(57)【要約】  本発明は、苦味が低減されつつ脂肪吸収抑制効果を有するホップエキスに関する。より詳細には、本発明は、ホップエキスの酸化反応により得られるホップエキス酸化反応物に関する。
2012081676.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホップエキスおよび粉末化基材を含んでなる粉末ホップエキスを酸化することを含んでなる、ホップエキス酸化反応物の製造方法。
【請求項２】
前記ホップエキスが、超臨界二酸化炭素または有機溶媒によって抽出処理されたものである、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記粉末化基材が、食品または食品添加物から選択される基材である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記粉末化基材が、糖類、多糖類、無機質担体、醸造原料からなる群から選択される少なくとも一つのものである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記粉末化基材が、澱粉、デキストリン、シクロデキストリン、セルロース、珪藻土、パーライト、活性白土、活性炭、シリカゲル、合成吸着樹脂、ホップ、ホップ粕からなる群から選択される少なくとも一つのものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ホップエキスと粉末化基材との重量比が１：１〜１：１０である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記酸化された粉末ホップエキスからホップエキス酸化反応物を単離することをさらに含んでなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ホップエキス酸化反応物が、次の成分あるいは成分群（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）：
（Ａ）α酸
（Ｂ）イソα酸
（Ｃ）β酸
（Ｄ）Oxi-Fr.1
（Ｅ）Oxi-Fr.2
（Ｆ）β1、β2、β3、β4
の少なくとも一つを含有し、（Ａ）〜（Ｆ）の各重量比が、（Ｄ）／（（Ａ）＋（Ｂ））＞0.1以上または（Ｆ）／（Ｃ）＞0.3以上または（Ｅ）／（Ｃ）＞2以上である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記（Ｆ）におけるβ1が、式（I）で表されるいずれかの化合物：
【化１】
2012081676.tif 000029
を含んでなり
β2が、式（II）で表されるいずれかの化合物：
【化２】
2012081676.tif 000030
を含んでなり、
β3が、以下の式（III）または（IV）で表されるいずれかの化合物：
【化３】
2012081676.tif 000031
【化４】
2012081676.tif 000032
を含んでなり、
β4が、式（V）または（VI）で表されるいずれかの化合物：
【化５】
2012081676.tif 000033
【化６】
2012081676.tif 000034
を含んでなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合が５０％以下である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０に記載のいずれか一項に記載の方法により得られる、ホップエキス酸化反応物。
【請求項１２】
次の成分あるいは成分群（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）：
（Ａ）α酸
（Ｂ）イソα酸
（Ｃ）β酸
（Ｄ）Oxi-Fr.1
（Ｅ）Oxi-Fr.2
（Ｆ）β1、β2、β3、β4
の少なくとも一つを含有し、（Ａ）〜（Ｆ）の各重量比が、（Ｄ）／（（Ａ）＋（Ｂ））＞0.1以上または（Ｆ）／（Ｃ）＞0.3以上または（Ｅ）／（Ｃ）＞2以上であることを特徴とする、ホップエキス酸化反応物。
【請求項１３】
前記（Ｆ）におけるβ1が、式（I）で表されるいずれかの化合物：
【化７】
2012081676.tif 000035
を含んでなり
β2が、式（II）で表されるいずれかの化合物：
【化８】
2012081676.tif 000036
を含んでなり、
β3が、以下の式（III）または（IV）で表されるいずれかの化合物：
【化９】
2012081676.tif 000037
【化１０】
2012081676.tif 000038
を含んでなり、
β4が、式（V）または（VI）で表されるいずれかの化合物：
【化１１】
2012081676.tif 000039
【化１２】
2012081676.tif 000040
を含んでなる、請求項１２に記載のホップエキス酸化反応物。
【請求項１４】
ＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合が５０％以下である、ホップエキス酸化反応物。
【請求項１５】
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のホップエキス酸化反応物を有効成分として含んでなる、脂質吸収抑制剤。
【請求項１６】
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のホップエキス酸化反応物が添加されてなる、飲食品。
【請求項１７】
脂質吸収抑制剤の製造における、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のホップエキス酸化反応物の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本特許出願は、先に出願された日本国特許出願である特願２０１０−２７９９３３号（出願日：２０１０年１２月１５日）に基づく優先権の主張を伴うものであり、かかる先の特許出願における全開示内容は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、苦味・エグ味が低減されたホップエキス酸化反応物、その製造法および用途に関し、より詳細には、ホップエキス酸化反応物を用いた食品およびそれを有効成分とする脂質吸収抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
近年、健康を意識した飲食品が多く開発され、市販もされている。健康機能の実感がある本物の製品を得るためには、当然有効量を上回る配合が必要となる。古くから「良薬口に苦し」といわれているように、人体に有用な効果を与える、いわゆる機能性成分は苦味を伴うことがたびたびある。その際、飲食品に有効量以上を配合した場合、嗜好性が低下して、製品としての魅力が低下してしまう。【０００４】
ビール中の苦味成分の起源であるホップは、古くから民間薬としても用いられており、鎮静効果、健胃効果などの様々な健康機能が知られている。このホップから得られる抽出物を飲食品に対して一定量以上配合すると独特の強烈な苦味やエグ味が生じてしまい、嗜好性を損なう恐れがある。【０００５】
このような苦味を除去あるいは抑制するために、多くの試みが報告されている。苦味低減素材として用いられる物質として、フォスファチジン酸（商品名「ベネコートＢＭＩ」花王株式会社）、Ｌ−オルニチン（食の科学 No.317 p54 2004）などが挙げられる。しかし、いずれも単独では効果が必ずしも強くなく、特に上記ホップ抽出物の苦味を抑制することは難しかった。また、スクラロースやソーマチンなどの甘味料添加によるマスキング技術（特開２００８−９９６８２号公報）では、甘味によって苦味が多少マスクされるものの、その強い甘味のため用途が限られたものになる。【０００６】
医薬品の場合は、錠剤の場合では通常糖衣が主に行われ、その他フィルムコーティング技術やマイクロカプセル化等が用いられているが、完全に苦味のマスキングをすることは難しかった。さらに、液剤の場合は飲料と同様にこれらの技術を使用することができず、飲食品や医薬品の分野では苦味の抑制は依然として大きな課題である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−９９６８２号公報
【特許文献２】特許第４５０３３０２号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】食の科学 No.317 p54 2004
【非特許文献２】IntJObes(Lond). 2005 Aug;29(8):991-7
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これまでにホップエキスに含まれるイソα酸等にＰＰＡＲアゴニスト作用があり、この作用を介して脂質代謝改善機能があることが報告されている（特許第４５０３３０２号）。また、イソα酸には膵リパーゼ阻害活性があり、脂質の吸収を抑制する作用があることが報告されている（IntJObes(Lond). 2005 Aug;29(8):991-7）。このような理由からα酸、β酸、イソα酸などのホップ苦味成分を主成分に含むホップエキスは健康機能性素材としての活用が期待される。しかしながら、イソα酸には強烈な苦味があり、α酸、β酸には強烈なエグ味があるため、飲食品や医薬品へ応用する際にはその苦味やエグ味の抑制が課題となっていた。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ホップエキス中のα酸（フムロン類）・β酸（ルプロン類）・イソα酸（イソフムロン類）などを酸化反応させて含量を低下させて得られたホップエキス酸化反応物がイソα酸等の含量を大幅に低下させているにも関わらず、健康機能性効果として脂質吸収抑制作用を有すること、ホップエキス酸化反応物の苦味・エグ味が大幅に低減されること、さらに、ホップエキスを粉末化して酸素と接触させることでホップエキス酸化反応物を効率よく製造することができることを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。【００１１】
すなわち、本発明によれば、ホップエキスおよび粉末化基材を含んでなる粉末ホップエキスを酸化することを含んでなる、ホップエキス酸化反応物の製造方法が提供される。【００１２】
本発明によれば、また、上記方法により製造された、苦味・エグ味が低減されたホップエキス酸化反応物（以下、単に「本発明のホップエキス酸化反応物」ということがある）、およびホップエキス酸化反応物が添加されてなる、飲食品（以下、単に「本発明の飲食品」ということがある）が提供される。【００１３】
本発明によれば、また、ホップエキス酸化反応物を有効成分として含んでなる、脂質吸収抑制剤（以下、単に「本発明の抑制剤」ということがある）が提供される。【００１４】
本発明によれば、更に、ホップエキス酸化反応物をヒトを含む哺乳動物に投与することを含んでなる、脂質吸収抑制方法が提供される。【００１５】
本発明によれば、脂質吸収抑制効果を有する飲食品の製造のためのホップエキス酸化反応物の使用が提供される。【００１６】
本発明のホップエキス酸化反応物は脂質吸収抑制作用を有するとともに、異性化されたホップエキスのような強烈な苦味や異性化処理されていないホップエキスのような強烈なエグ味がない。従って、本発明のホップエキス酸化反応物や本発明の抑制剤は脂質吸収抑制作用などの生理活性を期待しつつ、苦味・エグ味のマスキング手段を講じずにそのまま摂取できる点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ホップエキスに含まれる苦味成分とホップエキス酸化反応物に含まれる成分を示した図である。
【図２−１】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例１）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図２−２】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例１）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図２−３】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例１）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の別の拡大図である。
【図２−４】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例１）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長３５５nm)である。
【図３−１】実施例１記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図３−２】実施例１記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図３−３】実施例１記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長３５５nm)の拡大図である。
【図４−１】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例２）のＨＰＬＣクロマトグラムム(検出波長２７０nm)である。
【図４−２】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例２）のＨＰＬＣクロマトグラムム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図４−３】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例２）のＨＰＬＣクロマトグラムム(検出波長２７０nm)の別の拡大図である。
【図４−４】超臨界二酸化炭素抽出して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例２）のＨＰＬＣクロマトグラムム(検出波長３５５nm)である。
【図５−１】実施例２記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図５−２】実施例２記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図５−３】実施例２記載のホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長３５５nm)である。
【図６−１】超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理を施して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例３）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図６−２】超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理を施して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例３）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図６−３】超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理を施して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例３）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の別の拡大図である。
【図６−４】超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理を施して製造されたホップエキスを粉末化して酸化反応に付した後の酸化反応物（実施例３）のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長３５５nm)である。
【図７−１】実施例３におけるホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図７−２】実施例３におけるホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図７−３】実施例３におけるホップエキス酸化反応物の製造原料であるホップエキスのＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長３５５nm)である。
【図８−１】実施例５における原料ホップエキスおよび６０℃２４時間酸化反応を行った後のホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−２】実施例５における原料ホップエキスおよび６０℃２４時間酸化反応を行った後のホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)の拡大図である。
【図８−３】実施例７におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−４】実施例８におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−５】実施例９におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−６】実施例１０におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−７】実施例１１におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図８−８】実施例１２におけるホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣクロマトグラム(検出波長２７０nm)である。
【図９】ホップエキス酸化反応物の脂質吸収抑制作用を示した図である。
【図１０】ホップエキス酸化反応物の膵リパーゼ阻害活性を示した図である。
【図１１】ホップエキス酸化反応物の５０％膵リパーゼ活性阻害濃度（ＩＣ５０）を示した図である。
【図１２】ホップエキス酸化反応物の水溶性ナトリウム塩製剤のHPLCクロマトグラム（検出波長２７０nm）である。
【図１３】β１（Hydroxytricyclocolupone epimer B）と、β２（Hydroxytricyclocolupone epimer Ａ）は、C４位の立体配置が異なる立体異性体であることを示す。
【発明の具体的説明】
【００１８】
［ホップエキス酸化反応物］
本発明により提供されるホップエキス酸化反応物は、ホップエキス中の成分を酸化反応に付すことにより得ることができる。本発明において「酸化反応」とは、ホップエキス中の成分であるα酸、イソα酸、β酸が、より親水性の高い酸化生成物に変化しうる限り、特に限定されるものではない。また、反応の進行はＨＰＬＣを用いた分析により確認することができる。また、本発明において「ホップエキス」とは、ホップ毬花の抽出物を意味し、ホップエキスを異性化処理に付すことにより得られた異性化ホップエキスや還元剤を用いてイソα酸を還元させた還元型異性化ホップエキスを含む意味で用いられる。ホップエキスの抽出手法や異性化処理については後述する。
【００１９】
ホップエキスにはα酸（フムロン類）、β酸（ルプロン類）などの酸性樹脂成分が含まれている。また、異性化されたホップエキスにはイソα酸（イソフムロン類）などの酸性樹脂成分が含まれている。本発明において「α酸、フムロン類」は、フムロン、アドフムロン、コフムロン、ポストフムロン、およびプレフムロンを含む意味で用いられる。また、本発明において「β酸、ルプロン類」はルプロン、アドルプロン、コルプロン、ポストルプロン及びプレルプロンを含む意味で用いられる。さらに、本発明において「イソα酸、イソフムロン類」は、イソフムロン、イソアドフムロン、イソコフムロン、イソポストフムロン、イソプレフムロン、Rho-イソフムロン、Rho-イソアドフムロン、Rho-イソコフムロン、Rho-イソポストフムロン、Rho-イソプレフムロン、テトラハイドロイソフムロン、テトラハイドロイソアドフムロン、テトラハイドロイソコフムロン、テトラハイドロイソプレフムロン、テトラハイドロイソポストフムロン、ヘキサハイドロイソフムロン、ヘキサハイドロイソアドフムロン、ヘキサハイドロイソコフムロン、ヘキサハイドロイソポストフムロン、ヘキサハイドロイソプレフムロン、を含む意味で用いられる。なお、イソフムロン類にはシスおよびトランス立体異性体が存在するが、特に断りがない限りその両者を含む意味で用いられる。また本発明において上記の成分を総称して苦味成分と呼ぶことがある。
【００２０】
上述のようにホップエキスには様々なタイプのものが存在するが、ホップエキスの従来の利用としては、ビール系飲料の醸造、ノンアルコールビールテイスト飲料への利用にほぼ限定されており、これらの飲料にビールらしい苦味や香りを付与することを主目的として利用されている。ホップエキスはホップ毬花やホップペレットなどの植物原体と比べて保存性に優れ、含有苦味成分の安定性、均一性も優れているため、苦味成分を上記飲料へ安定的に付与することができる。これに対し、ホップエキスを敢えて酸化反応に付し、α酸、β酸、イソα酸などの苦味成分を低減させた後に利用するという発想はこれまでになかったものである。また、エキス中の苦味成分は植物原体中よりも安定であるため、そのまま酸化反応に付しても効率的に酸化反応物を得るのは難しいが、ホップエキスを粉末化した後に酸化反応に付すことで、非常に効率よく本発明のホップエキス酸化反応物を得ることができる。
【００２１】
後記実施例によると、ホップエキスを酸化反応に付すことによりα酸、イソα酸およびβ酸の含有量が低減され、oxidation-fraction1（Oxi-Fr1）、oxidation-fraction2（Oxi-Fr2）、β1、β2、β3、β4などの成分の含有量が増加する（これら成分の分析法および定義については実施例４参照）。従って、「ホップエキス酸化反応物」の例としては、実施例４のＨＰＬＣ分析を実施した場合に、ホップエキス酸化反応物のうち、「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、が重量比で0.1以上または「（β1+β2+β3+β4）／β酸」、が重量比で0.3以上または「Oxi-Fr2／β酸」、が重量比で2.0以上であるものが挙げられる（β1+β2+β3+β4はβ１−４とも記載する）。尚、原料ホップエキスとして（α酸＋イソα酸）またはβ酸のどちらか一方が他方に比べて無視できるほど含有量が少ない（目安として1/10以下）ものも使用可能であり、その場合、上記パラメータのうち含有量が無視できる成分を含むパラメータは考えなくてもよい（例えば実施例２、１０）。
【００２２】
また、実施例2から明らかなようにβ１−４各成分を含むOxi-Fr2はホップエキス中のβ酸の酸化反応物で主に構成され、この知見とさらに実施例10および12からOxi-Fr1はホップエキス中のα酸およびイソα酸の酸化反応物で主に構成されていることが分かる。ホップエキス中の苦味成分と酸化生成物の関係を図１に示す。
【００２３】
また、実施例17から明らかなように、β１−４各成分は以下に示される化合物で構成されている。
【００２４】
β１
β１は、以下の式（Ｉ）で表されるいずれかの化合物を含んでなる。β１は、式（Ｉ）で表される化合物のいずれか一つであってもよいし、式（Ｉ）で表される化合物の混合物であってもよい。したがって、一つの態様によれば、β１は、式（Ｉ）で表されるいずれかの一方または両方の化合物である。
【化１】
2012081676.tif 000003
【００２５】
β２
β２は、以下の式（II）で表されるいずれかの化合物を含んでなる。β２は、式（II）で表される化合物のいずれか一つであってもよいし、式（II）で表される化合物の混合物であってもよい。したがって、一つの態様によれば、β２は、式（II）で表されるいずれかの一方または両方の化合物である。
【化２】
2012081676.tif 000004
【００２６】
β３
β３は、以下の式（III）または（IV）で表されるいずれかの化合物を含んでなる。β３は、式（III）または（IV）で表される化合物のいずれか一つであってもよいし、式（III）または（IV）で表されるいずれか２つ以上の化合物の混合物であってもよい。したがって、一つの態様によれば、β２は、式（III）で表される化合物および式（IV）で表される化合物から選択される少なくとも一つの化合物である。
【化３】
2012081676.tif 000005
【化４】
2012081676.tif 000006
【００２７】
β４
β４は、以下の式（V）または（VI）で表されるいずれかの化合物を含んでなる。β４は、式（V）または（VI）で表される化合物のいずれか一つであってもよいし、式（V）または（VI）で表されるいずれか２つ以上の化合物の混合物であってもよい。したがって、一つの態様によれば、β４は、式（V）で表される化合物および式（VI）で表される化合物から選択される少なくとも一つの化合物である。
【化５】
2012081676.tif 000007
【化６】
2012081676.tif 000008
【００２８】
実施例１〜３、５〜１２に記載の手順で調製されたホップエキス酸化反応物には、α酸、β酸、およびイソα酸の酸化生成物が含まれており、この酸化生成物を主成分に含むホップエキス酸化反応物は実施例１３に示されているようにホップエキス特有の苦味・エグ味が低減されており、尚且つ実施例１４および１５に示されているような生理活性を奏することができる。
【００２９】
［ホップエキス酸化反応物の調製］
粉末化処理後の酸化反応
本発明のホップエキス酸化反応物は、ホップエキスを粉末化基材と混合し、粉末化させた後に酸化反応に付すことにより効率的に製造することができる。ホップエキスをそのままの形態で加熱する場合に酸化反応に膨大な時間を要することを勘案すれば、本発明のようにホップエキスを粉末化した後に酸化することは、産業利用上有利である。
【００３０】
ホップエキスの粉末化において、ホップエキスと粉末化基材との重量比は、粉末化したホップエキスが均一に調製できれば特に限定されるものではないが、好ましくは１:１〜１:１０程度であり、より好ましくは、１:２〜１：５程度である。
【００３１】
また、ホップエキスの酸化反応の温度範囲は、好ましくは室温〜１２０℃であり、より好ましくは６０℃〜８０℃である。
【００３２】
また、ホップエキスの酸化反応の反応時間は、好ましくは数時間〜数週間であり、より好ましくは４時間〜１週間であり、さらに好ましくは８時間〜９６時間である。
【００３３】
粉末化基材としては、ホップエキスを粉末形態にできるものであれば特に限定されるものではないが、ホップエキス酸化反応物の食品用途での使用を考えると、一般的な飲食品として許容可能な添加剤や食品そのものを用いるのが好ましい。かかる添加剤や食品としては、好ましくは多糖類、無機質担体、醸造原料であり、より好ましくは、デキストリン、セルロースなどの賦形剤、珪藻土、パーライト、活性白土などの製造助剤、ホップやホップ粕などの食品が上げられる。粉末化基材としては単一の基材を用いてもよいし、複数の基材を任意の割合で混合したものを用いてもよい。また、酸化反応に付した後の粉末状態のホップエキス酸化反応物は、そのままの形態でも使用可能であるが、粉末化に用いた基材を除去し、ホップエキス酸化反応成分のみを使用してもよい。ホップエキス酸化反応成分のみを抽出するにはホップエキス成分を溶解し、基材を溶解しない溶媒を使用すればよい。例えばデキストリンを基材に用いた場合はエタノール等の溶剤が使用でき、セルロースを基材に用いた場合、エタノール等の溶剤やアルカリ水溶液などによりホップ酸化反応成分のみ抽出することができる。粉末化に用いた基材を分離する必要がない場合は、基材を含めた状態で製剤化することもできる。また、製剤化に用いた溶媒を除去し、乾燥させたものを使用してもよい。
【００３４】
酸化反応により、ホップエキスに含まれているα酸、イソα酸、β酸は低減される。これらの成分の低減の程度はＨＰＬＣ等により分析し確認することができる。ホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による波長270nmで検出される成分の総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は、好ましくは５０％以下であり、より好ましくは３０％以下であり、さらに好ましくは１０％以下である。従って、本発明の一つの態様によれば、ホップエキス酸化反応物であって、該ホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合が５０％以下であるものが提供される。
【００３５】
本発明のホップエキス酸化反応物の製造原料に用いられるホップエキスは、例えば、ホップ毬花やその圧縮物をそのままもしくは粉砕後、抽出操作に供することによって調製したものを用いることができる。抽出方法としては、例えば、ビール醸造に用いられるホップエキスの調製法として用いられるエタノール溶媒による抽出法や超臨界二酸化炭素抽出法などがある。このうち超臨界二酸化炭素抽出はポリフェノール成分が少なく、苦味成分と精油成分がより高く濃縮されるなどの特徴を有する。また、ホップ抽出法として、その他一般に用いられる方法を採用することができ、例えば、溶媒中にホップの毬花、その粉砕物などを冷浸、温浸等によって浸漬する方法；加温し攪拌しながら抽出を行い、濾過して抽出液を得る方法；またはパーコレーション法等を挙げられる。得られた抽出液は、必要に応じてろ過または遠心分離によって固形物を除去した後、使用の態様により、そのまま用いるか、または溶媒を留去して一部濃縮若しくは乾燥して用いてもよい。また濃縮乃至は乾燥後、さらに非溶解性溶媒で洗浄して精製して用いても、またこれを更に適当な溶剤に溶解もしくは懸濁して用いることもできる。更に、上記のようにして得られた溶媒抽出液を、減圧乾燥、凍結乾燥等の通常の手段により乾燥させて得られたホップ抽出エキス乾燥物を使用してもよい。
【００３６】
上記の抽出に用いられる溶媒としては、例えば、水；メタノール，エタノール，プロパノールおよびブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコール；酢酸エチルエステル等の低級アルキルエステル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどのグリコール類；その他アセトン、酢酸等の極性溶媒；ベンゼンやヘキサン等の炭化水素；エチルエーテルや石油エーテルなどのエーテル類等の非極性溶媒の公知の有機溶媒を挙げることができる。これら溶媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて使用することもできる。
【００３７】
本発明のホップエキス酸化反応物の製造原料に用いられるホップエキスは上記ホップエキスをさらに異性化処理に付した異性化ホップエキスや、還元剤処理によりイソα酸を還元させた還元型異性化ホップエキスを使用してもよい。異性化処理の方法は公知であり、いずれの方法を用いてもよいが、典型的には、ホップエキスをｐＨ８〜９の弱アルカリ条件下で、あるいは酸化マグネシウム存在下で加熱することで実施することができる。ホップエキスをそのまま異性化処理に付してもよいが、異性化処理に先立って、ホップエキスを加温アルカリ水に添加し（ホップエキス添加後にｐＨ８〜９）、溶解したα酸と不溶のβ酸を分離し、得られたα酸画分を異性化処理に付してもよい。
【００３８】
ホップエキス酸化反応物の製造に使用されるホップエキスはビール添加物として市販されており、本発明では市販品を使用することができる。例えば、ホップ毬花粉砕物から主にフムロン類とルプロン類を超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（例えば、CO2 Hop Extract（Hopsteiner社））、ホップ毬花粉砕物から主にフムロン類とルプロン類をエタノール抽出したホップエキス（例えば、Ethanol Hop Extract（Hopsteiner社））、ホップ毬花粉砕物から主にルプロン類を超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（例えば、Beta Aroma Extract（Hopsteiner社））ホップ毬花粉砕物の炭酸ガス抽出物を異性化したエキス（例えば、Isomerized Kettle Extract (Hopsteiner社)）、ホップ毬花粉砕物の炭酸ガス抽出物を異性化及び還元処理したエキス（例えば、Light Stable Kettle Extract(Hopsteiner社)、Tetra Concentrate(Hopsteiner社)、Hexa IsoExtract(Hopsteiner社)）、ホップ毬花粉砕物の炭酸ガス抽出物を異性化した後、さらにカリウム塩化して粘性の低い液体とした水溶性エキス（例えば、IsoExtract30%（Hopsteiner社）、）などを用いることができる。上記市販ホップエキスの中には苦味成分がカリウム塩化した状態のものも存在するが、酸化反応にあたっては酸性処理後、フリー体の樹脂状エキスとしたものを用いるのが好ましい。また、エキス中の特定の苦味成分のみを分画して使用してもよい。
【００３９】
アルカリ金属塩の調製
本発明のホップエキス酸化反応物はアルカリ金属と塩を形成させ、アルカリ金属塩水溶液とすることができる。また、その水溶液をスプレードライ等により粉末化することができる。本発明のホップエキス酸化反応物の金属塩形成に使用可能なアルカリ金属塩としては、カリウム塩、ナトリウム塩のような食品への添加が許容された塩が挙げられる。本発明のホップエキス酸化反応物のアルカリ金属塩は水溶性が優れており、食品（特に飲料）への添加を容易に行うことができる点で有利である。
【００４０】
上記のようにして得られた本発明のホップエキス酸化反応物はさらに分画処理などによってホップエキス酸化反応物中の特定の成分を濃縮してもよい。またその濃縮物を食品に添加してもよく、また、本発明の脂質吸収抑制剤として用いてもよい。
【００４１】
［ホップエキス酸化反応物の用途］
後記実施例１４〜１５に示される通り、ホップエキス酸化反応物は脂質吸収抑制作用を有する。
【００４２】
従って、本発明のホップエキス酸化反応物は、脂質吸収抑制剤として有用である。また、本発明のホップエキス酸化反応物は肥満の予防および／または治療に有用である。
【００４３】
本発明のホップエキス酸化反応物は異性化されたホップエキスのような強烈な苦味や異性化未処理のホップエキスのような強烈なエグ味がない（実施例１３）。従って、本発明のホップエキス酸化反応物は上記のような生理活性作用を期待しつつ、飲食品や医薬品において苦味・エグ味のマスキング手段を講じずにそのまま利用できる点で有利である。
【００４４】
［医薬品および食品］
本発明のホップエキス酸化反応物を医薬品として提供する場合には、本発明のホップエキス酸化反応物を薬学上許容される添加物と混合することにより製造できる。本発明のホップエキス酸化反応物は異性化されたホップエキスのような強烈な苦味や異性化未処理のホップエキスのような強烈なエグ味を有さないことから、苦味・エグ味をマスキングするための手段を講じずに、あるいは既存のマスキング手段を用いて苦味・エグ味を十分にマスキングした状態で所定の効能を期待する製剤とすることができる点で有利である。
【００４５】
本発明ではホップエキス酸化反応物そのもののみならず、ホップエキス酸化反応物に含まれる特定の成分を単離・精製したものを使用することができる。
【００４６】
本発明のホップエキス酸化反応物は有効成分として経口投与または非経口投与することができ、好ましくは経口投与である。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤が挙げられる。非経口剤としては、注射剤（例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤）、点滴剤、外用剤（例えば、経鼻投与製剤、経皮製剤、軟膏剤）、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）が挙げられる。これらの製剤は、当分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられ、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバターを担体として使用できる。
【００４７】
製剤は、例えば、下記のようにして製造できる。  
経口剤は、有効成分に、例えば賦形剤（例えば、乳糖、白糖、デンプン、マンニトール）、崩壊剤（例えば、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム）、結合剤（例えば、α化デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース）または滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００）を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため自体公知の方法でコーティングすることにより製造することができる。コーティング剤としては、例えばエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートおよびオイドラギット（ローム社製、ドイツ、メタアクリル酸・アクリル酸共重合物）などを用いることができる。
【００４８】
注射剤は、有効成分を分散剤（例えば、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０（アトラスパウダー社製、米国）、ＨＣＯ６０（日光ケミカルズ製）、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウムなど）、保存剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノール、フェノール）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖、転化糖）などと共に水性溶剤（例えば、蒸留水、生理的食塩水、リンゲル液等）あるいは油性溶剤（例えば、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、コーン油などの植物油、プロピレングリコール）などに溶解、懸濁あるいは乳化することにより製造することができる。この際、所望により溶解補助剤（例えば、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイン）等の添加物を添加してもよい。
【００４９】
外用剤は、有効成分を固状、半固状または液状の組成物とすることにより製造することができる。例えば、上記固状の組成物は、有効成分をそのまま、あるいは賦形剤（例えば、ラクトース、マンニトール、デンプン、微結晶セルロース、白糖）、増粘剤（例えば、天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体）などを添加、混合して粉状とすることにより製造できる。上記液状の組成物は、注射剤の場合とほとんど同様にして製造できる。半固状の組成物は、水性または油性のゲル剤、あるいは軟骨状のものがよい。また、これらの組成物は、いずれもｐＨ調節剤（例えば、炭酸、リン酸、クエン酸、塩酸、水酸化ナトリウム）、防腐剤（例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウム）などを含んでいてもよい。坐剤は、有効成分を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の組成物とすることにより製造できる。該組成物に用いる油性基剤としては、高級脂肪酸のグリセリド〔例えば、カカオ脂、ウイテプゾル類（ダイナマイトノーベル社製）〕、中級脂肪酸〔例えば、ミグリオール類（ダイナマイトノーベル社製）〕、あるいは植物油（例えば、ゴマ油、大豆油、綿実油）が挙げられる。水性基剤としては、ポリエチレングリコール類、プロピレングリコールが挙げられる。また、水性ゲル基剤としては、天然ガム類、セルロース誘導体、ビニール重合体、アクリル酸重合体が挙げられる。
【００５０】
本発明のホップエキス酸化反応物は、飲食品へ添加して使用することができる。本発明のホップエキス酸化反応物は前記のように脂質吸収抑制効果などの生理的作用を発揮する。従って、本発明のホップエキス酸化反応物を添加した飲食品には脂質吸収抑制効果などの生理的作用が期待される。
【００５１】
本発明の飲食品は、本発明のホップエキス酸化反応物を有効量含有した飲食品である。
ここで、本発明のホップエキス酸化反応物を「有効量含有した」とは、個々の飲食品において通常喫食される量を摂取した場合に、後述するような範囲でホップエキス酸化反応物が摂取されるような含有量をいう。
【００５２】
本発明のホップエキス酸化反応物を飲食品として提供する場合には、本発明のホップエキス酸化反応物をそのまま飲食品に配合することができる。より具体的には、本発明の飲食品は、本発明のホップエキス酸化反応物をそのまま飲食品として調製したもの、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等を更に配合したもの、液状、半液体状若しくは固体状にしたもの、カリウム塩、ナトリウム塩等の水溶液状にしたもの、一般の飲食品へ添加したものであってもよい。本発明のホップエキス酸化反応物は異性化されたホップエキスのような強烈な苦味や異性化未処理のホップエキスのような強烈なエグ味を有さないことから、苦味・エグ味をマスキングするための手段を講じずに、あるいは既存のマスキング手段を用いて苦味・エグ味を十分にマスキングした状態で所定の生理作用が期待される飲食品とすることができる点で有利である。
【００５３】
本発明において「飲食品」とは、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、病者用食品を含む意味で用いられる。
【００５４】
また「飲食品」の形態は特に限定されるものではなく、例えば、飲料の形態であってもよい。
【００５５】
本発明のホップエキス酸化反応物は、脂質吸収抑制作用を有するため、日常摂取する飲食品やサプリメントとして摂取する健康食品や機能性食品、好適には脂質を含有する食品や高カロリーの食品等に本発明のホップエキス酸化反応物を配合することにより、健康の維持・増進に役立つ飲食品、具体的には、脂質吸収抑制作用といった機能を併せ持つ飲食品として提供することができる。すなわち、本発明の食品は、高脂血漿や脂肪の蓄積（特に、体脂肪および内臓脂肪の蓄積）が気になる消費者や体重の増加が気になる消費者に適した飲食品、特に特定保健用食品、として提供することができる。
【００５６】
かかる飲食品として具体的には、飯類、麺類、パン類およびパスタ類等炭水化物含有飲食品；クッキーやケーキなどの洋菓子類、饅頭や羊羹等の和菓子類、キャンディー類、ガム類、ヨーグルトやプリンなどの冷菓や氷菓などの各種菓子類；ウイスキー、バーボン、スピリッツ、リキュール、ワイン、果実酒、日本酒、中国酒、焼酎、ビール、アルコール度数１％以下のノンアルコールビール、発泡酒、その他雑酒、酎ハイなどのアルコール飲料；果汁入り飲料、野菜汁入り飲料、果汁および野菜汁入り飲料、清涼飲料水、牛乳、豆乳、乳飲料、ドリンクタイプのヨーグルト、ドリンクタイプのゼリー、コーヒー、ココア、茶飲料、栄養ドリンク、スポーツ飲料、ミネラルウォーターなどの非アルコール飲料；卵を用いた加工品、魚介類（イカ、タコ、貝、ウナギなど）や畜肉（レバー等の臓物を含む）の加工品（珍味を含む）などを例示することができるが、これらに限定されるものではない。
【００５７】
茶飲料としては、例えば、紅茶、緑茶、麦茶、玄米茶、煎茶、玉露茶、ほうじ茶、ウーロン茶、ウコン茶、プーアル茶、ルイボスティー茶、ローズ茶、キク茶、ハーブ茶（例えば、ミント茶、ジャスミン茶）が挙げられる。
【００５８】
果汁入り飲料や果汁および野菜汁入り飲料に用いられる果物としては、例えば、リンゴ、ミカン、ブドウ、バナナ、ナシ、およびウメが挙げられる。また、野菜汁入り飲料や果汁および野菜汁入り飲料に用いられる野菜としては、例えば、トマト、ニンジン、セロリ、キュウリ、およびスイカが挙げられる。
【００５９】
本発明の医薬品および飲食品は、人類が飲食品として長年摂取してきたホップエキスを利用することから、毒性も低く、それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等）に対し安全に用いられる。本発明のホップエキス酸化反応物の投与量または摂取量は、受容者、受容者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定できる。例えば、本発明のホップエキス酸化反応物を医薬として経口投与する場合、体重６０ｋｇの成人１人１日当たりホップエキス酸化反応物をイソフムロン換算で１０〜６００ｍｇ、より好ましくは２０〜２００ｍｇ、非経口投与する場合は１〜１００ｍｇ、好ましくは３〜３０ｍｇの範囲となるように、１日１〜３回に分けて投与することができる。本発明のホップエキス酸化反応物と組み合わせて用いる他の作用機序を有する薬剤も、それぞれ臨床上用いられる用量を基準として適宜決定できる。また、飲食品として摂取する場合に、体重６０ｋｇの成人１人１日当たりイソフムロン換算でホップエキス酸化反応物が、２５〜９６００ｍｇの範囲、好ましくは、２５〜７８０ｍｇの範囲の摂取量となるよう本発明のホップエキス酸化反応物を食品に配合することができる。
【実施例】
【００６０】
以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。【００６１】
実施例１：超臨界二酸化炭素抽出ホップエキスからのホップエキス酸化反応物の調製１
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）60gとデキストリン（TK-16；松谷化学）120gを重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で24時間加熱し、酸化反応に付した。【００６２】
実施例２：超臨界二酸化炭素抽出ホップエキスからのホップエキス酸化反応物の調製２
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（Beta Aroma Extract；β酸41.3%w/w、α酸およびイソα酸未検出；hopsteiner社製）20gとデキストリン（TK-16；松谷化学）60gを重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で24時間加熱し、酸化反応に付した。【００６３】
実施例３：超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理をしたホップエキスからのホップエキス酸化反応物の調製
超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理をしたホップエキス（Isomerized Kettle Extract；イソα酸53.0%w/w、β酸20.0%w/w、α酸未検出；hopsteiner社製）20gとデキストリン（TK-16；松谷化学）60gを重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で24時間加熱し、酸化反応に付した。【００６４】
実施例４：ホップエキス酸化反応物の分析
実施例１〜３で調製したホップエキス酸化反応物を以下のように分析用前処理を行った。
［分析前処理］
反応後の粉末状ホップエキスからエタノールによりホップエキス成分を抽出し、ホップエキス由来固形分が2.5mg/mLになるように調製し、ＨＰＬＣにて分析した。また、比較として実施例１〜３で原料として使用したホップエキスについても同じ固形分濃度になるように調製して分析した。
［ＨＰＬＣ構成装置］
ホンプ：LC-20AD×3（SHIMADZU）
デガッサー：DGU-20A5（SHIMADZU）
システムコントローラー：CBM-20A（SHIMADZU）
オートサンプラー：SIL-20ACHT（SHIMADZU）
カラムオーブン：CTO-20AC（SHIMADZU）
フォトダイオードアレー検出器：SPD-M20A（SHIMADZU）
波形解析ソフトウェア：LCSolution（SHIMADZU）
［ＨＰＬＣ条件］
カラム：Alltima C18 2.1mm I.D. x 100mm 粒子径3μm
流速：0.6mL/min
溶出溶媒A：水/リン酸、1000/0.2, (v/v)  + EDTA(free) 0.02%(w/v)
溶出溶媒B：アセトニトリル
溶出溶媒C：水
注入量：3μL
カラム温度：40℃
検出波長：270nm（Oxi-Fr1・Oxi-Fr2・イソα酸・β1-4の検出および定量波長、α酸およびβ酸の検出波長）
355nm（α酸およびβ酸定量波長）
グラジエントプログラム：  
【表１】
2012081676.tif 000009
【００６５】
上記分析条件にて、イソα酸、具体的にはtrans-イソコフムロンの前方に溶出され、270nmで検出される成分群をOxidation-Fraction1（Oxi-Fr1）と定義する。また、α酸、具体的にはコフムロン溶出時間前方から分析終了時点（検出器内の移動相が洗浄溶媒に切り替わる時間）までに溶出され、α酸およびβ酸ピークを除く270nmで検出される成分群をOxidation-Fraction2（Oxi-Fr2）と定義する。さらに、Oxi-Fr2に含まれ、後述するようにβ酸に酸素が一つ付加した酸化化合物をβ１、β２、β３、β４と定義する。波形解析にあたって、溶媒ピークやインジェクションショックによる負ピークが生じる領域は解析除外領域とした。また、Oxi-Fr１、Oxi-Fr2、β1-4の定量解析時に使用する面積値の求め方は後述する。【００６６】
上記実施例１で調製したホップエキス酸化反応物分析時のＨＰＬＣクロマトグラムを図２−１〜図２−３(検出波長２７０nm)、図２−４(検出波長３５５nm)に示す。また、原料に用いたホップエキス分析時クロマトグラムを図３−１および図３−２(検出波長２７０nm)、ならびに図３−３(検出波長３５５nm)に示す。Oxi-Fr1と定義する成分群は図２−１で図示された領域に検出される。定量解析時にはこの画分に検出された全ピーク面積の合算値を使用する。また、Oxi-Fr2と定義する成分群は図２−２、図３−２で示された領域に検出される。定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。β１−４各成分は図２−３で示したピーク群で、定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。【００６７】
上記実施例２で調製したホップエキス酸化反応物分析時のＨＰＬＣクロマトグラムを図４−１〜図４−３(検出波長２７０nm)、および図４−４(検出波長３５５nm)に示す。また、原料に用いたホップエキス分析時クロマトグラムを図５−１および図５−２(検出波長２７０nm)、ならびに図５−３(検出波長３５５nm)に示す。実施例１の場合と同様にOxi-Fr1と定義する成分群は図４−１で図示された領域に検出されるが、実施例２で使用した原料エキスにはα酸およびイソα酸が含まれていないため、Oxi-Fr1の生成量はわずかであった。また、実施例１と同様にOxi-Fr2と定義する成分群は図４−２、図５−２で示された領域に検出される。定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。β１−４各成分は図４−３で示したピーク群で、定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。
実施例2の結果から、β１−４各成分を含むOxi-Fr2はホップエキス中のβ酸の酸化により生成することが示唆された。【００６８】
β酸の酸化により生成したβ１−４の各成分について、ピークを分取して精密質量測定が可能な質量分析装置で分析を実施した。その結果得られた測定値からβ１およびβ２はコルプロンに酸素が一つ付加した化合物であり、β３およびβ４はルプロン、アドルプロンに酸素が一つ付加した化合物であることが示唆された。【００６９】
上記実施例３で調製したホップエキス酸化反応物分析時のＨＰＬＣクロマトグラムを図６−１〜図６−３(検出波長２７０nm)、および図６−４(検出波長３５５nm)に示す。また、原料に用いたホップエキス分析時クロマトグラムを図７−１および図７−２(検出波長２７０nm)、ならびに図７−３(検出波長３５５nm)に示す。実施例１の場合と同様にOxi-Fr1と定義する成分群は図６−１で図示された領域に検出される。定量解析時にはこの画分に検出された全ピーク面積の合算値を使用する。また、実施例１および２の場合と同様にOxi-Fr2と定義する成分群は図６−２、図７−２で示された領域に検出される。定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。β１―４各成分は図６−３で示したピーク群で、定量解析時には斜線で示した部分の面積を使用する。【００７０】
「定量方法」
Oxi-Fr1、Oxi-Fr2、およびβ１−４の定量は、それぞれ算出した面積値を基に、イソα酸換算で定量を実施する。具体的にはイソα酸標品を用いて作成した検量線を使用して求めることができる。α酸、β酸、イソα酸の定量はそれぞれの標品を用いて作成した検量線を使用して求めることができる。α酸、β酸およびイソα酸の標品としては、例えばAmerican Society of Brewing Chemists（ASBC）から入手可能なInternal Calibration StandardsのICE-2、ICS-I2、ICS-T2などが利用できる。【００７１】
[ピーク面積比率の算出]
ホップエキスを酸化反応に付すことで、エキス中のα酸、β酸およびイソα酸は低減し、Oxi-Fr1、Oxi-Fr2といった成分群が増加することから、ホップエキス酸化反応物はＨＰＬＣ分析を実施した際に波長270nmで検出される成分の総ピーク面積に対する同波長で検出されるα酸、β酸およびイソα酸ピークの面積比率からも評価可能である。総ピーク面積の算出にあたっては、Oxi-Fr1の始点からOxi-Fr2の終点までの領域に検出されるピークを解析対象とする。【００７２】
各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率は表１の通りであった。
【表２】
2012081676.tif 000010
（実施例２で使用した原料エキスにはα酸とイソα酸が含まれないため、Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）に関しては算出できない。）【００７３】
図１、２、３および表２の結果から明らかなように、粉末化後酸化反応に付して製造したホップエキス酸化反応物ではα酸、β酸、イソα酸が大きく低下あるいは消失していた。ホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は実施例１および２で１０％以下であり、実施例３で１５.１％であった。【００７４】
また、粉末化後酸化反応に付したホップエキスではOxi-Fr1、Oxi-Fr2、β1-4が新たに出現もしくは大きく増加していた。【００７５】
実施例５
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）60gとデキストリン（TK-16；松谷化学）180gを重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを40℃、60℃、80℃で8時間〜196時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表３に示す。【００７６】
【表３】
2012081676.tif 000011
【００７７】
表３から明らかなように、デキストリンを粉末化基材に使用した場合、酸化反応時の温度が高いほど酸化反応の進行が早まることが確認された。図８−１、図８−２に原料エキスと60℃24時間加熱したエキス酸化反応物の成分プロファイルを示す。【００７８】
実施例６
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）20gとデキストリン（TK-16；松谷化学）を重量比1:2〜1:9で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で8時間〜48時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表４に示す。【００７９】
【表４】
2012081676.tif 000012
【００８０】
原料エキスとデキストリンの比が1:1の状態では均一な粉末とならずにエキスがダマになってしまい反応効率が低下した。一方、完全に均一な粉末状態にできた1:3〜1:9のものに関しては効率的に反応が進行した。エキスとデキストリン比が変化してもエキス酸化反応物の成分プロファイル自体の変化はなかった。【００８１】
実施例７
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）20gと糖質系賦形剤（デキストリン：TK-16、マックス1000；ともに松谷化学、セルロース：FD101、ST100；ともに旭化成ケミカル）を重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で8時間〜93時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表５に示す。【００８２】
【表５】
2012081676.tif 000013
【００８３】
いずれの基材を用いた場合でも同様に酸化反応が進行した。また、酸化生成物の成分プロファイルも同様であった。反応時間８時間のホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１５％以下であり、反応時間２４時間以上のホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１０％以下であった。また、図８−３にFD-101を用いて粉末化したエキスの80℃8時間、24時間加熱時のエキス酸化反応物の成分プロファイルを示す。【００８４】
実施例８
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）20gと珪藻土（ラヂオライト＃２０００、＃３００；昭和化学）を重量比1:2〜1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを室温または80℃で4時間〜48時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表６に示す。【００８５】
【表６】
2012081676.tif 000014
【００８６】
粉末化基材に珪藻土を用いた場合、酸化反応時に加熱をせずとも効率的に反応が進行した。いずれのホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１０％以下であった。加熱せずとも反応が効率的に進行したのは、珪藻土に含まれる金属類が酸化反応を触媒したためと考えられる。この結果から、金属類を含む基材を用いることで反応効率をより高めることが可能であることが示唆される。図８−４に各条件で反応させたエキス酸化反応物のプロファイルを示す。【００８７】
実施例９
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；α酸55.6%w/w、β酸22.6%w/w、イソα酸未検出；hopsteiner社製）20gと粉砕したホップ粕（ＢＰ５５；hopsteiner社製）を重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で２４時間〜48時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表７に示す。【００８８】
【表７】
2012081676.tif 000015
【００８９】
粉末化基材としてホップ粕を使用した場合でも効率よく酸化反応が進行した。いずれのホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１０％以下であった。図８−５にエキス酸化反応物のプロファイルを示す。【００９０】
実施例１０
超臨界二酸化炭素抽出したホップエキス（CO2 Hop Extract；Hopsteiner）からα酸画分を分取して調製したホップエキス（α酸９４．４%w/w、β酸３．３６%w/w、イソα酸未検出）10gとデキストリン（TK-16；松谷化学）を重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で8時間〜72時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表８に示す。【００９１】
【表８】
2012081676.tif 000016
【００９２】
原料エキス中のα酸量に対するβ酸量が極めて低いため、β酸に関するパラメータについては考慮していない。α酸が酸化することで主にOxi-Fr1が生成することが明らかとなった。反応時間２４時間以上のいずれのホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１０％以下であった。図８−６に原料に使用したエキスと24時間酸化反応をさせたエキス酸化反応物の成分プロファイルを示す。【００９３】
実施例１１
エタノール抽出したホップエキス（EtOH Hop Extract；α酸31.8%w/w、β酸24.8%w/w、イソα酸2.77%；hopsteiner社製）20gとセルロース（FD-101；旭化成ケミカルズ）を重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で8時間〜24時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表９に示す。【００９４】
【表９】
2012081676.tif 000017
【００９５】
原料としてエタノール抽出ホップエキスを使用した場合でも酸化反応が進行することが確認された。いずれのホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は１０％以下であった。図８−７に原料に使用したエキスと24時間酸化反応をさせたエキス酸化反応物の成分プロファイルを示す。【００９６】
実施例１２
超臨界二酸化炭素抽出した後に異性化処理をしたホップエキス（Isomerized Kettle Extract；イソα酸53.0%w/w、β酸20.0%w/w、α酸未検出；hopsteiner社製）20gとデキストリン（TK-16；松谷化学）を重量比1:3で均一になるよう混合し、ホップエキスを粉末状形態にした。得られた粉末状ホップエキスを80℃で8時間〜72時間加熱し、酸化反応に付した。酸化反応中、経時的にサンプリングし、実施例４記載の方法で分析し、各分析サンプルにおける「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」、「β１−４／β酸」、「Oxi-Fr2／β酸」の重量比率を求めた。結果を表１０に示す。【００９７】
【表１０】
2012081676.tif 000018
【００９８】
異性化処理を施しイソα酸をリッチにしたエキスを原料に用いた場合でも酸化反応が進行することが確認された。ホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析による総ピーク面積に対するイソα酸、α酸およびβ酸のピーク面積の割合は反応時間８時間で４４．９％、反応時間２４時間で１５．１％、反応時間４８時間以上で１０％以下であった。図８−８に8時間〜72時間酸化反応をさせたエキス酸化反応物の成分プロファイルを示す。【００９９】
実施例１３：官能評価
実施例１、２、３、５、７〜１２で得られたホップエキス酸化反応物について、その苦味・エグ味を官能評価にてホップエキスと比較した。【０１００】
［苦味・エグ味官能評価の評価方法］
実施例１、２、３、５〜１２で得られたホップエキス酸化反応物及び、比較例としてホップエキス酸化反応物の原料に用いたホップエキスおよび異性化ホップエキス（IsoExtract30%；hopsteiner社製）の苦味・エグ味について、以下の方法で８人の社内パネラーを用いて官能評価を行った。実施例１、２、５、７〜１２のホップエキス酸化反応物については原料中のα酸、イソα酸、β酸合計５０ｐｐｍからの酸化反応物生成相当量となるように、比較例についてはα酸、β酸、イソα酸が合計５０ｐｐｍとなるように、それぞれ１０ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ５．５）に添加し、サンプルとした。【０１０１】
官能評価はサンプル数ｍＬを口に含み、評価基準に従い評価した。結果は８名の評価点の平均値として求めた。【０１０２】
［評価基準］
【表１１】
2012081676.tif 000019
【０１０３】
［評価結果］
【表１２】
2012081676.tif 000020
【０１０４】
その結果、実施例１、２、３、５、７〜１２で得られたホップエキス酸化反応物について苦味・エグ味が大きく低減しており、飲用に適した香味であることが示唆された。具体的には、「Oxi-Fr1／（α酸＋イソα酸）」が重量比で0.1以上または「（β1+β2+β3+β4）／β酸」が重量比で0.3以上または「Oxi-Fr2／β酸」が重量比で2.0以上であるホップエキス酸化反応物（実施例）はそうでないホップエキス（比較例）に比べ、苦味・エグ味が低減していることが示された。また、ピーク面積比率で評価した場合、HPLC分析での総ピーク面積に対するα酸、イソα酸、β酸のピーク面積比率が５０％以下であるホップエキス酸化反応物（実施例）はそうでないホップエキス（比較例）に比べ、苦味・エグ味が低減していることが示された。【０１０５】
実施例１４：ホップエキス酸化反応物の脂質吸収抑制作用の評価
実施例１で得られたホップエキス酸化反応物の脂質吸収抑制作用を、ラットへの脂質エマルジョン単回投与試験によって評価した。ラットにおける脂質エマルジョン吸収の測定試験は、すでに報告された方法（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．Ｒｅｌａｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．２５，１４５９−１４６４（２００１）に従って以下の通りに実施した。つまり、脂質エマルジョンはコーン油（６ｍｌ）、コール酸（８０ｍｇ）、オレイン酸コレステリル（２ｇ）、蒸留水（２ｍｌ）を混合し、超音波処理により調製し、１６時間絶食後の８週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラット（日本チャールズリバー）に１０ｍｌ／ｋｇ体重になるように胃ゾンデを用いて経口投与した。実施例１で得られたホップエキス酸化反応物投与群では、投与量が１０００ｍｇ／ｋｇ体重になるように、脂質エマルジョン調製時にホップエキス酸化反応物を混合した。脂質エマルジョン投与前、及び投与後１、２、３、４、５時間後のそれぞれに尾静脈より採血し、定法に従い血漿を調製し、血漿中の中性脂肪濃度をトリグリセライドＥテストワコー（和光純薬）により測定した。【０１０６】
その結果、対照群では投与後１〜３時間で血漿中中性脂肪濃度の増加が見られたのに対し、ホップエキス酸化反応物投与群では血漿中中性脂肪濃度の増加が投与後１〜２時間で有意に抑制された（図９：ホップエキス酸化反応物の脂質吸収阻害作用；ホップエキス酸化反応物は１０００ｍｇ／ｋｇ体重で脂質エマルジョンと同時投与。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１（Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較）；投与前後の血中中性脂肪濃度を平均値±標準偏差で表示した。）。以上の結果から、ホップエキス酸化反応物は脂質の吸収を抑制する作用を持つことが確認された。中性脂肪は小腸で膵リパーゼにより分解され吸収される。そこで膵リパーゼ活性が中性脂肪の吸収に大きく寄与するためホップエキス酸化反応物の膵リパーゼ活性阻害作用を評価した。【０１０７】
実施例１５：ホップエキス酸化反応物の膵リパーゼ活性阻害作用の評価
実施例１で得られたホップエキス酸化反応物の膵リパーゼ活性阻害作用を評価した。膵リパーゼ活性の測定はすでに報告された方法（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，５３，４５９３−４５９８（２００５））に従って以下の通りに実施した。測定試薬には４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌｏｌｅａｔｅ（シグマアルドリッチ）を使用し、酵素源にはブタ膵リパーゼ（シグマアルドリッチ）を、１検体当たり１０Ｕ使用した。実施例１、２、３、５、７〜１２で得られたホップエキス酸化反応物は４％ジメチルスルホキシドを用いて所定の固形分濃度（ホップエキス由来酸化成分濃度）に溶解し、試験に供した。活性は４％ジメチルスルホキシドのみを添加した場合に得られる酵素活性を１００％として表示した。【０１０８】
その結果、実施例１で得られたホップエキス酸化反応物は膵リパーゼ活性を阻害し、終濃度８０．５μｇ／ｍｌで添加した時に約５０％までリパーゼ活性が低下した（図１０：ホップエキス酸化反応物の膵リパーゼ阻害活性；平均値±標準偏差）。以上の結果から、ホップエキス酸化反応物が膵リパーゼ活性の阻害作用を持つことが確認された。【０１０９】
次に、実施例２、３、５、７〜１２で得られたホップエキス酸化反応物について同様に膵リパーゼ活性阻害作用を評価した。また、比較としてイソα酸の膵リパーゼ活性阻害作用についても評価した。イソα酸の測定には異性化ホップエキス（IsoExtract30%；hopsteiner社製）を使用した。測定の結果、実施例２、３、５、７〜１２で得られたホップエキス酸化反応物はすべて膵リパーゼ活性を阻害し、終濃度２９．２〜１０５．８μｇ／ｍｌで添加したときに約５０％までリパーゼ活性が低下した。一方、イソα酸は終濃度２９６μｇ／ｍｌで添加したときに約５０％までリパーゼ活性が低下した（図１１：ホップエキス酸化反応物の５０％膵リパーゼ活性阻害濃度（ＩＣ５０））。以上の結果から、ホップエキス酸化反応物は原料ホップエキスや粉末化基材の種類を問わず、全て膵リパーゼ活性の阻害作用を持つことが確認され、活性の力価についてもイソα酸よりも強いことが示された。【０１１０】
実施例１６：ホップエキス酸化反応物のアルカリ金属塩水溶性製剤化
実施例７で得られた粉末状ホップエキス酸化反応物（基材FD-101、80℃24時間加熱）５ｇを５０℃に加温した０．２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液２５ｍＬに加え、よく攪拌した。
得られた溶液をろ過して基材のセルロースを除き、茶褐色透明のホップエキス酸化反応物のナトリウム塩水溶液(ホップエキス由来酸化成分を固形分として５％ｗ／ｖ)を得た。得られた水溶液を希釈し、実施例４記載の方法で分析した結果を図１２に示す。ホップエキス酸化反応物を水溶化した製剤が得られていることが確認された。【０１１１】
実施例１７：ホップエキス酸化反応物中のβ１〜４成分の構造解析
１７−１：β１およびβ２の分析
実施例４の記載に準じてホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析を行い、β１およびβ２を分取精製し、精密質量測定が可能な質量分析装置による分析、１Ｈ−ＮＭＲ測定および１3Ｃ−ＮＭＲ測定を実施した。【０１１２】
その結果、β１は式（Ｉ）で表されるHydroxytricyclocolupone epimer Bのいずれかの化合物、またはその混合物であり、β２は式（II）で表されるHydroxytricyclocolupone epimer Ａのいずれかの化合物、またはその混合物であることが同定された。なお、図１３に示される通り、β１およびβ２は、C４位の立体配置が異なる立体異性体の関係にある。【０１１３】
β１
【化７】
2012081676.tif 000021
【０１１４】
β２
【化８】
2012081676.tif 000022
【０１１５】
β１に関する質量分析、１Ｈ−ＮＭＲ測定および１3Ｃ−ＮＭＲ測定の結果は、以下の通りであった。
β１
質量分析：HR-ESIMS m/z 415.2494 [M -H]- (calcd for [C25H36O5-H]-, 415.2490)
１Ｈ−ＮＭＲおよび１3Ｃ−ＮＭＲ
【表１３】
2012081676.tif 000023
【０１１６】
β２に関する質量分析、１Ｈ−ＮＭＲ測定および１3Ｃ−ＮＭＲ測定の結果は、以下の通りであった。
β２
質量分析：HR-ESIMS m/z 415.2496 [M -H]- (calcd for [C25H36O5-H]-, 415.2490)
１Ｈ−ＮＭＲおよび１3Ｃ−ＮＭＲ
【表１４】
2012081676.tif 000024
【０１１７】
１７−２：β３およびβ４の分析
実施例４の記載に準じてホップエキス酸化反応物のＨＰＬＣ分析を行い、β３およびβ４を分取精製し、精密質量測定が可能な質量分析装置による分析を実施した。【０１１８】
J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 7480-7489に記載の手法に準じて、β１とのＨＰＬＣでの溶出位置の比較を実施した結果、β３はβ１のｎ及びad同族体であることが示唆された。さらに質量分析を行った結果、β３は、式（III）で表されるHydroxytricyclolupone epimer Bおよび式（IV）で表されるHydroxytricycloadlupone epimer Bのいずれか一つまたはそれらの混合物であることが同定された。
質量分析結果および式（III）および式（IV）の化学式は、以下の通りである。【０１１９】
β３
質量分析：HR-ESIMS m/z 429.2650 [M -H]- (calcd for [C26H38O5-H]-, 429.2647)
化学式：
Hydroxytricyclolupone epimer B
【化９】
2012081676.tif 000025
【０１２０】
Hydroxytricycloadlupone epimer B
【化１０】
2012081676.tif 000026
【０１２１】
また、同様に、J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 7480-7489に記載の手法に準じて、β２とのＨＰＬＣでの溶出位置の比較を実施した結果、β４はβ２のｎ及びad同族体であることが示唆された。さらに質量分析を行った結果、β４は式（V）で表されるHydroxytricyclolupone epimer Aおよび式（VI）で表されるHydroxytricycloadlupone epimer Aのいずれか一つまたはそれらの混合物であることが同定された。
質量分析結果および式（V）および式（VI）の化学式は、以下の通りである。【０１２２】
β４
質量分析：HR-ESIMS m/z 429.2651 [M -H]- (calcd for [C26H38O5-H]-, 429.2647)
化学式：
Hydroxytricyclolupone epimer A
【化１１】
2012081676.tif 000027
【０１２３】
Hydroxytricycloadlupone epimer A
【化１２】
2012081676.tif 000028
【図１】
2012081676.tif 000041
【図２−１】
2012081676.tif 000042
【図２−２】
2012081676.tif 000043
【図２−３】
2012081676.tif 000044
【図２−４】
2012081676.tif 000045
【図３−１】
2012081676.tif 000046
【図３−２】
2012081676.tif 000047
【図３−３】
2012081676.tif 000048
【図４−１】
2012081676.tif 000049
【図４−２】
2012081676.tif 000050
【図４−３】
2012081676.tif 000051
【図４−４】
2012081676.tif 000052
【図５−１】
2012081676.tif 000053
【図５−２】
2012081676.tif 000054
【図５−３】
2012081676.tif 000055
【図６−１】
2012081676.tif 000056
【図６−２】
2012081676.tif 000057
【図６−３】
2012081676.tif 000058
【図６−４】
2012081676.tif 000059
【図７−１】
2012081676.tif 000060
【図７−２】
2012081676.tif 000061
【図７−３】
2012081676.tif 000062
【図８−１】
2012081676.tif 000063
【図８−２】
2012081676.tif 000064
【図８−３】
2012081676.tif 000065
【図８−４】
2012081676.tif 000066
【図８−５】
2012081676.tif 000067
【図８−６】
2012081676.tif 000068
【図８−７】
2012081676.tif 000069
【図８−８】
2012081676.tif 000070
【図９】
2012081676.tif 000071
【図１０】
2012081676.tif 000072
【図１１】
2012081676.tif 000073
【図１２】
2012081676.tif 000074
【図１３】
2012081676.tif 000075
【国際調査報告】
2012081676.tif 000076
2012081676.tif 000077
2012081676.tif 000078
2012081676.tif 000079