(57)【要約】  質量分析装置において分析対象物を定量するための検量線作成の迅速化と簡易化することができる質量分析装置である。質量分析装置において、定量する１つの分析対象物に対して、分析対象物、複数ある分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを含む分析対象物の試料を保存する試料保存・希釈部１と、試料をイオン化するイオン化部５と、イオン化された試料を分析する質量分析部６と、定量用キャリブレータが質量分析部６により分析された分析結果に基づいて、２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するデータ処理部７とを備えた。
2012093622.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析対象物を定量する分析装置における分析法であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを用意し、前記定量用キャリブレータを前記分析装置により測定することにより、前記定量用キャリブレータにて２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量することを特徴とする分析法。
【請求項２】
請求項１記載の分析法であって、分析法が質量分析法であることを特徴とする分析法。
【請求項３】
請求項２に記載の分析法において、
前記定量用キャリブレータは、２番目に高い濃度のキャリブレーション物質の濃度が最高濃度のキャリブレーション物質の濃度の１／１０以上の濃度であることを特徴とする分析法。
【請求項４】
請求項２に記載の分析法において、
質量分析装置によって生成される定量用キャリブレータに含まれるキャリブレーション物質由来の任意の２種のイオンのｍ／ｚの差が、前記質量分析装置の分解能ｍ／ｚより大きいことを特徴とする分析法。
【請求項５】
請求項２に記載の分析法において、
前記定量用キャリブレータに含まれる任意の２種のキャリブレーション物質が前記質量分析装置にて、３ｍ／ｚ以上異なった質量スペクトル信号として分析されることを特徴とする分析法。
【請求項６】
請求項２に記載の分析法において、
前記定量用キャリブレータは、２種以上の分析対象物の定量のために、前記２種以上の分析対象物の各々に対応する２種以上のキャリブレーション物質セットを含むことを特徴とする分析法。
【請求項７】
分析対象物を定量する質量分析装置であって、
定量する少なくとも１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物をキャリブレーション物質として異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを保存する試料保存部と、
試料をイオン化するイオン化部と、
前記イオン化された試料を分析する質量分析部と、
前記定量用キャリブレータが前記質量分析部により分析された分析結果に基づいて、２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するデータ処理部とを備えたことを特徴とする質量分析装置。
【請求項８】
請求項７に記載の質量分析装置において、
前記質量分析部は、前記イオン化部にて生成され、前記質量分析部に導入されたイオンの中から特定のイオンを選択し、選択したイオンにエネルギーを与えて解離を起こさせ、生成したプロダクトイオンを検出することを特徴とする質量分析装置。
【請求項９】
請求項８の質量分析装置において、２種以上のキャリブレーション物質のうち、任意の２つのキャリブレーション物質から生成したイオンを共に選択し、解離して、得られる２種以上のプロダクトイオンのｍ／ｚを識別することで、前記任意の２つのキャリブレーション物質を定量することを特徴とする質量分析装置。
【請求項１０】
請求項７に記載の質量分析装置において、
前記定量用キャリブレータは、少なくとも前記定量用キャリブレータに含まれる化合物名とその濃度の情報を識別する情報媒体が添付された試薬保存容器に保存されていることを特徴とする質量分析装置。
【請求項１１】
請求項１０に記載の質量分析装置において、
前記試薬保存容器に添付された情報媒体に対応した前記定量用キャリブレータの情報を保持するデータベースを備えたことを特徴とする質量分析装置。
【請求項１２】
分析対象物を定量する分析装置で使用されるキャリブレーション試料であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合されたことを特徴とするキャリブレーション試料。
【請求項１３】
請求項１２に記載のキャリブレーション試料において、
２番目に高い濃度のキャリブレーション物質の濃度が最高濃度のキャリブレーション物質の濃度の１／１０以上の濃度であることを特徴とするキャリブレーション試料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、質量分析装置において分析対象物を定量するための分析法および質量分析装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
分析対象物の定量分析を行うとき、通常２点以上の濃度の異なる分析対象物をそれぞれ測定し、その結果から信号強度と濃度の関係によって検量線を作成する必要がある。質量分析装置の安定性によって、数時間ごと、日ごと、または分析対象物ごとに検量線を作成する必要が出てくる。【０００３】
検量線の精度を高めるためには、通常３点以上の濃度点を使って検量線を作成する。検出器のサチュレーション、測定のバラつきなどの理由から、検量線が直線にならない場合があるからである。【０００４】
光学計測において分析対象物の定量のために検量線を作成するには、同一物質は同一波長で検出されるため、多濃度を同時に計測することは不可能であり、濃度の異なる分析対象物をそれぞれ測定し、検量線を作成する必要がある。光学計測における生化学検査には、多項目の分析対象物の校正が可能なマルチキャリブレーターを用いることが一般的であるが、これは互いに干渉しない分析対象物同士が１濃度点ずつ混合された試料であって、同一物質を多濃度点含むものではない。【０００５】
一方、本発明で用いる質量分析装置においても分析対象物の定量のために検量線を精度良く作成するには、少なくとも２点以上の濃度の異なる分析対象物をそれぞれ測定し、その測定結果から信号強度と濃度の関係によって検量線を作成する必要がある。【０００６】
一般的な質量分析法では、分析対象物をイオン化した後、生成された各種イオンを質量分析装置に取り込み、イオンの質量数と電荷の比である質量対電荷比（ｍ／ｚ）の値ごとに、イオンの測定強度を決定する。この結果得られるマススペクトルデータは、各質量対電荷比に対する測定されたイオンの測定強度のピークを含んでいる。つまり、質量が異なる物質であれば、質量分析装置では同時に検出することが可能である。【０００７】
さらに、生体試料のように多くの夾雑成分を含む試料の分析において、分析対象物をその代謝物などの類似構造分子と識別しようとするとき、タンデム質量分析法（MS/MS法）が使われる。このMS/MS法は、導入された試料から生成される多種イオンの中から特定の測定対象成分のイオンを分析装置内でガス等と衝突させ、解離させて生じる生成イオン（プロダクトイオン）を測定する。このMS/MS法により、類似構造成分同士の高精度識別が可能になる。すなわち、測定対象物と類似な構造の、測定したくない夾雑成分を排除した、測定対象物のみの測定が可能である。これにより、測定対象物イオンと質量数が同じである夾雑成分イオンがあったとしても、プロダクトイオンが異なれば、測定対象物イオンを識別できる。【０００８】
質量分析装置において、分析対象物を正確に定量したいとき、内標準物質として同位体標識した分析対象物の安定同位体化合物、または化学的物理的性質が類似した化合物（以下、類似体化合物とよぶ）を用いることが一般的である。内標準物質としては、質量分析装置に対する応答が分析対象物と類似し、かつ分析対象物と分離測定可能な安定同位体化合物および類似体化合物が選択される。【０００９】
すなわち、質量分析装置において測定するとき、分析対象物とその安定同位体化合物、類似体化合物はピーク強度の変動が同様の挙動を示すこととなり、なんらかの要因、例えば夾雑成分によるピーク強度の減少やイオン化効率の低下などが起こった場合、ピーク面積の増減が分析対象物と同様の挙動を示す。ここでプロダクトイオンを検出する場合、用いる安定同位体化合物はプロダクトイオンに含まれる元素が同位体標識化されている化合物でなければならない。【００１０】
つまり、質量分析装置において分析対象物の定量のために検量線を精度良く作成するには、分析対象物と内標準物質とを混合した溶液を異なる濃度点で２点以上用意して、少なくとも２回以上測定する必要がある。【００１１】
このように精度良く検量線を作成するには、多種類の濃度の異なる分析対象物を用意し、少なくとも２回以上の分析をしなければならず、その準備やそれらの試料を分析するのに手間と時間を要す。また、多種類の定量用キャリブレータの調製、測定などを行う際、人為的ミスが生じる可能性がある。【００１２】
このため、特開平５−７９９８４号公報（特許文献１）では、分析の効率化を図るために、用意された１つの高濃度定量用キャリブレータを用いて、必要に応じて自動希釈を何度か繰り返して測定することで、複数種類の標準溶液を用意する手間と人為的ミスを軽減している。【００１３】
また、安定同位体化合物を用いた分析法として、特開２０００−６５７９７号公報（特許文献２）があり、分析対象物自体に含まれる天然同位体比を利用して分析対象物を測定することで検量線を作成している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開平５−７９９８４号公報
【特許文献２】特開２０００−６５７９７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
しかしながら、特許文献１では、測定は複数回行わなければならず、測定時間の迅速化は達成できない。【００１６】
また、特許文献２の方法では、天然に存在する元素の同位体比を用いるので、検量線の測定濃度域を制御できないという問題がある。【００１７】
そこで、本発明の目的は、このような煩雑な操作が必要な検量線の作成を簡便かつ迅速に行い、さらに検量線作成に費やす分析時間と消耗品の消費を低減し、分析スループットの向上を図ることができる質量分析装置を提供することにある。【００１８】
本発明の前記ならびにその他の目的と新規な特徴は、本明細書の記述および添付図面から明らかになるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本願において開示される発明のうち、代表的なものの概要を簡単に説明すれば、次の通りである。【００２０】
すなわち、代表的なものの概要は、定量する１つの分析対象物に対して、分析対象物、複数の分析対象物の安定同位体化合物、および複数の分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物をキャリブレーション物質として選び、それぞれのキャリブレーション物質が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを用意し、定量用キャリブレータ中のキャリブレーション物質を質量分析装置で分析することにより、定量用キャリブレータにて２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するものである。【００２１】
ここで、キャリブレーション物質として用いる物質の条件は、図１に示すとおり、分析対象物とキャリブレーション物質のピークのｍ／ｚが質量分析計の分解能以上離れていること、キャリブレーション物質と分析対象物に含まれる安定同位体の質量スペクトルピークが、互いに質量分析計の分解能以上離れていることで、ｍ／ｚが重ならないことである。【００２２】
また、定量する１つの分析対象物に対して、分析対象物、複数ある分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを含む分析対象物の試料を保存する試料保存部と、試料をイオン化するイオン化部と、イオン化された試料を分析する質量分析部と、定量用キャリブレータが質量分析部により分析された分析結果に基づいて、２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するデータ処理部とを備えたものである。
【発明の効果】
【００２３】
本願において開示される発明のうち、代表的なものによって得られる効果を簡単に説明すれば以下の通りである。【００２４】
すなわち、代表的なものによって得られる効果は、複数の定量用キャリブレータを用意することなく、１種の定量用キャリブレータを１回測定することだけで、目的の濃度範囲における定量精度が確保された情報を作成することができ、質量分析装置における定量分析の迅速化、簡略化が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における分析対象物とキャリブレーション物質との関係を説明するためのマススペクトルである。
【図２】本発明の一実施の形態に係る質量分析装置の構成を示す構成図である。
【図３】本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における検量線作成工程を示すフローチャートである。
【図４】本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における分析法を説明するための説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の実施の形態を図面に基づいて詳細に説明する。なお、実施の形態を説明するための全図において、同一の部材には原則として同一の符号を付し、その繰り返しの説明は省略する。
【００２７】
まず、本発明の概要について説明する。
【００２８】
本発明では、キャリブレーションを迅速に、かつ消耗品の消費を少なくするために、１つの分析対象物に対し、分析対象物自体、複数ある安定同位体化合物、および複数ある類似体化合物の中から２種以上の化合物を異なる濃度で混合した定量用キャリブレータ（キャリブレーション試料）を用い、多濃度の試料を同時に測定する。
【００２９】
つまり、定量用キャリブレータを１回測定することにより２点以上の多点検量線を作成することができる。ここで、定量用キャリブレータ中に含まれる複数あるキャリブレーション物質と分析対象物各化合物のm/zは互いに検出に用いる質量分析計の質量分解能以上、ピークのm/zが離れている必要がある。通常の質量分析計は質量分解能が１m/z程度であるので、それぞれの化合物の質量スペクトルピークのm/zが最低１Ｄａ、好ましくは３Ｄａ以上離れていることが望ましい。
【００３０】
ここで、特に生体試料などの夾雑成分が多く含まれる試料の測定において、正確な測定を行うためには、検出に用いる質量分析計は、プロダクトイオンが検出できるMS/MS法を備えた装置を用いることが望ましい。MS/MS法を用いる場合は、定量用キャリブレータ中に含まれる複数あるキャリブレーション物質のプリカーサーイオンのm/zが互いに同一であっても、プロダクトイオンのm/zが異なればよい。
【００３１】
さらに、検量線の作成に必要な情報の入力を適切、かつ間違いなく行うために、装置に定量用キャリブレータの詳細情報が格納されたデータベース、または定量用キャリブレータの詳細情報を取り込む手段を備え、さらに定量用キャリブレータの詳細情報と、その試料測定結果がリンクし、測定試料の検量線の作成ができるよう、定量用キャリブレータの組成、濃度を、ＩＣチップやバーコードなどの情報媒体を用いて自動で装置内データベースに取り込む機構を備える。
【００３２】
分析対象物としてテオフィリン（分子量１８０、構造式Ｃ7Ｈ8Ｎ4Ｏ2）を測定するとき、天然同位体比を計算すると、以下のようになる。
【００３３】
分子量１８１＝９０．６７％
分子量１８２＝８．５６％
分子量１８３＝０．７３％
分子量１８４＝０．０４％
例えば、１００μｇ／ｍＬの濃度のテオフィリンの場合、上記比率に応じて９０．６７μｇ／ｍＬ、８．５６μｇ／ｍＬ、０．７３μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬの天然同位体が含まれることになる。
【００３４】
特許文献２に準じて上記天然同位体比を用いて、４点の濃度点で検量線を作成する場合、５桁の定量ダイナミックレンジが必要となる。また、３点の濃度点（Ｈｉｇｈ濃度、Ｍｉｄｄｌｅ濃度、Ｌｏｗ濃度とする）で検量線を作成する場合でも、４桁の定量ダイナミックレンジが必要となる。
【００３５】
例に挙げた分析対象物であるテオフィリンは、抗炎症剤などに用いられる薬剤であるが、その有効血中濃度は８−２０μｇ／ｍＬであり、その血中濃度範囲を３点濃度の検量線で正確に定量したい場合、例えば、Ｈｉｇｈ濃度が血中治療域濃度上限値の２倍以上の値である５０μｇ／ｍＬ、Ｍｉｄｄｌｅ濃度が血中治療域濃度内である２０μｇ／ｍＬ、Ｌｏｗ濃度が血中治療域濃度下限値の１／２倍以下の値である２μｇ／ｍＬの３点によって検量線を作成すると、測定した濃度範囲の２〜５０μｇ／ｍＬを正確に定量できる。しかし、特許文献２による天然同位体比を使う方法では定量に必要な濃度範囲を制御することができず、広範囲の濃度域においてまばらな間隔で検量線を作成することになり、本発明の分析法で検量線を作成したときと比較して検量線の信頼性が得られない。すなわち、分子量１８１を５０μｇ／ｍＬとなるように定量用キャリブレータを調製した場合、次に濃度が高い濃度点は分子量１８２の４．７２μｇ／ｍＬとなるが、実質、他の分子量１８３、１８４はブランク試料（濃度０）と同等濃度となってしまい、事実上の２点濃度の検量線となり、定量精度が劣ることになる。
【００３６】
本発明ではテオフィリン、複数あるテオフィリンの安定同位体化合物、複数あるテオフィリン類似体化合物の中から３種の化合物を高精度な検量線に必要な３点の濃度で人為的に混合した定量用キャリブレータを用いる。そして、必要な濃度範囲を正確に定量できる３点検量線用定量用キャリブレータを用い、１回の測定で効率よく検量線を作成できる。
【００３７】
ここで、質量分解能ｍ／ｚが１程度の通常の質量分析計を検出器として用いる場合、図１のように、用いる定量用キャリブレータに混合される任意の２つのキャリブレーション物質のｍ／ｚは、質量分析計の分解能以上、すなわち１Ｄａ以上、好ましくは３Ｄａ以上離れていることが、お互いの干渉による定量精度の劣化を防ぐために望ましい。例えば、図１において、分析対象物のピーク１０１、分析対象物の安定同位体のピーク１０２、１０３、キャリブレーション物質のピーク１０４は互いに１ｍ／ｚ以上離れている。
【００３８】
また、好ましくは、天然同位体比が小さい同位体をキャリブレーション物質として使うと、人為的な添加による濃度制御が容易である。たとえば、テオフィリンの天然同位体の存在比において、分子量１８４の天然同位体が重なるが０．０４％と非常に存在量は少なく、人為的濃度制御においては無視できる量である。天然同位体比が無視できない量（テオフィリンでは分子量１８２の８．５６％）の場合は、この天然同位対比を考慮して、人為的なキャリブレーション物質の添加量を決めて濃度を制御すればよい。
【００３９】
上記テオフィリン以外にも、有機化合物を構成している元素の天然同位体存在比は、例えば酸素でいうと、16Ｏが９９．７６％、17Ｏが０．０３８％、18Ｏが０．２０％のように、ほとんどの元素において存在比の割合の差は大きく、低質量の化合物に対して特許文献２の方法を用いることは現実的ではない。
【００４０】
一方、本発明で用いる定量用キャリブレータは、分析対象物自体、複数ある分析対象物の安定同位体化合物、複数ある分析対象物の類似体化合物の中から必要な種類を必要な濃度で任意に混合された試料であり、これを１度測定することにより、必要濃度範囲で最も正確な検量線を作成することができる。また、当然のことながら、１つの分析対象のみならず、２つ以上の分析対象物に対応して、各々、複数の安定同位体・類似体から構成されるキャリブレーション物質セットを用意し、それら２つ以上の分析対象物に対応した２つ以上のキャリブレーション物質セットを、１つの定量用キャリブレータとして混合し、その混合試料の１回の測定により、２つ以上の分析対象物に対応する２つ以上の検量線を高精度に作成しても良い。
【００４１】
次に、図２により、本発明の一実施の形態に係る質量分析装置の構成について説明する。図２は本発明の一実施の形態に係る質量分析装置の構成を示す構成図である。
【００４２】
図２において、質量分析装置は、定量用キャリブレータやその他の測定試料などが保存され、必要に応じて希釈を行う試料保存・希釈部１、定量用キャリブレータの詳細情報が格納されたデータベース２、質量分析装置の制御を行う制御部３、定量用キャリブレータやその他の測定試料などを導入する試料導入部４、定量用キャリブレータやその他の測定試料などをイオン化するイオン化部５、定量用キャリブレータの分析やその他の測定試料を分析する質量分析部６、質量分析部６での分析結果を処理するデータ処理部７、データ処理部７で処理された結果を表示する表示部８から構成されている。
【００４３】
次に、図３および図４により、本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における分析法について説明する。図３は本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における検量線作成工程を示すフローチャート、図４は本発明の一実施の形態に係る質量分析装置における分析法を説明するための説明図であり、一例として、フェニトインを分析対象物としたときの分析法を示している。
【００４４】
検量線の作成は、まず、図３に示すように、分析対象物の選択を行い（Ｓ１００）、Ｓ１００で分析対象物として、例えばフェニトインを測定することをインプットすると、データベースを照合（Ｓ１０１）し、試料保存・希釈部１内の試薬保存容器に格納されているフェニトインの定量に用いる定量用キャリブレータの溶液がそのまま測定可能か、希釈が必要かを判断し（Ｓ１０２）、Ｓ１０２で希釈が必要であれば希釈の工程に進み（Ｓ１０３）、その後、定量用キャリブレータの溶液の測定を行う（Ｓ１０４）。
【００４５】
また、Ｓ１０２で希釈が必要なければ、定量用キャリブレータの溶液の測定を行う（Ｓ１０４）。
【００４６】
定量用キャリブレータの溶液の測定は、定量用キャリブレータの溶液が、試料導入部４を介し、イオン化部５でイオン化され、質量分析部６で分析されることにより行われる。
【００４７】
また、データ処理部７において、Ｓ１０４での測定結果を基に検量線を自動計算し（Ｓ１０５）、計算結果の情報は表示部８にて表示される。
【００４８】
その後、実試料を測定し、Ｓ１０５で計算された検量線を基に定量計算を行い、実試料中に含まれる分析対象物の定量値を得ることができる。
【００４９】
ここで、フェニトイン（別名５，５ジフェニルヒダントイン）の定量には、フェニトインと質量数が３、および１０異なる安定同位体化合物を用いることができる。
【００５０】
フェニトイン（Ｃ15Ｈ12Ｎ2Ｏ2）＝２５２
フェニトインと質量数が３異なる安定同位体化合物（*ＣＣ14Ｈ12*Ｎ2Ｏ2）＝２５５
フェニトインと質量数が１０異なる安定同位体化合物（Ｃ15Ｈ3Ｄ10Ｎ2Ｏ2）＝２６２
なお、フェニトインは抗てんかん剤として使用される薬剤であり、血中治療域濃度は５−２０μｇ／ｍＬである。例えば、Ｈｉｇｈ濃度が血中治療域濃度上限値の２倍以上の値である５０μｇ／ｍＬ、Ｍｉｄｄｌｅ濃度が血中治療域濃度内である２０μｇ／ｍＬ、Ｌｏｗ濃度が血中治療域濃度下限値の１／２倍以下の値である２μｇ／ｍＬでフェニトインとフェニトインの安定同位体化合物２種が含まれる定量用キャリブレータを用いれば、図４（Ｂ）に示すようなクロマトグラムに示すような測定結果から、図４（Ｃ）に示すような、治療域濃度を正確に定量できる検量線の作成が可能である。
【００５１】
定量用キャリブレータは、試料保存・希釈部１に、例えば、図４（Ａ）に示す試薬保存容器９に保存されている。試薬保存容器９には、ＩＣチップまたはバーコードなどの情報媒体１０が添付されており、試料保存・希釈部１に試薬保存容器９が入れられると、情報媒体１０が読み取られ、その定量用キャリブレータの溶液に含まれる成分と濃度が認識されるようになっている。
【００５２】
試薬情報は、ＩＣチップまたはバーコードなどの情報媒体１０に保持されていても、データベース２に保持されていても良く、データベース２に保持されている場合、情報媒体１０からどの試薬が入れられたかを認識し、データベース２に照合し、情報を取り出すこととなる。
【００５３】
ここで、定量用キャリブレータの溶液を保存する試薬保存容器９内に検量線に必要な濃度よりも高い濃度で保存し、測定前にその都度希釈を行って測定してもよい。
【００５４】
また、上記の例は３点検量線であったが、それ以上の多点検量線を用いてより正確な検量線を作成したい場合や、血中濃度が異常値の検体を測定するための広い濃度域の検量線を作成したい場合に、試薬保存容器９に保存されている定量用キャリブレータの溶液を異なる濃度の定量用キャリブレータを得るために、定量用キャリブレータを希釈してもよい。その場合、希釈前と希釈後の定量用キャリブレータを合計２回測定すれば、６点濃度の検量線を作成することができる。
【００５５】
具体的には、Ｌｏｗ濃度が５０μｇ／ｍＬ、Ｍｉｄｄｌｅ濃度が１００μｇ／ｍＬ、Ｈｉｇｈ濃度が２００μｇ／ｍＬ含まれている定量用キャリブレータの溶液が試薬保存容器９に保管されている場合、定量用キャリブレータの溶液そのものと、それを１／１０になるように希釈したものとの２種をそれぞれ１回ずつ測定することで、５、１０、２０、５０、１００、２００μｇ／ｍＬの６点濃度検量線を作成することができる。
【００５６】
これらの希釈、測定はデータベース２内に保持されているデータを基に制御部３によって制御される。
【００５７】
さらに、分析対象物によっては、その安定同位体化合物が入手困難であることや高価であるなどの理由により、分析対象物と定量用キャリブレータの質量分析装置に対する応答が異なる類似化合物を定量用キャリブレータのキャリブレーション物質として用いる場合がある。
【００５８】
例えば同濃度の分析対象物と定量用キャリブレータを測定したとき、ピーク面積が同等ではなく、ある一定の比率で検出されるような化合物を定量用キャリブレータとして用いる場合があるが、この場合はデータベース２内に分析対象物とキャリブレーション物質とのピーク面積値の比率関係の情報を保持しておくことで定量用キャリブレータのピーク面積値に係数を掛けた値を返すことで、安定同位体化合物と同様に検量線を作成することが可能である。
【００５９】
当然のことながら、質量分析は、生成されたイオンをそのまま検出しても良いし、導入されたイオンの中から特定のプロダクトイオンを検出してもよい。たとえば、任意の２種以上のキャリブレーション物質の質量数が実質的に同一、もしくは質量分析計で分別できない場合は、プロダクトイオンの質量数がそれぞれ異なる同位体であれば、質量分析部６において、導入されたイオンの中から特定のキャリブレーション物質由来のイオンを選択し、選択したイオンから得られたプロダクトイオンを検出することにより、他のキャリブレーション物質と分離測定可能であり、定量用キャリブレータとして使用できる。ここで、衝突解離の代わりに解離を起こす方法として、光解離、電子移動解離、電子捕獲解離があり、それらを用いても良い。
【００６０】
以上、本発明者によってなされた発明を実施の形態に基づき具体的に説明したが、本発明は前記実施の形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で種々変更可能であることはいうまでもない。
【００６１】
例えば、本実施の形態では、検量線を作成する例を説明しているが、検量線を作成することなく、テーブルを用いたり、演算したりして、定量用キャリブレータにて２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量することもできる。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明は、検量線を用いて分析対象物を定量する質量分析装置などに広く適用可能である。
【符号の説明】
【００６３】
１…試料保存・希釈部、２…データベース、３…制御部、４…試料導入部、５…イオン化部、６…質量分析部、７…データ処理部、８…表示部、９…試薬保存容器、１０…情報媒体。
【図１】
2012093622.tif 000003
【図２】
2012093622.tif 000004
【図３】
2012093622.tif 000005
【図４】
2012093622.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成25年10月11日(2013.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析対象物を定量する分析装置における分析法であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを用意し、前記定量用キャリブレータを前記分析装置により測定することにより、前記定量用キャリブレータにて２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量し、
前記定量用キャリブレータは、２番目に高い濃度のキャリブレーション物質の濃度が最高濃度のキャリブレーション物質の濃度の１／１０以上の濃度であることを特徴とする分析法。
【請求項２】
請求項１記載の分析法であって、分析法が質量分析法であることを特徴とする分析法。
【請求項３】
請求項２に記載の分析法において、
質量分析装置によって生成される定量用キャリブレータに含まれるキャリブレーション物質由来の任意の２種のイオンのｍ／ｚの差が、前記質量分析装置の分解能ｍ／ｚより大きいことを特徴とする分析法。
【請求項４】
請求項２に記載の分析法において、
前記定量用キャリブレータに含まれる任意の２種のキャリブレーション物質が前記質量分析装置にて、３ｍ／ｚ以上異なった質量スペクトル信号として分析されることを特徴とする分析法。
【請求項５】
分析対象物を定量する分析装置における分析法であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを用意し、前記定量用キャリブレータを前記分析装置により測定することにより、前記定量用キャリブレータにて２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量し、
分析法が質量分析法であり、
前記定量用キャリブレータは、２種以上の分析対象物の定量のために、前記２種以上の分析対象物の各々に対応する２種以上のキャリブレーション物質セットを含むことを特徴とする分析法。
【請求項６】
分析対象物を定量する質量分析装置であって、
定量する少なくとも１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物をキャリブレーション物質として異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを保存する試料保存部と、
試料をイオン化するイオン化部と、
前記イオン化された試料を分析する質量分析部と、
前記定量用キャリブレータが前記質量分析部により分析された分析結果に基づいて、２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するデータ処理部とを備え、
前記定量用キャリブレータは、２番目に高い濃度のキャリブレーション物質の濃度が最高濃度のキャリブレーション物質の濃度の１／１０以上の濃度であることを特徴とする質量分析装置。
【請求項７】
請求項６に記載の質量分析装置において、
前記質量分析部は、前記イオン化部にて生成され、前記質量分析部に導入されたイオンの中から特定のイオンを選択し、選択したイオンにエネルギーを与えて解離を起こさせ、生成したプロダクトイオンを検出することを特徴とする質量分析装置。
【請求項８】
請求項７の質量分析装置において、
２種以上のキャリブレーション物質のうち、任意の２つのキャリブレーション物質から生成したイオンを共に選択し、解離して、得られる２種以上のプロダクトイオンのｍ／ｚを識別することで、前記任意の２つのキャリブレーション物質を定量することを特徴とする質量分析装置。
【請求項９】
請求項６に記載の質量分析装置において、
前記定量用キャリブレータは、少なくとも前記定量用キャリブレータに含まれる化合物名とその濃度の情報を識別する情報媒体が添付された試薬保存容器に保存されていることを特徴とする質量分析装置。
【請求項１０】
請求項９に記載の質量分析装置において、
前記試薬保存容器に添付された情報媒体に対応した前記定量用キャリブレータの情報を保持するデータベースを備えたことを特徴とする質量分析装置。
【請求項１１】
分析対象物を定量する質量分析装置であって、
定量する少なくとも１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から２種以上の化合物をキャリブレーション物質として異なる濃度で混合された定量用キャリブレータを保存する試料保存部と、
試料をイオン化するイオン化部と、
前記イオン化された試料を分析する質量分析部と、
前記定量用キャリブレータが前記質量分析部により分析された分析結果に基づいて、２つ以上の濃度を測定し、その測定の情報に基づいて定量するデータ処理部とを備え、
前記定量用キャリブレータは、２種以上の分析対象物の定量のために、前記２種以上の分析対象物の各々に対応する２種以上のキャリブレーション物質セットを含むことを特徴とする質量分析装置。
【請求項１２】
分析対象物を定量する分析装置で使用されるキャリブレーション試料であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合されており、
２番目に高い濃度のキャリブレーション物質の濃度が最高濃度のキャリブレーション物質の濃度の１／１０以上の濃度であることを特徴とするキャリブレーション試料。
【請求項１３】
分析対象物を定量する分析装置で使用されるキャリブレーション試料であって、
定量する１つの前記分析対象物に対して、前記分析対象物、複数ある前記分析対象物の安定同位体化合物、および複数ある前記分析対象物の類似体化合物の中から、２種以上の化合物をキャリブレーション物質として、各々が異なる濃度で混合されており、
前記定量用キャリブレータは、２種以上の分析対象物の定量のために、前記２種以上の分析対象物の各々に対応する２種以上のキャリブレーション物質セットを含むことを特徴とするキャリブレーション試料。
【国際調査報告】
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