(57)【要約】対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給した後、対象物の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する、導入対象物質の送達方法および導入対象物質の送達装置の作動方法を提供する。
2012056756.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体内に存在する組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部と、前記組織の標的部位に圧力を負荷する圧力負荷部とを備えた導入対象物質の送達装置の作動方法であって、
（１−１）供給部から導入対象物質を送出させ、前記管路に前記導入対象物質を供給する工程、および
（１−２）前記工程（１−１）と同時または前記工程（１−１）の後、圧力負荷部に前記組織の標的部位に対する圧力を発生させる工程
を含む導入対象物質の送達装置の作動方法。
【請求項２】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記圧力負荷部が、標的部位を吸引する吸引部を備えており、
前記工程（１−２）において、前記吸引部に前記標的部位を吸引させることにより、この標的部位に対する吸引圧を発生させる請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記圧力負荷部が、標的部位を押圧する押圧部と、前記組織の位置を固定して保持する保持部とを備えており、
前記工程（１−２）において、前記押圧部に前記標的部位を押圧させることにより、この標的部位に対する押圧力を発生させる請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記保持部が、生体内に埋め込み可能とされている請求項４に記載の方法。
【請求項６】
非ヒト哺乳動物の組織の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（２−１）  前記組織の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する工程、および
（２−２）  前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記組織の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程
を含む導入対象物質の送達方法。
【請求項７】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記工程（２−２）において、標的部位に対して吸引圧を負荷する請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記工程（２−２）において、組織の位置を固定しながら、標的部位を押圧する請求項６または７に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織が臓器の組織であり、
前記工程（２−２）において、前記臓器を収容可能なケースに臓器を収容して前記組織の位置を固定しながら、標的部位を押圧する請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
生体由来の対象物の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（３−１）  前記対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する工程、および
（３−２）  前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記対象物の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程、
を含む対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法。
【請求項１２】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記工程（３−２）において、標的部位に対して吸引圧を負荷する請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記工程（３−２）において、標的部位の位置を固定しながら、押圧する請求項１１または１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
疾患の治療、診断などに際しては、生体内の分子を標的とする種々の薬剤、タンパク質、ペプチド、抗体、核酸などの物質などが用いられている。例えば、前記核酸を含む医薬（以下、「核酸医薬」という）は、ＤＮＡからｍＲＮＡへの転写、ｍＲＮＡからタンパク質への翻訳、タンパク質の生理活性などを制御する性質を有する。したがって、核酸医薬は、種々の疾患の治療への応用が期待されている。前記核酸医薬による効果を十分に発揮させるためには、当該核酸医薬を標的部位に効率よく送達することが望まれている。【０００３】
核酸を臓器などの標的部位に送達する方法として、例えば、注射器によって核酸を標的部位に直接注入する方法（以下、「直接注入法」という）、カテーテルを臓器の脈管構造中に留置して体液の流れを閉塞して隔絶された領域に核酸を注入する方法（例えば、特許文献１、非特許文献１および２などを参照）などが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００６―５０１１７７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】サイモン・ジェイ・イーストマン（Ｓｉｍｏｎ  Ｊ．  Ｅａｓｔｍａｎ）ら、「隔絶されたウサギ肝臓にプラスミドＤＮＡを導入するためのカテーテルによる処置の開発（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｔｈｅｔｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ｌｉｖｅｒ  ｗｉｔｈ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ．）」ヒューマン・ジーン・セラピー（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２００２年１１月２０日発行、第１３巻、ｐｐ．２０６５−２０７７
【非特許文献２】エスイー・コーサンディ（ＳＥ  Ｋｈｏｒｓａｎｄｉ）ら、「ブタおよびヒトにおける肝臓区域の低侵襲性選択的ハイドロダイナミック遺伝子治療（Ｍｉｎｉｍａｌｌｙ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｇ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ）」キャンサー・ジーン・セラピー（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２００８年発行、第１５巻、ｐｐ．２２５−２３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、前記直接注入法は、注射器の針によって、標的部位周辺の組織に障害をもたらすことがあるという欠点がある。
また、前記特許文献１、非特許文献１および２に記載の方法では、カテーテルにより隔絶された領域には核酸を送達することができるが、臓器などにおける標的部位のみに局所的に核酸を送達したり、複数の標的部位に一度に核酸を送達したりすることが困難であるという欠点がある。【０００７】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、効率よく、標的部位に局所的に導入対象物質を送達することができる、導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕  生体内に存在する組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部と、前記組織の標的部位に圧力を負荷する圧力負荷部とを備えた導入対象物質の送達装置の作動方法であって、
（１−１）供給部から導入対象物質を送出させ、前記管路に前記導入対象物質を供給する工程、および
（１−２）前記工程（１−１）と同時または前記工程（１−１）の後、圧力負荷部に前記組織の標的部位に対する圧力を発生させる工程
を含む導入対象物質の送達装置の作動方法、
〔２〕  前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である前記〔１〕に記載の方法、
〔３〕  前記圧力負荷部が、標的部位を吸引する吸引部を備えており、
前記工程（１−２）において、前記吸引部に前記標的部位を吸引させることにより、この標的部位に対する吸引圧を発生させる前記〔１〕または〔２〕に記載の方法、
〔４〕  前記圧力負荷部が、標的部位を押圧する押圧部と、前記組織の位置を固定して保持する保持部とを備えており、
前記工程（１−２）において、前記押圧部に前記標的部位を押圧させることにより、この標的部位に対する押圧力を発生させる前記〔１〕または〔２〕に記載の方法、
〔５〕  前記保持部が、生体内に埋め込み可能とされている前記〔４〕に記載の方法、
〔６〕  非ヒト哺乳動物の組織の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（２−１）  前記組織の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する工程、および
（２−２）  前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記組織の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に前記導入対象物質を送達する工程
を含む導入対象物質の送達方法、
〔７〕  前記導入対象物質が核酸である前記〔６〕に記載の方法、
〔８〕  前記工程（２−２）において、標的部位に対して吸引圧を負荷する前記〔６〕または〔７〕に記載の方法、
〔９〕  前記工程（２−２）において、組織の位置を固定しながら、標的部位を押圧する前記〔６〕または〔７〕に記載の方法、
〔１０〕  前記組織が臓器の組織であり、
前記工程（２−２）において、前記臓器を収容可能なケースに臓器を収容して前記組織の位置を固定しながら、標的部位を押圧する前記〔９〕に記載の方法、
〔１１〕  生体由来の対象物の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（３−１）  前記対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する工程、および
（３−２）  前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記対象物の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程、
を含む対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法、
〔１２〕  前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である前記〔１１〕に記載の方法、
〔１３〕  前記工程（３−２）において、標的部位に対して吸引圧を負荷する前記〔１１〕または〔１２〕に記載の方法、ならびに
〔１４〕  前記工程（３−２）において、標的部位の位置を固定しながら、押圧する前記〔１１〕または〔１２〕に記載の方法
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法によれば、効率よく、標的部位に局所的に導入対象物質を送達することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明に用いられる導入対象物質の送達装置の構成を示すブロック図である。
【図２】本発明に用いられる導入対象物質の送達装置（第１の送達装置）の要部構成を示す概略説明図である。
【図３】第１の送達装置の圧力負荷部の構成を示す概略説明図である。
【図４】本発明に用いられる導入対象物質の送達装置（第２の送達装置）の要部構成を示す概略説明図である。
【図５】第２の送達装置の保持部の一例の構成を示す斜視説明図である。
【図６】第２の送達装置の保持部を腎臓に取り付ける際の手順を示す工程図である。
【図７】第２の送達装置の圧力負荷部の構成を示す概略説明図である。
【図８】本発明の一実施の形態に係る導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法の処理手順を示す工程図である。
【図９】本発明の他の実施の形態に係る導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法の処理手順を示す工程図である。
【図１０】実施例１において、マウスにおける注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す図面代用写真である。
【図１１】実施例２において、マウスの肝臓における１ヶ所の標的部位を吸引した場合における注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す図面代用写真である。
【図１２】実施例３において、マウスの肝臓における２ヶ所の標的部位を同時に吸引した場合における注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す図面代用写真である。
【図１３】試験例１において、種々の条件下に注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す図面代用写真である。
【図１４】実施例４において、用いたデバイスの種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図１５】（Ａ）は試験例２において、吸引部を設置した部分の肝臓中における位置を示す概略説明図である。（Ｂ）は図１５（Ａ）に示された吸引部の設置部分の拡大説明図である。（Ｃ）は試験例２において、ルシフェラーゼ活性を測定する対象となる部分の切片を示す概略説明図である。
【図１６】試験例２において、肝臓の部位とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図１７】試験例３において、注入した試料の種類とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図１８】試験例４において、圧力の負荷に用いた押圧部の構成を示す概略説明図である。
【図１９】試験例４において、負荷空気圧または圧力の負荷の手法とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図２０】試験例５において、圧力負荷条件とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図２１】実施例５において、対象物の種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図２２】実施例６において、用いたデバイスの種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【図２３】試験例６において、導入方法の種類とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明者らは、対象物において、標的部位とは異なる部位に核酸を注入し、標的部位に圧力（吸引圧または押圧力）を負荷することにより、核酸を標的部位に局所的に送達することができ、しかも、かかる標的部位において、前記核酸にコードされたタンパク質や前記核酸の機能を発現させることができることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいてなされたものである。
【００１２】
なお、本明細書において、「組織」とは、体液や代謝産物を輸送する管路を有する動物の臓器を構成する組織であり、上皮組織、結合組織、筋組織、神経組織などをいう。例えば、腎臓、肝臓、膵臓、胃、脾臓、心臓、小腸、大腸、肺、子宮、膀胱、食道、十二指腸、脳、眼球、気管、骨格筋、横隔膜、副腎、前立腺、卵巣、卵管などを構成する組織などをいう。また、本明細書において、「管路」とは、動物の血管、輸尿管、リンパ管などをいう。「標的部位の上流に位置する管路」とは、標的部位に、体液や代謝産物を輸送する管路をいう。「上流」とは、体液や代謝産物が流れていく方向の始点側を意味する。
【００１３】
前記導入対象物質としては、特に限定されるものではなく、例えば、核酸、薬剤、タンパク質、ペプチドもしくはその誘導体（以下、「ペプチド誘導体」ともいう）、抗体、高分子化合物、金属（例えば、金属ナノ粒子など）、半導体〔例えば、量子ドット（Ｑｕａｎｔｕｍ  ｄｏｔ）など〕、またはそれらを複合して構成された物質などが挙げられる。なお、「ペプチド誘導体」には、ペプチド骨格を有する化合物が包含される。また、本明細書において、タンパク質、ペプチドおよびペプチド誘導体を総称して、「ペプチド化合物」という。これらのなかでは、通常、細胞膜を透過しにくいにもかかわらず、本発明によって組織や臓器の細胞内に効率よく導入することができることから、核酸またはペプチド化合物が好ましい。
【００１４】
１．導入対象物質の送達装置の作動方法
本発明は、１つの側面では、生体内に存在する組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部と、前記組織の標的部位に圧力を負荷する圧力負荷部とを備えた導入対象物質の送達装置の作動方法であって、
（１−１）供給部から導入対象物質を送出させ、前記管路に前記導入対象物質を供給する工程、および
（１−２）前記工程（１−１）と同時または前記工程（１−１）の後、圧力負荷部に前記組織の標的部位に対する圧力を発生させる工程
を含む導入対象物質の送達装置の作動方法に関する（以下、「方法１」という）。
【００１５】
前記方法１は、前記送達装置の供給部から導入対象物質を送出させ、生体内に存在する組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給することに１つの大きな特徴がある。したがって、前記方法１によれば、組織の標的部位における不要な損傷の発生を抑制することができる。また、前記方法１は、前記管路への導入対象物質の供給と同時またはその後に、圧力負荷部に前記組織の標的部位に対する圧力を発生させる点にも１つの大きな特徴がある。したがって、前記方法１によれば、圧力が負荷された標的部位に局所的に導入対象物質を送達することができる。また、前記導入対象物質として、細胞膜を透過しにくい物質を用いた場合であっても、標的部位に当該物質を送達することができる。
【００１６】
前記生体としては、例えば、体液や代謝産物を輸送する管路を有する動物などが挙げられる。かかる動物としては、ヒト、非ヒト哺乳動物、鳥類（例えば、ニワトリ、ウズラなど）などが挙げられる。
【００１７】
つぎに、方法１に用いられる導入対象物質の送達装置の例について、添付の図面を参照して説明する。しかしながら、本発明は、例示された送達装置により限定されるものではない。図１は、本発明に用いられる導入対象物質の送達装置の構成を示すブロック図である。
【００１８】
図１に示される送達装置１は、生体内に存在する組織の標的部位に圧力を負荷する圧力負荷部１０ａと、前記組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部３０と、圧力負荷部１０ａおよび供給部３０を制御する制御部４０とを有している。
【００１９】
方法１に用いられる送達装置は、圧力として吸引圧を負荷する装置（第１の送達装置）と、圧力として押圧力を負荷する装置（第２の送達装置）とに大別される。以下、各送達装置について説明する。
【００２０】
図２は、本発明に用いられる導入対象物質の送達装置（第１の送達装置）の要部構成を示す概略説明図である。また、図３は、第１の送達装置の圧力負荷部の構成を示す概略説明図である。第１の送達装置１は、生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1に吸引圧を負荷する圧力負荷部１０ａと、前記組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2に導入対象物質を供給する供給部３０と、供給部３０および圧力負荷部１０ａを制御する制御部（図示せず）を有している。
【００２１】
圧力負荷部１０ａは、図３に示されるように、組織Ｓ0に接触させ、標的部位Ｓ1を吸引する吸引部１１と、吸引部１１内の空気を吸引する吸引器や他のデバイスと接続するための接続部１２と、吸引部１１および接続部１２の間を接続する屈曲可能な管体１３とを有する。接続部１２の一端は、管体１３と接続しており、他端は、吸引部１１内の空気を吸い出す吸引器や他のデバイス（例えば、内視鏡、鉗子など）と接続可能となっている。
【００２２】
吸引部１１は、カップ状であり、吸引部１１内の空気を吸い出すための吸引口１１ａを有している（図２参照）。
【００２３】
圧力負荷部１０ａでは、吸引口１１ａから吸引部１１内の空気が吸い出されることで、組織Ｓ0の標的部位Ｓ1を吸引する（図２参照）。これにより、供給部３０によって管路Ｓ2に注入された導入対象物質が標的部位Ｓ1に送達される。
【００２４】
この圧力負荷部１０ａの大きさは、吸引部１１内の空気を吸い出す吸引器や他のデバイス（例えば、内視鏡、鉗子など）に取り付けることができる程度の大きさとなっている。
【００２５】
供給部３０は、導入対象物質を貯留する貯留部３０ａと、この導入対象物質を送出する送出部３０ｂとを有している。送出部３０ｂは、標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2に挿入して当該管路Ｓ2に導入対象物質が導入できるように、先端が針状となっている。
【００２６】
制御部４０は、圧力負荷部１０ａと、供給部３０の貯留部３０ａおよび送出部３０ｂとを制御している。かかる制御部４０は、圧力負荷部１０ａによる標的部位Ｓ1の吸引、貯留部３０ａから送出部３０ｂへの導入対象物質の移送、送出部３０ｂから管路Ｓ2への導入対象物質の送出などを制御している。
【００２７】
なお、送達装置１は、制御部に代えて、圧力負荷部１０ａおよび供給部３０を手動で制御するように構成されていてもよい。
【００２８】
送達装置１では、圧力負荷部１０ａによって標的部位Ｓ1を吸引するため、送達装置１を用いることにより、従来の直接注入法と比べて、標的部位Ｓ1の損傷を抑制することができる。また、送達装置１によれば、従来のカテーテルを用いる方法のように血流を遮断しなくても、吸引圧を負荷した標的部位Ｓ1に導入対象物質を送達することができる。
【００２９】
さらに、生体内の臓器などへの導入対象物質の送達に際しては、圧力負荷部１０ａを挿入することができる程度の挿入口を生体に形成させれば、圧力負荷部１０ａを標的部位Ｓ1に設置することができる。したがって、送達装置１によれば、低侵襲での導入対象物質の送達が可能になる。
【００３０】
図４は、本発明に用いられる導入対象物質の送達装置（第２の送達装置）の要部構成を示す概略説明図である。
【００３１】
図４に示される送達装置２は、生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1に押圧力を負荷する圧力負荷部１０ｂと、前記組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2に導入対象物質を供給する供給部３０とを備えている。また、送達装置２は、圧力負荷部１０ｂおよび供給部３０を制御する制御部４０（パーソナルコンピュータ）を有している。
【００３２】
圧力負荷部１０ｂは、生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の位置を固定して保持する保持部２１と、流体によって膨脹することによって前記標的部位Ｓ1を押圧する押圧部２２と、生体内に設置され、生体外から流体を受領するポート２３と、前記ポート２３から押圧部２２に流体を供給する流路部２４と、ポート２３に接続され、当該ポート２３に流体を供給する流体供給部２５とを有している。流体供給部２５は、流体を貯留する流体貯留部２６と、制御部４０からの電気信号を流体圧力信号に変換する変換器２７と流体の圧力を検出する圧力センサ２８と、生体に穿刺されポート２３に接続されるニードル部２９と、このニードル部２９を保持する保持部２５ａとから構成されている。変換器２７は、制御部４０と接続されている。
【００３３】
保持部２１は、標的部位Ｓ1が存在する臓器などを収納する保持部本体１２１と、保持部本体１２１の側面に、臓器などにつながる管路Ｓ2が通る隙間を形成しつつ、保持部本体１２１の側面方向への臓器などの位置ずれを抑制する管路側蓋部１２２と、保持部本体１２１の上下方向への臓器などの位置ずれを抑制する上蓋部１２３とを有している（図５参照）。この保持部２１は、生体内に埋め込み可能となっている。かかる保持部２１は、押圧力を標的部位Ｓ1に効率よく負荷する観点から、剛性を有することが好ましい。また、保持部２１は、押圧力を標的部位Ｓ1に効率よく負荷する観点から、膨脹しないことが好ましい。
【００３４】
保持部本体１２１は、底部１２１ａと、側部１２１ｂ，１２１ｃ，１２１ｄとからなる（図５参照）。保持部本体１２１の側部１２１ｂ，１２１ｃそれぞれの内側には、上下方向に伸びる突出部１３１の側面と、側部１２１ｂ，１２１ｃそれぞれの端部１３２とにより、管路側蓋部１２２を嵌めこむ溝部１３３が形成されている〔図６（Ａ）参照〕。また、前記端部１３２の内側には、管路側蓋部１２２の上下方向位置を固定して臓器などにつながる管路Ｓ2が通る隙間を形成させるストッパー１３４が形成されている〔図６（Ａ）および（Ｂ）参照〕。保持部本体１２１の側部１２１ｂ，１２１ｃそれぞれの上側には、側部の１２１ｂ，１２１ｃそれぞれの長手方向に溝部１３５が形成されており、上蓋部１２３を嵌めこむことができるようになっている〔図６（Ａ）および（Ｃ）参照〕。
【００３５】
押圧部２２は、図７に示されるように、押圧部本体２２ａと、この押圧部本体２２ａに一体に設けられた８つのバルーン２２ｂと、８つのバルーン２２ｂに流体を供給する流路２２ｃと、流体を導入する流体導入口２２ｄとを備えている。バルーン２２ｂは、流体が供給されることにより膨脹するように構成されている。これにより、供給部３０によって管路（血管）Ｓ2に注入された導入対象物質が標的部位Ｓ1に送達される（図４参照）。
【００３６】
送達装置２において、圧力負荷部１０ｂの保持部２１およびポート２３の大きさは、例えば、標的部位Ｓ1が存在する臓器などの大きさなどによって異なるため、標的部位Ｓ1が存在する臓器などの大きさなどに応じて適宜決定することが望ましい。
【００３７】
送達装置２において、供給部３０は、前記送達装置１の供給部と同様である。
【００３８】
制御部４０は、圧力負荷部１０ｂと、供給部３０の貯留部３０ａおよび送出部３０ｂとを制御している。かかる制御部４０は、圧力負荷部１０ｂによる押圧力の負荷、貯留部３０ａから送出部３０ｂへの導入対象物質の移送、送出部３０ｂからの導入対象物質の送出などを制御している。
【００３９】
なお、送達装置２を、腎臓、肝臓、膵臓、胃、脾臓、心臓、小腸、大腸、肺、子宮、膀胱、食道、十二指腸、脳、眼球、気管、骨格筋、横隔膜、副腎、前立腺、卵巣、卵管などを構成する組織などに用いる場合、保持部２１は、前記組織を保持するのに適した形状を有すればよい。
【００４０】
送達装置２では、保持部２１によって標的部位Ｓ1の位置を固定することができるため、標的部位Ｓ1への押圧力の負荷に際して位置ずれが生じ難くなる。したがって、送達装置２を用いることにより、導入対象物質の送達に際する特異性を向上させることができる。
【００４１】
つぎに、第１の送達装置１を用いる場合の導入対象物質の送達装置の作動方法（「方法１−１」という）の各工程について、詳細に説明する。本発明の一実施の形態に係る導入対象物質の送達装置の作動方法の処理手順を示す工程図を図８に示す。
【００４２】
方法１−１を行なうに先立ち、送達装置１の圧力負荷部１０ａを生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2にセットしておく〔図８中、「セット工程Ｓ１−１」参照）〕。
【００４３】
方法１−１では、まず、供給部３０から導入対象物質を送出させ、管路Ｓ2に導入対象物質を供給する〔工程（１−１）（図８中、「導入対象物質供給工程Ｓ１−２」参照）〕。
【００４４】
管路Ｓ2における導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて、適宜設定することができる。導入対象物質の供給位置は、例えば、導入対象物質が核酸である場合、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離が、核酸が分解されない程度の距離となり、かつ導入対象物質の供給が容易である位置であることが好ましい。
【００４５】
この導入対象物質供給工程Ｓ１−２において、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などにより異なるので、一概に決定することはできない。したがって、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。
【００４６】
そして、前記導入対象物質供給工程Ｓ１−２と同時または前記導入対象物質供給工程Ｓ１−２の後、圧力負荷部１０ａに前記組織Ｓ0の標的部位Ｓ1を吸引させることにより、標的部位Ｓ1に対する吸引力を発生させる〔工程（１−２）（図８中、「吸引圧負荷工程Ｓ１−３」参照）〕。
【００４７】
この吸引圧負荷工程Ｓ１−３では、吸引圧の大きさは、標的部位Ｓ1への導入対象物質の送達量、吸引部１１の内径Ｄ1、外径Ｄ2および内壁の高さｈならびに吸引口１１ａの内径ｄにより異なるので、一概に決定することはできない。したがって、吸引圧の大きさは、標的部位Ｓ1への導入対象物質の送達量、吸引部１１の内径Ｄ1、外径Ｄ2および内壁の高さｈならびに吸引口１１ａの内径ｄに応じて決定することが好ましい。通常、１０ｋＰａ〜８０ｋＰａである。
【００４８】
かかる方法１−１では、吸引圧負荷工程Ｓ１−３は、前記導入対象物質供給工程Ｓ１−２と同時に行なってもよく、前記導入対象物質供給工程Ｓ１−２の後に行なってもよい。かかる吸引圧負荷工程Ｓ１−３を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００４９】
方法１−１では、圧力負荷部１０ａによって標的部位Ｓ1を吸引するので、導入対象物質を標的部位Ｓ1に特異的に送達することができる。
【００５０】
つぎに、第２の送達装置２を用いる場合の導入対象物質の送達装置の作動方法（「方法１−２」という）の各工程について、詳細に説明する。本発明の他の実施の形態に係る導入対象物質の送達方法の処理手順を示す工程図を図９に示す。
【００５１】
方法１−２を行なうに先立ち、送達装置２の圧力負荷部１０ｂを生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2にセットしておく〔図９中、（Ａ）参照〕。このとき、保持部２１内に標的部位Ｓ1が存在する臓器を収容し、臓器を囲むように押圧部２２を配置しておく。
【００５２】
方法１−２では、まず、供給部３０から導入対象物質を送出させ、管路Ｓ2に導入対象物質を供給する〔工程（１−１）（「導入対象物質供給工程」ともいう）、図９中、（Ｂ）参照〕。
【００５３】
導入対象物質の供給量は、前記方法１−１の場合と同様に、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。また、管路Ｓ2における導入対象物質の供給位置は、前記方法１−１の場合と同様に、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて、適宜設定することができる。
【００５４】
そして、前記導入対象物質供給工程と同時または前記導入対象物質供給工程の後、圧力負荷部のバルーン２２ｂに流体を供給してバルーン２２ｂを膨脹させ、バルーン２２ｂに接触する臓器の組織Ｓ0の標的部位Ｓ1に対する押圧力を発生させる〔工程（１−２）（「押圧力負荷工程」ともいう）、図９中、（Ｃ）参照〕。
【００５５】
バルーン２２ｂに供給する流体の量は、標的部位Ｓ1への押圧力と比例関係にある。そして、標的部位Ｓ1への押圧力は、標的部位Ｓ1に導入される導入対象物質の量と比例関係にある。したがって、押圧力負荷工程では、バルーン２２ｂに供給する流体の量は、標的部位Ｓ1に導入される導入対象物質の量に応じて決定することが好ましい。通常、押圧力の大きさが３０ｋＰａ〜８０ｋＰａとなるように流体の量を調整することが好ましい。
【００５６】
かかる方法１−２では、押圧力負荷工程は、前記導入対象物質供給工程と同時に行なってもよく、前記導入対象物質供給工程の後に行なってもよい。かかる押圧力負荷工程を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００５７】
２．導入対象物質の送達方法
〔１〕非ヒト哺乳動物の組織の標的部位への導入対象物質の送達方法
本発明は、他の側面は、非ヒト哺乳動物の組織の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（２−１）  前記組織の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する工程、および
（２−２）  前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記組織の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程
を含む導入対象物質の送達方法に関する（以下、「方法２」という）。
【００５８】
方法２は、非ヒト哺乳動物の組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する点および前記管路への導入対象物質の供給と同時またはその後に、前記組織の標的部位に対する圧力を負荷する点に１つの大きな特徴がある。したがって、前記方法２は、前記方法１と同様の作用効果を奏する。
【００５９】
非ヒト哺乳動物としては、例えば、サル、ブタ、イヌ、ウマ、マウス、ウサギ、ラット、ウシ、ヒツジ、モルモット、ハムスターなどが挙げられる。
【００６０】
方法２は、標的部位に負荷する圧力として、吸引圧を用いる方法（「方法２−１」という）および標的部位に負荷する圧力として、押圧力を用いる方法（「方法２−２」という）に大別される。
【００６１】
方法２−１は、前記方法１−１と同様に、例えば、図１に示される送達装置１を用い、図８に示される工程を行なうことにより実施することができる。したがって、図１に示される送達装置１を用いる場合、方法２−１に先立ち、送達装置１の圧力負荷部１０ａの少なくとも吸引部１１を生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2にセットしておく〔図８中、「セット工程Ｓ１−１」参照〕。
【００６２】
方法２−１では、まず、非ヒト哺乳動物の組織Ｓ0の上流に位置する管路Ｓ2に導入対象物質を供給する〔工程（２−１）、図８中、「導入対象物質供給工程Ｓ１−２」参照〕。
【００６３】
導入対象物質の供給量は、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。
【００６４】
管路における導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて、適宜設定することができる。導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離が、導入対象物質を安定に保持できる程度の距離となり、かつ導入対象物質の供給が容易である位置であることが好ましい。
【００６５】
また、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することができる。
【００６６】
つぎに、前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記組織Ｓ0の標的部位Ｓ1に圧力（吸引圧）を負荷して、当該標的部位Ｓ1に導入対象物質を送達する〔工程（２−２）、図８中、「吸引圧負荷工程Ｓ１−３」参照〕。
【００６７】
吸引圧の大きさは、標的部位Ｓ1への導入対象物質の送達量などに応じて決定することが好ましい。通常、１０ｋＰａ〜８０ｋＰａである。
【００６８】
かかる方法２−１では、工程（２−２）における標的部位Ｓ1の吸引は、工程（２−１）と同時に行なってもよく、工程（２−１）の後に行なってもよい。かかる工程（２−２）を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００６９】
一方、方法２−２は、前記方法１−２と同様に、例えば、図４に示される送達装置２を用い、図９に示される工程を行なうことにより実施することができる。したがって、図４に示される送達装置２を用いる場合、方法２−２に先立ち、送達装置２の圧力負荷部１０ｂを生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を生体内に存在する組織Ｓ0の標的部位Ｓ1の上流に位置する管路Ｓ2にセットしておく〔図９中、（Ａ）参照〕。このとき、保持部２１内に標的部位Ｓ1が存在する臓器を収容し、臓器を囲むように押圧部２２を配置しておく。
【００７０】
方法２−２では、まず、組織Ｓ0の上流に位置する管路Ｓ2に導入対象物質を供給する〔図９中、（Ｂ）参照〕。
【００７１】
導入対象物質の供給量は、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。
【００７２】
管路Ｓ2における導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて、適宜設定することができる。導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離が、導入対象物質を安定に保持できる程度の距離となり、かつ導入対象物質の供給が容易である位置であることが好ましい。
【００７３】
方法２−２では、つぎに、前記工程（２−２）において、組織Ｓ0の位置を固定しながら、標的部位Ｓ1を押圧する〔図９中、（Ｃ）参照〕。これにより、標的部位Ｓ1に押圧力を負荷することができ、標的部位Ｓ1に導入対象物質を送達することができる。
【００７４】
方法２−２では、組織Ｓ0の位置の固定は、組織Ｓ0が臓器の組織である場合、前記工程（２−２）において、前記臓器を収容可能なケースに臓器を収容して前記組織Ｓ0の位置を固定しながら、標的部位Ｓ1を押圧することが好ましい。
【００７５】
標的部位Ｓ1への押圧力の大きさは、標的部位Ｓ1に導入される導入対象物質の量に応じて決定することが好ましい。通常、３０ｋＰａ〜８０ｋＰａである。
【００７６】
かかる方法２−２では、工程（２−２）における標的部位Ｓ1への押圧は、工程（２−１）と同時に行なってもよく、工程（２−１）の後に行なってもよい。かかる工程（２−２）を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００７７】
なお、本導入対象物質の送達方法は、非ヒト動物以外に、ヒトに対しても応用することができる。これにより、ヒトの疾患の治療や予防における核酸、薬剤、ペプチド化合物、抗体、高分子化合物、金属（例えば、金属ナノ粒子など）、半導体（例えば、量子ドットなど）、またはそれらを複合して構成された物質などの種々の導入対象物質の標的部位への局所的な送達、ヒトの診断における前記導入対象物質の標的部位への局所的な送達などが可能となる。
【００７８】
〔２〕生体由来の対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法
本発明は、さらに他の側面では、生体由来の対象物の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（３−１）  前記対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する工程、および
（３−２）  前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記対象物の標的部位に圧力を負荷して、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程、
を含む対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法に関する（以下、「方法３」という）。
【００７９】
方法３は、生体由来の対象物の標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する点および生体由来の対象物の標的部位とは異なる部位への導入対象物質の供給と同時またはその後に、前記組織の標的部位に対する圧力を負荷する点に１つの大きな特徴がある。したがって、前記方法３は、前記方法１と同様の作用効果を奏する。
【００８０】
前記生体としては、例えば、ヒト、非ヒト哺乳動物、鳥類（例えば、ニワトリ、ウズラ）などが挙げられる。
【００８１】
前記生体由来の対象物としては、生体から単離した組織（例えば、腎臓、肝臓、膵臓、胃、脾臓、心臓、小腸、大腸、肺、子宮、膀胱、食道、十二指腸、脳、眼球、気管、骨格筋、横隔膜、副腎、前立腺、卵巣、卵管などを構成する組織）、生体から単離した臓器（例えば、腎臓、肝臓、膵臓、胃、脾臓、心臓、小腸、大腸、肺、子宮、膀胱、食道、十二指腸、脳、眼球、気管、骨格筋、横隔膜、副腎、前立腺、卵巣、卵管など）、生体の細胞から構成された人工組織（例えば、体細胞や幹細胞を由来とする単一種類の細胞で構成された細胞集合体、体細胞や幹細胞を由来とする単一種類の細胞集団と細胞の足場からなる集合体など）、生体の細胞から構成された人工臓器（例えば、体細胞や幹細胞を由来とする複数種類の細胞で構成された細胞集合体、体細胞や幹細胞を由来とする複数種類の細胞集団と細胞の足場からなる集合体など）などが挙げられる。これらの対象物は、標的部位につながる管路を有するものであることが望ましいが、これに限るものではない。
【００８２】
方法３は、標的部位に負荷する圧力として、吸引圧を用いる方法（「方法３−１」という）および標的部位に負荷する圧力として、押圧力を用いる方法（「方法３−２」という）に大別される。
【００８３】
方法３−１は、前記方法１−１および２−１と同様に、例えば、図１に示される送達装置１を用い、図８に示される工程を行なうことにより実施することができる。また、したがって、図１に示される送達装置１を用いる場合、方法３−１に先立ち、送達装置１の圧力負荷部１０ａの少なくとも吸引部１１を標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を標識部位Ｓ1とは異なる部位にセットしておく〔図８中、「セット工程Ｓ１−１」参照〕。
【００８４】
方法３−１では、まず、前記対象物において、標識部位Ｓ1とは異なる部位に導入対象物質を供給する〔工程（３−１）、図８中、「導入対象物質供給工程Ｓ１−２」参照〕。
【００８５】
導入対象物質の供給量は、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。
【００８６】
対象物への導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて、適宜設定することができる。導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離が、導入対象物質を安定に保持できる程度の距離となり、かつ導入対象物質の供給が容易である位置であることが好ましい。
【００８７】
また、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することができる。
【００８８】
つぎに、前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記対象物の標的部位Ｓ1に圧力（吸引圧）を負荷して、当該標的部位Ｓ1に導入対象物質を送達する〔工程（３−２）（図８中、「吸引圧負荷工程Ｓ１−３」参照）〕。
【００８９】
吸引圧の大きさは、標的部位Ｓ1への導入対象物質の送達量などに応じて決定することが好ましい。通常、１０ｋＰａ〜８０ｋＰａである。
【００９０】
かかる方法３−１では、工程（３−２）における標的部位Ｓ1の吸引は、工程（３−１）と同時に行なってもよく、工程（３−１）の後に行なってもよい。かかる工程（３−２）を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００９１】
一方、方法３−２は、生体由来の対象物として、生体から単離した筋肉などの組織、生体から単離した臓器または生体の細胞から構成された人工臓器を用いる場合に好適である。この場合、かかる方法３−２は、前記方法１−２と同様に、例えば、図４に示される送達装置２を用い、図９に示される工程を行なうことにより実施することができる。この場合、方法３−２に先立ち、送達装置２の圧力負荷部１０ｂを生体由来の対象物の標的部位Ｓ1にセットしておくとともに、供給部３０を対象物において、標的部位Ｓ1とは異なる部位にセットしておく〔図９中、（Ａ）参照〕。
【００９２】
そして、生体由来の対象物において、標的部位Ｓ1とは異なる部位に導入対象物質を供給する〔図９中、（Ｂ）参照〕。
【００９３】
導入対象物質の供給量は、導入対象物質の供給量は、導入対象物質の種類、標的部位Ｓ1の種類などに応じて決定することが好ましい。
【００９４】
対象物における導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の送達の効率を向上させる観点から、標的部位Ｓ1との間で物質の輸送が行なわれる部位であることが好ましい。このような標的部位Ｓ1との間で物質の輸送が行なわれる部位としては、例えば、管路、人工的に作製された管路などが挙げられる。また、前記導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の種類や安定性、標的部位Ｓ1の位置などに応じて設定することが好ましい。具体的には、導入対象物質の供給位置は、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離が、導入対象物質を安定に保持できる程度の距離となり、かつ導入対象物質の供給が容易である位置であることが好ましい。
【００９５】
方法３−２では、つぎに、前記工程（３−２）において、標的部位Ｓ1の位置を固定しながら、押圧する〔図９中、（Ｃ）参照〕。これにより、標的部位Ｓ1に押圧力を負荷することができ、標的部位Ｓ1に導入対象物質を送達することができる。
【００９６】
方法３−２では、標的部位Ｓ1の固定は、対象物が生体から単離した筋肉などの組織、生体から単離した臓器または生体の細胞から構成された人工臓器である場合、前記工程（３−２）において、前記臓器を収容可能なケースに臓器を収容して前記臓器を拘束することにより行なわれる。
【００９７】
標的部位Ｓ1への押圧力の大きさは、標的部位Ｓ1に導入される導入対象物質の量に応じて決定することが好ましい。通常、３０ｋＰａ〜８０ｋＰａである。
【００９８】
かかる方法３−２では、工程（３−２）における標的部位Ｓ1への押圧は、工程（３−１）と同時に行なってもよく、工程（３−１）の後に行なってもよい。かかる工程（３−２）を行なうタイミングは、導入対象物質の供給位置と標的部位Ｓ1との間の距離などに応じて適宜設定することができる。
【００９９】
以上のように、本発明の導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法によれば、効率よく、標的部位に局所的に導入対象物質を送達することができる。したがって、本発明の導入対象物質の送達装置の作動方法および導入対象物質の送達方法は、疾患の治療や予防における核酸、薬剤、ペプチド化合物、抗体、高分子化合物、金属（例えば、金属ナノ粒子など）、半導体（例えば、量子ドットなど）、またはそれらを複合して構成された物質などの種々の導入対象物質の標的部位への局所的な送達、診断における前記導入対象物質の標的部位への局所的な送達などに極めて有用である。
【実施例】
【０１００】
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。【０１０１】
（実施例１）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、肝臓を露出させた。その後、導入対象物質の送達装置１の圧力負荷部１０ａの吸引部１１（図２および図３参照）を肝臓における標的部位に設置した。なお、圧力負荷部１０ａの吸引部１１の内径Ｄ1は３ｍｍ、外径Ｄ2は５ｍｍ、内壁の高さｈは３ｍｍである。また、吸引部１１の吸引口１１ａの内径ｄは１ｍｍである。【０１０２】
つぎに、前記送達装置１の供給部３０によって、１００μｇのプラスミドｐＣＭＶ−ＬＵＣをマウスの尻尾の血管に注入した。そして、その直後に、前記送達装置１の圧力負荷部１０ａによって、５秒間、肝臓における標的部位を２．５ｍＬ相当量吸引した。その後、マウスの腹腔を閉じ、マウスを６時間飼育した。なお、前記プラスミドｐＣＭＶ−ＬＵＣは、ルシフェラーゼをコードする核酸を保持するプラスミド〔ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：Ｕ４７２９６、プロメガ社製ｐＧＬ３−ｃｏｎｔｒｏｌ）から作製されたプラスミドである〔野村（Ｔ．Ｎｏｍｕｒａ）ら、「ネイキッドプラスミドＤＮＡおよびＤＣ−ｃｈｏｌリポソーム複合体による直接的なインターフェロン（ＩＦＮ）−γ遺伝子導入後の遺伝子発現および抗腫瘍効果（Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｄｉｒｅｃｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  （ＩＦＮ）−γ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｗｉｔｈ  ｎａｋｅｄ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ＤＣ−ｃｈｏｌ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ）」、ジーン・セラピー（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、１９９９年１月発行、  第６巻、第１号、ｐ．１２１−１２９〕を参照〕【０１０３】
つぎに、マウスに麻酔を処置した。その後、腹腔内にルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを含むルシフェリン溶液２００μＬを投与した。なお、前記ルシフェリン溶液は、市販の試薬〔東洋ビーネット社製の商品名：ピッカジーン  ＰＧＬ１５００〕の取り扱い説明書にしたがい、ルシフェリンをその濃度が２５ｍｇ／ｍＬとなるように、生理食塩水に溶解することにより調製されたものである。投与後のマウスをイメージング装置（ベルトールドテクノロジーズ社製、商品名：ＮｉｇｈｔＯＷＬ  ＮＣ３２０）内に置き、ルシフェラーゼに基づく発光をカメラで撮影し、肉眼で観察した。実施例１において、マウスにおける注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を図１０に示す。図中、矢印により示された部位はルシフェラーゼに基づく発光が観察された部位を示す。【０１０４】
図１０に示された結果から、肉眼により、マウスの肝臓においてルシフェラーゼに基づく発光を確認することができることがわかる。したがって、この結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に注入された核酸が、圧力（吸引圧）が負荷された標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、前記核酸によりコードされたタンパク質が発現していることがわかる。【０１０５】
（実施例２および３）
実施例１において、ルシフェリンを含む溶液を投与後、腹腔を開き、マウスの肝臓を取り出したことを除き、実施例１と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼに基づく発光をカメラで撮影し、肉眼で観察した（実施例２）。実施例２において、マウスの肝臓における１ヶ所の標的部位を吸引した場合における注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を図１１に示す。図中、（Ａ）はマウスの肝臓を直接観察した結果、（Ｂ）はルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す。【０１０６】
また、実施例２において、マウスの肝臓における２ヶ所の標的部位を同時に吸引したことを除き、実施例２と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼに基づく発光をカメラで撮影し、肉眼で観察した（実施例３）。実施例３において、マウスの肝臓における２ヶ所の標的部位を吸引した場合における注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を図１２に示す。図中、（Ａ）はマウスの肝臓を直接観察した結果、（Ｂ）はルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を示す。【０１０７】
図１１（Ａ）及び（Ｂ）に示された結果から、１ヶ所の標的部位を吸引した場合には、肉眼により、かかる標的部位にのみルシフェラーゼに基づく発光を確認することができることがわかる。また、図１２（Ａ）及び（Ｂ）に示された結果から、２ヶ所の標的部位を同時に吸引した場合には、肉眼により、両方の標的部位にルシフェラーゼに基づく発光を確認することができることがわかる。したがって、これらの結果から、標的部位が複数ヶ所存在している場合、各標的部位を吸引することにより、対象物において、標的部位とは異なる部位に注入された核酸を各標的部位に送達することができることがわかる。【０１０８】
（試験例１）
実施例１において、表１に示された種々の条件下に核酸を注入したことを除き、実施例１と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼに基づく発光をカメラで撮影し、肉眼で観察した。なお、表中、直径Ｄ1は図２に示された送達装置１の圧力負荷部１０ａの吸引部１１の内径Ｄ1である。試験例１において、種々の条件下に注入した核酸にコードされたルシフェラーゼの発現部位を調べた結果を図１３に示す。【０１０９】
【表１】
2012056756.tif 000003
【０１１０】
図１３に示された結果から、吸引部１１を有する送達装置を用いた場合（図中、条件４、６および７）、肉眼により、標的部位にルシフェラーゼに基づく発光を確認することができることがわかる。なお、直径Ｄ1が２ｍｍである吸引部１１を有する送達装置を用いた場合、ルシフェラーゼに基づく発光は、肉眼では、はっきりと確認することができなかったが、後述の実施例４の結果を考慮すると、実際には、標的部位に核酸が送達されていると考えられる。【０１１１】
一方、図１３に示された結果から、吸引を行なわなかった場合（図中、条件２および３）、ルシフェラーゼの発光が確認できないことがわかる。【０１１２】
したがって、これらの結果、吸引部１１を有する送達装置を用いて、標的部位を吸引することにより、より効率的に核酸を標的部位に送達することができることが示唆される。【０１１３】
（実施例４）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、腎臓を露出させた。その後、送達装置１の圧力負荷部１０ａの吸引部１１（図２および図３参照）を腎臓における標的部位に設置した。なお、送達装置１として、表２に示されたデバイス番号：１〜４の送達装置それぞれを用いた。吸引部１１の内壁の高さｈは、３ｍｍである。【０１１４】
【表２】
2012056756.tif 000004
【０１１５】
つぎに、前記送達装置１の供給部３０により、前記ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ  １００μｇをマウスの尻尾の血管に注入した。そして、その直後に、前記送達装置１の圧力負荷部１０ａによって５秒間、表２に示された条件で、腎臓における標的部位の吸引を行なった。その後、マウスの腹腔を閉じ、マウスを６時間飼育した。【０１１６】
つぎに、マウスを麻酔下に安楽死させ、腎臓を取り出し、質量を測定した。その後、前記腎臓をＬｙｓｉｓ溶液〔組成：０．０５質量％  Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、２ｍＭエチレンジアミン四酢酸、０．１Ｍトリス−塩酸〕に対して、腎臓１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液５ｍＬとなるように添加した。そして、得られた混合物を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液１００μＬを添加し、混合し、混合物を得た。そして、発光量定量装置〔ＥＧ＆Ｇ  ＢＥＲＴＨＯＬＤ社製、商品名：Ｌｕｍａｔ  ＬＢ  ９５０７〕を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した。実施例４において、用いたデバイスの種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を図１４に示す。【０１１７】
図１４に示された結果から、同じ大きさの吸引部を用いた場合、吸引量が５ｍＬであるときのルシフェラーゼ活性は、吸引量が２．５ｍＬであるときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、この結果から、吸引量を調節することにより、送達すべき核酸の量を設定することができることが示唆される。【０１１８】
また、同じ吸引量としたときの場合、内径Ｄ1が４ｍｍであり、かつ外径Ｄ2が６ｍｍの吸引部を用いたときのルシフェラーゼ活性は、内径Ｄ1が２ｍｍであり、かつ外径Ｄ2が３ｍｍの吸引部を用いたときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、この結果から、吸引部の大きさを調節することにより、送達すべき核酸の量を設定することができることが示唆される。【０１１９】
さらに、同じ大きさの吸引部を用い、同じ吸引量とした場合、吸引圧を負荷した部位の数が３ヶ所であるときのルシフェラーゼ活性は、吸引圧を負荷した部位の数が１ヶ所であるときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、この結果から、吸引を繰り返すことで、送達すべき核酸の量または送達するべき場所を設定することができることが示唆される。【０１２０】
（試験例２）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、肝臓を露出させた。その後、送達装置１の圧力負荷部１０ａの吸引部１１（図２および図３参照）を肝臓における標的部位に設置した。なお、圧力負荷部１０ａの吸引部１１の内径Ｄ1は４ｍｍ、外径Ｄ2は８ｍｍ、内壁の高さｈは３ｍｍである。試験例２において、吸引部を設置した部分の肝臓中における位置を図１５（Ａ）に示す。図中、矢印は、吸引口が設置された部分に対応する。また、破線部は、吸引部の壁部が接触した部分に対応する。また、図１５（Ａ）に示された吸引部の設置部分の拡大説明図を図１５（Ｂ）に示す。【０１２１】
つぎに、前記送達装置１の供給部３０により、マウスの尻尾の血管に前記ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ１００μｇを注入した。そして、その直後に、前記送達装置１の圧力負荷部１０ａによって５秒間、肝臓における標的部位を２．５ｍＬ相当量吸引した。その後、マウスの腹腔を閉じ、マウスを６時間飼育した。【０１２２】
つぎに、マウスを麻酔下に安楽死させ、肝臓中における吸引部１１の設置部分を、直径８ｍｍ、高さ約３〜４ｍｍの円柱状になるようにくりぬいた。得られた切片について、さらに４つの切片に分けた。そして、各切片の質量を測定した。各切片を、ルシフェラーゼ活性を測定する対象として用いた。試験例２において、ルシフェラーゼ活性を測定する対象となる部分の切片を図１５（Ｃ）に示す。【０１２３】
前記切片を前記Ｌｙｓｉｓ溶液に対して、切片１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液２５ｍＬとなるように添加した。得られた混合物を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液１００μＬを添加し、混合し、混合物を得た。そして、前記発光量定量装置を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した。試験例２において、肝臓の部位とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を図１６に示す。【０１２４】
図１６に示された結果から、吸引口が接触した部分のうち、深さ約１．５ｍｍまでの部分（切片１）において、最もルシフェラーゼ活性が高くなることがわかる。この結果から、吸引部位の表面に核酸が局所的に送達されることが示唆された。【０１２５】
（試験例３）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、肝臓を露出させた。その後、送達装置１の圧力負荷部１０ａの吸引部１１（図２および図３参照）を肝臓における標的部位に設置した。なお、圧力負荷部１０ａの吸引部１１の内径Ｄ1は４ｍｍ、外径Ｄ2は６ｍｍ、内壁の高さｈは３ｍｍである。【０１２６】
つぎに、前記送達装置１の供給部３０により、マウスの尻尾の血管にｐＣＭＶ−Ｌｕｃ単独（導入試料番号１）１８μｇ、ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ１８μｇとルシフェラーゼをコードする核酸に対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ−ＬＵＣ）１０μｇとの組み合わせ（導入試料番号２）またはｐＣＭＶ−Ｌｕｃ１８μｇとスクランブルｓｉＲＮＡ１０μｇとの組み合わせ（導入試料番号３）を注入した。そして、その直後に、前記送達装置１の圧力負荷部１０ａによって５秒間、肝臓における標的部位を８０ｋＰａで吸引した。その後、マウスの腹腔を閉じ、マウスを６時間飼育した。【０１２７】
つぎに、マウスを麻酔下に安楽死させ、肝臓を取り出し、質量を測定した。その後、前記肝臓を前記Ｌｙｓｉｓ溶液に対して、肝臓１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液２５ｍＬとなるように添加した。得られた混合物を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液  １００μＬを添加し、混合し、混合物を得た。そして、前記発光量定量装置を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した。その後、ｐＣＭＶ−Ｌｕｃを単独で用いたときのルシフェラーゼ活性を１００％として、ルシフェラーゼ相対活性を算出した。試験例３において、導入した試料の種類とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を図１７に示す。【０１２８】
図１７に示された結果から、ｐＣＭＶ−ＬｕｃとｓｉＲＮＡ−ＬＵＣとの組み合わせを用いたときのルシフェラーゼ相対活性は、ｐＣＭＶ−Ｌｕｃを単独で用いたときのルシフェラーゼ相対活性の１７％であることがわかる。この結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に注入された核酸が、圧力（吸引圧）が負荷された標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、ｓｉＲＮＡの機能（ＲＮＡ干渉）が発現していることがわかる。【０１２９】
（試験例４）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、腎臓を露出させた。つぎに、図１８に示される押圧部２２を腎臓に接触させ、これらを２枚のプレートで挟んで固定した。なお、押圧部２２は、押圧部本体２２ａと、この押圧部本体２２ａに一体に設けられた４つのバルーン２２ｂと、４つのバルーン２２ｂそれぞれに流路を介して接続された空気供給部２２ｄとを備えている（図１８参照）。【０１３０】
つぎに、注射器で、マウスの尻尾の血管に前記ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ１００μｇを注入した。そして、その直後に、前記押圧部２２によって０ｋＰａ、３０ｋＰａ、５０ｋＰａ、６０ｋＰａまたは７０ｋＰａで５秒間腎臓を押圧した。その後、マウスの腹腔を閉じ、マウスを６時間飼育した。【０１３１】
つぎに、マウスを麻酔下に安楽死させ、腎臓を取り出し、質量を測定した。その後、ホモジナイザーを用い、前記腎臓を前記Ｌｙｓｉｓ溶液に対して、腎臓１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液５ｍＬとなるように添加した。得られた混合物を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液１００μＬを添加し、混合し、混合物を得た。そして、前記発光量定量装置を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した。一方、前記押圧部２２を用いる代わりに、指で腎臓を押圧したことを除き、前記と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼ活性を測定した。試験例４において、負荷空気圧または圧力の負荷の手法とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を図１９に示す。【０１３２】
図１９に示された結果から、マウスの腎臓においてルシフェラーゼ活性を検出することができることがわかる。したがって、この結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に注入された核酸が、圧力（押圧力）を負荷された標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、前記核酸によりコードされたタンパク質が発現していることがわかる。【０１３３】
また、図１９に示された結果から、負荷空気圧の大きさが大きいほど、ルシフェラーゼ活性が高くなっていることがわかる。一方、指により圧力を負荷した場合、ルシフェラーゼ活性を検出することができるが、発現量の調節は困難である。また、プレートで挟んで固定しなかった場合、バルーンで組織表面を触れるだけになり、核酸を送達することが困難である。したがって、この結果から、負荷空気圧の大きさを調節することにより、送達すべき核酸の量（発現量）を設定することができることが示唆される。【０１３４】
（試験例５）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、腎臓を露出させた。つぎに、図４に示される送達装置２の保持部２１を構成する保持部本体１２１内に腎臓Ｓ0をセットした〔図６（Ａ）参照〕。その後、血管側蓋部１２２を保持部本体１２１に取り付けた〔図６（Ｂ）参照〕。このとき、保持部本体１２１と血管側蓋部１２２との間の隙間から血管Ｓ2を保持部本体１２１外に出るようにした。つぎに、上蓋部１２３を保持部本体１２１に取り付け、腎臓Ｓ0を固定した〔図６（Ｃ）参照〕。なお、図６においては、押圧部２２の記載を省略している。【０１３５】
つぎに、圧力負荷部２２の一部〔図７中の２２ｄの部分〕だけがマウスの腹腔外に露出した状態となるように、マウスの腹腔を閉じた。前記送達装置２の供給部３０によって、マウスの尻尾の血管に前記ｐＣＭＶ−Ｌｕｃ１００μｇを注入した。そして、その直後に、前記送達装置２の押圧部２２によって６０ｋＰａ（負荷空気圧）で５秒間腎臓を押圧した。その後、マウスを６時間飼育した。【０１３６】
つぎに、マウスを麻酔下に安楽死させ、腎臓を取り出し、質量を測定した。その後、ホモジナイザーを用い、前記腎臓を前記Ｌｙｓｉｓ溶液に対して、腎臓１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液５ｍＬとなるように添加した。得られた混合物中の腎臓を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液１００μＬを添加し、混合物を得た。そして、前記発光量定量装置を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した。一方、負荷空気圧を６０ｋＰａとする代わりに、負荷空気圧を０ｋＰａとしたことを除き、前記と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼ活性を測定した。試験例５において、圧力負荷条件とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を図２０に示す。【０１３７】
図２０に示された結果から、マウスの尻尾の血管に核酸を注入した後、保持部２１によって腎臓を固定しながら押圧した場合、マウスの腎臓においてルシフェラーゼ活性を検出することができることがわかる。したがって、この結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に核酸を注入し、保持部で標的部位を固定しながら押圧した場合、前記核酸が標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、前記核酸によりコードされたタンパク質が発現していることがわかる。【０１３８】
また、図２０に示された結果から、保持部２１を有する送達装置２（図４参照）を用いた場合、腹腔を閉じた後であっても、核酸が標的部位に局所的に送達することができることがわかる。これに対し、２枚のプレートを用いて標的部位が存在する臓器を固定した場合（試験例４参照）には、腹腔を閉じることが困難である。そのため、開腹下状態のままでしか、核酸を標的部位に送達することができないと考えられる。したがって、これらの結果から、保持部を有する送達装置２を用いた場合、腹腔を繰り返し開くことなく、何度も核酸を標的部位に送達することができることが示唆される。【０１３９】
以上の結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に核酸などの導入対象物質を注入し、標的部位に圧力（吸引圧または押圧力）を負荷することにより、核酸などの導入対象物質を標的部位に局所的に送達することができ、しかも、かかる標的部位において、前記核酸などの導入対象物質の機能（例えば、導入対象物質が核酸である場合、核酸にコードされたタンパク質の発現、核酸の機能など）を発現させることができることがわかる。また、標的部位に押圧力を負荷する場合にあっては、保持部によって標的部位を固定することにより、効率よく核酸などの導入対象物質を標的部位に送達させることができることがわかる。したがって、本発明は、核酸医薬などの標的部位への局所的な送達に有用であることがわかる。【０１４０】
（実施例５）
実施例４において、対象物として腎臓、心臓、脾臓または肝臓を用いたことおよび対象物における標的部位に設置した圧力負荷部１０ａの条件を表３に示される条件としたことを除き、実施例４と同様の操作を行ない、ルシフェラーゼ活性を測定した。実施例５において、対象物の種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を図２１に示す。【０１４１】
【表３】
2012056756.tif 000005
【０１４２】
図２１に示された結果から、腎臓、心臓、脾臓および肝臓のいずれにおいても、ルシフェラーゼ活性が検出されることがわかる。したがって、これらの結果から、腎臓、心臓、脾臓および肝臓のいずれにおいても、標的部位とは異なる部位に注入された核酸が、圧力（吸引圧）が負荷された標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、前記核酸によりコードされたタンパク質が発現していることがわかる。【０１４３】
（実施例６）
実施例４において、対象物として腎臓の代わりに心臓を用いたことおよび送達装置１として、表４に示されたデバイス番号：５〜７の送達装置それぞれを用いたことを除き、実施例４と同様の操作を行ない、ルシフェラーゼ活性を測定した。実施例６において、用いたデバイスの種類とルシフェラーゼ活性との関係を調べた結果を図２２に示す。【０１４４】
【表４】
2012056756.tif 000006
【０１４５】
図２２に示された結果から、同じ大きさの吸引部を用いた場合、吸引圧を負荷した部位の数が２ヶ所であるときのルシフェラーゼ活性は、吸引圧を負荷した部位の数が１ヶ所であるときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、この結果から、吸引を繰り返すことで、送達すべき核酸の量または送達するべき場所を設定することができることが示唆される。【０１４６】
また、吸引圧を負荷した部位の数が同じである場合、内径Ｄ1が３ｍｍであり、かつ外径Ｄ2が４ｍｍの吸引部を用いたときのルシフェラーゼ活性は、内径Ｄ1が２ｍｍであり、かつ外径Ｄ2が３ｍｍの吸引部を用いたときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、この結果から、吸引部の大きさを調節することにより、送達すべき核酸の量を設定することができることが示唆される。【０１４７】
（試験例６）
麻酔下にあるマウスの腹腔を正中線に沿って切開し、腎臓を露出させた。その後、送達装置１の圧力負荷部１０ａ（図２および図３参照）を腎臓における標的部位に設置した。なお、送達装置１として、表５に示されたデバイスを用いた。【０１４８】
【表５】
2012056756.tif 000007
【０１４９】
リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）をその濃度が０．１質量％となるように添加し、０．１質量％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液を得た。得られた０．１質量％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に、ホタルルシフェラーゼ酵素溶液〔東洋ビーネット（株）製〕をホタルルシフェラーゼの濃度が０．０４μｇ／２００μＬとなるように添加し、混合物を得た。【０１５０】
つぎに、前記送達装置１の供給部３０により、前記混合物をマウスの尻尾の血管に注入した。その直後に、前記送達装置１の圧力負荷部１０ａによって５秒間、表５に示された条件で、片方の腎臓における標的部位に吸引圧を負荷した。その後、直ちにルシフェラーゼ活性の測定を行なった。【０１５１】
つぎに、マウスを麻酔下で脱血し、安楽死させたのちに、両方の腎臓を取り出し、質量を測定した。【０１５２】
その後、吸引圧が負荷された標的部位を有する腎臓をＬｙｓｉｓ溶液に対して、腎臓１ｇあたりＬｙｓｉｓ溶液１０ｍＬとなるように添加した。そして、得られた混合物を、ホモジナイザーを用いて４℃で均質溶質化して、組織破砕液を得た。つぎに、組織破砕液を遠心分離（１００００×ｇ、１０分間、４℃）に供し、上清を得た。得られた上清１０μＬに、前記ルシフェリンを含む溶液１００μＬを添加し、混合し、混合物を得た。そして、発光量定量装置〔ＥＧ＆Ｇ  ＢＥＲＴＨＯＬＤ社製、商品名：Ｌｕｍａｔ  ＬＢ  ９５０７〕を用いて、前記混合物のルシフェラーゼ活性を測定した（実験番号１の導入方法）。【０１５３】
一方、吸引圧が負荷された標的部位を有する腎臓の代わりに、吸引圧が負荷されていない腎臓を用いたことを除き、前記と同様に操作を行ない、ルシフェラーゼ活性を測定した（実験番号２の導入方法）。【０１５４】
つぎに、実験番号２の方法を行なったときのルシフェラーゼ活性を１００％として、相対活性を算出した。試験例６において、導入方法の種類とルシフェラーゼ相対活性との関係を調べた結果を図２３に示す。【０１５５】
図２３に示された結果から、実験番号１の導入方法を行なったときのルシフェラーゼ活性は、実験番号２の方法を行なったときのルシフェラーゼ活性と比べて、高くなっていることがわかる。したがって、かかる結果から、標的部位とは異なる部位に注入されたタンパク質が、圧力（吸引圧）が負荷された標的部位に局所的に送達されており、しかも、かかる標的部位において、前記タンパク質の生理活性が発現していることがわかる。【０１５６】
以上の結果から、対象物において、標的部位とは異なる部位に、核酸、ペプチド化合物などの導入対象物質を注入し、標的部位に圧力（吸引圧または押圧力）を負荷することにより、前記導入対象物質を標的部位に局所的に送達することができ、しかも、かかる標的部位において、前記導入対象物質の機能を発現させることができることがわかる。したがって、本発明は、疾患の治療や予防における核酸、薬剤、ペプチド化合物、抗体、高分子化合物、金属（例えば、金属ナノ粒子など）、半導体（例えば、量子ドットなど）、またはそれらを複合して構成された物質などの種々の導入対象物質の標的部位への局所的な送達、診断における前記導入対象物質の標的部位への局所的な送達などに有用であることが示唆される。【０１５７】
（試験例７）
対象物において、標的部位とは異なる部位に、薬剤、抗体、高分子化合物、金属ナノ粒子または量子ドットを溶媒に添加した混合物を注入し、標的部位に吸引圧または押圧力を負荷する。これにより、標的部位に、薬剤、抗体、高分子化合物、金属ナノ粒子または量子ドットを局所的に送達することができる。各物質に応じた検出方法により、標的部位における薬剤、抗体、高分子化合物、金属ナノ粒子または量子ドットの存在を確認することができる。
【符号の説明】
【０１５８】
１        送達装置
２        送達装置
１０      圧力負荷部
１０ａ    圧力負荷部
１０ｂ    圧力負荷部
１１      吸引部
１１ａ    吸引口
１２      接続部
１３      管体
２１      保持部
２２      押圧部
２２ａ    押圧部本体
２２ｂ    バルーン
２２ｃ    流路
２２ｄ    流体導入口
２３      ポート
２４      流路部
２５      流体供給部
２５ａ    保持部
２６      流体貯留部
２７      変換器
２９      ニードル部
３０      供給部
３０ａ    貯留部
３０ｂ    送出部
４０      制御部
１２１    保持部本体
１２１ａ  底部
１２１ｂ  側部
１２１ｃ  側部
１２１ｄ  側部
１２２    管路側蓋部
１２３    上蓋部
１３１    突出部
１３２    端部
１３３    溝部
１３４    ストッパー
１３５    溝部
Ｓ0       組織
Ｓ1       標的部位 
Ｓ2       管路（血管）
【図１】
2012056756.tif 000008
【図２】
2012056756.tif 000009
【図３】
2012056756.tif 000010
【図４】
2012056756.tif 000011
【図５】
2012056756.tif 000012
【図６】
2012056756.tif 000013
【図７】
2012056756.tif 000014
【図８】
2012056756.tif 000015
【図９】
2012056756.tif 000016
【図１０】
2012056756.tif 000017
【図１１】
2012056756.tif 000018
【図１２】
2012056756.tif 000019
【図１３】
2012056756.tif 000020
【図１４】
2012056756.tif 000021
【図１５】
2012056756.tif 000022
【図１６】
2012056756.tif 000023
【図１７】
2012056756.tif 000024
【図１８】
2012056756.tif 000025
【図１９】
2012056756.tif 000026
【図２０】
2012056756.tif 000027
【図２１】
2012056756.tif 000028
【図２２】
2012056756.tif 000029
【図２３】
2012056756.tif 000030
【手続補正書】
【提出日】平成23年12月14日(2011.12.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体内に存在する組織の標的部位の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部と、前記組織の標的部位に圧力を負荷する圧力負荷部とを備えた導入対象物質の送達装置の作動方法であって、
（１−１）供給部から導入対象物質を送出させ、前記管路に前記導入対象物質を供給する工程、および
（１−２）前記工程（１−１）と同時または前記工程（１−１）の後、圧力負荷部に前記組織の標的部位に対する圧力を発生させる工程
を含む導入対象物質の送達装置の作動方法。
【請求項２】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記圧力負荷部が、標的部位を吸引する吸引部を備えており、
前記工程（１−２）において、前記吸引部に前記標的部位を吸引させることにより、この標的部位に対する吸引圧を発生させる請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記圧力負荷部が、標的部位を押圧する押圧部と、前記組織の位置を固定して保持する保持部とを備えており、
前記工程（１−２）において、前記押圧部に前記標的部位を押圧させることにより、この標的部位に対する押圧力を発生させる請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記保持部が、生体内に埋め込み可能とされている請求項４に記載の方法。
【請求項６】
非ヒト哺乳動物の組織の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（２−１）  前記組織の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する工程、および
（２−２）  前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記組織の標的部位の外部から当該標的部位に吸引圧を負荷して、前記標的部位に導入対象物質を送達する工程
を含む導入対象物質の送達方法。
【請求項７】
生体内に存在する臓器につながる管路が通る隙間を有し、前記臓器を収容して当該臓器の組織の標的部位の位置を固定して保持し、かつ流体により膨脹して前記標的部位を押圧する圧力負荷部と、前記管路のうち前記組織の上流に位置する管路に導入対象物質を供給する供給部とを備える導入対象物質の送達装置を用い、非ヒト哺乳動物の組織の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（２−１）  前記供給部によって前記管路に導入対象物質を供給する工程、および
（２−２）  前記工程（２−１）と同時または前記工程（２−１）の後、前記圧力負荷部によって、標的部位の位置を固定して保持しながら、当該圧力負荷部を流体により膨張させてこの標的部位をその外部から押圧し、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程
を含む導入対象物質の送達方法。
【請求項８】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
生体由来の対象物の標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（３−１）  前記対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する工程、および
（３−２）  前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記対象物の標的部位の外部から当該標的部位に吸引圧を負荷して、前記標的部位に導入対象物質を送達する工程、
を含む対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法。
【請求項１２】
生体由来の対象物を収容して当該対象物の標的部位の位置を固定して保持し、かつ流体により膨脹して前記標的部位を押圧する圧力負荷部と、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する供給部とを備えた導入対象物質の送達装置を用い、前記標的部位に導入対象物質を送達する導入対象物質の送達方法であって、
（３−１）  前記供給部により、前記対象物において、標的部位とは異なる部位に導入対象物質を供給する工程、および
（３−２）  前記工程（３−１）と同時または前記工程（３−１）の後、前記圧力負荷部によって、標的部位の位置を固定して保持しながら、当該圧力負荷部を流体により膨張させてこの標的部位をその外部から押圧し、当該標的部位に導入対象物質を送達する工程
を含む対象物の標的部位への導入対象物質の送達方法。
【請求項１３】
前記導入対象物質が核酸またはペプチド化合物である請求項１１または１２に記載の方法。
【国際調査報告】
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