(57)【要約】  本発明は、イソロイシン、ロイシン及びバリンを有効成分として含有する、抗癌剤副作用改善用組成物を提供する。該組成物は、極めて安全性が高く、抗癌剤の抗癌作用に影響を与えることもないため、抗癌剤投与による癌治療効果を向上させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、抗癌剤副作用改善用組成物。
【請求項２】
イソロイシンを有効成分として含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
イソロイシン、ロイシン及びバリンを有効成分として含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
イソロイシンを有効成分として含有し、且つロイシン及びバリンを有効成分として含有しない、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
抗癌剤が、ＤＮＡ傷害性抗癌剤である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
ＤＮＡ傷害性抗癌剤が、アドリアマイシン及び／又はシスプラチンである、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
副作用が、心機能障害又は腎機能障害である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
抗癌剤がアドリアマイシンであり、副作用が心機能障害である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
心機能障害が心不全である、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
抗癌剤がシスプラチンであり、副作用が腎機能障害である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
腎機能障害がシスプラチン腎症である、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
イソロイシン、ロイシン及びバリンの重量比が、１：１．５〜２．５：０．８〜１．７であることを特徴とする、請求項３及び５〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を含み、抗癌剤との併用により延命効果を有する、癌治療用組成物。
【請求項１４】
イソロイシンを含むことを特徴とする、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
イソロイシン、ロイシン及びバリンを含むことを特徴とする、請求項１３記載の組成物。
【請求項１６】
イソロイシンを含み、且つロイシン及びバリンを含まないことを特徴とする、請求項１３記載の組成物。
【請求項１７】
抗癌剤が、ＤＮＡ傷害性抗癌剤である、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
ＤＮＡ傷害性抗癌剤が、アドリアマイシン及び／又はシスプラチンである、請求項１７記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分岐鎖アミノ酸を含む、抗癌剤副作用改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡ傷害性抗癌剤は癌細胞の選択性に乏しいため、正常細胞の傷害に起因する組織機能不全の副作用を高頻度に招く。副作用の発症は癌患者のＱＯＬを著しく低下させる上に、骨髄抑制による感染症や心不全などの一部の重篤な副作用には、患者の生死に関わるリスクがある。【０００３】
副作用の発症率は抗癌剤の投与量と相関することが多いため、抗癌効果の主作用増強を期待した増薬は同時に副作用発症リスクも高めることになる。治療方法がない副作用に対しては、予防のために抗癌剤投与量を低く抑える必要がある上に、発症した場合は休薬の他に対処方法がないなど、副作用のリスクが抗癌剤の用量規定因子として治療の妨げとなることが多い。過去に抗癌剤の用量規定因子とされていた骨髄抑制による感染症の副作用に対して現在はＧ−ＣＳＦ製剤が開発され、急性の悪心・嘔吐に対しては５−ＨＴ３受容体拮抗薬が使用されている。これら一部の副作用に対する対処法が開発されたことは、抗癌剤の増量を可能としたが、その結果として心不全や腎不全のような現在なお対処法のない他の副作用が新たな用量規定因子として治療の妨げとなるようになっている。【０００４】
アントラサイクリン系抗癌剤に属するアドリアマイシンの副作用の一つに、心筋障害に起因する心不全がある。アドリアマイシン心不全は、総投与量が５００ｍｇ／ｍ２を超えると発症することが多くなることから、用量規定因子とされている。心不全の発症時期は治療開始１ヵ月後から数年後までに及ぶため、アドリアマイシンによる治療を受ければ長期にわたって心不全発症のリスクを伴うようになる。アドリアマイシン心不全に対する有効な治療法はなく、発症させないための予防的措置をとることが最も重要とされている。具体的には、アドリアマイシンの累積総投与量を厳密に管理しながら十分な心機能評価を行い、心機能低下が認められた場合は投与を中止せざるを得ない。発症した場合は、症状は不可逆的であることが多く、重篤な場合には死に至る。したがって、たとえ癌の治療に成功したとしても、心不全のために死亡するケースが深刻な問題となっている。【０００５】
プラチナ系抗癌剤に属するシスプラチンは適応範囲が広く、多くの抗癌剤治療で中心的な役割を担う薬剤として使用されることが多い。シスプラチンは効果が強い反面で副作用も強く、中でも急性腎不全が最も深刻な副作用である（シスプラチン腎症）。腎不全発症後の治療法はなく、予防のためにシスプラチンを大量の輸液とともに投与しながら利尿薬を併用するなどの措置がとられているが、必ずしも十分な効果が得られているとは言えない。発症すれば人工透析が必要となり癌患者のＱＯＬは著しく低下するため、急性腎不全はシスプラチンによる治療の用量規定因子とされている。【０００６】
アドリアマイシンとシスプラチンはそれぞれ心臓及び腎臓に蓄積しやすい性質を有している。各組織に蓄積した薬剤はフリーラジカルを産生して、細胞に対する酸化ストレスを引き起こす。この酸化ストレスを受けて心筋細胞や尿細管細胞が障害され、臓器の機能不全が生じると考えられている。【０００７】
副作用予防を目的として抗癌剤と併用する薬剤の場合、その予防効果に加えて癌患者にさらなる身体的・精神的負担をかけることのない高い安全性が求められる。これまでにフリーラジカルスカベンジャー作用を有する食品由来の抗酸化物質が、酸化ストレスの低減によりアドリアマイシン心不全もしくはシスプラチン腎症を低減させることが報告されているが、十分な予防効果が得られているとは言えない。合成化合物の場合は、フリーラジカルスカベンジャー作用を有するＤｅｘｒａｚｏｘａｎｅがアドリアマイシン心不全の予防薬として欧米で承認されて使用されているが（日本未承認）（非特許文献１）、骨髄抑制の副作用がある。このように、食品由来の抗酸化物質では副作用に対する十分な予防効果が期待できない上に、合成化合物を併用する予防方法には安全性の面でリスクが残されている。【０００８】
これまでに分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）の、慢性心不全患者の急性増悪時の胸水低下や食欲増進が報告されているが、発症後の対処的な治療効果に過ぎず、心筋障害低減及び心不全発症予防の効果を示すことは知られていない（特許文献１）。また慢性腎不全病態における貧血症状及び生命予後の改善が報告されているが、病態発症後の治療効果に限られており、尿細管障害低減や腎不全発症予防の効果を示すことは知られていない（特許文献２）。またＢＣＡＡにはフリーラジカルスカベンジャー作用はなく、前述の抗酸化物質のような機序による酸化ストレス低減効果は考えられず、ＢＣＡＡが心筋細胞や尿細管細胞の障害低減効果を有することは知られていない。ＢＣＡＡをアドリアマイシンもしくはシスプラチンと併用して、その主作用や副作用に対する何らかの効果を示したという報告もない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００７−２０４４１６号公報
【特許文献２】国際公開第２００５／０９４８１３号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Toxycology 225 (2009) 72-79
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、癌患者にさらなる身体的・精神的負担をかけることのない高い安全性を有する、抗癌剤の副作用を改善するための組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意研究した結果、イソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分とする組成物が、アドリアマイシン又はシスプラチンの投与によって起こる心機能障害や腎機能障害などの副作用の改善に有効であること、またこれらの抗癌剤の抗癌効果には影響しないことを見出した。さらに担癌マウスに対する抗癌剤治療において、イソロイシン、ロイシン及びバリンを投与することで、生存期間が顕著に延長されることを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいて更に研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。【００１３】
すなわち、本発明は以下のとおりである。【００１４】
［１］イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、抗癌剤副作用改善用組成物。
［２］イソロイシンを有効成分として含有する、［１］記載の組成物。
［３］イソロイシン、ロイシン及びバリンを有効成分として含有する、［１］記載の組成物。
［４］イソロイシンを有効成分として含有し、且つロイシン及びバリンを有効成分として含有しない、［１］記載の組成物。
［５］抗癌剤が、ＤＮＡ傷害性抗癌剤である、［１］〜［４］のいずれかに記載の組成物。
［６］ＤＮＡ傷害性抗癌剤が、アドリアマイシン及び／又はシスプラチンである、［５］記載の組成物。
［７］副作用が、心機能障害又は腎機能障害である、［１］〜［６］のいずれかに記載の組成物。
［８］抗癌剤がアドリアマイシンであり、副作用が心機能障害である、［１］〜［４］のいずれかに記載の組成物。
［９］心機能障害が心不全である、［８］記載の組成物。
［１０］抗癌剤がシスプラチンであり、副作用が腎機能障害である、［１］〜［４］のいずれかに記載の組成物。
［１１］腎機能障害がシスプラチン腎症である、［１０］記載の組成物。
［１２］イソロイシン、ロイシン及びバリンの重量比が、１：１．５〜２．５：０．８〜１．７であることを特徴とする、［３］及び［５］〜［１１］のいずれかに記載の組成物。
［１３］イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を含み、抗癌剤との併用により延命効果を有する、癌治療用組成物。
［１４］イソロイシンを含むことを特徴とする、［１３］記載の組成物。
［１５］イソロイシン、ロイシン及びバリンを含むことを特徴とする、［１３］記載の組成物。
［１６］イソロイシンを含み、且つロイシン及びバリンを含まないことを特徴とする、［１３］記載の組成物。
［１７］抗癌剤が、ＤＮＡ傷害性抗癌剤である、［１３］〜［１６］のいずれかに記載の組成物。
［１８］ＤＮＡ傷害性抗癌剤が、アドリアマイシン及び／又はシスプラチンである、［１７］記載の組成物。
【発明の効果】
【００１５】
ＢＣＡＡは必須アミノ酸として人体に不可欠な栄養素であるため、合成化合物と比較して極めて安全性が高い。またイソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸は、抗癌剤の抗癌作用に影響を与えない。そのため本発明により提供される、イソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分とする組成物は、抗癌剤（特にアドリアマイシン及び／又はシスプラチン）による副作用の改善のために有用である。特に、本発明の組成物は、心不全や腎不全のような現在なお対処法のない副作用を改善できるため、１）患者のＱＯＬ低下の軽減、２）副作用による生命予後低下の改善、３）抗癌剤治療の継続、４）抗癌剤の増薬、などにより、癌治療効果を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＢＣＡＡ投与がアドリアマイシンによる心毒性を抑制することを示す。上段パネルは、アドリアマイシン投与開始後２３日目の運動能力測定の結果を示す。左より、ビークル投与群（ｖｅｈｉｃｌｅ）及びＢＣＡＡ投与群（ＢＣＡＡ）。縦軸は、走行距離（ｍ）を示す。中段パネルは、アドリアマイシン投与開始後２３日目の体重変化を示す。左より、ビークル投与群（ｖｅｈｉｃｌｅ）及びＢＣＡＡ投与群（ＢＣＡＡ）。縦軸は、投与前の体重を１００％とした体重変化（％）を示す。下段パネルは、アドリアマイシン投与開始からの、ビークル投与群（ｖｅｈｉｃｌｅ）及びＢＣＡＡ投与群（ＢＣＡＡ）の生存率の変化を示す。縦軸は生存率（％）を表し、横軸は生存期間（日）を表す。
【図２】アドリアマイシンによる心臓組織障害に対するＢＣＡＡの低減効果を示す。上段パネルは、１５ｍｇ／ｋｇアドリアマイシン単回投与後５日目のマウス心筋の電子顕微鏡像を示す。左パネル：ビークル群（１５ｍｇ／ｋｇ  Ａｄｒ）；中央パネル：ＢＣＡＡ投与群（Ａｄｒ  ＋  ＢＣＡＡ）；右パネル：コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）。下段パネルは、血清中のクレアチニンキナーゼ（クレアチンホスフォキナーゼ（ＣＰＫ））値の測定結果を示す。縦軸は、ＣＰＫ値（ＩＵ／Ｌ）を表す。
【図３】１５ｍｇ／ｋｇアドリアマイシン単回投与後１１日目の心電図を示す。上段パネルは、ビークル投与個体（Ａｄｒ）の心電図を、下段パネルは、ＢＣＡＡ投与個体（Ａｄｒ  ＋  ＢＣＡＡ）の心電図を表す。
【図４】ＢＣＡＡ投与がシスプラチンによる腎臓機能障害を抑制し、急性腎不全を予防することを示す。上段パネルは、シスプラチン投与後３日目及び４日目の血中尿素窒素（ＢＵＮ）を示す。左より、シスプラチン投与ビークル投与群（ｃｉｓ  ２０  ｖｅｈｉｃｌｅ）、シスプラチン投与ＢＣＡＡ投与群（ｃｉｓ  ２０  ＢＣＡＡ）、無治療群（ｎｏｎ−ｔｒｅａｔ）、及び無治療ＢＣＡＡ投与群（ｎｏｎ−ｔｒｅａｔ  ＢＣＡＡ）。下段パネルは、シスプラチン投与開始からの、ビークル投与群（ｖｅｈｉｃｌｅ）及びＢＣＡＡ投与群（ｇＣＤ−ＢＣＡＡ）の生存率の変化を示す。縦軸は生存率（％）を表し、横軸は生存期間（日）を表す。
【図５】シスプラチンによるマウス腎臓の変性とＢＣＡＡの効果を示す。シスプラチン投与３日後の腎臓組織のヘマトキシリン−エオシン染色像を示す。上段パネル：無治療個体（Ｃｏｎｔｒｏｌ）；中段パネル：ビークル投与個体（Ｖｅｈｉｃｌｅ）；下段パネル：ＢＣＡＡ投与個体（ＢＣＡＡ）。
【図６】ＢＣＡＡが腎臓尿細管を保護することを示す。シスプラチン投与４日後の腎臓組織の電子顕微鏡像を示す。上段パネル：無治療個体（Ｃｏｎｔｒｏｌ，  ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）；中段パネル：ビークル投与個体（Ｖｅｈｉｃｌｅ，  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）；下段パネル：ＢＣＡＡ投与個体（ＢＣＡＡ，  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）。
【図７】ＢＣＡＡがアドリアマイシンのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの癌細胞株に対する毒性に影響しないことを示す。縦軸は、ＷＳＴ試薬による測定値を示す。ｎ＝４、平均値±標準偏差。
【図８】ＢＣＡＡがシスプラチンのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの癌細胞株に対する毒性に影響しないことを示す。縦軸は、ＷＳＴ試薬による測定値を示す。ｎ＝４、平均値±標準偏差。
【図９】ＢＣＡＡがアドリアマイシンの抗癌効果に影響しないことを示す。Ｂ１６メラノーマ細胞を尾静脈注射により接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける、２週間後の肺転移を示す。上段パネル：無治療個体（ｎｏｎ−ｔｒｅａｔ）；中段パネル：アドリアマイシン投与個体（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）；下段パネル：アドリアマイシン投与ＢＣＡＡ投与個体（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＋  ＢＣＡＡ）。
【図１０】ＢＣＡＡがアドリアマイシンの抗癌効果に影響しないことを示す。上段パネルは、図９の試料についての肺転移コロニー数を示す。左より、アドリアマイシン投与群（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ、ｎ＝５）、アドリアマイシン投与ＢＣＡＡ投与群（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＋  ＢＣＡＡ、ｎ＝５）。下段パネルは、図９の試料についての転移巣面積を示す。縦軸は、転移巣面積（％）を示す。左より、無治療群（ｎｏｎ−ｔｒｅａｔ、ｎ＝５）、アドリアマイシン投与群（ＡＤＭ、ｎ＝６）、アドリアマイシン投与ＢＣＡＡ投与群（ＡＤＭ  ＋  ＢＣＡＡ、ｎ＝４）。平均値±標準偏差。
【図１１】ＢＣＡＡがシスプラチンの抗癌効果に影響しないことを示す。上段パネルは、Ｂ１６メラノーマ細胞を尾静脈注射により接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける、２週間後の肺転移を示す。上から、生理食塩水投与ビークル投与群（ｖｅｈｉｃｌｅ）、シスプラチン投与ビークル投与群（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、シスプラチン投与ＢＣＡＡ投与群（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ＋  ＢＣＡＡ）。下段パネルは、肺転移コロニー数を示す。左より、生理食塩水投与ビークル投与群（ｓａｌｉｎｅ：  ｖｅｈｉｃｌｅ、ｎ＝５）、シスプラチン投与ビークル投与群（ｃｉｓ  １０：  ｖｅｈｉｃｌｅ、ｎ＝５）、シスプラチン投与ＢＣＡＡ投与群（ｃｉｓ  １０：  ＢＣＡＡ、ｎ＝４）。
【図１２】シスプラチン腎症に対するＢＣＡＡの個別アミノ酸の単独効果を示す。縦軸は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）非投与群（Ｎｏｒｍａｌ）におけるＫｉｍ１の発現量を１とした場合の相対発現量を示す。平均値±標準偏差、＊ｐ＜０．０５。
【図１３】ＢＣＡＡ投与による担癌マウスへの抗癌剤治療による延命効果を示す。縦軸は生存率（％）を表し、横軸は生存期間（日）を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする抗癌剤副作用改善用組成物（以下本発明の副作用改善用組成物と総称することもある）を提供する。
【００１８】
本明細書において、「改善」とは、「予防、軽減、治療」を含む意であり、抗癌剤投与に伴う副作用が正常化の方向に向かうことであり、さらには当該副作用の発生を予め防止、抑制することである。
【００１９】
抗癌剤投与に伴う副作用としては、食欲不振、全身倦怠感、痛み、呼吸困難感、皮膚症状、悪心・嘔吐、下痢、発熱、脱毛、嗅覚脱失、心機能障害（心筋細胞障害に起因する心不全など）、腎機能障害（尿細管細胞障害に起因する腎不全など）、肝機能障害、間質性肺炎、末梢循環不全に伴う臓器不全、骨髄抑制及びそれに伴う感染症等が挙げられる。本発明は特に、抗癌剤投与に伴う心機能障害（心筋細胞障害に起因する心不全など）及び腎機能障害（尿細管細胞障害に起因する腎不全など）に有効である。
【００２０】
抗癌剤投与により治療される疾患としては、あらゆる組織由来の癌が挙げられる。癌としては、固形腫瘍（例、上皮性腫瘍、非上皮性腫瘍）及び造血組織における腫瘍が挙げられる。より詳細には、固形腫瘍としては、例えば、消化器癌（例、胃癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌）、肺癌（例、小細胞癌、非小細胞癌）、膵臓癌、腎臓癌、肝臓癌、胸腺、脾臓、甲状腺癌、副腎、前立腺癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌（例、子宮内膜癌、子宮頚癌）、骨癌、皮膚癌、肉腫（例、カポシ肉腫）、黒色腫、芽細胞腫（例、神経芽細胞腫）、腺癌、扁平細胞癌、非扁平細胞癌、脳腫瘍、並びにこれらの固形腫瘍の再発及び転移が挙げられる。造血組織における腫瘍としては、白血病（例、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ））、リンパ腫（例、Ｔリンパ腫、Ｂリンパ腫、ホジキンリンパ腫）、骨髄腫（多発性骨髄腫）、並びにこれらの腫瘍の再発が挙げられる。
【００２１】
本発明において、抗癌剤とは、癌細胞に直接作用し、その分裂を抑制し、殺傷する能力を有する化合物をいう。抗癌剤としては、ＤＮＡ傷害性抗癌剤、代謝拮抗剤、植物アルカロイド、分子標的治療剤等を挙げることができる。
【００２２】
ＤＮＡ傷害性抗癌剤とは、抗癌剤のうちＤＮＡに損傷を引き起こすことにより癌細胞の増殖を抑制するものをいい、白金製剤、アルキル化剤、抗癌性抗生物質などが含まれるがこれらに限定されない。
白金製剤とは、ＤＮＡの構成塩基であるグアニン、アデニンのＮ−７位に、２つの塩素原子部位で結合し、ＤＮＡ鎖内に架橋を形成し、ＤＮＡ合成を阻害することによって癌細胞の増殖を抑制する効果を発揮する抗癌剤をいう。白金製剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン等が挙げられる。
アルキル化剤とは、ＤＮＡをアルキル化することにより切断して癌細胞の増殖を抑制する効果を発揮する抗癌剤をいう。アルキル化剤としては、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、クロラムブシル等のナイトロジェンマスタード系アルキル化剤；カルボコン、チオテパ等のエチレンイミン誘導体；ブスルファン、トシル酸インプロスルファン等のスルホン酸エステル類；塩酸ニムスチン等のニトロソウレア誘導体等が挙げられる。
抗癌性抗生物質としては、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ペプロマイシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ピラルビシン、ＴＨＰ−アドリアマイシン、４’−エピドキソルビシン、エピルビシン等のアントラサイクリン系抗生物質抗腫瘍剤；クロモマイシンＡ３、アクチノマイシンＤ等が挙げられる。
【００２３】
代謝拮抗剤とは、癌細胞が分裂・増殖する際に、核酸の材料となる物質と化学的構造が近似している物質でＤＮＡの合成を妨げ、癌細胞の代謝を阻害して、増殖を抑制する抗癌剤をいう。代謝拮抗剤としては、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、テガフール、カペシタビン、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン、エノシタビン、ヒドロキシフリジン、ヒドロキシカルバミド、メトトレキサート、リン酸フルダラビン等のピリミジン代謝拮抗剤；６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、チオイノシン、塩酸ゲムシタビン等のプリン代謝拮抗剤等が挙げられる。
【００２４】
植物アルカロイドとしては、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン等のビンアルカロイド類；エトポシド、テニポシド等のエピポドフィロトキシン類；パクリタキセル、ドタキセル等のタキサン系アルカロイド等が挙げられる。
【００２５】
分子標的治療剤とは、癌細胞の増殖に関わる分子を標的にして、その分子を阻害することにより癌細胞を殺傷する活性を有する化合物をいう。分子標的治療剤としては、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、バンデタニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、リツキシマブ、セツキシマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、ベバシツマブ等を挙げることができる。
【００２６】
本発明の副作用改善用組成物は、これまで効果的な対処法が知られていなかった心機能障害（特に心不全）や腎機能障害（特に腎不全）のような重篤な副作用の改善に有効である。そのような副作用を引き起こす抗癌剤としては、ＤＮＡ傷害性抗癌剤、特に抗癌性抗生物質又は白金製剤が挙げられる。そのなかでも、アドリアマイシンは心不全を、シスプラチンはシスプラチン腎症（尿細管細胞障害に起因する腎機能障害であり、腎不全を含む）を引き起こすことが知られている。従って、一態様において、本発明の副作用改善用組成物は、好ましくはＤＮＡ傷害性抗癌剤（より好ましくは抗癌性抗生物質及び／又は白金製剤、最も好ましくはアドリアマイシン及び／又はシスプラチン）に伴う副作用の改善用である。本発明の副作用改善用組成物が、上記のような抗癌剤投与に伴う心機能障害を改善することは、後述の実施例に記載されるような実験動物を使用した運動機能の評価、心臓組織傷害の評価（例えば、血清中のクレアチニンキナーゼ（クレアチンホスフォキナーゼ（ＣＰＫ））値を指標とする）、又は心電図による評価により調べることができる。また本発明の副作用改善用組成物が、上記のような抗癌剤投与に伴う腎機能障害を改善することは、後述の実施例に記載されるような実験動物を使用した腎臓組織傷害の評価（例えば、血中尿素窒素や、腎臓組織におけるＫｉｍ１（急性腎傷害マーカー：Am J Physiol Renal Physiol, 286: F552-F563 (2004); Nat Biotechnol., 28: 478-485 (2010)）の発現を指標とする）により調べることができる。
【００２７】
本発明の副作用改善用組成物の有効成分であるイソロイシン、ロイシン及び／又はバリンは、それぞれＬ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体のいずれも使用することができるが、好ましくは、Ｌ−体、ＤＬ−体であり、さらに好ましくは、Ｌ−体である。
【００２８】
また、本発明におけるイソロイシン、ロイシン及び／又はバリンは、それぞれ遊離体だけでなく塩の形態でも使用することができる。本発明におけるイソロイシン、ロイシン及び／又はバリンは、かかる塩の形態をも包含する。塩の形態としては、酸との塩（酸付加塩）、塩基との塩（塩基付加塩）等を挙げることができるが、医薬として許容される塩を選択することが好ましい。
【００２９】
イソロイシン、ロイシン及び／又はバリンに付加し、かつ医薬として許容される酸付加塩を形成する酸としては、例えば、塩化水素、臭化水素、硫酸、リン酸等の無機酸；酢酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、モノメチル硫酸等の有機酸が挙げられる。
【００３０】
イソロイシン、ロイシン及び／又はバリンに付加し、かつ医薬として許容される塩基付加塩を形成する塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム等の金属の水酸化物又は炭酸化物、あるいはアンモニア等の無機塩基；エチレンジアミン、プロピレンジアミン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩基が挙げられる。
【００３１】
本発明の副作用改善用組成物中のイソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種の含有量は、ヒトに適用する場合、その合計量の１回摂取量として０．１ｇ以上であり、好ましくは１ｇ以上である。摂取のしやすさの観点から、上記１回摂取量は、好ましくは１００ｇ以下であり、より好ましくは１０ｇ以下である。
【００３２】
本明細書において「１回摂取量」とは、本発明の副作用改善用組成物が医薬の場合、１回に投与される有効成分量であり、本発明の副作用改善用組成物が食品の場合、１回に摂取される有効成分量である。当該１回摂取量は、年齢、体重、性別、抗癌剤投与による副作用の重篤度などによって適宜変動する量である。
【００３３】
本発明の副作用改善用組成物は、イソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸からなる群から選択される少なくとも１種（即ち、１種（イソロイシン、ロイシン又はバリン）、２種（イソロイシン及びロイシン、イソロイシン及びバリン、又はロイシン及びバリン）又は３種（イソロイシン、ロイシン及びバリン））を有効成分として含有する。抗癌剤投与に伴う副作用を改善する効果の観点から、本発明の副作用改善用組成物は、少なくともイソロイシンを有効成分として含有することが好ましい（即ち、イソロイシン、ロイシン及びバリンの３種、イソロイシン及びロイシンの２種、イソロイシン及びバリンの２種、又はイソロイシンのみを有効成分として含有する）。本発明の副作用改善用組成物は、イソロイシン、ロイシン及びバリンの３種を有効成分として含有するか、或いはイソロイシンのみを有効成分として含有する（即ちイソロイシンを有効成分として含有し、且つロイシン及びバリンを有効成分として含有しない）ことがより好ましい。
【００３４】
本発明の副作用改善用組成物がイソロイシン、ロイシン及びバリンの３種の分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有する場合、かかる３種のアミノ酸の配合比は、それぞれ重量比で、通常、１：１．５〜２．５：０．８〜１．７の範囲であり、特に好ましくは１：１．９〜２．２：１．１〜１．３の範囲であり、最も好ましくは１：２：１．２である。この範囲を外れると、有効な作用効果が得難くなる。
本発明の副作用改善用組成物がイソロイシン及びロイシン、イソロイシン及びバリン、又はロイシン及びバリンの２種の分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有する場合、かかる２種のアミノ酸の配合比は、上記３種のアミノ酸の配合比における当該２種のアミノ酸の配合比とすればよい。
また本発明の副作用改善用組成物がイソロイシンのみ、ロイシンのみ、又はバリンのみを有効成分として含有する場合、その配合量を後述する投与量に基づいて決定して製剤化することができる。
【００３５】
本発明の副作用改善用組成物は、通常抗癌剤と併用される。ここで「併用」とは、抗癌剤投与の前、同時、後における使用を意味し、また、後述の配合剤のように抗癌剤と配合しての使用も含む意である。
また抗癌剤の投与は、副作用からの回復のため、通常休薬期間を挟んで一定の投与間隔で投与されるが、本発明の副作用改善用組成物は極めて安全性が高いため、抗癌剤の休薬期間も投与することができ、また抗癌剤の投与間隔よりも短い間隔で投与することができる。例えば、抗癌剤を一定の間隔（例えば数日から数週間毎）で投与し、本発明の副作用改善用組成物を抗癌剤よりも短い間隔（例えば毎日）で投与することができる。このような場合も本発明の副作用改善用組成物と抗癌剤とが併用されるということができる。
【００３６】
本発明の副作用改善用組成物と併用される抗癌剤としては、上記対象疾患に通常用いられるものであれば特に限定されず、具体的には、上述した抗癌剤が挙げられる。
【００３７】
本発明の副作用改善用組成物は、医薬及び食品などとしても有用であり、その適用対象としては、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル等）が挙げられる。なお、ヒト以外の哺乳動物に適応する場合、本発明の副作用改善用組成物の摂取量は、動物の体重もしくは大きさに応じて適宜加減すればよい。
【００３８】
本発明の副作用改善用組成物を医薬として用いる場合の投与方法は特に限定されないが、経口投与、直腸投与、注射、輸液による投与等の一般的な投与経路を経ることができる。
経口投与の剤形としては、顆粒剤、細粒剤、粉剤、被覆錠剤、錠剤、坐剤、散剤、（マイクロ）カプセル剤、チュアブル剤、シロップ、ジュース、液剤、懸濁剤、乳濁液などが挙げられる。また注射による投与の剤形としては、静脈直接注入用、点滴投与用、活性物質の放出を延長する製剤等などの医薬製剤一般の剤型を採用することができる。
【００３９】
これらの医薬は、常法により製剤化することによって調製される。さらに製剤上の必要に応じて、医薬的に許容し得る各種の製剤用物質を配合することができる。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等が挙げられる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロール等を挙げることができる。
【００４０】
本発明の副作用改善用組成物を医薬として使用する場合の投与量は、対象患者の年齢、体重もしくは病態、又は医薬の剤形もしくは投与方法などによっても異なるが、成人１日あたり、イソロイシン０．００５ｇ／ｋｇ体重〜５ｇ／ｋｇ体重、ロイシン０．０１ｇ／ｋｇ体重〜１０ｇ／ｋｇ体重、バリン０．００５ｇ／ｋｇ体重〜５ｇ／ｋｇ体重を目安とする。
【００４１】
一般の成人の場合、好ましくは、成人１日あたり、イソロイシン０．０１ｇ／ｋｇ体重〜１ｇ／ｋｇ体重、ロイシン０．０２ｇ／ｋｇ体重〜２ｇ／ｋｇ体重、バリン０．０１ｇ／ｋｇ体重〜１ｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは、イソロイシン０．０２ｇ／ｋｇ体重〜０．２ｇ／ｋｇ体重、ロイシン０．０４ｇ／ｋｇ体重〜０．４ｇ／ｋｇ体重、バリン０．０２ｇ／ｋｇ体重〜０．２ｇ／ｋｇ体重である。アミノ酸の全体量としては１日あたり０．０１ｇ／ｋｇ体重〜２ｇ／ｋｇ体重程度が好ましい。上記１日あたりの量は一度に、もしくは数回に分けて投与することができる。投与の時期としては特に限定されず、例えば食前、食後、食間のいずれでもよい。また、投与期間も特に限定されない。
【００４２】
なお、本発明の副作用改善用組成物の有効成分である分岐鎖アミノ酸の投与量（摂取量）について算出する際、本発明が目的とする副作用の改善とは別目的で（例えば通常の食生活の必要から、又は別の疾患の治療を目的として）摂取もしくは投与される分岐鎖アミノ酸については、前記算出に含める必要はない。例えば、通常の食生活から摂取される１日あたりの分岐鎖アミノ酸の量を、前記本発明における有効成分の１日あたりの投与量から控除する必要はない。
【００４３】
本発明の副作用改善用組成物の有効成分であるイソロイシン、ロイシン及び／又はバリンは、それぞれが単独もしくは任意の組み合わせで製剤に含有されていてもよく、又は全てが１種の製剤中に含有されていてもよい。別途製剤化して投与する場合、それらの投与経路、投与剤形は同一であっても、異なっていてもよく、また各々を投与するタイミングも、同時であっても別々であってもよい。従って、投与剤形、投与時期、投与経路などは、併用する薬剤の種類や効果によって適宜決定することができる。即ち、本発明の副作用改善用組成物は、複数の分岐鎖アミノ酸を同時に含有する製剤であってもよく、またそれぞれを別途製剤化して併用するような併用剤であってもよい。本発明の副作用改善用組成物は、これら全ての形態の製剤を包含するものである。特に、同一製剤中に全ての分岐鎖アミノ酸を含有する態様が、簡便に投与できるため好ましい。
【００４４】
本発明において、「重量比」とは、製剤中のそれぞれの成分の重量の比を示す。例えば、イソロイシン、ロイシン及びバリンの各有効成分を１つの製剤中に含めた場合には、個々の含有量の比であり、各有効成分のそれぞれを単独で又は任意の組み合わせで複数製剤中に含めた場合には、各製剤に含められる各有効成分の重量の比である。
【００４５】
また本発明において、実際の投与量の比は、投与対象（即ち患者）あたりの各有効成分１回投与量あるいは１日投与量の比である。例えば、イソロイシン、ロイシン及びバリンの各有効成分を１つの製剤中に含め、それを投与対象に投与する場合には、重量比が投与量比に相当する。各有効成分を単独又は任意の組み合わせで複数の製剤中に含めて投与する場合には、１回あるいは１日投与した各製剤中の各有効成分の合計量の比が重量比に相当する。
【００４６】
イソロイシン、ロイシン、及びバリンは既に、医薬・食品分野において広く用いられていて、安全性は確立している。例えば、これらのアミノ酸を１：２：１．２の重量比で含有する製剤の急性毒性（ＬＤ５０）は、マウスに経口投与する場合でも、１０ｇ／ｋｇ以上である。
【００４７】
本発明の副作用改善用組成物は、抗癌剤と配合することにより、抗癌剤の副作用改善用の配合剤とすることもできる。本発明の副作用改善用組成物を抗癌剤と配合する場合、本発明の副作用改善用組成物が抗癌剤の副作用を改善する効果を示す限り配合比は特に限定されず、上記説明した本発明の副作用改善用組成物の投与量及び配合される抗癌剤の有効量に基づき、適宜設定することができる。通常、抗癌剤と本発明の副作用改善用組成物の配合比は、それぞれ重量比で１：０．１〜１，０００，０００の範囲であり、特に好ましくは１：１〜１０，０００の範囲である。
【００４８】
さらに、本発明の副作用改善用組成物は、食品の形態でも簡便に使用することができる。食品として用いる場合には、本発明の食品の有効成分、すなわち分岐鎖アミノ酸を含む一般的な食事形態であればいかなるものでも良い。例えば、適当な風味を加えてドリンク剤、例えば清涼飲料、粉末飲料とすることもできる。具体的には、例えば、ジュース、牛乳、菓子、ゼリー、ヨーグルト、飴等に混ぜて飲食することができる。
【００４９】
また、このような食品を、保健機能食品又はダイエタリーサプリメントとして提供することも可能である。この保健機能食品には、特定保健用食品及び栄養機能食品なども含まれる。特定保健用食品は、例えば、抗癌剤投与に伴う副作用の改善など、特定の保健の目的が期待できることを表示できる食品である。また、栄養機能食品は、１日あたりの摂取目安量に含まれる栄養成分量が、国が定めた上・下限値の規格基準に適合している場合その栄養成分の機能の表示ができる食品である。ダイエタリーサプリメントには、いわゆる栄養補助食品又は健康補助食品などが含まれる。本発明において、特定保健用食品には、抗癌剤投与に伴う副作用の改善の用途に用いるものであるという表示を付した食品、さらには、かかる用途に用いるものである旨を記載した書類（いわゆる能書き）などをパッケージとして包含する食品なども含まれるものとする。
【００５０】
食品として摂取する場合の摂取量、摂取期間は、医薬として使用する場合の上記投与量、投与期間の記載に基づき、本発明の副作用改善用組成物が抗癌剤の副作用を改善する効果を示すように適宜設定することができる。
【００５１】
以上の本発明の副作用改善用組成物により、抗癌剤投与に伴う副作用を改善することができるため、抗癌剤による癌治療の効果を高めることができ有用である。
【００５２】
或いは、本発明は、抗癌剤と併用することにより延命効果を有する癌治療用組成物を提供する（以下、本発明の癌治療用組成物と称する）。より具体的には、本発明は、イソロイシン、ロイシン及びバリンからなる群から選択される少なくとも１種を含み、抗癌剤との併用により延命効果を有する、癌治療用組成物を提供する。
【００５３】
本発明の癌治療用組成物は、上述の本発明の副作用改善用組成物と同様に調製することができる。
【００５４】
本発明の癌治療用組成物は、イソロイシン、ロイシン及びバリンのうち、１種（イソロイシン、ロイシン又はバリン）、２種（イソロイシン及びロイシン、イソロイシン及びバリン、又はロイシン及びバリン）、又は３種（イソロイシン、ロイシン及びバリン）を含み得るが、少なくともイソロイシンを含むことが好ましく、イソロイシン、ロイシン及びバリンを含むことがより好ましい。
【００５５】
本発明の癌治療用組成物と併用される抗癌剤としては、上述した抗癌剤が挙げられる。
抗癌剤はＤＮＡ傷害性抗癌剤のなかから白金製剤と抗癌性抗生物質の２種類を併用しても良いし、ＤＮＡ傷害性抗癌剤と代謝拮抗剤を併用しても良い。例えばＤＮＡ傷害性抗癌剤として白金製剤を選択し、代謝拮抗剤からテガフールもしくはカペシダビンを選択して併用してもよい。更に白金製剤と代謝拮抗剤にべバシツマブ等の分子標的治療剤を併用しても良い。
抗癌剤は、好ましくはＤＮＡ傷害性抗癌剤であり、より好ましくはアドリアマイシン及び／又はシスプラチンである。
【００５６】
本発明の癌治療用組成物と抗癌剤との併用の態様は、抗癌剤のみを投与した場合と比較して投与対象の生存期間が延長される限り（即ち延命効果を有する限り）、特に限定されず、上述した態様のいずれであってもよい。本発明の癌治療用組成物は極めて安全性が高いため、例えば、抗癌剤の投与前（例えば数日前、数週間前、数ヶ月前など）から投与することができ、また長期間にわたり毎日連続して投与することもできる。好ましくは３ヶ月以上の期間、より好ましくは半年以上の期間で本発明の癌治療用組成物と抗癌剤との併用投与を継続するのが良い。本発明の癌治療用組成物が延命効果を有することは、後述の実施例に記載されるような実験動物を使用した抗癌剤治療における生存率の評価により調べることができる。
【００５７】
本発明の癌治療用組成物は、抗癌剤と併用することにより、抗癌剤治療を受ける対象に対してより高い治療効果をもたらすため有用である。
【００５８】
以下の実施例において本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００５９】
（材料及び方法）
［動物］
Ｃ５７ＢＬ／６マウス・雄（日本ＳＬＣ）を使用した。７週齢で購入し、順化飼育後８−９週齢より薬剤の投与を開始した。生存曲線の実験にのみ、雌も使用した。【００６０】
［アドリアマイシン（ドキソルビシン）の投与］
アドリアマイシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ，  Ｔｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃａｔ＃Ｄ５５８０００）は、１．５ｍｇ／ｍｌの濃度で５％  ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（Ｓｉｇｍａ）のＰＢＳ溶液に溶解し、分注後使用時まで凍結保存した。生存率や運動機能の評価の際は、マウスに５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを週１回腹腔内投与した。急性の心臓組織障害を見る際には１５ｍｇ／ｋｇを単回投与、ｉｎ  ｖｉｖｏでの癌細胞の転移・増殖を評価する際には２ｍｇ／ｋｇを毎日、１１日間に渡って、尾静脈投与した。【００６１】
［シスプラチンの投与］
シスプラチン（ｃｉｓ−Ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ）  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ，  Ｓｉｇｍａ  ｃａｔ＃Ｐ４３９４）は２ｍｇ／ｍｌの濃度で使用時に生理食塩水に溶解して調製した。腎臓毒性を評価する実験には２０ｍｇ／ｋｇを単回投与し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの癌細胞の転移・増殖を評価する実験には１０ｍｇ／ｋｇの用量を単回投与で用いた。【００６２】
［アドリアマイシンとシスプラチンの同時投与］
抗癌剤単独及び抗癌剤とＢＣＡＡの同時投与による担癌マウスに対する延命効果の実験では、癌細胞を接種後、１日目と８日目に６ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンと同量のシスプラチンを同時に腹腔内投与した。【００６３】
［ＢＣＡＡの調製と投与］
ロイシン、イソロイシン及びバリンを２：１：１．２の割合で含む分岐鎖アミノ酸の混合物をＢＣＡＡとする。ＢＣＡＡは０．５％  ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｒｏｓｅ（ＣＭＣ，  Ｓｉｇｍａ）への懸濁もしくは、γ-シクロデキストリン（ＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８，  Ｗａｃｋｅｒ  ｆｉｎｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）への溶解後に、７５０ｍｇ／ｋｇの用量でゾンデを用いて経口投与した。【００６４】
（実施例１）アドリアマイシン心不全に対するＢＣＡＡの低減効果
［運動機能試験］
アドリアマイシンの投与前に体重測定とトレッドミル上での運動能力測定を行い、運動能力が均一になるように群分けを行った。トレッドミルの作動速度・時間は次のプロトコールで行った。
１０  ｍ／分：  １分
１５  ｍ／分：  １分
２０  ｍ／分：  ３分
２５  ｍ／分：  ３分
３０  ｍ／分：  ２分
３５  ｍ／分：  ２分
アドリアマイシンは５ｍｇ／ｋｇの用量で週１回腹腔内投与、ＢＣＡＡは７５０ｍｇ／ｋｇの用量で毎日経口投与を行った。週１回、トレッドミル上での運動機能測定により運動機能を評価した（図１、上段パネル）。アドリアマイシン投与で運動機能は徐々に低下したが、ＢＣＡＡ投与群は非投与群よりも有意に高い運動機能を保持していた。体重には平均値の差がみられたが有意な差は認められなかった（図１、中段パネル）。
生存率の評価（図１、下段パネル）では、４回目のアドリアマイシン投与を行った後、１週間後まで毎日ＢＣＡＡ投与を行い、生存状況を観察した。ビークル（ＣＭＣのみ）投与群では４回目投与後から数日して生存率が低下しはじめ、最終的には３０％弱にまで低下したが、ＢＣＡＡ投与群では約８０％の個体が生存していた。【００６５】
（実施例２）アドリアマイシンによる心臓組織傷害に対するＢＣＡＡの低減効果
アドリアマイシンを１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与後、ＢＣＡＡ投与群とビークル投与群に分けて毎日経口投与を行い、５日後にマウス血清を採取して血清中のクレアチニンキナーゼ（クレアチンホスフォキナーゼ（ＣＰＫ））値を酵素法で測定（ＣＰＫＩＩテストワコー、和光純薬）した（図２、下段パネル）。測定値には個体差が多く有意な差は得られなかったが、ＢＣＡＡ投与群にはビークル投与群の平均値を大幅に下回る個体が複数存在した。
組織障害を評価するために、心室の側壁部分下部から１ｍｍ角程度の組織を切り出し、２％グルタルアルデヒド固定後にエポキシ樹脂に包埋して薄切し、電子顕微鏡で観察した（図２、上段パネル）。観察対象として、ビークル投与群ではクレアチニンキナーゼ値が平均的な個体を、ＢＣＡＡ投与群ではクレアチニンキナーゼ値がビークル投与群より低い２個体のうち平均値に近い個体を選択した。ビークル投与個体の心臓では、心筋繊維走行の乱れやミトコンドリアの膨潤が高頻度に認められたが、ＢＣＡＡ投与個体では心筋繊維・ミトコンドリアともに正常個体に近い状態が観察された。【００６６】
（実施例３）心電図による心機能評価
１５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンを腹腔内単回投与したマウスに、ビークルもしくは７５０ｍｇ／ｋｇのＢＣＡＡを毎日経口投与し、１１日目に心電図にて心機能を評価した（図３）。ビークル投与個体はアドリアマイシン投与の影響を受けて心電図の波形が大きく乱れていたが、ＢＣＡＡ投与個体はほぼ正常に近い波形を保っていた。【００６７】
（実施例４）シスプラチンによる急性腎不全に対するＢＣＡＡの低減効果
シスプラチンを２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与後、ＢＣＡＡ投与群とビークル投与群に分けて毎日経口投与を行い、３日目・４日目に血清を採取して血清中の尿素を酵素法で測定（ＢＵＮテストワコー、和光純薬）した（図４、上段パネル）。ＢＣＡＡ投与は血清中の尿素の上昇を有意に抑制した。
生存率の評価（図４、下段パネル）では、シスプラチンは１日目に、ビークル（ＣＭＣのみ）もしくはＢＣＡＡ（γ−ＣＤ  ＢＣＡＡ）は毎日投与し、生存状況を観察した。ビークル投与群では１週間程度でほぼ全個体が死亡したが、ＢＣＡＡ投与群ではシスプラチン投与３週間後の時点でも、約７０％の個体が生存していた。【００６８】
（実施例５）シスプラチンによる腎臓組織傷害に対するＢＣＡＡの低減効果
シスプラチンを１５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与後に２群に分け、ビークルもしくはＢＣＡＡを毎日経口投与した。３日後に４％パラホルムアルデヒドで灌流固定した腎臓組織を取り出し、切片のヘマトキシリン−エオシン染色を行い、組織像を光学顕微鏡で観察した（図５）。ビークル投与群ではシスプラチンによる尿細管の壊死像が高頻度に認められたが、ＢＣＡＡ投与群では抑制されていた。シスプラチン投与４日後にグルタルアルデヒドで固定して包埋・観察した腎臓組織でも、シスプラチンによる尿細管の壊死がＢＣＡＡにより抑制されていることが確認された（図６）。【００６９】
（実施例６）アドリアマイシン及びシスプラチンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ癌細胞抑制作用に対するＢＣＡＡの影響
各種培養細胞を９６穴プレートに４，０００−５，０００  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播き、翌日に０．３−１０μＭのアドリアマイシン又は１０−３００μＭのシスプラチンと１０ｍＭ  ＢＣＡＡで処理した。２４時間後、アドリアマイシンとシスプラチンの癌細胞抑制効果に対するＢＣＡＡの影響を、ＷＳＴ試薬（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ＳＦ、♯０７５５３−１５、ナカライテスク）を用いて生細胞の有する酵素活性を測定することにより比較した（図７及び図８）。評価を行った全ての癌細胞株（ＨｅＬａ：ヒト子宮頸癌、ＨｅｐＧ２：ヒト肝臓癌、ＰＣ３，ＤＵ１４５：ヒト前立腺癌、ＭＣＦ７：ヒト乳癌、Ｃｏｌｏ２６：マウス大腸癌）において、アドリアマイシンとシスプラチンの癌細胞抑制作用にＢＣＡＡが影響を与えることはなかった。【００７０】
（実施例７）アドリアマイシンのｉｎ  ｖｉｖｏ抗癌作用に対するＢＣＡＡの影響
ＢＣＡＡを７５０ｍｇ／ｋｇの用量でＣ５７ＢＬ／６マウスに毎日経口投与を行った。ＢＣＡＡ投与開始翌日に５ｘ１０５ｃｅｌｌｓのＢ１６メラノーマ細胞を尾静脈注射により接種した。アドリアマイシンを接種の翌日より毎日、１１日間に渡って、２ｍｇ／ｋｇの用量で尾静脈注射した。２週間後に肺を取り出してメラノーマ細胞の肺転移を評価した（図９及び１０）。アドリアマイシンによる肺転移抑制効果は、コロニーの癒着によりコロニー数の評価は難しいものの肉眼所見上は明らかであり、このときＢＣＡＡ併用の有無によるコロニー数の変化は認められなかった。肺組織表面における転移巣面積の評価（図１０、下段パネル）においても、アドリアマイシン投与による転移巣面積の低下に対するＢＣＡＡの影響は見られなかった。【００７１】
（実施例８）シスプラチンのｉｎ  ｖｉｖｏ抗癌作用に対するＢＣＡＡの影響
５ｘ１０５ｃｅｌｌｓのＢ１６メラノーマ細胞を尾静脈注射により接種したＣ５７ＢＬ／６マウスに対し、シスプラチンは１０ｍｇ／ｋｇの用量で翌日に腹腔内単回投与し、γ−ＣＤ  ＢＣＡＡは同日から毎日経口投与した。２週間後の肺転移を、肉眼での観察（図１１、上段パネル）及びコロニー数（図１１、下段パネル）により評価した。シスプラチン投与により見られた肺転移コロニー数の低下に対し、ＢＣＡＡが影響を及ぼさないことが確認された。【００７２】
（実施例９）シスプラチン腎症に対するＢＣＡＡの個別アミノ酸の単独効果
Ｃ５７ＢＬ／６（８週齢）にシスプラチン（ＣＤＤＰ）を２０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与後、０．７５ｇ／ｋｇのＢＣＡＡ又はその構成アミノ酸であるロイシン、イソロイシンもしくはバリンを個別に毎日経口投与した。２日後の腎臓を採取してＲＮＡ抽出及びｃＤＮＡ合成を行い、急性腎傷害バイオマーカーであるＫｉｍ１（Am J Physiol Renal Physiol, 286: F552-F563 (2004); Nat Biotechnol., 28: 478-485 (2010)）の発現をｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲによって解析した（図１２）。シスプラチン投与によって上昇するＫｉｍ１の発現は、ＢＣＡＡの投与によって抑制された。特に各アミノ酸で比較すると、イソロイシンのＫｉｍ１発現抑制効果が最も強いことが判明した。【００７３】
（実施例１０）ＢＣＡＡ投与による担癌マウスへの抗癌剤治療による延命効果
Ｃ５７ＢＬ／６（８週齢）に対し、２０万個のＢ１６メラノーマ細胞を尾静脈より注射し（day ０）、シスプラチン（ＣＤＤＰ）（６ｍｇ／ｋｇ）及びアドリアマイシン（ＤＯＸ）（６ｍｇ／ｋｇ)を併用して、翌日（day １)と８日後(day ８)に腹腔内に投与した。また、ＢＣＡＡ（７５０ｍｇ／ｋｇ）は、Ｂ１６メラノーマ細胞注入の２週間前から連日経口投与した。癌細胞注入後、４０日後までの生存状況を観察した（図１３）。その結果、シスプラチン及びアドリアマイシンの処理により、担癌マウスの生存は延長し、さらにＢＣＡＡを投与することで、その生存が延長することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明により、抗癌剤投与に伴う副作用を改善するための医薬や食品等の提供が可能となる。【００７５】
本出願は、日本で出願された特願２０１１−１０２３３０（出願日：２０１１年４月２８日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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