(57)【要約】頭頸部がん細胞の生育阻害が可能なTS-miR及びその利用。マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。
2012161124.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物。
【請求項２】
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物。
【請求項３】
ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法。
【請求項４】
ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法。
【請求項５】
頭頸部がんの有無を分析する方法であって、
体液試料中のマイクロＲＮＡを検出し、その測定値を基準値と比較することを含み、
前記マイクロＲＮＡは、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択される少なくとも１つである、頭頸部がんの有無の分析方法。
【請求項６】
体液試料中のhsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択されるマイクロＲＮＡの使用であって、体液試料中の頭頸部がんマーカーとしての使用。
【請求項７】
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物。
【請求項８】
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物。
【請求項９】
前記がんが、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、請求項７から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法。
【請求項１２】
ヒトのがんの治療又は予防方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防方法。
【請求項１３】
前記がんが、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、請求項１１から１３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイクロＲＮＡ又はその発現系を含む組成物及び頭頸部がんマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
マイクロＲＮＡ（microRNA/miRNA）は、１８〜２５塩基からなる小分子ＲＮＡであり、標的ｍＲＮＡに結合することで、そのタンパク質への翻訳を阻害する。現在までに約１，１００種類のヒトmiRNAがデータベース（例えば、miRBase (http://www.miRbase.org/)）に登録されており、これらmiRNAの発現或いは機能異常が種々の疾患に関与していることが明らかにされている（非特許文献１参照）。特に、がんに関しては、miRNAマイクロアレイを用いた網羅的発現解析によって、がん組織又はがん細胞で発現亢進又は発現抑制されているmiRNAが多数同定されている（特許文献１）。【０００３】
がんで発現亢進するmiRNAとしては、miR-21、miR-155、miR-17-5p、miR-19等が知られており、中でもmiR-19は細胞がん化に必要十分であり、その標的の一つががん抑制遺伝子ＰＴＥＮであることが示された。このようにがん抑制遺伝子を標的としてがん遺伝子的な性質を有するmiRNAは、OncomiRと呼ばれている。【０００４】
また、多くのmiRNAはがんで発現低下しており、そのようなmiRNAとしては、let-7、miR-15a、miR-34a、miR-143、miR-145等が報告されている。なかでも、let-7は、肺がんにおいて発現低下と予後とが相関することが明らかにされており、その標的にがん遺伝子Ｒａｓが含まれていることが知られている。がん遺伝子を標的としてがん抑制遺伝子様の機能を発揮するmiRNAは、Tumor suppressor miR（TS-miR）と呼ばれる。【０００５】
口腔がんのTS-miRとしては、miR-137とmiR-193aが示唆されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２００８−５００８３７号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Schickel R, et al. Oncogene 27: 5959-5974, 2008.
【非特許文献２】小崎健一ら、「口腔癌の新たな診断・治療体系の確立を目指したmicroRNAに関する網羅的解析」科学研究費補助金データベース（http://kaken.nii.ac.jp）、研究課題番号：18591997
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
がんにおいて発現が低下するのみならず、がん細胞内で発現させることによりそのがん細胞の生育を阻害でききるマイクロＲＮＡであれば、がんの治療や予防にいっそう有利となる。また、そのようなマイクロＲＮＡが血清や唾液中のがんマーカーとして利用できれば、がんの診断に有用となる。【０００９】
そこで、本発明は、一態様として、頭頸部がん細胞の生育阻害が可能なマイクロＲＮＡ及びその利用を提供する。また、本発明は、その他の態様として、体液試料中の頭頸部がんマーカーとして利用できるマイクロＲＮＡ及びその利用を提供する。また、本発明は、さらにその他の態様として、ヒトのがん細胞の生育阻害が可能なマイクロＲＮＡ及びその利用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一態様として、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。【００１１】
本発明は、その他の態様として、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法に関する。【００１２】
本発明は、さらにその他の態様として、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択されるマイクロＲＮＡの使用であって、体液試料中の頭頸部がんマーカーとしての使用に関する。【００１３】
本発明は、さらにその他の態様として、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。【００１４】
本発明は、さらにその他の態様として、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、例えば、頭頸部がんの診断、治療、予防、又は再発予防などに寄与できる。また、本発明によれば、例えば、ヒトの頭頸部がん以外のがんの診断、治療、予防、又は再発予防などに寄与できる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、ヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASに対するTS-miRによる増殖阻害の影響を示すグラフの一例である。
【図２】図２は、ヒト唾液腺がん細胞GFP-ACCMに対するTS-miRによる増殖阻害の影響を示すグラフの一例である。
【図３】図３は、各種ヒトがん細胞に対するhsa-miR-629*による増殖阻害の影響を示すグラフの一例である。
【図４】図４は、各種ヒトがん細胞に対するhsa-miR-1289による増殖阻害の影響を示すグラフの一例である。
【図５】図５は、各種ヒトがん細胞に対するhsa-miR-892bによる増殖阻害の影響を示すグラフの一例である。
【図６】図６Ａは、各ステージの口腔扁平上皮がん組織におけるhsa-miR-1289の発現を示すグラフの一例であり、図６Ｂは、唾液腺がん組織におけるhsa-miR-1289の発現を示すグラフの一例である。
【図７】図７Ａは、各ステージの口腔扁平上皮がん組織におけるhsa-miR-892bの発現を示すグラフの一例であり、図７Ｂは、唾液腺がん組織におけるhsa-miR-892bの発現を示すグラフの一例である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、以下の態様、すなわち、
［１］マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物；
［２］マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物；
［３］ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制する方法；
［４］ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトの頭頸部がんの治療又は予防方法；
［５］頭頸部がんの有無を分析する方法であって、体液試料中のマイクロＲＮＡを検出し、その測定値を基準値と比較することを含み、前記マイクロＲＮＡは、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択される少なくとも１つである、頭頸部がんの有無の分析方法；
［６］体液試料中のhsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択されるマイクロＲＮＡの使用であって、体液試料中の頭頸部がんマーカーとしての使用；
［７］マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物；
［８］マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物；
［９］前記がんが、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、［７］又は［８］に記載の組成物；
［１０］前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、［７］から［９］のいずれかに記載の組成物；
［１１］ヒトがん細胞の生育を抑制する方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法；
［１２］ヒトのがんの治療又は予防方法であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を対象に投与することを含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防方法；
［１３］前記がんが、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される、［１１］又は［１２］に記載の方法；
［１４］前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、［１１］から［１３］のいずれかに記載の方法；
に関する。
【００１８】
本明細書において「マイクロＲＮＡ（microRNA/miRNA）」とは、低分子non-codingRNAの一種をいい、当該技術分野において使用される通常の意味を示す。本明細書においてＩＤを用いて言及するマイクロＲＮＡは、データベース（例えば、miRBase (http://www.miRbase.org/)）を参照できる。本明細書においてマイクロＲＮＡは、特に言及がない場合、成熟型の１８〜２５塩基からなるマイクロＲＮＡをいう。
【００１９】
本明細書において「マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」とは、所期のマイクロＲＮＡを細胞内に導入し得る形態の組成物をいう。「マイクロＲＮＡを含む組成物」としては、一実施形態として、１本鎖又は２本鎖の成熟マイクロＲＮＡを直接細胞に導入するための組成物が挙げられ、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」としては、一実施形態として、マイクロＲＮＡ前駆体をコードするポリヌクレオチドが発現可能に連結されたベクターを含む組成物が挙げられる。マイクロＲＮＡ又はベクターを細胞内に導入する方法は、公知の方法を採用し得る。
【００２０】
本明細書において「細胞の生育の抑制」は、細胞の増殖の阻害及び細胞の死滅を含み、in vivo、in vitro、ex vivoにおける細胞の生育の抑制を含む。本明細書において「細胞」は、ヒト細胞及び非ヒト細胞を含みうるが、ヒト細胞が好ましい。
【００２１】
本明細書において「頭頸部がん」とは、脳と眼を除いた首から上にできるがんをいい、一般的に、口腔がん、鼻副鼻腔がん、口唇がん、咽頭がん、喉頭がん、頸部腫瘍、耳のがんを含む。また、本明細書において、口腔がんとは、一般に、歯肉、舌、頬部、口蓋、口底、唾液腺等の口腔を構成する部位の粘膜により発生するがんをいう。本明細書において「ヒトのがん」は、特に制限されず、例えば、頭頸部がん、悪性黒色腫、基底細胞がん、卵巣がん、乳がん、非小細胞肺がん、腎細胞がん、膀胱がん、再発性表在性膀胱がん、胃がん、前立腺がん、胆道がん、膵臓がん、肺がん、子宮頸がん、子宮頸部形成異常、喉頭乳頭腫症、結腸がん、結腸直腸がん、及びカルチノイド腫瘍を含む。
【００２２】
［ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物］
本発明は、一態様において、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう。）に関する。本発明の組成物の一実施形態において、マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される組成物に関する。データベース（miRBase、Release 17: April 2011）に登録されている前記マイクロＲＮＡ（成熟型）の配列を、それぞれ、下記表１の配列番号１〜１７に示す。
【００２３】
【表１】
2012161124.tif 000003
【００２４】
本発明の組成物が、「マイクロマイクロＲＮＡを含む組成物」の形態である場合、一実施形態として、上記表１のＲＮＡで表わされる成熟マイクロＲＮＡが１本鎖又は２本鎖の状態で含まれる。成熟マイクロＲＮＡが２本鎖の場合、頭頸部がん細胞の細胞生育抑制の点からは、前駆体がDicerに切断された後の状態を想定した２本鎖ＲＮＡ（すなわち、相補鎖との間にミスマッチを保ったよりネイティブ又はネイティブに近い２本鎖ＲＮＡ）とすることが好ましい。これらのマイクロＲＮＡは合成したものを使用できる。
【００２５】
本発明の組成物が、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物」の形態である場合、「細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系」の一実施形態として、ＲＮＡ前駆体又はその類似配列であって上記表１の成熟マイクロＲＮＡを発現するものを発現可能にコードするベクターを含む組成物があげられる。前記ＲＮＡ前駆体又はその類似配列を連結する発現ベクターは、公知のマイクロＲＮＡ発現用ベクターを使用してもよい。
【００２６】
本態様の組成物は、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制するための組成物であり、本態様の組成物が含有するマイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系をヒト頭頸部がん細胞に導入して使用する。前記導入は公知のトランスフェクション方法を採用して行える。前記導入は、in vivo、in vitro、ex vivoのいずれであってもよい。
【００２７】
［ヒト頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物］
本発明は、その他の態様において、ヒト頭頸部がんの治療又は予防のための医薬組成物であって、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含み、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される医薬組成物（以下、「本発明の医薬組成物」ともいう。）に関する。本明細書において、がんの予防は、がんの再発の予防を含む。
【００２８】
本発明の医薬組成物には、さらに、薬学的に許容されるキャリアを含んでもよい。前記薬学的キャリアとしては、特に制限されないが、例えば、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系が、標的の部位、組織、細胞等に侵入する効率を高めることができるキャリア、例えば、アテロコラーゲン、リポソーム、カチオンリポソーム等が挙げられる。本態様の医薬組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。本発明の医薬組成物の剤形は、公知のマイクロＲＮＡ及び／又はｓｉＲＮＡの補充剤の剤形を利用できる。
【００２９】
［ヒト頭頸部がん細胞の増殖抑制方法］
本発明の組成物によれば、ヒト頭頸部がん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、その他の態様として、本発明の組成物を対象のヒトがん細胞と接触させることを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。接触方法は特に制限されず、前記組成物中のマイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を対象とするがん細胞に導入できる方法が採用できる。マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系をがん細胞に導入する実施形態の一つとしてリポフェクション法が挙げられる。また、リポフェクション法及びその他の導入方法時における前記マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系の細胞への投与量としては、例えば、１０〜２５ｎＭが挙げられる。
【００３０】
［ヒトの頭頸部がんの治療及び又は予防方法］
本発明の医薬組成物によれば、ヒトの頭頸部がんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、その他の態様として、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含むがん細胞の生育を抑制する方法に関する。投与する組成物の剤形は、特に制限されず、例えば、注射剤、クリーム剤、軟膏、錠剤、懸濁剤等が挙げられる。また、投与方法も特に制限されず、例えば、注射、経口、局所、鼻内、直腸、静脈内、動脈内投与等が挙げられる。投与は、治療する病状の重症度と反応性、及び治療経過に依存する。最適な投薬スケジュールは、対象の体内への薬剤の蓄積量の測定値から計算することができる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的有効性によって異なりうる。一般的には、in vitro及びin vivo動物モデルで有効であることが分かったＥＣ５０に基づいて推定することができる。一般的には、用量は０．０１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。投与回数としては、１日、１週間、１月間又は１年間に１回又はそれ以上、又は２〜１０年間に１回投与するか、あるいは数時間〜数カ月間連続注入により投与することができる。投与の反復回数は、測定した体液又は組織中の薬剤濃度と滞留時間に基づいて推定することができる。治療の成功後、病状の再発を防ぐために対象は維持療法を受けることが望ましい場合もある。
【００３１】
［頭頸部がんマーカー］
本発明は、その他の態様として、上記表１の一部のマイクロＲＮＡからなる、体液試料中の頭頸部がんマーカー（以下、「本発明の頭頸部がんマーカー」ともいう。）に関する。本発明の頭頸部がんマーカーは、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択されるマイクロＲＮＡからなる。よって、本発明は、体液試料中のhsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択されるマイクロＲＮＡの使用であって、体液試料中の頭頸部がんマーカーとしての使用に関する。
【００３２】
前記「体液試料」としては、血液試料及び／又は唾液試料が挙げられる。前記「血液試料」としては、全血、血漿、血清が挙げられるが、頭頸部がんマーカーとしての機能を発揮しやすい点から、前記血液試料は血清が好ましい。本発明の頭頸部がんマーカーは、頭頸部がんの有無の指標となる。したがって、本発明は、さらにその他の態様において、頭頸部がんの有無を分析する方法であって、体液試料中のマイクロＲＮＡを検出し、その測定値を基準値と比較することを含み、前記マイクロＲＮＡは、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-124*、hsa-miR-206、hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192からなる群から選択される少なくとも１つである、頭頸部がんの有無の頭頸部がんの有無の分析方法に関する。
【００３３】
前記測定値は、分析対象体液試料中の前記マイクロＲＮＡの量又は濃度の測定値が挙げられ、絶対量であってもよく、相対的な値であってもよい。マイクロＲＮＡの量又は濃度の測定方法は、特に制限されず、例えば、定量ＰＣＲ法やＤＮＡマイクロアレイ法によって行うことができる。基準としては、予め健常者及び／又は頭頸部がん患者の各マイクロＲＮＡの量又は濃度を分析対象と同様に測定して得られた測定値を使用できる。
【００３４】
本発明の頭頸部がんマーカーにおいて、hsa-miR-1289、hsa-miR-876-5p、及びhsa-miR-1は、健常者の体液試料中には検出されず、頭頸部がん患者の体液試料中に検出されるタイプのマーカーである。このタイプのマーカーは、例えば、前記基準値として０を設定し、分析対象体液試料の測定値が前記基準値より高ければ、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。
【００３５】
本発明の頭頸部がんマーカーにおいて、hsa-miR-124*及びhsa-miR-206は、頭頸部がん患者の体液試料中には検出されず、健常者の体液試料中に検出されるタイプのマーカーである。このタイプのマーカーは、例えば、前記基準値として０又は検出限界以下を設定し、分析対象体液試料の測定値が前記基準値と同じであれば、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。
【００３６】
本発明の頭頸部がんマーカーにおいて、hsa-miR-892b、hsa-miR-124、hsa-miR-193b*、sa-miR-192*、及びhsa-miR-192は、健常者及び頭頸部がん患者の双方で検出されるが、その測定値に優位な差があるタイプのマーカーである。
【００３７】
前記マーカーのうち、hsa-miR-892b及びhsa-miR-124は、頭頸部がん患者の体液試料中で健常者に比べてその測定値が増加するマーカーである。このタイプのマーカーは、例えば、前記基準値として健常者及び頭頸部がん患者の体液試料の測定値を設定し、分析対象体液試料の測定値が健常者の測定値よりも頭頸部がん患者の測定値に近い又はそれ以上であれば、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。あるいは、測定対象個体の従前の測定値を基準値とし、分析対象体液試料の測定値が前記基準値よりも高くなれば（例えば、１．２倍以上、好ましくは１．３倍以上、より好ましくは１．４倍以上）、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。
【００３８】
hsa-miR-193b*、hsa-miR-192*、及びhsa-miR-192は、健常者の体液試料中で頭頸部がん患者に比べてその測定値が増加する。このタイプのマーカーは、例えば、前記基準値として健常者及び頭頸部がん患者の体液試料の測定値を設定し、分析対象体液試料の測定値が健常者の測定値よりも頭頸部がん患者の測定値に近い又はそれ以下であれば、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。あるいは、測定対象個体の従前の測定値を基準値とし、分析対象体液試料の測定値が前記基準値よりも低くなれば（例えば、０．８倍以下、好ましくは０．７倍以下、より好ましくは０．６倍以下）、頭頸部がんが存在する可能性があると判定できる。
【００３９】
［頭頸部がんの判定又は診断キット］
本発明は、さらにその他の態様として、本発明の頭頸部がんマーカーを検出するための試薬を含む頭頸部がんの判定又は診断キット（以下、「本発明の判定又は診断キット」ともいう。）に関する。本発明の判定又は診断キットは、例えば、公知のマイクロアレイ法や定量ＰＣＲ法を採用しうる。
【００４０】
マイクロアレイ法としては、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡの発現量を測定することが可能である限り特に制限されないが、体液試料から抽出したＲＮＡをラベル（好ましくは蛍光ラベル）で標識し、そのＲＮＡを、同定対象とするマイクロＲＮＡに相補的な核酸配列からなるポリヌクレオチド（好ましくはＤＮＡ）又はその一部からなるプローブが固定されたマイクロアレイに接触させてハイブリダイゼーションを行った後、マイクロアレイを洗浄して、マイクロアレイ上に残ったマイクロＲＮＡの発現量を測定する方法を例示することができる。
【００４１】
上記の核酸配列のヌクレオチドの種類としては、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡに特異的にハイブリダイズし得る限り特に制限されないが、安定性が高いことからＤＮＡであることが好ましい。また、上記のポリヌクレオチドの一部の長さとしては、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡに特異的にハイブリダイズし得る限り特に制限されないが、ハイブリダイゼーションの安定性を確保する観点から、１０〜１００ｍｅｒであることが好ましく、１０〜４０ｍｅｒであることがより好ましい。なお、上記のポリヌクレオチド又はその一部は、当該技術分野において周知の方法を用いて化学合成等することにより得ることができる。
【００４２】
上記のポリヌクレオチド又はその一部を固定するアレイとしては特に制限されないが、ガラス基板やシリコン基板等を好適に例示することができ、ガラス基板をより好適に例示することができる。上記のポリヌクレオチド又はその一部をアレイに固定する方法としては特に制限されず、公知の方法を用いることができる。
【００４３】
また、本発明の判定又は診断キットには、前述のマイクロアレイの他に、例えばＲＮＡのラベル化反応に用いる試薬、ハイブリダイゼーション反応に用いる試薬、洗浄に用いる試薬、組織からのＲＮＡ抽出に用いる試薬等の、マイクロアレイ法に用いる試薬などの任意の要素をさらに含んでいてもよい。
【００４４】
定量ＰＣＲ法としては、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡの配列を増幅し得るプライマーセットを用いる方法であり、かつ、前記マイクロＲＮＡの発現量を測定することが可能である限り特に制限されず、アガロース電気泳動法、ＳＹＢＲグリーン法、蛍光プローブ法等の通常の定量ＰＣＲ法を用いることができるが、定量の精度や信頼性の点で、蛍光プローブ法が最も好ましい。
【００４５】
定量ＰＣＲ法におけるプライマーセットとは、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡの配列を増幅し得るプライマー（ポリヌクレオチド）の組合せを意味する。上記プライマーとしては、本件マイクロＲＮＡの配列を増幅し得る限り特に制限されないが、本発明の頭頸部がんマーカーであるマイクロＲＮＡの配列の５’側の一部の配列からなるプライマー（フォワードプライマー）と、そのマイクロＲＮＡの配列の３’側の一部の配列に相補的な配列からなるプライマー（リバースプライマー）とからなるプライマーセットを例示することができる。
【００４６】
上記の蛍光プローブとしては、本件マイクロＲＮＡの配列に相補的な核酸配列からなるポリヌクレオチド又はその一部を含んでいる限り特に制限されず、TaqMan（登録商標）プローブ法（ＦＲＥＴ原理を利用したものも含む）や、サイクリングプローブ法に用いうる蛍光プローブを好適に例示することができ、特にTaqMan（登録商標）プローブ法（ＦＲＥＴ原理を利用したものも含む）に用いうる蛍光プローブをより好適に例示することができる。
【００４７】
上記プライマーセットや、上記の蛍光プローブは、その配列情報に基づき当該技術分野において周知の方法を用いて化学合成等することにより得ることができる。上記のプライマーセットや蛍光プローブを用いた定量ＰＣＲの具体的な方法としては、TaqMan（登録商標）マイクロＲＮＡ Assays（Applied Biosystems社製）を、添付のプロトコールにしたがって使用する方法を好適に例示することができる。また、プライマーセットと蛍光プローブとを備えた本発明の頭頸部腫瘍の判定キットには、前述のプライマーセットの他に、例えばポリメラーゼ等の定量ＰＣＲ反応に用いる試薬などの任意の要素をさらに含んでいてもよい。
【００４８】
［ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物］
本発明は、さらにその他の態様において、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物（以下、「本発明の第２の組成物」ともいう。）に関する。
【００４９】
生育を抑制する対象のがんは、一実施形態において、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択されるヒトのがんである。本発明の第２の組成物に含まれうるマイクロＲＮＡは、その他の実施形態において、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される。本発明の第２の組成物は、さらにその他の実施形態において、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択されるマイクロＲＮＡまたは細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む、ヒト肺がん細胞、ヒト膵臓がん細胞、及びヒト前立腺がん細胞からなる群から選択されるヒトがん細胞の生育を抑制するための組成物に関する。
【００５０】
［ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物］
本発明は、さらにその他の態様において、マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む医薬組成物であって、前記マイクロＲＮＡが、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、hsa-miR-661、hsa-miR-193b*、hsa-miR-671-5p、hsa-miR-124*、hsa-miR-1908、hsa-miR-876-5p、hsa-miR-192*、hsa-miR-124、hsa-miR-760、hsa-miR-192、hsa-miR-206、hsa-miR-629、hsa-miR-1、hsa-miR-708*、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される、ヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物（以下、「本発明の第２の医薬組成物」ともいう。）に関する。
【００５１】
治療又は予防の対象となるヒトのがんは、一実施形態において、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される。本発明の第２の医薬組成物に含まれうるマイクロＲＮＡは、一実施形態において、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択される。本発明の第２の医薬組成物は、さらにその他の実施形態において、hsa-miR-1289、hsa-miR-892b、及びhsa-miR-629*からなる群から選択されるマイクロＲＮＡまたは細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む、ヒト肺がん、ヒト膵臓がん、及びヒト前立腺がんからなる群から選択されるヒトのがん治療又は予防のための医薬組成物である。
【００５２】
［ヒトがん細胞の増殖抑制方法、ヒトのがん細胞の治療及び予防方法］
本発明の第２の組成物によれば、ヒトのがん細胞の生育を抑制できる。したがって、本発明は、さらにその他の態様において、本発明の第２の組成物をヒトがん細胞に接触させることを含む、ヒトがん細胞の生育を抑制する方法に関する。また、本発明の第２の医薬組成物によれば、ヒトのがんの治療や予防が可能となる。したがって、本発明は、さらにその他の態様として、本発明の第２の医薬組成物を対象に投与することを含む、ヒトのがんの治療又は予防方法に関する。これらの態様の本発明の方法における一実施形態において、前記がんが、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択される。
【実施例】
【００５３】
１．ヒト頭頸部がん細胞の増殖を阻害するTS-miRの同定
合成miRNA libraryを用いて下記２種類のヒト頭頸部がん細胞株にマイクロＲＮＡを導入し、ヒト頭頸部がん細胞の増殖阻害に関して網羅的に解析した。具体的には下記の条件で行った。【００５４】
〔使用した細胞株〕
ヒト口腔扁平上皮がん細胞株ＳＡＳ及びヒト唾液腺がん細胞株ＡＣＣＭにgreen fluorescent protein（GFP）遺伝子を導入して分離樹立したＧＦＰ安定発現株GFP-SAS及びGFP-ACCMを使用した。これら細胞株の培養には、１０％牛胎児血清（FBS、Biosource International社製）、１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン、１００Ｕ／ｍｌ ペニシリン、及び０．２５ｍｇ／ｍｌ アンホテリシンＢ（Invitrogen社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）若しくはRPMI1640培地（Sigma-Aldrich社製）を増殖培養液として用い、空気中に５％の割合で炭酸ガスを含む培養器内で、３７℃にて行った。【００５５】
〔合成miRNA libraryを用いた網羅的機能解析〕
９６ウェルプラスチックプレート（商品名：BD Falcon、BD社製）の各ウェルに、ヒト頭頸部がん細胞株GFP-SAS又はGFP-ACCMを２ｘ１０３個含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１６０μｌと１０００種類のヒト合成マイクロＲＮＡ（商品名：Synthetic microRNA Library-Human v13.0、Hokkaido System Science社製）各４ｐｍｏｌ及びRNAiMAX （Invitrogen社製）０．４μｌを含む Opti-MEM（Invitrogen社製）４０μｌとを混合して加えた。８０時間培養した後、各ウェルのＧＦＰ蛍光強度をWallac ARVO MX 1420 Multilabel Counter（PerkinElmer社製）にて測定し、つづいてCell Counting Kit-8（Dojindo社製）を用いて細胞数を定量した。【００５６】
上記の合成miRNA libraryを用いた網羅的機能解析により、ヒト口腔扁平上皮がん細胞GFP-SASにおいて７０％以上の増殖抑制率を示す１６種類、ヒト唾液腺がん細胞GFP-ACCMにおいて５０％以上の増殖抑制率を示す２種類のTS-miRを同定した。その結果を、図１及び下記表２に示す。なお、図１及び表２におけるhas-miR-193a-3pは、非特許文献２において頭頸部がんのTS-miRであることが示唆されたマイクロＲＮＡである。【００５７】
【表２】
2012161124.tif 000004
【００５８】
〔ヒト血清中のTS-miRの発現量解析〕
未治療の頭頸部がん患者１０名と健常者１０名より血清０．５ｍｌを採取し、各検体よりmiRNAを抽出し、上記表２中のTS-miRの発現量について、マイクロアレイ解析を行った。その結果を下記表３に示す。なお、下記表３において数値は、相対シグナル強度を示す。【００５９】
【表３】
2012161124.tif 000005
【００６０】
上記表３に示すとおり、頭頸部がん患者及び健常者由来血清を用いたTS-miRの発現解析により、頭頸部がん患者のみに検出される３種類のTS-miR、健常者のみに検出される２種類のTS-miR、及び、両群間において有意な発現量の変動を認める５種類のTS-miR（頭頸部がん患者で増加する２種類、及び、健常者で増加する３種類）を同定した。【００６１】
２．TS-miR導入による種々のがん細胞に対する増殖阻害の確認
下記表４に示す８種類のヒトがん細胞株に、hsa-miR-629*、hsa-miR-1289又はhsa-miR-892bを導入し、各ヒトがん細胞の増殖阻害効果を検討した。細胞株は、下記表４に示す８種類の細胞株を用いた以外は、上記１．の〔使用した細胞株〕と同様に細胞株を準備した。また、ヒトがん細胞の増殖の解析は、上記３種類のTS-miR、及び細胞株を用いた以外は、上記１．の〔ヒトがん細胞の増殖の解析〕と同様に行った。その結果を図３から５に示す。【００６２】
【表４】
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【００６３】
図３から５は、表４に示すヒトがん細胞に対するTS-miRによる増殖への影響を示すグラフの一例であって、図３はhsa-miR-629*のグラフ、図４はhsa-miR-1289のグラフ、図５はhsa-miR-892bのグラフを示す。図３から５に示すように、表４に示す種々のヒトがん細胞の増殖が、hsa-miR-629*、hsa-miR-1289及びhsa-miR-892bによって抑制された。また、hsa-miR-629*及びhsa-miR-1289は、ヒト膵がん細胞MIAPaca2、ヒト肺扁平上皮がん細胞EBC-1、ヒト肺腺がん細胞A549-57、及びヒト前立腺がん細胞PC-3,LNCaPにおいて４０％以上の増殖抑制率を示し、特に、hsa-miR-629*は、ヒト肺腺がん細胞A549-57、及びヒト前立腺がん細胞PC-3において７０％以上の増殖抑制率を示し、hsa-miR-1289は、ヒト肺扁平上皮がん細胞EBC-1において７０％以上の増殖抑制率を示した。hsa-miR-892bは、ヒト膵がん細胞MIAPaca2、ヒト肺扁平上皮がん細胞EBC-1、ヒト肺腺がん細胞A549-57、及びヒト前立腺がん細胞PC-3,LNCaPにおいて３０％以上の増殖抑制率を示し、特にヒト膵がん細胞MIAPaca2及びヒト前立腺がん細胞PC-3において６０％以上の増殖抑制率を示した。【００６４】
３.ヒト頭頸部がん組織におけるhsa-miR-1289の発現の解析
未治療の口腔扁平上皮がん患者及び唾液腺がん患者からそれぞれがん組織を採取し、各検体よりmiRNAを抽出し、hsa-miR-1289の発現量についてマイクロアレイ解析を行った。口腔扁平上皮がん組織は、ステージI、II、III、及びIVの口腔扁平上皮がん患者からそれぞれ採取し（計１１名）、唾液腺がん組織は、唾液腺がん患者５名から採取した。また、健常者から口腔粘膜組織を採取し、同様にhsa-miR-1289の発現についてマイクロアレイ解析を行った。その結果を図６に示す。図６は、ヒト頭頸部がん組織におけるhsa-miR-1289の発現を示すグラフの一例であって、図６Ａは各ステージの口腔扁平上皮がん組織におけるhsa-miR-1289の発現を示し、図６Ｂは、唾液腺がん組織におけるhsa-miR-1289の発現を示す。図６Ａ及びＢにおいて、TS-miRの発現は、RNU6Bの発現を内部コントロールとした相対値として示す。【００６５】
図６Ａ及びＢに示すように、hsa-miR-1289の発現は、正常口腔粘膜組織と比較して口腔扁平上皮がん組織及び唾液腺がん組織において、ステージに関わりなく明らかに低下している傾向が認められた。したがって、hsa-miR-1289の発現が低下している症例では、hsa-miR-1289の補充療法が有効である可能性が示唆された。【００６６】
４.ヒト頭頸部がん組織におけるhsa-miR-892bの発現の解析
未治療の口腔扁平上皮がん患者及び唾液腺がん患者からそれぞれがん組織を採取し、各検体よりmiRNAを抽出し、hsa-miR-892bの発現についてマイクロアレイ解析を行った。口腔扁平上皮がん組織は、ステージI、II、III、及びIVの口腔扁平上皮がん患者からそれぞれ採取し（計１１名）、唾液腺がん組織は、唾液腺がん患者５名から採取した。また、健常者から口腔粘膜組織を採取し、同様にhsa-miR-892bの発現についてマイクロアレイ解析を行った。その結果を図７に示す。図７は、ヒト頭頸部がん組織におけるhsa-miR-892bの発現を示すグラフの一例であって、図７Ａは各ステージの口腔扁平上皮がん組織におけるhsa-miR-892bの発現を示し、図７Ｂは、唾液腺がん組織におけるhsa-miR-892bの発現を示す。図７Ａ及びＢにおいて、TS-miRの発現は、RNU6Bの発現を内部コントロールとした相対値として示す。【００６７】
図７Ａ及びＢに示すように、hsa-miR-892bの発現は、正常口腔粘膜組織と比較して口腔扁平上皮がん組織及び唾液腺がん組織において明らかに低下している症例が認められた。特に、口腔扁平上皮がん組織では、１つの症例を除くすべての症例においてステージに関わりなくhsa-miR-892bの発現が著明に低下していた。これらのことから、hsa-miR-892bの発現が低下している症例では、hsa-miR-892bの補充療法が有効である可能性が示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明は、頭頸部がんに関する医薬開発、頭頸部がんの医療分野、頭頸部がんの研究分野等において有用である。
【配列表フリーテキスト】
【００６９】
配列番号１−１８：miRBase（Release 17: April 2011）に登録されている成熟miRNAの配列
【図１】
2012161124.tif 000007
【図２】
2012161124.tif 000008
【図３】
2012161124.tif 000009
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2012161124.tif 000013
【配列表】
2012161124000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年6月24日(2013.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
頭頸部がん、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択されるヒトのがん細胞の生育を抑制するための組成物であって、
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含み、前記マイクロＲＮＡが、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８９、ｈｓａ−ｍｉＲ−８９２ｂ、及びｈｓａ−ｍｉＲ−６２９＊からなる群から選択される、組成物。
【請求項２】
頭頸部がん、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択されるヒトのがんの治療又は予防のための医薬組成物であって、
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含み、前記マイクロＲＮＡが、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８９、ｈｓａ−ｍｉＲ−８９２ｂ、及びｈｓａ−ｍｉＲ−６２９＊からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項３】
頭頸部がん、肺がん、膵臓がん、及び前立腺がんからなる群から選択されるヒトのがん細胞の生育を抑制する方法であって、
マイクロＲＮＡ又は細胞内でマイクロＲＮＡを発現可能な発現系を含む組成物を前記がん細胞に接触させることを含み、前記マイクロＲＮＡが、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８９、ｈｓａ−ｍｉＲ−８９２ｂ、及びｈｓａ−ｍｉＲ−６２９＊からなる群から選択される、方法。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
頭頸部がんの有無を分析する方法であって、
体液試料中のマイクロＲＮＡを検出し、その測定値を基準値と比較することを含み、
前記マイクロＲＮＡは、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８９、ｈｓａ−ｍｉＲ−８７６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２４＊、及びｈｓａ−ｍｉＲ−２０６からなる群から選択される少なくとも１つであり、
前記ｈｓａ−ｍｉＲ−１２８９、ｈｓａ−ｍｉＲ−８７６−５ｐ、及びｈｓａ−ｍｉＲ−１の場合、前記体液試料の測定値が基準値である０より高ければ、頭頸部がんが存在する可能性があると判定し、
前記ｈｓａ−ｍｉＲ−１２４＊、及びｈｓａ−ｍｉＲ−２０６の場合、前記体液試料の測定値が基準値である０又は検出限界以下と同じであれば、頭頸部がんが存在する可能性があると判定する、分析方法。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
（削除）
【請求項１３】
（削除）
【請求項１４】
（削除）
【請求項１５】
頭頸部がんの有無を分析する方法であって、
体液試料中のマイクロＲＮＡを検出し、その測定値を基準値と比較することを含み、
前記マイクロＲＮＡは、ｈｓａ−ｍｉＲ−１、及びｈｓａ−ｍｉＲ−２０６からなる群から選択される少なくとも１つであり、
前記ｈｓａ−ｍｉＲ−１の場合、前記体液試料の測定値が基準値である０より高ければ、頭頸部がんが存在する可能性があると判定し、
前記ｈｓａ−ｍｉＲ−２０６の場合、前記体液試料の測定値が基準値である０又は検出限界以下と同じであれば、頭頸部がんが存在する可能性があると判定する、分析方法。
【国際調査報告】
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