(57)【要約】本発明は、角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害に有効で安全な予防、治療用医薬品、サプリメントを提供する。エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸、又はこれら脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリンエステル又はリン脂質、又はこれら脂肪酸の低級アルコールエステルを有効成分として含有することを特徴とする角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の治療及び／又は予防剤である。EPA及び／又はDHAを精製魚油又は精製オキアミ油として含有するものが好ましい。一日量として、EPA及び／又はDHA又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約５０〜５０００ｍｇを摂取させることにより、角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害を緩和させる。また、涙量を回復させることができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸、又はこれら脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリンエステル又はリン脂質、又はこれら脂肪酸の低級アルコールエステルを有効成分として含有することを特徴とする角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の治療及び／又は予防剤。
【請求項２】
角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害が、ドライアイ、コンタクトレンズ、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、及び、アレルギー性結膜炎のいずれかに起因する障害である請求項１の治療及び／又は予防剤。
【請求項３】
エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を構成脂肪酸として含有するグリセリンエステル又はリン脂質を精製魚油又は精製オキアミ油として含有する請求項１又は２の治療及び／又は予防剤。
【請求項４】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約５０〜５０００ｍｇ摂取させるための請求項１ないし３いずれかの治療及び／又は予防剤。
【請求項５】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約３００〜３０００ｍｇ摂取させるための請求項１ないし３いずれかの治療及び／又は予防剤。
【請求項６】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約９００〜２１００ｍｇ摂取させるための請求項１ないし３いずれかの治療及び／又は予防剤。
【請求項７】
更に抗酸化剤としてトコフェロールを含有する請求項１ないし６いずれかの治療及び／又は予防剤。
【請求項８】
エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸、又はこれら脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリンエステル又はリン脂質、又はこれら脂肪酸の低級アルコールエステルを有効成分として含有することを特徴とする涙量回復剤。
【請求項９】
エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を構成脂肪酸として含有するグリセリンエステル又はリン脂質を精製魚油又は精製オキアミ油として含有する請求項８の涙量回復剤。
【請求項１０】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約５０〜５０００ｍｇ摂取させるための請求項８又は９の涙量回復剤。
【請求項１１】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約３００〜３０００ｍｇ摂取させるための請求項８又は９の涙量回復剤。
【請求項１２】
１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸を合計で約９００〜２１００ｍｇ摂取させるための請求項８又は９の涙量回復剤。
【請求項１３】
更に抗酸化剤としてトコフェロールを含有する請求項８ないし１２いずれかの涙量回復剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はドライアイ、コンタクトレンズ、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、及び、アレルギー性結膜炎などに起因する角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害等の眼疾患の治療・予防に関する。
【背景技術】
【０００２】
パソコン、携帯電話などの普及に伴い、目が疲れやすい、あるいは何となく目に不快感を感ずる人が増えている。特に、コンタクトレンズ使用者においては、画面を凝視することにより、目が乾く、ゴロゴロするなどの不快感を訴える症例が増加している。このような症状の原因として注目されているのが眼の乾き、ドライアイである。
ドライアイは、涙の減少あるいは質的変化により眼の表面に障害を生じる疾患である。涙の不足により、眼は乾いて傷つきやすい状態になり、コンタクトレンズの使用が困難になったりする。
2006年ドライアイ研究会によるドライアイの診断基準によると、自覚症状（VASテストによる痛み、乾きの評価）、涙液の異常（涙液層破壊時間、又はシルマーテストにより評価）、角結膜の障害（フルオレセイン又はローズベンガル染色による評価）の３つが確認されるとドライアイと診断され、２つの場合疑いと診断される。【０００３】
ドライアイの対症療法としては、生理食塩水の点眼薬やコンドロイチン硫酸などの粘性のある点眼薬が使用されている。また、涙を少しでも長い時間、目の表面に滞留させておくため、涙の排出口を閉じるという治療もある。
ドライアイ以外にも、コンタクトレンズ、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、及び、アレルギー性結膜炎などを原因として角膜上皮及び／又は結膜上皮に細かい傷ができる。【０００４】
特許文献１には、ＧＬＡリッチなアマニ油とエイコサペンタエン酸（以下、EPAと記す。）やドコサヘキサエン酸（以下、DHAと記す。）を併用するドライアイ用栄養補給剤が記載されている。非特許文献１には、ドライアイに対する必須脂肪酸の影響が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００５−５３５７３３号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】“Essential Fatty Acids in the Treatment of Dry Eye”, The OcularSurface, 8 (1) p18-28, 2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ドライアイは、重症でなくても、日々の生活の快適さを損なうものである。ドライアイの原因を究明し、対症療法でなく、また、副作用の心配等のない安全な治療方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、n-3系脂肪酸欠乏マウスの研究を進める中で、n-3系脂肪酸欠乏マウスにおいて涙量が減少していることを見出し、涙量にn-3系脂肪酸が関与していると考えた。さらに、n-3系脂肪酸欠乏マウスにn-3系脂肪酸であるEPA、DHAを多く含有する精製魚油を投与することにより、その涙量の減少を通常のレベルに戻すことができることを見出し、本発明を完成させた。【０００９】
本発明は、（１）〜（７）の角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の治療及び／又は予防剤、及び（８）〜（１３）の涙量回復剤を要旨とする。
（１）EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルを有効成分として含有することを特徴とする角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の治療及び／又は予防剤。
（２）角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害が、ドライアイ、コンタクトレンズ、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、及び、アレルギー性結膜炎のいずれかに起因する障害である（１）の治療及び／又は予防剤。
（３）EPA及び／又はDHAのエステルがグリセリンエステル、低級アルコールエステル、リン酸エステル又は精製魚油として含有する（１）又は（２）の治療及び／又は予防剤。
（４）１日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約５０〜５０００ｍｇを摂取させるための（１）ないし（３）いずれかの治療及び／又は予防剤。
（５）１日量として、EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約３００〜３０００ｍｇを摂取させるための（１）ないし（３）いずれかの治療及び／又は予防剤。
（６）１日量として、EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約１０００〜２０００ｍｇを摂取させるための（１）ないし（３）いずれかの治療及び／又は予防剤。
（７）更に抗酸化剤としてトコフェロールを含有する（１）ないし（６）いずれかの治療及び／又は予防剤。【００１０】
（８）EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルを有効成分として含有することを特徴とする涙量回復剤。
（９）EPA及び／又はDHAのエステルがグリセリンエステル、低級アルコールエステル、リン酸エステル又は精製魚油として含有する（７）の涙量回復剤。
（１０）  １日量として、エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエン酸、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約５０〜５０００ｍｇを摂取させるための（８）又は（９）の涙量回復剤。
（１１）１日量として、EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約３００〜３０００ｍｇを摂取させるための（８）又は（９）の涙量回復剤。
（１２）１日量として、EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルの合計量が少なくとも約９００〜２１００ｍｇを摂取させるための（８）又は（９）の涙量回復剤。
（１３）更に抗酸化剤としてトコフェロールを含有する（８）ないし（１２）いずれかの涙量回復剤。
【発明の効果】
【００１１】
n-3系脂肪酸であるEPA、DHAを投与することにより、ドライアイ、コンタクトレンズ、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、及び、アレルギー性結膜炎などによる角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害を治療又は予防することができる。EPA、DHAは涙量を増加させることができるので、これらの症状を緩和することができる。食経験が豊富で、副作用の心配のない精製魚油からなるドライアイなどの症状を軽減することができる医薬品、サプリメントなどを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１はVASテストで目の痛みの主観評価を評価した結果を示す図である。図中、*P<0.05, #P<0.1 はMann-Whitney U testによる有意差を示す。
【図２】図２はVASテストで目の乾きの主観評価を評価した結果を示す図である。
【図３】図３はTear film breakup time （涙液層破壊時間）を測定した結果を示す図である。n=24又は30。図中、*P<0.05, #P<0.1 はMann-Whitney U testによる有意差を示す。
【図４】図４はフルオレセイン染色で目の傷を評価した結果を示す図である。n=24又は30。
【図５】図５は図４の変化量を示す図である。
【図６】図６はローズベンガル染色で目の傷を評価した結果を示す図である。n=24又は30。
【図７】図７は図６の変化量を示す図である。図中、*P<0.05 はMann-Whitney U testによる有意差を示す。図中、**P<0.05は two-way ANOVAによる有意差を示す。
【図８】図８はシルマーテストで涙量を評価した結果を示す図である。n=24又は30。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、EPA及び／又はDHA、あるいはこれらのエステルを有効成分とする角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の予防あるいは治療剤である。アマニ油などn-6系脂肪酸をドライアイの治療に用いる報告はいくつかあるが、n-3系脂肪酸（特にEPA、DHA）単独の摂取が角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害にどのような影響があるのかは知られていない。
本発明者らは、n-3系脂肪酸の欠乏が明らかに涙量の低下をもたらすことを見出し、そのような涙量をEPA、DHAを含有する精製魚油の服用が回復させることを確認した。
【００１４】
本発明で用いるEPA及び／又はDHAは、好ましくは、グリセリンとのエステル、すなわち、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、あるいはリン脂質、すなわち、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ホスファチジン酸（いずれにもリゾ体を含む）、あるいは、低級アルコール（炭素数１〜５）とのエステル、すなわち、メチルエステル、エチルエステルなどである。EPA、DHAなどｎ-３系の脂肪酸を主成分とし、実質的にｎ-６系の脂肪酸を含まないものが好ましい。具体的にはn-6系の脂肪酸の合計が10重量％以下、好ましくは５重量％以下が好ましい。
具体的には、トリグリセリドとしては精製魚油、濃縮油（酵素反応、化学反応により精製魚油のEPA、DHA濃度を濃縮したもの）などが使用できる。また、リン脂質としては、オキアミオイルなどを使用できる。EPA、DHAを含むn-3系高度不飽和脂肪酸源としては、魚介類抽出物、動物抽出物、卵黄抽出物、植物抽出物、菌類抽出物等、好ましくはオキアミ油、魚油、魚抽出物、イカ抽出物、カツオ卵巣抽出物、遺伝子組み換えをした植物の抽出物等、ラビリンチュラ類の抽出物等が挙げられる。リン脂質を多く含む素材として、オキアミ油、イカ抽出物、カツオ卵巣抽出物が挙げられる。当該技術分野において一般的に知られている濃縮、抽出、及び／又は精製、配合等の技術を用いることによって、これらの素材中のリン脂質濃度や純度を任意に調節することができる。
EPA及び／又はDHAは、高脂血症やアレルギー症状などに有効であることが知られており、すでに医薬品や各種サプリメントが多く市販されている。本発明の目的にはそれらと同様のカプセル製剤を用いることができる。また、各種飲料や食品に添加して摂取することも可能である。
具体的には、精製魚油に抗酸化剤を添加した油脂をゼラチンカプセルに加工したものが多く利用されている。
【００１５】
精製魚油としては、EPA及びDHAを含有する魚油であれば、どの魚類の魚油であってもかまわない。EPAが多く含まれる魚油としてはイワシ油、タラ肝油など、DHAが多く含まれる魚油としてはマグロ油、カツオ油などが例示される。
EPA/DHAの濃縮油とは、位置選択性、脂肪酸選択性のあるリパーゼなどを用いて、精製魚油のトリグリセリド中のEPA/DHAの濃度を高めた油脂である（特公平４‐１６５１９号等参照）。
【００１６】
本発明の治療及び／又は予防剤は、EPA及び／又はDHA、又はこれらのエステルを１日あたり、EPA及びDHAの合計量として約５０〜５０００ｍｇ、好ましくは３００〜３０００mg、さらに好ましくは約９００〜２１００mg、特に好ましくは１１００〜１９００ｍｇを一度又は分割して、ドライアイ症状のある患者に経口投与する。少なくとも４週間連続して投与することにより効果が認められる。
EPA及び／又はDHAはすでに他の用途で長い使用経験があるので、安全性に問題がない。
【００１７】
本発明の角膜上皮障害及び／又は結膜上皮障害の治療及び／又は予防剤又は涙量回復剤には、眼の疲労回復に好ましいとされるアントシアニジン、ルテイン、アイブライト、メグスリノキ、ビタミン類などを添加し、併用してもよい。
【００１８】
以下に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１９】
n-3系脂肪酸欠乏動物の作製
一般に実験動物用飼料は、適切量のDHAを含むn-3系脂肪酸を含有しているため、n-3系脂肪酸欠乏動物を作製するためにはn-3系脂肪酸を含まない特殊飼料を用いる必要がある。さらに通常飼育の動物は出生前から離乳までの間に胎盤や母獣乳から十分なDHAを摂取しており、第１世代で目的とするn-3系脂肪酸欠乏動物を作製することは容易ではない。これらのことを考慮して、AIN93G（米国国立栄養研究所から発表されたマウス・ラット用の栄養研究のための標準精製飼料組成）を基礎飼料として 7%脂質を含有するn-3系脂肪酸欠乏飼料（n-3 Def，リノール酸，14.4%； α-リノレン酸，0.1%）を作製した。 正常飼料としてはα-リノレン酸（18:3n-3）を含むn-3系脂肪酸含有飼料（n-3 Adq，リノール酸，14.3%；α-リノレン酸，2.6%）を用いた。 これらの飼料を離乳直後（3週齢）の雌性マウスに与えて飼育し、成熟させた後に交配を行って第2世代を得、この第2世代の11ヶ月齢の雄性マウスを実験に用いた。 また、実験に際して母獣の影響を避けるために各群の個体は全て母獣が異なるように設定した。【００２０】
被験薬の調製
被験薬は、魚油（日本水産株式会社製、精製魚油  EPA-28（EPA２８％以上、DHA１２％以上含有））を用い、投与量はDHA量が5 mg/head、EPA量が11 mg/headとなるように調製した。
対照群としては、ヤシ油を用い、魚油群の脂肪酸量と等量になるように設定した。用いた魚油の主な脂肪酸組成を表１に示す（n-6系脂肪酸である18:2の含有量は1.1％、20:4は1.3％であった）。【００２１】
【表１】
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【００２２】
操作手順
涙液量検査用フェノールレッド糸（Zone-Quick、昭和薬品）を用いてn-3 Defならびにn-3 Adqマウスの30秒間に分泌する涙量（糸が赤色を呈した長さ）を測定した。これらの動物を2群に分け、魚油又はヤシ油配合飼料を7日間経口投与して、8日目に涙液量を再び測定し、9日目に視覚に関わる網膜、涙液分泌に関わる涙腺、マイボーム腺を採取し、脂肪酸組成を測定した。【００２３】
実験結果と考察
涙液は、外部に接しているものから順に、マイボーム腺から分泌される油層、涙腺から分泌される水層、結膜から分泌されるムチン層の３層で構成されている。
ドライアイは、角膜乾燥症ともいわれ、眼球の表面が乾燥して傷や障害が生じ、眼不快感や視覚機能異常を伴う眼疾患のひとつで、涙腺から分泌される水層涙液が減る涙液減少型とマイボーム腺から分泌される油層が十分でないために起こる涙液蒸発亢進型が知られている。
n-３系脂肪酸欠乏老齢マウスの涙液量は、明らかな減少を示し、ドライアイ症状を呈していると判断された（表２）。このn-３系脂肪酸欠乏マウスに、魚油を７日間投与した魚油群は、対照群と比較して有意な涙量の上昇（涙量の回復）が認められた（表３）。また、その涙量が正常マウスと同程度であることから、涙量はほぼ完全に回復していると思われた。涙量に関わる器官のEPA、DHAの脂肪酸組成結果では、涙腺、マイボーム腺ともに魚油の投与により上昇が観察された（表４）。
上記の結果から、n-3系脂肪酸欠乏動物は、明らかなドライアイ症状を示し、魚油の摂取によりその症状が改善されることが明らかとなった。また、魚油投与後の脂肪酸組成の反応結果からn-3系脂肪酸欠乏動物のドライアイ症状は、涙腺、マイボーム腺両方もしくはどちらかの機能性低下による涙液分泌量の減少と考えられた。【００２４】
【表２】
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【００２５】
【表３】
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【００２６】
【表４】
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【実施例２】
【００２７】
実施例１と同じ魚油（日本水産株式会社製、精製魚油  EPA-28（EPA２８％以上、DHA１２％以上含有））を用いて、ヒトの角膜上皮障害に対する効果を確認した。【００２８】
試験プロトコル概要
ドライアイの診断基準（2006年ドライアイ研究会）によりドライアイと診断された２７例の被験者に対して、二重盲検試験でEPA及びDHAの有効性を評価した。点眼薬などによる通常のドライアイ治療を継続した状態でActive又はPlaceboのサプリメントを12週間摂取させた。Active群には1日あたりEPAを1245mg、DHAを540mg摂取する量の精製魚油のカプセル（15カプセル）を投与した。Placebo群には中鎖脂肪酸トリグリセライド(MCT) のカプセル（15カプセル）を投与した。有効性の測定は投与前、投与後4週間、8週間、12週間、投与後観察期間4週間の計5回行った。【００２９】
評価項目は以下の６項目行った。
・VASテストで目の痛みの主観評価：Visual analog
scaleを用いて、痛みの程度を視覚的に評価する。
・VASテストで目の乾きの主観評価：Visual analog
scaleを用いて、乾きの程度を視覚的に評価する。
・Tear film breakup time （BUT、涙液層破壊時間）：ドライアイの診断基準の一つ。フルオレセインを点眼後、瞬きを我慢してもらい角膜表面の涙液層が破壊されるまでの時間を測定する検査。涙液保持力を判定する。10秒以上は正常、5秒以下をドライアイの疑いと評価する。
・フルオレセイン染色で目の傷を評価：フルオレセインという黄色の染色液を点眼して、眼の表面にある傷を染めて、ドライアイの重症度を判定する。フルオレセインは結膜も染めるが主に角膜の傷を評価することができる。
・ローズベンガル染色で目の傷を評価：ローズベンガルという赤色の染色液を点眼して、眼の表面にある傷を染めて、ドライアイの重症度を判定する。ローズベンガルは主にムチン層が障害された結膜を評価することができる。
・シルマーテストで涙量を評価：シルマーテストは涙液の分泌量を測定する検査であり、５分間、細長い濾紙を下まぶたに挟み、涙で濡れた長さを測定する。５mm以下を異常値と評価する。【００３０】
結果
被験者数はActive群12名、Placebo群15名となった。
それぞれの評価項目の結果を図１〜８に示した。
VASテストによる目の痛みの評価、涙液層破壊時間、ローズベンガル染色テストではPlacebo群と比べて統計的に有意差をもって、効果があることが示された。他の項目でもActive群においてPlacebo群よりも好ましい傾向が見られた。
【実施例３】
【００３１】
眼精疲労症状を有する被験者を対象に、二重盲検ランダム化比較試験により、１日当たり、EPA162ｍｇ、DHA784ｍｇ、アントシアニジン５９ｍｇ、ルテイン１７ｍｇをカプセル剤として摂取させるActive群と中鎖脂肪酸のトリグリセリドを含むカプセル剤を摂取させるPlacebo群との効果を比較した。【００３２】
結果
被験者数は、Active群は11名、Placebo群は９名であった。投与開始後４週間目の自覚症状評価において、眼の症状のうち、乾燥の項目においてActive群でPlacebo群と比べて統計的に有意な回復が認められた。また、眼の症状のうち、疲労感、かすみ、充血、ちらつきの項目において、Active群では投与前に比べて投与開始後4週間目で有意な回復が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明によりドライアイ、コンタクトレンズ使用、眼瞼内反の睫毛による刺激、結膜結石、ウイルス性結膜炎、アレルギー性結膜炎などさまざまな原因による目、特に角膜上皮及び結膜上皮の障害を緩和し、不快感等を軽減するための医薬品、サプリメントを供給することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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