(57)【要約】  蛍光検出キット（１）は、分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレン（１２）と、メンブレン（１２）を支持するバッキングシート（１６）と、メンブレン（１２）を収納するハウジング（２０）とを有している。メンブレン（１２）の励起光の照射を受ける側の面を表面（１２ａ）と、その反対面を裏面（１２ｂ）としたとき、メンブレン（１２）の裏面（１２ｂ）には、ハウジング（１２）の自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シート（１４）が貼付されている。
2012124508.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンを有し、
前記メンブレンの片面には、前記メンブレンが収納されるハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出シート。
【請求項２】
請求項１に記載の蛍光検出シートにおいて、
前記メンブレンには、前記メンブレンを支持するためのバッキングシートが貼付されていることを特徴とする蛍光検出シート。
【請求項３】
請求項２に記載の蛍光検出シートにおいて、
前記バッキングシートの自家蛍光が前記ハウジングの自家蛍光よりも光量が小さいことを特徴とする蛍光検出シート。
【請求項４】
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
前記メンブレンの励起光の照射を受ける側の面を表面と、その反対面を裏面としたとき、前記メンブレンの裏面には、前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項５】
請求項４に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記メンブレンには、前記メンブレンを支持するためのバッキングシートが貼付されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項６】
請求項５に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記バッキングシートの自家蛍光が前記ハウジングの自家蛍光よりも光量が小さいことを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項７】
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
前記ハウジングの励起光の照射を受ける面には、前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項８】
請求項７に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記メンブレンには、前記メンブレンを支持するためのバッキングシートが貼付されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項９】
請求項８に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記バッキングシートの自家蛍光が前記ハウジングの自家蛍光よりも光量が小さいことを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１０】
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングと、
前記ハウジングの自家蛍光または励起光を遮断する遮光シートとを有し、
前記メンブレンの励起光の照射を受ける側の面を表面と、その反対面を裏面としたとき、前記遮光シートが前記メンブレンの裏面と前記ハウジングとの間に配置されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１１】
請求項１０に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記メンブレンには、前記メンブレンを支持するためのバッキングシートが貼付されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１２】
請求項１１に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記バッキングシートの自家蛍光が前記ハウジングの自家蛍光よりも光量が小さいことを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１３】
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
分析対象物を励起させる波長帯域において前記ハウジングが自家蛍光を発光しない非発光材料で構成されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１４】
請求項１３に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記メンブレンには、前記メンブレンを支持するためのバッキングシートが貼付されていることを特徴とする蛍光検出キット。
【請求項１５】
請求項１４に記載の蛍光検出キットにおいて、
前記バッキングシートの自家蛍光が前記ハウジングの自家蛍光よりも光量が小さいことを特徴とする蛍光検出キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は蛍光検出シートおよび蛍光検出キットに関し、特にイムノクロマト法を用いて分析対象物を蛍光により検出するための蛍光検出シートおよび蛍光検出キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
イムノクロマトグラフ法は、その判定・測定に重厚な設備・機器を必要とせず、操作が簡便であり、たとえば、分析対象物を含む可能性のある検体溶液を滴下した後、約５分〜１０分間静置するだけで測定結果が得られる。
そのため、簡便・迅速・特異性の高い判定・測定手法として、多くの場面で、たとえば病院における臨床検査や研究室における検定試験などで、広く使用されている。
ただ、イムノクロマトグラフ法は、検出感度の面において、高感度検出法として知られている遺伝子増幅法（ＰＣＲ法）と比べて劣っており、高感度化が望まれている。【０００３】
高感度化を達成する手段として、イムノクロマト法用蛍光検出システムが提供されている（特許文献１参照）。
イムノクロマト法用蛍光検出システムとは、分析対象物と蛍光体物質とを結合させたイムノクロマト法試薬を、多孔質体（以下「メンブレン」という。）に滴下し、滴下された試薬が毛細管現象によりメンブレン内を移動し、捕捉物質固定部に固定化された分析対象物捕捉物質と接触することで前記試薬が前記捕捉物質固定部に凝縮するため、前記固定部に前記蛍光物質が蛍光発光する波長領域の励起光を照射し、前記蛍光物質が発生させた蛍光を検出部で検出することにより、被検物質の有無を定量的に判断する免疫測定法である。
特許文献１の段落００２８の記載によれば、メンブレンは、前記試薬を滴下する際に飛散の影響を防ぐために、好ましくはプラスチック材料製の保護ケース（以下「ハウジング」という。）に収納される（特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−１１５８２２号公報
【特許文献２】特開２０００−３５６６３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、メンブレンをハウジングに収納するという上記のような構成では、捕捉物質固定部に励起光を照射したとき、ハウジングが自ら蛍光を発光してしまい（自家蛍光を発生してしまい）、検出部において検出対象物以外の蛍光までが検出され、その結果検出感度が低下してしまうという課題がある。
この課題に対して、既に市販化されている蛍光イムノクロマトキットでは、メンブレンとハウジングとの間に支柱などを立設して十分な間隔を設け、ハウジングからの自家蛍光を抑制する方法が用いられている。ただ、この方法によれば、メンブレンを十分に固定することができないため、メンブレンにたわみが生じてしまうおそれがあることや、メンブレンとハウジングとの間に十分な間隔を設ける必要があるため、小型化が困難になるなどの課題がある。【０００６】
したがって、本発明の主な目的は、メンブレンにたわみが生じることや小型化が困難になるといった課題を克服したうえで、ハウジングからの自家蛍光の発生を抑制し、検出感度を向上させることができるイムノクロマト法用の蛍光検出シートおよび蛍光検出キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するため本発明の第１の態様によれば、
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンを有し、
前記メンブレンの片面には、前記メンブレンが収納されるハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出シートが提供される。【０００８】
本発明の第２の態様によれば、
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
前記メンブレンの励起光の照射を受ける側の面を表面と、その反対面を裏面としたとき、前記メンブレンの裏面には、前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出キットが提供される。【０００９】
本発明の第３の態様によれば、
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
前記ハウジングの励起光の照射を受ける面には、前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光シートが貼付されているか、または前記ハウジングの自家蛍光もしくは励起光を遮断する遮光材料がコートされていることを特徴とする蛍光検出キットが提供される。【００１０】
本発明の第４の態様によれば、
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングと、
前記ハウジングの自家蛍光または励起光を遮断する遮光シートとを有し、
前記メンブレンの励起光の照射を受ける側の面を表面と、その反対面を裏面としたとき、前記遮光シートが前記メンブレンの裏面と前記ハウジングとの間に配置されていることを特徴とする蛍光検出キットが提供される。【００１１】
本発明の第５の態様によれば、
分析対象物と特異的に結合する捕捉物質が固定化されたメンブレンと、
前記メンブレンを収納するハウジングとを有し、
分析対象物を励起させる波長帯域において前記ハウジングが自家蛍光を発光しない非発光材料で構成されていることを特徴とする蛍光検出キットが提供される。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ハウジングからの自家蛍光の発生が防止され、分析対象物の検出感度を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】蛍光検出キットの概略構成を示す分解斜視図である。
【図２】図１の側面断面図である。
【図３】図１の変形例（１）にかかる蛍光検出キットの概略構成を示す分解斜視図である。
【図４】図３の側面断面図である。
【図５】図１の変形例（２）にかかる蛍光検出キットの概略構成を示す分解斜視図である。
【図６】図５の側面断面図である。
【図７】図１の変形例（３）にかかる蛍光検出キットの概略構成を示す分解斜視図である。
【図８】図７の側面断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、図面を参照しながら本発明の好ましい実施形態について説明する。
本発明の好ましい実施形態にかかる蛍光検出キットは、公知のイムノクロマト法を用いて分析対象物を検出するのに使用され、特に蛍光発光を利用して分析対象物を検出するのに使用される。
【００１５】
図１に示すとおり、蛍光検出キット１は主に蛍光検出シート１０とハウジング２０とから構成されている。
蛍光検出シート１０はメンブレン１２とバッキングシート１６と遮光シート１４とから構成され、使用時においてハウジング２０に収納される。
メンブレン１２には分析対象物と特異的に結合する捕捉物質（抗体など）が固定されている。メンブレン１２は表面１２ａが励起光５０（図２参照）の照射を受ける面になっている。
メンブレン１２にはバッキングシート１６が貼付されており、メンブレン１２はバッキングシート１６により支持されている。バッキングシート１６はメンブレンの強度を向上させるシートである。バッキングシート１６は自家蛍光の光量がハウジング２０のそれより小さい。バッキングシート１６はたとえばポリエステルフィルムから構成される。バッキングシート１６はなくてもよい（必須ではない。）。
遮光シート１４はメンブレン１２の裏面１２ｂに対しバッキングシート１６を介して貼付され、メンブレン１２と一体になっている。遮光シート１４はハウジング２０からの自家蛍光と励起光５０（図２参照）とを遮断し、かつ、励起光５０（図２参照）を反射しない遮光材料で構成されている。遮光シート１４は、たとえばカーボンブラックを練りこんだポリエステルフィルムから構成される。
メンブレン１２の裏面１２ｂ（バッキングシート１６）には、遮光シート１４に代えて、ハウジング２０からの自家蛍光と励起光５０（図２参照）とを遮断しかつ励起光５０（図２参照）を反射しない遮光材料がコート（被覆）されてもよい。当該遮光材料としては、たとえばカーボンブラックを練りこんだポリエステル樹脂が使用される。
【００１６】
ハウジング２０は蛍光検出シート１０を収納するためのプラスチック製の筐体である。ハウジング２０は上蓋２２と下容器２４とから構成され、両者はヒンジ構造により一体成形されている。
上蓋２２の中央部には、メンブレン１２（図示略）上に表示される検出ラインを観察するための観察窓２６が形成されている。観察窓２６は着色透明であり、ハウジング２０と同一材料で一体成形されている。上蓋２２の内側には蛍光検出シート１０を上側から支持するための突起物２８が数箇所設けられている。上蓋２２の端部には、分析対象物を含む検体溶液４０（図２参照）を供給するための試料添加窓３０が設けられている。
下容器２４には、蛍光検出シート１０の４つの側面を固定するためのストリップガード３２が形成されている。ストリップガード３２は下容器２４と一体成形されており、下容器２４の底面から立設されている。
【００１７】
蛍光検出キット１を使用する場合は、検体溶液４０を試料添加窓３０からメンブレン１２に滴下する。検体溶液４０は通常、分析対象物（抗原など）やそれに結合する蛍光体付き標識体（標識抗体など）、緩衝液などから構成される。検体溶液４０は毛細管現象によりメンブレン１２中を展開し、その展開中において、分析対象物がメンブレン１２に固定された捕捉物質と特異的に結合される。
その後、一定時間が経過したら、観察窓２６を通じてメンブレン１２に向けて励起光５０を照射する。その結果、分析対象物がメンブレン１２の捕捉物質と特異的に結合している場合には、分析対象物と結合した標識体の蛍光体が励起され蛍光を発光し、検出ラインが出現する（分析対象物が検出される。）。
【００１８】
以上の実施形態によれば、蛍光検出シート１０のメンブレン１２の裏面１２ｂには遮光シート１４が貼付されているから、励起光５０が観察窓２６を通じてハウジング２０の下容器２４に到達するのが防止され、ハウジング２０からの自家蛍光の発生を抑制することができ、その結果分析対象物の検出感度を向上させることができる。
かかる構成によれば、ハウジング２０からの自家蛍光の発生を抑制するために、メンブレン１２とハウジング２０との間に支柱などを立設して十分な間隔を確保する必要もないから、メンブレン１２にたわみが生じることや蛍光検出キット１自体の小型化が困難になるといった従来の課題も克服することができる。
【００１９】
［変形例１］
図３および図４に示すとおり、変形例１にかかる蛍光検出キット３では、遮光シート１４がメンブレン１２およびバッキングシート１６から分離され、下容器２４の底面２４ａに直に貼付されている。下容器２４の底面２４ａが励起光５０の照射を受ける面になっている。
メンブレン１２がハウジング２０に収納される場合には、メンブレン１２がバッキングシート１６を介して遮光シート１４の上に重ねられる。
なお、下容器２４の底面２４ａには、遮光シート１４に代えて、ハウジング２０からの自家蛍光と励起光５０（図４参照）とを遮断しかつ励起光５０（図４参照）を反射しない遮光材料がコート（被覆）されてもよい。当該遮光材料としては、たとえばカーボンブラックを練りこんだポリエステル樹脂が使用される。
【００２０】
［変形例２］
図５および図６に示すとおり、変形例２にかかる蛍光検出キット５では、遮光シート１４がメンブレン１２およびバッキングシート１６から分離され、いずれの部材にも貼付されることなく単体で存在している。
メンブレン１２がハウジング２０に収納される場合には、遮光シート１４が下容器２４の底面２４ａに載置され、その上にメンブレン１２がバッキングシート１６を介して重ねられる。遮光シート１４はメンブレン１２の裏面１２ｂとハウジング２０との間に配置される。
【００２１】
［変形例３］
図７および図８に示すとおり、変形例３にかかる蛍光検出キット７では、ハウジング２０自体が分析対象物を励起させる波長帯域において自家蛍光を発光しない非発光材料から構成されており、遮光シート１４は用いられてはいない。当該非発光材料としては、たとえばカーボンブラックを練りこんだポリエステル樹脂が使用される。
メンブレン１２がハウジング２０に収納される場合には、メンブレン１２がバッキングシート１６を介して単に下容器２４の底面２４ａに載置される。
【００２２】
以上の変形例１〜３によっても、励起光５０が観察窓２６を通じてハウジング２０の下容器２４に到達するのが防止され、ハウジング２０からの自家蛍光の発生を抑制することができ、その結果分析対象物の検出感度を向上させることができる。
【００２３】
なお、ハウジング２０は、物質の種類によって自家蛍光の大きさが異なり、たとえばカーボンを練り込んだ素材で構成されれば自家蛍光の発光が抑制される。ただ、カーボンなどでハウジング２０を成形すると材料費、加工費が高くなるため、一般的にハウジング２０にはプラスチックなどの加工がしやすく安価なものが使用される。本実施形態にかかる蛍光検出キット１，３，５（変形例３の蛍光検出キット７は除く。）は、ハウジング２０として、励起光５０の照射を受けて自家蛍光を発光するハウジングが使用される場合に適用される。
詳しくは、ハウジング２０も含め、基本的には地球上に存在するすべての物質において自家蛍光が発光されるため、本実施形態にかかる蛍光検出キット１，３，５，７は、各部材の自家蛍光の光量の関係が式（１）の条件を満たす場合に、本願発明に適用されるものとする。
（遮光シート１４の自家蛍光）＜（メンブレン１２，バッキングシート１６の自家蛍光）＜（ハウジング２０の自家蛍光）  …  （１）
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明は、分析対象物の検出感度を向上させるのに好適に利用することができる。
【符号の説明】
【００２５】
１，３，５，７  蛍光検出キット
１０  蛍光検出シート
１２  メンブレン
１２ａ  表面
１２ｂ  裏面
１４  遮光シート
１６  バッキングシート
２０  ハウジング
２２  上蓋
２４  下容器
２４ａ  底面
２６  観察窓
２８  突起物
３０  試料添加窓
３２  ストリップガード
４０  検体溶液
５０  励起光
【図１】
2012124508.tif 000003
【図２】
2012124508.tif 000004
【図３】
2012124508.tif 000005
【図４】
2012124508.tif 000006
【図５】
2012124508.tif 000007
【図６】
2012124508.tif 000008
【図７】
2012124508.tif 000009
【図８】
2012124508.tif 000010
【国際調査報告】
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2012124508.tif 000012
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