(57)【要約】本発明は、効率的に液中の肝炎ウイルス等を除去する糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材及びウイルスの除去方法を提供することであり、特に、生体の血液に適用するにあたっては、体外に取り出す血液量や、血中有用成分の除去量が少なく、低い侵襲性で施術サイクルの短縮が可能な、肝炎ウイルス等を除去する糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材及びウイルスの除去方法を提供する。本発明の中空糸膜は、高いウイルス除去機能と有用な血漿成分を除去しない機能を有するモジュールとして利用が可能である。
2012121073.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材であって、
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）と、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が結合し、更にアミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材。
【請求項２】
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）が、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の部分けん化物、ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、ヒドロキシメタクリレート共重合体、酢酸セルロースの部分けん化物又はグリセリン誘導体で表面処理された中空糸である請求項１に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項３】
中空糸が、多孔性中空糸である請求項２に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項４】
中空糸が、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリ−４−メチルペンテンを基質とするものである請求項３に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項５】
多孔性中空糸の平均流量孔径が５０〜５００ｎｍの範囲である請求項３又は４に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項６】
多孔性中空糸の内径が１５０〜５００μｍの範囲である請求項３〜５の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項７】
多孔性中空糸の膜厚が３０〜１００μｍの範囲である請求項３〜６の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項８】
多孔性中空糸の糖類の固定化量が１〜１００μｇ/ｃｍ２の範囲である請求項３〜７の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項９】
水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が、エピクロロヒドリン、カルボン酸無水物、ジカルボン酸化合物、ジカルボン酸塩化物、ジイソシアネート、ジエポキシ化合物、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート又は（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネートである請求項１〜８の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１０】
アミノ基を有する化合物（Ｃ）が、ポリアリルアミン、アンモニア、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、１，２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン、又はポリエチレンイミンである請求項１〜９の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１１】
糖類が、ヘパリン、ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸、デキストラン硫酸、フコイダン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、又はカルボキシメチルセルロースである請求項１〜１０の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１２】
ウイルスが、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルスである請求項１〜１１の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材を用いたウイルスの除去方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載のウイルス除去方法において、ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより、中空糸の有する孔を通過した液と、孔を通過しなかった液とを混合する工程を有することを特徴とするウイルスの除去方法。
【請求項１５】
ウイルスを含む液が、ウイルスを含む血液である請求項１４に記載のウイルスの除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖類固定化ウイルス除去用高分子基材、及びウイルスの除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の慢性的感染が原因であり、薬剤による治療法としてペグインターフェロン、リバビリンの併用療法が一般的である。ジェノタイプ１ｂかつ血液中のウイルス量の多い患者では、治療成績は５０％程度であり、肝硬変や肝がんへの移行割合が高いことから、より有効な治療法、薬剤の開発が望まれている（非特許文献１）。一般的に薬剤による治療では、血中のウイルス量が低い場合に治療成績が高いことが知られており、血中のＨＣＶを多孔性のフィルターで除去し、薬剤との併用療法を行うと、治療成績が向上するとの報告がある（非特許文献２）。即ち、体内のウイルス量を下げることで、治療成績が向上したものと推定される。【０００３】
また、特許文献１には、血液入口、上流側血液回路、血漿分離手段、下流側血液回路がこの順に接続され、更に血漿分離手段の血漿出口、上流側血漿回路、血漿浄化手段、下流側血漿回路がこの順に接続され、下流側血漿回路の末端は下流側血液回路の途中に設けられた血液血漿混合手段に接続されている血液処理装置であって、下流側血液回路の血液血漿混合手段の下流側に少なくともウイルス及びウイルス感染細胞を除去する水不溶性担体からなる血球処理手段が設けられ血漿浄化手段が最大孔径２０ｎｍ以上５０ｎｍ以下の多孔性濾過膜からなる装置が記載されている。【０００４】
しかしながら、上記フィルターで除去する方法は、一旦血球と血漿を分離した後、血漿成分からウイルスを除去することから、回路構成は複雑で、より簡便に血中からウイルスを除去する方法が望まれている。
リガンド等を固定化したＣ型肝炎ウイルス用の血液浄化用吸着材としては、特許文献２に、免疫グロブリン等と親和性のあるペプチドを水不溶性ゲルに固定化し、免疫複合体型Ｃ型肝炎ウイルスを効率良く除去する方法が報告されている。【０００５】
一方、ＨＣＶに結合するリガンドとしてヘパリンが有効なことが知られている（非特許文献３）。よって、血球と血漿を分離することなく全血を通過させることのできる中空糸等の高分子支持体にヘパリンが固定化された基材や血球血漿分離膜の細孔内などにヘパリンを固定化した基材であればより簡便にＨＣＶを除去できる可能性があり、患者への負担の少ないＨＣＶ除去モジュール等を提供できることが期待される。【０００６】
ヘパリンが固定化された基材の形態にはビーズや多孔質中空糸が挙げられる。多孔質中空糸を用いた内部循環型やろ過型の体外循環モジュールは、粒子状ヘパリン固定化基材の充填された体外循環モジュールと比較して血液の滞留部分が少ないことから、構成上血栓の形成が少ない利点を有する。多孔質中空糸にヘパリンを固定化する際、表面官能基の種類や固定化密度は基材材質によって異なり、各基材によって最適な方法を見出す必要がある。【０００７】
一方、糖類を有するウイルス吸着剤として、ヒト免疫不全ウイルス（以下ＨＩＶ）に吸着作用を有する基材の報告がある。例えば、特許文献３には、主鎖にメチレン基を有する高分子基材に、エチレン性不飽和結合と糖鎖を有する重合性化合物、又は該重合性化合物を含む重合性組成物を接触させ、電離性放射線を照射するか、又は、前記高分子基材に電離放射線を照射した後、前記重合性化合物、又は該重合性化合物を含む重合性組成物を接触させて得られる、糖鎖を有するＨＩＶ吸着用高分子基材が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００５−２３０１６５
【特許文献２】特開平１０−３２３３８７
【特許文献３】特開２０１０−６８９１０
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】ウイルス性肝炎−基礎・臨床研究の進歩−日本臨床６９巻増刊号４（２０１１）
【非特許文献２】Ａ．Ｋ．Ｆｕｊｉｗａｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，３７，７０１（２００７）
【非特許文献３】Ｚａｈｎ，Ｊ．Ｐ．Ａｌｌａｉｎ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８６，６７７（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、従来技術を鑑み、血栓等の生成による目詰まりを起こすことなく、血液等の体液を流すことができ、効率的に体液中のウイルスを除去することが可能な基材、器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明者らは高分子支持体（Ａ）の選択、ウイルスを除去する機能を有する糖類の高分子支持体（Ａ）への固定化方法について詳細に検討を行った結果、本発明を完成させるに至った。【００１２】
即ち、本発明は、糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材であって、
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）と、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が結合し、更にアミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材に関する。または、化合物（Ｃ）を介せずとも、化合物（Ｂ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、除去が好ましくない血液成分を吸着・除去することなく、ウイルスを選択的に除去できる機能を有する高分子基材、及びそれを用いた医療器具を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の高分子基材を備えてなる医療器具の一例を示す概略断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
即ち、本発明は、
１．糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材であって、
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）と、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が結合し、更にアミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材、
２．水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）が、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の部分けん化物、ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、ヒドロキシメタクリレート共重合体、酢酸セルロースの部分けん化物又はグリセリン誘導体で表面処理された中空糸である１．に記載のウイルス除去用高分子基材、
３．中空糸が、多孔性中空糸である２．に記載のウイルス除去用高分子基材、
４．中空糸が、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリ−４−メチルペンテンを基質とするものである２．又は３．に記載のウイルス除去用高分子基材、
５．多孔性中空糸の平均流量孔径が５０〜５００ｎｍの範囲である３．又は４．に記載のウイルス除去用高分子基材、
６．多孔性中空糸の内径が１５０〜５００μｍの範囲である３．〜５．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
７．多孔性中空糸の膜厚が３０〜１００μｍの範囲である３．〜６．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
８．多孔性中空糸の糖類の固定化量が１〜１００μｇ/ｃｍ２の範囲である３．〜７．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
９．水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が、エピクロロヒドリン、カルボン酸無水物、ジカルボン酸化合物、ジカルボン酸塩化物、ジイソシアネート、ジエポキシ化合物、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート又は（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネートである１．〜８．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
１０．アミノ基を有する化合物（Ｃ）が、ポリアリルアミン、アンモニア、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、１，２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン、又はポリエチレンイミンである１．〜９．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
１１．糖類が、ヘパリン、ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸、デキストラン硫酸、フコイダン、コンドロイチン硫酸A、コンドロイチン硫酸C、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、又はカルボキシメチルセルロースである１．〜１０．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
１２．ウイルスが、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルスである１．〜１１．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材、
１３．１．〜１２．の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材を用いたウイルスの除去方法、
１４．１３．に記載のウイルス除去方法において、ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより、中空糸の有する孔を通過した液と、孔を通過しなかった液とを混合する工程を有することを特徴とするウイルスの除去方法、
１５．ウイルスを含む液が、ウイルスを含む血液である１４．に記載のウイルスの除去方法。
【００１６】
以下、詳細に本発明を説明する。
・高分子支持体（Ａ）
本発明に用いる高分子支持体（Ａ）は、水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体であれば特に制限はない。このような高分子支持体（Ａ）としては血液適合性の高いものであれば種々のものを用いることができるが、例えば、オレフィン系樹脂、スチレン系樹脂、スルホン系樹脂、アクリル系樹脂、ウレタン系樹脂、エステル系樹脂、エーテル系樹脂又はセルロース混合エステル等が挙げられ、より具体的にはポリエチレンテレフタレート、ポリメチルメタクリレート、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリ−４−メチルペンテン等で構成されるものを公知の方法で水酸基を有する高分子材で表面処理したものや水酸基を含有する樹脂を公知の方法で予め混練された樹脂を例示できる。
【００１７】
高分子支持体（Ａ）の形状には特に限定はなく、中空糸、ビーズなど種々の形態のものとして用いることができる。体外循環への適用時にはビーズとして用いることも可能であるが、ビーズは滞留部において血栓の発生が多くなることから、このような用途を目的とする場合は中空糸を使用することが望ましい。また、中空糸の形態は適宜選択することができる。
【００１８】
多孔性中空糸は、使用目的に応じて、公知慣用の方法で製造すれば良い。ポリオレフィン中空糸の場合は、紡出糸をアニール処理、冷延伸、熱延伸、熱固定を行うことでさまざまな細孔径、孔径分布を有したものが調製可能である。
【００１９】
多孔性中空糸を用いた場合には、ウイルスを含む液を中空糸の有する孔内を通じることにより、効率的にウイルスを除去することができる。体外循環時に血液を処理する場合を考えると、全血を孔内で処理出来ることが簡便で望ましいが、滞留の問題や細孔内に直接血球が接するために高い生体適合性を要求されることが課題として挙げられる。
一方、血球と血漿成分を分離し、血漿成分だけを孔内に通過させ、血漿からウイルスを除去する方法が挙げられる。その場合は中空糸の有する孔を通過した液と孔を通過しなかった液とが生成する。ウイルスを含む液中のウイルスの除去率の検討から、中空糸の孔を通過した液中のウイルスの除去率は好成績であり、また、血液中の有用な成分であるアルブミンは除去しないことが明らかとなった。また、中空糸の孔を通過しなかった液すなわち内表面や内表面近傍の細孔のみに接触した液中のウイルス除去率は、中空糸の孔を通過した液中のウイルス除去率よりも低く、ウイルス除去の多くは、多孔性中空糸の孔を通過する際に起こっていることが示唆された。
ここで、孔を通過するとは、中空糸の内表面から外表面側に、もしくは外表面から内表面側に液が通り抜ける状態をさす。
【００２０】
用いられる多孔性中空糸の細孔径は、上記のウイルスを効率的に除去させうる孔径のものであれば、特に制限はない。例えば、体外循環で血漿中からウイルスを効率的に除去する場合は、以下のように設計する必要がある。血球と血漿を分離し、血漿中からウイルスを除去する場合、血漿分離膜としての機能を有する必要がある。したがって、血球成分や血小板が細孔内に入らないように平均流量孔径として５００ｎｍ以下があることが望ましい。更に、血漿中のタンパク成分の透過性が落ちないように設計する必要があるために、平均流量孔径として５０ｎｍ以上が望ましい。
したがって、血漿分離膜としての機能を有するためには、平均流量孔径としては５０〜５００ｎｍに設計する必要がある。本発明では、血液から分離した血漿中から効率的にウイルスを除去する特徴を有するため、ウイルスの除去を想定した場合、ウイルスの大きさによって最適な細孔径が異なる。Ｃ型肝炎ウイルスの場合を例に挙げると、好ましい細孔径は８０〜２５０ｎｍ、更に好ましくは１００〜１８０ｎｍとなる。また、比較的大きいヒト免疫不全ウイルスの場合などは、好ましい細孔径が１００〜２５０ｎｍ、更に好ましくは１２０〜２００ｎｍとなる。
【００２１】
用いられる多孔性中空糸の内径は、上記のウイルスを効率的に除去させうる内径のものであれば、特に制限はない。例えば、体外循環で中空糸を用いる場合は、以下のように設計する必要がある。
人間から取り出して循環させられる血液量は限られているため、循環モジュール等のサイズは過度に大きくすることはできない。内径が大きい場合は、モジュールに入れられる糸の本数が少なくなるため接触面積が減少してしまうことや線速が劣って血液が滞留してしまう恐れがある。
一方、内径が小さくなりすぎる場合は、血球成分が詰まりやすくなることが考えられる。それらの点を考慮した場合、内径は１５０〜５００μｍが好ましく、更に好ましくは１６０〜４００μｍ、更に好ましくは１７０〜３５０μｍとなる。
【００２２】
用いられる多孔性中空糸の膜厚は、上記のウイルスを効率的に除去させうる膜厚のものであれば、特に制限はない。例えば、体外循環で血漿中からウイルスを効率的に除去する場合などは血漿分離性能、接触面積、中空糸の機械強度等を考慮して、３０〜１００μｍが好ましく、更に好ましくは３５〜８０μｍ、更に好ましくは４０〜６０μｍとなる。
【００２３】
更に、中空糸外部に、ウイルスを捕捉し除去させる機能を有する他の基材を組み合わせることで、ウイルスの除去率の向上を図ることも可能である。このような他の基材としては、ウイルスを捕捉し除去させる機能を有するものであれば特に制限はないが、例えば、糖鎖固定化ゲルや糖鎖固定化不織布等を挙げることができる。
【００２４】
・高分子支持体（Ａ）に含まれる水酸基を有する高分子材
本発明で使用が可能な水酸基を有する高分子材としては、例えば、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の部分けん化物、ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体などのビニルアルコール共重合体を含んだもの、ヒドロキシメタクリレート共重合体を含んだもの、酢酸セルロースの部分けん化物又はグリセリン誘導体を例示することができる。ただし、例示したもの以外にも、水酸基を有する樹脂であれば特に制限はない。
水酸基を有する高分子材での表面処理は、公知慣用の方法で行うことができ、例えば多孔化されたポリオレフィンを、水酸基を有する高分子材を溶解させた溶液中に浸漬し、引き上げた後乾燥する等を好ましい方法として挙げることができる。中でもエチレン−ビニルアルコール共重合体は、特開昭６１−２７１００３などにもあるように、ポリオレフィン多孔中空糸を簡便に親水化することができる点で好ましい。もしくは、予めポリオレフィン等と水酸基を有する高分子材を混合させたものを多孔化する手法を用いることも可能である。
【００２５】
・水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）
本発明で使用される水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）は、表面処理された高分子支持体（Ａ）の表面に存在する水酸基と反応しえる基を有し、固定化後にアミノ基と容易に反応する官能基などを有していれば特に制限はない。例えば、エピクロロヒドリン、カルボン酸無水物、ジカルボン酸、ジカルボン酸塩化物、ジイソシアネート、ジエポキシ化合物等の化合物が挙げられる。基材にグラフト重合できる化合物として、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネート、無水マレイン酸等が挙げられる。
【００２６】
高分子支持体（Ａ）の表面に存在する水酸基に、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）を反応させて固定化する場合は、例えば公知慣用の水酸基とエポキシ基との反応、水酸基とカルボキシ基との反応、水酸基とカルボン酸無水物との反応、水酸基とイソシアネートとの反応に用いる条件等で行うことができる。
また、エチレン性不飽和基を有する化合物をグラフト重合させる場合には、水酸基を有する高分子材にラジカルを生成させることによるグラフト重合反応により、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネート、又は無水マレイン酸等を固定化することが可能である。
ラジカルを生成させる方法としては、セルロースやポリビニルアルコール等の水酸基を有する高分子材のラジカル重合開始剤に広く用いられている硝酸二アンモニウムセリウム等の試薬を用いる方法を挙げることが出来る。
【００２７】
なお、高分子支持体（Ａ）の形状が中空糸であり、該中空糸へ水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）を固定化する場合には、実施形態に応じて糸の内面、外面のどちらか又は両方に固定化することができる。例えば中空糸内表面に血液を灌流させる時は、中空糸内表面に水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）を接触させて固定化すれば良く、逆に、外部灌流させる時には、中空糸外表面に水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）を接触させれば良い。糸の細孔内も含めて内外表面に固定化したい場合は、糸を束ねて反応溶液に浸漬してもよいし、モジュールとして組み立ててから反応溶液を循環させる方法などが挙げられる。
【００２８】
・アミノ基を有する化合物（Ｃ）
本発明で使用されるアミノ基を有する化合物（Ｃ）は、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）と反応し、糖類を簡便に固定化できるアミノ基が残存するものであれば特に制限はない。このような化合物（Ｃ）としては、例えば、ポリアリルアミン、アンモニア、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、１，２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン又はポリエチレンイミン等のアミン類を挙げることができる。化合物（Ｃ）のアミノ基は、必要に応じてアミノ基に用いられる公知慣用の保護基を有していてもよい。使用される保護基としては、例えばｔ−ブチルカーバメート（Ｂｏｃ基）、ベンジルカーバメート等を挙げることができる。脱保護も公知慣用の方法を用いればよい。
化合部（Ｃ）と水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）との反応は、公知慣用のアミノ基とエポキシ基との反応、アミノ基とカルボキシ基との反応、アミノ基とカルボン酸無水物との反応、アミノ基とイソシアネートとの反応に用いる条件で適宜行うことができる。
【００２９】
・糖類
本発明で使用される糖類は、ウイルスを吸着等の作用によって効率的に捕捉し、ウイルスを含む液からウイルスを除去することのできるのであれば、特に制限はない。このような糖類としては、例えば、ヘパリン、ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸（イオウ含量３〜６％のものが好ましい）、デキストラン硫酸（イオウ含量１５〜２０％のものが好ましい）、フコイダン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース等を挙げることができる。
【００３０】
ヘパリンは、通常公知のものを制限なく使用することができる。ヘパリンは、小腸、筋肉、肺、脾や肥満細胞など体内で幅広く存在し、化学的にはグリコサミノグリカンであるヘパラン硫酸の一種であり、β−Ｄ−グルクロン酸、或いはα−Ｌ−イズロン酸とＤ−グルコサミンが１，４−結合により重合した高分子であって、ヘパラン硫酸と比べて硫酸化の度合いが特に高いという特徴を有する。
また、ヘパリンの平均分子量についても特に制限はないが、平均分子量が大きい場合には化合物（Ｃ）との反応性が低くなる為、ヘパリンの固定化の効率が悪いと考えられる。従って、ヘパリンの分子量は、概ね、５００から５００，０００ダルトン、より好ましくは１,２００から５０，０００ダルトン、更に好ましくは５，０００〜３０，０００ダルトンであることが好ましい。
【００３１】
本発明で用いられるヘパリン誘導体としては、上記ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、上記ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、又はヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体を好ましく用いることができる。
【００３２】
ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体を合成する場合には、例えば、上記ヘパリンのアルカリ塩類をイオン交換樹脂（Ｈ＋）等に通じ、アミン類と処理することによりヘパリンアミン塩を調製する。その後に、硫酸化剤で処理して目的とするヘパリン誘導体とすることができる。硫酸化剤としては、公知慣用のＳＯ３・ピリジン等が好ましい。
【００３３】
ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体を合成する場合には、例えば、ヘパリンのＮ−アセチル基をヒドラジン等で脱アセチル化した後に、硫酸化剤で処理して目的とするヘパリン誘導体とすることができる。硫酸化剤としては、公知慣用のＳＯ３・
ＮＭｅ３等が好ましい。
ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体を合成する場合には、例えば、ヘパリンのピリジニウム塩を調製後、窒素原子上の硫酸基のみを脱硫酸化し、公知慣用の方法でＮ−アセチル化すればよい。
また、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸（イオウ含量３〜６%）、デキストラン硫酸（イオウ含量１５〜２０％）、フコイダン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、又はカルボキシメチルセルロースは公知慣用の化合物を用いることができる。
デキストラン硫酸の硫酸化度は、高硫酸化度（イオウ含量１５〜２０％）であっても、低硫酸化度（イオウ含量３〜６％）であっても良く、公知慣用の方法で得られるものであれば、特に硫酸化度に制限はない。
ヘパリン類似物質は、一般に日本薬局方外医薬品成分規格等に収載されている硫酸化多糖類を指すものである。しかし、公知慣用の抽出方法や調製方法で得られるものであれば、日本薬局方外医薬品成分規格に収載されているものに限定されるものではない。
【００３４】
アミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されるためには、化合物（Ｃ）と糖類が共有結合により結合されることが必要である。このような結合は公知慣用の反応を適宜行うことにより形成することができる。
糖類の固定化に好ましい反応として、アミド化反応もしくは還元アミノ化反応を挙げることができる。アミド化方法は、例えば、活性エステルによるアミド化、縮合剤によるアミド化、これらの併用、混合酸無水物法、アジド法、酸化還元法、ＤＰＰＡ法、ウッドワード法など、ペプチド合成などで用いられている公知慣用のアミド化反応を適宜行えばよい。還元アミノ化反応は、化合物（Ｃ）のアミノ基と糖類の還元末端を反応させる公知慣用の方法を用いればよい。
【００３５】
活性エステルによるアミド化としては、例えば、ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、ニトロフェノール、ペンタフルオロフェノール、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）、ＨＯＢＴ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＨＯＡＴ（ヒドロキシアザベンゾトリアゾール）等を用いて、脱離能の高い基をカルボキシ基と一旦縮合させた活性エステルを形成させておき、これにアミノ基を反応させる方法が挙げられる。縮合剤によるアミド化は、それ単独で用いても良いが、上記活性エステルと併用することができる。縮合剤としては、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル−３−エチル−カルボジイミドヒドロクロライド）、ＨＯＮＢ（エンド−Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキサミド）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＴＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＨＯＯＢｔ（３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン）、ジ−ｐ−トリオイルカルボジイミド、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ＢＤＰ（１−ベンゾトリアゾールジエチルホスフェート−１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニルエチル）カルボジイミド）、フッ化シアヌル、塩化シアヌル、ＴＦＦＨ（テトラメチルフルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスホスフェート）、ＤＰＰＡ（ジフェニルホスホラジデート）、ＴＳＴＵ（Ｏ−（Ｎ−スクシニミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＨＡＴＵ（Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１−Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５，６］−ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウム・ヘキサフルオロホスフェート・Ｎ−オキシド）、ＢＯＰ−Ｃｌ（ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンクロライド）、ＰｙＢＯＰ（（１−Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）−トリス（ピロリジノ）ホスホニウム・テトラフルオロホスフェート）、ＢｒＯＰ（ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート）、ＤＥＰＢＴ（３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）、ＰｙＢｒＯＰ（ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート）などが挙げられる。
【００３６】
これらのアミド化方法において利用できる溶媒としては、水及びペプチド合成に用いられる有機溶媒を使用することができ、例えばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘキサホスホロアミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル等、更にはこれらの混合溶媒やこれらを含む水溶液が挙げられる。
【００３７】
糖類は、アミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して固定化する以外にも、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）を介して固定化することも可能である。使用目的、反応条件や設備等に応じて適宜選択すればよい。
また、糖類の固定化量は、ウイルスを効率的に除去出来れば特に制限はない。ただし、体外循環時は、生体適合性が重要になるため、血漿タンパクの吸着や補体の活性化などが起きないよう調整する必要がある。その際には、アミノ基を有する化合物（Ｃ）の導入量を調整する方法や糖類を固定化する反応条件を変える方法等で固定化量を調整することが可能である。検討した結果、１〜１００μｇ/ｃｍ２、好ましくは２〜８０μｇ/ｃｍ２、更に好ましくは３〜７０μｇ/ｃｍ２にすればよい。
【００３８】
・ウイルスを含む液
本発明で対象とするウイルスを含む液は、ウイルスを含む液であれば特に制限はない。より具体的には、例えば、ヒトの体内液体成分である体液、ウイルスを含んだ培養液等を挙げることができる。体液のより具体的な例としては、血液、唾液、汗、尿、鼻水、精液、血漿、リンパ液、組織液等を挙げることができる。
【００３９】
本発明の高分子基材を備えてなる医療器具の形態としては、前記用途に適用可能な形状であれば特に限定されるものではないが、例えば中空糸モジュールや濾過カラム、フィルターなどが挙げられる。中空糸モジュールや濾過カラムにおいて、容器の形状及び材質は特に限定されないが、体液（血液）の体外循環に適用する場合、内部容量が１０〜４００ｍＬで外径が２〜１０ｃｍ程度の筒状容器とすることが好ましく、内部容量が２０〜３００ｍＬで外径が２．５〜７ｃｍ程度の筒状容器とすることがより好ましい。図１にその一例を挙げる。
【００４０】
本発明の医療器具の使用方法としては、上記ウイルスを含む液と接触させて該液中のウイルスを除去、分離することができればいずれの方法でもよい。
【実施例】
【００４１】
以下の実施例により本発明を更に詳細に説明する。【００４２】
＜多孔性高分子基材の孔径＞
ＡＳＴＭ Ｆ３１６−８６およびＡＳＴＭ Ｅ１２９４−８９に準拠し、
Ｐｏｒｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．社製「パームポロメータＣＦＰ−２００ＡＥＸ」を用いてハーフドライ法により平均流量孔径（膜の一方から他方に向けて貫通する孔の窄み部分の平均孔径）を測定した。試液はパーフルオロポリエステル（商品名「Ｇａｌｗｉｃｋ」）を用いた。
細孔は必ずしも直状の管として膜を貫通している必要はなく、膜の内部で屈曲していても良い。また、幾つかの孔が膜内部で融合していたり、逆に一つの孔が枝分かれしていても良く、これらが混在していても良い。【００４３】
＜糖類の固定化量＞
中空糸に固定化された糖類の量は、１，９−ジメチルメチレンブルーの色素吸着量より算出した。検量線の作成：色素水溶液を調製し、糖類を所定量添加し、糖類と色素の複合体を形成させる。そこへ、ヘキサンを加えて色素と糖類の複合体を水相から分離し、残った水溶液中の色素量を吸光度(６５０ｎｍ)で測定し、糖類の添加量と吸光度を用いて検量線を作成した。サンプル測定：色素溶液に、中空糸を所定の長さ入れ、色素の吸着量から換算して糖類の固定化量を算出した。
＜ＨＣＶ除去試験＞
膜面積１．８ｃｍ２の中空糸モジュールを作製し、ＨＣＶ患者血漿（原液）０．６ｍＬを通液して、孔を通過した液（ろ液）０．３ｍＬ、孔を通過しなかった液（内液）０．３ｍＬを得た。検体をオーソ製ＨＣＶ抗原ＥＬＩＳＡテストで測定し、
ＨＣＶ除去率（％）＝（１−ろ液中のＨＣＶ量／原液中のＨＣＶ量）×１００
を求めた。【００４４】
＜ＥＬＩＳＡ＞
検体を前処理液（ＳＤＳ）で前処理し、ＨＣＶコア抗原を遊離させると同時に共存するＨＣＶ抗体を失活させ測定試料とする。測定試料をＨＣＶコア抗原抗体固定化プレートに添加し、インキュベーションする。所定時間反応後、洗浄し、ホールラディッシュ由来ペルオキシダーゼ標識化ＨＣＶコア抗原抗体を添加し、インキュベーションする。所定時間反応後、洗浄し、ｏ−フェニレンジアミン試薬を添加し、インキュベーションする。所定時間反応後、反応停止液を添加する。４９２ｎｍの波長で発色を測光する。標品の吸光度より、濃度を算出する。【００４５】
＜血漿中アルブミン透過量＞
検体にブロムクレゾールグリーン試薬を添加し、６３０ｎｍの波長で発色を測光する。標品の吸光度より、濃度を算出した。
アルブミン透過率（％）＝（ろ液中のアルブミン量／原液中のアルブミン量）×１００【００４６】
高分子支持体（Ａ）の調製例
密度０．９６８ｇ／ｃｍ３ 、メルトインデックス５．５の高密度ポリエチレン（三井石油化学工業株式会社製ＨＩＺＥＸ ２２００Ｊ）を吐出口径１６ｍｍ、円環スリット幅が２．５ｍｍ、吐出断面積が１．０６ｃｍ２の中空糸賦型用紡糸口金を用い、紡糸温度１６０℃で紡糸し、紡糸ドラフト１４２７で巻き取った。得られた未延伸中空糸の寸法は内径が３０８μｍ、膜厚が６４μｍであった。
この未延伸中空糸を１１５℃で２４時間、定長で熱処理した。つづいて室温で２１４００％／ｍｉｎの変形速度で１．８倍延伸した後、１００℃の加熱炉中で変形速度が３３０％／ｍｉｎとなるように総延伸倍率が４．８倍になるまで熱延伸を行った、更に１２５℃の加熱炉で総延伸倍率が２．８倍になるまで連続的に熱収縮を行い、延伸糸を得た。続いて、エチレン含有率が４４％のエチレン−ビニルアルコール共重合体（ＥＶＯＨ）を７５％エタノール水溶液に加熱溶解し、濃度２．５重量％の溶液を得た。５０℃に保温した該溶液に延伸糸を１００秒間浸漬し、５０℃のエタノール飽和蒸気下で８０秒保温した後、更に８０秒かけて溶剤を乾燥した。得られたＥＶＯＨ親水化処理多孔性中空糸膜の内径は２８７μｍ、膜厚は５２μｍであった。【００４７】
（実施例１）
特開平２−０２９２６０に従い、試験管にアセトン２６ｍＬ、エピクロロヒドリン２１ｍＬ、４０％ＮａＯＨ水溶液５ｍＬを入れ、そこへ内径２８７μｍ、膜厚５２μｍ、平均孔径１０２ｎｍのＥＶＯＨ親水化処理多孔性中空糸膜を浸漬した。超音波をかけながら、３０〜４０℃で５時間反応させた。反応終了後、アセトンと水で洗浄し、エポキシ基が導入された中空糸を得た。導入されたエポキシ基量は、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液を用い、ＮａＯＨで滴定を行った結果、約０．０１μｍｏｌ／ｃｍ２導入されていることがわかった。
次に、２８％アンモニア水溶液にエポキシ基を導入した中空糸を浸漬し、室温で終夜反応させた。反応終了後は水で洗浄し、１級アミノ基が導入された中空糸を得た。導入されたアミノ基量を、ＨＣｌにより滴定して約０．０３μｍｏｌ／ｃｍ２導入されていることがわかった。
次に、試験管にヘパリン４００ｍｇとシアノ水素化ホウ素ナトリウム５０ｍｇを入れ、ＰＢＳ５０ｍＬに溶解し、アミノ基が導入された中空糸を浸漬して、４０℃で３日間反応させた。反応終了後、飽和食塩水と水で洗浄した。残存しているアミノ基をアセチル化するために、中空糸をメタノール５０％含有のＡｃＯＮａ水溶液（０．２ｍｏｌ／Ｌ）３６ｍＬに入れ、氷冷する。氷冷しながら無水酢酸１８ｍＬを滴下し、そのまま超音波で３０分反応させた。
更に、水浴（１０〜２５℃）にて、３０分反応させた。反応終了後、水で洗浄を行い、再度同様のアセチル化処理を行った。反応終了後、飽和食塩水、水およびＰＢＳで洗浄を行い、ヘパリン固定化中空糸を得た。固定化量をメチレンブルーの吸着量で測定したところ、１７μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。【００４８】
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが７６％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
（比較例１）
実施例１で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は６４％であった。したがって、ヘパリンを固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００４９】
（実施例２）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径２６７μｍ、膜厚５４μｍ、平均孔径２４６ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、１７μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが４８％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９８％だった。
（比較例２）
実施例２で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３３％であった。【００５０】
（実施例３）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径３００μｍ、膜厚４０μｍ、平均孔径２２６ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、１５μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
（比較例３）
実施例３で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３７％であった。【００５１】
（実施例４）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径２５７μｍ、膜厚５４μｍ、平均孔径１８３ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、１８μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
（比較例４）
実施例４で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３５％であった。【００５２】
（実施例５）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径１７６μｍ、膜厚４０μｍ、平均孔径１５３ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、１６μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
(比較例５)
実施例５で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３１％であった。【００５３】
（実施例６）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径１６８μｍ、膜厚６３μｍ、平均孔径１１８ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、１７μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６７％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９６％だった。
（比較例６）
実施例６で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は４５％であった。【００５４】
（実施例７）
実施例１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径１７０μｍ、膜厚５４μｍ、平均孔径１１７ｎｍに変えた以外は、実施例１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、２０μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６７％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９７％だった。
（比較例７）
実施例７で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は５５％であった。【００５５】
（実施例８）
実施例４のヘパリンを低分子量ヘパリンに変えた以外は、実施例４と同様の手法で低分子量ヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、２１μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記の低分子量ヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５１％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
（比較例８）
実施例８で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３５％であった。したがって、低分子量ヘパリンを固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００５６】
（実施例９）
実施例４のヘパリンを分子量５０００のデキストラン硫酸（硫酸化度１５〜２０％）に変えた以外は、実施例４と同様の手法でデキストラン硫酸を固定化した。固定化量を測定したところ、８μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のデキストラン硫酸固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが４９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
(比較例９)
実施例９で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３５％であった。したがって、分子量５０００のデキストラン硫酸（硫酸化度１５〜２０％）を固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００５７】
（実施例１０）
実施例４のヘパリンを分子量２００００のデキストラン硫酸（硫酸化度１５〜２０％）に変えた以外は、実施例４と同様の手法でデキストラン硫酸を固定化した。固定化量を測定したところ、１０μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のデキストラン硫酸固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが４９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
(比較例１０)
実施例１０で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜で同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３５％であった。したがって、分子量２００００のデキストラン硫酸（硫酸化度１５〜２０％）を固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００５８】
（実施例１１）
実施例２の２８％アンモニア水を５％ポリアリルアミン水溶液に変えた以外は、実施例２と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、４３μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％だった。
(比較例１１)
実施例１１で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜で同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３３％であった。【００５９】
（実施例１２）
実施例１１のＥＶＯＨ親水化処理膜を内径２５７μｍ、膜厚５４μｍ、平均孔径１８３ｎｍに変えた以外は、実施例１１と同様の手法でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、４６μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９８％だった。
（比較例１２）
実施例１２で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜で同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３５％であった。【００６０】
（実施例１３）
実施例１２のヘパリンを低分子量ヘパリンに変えた以外は、実施例１２と同様の手法で低分子量ヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、７０μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記の低分子量ヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５９％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。【００６１】
（実施例１４）
実施例１２のヘパリンを分子量５０００のデキストラン硫酸（イオウ含量１５〜２０％）に変えた以外は、実施例１２と同様の手法でデキストラン硫酸を固定化した。固定化量を測定したところ、３０μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のデキストラン硫酸固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５８％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。【００６２】
（実施例１５）
実施例１２のヘパリンを分子量２００００のデキストラン硫酸（イオウ含量１５〜２０％）に変えた以外は、実施例１２と同様の手法でデキストラン硫酸を固定化した。固定化量を測定したところ、３４μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のデキストラン硫酸固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６７％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％だった。【００６３】
（実施例１６）
試験管にこはく酸無水物３．５ｇ、トリエチルアミン３５０ｕＬを入れ、アセトン３０ｍＬに溶解させた。そこへ、実施例４で使用したＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を浸漬し、室温で２４時間反応させた。反応終了後、アセトンおよび水で洗浄した。真空乾燥して、カルボキシル基が導入された中空糸を得た。
試験管にＥＤＣ１９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）とＮＨＳ１２ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を入れ、ＰＢＳ３０ｍＬに溶解させた後、カルボキシル基を導入した中空糸を浸漬し、５分間反応させた。そこへ、ポリアリルアミンの２０％水溶液を１ｍＬ滴下し、室温で４時間反応させた。反応終了後、水で洗浄し、１級アミノ基が導入された中空糸を得た。その後、実施例１と同様にヘパリンを固定化し、アミノ基のアセチル化処理を行い、ヘパリン固定化中空糸を得た。固定化量を測定したところ、６６μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６４％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９８％だった。【００６４】
（実施例１７）
実施例１６のヘパリンを低分子量ヘパリンに変えた以外は、実施例１６と同様の手法で低分子量ヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、６８μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５３％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％だった。【００６５】
（実施例１８）
実施例４で実施したアミノ基にヘパリンを固定化する反応を、還元アミノ化ではなくＥＤＣを用いた活性エステル化による縮合反応に変えた以外は同様の操作でヘパリンを固定化した。固定化量を測定したところ、３０μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが５６％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９４％だった。【００６６】
（実施例１９）
実施例４で用いたＥＶＯＨ親水化中空糸膜に実施例１と同様の方法でエポキシ基を導入した後に１０％のヘパリン水溶液に浸漬し、４０℃で反応させた。固定化量を測定したところ、１１μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが４１％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％だった。【００６７】
（実施例２０）
実施例４のヘパリンをデキストラン硫酸（イオウ含量３〜６％）に変えた以外は、実施例４と同様の手法で低硫酸化度のデキストラン硫酸を固定化した。固定化量を測定したところ、４１μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記の低硫酸化度のデキストラン硫酸を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが４０％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。【００６８】
（比較例１３）
実施例２０で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜を用いて同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３０％であった。したがって、低硫酸化度のデキストラン硫酸を固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００６９】
（実施例２１）
実施例４のヘパリンをヘパリン類似物質に変えた以外は、実施例４と同様の手法でヘパリン類似物質を固定化した。固定化量を測定したところ、１８μｇ／ｃｍ２（内表面積換算）固定化されていた。
上記のヘパリン類似物質固定化中空糸膜を用いて得られるモジュールで、ＨＣＶ患者の血漿をろ過したところ、ＨＣＶが６２％除去された。このとき、アルブミンの透過率は９９％以上だった。
（比較例１４）
実施例２１で使用した糖類を固定化していないＥＶＯＨ親水化処理中空糸膜で同様の評価を行ったところ、ＨＣＶの除去率は３０％であった。したがって、ヘパリン類似物質を固定化した中空糸は、アルブミンのような生体成分は除去せずに、ＨＣＶの除去率を向上させられることがわかった。【００７０】
（実施例２２）血球血漿分離試験
中空糸モジュール用ハウジングパイプ（内径３ｍｍ×外径５ｍｍ、全長２２５ｍｍ）の両端側面に血漿取り出し用のニードル（１５ゲージ２条ネジプラスチックニードル、武蔵エンジニアリング(株)製）を取り付け、実施例１で調製した多孔質中空糸膜を３７本挿入し、両端部を５分型エポキシ樹脂系接着剤（ボンドクイックセット、コニシ(株)）を用いてハウジングパイプに固定した。更に両端部に血液流入出用コネクター（ルアーフィッティング、アイシス製）を取り付けて、有効長１５ｃｍ、有効ろ過面積５０ｃｍ２の中空糸モジュールを得た。健常なボランティアから採血し、血液保存液（ＣＰＤ液、クエン酸リン酸ブドウ糖液）を混合して抗凝固した血液を調製し、そこにＨＣＶ患者血漿を添加してウイルス除去能評価用の血液とした。ＨＣＶ入り血液１６ｍＬをリザーバーに入れて３７℃に加温し、中空糸モジュールに血液流量０．３３ｍＬ／分で血液を流入させ、血漿ろ過流量０．１ｍＬ／分で血漿分離を行った。３０分後、分離された血漿側のウイルス量を測定したところ、８０％除去されていた。このとき、アルブミンは９９％以上、ＬＤＬは８９％透過しており、有用な血漿成分を除去せずに効率的にウイルスを除去出来ることがわかった。試験中には、目詰まりによるＴＭＰ等の上昇や目だった溶血もみられなかった。このことから、リガンドを固定化した中空糸膜モジュールを使用することで、簡便かつ継続的に血漿分離をしながら同時にウイルスを除去できることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明の高分子基材は、ウイルス除去器具への利用が可能であり、当該器具はウイルスの除去に利用が可能である。
【符号の説明】
【００７２】
１：ウイルス液流入口
２：孔を通過しなかった液の流出口
３：中空糸膜
４：孔を通過したウイルス液の流出口
５：容器
６：隔壁
【図１】
2012121073.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成24年8月8日(2012.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材であって、
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）と、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が結合し、更にアミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材。
【請求項２】
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）が、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の部分けん化物、ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、ヒドロキシメタクリレート共重合体、酢酸セルロースの部分けん化物又はグリセリン誘導体で表面処理された中空糸である請求項１に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項３】
中空糸が、多孔性中空糸である請求項２に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項４】
中空糸が、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリ−４−メチルペンテンを基質とするものである請求項３に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項５】
多孔性中空糸の平均流量孔径が５０〜５００ｎｍの範囲である請求項３又は４に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項６】
多孔性中空糸の内径が１５０〜５００μｍの範囲である請求項３〜５の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項７】
多孔性中空糸の膜厚が３０〜１００μｍの範囲である請求項３〜６の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項８】
多孔性中空糸の糖類の固定化量が１〜１００μｇ/ｃｍ２の範囲である請求項３〜７の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項９】
水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が、エピクロロヒドリン、カルボン酸無水物、ジカルボン酸化合物、ジカルボン酸塩化物、ジイソシアネート、ジエポキシ化合物、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート又は（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネートである請求項１〜８の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１０】
アミノ基を有する化合物（Ｃ）が、ポリアリルアミン、アンモニア、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、１，２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン、又はポリエチレンイミンである請求項１〜９の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１１】
糖類が、ヘパリン、ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸、フコイダン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、又はカルボキシメチルセルロースである請求項１〜１０の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１２】
ウイルスが、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルスである請求項１〜１１の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材を用いたウイルスの除去器具。
【請求項１４】
ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより、中空糸の有する孔を通過した液と、孔を通過しなかった液とを混合する工程を有する、請求項１３に記載のウイルスの除去器具。
【請求項１５】
ウイルスを含む液が、ウイルスを含む血液である請求項１３又は１４に記載のウイルスの除去器具。
【請求項１６】
ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより、中空糸の有する孔を通過した液と、孔を通過しなかった液とを混合することにより、請求項１３〜１５の何れかに記載のウイルスの除去器具を作動する方法。
【手続補正書】
【提出日】平成24年10月12日(2012.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖類が固定化されたウイルス除去用高分子基材であって、
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）と、水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が結合し、更にアミノ基を有する化合物（Ｃ）を介して糖類が固定化されたことを特徴とするウイルス除去用高分子基材。
【請求項２】
水酸基を有する高分子材で表面処理された高分子支持体（Ａ）が、エチレン−ビニルアルコール共重合体、エチレン−ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の部分けん化物、ビニルアルコール−酢酸ビニル共重合体、ヒドロキシメタクリレート共重合体、酢酸セルロースの部分けん化物又はグリセリン誘導体で表面処理された中空糸である請求項１に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項３】
中空糸が、多孔性中空糸である請求項２に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項４】
中空糸が、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリ−４−メチルペンテンを基質とするものである請求項３に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項５】
多孔性中空糸の平均流量孔径が５０〜５００ｎｍの範囲である請求項３又は４に記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項６】
多孔性中空糸の内径が１５０〜５００μｍの範囲である請求項３〜５の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項７】
多孔性中空糸の膜厚が３０〜１００μｍの範囲である請求項３〜６の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項８】
多孔性中空糸の糖類の固定化量が１〜１００μｇ/ｃｍ２の範囲である請求項３〜７の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項９】
水酸基と反応して共有結合を形成しえる基を有する化合物（Ｂ）が、エピクロロヒドリン、カルボン酸無水物、ジカルボン酸化合物、ジカルボン酸塩化物、ジイソシアネート、ジエポキシ化合物、（メタ）アクリル酸、グリシジル（メタ）アクリレート又は（メタ）アクリロイルオキシアルキルイソシアネートである請求項１〜８の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１０】
アミノ基を有する化合物（Ｃ）が、ポリアリルアミン、アンモニア、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、ブチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、１，２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、３，３’−ジアミノジプロピルアミン、ジエチレントリアミン、フェニレンジアミン、又はポリエチレンイミンである請求項１〜９の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１１】
糖類が、ヘパリン、ヘパリンの１級又は２級水酸基を硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−アセチル基のアセチル基脱離体をＮ−硫酸エステル化したヘパリン誘導体、ヘパリンのＮ−硫酸基の硫酸基脱離体をＮ−アセチル化したヘパリン誘導体、低分子量ヘパリン、デキストラン硫酸、フコイダン、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、デルマタン硫酸、ヘパリン類似物質、ヘパラン硫酸、ラムナン硫酸、ケタラン硫酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、又はカルボキシメチルセルロースである請求項１〜１０の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１２】
ウイルスが、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルスである請求項１〜１１の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れかに記載のウイルス除去用高分子基材を用いたウイルスの除去器具。
【請求項１４】
ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより生成する、中空糸の有する孔を通過した液と孔を通過しなかった液とを混合する機能を有する、請求項１３に記載のウイルスの除去器具。
【請求項１５】
ウイルスを含む液が、ウイルスを含む血液である請求項１３又は１４に記載のウイルスの除去器具。
【請求項１６】
ウイルスを含む液を多孔性中空糸に通じることにより生成する、中空糸の有する孔を通過した液と孔を通過しなかった液とを混合する機能を有する請求項１３〜１５の何れかに記載のウイルスの除去器具の作動方法。
【国際調査報告】
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