(57)【要約】  キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、ここで、脂質二重膜は、第１層および第２層に挟まれており、脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、キメラ嗅覚受容体は、脂質二重膜を貫通しており、アデニル酸シクラーゼは、脂質二重膜を貫通しており、第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ  ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されている、およびキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を第１層に供給し、ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）。
2012056683.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
【請求項６】
請求項２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項７】
請求項３に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項８】
請求項４に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項９】
請求項５に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項１３】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
【請求項１７】
請求項１３に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
【請求項１８】
請求項１４に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１９】
請求項１５に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項２０】
請求項１６に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項２１】
請求項１７に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項２２】
請求項１３に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項２３】
請求項１３に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項２５】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
【請求項２７】
請求項２５に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
【請求項３０】
請求項２６に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３１】
請求項２７に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３２】
請求項２８に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３３】
請求項２９に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３４】
請求項２５に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項３５】
請求項２５に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項３７】
配列番号：３６によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項３８】
配列番号：５１によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項３９】
配列番号：６０によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項４０】
配列番号：６９によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項４１】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されている、脂質二重膜。
【請求項４２】
請求項４１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項４３】
請求項４１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項４４】
請求項４１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項４５】
請求項４１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項４６】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されている、反応系。
【請求項４７】
請求項４６に記載の反応系であって、前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項４８】
請求項４６に記載の反応系であって、前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項４９】
請求項４６に記載の反応系であって、前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項５０】
請求項４６に記載の反応系であって、前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
嗅覚受容体は、三量体Ｇタンパク質結合型受容体（ＧＰＣＲ）であり、より具体的には、三量体Ｇタンパク質結合型７回膜貫通型受容体の１種である。【０００３】
図１は、細胞膜への匂い分子の刺激が電気信号に変換されるメカニズムを示す。【０００４】
嗅覚受容体は、細胞膜上に発現している膜タンパク質である。当該細胞膜は、主に、脂質二重膜からなる。脂質二重膜は、各層が高密度に並んだリン脂質分子からなる二層の構造を有している。この脂質二重膜が、図１の中央に模式的に示されている。図１において、脂質二重膜の上側が細胞外側であり、他方、脂質二重膜の下側が細胞内側である。当該嗅覚受容体の近傍に、三量体Ｇタンパク質が配置されている。【０００５】
当該三量体Ｇタンパク質は、αサブユニット（Ｇαｏｌｆ）、βサブユニット（Ｇβ）、およびγサブユニット（Ｇγ）から構成されるヘテロ三量体である。細胞は、アデニル酸シクラーゼを含有する。図１では、アデニル酸シクラーゼは、記号「ＡＣ」で記述されている。アデニル酸シクラーゼは、正確には、膜貫通型タンパク質である。タンパク質ＲＴＰ１Ｓ（配列番号：４２）は、嗅覚受容体が細胞膜に発現することを補助する機能を有する。なお、このタンパク質ＲＴＰ１Ｓは、上記メカニズムとは直接的には関連しない。【０００６】
次に、上記メカニズムが説明される。匂い分子が当該嗅覚受容体に結合する。当該結合は、三量体Ｇタンパク質をαサブユニット（Ｇαｏｌｆ）とβγ複合体とに分離させる。当該βγ複合体は、サブユニットＧβおよびＧγからなる。分離したＧαｏｌｆは、アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）を活性化させる。活性化したアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）に変換する。【０００７】
環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）は、イオンチャネル（具体的には、例えば、環状ヌクレオチド感受性イオンチャネル（ＣＮＧ））を活性化する。当該活性化は、細胞内から細胞外へ、または細胞外から細胞内へイオンが輸送されることをもたらす。このイオンの輸送の度合いが、電気信号として測定され得る。【０００８】
言うまでもないが、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の産生量が多ければ多いほど、より多くの電気信号が得られる。当該より多くの電気信号は、測定の精度を向上させる。【０００９】
ところで、β１アドレナリン受容体への刺激は、細胞内でのｃＡＭＰの産生量を増加させることが知られている。β１アドレナリン受容体の一部が組み込まれた多くの嗅覚受容体は、ｃＡＭＰを増加させ、それによって測定精度を向上させると予想される。このような嗅覚受容体、すなわち、他の受容体（この場合、β１アドレナリン受容体）の一部が組み込まれた嗅覚受容体は、「キメラ嗅覚受容体」と呼ばれる。【００１０】
（先行技術文献の開示内容）
非特許文献１は、アドレナリン受容体の細胞内ドメインＩＣ３およびＩＣ４が、三量体Ｇタンパク質との相互作用のために重要な領域であることを開示している。
非特許文献２は、ＩＣ３ドメインへの点変異導入、ＩＣ４ドメインへの点変異導入、ＩＣ４ドメインの欠損、またはロドプシン（Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ）のＩＣ４ドメインによるＩＣ４ドメインの置換によって、ｃＡＭＰの生産量が極端に低下することを開示している。
非特許文献３は、Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧのＮ末端にＦｌａｇ−ｔａｇが付加されたＦｌａｇ−Ｒｈｏ  ｍＯＲＥＧが、Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧよりも迅速に細胞膜表面に移行し、これによって嗅覚受容体の応答が高められたことを開示している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｎｏｅｌ  Ｍ．Ｄｅｌｏｓ  Ｓａｎｔｏｓ，Ｌｉｄｉａ  Ａ．Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｗ．Ｗｈｉｔｅ，Ｓｕｌｅｉｍａｎ  Ｗ．Ｂａｈｏｕｔｈ（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１，１２８９６−１２９０７
【非特許文献２】Ｋａｔｏ  Ａ．，Ｋａｔａｄａ  Ｓ．，Ｔｏｕｈａｒａ  Ｋ．（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，１０７，１２６１−１２７０
【非特許文献３】Ｋａｔａｄａ  Ｓ．，Ｔａｎａｋａ  Ｍ．，Ｔｏｕｈａｒａ  Ｋ．（２００４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，９０，１４５３−１４６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
しかし、本発明者らは、上記期待とは異なり、ほとんどのキメラ嗅覚受容体は、ｃＡＭＰの産生量の減少をもたらすことを見出した。
本発明の目的は、ｃＡＭＰの産生量を増加させるキメラ嗅覚受容体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
以下の方法Ａ１〜Ｃ６、キメラ嗅覚受容体Ｄ１〜Ｄ４、脂質二重膜Ｅ１〜Ｅ５、または反応系Ｆ１〜Ｆ５は、上記課題を解決する：
Ａ１．
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）。
Ａ２．
Ａ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
Ａ２−１．
Ａ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
Ａ２−２．
Ａ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
Ａ２−３．
Ａ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
Ａ３．
Ａ２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ａ３−１．
Ａ２−１に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ａ３−２．
Ａ２−２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ａ３−３．
Ａ２−３に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ａ４．
Ａ１に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
Ａ５．
Ａ１に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
Ａ６．
Ａ５に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
Ｂ１．
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）。
Ｂ２．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
Ｂ２−１．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
Ｂ２−２．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
Ｂ２−３．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
Ｂ３．
Ｂ２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｂ３−１．
Ｂ２−１に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｂ３−２．
Ｂ２−２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｂ３−３．
Ｂ２−３に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｂ４．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
Ｂ５．
Ｂ１に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
Ｂ６．
Ｂ５に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
Ｃ１．
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）。
Ｃ２．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールである、方法。
Ｃ２−１．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンである、方法。
Ｃ２−２．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンである、方法。
Ｃ２−３．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸である、方法。
Ｃ３．
Ｃ２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｃ３−１．
Ｃ２−１に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｃ３−２．
Ｃ２−２に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｃ３−３．
Ｃ２−３に記載の方法であって、
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
Ｃ４．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
Ｃ５．
Ｃ１に記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
Ｃ６．
Ｃ５に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
Ｄ１．
配列番号：３６によって表されるキメラ嗅覚受容体。
Ｄ２．
配列番号：５１によって表されるキメラ嗅覚受容体。
Ｄ３．
配列番号：６０によって表されるキメラ嗅覚受容体。
Ｄ４．
配列番号：６９によって表されるキメラ嗅覚受容体。
Ｅ１．
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されている。
Ｅ２．
Ｅ１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
Ｅ３．
Ｅ１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
Ｅ４．
Ｅ１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
Ｅ５．
Ｅ１に記載の脂質二重膜であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
Ｆ１．
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されている、反応系。
Ｆ２．
Ｆ１に記載の反応系であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
Ｆ３．
Ｆ１に記載の反応系であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
Ｆ４．
Ｆ１に記載の反応系であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
Ｆ５．
Ｆ１に記載の反応系であって、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、ｃＡＭＰの産生量を増加させるキメラ嗅覚受容体を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、細胞膜への匂い分子の刺激が電気信号に変換されるメカニズムを示す。
【図２】図２は、Ｒｈｏタグ（Ｒｈｏ−ｔａｇ）によって修飾されたＮ末端を有する嗅覚受容体を示す。
【図３】図３は、Ｒｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたＮ末端を有する嗅覚受容体を示す。
【図４】図４は、ＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換され、かつＮ末端がＲｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図５】図５は、ＥＣ１ドメイン〜ＩＣ１ドメインおよびＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のそれらに置換されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図６】図６は、ＥＣ１ドメイン〜ＩＣ１ドメインおよびＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のそれらに置換され、かつＮ末端がＲｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図７】図７は、ＴＭ７ドメインおよびＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のそれらに置換され、かつＮ末端がＲｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図８】図８は、ＩＣ３ドメインが、β１アドレナリン受容体のそれに置換され、かつＮ末端がＲｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図９】図９は、ＩＣ３ドメインおよびＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のそれらに置換され、かつＮ末端がＲｈｏタグおよびｍｙｃエピトープタグによって修飾されたキメラ嗅覚受容体を示す。
【図１０】図１０は、プラスミド（β１アドレナリン受容体）を調製する手順を示す。
【図１１】図１１は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）を調製する手順を示す。
【図１２】図１２は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）を調製する手順を示す。
【図１３】図１３は、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ１）を調製する手順を示す。
【図１４】図１４は、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ２）を調製する手順を示す。
【図１５】図１５は、β１アドレナリン受容体が導入された場合のｃＡＭＰ産生量およびβ１アドレナリン受容体が導入されなかった場合のｃＡＭＰ産生量を示す。
【図１６】図１６は、実施例１−１および比較例１−１〜比較例１−７による細胞内ｃＡＭＰの濃度の増加量を示すグラフである。
【図１７】図１７は、Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ、およびｃｈｉｍｅｒａ  １のオイゲノールに対する濃度―応答曲線を示すグラフである。
【図１８】図１８は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃＯｌｆｒ１６８）を調製する手順を示す。
【図１９】図１９は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃＯｌｆｒ１５）を調製する手順を示す。
【図２０】図２０は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃＯｌｆｒ６０９）を調製する手順を示す。
【図２１】図２１は、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ３）を調製する手順を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（用語の定義）
本明細書において用いられる用語は以下の通り定義される。
ＧＰＣＲ：Ｇタンパク質結合型受容体
ＩＣドメイン：細胞内ドメイン
ＥＣドメイン：細胞外ドメイン
ＴＭドメイン：細胞膜貫通ドメイン
Ｇαｏｌｆ：嗅上皮に特異的に発現するＧタンパク質αサブユニット
Ｇβ：Ｇタンパク質βサブユニット
Ｇγ：Ｇタンパク質γサブユニット
ＡＣ：アデニル酸シクラーゼ
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ｃＡＭＰ：環状アデノシン一リン酸
Ｒｈｏタグ：ウシロドプシンのＮ末端側より２０番目までのアミノ酸。より詳細には、配列番号：０１（ウシ視神経  ロドプシン由来）を参照せよ。
β１ＡＲ：β１アドレナリン受容体
ＲＴＰ１Ｓ：ＲＴＰ１（受容体輸送タンパク質１）のＮ末端から３６番目までのアミノ酸配列を削除した受容体輸送タンパク質。詳細は、配列番号：４２およびＭａｔｓｕｎａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００７，２８２，１５２８４を参照せよ。
ＣＮＧ：環状ヌクレオチド感受性イオンチャネル
プラスミド（ｘｘ）：タンパク質ｘｘをコードする遺伝子を含むプラスミド
遺伝子断片（ｘｘ）：タンパク質ｘｘをコードする遺伝子を含む遺伝子断片
ｍＯＲＥＧ：マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＢ０６１２２８．１）
Ｏｌｆｒ７３：  マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体、ｍＯＥＲＧと同一
Ｏｌｆｒ１６８：マウス由来２−ペンタノン認識嗅覚受容体（配列番号：４３を参照せよ）
Ｏｌｆｒ１５：マウス由来シクロヘキサノン認識嗅覚受容体（配列番号：４４を参照せよ）
Ｏｌｆｒ６０９：マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体（配列番号：４５を参照せよ）
【００１７】
マウス由来嗅覚受容体の例は、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体ｍＯＲＥＧ、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５、またはマウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９である。
【００１８】
マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体ｍＯＲＥＧは、オイゲノールを認識する。言い換えれば、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体ｍＯＲＥＧは、オイゲノールによって刺激される。オイゲノールは、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体ｍＯＲＥＧに対して匂い分子として機能する。マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体ｍＯＲＥＧは、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ７３と言われる。
【００１９】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８は、２−ペンタノンを認識する。言い換えれば、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８は、２−ペンタノンによって刺激される。２−ペンタノンは、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８に対して匂い分子として機能する。
【００２０】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５は、シクロヘキサノンを認識する。言い換えれば、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５は、シクロヘキサノンによって刺激される。シクロヘキサノンは、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５に対して匂い分子として機能する。
【００２１】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９は、バニリン酸を認識する。言い換えれば、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９は、バニリン酸によって刺激される。バニリン酸は、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９に対して匂い分子として機能する。
【００２２】
マウス由来嗅覚受容体は、７つの細胞膜貫通ドメイン（ＴＭ１−ＴＭ７）、４つの細胞外ドメイン（ＥＣ１−ＥＣ４）、および４つの細胞内ドメイン（ＩＣ１−ＩＣ４）から構成されている。すなわち、マウス由来嗅覚受容体のアミノ酸配列は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなる。
【００２３】
図２に示されるように、細胞外ＥＣ１ドメインのＮ末端が、Ｒｈｏタグで修飾されている。このＲｈｏタグは、ＭＮＧＴＥＧＰＮＦＹＶＰＦＳＮＫＴＧＶＶ（配列番号：０１）によって表されるアミノ酸配列からなる。Ｒｈｏタグは、マウス由来嗅覚受容体の細胞膜での発現を促進することが知られている（Ｋｒａｕｔｗｕｓｔ  Ｄ．，Ｙａｕ  Ｋ．Ｗ．，Ｒｅｅｄ  Ｒ．Ｒ．，（１９９９），Ｃｅｌｌ，９５，９１７−９２５）。
【００２４】
マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体（ｍＯＲＥＧ）は、配列番号：０２によって表されるアミノ酸配列（マウス嗅球由来）からなる。
マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体（ｍＯＲＥＧ）の各領域のアミノ酸配列は以下の通りである。アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端の方向に記載した。
ＥＣ１：ＭＴＬＳＤＧＮＨＳＧＡＶＦＴＬＬＧＦＳＤＹ
ＴＭ１：ＰＥＬＴＩＰＬＦＬＩＦＬＴＩＹＳＩＴＶＶＧＮＩＧＭＩＶＩＩＲＩ
ＩＣ１：ＮＰＫＬＨＩ
ＴＭ２：ＰＭＹＦＦＬＳＨＬＳＦＶＤＦＣＹＳＳＩＶＡＰＫＭＬＶＮＬＶＴ
ＥＣ２：ＭＮＲＧ
ＴＭ３：ＩＳＦＶＧＣＬＶＱＦＦＦＦＣＴＦＶＶＴＥＳＦＬＬＧＶＭＡＹＤＲＦＶＡＩ
ＩＣ２：ＲＮＰＬＬＹＴＶＡＭＳ
ＴＭ４：ＱＲＬＣＡＭＬＶＬＧＳＹＡＷＧＶＶＣＳＬＩＬＴＣ
ＥＣ３：ＳＡＬＮＬＳＦＹＧＦＮＭＩＮＨＦＦＣＥＦＳＳＬＬＳＬＳＲＳＤＴＳ
ＴＭ５：ＶＳＱＬＬＬＦＶＦＡＴＦＮＥＩＳＴＬＬＩＩＬＬＳＹＶＬＩ
ＩＣ３：ＶＶＴＩＬＫＭＫＳＡＳＧＲ
ＴＭ６：ＲＫＡＦＳＴＣＡＳＨＬＴＡＩＴＩＦＨＧＴＩＬＦＬＹＣＶＰＮＳＫＮ
ＥＣ４：ＳＲＨＴ
ＴＭ７：ＶＫＶＡＳＶＦＹＴＶＶＩＰＭＬＮＰＬＩＹＳＬＲＮＫＤ
ＩＣ４：ＶＫＤＴＶＫＫＩＩＧＴＫＶＹＳＳ
【００２５】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８は、配列番号：４３によって表されるアミノ酸配列からなる。
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒの各領域のアミノ酸配列は以下の通りである。アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端の方向に記載した。
ＥＣ１：ＭＥＫＷＮＱＳＳＳＤＦＩＬＬＧＬＬＰＱ
ＴＭ１：ＮＱＴＧＬＬＬＭＭＬＩＩＬＶＦＦＬＡＬＦＧＮＳＡＭＩＨＬＩＲＶ
ＩＣ１：ＤＰＲＬＨＴ
ＴＭ２：ＰＭＹＦＬＬＳＱＬＳＬＭＤＬＭＹＩＳＴＴＶＰＫＭＡＦＮＦＬＳ
ＥＣ２：ＧＱＫＮ
ＴＭ３：ＩＳＦＬＧＣＧＶＱＳＦＦＦＬＴＭＡＧＳＥＧＬＬＬＡＳＭＡＹＤＲＦ
ＩＣ２：ＶＡＩＣＨＰＬＨＹＰＩＲＭＳ
ＴＭ４：ＫＩＭＣＬＫＭＩＩＧＳＷＩＬＧＳＩＮＳＬＡＨＳＩ
ＥＣ３：ＹＡＬＨＩＰＹＣＨＳＲＳＩＮＨＦＦＣＤＶＰＡＭＬＰＬＡＣＭＤＴＷ
ＴＭ５：ＶＹＥＹＭＶＦＶＳＴＳＬＦＬＬＬＰＦＬＧＩＴＡＳＹＧＲＶ
ＩＣ３：ＬＦＡＶＦＨＭＲＳＫＥＧＫ
ＴＭ６：ＫＫＡＦＴＴＣＳＴＨＬＴＶＶＴＦＹＹＡＰＦＶＹＴＹＬＲＰＲＳＬＲ
ＥＣ４：ＳＰＴ
ＴＭ７：ＥＤＫＩＬＴＶＦＹＴＩＬＴＰＭＬＮＰＩＩＹＳＬＲＮＫ
ＩＣ４：ＥＶＬＧＡＭＴＲＶＬＧＴＦＳＳＭＫＰ
【００２６】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５は、配列番号：４４によって表されるアミノ酸配列からなる。
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５の各領域のアミノ酸配列は以下の通りである。アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端の方向に記載した。
ＥＣ１：ＭＥＶＤＳＮＳＳＳＧＳＦＩＬＭＧＶＳＤＨ
ＴＭ１：ＰＨＬＥＩＩＦＦＡＶＩＬＡＳＹＬＬＴＬＶＧＮＬＴＩＩＬＬＳＲＬ
ＩＣ１：ＤＡＲＬＨＴ
ＴＭ２：ＰＭＹＦＦＬＳＮＬＳＳＬＤＬＡＦＴＴＳＳＶＰＱＭＬＫＮＬＷＧ
ＥＣ２：ＰＤＫＴ
ＴＭ３：ＩＳＹＧＧＣＶＴＱＬＹＶＦＬＷＬＧＡＴＥＣＩＬＬＶＶＭＡＦＤＲＹ
ＩＣ２：ＶＡＶＣＲＰＬＨＹＭＴＶＭＮ
ＴＭ４：ＰＲＬＣＷＧＬＡＡＩＳＷＬＧＧＬＧＮＳＶＩＱＳＴ
ＥＣ３：ＦＴＬＱＬＰＦＣＧＨＲＫＶＤＮＦＬＣＥＶＰＡＭＩＫＬＡＣＧＤＴＳ
ＴＭ５：ＬＮＥＡＶＬＮＧＶＣＴＦＦＴＶＶＰＶＳＶＩＬＶＳＹＣＦＩ
ＩＣ３：ＡＱＡＶＭＫＩＲＳＶＥＧＲ
ＴＭ６：ＲＫＡＦＮＴＣＶＳＨＬＶＶＶＦＬＦＹＧＳＡＩＹＧＹＬＬＰＡＫＳＳ
ＥＣ４：ＮＱＳ
ＴＭ７：ＱＧＫＦＩＳＬＦＹＳＶＶＴＰＭＶＮＰＬＩＹＴＬＲＮＫ
ＩＣ４：ＥＶＫＧＡＬＧＲＬＬＧＫＧＲＧＡＳ
【００２７】
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９は、配列番号：４５によって表されるアミノ酸配列からなる。
マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９の各領域のアミノ酸配列は以下の通りである。アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端の方向に記載した。
ＥＣ１：ＭＳＹＳＮＨＳＳＴＳＦＦＬＴＧＬＰＧＬ
ＴＭ１：ＥＴＶＹＬＷＬＳＩＰＬＣＴＭＹＩＡＳＬＡＧＮＧＬＩＬＷＶＶＫＳ
ＩＣ１：ＥＰＳＬＨＱ
ＴＭ２：ＰＭＹＹＦＬＳＭＬＡＶＴＤＬＧＬＳＶＳＴＬＰＴＭＬＴＩＹＭＭＧ
ＥＣ２：ＶＳＥ
ＴＭ３：ＶＡＬＤＭＣＬＡＱＬＦＦＩＨＴＦＳＩＭＥＳＳＶＬＬＴＭＡＦＤＲＶＶＡＩ
ＩＣ２：ＳＳＰＬＨＹＡＴＩＬＴ
ＴＭ４：ＮＰＲＶＡＳＬＧＭＶＩＬＶＲＳＩＧＬＨＩＰＡＰＩ
ＥＣ３：ＭＬＫＫＬＰＹＣＱＫＲＨＬＳＨＳＹＣＬＨＰＤＶＭＫＬＡＣＴＤＴＲ
ＴＭ５：ＩＮＳＡＹＧＬＦＶＶＬＳＴＬＧＶＤＳＶＬＩＶＬＳＹＧＬＩ
ＩＣ３：ＬＹＴＶＬＳＩＡＳＫＴＥＲ
ＴＭ６：ＬＫＡＬＮＴＣＶＳＨＩＣＳＶＬＬＦＹＴＰＭＩＧＬＳＭＩＨＲＦＧ
ＥＣ４：ＫＷＡＳＰＣ
ＴＭ７：ＳＲＶＬＬＳＹＬＨＦＬＴＰＰＶＬＮＰＶＶＹＴＩＫＴＫ
ＩＣ４：ＱＩＲＱＲＩＷＲＩＦＲＣＧＧＲＳＩＧＨＩＱＧＨ
【００２８】
β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ）は、配列番号：３によって表されるアミノ酸配列からなる。
マウス由来嗅覚受容体と同様に、β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ）もまた、７つの細胞膜貫通領域（ＴＭ１−ＴＭ７）、４つの細胞外領域（ＥＣ１−ＥＣ４），および４つの細胞内領域（ＩＣ１−ＩＣ４）から構成されている。
【００２９】
β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ）の各領域のアミノ酸配列は以下の通りである。
ＥＣ１：ＭＧＡＧＡＬＡＬＧＡＳＥＰＣＮＬＳＳＡＡＰＬＰＤＧＡＡＴＡＡＲＬＬＶＬＡＳＰＰＡＳＬＬＰＰＡＳＥＧＳＡＰＬＳ
ＴＭ１：ＱＱＷＴＡＧＭＧＬＬＬＡＬＩＶＬＬＩＶＶＧＮＶＬＶＩＶＡＩＡＫ
ＩＣ１：ＴＰＲＬＱＴＬ
ＴＭ２：ＴＮＬＦＩＭＳＬＡＳＡＤＬＶＭＧＬＬＶＶＰＦＧＡＴＩＶＶＷ
ＥＣ２：ＧＲＷＥＹＧ
ＴＭ３：ＳＦＦＣＥＬＷＴＳＶＤＶＬＣＶＴＡＳＩＥＴＬＣＶＩＡＬＤＲＹＬＡＩＴ
ＩＣ２：ＬＰＦＲＹＱＳＬＬ
ＴＭ４：ＴＲＡＲＡＲＡＬＶＣＴＶＷＡＩＳＡＬＶＳＦＬＰＩＬＭ
ＥＣ３：ＨＷＷＲＡＥＳＤＥＡＲＲＣＹＮＤＰＫＣＣＤＦＶＴＮ
ＴＭ５：ＲＡＹＡＩＡＳＳＶＶＳＦＹＶＰＬＣＩＭＡＦＶＹＬＲＶＦＲＥＡＱ
ＩＣ３：ＫＱＶＫＫＩＤＳＣＥＲＲＦＬＴＧＰＰＲＰＰＳＰＡＰＳＰＳＰＧＰＰＲＰＡＤＳＬＡＮＧＲＳＳＫＲＲＰＳＲＬＶＡＬＲＥ
ＴＭ６：ＱＫＡＬＫＴＬＧＩＩＭＧＶＦＴＬＣＷＬＰＦＦＬＡＮＶＶＫＡＦ
ＥＣ４：ＨＲＤＬＶ
ＴＭ７：ＰＤＲＬＦＶＦＦＮＷＬＧＹＡＮＳＡＦＮＰＩＩＹＣＲＳＰＤ
ＩＣ４：ＦＲＫＡＦＱＲＬＬＣＣＡＲＲＡＡＣＲＲＲＡＡＨＧＤＲＰＲＡＳＧＣＬＡＲＡＧＰＰＰＳＰＧＡＰＳＤＤＤＤＤＤＡＧＡＴＰＰＡＲＬＬＥＰＷＡＧＣＮＧＧＴＴＴＶＤＳＤＳＳＬＤＥＰＧＲＱＧＦＳＳＥＳＫＶ
【００３０】
マウス由来嗅覚受容体およびβ１ＡＲと同様、キメラ嗅覚受容体もまた、ＥＣ１〜ＩＣ４の１５個のドメインからなる。
【００３１】
キメラ嗅覚受容体の各ドメインは、マウス由来嗅覚受容体に含まれる対応するドメインまたはβ１ＡＲに含まれる対応するドメインのいずれかから選択される。例えば、キメラ嗅覚受容体のＥＣ１ドメインは、マウス由来嗅覚受容体に含まれるＥＣ１ドメインまたはβ１ＡＲに含まれるＥＣ１ドメインのどちらかから選択される。同様に、キメラ嗅覚受容体のＴＭ１、ＩＣ１、ＴＭ２、ＥＣ２、ＴＭ３、ＩＣ２、ＴＭ４、ＥＣ３、ＴＭ５、ＩＣ３、ＴＭ６，ＥＣ４、ＴＭ７、およびＩＣ４ドメインは、マウス由来嗅覚受容体に含まれるＴＭ１、ＩＣ１、ＴＭ２、ＥＣ２、ＴＭ３、ＩＣ２、ＴＭ４、ＥＣ３、ＴＭ５、ＩＣ３、ＴＭ６，ＥＣ４、ＴＭ７、およびＩＣ４ドメインまたはβ１ＡＲに含まれるＴＭ１、ＩＣ１、ＴＭ２、ＥＣ２、ＴＭ３、ＩＣ２、ＴＭ４、ＥＣ３、ＴＭ５、ＩＣ３、ＴＭ６，ＥＣ４、ＴＭ７、およびＩＣ４ドメインのどちらかから、それぞれ、選択される。
【００３２】
従って、キメラ嗅覚受容体の理論上の個数は、２＾１５（２の１５乗、３２７６８）である。
【００３３】
β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ）は、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の産生量を増加させることが知られている。従って、上記のように得られるキメラ嗅覚受容体は、ｃＡＭＰの産生量を増加させることが期待された。しかし、本発明者らは、上記期待とは異なり、ほとんどのキメラ嗅覚受容体は、ｃＡＭＰの産生量を減少することを見出した。
【００３４】
本発明者らは、以下の（１）および（２）の条件が満たされたキメラ嗅覚受容体だけが環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の産生量を増加させることを見出した。
（１）ＲｈｏタグとＥＣ１ドメインとの間に、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号：０４、以下、「ｍｙｃエピトープタグ」という）のアミノ酸配列を挿入すること、および
（２）マウス由来嗅覚受容体のＩＣ４ドメインを、β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ）のＩＣ４ドメインに置換すること。
図４を参照せよ。
【００３５】
図４より明らかなように、キメラ嗅覚受容体のＩＣ４ドメインは、β１アドレナリン受容体のアミノ酸配列のＣ末端を含む。
【００３６】
（実験例）
上記事項を裏付ける実験例が、以下、説明される。
表１および表２は、実験例において用いられたプライマーを示す。
【表１】
2012056683.tif 000003
【表２】
2012056683.tif 000004
【００３７】
（プラスミド（Ｇαｏｌｆ）およびプラスミド（ＲＴＰ１Ｓ）の調製）
最初に、プラスミド（Ｇαｏｌｆ）およびプラスミド（ＲＴＰ１Ｓ）が調製された。
【００３８】
（プラスミド（Ｇαｏｌｆ）の調製）
Ｇαｏｌｆ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＹ１７９１６９．１）は、嗅球に局在することが知られている。そのため、Ｇαｏｌｆをコードする遺伝子も嗅球から調製された。マウスより嗅球が単離された。この単離された嗅球からｃＤＮＡが調製された。このｃＤＮＡ、プライマー２２、およびプライマー２３を用いるＰＣＲ法により、Ｇαｏｌｆ遺伝子が増幅された。
【００３９】
増幅されたＧαｏｌｆ遺伝子は、クローニング用のプラスミドにライゲーションされた。このクローニング用プラスミド、プライマー２４、およびプライマー２５を用いたＰＣＲ法が行われた。プライマー２４は制限酵素サイトＥｃｏＲＩを有していた。プライマー２５は制限酵素サイトＳａｌＩを有していた。
【００４０】
このようにして、制限酵素サイトＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを５’末端および３’末端に有するＧαｏｌｆ遺伝子が得られた。
【００４１】
得られたＧαｏｌｆ遺伝子は、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩにより処理された。処理後、Ｇαｏｌｆ遺伝子は、予め制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩにより処理された哺乳動物発現用プラスミドにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（Ｇαｏｌｆ）が得られた。
【００４２】
（プラスミド（ＲＴＰ１Ｓ）の調製）
Ｇαｏｌｆと同様、マウス由来ＲＴＰ１Ｓ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＥＵ０７０４１１）も、嗅球に局在することが知られている。そのため、ＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子も、Ｇαｏｌｆの場合と同様、マウスの嗅球から調製された。以下の点を除き、プラスミド（Ｇαｏｌｆ）の調製と同様にプラスミド（ＲＴＰ１Ｓ）が調製された：
【００４３】
プライマー２２およびプライマー２３からなるプライマーセットに代えて、プライマー２６およびプライマー２７からなるプライマーセットを用い、そして
【００４４】
プライマー２４およびプライマー２５からなるプライマーセットに代えて、プライマー２８およびプライマー２９からなるプライマーセットを用いた。
【００４５】
（参考例１：β１ＡＲ）
参考例１では、β１ＡＲによって提供されたｃＡＭＰの濃度が測定された。参考例１は、３工程、すなわち、工程１：プラスミド（β１ＡＲ）の調製、工程２：β１ＡＲの細胞膜への発現、および工程３：アゴニストによるｃＡＭＰの変化量の測定に大別される。
【００４６】
（工程１：プラスミド（β１アドレナリン受容体）の調製）
ラット心臓由来のＲＮＡを逆転写して得られたｃＤＮＡを用いるＰＣＲ法によって、β１アドレナリン受容体の遺伝子が増幅された。その調製手順が、図１０を参照して説明される。図１０は、β１アドレナリン受容体を発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（β１アドレナリン受容体）を調製する手順を示す。図１０に示されるように、上記ＰＣＲ法では、標的遺伝子（すなわち、β１アドレナリン受容体をコードする遺伝子）は２遺伝子断片に分割された。
【００４７】
２つの遺伝子断片を得るためのプライマーとして、プライマー１〜４が用いられた。図１０の左側に示される一方の遺伝子断片は、上記ｃＤＮＡ、プライマー１、およびプライマー２を用いるＰＣＲ法によって得られた。図１０の右側に示される他方の遺伝子断片は、上記ｃＤＮＡ、プライマー３、およびプライマー４を用いるＰＣＲ法によって得られた。図１０に示されるように、ｃＤＮＡは、制限酵素サイトＨｉｎｄＩＩＩを有していた。
【００４８】
得られた２つの遺伝子断片の各々がプラスミドへライゲーションされた。これらの２つのプラスミドを用いてＰＣＲ反応が行なわれた。一方の遺伝子断片のためのＰＣＲ反応では、プライマー５およびプライマー２が用いられた。プライマー５は、制限酵素サイトＥｃｏＲＩを有していた。他方の遺伝子断片のためのＰＣＲ反応では、プライマー３およびプライマー６が用いられた。プライマー６は、制限酵素サイトＳａｌＩを有していた。
【００４９】
増幅された一方の遺伝子断片の５’末端および３’末端は、それぞれ、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで処理された。増幅された他方の遺伝子断片の５’末端および３’末端は、それぞれ、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＳａｌＩで処理された。あらかじめ制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩで処理された発現ベクターに、これらの２つの遺伝子断片がライゲーションされた。このようにして、プラスミド（β１ＡＲ）が得られた。
【００５０】
（工程２：β１ＡＲの細胞膜への発現）
プラスミド（Ｇαｏｌｆ）、プラスミド（ＲＴＰ１Ｓ）、およびプラスミド（β１ＡＲ）がＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入された。
【００５１】
具体的には、ＤＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する３つのペトリ皿の各々に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を添加した。ＤＭＥＭ培地は、１０％ＦＢＳ（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎより入手）、３０ｕｎｉｔｓ／ｍＬペニシリン（明治製菓）、および３０ｍｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン（明治製菓）を含有していた。
【００５２】
添加後、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ペトリ皿の内壁に自発的に接着した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、一晩、培養された。
【００５３】
その後、リポフェクション法により上記３つのプラスミドを用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞が形質変換された。その後４８時間にわたりＨＥＫ２９３Ｔ細胞は培養され、配列番号０３によって表されるタンパク質（ラット心臓由来）からなるβ１ＡＲがＨＥＫ２９３Ｔ細胞の細胞膜上に発現された。
【００５４】
（工程３：アゴニストによるｃＡＭＰの変化量の測定）
発現されたβ１ＡＲを含有するＤＭＥＭ培地は、１ｍＭ  ＩＢＭＸ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を含有するＤＭＥＭ培地によって置換された。その後、３０分間、３７℃の温度下で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は培養された。略号「ＩＢＭＸ」とは、3-イソブチル-1-メチルキサンチンを意味する。ＩＢＭＸは、フォスフォジエステラーゼ阻害剤の１つである。ＩＢＭＸは不安定なｃＡＭＰを安定化させる。
【００５５】
その後、１ｍＭ  ＩＢＭＸを含有するＤＭＥＭ培地が、１ｍＭ  ＩＢＭＸを含むＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地（ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎより入手）に置換された。
【００５６】
上記Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地に、表３に示される濃度のイソプロテレノール水溶液がアゴニストとして添加された。１５分間、３７℃の温度下で、β１ＡＲを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を含有するＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地は放置された。
【００５７】
Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地が除去され、ペトリ皿の内壁にＨＥＫ２９３Ｔ細胞を残した。ペトリ皿に０．１Ｍ  ＨＣｌを加え、１０分間にわたり室温で放置した。このようにして、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞が溶出され、溶出液を得た。この溶出液を６００ｇで１０分間の遠心分離して、上清をサンプル溶液として得た。
【００５８】
サンプル溶液中に含まれるｃＡＭＰの量が、ＥＩＡ（ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏ  ａｓｓａｙ）法によって測定された。
【００５９】
３つのペトリ皿に含有される細胞の数の差を標準化させるために、得られた上清に含有されるタンパク質の量がＢＣＡ（ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）法により測定された。
【００６０】
以下の式に基づいて、ｃＡＭＰの濃度が算出された。
ｃＡＭＰの濃度＝測定されたｃＡＭＰの量／測定された上清のタンパク質の量
【００６１】
（参考例２）
参考例２では、プラスミド（β１ＡＲ）を用いなかったこと以外、参考例１と同様の実験が行われた。
【００６２】
表３は、参考例１および参考例２において算出されたｃＡＭＰの濃度を示す。図１５は、表３に基づいて作成されたグラフを示す。
【００６３】
【表３】
2012056683.tif 000005
【００６４】
表３および図１５から明らかなように、β１ＡＲが導入されない場合、細胞内ｃＡＭＰ濃度はあまり増加しなかった。一方、β１ＡＲはイソプロテレノールによって刺激され、細胞内のｃＡＭＰ濃度を顕著に増加させた。
【００６５】
（実験例１）
実験例１では、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体（ｍＯＲＥＧ）の遺伝子組換えタンパク質が産生された。
【００６６】
実験例１は、１つの実施例（実施例１−１）および７つの比較例（比較例１−１〜比較例１−７）を含む。
【００６７】
（比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）
図１１は、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）を調製する方法を示す。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）は、図２に示されるような、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現するために用いられる。以下、この嗅覚受容体は「Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ」と略記される。
【００６８】
（工程１：プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）の調製）
まず、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＡＢ０６１２２８．１）が、マウスゲノムＤＮＡを鋳型として用いるＰＣＲ法により増幅された。このＰＣＲ法では、プライマー７およびプライマー８が用いられた。増幅された遺伝子がクローニング用のプラスミドへライゲーションされ、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子をクローニングした。
【００６９】
次に、ＰＣＲ法により、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子の５’末端にＲｈｏタグをコードする遺伝子配列が付加された。Ｒｈｏタグをコードする遺伝子配列は６０個の塩基を有するため、Ｒｈｏタグをコードする遺伝子配列の付加は２つの工程（すなわち、第１工程および第２工程）に分割された。
【００７０】
第１工程では、上記ｍＯＲＥＧをコードするプラスミド、プライマー８、およびプライマー９を用いるＰＣＲ反応が行われ、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子の５’末端に３１塩基が付加された遺伝子断片が得られた。プライマー９が、当該３１塩基を有していた。
【００７１】
同様に、第２工程では、第１工程により得られた遺伝子断片、プライマー８、およびプライマー１０を用いるＰＣＲ反応が行われ、追加の２９塩基が５’末端に付加された。プライマー１０が当該追加の２９塩基を有していた。プライマー１０は、制限酵素サイトＥｃｏＲＩも有していた。
【００７２】
このようにして、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）をコードする遺伝子配列（６０塩基）がｍＯＲＥＧ遺伝子の５’末端に付加され、Ｒｈｏ−ｍＯＥＲＧ遺伝子断片を得た。このＲｈｏ−ｍＯＥＲＧ遺伝子断片が哺乳動物発現プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトへライゲーションされた。この哺乳動物発現プラスミドは、図１１に示されるように、３つの制限酵素サイトＮｈｅＩ、ＥｃｏＲＩ、およびＳａｌＩを有していた。このようにして、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）を得た。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）は、２つの制限酵素サイトＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩだけでなく、制限酵素サイトＮｈｅＩも有していた。
【００７３】
（工程２：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ（配列番号：３４）が細胞膜に発現された。
【００７４】
（工程３：アゴニストによるｃＡＭＰの変化量の測定）
イソプレテレノール水溶液に代えて、アゴニストとして３００μＭの濃度を有するオイゲノール水溶液が用いられたこと以外は、参考例１の工程３と同様に、ｃＡＭＰ濃度を測定した。
【００７５】
測定されたｃＡＭＰ濃度を元にして、以下の等式に従って濃度増加値が算出された。
濃度増加値＝（オイゲノールの濃度が３００μＭである場合に測定されたｃＡＭＰ濃度）−（オイゲノールの濃度が０μＭである場合に測定されたｃＡＭＰ濃度）
【００７６】
オイゲノールの濃度が０μＭである場合に測定されたｃＡＭＰ濃度は、６．３３×１０−３ｐｍｏｌ／μｇであった。
【００７７】
（比較例１−２：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）
図１２は、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）を調製する手順を示す。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）は、図３に示されるような、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現するために用いられる。この嗅覚受容体は「Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ」と略記される。
【００７８】
（工程１：プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）の調製）
【００７９】
図１２に示されるように、比較例１により得られたプラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）および２つのプライマーセットを用いて、２つの遺伝子断片を増幅させた。
【００８０】
一方の遺伝子断片は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）、プライマー１１、およびプライマー１２を用いたＰＣＲ法により増幅された。プライマー１２は、ｍｙｃエピトープタグをコードする遺伝子配列のアンチセンス鎖および制限酵素サイトＥｃｏＲＩを有していた。このようにして、Ｒｈｏタグの３’末端にｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）をコードする遺伝子配列のアンチセンス鎖が付加された当該一方の遺伝子断片が増幅された。
【００８１】
他方の遺伝子断片は、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）、プライマー１３、およびプライマー１４を用いたＰＣＲ法により増幅された。プライマー１３は、ｍｙｃエピトープタグの一部および制限酵素サイトＥｃｏＲＩを有していた。このようにして、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子の５’末端にｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）をコードする遺伝子配列の一部が付加された当該他方の遺伝子断片が増幅された。
【００８２】
このようにして増幅されたこれら２つの遺伝子断片が混合された。プライマー１１およびプライマー１４を用いるオーバーラップエクステンションＰＣＲ法により、これら２つの遺伝子断片が連結された。連結された遺伝子断片は、制限酵素ＮｈｅＩおよび制限酵素ＳａｌＩによって予め処理された哺乳動物発現用プラスミドにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が得られた。
【００８３】
（工程２：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧの細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ（配列番号：３５）が細胞膜に発現された。
【００８４】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度増加値が算出された。算出された濃度増加値は、表４および図１６に示される。
【００８５】
（実施例１−１：ｃｈｅｍｅｒａ１）
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ１）の調製）
図４に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ１は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧのＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインにより置換されたアミノ酸配列からなる。
【００８６】
図１３は、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ１を発現させるプラスミド、すなわち、プラスミド（ｃｈｅｍｅｒａ１）を調製する手法を示す。このプラスミド（ｃｈｅｍｅｒａ１）は、図４に示されるようなキメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ１を発現するために用いられる。以下、このキメラ嗅覚受容体は「ｃｈｉｍｅｒａ１」と略記される。
【００８７】
（工程１：プラスミド（ｃｈｅｍｅｒａ１）の調製）
図１３に示されるように、ＩＣ４ドメインを含有しないＲｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子断片が、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）、プライマー１１、およびプライマー１５を用いるＰＣＲにより増幅された。図１３の左上に示されるように、制限酵素サイトＳａｌＩおよびプライマー１５の間に挟まれる遺伝子配列が、ｍＯＲＥＧのＩＣ４ドメインに対応する。実施例１−１では、ｍＯＲＥＧのＩＣ４ドメインは増幅されなかった。
【００８８】
一方、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインをコードする遺伝子断片が、プラスミド（β１ＡＲ）、プライマー１６、およびプライマー１７を用いるＰＣＲにより増幅された。図１３の右上に示されるように、制限酵素サイトＳａｌＩおよびプライマー１６の間に挟まれる遺伝子配列が、β１ＡＲのＩＣ４ドメインに対応する。実施例１では、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメイン以外のβ１アドレナリン受容体のドメインは増幅されなかった。
【００８９】
これらの２つの遺伝子断片は、プライマー１１およびプライマー１７を用いるオーバーラップエクステンションＰＣＲによって連結された。
【００９０】
連結された遺伝子断片は、制限酵素ＮｈｅＩおよびＳａｌＩを用いて処理された。その後、予め制限酵素ＮｈｅＩおよびＳａｌＩを用いて処理された哺乳動物発現用プラスミドに、連結された遺伝子断片はライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ  １）が得られた。
【００９１】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａ１の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ１）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａ１（配列番号：３６）が細胞膜に発現された。
【００９２】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度増加値が算出された。算出された濃度増加値は、表４および図１６に示される。
【００９３】
（比較例１−３：ｃｈｉｍｅｒａ２）
図５に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ２は、β１ＡＲのＥＣ１〜ＩＣ１ドメイン、ｍＯＲＥＧのＴＭ２〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ２は、ｍＯＲＥＧのＥＣ１ドメイン、ＴＭ１ドメイン、ＩＣ１ドメイン、およびＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれらに置換されたアミノ酸配列からなる。
【００９４】
図１４は、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ２を発現させるプラスミド、すなわち、プラスミド（ｃｈｅｍｅｒａ２）を調製する手順を示す。このプラスミド（ｃｈｅｍｅｒａ２）は、図５に示されるような、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ２を発現するために用いられる。以下、このキメラ嗅覚受容体は「ｃｈｉｍｅｒａ２」と略記される。
【００９５】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ２）の調製）
図１４の左側に示されるように、プラスミド（β１ＡＲ）、プライマー１１、およびプライマー１８を用いるＰＣＲ法により、β１ＡＲのＥＣ１〜ＩＣ１ドメインをコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー１８は、制限酵素サイトＭｌｕＩを有していた。
同様に、図１４の左側に示されるように、プラスミド（β１ＡＲ）、プライマー１９、およびプライマー１７を用いるＰＣＲ法により、β１ＡＲのＩＣ４をコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー１９は、制限酵素サイトＸｂａＩを有していた。
このようにして得られた２つの遺伝子断片は、プライマー１１およびプライマー１７を用いるオーバーラップエクステンションＰＣＲ法によって連結された。
【００９６】
連結された遺伝子断片は、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理した。その後、予め制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理された哺乳動物発現用プラスミドに、連結された遺伝子断片はライゲーションされ、図１４の左下に示されるプラスミドを得た。
【００９７】
一方、図１４の右側に示されるように、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）、プライマー２０、およびプライマー２１を用いるＰＣＲ法により、ｍＯＲＥＧのＴＭ２〜ＴＭ７ドメインをコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー２０は、制限酵素サイトＭｌｕＩを有していた。プライマー２１は、制限酵素サイトＸｂａＩを有していた。
【００９８】
得られた遺伝子断片は、制限酵素ＭｌｕＩおよびＸｂａＩにより処理された。その後、遺伝子断片は、図１４の左下に示されるプラスミドにライゲーションされた。このようにして、図１４の右下に示されるプラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ２）が得られた。
【００９９】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａ２の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ２）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａ２（配列番号：３７）が細胞膜に発現された。
【０１００】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度増加値が算出された。算出された濃度増加値は、表４および図１６に示される。
【０１０１】
（比較例１−４：ｃｈｉｍｅｒａ３）
図６に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ３は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、β１ＡＲのＥＣ１〜ＩＣ１ドメイン、ｍＯＲＥＧのＴＭ２〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａ３は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧのＥＣ１〜ＩＣ１ドメインおよびＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれらに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１０２】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ３）の調製）
図２１の左側に示されるように、プラスミド（β１アドレナリン受容体）、プライマー１１、およびプライマー１８を用いて、β１ＡＲのＥＣ１〜ＩＣ１ドメインをコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー１８は、制限酵素サイトＭｌｕＩを有していた。
【０１０３】
同様に、図２１の左側に示されるように、プラスミド（β１アドレナリン受容体）、プライマー１７、およびプライマー１９を用いて、β１ＡＲのＩＣ４ドメインをコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー１９は、制限酵素サイトＸｂａＩを有していた。プライマー１９は、プライマー１８の遺伝子配列の一部と相補的な遺伝子配列を有していた。
【０１０４】
このようにして得られた２つの遺伝子断片は、プライマー１１およびプライマー１７を用いるオーバーラップエクステンションＰＣＲ法によって連結され、連結された遺伝子断片を得た。
【０１０５】
一方、図２１の左下に示されるように、比較例１−２により得られたプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理され、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子配列が除去されたプラスミドが得られた。
【０１０６】
当該プラスミドに上記連結された遺伝子断片が上記プラスミドにライゲーションされ、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ  Ｎ−Ｃ）を得た。
【０１０７】
図２１の右側に示されるように、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ）、プライマー２０、およびプライマー２１を用いて、ｍＯＲＥＧのＴＭ２〜ＴＭ７ドメインをコードする遺伝子断片が増幅された。プライマー２０は制限酵素サイトＭｌｕＩを有していた。プライマー２１は制限酵素サイトＸｂａＩを有していた。
【０１０８】
増幅された遺伝子断片は上記プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ  Ｎ−Ｃ）にライゲーションされ、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ３）を得た。
【０１０９】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａ３の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａ３）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様の発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａ３（配列番号：３８）が細胞膜に発現された。
【０１１０】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度の増加量が算出された。算出された濃度の増加量は、表４および図１６に示される。
【０１１１】
（比較例１−５：ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７）
図７に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、ｍＯＲＥＧのＥＣ１〜ＥＣ４ドメイン、およびβ１ＡＲのＴＭ７〜ＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧのＴＭ７ドメインおよびＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれらに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１１２】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７）の調製）
配列番号：３９によって表されるアミノ酸配列を元にしてタカラバイオ（株）がｃｈｉｍｅｒａＴＭ７の遺伝子断片を合成した。合成されたｃｈｉｍｅｒａＴＭ７の遺伝子断片は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７）が得られた。
【０１１３】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に、ｃｈｉｍｅｒａＴＭ７（配列番号：３９）が細胞膜に発現された。
【０１１４】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度の増加量が算出された。算出された濃度の増加量は、表４および図１６に示される。
【０１１５】
（比較例１−６：ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３）
図８に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、ｍＯＲＥＧのＥＣ１〜ＴＭ５ドメイン、β１ＡＲのＩＣ３ドメイン、およびｍＯＲＥＧのＴＭ６〜ＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧのＩＣ３ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれに置換されたアミノ酸配列を有する。
【０１１６】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３）の調製）
配列番号：４０によって表されるアミノ酸配列を元にしてタカラバイオ（株）がｃｈｉｍｅｒａＩＣ３の遺伝子断片を合成した。合成されたｃｈｉｍｅｒａＩＣ３の遺伝子断片は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３）が得られた。
【０１１７】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３（配列番号：４０）が細胞膜に発現された。
【０１１８】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度の増加量が算出された。算出された濃度の増加量は、表４および図１６に示される。
【０１１９】
（比較例１−７：ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４）
図９に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、ｍＯＲＥＧのＥＣ１〜ＴＭ５ドメイン、β１ＡＲのＩＣ３ドメイン、ｍＯＲＥＧのＴＭ６〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧのＩＣ３ドメインおよびＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれらに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１２０】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４）の調製）
配列番号：４１のアミノ酸配列を元にしてタカラバイオ（株）がｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４をコードする遺伝子断片を合成した。合成されたｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４）が得られた。
【０１２１】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａＩＣ３−ＩＣ４（配列番号：４１）が細胞膜に発現された。
【０１２２】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例１−１：Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧの工程３と同様に、濃度の増加量が算出された。算出された濃度の増加量は、表４および図１６に示される。
【０１２３】
表４は、実施例１−１および比較例１−１〜１−７において算出された濃度増加値を示す。図１６は、表４を元にして作成されたグラフである。
【０１２４】
【表４】
2012056683.tif 000006
【０１２５】
表４から明らかなように、ｃｈｉｍｅｒａ１が用いられた場合に測定されたｃＡＭＰの濃度増加値は、その他のｍＯＲＥＧ由来の嗅覚受容体が用いられた場合に測定されたｃＡＭＰの濃度増加値よりもずっと高い。
【０１２６】
（オイゲノール濃度依存性）
表５は、比較例１−１、比較例１−２、および実施例１−１において、３０μＭ、３００μＭ、および１０００μＭの濃度を有するオイゲノール水溶液が用いられた場合における濃度増加値を示す。図１７は、表５を元にして作成されたグラフである。
【０１２７】
【表５】
2012056683.tif 000007
【０１２８】
表５から明らかなように、アゴニストとして用いられたオイゲノールの濃度に拘わらず、ｃｈｉｍｅｒａｌが用いられた場合に測定されるｃＡＭＰの濃度増加値は、他の嗅覚受容体が用いられた場合に測定されるｃＡＭＰの濃度増加値よりも高い。
【０１２９】
当業者は、アゴニストに応じて、アゴニストの濃度を適切に選択するだろう。
【０１３０】
（実験例２）
実験例２では、マウス由来２−ペンタノン認識嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８の遺伝子組換えタンパク質が産生された。
【０１３１】
実験例２は、１つの実施例（実施例２−１）および１つの比較例（比較例２−１）を含む。
【０１３２】
（比較例２−１：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）
図１８は、マウス由来２−ペンタノン認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８を発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）を調製する手順を示す。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）は、マウス由来２−ペンタノン認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８を発現するために用いられる。以下、この嗅覚受容体は「Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８」と略記される。図２で示される場合と同様に、嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、およびＯｌｆｒ１６８のＥＣ１〜ＩＣ４ドメインから構成されている。嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８は、配列番号：４９により表されるアミノ酸配列からなる。
【０１３３】
（工程１：プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）の調製）
図１８に示されるように、Ｏｌｆｒ１６８をコードする遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＢＣ１２７９６９．１）を有するプラスミドが、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから、ＩＤ：４０１３５０７０として購入された。Ｏｌｆｒ１６８をコードする遺伝子が、上記プラスミド、プライマー３０（配列番号：４６）、およびプライマー３１（配列番号：４７）をＰＣＲ法により増幅された。プライマー３０およびプライマー３１は、制限酵素サイトＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩをそれぞれ有していた。このようにして、配列番号：４８により表される遺伝子断片を得た。
【０１３４】
一方、比較例１−２により得られたプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理され、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子配列が除去されたプラスミドが得られた。このプラスミドに上記遺伝子断片がライゲーションされ、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）を得た。プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）は、配列番号：５７によって表される遺伝子配列を含有していた。
【０１３５】
（工程２：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８（配列番号：４９）が細胞膜に発現された。
【０１３６】
（工程３：アゴニストを用いたｃＡＭＰの変化量の測定）
オイゲノール水溶液に代えて、３０、１００、３００、１０００、および３０００μＭの濃度を有する２−ペンタノン水溶液がアゴニストとして用いられたこと以外は、比較例１−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。結果は表６に示される。
【０１３７】
（実施例２−１：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８）
図４に示される場合と同様に、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、Ｏｌｆｒ１６８のＥＣ１〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８のＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１３８】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８）の調製）
配列番号：５０によって示される遺伝子配列を元にしてタカラバイオ（株）がｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８をコードする遺伝子断片（配列番号：６７）を合成した。ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８の合成されたこの遺伝子断片は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８）が得られた。
【０１３９】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８（配列番号：５１）が細胞膜に発現された。
【０１４０】
（工程３：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８へのアゴニストの刺激によるｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例２−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。
【０１４１】
表６は、実施例２−１および比較例２−１において測定されたｃＡＭＰの濃度を示す。
【０１４２】
【表６】
2012056683.tif 000008
【０１４３】
表６から明らかなように、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８を用いて測定されるｃＡＭＰの濃度は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８が用いて測定されるｃＡＭＰの濃度よりもずっと高い。
【０１４４】
（実験例３）
実験例３では、マウス由来シクロヘキサノン認識嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５の遺伝子組換えタンパク質が産生された。
【０１４５】
実験例３は、１つの実施例（実施例３−１）および１つの比較例（比較例３−１）を含む。
【０１４６】
（比較例３−１：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）
図１９は、マウス由来シクロヘキサノン認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）を調製する方法を示す。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）は、図２に示されるようなマウス由来２−シクロヘキサノン認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現するために用いられる。以下、この嗅覚受容体は「Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５」と略記される。図２に示されるように、嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、Ｏｌｆｒ１５のＥＣ１〜ＩＣ４ドメインから構成されている。嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５は、配列番号：５８によって表されるアミノ酸配列からなる。
【０１４７】
（工程１：プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）の調製）
まず、Ｏｌｆｒ１５をコードする遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＢＣ１４６５３１）が、マウスゲノムＤＮＡを鋳型として用いるＰＣＲ法により増幅された。このＰＣＲ法では、プライマー３２（配列番号：５２）およびプライマー３３（配列番号：５３）が用いられた。このようにして、配列番号：５６によって表される遺伝子断片が得られた。
【０１４８】
この遺伝子断片が、クローニング用プラスミドにライゲーションされ、プラスミドを得た。
【０１４９】
このプラスミド、プライマー３４（配列番号：５４）、およびプライマー３５（配列番号：５５）を用いたＰＣＲ法により、この遺伝子断片が増幅された。プライマー３４（配列番号：５４）およびプライマー３５（配列番号：５５）は、それぞれ、制限酵素部位ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを有していた。
【０１５０】
一方、比較例１−２により得られたプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理され、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子配列が除去されたプラスミドが得られた。当該プラスミドに上記遺伝子断片がライゲーションされ、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）を得た。プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）は、配列番号：７０によって表される遺伝子配列を含有していた。
【０１５１】
（工程２：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５（配列番号：５８）が細胞膜に発現された。
【０１５２】
（工程３：アゴニストによるｃＡＭＰの変化量の測定）
オイゲノール水溶液に代えて、３０μＭ、１００μＭ、３００μＭ、１０００μＭ、および３０００μＭの濃度を有するシクロヘキサノン水溶液がアゴニストとして用いられたこと以外は、比較例１−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。結果は表７に示される。
【０１５３】
（実施例３−１：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５）
図３に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、Ｏｌｆｒ１５のＥＣ１〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５のＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１５４】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５）の調製）
配列番号：５９によって示される遺伝子配列を元にして、タカラバイオ（株）が、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５をコードする遺伝子断片（配列番号：６８）を合成した。合成された遺伝子断片ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５）が得られた。
【０１５５】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５（配列番号：６０）が細胞膜に発現された。
【０１５６】
（工程３：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５へのアゴニストの刺激によるｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例３−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。
【０１５７】
表７は、実施例３−１および比較例３−１において測定されたｃＡＭＰの濃度を示す。
【０１５８】
【表７】
2012056683.tif 000009
【０１５９】
表７から明らかなように、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５を用いて測定されるｃＡＭＰの濃度は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を用いて測定されるｃＡＭＰの濃度よりもずっと高い。
【０１６０】
（実験例４）
実験例４では、マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９の遺伝子組換えタンパク質が産生された。
【０１６１】
実験例４は、１つの実施例（実施例４−１）および１つの比較例（比較例４−１）を含む。
【０１６２】
（比較例４−１：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８）
図２０は、マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９を発現させるためのプラスミド、すなわち、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）を調製する方法を示す。このプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）は、図２に示されるような、マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９を発現するために用いられる。以下、この嗅覚受容体は「Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９」と略記される。図２に示されるように、嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、Ｏｌｆｒ６０９のＥＣ１〜ＩＣ４ドメインから構成されている。嗅覚受容体Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９は、配列番号：６４によって表されるアミノ酸配列からなる。
【０１６３】
（工程１：プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）の調製）
まず、マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９をコードする遺伝子を有するプラスミドが、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから、ＩＤ：４０１３５９９０として購入された。Ｏｌｆｒ６０９をコードする遺伝子が、上記プラスミド、プライマー３６（配列番号：６１）、およびプライマー３７（配列番号：６２）を用いるＰＣＲ法により増幅された。このＰＣＲ法では、プライマー３６（配列番号：６１）およびプライマー３７（配列番号：６２）が用いられた。プライマー３６（配列番号：６１）およびプライマー３７（配列番号：６２）は、制限酵素サイトＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩをそれぞれ有していた。このようにして、配列番号：６３によって表される遺伝子断片を得た。
【０１６４】
一方、比較例１−２により得られたプラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ）が、制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩを用いて処理され、ｍＯＲＥＧをコードする遺伝子配列が除去されたプラスミドが得られた。当該プラスミドに上記遺伝子断片がライゲーションされ、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）を得た。プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）は、配列番号：７１によって表される遺伝子配列を含有していた。
【０１６５】
（工程２：Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９（配列番号：６４）が細胞膜に発現された。
【０１６６】
（工程３：アゴニストによるｃＡＭＰの変化量の測定）
オイゲノール水溶液に代えて、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ、および３０μＭの濃度を有するバニリン酸水溶液がアゴニストとして用いられたこと以外は、比較例１−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。結果は表８に示される。
【０１６７】
（実施例４−１：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９）
図３に示されるように、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９は、Ｒｈｏタグ、ｍｙｃエピトープタグ、Ｏｌｆｒ６０９のＥＣ１〜ＴＭ７ドメイン、およびβ１ＡＲのＩＣ４ドメインから構成されている。言い換えれば、キメラ嗅覚受容体ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ６０９のＩＣ４ドメインがβ１アドレナリン受容体のそれに置換されたアミノ酸配列からなる。
【０１６８】
（工程１：プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９）の調製）
配列番号：６５によって表される遺伝子配列を元にしてタカラバイオ（株）がｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９の遺伝子断片（配列番号：６６）を合成した。合成された遺伝子断片ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９は、哺乳動物発現用プラスミドのＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩサイトにライゲーションされた。このようにして、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９）が得られた。
【０１６９】
（工程２：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９の細胞膜への発現）
プラスミド（β１ＡＲ）に代えて、プラスミド（ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９）が用いられたこと以外は、参考例１の工程２と同様に発現が行われた。このようにして、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９（配列番号：６９）が細胞膜に発現された。
【０１７０】
（工程３：ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９へのアゴニストの刺激によるｃＡＭＰの変化量の測定）
比較例４−１の工程３と同様に、ｃＡＭＰの濃度が測定された。
【０１７１】
表８は、実施例４−１および比較例４−１において測定されたｃＡＭＰの濃度を示す。
【０１７２】
【表８】
2012056683.tif 000010
【０１７３】
表８から明らかなように、ｃｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８を用いて測定されたｃＡＭＰの濃度は、Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８を用いて測定されたｃＡＭＰの濃度よりもずっと高い。
【０１７４】
以上、本発明を詳細に説明してきたが、前述の説明はあらゆる点において本発明の例示にすぎず、その範囲を限定しようとするものではない。本発明の範囲を逸脱することなく種々の改良や変形を行うことができることは言うまでもない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。また、当業者は、本発明の具体的な実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて均等な範囲を実施することができることが理解される。また、本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞または形容詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【産業上の利用可能性】
【０１７５】
本発明は、ｃＡＭＰの産生量を増加させるキメラ嗅覚受容体を提供する。本発明によるキメラ嗅覚受容体を用いて、匂い分子のような化学物質が高感度に検出または定量される。
【配列表フリーテキスト】
【０１７６】
配列番号：１  ウシ視神経由来ロドプシンＮ末端断片
配列番号：２  マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体（マウス嗅球由来）
配列番号：３  β１アドレナリン受容体（β１ＡＲ；ラット心臓由来）
配列番号：４  抗体標識用タグ
配列番号：５  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：６  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：７  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：８  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：９  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１０  β１アドレナリン受容体を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１１  マウスＲｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１２  マウスＲｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１３  マウスＲｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１４  マウスＲｈｏ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１５  マウスＲｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１６  マウスＲｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１７  マウスＲｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１８  マウスＲｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：１９  マウスｃｈｉｍｅｒａ  １を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２０  マウスｃｈｉｍｅｒａ  １を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２１  マウスｃｈｉｍｅｒａ  １  および２を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２２  マウスｃｈｉｍｅｒａ  ２を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２３  マウスｃｈｉｍｅｒａ  ２を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２４  マウスｃｈｉｍｅｒａ  ２を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２５  マウスｃｈｉｍｅｒａ  ２を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２６  Ｇαｏｌｆを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２７  Ｇαｏｌｆを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２８  Ｇαｏｌｆを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：２９  Ｇαｏｌｆを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：３０  ＲＴＰ１Ｓを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：３１  ＲＴＰ１Ｓを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：３２  ＲＴＰ１Ｓを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：３３  ＲＴＰ１Ｓを発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：３４  Ｒｈｏ−ｍＯＲＥＧ
配列番号：３５  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｍＯＲＥＧ
配列番号：３６  ｃｈｉｍｅｒａ  １
配列番号：３７  ｃｈｉｍｅｒａ  ２
配列番号：３８  ｃｈｉｍｅｒａ  ３
配列番号：３９  ｃｈｉｍｅｒａ  ＴＭ７
配列番号：４０  ｃｈｉｍｅｒａ  ＩＣ３
配列番号：４１  ｃｈｉｍｅｒａ  ＩＣ３−ＩＣ４
配列番号：４２  マウス由来タンパク質ＲＴＰ１Ｓ
配列番号：４３  マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８
配列番号：４４  マウス由来シクロヘキサノン認識嗅覚受容体
配列番号：４５  マウス由来バニリン酸認識嗅覚受容体
配列番号：４６  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：４７  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：４８  マウス由来遺伝子断片
配列番号：４９  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｏｌｆｒ１６８
配列番号：５０  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８を調製するための断片
配列番号：５１  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１６８
配列番号：５２  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：５３  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：５４  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：５５  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：５６  マウス由来遺伝子断片
配列番号：５７  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１６８をコードする断片
配列番号：５８  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ１５
配列番号：５９  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５を調製するための断片
配列番号：６０  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ１５
配列番号：６１  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ  ６０９を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：６２  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ  ６０９を発現するプラスミドを調製するためのプライマー
配列番号：６３  マウス由来遺伝子断片
配列番号：６４  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−ｏｌｆｒ６０９
配列番号：６５  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ６０９を調製するための断片
配列番号：６６  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ  ６０９をコードする断片
配列番号：６７  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ  １６８をコードする断片
配列番号：６８  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ  １５をコードする断片
配列番号：６９  ＣｈｉｍｅｒａＯｌｆｒ  ６０９
配列番号：７０  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ  １５をコードする断片
配列番号：７１  Ｒｈｏ−ｍｙｃ−Ｏｌｆｒ  ６０９をコードする断片
【図１】
2012056683.tif 000011
【図２】
2012056683.tif 000012
【図３】
2012056683.tif 000013
【図４】
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【図５】
2012056683.tif 000015
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2012056683.tif 000019
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2012056683.tif 000024
【図１５】
2012056683.tif 000025
【図１６】
2012056683.tif 000026
【図１７】
2012056683.tif 000027
【図１８】
2012056683.tif 000028
【図１９】
2012056683.tif 000029
【図２０】
2012056683.tif 000030
【図２１】
2012056683.tif 000031
【配列表】
2012056683000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年4月19日(2012.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項２】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項４】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項８】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項９】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１０】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１１】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１２】
請求項８〜１１のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項１３】
請求項８〜１１のいずれかに記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項１５】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１６】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１７】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１８】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項２０】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項２２】
配列番号：３６によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２３】
配列番号：５１によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２４】
配列番号：６０によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２５】
配列番号：６９によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２６】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２７】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２８】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２９】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項３０】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３１】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３２】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３３】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【手続補正書】
【提出日】平成24年7月27日(2012.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項２】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項３】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項４】
キメラ嗅覚受容体を用いてｃＡＭＰを産生する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、および
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を前記第１層に供給し、前記ＡＴＰからｃＡＭＰを産生する工程（ｂ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、
前記脂質二重膜はさらにイオンチャネルを具備し、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、かつ
前記工程（ｂ）において産生された前記ｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項８】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項９】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１０】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１１】
試料溶液がキメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有するかどうかを判定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層に含有される前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度が変化する場合には、前記試料溶液が前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子を含有すると判定する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記キメラ嗅覚受容体を刺激する分子がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１２】
請求項８〜１１のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項１３】
請求項８〜１１のいずれかに記載の方法であって、前記工程（ｂ）において産生されたｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項１５】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来オイゲノール認識嗅覚受容体であって、
前記化学物質がオイゲノールであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１６】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１６８であって、
前記化学物質が２−ペンタノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１７】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１５であって、
前記化学物質がシクロヘキサノンであり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１８】
試料溶液に含有され、かつキメラ嗅覚受容体を刺激する化学物質を定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜工程（ｃ）を具備する、方法：
前記キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって、第１層、脂質二重膜、および第２層を具備する反応系を準備する工程（ａ）、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、前記キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏタグ（配列番号：０１）−ｍｙｃエピトープタグ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４ドメインが、β１アドレナリン受容体のＩＣ４ドメインに置換されており、
前記試料溶液を前記第１層に供給し、前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層の前記イオンの濃度を測定する工程（ｂ）、および
前記測定されたイオンの濃度の変化量に基づいて、前記試料溶液に含有される前記化学物質を定量する工程（ｃ）、ここで
前記マウス由来嗅覚受容体が、マウス由来嗅覚受容体Ｏｌｆｒ６０９であって、
前記化学物質がバニリン酸であり、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が、配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、方法。
【請求項１９】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法であって、
前記Ｇタンパク質は、Ｇαｏｌｆ、Ｇβ、およびＧγを具備し、
前記工程（ｂ）において前記Ｇタンパク質は、前記Ｇαｏｌｆおよび複合体に分離し、
前記複合体は、前記Ｇβおよび前記Ｇγからなり、かつ
前記Ｇαｏｌｆが前記アデニル酸シクラーゼを活性化する、方法。
【請求項２０】
請求項１５〜１８のいずれかに記載の方法であって、前記工程（ｂ）において産生されたｃＡＭＰが前記イオンチャネルを活性化する、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、
前記イオンチャネルがカルシウムイオンチャネルである、方法。
【請求項２２】
配列番号：３６によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２３】
配列番号：５１によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２４】
配列番号：６０によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２５】
配列番号：６９によって表されるキメラ嗅覚受容体。
【請求項２６】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２７】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２８】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項２９】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系に具備される脂質二重膜であって、
前記脂質二重膜は、キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、かつ
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、脂質二重膜。
【請求項３０】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３１】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：５１によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３２】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６０によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【請求項３３】
試料溶液に含有される化学物質を検出または定量するために用いられる反応系であって、
前記反応系は、キメラ嗅覚受容体をコードする遺伝子を含むプラスミドを細胞に導入して、前記キメラ嗅覚受容体を前記細胞の細胞膜に発現させることによって得られる第１層、脂質二重膜、および第２層を具備し、
ここで、前記脂質二重膜は、前記第１層および前記第２層に挟まれており、
前記第１層および前記第２層の少なくともいずれか１層はイオンを含有しており、
前記脂質二重膜は、前記キメラ嗅覚受容体、イオンチャネル、およびアデニル酸シクラーゼを具備し、
前記キメラ嗅覚受容体は、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記アデニル酸シクラーゼは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記イオンチャネルは、前記脂質二重膜を貫通しており、
前記第２層は、ＡＴＰおよびＧタンパク質を含有しており、
前記Ｇタンパク質は、キメラ嗅覚受容体の一端の近傍に配置されており、
前記キメラ嗅覚受容体は、（Ｎ末端）−ＥＣ１ドメイン−ＴＭ１ドメイン−ＩＣ１ドメイン−ＴＭ２ドメイン−ＥＣ２ドメイン−ＴＭ３ドメイン−ＩＣ２ドメイン−ＴＭ４ドメイン−ＥＣ３ドメイン−ＴＭ５ドメイン−ＩＣ３ドメイン−ＴＭ６ドメイン−ＥＣ４ドメイン−ＴＭ７ドメイン−ＩＣ４ドメイン−（Ｃ末端）のアミノ酸配列からなるマウス由来嗅覚受容体由来であり、
前記キメラ嗅覚受容体のＮ末端は、Ｒｈｏ（配列番号：０１）−ｍｙｃ（配列番号：０４）のアミノ酸配列によって修飾されており、
前記ＩＣ４が、β１アドレナリン受容体のＩＣ４に置換されており、かつ
前記キメラ嗅覚受容体が配列番号：６９によって表されるアミノ酸配列からなる、反応系。
【国際調査報告】
2012056683.tif 000032
2012056683.tif 000033
2012056683.tif 000034
2012056683.tif 000035
2012056683.tif 000036
2012056683.tif 000037