(57)【要約】  下記一般式（１）〜（１０）のいずれかで表されるヌクレオシド類縁体又はその塩であることを特徴とする。【化１】2012074012.tif 000038  （但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、リン酸基、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、及び固相合成用活性化リン酸基からなる群より選択される。Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）
2012074012.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）〜（１０）のいずれかで表されるヌクレオシド類縁体又はその塩。
【化１】
2012074012.tif 000033
（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される。Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）
【請求項２】
前記Ｒ1は、水素原子、又は前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基のいずれかである、
前記Ｒ2は、水素原子、前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択され、
前記Ｒ3は、水素原子、又は前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基のいずれかである
ことを特徴とする請求項１に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項３】
前記Ｒ1、Ｒ2が前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基の場合、
前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基は、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基、脂肪族で置換されたシリル基、及び芳香族で置換されたシリル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項２に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項４】
前記脂肪族アシル基は、アセチル基であり、前記芳香族アシル基は、ベンゾイル基であり、前記アリール基で置換されたメチル基は、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、及び４−モノメトキシトリチル基からなる群より選択され、前記脂肪族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基であり、前記芳香族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基である
ことを特徴とする請求項３に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項５】
前記Ｒ3が前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基の場合、
前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基は、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基、脂肪族で置換されたシリル基、芳香族で置換されたシリル基、脂肪族で置換されたスルホニル基、芳香族で置換されたスルホニル基、カルボニル基、及びアミド基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項２に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項６】
前記脂肪族アシル基は、アセチル基であり、前記芳香族アシル基は、ベンゾイル基であり、前記アリール基で置換されたメチル基は、ベンジル基であり、前記脂肪族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルであり、前記芳香族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルであり、前記芳香族で置換されたスルホニル基は、ｐ−トルエンスルホニル基であり、前記カルボニル基は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、又はベンジルオキシカルボニル基のいずれかであり、前記アミド基は、ジメチルホルムアミド基、又はジメチルアセトアミド基のいずれかである
ことを特徴とする請求項５に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項７】
前記リン酸基には、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、及び固層合成用活性化リン酸基を含む
ことを特徴とする請求項１に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項８】
前記核酸合成における保護基で保護されたリン酸基は、２−クロロフェニルリン酸基、又は４−クロロフェニルリン酸基のいずれかである
ことを特徴とする請求項７に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項９】
前記固層合成用活性化リン酸基は、−Ｐ（ＯＣ2Ｈ4ＣＮ）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）、又は−Ｐ（ＯＣＨ3）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）のいずれかである
ことを特徴とする請求項７に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１０】
下記一般式（１１）で表されるヌクレオシド類縁体又はその塩。
【化２】
2012074012.tif 000034
（但し、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基、からなる群より選択され、
Ｘ1は、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基であり、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項１１】
前記Ｘ1は、ジアジリン基である
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１２】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１３】
前記Ｒ1は、水素原子、又は核酸合成における水酸基の保護基のいずれかであり、
前記Ｒ2は、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１４】
前記リン酸基には、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、及び固層合成用活性化リン酸基を含む
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１５】
前記核酸合成における保護基で保護されたリン酸基は、２−クロロフェニルリン酸基、又は４−クロロフェニルリン酸基のいずれかである
ことを特徴とする請求項１４に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１６】
前記固層合成用活性化リン酸基は、−Ｐ（ＯＣ2Ｈ4ＣＮ）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）、又は−Ｐ（ＯＣＨ3）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）のいずれかである
ことを特徴とする請求項１４に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１７】
式（１ａ）〜（１０ａ）のいずれかで表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体。
（但し、Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）
【化３】
2012074012.tif 000035
【請求項１８】
一般式（１１ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体。
【化４】
2012074012.tif 000036
（但し、Ｘ1は、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基であり、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項１９】
前記Ｘ1は、ジアジリン基である
ことを特徴とする請求項１８に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２０】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１８又は請求項１９に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２１】
一本鎖であることを特徴とする請求項１７、又は請求項１８に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２２】
相補的な配列を少なくとも一部含むオリゴヌクレオチドと二本鎖を形成している
ことを特徴とする請求項１７、又は請求項１８に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２３】
請求項１７〜請求項２２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体を含有する
ことを特徴とする遺伝子発現抑制剤。
【請求項２４】
一般式（１１ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体を含有する
ことを特徴とする遺伝子検出用核酸プローブ。
【化５】
2012074012.tif 000037
（但し、Ｘ1は、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基であり、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項２５】
前記Ｘ1は、ジアジリン基である
ことを特徴とする請求項２４に記載の遺伝子検出用核酸プローブ。
【請求項２６】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択される  ことを特徴とする請求項２４、又は請求項２５に記載の遺伝子検出用核酸プローブ。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本国際出願は、２０１０年１１月３０日に日本国特許庁に出願された日本国特許出願第２０１０−２６７３１４号、および、２０１１年８月３１日に日本国特許庁に出願された日本国特許出願第２０１１−１９００４８号に基づく優先権を主張するものであり、日本国特許出願第２０１０−２６７３１４号および日本国特許出願第２０１１−１９００４８号の全内容を本国際出願に援用する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、ヌクレオシド類縁体又はその塩、オリゴヌクレオチド類縁体、遺伝子発現抑制剤、及び遺伝子検出用核酸プローブに関する。
【背景技術】
【０００３】
短鎖二本鎖ＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）及びｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレオチドである。標的ｍＲＮＡは、例えば疾患の原因となる遺伝子の塩基配列を備える。ＲＮＡ干渉とは、これら短鎖二本鎖ＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡが、生体内で標的ｍＲＮＡの遺伝子発現を抑制する生体内遺伝子抑制機構である。【０００４】
ｓｉＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡであり、その二本鎖ＲＮＡは相補的な塩基配列からなる。ｓｉＲＮＡは配列特異的に標的ｍＲＮＡと結合する。標的ｍＲＮＡと結合したｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＲＩＳＣ））に取り込まれることによって、標的ｍＲＮＡは切断される。疾患の原因となる遺伝子の塩基配列が明らかであれば、疾患の原因となる遺伝子と相補的な配列を有するようにｓｉＲＮＡを設計・合成することが可能となる。そのため、このように合成されたｓｉＲＮＡは、疾患の原因となる遺伝子を切断することができ、疾患関連タンパク質の発現を抑制することができる。【０００５】
ｍｉＲＮＡは、部分的にミスマッチ塩基対を含む二本鎖ＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは、部分的に相補的な配列を持つ標的ｍＲＮＡを認識し、その標的ｍＲＮＡと結合する。ｍｉＲＮＡが標的ｍＲＮＡと結合すると、標的ｍＲＮＡは不安定化し、標的ｍＲＮＡの翻訳が抑制されるので、結果として遺伝子発現が抑制される。ｍｉＲＮＡは生物の発生、形態形成、細胞増殖など様々な生物学的機能を緻密に制御していることが明らかになっている。近年、ＲＮＡ干渉（二本鎖ＲＮＡと相補的な塩基配列を持つｍＲＮＡが分解される現象。）を利用した医薬品開発研究が活発に行われている。特に、ｍｉＲＮＡは、癌など様々な疾患と関連性があることが報告されている。【０００６】
例えば、肺癌患者由来の癌組織では、ｌｅｔ−７  ｍｉＲＮＡの発現量が低下している。このｌｅｔ−７  ｍｉＲＮＡの発現量を測定することによって、肺癌患者の予後を判定することが可能であることが報告されている。さらに、ｌｅｔ−７  ｍｉＲＮＡは、肺癌に対して増殖抑制効果を有することが報告されている（特許文献１参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−１９２４８４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、上記ｌｅｔ−７  ｍｉＲＮＡは、天然型のオリゴヌクレオチドであるため、血液中や細胞内に存在する各種ヌクレアーゼによって速やかに分解されてしまう。そのため、ｌｅｔ−７  ｍｉＲＮＡのような天然型のオリゴヌクレオチドをｍｉＲＮＡ創薬として利用することは困難であった。ｍｉＲＮＡを利用した薬剤の開発には、天然型のオリゴヌクレオチドで形成されたｍｉＲＮＡと比較して、ヌクレアーゼ耐性が向上し、遺伝子発現の抑制効果が増強するｍｉＲＮＡが望まれているが、発明者の知るところでは、それらに関する報告はほとんどない。【０００９】
さらに、ｍｉＲＮＡは、一部にミスマッチ塩基対を含んだ状態で標的ｍＲＮＡと結合する。そのため、一つのｍｉＲＮＡに対して複数の標的ｍＲＮＡが存在することになる。その結果、ヒトのｍｉＲＮＡは、莫大な数のｍＲＮＡを標的とすることから、標的となるｍＲＮＡの塩基配列を同定することが困難であった。標的ｍＲＮＡの塩基配列を同定することは、ｍｉＲＮＡの遺伝子発現制御機構の解明につながるため、生命科学分野における重要な研究課題の一つとなっている。【００１０】
本発明は、このような背景の下、上記問題を解決するものであり、その目的は、ヌクレアーゼ耐性が向上し、遺伝子発現の抑制効果を増強することができるヌクレオシド類縁体又はその塩、及びオリゴヌクレオチド類縁体と、標的ｍＲＮＡの塩基配列の同定を容易にすることが可能なヌクレオシド類縁体又はその塩、及びオリゴヌクレオチド類縁体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
以下、本発明において採用した特徴的構成について説明する。
本発明のヌクレオシド類縁体又はその塩は、下記一般式（１）〜（１０）であることを特徴とする。（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される。Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）【００１２】
【化１】
2012074012.tif 000003
上記一般式（１）〜（１０）中、ヌクレオシドの糖部に相当する部分は開環型であり、三重結合を備えている。また、上述の官能基には、水酸基、アミノ基が挙げられる。また上述の保護基とは、有機合成の反応において、水酸基やアミノ基などの官能基に副反応が進行しないようにそれらを保護するために導入する有機分子のことである。【００１３】
また一般式（１０）のＡｒは、芳香族炭化水素基及び多環芳香族炭化水素基であり、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ピレンの基であると好ましい。
上記式（１）〜（１０）において、Ｒ1は、水素原子、又は核酸合成における官能基である水酸基の保護基のいずれかであると好ましい。Ｒ2は、水素原子、核酸合成における官能基である水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択されることが好ましい。Ｒ3は、水素原子、核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基であると好ましい。【００１４】
核酸合成における官能基である水酸基の保護基の具体的な例としては、脂肪族アシル基（例えばアセチル基など）、芳香族アシル基（例えばベンゾイル基など）、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基（例えばベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、４−モノメトキシトリチル基など）、脂肪族で置換されたシリル基（例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基など）、芳香族で置換されたシリル基（例えばｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基など）などを挙げることができる。【００１５】
核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基の具体的な例としては、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基、脂肪族で置換されたシリル基、芳香族で置換されたシリル基などを挙げることができ、これらの他、脂肪族で置換されたスルホニル基、芳香族で置換されたスルホニル基（例えばｐ−トルエンスルホニル基など）、カルボニル基（例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基など）、アミド基（ジメチルホルムアミド基、ジメチルアセトアミド基、）などであってもよい。【００１６】
リン酸基は、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、固層合成用活性化リン酸基であると好ましい。
核酸合成における保護基で保護されたリン酸基の具体的な例としては、例えば２−クロロフェニルリン酸基、４−クロロフェニルリン酸基などを挙げることができる。【００１７】
固層合成用活性化リン酸基の具体的な例としては、例えば、−Ｐ（ＯＣ2Ｈ4ＣＮ）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）、−Ｐ（ＯＣＨ3）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）などを挙げることができる。【００１８】
又、本発明のヌクレオシド類縁体又はその塩は、下記一般式（１１）（但し、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なる基であり、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択され、Ｘ1は、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基であり、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）であることを特徴とする。【００１９】
Ｘ1における光反応性基とは、光を吸収すると反応性の高い中間体カルベンを生じ、標的分子と共有結合が可能になる基である。
Ｘ2におけるアルキル基としては、炭素数が１〜５であるアルキル基、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。【００２０】
【化２】
2012074012.tif 000004
さらに、一般式（１１）中、ヌクレオシドの糖部に相当する部分は開環型であり、三重結合を備えている。【００２１】
上記一般式（１１）において、Ｒ1、Ｒ2は、一般式（１）〜（１０）において説明したＲ1、Ｒ2と同様な基であると好ましい。
Ｘ1は、ジアジリン基であると好ましい。【００２２】
Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択されると好ましい。
又、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、式（１ａ）〜（１０ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体であることを特徴とする。（但し、Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）【００２３】
【化３】
2012074012.tif 000005
又、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、式（１１ａ）（但し、Ｘ1は、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基であり、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体であることを特徴とする。【００２４】
Ｘ1における光反応性基とは、光を吸収すると反応性の高い中間体カルベンを生じ、標的分子と共有結合が可能になる基である。
Ｘ2におけるアルキル基としては、炭素数が１〜５であるアルキル基、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。【００２５】
【化４】
2012074012.tif 000006
上記一般式（１１ａ）において、Ｘ1は、ジアジリン基であると好ましい。【００２６】
Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択されると好ましい。
さらに、上記一般式（１ａ）〜（１０ａ）、（１１ａ）中、ヌクレオシドの糖部に相当する部分は開環型であり、三重結合を備えている。糖部開環型ヌクレオシドで構成されているオリゴヌクレオチド誘導体としては、例えばグリコール核酸（ＧＮＡ）がある。ＧＮＡは、リン酸ジエステル結合によってグリセロール単位を繰り返す構造を備えている。（Ｓ）−ＧＮＡは、ゴーシュ効果によって（Ｓ）−ＧＮＡの二重鎖が安定化されていることが知られている。したがって、類似した構造を含む式（１ａ）〜（１０ａ）、（１１ａ）を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類似体において、そのオリゴヌクレオチド類縁体の二重鎖の安定性は向上することが期待される。さらに、式（１ａ）〜（１０ａ）、（１１ａ）は不飽和結合を備えているので、二重鎖を形成しているオリゴヌクレオチド間においてスタッキング相互作用が働き、構造が固定されることから、二重鎖形成におけるエントロピーのロスは減少する。その結果、二重鎖が熱力学的に安定になることが期待される。【００２７】
本発明の「その塩」とは、本発明のヌクレオシド類縁体及びオリゴヌクレオチド類縁体は、塩にすることができるので、その塩をいい、特に限定はないが、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩、アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩、酢酸塩、りんご酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩、及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。【００２８】
本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、一本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖オリゴヌクレオチドであってもよい。一本鎖オリゴヌクレオチドの場合は、一方の鎖と相補的な配列を少なくとも一部含むオリゴヌクレオチドと二本鎖を形成していてもよい。オリゴヌクレオチドとは、ヌクレオチドが数個から１００個重合した重合体である。【００２９】
本発明の遺伝子発現抑制剤は、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体を含有することを特徴とする。
遺伝子発現抑制剤とは、ＤＮＡあるいはｍＲＮＡに働きかけその複製、転写、翻訳の過程を阻害する分子のことである。【００３０】
本発明の遺伝子検出用核酸プローブは、上記一般式（１１ａ）の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体を含有することを特徴とする。
上記一般式（１１ａ）において、Ｘ1は、ジアジリン基であると好ましい。【００３１】
Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択されると好ましい。
遺伝子検出用核酸プローブとは、ＤＮＡあるいはｍＲＮＡを可視化し検出するための短鎖のＤＮＡあるいはＲＮＡ分子である。【００３２】
このような遺伝子検出用核酸プローブは、式（１１ａ）の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体を含有する、例えばＤＮＡマイクロアレイ等が挙げられる。
【発明の効果】
【００３３】
本発明のヌクレオシド類縁体（式（１）〜式（１１））の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体によれば、天然型ヌクレオシドの糖、塩基部に相当する部分を化学修飾することによって、ヌクレアーゼによって認識されにくくなり、その結果天然型のオリゴヌクレオチドと比較してヌクレアーゼ耐性が向上すると考えられる。さらに、ｍｉＲＮＡの熱力学的安定性が変化することによって遺伝子発現の抑制効果を天然型のオリゴヌクレオチドと比較して増強することができると考えられる。【００３４】
本発明の遺伝子発現抑制剤は、例えば本発明のヌクレオシド類縁体（式（１）〜式（１１））の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体がｍｉＲＮＡとして作用する。このｍｉＲＮＡは、部分的に相補的な配列を持つ標的ｍＲＮＡを認識し結合することによって、標的ｍＲＮＡを不安定化し、標的ｍＲＮＡの翻訳が抑制される。その結果、遺伝子発現を抑制することができる。【００３５】
さらに、式（１１）のオリゴヌクレオシド類縁体の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体が遺伝子検出用核酸プローブとして作用する。この遺伝子検出用核酸プローブに光が照射されると、共有結合が可能な活性種が形成されるので、この遺伝子検出用核酸プローブは標的ｍＲＮＡとの間でクロスリンクし標的ｍＲＮＡを捕獲することができる。その結果、この遺伝子検出用核酸プローブを利用することによって、捕獲されたｍＲＮＡの塩基配列を同定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】Ｔｍ測定結果を示すグラフである。
【図２】Ｔｍ測定結果を示すグラフである。
【図３】Ｔｍ測定結果を示すグラフである。
【図４Ａ−４Ｂ】図４Ａはｐｓｉ１９９ａ３ｐベクターを使用した場合の遺伝子発現抑制能の検証結果を示すグラフであり、図４Ｂはｐｓｉ１９９ａ５ｐベクターを使用した場合の遺伝子発現抑制能の検証結果を示すグラフである。
【図５Ａ−５Ｂ】図５Ａは、天然型ＲＮＡのヌクレアーゼ耐性を検証した電気泳動後のゲル写真であり、図５Ｂは、３′末端をヌクレオシド類縁体（１）に置換したＲＮＡのヌクレアーゼ耐性を検証した電気泳動後のゲル写真である。
【図６】天然型ＲＮＡのヌクレアーゼ耐性及び３′末端をヌクレオシド類縁体（１）に置換したＲＮＡのヌクレアーゼ耐性検証結果を示すグラフである。
【図７】クロスカップリング結果を示す電気泳動後のゲル写真である。
【図８】本発明の遺伝子検出用核酸プローブの説明図である。
【図９】Ｔｍ測定結果を示すグラフである。
【図１０】ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含むｓｉＲＮＡの遺伝子発現抑制能の検証結果を示すグラフである。
【図１１】ヌクレオシド類縁体（１０）を構成成分として含むｓｉＲＮＡの遺伝子発現抑制能の検証結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、本発明の実施形態について説明する。
本明細書においてはいくつかの略語を使用するので、まず、以下に本明細書中で使用する略語について、その一覧を示す。
【００３８】
［略語一覧］
ＢＦ3ＥＯＥｔ：ボロン  トリフルオリド  エーテレイト（Ｂｏｒｏｎ  ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｅ  ｅｔｈｅｒａｔｅ）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＴＢＤＭＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル  クロリド（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
Ｐｄ（ＰＰｈ3）：テトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（Ｔｅｔｒａｋｉｓ（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）ｐａｌｌａｄｉｕｍ）
ＴＥＡ：トリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｙａｍｉｎｅ）
ＴＢＡＦ：テトラ−ブチルアンモニウム−フルオリド（Ｔｅｔｒａ−ｎ−ｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ）
ＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2：ビス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（ＩＩ）  クロリド（Ｂｉｓ（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）ｐａｌｌａｄｉｕｍ（ＩＩ）  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＴｓＣｌ：ｐ−トルエンスルホニル  クロリド（ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−４−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）
ＤＭＴｒＣｌ：ジメトキシトリフェニルメチル  クロリド（ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）
アミダイト試薬，ｉ−Ｐｒ2ＮＰ（Ｃｌ）：ＯＣＥ２−シアノエチルジイソプロピルクロロ−ホスホロアミダイト（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃｈｌｏｒｏ−ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）
ＤＭＦ−ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメトキシホルムアミド  ジメチルアセタール（Ｎ，Ｎ−Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ  ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｌ）
ＣＰＧ：コントロール  ポア  グラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｐｏｒｅ  ｇｌａｓｓ）
ＷＳＣ：水溶性カルボジイミド（ｗａｔｅｒ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｃａｒｂｉｄｉｉｍｉｄｅ）
Ｘ−ｐｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノー２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｏ−２’，４’，６’−ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｂｉｐｈｅｎｙｌ）
ＮａＨＣＯ3  ａｑ．：炭酸水素ナトリウム水溶液
ＮａＣｌ  ａｑ．：塩化ナトリウム水溶液
ＮＭＲ：核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）
ＣＤＣｌ3：重クロロホルム
Ｔｍ：融解温度（ｍｅｌｔｉｎｇ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）
［ヌクレオシド類縁体及びヌクレオシド類縁体の合成方法の概略］
次に、本発明のヌクレオシド類縁体及びヌクレオシド類縁体の合成方法について概略を説明する。
【００３９】
本発明のヌクレオシド類縁体の糖部は、エポキシ基を備える第一級アルコールを出発物質として合成される。より詳しくは、まず、エポキシ基を備える一級アルコールの水酸基をシリル化合物で保護した後、エポキシ基の開環に伴い、末端をシリル基で保護したアセチレン基を導入する。続いて、エポキシ基の開環に伴って生じた水酸基をシリル基で保護する。その後、選択的にアセチレン側鎖の末端シリル基を除去することによって、以下に記載する本発明のヌクレオシド類縁体の塩基部とのカップリング反応が可能な糖部前駆体を得る。
【００４０】
一方、本発明のヌクレオシド類縁体の塩基部は、複素環の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体、芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体、及び多環芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体からなる群より選択される。芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体には、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基、及びアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基のいずれかを備える芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体を含む。
【００４１】
これらの糖部前駆体と塩基部を、パラジウム触媒存在下、カップリング反応させることによってカップリング体を得る。その後、シリル基の脱保護後、抽出、洗浄、精製する工程を得て、所望とするヌクレオシド類縁体を得ることができる。
【００４２】
次に、本発明の実施形態についていくつかの例を挙げて説明する。但し、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。なお、以下に説明する実施例では、実施例として例示するヌクレオシド類縁体と先に説明した一般式との関係を理解しやすくするため、一般式（ｎ）で表されるヌクレオシド類縁体の一例として挙げるヌクレオシド類縁体のことを、一般式に付与した番号（ｎ）を利用して、ヌクレオシド類縁体（ｎ）と表記する（ｎは１〜１１の整数。）。ただし、この表記は、一般式（ｎ）で表されるヌクレオシド類縁体が、以下の実施例で例示するヌクレオシド類縁体（ｎ）に限定されることを意味するものではない。
【実施例】
【００４３】
〔１〕［ヌクレオシド類縁体（１）：（Ｓ）−５−（４，５−ジヒドロキシペント−１−イニル）−１−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（（Ｓ）−５−（４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−１−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ｄｉｏｎｅ）の合成］
ヌクレオシド類縁体（１）を、下記［化５］に示す合成法１を用いて合成した。【００４４】
【化５】
2012074012.tif 000007
〔１．１〕合成法１中の合成ルート（ａ）
（Ｒ）−グリシドール（ｇｌｙｃｉｄｏｌ）（２．７ｍｌ、４０．５ｍｍｏｌ）（１３ａ）にイミダゾール（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ）（６．６ｇ、９７．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（７５ｍｌ）を加えて攪拌し、そこにＴＢＤＰＳＣｌ（１２．６ｍｌ，４８．６ｍｍｏｌ）を加え０℃で一晩反応させた。翌日、薄層クロマトグラフイー（Ｔｈｉｎ−Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＴＬＣ）（以下、ＴＬＣと称する。）にて原料のスポットの消失を確認した後、生成物を酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。真空エバポレーターで溶媒をとばし、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１）にて単離精製し、化合物（１３ｂ）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（オキシラン−２−イルメトキシ）ジフェニルシラン（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ（ｏｘｉｒａｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌａｎｅ）：（４．５６６４ｇ，１５ｍｍｏｌ，３７％）を無色透明な液体として得た。【００４５】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：７．６７−７．６５（４Ｈ，ｍ），７．４１−７．３５（６Ｈ，ｍ），３．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，３．２Ｈｚ），３．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，４．８Ｈｚ），３．１３−３．０９（１Ｈ，ｍ），２．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，４．０Ｈｚ），２．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２．８Ｈｚ），１．０（９Ｈ，ｓ）．13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：１３５．５，１２９．７，１２７．７，６４．３，５２．２，４４．４，２６．７，１９．２．
〔１．２〕合成法１中の合成ルート（ｂ）
アルゴン雰囲気下にて５０ｍｌの梨型フラスコに化合物（１３ｂ）（２．５２６８ｇ，８．０ｍｍｏｌ）を加え、ＴＨＦ（１０ｍｌ）で溶解させた。（Ａ）アルゴン雰囲気下にて５０ｍｌのナスフラスコにＴＭＳ−ａｃｅｔｙｌｅｎｅ（１．６５６ｍｌ，１２．０ｍｍｏｌ），ＴＨＦ（１０ｍｌ），ｎ−ＢｕＬｉ（７．２２８８ｍｌ，１２．０ｍｍｏｌ），ＢＦ3・ＯＥｔ2（１．５９６８ｍｌ，１３．０ｍｍｏｌ）の順番で加え、最後に溶液（Ａ）を加え−７８°Ｃで一晩反応させた。翌日ＴＬＣにて原料のスポットの消失を確認した後、緩衝剤としてＮＨ4Ｃｌ（２０ｍｌ）を加えて反応を止め、生成物を酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。真空エバポレーターで減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）にて単離精製し、化合物（１３ｃ）：（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）−５−（トリメチルシリル）ペント−４−イン−２−オル（（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｏｌ）（２．２１７７ｇ，５．４ｍｏｌ，６７％）を無色透明な液体として得た。【００４６】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：７．５６−７．３５（４Ｈ，ｍ），７．３４−７．１８（６Ｈ，ｍ），３．７９−３．７５（１Ｈ，ｍ），３．６２（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２５．６Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，４．４Ｈｚ），２．４１−２．３８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），０．９６（９Ｈ，ｓ），０．００（９Ｈ，ｓ）．13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ：１３５．５，１２９．８，１２７．８，１０２．７，８７．１，７０．２，６６．４，４４．４，２６．８，１９．３，０．００
〔１．３〕合成法１中の合成ルート（ｃ）
アルゴン雰囲気下にて５０ｍｌの梨型フラスコにイミダゾール（ｉｍｉｄａｚｏｌｅ）（１．１０３ｇ，１６．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２５ｍｌ）、ＴＢＤＭＳＣｌ（１．２３８ｇ，８．０１ｍｍｏｌ）を加えて攪拌した。攪拌後、得られた溶液を溶液（Ｂ）とした。アルゴン雰囲気下にて５０ｍｌのナスフラスコに化合物（１３ｃ）（２．２１７７ｇ，５．４ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２５ｍｌ）を加え攪拌し、そこに溶液（Ｂ）を加え、一晩反応させた。翌日ＴＬＣにて原料のスポットの消失を確認した後、生成物を酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。真空エバポレーターで減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）にて単離精製し、化合物（１３ｄ）：（Ｓ）−２，２，３，３，９，９−ヘキサメチル−８，８−ジフェニル−５−（３−（トリメチルシリル）プロプ−２−イニル）−４，７−ジオキサー３，８−ジシリラデカン（（Ｓ）−２，２，３，３，９，９−ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ−８，８−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−５−（３−（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）ｐｒｏｐ−２−ｙｎｙｌ）−４，７−ｄｉｏｘａ−３，８−ｄｉｓｉｌａｄｅｃａｎｅ）（１．７７１３ｇ，３．８ｍｍｏｌ，６２％）をうす黄色の液体として得た。【００４７】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：７．５６−７．５３（４Ｈ，ｍ），７．３１−７．２２（６Ｈ，ｍ），３．７５−３．７０（１Ｈ，ｍ），３．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，４．６Ｈｚ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，６．０Ｈｚ），２．５４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，５．４Ｈｚ），２．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，７．０Ｈｚ），０．９６−０．８８（９Ｈ，ｍ），０．７７−０．６７（９Ｈ，ｍ），０．０４７−０．００（９Ｈ，ｍ），−０．０７（３Ｈ，ｓ），−０．１５（３Ｈ，ｓ）．13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：１３５．５，１２９．５，１２７．６，１０４．７，８５．７，７１．８，６７．０，２６．７，２５．７，１９．２，１８．０，０．００，−４．６７．
〔１．４〕合成法１中の合成ルート（ｄ）
アルゴン雰囲気下にて化合物（１３ｄ）（１．７７１３ｇ，３．３７ｍｍｏｌ）をドライ（ｄｒｙ）  ＭｅＯＨ（３５ｍｌ）で溶かし、ＣＨ3ＯＮａ（２．３７ｍｌ，４．３９ｍｍｏｌ）と反応させた。常温で約１時間反応させＴＬＣにて原料のスポットの消失を確認した後、生成物を酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。真空エバポレーターで減圧濃縮し化合物（１３ｅ）：（Ｓ）−２，２，３，３，９，９−ヘキサメチル−８，８−ジフェニル−５−（プロプ−２−イニル）−４，７−ジオキサ−３，８−ジシラデカン（（Ｓ）−２，２，３，３，９，９−ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ−８，８−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−５−（ｐｒｏｐ−２−ｙｎｙｌ）−４，７−ｄｉｏｘａ−３，８−ｄｉｓｉｌａｄｅｃａｎｅ）（１．４４８８ｇ，３．２ｍｍｏｌ  ９５％）を無色透明な液体として得た。【００４８】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：７．５６−７．５３（４Ｈ，ｍ），７．２９−７．２３（６Ｈ，ｍ），３．７８−３．７５（１Ｈ，ｍ），３．５２（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２１．２Ｈｚ，１０．１Ｈｚ，５．５Ｈｚ），２．５２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，５．５Ｈｚ，２．８Ｈｚ），２．２９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，６．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），１．８６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），０．９８（９Ｈ，ｓ），０．７９（９Ｈ，ｓ），０．００（３Ｈ，ｓ），−０．０８（３Ｈ，ｓ）．13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：１３５．５，１２９．７，１２７．８，８１．８，７１．７，６９．７，６６．９，２６．８，２５．８，２４．４，１９．３，１８．１，−４．７２．
〔１．５〕合成法１中の合成ルート（ｅ）
化合物（２２）（０．７０ｇ，２．７８ｍｍｏｌ）と化合物（１３ｅ）（１．９３ｇ，１．２ｅｑ．）をＤＭＦ（２７．８ｍｌ）に溶解させた。Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．１６ｇ，０．０５ｅｑ．），とＣｕＩ（０．０５３ｇ，０．１ｅｑ．）を加えて攪拌し、ＴＥＡ（０．９７ｍｌ，２．５ｅｑ．）を加えて４０℃で反応させた。一晩攪拌後、反応液をＥｔＯＡｃを用いてセライトろ過した。ろ過後、ろ液をＥｔＯＡｃ、Ｈ2Ｏで抽出し有機層を回収した。有機層を、ＮａＨＣＯ3  ａｑ．、ＮａＣｌ  ａｑ．で洗浄した後、真空エバポレーターで濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカの使用、溶出溶媒はＣＨＣｌ3：ＣＨ3ＯＨ＝１００：１）で分離精製しカップリング体（２３）：（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）−１−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−１−ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ｄｉｏｎｅ）（収量：１．６２ｇ）を得た。【００４９】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ：８．６８（１Ｈ，ｓ）７．９５（１Ｈ，ｓ）７．６３−７．１０（１０Ｈ，ｍ）３．８８−３．８６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．９６，５．０４）３．６３−３．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０４，５．０４）３．５６−３．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９６，５．９６）３．２７（３Ｈ，ｓ）２．７８−２．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９６，５．５２）２．５５−２．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４４，６．４４）０．９８（９Ｈ，ｓ）０．８０（９Ｈ，ｓ）−０．００（３Ｈ，ｓ）−０．０７（３Ｈ，ｓ）  13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１６１．８，１４９．９，１４６．８，１３５．６，１３２．０，１２７．６，１００．５，９２．６，７１．７，６７．１，６４．３，３６．１，３１．４，２６．８，２５．７，１９．２，１８．０，−４．６５
〔１．６〕合成法１中の合成ルート（ｆ）
カップリング体（２３）（１．６２ｇ，２．７８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１１．２ｍｌ）に溶解し、１ｍｏｌ／ｌ  ＴＢＡＦ（５．８８ｍｌ，２．１ｅｑ．）を加えて一晩攪拌した。ＴＬＣで反応の終了を確認し、減圧濃縮した。その後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカ、ＣＨＣｌ3のみ〜ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１５：１）で分離精製し、ヌクレオシド類縁体（１）（収量：０．３３ｇ、収率：５２．２％）を得た。【００５０】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）  δ：７．９４（１Ｈ，ｓ）４．８４−４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８）４．６０−４．５７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８４−５．６０）３．６０−３．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．８４，５．６０）３．３９−３．３５（１Ｈ，ｄｄ）３．３１（１Ｈ，ｓ）３．１７−３．１３（１Ｈ，ｄｄ）２．５４−２．５０（１Ｈ，ｄｄ）２．４０−２．３５（１Ｈ，ｄｄ）
［実施例２］
〔２〕［ヌクレオシド類縁体（３）：（Ｓ）−５−（６−アミノピリジン−３−イル）ペント−４−イン−１，２−ジオール（（Ｓ）−５−（６−ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎｅ−１，２−ｄｉｏｌ）の合成］
ヌクレオシド類縁体（３）を、下記［化６］に示す合成法２を用いて合成した。【００５１】
【化６】
2012074012.tif 000008
〔２．１〕合成法２中の合成ルート（ａ）
糖部（１３ｅ）（０．７６ｇ，３．４５ｍｍｏｌ）と塩基部（２８）（１．８７ｇ，１．３ｅｑ．）をフラスコに加えＤＭＦ（３５．０ｍｌ）に溶解した。Ｐｄ（ＰＰｈ3）4（０．４０ｇ，０．１ｅｑ．）、ＣｕＩ（０．１３ｇ，０．２ｅｑ）を加えて攪拌し、ＴＥＡ（１．２０ｍｌ，２．５ｅｑ．）を加えて４５℃で反応させた。一晩攪拌後、反応液をＥｔＯＡｃでセライトろ過した。ろ過後、ろ液をＥｔＯＡｃ、Ｈ2Ｏで抽出し有機層を回収した。有機層を、ＮａＨＣＯ3ａｑ．、ＮａＣｌａｑ．で洗浄した後、真空エバポレーターで濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカゲルの使用、溶出溶媒はＣＨＣｌ3）で分離精製し、カップリング体（２９）：（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ｐｅｎｔ−１−イニル）ピリジン−２−アミン（（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ａｍｉｎｅ）（収量：１．３５ｇ、収率：７１．５％）を得た。【００５２】
〔２．２〕合成法２中の合成ルート（ｂ）
カップリング体（２９）（１．０ｇ，１．７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１７．３ｍｌ）に溶解し、１ｍｏｌ／ｌ  ＴＢＡＦ（３．６ｍｌ，２．１ｅｑ．）を加えて一晩攪拌した。その後、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカゲルの使用、溶出溶媒はＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１：０〜）で分離精製し、ヌクレオシド類縁体（３）（収量：０．４７ｇ）を得た。【００５３】
［実施例３］
〔３〕［ヌクレオシド類縁体（５）：（Ｓ）−２−アミノ−５−（４，５−ジヒドロキシペント−１−イニル）ピリミジン−４（１Ｈ）−オン（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−５−（４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−４（１Ｈ）−ｏｎｅ）の合成］
ヌクレオシド類縁体（５）を、下記［化７］に示す合成法３を用いて合成した。【００５４】
【化７】
2012074012.tif 000009
〔３．１〕合成法３中の合成ルート（ａ）
アルゴン雰囲気下で化合物（１６）：５−ヨード−１，３−ジメチルウラシル（５−ｉｏｄｏ−１，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｕｒａｃｉｌ）（０．５ｇ，１．８８ｍｍｏｌ），ＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2（１０．９９ｍｇ，０．０１５６６ｍｍｏｌ），ＣｕＩ（５．９６５ｍｇ，０．０３１３２ｍｍｏｌ），化合物（１３ｅ）（０．７１ｇ，１．５６６ｍｍｏｌ），ＤＭＦ（１０ｍｌ）の順番でフラスコに加え１７ｈ攪拌した。反応の完結を確認後、反応物を酢酸エチルと蒸留水で抽出し、有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層を真空エバポレーターで減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒はクロロホルム：メタノール＝１００：１）にて単離精製し、化合物（１７）：（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）−１，３−ジメチルピリジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（（Ｓ）−５−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−１，３−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ｄｉｏｎｅ）（収量：０．４７１５ｇ、０．８ｍｍｏｌ、収率：５１％、黄色の液体）を得た。【００５５】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：７．７０−７．６３（４Ｈ，ｍ），７．４０−７．３７（６Ｈ，ｍ），３．９６−３．９０（１Ｈ，ｍ），３．６９−３．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，４．８Ｈｚ），３．６３−３．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，４．８Ｈｚ），３．３７（６Ｈ，ｓ），２．８５−２．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，６．００Ｈｚ），２．６０−２．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，６．００Ｈｚ），１．０４（９Ｈ，ｓ），０．８３（９Ｈ，ｓ），０．０６（３Ｈ，ｓ），０．００（３Ｈ，ｓ）
〔３．２〕合成法３中の合成ルート（ｂ）
アルゴン雰囲気下でグアニジン塩酸塩（２４．８ｇ，０．２５９６ｍｏｌ）とナトリウムエトキシド（１２．３７ｇ，０．１８２ｍｏｌ）をドライ（ｄｒｙ）エタノール（１００ｍｌ）に溶かし，４０分間攪拌した後、セライトろ過を行った。ろ液をエバポレーターで減圧濃縮しオイルを得た。得られたオイルを２径ナスフラスコに移した。２径ナスフラスコにジムロートを装着した。２径ナスフラスコに、化合物１７（１．５３４ｇ，２．６０ｍｍｏｌ）をドライ（ｄｒｙ）  エタノール（１００ｍｌ）で溶かした物を加え、オイルバスで９６℃に保ち１．５ｈ攪拌した。反応終了後、反応液を真空エバポレーターで減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１００：１）にて単離精製し、化合物（１８）：（Ｓ）−２−アミノ−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ｐｅｎｔ−１−イニル）ピリミジン−４（１Ｈ）−オン（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−５−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−４（１Ｈ）−ｏｎｅ）（０．８１３ｇ，１．４５ｍｍｏｌ，５６％，黄色の液体）を得た。【００５６】
〔３．３〕合成法３中の合成ルート（ｃ）
アルゴン雰囲気下で化合物（１８）（０．７９３ｇ，１．４１ｍｍｏｌ）をドライ（ｄｒｙ）  ＭｅＯＨ（４０ｍｌ）に溶かし、そこに１２ｍｏｌ／ｌ  ＨＣｌ（０．３５３ｍｌ，４．２３ｍｍｏｌ）を加え、オイルバスで６０℃に保ち、４時間攪拌した。反応後、真空エバポレーターで減圧濃縮しヌクレオシド類縁体（５）を得た。ヌクレオシド類縁体（５）は、後処理をせず、そのまま次の反応をかけた。【００５７】
［実施例４］
〔４〕［ヌクレオシド類縁体（１０）：（Ｓ）−５−（アントラセン−９−イル）ペント−４−イン−１，２−ジオール（（Ｓ）−５−（ａｎｔｈｒａｃｅｎ−９−ｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎｅ−１，２−ｄｉｏｌ）の合成］
ヌクレオシド類縁体（１０）を、下記［化８］に示す合成法４を用いて合成した。【００５８】
【化８】
2012074012.tif 000010
〔４．１〕合成法４中の合成ルート（ａ）、（ｂ）
化合物（１３ｅ）（０．８６ｇ，１．８９ｍｍｏｌ）を入れたフラスコにＰｄＣｌ2（ＣＨ3ＣＮ）2（１９．６ｍｇ，７５．６μｍｏｌ），Ｘ−Ｐｈｏｓ（１０８ｍｇ，２２７μｍｏｌ）、Ｃｓ2ＣＯ3（１．６０ｇ，４．９２ｍｍｏｌ）、９−クロロ  アントラセン（９−ｃｈｌｏｒｏ  ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ）（１．２１ｇ，５．６ｍｍｏｌ）を順に入れ、アセトニトリル（１５ｍｌ）を加えて溶解させ、９０℃で反応させた。オーバーナイト（Ｏｖｅｒ  ｎｉｇｈｔ）で反応後、酢酸エチルとＨ2Ｏで抽出した。水層を集め、再度、酢酸エチルとＨ2Ｏで抽出した。有機層を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。（ｂ）得られた残渣をＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解させ、ＴＢＡＦ（７．１ｍｌ，７．１１ｍｍｏｌ）を入れ、攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、溶出液を減圧留去しヌクレオシド類縁体（１０）（収量０．１４ｇ、収率２６％、褐色固体）を得た。【００５９】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ3）δ：１．９７−２．００（ｍ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈα），２．５２−２．５３（ｍ，１Ｈ，Ｃ１−Ｈβ），３．０２−３．０４（ｍ，２Ｈ，ＯＨ），３．８１−３．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈα,Ｊ＝５．５２，１１．５Ｈｚ），３．９５−３．９９（ｄｄ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈβ，Ｊ＝５．６８，１１．５Ｈｚ），４．１４−４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），７．２５−７．２８（ｍ，２Ｈ，ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ），７．４９−７．５６（ｍ，３Ｈ，ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ），７．９９−８．０１（ｍ，２Ｈ，ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ），８．４１−８．５１（ｍ，２Ｈ，ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ）
［実施例５］
〔５〕［ヌクレオシド類縁体（１１）：（Ｓ）−５−（４−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）ペント−４−イン−１，２−ジオール（（Ｓ）−５−（４−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎ−３−ｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎｅ−１，２−ｄｉｏｌ）の合成］
ヌクレオシド類縁体（１１）を、下記［化９］に示す合成法５を用いて合成した。【００６０】
【化９】
2012074012.tif 000011
〔５．１〕合成法５中の合成ルート（ａ）
アルゴン雰囲気下にて、十分に乾燥させた化合物（３３）：４’−ヨード−２，２，２−トリフルオロアセトフェノン（４’−ｉｏｄｏ−２，２，２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ）（０．１８ｇ，０．６０ｍｍｏｌ）をフラスコに入れＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2  （０．０１７ｇ，０．０２４ｍｍｏｌ，０．０４ｅｑ．）とＣｕＩ（０．００９ｇ，０．０４８ｍｍｏｌ，０．０８ｅｑ．）を加え、ＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解させた。このフラスコに十分に乾燥させた化合物（１３ｅ）（０．３０ｇ，０．６６ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解させたものと、ＴＥＡ（０．２５ｍｌ，１．８ｍｍｏｌ，３．０ｅｑ．）を加え、８０°Ｃで攪拌し、反応を開始させた。一晩攪拌後、反応の終了を確認した後、反応液をセライトろ過し、揮発性のものを減圧除去した。得られた残渣を酢酸エチルとＨ2Ｏで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１）で精製し、化合物（３４）：（Ｓ）−１−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）フェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノン（（Ｓ）−１−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）−２，２，２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔａｎｏｎｅ）を（０．１９ｇ，０．２９ｍｍｏｌ，５０％，褐色のオイル状）得た。【００６１】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−０．０７４（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），−０．０１２（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．７９（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．９７（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），２．４２−２．４８（ｑ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６９−２．７５（ｑ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５６−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．８５（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．６４（ｍ，１０Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），７．６１−７．６２（ｄ，２Ｈ），７．９１−７．９３（ｄ，２Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−８７．４（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）．
〔５．２〕合成法５中の合成ルート（ｂ）
アルゴン雰囲気化、化合物（３４）（０．１９ｇ，０．２ｍｍｏｌ）とＨＯＮＨ2・ＨＣｌ（０．０４０ｇ，０．５８ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）をフラスコに加え、ドライ（ｄｒｙ）  ＥｔＯＨ（３ｍｌ）とドライ（ｄｒｙ）  ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（３ｍｌ）に溶解させ、６０°Ｃで攪拌し反応を開始させた。一晩反応後、反応物をクロロメタンと蒸留水で抽出した後、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を適量のＣＨ2Ｃｌ2に溶解させ、そのフラスコにＴＥＡ（０．２４ｍｌ，１．７ｍｍｏｌ，４．０ｅｑ．）とＴｓＣｌ（０．０８３ｇ，０．４４ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ．）を加え、触媒としてＤＭＡＰを少量添加し、室温下で反応を開始させた。一晩反応後、揮発性のものを減圧除去し、得られた残渣をクロロホルムとＨ2Ｏで抽出した後、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１００：１）で精製し、化合物（３５）：（Ｓ）−１−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）フェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノン  Ｏ−トシル  オキシム（（Ｓ）−１−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）−２，２，２−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｎｅ  Ｏ−ｔｏｓｙｌ  ｏｘｉｍｅ）（０．１１ｇ，０．１３ｍｍｏｌ，４８％，白色固体）を得た。【００６２】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−０．０７４（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），−０．０１２（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．７９（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．９７（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），２．４２−２．４８（ｑ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４７−２．４９（ｄ，３Ｈ，−Ｔｓ），２．６９−２．７５（ｑ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５６−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．８５（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．６４（ｍ，１０Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），７．４０−７．６９（ｍ，４Ｈ，−Ｔｓ），７．６１−７．６２（ｄ，２Ｈ），７．９１−７．９３（ｄ，２Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−９１．５（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）．
〔５．３〕合成法５中の合成ルート（ｃ）
アルゴン雰囲気下にて、封管を−７８°Ｃに冷却した後、その封管に化合物（３４）（０．１１ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を入れ、ＴＨＦ（４ｍｌ）を加え、溶解させた。そこにＮＨ3  ｇａｓを適量吹き込み、密封し、常温にて２日間攪拌した。−７８°Ｃに冷却した後、開封し、再び常温に戻し、過剰なＮＨ3  ｇａｓを揮発させた。揮発性の溶媒を真空エバポレーターにより減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製し、化合物（３６）：（Ｓ）−３−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）ジアジリン（（Ｓ）−３−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）ｄｉａｚｉｒｉｄｉｎｅ）（０．７９ｇ，２．９５ｍｍｏｌ，８０％，褐色のオイル）を得た。【００６３】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−０．０７４（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），−０．０１２（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．７９（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．９７（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），２．４２−２．４８（ｑ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１２−２．７４（ｍ，２Ｈ，−ＮＨ−ＮＨ−），２．６９−２．７５（ｑ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５６−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．８５（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．６４（ｍ，１０Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），７．６１−７．６２（ｄ，２Ｈ），７．９１−７．９３（ｄ，２Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−９１．２（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）．
〔５．４〕合成法５中の合成ルート（ｄ）
アルゴン雰囲気下で化合物（３６）（０．５１ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）をドライ（ｄｒｙ）  ＭｅＯＨ（１６ｍｌ）に溶解させた。遮光条件下でＴＥＡ（０．３０ｍｌ，２．０ｍｍｏｌ，２．５ｅｑ．）とＩ2（０．２２ｇ，０．８８ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）を加え、反応を開始させた。３０分後、原料の消失を確認した後、反応物をジエチルエーテルとチオ硫酸ナトリウムで抽出した。有機層を回収し、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４０：１）で精製し、化合物（３７）：（Ｓ）−３−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ペント−１−イニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン（（Ｓ）−３−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）−５−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌｓｉｌｙｌｏｘｙ）ｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）−３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎｅ）（０．４８ｇ，０．７５ｍｍｏｌ，９３％，無色の結晶）を得た。【００６４】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−０．０７３（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．００（ｓ，３Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．７９（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＭＳ），０．９９（ｓ，９Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），２．４９−２．５５（ｑ，１Ｈ），２．７５−２．８０（ｑ，１Ｈ），３．５３−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．８６−４．０３（ｍ，２Ｈ），７．０１−７．０４（ｄ，２Ｈ），７．１９−７．３７（ｍ，１０Ｈ，−ＴＢＤＰＳ），７．６０−７．６３（ｄ，２Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−８０．９（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）．
〔５．５〕合成法５中の合成ルート（ｅ）
アルゴン雰囲気下、化合物（３７）（０．４４ｇ，０．６８ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ＴＨＦ（１３．６ｍｌ）を加えて溶解させ、１．０ｍｏｌ／ｌ  ＴＢＡＦ（１．４２ｍｌ，１．４２ｍｍｏｌ，２．１ｅｑ．）を加えて室温で反応を開始させた。２時間後、原料の消失を確認した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製し、ヌクレオシド類縁体（１１）（０．１８ｇ，０．６４ｍｍｏｌ，９４％，無色の結晶）を得た。【００６５】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：２．６５−２．６７（ｍ，２Ｈ，−ＯＨ），３．６３−３．６７（ｑ，２Ｈ），３．７８−３．８１（ｑ，１Ｈ），３．９５−３．９７（ｍ，２Ｈ），７．０８−７．１０（ｄ，２Ｈ），７．３８−７．４１（ｄ，２Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−８０．９（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）．
［実施例６］
〔６〕［ヌクレオシド類縁体（１）のアミダイト体（２５）：（Ｓ）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−５−（１−メチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−イル）ペント−４−イン−２−イル  ２−シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−５−（１−ｍｅｔｈｙｌ−２，４−ｄｉｏｘｏ−１，２，３，４−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−５−ｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｙｌ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）の合成］
アミダイト体（２５）は、下記［化１０］に示す合成法６を用いて合成した。【００６６】
【化１０】
2012074012.tif 000012
〔６．１〕合成法６中の合成ルート（ａ）
ヌクレオシド類縁体（１）（０．３３ｇ，１．４７ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（７．２５ｍｌ）を加えて溶解させ、ＤＭＴｒＣｌ（０．５４ｇ，１．１ｅｑ．）加えて攪拌した。２時間後、ＴＬＣで原料の消失を確認した。ＥｔＯＡｃ、Ｈ2Ｏで抽出し、有機層を回収した。有機層を、ＮａＨＣＯ3ａｑ．、ＮａＣｌａｑ．で洗浄し溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（中性シリカ、ＣＨＣｌ3〜ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１００：１）で分離精製し、化合物（２４）：（Ｓ）−５−（５−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−４−ヒドロキシペント−１−イニル）−１−メチル  ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（（Ｓ）−５−（５−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−１−ｍｅｔｈｙｌ  ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ｄｉｏｎｅ）（収量：０．３３ｇ  収率：４３．７％）を得た。【００６７】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：８．０７（１Ｈ，ｓ）７．４５−７．４０，７．３４−７．２０，６．８４−６．８２（１４Ｈ，ｍ）３．９９−３．９７（１Ｈ，ｄｄ）３．８０（６Ｈ，ｓ）３．３８（３Ｈ，ｓ）３．２６−３．２４（２Ｈ，ｍ）２．７０−２．６７（１Ｈ，ｄｄ）２．５１−２．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２１）。【００６８】
〔６．２〕合成法６中の合成ルート（ｂ）
化合物（２４）（０．２３ｇ，０．４４ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、アルゴン雰囲気下で、ドライ（ｄｒｙ）  ＴＨＦ  ２．２ｍｌに溶解させ、ＤＩＰＥＡ（０．３９ｍｌ，２．２０ｍｍｏｌ，５．０ｅｑ．）、アミダイト試薬（０．２０ｍｌ，０．８８ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を加え攪拌した。３０分後、ＴＬＣで反応の終了を確認した後、ＣＨＣｌ3で抽出し有機層を回収した。有機層を、ＮａＨＣＯ3  ａｑ．、ＮａＣｌ  ａｑ．で洗浄し溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘａｎ＝１：３）で精製し、アミダイト体（２５）（収量０．２０ｇ、収率６３．７％  31Ｐ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）δ：１４９．１）を得た。【００６９】
［実施例７］
〔７〕［ヌクレオシド類縁体（３）のアミダイト体（３２）：（Ｓ）−Ｎ’−（５−（５−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−４−ヒドロキシペント−１−イニル）ピリジン−２−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド  ２−シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−Ｎ’−（５−（５−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｍｉｄａｍｉｄｅ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）の合成］
アミダイト（３２）は、下記［化１１］に示す合成法７を用いて合成した。【００７０】
【化１１】
2012074012.tif 000013
〔７．１〕合成法７中の合成ルート（ａ）
ヌクレオシド類縁体（３）（０．４７ｇ，１．７３ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ＤＭＦ（１７．３ｍｌ）を加えて溶解し、ＤＭＦ−ＤＭＡ（１．１５ｍｌ、５．０ｅｑ．）を加えて４５°Ｃで一晩攪拌した。その後、溶媒を減圧留去した後、化合物（３０）：（Ｓ）−Ｎ’−（５−（４，５−ジヒドロキシペント−１−イニル）ピリジン−２−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド（（Ｓ）−Ｎ’−（５−（４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｍｉｄａｍｉｄｅ）を得た。【００７１】
〔７．２〕合成法７中の合成ルート（ｂ）
化合物（３０）（１．７３ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（２５ｍｌ）に溶解し、ＤＭＴｒＣｌ（０．６４ｇ，１．１ｅｑ．）を加えて５時間半攪拌した。ＥｔＯＡｃ、Ｈ2Ｏで抽出し、ＮａＨＣＯ3ａｑ．、ＮａＣｌａｑ．で洗浄後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離精製し、化合物（３１）：（Ｓ）−Ｎ’−（５−（５−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−４−ヒドロキシペント−１−イニル）ピリジン−２−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド（（Ｓ）−Ｎ’−（５−（５−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｍｉｄａｍｉｄｅ）を得た。【００７２】
〔７．３〕合成法７中の合成ルート（ｃ）
化合物（３１）をアミダイト体（２５）の合成方法と同様な方法を用いて、アミダイト体（３２）を得た。【００７３】
［実施例８］
〔８〕［ヌクレオシド類縁体（５）のアミダイト体（２１）：（Ｓ）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−５−（２−（（Ｅ）−（ジメチルアミノ）メチレンアミノ）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリミジン−５−イル）ペント−４−イン−２−イル  ２−シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−５−（２−（（Ｅ）−（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌｅｎｅａｍｉｎｏ）−４−ｏｘｏ−１，４−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−５−ｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｙｌ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）の合成］
アミダイト（２１）を下記［化１２］に示す合成法８を用いて合成した。【００７４】
【化１２】
2012074012.tif 000014
〔８．１〕合成法８中の合成ルート（ａ）
アルゴン雰囲気下で前記ヌクレオシド類縁体（５）（０．２９ｇ，１．４１ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ドライ（ｄｒｙ）  ＤＭＦ（１４ｍｌ）に溶かした。そこにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド  ジメチルアセタール（Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄ  ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｅｔａｌ）（１．１２ｍｌ，８．４６ｍｍｏｌ）を加え、オイルバスで４０°Ｃに保ち、約５時間攪拌した。反応液を、真空エバポレーターで減圧濃縮し、化合物（１９）を得た。化合物（１９）：（Ｓ，Ｅ）−Ｎ’−（５−（４，５−ジヒドロキシペント−１−イニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリミジン−２−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド（（Ｓ，Ｅ）−Ｎ’−（５−（４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−４−ｏｘｏ−１，４−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｍｉｄａｍｉｄｅ）は、後処理せずにそのまま次の反応に使用された。【００７５】
〔８．２〕合成法８中の合成ルート（ｂ）
化合物（１９）（０．３７ｇ，１．４１ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、アルゴン雰囲気下でドライ（ｄｒｙ）ピリジン（ｐｒｉｄｉｎｅ）（１０ｍｌ）に溶かし、そこにＤＭＴｒＣｌ（０．６２ｇ）を加え、約５時間攪拌した。反応液を、真空エバポレーターで減圧濃縮し、化合物（２０）：（Ｓ，Ｅ）−Ｎ’−（５−（５−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−４−ヒドロキシペント−１−イニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリミジン−２−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムイミドアミド（（Ｓ，Ｅ）−Ｎ’−（５−（５−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｅｎｔ−１−ｙｎｙｌ）−４−ｏｘｏ−１，４−ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎ−２−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍｉｍｉｄａｍｉｄｅ）を得た。化合物（２０）は、後処理せずにそのまま次の反応に使用された。【００７６】
〔８．３〕合成法８中の合成ルート（ｃ）
アルゴン雰囲気下で化合物（２０）（０．１９５２ｇ，０．３４４ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ＴＨＦ（１．７２ｍｌ，０．２ｍｏｌ／ｌ）に溶解させた。次に、ＤＩＰＥＡ（０．３６ｍｌ，２．０６ｍｍｏｌ，６ｅｑ）を加えて攪拌し、ｉ−Ｐｒ2ＮＰ（Ｃｌ）ＯＣＥ（０．１５ｍｌ，２．０６ｍｍｏｌ，２ｅｑ）を滴下しながら加えた。１時間後、反応液にクロロホルムを加え有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチルのみ）で単離精製し、溶媒留去することで、黄色結晶のアミダイト体（２１）を得た。【００７７】
［実施例９］
〔９〕［ヌクレオシド類縁体（１０）のアミダイト体（１０２）：（Ｓ）−５−（アントラセン−９−イル）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）ペント−４−イン−２−イル  ２−シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−５−（ａｎｔｈｒａｓｅｎ−９−ｙｌ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｙｌ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）の合成］
アミダイト（１０１）を下記［化１３］に示す合成法９を用いて合成した。【００７８】
【化１３】
2012074012.tif 000015
〔９．１〕合成法９中の合成ルート（ａ）
ヌクレオシド類縁体（１０）（０．１４ｇ，０．４９ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（２ｍｌ）に溶解させ、ＤＭＴｒＣｌ（０．１９ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を入れ、攪拌した。１時間後、メタノール（１ｍｌ）を加えて反応を停止した。反応液を酢酸エチル、水、ＮａＨＣＯ3で分液し有機層を回収した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、溶媒を減圧留去し化合物（１０１）：（Ｓ）−５−（アントラセン−９−イル）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）ペント−４−イン−２−オル（（Ｓ）−５−（ａｎｔｈｒａｓｅｎ−９−ｙｌ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｏｌ）（オレンジ色の泡状物質、収量は０．２８ｇ（収率９８％））を得た。【００７９】
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ3）δ：２．５７−２．５８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ，Ｊ＝４．６０Ｈｚ），３．０５−３．０７（ｄ，２Ｈ，Ｃ１−Ｈ２，Ｊ＝６．４０Ｈｚ），３．４３−３．５４（ｍ，２Ｈ，Ｃ３−Ｈ２），３．６６（ｓ，６Ｈ，ＯＭｅ），４．２０−４．２１（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），６．７５−６．７９（ｍ，５Ｈ，ｂｅｎｚｅｎｅ），７．２４−７．５０（ｍ，１３Ｈ，ｂｅｎｚｅｎｅ），７．９８−８．００（ｍ，２Ｈ，ｂｅｎｚｅｎｅ），８．３９−８．４７（ｍ，３Ｈ，ｂｅｎｚｅｎｅ）
〔９．２〕合成法９中の合成ルート（ｂ）
化合物（１０１）（０．２６ｇ，０．４６ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ＴＨＦ（２．３ｍｌ）に溶解させ、ＤＩＰＥＡ（０．４ｍｌ）、アミダイト試薬（０．２１ｍｌ）を加え、室温で攪拌した。４５分攪拌後、クロロホルムで抽出し有機層を回収した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し化合物（１０２）：（Ｓ）−５−（アントラセン−９−イル）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）ペント−４−イン−２−イル  ２−シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−５−（ａｎｔｈｒａｓｅｎ−９−ｙｌ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｙｌ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）を（オレンジ泡状物質、収量は０．２８ｇ（収量７８％））得た。【００８０】
31Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１４９．１８
［実施例１０］
〔１０〕［ヌクレオシド類縁体（１１）のアミダイト体（３９）：（Ｓ）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−５−（４−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）ペント−４−イン−２−イル  シアノエチル  ジイソプロピルホスホロアミダイト（（Ｓ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−５−（４−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎ−３−ｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｙｌ  ｃｙａｎｏｍｅｔｈｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ）の合成］
アミダイト体（３９）を下記［化１４］に示す合成法１０を用いて合成した。【００８１】
【化１４】
2012074012.tif 000016
〔１０．１〕合成法１０中の合成ルート（ａ）
アルゴン雰囲気下にてヌクレオシド類縁体（１１）（０．３６ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）をフラスコに入れｐｙｒｉｄｉｎｅ（７．２ｍｌ）に溶解させ、ＤＭＴｒＣｌ（０．４７ｇ，１．３８ｍｍｏｌ，１．１ｅｑ．）を氷冷下にて少量ずつ加えた。５時間後、ｓａｔ  ＮａＨＣＯ3、ｓａｔ  ＮａＣｌで抽出、洗浄を行い、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、化合物（３８）：（Ｓ）−１−（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）−５−（４−（３−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）フェニル）ペント−４−イン−２−オル（（Ｓ）−１−（ｂｉｓ（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）（ｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｏｘｙ）−５−（４−（３−（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ）−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎ−３−ｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ）ｐｅｎｔ−４−ｙｎ−２−ｏｌ）（０．７３ｇ，１．２４ｍｍｏｌ，９８％，黄色の結晶）を得た。【００８２】
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：２．６５−２．６７（ｍ，２Ｈ，−ＯＨ），３．６３−３．６７（ｑ，２Ｈ），３．７２（ｓ，６Ｈ，−ＤＭＴｒ），３．７８−３．８１（ｑ，１Ｈ），３．９５−３．９７（ｍ，２Ｈ），７．０８−７．１０（ｄ，２Ｈ），７．３８−７．４１（ｄ，２Ｈ）．６．７２−７．４７（ｍ，１６Ｈ，ＤＭＴｒ）．19Ｆ  ＮＭＲ  （３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−８１．１（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）
〔１０．２〕合成法１０中の合成ルート（ｂ）
化合物（３８）（０．７３ｇ，１．２４ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、Ａｒ雰囲気下でＴＨＦ（６．２ｍｌ，０．２ｍｏｌ／ｌ）に溶解させた。ＤＩＰＥＡ（１．０８ｍｌ，６．１９ｍｍｏｌ，５．０ｅｑ．）を加えて攪拌し、ｉ−Ｐｒ2ＮＰ（Ｃｌ）ＯＣＥ（０．５５ｍｌ，２．４８ｍｍｏｌ，２．０ｅｑ．）を滴下した。１時間後、クロロホルムを加え、ｓａｔ  ＮａＨＣＯ3、ｓａｔ  ＮａＣｌで抽出、洗浄を行い有機層を回収した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を減圧留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で単離精製し、溶媒を減圧留去することで、アミダイト体（３９）（０．７７ｇ，０．９８ｍｍｏｌ，７９％，黄色のオイル状）を得た。【００８３】
31Ｐ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１４９．４  19Ｆ  ＮＭＲ（３７２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：−８２．０（ｓ，３Ｆ，−ＣＦ3）
［実施例１１］
〔１１〕［ＣＰＧ樹脂連結型ヌクレオシド類縁体（２７）の合成］
ＣＰＧ樹脂連結型ヌクレオシド類縁体（２７）を下記［化１５］に示す合成法１１を用いて合成した。【００８４】
【化１５】
2012074012.tif 000017
〔１１．１〕合成法１１中の合成ルート（ａ）
化合物（２４）（９０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（０．４２ｍｇ，０．０２ｅｑ）をフラスコに入れピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）（１．７ｍｌ）に溶解し、無水コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）（５０ｍｇ，３．０ｅｑ）を加えてＡｒ雰囲気下、室温にて攪拌した。７８時間攪拌後、原料が残っていたため、ＤＭＡＰを少量追加して攪拌した。翌日に反応を止め、反応液を抽出し有機層を回収した。有機層を真空エバポレーターで減圧濃縮し、スクシニル体（２６）を得た。【００８５】
〔１１．２〕合成法１１中の合成ルート（ｂ）
スクシニル体（２６）（１１３．２ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）をフラスコに入れ、ＤＭＦ（４．５ｍｌ，０．０１ｍｏｌ／ｌ）に溶解させ、ＣＰＧ樹脂（０．３８ｇ，１．０ｅｑ．）、ＷＳＣ（３４．６ｍｇ，４．０ｅｑ．，０．１８ｍｍｏｌ）を素早く加えて、３日間振とうした。その後、ＣＰＧ樹脂をｐｙｒｉｄｉｎｅで洗浄して、引き続き前記スクシニル体（２６）と結合しなかった樹脂のキャッピング作業を行った。０．１ｍｏｌ／ｌ  ＤＭＡＰ  ｉｎ  ｐｙｒｉｄｉｎｅ（１５ｍｌ）に洗浄した樹脂を加え、一晩振とうした。反応溶液が褐色になっているのを確認し、反応を終了させた。反応終了後、ｐｙｒｉｄｅｎｅ、ＥｔＯＨ、ＣＨ3ＣＮの順に樹脂を洗浄し、ＣＰＧ樹脂連結型ヌクレオシド類縁体（２７）（活性：３８．９μｍｏｌ／ｇ）を得た。【００８６】
［実施例１２］
［ヌクレオシド類縁体（１）のε値の算出。］
ヌクレオシド類縁体（１）のε値を次に示す方法で算出した。【００８７】
ヌクレオシド類縁体（１）１．１２ｍｇを５０ｍｌのＭｉｌｌｉＱで溶解（０．１ｍｍｏｌ／ｌの水溶液となる）後、吸光度を測定した。そしてε値を算出した。その結果、ε２６０：２８２０、ε２９０：８６３０であった。【００８８】
天然チミジンのε２６０値が７４００であるが、ヌクレオシド類縁体（１）は、アルキンが存在することから、最大吸収波長は２９３ｎｍにシフトした。
各ヌクレオシド類縁体のアミダイト体や各ＣＰＧ樹脂連結型ヌクレオシド類縁体を使用して、以下に述べるホスホロアミダイト固相合成法によって、オリゴヌクレオチド類縁体を合成した。【００８９】
［実施例１３］
［ホスホロアミダイト固相合成法］
オリゴヌクレオチド類縁体の合成は、１μｍｏｌスケールで行った。３４００ＤＮＡ自動合成機を用いた。ｎｏｒｍａｌホスホロアミダイトは０．１ｍｏｌ／ｌ、合成したアナログ体のアミダイトは０．１２ｍｏｌ／ｌになるようにＭｅＣＮに溶解し、ＲＮＡ  ｐｒｏｔｏｃｏｌで合成した。オリゴヌクレオチドの５’末端はＤＭＴｒ基を除去した状態で合成を終了した。Ａｒガスを通じてＣＰＧ樹脂を乾燥させた。オリゴヌクレオチドが結合したＣＰＧ樹脂をサンプルストックチューブに移し、（ＮＨ4ＯＨ：ＥｔＯＨ＝３：１）を加え室温で１２ｈ、振とうすることによりＣＰＧ樹脂の除去を行った。反応溶液をエッペンドルフチューブに移し、減圧下乾固させた。さらに、残渣にＴＢＡＦを加え、１２ｈ室温で振とうすることによる脱保護処理を行った。反応溶液を０．１ｍｏｌ／ｌ  ＴＥＡＡＢｕｆ．３０ｍｌに希釈し、その溶液をＣ１８  逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）により粗精製した。残渣にｌｏａｄｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（９０％ｆｏｒｍａｍｉｄｅ  ｉｎ  １×ＴＢＥ）２００μｌを加え２０％ＰＡＧＥにより目的のオリゴヌクレオチドを分離した。目的のオリゴヌクレオチドのバンドを切り出し、０．１ｍｏｌ／ｌ  ＴＥＡＡ、０．１ｍｏｌ／ｌ  ＥＤＴＡ水溶液１５ｍｌを加え、一晩振とうさせた。この濾液をＣ−１８  逆相カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）により精製した。オリゴヌクレオチドは、Ｈ2Ｏ  １ｍＬに溶かし、その希釈液の２６０ｎｍにおける吸光度を測定し、その収量を求めた。精製したオリゴヌクレオチドは、３０ｐｍｏｌ分を乾固し、３μｌの滅菌水に溶解させ、３μｌ  のマトリックス溶液と、よく混和させた後、プレートにサンプルをアプライした。サンプルが乾固した後、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳで構造の確認を行った。【００９０】
合成したオリゴヌクレオチド類縁体の配列、分子量の計算値（ｃａｌｕｃｕｌａｔｅｄ）、及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳの測定結果（ｏｂｓｅｒｖｅｄ）を表１に示す。【００９１】
【表１】
2012074012.tif 000018
ここでＴaは、ヌクレオシド類縁体（１）を表す。【００９２】
ｐｏｌｙ  Ｔaのε値はモノマーのε値を１０倍した値を用いた。
ｐｏｌｙ  ＴaはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳでのメインピークは２８２０．１のＮａ付加体である。【００９３】
［実施例１４］
［Ｔｍ値の算出１］
合成した前記オリゴヌクレオチド類縁体において、相補ＤＮＡ及びＲＮＡとの二重鎖の安定性を熱変性法にてＴｍ値を算出し、天然型二重鎖と比較した（Δ℃）。
測定条件：５−８５℃、サンプル濃度１２μｍｏｌ／ｌ、ｂｕｆｆｅｒは１０ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＰｈｏｓｐｈａｔｅ、１００ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＣｌ。【００９４】
２６０ｎｍでのＴｍ測定結果を［図１］及び［表２］に示す。【００９５】
【表２】
2012074012.tif 000019
その結果、天然のチミジンポリマーの場合と比較して、Ｔｍ値が上昇し本アナログは二重鎖の熱的安定性を上昇させることが明らかとなった。この結果は、ヌクレオシド類縁体（１）のホモポリマーが、ナノマテリアルとして有用であることを示唆する。【００９６】
さらに、ファントホッフ・プロットによってエンタルピー差（ΔＨ°）、エントロピー差ΔＳ°を算出し、二重鎖の熱力学的安定性を比較した。ΔＨ°、ΔＳ°を算出した結果を［表３］に示す。【００９７】
Ｒ＝８．３１５［ｋＪ／ｍｏｌ］，４．１８４０ｋＪ／ｍｏｌ＝１ｋｃａｌ／ｍｏｌ。【００９８】
【表３】
2012074012.tif 000020
その結果、二重鎖の安定化は主にエントロピー項によるものであることが明らかとなった。【００９９】
続いて、アナログＴaのＲＮＡとの塩基特異性について検討した。中央に四種の塩基を導入した相補鎖を作成し、二重の安定性をＴｍ測定することにより比較した。
合成したオリゴヌクレオチド類縁体の配列、分子量の計算値（ｃａｌｕｃｕｌａｔｅｄ）、及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳの測定結果（ｏｂｓｅｒｖｅｄ）を［表４］に示す。【０１００】
【表４】
2012074012.tif 000021
［実施例１５］
［Ｔｍ値の算出２］
Ｔｍ測定の結果を［図２］及び［表５］に示す。
測定条件：２０−１００℃、サンプル濃度は３μｍｏｌ／ｌ、ｂｕｆｆｅｒは、１０ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＰｈｏｓｐｈａｔｅ、１００ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＣｌ。【０１０１】
【表５】
2012074012.tif 000022
さらに、ヌクレオシド類縁体（１）を２塩基置換したオリゴヌクレオチド類縁体のＴｍ測定を行った。【０１０２】
［実施例１６］
［Ｔｍ値の算出３］
Ｔｍ測定の結果を［図３］及び［表６］に示す。【０１０３】
【表６】
2012074012.tif 000023
以上の結果から、鎖の中央に導入した糖部開環型ヌクレオシド類縁体（１）は天然の塩基と水素結合を有すること、すなわち、塩基特異性を有するが、二重鎖の熱的安定性を低下させることが明らかとなった。【０１０４】
さらに、内部に合成したシトシンアナログＣｚ：ヌクレオシド類縁体（５）を導入した１８ｍｅｒのオリゴヌクレオチドとその相補鎖を合成した。
合成したオリゴヌクレオチド類縁体の配列、分子量の計算値（ｃａｌｕｃｕｌａｔｅｄ）、及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳの測定結果（ｏｂｓｅｒｖｅｄ）を［表７］に示す。【０１０５】
【表７】
2012074012.tif 000024
さらに、以下に示す配列で合成したオリゴヌクレオチド類縁体と既存のオリゴヌクレオチドを以下のような組み合わせでＴｍ値を測定し、比較した。Ｔｍ測定の結果を［表８］に示す。【０１０６】
【表８】
2012074012.tif 000025
以上の結果から、合成した糖部開環型のシトシンアナログＣｚ：ヌクレオシド類縁体（５）はミスマッチを選択でき、相補鎖と水素結合することが明らかとなった。さらに、熱力学的安定性も天然型と変わらない、もしくはそれ以上の結果を得ることができた。糖部開環型のシトシンアナログＣｚ：ヌクレオシド類縁体（５）を配列の中央に２つ、３つと増やしてもＴｍ値に大きな変化はなかった。【０１０７】
［ｍｉＲ１９９ａへの利用］
ｍｉＲ１９９ａはＨＣＶ（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：Ｃ型肝炎ウイルス）を標的とする配列を含む。そこで、糖部開環型ヌクレオシド類縁体がｍｉＲＮＡへ応用できるか、ガイド鎖選択性を向上するために利用できるかについて検証する。使用したヌクレオシド類縁体（１）：アナログＴaは、１〜２つ導入してもＴｍ値は減少する。そのため、ｍｉＲ１９９ａへの導入は鎖につき一つが限界であると考える。又、ｐｓｉ１９９ａ５ｐ  ｖｅｃｔｏｒとｐｓｉ１９９ａ３ｐ  ｖｅｃｔｏｒの違いによってその遺伝子発現抑制能に違いが生じる。特にｐｓｉ１９９ａ３ｐ  ｖｅｃｔｏｒを用いたときに発現抑制が大きい理由には、５’末端にアデノシンが存在するためＲＩＳＣを形成しやすいこと、ｍｉＲ１９９ａ５ｐにはバルジアウト部位が２カ所存在し、二本鎖から１本鎖への解離を容易にすること、ｍｉＲ１９９ａ３ｐの５’末端側の方をＡＵ塩基対が多く含み、逆にｍｉＲ１９９ａ５ｐの５’末端側の方は主にＧＣ塩基対が存在することから、その熱力的安定性に偏りが生じたことなどが考えられる。【０１０８】
今回、ガイド鎖選択性には様々な要因が重なっていると考えられるため、どの部位にアナログを導入することが最も効果的であるかを検討するために、ｍｉＲ１９９ａ５ｐ、３ｐの塩基Ｕの位置にＴaを一つずつ置換し、計１４本のｍｉＲＮＡを合成し、アッセイを行うこととした。【０１０９】
［実施例１７］
［ｍｉＲＮＡ１９９ａの遺伝子発現抑制能の検証］
ＨＣＶに標的配列を持つｍｉＲ１９９ａ３ｐ、５ｐの様々な部位のＵをヌクレオシド類縁体（１）：アナログＴa（［表９］中ではＹと記載。）と置換した。ヌクレオシド類縁体（１）によるｍｉＲＮＡ１９９ａの修飾部位特異的な遺伝子発現抑制能の変化を検証した。【０１１０】
以下に合成したオリゴヌクレオチド類縁体の配列を示す。【０１１１】
【表９】
2012074012.tif 000026
合成したオリゴヌクレオチド類縁体（ｍｉＲＮＡ＜１＞、ｍｉＲＮＡ＜２＞、ｍｉＲＮＡ＜３＞、ｍｉＲＮＡ＜４＞、ｍｉＲＮＡ＜５＞、ｍｉＲＮＡ＜６＞、ｍｉＲＮＡ＜７＞、ｍｉＲＮＡ＜８＞）を使用して、遺伝子発現抑制能を検証した。【０１１２】
遺伝子発現抑制能は、ｍｉＲＮＡ＜１＞〜ｍｉＲＮＡ＜８＞を、それぞれＨｅＬａ細胞に導入し、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙによって評価した。【０１１３】
以下に、ｍｉＲＮＡ＜１＞〜ｍｉＲＮＡ＜８＞について［表１０］に示す。［表１０］中のｍｉＲは、ｍｉＲＮＡを表す。表中の５ｐはｐｒｅ−ｍｉＲＮＡの５’側のアームに由来するｍｉＲＮＡであり、３ｐはｐｒｅ−ｍｉＲＮＡの３’側のアームに由来するｍｉＲＮＡである。【０１１４】
【表１０】
2012074012.tif 000027
ｍｉＲＮＡ＜１＞は、天然型のｍｉＲ１９９ａ５ｐと天然型のｍｉＲ１９９ａ３ｐで形成されている。ｍｉＲＮＡ＜２＞は、ｍｉＲ１９９ａ５ｐ−＜１＞と天然型のｍｉＲ１９９ａ３ｐで形成されている。ｍｉＲＮＡ＜３＞は、ｍｉＲ１９９ａ５ｐ−＜３＞と天然型のｍｉＲ１９９ａ３ｐで形成されている。ｍｉＲＮＡ＜４＞は、ｍｉＲ１９９ａ５ｐ−＜４＞と天然型のｍｉＲ１９９ａ３ｐで形成されている。ｍｉＲＮＡ＜５＞は、ｍｉＲ１９９ａ５ｐ−＜６＞と天然型のｍｉＲ１９９ａ３ｐで形成されている。ｍｉＲＮＡ＜６＞は、天然型のｍｉＲ１９９ａ５ｐとｍｉＲ１９９ａ３ｐ−＜３＞で形成されている。ｍｉＲＮＡ＜７＞は、天然型のｍｉＲ１９９ａ５ｐとｍｉＲ１９９ａ３ｐ−＜５＞で形成されている。ｍｉＲＮＡ＜８＞は、天然型のｍｉＲ１９９ａ５ｐとｍｉＲ１９９ａ３ｐ−＜７＞で形成されている。【０１１５】
遺伝子発現抑制能を検証した結果を［図４Ａ−４Ｂ］に示す。
糖部開環型ヌクレオシド類縁体（１）：アナログＴaを構成成分として含むｍｉＲＮＡの遺伝子発現抑制能は、ｍｉＲＮＡの修飾部位によって特異性を有することが明らかとなった。ｍｉＲＮＡ＜２＞はどちらのベクターを用いても、あまり発現抑制しなかった。ｍｉＲＮＡ＜４＞、＜５＞は３’末端側にアナログＴaを導入することで不安定化することによって、その逆鎖の５’末端側を不安定化してガイド鎖として取り込ませる。そのため、発現抑制能が天然よりも向上し、逆鎖による発現抑制を抑えることができると考えられる。又、バルジアウト部位に修飾を持つｍｉＲＮＡ＜３＞も天然以上の発現抑制能を持つがその逆鎖もある程度発現を抑制してしまう。ｍｉＲＮＡ＜６＞はｍｉＲＮＡ＜４＞、＜５＞と同様の理由から多少の鎖の選択性が見られるが、その程度は小さい。ｍｉＲＮＡ＜７＞、＜８＞も天然と同程度の発現抑制を示すが、その逆鎖による発現抑制も多少ある。以上の結果から、５’末端側に修飾体を導入して不安定化するよりも３’末端側に修飾体を導入し、その逆鎖をＲＩＳＣに取り込まれるようにした方が、発現抑制能を低下させることなく鎖の選択性を出すことができると考えられる。【０１１６】
［実施例１８］
［ヌクレアーゼ耐性の検証］
ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡについて、へび毒ホスホジエステラーゼ（Ｓｎａｋｅ  ｖｅｎｏｍ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ：ＳＶＰ）による安定性を検討した。ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡは、３’−ｏｖｅｒｈａｎｇのｄＴ（チミジン）をヌクレオシド類縁体（１）に置換した一本鎖ＲＮＡである。前記ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡは、時間依存的にＳＶＰで処理された。反応停止後に、分解したＲＮＡ断片を電気泳動により解析した。【０１１７】
［図５Ａ−５Ｂ］及び［図６］に解析結果を示す。[図６]のＴａ  ＲＮＡが、ヌクレオシド類縁体（１）：Ｔaを構成成分として含むｍｉＲＮＡである。
分解されずに残っているＲＮＡを時間毎（右側より０ｍｉｎ、１ｍｉｎ、５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、３ｈ、６ｈ）に示す。酵素反応中のＲＮＡ濃度は１μｍｏｌ／ｌである。酵素反応系に使用した緩衝液は、酵素に適する緩衝液であれば制限はないが、トリス−塩酸緩衝液が使用された。一定時間経過後、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加え、１００℃で２分間加熱することにより、反応を停止させた。反応後の反応液を、ゲル電気泳動で検証し、逆相高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を使用して分解されずに残っているＲＮＡの残存率を測定した。【０１１８】
以上の結果から、[図６]に示すように、ヌクレオシド類縁体（１）：Ｔaを構成成分として含むｍｉＲＮＡは、天然のｍｉＲＮＡと比較して、５分経過後も５０％以上が分解されずに残存しており、ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含むことによって安定性が増加することが明らかとなった。【０１１９】
［実施例１９］
［ｍｉＲＮＡの核酸プローブへの応用］
ヌクレオシド類縁体（１１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡを使用して、ヌクレオシド類縁体（１１）が光反応性残基であることを利用し、光照射によって相補鎖ＲＮＡを捕獲することができるか検証した。【０１２０】
ヌクレオシド類縁体（１１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡをＮｏ．２とし、ヌクレオシド類縁体（１１）の対となる塩基をそれぞれ変化させた相補鎖ＲＮＡをＮｏ．６、Ｎｏ．７、Ｎｏ．８として、各相補鎖ＲＮＡをＮｏ．２とアニーリングした。【０１２１】
その後、０℃条件下で、各アニーリングしたサンプルに３６５ｎｍｍのＵＶを照射しクロスリンクカップリング反応を開始させた。時間毎に５μｍｌ分取し、７ｍｏｌ／ｌ  Ｕｒｅａ溶液４μｍｌとｌｏａｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ  ４μｍｌを加え反応を停止させた。反応停止後に、変性ゲル電気泳動によって検証した。【０１２２】
［表１１］にＮｏ．２、Ｎｏ．６、Ｎｏ．７及びＮｏ．８の配列を示す。［図７］にＮｏ．２と各ＲＮＡとのクロスリンクカップリング反応の結果を示す。【０１２３】
【表１１】
2012074012.tif 000028
以上の結果から、特にＮｏ．２のＲＮＡとＮｏ．８のＲＮＡとのクロスカップリング反応が顕著に起こることが明らかとなった。この結果は、ヌクレオシド類縁体（１１）を構成成分として含むｍｉＲＮＡが、配列特異的にｍＲＮＡを捕獲することが可能であることを示唆する。したがって、ｍｉＲＮＡが標的とするｍＲＮＡを捕獲し（図８参照。）、捕獲したｍＲＮＡの配列を調べることで、ｍｉＲＮＡの標的となるｍＲＮＡの塩基配列を同定することが可能になると考えられる。【０１２４】
［その他の実施形態］
以上、本発明の実施形態について説明したが、本発明は上記の実施形態に限定されず、この他にも種々の形態で実施することができる。【０１２５】
例えば、ヌクレオシド類縁体（１）〜（１１）のいずれかを構成成分として含むｓｉＲＮＡを合成することもできる。
以下に合成したｓｉＲＮＡの配列を示す。合成した一本鎖のｓｉＲＮＡは、ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含む２１ｍｅｒのＲＮＡ、及びヌクレオシド類縁体（１０）を構成成分として含む２２ｍｅｒのＲＮＡである。【０１２６】
ヌクレオシド類縁体（１）を構成成分として含む２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡの配列を表１２に示す。ＯＮ１及びＯＮ２は、３’末端のダングリングエンド部位にチミジンが導入されている。ＯＮ３及びＯＮ４は、３’末端のダングリングエンド部位にヌクレオシド類縁体（１）が導入されている。ＯＮ８は、５’末端側にヌクレオシド類縁体（１）が導入され、３’末端のダングリングエンド部位にチミジンが導入されている。ＯＮ９は、３’末端側にヌクレオシド類縁体（１）が導入され、３’末端のダングリングエンド部位にチミジンが導入されている。【０１２７】
【表１２】
2012074012.tif 000029
さらに合成した一本鎖２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡは、［表１３］に示すように、それぞれ相補鎖の配列と二本鎖を形成させた。【０１２８】
【表１３】
2012074012.tif 000030
ｓｉＲＮＡ＜１＞は、天然型のｓｉＲＮＡであり、センス鎖がＯＮ１、アンチセンス鎖がＯＮ２である。ｓｉＲＮＡ＜２＞は、センス鎖がＯＮ３、アンチセンス鎖がＯＮ４である。ｓｉＲＮＡ＜６＞は、センス鎖がＯＮ８、アンチセンス鎖がＯＮ２である。ｓｉＲＮＡ＜７＞は、センス鎖がＯＮ９、アンチセンス鎖がＯＮ２である。【０１２９】
ヌクレオシド類縁体（１０）を構成成分として含む２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡの配列を表１４に示す。ｓｅｎｓｅ、ａｎｔｉｓｅｎｓｅは５’末端側にヌクレオシド類縁体（１０；Ｅ）が導入されている。【０１３０】
【表１４】
2012074012.tif 000031
さらに合成した一本鎖２２ｍｅｒのｓｉＲＮＡは、表１５に示すように、それぞれ相補鎖の配列と二本鎖を形成させた。ｓｉＲＮＡｓｅｎｓｅは、センス鎖がｓｅｎｓｅ、アンチセンス鎖が天然のａｎｔｉｓｅｎｓｅである。ｓｉＲＮＡａｎｔｉｓｅｎｓｅは、センス鎖が天然のｓｅｎｓｅ、アンチセンス鎖がａｎｔｉｓｅｎｓｅである。Ｔｍ値測定結果を［図９］及び［表１５］に示す。【０１３１】
【表１５】
2012074012.tif 000032
Ｔｍ値の測定結果から、天然のｓｉＲＮＡと比較して、ヌクレオシド類縁体（１０）をセンス鎖の５’末端側に構成成分として含むｓｉＲＮＡ及び、ヌクレオシド類縁体（１０）をアンチセンス鎖の５’末端側に構成成分として含むｓｉＲＮＡは共にＴｍ値が上昇し、ヌクレオシド類縁体（１０）は二重鎖の熱的安定性を上昇させることが明らかとなった。
［遺伝子発現抑制能の検証］
［表１３］に開示されているｓｉＲＮＡ＜１＞、ｓｉＲＮＡ＜２＞、ｓｉＲＮＡ＜６＞、ｓｉＲＮＡ＜７＞及び、［表１５］に開示されているｓｉＲＮＡｓｅｎｓｅ，ｓｉＲＮＡａｎｔｉｓｅｎｓｅについて遺伝子発現抑制能を検証した。【０１３２】
遺伝子発現抑制能は、ピーエスアイ  チェックベクター（Ｐｓｉ  ｃｈｅａｋ  ｖｅｃｔｏｒ）を用いた。各ｓｉＲＮＡが０．１、１．０、１０ｎｍｏｌ／ｌになるように調製した試料をＨｅＬａ細胞にトランスフェクションし、デュアル−ルシフェラーゼ  レポーター  アッセイ（Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙ）を行うことによって検証した。ｓｉＲＮＡ＜１＞、ｓｉＲＮＡ＜２＞、ｓｉＲＮＡ＜６＞、ｓｉＲＮＡ＜７＞の遺伝子発現抑制能の結果を［図１０］に、ｓｉＲＮＡｓｅｎｓｅ，ｓｉＲＮＡａｎｔｉｓｅｎｓｅの遺伝子発現抑制能の結果を［図１１］に示す。【０１３３】
［図１０］に示すようにｓｉＲＮＡ＜２＞は、天然型ｓｉＲＮＡ＜１＞と比較して、同程度の遺伝子発現抑制能を示したが、試料の濃度が低濃度であると、天然型ｓｉＲＮＡ＜１＞よりも遺伝子発現抑制能が低くなることが示された。又、ｓｉＲＮＡ＜６＞は、天然型ｓｉＲＮＡと比較して、遺伝子発現抑制能が低下すること示された。この理由は、ｓｉＲＮＡ＜６＞は、センス鎖の５’末端側にヌクレオシド類縁体（１）が導入されているので、二本鎖が不安定となり、センス鎖が取り込まれやすくなったためと考えられる。さらに、ｓｉＲＮＡ＜７＞は、天然型ｓｉＲＮＡと比較して、高い遺伝子発現抑制能を有することが明らかとなった。この理由は、ｓｉＲＮＡ＜７＞は、センス鎖の３’末端側にヌクレオシド類縁体（１）が導入されているので、アンチセンス鎖の５’末端側が不安定化されたため、アンチセンス鎖が取り込まれやすくなったためと考えられる。【０１３４】
また、［図１１］に示すように、ｓｉＲＮＡｓｅｎｓｅは、天然型ｓｉＲＮＡｎａｔｉｖｅと比較して、試料の濃度が高濃度であると遺伝子発現抑制能が高くなることが明らかとなった。ｓｉＲＮＡａｎｔｉｓｅｎｓｅは、天然型ｓｉＲＮＡｎａｔｉｖｅと比較して、遺伝子発現抑制能が低くなることが明らかとなった。【０１３５】
なお、上述の実施形態では、一般式（１），（３），（５），（１０），（１１）で表されるヌクレオシド類縁体の一例として、ヌクレオシド類縁体（１），（３），（５），（１０），（１１）を例示して、それらの合成方法を詳述したが、一般式（１），（３），（５），（１０），（１１）で表されるヌクレオシド類縁体であれば、一部の基が例示したヌクレオシド類縁体（１），（３），（５），（１０），（１１）とは異なっていても同等な作用・効果を期待することができ、それらの合成方法も、例示したヌクレオシド類縁体（１），（３），（５），（１０），（１１）とほぼ同等な手順での合成ができる。【０１３６】
また、一般式（２），（４）,（６），（７），（８），（９）で表されるヌクレオシド類縁体についても、これらのヌクレオシド類縁体の塩基部に相当する分子構造を持つ出発原料を採用すれば、後は、例示したヌクレオシド類縁体（１），（３），（５），（１０），（１１）とほぼ同等な手順で合成することができる。【０１３７】
より詳しくは、水酸基がシリル基で保護された糖部と、ハロゲン置換基を有する塩基部とを、パラジウム触媒存在下でカップリング反応させることによって、カップリング体を得た後、保護基の脱保護反応、精製工程を経て、一般式（２），（４）,（６），（７），（８），（９）で表される構造を有するヌクレオシド類縁体を合成することができる。【０１３８】
さらに、ヌクレオシド類縁体の一般式（２ａ），（３ａ）〜（９ａ），（１１ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むｓｉＲＮＡについても、その効果を実験的に確認したところ、ヌクレオシド類縁体（１；Ｔａ）及び（１０；Ｅ）を導入した場合と同様な結果が得られた。
【産業上の利用可能性】
【０１３９】
本発明のヌクレオシド類縁体をｓｉＲＮＡ，ｍｉＲＮＡに導入することで活性が増強されることからＲＮＡ創薬への利用が可能になる。さらに、光に反応し共有結合が可能な活性種を与える光反応性基を導入したヌクレオシド類縁体をｍｉＲＮＡに導入することにより、ｍＲＮＡを捕獲することが可能であり、創薬の標的を探索することが出来る。【０１４０】
本発明のオリゴヌクレオチド類縁体を利用した治療法は、標的遺伝子あるいはウイルスの塩基配列が明らかであれば論理的に設計できることから、これまで治癒が困難とされてきた難治性疾患に対する新たな治療法と成り得る。【０１４１】
また、ＲＮＡ干渉に関与するｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡによる遺伝子制御機構の解明につながり、生命科学分野における解決しなくてはならない最重要課題の一つを解決するための研究に活用することが出来る。
【図９】
2012074012.tif 000039
【図１】
2012074012.tif 000040
【図２】
2012074012.tif 000041
【図３】
2012074012.tif 000042
【図４Ａ−４Ｂ】
2012074012.tif 000043
【図５Ａ−５Ｂ】
2012074012.tif 000044
【図６】
2012074012.tif 000045
【図７】
2012074012.tif 000046
【図８】
2012074012.tif 000047
【図１０】
2012074012.tif 000048
【図１１】
2012074012.tif 000049
【配列表】
2012074012000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成24年10月19日(2012.10.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
下記一般式（１）〜（９）のいずれかで表されるヌクレオシド類縁体又はその塩。
【化１】
2012074012.tif 000050
（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される。）
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
以下、本発明において採用した特徴的構成について説明する。
本発明のヌクレオシド類縁体又はその塩は、下記一般式（１）〜（９）であることを特徴とする。（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される。）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
【化１】
2012074012.tif 000051
上記一般式（１）〜（９）中、ヌクレオシドの糖部に相当する部分は開環型であり、三重結合を備えている。また、上述の官能基には、水酸基、アミノ基が挙げられる。また上述の保護基とは、有機合成の反応において、水酸基やアミノ基などの官能基に副反応が進行しないようにそれらを保護するために導入する有機分子のことである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
上記式（１）〜（９）において、Ｒ1は、水素原子、又は核酸合成における官能基である水酸基の保護基のいずれかであると好ましい。Ｒ2は、水素原子、核酸合成における官能基である水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択されることが好ましい。Ｒ3は、水素原子、核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基であると好ましい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
上記一般式（１１）において、Ｒ1、Ｒ2は、一般式（１）〜（９）において説明したＲ1、Ｒ2と同様な基であると好ましい。
Ｘ1は、ジアジリン基であると好ましい。
【手続補正書】
【提出日】平成24年12月13日(2012.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）〜（９）のいずれかで表されるヌクレオシド類縁体又はその塩。
【化１】
2012074012.tif 000052
（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における官能基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される。）
【請求項２】
前記Ｒ1は、水素原子、又は前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基のいずれかである、
前記Ｒ2は、水素原子、前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択され、
前記Ｒ3は、水素原子、又は前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基のいずれかである
ことを特徴とする請求項１に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項３】
前記Ｒ1、Ｒ2が前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基の場合、
前記核酸合成における官能基である水酸基の保護基は、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基、脂肪族で置換されたシリル基、及び芳香族で置換されたシリル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項２に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項４】
前記脂肪族アシル基は、アセチル基であり、前記芳香族アシル基は、ベンゾイル基であり、前記アリール基で置換されたメチル基は、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、４，４’−ジメトキシトリチル基、及び４−モノメトキシトリチル基からなる群より選択され、前記脂肪族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基であり、前記芳香族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基である
ことを特徴とする請求項３に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項５】
前記Ｒ3が前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基の場合、
前記核酸合成における官能基であるアミノ基の保護基は、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、アルコキシ基、アリール基で置換されたメチル基、脂肪族で置換されたシリル基、芳香族で置換されたシリル基、脂肪族で置換されたスルホニル基、芳香族で置換されたスルホニル基、カルボニル基、及びアミド基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項２に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項６】
前記脂肪族アシル基は、アセチル基であり、前記芳香族アシル基は、ベンゾイル基であり、前記アリール基で置換されたメチル基は、ベンジル基であり、前記脂肪族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルであり、前記芳香族で置換されたシリル基は、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルであり、前記芳香族で置換されたスルホニル基は、ｐ−トルエンスルホニル基であり、前記カルボニル基は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、又はベンジルオキシカルボニル基のいずれかであり、前記アミド基は、ジメチルホルムアミド基、又はジメチルアセトアミド基のいずれかである
ことを特徴とする請求項５に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項７】
前記リン酸基には、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、及び固層合成用活性化リン酸基を含む
ことを特徴とする請求項１に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項８】
前記核酸合成における保護基で保護されたリン酸基は、２−クロロフェニルリン酸基、又は４−クロロフェニルリン酸基のいずれかである
ことを特徴とする請求項７に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項９】
前記固層合成用活性化リン酸基は、−Ｐ（ＯＣ2Ｈ4ＣＮ）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）、又は−Ｐ（ＯＣＨ3）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）のいずれかである
ことを特徴とする請求項７に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１０】
下記一般式（１１）で表されるヌクレオシド類縁体又はその塩。
【化２】
2012074012.tif 000053
（但し、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なる基であり、それぞれが、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基、からなる群より選択され、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項１１】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１２】
前記Ｒ1は、水素原子、又は核酸合成における水酸基の保護基のいずれかであり、
前記Ｒ2は、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１３】
前記リン酸基には、核酸合成における保護基で保護されたリン酸基、及び固層合成用活性化リン酸基を含む
ことを特徴とする請求項１０に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１４】
前記核酸合成における保護基で保護されたリン酸基は、２−クロロフェニルリン酸基、又は４−クロロフェニルリン酸基のいずれかである
ことを特徴とする請求項１３に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１５】
前記固層合成用活性化リン酸基は、−Ｐ（ＯＣ2Ｈ4ＣＮ）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）、又は−Ｐ（ＯＣＨ3）（Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）2）のいずれかである
ことを特徴とする請求項１３に記載のヌクレオシド類縁体又はその塩。
【請求項１６】
式（１ａ）〜（１０ａ）のいずれかで表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体。
（但し、Ａｒは、芳香族炭化水素基又は多環芳香族炭化水素基のいずれかである。）
【化３】
2012074012.tif 000054
【請求項１７】
一般式（１１ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体。
【化４】
2012074012.tif 000055
（但し、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項１８】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１７に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項１９】
一本鎖であることを特徴とする請求項１６、又は請求項１７に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２０】
相補的な配列を少なくとも一部含むオリゴヌクレオチドと二本鎖を形成している
ことを特徴とする請求項１６、又は請求項１７に記載のオリゴヌクレオチド類縁体。
【請求項２１】
請求項１６〜請求項２０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド類縁体を含有する
ことを特徴とする遺伝子発現抑制剤。
【請求項２２】
一般式（１１ａ）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体を含有する
ことを特徴とする遺伝子検出用核酸プローブ。
【化５】
2012074012.tif 000056
（但し、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）
【請求項２３】
前記Ｘ2は、トリフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、及びモノフルオロメチル基からなる群より選択されることを特徴とする請求項２２に記載の遺伝子検出用核酸プローブ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
又、本発明のヌクレオシド類縁体又はその塩は、下記一般式（１１）（但し、Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なる基であり、水素原子、核酸合成における水酸基の保護基、及びリン酸基からなる群より選択され、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）であることを特徴とする。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
ジアジリン基は、光を吸収すると反応性の高い中間体カルベンを生じ、標的分子と共有結合が可能になる基である。
Ｘ2におけるアルキル基としては、炭素数が１〜５であるアルキル基、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
【化２】
2012074012.tif 000057
さらに、一般式（１１）中、ヌクレオシドの糖部に相当する部分は開環型であり、三重結合を備えている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
上記一般式（１１）において、Ｒ1、Ｒ2は、一般式（１）〜（９）において説明したＲ1、Ｒ2と同様な基であると好ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
【化３】
2012074012.tif 000058
又、本発明のオリゴヌクレオチド類縁体は、式（１１ａ）（但し、Ｘ2はアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基である。）で表される構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体であることを特徴とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
ジアジリン基は、光を吸収すると反応性の高い中間体カルベンを生じ、標的分子と共有結合が可能になる基である。
Ｘ2におけるアルキル基としては、炭素数が１〜５であるアルキル基、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【化４】
2012074012.tif 000059
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
本発明の遺伝子検出用核酸プローブは、上記一般式（１１ａ）の構造を一つ以上構成成分として含むオリゴヌクレオチド類縁体を含有することを特徴とする。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
一方、本発明のヌクレオシド類縁体の塩基部は、複素環の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体、芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体、及び多環芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体からなる群より選択される。芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体には、光に反応し共有結合が可能な活性種を与えるジアジリン基、及びアルキル基又は少なくとも一つの水素がハロゲンで置換されたアルキル基のいずれかを備える芳香族炭化水素の一つの水素原子をハロゲン原子に置換したハロゲン置換体を含む。
【国際調査報告】
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