(57)【要約】  デスモステロール単独、デスモステロール及びアミロイドベータの組み合わせ、デスモステロール及びゲルゾリンの組み合わせ並びにデスモステロール、アミロイドベータ及びゲルゾリンの組み合わせは、アルツハイマー病又は軽度認知症の血中バイオマーカーとして利用可能である。これらのバイオマーカーを利用した、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助する方法及びアルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項３】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項４】
アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項５】
アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項６】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項７】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項８】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項９】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１０】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１１】
アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１２】
アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１３】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１４】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１５】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１６】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１７】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１８】
アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１９】
アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２０】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２１】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２２】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２３】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２４】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２５】
アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２７】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２８】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病又は軽度認知症のバイオマーカーに関する。より詳細には、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助する方法及びアルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオマーカーは疾患の進行を診断及び監視するのに非常に有用であり、患者の選別、副作用の監視、適切な治療の選択の支援及び新薬の発見にとって重要である。アルツハイマー病では、脳脊髄液のＡβ（アミロイドベータ）１−４２及びリン酸化タウタンパク質が、現在、最も有用なバイオマーカーと考えられている（非特許文献１及び２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ibach et al., “Cerebrospinal fluid tau and beta-amyloid in Alzheimer patients, disease controls and an age-matched random sample”, Neurobiol. Aging., 2006; vol.27 (no.9): p.1202-1211.
【非特許文献２】Bouwman et al., “CSF biomarker levels in early and late onset Alzheimer's disease”, Neurobiol. Aging., 2009; vol.30 (no.12): p.1895-1901.
【非特許文献３】Koelsch et al. “Alterations of cholesterol precursor levels in Alzheimer's disease”, Biochim. Biophys. Acta., 2010; vol.1801 (no.8): p.945-950.
【非特許文献４】Guentert et al., “Plasma Gelsolin is Decreased and Correlates with Rate of Decline in Alzheimer’s Disease”, J. Alzheimer’s. Dis., 2010; vol.21 (no.2): p.585-596.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、上記バイオマーカーでは、脳脊髄液を用いる必要があり、特にアルツハイマー病態の経時変化をモニタリングする際にその都度脳脊髄液を採集することは患者への負担が大きく、より低浸襲性の血液等でのバイオマーカーが求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
デスモステロールは、コレステロールの前駆体である。アルツハイマー病ではコレステロール代謝の異常が起きていると考えられ、アルツハイマー病患者では血漿中のデスモステロールレベルは変化しないものの、脳脊髄液中のデスモステロールレベルが高齢健常者と比較して低下していることが報告されている（非特許文献３）。本発明者らは、この知見に反して、アルツハイマー病患者の血漿中のデスモステロールレベルが高齢健常者と比較して低下していることを見出し、血漿中のデスモステロールがアルツハイマー病のバイオマーカーとして利用できることを見出した。さらに本発明者らは、デスモステロールはアルツハイマー病の先行疾患である軽度な認知機能障害を示す、軽度認知症をも単独で診断可能であることを発見した。【０００６】
また、本発明者らは、血中のデスモステロール及びアミロイドベータを組み合わせてバイオマーカーとすることで、血中デスモステロール単独をバイオマーカーとするよりも正確にアルツハイマー病又は軽度認知症を診断できること見出した。【０００７】
さらに、本発明者らは、血中のデスモステロール及びゲルゾリンを組み合わせてバイオマーカーとすることで、あるいは、血中のデスモステロール、アミロイドベータ及びゲルゾリンを組み合わせてバイオマーカーとすることで、血中デスモステロール単独をバイオマーカーとするよりも正確にアルツハイマー病又は軽度認知症を診断できること見出した。なお、血漿ゲルゾリンレベルがアルツハイマー病患者では低下していることが知られている（非特許文献４）。【０００８】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［２８］を提供する。
［１］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［３］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［４］アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［５］アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
［６］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［７］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［８］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［９］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１０］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１１］アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１２］アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
［１３］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１４］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１５］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１６］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１７］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１８］アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［１９］アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
［２０］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２１］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２２］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２３］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２４］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２５］アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２６］アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
［２７］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
［２８］アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【発明の効果】
【０００９】
血中デスモステロールレベル等を指標とすることにより、アルツハイマー病又は軽度認知症の進行を正確に診断することが可能であり、また、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を正確に評価することが可能であり、さらに、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択することが可能であり、また、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測することが可能である。本発明に係るデスモステロール等は血中バイオマーカーであるため、脳脊髄液を採取することなく、アルツハイマー病又は軽度認知症を正確に診断等することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】高齢健常者及びアルツハイマー病患者に関する、デスモステロール、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０、及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図２】高齢健常者及び軽度認知症患者に関する、デスモステロール、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０、及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図３】高齢健常者及びアルツハイマー病患者に関する、デスモステロール／コレステロール、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０、ゲルゾリン及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図４】高齢健常者及び軽度認知症患者に関する、デスモステロール／コレステロール、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０、ゲルゾリン及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図５】高齢健常者及びアルツハイマー病患者に関する、デスモステロール／コレステロール、ゲルゾリン及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図６】高齢健常者及び軽度認知症患者に関する、デスモステロール／コレステロール、ゲルゾリン及びそれらの組み合わせの受信者動作特性プロットを示す図である。
【図７】高齢健常者及び軽度認知症患者の、デスモステロールレベルを示す図である。図中の太いバーはメジアン値を表す。高齢健常者に対する軽度認知症患者の倍率変化は０．７３６８である。
【図８】高齢健常者及び軽度認知症患者に関する、デスモステロールの受信者動作特性プロットを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法は、非ヒト動物又はヒトを対象に行う。非ヒト動物は、哺乳動物であることが好ましい。非ヒト動物は、アルツハイマー病又は軽度認知症のモデル動物を利用することが好ましい。アルツハイマー病又は軽度認知症のモデル動物は、例えば、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）やプレセリニン２を改変することで、アミロイドベータの産生が増大している動物が挙げられる。より具体的には、ＡＰＰを過剰発現する遺伝子改変マウスであるＴｇ２５７６が挙げられる。ヒトは、アルツハイマー病又は軽度認知症に罹患した患者を対象とすることが好ましい。
【００１２】
同一個体の非ヒト動物又はヒトの血中デスモステロールレベルを、候補物質を投与する前後で測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。
【００１３】
ここで、血中デスモステロールレベルは、液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）により測定することができる。より詳細には、実施例に記載した条件で測定することができる。血中デスモステロールレベルは、デスモステロールの濃度でもよく、コレステロールに対するデスモステロールの比であるデスモステロール／コレステロールでもよく、好ましくはデスモステロールの濃度である。また、血中デスモステロールレベルは、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ法（ＥＬＩＳＡ）やガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）でも測定することができる。血中デスモステロールレベルは、好ましくは血漿中レベルである。
【００１４】
候補物質の薬効の評価は、候補物質投与後の血中デスモステロールレベルが候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００１５】
また、異なる個体の非ヒト動物を用いて、一方の１又は複数の個体は候補物質を投与せず（コントロール群）に血中デスモステロールレベルを測定し、他方の１又は複数の個体は候補物質を投与した後（候補物質投与群）に血中デスモステロールレベルを測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。この場合、候補物質の薬効の評価は、候補物質投与群の血中デスモステロールレベルがコントロール群の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００１６】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値は、健常人、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【００１７】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血中デスモステロールレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する。血中デスモステロールレベルの基準値は、上記の通りである。
【００１８】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロールレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値は、上記の通りである。
【００１９】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロールレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値は、上記の通りである。
【００２０】
なお、本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質は、特に限定されないが、好ましくはコレステロール代謝経路修飾物質又はＡβ仮説に基づく修飾物質であり、より好ましくはβ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼ修飾剤、抗Ａβ抗体、抗Ａβオリゴマー抗体などである。
【００２１】
上記方法において、血中デスモステロールレベル単独をバイオマーカーとしても用いてもよく、他のバイオマーカーと組み合わせて用いてもよい。他のバイオマーカーと組み合わせることで、より的確な評価等を行うことが可能である。中でも、血中アミロイドベータレベルとの組み合わせ、血中ゲルゾリンレベルとの組み合わせ又は血中アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルとの組み合わせは、著しく的確な評価等を行うことができるため好ましい。以下に、これらのバイオマーカーと組み合わせた態様について詳細に説明する。
【００２２】
血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルをバイオマーカーとした方法について説明する。
【００２３】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法は、非ヒト動物又はヒトを対象に行う。具体的には、上記の通りである。
【００２４】
同一個体の非ヒト動物又はヒトの血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを、候補物質を投与する前後で測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。
【００２５】
血中デスモステロールレベルの測定方法は、上記の通りである。
【００２６】
血中アミロイドベータレベルは、例えばＥＬＩＳＡ法、ＬＣ／ＭＳなどの公知の方法で測定することができる。アミロイドベータは、Ａβｘ−４０及びＡβｘ−４２の双方の測定を行うことが望ましい。Ａβｘ−４０とは、Ａβ１−４０及びそのＮ末端側の一部を欠いたペプチドを意味し、Ａβｘ−４２とは、Ａβ１−４２及びそのＮ末端側の一部を欠いたペプチドを意味する。血中アミロイドベータレベルは、血中Ａβｘ−４２の濃度でもよく、Ａβｘ−４０に対するＡβｘ−４２の比であるＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０でもよく、好ましくはＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０である。血中アミロイドベータレベルは、好ましくは血漿中レベルである。
【００２７】
候補物質の薬効の評価は、候補物質投与後の血中デスモステロールレベルが候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、候補物質投与後の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０は、血中Ａβｘ−４０レベルに対する血中Ａβｘ−４２レベルの比を意味する。
【００２８】
また、異なる個体の非ヒト動物を用いて、一方の１又は複数の個体は候補物質を投与せず（コントロール群）に血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定し、他方の１又は複数の個体は候補物質を投与した後（候補物質投与群）に血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベル測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。この場合、候補物質の薬効の評価は、候補物質投与群の血中デスモステロールレベルがコントロール群のレベルと比較して上昇しており、かつ、候補物質投与群の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０がコントロール群と比較して上昇している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００２９】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロール及びアミロイドベータレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値は、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【００３０】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血中デスモステロール及びアミロイドベータレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値は、上記の通りである。
【００３１】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロール及びアミロイドベータレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値は、上記の通りである。
【００３２】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロール及びアミロイドベータレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値は、上記の通りである。
【００３３】
なお、本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質は特に限定されず、好ましくは上記の通りである。
【００３４】
血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルをバイオマーカーとした方法について説明する。
【００３５】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法は、非ヒト動物又はヒトを対象に行う。具体的には、上記の通りである。
【００３６】
同一個体の非ヒト動物又はヒトの血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを、候補物質を投与する前後で測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。
【００３７】
血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルの測定方法は、上記の通りである。
【００３８】
血中ゲルゾリンレベルは、例えばＥＬＩＳＡ法などの公知の方法で測定することができる。血中ゲルゾリンレベルは、好ましくは血漿中レベルである。
【００３９】
候補物質の薬効の評価は、候補物質投与後の血中デスモステロールレベルが候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、候補物質投与後の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、候補物質投与後の血中ゲルゾリンレベルが候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００４０】
また、異なる個体の非ヒト動物を用いて、一方の１又は複数の個体は候補物質を投与せず（コントロール群）に血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、他方の１又は複数の個体は候補物質を投与した後（候補物質投与群）に血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベル測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。この場合、候補物質の薬効の評価は、候補物質投与群の血中デスモステロールレベルがコントロール群のレベルと比較して上昇しており、候補物質投与群の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０がコントロール群と比較して上昇しており、かつ、候補物質投与群の血中ゲルゾリンレベルがコントロール群のレベルと比較して上昇している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００４１】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロール、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【００４２】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血中デスモステロール、アミロイドベータレベル及び血中ゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００４３】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロール、アミロイドベータレベル及び血中ゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００４４】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法は、アルツハイマー病と診断された被験者の血中デスモステロール、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００４５】
なお、本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質は特に限定されず、好ましくは上記の通りである。
【００４６】
血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルをバイオマーカーとした方法について説明する。
【００４７】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法は、非ヒト動物又はヒトを対象に行う。具体的には、上記の通りである。
【００４８】
同一個体の非ヒト動物又はヒトの血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを、候補物質を投与する前後で測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。
【００４９】
血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及び血中ゲルゾリンレベルの測定方法は、上記の通りである。
【００５０】
候補物質の薬効の評価は、候補物質投与後の血中デスモステロールレベルが候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、候補物質投与後の血中ゲルゾリンレベルが候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００５１】
また、異なる個体の非ヒト動物を用いて、一方の１又は複数の個体は候補物質を投与せず（コントロール群）に血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、他方の１又は複数の個体は候補物質を投与した後（候補物質投与群）に血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベル測定し、それらのレベルを比較することで、候補物質の効果を評価することができる。この場合、候補物質の薬効の評価は、候補物質投与群の血中デスモステロールレベルがコントロール群のレベルと比較して上昇しており、かつ、候補物質投与群の血中ゲルゾリンレベルがコントロール群のレベルと比較して上昇している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。
【００５２】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロール及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【００５３】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症を診断する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血中デスモステロール及び血中ゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する。血中デスモステロールレベルの基準値、及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００５４】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロール及び血中ゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００５５】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法は、アルツハイマー病と診断された被験者の血中デスモステロール及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【００５６】
なお、本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質は特に限定されず、好ましくは上記の通りである。
【実施例】
【００５７】
実施例１：高齢健常者及びアルツハイマー病患者の血中デスモステロールレベルの測定
サンプル
高齢健常者（１０例）及びアルツハイマー病患者（１０例）の血漿をサンプルに用いた。【００５８】
デスモステロールの測定
血漿２５μｌに、内部標準として５００ｎｇ／ｍｌのデスモステロール−ｄ６（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．から購入）を１００μＬ、２００μｇ／ｍｌのコレステロール−ｄ７（関東化学株式会社から購入）を１００μＬ添加し、さらに５０％水酸化カリウム水溶液を１００μＬ添加し、７０℃にて６０分インキュベートした。その後、ヘキサン２ｍＬとリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ６．８）０．５ｍＬを添加し、攪拌、遠心後、ヘキサン層を取り出した。この抽出操作を２回繰り返した。得られたヘキサン層をまとめた後、窒素ガスにて溶媒を蒸発乾固させた。ペレットをエタノールに溶解させ、液体クロマトグラフィー／大気圧化学イオン化質量分析（ＬＣ／ＡＰＣＩ−ＭＳ）に付した。【００５９】
ＬＣ／ＡＰＣＩ−ＭＳの装置は、オートサンプラーＳＩＬ−２０ＡＣ、カラムオーブンＣＴＯ−２０ＡＣ及び四重極型質量分析計ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶを備えたＬＣ−２０ＡＤシステム（島津製作所製）を使用した。カラムとして内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ＲＳ  ｃｏｌｕｍｎ（ＹＭＣ社から購入）を用いカラム温度を５０℃とした。移動相として水とメタノールの混合溶媒（流速１ｍｌ／分）を用いた。より詳細には、溶媒Ａ（水：メタノール＝５０：５０）及び溶媒Ｂ（メタノール）を使用し、０−４５分を８５％Ｂとし、４５−５５分を１００％Ｂとし、５５−７０分を８５％とした。【００６０】
ＭＳ分析はモニタリングイオンとして、ｍ／ｚ３６９．３、３７６．３、３６７．３及び３７３．３（それぞれ、コレステロール、コレステロール−ｄ７、デスモステロール、デスモステロール−ｄ６に相当）を用いるＳｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＳＩＭ）モードで実施した。各サンプルの濃度は、測定対象物の検量線を基に算出した。【００６１】
結果を以下の表１及び２に示す。アルツハイマー病患者の血漿中のデスモステロールレベルは高齢健常者と比較して低下していることが確認された。【００６２】
【表１】
2012053255.tif 000002
【００６３】
【表２】
2012053255.tif 000003
【００６４】
実施例２：高齢健常者及びアルツハイマー病患者の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルの測定
サンプル
高齢健常者（１０例）及びアルツハイマー病患者（１０例）の血漿をサンプルに用いた。【００６５】
デスモステロールの測定
実施例１と同様の方法により測定した。【００６６】
Ａβｘ−４０、Ａβｘ−４２の測定
血液中のＡβｘ−４０、Ａβｘ−４２の濃度はＷＡＫＯ  Ａβｘ−４０  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（和光純薬工業）、ＷＡＫＯ  Ａβ  ｘ−４２  Ｈｉｇｈ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（和光純薬工業）を使用し、キットのマニュアルに沿って測定を実施した。【００６７】
結果を以下の表３及び４に示す。【００６８】
【表３】
2012053255.tif 000004
【００６９】
【表４】
2012053255.tif 000005
【００７０】
統計解析
上記データを使用し、各々の測定値及びその組み合わせの診断精度を評価するために、受信者動作特性プロット（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ Ｃｕｒｖｅ）を利用した。デスモステロール及びＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０各々の受信者動作特性プロットはＲの基本パッケージＲＯＣを利用して描画した。デスモステロール及びＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の組み合わせは学習モデルＳＶＭ（Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｍａｃｈｉｎｅ）（Ｒパッケージｅ１０７１）を利用した。評価は高齢健常者群１０検体、アルツハイマー病患者群１０検体、合計２０検体の中から無作為に１０検体を抽出し学習セットとし、残りの１０検体をテストセットとして行った。また、テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図１）。デスモステロール単独のＡＵＣは０．９６であり、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０のＡＵＣは０．９１であり、デスモステロール及びＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の組み合わせのＡＵＣは１であった。【００７１】
実施例３：高齢健常者及び軽度認知症患者の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルの測定
サンプル
高齢健常者（４２例）及び軽度認知症患者（２６例）の血漿をサンプルに用いた。【００７２】
デスモステロールの測定
実施例１と同様の方法により測定した。【００７３】
Ａβｘ−４０、Ａβｘ−４２の測定
実施例２と同様の方法により測定した。【００７４】
統計解析
上記データを使用し、各々の測定値及びその組み合わせの診断精度を評価するために、実施例２と同様に受信者動作特性プロットを利用した。評価は高齢健常者群４２検体、軽度認知症患者群２６検体、合計６８検体の中から無作為に３４検体を抽出し学習セットとし、残りの３４検体をテストセットとして行った。また、テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図２）。デスモステロール単独のＡＵＣは０．７１であり、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０のＡＵＣは０．８４であり、デスモステロール及びＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の組み合わせのＡＵＣは０．９２であった。【００７５】
実施例４：高齢健常者、アルツハイマー病患者及び軽度認知症患者の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルの測定
サンプル
高齢健常者（３７例）、アルツハイマー病患者（３９例）及び軽度認知症患者（２６例）の血漿をサンプルに用いた。【００７６】
デスモステロールの測定
実施例１と同様の方法により測定した。【００７７】
Ａβｘ−４０、Ａβｘ−４２の測定
実施例２と同様の方法により測定した。【００７８】
ゲルゾリンの測定
血液中のゲルゾリンの濃度はｇｅｌｓｏｌｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ（ＵＳＣＮ  Ｌｉｆｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ社）を使用し、キットのマニュアルに沿って測定を実施した。【００７９】
統計解析
上記データを使用し、各々の測定値及びその組み合わせの診断精度を評価するために、実施例２と同様に受信者動作特性プロットを利用して行った。評価は高齢健常者群３７検体、アルツハイマー病患者群３９検体、合計７６検体の中から無作為に３８検体を抽出し学習セットとし、残りの３８検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図３）。デスモステロール／コレステロールのＡＵＣは０．８０であり、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０のＡＵＣは０．８８であり、ゲルゾリンのＡＵＣは０．８８であり、三者の組み合わせのＡＵＣは０．９８であった。三者の組み合わせについて、特異性を１００％とすると感度は９０％であった。【００８０】
また、高齢健常者群３７検体、軽度認知症患者群２６検体、合計６３検体の中から無作為に３２検体を抽出し学習セットとし、残りの３１検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図４）。デスモステロール／コレステロールのＡＵＣは０．７１であり、Ａβｘ−４２／Ａβｘ−４０のＡＵＣは０．８１であり、ゲルゾリンのＡＵＣは０．８０であり、三者の組み合わせのＡＵＣは０．８６であった。三者の組み合わせについて、特異性を８５％とすると感度は８５％であった。【００８１】
実施例５：高齢健常者、アルツハイマー病患者及び軽度認知症患者の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルの測定
サンプル
高齢健常者（４２例）、アルツハイマー病患者（４１例）及び軽度認知症患者（２６例）の血漿をサンプルに用いた。【００８２】
デスモステロールの測定
実施例１と同様の方法により測定した。【００８３】
ゲルゾリンの測定
実施例４と同様の方法により測定した。【００８４】
統計解析
上記データを使用し、各々の測定値及びその組み合わせの診断精度を評価するために、実施例２と同様に受信者動作特性プロットを利用して行った。評価は高齢健常者群４２検体、アルツハイマー病患者群４１検体、合計８３検体の中から無作為に４２検体を抽出し学習セットとし、残りの４１検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図５）。デスモステロール／コレステロールのＡＵＣは０．８０であり、ゲルゾリンのＡＵＣは０．８８であり、両者の組み合わせのＡＵＣは０．９６であった。【００８５】
また、高齢健常者群４２検体、軽度認知症患者群２６検体、合計６８検体の中から無作為に３４検体を抽出し学習セットとし、残りの３４検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図５）。デスモステロール／コレステロールのＡＵＣは０．７１であり、ゲルゾリンのＡＵＣは０．８０であり、両者の組み合わせのＡＵＣは０．８２であった。【００８６】
実施例６：高齢健常者及び軽度認知症患者の血中デスモステロールレベルの測定
サンプル
高齢健常者（４２例）及び軽度認知症患者（２６例）の血漿をサンプルに用いた。【００８７】
デスモステロールの測定
実施例１と同様の方法により測定した。高齢健常者及び軽度認知症患者の血中デスモステロールレベルを図７に示した。高齢健常者の平均血漿デスモステロールレベルは、１０４６ｎｇ／ｍｌであり、軽度認知症患者の平均血漿デスモステロールレベルは、７７０ｎｇ／ｍｌであった。両者の間に、有意差が認められた（ｐ＜０．０１；ｔ検定）。【００８８】
統計解析
上記データを使用し、診断精度を評価するために、実施例２と同様に受信者動作特性プロットを利用して行った。評価は高齢健常者群４２検体、軽度認知症患者群２６検体、合計６８検体の中から無作為に３４検体を抽出し学習セットとし、残りの３４検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図８）。ＡＵＣは０．７２であった。
【図１】
2012053255.tif 000006
【図２】
2012053255.tif 000007
【図３】
2012053255.tif 000008
【図４】
2012053255.tif 000009
【図５】
2012053255.tif 000010
【図６】
2012053255.tif 000011
【図７】
2012053255.tif 000012
【図８】
2012053255.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成25年5月15日(2013.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２】
アルツハイマー病治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項３】
アルツハイマー病治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項４】
アルツハイマー病の検出を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項５】
アルツハイマー病を検出する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項６】
アルツハイマー病治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項７】
アルツハイマー病治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項８】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前のレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項９】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１０】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１１】
アルツハイマー病又は軽度認知症の検出を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１２】
アルツハイマー病又は軽度認知症を検出する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１３】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１４】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びアミロイドベータレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１５】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１６】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１７】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、前記候補物質投与後の被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が前記候補物質投与前と比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１８】
アルツハイマー病又は軽度認知症の検出を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項１９】
アルツハイマー病又は軽度認知症を検出する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２０】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２１】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、前記被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２２】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２３】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
第二の非ヒト動物に候補物質を投与する工程と、
候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の第二の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルが、候補物質を投与されていない第一の非ヒト動物の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２４】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の効果を評価する方法であって、
候補物質投与前の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
候補物質投与後の被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
前記候補物質投与後の被験者の血中デスモステロールレベルが前記候補物質投与前の血中デスモステロールレベルと比較して上昇しており、かつ、前記候補物質投与後の被験者の血中ゲルゾリンレベルが前記候補物質投与前の血中ゲルゾリンレベルと比較して上昇している場合に、当該候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２５】
アルツハイマー病又は軽度認知症の検出を補助するための方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
アルツハイマー病又は軽度認知症を検出する方法であって、
被験者の血中デスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症であると判定する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２７】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を期待できる患者を選択する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質を投与すべき患者であるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２８】
アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法であって、
被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、及びゲルゾリンレベルを測定する工程と、
当該被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、当該被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質が有効である可能性があるとの指標を提供する工程と、
を含む、前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロール及びアミロイドベータレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値及び血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値は、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症の診断を補助するための方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症が疑われる被験者の血液サンプル中のデスモステロールレベル、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで診断の指標を提供する。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、アルツハイマー病又は軽度認知症である可能性があるとの指標を提供する。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、アルツハイマー病又は軽度認知症と確定診断された患者の値を参照することにより導き出すことができる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明に係る、アルツハイマー病又は軽度認知症治療剤の候補物質の治療効果を予測する方法は、アルツハイマー病又は軽度認知症と診断された被験者の血中デスモステロール、アミロイドベータレベル及びゲルゾリンレベルを測定し、基準値と比較することで判定を行う。すなわち、被験者の血中デスモステロールレベルが基準値と比較して低下しており、被験者の血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０が基準値と比較して低下しており、かつ、被験者の血中ゲルゾリンレベルが基準値と比較して低下している場合に、候補物質がアルツハイマー病又は軽度認知症治療に有効である可能性があるとの指標に基づいて行うことができる。血中デスモステロールレベルの基準値、血中Ａβｘ−４２又はＡβｘ−４２／Ａβｘ−４０の基準値及び血中ゲルゾリンレベルの基準値は、上記の通りである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
血中デスモステロールレベル及び血中ゲルゾリンレベルの測定方法は、上記の通りである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
ＬＣ／ＡＰＣＩ−ＭＳの装置は、オートサンプラーＳＩＬ−２０ＡＣ、カラムオーブンＣＴＯ−２０ＡＣ及び四重極型質量分析計ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶを備えたＬＣ−２０ＡＤシステム（島津製作所製）を使用した。カラムとして内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ＲＳ  ｃｏｌｕｍｎ（ＹＭＣ社から購入）を用いカラム温度を５０℃とした。移動相として水とメタノールの混合溶媒（流速１ｍｌ／分）を用いた。より詳細には、溶媒Ａ（水：メタノール＝５０：５０）及び溶媒Ｂ（メタノール）を使用し、０−４５分を８５％Ｂとし、４５−５５分を１００％Ｂとし、５５−７０分を８５％Ｂとした。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
また、高齢健常者群４２検体、軽度認知症患者群２６検体、合計６８検体の中から無作為に３４検体を抽出し学習セットとし、残りの３４検体をテストセットとして行った。テストデータの予測結果の受信者動作特性プロットはＲＯＣＲパッケージを用いて実施した（図６）。デスモステロール／コレステロールのＡＵＣは０．７１であり、ゲルゾリンのＡＵＣは０．８０であり、両者の組み合わせのＡＵＣは０．８２であった。
【国際調査報告】
2012053255.tif 000014
2012053255.tif 000015
2012053255.tif 000016
2012053255.tif 000017