(57)【要約】  本発明の目的は、消化器、呼吸器及び循環器等の種々の臓器に使用できる新規な生体用接着剤を提供すること、種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞できる新規な接着材料を提供すること、及びそのような接着材料の製造方法を提供することである。本発明は、そのような接着材料として（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨ５．５〜７．０のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合して得られる生体用接着材料を提供する。また、（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合する生体用接着材料の製造方法を提供する。上記生体用接着材料は、注射剤として好適に使用でき、種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）フィブリノーゲン及び（ｂ）トロンビン
を混合することで得られる生体用接着材料であって、
更に、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合して得られる生体用接着材料。
【請求項２】
コラーゲンは、未架橋である請求項１記載の生体用接着材料。
【請求項３】
ポリグルコール酸は、５０００〜３００００の重量平均分子量を有する請求項１又は２に記載の生体用接着材料。
【請求項４】
生体用接着剤は注射剤である請求項１〜３のいずれかに記載の生体用接着材料。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の生体用接着材料を得るための
（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）の組み合わせ。
【請求項６】
（ａ）フィブリノーゲン及び（ｂ）トロンビンを混合する生体用接着材料の製造方法であって、
更に、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合する生体用接着材料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体用接着材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管皮膚瘻は、消化管に穴が開き、その穴が、体外にまで達する病気であって、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、術後縫合不全等（例えば、腸管皮膚瘻、胆汁瘻、膵液瘻）、放射線治療後の合併症（例えば、直腸膣瘻、直腸膀胱瘻）等の多岐の疾病に渡る難治性の疾患である。消化管皮膚瘻の治療法として、消化管皮膚瘻の自然閉塞を期待する長期に渡る絶食、手術による閉鎖等がある。手術を試みる場合、患部の周囲の炎症が強いため、非常に侵襲の大きな手術となることが多い。【０００３】
本来、消化管皮膚瘻の瘻管を、何らかの方法で完全に閉塞することができれば、長期の絶食も手術も必要とすることなく治療可能なはずである。しかし、消化管皮膚瘻を低侵襲な方法で閉塞することは、一般的に困難である。その理由として、下記の３点が指摘される。（図１参照）
ｉ）消化管皮膚瘻（１）に対して、薬剤及び材料（２）は、皮膚（３）側からしかアプローチできない。即ち、薬剤及び材料（２）は、消化管（４）、例えば腸管側から、アプローチできない。
ii）消化管皮膚瘻（１）の瘻管は非常に細くて複雑な形態を有することが多く、瘻管を閉塞するために用いる材料（２）を、瘻管に留置することが困難である。
iii）瘻管を閉塞するために用いる材料（２）は、瘻管に留まり、消化管（４）からの消化液（５）の流入を防ぐことが要求される。【０００４】
このような事情から、消化管皮膚瘻の瘻管を閉塞するために、使用開始後すぐにゲル化し、接着力を生ずる注射剤を注入することが、近年行われている。そのような注射剤として、フィブリン糊が良く用いられている。【０００５】
フィブリン糊は、主にフィブリノーゲンから成るＡ液と、主にトロンビンから成るＢ液の２液を混合することによって得られる。モノマーであるフィブリノーゲンが、トロンビンの触媒作用によって重合して、ポリマーであるフィブリンを形成し、それが糊となって生体組織に接着する。フィブリン糊は、生体適合性が良好であり、生体内に留置できる接着材料が他にないので、手術の際によく使用される。塗布されたフィブリン糊が膜を形成して損傷した臓器を覆うので、損傷した肺から空気漏れを防止することや、血管や臓器等からの出血を防止することができる。塗布されたフィブリン糊は、生体内で徐々に分解されて縮小し、最終的に体内に吸収される。（例えば、特許文献１及び２参照）【０００６】
フィブリン糊を、消化管皮膚瘻等の瘻管内に注入すると、注入直後は、フィブリン糊は、瘻管に留まり、一時的に瘻管を閉鎖する。しかし、徐々にフィブリン糊が生体内で分解されて縮小するので、最後には、フィブリン糊は消化液によって瘻管から押し出されて抜け落ちて、消化管皮膚瘻は再発することとなる。つまり、フィブリン糊が長期間にわたって瘻管内に留まり、瘻管が治癒して塞がる確立は極めて低いのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＪＰ２７７４１４１Ｂ
【特許文献２】ＪＰ６−１０２６２８Ｂ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、消化器、呼吸器及び循環器等の種々の臓器に使用することができる新規な生体用接着剤を提供することである。より具体的には、種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞することができる新規な接着材料を提供することである。
更に本発明の別の目的は、そのような接着材料を得るための成分の組合せを提供することである。
また本発明の更なる目的は、そのような接着材料の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、種々検討した結果、驚くべきことに、特定のコラーゲンと特定のポリグリコール酸（ＰＧＡ）を、フィブリン糊に混合することによって、上記課題を解決することができることを見出して、本発明を完成するに至ったものである。【００１０】
即ち、本発明は、第一の要旨において、（ａ）フィブリノーゲン及び（ｂ）トロンビンを混合することで得られる生体用接着材料であって、
更に、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合して得られる接着材料を提供する。
本発明に係る生体用接着材料は、注射剤として、好適に使用することができる。【００１１】
本発明は、一の態様において、コラーゲンは、未架橋である上記生体用接着材料を提供する。
本発明は、他の態様において、ポリグルコール酸は、５０００〜３００００の重量平均分子量を有する上記生体用接着材料を提供する。【００１２】
本発明は、別の要旨において、上記生体用接着材料を得るための、（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）の組み合わせを提供する。【００１３】
本発明は、好ましい要旨において、（ａ）フィブリノーゲン及び（ｂ）トロンビンを混合する生体用接着材料の製造方法であって、
更に、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合する製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る生体用接着剤は、（ａ）フィブリノーゲン及び（ｂ）トロンビンを混合することで得られ、更に、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合して得られるので、消化器、呼吸器及び循環器等の種々の臓器に使用することができる新規な生体用接着剤を提供することができる。より具体的には、種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞することができる。【００１５】
上記生体用接着剤は、コラーゲンが、未架橋である場合、上記生体用接着材料は、生体用接着剤として、より均一性が向上し、より使用し易くなる。
上記生体用接着剤本発明は、ポリグルコール酸が、５０００〜３００００の重量平均分子量を有する場合、より微粉末と成り得、生体用接着剤として、より均一性が向上し、より使用し易くなる。【００１６】
本発明に係る上記生体用接着材料を得るための組み合わせは、（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）の組み合わせであるので、消化器、呼吸器、循環器等の種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞することができる生体用接着剤を提供することができる。【００１７】
本発明に係る生体用接着材料の製造方法は、（ａ）フィブリノーゲン（ｂ）トロンビン（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合する製造方法であるので、消化器、呼吸器、循環器等の種々の臓器に生じた瘻管内に接着材料が留まっている間に、その瘻管を閉塞することができる生体用接着剤の製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、消化管皮膚瘻を模式的に示す。
【図２】図２は、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の材料として、ＳＤラット皮下に埋入した、実施例１に係る生体用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を示す。図２（ａ）〜（ｄ）は、各々３日後４０倍、３日後２００倍、２１日後４０倍、２８日後４０倍の光学顕微鏡写真を示す。
【図３】図３は、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の材料として、ＳＤラット皮下に埋入した、比較例１に係る生体用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を示す。図３（ａ）〜（ｄ）は、各々３日後４０倍、７日後４０倍、１４日後４０倍、２８日後４０倍の光学顕微鏡写真を示す。
【図４】図４は、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の材料として、ＳＤラット皮下に埋入した、比較例２に係る生体用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を示す。図４（ａ）〜（ｄ）は、各々３日後４０倍、７日後４０倍、１４日後４０倍、２８日後４０倍の光学顕微鏡写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明に係る「（ａ）フィブリノーゲン」とは、通常「フィブリノーゲン」とされるものであり、本発明が目的とする生体用接着剤を得ることができれば、特に制限されるものではない。「（ａ）フィブリノーゲン」は、市販のものを使用することができる。そのような市販のフィブリノーゲンとして、例えば、ボルヒール（製品名）及びベリプラスト（製品名）等を例示できる。（ａ）フィブリノーゲンは、市販の原液（例えば、約８重量％）をそのまま使用することができるが、適切な水性媒体を用いて溶解及び／又は分散させて、水性液を作成して使用することもできる。
【００２０】
本発明に係る「（ｂ）トロンビン」とは、通常「トロンビン」とされるものであり、本発明が目的とする生体用接着剤を得ることができれば、特に制限されるものではない。「（ｂ）トロンビン」は、市販のものを使用することができる。そのような市販のトロンビンとして、例えば、ボルヒール（製品名）及びベリプラスト（製品名）等を例示できる。（ｂ）トロンビンは、市販の原液（２５０単位／ｍｌ）をそのまま使用することができるが、適切な水性媒体を用いて溶解及び／又は分散させて、水性液を作成して使用することもできる。
【００２１】
本発明において、「水性媒体」とは、通常フィブリン糊を作るために使用され、おもに水から形成される媒体であって、適宜、添加剤を含んでよく、本発明が目的とする生体用接着剤を得ることができるものであれば、特に制限されるものではない。そのような水性媒体として、例えば、フィブリノーゲン溶解液及びトロンビン溶解液（化学及び血清療法研究所製）等を例示できる。また、本発明において、「水性液」とは、本発明に係る種々の成分が、水性媒体に溶解及び／又は分散した状態であることを意味する。
【００２２】
本発明に係る生体用接着剤では、（ａ）フィブリノーゲンは、上述の原液を５倍まで希釈するか原液をそのままで使用することが好ましく、原液を３倍まで希釈するか原液をそのままで使用することがより好ましく、原液を２倍まで希釈するか原液をそのままで使用することが特に好ましい。（ｂ）トロンビンは、上述の原液を２倍〜２０倍に希釈して使用することが好ましく、原液を５倍〜１５倍に希釈して使用することがより好ましく、原液を８倍〜１２倍に希釈して使用することが特に好ましい。
【００２３】
（ａ）フィブリノーゲンの濃さは、生体用接着剤の濃さと関連し、濃い方が、接着剤としてより大きな接着力を発揮すると考えられる。また、トロンビンはフィブリノーゲンに重合に関する触媒作用を有するので、濃い場合はフィブリン糊形成が早く、薄い場合フィブリン糊形成が遅くなる。本発明に係る生体用接着剤に求められる性質（例えば、接着強度、固化に要する時間等）に応じて、（ａ）及び（ｂ）の濃さは、適宜選択されるものである。
【００２４】
本発明に係る「（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン（以下「（ｃ）コラーゲン」ともいう）」とは、水に濃度１０ｇ／Ｌで溶解したときに５．５より大きく７．０以下のｐＨを示すコラーゲンであり、本発明が目的とする生体用接着剤を得ることができれば、特に制限されるものではない。
本発明に係る（ｃ）コラーゲンは、通常、水に溶解性が高いので、通常の固形物であってよく、特に、粉末状であることを要しないが、水により迅速に溶解させるために、「粉末状」であることが好ましい。ここで「コラーゲン」に関し「粉末状」とは、砕けて細かくなった状態をいい、たとえ粉末状で水中に存在したとしても、注射器の先端（内径が１ｍｍ）を閉塞しない程度に細かいことが好ましい。従って、粉末の粒子は、その一番長い径が、１００μｍ以下であることが好ましく、５０μｍ以下であることがより好ましく、１０μｍ以下であることが特に好ましい。粉末の粒子の径は、光学顕微鏡、電子顕微鏡等の各種顕微鏡を用いて目視で観察することができる。
【００２５】
尚、ここで、「水」とは、医薬・バイオテクノロジー分野において、一般的に純水又は超純水と呼ばれる水であって、通常、イオン交換法、蒸留法、逆浸透膜法、及び（逆浸透＋連続イオン交換法）から選択される少なくとも一種を用いて精製された水をいい、超純水が好ましく、ミリポア社製の超純水装置ミリＱ（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）（商品名）により精製された超純水（いわゆる、ミリＱ水）がより好ましいが、本発明が目的とする生体用接着材料が得られる限り特に制限されるものではない。一般的に「純水」とは、比抵抗が１ＭΩ・ｃｍ（２５℃）以上、好ましくは３ＭΩ・ｃｍ（２５℃）以上を示す水をいい、「超純水」とは、比抵抗が１５ＭΩ・ｃｍ（２５℃）以上、好ましくは１８ＭΩ・ｃｍ（２５℃）以上を示し、有機物量（ＴＯＣ）が５０ｐｐｂ以下、好ましくは２０ｐｐｂ以下であるものをいう。
【００２６】
フィブリノーゲンとトロンビンを混合することで得られるフィブリン糊をゲル化して、糊として機能させるためには、フィブリン糊のｐＨは５．５より大きく７．０以下という特定の値の範囲にｐＨを調整しなければならないことが知られている。常套のコラーゲンは、通常、この範囲のｐＨより、ｐＨの値がより小さいので、より酸性を示すことが知られている。本発明者等は、フィブリン糊のゲル化を考慮して、コラーゲンが示すｐＨは、水に濃度１０ｇ／Ｌで溶解したときに、５．５より大きく７．０以下であることが必要であると考えて、そのようなコラーゲンを用いて検討を行った。（ｃ）コラーゲンが示すｐＨは、６．０〜７．０であることが好ましく、６．５〜７．０であることがより好ましい。
【００２７】
このような（ｃ）コラーゲンは、常套のコラーゲンを、上述の水、好ましくは超純水、より好ましくはミリＱ水に１重量％となるように混合し、攪拌して溶解して溶解液を得た後、０．１ＮのＨＣｌを用いて、この溶解液のｐＨを５．５より大きく７．０以下となるように調節し、凍結乾燥することによって得ることができる。（ｃ）コラーゲンのｐＨの値として、この溶解液のｐＨを、ｐＨメーターで測定して得た値を示した。通常、この０．１ＮＨＣｌを用いて調節された溶解液のｐＨは、コラーゲンを水に濃度１０ｇ／Ｌで溶解したときに示すｐＨの値と実質的に等しいと考えられる。上述のコラーゲンの上記溶解液のｐＨを、６．０〜７．０となるように調節して、凍結乾燥して得られるコラーゲンが、（ｃ）コラーゲンとして好ましく、ｐＨを６．５〜７．０となるように調節して、凍結乾燥して得られるコラーゲンが、（ｃ）コラーゲンとしてより好ましい。
【００２８】
凍結乾燥は、常套の方法を用いて行うことができる。凍結温度は、コラーゲンを凍結乾燥することができ、目的とする生体用接着剤を得ることができれば特に制限されるものではない。凍結乾燥して得られるコラーゲンの構造に応じて適宜凍結温度を選択することができる。一般的に−２０℃付近で凍結すると線維状又はスポンジ状コラーゲンが得られ、−８０℃付近で凍結すると、薄フィルム多房状コラーゲンが得られ、−１９６℃付近で凍結すると、線維状又はスポンジ状コラーゲンが得られる。組織再生能力の点から、コラーゲンは、薄フィルム多房状コラーゲンが好ましく、凍結温度は、−７０℃〜−１００℃がより好ましく、−８０〜−９０℃が特に好ましい。凍結乾燥は、凍結した温度で、例えば、薄フィルム多房状コラーゲンを得た場合、−８０℃〜−９０℃の温度で、５．０Ｐａ以下に減圧して、２４時間行うことが好ましい。
【００２９】
本発明に係るコラーゲンは、水性媒体に溶解及び／又は分散し易いことが好ましく、そのため、架橋されていないことが好ましい。コラーゲンは、架橋されていない、即ち、未架橋であることによって、本発明に係る生体用接着剤の均一性がより向上し、注射剤として使用した場合により注射し易い接着剤を得ることができる。
【００３０】
本発明に係る「（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（以下、「（ｄ）ＰＧＡ」ともいう）」とは、粉末状に粉砕したＰＧＡであって、本発明が目的とする生体用接着剤を得ることができれば、特に制限されるものではない。
本発明に係るＰＧＡに関し「粉末状」とは、砕けて細かくなった状態をいい、注射器の先端（内径が１ｍｍ）を閉塞しない程度に細かいことが好ましい。従って、粉末の粒子は、その一番長い径が、１００μｍ以下であることが好ましく、５０μｍ以下であることがより好ましく、１０μｍ以下であることが特に好ましい。粉末の粒子の径は、光学顕微鏡、電子顕微鏡等の各種顕微鏡を用いて目視で観察することができる。
【００３１】
一般的にＰＧＡは、生分解性の合成高分子であり、縫合糸や組織補強材料として使用されるので、強度を高めるために、約２０万から３０万の重量平均分子量を有するものが合成されている。
しかし、水への溶解性及び／又は分散性を考慮すると、より低分子量であることが好ましく、重量平均分子量は、１０００〜５００００であることが好ましく、３０００〜４０００００であることがより好ましく、５０００〜３００００であることが特に好ましい。
【００３２】
このような分子量がより小さい（ｄ）ＰＧＡは、例えば、ラウリルアルコール等の沸点の高いアルコール類、乳酸及びグリコール酸又はそれらのエステル化物等をグリコリドに添加して、バルク重合することによって、製造することができることは周知のことである（例えば、Chang-Ming Dong et al; Polymer４２（２００１）６８９１−６８９６参照）。その重量平均分子量は、ＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー)を用いて測定することができる。ＧＰＣ測定条件等の詳細は、実施例に記載した。
【００３３】
本発明に係る生体用接着材料は、通常、上述の（ａ）〜（ｄ）成分を含んで成る水性液の形態を有し、一般的に、ゲル状の形態を有する。
（ｄ）ＰＧＡが比較的水性媒体に溶解し難く、沈殿しやすい成分であるが、一緒に混合する（ｃ）コラーゲンは、水性媒体に溶解及び／又は分散して比較的粘度の高い水性液を形成することができるので、（ｄ）ＰＧＡは、沈殿することはなく、その結果、水性媒体に均一に成分（ａ）〜（ｄ）が分散及び／又は溶解した水性液の形態の生体用接着材料を得ることができる。
【００３４】
本発明に係る生体用接着材料は、（ａ）〜（ｄ）成分を含んで成る水性液を基準（１００ｇ当たり）として、（ａ）フィブリノーゲンを、１〜５ｇ含むことが好ましく、３〜５ｇ含むことがより好ましく、４〜５ｇ含むことが特に好ましい。
（ｂ）トロンビンを、１０〜２５０単位含むことが好ましく、１５〜１００単位含むことがより好ましく、２０〜３０単位含むことが特に好ましい。
（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲンを、１〜２０ｇ含むことが好ましく、３〜１０ｇ含むことがより好ましく、４〜６ｇ含むことが特に好ましい。
（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を、１〜２０ｇ含むことが好ましく、３〜１０ｇ含むことがより好ましく、４〜６ｇ含むことが特に好ましい。
【００３５】
本発明は、上述した生体用接着材料を得るための、（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）の組み合わせを提供する。
この組み合わせは、四成分型接着剤ということもできる。使用する直前に四つの成分全部を一度に混合して本発明に係る生体用接着材料を製造して使用することができる。
【００３６】
更に、（ａ）フィブリノーゲンを含む第一成分（具体的には、原液又は水性液）と、（ｂ）トロンビン、（ｃ）コラーゲン及び（ｄ）ＰＧＡの三成分を含む第二成分（具体的には水性液）の二種類の成分の組み合わせを一旦作成することができる。これは、いわゆる二成分型生体用接着材料ということができる。この二種類の成分を混合して本発明に係る生体用接着材料を製造して使用することができる。
尚、これらの四つの成分の組み合わせ及び二種類の成分の組み合わせは、混合して得られる本発明に係る生体用接着剤に関して、（ａ）〜（ｄ）成分を含んで成る水性液を基準（１００ｇ当たり）とする、（ａ）〜（ｄ）成分の上述の量的な関係を満たすことが好ましい。
【００３７】
本発明に係る生体用接着剤を製造するための（ａ）〜（ｄ）成分の混合は、通常使用される混合方法を使用して行うことができる。製造した生体用接着剤は、種々の器具、例えば、シリンジ等を用いて生体の種々の臓器に塗工することができる。
本発明に係る生体用接着材料は、注射器を使用して注射剤として瘻管内に入れて、瘻管を閉塞するために好適に使用することができる。
瘻管を閉塞するために、上述の二種類の成分の組み合わせ（（ａ）成分を含む第一成分と（ｂ）〜（ｄ）成分を含む第二成分の組み合わせ）、即ち、二成分型接着材料を、二種類の成分の各々を同時に押し出して注射器先端で混合しながら瘻管に入れることができる注射器、即ち、デュアルシリンジを用いて、使用することが好ましい。
【００３８】
本発明に係る生体用接着材料は、種々の臓器、例えば、消化器、呼吸器、循環器等に使用することができるが、それらに生じた瘻管の閉鎖に好適に使用することができる。例えば、消化管皮膚瘻（クローン病、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患、術後の消化管縫合不全の遅延化による瘻孔、術後胆汁瘻、術後膵液瘻等）、痔瘻、術後気管支断端瘻、膀胱膣瘻、直腸膣瘻、気管食道瘻、隣接する臓器で瘻孔を形成するような病態等に好適に使用することができる。本発明に係る生体用接着材料を使用することで、種々の臓器に生じた瘻管を低侵襲な方法で閉塞することができる。
【００３９】
本発明に係る生体用接着材料は、患者のベッドサイドで簡単に調合することができるので、使用が容易である。更に、造影剤等を混合することによって、透視下で、種々の病気を治療することができる。
【００４０】
本発明に係る生体用接着材料は、上述したような優れた効果を奏するが、それは、以下のような理由によるものと考えられる。
本発明者等は、フィブリン糊が、瘻管内に長期に渡って留まり、瘻管が治癒して塞がらない理由は、フィブリン糊は、瘻管の周囲の組織から細胞や血管等の組織を誘導することなく、単に分解して縮小するからであると考えた。そこで、フィブリン糊の生体用接着材料としての長所を生かしつつ、フィブリン糊が分解縮小するとともに、瘻管内部に新たな組織を生じさせることを考えた。
【００４１】
本発明者等は、種々の検討を行った結果、上述した特定の成分である（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸を更に加えてフィブリン糊を製造すると、フィブリン糊の生体用接着材料としての長所を生かしつつ、フィブリン糊が分解縮小するとともに、瘻管内部に新たな組織を生じさせることができることを見出して本発明を完成したものである。加えられた（ｃ）コラーゲンと（ｄ）ポリグルコール酸は、瘻管の周囲の組織から、細胞や血管等の新たな組織を誘導する効率を著しく向上すると考えられる。
【００４２】
尚、本発明に係る（ｃ）コラーゲンと（ｄ）ポリグルコール酸ではなく、一般的な単なる「コラーゲン」と「ポリグルコール酸」を用いると、フィブリン糊はゲル化せず接着材料として機能しない、均一な接着材料を得ることができず結果的に使用できない、シリンジの先端で詰まってしまう等の問題を生じ、目的とする生体用接着材料を得ることが困難であると考えられる。
【００４３】
以下、本発明を実施例及び比較例により具体的に説明するが、本発明はその要旨を逸脱しない限り以下の実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４４】
使用した材料を、以下説明する。
＜コラーゲン＞
日本ハム社製（ＮＭＰコラーゲンＰＳＮ（商品名））のブタのコラーゲンを、ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製のＭｉｌｌｉ−Ｑ  ｓｐＵ（精製装置名）を用いて作成したミリＱ水に、１重量％となるように混合し、攪拌して溶解した。この水溶液のｐＨを、０．１ＮのＨＣｌを用いて、６．５〜７．０になるように調節した。ｐＨは、ｐＨメーター（ＨＯＲＩＢＡ製のＴｗｉｎ  ｐＨ  Ｂ−２１２（商品名）を用いて測定した。作成したコラーゲン水溶液を容器に流し込み、−８０℃で固めた。十分に固まった後、−８０℃で凍結乾燥した。尚、コラーゲンに通常施される熱架橋は行わなかった。４８時間の凍結乾燥後、容器から乾燥したコラーゲンを取り出した。
このコラーゲンを、大阪ケミカル製のワンダーブレンダー  ＷＢ−１を用いて３０秒間〜１分間粉砕することによって、微粉化した。
コラーゲンは、エチレンオキサイドガスを用いて４０℃で２２時間３０分、減菌した。【００４５】
＜ポリグルコール酸＞
分子量調整剤（酢酸エチル）、グリコリド及び重合開始剤（オクチル酸錫、約０．００５〜０．０１重量％程度）を重合管に入れ、減圧して真空にした後、管を封じて、オイルバス（約１４０℃）で、２４〜４８時間加熱して、重合させることで、重量平均分子量が約２４０００のＰＧＡを合成した。
得られたＰＧＡの重量平均分子量は、ＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー)を用いて測定される、単分散分子量ポリスチレンで換算された重量平均分子量をいう。より具体的には、下記のＧＰＣ装置及び測定方法を用いて測定された値をいい、本発明者は後述する実施例においても、下記の装置及び測定方法を用いた。【００４６】
ＧＰＣ装置はゲル浸透クロマトグラフＧＰＣ（機器Ｎｏ．ＧＰＣ−１４）を用い、検出器として、示差屈折率検出器ＲＩ（Ｗａｔｅｒｓ社製のＲＩ−２４１４型、感度５１２）を用いた。ＧＰＣカラムとして、昭和電工製のＳｈｏｄｅｘ  ＨＦＩＰ−８０６Ｍ（２本）（Ｓ／Ｎ Ａ８０５２６０、Ａ８０５２６１、φ７．８ｍｍ×３０ｃｍ）を用いた。３ｍｇの試料に５ｍｌの溶媒（５ｍＭの濃度でトリフルオロ酢酸ナトリウムが添加されたヘキサフルオロイソプロパノール）を加えて、４０℃で４時間緩やかに撹拌後、０．４５μｍのフィルターを用いて濾過した試料を用いた。カラム温度は、４０℃で、同様の溶媒を用いた。流量は、０．５ｍｌ／分であった。試料の秤量から繰り返し２回測定を行い、得られたＭｎ及びＭｗの平均値を、ＰＧＡのＭｎ及びＭｗとした。Ｍｎは約１６，０００、Ｍｗは約２４，０００であった。
このＰＧＡを、大阪ケミカル製のワンダーブレンダー  ＷＢ−１を用いて３０秒間〜１分間粉砕することによって、微粉化した。粉の寸法は、ＯＬＹＭＰＵＳ製の光学顕微鏡ＢＸ４０（商品名）を用いて測定して、約１０〜１００μｍであった。
ＰＧＡは、エチレンオキサイドガスを用いて４０℃で２２時間３０分、減菌した。【００４７】
＜フィブリノーゲン液（Ａ液）＞
フィブリノーゲン液は、市販のもの（原液、フィブリノーゲンを８重量％含む）（化学及び血清療法研究所製のボルヒール（商品名））をそのまま使用した。
＜トロンビン液（Ｂ液）＞
トロンビン液は、市販のもの（原液、トロンビンを２５０単位/ｍｌ含む）（化学及び血清療法研究所製のボルヒール（商品名））を、生理食塩水を使用して１０倍に希釈して用いた。【００４８】
実施例１
上述のコラーゲン粉末０．１ｇとＰＧＡ粉末０．１ｇを、１ｍｌのトロンビン液（上述の１０倍に希釈したもの）と混合して、混合トロンビン液を得た。
デュアルシリンジ（Ｐｌａｓ−Ｐａｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ製のＭｉｎｉ−Ｄｕａｌ  Ｓｙｒｉｎｇｅ（商品名））の一方に、フィブリノーゲン液を１ｍｌ入れ、他方に混合トロンビン液を１ｍｌ入れた。デュアルシリンジの内筒を押すことで、両者を当量ずつ押し出して、実施例１に係る生体用接着材料を製造すると同時に、シリンジの先から、細い瘻管内へ、注入することができた。【００４９】
実施例１に係る生体用接着材料をＳＤラット皮下に、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の形状の材料としてデュアルシリンジを用いて製造すると同時に埋入した。HematoxylinとEosin染料で染色し、光学顕微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ製のＢＸ４０（商品名））を使用して４０倍と２００倍で目視観察した。円筒形の生物用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を、図２（ａ）〜（ｄ）に示す。
図２（ａ）は、３日後４０倍、図２（ｂ）は、３日後２００倍、図２（ｃ）は２１日後４０倍、図２（ｄ）は２８日後４０倍で、円筒形の生物用接着材料の中央部分の組織の様子を示す。【００５０】
図２（ａ）に示すように、３日目には、楕円状に見える接着材料の内部にラットの炎症細胞等の細胞が侵入していることが認められた。この侵入は、中央部まで達していた。図２（ｂ）は、図２（ａ）の接着材料の中央部を拡大したものである。紫色の点々は、ラットの細胞と考えられる。図２（ｃ）及び（ｄ）に示すように、２〜３週間で、ラットの細胞によって、接着材料の内部にラットの組織が完全に再構築されるとともに、接着材料は徐々に分解された。図２（ｄ）では、少量のグルコール酸は、残存しているが、接着材料全体として分解は順調に進んでいた。【００５１】
比較例１
比較例１に係る生体用接着材料は、フィブリノーゲン液とトロンビン液（上述の１０倍に希釈したもの）を混合して得た。
即ち、デュアルシリンジ（Ｐｌａｓ−Ｐａｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ製のＭｉｎｉ−Ｄｕａｌ  Ｓｙｒｉｎｇｅ（商品名））の一方に、フィビリノーゲン液を１ｍｌ入れ、トロンビン液を１ｍｌ入れた。デュアルシリンジの内筒を押すことで、両者を当量ずつ押し出して、比較例１に係る生体用接着材料を製造した。この生体用接着材料は、通常のフィブリン糊に対応する。【００５２】
比較例１に係る生体用接着材料をＳＤラット皮下に、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の形状の材料としてデュアルシリンジを用いて製造すると同時に埋入した。HematoxylinとEosin染料で染色し、光学顕微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ製のＢＸ４０（製品名））を使用して４０倍で目視観察した。円筒形の生物用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を、図３（ａ）〜（ｄ）に示す。
図３（ａ）は、３日後４０倍、図３（ｂ）は、７日後４０倍、図３（ｃ）は１４日後４０倍、図３（ｄ）は２８日後４０倍で、円筒形の生物用接着材料の中央部分の組織の様子を示す。【００５３】
図３（ａ）〜（ｄ）に示すように、楕円形の生体用接着材料は徐々に小さくなるが、その周囲にあるラットの皮下組織から接着材料の内部に細胞や血管が侵入してラットの組織が構築されることはなかった。楕円形の生体用接着材料とラット皮下組織の間には、隙間が常に存在した。このことが、コラーゲン粉末とＰＧＡ粉末を混合していない、フィブリン糊では、ある程度小さくなったときに、容易に瘻管から脱落する原因であると思われる。【００５４】
比較例２
上述のコラーゲン粉末０．１ｇを、１ｍｌのトロンビン液（上述の１０倍に希釈したもの）と混合して、混合トロンビン液を得た。
デュアルシリンジ（Ｐｌａｓ−Ｐａｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ製のＭｉｎｉ−Ｄｕａｌ  Ｓｙｒｉｎｇｅ（商品名））の一方に、フィブリノーゲン液を１ｍｌ入れ、他方に混合トロンビン液を１ｍｌ入れた。デュアルシリンジの内筒を押すことで、両者を当量ずつ押し出して、比較例２に係る生体用接着材料を製造した。【００５５】
比較例２に係る生体用接着材料をＳＤラット皮下に、直径５ｍｍ、長さ１０ｍｍの円筒形の形状の材料としてデュアルシリンジを用いて製造すると同時に埋入した。HematoxylinとEosin染料で染色し、光学顕微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ製のＢＸ４０（製品名））を使用して４０倍と２００倍で目視観察した。円筒形の生物用接着材料の中央部分の光学顕微鏡写真を、図４（ａ）〜（ｄ）に示す。
図４（ａ）は、３日後４０倍、図４（ｂ）は、７日後４０倍、図４（ｃ）は２１日後４０倍、図４（ｄ）は２８日後４０倍で、円筒形の生物用接着材料の中央部分の組織の様子を示す。【００５６】
図４（ａ）〜（ｄ）に示すように、楕円形の生体用接着材料は徐々に小さくなるが、その周囲にあるラットの皮下組織から接着材料の内部に細胞や血管が侵入してラットの組織が構築されることはなかった。尚、比較例２の生体用接着材料は、フィブリン糊がコラーゲンを含む場合であるが、フィブリン糊の内部に空隙が見られる。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明に係る生体用接着材料は、（ａ）フィブリノーゲン、（ｂ）トロンビン、（ｃ）ｐＨは５．５より大きく７．０以下のコラーゲン及び（ｄ）粉末状ポリグルコール酸（ＰＧＡ）を混合して得られ、種々の臓器、例えば、消化器、呼吸器、循環器等に使用することができるが、特に、それらに生じた瘻管の閉鎖に好適に使用することができる。例えば、消化管皮膚瘻（クローン病、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患、術後の消化管縫合不全の遅延化による瘻孔、術後胆汁瘻、術後膵液瘻等）、痔瘻、術後気管支断端瘻、膀胱膣瘻、直腸膣瘻、気管食道瘻、隣接する臓器で瘻孔を形成するような病態等に好適に使用することができる。本発明に係る生体用接着材料を使用することで、種々の臓器に生じた瘻管を低侵襲な方法で閉塞することができる。
［関連出願］
尚、本出願は、２０１１年１月１２日に日本国でされた出願番号２０１１−０３８４１を基礎出願とするパリ条約第４条又は日本国特許法第４１条に基づく優先権を主張する。この基礎出願の内容は、参照することによって、本明細書に組み込まれる。
【符号の説明】
【００５８】
１  消化管皮膚瘻、  ２  薬剤及び材料、  ３  皮膚、  ４  消化管、  ５  消化液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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