(57)【要約】  個々の患者の治療反応性を判別できる抗がん剤感受性判定マーカー及びそれを利用する新たながん治療手段を提供する。  Ｎ−アセチルグルコサミン、アミノ酸代謝系上の物質、核酸代謝系上の物質、ペントースリン酸経路上の物質、解糖系上の物質、ＴＣＡ回路上の物質、ポリアミン代謝系上の物質並びにＬａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋及びそれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる１以上の物質からなる、抗がん剤感受性判定マーカー。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−アセチルグルコサミン、アミノ酸代謝系上の物質、核酸代謝系上の物質、ペントースリン酸経路上の物質、解糖系上の物質、ＴＣＡ回路上の物質、ポリアミン代謝系上の物質並びにＬａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋及びそれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる１以上の物質からなる、抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項２】
アミノ酸代謝系上の物質が、Ａｒｇ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌ−ｂｅｔａ−ａｌａｎｉｎｅ、Ｎ−アセチルアスパラギン酸、β−アラニン、オルニチン、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓｅｒ、３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ及びＣｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅから選ばれる１以上の物質である請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項３】
核酸代謝系上の物質が、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＩＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰ及びＡｄｅｎｏｓｉｎｅから選ばれる１以上の物質である請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項４】
ペントースリン酸経路上の物質が、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ及びＰＲＰＰから選ばれる１以上の物質である請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項５】
解糖系上の物質が、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ及びＰｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄから選ばれる１以上の物質である請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項６】
ＴＣＡ回路上の物質が、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄである請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項７】
ポリアミン代謝系上の物質が、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン及びＮ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅから選ばれる１以上の物質である請求項１記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項８】
抗がん剤が、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤から選ばれる抗がん剤である請求項１〜７のいずれか１項記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項９】
抗がん剤が、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれるものである請求項１〜７のいずれか１項記載の抗がん剤感受性判定マーカー。
【請求項１０】
検体中の請求項１〜７のいずれか１項記載の物質を測定することを特徴とする抗がん剤感受性の判定方法。
【請求項１１】
検体が、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項１０記載の判定方法。
【請求項１２】
検体が、抗がん剤を投与された、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項１０又は１１記載の判定方法。
【請求項１３】
抗がん剤が、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤から選ばれる抗がん剤である請求項１０〜１２のいずれか１項記載の判定方法。
【請求項１４】
抗がん剤が、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれるものである請求項１０〜１２のいずれか１項記載の判定方法。
【請求項１５】
検体中の請求項１〜７のいずれか１項記載の物質を測定するためのプロトコールを含むことを特徴とする請求項１０〜１４のいずれか１項記載の判定方法を実施するためのキット。
【請求項１６】
検体が、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項１５記載のキット。
【請求項１７】
検体が、抗がん剤を投与された、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項１５又は１６記載のキット。
【請求項１８】
抗がん剤が、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤から選ばれる抗がん剤である請求項１５〜１７のいずれか１項記載のキット。
【請求項１９】
抗がん剤が、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれるものである請求項１５〜１７のいずれか１項記載のキット。
【請求項２０】
請求項１〜７のいずれか１項記載の物質の発現変動を指標とする抗がん剤感受性亢進剤のスクリーニング方法。
【請求項２１】
抗がん剤が、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤から選ばれる抗がん剤である請求項２０記載のスクリーニング方法。
【請求項２２】
抗がん剤が、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれるものである請求項２０記載のスクリーニング方法。
【請求項２３】
請求項２０〜２２のいずれか１項記載の方法により得られた抗がん剤感受性亢進剤。
【請求項２４】
請求項２３記載の抗がん剤感受性亢進剤と、感受性亢進の対象となる抗がん剤とを組み合せてなるがん治療用組成物。
【請求項２５】
抗がん剤が、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤から選ばれる抗がん剤である請求項２４記載のがん治療用組成物。
【請求項２６】
抗がん剤が、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれるものである請求項２４記載のがん治療用組成物。
【請求項２７】
Ａｓｎ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ａｓｐ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、スペルミン、スペルミジン及びそれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる１以上の物質からなる、オキサリプラチン、フルオロウラシル及びそれらの塩から選ばれる抗がん剤の感受性判定マーカー。
【請求項２８】
検体中の請求項２７記載の物質を測定することを特徴とする抗がん剤感受性の判定方法。
【請求項２９】
検体が、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項２８記載の判定方法。
【請求項３０】
検体が、抗がん剤を投与された、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項２８又は２９記載の判定方法。
【請求項３１】
検体中の請求項２７記載の物質を測定するためのプロトコールを含むことを特徴とする請求項２８〜３０のいずれか１項記載の判定方法を実施するためのキット。
【請求項３２】
検体が、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
検体が、抗がん剤を投与された、がんを有する被験者由来の生体試料である請求項３１又は３２記載のキット。
【請求項３４】
請求項２７記載の物質の発現変動を指標とする抗がん剤感受性亢進剤のスクリーニング方法。
【請求項３５】
請求項３４記載の方法により得られた抗がん剤感受性亢進剤。
【請求項３６】
請求項３５記載の抗がん剤感受性亢進剤と、感受性亢進の対象となる抗がん剤とを組み合せてなるがん治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象となる患者のがんが、抗がん剤に治療反応性を有するか否かを判定するために用いる抗がん剤感受性判定マーカー及びその応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗がん剤には、アルキル化剤、白金製剤、代謝拮抗剤、抗がん性抗生物質、抗がん性植物アルカロイド等の種類がある。そしてこれらの抗がん剤にはがんの種類によって効果を示す場合と効果を示さない場合がある。しかし、有効であると認められている種類のがんであっても、個々の患者によって効果を示す場合と効果を示さない場合があることが知られている。このような個々の患者のがんに対して抗がん剤が効果を示すか否かを抗がん剤感受性という。【０００３】
オキサリプラチン（ＳＰ−４−２）−［（１Ｒ，２Ｒ）−Ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１，２−ｄｉａｍｉｎｅ−κＮ，κＮ’］［ｅｔｈａｎｅｄｉｏａｔｏ（２−）−κＯ1，κＯ2］ｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＵＰＡＣ）は第三世代白金錯体系抗悪性腫瘍薬である。作用機序は先行薬剤であるシスプラチン（ＣＤＤＰ）やカルボプラチン（ＣＢＣＤＡ）と同様、ＤＮＡ塩基との架橋形成によるＤＮＡ合成阻害、蛋白合成阻害と考えられているが、ＣＤＤＰやＣＢＣＤＡが無効な大腸癌に対してもオキサリプラチン（Ｌ−ＯＨＰ）は抗腫瘍効果を示し、従来の白金錯体系抗悪性腫瘍薬とは異なる抗腫瘍スペクトルを示す。アメリカでは２００４年１月にフルオロウラシル（５−ＦＵ）／レボホリナート（ＬＶ）との併用で転移性結腸・直腸癌のファーストライン治療薬として承認されており、日本においても２００５年４月、治癒切除不能な進行・再発の結腸・直腸癌に対するレボホリナート及びフルオロウラシルの静脈内持続投与法との併用（ＦＯＬＦＯＸ４法）にて薬価収載された。進行再発大腸癌の治療は、１９９０年代前半まで行なわれていた５−ＦＵ／ＬＶ療法での生存率は１０〜１２ヶ月であったのに対し、オキサリプラチンを加えたＦＯＬＦＯＸ療法での生存期間は１９．５ヶ月とほぼ２倍にまで到達している。さらに２００９年８月には、同じく５−ＦＵ／ＬＶの静脈内持続投与法との併用による「結腸癌における術後補助化学療法」が効能・効果として追加され、大腸癌患者での使用拡大と有益性が期待できる薬剤である。【０００４】
しかし、それでもなお進行再発大腸癌に対するＦＯＬＦＯＸ療法の奏効率は５０％程度であり、換言すれば治療を受けた患者の半数は効果が得られていないことを意味する。また、オキサリプラチンの使用により好中球減少症のほか高頻度の末梢神経障害を呈し、これは致死的副作用ではないものの治療継続を困難にする因子ともなっている。したがって、治療開始前に効果の期待できる患者（レスポンダー）と、効果の期待できない患者（ノンレスポンダー）を予測・診断できれば有効性と安全性の高い化学療法が実現する。さらに、一般にがん化学療法の治療スケジュールは長期に渡るため、治療継続中における抗がん剤に対する感受性の経時的モニターは治療継続の是非の判定を可能とし、患者負担や副作用軽減につながるのみならず医療経済の観点からも有用であると考えられる。個々の患者における治療反応性を予測して適切な治療を選択する“Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ”のための治療反応性予測バイオマーカーの確立は急務である。【０００５】
オキサリプラチンの治療反応性に関連する因子としては、主に、
１）オキサリプラチンによりもたらされる損傷ＤＮＡの除去・修復能の亢進
２）細胞内におけるオキサリプラチン（活性化体）の不活化（解毒）
３）オキサリプラチンの細胞内蓄積量の低下
などが関与していると考えられており、大腸癌患者を対象にしたオキサリプラチンと５−ＦＵの併用療法における治療反応性や予後予測因子として１）〜３）と関連する臨床研究が行われている。【０００６】
１）に関しては、ヌクレオチド除去修復（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｅｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ：ＮＥＲ）に重要な役割を果たすＥｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ  １（ＥＲＣＣ１）について、腫瘍内ＥＲＣＣ１遺伝子発現量が予後因子であるとする報告（非特許文献１）や、ＥＲＣＣ１の一塩基多型（ＳＮＰ）の一つであるＣ１１８ＴについてＣ／Ｃホモ接合体を有する患者では、少なくとも１つ以上のＴアレルを有する患者よりも良好な生存率が報告されている（非特許文献２）。Ｘｅｒｏｄｅｒｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ  Ｄ（ＸＰＤ、ＥＲＣＣ２としても知られている）ではＬｙｓ７５１Ｇｌｎのアミノ酸変異を伴う遺伝子多型が腫瘍縮小率や生存期間に関与するとの報告がなされている（非特許文献２、３）。塩基除去修復（ｂａｓｅ  ｅｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ：ＢＥＲ）においては、アルキル化剤への曝露などにより形成されるＤＮＡ一本鎖切断の効率的な修復に関わると考えられているタンパク質をコードするＸ−ｒａｙ  ｒｅｐａｉｒ  ｃｒｏｓｓ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ  １（ＸＲＣＣ１）のＡｒｇ３９９Ｇｌｎのアミノ酸変異を伴う遺伝子多型と腫瘍縮小効果との関係が報告されたが（非特許文献４）、同じ患者を対象としたその後の解析により臨床予後には影響しないことが報告されている（非特許文献２）。シスプラチンへの感受性低下にはＤＮＡミスマッチ修復（ＤＮＡ  ｍｉｓｍａｔｃｈ  ｒｅｐａｉｒ：ＭＭＲ）も関与していると考えられているが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの検討ではオキサリプラチンによるＤＮＡ損傷部位の修復にＭＭＲは関与しないことが報告されている（非特許文献５）。【０００７】
２）に関して、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ−Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＧＳＴ）は解毒・代謝の第ＩＩ相反応を担う酵素の一つであり、ＤＮＡ白金付加体とｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅとの抱合体形成を触媒することで、薬剤を不活化する。ＧＳＴサブタイプのうち、ＧＳＴＰ１は大腸癌での発現量が高く、Ｉｌｅ１０５Ｖａｌのアミノ酸変異を伴う遺伝多型と生存期間が関連する（生存期間の中央値：Ｉｌｅ／Ｉｌｅ  ７．９ヶ月、Ｉｌｅ／Ｖａｌ  １３．３ヶ月、Ｖａｌ／Ｖａｌ  ２４．９ヶ月）ことが報告されている（非特許文献６）。【０００８】
３）に関しては、培養細胞を用いた検討では、有機カチオントランスポーター（ＯＣＴｓ）がオキサリプラチンの細胞内への輸送と感受性に関与することが報告されている他（非特許文献７）、ＡＴＰ７Ａ、ＡＴＰ７Ｂなどの銅や重金属の輸送に関与するトランスポーターと感受性との関連についても報告されている（非特許文献８、９）。ただし、これらの発現とオキサリプラチン治療反応性との関連について臨床的検討は行なわれていない。【０００９】
ＦＯＬＦＯＸ療法を受けた進行大腸癌患者を対象とした最近の臨床研究においては、ＥＲＣＣ１の遺伝多型（Ａｓｎ１１８Ａｓｎ）とＸＰＤの遺伝多型（Ｌｙｓ７５１Ｇｌｎ）が独立して無増悪期間（ＰＦＳ）と関連することが報告されているが、ＧＳＴＰ１（Ｉｌｅ１０５Ｖａｌ）についてはＰＦＳとの関連は見出されず、オキサリプラチン誘発神経毒性と関連する傾向が認められている（非特許文献１０）。【００１０】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの検討では、白金錯体系の先行薬剤であるシスプラチンの耐性関連因子については数多くの報告がなされており、オキサリプラチンについてもＦＡＳ／ＦＡＳＬ、Ｂｃｌ−ｘＬなどのアポトーシス関連因子との関連も報告されている（非特許文献１１、１２）。しかし、オキサリプラチンはシスプラチンとはがん種により異なる治療反応性を示すことに加え、オキサリプラチンの細胞障害活性を担う白金ＤＮＡ付加体に対するがん細胞の細胞応答はほとんど解明されておらず、オキサリプラチンを用いた化学療法に対する治療反応性を予測し得る明確なバイオマーカーは未だ確立されていない。【００１１】
フルオロウラシルは、１９５７年に開発されたフッ化ピリミジン系抗癌剤であり、今なお消化器癌化学療法の基本となる薬剤である。がん細胞に取り込まれたフルオロウラシルは、活性代謝物ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ−５’−ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＦｄＵＭＰ）によるｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＴＳ）の阻害が惹起するＤＮＡ合成阻害を主たる作用機序とする他、同じく活性代謝物である５−ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＦＵＴＰ）によるＲＮＡ機能障害などにより殺細胞効果を発揮する。【００１２】
フッ化ピリミジン系抗癌剤の治療応答性の予測についてはこれまで多くの研究がなされているが、とくにフルオロウラシルの分解酵素であるｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＤＰＤ）と活性代謝物の標的酵素であるｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＴＳ）についての報告が多い。フルオロウラシル異化代謝の律速酵素であるＤＰＤを高発現している腫瘍ではフルオロウラシル耐性であることが報告されているが（非特許文献１３）、臨床検体を用いての検証報告は多くはない。ＴＳ発現については、酵素活性、タンパク質及びＲＮＡレベルなどの測定法によらず、その多寡がフッ化ピリミジン系抗癌剤の治療効果規定因子となり得ることが報告されている（非特許文献１４、１５）。しかし、すべての報告において必ずしも一致する結果は得られておらず、さらにフルオロウラシルに対する治療反応性を治療早期に予測する明確なバイオマーカーは知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９，４２９８−４３０４（２００１）
【非特許文献２】Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９１，３４４−３５４（２００４）
【非特許文献３】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１，８６５４−８６５８（２００１）
【非特許文献４】Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１，３０７５−３０７９（２００１）
【非特許文献５】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６，４８８１−４８８６（１９９６）
【非特許文献６】Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４，９３６−９４２（２００２）
【非特許文献７】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６，８８４７−８８５７（２００６）
【非特許文献８】Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６６，２５−３２（２００４）
【非特許文献９】Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０，４６６１−４６６９（２００４）
【非特許文献１０】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２５，１２４７−１２５４（２００７）
【非特許文献１１】Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１，４７７０−４７７４（２００５）
【非特許文献１２】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，４６１１３−４６１２１（２００４）
【非特許文献１３】Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００４；４０：９３９−９５０
【非特許文献１４】Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００２；２８：２７−４７
【非特許文献１５】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００４；２２：５２９−５３６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の課題は、個々の患者の治療反応性を判別できる抗がん剤感受性判定マーカー及びそれを利用する新たながん治療手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
そこで本発明者らは、１０種類のヒトがん細胞株を培養し、それらの細胞内代謝物についてキャピラリー電気泳動−飛行時間型質量分析計（ＣＥ−ＴＯＦＭＳ）を用いて抗がん剤感受性判定マーカーの探索を行ったところ、オキサリプラチン（Ｌ−ＯＨＰともいう）に対する感受性が低い細胞群と高い細胞群で細胞内レベルに違いが認められる代謝物を見出し、その代謝物がＮ−アセチルグルコサミン、アミノ酸代謝系上の物質（Ｎ−アセチルアスパラギン酸、Ｎ−アセチル−β−アラニン、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、オルニチン）、ポリアミン代謝系上の物質（スペルミジン）、解糖系上の物質（３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸）であることを見出した。また本発明者らは、ヒトがん細胞株を培養し、Ｌ−ＯＨＰ曝露後の細胞内代謝変動についてＣＥ−ＴＯＦＭＳを用いて網羅的に解析し、抗がん剤感受性判定マーカーの探索を行ったところ、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（β−アラニン（β−Ａｌａ）、アスパラギン、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、Ａｒｇ、リジン（Ｌｙｓ）、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−アセチル−β−アラニン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）、ポリアミン代謝系上の物質（プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、スペルミジン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ）、核酸代謝系上の物質（ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ）、ペントースリン酸経路上の物質（２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ）、ＴＣＡ回路上の物質（Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄであることを見出した。さらに、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ））、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅであることを見出した。さらに、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な低下が認められるピークを見出し、そのピークが、核酸代謝系上の物質（ＩＭＰ）であることを見出した。【００１６】
また、同様にフルオロウラシル（５−ＦＵともいう）について、ヒトがん細胞株を培養し、５−ＦＵ曝露後の細胞内代謝変動についてＣＥ−ＴＯＦＭＳを用いて網羅的に解析し、抗がん剤感受性判定マーカーの探索を行ったところ、５−ＦＵ高感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（アスパラギン酸（Ａｓｐ）、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）、核酸代謝系上の物質（Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ）、ペントースリン酸経路上の物質（Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、解糖系上の物質（Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ）、ＴＣＡ回路上の物質（Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリアミン代謝系上の物質（Ｎ1−アセチルスペルミン）、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄであることを見出した。また、５−ＦＵ低感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内の顕著な上昇が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（セリン（Ｓｅｒ）、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ））、核酸代謝系上の物質（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）であることを見出した。また、５−ＦＵ高感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内の顕著な低下が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ）、ペントースリン酸経路上の物質（ＰＲＰＰ）、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅであることを見出した。また、５−ＦＵ低感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内の顕著な低下が認められるピークを見出し、そのピークが、アミノ酸代謝系上の物質（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）、解糖系上の物質（２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリアミン代謝系上の物質（Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｎ8−アセチルスペルミジン、プトレシン、スペルミジン）、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋であることを見出した。【００１７】
かかる知見に基づき、さらに検討した結果、がん患者由来の生体試料中のこれら代謝物の濃度を指標とすれば、当該がん患者のがんが抗がん剤に対する感受性を有するか否かを判定できること、また、これら代謝物の濃度や変動を指標とすれば抗がん剤感受性亢進剤のスクリーニングが可能になること、さらに当該抗がん剤感受性亢進剤と感受性亢進の対象となる抗がん剤を併用すれば、当該抗がん剤の治療効果が飛躍的に向上することを見出し、本発明を完成した。【００１８】
すなわち、本発明は、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミノ酸代謝系上の物質、核酸代謝系上の物質、ペントースリン酸経路上の物質、解糖系上の物質、ＴＣＡ回路上の物質、ポリアミン代謝系上の物質並びにＬａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋及びそれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる１以上の物質からなる、抗がん剤感受性判定マーカーを提供するものである。
また、本発明は、Ａｓｎ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ａｓｐ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、スペルミン、スペルミジン及びそれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる１以上の物質からなる、Ｌ−ＯＨＰ、５−ＦＵ及びそれらの塩から選ばれる抗がん剤の感受性判定マーカーを提供するものである。
また、本発明は、検体中の上記の物質を測定することを特徴とする抗がん剤感受性の判定方法を提供するものである。
また、本発明は、検体中の上記の物質を測定するためのプロトコールを含むことを特徴とする抗がん剤感受性の判定方法を実施するためのキットを提供するものである。
さらに本発明は、上記の物質の発現変動を指標とする抗がん剤感受性亢進剤のスクリーニング方法を提供するものである。
さらにまた本発明は、上記のスクリーニング方法により得られた抗がん剤感受性亢進剤を提供するものである。
さらに本発明は、上記の抗がん剤感受性亢進剤と、感受性亢進の対象となる抗がん剤とを組み合せてなるがん治療用組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の抗がん剤感受性判定マーカーを用いれば、個々の患者の抗がん剤治療反応性が抗がん剤投与前、或いは抗がん剤投与開始後早期に適確に判定できる結果、より治療効果の高い抗がん剤の選択が可能となり、その結果として治療効果の期待できない抗がん剤の継続投与に伴うがんの進行、副作用の増大を防止でき、さらには患者の負担軽減、医療費の削減も期待できる。また、このマーカーを用いれば、抗がん剤感受性を亢進させる薬剤がスクリーニングでき、その対象となった抗がん剤と抗がん剤感受性亢進剤とを併用すれば、がん治療効果が飛躍的に向上する。本発明の抗がん剤感受性判定マーカーの測定試薬は、抗がん剤感受性判定試薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】１０種類のヒト大腸癌細胞株のＬ−ＯＨＰに対する感受性を示す図である。
【図２】Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞と高感受性細胞の定常状態（薬剤処理前）におけるＮ−アセチルグルコサミン、アルギニン、アスパラギン、３−ホスホグリセリン酸、Ｎ−アセチル−β−アラニン、Ｎ−アセチルアスパラギン酸、フルクトース１，６−二リン酸の細胞内レベルを示す図である。
【図３】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のプトレシンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図４】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のＮ1−アセチルスペルミンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図５】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のＮ8−アセチルスペルミジンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図６】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のスペルミンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図７】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のアスパラギンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図８】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のβ−アラニンの細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図９】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６のＬ−ＯＨＰ２４時間曝露後における核酸代謝系上の物質の変動を示す図である。
【図１０】Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞と高感受性細胞の定常状態（薬剤処理前）におけるポリアミン代謝系上の物質の細胞内レベル、およびＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６におけるＬ−ＯＨＰ曝露後のポリアミン代謝系上の物質の細胞内レベルの経時的変化を示す図である。
【図１１】図１０の見方を示す図である。
【図１２】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６のＬ−ＯＨＰ２４時間曝露後における各代謝物質の変動を示す図である。
【図１３】ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６の５−ＦＵ２４時間曝露後における各代謝物質の変動を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミノ酸代謝系上の物質、核酸代謝系上の物質、ペントースリン酸経路上の物質、解糖系上の物質、ＴＣＡ回路上の物質、ポリアミン代謝系上の物質、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋及びこれらの物質が関与する代謝系上の物質から選ばれる物質である。また、これらの物質の濃度を変動させる代謝系上のすべての物質が含まれ、当該物質としては、これらの物質への代謝を亢進する物質、阻害する物質、これらの物質からの代謝を促進する物質、阻害する物質などが挙げられる。
【００２２】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、Ｎ−アセチルグルコサミン又はこれが関与する代謝系上の物質（Ｎ−アセチルグルコサミン代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＮ−アセチルグルコサミンの他、代謝系においてＮ−アセチルグルコサミンの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、Ｎ−アセチルグルコサミンへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、Ｎ−アセチルグルコサミンからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては、Ｎ−アセチルグルコサミンが特に好ましい。
【００２３】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、アミノ酸代謝系上の物質（アミノ酸代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはアミノ酸代謝系物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、アミノ酸代謝系物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、アミノ酸代謝系物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしてはＡｒｇ、Ａｓｎ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌ−ｂｅｔａ−ａｌａｎｉｎｅ、Ｎ−アセチルアスパラギン酸、β−アラニン、オルニチン、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅが特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしてはＡｓｐ、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ（ＧＡＢＡ）、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｓｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅが特に好ましい。
【００２４】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、核酸代謝系上の物質（核酸代謝系物質ともいう）であり、当該物質としては核酸代謝系物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、核酸代謝系物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、核酸代謝系物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＩＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰが好ましく、ＵＭＰ、ＵＤＰが特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしてはＧｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅが特に好ましい。
【００２５】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、ペントースリン酸経路上の物質（ペントースリン酸経路上物質ともいう）であり、当該物質としてはペントースリン酸経路上物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、ペントースリン酸経路上物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、ペントースリン酸経路上物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ＰＲＰＰが特に好ましい。
【００２６】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、解糖系上の物質（解糖系物質ともいう）であり、当該物質としては解糖系物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、解糖系物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、解糖系物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸が特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００２７】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、ＴＣＡ回路上の物質（ＴＣＡ回路上物質ともいう）であり、当該物質としてはＴＣＡ回路上物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、ＴＣＡ回路上物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、ＴＣＡ回路上物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしてはＭａｌｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００２８】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、ポリアミン代謝系上の物質（ポリアミン代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはポリアミン代謝系物質の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、ポリアミン代謝系物質への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、ポリアミン代謝系物質からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしてはプトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、スペルミジン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅが特に好ましい。また、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしてはプトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミジン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅが特に好ましい。
【００２９】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ又はこれが関与する代謝系上の物質（Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＬａｕｒｉｃ  ａｃｉｄの他、代謝系においてＬａｕｒｉｃ  ａｃｉｄの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００３０】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ又はこれが関与する代謝系上の物質（６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としては６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄの他、代謝系において６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカー及び５−ＦＵ感受性判定マーカーのいずれも、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００３１】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ又はこれが関与する代謝系上の物質（Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＢｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄの他、代謝系においてＢｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカーとしては、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００３２】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ又はこれが関与する代謝系上の物質（４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としては４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの他、代謝系において４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、Ｌ−ＯＨＰ感受性判定マーカー及び５−ＦＵ感受性判定マーカーのいずれも、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅが特に好ましい。
【００３３】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ又はこれが関与する代謝系上の物質（Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＩｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅの他、代謝系においてＩｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅが特に好ましい。
【００３４】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ又はこれが関与する代謝系上の物質（Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＧｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄの他、代謝系においてＧｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄが特に好ましい。
【００３５】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、ＮＡＤＨ又はこれが関与する代謝系上の物質（ＮＡＤＨ代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＮＡＤＨの他、代謝系においてＮＡＤＨの濃度を変動させるすべての物質が含まれ、ＮＡＤＨへの代謝を亢進する物質又は阻害する物質、ＮＡＤＨからの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、ＮＡＤＨが特に好ましい。
【００３６】
本発明における抗がん剤感受性判定マーカーの一つは、ＮＡＤ＋又はこれが関与する代謝系上の物質（ＮＡＤ＋代謝系物質ともいう）であり、当該物質としてはＮＡＤ＋の他、代謝系においてＮＡＤ＋の濃度を変動させるすべての物質が含まれ、ＮＡＤ＋への代謝を亢進する物質又は阻害する物質、ＮＡＤ＋からの代謝を促進する物質又は阻害する物質などが挙げられる。これらのうち、５−ＦＵ感受性判定マーカーとしては、ＮＡＤ＋が特に好ましい。
【００３７】
ＰＲＰＰ、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰ＋は、様々な代謝に関与している物質であり、核酸代謝系物質の一つであることも知られている。
【００３８】
上記の抗がん剤感受性判定マーカーのうち、アスパラギン、スペルミン、スペルミジン、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ（ＧＡＢＡ）、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、アスパラギン酸、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅは本発明者らによりイリノテカン、ＳＮ−３８又はそれらの塩の感受性判定マーカーであることが確認されているが、新たに、アスパラギン、スペルミン、スペルミジン、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅは、オキサリプラチン（Ｌ−ＯＨＰ）及び／又はその塩を含む抗がん剤の感受性判定マーカーとなり得ることが見出された。また、アスパラギン酸、スペルミジン、ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、ＧＡＢＡ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅは、新たに、５−ＦＵを含む抗がん剤の感受性判定マーカーとなり得ることが見出された。なお、スペルミン、スペルミジンは、様々な代謝経路上に存在している物質であり、ポリアミン代謝系物質の一つであることも知られている。
【００３９】
β−アラニン、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄは、後記実施例に示すように、Ｌ−ＯＨＰ曝露後、Ｌ−ＯＨＰ高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な上昇が認められた。一方、Ｌ−ＯＨＰ低感受性であるＤＬＤ−１ではＨＣＴ１１６ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。従って、これらの物質は、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４０】
Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅは、後記実施例に示すように、Ｌ−ＯＨＰ曝露後、低感受性であるＤＬＤ−１で細胞内レベルの顕著な上昇が認められたが、高感受性であるＨＣＴ１１６ではＤＬＤ−１ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。従って、これらの物質は、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４１】
ＩＭＰは、後記実施例に示すように、Ｌ−ＯＨＰ曝露後、Ｌ−ＯＨＰ高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な低下が認められたが、Ｌ−ＯＨＰ低感受性であるＤＬＤ−１では細胞内レベルがコントロール群に比べ上昇した。従って、ＩＭＰは、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４２】
Ｎ−アセチルアスパラギン酸は、後記実施例に示すように、１０種類のヒトがん細胞株を用いて検討したところ、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞で細胞内レベルが高く、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞で細胞内レベルが低かった。従って、Ｎ−アセチルアスパラギン酸は、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４３】
Ｎ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンは、後記実施例に示すように、１０種類のヒトがん細胞株を用いて検討したところ、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞で細胞内レベルが高く、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞で細胞内レベルが低かった。従って、Ｎ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンは、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４４】
アスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンは、後記実施例に示すように、１０種類のヒトがん細胞株を用いて検討したところ、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞で細胞内レベルが高く、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞で細胞内レベルが低かった。また、Ｌ−ＯＨＰ曝露後、Ｌ−ＯＨＰ高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な上昇が認められたが、Ｌ−ＯＨＰ低感受性であるＤＬＤ−１では高感受性細胞であるＨＣＴ１１６ほど細胞内レベルの顕著な変動は認められなかった。従って、アスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンは、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４５】
アルギニン、スペルミジンは、後記実施例に示すように、１０種類のヒトがん細胞株を用いて検討したところ、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞で細胞内レベルが高く、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞で細胞内レベルが低かった。また、Ｌ−ＯＨＰ曝露後、Ｌ−ＯＨＰ高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な上昇が認められたが、Ｌ−ＯＨＰ低感受性であるＤＬＤ−１では高感受性細胞であるＨＣＴ１１６ほど細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。従って、アルギニン、スペルミジンは、特にＬ−ＯＨＰ等の抗がん剤感受性判定マーカーとして有用である。
【００４６】
Ａｓｐ、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄは、後記実施例に示すように、５−ＦＵ曝露後、高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な上昇が認められた。一方、低感受性であるＤＬＤ−１ではＨＣＴ１１６ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。従って、これらの物質は、特に５−ＦＵ等の感受性判定マーカーとして有用である。
【００４７】
Ｓｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅは、後記実施例に示すように、５−ＦＵ曝露後、低感受性であるＤＬＤ−１で細胞内レベルの顕著な上昇が認められたが、高感受性であるＨＣＴ１１６ではＤＬＤ−１ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。従って、これらの物質は、特に５−ＦＵ等の感受性判定マーカーとして有用である。
【００４８】
３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅは、後記実施例に示すように、５−ＦＵ曝露後、高感受性であるＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な低下が認められたが、低感受性であるＤＬＤ−１ではＨＣＴ１１６ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが上昇した。従って、これらの物質は、特に５−ＦＵ等の感受性判定マーカーとして有用である。
【００４９】
Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｎ8−アセチルスペルミジン、プトレシン、スペルミジン、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋は、後記実施例に示すように、５−ＦＵ曝露後、低感受性であるＤＬＤ−１で細胞内レベルの顕著な低下が認められたが、高感受性であるＨＣＴ１１６ではＤＬＤ−１ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められなかった。従って、これらの物質は、特に５−ＦＵ等の感受性判定マーカーとして有用である。
【００５０】
本発明の抗がん剤感受性判定マーカーの対象となる抗がん剤としては特に限定されないが、例えばオキサリプラチン（Ｌ−ＯＨＰ）、シクロフォスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、テガフール／ウラシル（ｔｅｇａｆｕｌ・ｕｒａｃｉｌ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、テガフール／ギメラシル／オテラシル（ｔｅｇａｆｕｌ・ｇｉｍｅｒａｃｉｌ・ｏｔｅｒａｃｉｌ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン（６−ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、フルダラビン（ｆｕｌｕｄａｒａｂｉｎ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、アムルビシン（ａｍｕｒｕｂｉｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎｅ）、ペプレオマイシン（ｐｅｐｌｅｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ（ｍｙｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ）、アクラルビシン（ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン活性代謝物（ＳＮ−３８）、ノギテカン（ｎｏｇｉｔｅｃａｎ、ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、メドロキシプロゲステロン（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉ��ｉｎｉｂ）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、三酸化ヒ素（ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ）、ホリナート（ｆｏｌｉｎａｔｅ）、レボホリナート（ｌｅｖｏｆｏｌｉｎａｔｅ）、又はそれらの塩、又はそれらの活性代謝物等が挙げられる。このうち白金錯体系抗がん剤、フッ化ピリミジン系抗がん剤が好ましく、特にオキサリプラチン、フルオロウラシル又はそれらの塩が好ましい。
【００５１】
本発明の抗がん剤感受性判定マーカーの対象となる抗がん剤として、オキサリプラチン又はその塩やフルオロウラシル又はその塩が挙げられるが、体内で代謝されてオキサリプラチンやフルオロウラシルに変換される抗がん剤も、オキサリプラチンやフルオロウラシルと同様に本発明の抗がん剤感受性判定マーカーの対象となる。具体的に、テガフール（ｔｅｇａｆｕｌ）やカペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）は体内で代謝されてフルオロウラシルに変換されることが明らかになっているため、フルオロウラシルに代えてテガフールやカペシタビンも本発明の抗がん剤感受性判定マーカーの対象となる。
【００５２】
本発明の抗がん剤感受性判定マーカーを用いて抗がん剤感受性を判定するには、検体中のこれら代謝系物質を測定すればよい。ここで、検体としては、がんを有する被験者（がん患者）由来の生体試料、例えば血液、血清、血漿、尿、腫瘍組織・細胞、腹水、胸水、脳脊髄液、便、喀痰等が挙げられるが、血清が特に好ましい。
【００５３】
また、本発明の対象となるがんとしては、咽頭がんを代表とする口唇、口腔及び咽頭がん、食道がん、胃がん、結腸・直腸がんなどを代表とする消化器がん、肺がんを代表とする呼吸器及び胸腔内臓器がん、骨及び関節軟骨がん、皮膚の悪性黒色腫、有棘細胞がん及びその他の皮膚のがん、中皮腫を代表とする中皮及び軟部組織がん、乳房がん、子宮がん、卵巣がんを代表とする女性性器がん、前立腺がんを代表とする男性性器がん、膀胱がんを代表とする尿路がん、脳腫瘍を代表とする眼、脳及び中枢神経系がん、甲状腺及びその他の内分泌腺がん、非ホジキンリンパ腫やリンパ性白血病を代表とするリンパ組織、造血組織及び関連組織がん、及びこれらを原発巣とする転移組織のがん等が挙げられるが、特に非小細胞肺がん、小細胞肺がん、子宮頸がん、卵巣がん、胃がん、結腸・直腸がん、有棘細胞がん、悪性リンパ腫に対して好適に利用できる。
【００５４】
検体中のこれら代謝系物質の測定手段は、被測定対象物質により適宜決定すればよく、例えばＣＥ−ＴＯＦＭＳ、Ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＧＣ−ＭＳ）等の各種質量分析装置、ＨＰＬＣ、免疫学的測定法、生化学的測定法等により測定可能である。
【００５５】
β−アラニン、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００５６】
Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性ではなく、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性であると判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００５７】
ＩＭＰについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が低下するか、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００５８】
Ｎ−アセチルアスパラギン酸について、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前あるいは投与後初期の段階において、これら代謝系物質の濃度が所定の標準濃度より低いと判断される濃度を有する場合は、そのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００５９】
Ｎ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前あるいは投与後初期の段階において、これら代謝系物質の濃度が所定の標準濃度より高いと判断される濃度を有する場合は、そのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６０】
アスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればその癌は抗がん剤感受性ではないと判定できる。
また、抗がん剤投与前あるいは投与後初期の段階において、これら代謝系物質の濃度が所定の標準濃度より低いと判断される濃度を有する場合は、そのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６１】
アルギニン、スペルミジンについて、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
また、抗がん剤投与前あるいは投与後初期の段階において、これら代謝系物質の濃度が所定の標準濃度より高いと判断される濃度を有する場合は、そのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６２】
Ａｓｐ、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ１−Ａｃｅｔｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄについて、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６３】
Ｓｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅについて、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が上昇するか、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性ではなく、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性であると判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６４】
３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅについて、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が低下するか、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性であり、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性ではないと判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６５】
Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｎ8−アセチルスペルミジン、プトレシン、スペルミジン、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋について、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤に対する感受性を判定するには、抗がん剤投与前及び投与後のがん患者由来の生体試料中のこれら代謝系物質濃度を測定し、抗がん剤投与前に比べて投与後におけるこれら代謝系物質の濃度が低下するか、あるいは所定の基準を下回ればそのがんは抗がん剤感受性ではなく、抗がん剤投与前後におけるこれら代謝系物質の濃度が変化しなかったり、あるいは所定の基準を上回ればそのがんは抗がん剤感受性であると判定できる。
対象とする抗がん剤に対して感受性を有さない場合は、その薬効を期待することができず、このような薬効の期待できない抗がん剤の投与が続けられた場合、がんの進行、副作用の増大が危惧される。このように、本発明における抗がん剤感受性判定マーカーは、抗がん剤治療反応性の判定のみならず、薬効の期待できない抗がん剤の継続投与に伴う副作用の増大を防ぐことにも大きく貢献する。
【００６６】
本発明の抗がん剤感受性の判定方法を実施するには、検体中のこれら代謝系物質を測定するためのプロトコールを含むキットを用いるのが好ましい。当該キットには、これら代謝系物質測定試薬、測定試薬の使用方法、及び抗がん剤感受性の有無を判定するための基準等が含まれる。当該基準には、これら代謝系物質の標準濃度や標準比、高いと判断される濃度や比、低いと判断される濃度や比、測定結果に影響を与える要因とその影響の程度等が含まれ、これらの濃度は対象とする抗がん剤ごとに設定することが可能である。当該基準を用いて、前記のように判定することができる。
【００６７】
対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるβ−アラニン、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄの発現変動、具体的には変動の促進或いは濃度の上昇を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、これらの代謝系物質の抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるこれらの代謝系物質の変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のこれらの代謝系物質の変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００６８】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの発現変動の有無を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの抗がん剤曝露後における変動を小さくする物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００６９】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるＩＭＰの発現変動、具体的には変動の促進或いは濃度の低下を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＩＭＰの抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるＩＭＰの変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のＩＭＰの変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７０】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるＮ−アセチルアスパラギン酸の発現変動、具体的には濃度の上昇を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＮ−アセチルアスパラギン酸の抗がん剤曝露前における濃度を上昇させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露前に各種がん細胞株をある物質で処理した時、細胞内におけるＮ−アセチルアスパラギン酸の濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露前の、Ｎ−アセチルアスパラギン酸の濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７１】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるＮ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンの発現変動、具体的には濃度の低下を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＮ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンの抗がん剤曝露前における濃度を低下させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露前に各種がん細胞株をある物質で処理した時、細胞内におけるＮ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンの濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露前のＮ−アセチルグルコサミン、３−ホスホグリセリン酸、フルクトース１，６−二リン酸、オルニチンの濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７２】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの発現変動、具体的には変動の促進或いは濃度の上昇を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの抗がん剤曝露前における濃度を上昇させる物質、抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露前に各種がん細胞株をある物質で処理した時、細胞内におけるアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、各種がん細胞株における抗がん剤曝露後の細胞内におけるアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露前のアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの濃度を上昇させる物質、抗がん剤曝露後のアスパラギン、Ｎ−アセチル−β−アラニンの変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７３】
また、対象とする抗がん剤がＬ−ＯＨＰである場合、抗がん剤曝露後におけるアルギニン、スペルミジンの発現変動を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてアルギニン、スペルミジンの抗がん剤曝露前における濃度を低下させる物質、抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露前に各種がん細胞株をある物質で処理した時、細胞内におけるアルギニン、スペルミジンの濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、各種がん細胞株における抗がん剤曝露後の細胞内におけるアルギニン、スペルミジンの変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露前のアルギニン、スペルミジンの濃度を低下させる物質、抗がん剤曝露後のアルギニン、スペルミジンの変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７４】
対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤曝露後におけるＡｓｐ、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄの発現変動、具体的には変動の促進或いは濃度の上昇を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、これらの代謝系物質の抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるこれらの代謝系物質の変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のこれらの代謝系物質の変動を促進或いは濃度を上昇させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７５】
また、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤曝露後におけるＳｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅの発現変動の有無を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＳｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅの抗がん剤曝露後における変動を小さくする物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるＳｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅの変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のＳｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅの変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７６】
また、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤曝露後における３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの発現変動、具体的には変動の促進或いは濃度の低下を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの抗がん剤曝露後における変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内における３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後の３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅの変動を促進或いは濃度を低下させる物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７７】
また、対象とする抗がん剤が５−ＦＵである場合、抗がん剤曝露後におけるＣｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｎ8−アセチルスペルミジン、プトレシン、スペルミジン、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋の発現変動の有無を指標とすれば、抗がん剤感受性亢進剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、これらの代謝系物質の抗がん剤曝露後における変動を小さくする物質は、抗がん剤感受性を亢進する。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗がん剤曝露後の細胞内におけるこれらの代謝系物質の変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいては、担癌動物における抗がん剤曝露後のこれらの代謝系物質の変動を小さくする物質は、当該抗がん剤の感受性を亢進する物質（抗がん剤感受性亢進剤）である。
【００７８】
さらに、本発明の抗がん剤感受性判定マーカーを指標とすれば、抗がん剤がスクリーニングできる。すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ある物質により抗がん剤感受性判定マーカーの濃度が変動すれば、その物質は抗がん剤である。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、ある物質を各種がん細胞株に曝露後、曝露前に比べて抗がん剤感受性判定マーカーの濃度が変動すれば、その物質は抗がん剤である。また、担癌動物にある物質を投与した後、抗がん剤感受性判定マーカーの濃度が変動すれば、その物質は抗がん剤である。薬効が期待できる抗がん剤であれば、抗がん剤感受性判定マーカーの濃度変動は腫瘍の縮小あるいは殺細胞効果よりも早く現れるため、抗がん剤感受性判定マーカーを指標としたスクリーニングにより、より短時間の検討で当該物質が抗がん剤として有用であるかどうかを判定することができる。抗がん剤開発に伴う労力や費用の削減という面からも大きな効果が期待できる。
【００７９】
かくして得られた抗がん剤感受性亢進剤と感受性亢進の対象となる抗がん剤とを併用すれば、当該抗がん剤の治療効果が飛躍的に向上する。抗がん剤感受性亢進剤と感受性亢進の対象となる抗がん剤とを組み合せた形態としては、それらの成分の両方を含む一の組成物であってもよく、それぞれ別個の製剤の組み合せであってもよい。また、それらの成分はそれぞれ別の投与経路であってもよい。ここで用いられる対象となる抗がん剤としては、前記と同様であり、オキサリプラチン、シクロフォスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、テガフール／ウラシル（ｔｅｇａｆｕｌ・ｕｒａｃｉｌ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、テガフール／ギメラシル／オテラシル（ｔｅｇａｆｕｌ・ｇｉｍｅｒａｃｉｌ・ｏｔｅｒａｃｉｌ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン（６−ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、フルダラビン（ｆｕｌｕｄａｒａｂｉｎ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、アムルビシン（ａｍｕｒｕｂｉｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎｅ）、ペプレオマイシン（ｐｅｐｌｅｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ（ｍｙｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ）、アクラルビシン（ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン活性代謝物（ＳＮ−３８）、ノギテカン（ｎｏｇｉｔｅｃａｎ、ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、��レミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、メドロキシプロゲステロン（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、三酸化ヒ素（ａｒｓｅｎｉｃ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ）、ホリナート（ｆｏｌｉｎａｔｅ）、レボホリナート（ｌｅｖｏｆｏｌｉｎａｔｅ）、又はそれらの塩、又はそれらの活性代謝物等が挙げられる。このうち白金錯体系抗がん剤、フッ化ピリミジン系抗がん剤が好ましく、特にオキサリプラチン、フルオロウラシル又はそれらの塩が好ましい。
【実施例】
【００８０】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。【００８１】
実施例１
（１）方法
（ａ）使用細胞
１０種類のヒト大腸癌細胞株（ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１５、ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、Ｌｏｖｏ、ＬＳ１７４Ｔ、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０、ＳＷ１１１６、ＷｉＤｒ）を用いた。ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９は株式会社ヤクルト本社より、ＤＬＤ−１、Ｌｏｖｏ、ＳＷ４８０、ＳＷ１１１６、ＷｉＤｒは大日本住友製薬株式会社より、ＨＣＴ１５、ＬＳ１７４Ｔは東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センターより、ＳＷ６２０は住商ファーマインターナショナル株式会社より入手した。
（ｂ）薬剤
Ｌ−ＯＨＰ原末は、株式会社ヤクルト本社より入手した。【００８２】
（ｃ）Ｌ−ＯＨＰに対する感受性の評価
各細胞について、０〜１０００μｍｏｌ／ＬのＬ−ＯＨＰに４８時間曝露後の細胞生存率をＭＴＳ  ａｓｓａｙ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６TMＡＱueous  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ）にて評価し、ＩＣ50値（Ｌ−ＯＨＰ未処理に対して細胞数を５０％抑制するＬ−ＯＨＰ濃度）を算出して各細胞におけるＬ−ＯＨＰ感受性の指標とした。【００８３】
（ｄ）細胞内代謝物の採取
定常状態における各細胞に対して、培地を除去し氷上にて５％マンニトール（４℃）で細胞を洗浄後、素早くメタノール（４℃、内部標準物質含有）を添加することにより酵素を失活させ、−８０℃で保存した。なお、細胞数算出用の細胞を代謝物抽出用の細胞とは別に準備し、同様の処理を行った後セルカウントを行い、細胞数補正に用いた。【００８４】
（ｅ）メタボロームサンプルの調製
−８０℃保存メタノール溶液に、クロロホルムとミリＱ水を加え液―液抽出を行い、夾雑成分を除去した。代謝物を含む水―メタノール層を採取し、分画分子量５０００Ｄａの遠心限外ろ過フィルターを用いて除タンパクを行った後、ろ液を減圧乾燥し、−８０℃にて保存した。測定直前にミリＱ水に溶解させ、メタボローム測定に供した。【００８５】
（ｆ）メタボローム測定
細胞内代謝物の網羅的測定はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のキャピラリー電気泳動―飛行時間型質量分析計（ＣＥ−ＴＯＦＭＳ）にて行った。カチオンモード又はアニオンモードにて、ｍ／ｚ＝５０〜１０００の代謝物を一斉に定量分析した。【００８６】
（ｇ）細胞内代謝物量とＬ−ＯＨＰ感受性との関係
各細胞サンプルからＣＥ−ＴＯＦＭＳにより検出されたピークについて、既にｍ/ｚ及び移動時間が明らかとなっている約５００の標品データとの照合により、同定できた代謝物について、１０種類のヒト大腸癌細胞における細胞内レベルとそれぞれの細胞のＬ−ＯＨＰ感受性との関係を検討した。【００８７】
（２）結果
（ａ）１０種類のヒト大腸癌細胞株におけるＬ−ＯＨＰ感受性の評価
１０種類のヒト大腸癌細胞株（ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１５、ＨＣＴ１１６、ＨＴ２９、Ｌｏｖｏ、ＬＳ１７４Ｔ、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０、ＳＷ１１１６、ＷｉＤｒ）のＬ−ＯＨＰ感受性については、ＭＴＳアッセイによって算出されるＩＣ50を指標として評価した。ＳＷ４８０（０．６５±０．０７μＭ）、Ｌｏｖｏ（０．７２±０．１２μＭ）およびＨＣＴ１１６（０．８９±０．３３μＭ）が高感受性を示し、ＳＷ１１１６（２６．４２±４．１２μＭ）、ＨＴ２９（２３．９２±９．２９μＭ）、ＷｉＤｒ（１７．３０±５．２４μＭ）およびＤＬＤ−１（１６．９５±６．３１μＭ）が低感受性を示した(図１)。【００８８】
（ｂ）細胞内代謝物量とＬ−ＯＨＰ感受性との関係
１０種類のヒト大腸癌細胞から細胞内代謝物を抽出し、ＣＥ−ＴＯＦＭＳにて一斉分析した。各サンプルから検出された数千ピークについて、約５００の標品データと照合し、いずれかの細胞で検出が確認され、同定できた代謝物に着目した。ＭＴＳアッセイの結果に基づき１０種類のヒト大腸癌細胞をＬ−ＯＨＰ感受性がより高い上位５種類（ＨＣＴ１５、ＨＣＴ１１６、Ｌｏｖｏ、ＳＷ４８０、ＳＷ６２０）と下位５種類（ＤＬＤ−１、ＨＴ２９、ＬＳ１７４Ｔ、ＳＷ１１１６、ＷｉＤｒ）の２群に分け、両群間における細胞内代謝物量の違いを比較検討した。その結果、Ｌ−ＯＨＰ高感受性群と低感受性群の間でその細胞内レベルの違いが大きかった代謝物として、Ｎ−アセチルグルコサミン（ｐ＝０．０１０８）、アルギニン（ｐ＝０．０２６３）、アスパラギン（ｐ＝０．０７９４）、３−ホスホグリセリン酸（ｐ＝０．０２０１）、Ｎ−アセチル−β−アラニン（ｐ＝０．０３９２）、Ｎ−アセチルアスパラギン酸（ｐ＝０．０５２９）、フルクトース１，６−二リン酸（ｐ＝０．１０７１）が得られた（図２）。【００８９】
実施例２
（１）方法
（ａ）使用細胞
実施例１で用いた細胞のうち、２種類のヒト大腸癌細胞株（ＨＣＴ１１６、ＤＬＤ−１）を用いた。これらの細胞は、１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ(インビトロジェン社)を含むＤｏｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ） を用いて、φ１００ｍｍ／Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｄｉｓｈ（ＩＷＡＫＩ）にて３７℃、５％ＣＯ2の条件下で行った。
（ｂ）薬剤
Ｌ−ＯＨＰ原末は、株式会社ヤクルト本社より入手した。また、５−ＦＵ原末は、シグマアルドリッチジャパン株式会社より入手した。【００９０】
（ｃ）Ｌ−ＯＨＰの曝露と細胞内代謝物の採取
両細胞に対して、１０μｍｏｌ／ＬのＬ−ＯＨＰを含む培地に交換することにより抗がん剤曝露を開始した（Ｌ−ＯＨＰを含まない培地を用いたものをコントロール群とした）。０ｈｒ、４ｈｒ、１２ｈｒ、２４ｈｒ、４８ｈｒ曝露後に氷上にて５％マンニトール（４℃）で細胞を洗浄後、素早くメタノール（４℃、内部標準物質含有）を添加することにより酵素を失活させ、−８０℃で保存した。なお、細胞数算出用の細胞を代謝物抽出用の細胞とは別に準備し、同様の処理を行った後セルカウントを行い、細胞数補正に用いた。【００９１】
（ｄ）５−ＦＵの曝露と細胞内代謝物の採取
両細胞に対して、１００μｍｏｌ／Ｌの５−ＦＵを含む培地に交換することにより抗がん剤曝露を開始した（５−ＦＵを含まない培地を用いたものをコントロール群とした）。０ｈｒ、４ｈｒ、１２ｈｒ、２４ｈｒ、４８ｈｒ曝露後に氷上にて５％マンニトール（４℃）で細胞を洗浄後、素早くメタノール（４℃、内部標準物質含有）を添加することにより酵素を失活させ、−８０℃で保存した。なお、細胞数算出用の細胞を代謝物抽出用の細胞とは別に準備し、同様の処理を行った後セルカウントを行い、細胞数補正に用いた。【００９２】
（ｅ）メタボロームサンプルの調製
−８０℃保存メタノール溶液に、クロロホルムとミリＱ水を加え液―液抽出を行い、夾雑成分を除去した。代謝物を含む水―メタノール層を採取し、分画分子量５０００Ｄａの遠心限外ろ過フィルターを用いて除タンパクを行った後、ろ液を減圧乾燥し、−８０℃にて保存した。測定直前にミリＱ水に溶解させ、メタボローム測定に供した。【００９３】
（ｆ）メタボローム測定
細胞内代謝物の網羅的測定はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のキャピラリー電気泳動―飛行時間型質量分析計（ＣＥ−ＴＯＦＭＳ）にて行った。陽イオン性代謝物の網羅的測定ではキャピラリーの出口が陰極となるように電圧を印加し、また、陰イオン性代謝物の網羅的測定ではキャピラリーの出口が陽極となるように電圧を印加し、ｍ／ｚ＝５０〜１０００の代謝物を一斉に定量分析した。【００９４】
（２）結果
Ｌ−ＯＨＰに対する感受性の異なる２種類のヒト大腸癌細胞（高感受性：ＨＣＴ１１６、低感受性：ＤＬＤ−１）に１０μＭ  Ｌ−ＯＨＰを０、４、１２、２４、４８時間曝露し、細胞内代謝物を抽出後、ＣＥ−ＴＯＦＭＳにてカチオン、アニオンおよびヌクレオチド性代謝物を一斉分析した。検出が確認され、同定できた約１７０の代謝物について、Ｌ−ＯＨＰ曝露後における細胞内レベルの経時的変化を解析した結果、Ｌ−ＯＨＰ曝露後に低感受性細胞（ＤＬＤ−１）では大きな変動は見られず、高感受性細胞（ＨＣＴ１１６）において細胞内レベルが大きく上昇する代謝物として、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、アスパラギン、β−アラニンを見出した（図３〜８）。【００９５】
Ｌ−ＯＨＰ曝露後の経時的変化において両細胞間で差が大きかった代謝物のうち、β−アラニンについては、特に２４時間曝露の時点以降でＨＣＴ１１６での細胞内レベルの上昇が認められた。β−アラニンは核酸代謝における分解物として知られていることから、Ｌ−ＯＨＰ２４時間曝露後における核酸代謝の変動および核酸代謝と関連の深い代謝物の変動をＬ−ＯＨＰ高感受性細胞（ＨＣＴ１１６）と低感受性細胞（ＤＬＤ−１）で比較解析した。その結果、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞において、核酸代謝経路上の多くの代謝物の細胞内レベルが上昇していることが明らかとなった（図９）。特に、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰは、ＨＣＴ１１６で細胞内レベルの顕著な上昇が認められ、ＤＬＤ−１ではＨＣＴ１１６ほどの細胞内レベルの顕著な変動は認められないか、若しくはコントロール群に比べて細胞内レベルが低下した。これらの代謝物について、２４時間Ｌ−ＯＨＰ曝露後のコントロール群に対する細胞内レベルの変動を両細胞で比べた場合、その比率（ＨＣＴ１１６／ＤＬＤ−１）はいずれも１．２以上であった。
一方、ＩＭＰは、ＤＬＤ−１でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められたが、ＨＣＴ１１６では細胞内レベルが低下し、２４時間Ｌ−ＯＨＰ曝露後のコントロール群に対する細胞内レベルの変動を両細胞で比べた場合、その比率（ＨＣＴ１１６／ＤＬＤ−１）は０．２６と極端に低かった。
前記の比率が０．８未満、或いは１．２以上を基準として核酸代謝上の物質を選抜した結果、ｄＴＭＰ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、ＩＭＰ、ＧＭＰ、ＣＤＰ、ＵＤＰ、ｄＣＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、ＮＡＤＰ+、ＡＴＰ及び／又はｄＧＴＰが抗がん剤感受性判定マーカーとして見出された。【００９６】
Ｌ−ＯＨＰ曝露後の経時的変化において両細胞間で差が大きかった代謝物、プトレシン、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｎ8−アセチルスペルミジン、スペルミン、および、実施例１において見出されたアルギニンがポリアミン代謝経路に属していることから、実施例１、２で得られたデータのうち、ポリアミン経路に関わる代謝物のデータに着目した。その結果、Ｌ−ＯＨＰ高感受性群と低感受性群の間でその細胞内レベルの違いが大きかった代謝物として、オルニチン、スペルミジンが得られた（図１０）。なお、図１１には、図１０のグラフの見方を示した。【００９７】
さらに、Ｌ−ＯＨＰ２４時間曝露後におけるその他の代謝物の変動をＬ−ＯＨＰ高感受性細胞（ＨＣＴ１１６）と低感受性細胞（ＤＬＤ−１）で比較解析した。その結果、Ｌ−ＯＨＰ高感受性細胞でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められる代謝物として、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｎ６−Ａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ、Ｎ−アセチル−β−アラニン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｇａｍｍａ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、Ｓ−Ｌａｃｔｏｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｃｙｓｔｅｉｃ  ａｃｉｄ、ｔｒａｎｓ−Ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、スペルミジン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｌａｕｒｉｃ  ａｃｉｄ、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄを見出した。また、Ｌ−ＯＨＰ低感受性細胞でＬ−ＯＨＰ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められる代謝物として、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、4−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅを見出した（図１２）。【００９８】
５−ＦＵ感受性の異なる２種類のヒト大腸癌細胞（高感受性：ＨＣＴ−１１６、低感受性：ＤＬＤ−１）について、５−ＦＵ ２４時間曝露後の細胞内メタボロームデータに着目し、５−ＦＵ曝露後に変動が認められた代謝物をピックアップした（図１３）。その結果、５−ＦＵ高感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められる代謝物として、Ａｓｐ、オルニチン、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ、ｂｅｔａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、２−Ａｍｉｎｏａｄｉｐｉｃ  ａｃｉｄ、ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｙｌｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｇｕａｎｏｓｉｎｅ、ＣＭＰ、ＵＭＰ、１−Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｏｓｉｎｅ、ＵＤＰ、ＣＴＰ、Ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ７−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｐｙｒｕｖｉｃ  ａｃｉｄ、Ｍａｌｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ1−アセチルスペルミン、Ｉｓｏｂｕｔｙｌａｍｉｎｅ、Ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄを見出した。また、５−ＦＵ低感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内レベルの顕著な上昇が認められる代謝物として、Ｓｅｒ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅを見出した。また、５−ＦＵ高感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内レベルの顕著な低下が認められる代謝物として、３−Ｍｅｔｈｙｌｈｉｓｔｉｄｉｎｅ、Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＰＲＰＰ、４−Ｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｏｌｅを見出した。さらに、５−ＦＵ低感受性細胞で５−ＦＵ曝露後細胞内レベルの顕著な低下が認められる代謝物として、Ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ、２，３−Ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｉｃ  ａｃｉｄ、Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｐｕｔｒｅｓｃｉｎｅ、Ｎ8−アセチルスペルミジン、プトレシン、スペルミジン、６−Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ＋を見出した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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