(57)【要約】（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であり、かつ保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であり、かつ保存効力を有することを特徴とするブロムフェナク水性液剤組成物。
【請求項２】
（ａ）ブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲が、０．０１％以上１０％以下である請求項１記載の水性液剤組成物。
【請求項３】
（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が、０．０００７５％以上０．００３％以下である請求項１または２に記載の水性液剤組成物。
【請求項４】
さらに、（ｃ）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種を含有する請求項１〜３のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項５】
非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種の総和の濃度が０．０００１％以上５％以下である請求項４に記載の水性液剤組成物。
【請求項６】
非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、非イオン性界面活性剤である請求項４または５に記載の水性液剤組成物。
【請求項７】
非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である請求項４〜６のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項８】
非イオン性界面活性剤の濃度が０．０２５％以上０．２５％未満である請求項４〜７のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項９】
非イオン性界面活性剤の濃度が０．０５％以上０．２５％未満である請求項４〜８のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項１０】
非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、水溶性高分子である請求項４または５に記載の水性液剤組成物。
【請求項１１】
水溶性高分子がヒドロキシエチルセルロースおよびポビドンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項４、５および１０のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項１２】
水溶性高分子の濃度が０．０１％以上１．４％以下である請求項４、５、１０および１１のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項１３】
該水性液剤組成物が、点眼液、点鼻液および点耳液のいずれかである請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項１４】
ブロムフェナクまたはその塩と、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とを組み合わせることによって、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物に保存効力を付与する方法。
【請求項１５】
水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加することにより、該水溶液の保存効力を増強させることを特徴とする保存効力増強方法。
【請求項１６】
保存効力を増強させることが、S.aureusの生菌数を減少させることである請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低濃度の塩化ベンザルコニウムを含有する基剤を用いた、保存効力を有し、かつ安定なブロムフェナク水性液剤組成物に関する。また、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤組成物とブロムフェナクを組み合わせることで保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物を調製する方法に関する。本発明はさらに、水溶液の保存効力を増強させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に（マルチドーズの）水性液剤組成物には保存剤が不可欠である。その代表的なものとして塩化ベンザルコニウムが挙げられるが、塩化ベンザルコニウムを含む点眼液を頻回点眼したり、角膜に傷がある人や、ドライアイ症状等を示す涙液の動態が正常でない人に点眼したりすると、副作用が発生し、角膜に障害をきたすといわれている（非特許文献１および２）。このため、点眼液等においては、塩化ベンザルコニウムの添加濃度は低く設定することが望ましい。点眼液に添加される塩化ベンザルコニウムの濃度は、保存効力および安全性の面から、０．００２％〜０．００５％添加が望ましいとされている（非特許文献２）。塩化ベンザルコニウムが０．００１％および０．００５％添加されたブロムフェナク水性液剤組成物は知られている（特許文献１〜７）。しかし、それらの組成物の保存効力については知られていない。【０００３】
ブロムフェナク（化学名は２−アミノ−３−（４−ブロモベンゾイル）フェニル酢酸）は非ステロイド性抗炎症剤の１種であるが、保存効力に対する効果については知られていない。
一方、塩化ベンザルコニウムは陽イオン性界面活性剤であり、上述したように局所用水性液剤の保存剤として汎用されており、特に点眼液に添加される塩化ベンザルコニウムの濃度は、０．００２％〜０．００５％添加が望ましいとされているが、塩化ベンザルコニウムは、水性基剤中に含有される他の物質の影響で保存剤としての効力が低下することがある。例えば、水性液剤に添加される非イオン性界面活性剤の量が多いと、塩化ベンザルコニウムの保存効果が損なわれる（特許文献８）。また、塩化ベンザルコニウムが水性液剤中の他の物質と複合体を形成し、その保存効果が損なわれることも知られており、特に、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と塩化ベンザルコニウムのような４級アンモニウム塩は複合体を形成し、保存効力が低下することが報告されている（特許文献９および１０）。【０００４】
ブロムフェナクと保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有基剤を組み合わせることにより、十分な保存効力を有し、かつ安定であるブロムフェナク水性液剤組成物は、未だ報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１０−２７９４８１号公報（米国特許５９４２５０８号）
【特許文献２】特開平１０−２７９５０３号公報（米国特許６２７４５９２号）
【特許文献３】再表２００４／０６４８２８号公報（米国公開２００５／２３９８９５号公報）
【特許文献４】再表２００５／０４６７００号公報（米国特許７８２９５４４号）
【特許文献５】再表２００６／０４９２５０号公報（米国公開２００７／０２１５０７号公報）
【特許文献６】特許第２６８３６７６号（米国特許４９１０２２５号）
【特許文献７】中国特許公開  １０１３１３８９９号公報
【特許文献８】特開平１０−１０９９３０号公報
【特許文献９】特開平２−２８６６２７号公報（米国特許５４１４０１１号）
【特許文献１０】特許２９５４３５６（国際公開ＷＯ９６／１４８２９号公報）
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】眼科  ３１  ４３〜４８頁、１９８９（発行所  金原出版株式会社）
【非特許文献２】眼科  ３３  ５３３〜５３８頁、１９９１（発行所  金原出版株式会社）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、上記課題に鑑み、ブロムフェナクと保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とを組み合わせることにより、保存効力を有し、かつ安定なブロムフェナク水性液剤組成物を提供すること、およびブロムフェナクと保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とを組み合わせることで、保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物を調製する方法を提供することである。本発明はさらに、点眼液等に用いられる水溶液の保存効力を増強させる方法を提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、上記課題に鑑み、鋭意研究した結果、ブロムフェナクナトリウム含有の水性液剤組成物の基剤として、ブロムフェナクナトリウムと、最大０．００５％塩化ベンザルコニウムを含有しているにも関わらず保存効力が不十分な水性基剤組成物を組み合わせることで、保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物が調製できることを見出した。また、前記保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有の水性基剤組成物であっても、ブロムフェナクナトリウムを組み合わせることにより、保存効力を有する水性液剤組成物が調製できる方法を見出した。【０００９】
上述したように、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と４級アンモニウム塩は複合体を形成するため、これらを組み合わせると保存効力が低下することが知られている。ブロムフェナクは非ステロイド性抗炎症剤であり、塩化ベンザルコニウムは４級アンモニウム塩であることから、これらを組み合わせることにより保存効力が低下することが予測されうるが、予想外にも、各々単独では保存効力が不十分である濃度のブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムを組み合わせた結果、特に緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）に対する保存効力を顕著に増強でき、水性液剤組成物に保存効力を付与することができた。得られたブロムフェナク水性液剤組成物は、安定性にも優れるものであった。【００１０】
本発明者らはまた、（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを組み合わせて用いることにより、塩化ベンザルコニウムの添加量を最小限としても保存効力を有する水性液剤組成物を調製することができることを見出し、塩化ベンザルコニウムを含有するブロムフェナク水性液剤組成物の副作用を低減することができることを見出した。【００１１】
本発明者らはさらに、水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加することにより、該水溶液における菌の増殖を抑制することができることを見出した。このように水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加すると、該水溶液の保存効力を増強できることから、保存剤の配合量が少なくても細菌等の増殖を抑制することができ、安全性にも優れる水溶液剤組成物等とすることができる。
本発明者らは、上記知見に基づきさらに研究を重ね、本発明を完成させた。【００１２】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（１７）に関する。
（１）（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であり、かつ保存効力を有することを特徴とするブロムフェナク水性液剤組成物。
（２）（ａ）ブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲が、０．０１％以上１０％以下である前記（１）記載の水性液剤組成物。
（３）（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が、０．０００７５％以上０．００３％以下である前記（１）または（２）に記載の水性液剤組成物。
（４）さらに、（ｃ）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種を含有する前記（１）〜（３）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（５）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種の総和の濃度が０．０００１％以上５％以下である前記（４）に記載の水性液剤組成物。
（６）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、非イオン性界面活性剤である前記（４）または（５）に記載の水性液剤組成物。
（７）非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である前記（４）〜（６）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（８）非イオン性界面活性剤の濃度が０．０２５％以上０．２５％未満である前記（４）〜（７）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（９）非イオン性界面活性剤の濃度が０．０２５％以上０．１５％以下である前記（４）〜（８）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（１０）非イオン性界面活性剤の濃度が０．０５％以上０．２５％未満である前記（４）〜（８）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（１１）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、水溶性高分子である前記（４）または（５）に記載の水性液剤組成物。
（１２）水溶性高分子がヒドロキシエチルセルロースおよびポビドンからなる群より選択される少なくとも１種である前記（４）、（５）および（１１）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（１３）水溶性高分子の濃度が０．０１％以上１．４％以下である前記（４）、（５）、（１１）および（１２）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（１４）該水性液剤組成物が、点眼液、点鼻液および点耳液のいずれかである前記（１）〜（１３）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（１５）ブロムフェナクまたはその塩と、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とを組み合わせることによって、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物に保存効力を付与する方法。
（１６）水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加することにより、該水溶液の保存効力を増強させることを特徴とする保存効力増強方法。
（１７）保存効力を増強させることが、Staphylococcus aureus(S.aureus)の生菌数を減少させることである前記（１６）に記載の方法。【００１３】
また、本発明は、以下の（Ａ１）〜（Ａ１０）にも関する。
（Ａ１）（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であるブロムフェナク水性液剤組成物。
（Ａ２）（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００２％より低い濃度である前記（Ａ１）に記載の水性液剤組成物。
（Ａ３）保存効力を有するものである、前記（Ａ１）または（Ａ２）に記載の水性液剤組成物。
（Ａ４）（ａ）ブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲が、０．０１％以上１０％以下である前記（Ａ１）〜（Ａ３）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（Ａ５）（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が、０．０００７５％以上０．００１５％以下である前記（Ａ１）〜（Ａ４）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（Ａ６）さらに、（ｃ）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種を含有する前記（Ａ１）〜（Ａ５）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（Ａ７）非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である前記（Ａ６）に記載の水性液剤組成物。
（Ａ８）非イオン性界面活性剤の濃度が、０．００１％以上５％以下である前記（Ａ６）または（Ａ７）に記載の水性液剤組成物。
（Ａ９）該水性液剤組成物が、点眼液、点鼻液および点耳液のいずれかである前記（Ａ１）〜（Ａ８）のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
（Ａ１０）ブロムフェナクまたはその塩と、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とを組み合わせることによって、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物に保存効力を付与する方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、塩化ベンザルコニウム添加量を最小限としても、保存効力を有し、かつ安定なブロムフェナク水性液剤組成物を得ることができる。本発明によれば、ブロムフェナクと、保存効力が不十分なまたは低濃度の塩化ベンザルコニウムを含有する水性基剤とを組み合わせることによって、保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物を提供することが可能になった。該ブロムフェナク水性液剤組成物は、米国薬局方（ＵＳＰ）３２に規定される"Microbiological tests"の＜５１＞ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS TESTING (保存効力試験）に適合する保存効力も有する。従って本発明によれば、副作用が少なく安全で、しかも安定なブロムフェナク水性液剤組成物を提供することができる。【００１５】
また、本発明によれば、水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加することにより、該水溶液の保存効力を増強できる。このため本発明によれば、保存剤の配合量が少なくても水溶液において細菌等の増殖を抑制することができ、安全性にも優れる水溶液剤組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
定義
本明細書において、特記しない限り、「保存効力試験」とは第十五改正日本薬局方に規定の方法を指す。
すなわち、試験菌として、細菌として、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、大腸菌（Escherichia coli）および緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）を用い、真菌として、カンジタ菌（Candida albicans）、および黒麹かび（Aspergillus brasiliensis(niger)）を用い、以下の(i)〜(iv)の操作を行う方法である。
【００１７】
(i) 試験に用いる上記５種の菌株をそれぞれカンテン斜面培地の表面に接種して前培養する。前培養用のカンテン培地としては、細菌の場合はソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を、真菌の場合はサブロー・ブドウ糖カンテン培地を用いる。細菌の場合は30〜35℃で18〜24時間、Candida albicansは20〜25℃で40〜48時間、Aspergillus brasiliensis(niger) は20〜25℃で1週間又は十分な胞子が形成されるまで前培養する。
(ii)試験に供する水性液剤組成物を検体とし、該検体を１０ｍＬずつ５本の滅菌済みの共栓付試験管に分注し、(i)の試験菌を１０５〜１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるよう接種した混合試料を調製後、２０〜２５℃で遮光保存する。なお、試験菌は混合せず、それぞれ単独に検体に接種する。(iii)保存開始から１週、２週及び４週保存後に各混合試料から１ｍＬをサンプリングし、その液を生理食塩水９ｍＬで希釈する。さらに同様の希釈を２−３回行い、各希釈液１ｍＬを滅菌シャーレに分注する。(iv)次に、細菌にはレシチン０．１％  ポリソルベート８０  ０．７％添加ソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地、真菌にはレシチン０．１％  ポリソルベート８０  ０．７％添加サブロー・ブドウ糖カンテン培地を加えて混釈し、下記の条件で培養後、生成したコロニー数を測定し、混合試料１ｍＬ当たりの理論菌数を算出する。
細菌の培養条件：３０〜３５℃で約３日〜５日
真菌の培養条件：２０〜２５℃で約５日
【００１８】
上記(i)〜(iv)の操作後、混合溶液中の上記全ての細菌（黄色ブドウ球菌、大腸菌および緑膿菌）の生菌数が保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少し、かつ２８日後に１４日後のレベルと同等若しくはそれ以下にとどまっており、かつ、混合溶液中の上記全ての真菌の生菌数が１４日後と２８日後で接種菌数と同レベル若しくはそれ以下にとどまっていた場合、「保存効力を有する」と判定する。また上記細菌および真菌のうち１種でも上記判定基準を満たさない場合は、「保存効力が不十分である」と判定する。
【００１９】
また、米国薬局方（ＵＳＰ）３２に規定される"Microbiological tests"の＜５１＞ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS TESTING (保存効力試験）では、上記(i)〜(iv)の操作後、（１）混合溶液中の上記全ての細菌（黄色ブドウ球菌、大腸菌および緑膿菌）の生菌数が、保存７日後に接種菌数の１０％以下に減少し、かつ保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少し、かつ２８日後に１４日後の菌数より増加しない、かつ（２）混合溶液中の真菌の生菌数が７日後、１４日後と２８日後で接種菌数より増加しない場合、「保存効力を有する」と判定する。また上記細菌および真菌のうち１種でも上記判定基準を満たさない場合は、「保存効力が不十分である」と判定する。
【００２０】
「安定な」とは、例えば、少なくとも１年以上の、保存期間中に、性状に変化が見られず、かつ保存効力を有し続けることを意味する。
【００２１】
本明細書中、水性液剤組成物が「保存効力を有する」とは、上記日本薬局方または米国薬局方（ＵＳＰ）に規定された保存効力試験において「保存効力を有する」と判定されることを意味する。水性液剤組成物が「保存効力が不十分である」とは、上記保存効力試験において「保存効力が不十分である」と判定されることを意味する。また、「保存効力」と「防腐効力」の語は同義に用いられ、「保存剤」と「防腐剤」の語は同義に用いられる。
【００２２】
本明細書中で、特に言及しない限り、「水性基剤」とは水を媒体として、１種以上の添加物が加えられた水溶液を指し、「水性液剤」は水性基剤に１種以上の薬理活性成分が添加された液剤を指す。
【００２３】
本明細書中で、特に言及しない限り、「低濃度」とは０．０００５％より高く０．００５％より低い濃度を指す。
本明細書中、特に言及しない限り、％はｗ／ｖ％（ｇ／１００ｍＬ）を意味するものとする。
【００２４】
本明細書中で、前記のとおり、他の物質の影響で保存剤としての効力が低下し、上記日本薬局方または米国薬局方（ＵＳＰ）に規定された保存効力試験において「保存効力が不十分である」と判定された塩化ベンザルコニウム含有水性基剤を「保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤」と記載する。
【００２５】
本明細書中で、「保存効力を付与する方法」とは、それぞれ単独では保存効力が不十分である組成物および／または基剤を組み合わせることによって、保存効力を有する組成物にする方法を意味する。
【００２６】
本発明は、ブロムフェナクおよび低濃度の塩化ベンザルコニウムを含有するブロムフェナク水性液剤組成物を提供する。本発明のブロムフェナク水性液剤組成物は、保存効力を有するものである。
本発明の保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物は、（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度である。
【００２７】
本発明の水性液剤組成物に添加されるブロムフェナクの塩としては、薬学的に許容されるものであれば、特に制限されない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩などが挙げられ、それらはいずれも本発明の目的に反しないかぎり、いずれも適宜に使用することができる。なお、これらの化合物は、合成の条件、再結晶の条件等によっては、水和物として得られることがあるが、これらの形であっても、本発明において特に不都合なく使用することができる。好ましいブロムフェナクの塩は、ナトリウム塩である。
【００２８】
本発明の水性液剤組成物中のブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲は、通常約０．００１％以上約１０％以下、好ましくは約０．０１％以上約１０％以下、より好ましくは約０．０１％以上約１％以下、さらに好ましくは約０．０２％以上約０．１５％以下、特に好ましくは約０．０２％以上約０．１％以下である。
また、本発明の別の好ましい態様においては、ブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲は、好ましくは約０．０５％以上約０．１５％以下である。
【００２９】
ブロムフェナクおよびその薬理学的に許容できる塩は、例えば、特開昭５２−２３０５２号公報（対応ＵＳ特許４，０４５，５７６号）記載の方法またはそれに準じた方法（例えばＦＤＡ Ｄｒｕｇ Ｍａｓｔｅｒ Ｆｉｌｅ ＃１６４１４など）により適宜製造することができる。ブロムフェナクおよびその薬理学的に許容できる塩は、合成の条件、再結晶の条件などにより、通常それらの水和物として得られる。水和物としては例えば１／２水和物、１水和物、３／２水和物などが例示されるが、３／２水和物が好ましい。
【００３０】
本明細書中、塩化ベンザルコニウムの用語はベンザルコニウム塩化物と同じ意味で用いられる。
通常用いられる塩化ベンザルコニウムは、示性式［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌで示され、前記示性式中のアルキル基ＲがＣ８Ｈ１７〜Ｃ１８Ｈ３７である化合物の混合物で、日本、米国および欧州の薬局方にもその旨の記載がなされている。以下に、塩化ベンザルコニウムに関する日本、米国および欧州の薬局方を記載する。
日本薬局方：［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌで示され、ＲはＣ８Ｈ１７〜Ｃ１８Ｈ３７で、主としてＣ１２Ｈ２５及びＣ１４Ｈ２９からなる。
アメリカ薬局方：［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌの塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物で、ＲはＣ８Ｈ１７より長鎖の全てまたはいくつかのアルキル基の混合を表し、大部分はＣ１２Ｈ２５、Ｃ１４Ｈ２９およびＣ１６Ｈ３３で構成される。
ヨーロッパ薬局方：塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物で、アルキル基はＣ８からＣ１８の鎖長を有する。
【００３１】
本明細書中で「塩化ベンザルコニウム」とは、通常、上記のごとく混合物である塩化ベンザルコニウムを示す。
また、炭素数を特定したときの炭素数とは、上記薬局方において「Ｒ」で表されるアルキル基の炭素鎖の長さを示す。
【００３２】
本発明の水性液剤組成物中の添加される塩化ベンザルコニウムは、前記示性式［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌにおいてアルキル基ＲがＣ８Ｈ１７〜Ｃ１８Ｈ３７のうちの１種であって良く、それらの混合物であっても良い。好ましくは、主としてＣ１２Ｈ２５及びＣ１４Ｈ２９からなる混合物であり、さらに好ましくは前記示性式において、Ｒが、Ｃ１２Ｈ２５である化合物が約８０〜８５％かつ（Ｃ１２Ｈ２５である化合物＋Ｃ１４Ｈ２９である化合物）が約９８％以上含まれる混合物である。
【００３３】
本発明の水性液剤組成物中の塩化ベンザルコニウムの濃度範囲の下限は、通常約０．０００５％より高く、好ましくは約０．０００６％、より好ましくは約０．０００７％、さらに好ましくは約０．０００７５％、特に好ましくは約０．０００８％、最も好ましくは約０．００１％である。その上限は、通常約０．００５％より低く、好ましくは約０．００４％、より好ましくは約０．００３％、さらに好ましくは約０．００２％、特に好ましくは約０．００１５％、最も好ましくは約０．００１％である。塩化ベンザルコニウムが上記濃度範囲であっても、ブロムフェナクまたはその塩と組み合わせることにより、保存効力を有する水性液剤組成物を得ることができる。
【００３４】
本発明の水性液剤組成物中に配合しうる塩化ベンザルコニウムの濃度範囲は、通常約０．０００５％より高く約０．００５％より低く、好ましくは約０．０００７５％以上約０．００３％以下、さらに好ましくは約０．００１％以上約０．００２％以下である。
【００３５】
本発明の水性液剤組成物は、（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウムを含有し、前記（ｂ）の濃度範囲が０．０００５％より高い濃度であることから、保存効力を有するものである。このため、塩化ベンザルコニウム以外の保存剤を含有しなくてもよいが、所望により、さらに追加の保存剤を含有してもよい。
追加の保存剤として、塩化ベンザルコニウムのほかに、例えば、クロロヘキシジン塩、塩化ベンゼトニウム、パラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロルメタキシレノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、クロロブタノール、ホウ酸、エデト酸ナトリウム等の１種または２種以上を用いても良い。追加の保存剤の配合量は、本発明の効果を奏することになる限り特に限定されず、適宜設定することができる。
【００３６】
本発明の水性液剤組成物には、さらに界面活性作用を有する化合物を配合することができる。界面活性作用を有する化合物としては、非イオン性界面活性剤、水溶性高分子等が挙げられる。さらに、非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種を含有する水性液剤組成物は、本発明の好ましい実施態様の１つである。中でも、非イオン性界面活性剤を含有することがより好ましい。
【００３７】
本発明の水性液剤組成物に配合しうる非イオン性界面活性剤および水溶性高分子の濃度の総和は、通常約０．０００１％以上約５％以下（約０．０００１〜５％）、好ましくは約０．０１％以上約３％以下、より好ましくは約０．０１％以上約１．４％以下、さらに好ましくは約０．０２５％以上約０．２５％未満、特に好ましくは約０．０２５％以上約０．１５％以下、最も好ましくは約０．０５％以上約０．１５％以下である。
本発明の別の好ましい態様においては、非イオン性界面活性剤および水溶性高分子の濃度の総和は、さらに好ましくは約０．０５％以上約０．３％以下である。
【００３８】
本発明の水性液剤組成物に配合しうる非イオン性界面活性剤として、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類、アルキルアリールポリエーテルアルコール型ポリマー、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールまたはショ糖脂肪酸エステル等が挙げられる。好ましくはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類；チロキサポール等のアルキルアリールポリエーテルアルコール型ポリマー；ステアリン酸ポリオキシル類等のポリオキシエチレン脂肪酸エステル類等が挙げられる。中でも、さらに好ましくはポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、チロキサポールおよびステアリン酸ポリオキシル４０等であり、特に好ましくはポリソルベート８０である。これらは、１種のみ使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。水性液剤組成物中に添加される非イオン性界面活性剤の濃度の下限は、通常約０．００１％であり、好ましくは約０．００５％、より好ましくは約０．０１％、さらに好ましくは約０．０５％、特に好ましくは約０．１％である。該非イオン性界面活性剤の濃度の上限は、通常約５％であり、好ましくは約２％、より好ましくは約１％、さらに好ましくは約０．５％、さらにより好ましくは約０．４％、特に好ましくは約０．３％、特に好ましくは約０．２５％未満、特に好ましくは約０．２％、最も好ましくは約０．１５％以下である。
【００３９】
本発明の水性液剤組成物に配合しうる非イオン性界面活性剤の濃度は、好ましくは約０．００１％以上約５％以下であり、より好ましくは約０．０１％以上約１％以下であり、さらに好ましくは約０．０１％以上約０．２５％未満であり、さらに好ましくは約０．０２５％以上約０．２５％未満、特に好ましくは約０．０２５％以上約０．１５％以下、最も好ましくは約０．１％以上約０．１５％以下である。
また、本発明の別の好ましい態様においては、非イオン性界面活性剤の濃度は、好ましくは約０．０５％以上約０．２５％未満であり、特に好ましくは約０．１％以上０．２％以下である。
【００４０】
本発明の水性液剤組成物に配合しうる水溶性高分子には、ポビドン（ポリビニルピロリドン）、ポリビニルアルコールなどのビニル系高分子；ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース系高分子；およびそれらの塩等が挙げられ、好ましくはポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびそれらの塩等である。これらは、１種のみ使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。例えばビニル系高分子の場合、下限値が通常約０．０００１％で用いられ、下限値は好ましくは約０．０００５％、より好ましくは約０．００１％、さらに好ましくは約０．００５％、さらに好ましくは約０．０１％、さらに好ましくは約０．０５％、さらにより好ましくは約０．１％、特に好ましくは約０．５％、最も好ましくは約１％で用いられる。ビニル系高分子の場合、上限値は通常約５％で用いられ、好ましくは約３％、より好ましくは約２％、さらに好ましくは約１．５％、特に好ましくは約１．５％未満、最も好ましくは約１．４％である。例えば、セルロース系高分子の場合、下限値が通常約０．０００１％で用いられ、下限値は好ましくは約０．０００５％、より好ましくは約０．００１％、さらに好ましくは約０．００５％、さらにより好ましくは約０．０１％、特に好ましくは約０．０５％、最も好ましくは約０．１％である。セルロース系高分子の場合、上限値は通常約５％で用いられ、好ましくは約３％、さらに好ましくは約２％、さらに好ましくは約１％、さらに好ましくは約０．５％未満、さらに好ましくは約０．３％、特に好ましくは約０．２％である。
【００４１】
本発明の水性液剤組成物中に配合しうる水溶性高分子の濃度範囲は、通常約０．０００１％以上約５％以下であり、好ましくは約０．０１％以上約３％以下、さらに好ましくは約０．０５％以上約１．５％未満、さらに好ましくは約０．０５％以上約１．４％以下、最も好ましくは約０．０５％以上約０．３％以下である。また、別の好ましい態様においては、水溶性高分子の濃度範囲は、好ましくは約０．０１％以上約１．４％以下である。特に、ビニル系高分子の場合の濃度範囲は、通常約０．０００１％以上約５％以下、好ましくは約０．０１％以上約３％以下、さらに好ましくは約０．１％以上約１．５％未満、最も好ましくは約１％以上約１．４％以下である。セルロース系高分子の場合の濃度範囲は、通常約０．０００１％以上約５％以下、好ましくは約０．０１％以上約３％以下、さらに好ましくは約０．０５％以上約０．５％未満、最も好ましくは約０．０５％以上約０．３％以下である。
【００４２】
本発明の水性液剤組成物は、発明の効果を損なわない範囲であれば、その用途や形態に応じて、他の活性成分および／または添加物を適宜選択し、その１種またはそれ以上を組み合わせて含有していてもよい。該他の活性成分および添加物の配合割合については、適宜設定すればよい。
【００４３】
前記他の活性成分としては、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗アレルギー剤、消炎剤、非ステロイド消炎剤、抗生物質、サルファ剤、合成ペニシリン、緑内障治療剤、白内障治療剤、縮瞳剤、散瞳剤、局所収斂剤、血管収縮剤、眼圧上昇防止剤、高眼圧症治療剤、表面麻酔剤、α１−遮断剤、β−遮断剤、β１−遮断剤、炭酸脱水素酵素阻害剤、局所用選択Ｈ１−ブロッカー、副腎皮質ホルモン、ビタミンＢ１２、補酵素型ビタミンＢ２、抗コリンエストラーゼ剤、有機ヨウ素製剤などが挙げられる。
【００４４】
添加物として、例えば、半固形剤、液剤などの調製に一般的に使用される担体（水、水性溶媒、水性または油性基剤など）、増粘剤、糖類、界面活性剤、保存剤、殺菌剤または抗菌剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、香料または清涼化剤、キレート剤、緩衝剤、などが挙げられる。
【００４５】
本発明の水性液剤組成物のｐＨは、生体に許容される範囲内であって、該保存剤の効果が損なわれないことを限度として、特に制限されないが、通常約３．５〜９、好ましくは約７〜８．５である。
【００４６】
本発明の水性液剤組成物の調製方法は特に限定されず、上述した（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、および（ｂ）塩化ベンザルコニウム、並びに必要に応じて添加される（ｃ）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種等の所定量を水または緩衝液に溶解させることにより調製される。各成分を水に溶解後に、塩酸または水酸化ナトリウム等を用いて溶液のｐＨを上記範囲に調整することが好ましい。各成分の混合順序、混合方法等は特に限定されず、公知の調製法により各成分を水または緩衝液に溶解させればよい。水性液剤組成物の調製に使用される水は、医薬上、薬学的に又は生理学的に許容されるものであればよい。例えば、蒸留水、精製水、注射用水、注射用蒸留水等を用いることができる。緩衝液は特に限定されず、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等が挙げられる。
【００４７】
本発明のブロムフェナク水性液剤組成物は、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であり、（ｂ）塩化ベンザルコニウム単独では保存効力が不十分な濃度であるにもかかわらず、（ａ）ブロムフェナクまたはその塩と組み合わせることにより、保存効力を有するものである。本発明のブロムフェナク水性液剤組成物は、特に、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）を効果的に減少させることができるものである。ブロムフェナク水性液剤組成物の保存効力の有無の確認は、上述の保存効力試験により実施することができる。
【００４８】
本発明の水性液剤組成物は、懸濁液、乳液、ゲルまたは水溶液のいずれであっても良いが、水溶液であることが好ましい。
【００４９】
本発明の水性液剤組成物は、内服液剤、注射剤、外用剤、点眼剤及び耳鼻科用剤等として使用することができる。耳鼻科用剤としては、点鼻剤が好ましい。中でも、本発明の水性液剤組成物は、点眼液、点鼻液および点耳液のいずれかであることが好ましい。より好ましくは、点眼液である。本発明の水性組成物は、ユニットドーズ型、フィルター付き容器、マルチドーズ型等の容器に充填させて用いることができるが、保存効力を有することから、マルチドーズ型容器に充填させて好適に用いることができる。
【００５０】
本発明の水性液剤組成物は、例えば、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなどの哺乳動物に好適に使用される。
【００５１】
本発明の水性液剤組成物は、例えば点眼液として、眼科局所投与用炎症性疾患治療剤として用いられる。例えば術後炎症、強膜炎、眼瞼炎、麦粒腫、結膜炎、角膜炎、涙のう炎、ドライアイなどの治療に好適に用いられる。また、滲出型ＡＭＤ（加齢黄斑変性症）、糖尿病網膜症、糖尿病黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症などの網膜障害の治療などに用いることができる。水性液剤組成物の投与量は、通常、１回１〜２滴程度を１日１〜６回程度点眼すればよい。なお、適応症状の程度などにより、適宜投与回数を増減する。
【００５２】
本発明の水性液剤組成物を点鼻液とする場合には、例えば急性鼻炎、急性副鼻腔炎、副鼻腔炎（蓄膿症）などの治療に好適に用いられる。水性液剤組成物を点鼻液とする場合、その投与量は、通常、１回１〜２滴程度を１日１〜６回程度点鼻すればよい。
【００５３】
本発明の水性液剤組成物は、点耳液として、例えば外耳道真珠腫（症）、急性外耳炎、外耳の軟骨膜炎、外耳道蜂巣炎、耳介蜂巣炎、悪性外耳炎、壊死性外耳炎、緑膿菌性外耳炎、びまん性外耳炎、その他の感染性外耳炎または急性中耳炎などの治療に好適に用いられる。水性液剤組成物を点耳液とする場合、その投与量は、通常、１回１〜２滴程度を１日１〜６回程度点耳すればよい。
【００５４】
また、本発明は、ブロムフェナクまたはその塩と、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤を組み合わせることによって、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物に保存効力を付与する方法も包含する。
【００５５】
保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤とは、例えば、塩化ベンザルコニウムを、通常約０．０００５％より高く、かつ約０．０１％より低い濃度含有し、さらに塩化ベンザルコニウムの保存効果を低下させる作用を有する非イオン性界面活性剤等の化合物を含有する水性基剤である。本発明においては、このような保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤にブロムフェナクを組み合わせることにより、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物に保存効力を付与することができる。本発明により得られる水性液剤組成物は、ブロムフェナクまたはその塩、及び塩化ベンザルコニウムを含有し、かつ保存効力を有するものである。
【００５６】
ブロムフェナクまたはその塩と、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤を組み合わせる際に、各成分の混合順序、混合方法等は特に限定されず、公知の調製法により各成分を水または緩衝液に溶解させればよい。例えば、保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤を調製し、該基剤にブロムフェナクまたはその塩を添加してもよく、ブロムフェナクまたはその塩を含む水性液剤組成物に、所定量の塩化ベンザルコニウムを添加してもよい。また、ブロムフェナクまたはその塩、および塩化ベンザルコニウムの所定量を、上述した水または緩衝液に溶解させてもよい。保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤は、上述した界面活性作用を有する化合物、例えば非イオン性界面活性剤および／または水溶性高分子などを含むものであることが好ましい。非イオン性界面活性剤、水溶性高分子、および水性基剤中のこれらの好ましい濃度等は、上述した水性液剤組成物におけるものと同じである。
【００５７】
本発明の方法に適用されるブロムフェナクの塩としては、上述したブロムフェナク水性液剤組成物において用いられるものと同様であり、薬学的に許容されるものであれば、特に制限されない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩などが挙げられ、それらはいずれも本発明の目的に反しないかぎり、いずれも適宜に使用することができる。なお、これらの化合物は、合成の条件、再結晶の条件等によっては、水和物として得られることがあるが、これらの形であっても、本発明において特に不都合なく使用することができる。好ましいブロムフェナクの塩は、ナトリウム塩である。
【００５８】
本発明の方法において、ブロムフェナクまたはその塩は、最終生成物である水性液剤組成物に対して、通常約０．００１％以上約１０％以下、好ましくは約０．０１％以上約１０％以下、より好ましくは約０．０１％以上約１％以下、さらに好ましくは約０．０２％以上約０．１５％以下、最も好ましくは約０．０２％以上約０．１％以下の濃度範囲となるよう添加される。
【００５９】
また、別の好ましい態様では、ブロムフェナクまたはその塩は、最終生成物である水性液剤組成物に対して、通常、約０．００１％以上約１０％以下、好ましくは約０．０１％以上約１％以下、さらに好ましくは約０．０５％以上約０．１５％以下の濃度範囲となるよう添加される。
【００６０】
ブロムフェナクおよびその薬理学的に許容できる塩は、上述した方法により適宜製造することができる。ブロムフェナクおよびその薬理学的に許容できる塩は、合成の条件、再結晶の条件などにより、通常それらの水和物として得られる。水和物としては例えば１／２水和物、１水和物、３／２水和物などが例示されるが、３／２水和物が好ましい。
【００６１】
本発明の方法における塩化ベンザルコニウムおよびその好ましい態様は、上述した水性液剤組成物における塩化ベンザルコニウムおよびその好ましい態様と同様である。
上述したように、通常用いられる塩化ベンザルコニウム（示性式［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌ）は、通常、前記示性式中のアルキル基ＲがＣ８Ｈ１７〜Ｃ１８Ｈ３７である化合物の混合物で、日本、米国および欧州の薬局方にもその旨の記載がなされている。
【００６２】
本発明の方法における塩化ベンザルコニウムは、前記示性式［Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ］Ｃｌにおいてアルキル基ＲがＣ８Ｈ１７〜Ｃ１８Ｈ３７のうちの１種であって良く、それらの混合物であっても良い。好ましくは、主としてＣ１２Ｈ２５及びＣ１４Ｈ２９からなる混合物であり、さらに好ましくは前記示性式において、Ｒが、Ｃ１２Ｈ２５である化合物が約８０〜８５％かつ（Ｃ１２Ｈ２５である化合物＋Ｃ１４Ｈ２９である化合物）が約９８％以上含まれる混合物である。
【００６３】
本発明の方法において、本発明の水性液剤組成物に添加される塩化ベンザルコニウムの濃度範囲の下限は、通常約０．０００５％より高く、好ましくは約０．０００６％、より好ましくは約０．０００７％、さらに好ましくは約０．０００７５％、さらに好ましくは約０．０００８％であり、特に好ましくは約０．００１％である。その上限は、通常約０．０１％より低く、好ましくは約０．００５％、より好ましくは約０．００５％より低く、さらに好ましくは０．００４％、さらに好ましくは約０．００３％、さらに好ましくは約０．００２％、さらに好ましくは約０．００１５％、特に好ましくは約０．００１％である。
【００６４】
本発明の方法において、水性液剤組成物中に配合しうる塩化ベンザルコニウムの濃度範囲は、通常約０．０００５％より高く約０．００５％より低く、好ましくは約０．０００７５％以上約０．００３％以下、さらに好ましくは約０．００１％以上約０．００２％以下である。
【００６５】
本発明の方法においては、塩化ベンザルコニウムのほかに保存剤を使用しなくてもよいが、所望により追加の保存剤を使用してもよい。追加の保存剤として、塩化ベンザルコニウムのほかに、例えば、クロロヘキシジン塩、塩化ベンゼトニウム、パラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロルメタキシレノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、クロロブタノール、ホウ酸、エデト酸ナトリウム等の１種または２種以上を用いても良い。
【００６６】
本発明の方法においては、水性液剤組成物に、さらに界面活性作用を有する化合物配合することができる。界面活性作用を有する化合物としては、上述した非イオン性界面活性剤および水溶性高分子が挙げられる。好ましくは、非イオン性界面活性剤を添加する。
【００６７】
本発明の方法において配合しうる非イオン性界面活性剤および水溶性高分子の種類は前記のブロムフェナク水性液剤組成物に用いられるものと同様である。
また、これら界面活性作用を有する化合物を２種以上組み合わせて使用してもよい。添加される非イオン性界面活性剤および水溶性高分子の濃度は前記のとおりである。
【００６８】
本発明の方法において、本発明の効果を損なわない範囲であれば、その用途や形態に応じて、他の活性成分および／または添加物を適宜選択し、一種またはそれ以上を組み合わせて含有していてもよい。該活性成分または添加物の配合割合については、適宜設定すればよい。
【００６９】
該他の活性成分としては、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗アレルギー剤、消炎剤、非ステロイド消炎剤、抗生物質、サルファ剤、合成ペニシリン、緑内障治療剤、白内障治療剤、縮瞳剤、散瞳剤、局所収斂剤、血管収縮剤、眼圧上昇防止剤、高眼圧症治療剤、表面麻酔剤、α１−遮断剤、β−遮断剤、β１−遮断剤、炭酸脱水素酵素阻害剤、局所用選択Ｈ１−ブロッカー、副腎皮質ホルモン、ビタミンＢ１２、補酵素型ビタミンＢ２、抗コリンエストラーゼ剤、有機ヨウ素製剤などが挙げられる。
【００７０】
また、添加物として、例えば、半固形剤や液剤などの調製に一般的に使用される担体（水、水性溶媒、水性または油性基剤など）、増粘剤、糖類、界面活性剤、保存剤、殺菌剤または抗菌剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、香料または清涼化剤、キレート剤、緩衝剤、などが挙げられる。
【００７１】
本発明の方法におけるブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物のｐＨは、生体に許容される範囲内であって、該保存剤の効果が損なわれないことを限度として、特に制限されないが、通常３．５〜９程度、好ましくは７〜８．５程度である。
【００７２】
本発明の方法におけるブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物は、懸濁液、乳液、ゲルまたは水溶液のいずれであっても良いが、水溶液であることが好ましい。
【００７３】
本発明の方法によれば、（ｂ）塩化ベンザルコニウム単独では保存効力が不十分であるにもかかわらず、（ａ）ブロムフェナクまたはその塩を組み合わせることにより、保存効力を有する水性液剤組成物とすることができる。該水性液剤組成物は、特に、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）を効果的に減少させることができるものである。ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物の保存効力の有無の確認は、上述の保存効力試験により実施することができる。つまり、本発明の方法により、ブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物中の緑膿菌の生菌数を顕著に減少させることができる。特に、上述した第十五改正日本薬局方に規定された保存効力試験を実施した場合、緑膿菌の生菌数を、保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少させることができ、かつ２８日後に１４日後のレベルと同等若しくはそれ以下にとどまらせることができる。また、米国薬局方（ＵＳＰ）３２に規定される"Microbiological tests"の＜５１＞ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS TESTING (保存効力試験）において、保存７日後に接種菌数の１０％以下に減少させることができ、かつ保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少し、かつ２８日後に１４日後の菌数より増加させないものとできる。
このようなブロムフェナクまたはその塩を含有する水性液剤組成物は、塩化ベンザルコニウム濃度が低いことから、副作用が少なく安全性が高いものである。
本発明の方法により調製される水性液剤組成物の好ましい用途、使用方法等は、上述した保存効力を有するブロムフェナク水性液剤組成物と同様である。
【００７４】
本発明は、ブロムフェナクまたはその塩を水溶液に添加することにより、該水溶液の保存効力を増強させる方法も提供する。ブロムフェナクの塩として、上述した水性液剤組成物に使用されるものと同じものが挙げられる。
【００７５】
本明細書において、保存効力を増強するとは、少なくとも１種の細菌又は真菌の増殖を抑制する作用を高めること、および／または少なくとも１種の細菌又は真菌の生菌数を減少させる作用を高めることを指す。
【００７６】
本発明の方法によれば、ブロムフェナクまたはその塩を水溶液に添加することにより、添加しない場合と比較して、該水溶液の保存効力を増強することができる。このため本発明によれば、保存剤の配合量を低減しても、水溶液において細菌又は真菌の増殖を効果的に抑制できる、また、水溶液において細菌又は真菌の生菌数を効果的に減少させることができる。本発明の方法により保存効力が増強される水溶液は、所望により、上述した水性液剤組成物に配合される成分等を含んでいてもよい。本発明の方法は、水溶液が、例えば日本薬局方または米国薬局方（ＵＳＰ）の保存効力の基準を満たさず、保存効力が不十分な水溶液である場合に有利に用いることができる。さらに本発明の方法は、水溶液が保存剤を含有しているにもかかわらず、非イオン性界面活性剤や水溶性高分子などの添加物の影響により保存効力が低下した水溶液である場合等に好適に適用することができる。本発明の方法における水溶液として、例えば、日本薬局方または米国薬局方（ＵＳＰ）の保存効力の基準を満たさない、保存効力が不十分な水溶液が挙げられ、より好ましくは、保存剤を添加しているにもかかわらず保存効力が不十分な水溶液が挙げられ、より具体的には、例えば、該水溶液が、上述した保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤等である場合が好適である。
【００７７】
本発明の方法において、例えば、細菌又は真菌とは、Staphylococcus aureus 、Escherichia coli 、Pseudomonas aeruginosa等の細菌；Candida albicans、Aspergillus brasiliensis(niger)等の真菌が挙げられる。中でも、本発明の方法は、水溶液の細菌に対する増殖抑制効果、および／または細菌の生菌数を減少させる効果を増強するために好適に用いられる。特にStaphylococcus aureus（S.aureus）に対する増殖抑制効果および／または生菌数を減少させる効果は顕著である。本発明の方法の好ましい態様においては、ブロムフェナクまたはその塩を水溶液に添加することにより、水溶液のS.aureusの生菌数を減少させる。
【００７８】
本発明の方法は、例えば、保存剤の配合量を低減し、且つ十分な保存効果が望まれる点眼剤、内服液剤、注射剤、外用剤、耳鼻科用剤等の水性液剤組成物に好適に適用される。中でも、特に保存剤の種類等によっては白濁等の問題が生じる点眼剤等の水性液剤組成物において有用である。
【００７９】
本発明の保存効力の増強方法において、ブロムフェナクまたはその塩の添加量は、例えば、水溶液中約０．０２５％以上とすることが好ましい。また、ブロムフェナクまたはその塩の添加量の上限は、保存効力が増強される水溶液の用途等にもより適宜設定すればよいが、約１％程度とすることが好ましい。ブロムフェナクまたはその塩の添加量は、約０．０２５％以上約１％以下とすることが好ましく、約０．０５％以上約０．２％以下とすることがより好ましい。
【実施例】
【００８０】
以下に、実施例、試験例等に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。【００８１】
＜試験例１＞
０．１％のブロムフェナクナトリウムを含有させた水性液剤に０．０００５％〜０．００５％濃度の塩化ベンザルコニウムを添加したときの保存効力試験を実施した。【００８２】
１．試験操作
１．１  実施例１、２および比較例１〜７の検体の調製
下記表１に基づき、実施例１、２および比較例１〜７の検体（水性液剤組成物）を常法により調製した。【００８３】
【表１】
2012099142.tif 000002
【００８４】
なお、実施例１、２および比較例１〜７において、ブロムフェナクナトリウム水和物は、ＦＤＡ Ｄｒｕｇ Ｍａｓｔｅｒ Ｆｉｌｅ ＃１６４１４に従い製造されたものを用いた。
また、塩化ベンザルコニウムとして、日本製薬株式会社製の、〔Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ〕Ｃｌで表わされる化合物のＲが、Ｃ１２Ｈ２５である化合物が８０〜８５％、かつ（ＲがＣ１２Ｈ２５である化合物+ＲがＣ１４Ｈ２９である化合物）が９８％以上である、日局適合品を用いた。
塩化ベンザルコニウムは日本製薬社製の塩化ベンザルコニウム１０％液を、ポリソルベート８０は日油株式会社製、塩化ナトリウムはマナック株式会社製、リン酸水素ナトリウム水和物は和光純薬工業株式会社製、水酸化ナトリウムはナカライテスク株式会社製をそれぞれ用いた。【００８５】
１．２  操作方法
第十五改正日本薬局方に規定された保存効力試験を行い判定した。即ち、試験に用いる表２に示す５種の菌株をそれぞれカンテン斜面培地の表面に接種して前培養した。前培養用のカンテン培地としては、細菌の場合はソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を、真菌の場合はサブロー・ブドウ糖カンテン培地を用いた。細菌の場合は30〜35℃で18〜24時間、Candida albicansは20〜25℃で40〜48時間、Aspergillus brasiliensis(niger) は20〜25℃で1週間又は十分な胞子が形成されるまで前培養した。実施例１、２および比較例１〜７の検体を１０ｍＬずつ５本の滅菌済みの共栓付試験管に分注し、前培養した下記表２に示す試験菌を１０５〜１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるよう接種した混合試料を調製後、２０〜２５℃で遮光保存した。なお、試験菌は混合せず、それぞれ単独に各検体に接種した。保存開始から１週、２週及び４週保存後に各混合試料から１ｍＬをサンプリングし、その液を生理食塩水９ｍＬで希釈した。さらに同様の希釈を２−３回行い、各希釈液１ｍＬを滅菌シャーレに分注した。次に、細菌にはレシチン０．１％  ポリソルベート８０  ０．７％添加ソイビーン・カゼイン・ダイジェストカンテン培地を、真菌にはレシチン０．１％  ポリソルベート８０  ０．７％添加サブロー・ブドウ糖カンテン培地を加えて混釈し、下記表２に示す条件で培養後、生成したコロニー数を測定し、混合試料１ｍＬ当たりの理論菌数を算出した。【００８６】
【表２】
2012099142.tif 000003
【００８７】
１．３  判定基準
混合溶液中の細菌の生菌数が保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少し、かつ２８日後に１４日後のレベルと同等若しくはそれ以下にとどまっていた場合、その細菌に対して「保存効力がある」とした。
混合溶液中の真菌の生菌数が１４日後と２８日後で接種菌数と同レベル若しくはそれ以下にとどまっていた場合、その真菌に対して「保存効力がある」とした。
検体が、全ての試験菌株について保存効力がある場合、「保存効力を有する」と判定した。細菌および真菌のうち１種でも上記判定基準を満たさない菌があった検体は「保存効力が不十分である」とした。【００８８】
１．４  塩化ベンザルコニウム含量測定
１．４．１  試料溶液及び標準溶液の調製
検体２．５ｍＬを正確に量り、希釈液Ａ（メタノール・水混液（７：３（体積比）））を加えて正確に５ｍＬとし、試料溶液とした。別に塩化ベンザルコニウム液（１０ｗ／ｖ％）１ｍＬを正確に量り、希釈液Ａを加えて正確に１００ｍＬとした。この液１ｍＬを正確に量り、希釈液Ａを加えて正確に２００ｍＬとし、標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液１００μＬにつき、次の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行い、試料溶液中の塩化ベンザルコニウム(C12及びC14)のピーク面積AT(C12)、AT(C14)、及び標準溶液中の塩化ベンザルコニウム(C12及びC14)のピーク面積AS(C12)及びAS(C14)を求めた。試料溶液中の塩化ベンザルコニウム(C12及びC14)のピーク面積AT(C12)、AT(C14)、及び標準溶液中の塩化ベンザルコニウム(C12及びC14)のピーク面積AS(C12)及びAS(C14)から、下記式により、検体中の塩化ベンザルコニウム(C12及びC14)の量を求めた。塩化ベンザルコニウム(C12)とは、前記示性式において、Ｒが、Ｃ１２Ｈ２５である化合物を意味する。塩化ベンザルコニウム(C14)とは、前記示性式において、Ｃ１４Ｈ２９である化合物を意味する。【００８９】
【数１】
2012099142.tif 000004
【００９０】
１．４．２  塩化ベンザルコニウム含量測定用ＨＰＬＣ条件
（ＨＰＬＣ装置（島津製作所製））
システムコントローラ：ＣＢＭ−２０Ａ、ＳＣＬ−１０ＡＶＰ
送液ユニット：ＬＣ−２０ＡＤ、ＬＣ−１０ＡＤＶＰ
オンラインデガッサ：ＤＧＵ−２０Ａ３、ＤＧＵ−１４Ａ
ＵＶ−ＶＩＳ検出器：ＳＰＤ−２０Ａ、ＳＰＤ−１０Ａ、
ＳＰＤ１０ＡＶＶＰ
カラムオーブン：ＣＴＯ−２０ＡＣ、ＣＴＯ−１０ＡＣ、
ＣＴＯ１０ＡＣＶＰ
オートサンプラ：ＳＩＬ−２０ＡＣＨＴ、ＳＩＬ−２０ＡＣ、
ＳＩＬ−１０ＡＤＶＰ
（ＨＰＬＣ操作条件）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１４ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス管に５μｍ
の液体クロマトグラフィー用オクチルシリル化シリカゲル
を充填した市販カラムを用いた（ＹＭＣ社製、
製品名YMC-Pack C8 OC12S05-1546WT、
４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ）。
カラム温度：４０℃付近の一定温度
移動相：トリエチルアミン１５．２ｇを水９００ｍＬに溶かし、
リン酸を加えてｐＨを２．５に調整した。この液にメタ
ノール２１００ｍＬを加えよく混和した。メンブランフ
ィルター（Millipore社製、０．４５μｍ  ＨＶＬＰ、
４７ｍｍ）でろ過後、脱気した。必要量に応じて、適宜
調製量を調整した。
流量：塩化ベンザルコニウム（Ｃ１２）の保持時間が約９分になる
ように調整した。（１．０ｍＬ／ｍｉｎ）
インジェクター洗浄液：水・メタノール混液（１：１（体積比））
面積測定範囲：２５分
サンプルクーラー温度：２０℃【００９１】
１．５  ブロムフェナク含量測定
１．５．１  試料溶液及び標準溶液の調製
検体２ｍＬを正確に量り、希釈液Ｂ（０．０２ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二アンモニウム緩衝液（ｐＨ  ７．３）・アセトニトリル混液（７５：２５（体積比）））を加えて正確に２０ｍＬとし、試料溶液とした。別にブロムフェナクナトリウム水和物０．０２ｇを精密に量り、希釈液Ｂを加えて正確に２０ｍＬとした。この液２ｍＬを正確に量り、希釈液Ｂを加えて正確に２０ｍＬとし、標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液１０μＬにつき、次の条件で液体クロマトグラフ法により試験を行い、試料溶液中のブロムフェナクのピーク面積AT及び標準溶液中のブロムフェナクのピーク面積ASを求めた。試料溶液中のブロムフェナクのピーク面積AT及び標準溶液中のブロムフェナクのピーク面積ASから、下記式により、検体中のブロムフェナクの量を求めた。【００９２】
【数２】
2012099142.tif 000005
【００９３】
１．５．２  ブロムフェナク含量測定用ＨＰＬＣ条件
（ＨＰＬＣ装置（島津製作所製））
システムコントローラ：ＣＢＭ−２０Ａ、ＳＣＬ−１０ＡＶＰ
送液ユニット：ＬＣ−１０ＡＤ
オンラインデガッサ：ＤＧＵ−１２Ａ３、ＤＧＵ−２０Ａ３
ＵＶ−ＶＩＳ検出器：ＳＰＤ−１０Ａ
カラムオーブン：ＣＴＯ−１０ＡＣ
オートサンプラ：ＳＩＬ−１０ＡＣ/SAMPLE  COOLER
（ＨＰＬＣ操作条件）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２６６ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管に５μｍ
の液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカ
ゲルを充填した市販カラムを用いた（SHISEIDO社製、
製品名CAPCELL PAKC18,SG120 ５μｍ、４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ、５μｍ）。
カラム温度：４０℃付近の一定温度
移動相：リン酸水素二アンモニウム５．９４ｇを水２２５０ｍＬに
溶かし、リン酸を加えてｐＨを7.3に調整した。この液に
アセトニトリル７５０ｍＬを加えよく混和した。メンブラ
ンフィルター（Millipore社製、０．４５μｍ  ＨＶＬＰ、
４７ｍｍ）でろ過した。必要量に応じて、適宜調製量を
調整した。
流量：ブロムフェナクの保持時間が約１９分になるように調整し
た。（１．０ｍ  Ｌ／ｍｉｎ）
インジェクター洗浄液：水・アセトニトリル混液(３：１(体積比))
面積測定範囲：２２分
サンプルクーラー温度：室温（なりゆき温度）【００９４】
２．結果
各検体に、塩化ベンザルコニウム及びブロムフェナクナトリウム水和物が規定量含有されていることを確認した。各検体中の塩化ベンザルコニウム及びブロムフェナクナトリウム水和物の含量（対表示率）を表３中に示す。【００９５】
【表３】
2012099142.tif 000006
【００９６】
保存効力試験結果を下記表４〜１１に示す。表４〜１１中の数値は、生菌数（ｃｆｕ／ｍＬ）である。表５〜１１中の「＊」は、試験菌に対して保存効力が不十分であったことを意味する。保存効力試験での生菌数の結果は示さないが、実施例２の検体についても実施例１と同様に保存効力を有することが確認された。表１２に、表４〜１１の結果からの判定結果を示す。表１２中、「保存効力を有する」と判定された検体は、「○」で、「保存効力が不十分である」と判定された検体は、「×」で表わされる。保存効力試験の判定結果を表１２に示す。表１２中、「保存効力を有する」と判定された検体は、「○」で、「保存効力が不十分である」と判定された検体は、「×」で表わされる。【００９７】
【表４】
2012099142.tif 000007
【００９８】
【表５】
2012099142.tif 000008
【００９９】
【表６】
2012099142.tif 000009
【０１００】
【表７】
2012099142.tif 000010
【０１０１】
【表８】
2012099142.tif 000011
【０１０２】
【表９】
2012099142.tif 000012
【０１０３】
【表１０】
2012099142.tif 000013
【０１０４】
【表１１】
2012099142.tif 000014
【０１０５】
【表１２】
2012099142.tif 000015
【０１０６】
０．００１％塩化ベンザルコニウムおよび０．１％ブロムフェナクナトリウムを混在させた実施例１、および０．００５％塩化ベンザルコニウムおよび０．０２％ブロムフェナクナトリウムを混在させた実施例２は、日本薬局方の保存効力の基準を満たし、保存効力を有する水性液剤であった。
しかし、０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％及び０．００５％の塩化ベンザルコニウムを、０．１５％ポリソルベート８０を含有する水溶液に加えた比較例２〜６は日本薬局方の保存効力の基準を満たさず、保存効力が不十分であった。この結果は、保存効力が不十分な０．００１％〜０．００５％の塩化ベンザルコニウムと０．０２％〜０．１％のブロムフェナクを組み合わせることで保存効力の基準を満たす水性液剤が調製できることを示す。【０１０７】
特に、試験例１の比較例２〜６において、保存効力が不十分と判定された原因菌は緑膿菌であり、生菌数の減少が認められなかった。一方、０．１％ブロムフェナクナトリウムを添加した０．１５％ポリソルベート８０を含有する水溶液に０．０００５％塩化ベンザルコニウムを加えた比較例１も日本薬局方の保存効力の基準を満たさず、保存効力が不十分であった。不十分と判定された原因菌は緑膿菌であり、生菌数の減少が認められなかった。【０１０８】
このことから、本試験条件下では０．００１％の塩化ベンザルコニウムおよび０．１％ブロムフェナクナトリウムそれぞれ単独で添加された水性液剤では、緑膿菌に対して生菌数を減少させる効果がないにもかかわらず、０．００１％の塩化ベンザルコニウムおよび０．１％ブロムフェナクナトリウムを混在させた水性液剤では、日本薬局方の保存効力の基準を満たすに十分な緑膿菌の生菌数減少の効果がみられた。０．００５％の塩化ベンザルコニウムに０．０２％ブロムフェナクナトリウムを添加することでも日本薬局方の保存効力の基準を満たすに十分な緑膿菌の生菌数減少の効果がみられた。【０１０９】
また、実施例１の水性液剤組成物は米国微生物試験の規格、つまり、（１）混合溶液中の細菌の生菌数が保存７日後に接種菌数の１０％以下に減少し、かつ保存１４日後に接種菌数の０．１％以下に減少し、かつ２８日後に１４日後の菌数より増加しない、かつ（２）混合溶液中の真菌の生菌数が７日後、１４日後と２８日後で接種菌数より増加しない、を満たすことが確認された。【０１１０】
本試験結果は、ブロムフェナクを保存効力が不十分な塩化ベンザルコニウム含有水性基剤に添加すると、保存効力を有するブロムフェナク水性液剤が調製できることを示す。【０１１１】
また、本試験結果は、ブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムが水性液剤中で相乗的に保存効力を増強することをも示す。【０１１２】
＜試験例２＞
０．１％のブロムフェナクナトリウムと０．００１％の塩化ベンザルコニウムを含有する液剤において、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロースおよびポビドン（Ｋ−３０）が保存効力に及ぼす影響を確認した。
以下の試験例及び参考例において、検体の調製に使用したブロムフェナクナトリウム水和物、塩化ベンザルコニウム等は、実施例１、２および比較例１〜７で使用したものと同じである。【０１１３】
１．試験操作
１．１  実施例３〜７および比較例８〜１８の検体の調製
下記表１３、表１４および表１５に基づき、実施例３〜７および比較例８〜１８の検体（水性液剤組成物）を常法により調製した。ポビドンは、BASFジャパン社製日局適合品を使用した。【０１１４】
【表１３】
2012099142.tif 000016
【０１１５】
【表１４】
2012099142.tif 000017
【０１１６】
【表１５】
2012099142.tif 000018
【０１１７】
１．２  操作方法
実施例３〜７および比較例８〜１８の水性液剤組成物について、前記試験例１の１．２に記載の操作方法、および試験例１の１．３に記載の判定基準に従い、保存効力試験を行った。【０１１８】
２．結果
保存効力試験の判定結果を表１６および表１７に示す。表１６および表１７中、「保存効力を有する」と判定された検体は、「○」で、「保存効力が不十分である」と判定された検体は、「×」で表わされる。【０１１９】
【表１６】
2012099142.tif 000019
【０１２０】
【表１７】
2012099142.tif 000020
【０１２１】
０．００１％塩化ベンザルコニウム含有基剤は保存効力試験に適合するが（例えば比較例８）、０．００１％塩化ベンザルコニウムに０．０２５％以上のポリソルベート８０が溶液中に存在すれば保存効力の基準に適合しなかった（比較例１０〜１４）。しかし、０．０２５％以上０．２５％未満のポリソルベート８０を含有する液剤であっても、０．１％ブロムフェナクを配合することにより、日本薬局方の保存効力の基準に適合した（実施例４）。このことは基剤中にポリソルベート８０が配合されて保存効力が低下した場合でも、ブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムの配合により、保存効力が増強されたことを示す。【０１２２】
０．００１％塩化ベンザルコニウム含有基剤は保存効力試験に適合するが（例えば比較例８）、０．００１％塩化ベンザルコニウムに０．０５％以上のヒドロキシエチルセルロースが溶液中に存在すれば保存効力の基準に適合しなかった（比較例１６）。しかし、０．０５％以上から０．５％未満のヒドロキシエチルセルロースが添加されていても、０．１％ブロムフェナクを配合することにより、日本薬局方の保存効力の基準に適合した（実施例５および６）。このことは基剤中にヒドロキシエチルセルロースが配合されて保存効力が低下した場合でも、ブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムの配合により、保存効力が増強されたことを示す。また、ポピドン（Ｋ３０）を添加した基剤（比較例１８）を用いた場合でも、ブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムの配合により、保存効力が増強されたことが示された（実施例７）。【０１２３】
＜試験例３＞
ポリソルベート８０以外の非イオン性界面活性剤を含有させたときの、０．００１％塩化ベンザルコニウムを含有させたブロムフェナク液剤の保存効力について調べた。【０１２４】
１．試験操作
１．１  実施例８〜９の検体の調製
下記表１８に基づき、実施例８〜９および比較例１９の検体（水性液剤組成物）を常法により調製した。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０は、和光純薬社製のものを、ステアリン酸ポリオキシル４０は、日本サーファクタント工業社製日局適合品を使用した。【０１２５】
【表１８】
2012099142.tif 000021
【０１２６】
１．２  操作方法
実施例８〜９および比較例１９の水性液剤組成物について、前記試験例１の１．２に記載の操作方法、および試験例１の１．３に記載の判定基準に従い、保存効力試験を行った。【０１２７】
２．結果
保存効力試験の判定結果を表１９に示す。表１９中、「保存効力を有する」と判定された検体は、「○」で、「保存効力が不十分である」と判定された検体は、「×」で表わされる。【０１２８】
【表１９】
2012099142.tif 000022
【０１２９】
表１９より、ポリソルベート８０と同様、非イオン性界面活性剤であるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０およびステアリン酸ポリオキシルを用いた場合でも、保存効力に適合する０．００１％塩化ベンザルコニウムを含有させたブロムフェナク液剤組成物が調製できることが示された。【０１３０】
＜試験例４＞
１．試験操作
１．１  実施例１０〜１３の検体の調製
ブロムフェナクナトリウム  ４ｇを生理食塩水に溶解して全量２００ｍＬとした後、０．２２μｍフィルターでフィルター滅菌を行い、２ｗ／ｖ％ブロムフェナクナトリウム含有試料原液を調製した。この試料原液をさらにＭＨＢ培地（Muller-Hinton Broth (Difco社製)）で希釈して０．０１２５％、０．０２５％、０．０５％および０．２％のブロムフェナクナトリウム含有培地液を調製し、それぞれ実施例１０の検体、実施例１１の検体、実施例１２の検体および実施例１３の検体とした。なお、これらの検体はいずれも澄明であり、ｐＨは７．２、浸透圧はそれぞれ２８０ｍＯｓｍ（実施例１０）、２８１ｍＯｓｍ（実施例１１）、２８４ｍＯｓｍ（実施例１２）及び２９０ｍＯｓｍ（実施例１３）であった。【０１３１】
１．２  操作方法
丸底の９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）の各ｗｅｌｌに、それぞれ検体１００μＬとStaphylococcus aureus菌液５μＬを入れ（ｎ＝３）、数回ピペッティングして各検体の混合液を調製した。該混合液中にStaphylococcus aureus菌は約８．７×１０４ cfu / well含まれていた。該混合液を約３５℃で１８〜２４時間培養し、培養後に、各ｗｅｌｌ中の菌の増殖を観察した。なお、菌の沈殿物の有無、また、沈殿物の大きさを指標として評価した。【０１３２】
２．結果
培養後、０．０１２５％のブロムフェナクナトリウムを含有した実施例１０の検体では直径約１ｍｍを越える菌の沈殿物が、０．０２５％のブロムフェナクナトリウムを含有した実施例１１の検体では培養後、直径約１ｍｍ以下の菌の沈殿物が観察された。０．０５％のブロムフェナクナトリウムを含有した実施例１２の検体及び０．２％のブロムフェナクナトリウムを含有した実施例１３の検体では、いずれも菌の沈殿物は観察されなかった。この結果は、ブロムフェナクナトリウムの添加量を増加させるに従って、菌の沈殿物の直径は小さくなり、さらにブロムフェナクナトリウムの添加濃度を高くすると菌の沈殿物は観察されなくなることを示す。上記結果から、ブロムフェナクにより水溶液の保存効力を増強させることができ、特にStaphylococcus aureusの生菌数を減少させることができることが示された。【０１３３】
＜参考例１〜２＞
１．試験操作
１．１  参考例１〜２の検体の調製
下記表２０に基づき、参考例１〜２の検体（水性液剤組成物）を常法により調製した。ヒドロキシエチルセルロースは、和光純薬社製のものを使用した。【０１３４】
【表２０】
2012099142.tif 000023
【０１３５】
１．２  操作方法
参考例１〜２の水性液剤組成物について、前記試験例１の１．２に記載の操作方法、および試験例１の１．３に記載の判定基準に従い、保存効力試験を行った。【０１３６】
２．結果
保存効力試験の判定結果を表２１に示す。表２１中、「保存効力を有する」と判定された検体は、「○」で、「保存効力が不十分である」と判定された検体は、「×」で表わされる。【０１３７】
【表２１】
2012099142.tif 000024
【０１３８】
表２１から、０．１％ブロムフェナク、５％ヒドロキシエチルセルロース、２％ポリソルベート８０および亜硫酸ナトリウム２％を添加した参考例１の水性液剤組成物は、日本薬局方の保存効力の基準に適合するが、０．１％ブロムフェナク、５％ヒドロキシエチルセルロース、２％ポリソルベート８０を含有した参考例２の水性液剤組成物は日本薬局方の保存効力の基準に適合しなかった。参考例１の水性液剤組成物の保存効力の効果は、２％の亜硫酸ナトリウムの添加効果に基づくことを示すものである。【０１３９】
３．まとめ
本発明者らは０．００１％〜０．００５％塩化ベンザルコニウムが含有された水性基剤であっても、さらに一定量以上のポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、ポピドンを含有した水性基剤は保存効力が不十分であることを確認した。該水性基剤の保存効力が不十分であると判断されるに至った原因となった菌は緑膿菌であった。【０１４０】
一方、０．１％ブロムフェナクを含有したブロムフェナク／ポリソルベート８０水性液剤組成物でも保存効力が不十分であることを確認した。該水性液剤組成物の保存効力が不十分であると判断されるに至った原因となった菌も前記塩化ベンザルコニウム／ポリソルベート８０含有水性基剤と同じく緑膿菌であった。【０１４１】
このように、本発明者らは、０．００１％塩化ベンザルコニウムと、一定量以上のポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロースまたはポビドンのような界面活性剤や水溶性高分子を含有する水性基剤を調製したところ、各々単独では保存効力が不十分であったにもかかわらず、ブロムフェナク、塩化ベンザルコニウム、および界面活性剤または水溶性高分子を含有する水性液剤組成物は保存効力を有する液剤であることを見出した。【０１４２】
また、該ブロムフェナク、塩化ベンザルコニウム、および界面活性剤または水溶性高分子を含有する水性液剤組成物は、米国薬局方（ＵＳＰ）３２に規定される"Microbiological tests"の＜５１＞ANTIMICROBIAL EFFECTIVENESS TESTING (保存効力試験）に適合する保存効力を有することも確認した。【０１４３】
非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）と塩化ベンザルコニウムのような４級アンモニウム塩は複合体を形成し、保存効力が低下することも知られている。ブロムフェナクは非ステロイドであり、塩化ベンザルコニウムは４級アンモニウム塩であることから、保存効力が低下することが予測されうるが、意外にも、各々単独では保存効力が不十分である濃度のブロムフェナクと塩化ベンザルコニウムを組み合わせた結果、保存効力を有する水性液剤組成物を得ることができた。
【産業上の利用可能性】
【０１４４】
本発明によれば、副作用が少なく安全で、しかも安定なブロムフェナク水性液剤組成物を提供することができる。したがって、本発明の水溶液製剤は、医薬等の分野において有用であり、例えば点眼液、点鼻液、点耳液等として好適に用いられる。
【手続補正書】
【提出日】平成25年11月21日(2013.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ブロムフェナクまたはその塩、（ｂ）塩化ベンザルコニウム、および（ｃ）非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種を含有する水性液剤組成物であって、（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が０．０００５％より高く、かつ０．００５％より低い濃度であり、水性液剤組成物が非イオン性界面活性剤を含む場合には、非イオン性界面活性剤の濃度が０．０２５％以上０．２５％未満であり、水性液剤組成物が水溶性高分子を含む場合には、水溶性高分子の濃度が０．０１％以上１．４％以下であり、かつ保存効力を有することを特徴とするブロムフェナク水性液剤組成物。
【請求項２】
（ａ）ブロムフェナクまたはその塩の濃度範囲が、０．０５％以上０．１５％以下である請求項１記載の水性液剤組成物。
【請求項３】
（ｂ）塩化ベンザルコニウムの濃度範囲が、０．００１％以上０．００２％以下である請求項１または２に記載の水性液剤組成物。
【請求項４】
非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、非イオン性界面活性剤である請求項１〜３のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項５】
非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である請求項１〜４のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項６】
非イオン性界面活性剤の濃度が０．１％以上０．１５％以下である請求項１〜５のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項７】
非イオン性界面活性剤および水溶性高分子からなる群より選択される少なくとも１種が、水溶性高分子である請求項１〜３のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項８】
水溶性高分子がヒドロキシエチルセルロースおよびポビドンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項１〜３及び７のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項９】
該水性液剤組成物が、点眼液、点鼻液および点耳液のいずれかである請求項１〜８のいずれか一項に記載の水性液剤組成物。
【請求項１０】
水溶液にブロムフェナクまたはその塩を添加することにより、該水溶液の保存効力を増強させる方法であり、該水溶液は、（ａ）０．００１％以上０．００２％以下の塩化ベンザルコニウム、および（ｂ）０．０２５％以上０．２５％未満の非イオン性界面活性剤を含み、保存効力が不十分なものであることを特徴とする保存効力増強方法。
【請求項１１】
保存効力を増強させることが、緑膿菌の生菌数を減少させることである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
水溶液へのブロムフェナクまたはその塩の添加量が、０．０５％以上０．１５％以下である請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
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