(57)【要約】  本発明は、アンジオテンシン変換酵素阻害活性及び／又は線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着促進活性を有する新規物質を提供することを目的とする、下記の式（Ｉ）：  Ｘａａ１−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｘａａ２（配列番号：１）［ここで、Ｘａａ１及びＸａａ２は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示す］のアミノ酸配列からなるペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩である。
2012144546.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）：
Ｘａａ１−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｘａａ２（配列番号：１）
［ここで、Ｘａａ１及びＸａａ２は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示す］
のアミノ酸配列からなるペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩。
【請求項２】
前記ペプチドが、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（配列番号：２）、Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ（配列番号：３）、又はＡｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（配列番号：４）で示されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む、組成物。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種と、Ｌｅｕ―Ａｓｐ―Ｖａｌで表されるペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩とを含む、組成物。
【請求項５】
美容組成物である、請求項３又は４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のアミノ酸配列を有する新規ペプチド若しくはその誘導体又はそれらの塩に関する。本発明の新規ペプチド若しくはその誘導体又はそれらの塩は、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害するために、また細胞とコラーゲンとの間の接着を促進するために有益に利用され得る。
【背景技術】
【０００２】
アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、高血圧症や慢性心不全の治療のために広く一般に用いられている。アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、生体内で昇圧系のレニン−アンジオテンシン系と降圧系のカリクレイン−キニン系の両方に作用し、血管の拡張等を通じて降圧作用を発揮することが公知である。さらに、アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、心臓の前負荷と後負荷を共に軽減して、心血行動態を改善する作用を有することも知られている。また近年では、アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の産生を介して、アポトーシスの抑制や内皮修復、血管新生を促す作用があることも報告されている（非特許文献１）。【０００３】
これまでに、アンジオテンシン変換酵素阻害剤としては、エナラプリルやカプトプリル等の合成化合物が知られている他、食品由来の蛋白酵素分解物等が多数知られている。例えば、ゴマ蛋白質分解物（特許文献１）やブナハリタケエキス（特許文献２）等を添加した食品が、血圧が高めの方に適した特定保健用食品等として実用化されている。【０００４】
一方、生体の真皮内では、線維芽細胞が細胞外マトリクス中のコラーゲンと接着することが、コラーゲン線維束の格子状の立体構造を強化・安定化し、肌のハリや弾性を保つ一因となっている。そして、老化等の原因によって、この線維芽細胞のコラーゲンへの接着能力が低下すると、肌のハリや弾力の低下を引き起こすことが分かっている。更に、線維芽細胞自体も、コラーゲン線維に接着して足場を掴んでいなければ、その働き（例えば、種々の因子の産生等）が鈍くなることが知られている。以上のような理由から、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進する成分が探索されている。【０００５】
これまでに、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進させる素材としては、特定配列を有するペプチド（特許文献３）等が知られている。【０００６】
しかし、更なる有用なアンジオテンシン変換酵素阻害活性及び／又は線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着促進活性を有する素材の開発が求められている。そしてこれまでに、アンジオテンシン変換酵素阻害活性及び線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着促進活性の両者を併せ持つ素材は一切知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００６−５２０８０９号公報
【特許文献２】特開２００２−２９９９５号公報
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４／０１４１９３９号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】荒川博、Japanese Circulation Journal Vol.64, Suppl. 1,p438, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性及び／又は線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着促進活性を有する更なる有用な素材、とりわけ、アンジオテンシン変換酵素阻害活性と線維芽細胞のコラーゲンへの接着促進活性の両者を同時に併せ持ち、美容に非常に有用な新素材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討した結果、特定のアミノ酸配列を有する短鎖ペプチドが、高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性を発揮することができ、加えて該ペプチドが線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着促進活性をも発揮し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１１】
すなわち、本発明は、以下を提供する。【００１２】
[１]  下記の式（Ｉ）：
Ｘａａ１−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｘａａ２（配列番号：１）
［ここで、Ｘａａ１及びＸａａ２は存在してもしなくてもよく、存在する場合にはそれぞれ独立して任意のアミノ酸を示す］
のアミノ酸配列からなるペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩。【００１３】
[２]  前記ペプチドが、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（配列番号：２）、Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ（配列番号：３）、又はＡｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（配列番号：４）で示されるアミノ酸配列からなる、[１]に記載のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩。【００１４】
[３]  [１]又は[２]に記載のペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む、組成物。【００１５】
[４]  [１]又は[２]のペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種と、Ｌｅｕ―Ａｓｐ―Ｖａｌで表されるペプチド及びその誘導体、並びにそれらの塩とを含む、組成物。【００１６】
[５]  美容組成物である、[３]又は[４]に記載の組成物。【００１７】
[６]  外用組成物である、［３］〜[５]のいずれかに記載の組成物。【００１８】
[７]  皮膚の血色不良を改善し、皮膚のシワやタルミを改善し、かつ肌のハリや弾性を回復させるための、［３］〜[６]のいずれかに記載の組成物。【００１９】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2011-095945号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有する。本発明により、アンジオテンシン変換酵素阻害剤として用いることができる新素材が提供される。アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、高血圧症や慢性心不全の治療用の医薬として有用であるのみならず、血圧降下作用により生活習慣病を予防するための食品等にも有益に用いられ得る。また、アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、末梢血管拡張作用や血管新生促進作用を有することから、薄い皮膚の下で鬱血（血行不良）が起こることにより生じる目の下の青クマや、口唇の青紫色への変色等の血色不良をも有効に改善し得ることが期待できる。【００２１】
更に、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、線維芽細胞がコラーゲンに接着するのを効果的に促進することができる。従って、本発明により、老化等に起因した線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下を効果的に防止でき、線維芽細胞と細胞外マトリクスの結合を強化して、両者の引っ張り強度を増加させ、真皮を引き締め、皮膚のシワやタルミを改善し、肌のハリや弾性を回復させる新規素材が提供される。【００２２】
以上のように、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、アンジオテンシン変換酵素阻害活性による皮膚の血色改善作用と、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進することによる皮膚のシワ・タルミの改善作用と肌のハリ・弾性回復作用の両面から美容トラブルを総合的に解決できることが期待されるため、特に美容のための組成物に有益に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びRDLDV（Arg―Asp―Leu―Asp―Val）ペプチドの混合物によるアンジオテンシン変換酵素阻害を示す図である。
【図２】DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びRDLDVF（Arg―Asp―Leu―Asp―Val−Phe）ペプチドの混合物によるアンジオテンシン変換酵素阻害を示す図である。
【図３】DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びLDV（Leu―Asp―Val）ペプチドの混合物によるアンジオテンシン変換酵素阻害を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明を詳細に説明する。本明細書の全体にわたって、単数形の表現は、特に他に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書中において使用される用語は、特に他に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられていることが理解されるべきである。
【００２５】
本発明は、下記の式（Ｉ）：
Ｘａａ１−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｘａａ２（一文字略記：Ｘ１ＤＬＤＶＸ２、配列番号：１）で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、若しくはその誘導体又はそれらの塩を提供する。
【００２６】
上記配列番号１におけるＸａａ１及びＸａａ２（一文字略記：Ｘ１及びＸ２）は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には、それぞれ独立して、任意のアミノ酸を示す。該アミノ酸は、好ましくはα−アミノ酸であり、より好ましくは遺伝的にコードされるα−アミノ酸である。Ｘａａ１及びＸａａ２は、天然に存在するＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ及びＶａｌからなる群から任意に選択されるα−アミノ酸である。好ましくは、Ａｒｇ又はＰｈｅであるα−アミノ酸であり、より好ましくはＸａａ１がＡｒｇであり、Ｘａａ２がＰｈｅである。Ｘａａ１及びＸａａ２は、存在してもしなくても良いが、Ｘａａ１及びＸａａ２のうちの少なくとも一つは存在する方が好ましい。
【００２７】
上述のようなペプチドのうち、より確実に高い本発明の効果を得るためには、本発明のペプチドは、Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（一文字略記：ＤＬＤＶＦ、配列番号：２）、Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ（一文字略記：ＲＤＬＤＶ、配列番号：３）、又はＡｒｇ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（一文字略記：ＲＤＬＤＶＦ、配列番号：４）であることが好ましい。
【００２８】
本明細書中において、「ペプチドの誘導体」とは、例えば、ペプチドをアセチル化、パルミトイル化、ミリスチル化、アミド化、アクリル化、ダンシル化、ビオチン化、リン酸化、サクシニル化、アニリド化、ベンジルオキシカルボニル化、ホルミル化、ニトロ化、スルフォン化、アルデヒド化、環状化、グリコシル化、モノメチル化、ジメチル化、トリメチル化、グアニジル化、アミジン化、マレイル化、トリフルオロアセチル化、カルバミル化、トリニトロフェニル化、ニトロトロポニル化、又はアセトアセチル化した誘導体等をいう。
【００２９】
本明細書中において、「塩」とは、ペプチド又はその誘導体の薬理学的に許容される任意の塩（無機塩及び有機塩を含む）をいい、例えば、ペプチド又はその誘導体のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、有機酸塩（酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等）等が挙げられ、好ましくは、アンモニウム塩、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩又はトリフルオロ酢酸塩であり、より好ましくはアンモニウム塩、酢酸塩又はトリフルオロ酢酸塩である。
【００３０】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、水和物又は無水和物であってもよい。また、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、溶媒和物又は無溶媒和物であってもよい。
【００３１】
本発明のペプチドは、当該分野で公知の方法により作製され得る。例えば、本発明のペプチドは、化学合成方法（例えば、固相法（例えば、Ｆｍｏｃ法）、液相法等）により合成されてもよく、また遺伝子組換え発現等の方法により作製されてもよい。なお本発明のペプチドを構成するアミノ酸は、Ｌ−体であってもＤ−体であってもよいが、好ましくはＬ−体である。
【００３２】
さらに本発明のペプチドは、目的のアミノ酸配列を含むタンパク質のアミノ酸配列中から、目的のアミノ酸配列からなるペプチドをプロテアーゼ処理等の公知の手段によって切り出すことによって調製してもよい。
【００３３】
当業者は、プロテアーゼの配列特異性等を考慮して、目的のアミノ酸配列を含むタンパク質のアミノ酸配列中から、目的のアミノ酸配列からなるペプチドを切り出すために適切なプロテアーゼを適宜選択し得る。またタンパク質をプロテアーゼで加水分解する場合に用いられる反応条件は、特に制限されず、技術常識に従って当業者により適宜選択され得る。プロテアーゼによる加水分解処理後には、必要に応じ、当該分野で公知の手段によって精製することにより、目的のペプチドを精製することができる。
【００３４】
このように、天然のタンパク質をプロテアーゼで加水分解して得られるペプチドは、化学合成方法で製造する場合よりもコスト面から有利となる。さらに、天然のタンパク質をプロテアーゼで加水分解して得られるペプチドは、生体に対してより安全であると考えられる。従って、このようにして得られたペプチドは、生体への適用に対しより高い安全性が求められる内服剤、食品、敏感肌用化粧料、飼料などに好適に使用され得る。ここで、食品とは飲料品を含むすべての飲食物を含む。
【００３５】
本発明のペプチドの誘導体は、当該分野で公知の任意の方法により、当業者によって容易に作製され得る。
【００３６】
本発明のペプチドの塩もまた、当該分野で公知の任意の方法により、当業者によって容易に作製され得る。
【００３７】
本発明には、上記の特定配列を有するペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩のいずれもが用いられ得るが、より確実に高い本願効果を得るためには、好ましくはペプチド又はその塩が用いられ、特に好ましくはペプチドが用いられる。
【００３８】
以上のようにして得られた本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害し得る。アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害することにより、生体内で昇圧系のレニン−アンジオテンシン系と降圧系のカリクレイン−キニン系の両方に作用し、血管の拡張等を通じて降圧作用を発揮することが公知である。従って、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、高血圧症や慢性心不全の予防及び／又は治療のために、血圧降下作用により生活習慣病を予防するために、或いは血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善するために、有益に使用することができる。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、例えば、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)を基質として用い、該基質から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を測定することにより決定することができる。当業者ならば、このような方法によりアンジオテンシン変換酵素阻害活性が認められたペプチドが、高血圧症や慢性心不全の予防及び／又は治療、血圧降下作用による生活習慣病の予防、及び血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）の改善に効果があることを理解することができる。
【００３９】
また上記のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進し得る。生体の真皮内で線維芽細胞が細胞外マトリクス中のコラーゲンと接着することにより、線維芽細胞と細胞外マトリクスの結合を強化して、両者の引っ張り強度を増加させて真皮を引き締め、肌のハリや弾性が保持される。従って、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、前記細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する皮膚のシワやタルミを改善するため、或いは肌のハリや弾性を回復させるためにもまた有益に使用され得る。線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着の促進作用は、例えば、コラーゲンでコートした培養用プレート中で上記ペプチド等を含む培地を用いて皮膚線維芽細胞を培養した後、プレートを洗浄し、洗い流されずにプレート上のコラーゲンコートに残存した細胞を計測することにより測定することができる。当業者ならば、このような方法により線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進し得るペプチドが、線維芽細胞と細胞外マトリクスの結合を強化して、両者の引っ張り強度を増加させて真皮を引き締め、皮膚のシワやタルミを改善し、或いは肌のハリや弾性を回復させる効果を有することを理解することができる。
【００４０】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、２種類以上を組合せて用いてもよい。２種類以上を用いた場合、上記のアンジオテンシン変換酵素阻害活性が相乗的に高まる。従って、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は２種類以上を組合せて用いた場合、生体内で昇圧系のレニン−アンジオテンシン系と降圧系のカリクレイン−キニン系の両方に作用し、血管の拡張等を通じて降圧作用を相乗的に発揮する。その結果、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の２種類以上を組合せた混合物を、高血圧症や慢性心不全の予防及び／又は治療のために、血圧降下作用により生活習慣病を予防するために、或いは血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善するために、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を単独で用いる場合に比べ、より効果的に使用することができる。
【００４１】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の組合せとしては、X1DLDVX2（配列番号：１）で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、DLDVF（配列番号：２）、RDLDV（配列番号：３）、及びRDLDVF（配列番号：４）で表されるペプチドの２種類、３種類、４種類あるいはそれ以上の任意の組み合せが挙げられる。組合せにはX1DLDVX2（配列番号：１）で表されるアミノ酸配列からなるペプチド同士の組合せであって、X1及び／又はX2が互いに異なる同士の組合せも含まれる。
【００４２】
例えば、DLDVFペプチド及びRDLDVペプチドを組合せた混合物、DLDVFペプチド及びRDLDVFペプチドを組合せた混合物が挙げられる。さらに、X1DLDVX2（配列番号：１）で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、DLDVF（配列番号：２）、RDLDV（配列番号：３）、及びRDLDVF（配列番号：４）で表されるペプチドとLeu―Asp―Val（LDV)で表されるペプチドを組合せて混合物として用いても顕著な効果を発揮する。例えば、DLDVFペプチド及びLDVペプチドを組合せた混合物が挙げられる。
【００４３】
混合物の混合比は、限定されないが、２種類の組合せで用いる場合、一方のペプチドと他方のペプチドの混合重量比は、95：5〜5:95であり、好ましくは90:10〜10:90であり、さらに好ましくは80:20〜20:80であり、特に好ましくは75:25〜25:75である。例えば、DLDVFペプチド及びRDLDVペプチドを75:25〜25:75の混合比で混合すればよく、DLDVFペプチド及びRDLDVFペプチドを75:25〜25:75の混合比で混合すればよく、また、DLDVFペプチド及びLDVペプチドを75:25〜25:75の混合比で混合すればよい。
【００４４】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の２種類以上を組合せて用いた場合、例えば、アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、それぞれを単独で用いた場合に比べ、アンジオテンシン変換酵素活性を、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)を基質として用い、該基質から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を測定することにより決定した場合、IC50値が20％以上、好ましくは30％以上、さらに好ましくは40％以上、特に好ましくは50％以上低下し得る。
【００４５】
本発明はまた、前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む組成物を提供する。本発明において、ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む組成物という場合、ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の２種類以上の混合物を含む組成物も包含される。該組成物は、好ましくは美容組成物である。該組成物は上記の機能を有するペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含むため、美容効果を奏することができる。すなわち、上記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害するという作用及び皮膚維維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進するという作用の両方の作用を有する。前者の作用により、血管の拡張等を通じて、血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善するという効果を発揮し、後者の作用により、皮膚を引き締めて、皮膚のシワやタルミを改善し、或いは肌のハリや弾性を回復させるという効果を発揮する。両方の効果が相まって、顕著な美容効果を奏することができる。本発明においては、顔や体つきを美しくすること（例えば、美肌等の美容）を目的として用い得る組成物を、美容組成物という。
【００４６】
また、本発明の組成物は、医薬組成物、化粧料組成物、食品組成物又は飼料組成物として好適に使用され得る。好ましくは、美容のために用いられる医薬組成物、化粧料組成物、食品組成物及び飼料組成物である。さらに、本発明の組成物は、アンジオテンシン変換酵素阻害活性や、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着性に関連する生理状態解明のための研究試薬として好適に使用され得る。また、本発明の組成物はアンジオテンシン変換酵素阻害剤や線維芽細胞とコラーゲンの接着促進剤として用いることもできる。
【００４７】
医薬組成物としては、例えば、ヒト等の哺乳動物におけるアンジオテンシン変換酵素の活性に起因する疾患の予防剤及び／又は治療剤等が挙げられる。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む医薬組成物は、例えば、高血圧症及び／又は慢性心不全の予防剤及び／又は治療剤、並びに、血色不良症状（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）の予防剤及び／又は治療剤として使用され得る。更に、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む医薬組成物は、ヒト等の哺乳動物における線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する疾患の予防剤及び／又は治療剤等としても用いられ得る。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む医薬組成物は、例えば、加齢等により生じる線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する皮膚のシワ若しくはタルミの予防剤及び／又は治療剤として、前記接着能力低下に起因する皮膚のハリ若しくは弾力性の低下に対する予防剤及び／又は治療剤、或いは肌の引き締め剤等として使用され得る。
【００４８】
化粧料組成物としては、例えば、ヒト等の哺乳動物におけるアンジオテンシン変換酵素の活性に起因する状態の予防及び／又は改善のための化粧料が挙げられる。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む化粧料組成物は、例えば、血色不良状態（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）の予防及び／又は改善のための化粧料として使用され得る。更に、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む化粧料組成物は、ヒト等の哺乳動物における線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する状態の予防及び／又は改善のための化粧料としても用いられ得る。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む化粧料組成物は、例えば、加齢等により生じる線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する皮膚のシワ若しくはタルミの予防及び／又は改善のための化粧料として、前記接着能力低下に起因する皮膚のハリ若しくは弾力性の低下に対する予防及び／又は改善のための化粧料、或いは肌の引き締めのための化粧料等として使用され得る。
【００４９】
食品組成物としては、例えば、ヒト等の哺乳動物におけるアンジオテンシン変換酵素の活性に起因する状態の予防及び／又は改善のための食品が挙げられる。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む食品組成物は、例えば、高血圧症や慢性心不全の予防及び／又は改善のための食品、血圧降下作用により生活習慣病を予防及び／又は改善するための食品、或いは血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を予防及び／又は改善するための食品として有益に使用することができる。更に、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む食品組成物は、ヒト等の哺乳動物における線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する状態の予防及び／又は改善のための食品としても用いられ得る。具体的には、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む食品組成物は、例えば、加齢等により生じる線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する皮膚のシワ若しくはタルミの予防及び／又は改善のための食品、前記接着能力低下に起因する皮膚のハリ若しくは弾力性の低下に対する予防及び／又は改善のための食品、或いは肌の引き締めのための食品等として使用され得る。本発明の食品組成物は、健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品、健康補助食品等を含む。これらの組成物は美容健康食品を含む。特定保健用食品とは、食生活において特定の保健の目的で摂取をし、その摂取により当該保健の目的が期待できる旨の表示をする食品をいう。これらの食品には、特定の実施形態において、上記のような用途に用いられるものである旨の表示を付した食品として提供され得る。すなわち、美容のために用いられるものである旨の表示、美肌作用を有する旨の表示、肌質改善のために用いられるものである旨の表示、血色不良の予防又は改善のために用いられるものである旨の表示、顔色（例えば、目の下の青クマや、口唇の青紫色への変色等）の改善のために用いられるものである旨の表示、皮膚のハリや弾性を回復させるために用いられるものである旨の表示、皮膚のシワやタルミの予防又は改善のために用いられるものである旨の表示、肌の引き締めのために用いられるものである旨の表示、高血圧や慢性心不全の予防又は改善のために用いられるものである旨の表示、血圧降下作用により生活習慣病を予防又は改善するために用いられるものである旨の表示等の表示を付した食品として提供され得る。
【００５０】
飼料組成物としては、例えば、ウシ、ブタ、ニワトリ、ヒツジ、ウマ等の家畜や、イヌ、ネコ等のペット動物におけるアンジオテンシン変換酵素活性に起因する状態の予防用及び／又は改善用の飼料、或いは線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着能力低下に起因する状態の予防用及び／又は改善用の飼料等が挙げられる。
【００５１】
上記の本発明の組成物中の前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の含有量は、ペプチド等の種類、組成物の剤型等によっても異なるが、一般には、高い本願効果を得る観点から、0.00001〜80重量％、好ましくは0.0001〜70重量％、より好ましくは0.001〜50重量％、さらに好ましくは0.001〜20重量％、さらにより好ましくは0.01〜10重量％、さらにより好ましくは0.05〜10重量％、さらにより好ましくは0.1〜10重量％である。
【００５２】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む組成物は、前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の他に製剤分野や食品分野等において通常使用される担体、基剤、及び／又は添加剤等を本発明の目的を達成する範囲内で適宜配合して調製することができる。
【００５３】
担体としては、例えば、架橋ビニル重合体、脂質類等が１種又は２種以上組み合わせて用いられ得る。
【００５４】
基剤としては、例えば、水、油脂類、鉱物油類、ロウ類、脂肪酸類、シリコーン油類、ステロール類、エステル類、金属石鹸類、アルコール等が１種又は２種以上組み合わせて用いられ得る。
【００５５】
添加剤としては、例えば、可溶化成分、乳化剤、油分、安定化剤、増粘剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、分散剤、ｐＨ調整剤、保湿剤、紫外線吸収剤、キレート剤、経皮吸収促進剤、崩壊剤、可塑剤、緩衝剤、アミノ酸類、着色剤、香料等が１種又は２種以上組み合わせて用いられ得る。
【００５６】
さらに本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む組成物には、必要に応じて更なる有用な作用を付加するために、他の美白成分や、抗炎症成分、抗菌成分、細胞賦活化成分、収斂成分、ニキビ改善成分、生体成分合成促進成分、血行促進成分、保湿成分、老化防止成分等の各種成分が１種又は２種以上組み合わせて配合されてもよい。
【００５７】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む組成物は、外用剤(外用に供される化粧料を含む)、内服剤（経口摂取される食品及び飼料を含む）等の任意の剤型であり得るが、顔色（血色不良）や皮膚のシワ、タルミ、ハリ、弾力性、引き締め等に対してより直接的に高い効果を発揮させるためには、好ましくは外用剤として使用され得る。
【００５８】
外用剤としては、例えば、液状、乳液状、クリーム状、ローション状、ペースト状、ムース状、ジェル状、シート状(基材担持)、エアゾール状、スプレー状等の任意の形態で使用され得る。
【００５９】
化粧料としては、例えば、ローション、乳液、クリーム、オイル、パック等の基礎化粧料、またファンデーション、頬紅、口紅等のメーキャップ化粧料、さらに洗顔料、クレンジング、ボディ洗浄料等の洗浄料、入浴剤等の任意の形態で使用され得る。
【００６０】
内服剤（食品及び飼料を含む）としては、例えば、錠剤、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、ドライシロップ剤、液剤(ドリンク剤、懸濁剤、シロップ剤を含む)、ゲル剤、リポソーム剤、エキス剤、チンキ剤、レモネード剤、ゼリー剤等の任意の形態で使用され得る。
【００６１】
また本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を含む食品組成物は、食品衛生上許容される配合物を混合して、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品等に加工して利用することができる。さらに食品とする場合には、パン、麺、惣菜、食肉加工食品（例えば、ハム、ソーセージなど）、水産加工食品、調味料（例えば、ドレッシングなど）、乳製品、菓子（例えば、ビスケット、キャンディー、ゼリー、アイスクリームなど）、スープ、ジュースなどの任意の一般の食品形態としても提供され得る。このような形態にする場合、本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、目的とする食品の性質等に依存して、当業者に公知の方法により適宜配合され得る。
【００６２】
飼料としては、任意の形態で使用され得るため、特に限定は無い。
【００６３】
本発明はさらに、前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩、あるいはそれらを含む前記組成物を用いることを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害する方法及び線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進する方法を提供する。
【００６４】
該方法においては、前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩、あるいはそれらを含む前記組成物を、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害して所期の効果が得られる有効量以上、或いは、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進して所期の効果が得られる有効量以上で用いればよい。
【００６５】
すなわち、本発明の方法における前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の使用量は通常、外用剤の場合には、成人１人体重約50kgあたり好ましくは約0.1μg〜２g/日である。また、内服剤の場合における当該使用量は通常、成人1人体重約50kgあたり好ましくは約0.001〜10000mg/日、より好ましくは約1〜1000mg/日、さらに好ましくは約1〜100mg/日である。
【００６６】
本発明の方法は、さらに前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩あるいはそれらを含む前記組成物を皮膚に適用する工程を含んでいてもよい。この場合の前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の皮膚への適用量は、好ましくは約1ng〜500μg/cm2、より好ましくは約0.01〜50μg/cm2、さらに好ましくは約0.1〜10μg/cm2である。
【００６７】
前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩あるいはそれらを含む外用剤は、塗布、噴霧等により皮膚に局所的に適用することができる。
【００６８】
本発明はさらに、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害するため及び／又は線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進するための組成物、好ましくは外用剤として使用され得る組成物の製造のための、前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の使用を提供する。
【００６９】
前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩の使用量は、前記組成物中の含有量となるように使用すればよい。
【００７０】
本発明はさらに、アンジオテンシン変換酵素の活性を阻害するため及び／又は線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着を促進するための前記ペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩を提供する。
【００７１】
本発明は、上記組成物をヒト等の哺乳動物に投与して、血管の拡張等を通じて、血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善する方法を包含し、さらに、皮膚を引き締めて、皮膚のシワやタルミを改善し、或いは肌のハリや弾性を回復させる方法を包含する。また、本発明は、上記組成物の血管の拡張等を通じて、血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善するための薬剤、又は皮膚を引き締めて、皮膚のシワやタルミを改善し、或いは肌のハリや弾性を回復させるための薬剤の製造のための上記組成物の使用を包含する。さらに、本発明は、血管の拡張等を通じて、血色不良（例えば、目の下の青クマや口唇の青紫色への変色等）を改善するため、又は皮膚を引き締めて、皮膚のシワやタルミを改善し、或いは肌のハリや弾性を回復させるために用いられる上記組成物を包含する。
【実施例】
【００７２】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。【００７３】
実施例１：ペプチドの調製
１−１．DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド：
（１）  ペプチドの合成：
表題のペプチドを、ペプチド自動合成装置(島津製作所社製：ＰＳＳＭ８)を用いて、Ｆｍｏｃ法による固相合成法により合成した。具体的な手順は以下の通りである：まず固相合成用樹脂にＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（１−Ｔｒｔ）−ＯＨのＣ末端を結合させてから、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、次いでこの樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨをＰｈｅのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをＶａｌのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨをAspのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをLeuのＮ末端に導入した。次いで、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、この樹脂からペプチド鎖の切り出しを行った。ＴＦＡ(トリフルオロ酢酸)により、PheのＴｒｔ基とAspのｔＢｕ基を切断することにより脱保護した。最後に、分取ＨＰＬＣで未反応物を除去して精製することによりDLDVFペプチドを得た。【００７４】
（２）  ペプチドの純度検定：
得られた精製物を分析用逆相高速液体クロマトグラフィー［カラム：Inertsil ODS−3 (内径：2.1mm、長さ： 50mm)、GL Sciences社製、；移動相：溶媒Ａ（0.05％トリフルオロ酢酸）および溶媒Ｂ（0.05％トリフルオロ酢酸、100％アセトニトリル）のグラジエント（０分（溶媒Ｂ＝0％）〜25分（溶媒Ｂ＝50％））；流速：0.2 ml／分；検出法：波長 220nmにおける吸光度］に付したところ、14.8分に単一の鋭いピークが示され、純度は99.5％であった。【００７５】
１−２．RDLDV（Arg―Asp―Leu―Asp―Val）ペプチド：
（１）  ペプチドの合成：
表題のペプチドを、ペプチド自動合成装置(島津製作所社製：ＰＳＳＭ８)を用いて、Ｆｍｏｃ法による固相合成法により合成した。具体的な手順は以下の通りである：まず固相合成用樹脂にＦｍｏｃ−Ｖａｌ（１−Ｔｒｔ）−ＯＨのＣ末端を結合させてから、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、次いでこの樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをValのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨをＡｓｐのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをＬｅｕのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｐｍｃ)−ＯＨをＡｓｐのＮ末端に導入した。次いで、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、この樹脂からペプチド鎖の切り出しを行った。ＴＦＡ(トリフルオロ酢酸)により、ＶａｌのＴｒｔ基とＡｓｐのｔＢｕ基、ＡｒｇのＰｍｃ基を切断することにより脱保護した。最後に、分取ＨＰＬＣで未反応物を除去して精製することによりRDLDVを得た。【００７６】
（２）  ペプチドの純度検定
得られた精製物を分析用逆相高速液体クロマトグラフィー［カラム：Inertsil ODS−3 (内径：2.1mm、長さ： 50mm)、GL Sciences社製、；移動相：溶媒Ａ（0.05％トリフルオロ酢酸）および溶媒Ｂ（0.05％トリフルオロ酢酸、100％アセトニトリル）のグラジエント（０分（溶媒Ｂ＝0％）〜30分（溶媒Ｂ＝70％））；流速：0.2 ml／分；検出法：波長 220nmにおける吸光度］に付したところ、11.2分に単一の鋭いピークが示され、純度は99.2％であった。【００７７】
１−３．RDLDVF（Arg―Asp―Leu―Asp―Val―Phe）ペプチド：
（１）  ペプチドの合成：
表題のペプチドを、ペプチド自動合成装置(島津製作所社製：ＰＳＳＭ８)を用いて、Ｆｍｏｃ法による固相合成法により合成した。具体的な手順は以下の通りである：まず固相合成用樹脂にＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（１−Ｔｒｔ）−ＯＨのＣ末端を結合させてから、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、次いでこの樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨをＰｈｅのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをＶａｌのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨをＡｓｐのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨをＬｅｕのＮ末端に導入した。次いで保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、再度この樹脂を中和・洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｐｍｃ)−ＯＨをＡｓｐのＮ末端に導入した。次いで、保護基(Ｆｍｏｃ)をピペリジン処理で除去し、この樹脂からペプチド鎖の切り出しを行った。ＴＦＡ(トリフルオロ酢酸)により、ＰｈｅのＴｒｔ基とＡｓｐのｔＢｕ基、ＡｒｇのＰｍｃ基を切断することにより脱保護した。最後に、分取ＨＰＬＣで未反応物を除去して精製することによりRDLDVFを得た。【００７８】
（２）  ペプチドの純度検定：
得られた精製物を分析用逆相高速液体クロマトグラフィー［カラム：Inertsil ODS−3 (内径：2.1mm、長さ： 50mm) 、GL Sciences社製、；移動相：溶媒Ａ（0.05％トリフルオロ酢酸）および溶媒Ｂ（0.05％トリフルオロ酢酸、100％アセトニトリル）のグラジエント（０分（溶媒Ｂ＝0％）〜30分（溶媒Ｂ＝70％））；流速：0.2 ml／分；検出法：波長 220nmにおける吸光度］に付したところ、14.3分に単一の鋭いピークが示され、純度は99.9％であった。【００７９】
実施例２：アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定
上記実施例１で調製した各種ペプチドを用いて、アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定を行った。【００８０】
具体的には、各ペプチド濃度が1mg／mLになるように被験液を調製し、1倍、10倍、100倍、及び1000倍希釈液を用いてアンジオテンシン変換酵素阻害活性を測定した。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、ACE Kit-WSTキット（（株）同仁化学研究所製）を用いて、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を酵素法により検出し、プレートリーダーで450nmの吸光度を測定することにより評価した。ACE Kit-WSTキットは、付属のプロトコールに順じて使用した。この結果を、以下に示す。
【表１】
2012144546.tif 000003
【００８１】
上記の結果に示されるように、３種のいずれの被験ペプチドでも、高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が奏されることが明らかとなった。【００８２】
実施例３：コラーゲンコートへの線維芽細胞接着評価
上記実施例１で調製した各種ペプチドを用いて、コラーゲンコートへの線維芽細胞の接着促進効果について評価を行った。【００８３】
具体的には、先ず、ヒト正常皮膚由来線維芽細胞（クラボウ：KF-4009）をコラーゲンコートされたセルカルチャープレート(96well)に2×104cell /well濃度で播種した。次いで、各ペプチドが５μｇ／ｍｌ濃度となるように希釈したDulbecco’s Modified Eagle Medium（D-MEM；FCS10％・AB1％)を各ウェルに200μｌずつ添加し、３７℃、５％炭酸ガス及び９５％空気の環境下で20時間培養を行った。一方、ペプチドを添加していないD-MEM培地を200μｌ添加したもの用意して、コントロールとした。培養開始から4時間後にPBSで各ウェルの上清を洗い流し、Cell Counting Kit-8キット（（株）同仁化学研究所製）を用いて、各ウェル中でコラーゲンコートに接着して洗い流されずに残存した生細胞数を計測した。測定結果をもとに、コトロールにおける生細胞数を100％として各被験薬ペプチド添加群の生細胞数（％）を算出した。この結果を以下の表に示す。
【表２】
2012144546.tif 000004
【００８４】
上記の結果に示されるように、３種のいずれの被験ペプチドを添加した場合でも、コラーゲンコートへの線維芽細胞の接着が促進されることが明らかとなった。この結果から、DLDVF、RDLDV、RDLDVFペプチドを用いることにより、線維芽細胞とコラーゲンとの間の接着が促進され、線維芽細胞と細胞外マトリクスの結合を強化して、両者の引っ張り強度を増加させ、真皮を引き締め、老化等に伴う皮膚のシワやタルミが改善され、肌のハリや弾性を効果的に改善できる新規素材が提供されることが分かる。【００８５】
実施例４  アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定
上記実施例１で調製したペプチドを用いて、アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定を行った。【００８６】
具体的には、DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びRDLDV（Arg―Asp―Leu―Asp―Val）ペプチドを100：0、75：25、50：50、25：75、0：100となる比率で混合して、最終ペプチド濃度が合計1mg／mLになるように被験液を調製した。この1倍、10倍、100倍、及び1000倍希釈液を用いてアンジオテンシン変換酵素阻害活性を測定した。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、ACE Kit-WSTキット（（株）同仁化学研究所製）を用いて、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を酵素法により検出し、プレートリーダーで450nmの吸光度を測定することにより評価した。ACE Kit-WSTキットは、付属のプロトコールに順じて使用した。この結果を、図１に示す。【００８７】
図１に示されるように、DLDVFペプチドとRDLDVペプチドを組み合わせて添加することによって、相乗効果的に高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が発揮されることが認められた。【００８８】
実施例５  アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定
上記実施例１で調製したペプチドを用いて、アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定を行った。【００８９】
具体的には、DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びRDLDVF（Arg―Asp―Leu―Asp―Val−Phe）ペプチドを100：0、50：50、0：100となる比率で混合して、最終ペプチド濃度が合計1mg／mLになるように被験液を調製した。この1倍、10倍、100倍、及び1000倍希釈液を用いてアンジオテンシン変換酵素阻害活性を測定した。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、ACE Kit-WSTキット（（株）同仁化学研究所製）を用いて、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を酵素法により検出し、プレートリーダーで450nmの吸光度を測定することにより評価した。ACE Kit-WSTキットは、付属のプロトコールに順じて使用した。この結果を、図２に示す。【００９０】
図２に示されるように、DLDVFペプチドとRDLDVFペプチドを組み合わせて添加することによっても、相乗効果的に高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が発揮された。【００９１】
実施例６  アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定
上記実施例1で調製したペプチドを用いて、アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定を行った。【００９２】
具体的には、DLDVF(Asp―Leu―Asp―Val―Phe)ペプチド及びLDV（Leu―Asp―Val）ペプチドを100：0、50：50、0：100となる比率で混合して、最終ペプチド濃度が合計1mg／mLになるように被験液を調製した。この1倍、10倍、100倍、及び1000倍希釈液を用いてアンジオテンシン変換酵素阻害活性を測定した。アンジオテンシン変換酵素阻害活性は、ACE Kit-WSTキット（（株）同仁化学研究所製）を用いて、3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly (3HB-GGG)から切り出されてくる3-Hydroxybutyric acid (3HB)を酵素法により検出し、プレートリーダーで450nmの吸光度を測定することにより評価した。ACE Kit-WSTキットは、付属のプロトコールに順じて使用した。この結果を、図３に示す。【００９３】
図３に示されるように、DLDVFペプチドに対してLDVペプチドを組み合わせて添加することによっても、相乗効果的に高いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が発揮された。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明のペプチド若しくはその誘導体、又はそれらの塩は、美容のための組成物として用いることができる。【００９５】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【配列表フリーテキスト】
【００９６】
配列番号１〜４  合成
【図１】
2012144546.tif 000005
【図２】
2012144546.tif 000006
【図３】
2012144546.tif 000007
【配列表】
2012144546000001.app
【国際調査報告】
2012144546.tif 000008
2012144546.tif 000009
2012144546.tif 000010
2012144546.tif 000011