(57)【要約】  水と、レスベラトロールなどのヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子と、システインなどのチオール基を有する化合物と、を含む水系皮膚外用剤。
2012043680.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水と、ヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子と、チオール基を有する化合物と、を含む水系皮膚外用剤。
【請求項２】
前記ヒドロキシスチルベンが、レスベラトロール及びプテロスチルベンからなる群より選択された少なくとも１種である請求項１に記載の水系皮膚外用剤。
【請求項３】
前記チオール基を有する化合物が、システイン及びアセチルシステインからなる群より選択された少なくとも１種である請求項１又は請求項２記載の水系皮膚外用剤。
【請求項４】
ｐＨが、５．０〜７．０の範囲である請求項１〜請求項３のいずれか１項記載の水系皮膚外用剤。
【請求項５】
前記チオール基含有化合物の含有量が、ヒドロキシスチルベンのモル数の０．０１倍〜１０倍のモル数である請求項１〜請求項４のいずれか１項記載の水系皮膚外用剤。
【請求項６】
前記ヒドロキシスチルベンの含有量が、水系皮膚外用剤の全質量に対して０．００１質量％〜１０質量％である請求項１〜請求項５のいずれか１項記載の水系皮膚外用剤。
【請求項７】
多価アルコールを更に含む請求項１〜請求項６のいずれか１項記載の水系皮膚外用剤。
【請求項８】
前記カゼインナノ粒子の体積平均粒径が１０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲である請求項１〜請求項７のいずれか１項記載の水系皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水系皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒドロキシスチルベンはポリフェノールの一種であり、他のポリフェノール同様に抗酸化性を有する化合物である。ヒドロキシスチルベンは美白効果を有すること（特開平１−３８００９号公報参照）や皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化を防止することが知られている（特開２００８−８８１２３号公報参照）。またヒドロキシスチルベンは、近年、皮膚外用剤に配合されてきている。【０００３】
カゼインは天然の界面活性分子であり、水溶性乳化剤として用いることができる。このため、水溶性乳化剤としてカゼインを用いた技術が種々知られている。例えば、特開２００８−１７９５５１号公報には、脂溶性の抗酸化剤等を内包（含有）するカゼインナノ粒子が開示されている。この技術によれば、水溶液中で安定に存在することができ、また、抗酸化剤等を内包するカゼインナノ粒子は粒子径が小さいことにより透明性が高く、かつ、良好な皮膚浸透性を示すと記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
皮膚外用剤に使用されることもあるヒドロキシスチルベンは脂溶性であるため、水系の皮膚外用剤に配合する際には界面活性を有する物質によって水溶解性を付与する必要がある。しかしながら、一般的に用いられている合成界面活性剤には、皮膚刺激性の観点から改善の余地があり、このため、合成界面活性剤の代替成分について検討が行われている。
本発明は、ヒドロキシスチルベンを含有すると共に、経時安定性及び皮膚浸透性に優れた水系皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の各態様によれば以下の水系皮膚外用剤が提供される。
［１］  水と、ヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子と、チオール基を有する化合物と、を含む水系皮膚外用剤。
［２］  前記ヒドロキシスチルベンが、レスベラトロール及びプテロスチルベンからなる群より選択された少なくとも１種である［１］に記載の水系皮膚外用剤。
［３］  前記チオール基を有する化合物が、システイン及びアセチルシステインからなる群より選択された少なくとも１種である［１］又は［２］に記載の水系皮膚外用剤。
［４］  ｐＨが、５．０〜７．０の範囲である［１］〜［３］のいずれかに記載の水系皮膚外用剤。
［５］  前記チオール基含有化合物の含有量が、ヒドロキシスチルベンのモル数の０．０１倍〜１０倍のモル数である［１］〜［４］のいずれかに記載の水系皮膚外用剤。
［６］  前記ヒドロキシスチルベンの含有量が、水系皮膚外用剤の全質量に対して０．００１質量％〜１０質量％である［１］〜［５］のいずれかに記載の水系皮膚外用剤。
［７］  多価アルコールを更に含む［１］〜［６］のいずれかに記載の水系皮膚外用剤。
［８］  前記カゼインナノ粒子の平均粒径が１０ｎｍ〜２００ｎｍの範囲である［１］〜［７］のいずれかに記載の水系皮膚外用剤。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、ヒドロキシスチルベンを含有すると共に、経時安定性及び皮膚浸透性に優れた水系皮膚外用剤が得られる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本発明の実施例にかかるレスベラトロールの皮膚透過係数を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例にかかるプテロスチルベンの皮膚透過係数を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の水系皮膚外用剤は、水と、ヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子と、チオール基を有する化合物とを含む水系皮膚外用剤である。
【０００９】
カゼインナノ粒子に被輸送物質を内包したとき、カゼインナノ粒子の構造面での性質上、一般の低分子界面活性剤に内包される場合に比べて、被輸送物質が熱などによる影響を受けやすいことが判明した。被輸送物質としてヒドロキシスチルベンを用いた場合には、単に、ヒドロキシスチルベンをカゼインナノ粒子に内包させても、ヒドロキシスチルベンが熱などの影響を受けて、不安定となって経時安定性が低下する傾向があることも判明した。また、この場合、ヒドロキシスチルベンを含む水系皮膚外用剤の着色や凝集が生じやすくなり、また、皮膚浸透性との両立も困難となるおそれがあることもわかった。
【００１０】
本発明の水系皮膚外用剤では、チオール基を有する化合物と、ヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子とを有するので、カゼインナノ粒子に含有されるヒドロキシスチルベンの安定性が維持され、皮膚浸透性との両立が損なわれない。これにより、経時安定性及び皮膚浸透性に優れた水系皮膚外用剤を得ることができる。
以下、本発明について説明する。
【００１１】
なお、本明細書において「工程」との語は、独立した工程だけでなく、他の工程と明確に区別できない場合であっても本工程の所期の作用が達成されれば、本用語に含まれる。
また、本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
また、本発明において、組成物中の各成分の量について言及する場合、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合には、特に断らない限り、組成物中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
【００１２】
ヒドロキシスチルベンを含有するカゼインナノ粒子とは、カゼインにおける疎水部分にヒドロキシスチルベンが吸着されており、かつ平均粒子径（粒子の最大径に相当）がナノのオーダーであって、水中に分散している分散粒子を意味する。このカゼインナノ粒子は、水中にあっては、親水性部分を主として粒子外側に配置させ、疎水性部分を主として粒子内側に配置させ、水不溶性のヒドロキシスチルベンを、内側の疎水性部分に含み、構成されている。なお、ヒドロキシスチルベンの一部が粒子の外側に露出していてもよい。カゼインは、このような形態の粒子を構成し、水に不溶のヒドロキシスチルベンを水中に長期間にわたって安定的に分散させる。
【００１３】
カゼインナノ粒子に用いるカゼインは、その由来について特に限定されず、乳由来であっても、豆由来であってもよい。カゼインの例としては、α−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カゼイン、及びこれらの２種以上の混合物を挙げることができる。また、カゼインは、単独で前記水系皮膚外用剤中に存在していてもよく、アルカリ金属塩の形態で存在してもよい。カゼインは、アルカリ金属塩の形態であることが、分散性の観点から好ましく、中でも、水溶性が高いカゼインナトリウム塩（カゼインＮａ）であることがより好ましい。
【００１４】
カゼインナノ粒子に内包されるヒドロキシスチルベンの例としては、例えばモノ−、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタ−、オクタ−、ノナヒドロキシスチルベン、及びそれらのヒドロキシアルキル化誘導体が挙げられる。これらは単独で又は二種以上を混合して使用することができる。
本発明に用いられるヒドロキシスチルベンには、例えば４’−ヒドロキシスチルベン、２’，４’−ジヒドロキシスチルベン、３’，４’−ジヒドロキシスチルベン、４，４’−ジヒドロキシスチルベン、２’，４’，４−トリヒドロキシスチルベン、３’，４’，４−トリヒドロキシスチルベン、２，４，４’−トリヒドロキシスチルベン、３，４，４’−トリヒドロキシスチルベン、３，４’，５−トリヒドロキシスチルベン（レスベラトロールと称されるもの）、２’，３，４−トリヒドロキシスチルベン、２，３’，４−トリヒドロキシスチルベン、２’，２，４’−トリヒドロキシスチルベン、２，４，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２’，３，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４’，５−テトラヒドロキシスチルベン、２，３’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４，４’−テトラヒドロキシスチルベン、３，３’，４’，５，５’−ペンタヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’，６−ペンタヒドロキシスチルベン、２，３’，４，４’，６−ペンタヒドロキシスチルベン、２，２’，４，４’，６，６’−ヘキサヒドロキシスチルベン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１５】
また、前記ヒドロキシアルキル化誘導体としては、上記ヒドロキシスチルベンの１つ以上のヒドロキシ基を、炭素数１〜３のアルコキシ基に置換した誘導体が挙げられる。このようなヒドロキシアルキル化誘導体としては、４’−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシ−trans−スチルベン（プテロスチルベン）等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
なかでも、経時安定性の観点から、ヒドロキシスチルベンとしては、レスベラトロール、プテロスチルベン、又はこれらの混合物であることが好ましい。
【００１６】
ヒドロキシスチルベンの水系皮膚外用剤における含有量は、皮膚刺激性の観点から、水系皮膚外用剤の全質量に対して０．００１質量％〜１０質量％であることが好ましく、０．０１質量％〜１質量％であることがより好ましい。
また、安定性の観点から、ヒドロキシスチルベンの水系皮膚外用剤における含有量は、カゼインナノ粒子の全質量に対して０．００１質量％〜２０質量％であることが好ましく、０．０１質量％〜１０質量％であることがより好ましい。
【００１７】
水系皮膚外用剤における、ヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子の含有量は、カゼインナノ粒子が水に分散できる濃度であれば制限はなく、外用剤としての使用感の観点からは、皮膚外用剤の全質量に対して０．０１質量〜１０質量％であることがより好ましい。
【００１８】
本発明に用いられるチオール基を有する化合物（以下、「チオール基含有化合物」という）は、カゼインナノ粒子の安定性に寄与すると推定されるが、これに限定されない。チオール基含有化合物の例としては、例えばシステイン、アセチルシステイン、グルタチオン、及び、システイン残基を多く含む合成ペプチド等の、含硫アミノ酸及びそのペプチドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独でも２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１９】
水系皮膚外用剤におけるチオール基含有化合物の含有量（モル数）は、当該化合物が溶媒に分散できる濃度であれば制限は無いが、経時安定性及び皮膚浸透性の観点から、カゼインナノ粒子中のヒドロキシスチルベンのモル数に対して０．０１倍〜１０倍であることが好ましく、０．１倍〜５倍であることが好ましい。また、水系皮膚外用剤におけるチオール基含有化合物の含有量（質量％）は、安定性の観点から、皮膚外用剤の全質量の０．０００１質量％〜１０質量％、より好ましくは０．００１質量％〜１質量％であることがより好ましい。
【００２０】
本発明の水系皮膚外用剤は、水を必須構成要件とする。水系皮膚外用剤中の水の配合量は、水以外の成分の残量であって、おおむね７０質量％〜９０質量％である。
【００２１】
水系皮膚外用剤は、経時安定性の観点から、多価アルコールを含有してもよい。
前記多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、１，３−ブタンジオール、エチレングリコール、ショ糖、エリスリトール、キシリトール、グルコース、ガラクトース、ソルビトール、マルトトリオース、トレハロースなどを挙げることができる。これらは１種又は２種以上を組み合わせ使用することができる。
【００２２】
多価アルコールの水系皮膚外用剤全質量に対する含有量は、使用感の観点から、水系皮膚外用剤全質量に対して１質量％〜１０質量％が好ましく、より好ましくは１質量％〜８質量％である。
【００２３】
本発明の水系皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の水系皮膚外用剤に用いられる添加成分を配合することができる。このような添加成分の例としては、例えば、グリシンベタイン・尿素・中性アミノ酸・塩基性アミノ酸等の保湿剤、アラントイン等の薬効剤、セルロースパウダー・ナイロンパウダー・架橋型シリコーン末・架橋型メチルポリシロキサン・多孔質セルロースパウダー・多孔質ナイロンパウダー等の有機粉体、無水シリカ・酸化亜鉛・酸化チタン等の無機粉体、メントール・カンファー等の清涼剤などの他、植物エキス、ｐＨ緩衝剤、増粘剤、皮膚栄養剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、防腐剤、香料、殺菌剤、色素等、通常、その用途で使用される他の添加物を挙げることができる。
【００２４】
水系皮膚外用剤における、ヒドロキシスチルベンを含有したカゼインナノ粒子の平均粒子径は、通常は１〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０ｎｍ〜２００ｎｍであり、より好ましくは１０ｎｍ〜１００ｎｍであり、特に好ましくは２０ｎｍ〜５０ｎｍである。このような平均粒子径とすることによって、粒子の表面積が増大して高濃度でヒドロキシスチルベンを含有すると共に、優れた皮膚浸透効果を発揮することができる。
【００２５】
なお、カゼインナノ粒子の平均粒径は、市販の種々の粒度分布計等で計測可能であるが、粒径範囲及び測定の容易さから、動的光散乱法を適用したものとする。
動的光散乱を用いた市販の測定装置としては、ナノトラックＵＰＡ（日機装（株））、動的光散乱式粒径分布測定装置ＬＢ−５５０（（株）堀場製作所）、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株））等が挙げられる。
【００２６】
カゼインナノ粒子の粒径は、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００（大塚電子（株））を用いて測定した値であり、具体的には、以下のよう計測した値を採用する。
即ち、粒径の測定方法は、試料に含まれるカゼインの濃度が０．１質量％になるように純水で希釈を行い、石英セルを用いて測定を行う。粒径は、分散媒屈折率として１．３３３（純水）、分散媒の粘度として純水の粘度を設定したときの体積平均粒径として求めることができる。
【００２７】
本発明の水系皮膚外用剤のｐＨは、安定性、特に着色防止の観点から、ｐＨ５．０〜７．０であることが好ましく、ｐＨ５．５〜ｐＨ６．５あることがより好ましく、特にｐＨ５．８〜ｐＨ６．３であることが特に好ましい。
【００２８】
本発明の水系皮膚外用剤の製造方法としては、上述した各成分を含有していれば、特に制限はない。
【００２９】
ヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子は、特開２００８−１７９５５１号等の公知の方法を用いて作製することができる。
具体的には、カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、塩基性水性媒体中に注入する方法と、カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、攪拌しながら、ｐＨを下降させる方法が挙げられる。
【００３０】
カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、塩基性水性媒体中に注入する方法としては、シリンジを用いて行うことが簡便で好ましいが、注入速度、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。一般的には、注入速度は、１ｍＬ／ｍｉｎ〜１００ｍＬ／ｍｉｎで注入することができる。
塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃〜７０℃にすることができる。水性媒体の温度は、適宜設定することができるが、標準的には、０℃〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃〜６０℃にすることができる。
攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、１００ｒｐｍ〜３０００ｒｐｍにすることができ、好ましくは、２００ｒｐｍ〜２０００ｒｐｍである。
【００３１】
カゼインを塩基性水性媒体液に混合し、攪拌しながら、ｐＨを下降させる方法としては、酸を滴下するのが簡便で好ましいが、溶解性、温度、撹拌状態を満足する方法であれば特に限定しない。
塩基性水性媒体の温度は、適宜設定することができる。塩基性水性媒体の温度は、標準的には、０℃〜８０℃にすることができ、好ましくは、２５℃〜７０℃にすることができる。攪拌速度は、適宜設定することができるが、標準的には、１００ｒｐｍ〜３０００ｒｐｍにすることができ、好ましくは、２００ｒｐｍ〜２０００ｒｐｍにすることができる。
【００３２】
カゼインナノ粒子を作製するために用いられる水性媒体の例としては、有機酸または有機塩基の水溶液、無機酸または無機塩基の水溶液、及び緩衝液を挙げることができる。具体的には、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、フタル酸、トリフルオロ酢酸、モルホリノエタンスルホン酸、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸のような有機酸；トリス（ヒドロキシメチル）、アミノメタン、アンモニアのような有機塩基；塩酸、過塩素酸、炭酸のような無機酸；燐酸ナトリウム、燐酸カリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウムのような無機塩基を用いた水溶液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
上述した水性媒体の濃度は、約１０ｍＭから約１Ｍが好ましい。より好ましくは、約２０ｍＭから約２００ｍＭである。
【００３３】
塩基性水性媒体のｐＨは、８以上が好ましく、８〜１２が好ましい。より好ましくはｐＨ９〜１１である。ｐＨが高すぎると加水分解の懸念や取り扱い上の危険性があるため、上述の範囲が好ましい。
本発明において、カゼインをｐＨ８以上の塩基性水性媒体に混合させる温度は、０℃〜８０℃が好ましく、１０℃〜６０℃が好ましい。より好ましくは、２０℃〜４０℃である。
本発明に用いる酸性水性媒体のｐＨは、急激なｐＨ変化を防ぐ点からｐＨ３．５〜７．５であることが好ましく、ｐＨ５〜６であることがより好ましい。
【００３４】
本発明の水系皮膚外用剤の剤型としては、例えば、ローション、エッセンス、ゲル等が挙げられる。また、本発明の水系皮膚外用剤は、そのままで、あるいは懸濁剤、安定剤などを添加した状態で、軟膏剤、クリーム剤などの剤型で適用することができる。
【実施例】
【００３５】
以下、本発明を実施例にて詳細に説明するが、本発明はそれらに何ら限定されるものではない。【００３６】
［実施例１及び２、比較例１〜５］
実施例１及び２、比較例１〜５の各水系皮膚外用剤を、以下のようにして調製した。
（１）ヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子の調製
レスベラトロールを固形分中６質量％含有するブドウつるエキス（ACTICHEM社）を、１，３−ブチレングリコールで５％(w/w)となるように溶解し、レスベラトロール溶液を得た。
カゼインを、同量の１，３−ブチレングリコール中に分散し、ｐＨ１１に調整した１％（ｗ／ｗ）５０ｍＭクエン酸Ｎａを添加して、カゼインナノ分散液を得た。このカゼインナノ分散液のｐＨは７．２であった。【００３７】
それぞれ上記で得られたカゼインナノ分散液にレスベラトロール溶液を１／１０量（質量比）添加して、マグネティックスターラーでよく攪拌・分散した。得られた溶液はカゼインを０．９質量％、ヒドロキシスチルベンを約０．０３質量％含む溶液であった。
この溶液を、その後、０．２２μｍ程度のフィルターに通過させて、より透明で均一なヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子含有分散物を得た。
得られたカゼインナノ粒子含有分散物の作製直後の外観は、均一透明であり、平均粒子径は２７．５ｎｍであった。なお、ヒドロキシスチルベンの０．０３質量％含有する水溶液では、作製直後で既に白濁（７００ｎｍにおける吸光度（以下、「Ｏ．Ｄ．７００ｎｍ」）が０．１以上）であった。【００３８】
なお平均粒子径は大塚電子の粒径アナライザー（ＦＰＡＲ１０００）を用いて、測定した値であり、具体的には、以下のよう計測した値を採用する。
即ち、粒径の測定方法は、試料に含まれるカゼインの濃度が０．１質量％になるように純水で希釈を行い、石英セルを用いて測定を行う。粒径は、分散媒屈折率として１．３３３（純水）、分散媒の粘度として純水の粘度を設定した時の体積平均径として求めた。作製直後のヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子は、安定に水溶化できた。【００３９】
（２）水系皮膚外用剤の調製
上記（１）で得られたカゼインナノ粒子含有分散物を攪拌しながら、表１に記載の各添加成分を、各添加成分の終濃度がヒドロキシスチルベンの１／７モル量となるように下記の処方に添加し（比較例５では添加なし）、クエン酸でｐＨ６に調整し、実施例１及び２並びに、比較例１〜５の水系皮膚外用剤を調製した。
カゼインナノ粒子含有分散物            １質量部
添加成分（表１参照）              0.001質量部〜0.01質量部
ブチレングリコール                  １．５質量部
水                                        残部
合計                                １００質量部【００４０】
［評価例１］
＜経時安定性の評価＞
ａ）  加熱経時試験
上記で得られた各水系皮膚外用剤を、４０℃に付して加速経時６ヶ月の着色阻害率と経時後外観を調べた。【００４１】
マイクロプレートリーダーで４００ｎｍ（ブランクは７００ｎｍ）の波長による吸光度（ＯＤ４００ｎｍ。ブランクはＯＤ７００ｎｍ）を測定し、水を添加したときの着色率との相対値差を以下の式（１）で算出して、割合に変換した値を着色阻害率と定義した。評価は、以下の通りとした。結果を表１に示す。
着色阻害率７０％以上  Ａ
着色阻害率４０％以上  Ｂ
着色阻害率４０％未満  Ｃ【００４２】
【数１】
2012043680.tif 000003
【００４３】
ｂ）  粒径変化
粒径の安定性は、ヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子の平均粒子径の変化率によって評価した。添加成分未添加の初期値である約３５ｎｍを基準とし、各水系皮膚外用剤の調製直後から１時間後の粒子径について、平均粒子径の変化率に基づいて以下のように評価した。なお平均粒子径は大塚電子の粒径アナライザー（ＦＰＡＲ１０００）を用いて測定した。結果を表１に示す。
変化率小：（１．５倍未満（約５０ｎｍ未満）    Ａ
変化率中：（１．５倍以上、かつ３倍未満（約１００ｎｍ未満））  Ｂ
変化率大：（３倍以上、１００ｎｍ以上）  Ｃ
とした。【００４４】
【表１】
2012043680.tif 000004
【００４５】
表１に示されるように、システインおよびＮ−アセチルシステインは優れた着色阻害効果を有し、ヒドロキシスチルベンを内包するカゼインナノ粒子の粒径の安定性を高めることが分かる。【００４６】
［実施例３］
レスベラトロールをプテロスチルベンに置き換えたほかは、実施例２と同様にして、実施例３の水系皮膚外用剤を調製した。
［比較例６］
レスベラトロールをプテロスチルベンに置き換え、添加剤をトコフェロールに置き換えたほかは、実施例２と同様にして、比較例６の水系皮膚外用剤を調製した。【００４７】
［評価例２］
＜皮膚浸透性の評価＞
皮膚浸透性の評価は、皮膚透過試験によって行った。
対象の皮膚はヘアレスラット（８週齢）を使用した。２７ｍｍ径のバイオプシーでヘアレスラット腹部を円形に打ち抜いたものをフランツセル（Hanson Research）に固定した。ＰＢＳで１時間還流した後、レセプター液を、７ｍＬの３０ｖ／ｖ％エタノール配合ＰＢＳに置換し、実施例２、実施例３、比較例３及び比較例６の水系皮膚外用剤をそれぞれ０．９ｍＬに１０倍濃度のＰＢＳ（ｐＨ７．２〜７．４）を０．１ｍｌ添加した各製剤計１ｍＬを、それぞれドナー液に添加した。製剤はＰＢＳでドナーとレセプター液の塩強度を調整したものを用いた。【００４８】
レセプター液を攪拌しながら、ウォータージャケットを用いて３２℃に保ち、経時的にレセプター液を回収した。このレセプター液を下記条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析し透過したヒドロキシスチルベンを定量した。
試験時においてネガティブコントロールとしてＰＢＳ液、対象として一般的な可溶化剤であるＰＥＧ４０硬化ひまし油（ＨＣＯ−４０；ニッコーケミカル）でヒドロキシスチルベンを可溶化した溶液（以下、ＨＣＯ−４０可溶化物と称する）を用いた。ＨＣＯ−４０可溶化物は約０．０３質量％のヒドロキシスチルベンを含むように調整した。【００４９】
ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８  ５μｍ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ
流量：１ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：３１０ｎｍ
展開液：アセトニトリル／水＝２０／８０（容量比。酢酸０．１容量（体積）％、トリエタノールアミン０．１容量（体積）％を含む）【００５０】
それぞれの製剤における皮膚透過率は、以下の皮膚透過計数（Ｐ値）によって行った。Ｐ値の計算式は以下のとおりである。なお計算式において、Ｄ＝拡散係数、Ｋ＝分配係数、Ｃ＝薬物濃度、Ｌ＝膜厚、Ｊ＝フラックス、Ｐ＝透過係数、をそれぞれ示す。レセプター液中のヒドロキシスチルベンの経時による浸透結果を、図１及び図２に示す。【００５１】
【数２】
2012043680.tif 000005
【００５２】
図１及び２に示されるように、実施例の水系皮膚外用剤は比較例の水系皮膚外用剤と比べて、極めて高い皮膚浸透性を有することが分かる。【００５３】
［実施例４］
表２に示すＩ〜ＶＩ成分を含む美容液を調製し、４０℃で１ヶ月間加速経時試験した。その結果を表３に示す。なお平均粒子径は大塚電子の粒径アナライザー（ＦＰＡＲ１０００）を用いて上述と同様に測定した。なお、ＩＶ成分としては、実施例２で得られたレスベラトロール内包カゼインナノ粒子を使用した。
得られた美容液の４０℃加速経時の外観と平均粒径の変化に基づいて、各美容液を評価した。結果を表３に示す。なお、平均粒子径は大塚電子の粒径アナライザー（ＦＰＡＲ１０００）を用いて前述と同様に測定した。【００５４】
【表２】
2012043680.tif 000006
【００５５】
【表３】
2012043680.tif 000007
【００５６】
表３に示されるように、実施例４の美容液（水系皮膚外用剤）は、加熱経時に置いても着色や凝集が起こらず、経時安定性が高いことが分かった。
従って、本発明によれば、ヒドロキシスチルベンを含有すると共に、経時安定性及び皮膚浸透性に優れた水系皮膚外用剤を提供することができる。【００５７】
２０１０年９月２９日に出願された日本国特許出願第２０１０−２１９８９８号の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、および技術規格は、個々の文献、特許出願、および技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に援用されて取り込まれる。
【図１】
2012043680.tif 000008
【図２】
2012043680.tif 000009
【国際調査報告】
2012043680.tif 000010
2012043680.tif 000011
2012043680.tif 000012
2012043680.tif 000013