(57)【要約】  本発明は、いまだに提供されていない乳幼児の突発性発疹等の原因となる疾患ＨＨＶ−６Ｂのワクチンを提供すること、および他の治療薬の有効なスクリーニング方法を提供することを課題とする。上記課題は、配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）またはその改変配列のうち、少なくともＥを含む少なくとも５連続アミノ酸の配列を含むかまたはＥがＱに変化したとき４８７番目のＣおよび４８９番目のＧが保存された配列を含む、ＨＨＶ−６Ｂに特異的なエピトープを提供することによって解決される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）またはその改変配列のうち、少なくともＥを含む少なくとも５連続アミノ酸の配列を含むかまたはＥがＱに変化したとき４８７位のＣおよび４８９位のＧが保存された配列を含む、ＨＨＶ−６Ｂに特異的なエピトープ。
【請求項２】
配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）からなる、請求項１に記載のエピトープ。
【請求項３】
請求項１に記載のエピトープに対する抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
中和活性を有する、請求項３に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
モノクローナル抗体である、請求項３に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
配列番号１０に示す配列を含む軽鎖および配列番号１２に示す配列を含む重鎖を含む、請求項５に記載の記載の抗体。
【請求項７】
請求項１に記載のエピトープを含む抗原。
【請求項８】
配列番号２（ＢｇＱ１の全長）のうち、少なくともアミノ酸１位〜４９６位を含む、請求項１に記載のエピトープを含む抗原。
【請求項９】
ＢｇＱ１の全長を含む、請求項１に記載のエピトープを含む抗原。
【請求項１０】
請求項７に記載の抗原を含む組成物。
【請求項１１】
請求項７に記載の抗原を含む、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和抗体を生成するための組成物。
【請求項１２】
前記抗原は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
さらにＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は複合体を形成したものである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
医薬である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１７】
ワクチンである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１８】
ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするための方法であって、該方法は：
Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を提供する工程；
Ｂ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させる工程；ならびに
Ｃ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２との結合を観察する工程であって、該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される、工程、
を包含する、方法。
【請求項１９】
前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ａ）工程において、さらに、ｇＬおよびｇＨが提供される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするためのキットであって、該キットは：
Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１；
Ｂ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２；および
Ｃ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件を提供する手段を備え、該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させたときに該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される、キット。
【請求項２２】
前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
ｇＬおよびｇＨをさらに備える、請求項２１に記載のキット。
【請求項２４】
ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするための方法であって、該方法は：
Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する工程；
Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる工程；および
Ｃ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項２５】
ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするためのキットであって、該キットは：
Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する手段；
Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる手段；および
Ｃ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する手段、
を備える、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＨＶ−６Ｂに特異的な免疫科学に関し、より特定するとその中和エピトープ、治療薬のスクリーニング、そのワクチン等医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＨＶ−６は、ＡＩＤＳ患者およびリンパ増殖障害の患者の末梢血から分離された株であり、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）およびヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）なども属するβヘルペスウイルス（Ｔリンパ栄養性ヘルペスウイルス）に分類される。【０００３】
ＨＨＶ−６は２種の変種としてＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６Ｂに分類することができる。ＨＨＶ−６Ｂは、乳幼児の突発性発疹の原因とされている。他方、ＨＨＶ−６Ａは、ヒトにおける疾患との関係は不明である。２種の変種は、ヌクレオチド配列の相違に基づいて、ならびに免疫学的特徴および生物学的特徴によって分類される。【０００４】
ＨＨＶ−６の主要な標的はＴ細胞系統のリンパ球とされているが、ＨＨＶ−６Ｂは、ほとんどの成人に潜伏感染しており、乳幼児期の突発性発疹の原因ウイルスである。ＨＨＶ−６Ａに関してはその病原性はまだ報告されていない。【０００５】
ＨＨＶ−６Ａの遺伝子であるＵ９７，Ｕ９８，Ｕ９９およびＵ１００は、糖タンパク質Ｑ１およびＱ２（ｇＱ１およびｇＱ２）をコードする、非常にスプライシングを受けるｍＲＮＡ転写物を生成すると報告されている。【０００６】
ＨＨＶ−６に感染した細胞では、ｇＱ１はｇＨ／ｇＬ複合体に結合してｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２を形成する。この４複合体は、ウイルスエンベロープにおいて見出される。【０００７】
ＨＨＶ−６ＡのｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２複合体は、ヒトＣＤ４６に結合するが、ＨＨＶ−６Ｂのものは、結合しないとされている（非特許文献１：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００４，  Ｖｏｌ．  ７８（１５）ｐｐ．  ７９６９−７９８３；非特許文献２：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００３，  Ｖｏｌ．  ７７（４）ｐｐ．  ２４５２−２４５８）（図８参照）。非特許文献１（Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００４，  Ｖｏｌ．  ７８（１５）ｐｐ．  ７９６９−７９８３）は、ｇＱ１およびｇＱ２に関する細胞内プロセシングに関する分析を行なったことを開示する。非特許文献２（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００３，  Ｖｏｌ．  ７７（４）ｐｐ．  ２４５２−２４５８）は、Ｕ１００遺伝子産物についての解析およびｇＨおよびｇＬとの複合体形成に関する分析を行なったことを開示する。【０００８】
ＨＨＶ−６Ａにおいてｇｐ１０５−８２（現在はｇＱ１と呼ばれるので、本明細書ではｇＱ１という）という名前で中和抗体が作成されたことは知られている。また、ＨＨＶ−６Ａは、ヒトＣＤ４６を細胞レセプターとして使用する。同様の機構がＨＨＶ−６Ｂでも採用されているのか未だ不明なままであり、乳幼児の突発性発疹等の原因となる疾患ＨＨＶ−６Ｂのワクチン、および他の治療薬の有効なスクリーニング方法は提供されていない。【０００９】
非特許文献３（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  （２００９），１１（７），  １００１−１００６）は、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）とＣＤ４６との関係等を記載する。【００１０】
非特許文献４（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  １９９３，  Ｖｏｌ．  ６７（８）ｐｐ．  ４６１１−４６２０）はｇＱ１のマッピングを開示する。【００１１】
非特許文献５（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００４，  Ｖｏｌ．  ７８（９）ｐｐ．  ４６０９−４６１６）は、ｇＨ−ｇＬの複合体形成とＣＤ４６に関する分析を行なったことを開示する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００４，  Ｖｏｌ．  ７８（１５）ｐｐ．  ７９６９−７９８３
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００３，  Ｖｏｌ．  ７７（４）ｐｐ．  ２４５２−２４５８
【非特許文献３】Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  （２００９），１１（７），  １００１−１００６
【非特許文献４】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  １９９３，  Ｖｏｌ．  ６７（８）ｐｐ．  ４６１１−４６２０
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ２００４，  Ｖｏｌ．  ７８（９）ｐｐ．  ４６０９−４６１６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、いまだに提供されていない乳幼児の突発性発疹等の原因となる疾患ＨＨＶ−６Ｂのワクチンを提供すること、および他の治療薬の有効なスクリーニング方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
鋭意努力した結果、本発明者らは、ＫＨ−１と呼ばれるＨＨＶ−６Ｂに対する中和性のモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を作製することによって、上記課題を解決した。本発明では、この中和抗体によって認識されるＨＨＢ−６Ｂタンパク質も同定し、抗体自体の特徴づけも行なった。【００１５】
したがって、本発明は、以下を提供する。
（１）配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）またはその改変配列のうち、少なくともＥを含む少なくとも５連続アミノ酸の配列を含むかまたはＥがＱに変化したとき４８７位のＣおよび４８９位のＧが保存された配列を含む、ＨＨＶ−６Ｂに特異的なエピトープ。
（２）配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）からなる、項目１に記載のエピトープ。
（３）項目１または２に記載のエピトープに対する抗体または抗原結合性断片。
（４）中和活性を有する、項目３に記載の抗体または抗原結合性断片。
（５）モノクローナル抗体である、項目３または４に記載の抗体または抗原結合性断片。
（６）配列番号１０に示す配列を含む軽鎖および配列番号１２に示す配列を含む重鎖を含む、項目３〜５のいずれか１項に記載の記載の抗体。
（７）項目１または２に記載のエピトープを含む抗原。
（８）配列番号２（ＢｇＱ１の全長）のうち、少なくともアミノ酸１位〜４９６位を含む、項目１または２に記載のエピトープを含む抗原。
（９）ＢｇＱ１の全長を含む、項目１または２に記載のエピトープを含む抗原。
（１０）項目７〜９のいずれか１項に記載の抗原を含む組成物。
（１１）項目７〜９のいずれか１項に記載の抗原を含む、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和抗体を生成するための組成物。
（１２）前記抗原は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１である、項目１１に記載の組成物。
（１３）さらにＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を含む、項目１１または１２に記載の組成物。
（１４）前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は複合体を形成したものである、項目１３に記載の組成物。
（１５）前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、項目１３または１４に記載の組成物。
（１６）医薬である、項目１０〜１５のいずれかに記載の組成物。
（１７）ワクチンである、項目１０〜１６にいずれかに記載の組成物。
（１８）ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするための方法であって、該方法は：
Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を提供する工程；
Ｂ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させる工程；ならびに
Ｃ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２との結合を観察する工程であって、該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される、工程、
を包含する、方法。
（１９）前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、項目１８に記載の方法。
（２０）Ａ）工程において、さらに、ｇＬおよびｇＨが提供される、項目１８または１９に記載の方法。
（２１）ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするためのキットであって、該キットは：
Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１；
Ｂ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２；および
Ｃ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件を提供する手段を備え、該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させたときに該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される、キット。
（２２）前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される、項目２１に記載のキット。
（２３）ｇＬおよびｇＨをさらに備える、項目２１または２２に記載のキット。
（２４）ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするための方法であって、該方法は：
Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する工程；
Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる工程；および
Ｃ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する工程、
を包含する、方法。
（２５）ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするためのキットであって、該キットは：
Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する手段；
Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる手段；および
Ｃ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する手段、
を備える、キット。【００１６】
本発明者らは、ＨＨＶ−６Ｂ精製ウイルス粒子をマウスに免疫し、ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体を作製した。免疫沈降により得られた抗体が認識するウイルス側因子の同定を行った。次に同定されたウイルス側因子のクローニングおよびその変異体の作製を行い、２９３Ｔ細胞にて発現させることにより本抗体のエピトープ部位の同定を試みたところ、ＨＨＶ−６Ｂに対する中和活性を有する抗体を得ることができ、本抗体はｇＱ１を認識することが明らかとなった。ｇＱ１変異体を用いて本抗体の反応性を調べたところ、本抗体はｇＱ１のＣ末端のアミノ酸を認識することが明らかとなった。Ｃ末端欠損ｇＱ１およびｇＱ１と複合体を形成するｇＱ２を共発現させ、免疫沈降およびウェスタンブロットにより相互作用を調べたところ、本抗体が認識するアミノ酸を欠損させた変異体ｇＱ１も、ｇＱ２との相互作用を示した。以上から、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１を認識する中和活性を有するモノクローナル抗体が得られたことより、ＨＨＶ−６Ｂの侵入に際してもｇＱ１が重要な役割を果たしていることが示唆された。さらに、本抗体により認識されないｇＱ１変異体もｇＱ２との相互作用を示したことから、ｇＱ１中和エピトープ部位とｇＱ２との複合体形成に必要な領域は異なっていることが明らかとなった。これらの結果から、ｇＨおよびｇＬとの複合体形成や本抗体を用いたｇＱ１の立体構造解析等さらに詳細な解析を行うことができる。【００１７】
本発明者らは、ＨＨＶ−６Ｂ，ｇＱ１（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｑ１）に対する中和活性をもったモノクローナル抗体の作製に成功し、その中和のエピトープを本発明者らは同定した。この抗体は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１においてのみ反応し、ＨＨＶ−６Ａ  ｇＱ１には反応しなかったことを見出した。すなわち、この中和活性はＨＨＶ−６Ｂ  特異的であると思われる。ｇＱ１は、ＨＨＶ−６ＡにおいてｇＨ、ｇＬおよびｇＱ２という糖タンパクと複合体を形成し、レセプターに結合することが知られているところ、ＨＨＶ−６Ｂにおいてはそのレセプターも同定されておらず、複合体が必要かどうかも不明である。本発明の結果では、ｇＱ１およびｇＱ２を同時に細胞に発現させると両者は結合する。【００１８】
ＨＨＶ−６Ａにおいてｇｐ１０５−８２（現在は、ｇＱ１と呼ばれている）という名前で中和抗体が作成されたことは知られている（非特許文献７）。非特許文献７では、ｇＱ１とｇＱ２との複合体形成が重要だということや認識するエピトープに関しては報告されていなかった。ＨＨＶ−６Ａは、ヒトＣＤ４６を細胞レセプターとして使用する。【００１９】
ＨＨＶ−６Ｂまたは両方（ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６Ｂ）の変種についてのさらなるレセプターは、このウイルスの細胞栄養性を決定するにおいて重要な役割を果たすと本発明者らは考えた。ウイルスエンベロープにおける糖タンパク質は、ウイルス感染において必須の役割を果たすものであり、特にビリオン侵入の過程において重要な役割を果たしている。さらに、糖タンパク質は、中和抗体を惹起するので、宿主免疫応答の主要な標的になる。本発明では、本発明者らは、ＫＨ−１と称するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマクローンを分離した。このクローンは、中和活性を有しており、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と特異的に反応する能力を有することが明らかになった。【００２０】
ＨＨＶ−６は、おそらく、細胞内経路によって細胞に侵入する。エンベロープ糖タンパク質ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２（ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ）およびｇＢは、ウイルス接着および貫通の過程において機能する。ＨＨＶ−６Ａは、ヒトＣＤ４６を細胞レセプターとして利用するが、ＨＨＶ−６Ｂはそうではなく別のレセプターを介しているであろうことが本発明において明らかになった（図８）。
【発明の効果】
【００２１】
本発明は、突発性発疹の原因であるＨＨＶ−６Ｂのワクチン等の医薬およびそのスクリーニング方法を提供する。本発明では、作成したモノクローナル抗体は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１を認識するが、ＨＨＶ−６Ａ  ｇＱ１をＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２と共発現させた方が、その認識が強くなることがわかった。すなわち、ｇＱ１とｇＱ２が相互作用することによって、形成されるｇＱ１の立体構造を本発明において作製した中和抗体が認識すると考えられる。ｇＱ１とｇＱ２が結合することによって形成される立体構造は、ＨＨＶ−６Ｂ感染中和のターゲットとなること、そしてこの結合を阻止する分子を同定することによって治療薬の開発にも繋げられる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体によって認識されるウイルスタンパク質の決定を示す。左２列は、免疫沈降に使用したモノクローナル抗体ＢｇＱ２０２を示し、右２列は、ＫＨ−１を示す。１番左側および右から２番目の列は、ＨＨＶ−６Ｂ感染した株の結果を示し、左から２番目の列および一番右側の列は、モック感染したものを示す。
【図２】図２は、抗ｇＱ１モノクローナル抗体によってＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞におけるｇＨ／ｇＬ／ｇＱの検出を示す。左２列は、ＫＨ−１での免疫沈降を示し、右３列は細胞溶解物での免疫沈降を示す。１番左側および中央の列は、モック感染の株を示し、左から２番目および右から２番目はＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞を示し、一番右側はＨＨＶ−６Ｂのビリオンでの実験を示す。左側の数字は、分子量（ｋＤａ）を示す。
【図３】図３は、抗ｇＱ１抗体であるＫＨ−１は中和活性を有することを示す結果である。右上の模式図は、本実施例の実験のスキームを示す。下パネルの左側は、間接免疫蛍光アッセイのコントロールの結果を示し、右側はＫＨ−１を用いた場合の結果を示す。
【図４】図４は、ｇＱ１一過性発現系における抗体で認識されたタンパク質の発現を示す。左列の写真は、ＢｇＱ１を示す。右列の写真は、ＢｇＱ１およびＢｇＱ２を示す。上段のパネルは、ＩＦＡとしてＫＨ−１を使用したもの示す。下段のパネルは、ＩＦＡとしてＢｇＱを使用したものを示す。
【図５】図５は、種々のカルボキシ末端検出変異体を用いたＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１遺伝子の模式的ダイアグラムおよびモノクローナル抗体ＫＨ−１に対する反応性を示す。図５では、ＢｇＱ１の各種フラグメントのＭＡｂ抗体ＫＨ−１に対する反応性を＋（反応性あり）、および−（反応性なし）で示す。いずれのフラグメントもアミノ酸１位から始まり、図中に示Ｃ末端のアミノ酸位までのものである。
【図６】図６（Ａ）は、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６ＢのｇＱ１のアミノ酸配列アラインメントを示す。上段は、ＨＨＶ−６ＢのｇＱ１の４８４位〜４９６位のアミノ酸配列を示す。下段は、ＨＨＶ−６ＡのｇＱ１の４８４位〜４９６位のアミノ酸配列を示す。図６（Ｂ）は、ＫＨ−１が認識するＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１エピトープ部位の同定のため、Ｃ末端における点変異体のＫＨ−１反応性の有無も確認した結果を示す。上から、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１（天然型）、Ｅ４８８Ｑ（４８８位のＥをＱに変異させたもの）、Ｃ４８７Ｑ  Ｅ４８８Ｑ（４８７位のＣをＱに変異させ、４８８位のＥをＱに変異させたもの）、およびＥ４８８Ｑ  Ｇ４８９Ｖ（４８８位のＥをＱに変異させ、４８８位のＧをＶに変異させたもの）を示す。
【図７】図７は、ＨＨＶ−６ＢのＫＨ−１による侵入阻害のモデルを示す。
【図８】図８は、ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２複合体のＨＨＶ−６ＡとＨＨＶ−６Ｂとの反応性の相違を示す模式図である。
【図９】図９は、ＨＨＶ−６Ｂの細胞侵入の模式図である。ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２複合体の形成において、ｇＱ１およびｇＱ２が特異的な複合体形成を行なうことを示す。
【図１０】図１０は、中和抗体の反応および立体構造の変化を示す模式図である、下パネルには中和エピトープ（ＨＨＶ−６Ｂ）およびそれに対応するＨＨＶ−６Ａのアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下に本発明の好ましい形態を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など、他の言語における対応する冠詞、形容詞など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００２４】
（定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【００２５】
本明細書において使用される「ＨＨＶ」とは、ヒトヘルペスウイルス（ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）をいい、そのタイプによって、１型、２型、３型、４型、５型、６型、７型、８型などが存在する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、用語「ヘルペスウイルス」とは、任意の型を含む、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６Ｂを包含し、かつ、特に言及されない限り、これらウイルスの野生型、組換え型のいずれをも含む。また、本明細書において使用される場合、用語「ＨＨＶ−６（ヒトヘルペスウイルス６）」は、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６Ｂを包含し、かつ、特に言及されない限り、これらウイルスの野生型、組換え型のいずれをも含む。ＨＨＶ６は、サイトメガロウイルスＨＨＶ−５と同じくβ亜科に属し、ＨＨＶ−６Ｂは突発性発疹の原因ウイルスであり、日本ではほぼ全員が２歳までに感染するといわれている。ＨＨＶ−６Ａについては、疾患との関連は知られていない。
【００２７】
本明細書においてヘルペスウイルスの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然より単離されたヘルペスウイルス株をいう。野生株の例としては、ＪＩ株が挙げられるが、これに限定されない。
【００２８】
本明細書において、ＨＨＶ−６Ａ、ＨＨＶ−６Ｂ等ヘルペスウイルスの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然より単離されたヘルペスウイルス株（ＨＨＶ−６Ａ、ＨＨＶ−６Ｂ等）をいう。ＨＨＶ−６Ａ野生株の例としては、Ｕ１１０２株が挙げられるが、これに限定されない。ＨＨＶ−６Ｂ野生株の例としては、ＨＳＴ株が挙げられるが、これに限定されない。
【００２９】
本明細書において、ＨＨＶ−６Ａ、ＨＨＶ−６Ｂ等ヘルペスウイルスの「変異株」とは、野生株であるウイルス株に、変異誘発、多数回の継代培養などによって変異誘発をしたヘルペスウイルス株（ＨＨＶ−６Ａ、ＨＨＶ−６Ｂ等）をいう。ヘルペスウイルス株に変異誘発する場合、この変異誘発は、ランダムな変異導入であっても、部位特異的変異導入であってもよい。
【００３０】
本明細書において「エピトープ」とは、当該分野において用いられる通常の意味で用いられ、抗体が認識する抗原性を決定する領域をいう。抗体は病原微生物や高分子物質などと結合する際、その全体を認識するわけではなく、抗原の比較的小さな一部分のみであるエピトープを認識して結合する。エピトープは、通常アミノ酸配列で表され、直鎖状エピトープの場合、少なくとも５アミノ酸、好ましくは少なくとも６アミノ酸、７アミノ酸、あるいは８アミノ酸のアミノ酸配列で決定される。ある特定抗原の侵入により生成された抗体は，その抗原と同一あるいは類似のエピトープを持つものとしか反応しない。
【００３１】
本明細書において「中和エピトープ」とは、中和活性を付与することを担うエピトープをいう。中和エピトープを有する抗原を用いることによって、ワクチンを製造することができることから、注目される。中和エピトープは、例えば、中和抗体（例えば、本発明のＫＨ−１（配列番号１０および１２を参照。））を用いてスクリーニングすることができる。
【００３２】
本明細書において「中和活性」とは、ウイルス等の対象物（代表的には、病原体）が細胞内へ侵入・増殖するのを阻止する活性をいう。中和活性が発揮される結果、病原性が無毒化される。
【００３３】
本明細書において、免疫反応について「特異的」とは、他の対象物（例えば、抗体または抗原等）よりも、反応性が高い（好ましくは、対象のみに反応する）ことをいい、「ＨＨＶ−６Ｂに特異的」とは、ＨＨＶ−６ＡよりもＨＨＶ−６Ｂに対する反応性が高い（好ましくは、ＨＨＶ−６Ｂのみに反応する）ことをいう。また、本明細書において、「ＨＨＶ−６Ｂに特異的なエピトープ」とは、ＨＨＶ−６ＡよりもＨＨＶ−６Ｂに対する反応性が高い（好ましくは、ＨＨＶ−６Ｂのみに反応する）エピトープをいう。
【００３４】
本明細書において「抗体」とは、免疫反応において、抗原の刺激によって生体内でつくられ、抗原と特異的に結合したり反応したりするタンパク質またはそれらと同じ配列を有するものを化学合成等で生産したものを総称していう。実体は免疫グロブリンであり、Ａｂとも称する。
【００３５】
本明細書において抗体の「抗原結合性断片」とは、ある抗体について、その抗体の抗原と同じ抗原に対して結合性を有する断片をいう。そのような「抗原結合性断片」の範囲に入るかどうかは、本明細書に記載される親和性のアッセイによって評価することができる。本明細書中においては、そのような親和性は、抗体に対する標識抗原の結合量を５０％阻害する濃度（ＩＣ５０値）を指標として示すことができ、ＩＣ５０値は、例えばｌｏｇｉｓｔｉｃ曲線による回帰モデル（Ｒｏｄｂａｒｄら、Ｓｙｎｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  ＲＩＡ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｐ１６５，Ｉｎｔ．Ａｔｏｍｉｃ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ａｇｅｎｃｙ，１９７４）で算出することができる。
【００３６】
本明細書において「抗ＨＨＶ−６Ｂ抗体」とは、ＨＨＶ−６Ｂに対して惹起されたか、あるいは、それと同等の結合能を有する抗体をいう。抗ＨＨＶ−６Ｂ抗体という場合は、エピトープ（例えば、本発明の中和エピトープ）に対する結合能力を保持するために、「重鎖可変ドメイン（ＶＨ）」および「軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン」が特定の結合能力を保持しているものが包含されることが理解される。
【００３７】
本明細書において「中和抗体」とは、中和活性を有する任意の抗体をいう。
【００３８】
本明細書において免疫グロブリンの「重鎖可変ドメイン（ＶＨ）」および「軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン」とは、当該分野において通常用いられる意味で用いられる。免疫グロブリンは、基本構造は同じで２本のＬ鎖（軽鎖、ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ）と２本のＨ鎖（重鎖、ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ）がＳ−Ｓ結合でつながり、Ｈ鎖はＣ末端側のＦｃ（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）とＮ末端側のＦａｂ（ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）の２断片がヒンジ部（ちょうつがい部）で折れ曲ってつながり、全体としてＹ字形をとる。Ｌ鎖およびＨ鎖ともにＮ末端から約１１０個のアミノ酸(Ｌ鎖の約半分の長さ)の配列は、抗原特異性に応じて部分的に異なった配列の仕方をしている。この部分を可変部(可変領域、Ｖ部）とよび、抗原特異性の決定にはＬ鎖とＨ鎖の両方の可変部（ＶＬ、ＶＨ）が関係している．可変部以外の部分は各クラスあるいはサブクラスごとにほぼ一定であり、定常部（定常領域ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｒｅｇｉｏｎ、Ｃ部）とよぶ。定常部は約１１０個のアミノ酸からなるポリペプチド単位（相同単位）がＬ鎖では一つ（ＣＬ）、Ｈ鎖では、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤで３個（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ＩｇＭ、ＩｇＥで４個つながっていて、各単位あるいは向かいあった部位と結合して生じた部域をドメイン（ｄｏｍａｉｎ）という。本発明の抗体は、ドメイン等の部分を用いて表現することができる。
【００３９】
本明細書では、格別に他の意味であると指示しない限り、抗体などの任意のポリペプチド鎖は、Ｎ終末端（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ）で開始しＣ終末端（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ）で終結するアミノ酸配列を有するものとして記載する。抗原結合部位がＶＨおよびＶＬドメイン両方を含むとき、これらは同一ポリペプチド分子に位置し得るか、好ましくは、各ドメインは別の鎖に位置し得、この場合、ＶＨドメインは免疫グロブリンすなわち抗体の重鎖またはその断片の一部であり、またＶＬは免疫グロブリンすなわち抗体の軽鎖またはその断片の一部である。本発明の抗体は、このような断片等の部分を用いて表現することができる。
【００４０】
本明細書において使用される「抗体または抗原結合性断片」の例には、Ｂ細胞またはハイブリドーマにより産生されるような抗体およびキメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体もしくはヒトの抗体またはその任意の断片、例えばＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片、単鎖抗体および単一ドメイン抗体が含まれる。したがって、ＨＨＶ−６Ｂ抗体または抗原結合性断片とは、ＨＨＶ−６Ｂ結合分子ということもでき、これらは、例えば、これらのＢ細胞またはハイブリドーマにより産生されるような抗体およびキメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体もしくはヒトの抗体またはその任意の断片、例えばＦ（ａｂ’）２およびＦａｂ断片、単鎖抗体および単一ドメイン抗体に他の分子が結合したものなどが含まれることが理解される。
【００４１】
単鎖抗体は、１０から３０アミノ酸、好ましくは１５から２５アミノ酸からなるペプチドリンカーにより共有結合する抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインからなる。そのため、その構造は重鎖および軽鎖の定常部分を含まず、小さなペプチドスペーサーは全定常部分よりも抗原性が低いと考えられている。「キメラ抗体」とは、重鎖もしくは軽鎖またはその両方の定常領域がヒト等の特定の動物由来である一方、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインはそのヒト等の特定の動物以外の由来（例えば、非ヒト由来(例えば、マウス)あるいは別のヒト）であるか、またはヒト由来であるが、別のヒト抗体から誘導される抗体を意味する。「ＣＤＲ移植抗体」とは、超可変部位領域(ＣＤＲ)が、非ヒト(例えば、マウス)抗体または別のヒト抗体のようなドナー抗体から誘導される一方、免疫グロブリンの他の部分すべてまたは実質的にすべて、例えば定常領域および可変ドメインの高保存部分、すなわち、フレームワーク領域が、アクセプター抗体、例えば、ヒト由来の抗体から誘導される抗体を意味する。しかし、ＣＤＲ移植抗体は、フレームワーク領域中、例えば超可変領域に隣接するフレームワーク領域の一部にドナー配列の数アミノ酸を含む。「ヒト化抗体」とは、重鎖および軽鎖両方の定常および可変領域がすべてヒト由来であるか実質的にヒト由来配列と同一であり、必ずしも同一抗体由来である必要はなく、そしてマウス免疫グロブリン可変部分および定常部分の遺伝子がヒト対応物(counterpart)、例えば欧州特許０５４６０７３Ｂ１号、米国特許５５４５８０６号等において一般の用語で記載されるようなものにより置換えられるマウス産生抗体が含まれる抗体を意味する。
【００４２】
本明細書において「抗体価（ｔｉｔｅｒ）」とは、血清反応において、抗血清の単位容量中に含まれている、抗原に対して結合する抗体量をいう。実際の測定は抗血清の希釈系列に対して一定量の抗原を加えて行い、測定値は反応の生じる終末点における希釈倍数であらわす。
【００４３】
本明細書において「親和性（ａｆｆｉｎｉｔｙ）」とは抗体とその認識物質間の結合力をいう。本明細書中においては、抗体と抗原などその認識物質の解離定数を指標として親和性（ＫＤ）を示した。親和性（ＫＤ）の測定方法は、この分野の当業者にとって技術常識であり、たとえば、センサーチップを用いても求めることができる。
【００４４】
フレームワークは、任意の種類のフレームワーク領域に関連し得るが、好ましくはヒト由来のものである。適当なフレームワーク領域は、Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ．らの文献を参照すれば選択できる。好ましい重鎖フレームワークは、ヒト重鎖フレームワークである。それは、対象となる抗体の配列の情報から、上記文献を参照して決定することができ、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４領域の配列からなる。同様の方法で、抗ＨＨＶ−６Ｂ軽鎖フレームワークについては、対象となる抗体の配列の情報から、上記文献を参照して決定することができ、ＦＲ１’、ＦＲ２’、ＦＲ３’およびＦＲ４’領域の配列からなる。本発明の抗体は、フレームワーク等の部分を用いて表現することができる。
【００４５】
本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。抗体は通常、タンパク質の一種である。
【００４６】
本明細書において使用される用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいう。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示された配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、１またはそれ以上の選択された（または、すべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【００４７】
本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいう。通常染色体上に一定の順序に配列している。タンパク質の一次構造を規定する遺伝子を構造遺伝子といい、その発現を左右する領域を調節エレメントという。本明細書では、「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」ならびに／あるいは「タンパク質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」をさすことがある。本明細書において遺伝子の「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」とは、遺伝子の塩基配列を３塩基ずつに区切った時の３通りの枠組の１つであって、開始コドンを有し、そして途中に終止コドンが出現せずある程度の長さを持ち、実際にタンパク質をコードする可能性のある読み枠をいう。ヘルペスウイルスゲノムは、その全塩基配列が決定されており、少なくとも１０１個の遺伝子が同定されており、その遺伝子の各々がオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有することが公知である。
【００４８】
本明細書において使用されるｇＱとは糖タンパク質であって、ＨＨＶ−６Ｂでは、ｇＱ遺伝子は、３７ｋＤａ糖タンパク質をコードするものであり、オルタナティブスプライシング転写物に由来するものである。
【００４９】
本明細書において使用される「ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１」またはＨＨＶ−６Ｂについて言及する場合単に「ｇＱ１」（遺伝子）とは、ｇｐ１０５−８２とも呼ばれた分子であり、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＮＣ＿０００８９８（ゲノム配列）においても見出されるものである。ｇＱ１は、具体的には、配列番号２に示す配列またはその改変体を有し、例えば、そのタンパク質は、
（ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号２をコードする塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号２に示すアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドであり得る。
【００５０】
本明細書において使用される「ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２」またはＨＨＶ−６Ｂについて言及する場合単に「ｇＱ２」（遺伝子）は、ＨＨＶ−６に感染した細胞およびビリオンにおいて、ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１複合体と相互作用するものであり、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＮＣ＿０００８９８（ゲノム配列）においても見出されるものである。具体的には、配列番号４に示す配列またはその改変体を有し、例えば、そのタンパク質は、
（ａ）配列番号４に示すアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号４に示すアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号４をコードする塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号４に示すアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドであり得る。
【００５１】
本明細書において使用される「ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＨ」またはＨＨＶ−６Ｂについて言及する場合単に「ｇＨ」（遺伝子）は、ＨＨＶ−６に感染した細胞およびビリオンにおいて、ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２複合体を形成する１つの分子であり、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＮＣ＿０００８９８（ゲノム配列）においても見出されるものである。具体的には、配列番号６に示す配列またはその改変体を有し、例えば、そのタンパク質は、
（ａ）配列番号６に示すアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号６に示すアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号６をコードする塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号６に示すアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドであり得る。
【００５２】
本明細書において使用される「ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＬ」またはＨＨＶ−６Ｂについて言及する場合単に「ｇＬ」（遺伝子）は、ＨＨＶ−６に感染した細胞およびビリオンにおいて、ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２複合体を形成する１つの分子であり、ＧｅｎＢａｎｋにおいてＮＣ＿０００８９８（ゲノム配列）においても見出されるものである。具体的には、配列番号８に示す配列またはその改変体を有し、例えば、そのタンパク質は、
（ａ）配列番号８に示すアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号８に示すアミノ酸配列において、１以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号８をコードする塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号８に示すアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；または
（ｆ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチドであり得る。
【００５３】
本明細書において「対応する」アミノ酸および核酸とは、それぞれあるポリペプチドおよび核酸分子において、比較の基準となるポリペプチドおよび核酸分子における所定のアミノ酸および核酸と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸および核酸をいい、例えば、ｇＱ１、ｇＱ２、ｇＬ、ｇＨ等については、ＨＨＶ−６Ｂ等について、他の変異株等において、対応する遺伝子においてアラインメントをしたときに整列して対応する配列（アミノ酸、および核酸等）をいう。例えば、ある基準の位置と同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸およびそれをコードする核酸である。例えば、核酸配列であれば、その核酸配列またはそれがコードする特定の部分と同様の機能を発揮する部分であり得る。
【００５４】
本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリペプチド、核酸分子など）とは、ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、または有することが予測される遺伝子をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在する場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子の対応する遺伝子は、その遺伝子のオルソログであり得る。したがって、ヘルペスウイルス６Ｂ型の配列、癌抗原などの遺伝子に対応する遺伝子は、他の生物（ヘルペスウイルス６Ｂの他の変異株、ヘルペスウイルス７型など）においても見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を用いて同定することができる。したがって、例えば、ある動物における対応する遺伝子は、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、ヘルペスウイルス−６Ａの例えば、ｇＱ１、ｇＱ２、ｇＬ、ｇＨ配列等）の配列をクエリ配列として用いてその生物またはウイルス（例えばヘルペスウイルス６Ｂ）の配列データベースを検索することによって、またはウェットの実験でライブラリーをスクリーニングすることによって見出すことができる。
【００５５】
本明細書において「単離された」物質（例えば、核酸またはタンパク質などのような生物学的因子）とは、その物質が天然に存在する環境（例えば、生物体の細胞内）の他の物質（好ましくは、生物学的因子）（例えば、核酸である場合、核酸以外の因子および目的とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子および目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離または精製されたものをいう。「単離された」核酸およびタンパク質には、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。したがって、単離された核酸およびタンパク質は、化学的に合成した核酸およびタンパク質を包含する。
【００５６】
本明細書において「精製された」物質（例えば、核酸またはタンパク質などのような生物学的因子）とは、その物質に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものをいう。したがって、通常、精製された物質におけるその物質の純度は、その物質が通常存在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。
【００５７】
本明細書において「精製された」および「単離された」とは、好ましくは少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％、よりさらに好ましくは少なくとも９５重量％、そして最も好ましくは少なくとも９８重量％の、同型の物質が存在することを意味する。
【００５８】
本明細書において遺伝子の「相同性」とは、２以上の配列（例えば、アミノ酸配列、核酸配列等）の、互いに対する同一性の程度をいう。従って、ある２つの配列（例えば、野生型および改変体との間）の相同性が高いほど、それらの配列の同一性または類似性は高い。２種類の配列が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、または核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べられ得る。２つの配列を直接比較する場合、その配列間で配列が代表的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、それらの配列は相同性を有する。
【００５９】
本明細書において「ストリンジェントなハイブリダイズ条件」とは、当該分野で慣用される周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドをプローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法等を用いることにより、そのようなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、ストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドは、コロニーあるいはプラーク由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７〜１．０ＭのＮａＣｌ存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（ｓａｌｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１５ｍＭ  クエン酸ナトリウムである）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できるポリヌクレオチドを意味する。ハイブリダイゼーションは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １−３８、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  １：Ｃｏｒｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５）等の実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、Ａ配列のみまたはＴ配列のみを含む配列が除外される。「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」とは、上記ハイブリダイズ条件下で別のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドをいう。ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドとして具体的には、本発明で具体的に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列と少なくとも６０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、好ましくは８０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、さらに好ましくは９５％以上の相同性を有するポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００６０】
本明細書では塩基配列の同一性の比較および相同性の算出は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ  ２．２．９  （２００４．５．１２  発行）を用いて行うことができる。本明細書における同一性の値は通常は上記ＢＬＡＳＴを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。ただし、パラメーターの変更により、より高い値が出る場合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうちの最も高い値を同一性の値とする。
【００６１】
本明細書において、「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列を見出すことをいう。電子的な検索としては、ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ８５：２４４４−２４４８（１９８８））、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ法（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７（１９８１））、およびＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ法（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０））などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジェントハイブリダイゼーション、ゲノムＤＮＡをナイロンメンブレン等に貼り付けたマクロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、ＰＣＲおよび  ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定されない。本明細書において、本発明において使用されるｇＱ１、ｇＱ２、ｇＬ、ｇＨなどとしては、このような電子的検索、生物学的検索によって同定された対応する配列も含まれるべきであることが意図される。
【００６２】
アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に受け入れられた１文字コードにより言及され得る。
【００６３】
本明細書において、「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチド（長さがｎ）に対して、１〜ｎ−１までの配列長を有するポリペプチドまたはポリヌクレオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５，２０、２５、３０、４０、５０およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここで具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、５、６、７、８、９、１０、１５，２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００、６００、７００、８００、９００、１０００およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ、ここで具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として適切であり得る。
【００６４】
本発明において使用されるポリペプチドは、天然型のポリペプチドと実質的に同一の作用（例えば、中和活性）を有する限り、アミノ酸配列中の１以上（例えば、１または数個）のアミノ酸が置換、付加および／または欠失していてもよく、糖鎖が置換、付加および／または欠失していてもよい。
【００６５】
あるアミノ酸を、同様の疎水性指数を有する他のアミノ酸により置換して、そして依然として同様の生物学的機能を有するタンパク質（例えば、酵素活性において等価なタンパク質）を生じさせ得ることが当該分野で周知である。このようなアミノ酸置換において、疎水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。疎水性に基づくこのようなアミノ酸の置換は効率的であることが当該分野において理解される。親水性指標もまた、改変体作製において考慮される。米国特許第４、５５４、１０１号に記載されるように、以下の親水性指数がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；およびトリプトファン（−３．４）。アミノ酸が同様の親水性指数を有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。
【００６６】
本発明において、「保存的置換」とは、アミノ酸置換において、元のアミノ酸と置換されるアミノ酸との親水性指数または／および疎水性指数が上記のように類似している置換をいう。本明細書において「類似している置換」とは、親水性指数が±２以内であることをいう。保存的置換の例は、当業者に周知であり、例えば、次の各グループ内での置換：アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン、などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
本明細書において、「改変体」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドなどの物質に対して、一部が変更されているものをいう。そのような改変体としては、置換改変体、付加改変体、欠失改変体、短縮（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）改変体、対立遺伝子変異体などが挙げられる。対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅ）とは、同一遺伝子座に属し、互いに区別される遺伝的改変体のことをいう。従って、「対立遺伝子変異体」とは、ある遺伝子に対して、対立遺伝子の関係にある改変体をいう。「種相同体またはホモログ（ｈｏｍｏｌｏｇ）」とは、ある種の中で、ある遺伝子とアミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、相同性（好ましくは、６０％以上の相同性、より好ましくは、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上の相同性）を有するものをいう。そのような種相同体を取得する方法は、本明細書の記載から明らかである。「オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは、オルソロガス遺伝子（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅ）ともいい、二つの遺伝子がある共通祖先からの種分化に由来する遺伝子をいう。例えば、多重遺伝子構造をもつヘモグロビン遺伝子ファミリーを例にとると、ヒトとマウスのαヘモグロビン遺伝子はオルソログであるが，ヒトのαヘモグロビン遺伝子とβヘモグロビン遺伝子はパラログ（遺伝子重複で生じた遺伝子）である。オルソログは、分子系統樹の推定に有用であることから、本発明のオルソログもまた、本発明において有用であり得る。
【００６８】
本明細書において「機能的改変体」とは、基準となる配列が担う生物学的活性（特に、中和活性）を保持する改変体をいう。
【００６９】
本明細書において「保存的（に改変された）改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいい、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合には、本質的に同一な配列をいう。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンにより特定される全ての位置で、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変更することなく、記載された対応するコドンの任意のものに変更され得る。このような核酸の変動は、保存的に改変された変異の１つの種である「サイレント改変（変異）」である。核酸においては、保存的置換は、例えば、中和活性を測定しながら確認することができる。
【００７０】
本明細書中において、機能的に等価なポリペプチドをコードする遺伝子を作製するために、アミノ酸の置換のほかに、アミノ酸の付加、欠失、または修飾もまた行うことができる。アミノ酸の置換とは、もとのペプチドを１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸で置換することをいう。アミノ酸の付加とは、もとのペプチド鎖に１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチドから１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシル化、硫酸化、ハロゲン化、アルキル化、グリコシル化、リン酸化、水酸化、アシル化（例えば、アセチル化）などを含むが、これらに限定されない。置換、または付加されるアミノ酸は、天然のアミノ酸であってもよく、非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然のアミノ酸が好ましい。
【００７１】
本発明の抗原等のポリペプチドをコードする核酸は、周知のＰＣＲ法により得ることができ、化学的に合成することができる。これらの方法に、例えば、部位特異的変位誘発法、ハイブリダイゼーション法などを組み合わせてもよい。
【００７２】
本明細書において、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「置換、付加または欠失」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して、それぞれアミノ酸もしくはその代替物、またはヌクレオチドもしくはその代替物が、置き換わること、付け加わることまたは取り除かれることをいう。このような置換、付加または欠失の技術は、当該分野において周知であり、そのような技術の例としては、部位特異的変異誘発技術などが挙げられる。置換、付加または欠失は、１つ以上であれば任意の数でよく、そのような数は、その置換、付加または欠失を有する改変体において目的とする機能が保持される限り、多くすることができる。例えば、そのような数は、１または数個であり得、そして好ましくは、全体の長さの２０％以内、１０％以内、または１００個以下、５０個以下、２５個以下などであり得る。
【００７３】
本明細書において使用される場合、「スクリーニング」とは、目的とするある特定の性質をもつ物質などの因子を、特定の操作および／または評価方法で多数の候補から選抜することをいう。本発明では、所望の活性を有するスクリーニングによって得られた物質などの因子もまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。
【００７４】
本明細書においてワクチン、薬剤等の「有効量」とは、その薬剤等が目的とする薬効を発揮することができる量をいう。本明細書において、そのような有効量のうち、最小の濃度を最小有効量ということがある。そのような最小有効量は、当該分野において周知であり、通常、薬剤等の最小有効量は当業者によって決定されているか、または当業者は適宜決定することができる。そのような有効量の決定には、実際の投与のほか、動物モデルなどを用いることも可能である。本発明はまた、このような有効量を決定する際に有用である。本発明では、ワクチン等の有効量も適宜決定することができる。
【００７５】
本明細書において「薬学的に受容可能なキャリア」は、医薬を製造するときに使用される物質であり、有効成分に有害な影響を与えないものをいう。そのような薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および／または農学的もしくは薬学的アジュバントが挙げられるがそれらに限定されない。
【００７６】
本発明の処置方法において使用される薬剤等の種類および量は、本発明の方法によって得られた情報（例えば、疾患に関する情報）を元に、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、投与される被検体の部位の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明のモニタリング方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。疾患状態をモニタリングする頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）のモニタリングが挙げられる。１週間−１ヶ月に１回のモニタリングを、経過を見ながら施すことが好ましい。
【００７７】
本明細書において「指示書」は、本発明の医薬などを投与する方法または診断する方法、本発明の治療方法などを医師、患者など投与を行う人、診断する人（患者本人であり得る）、スクリーニング実施者等実施者に対して記載したものである。この指示書は、本発明の診断薬、予防薬、医薬などの使用方法、例えば、ワクチンの投与の回数、間隔等を指示する文言が記載されている。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず例えば、瓶に貼り付けられたフィルム、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ（ウェブサイト）、電子メール）のような形態でも提供され得る。
【００７８】
必要に応じて、本発明の治療では、２種類以上の薬剤等が使用され得る。２種類以上の薬剤等を使用する場合、類似の性質または由来の物質を使用してもよく、異なる性質または由来の薬剤等を使用してもよい。このような２種類以上の薬剤等を投与する方法のための疾患レベルに関する情報も、本発明の方法によって入手することができる。
【００７９】
本発明で使用される培養方法は、例えば、動物培養細胞マニュアル、瀬野ら編著、共立出版、１９９３年などに記載され支持されており、本明細書においてこのすべての記載を援用する。
【００８０】
（ポリペプチドの製造方法）
本発明の抗原、ワクチン等は、ポリペプチドでありうる。そのようなポリペプチドは、本発明のポリペプチド（抗原等）をコードするＤＮＡを組み込んだ組換え体ベクターを保有する微生物、動物細胞などに由来する形質転換体を、通常の培養方法に従って培養し、本発明のポリペプチドを生成蓄積させ、本発明の培養物より本発明のポリペプチドを採取することにより製造することができる。
【００８１】
本発明の形質転換体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用いられる通常の方法に従って行うことができる。大腸菌等の原核生物あるいは酵母等の真核生物を宿主として得られた形質転換体を培養する培地としては、本発明の生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、形質転換体の培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。
【００８２】
炭素源としては、それぞれの微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フラクトース、スクロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール類を用いることができる。
【００８３】
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の各種無機酸または有機酸のアンモニウム塩、その他含窒素物質、ならびに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物等を用いることができる。
【００８４】
無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条件下で行う。
【００８５】
培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間は、通常５時間〜７日間である。培養中ｐＨは、３．０〜９．０に保持する。ｐＨの調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。また培養中必要に応じて、アンピシリンまたはテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【００８６】
誘導性のプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときには、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよい。例えば、ｌａｃプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド等を、ｔｒｐプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加してもよい。遺伝子を導入した植物の細胞または器官は、ジャーファーメンターを用いて大量培養することができる。培養する培地としては、一般に使用されているムラシゲ・アンド・スクーグ（ＭＳ）培地、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）培地、またはこれら培地にオーキシン、サイトカイニン等、植物ホルモンを添加した培地等を用いることができる。
【００８７】
例えば、動物細胞を用いる場合、本発明の細胞を培養する培地は、一般に使用されているＲＰＭＩ１６４０培地［Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９，５１９（１９６７）］、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地［Ｓｃｉｅｎｃｅ，１２２，５０１（１９５２）］、ＤＭＥＭ培地［Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，８，３９６（１９５９）］、１９９培地［Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７３，１（１９５０）］またはこれら培地にウシ胎児血清等を添加した培地等が用いられる。
【００８８】
培養は、通常ｐＨ６〜８、２５〜４０℃、５％ＣＯ２存在下等の条件下で１〜７日間行う。また培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン、ストレプトマイシン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【００８９】
本発明のポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換された形質転換体の培養物から、本発明のポリペプチドを単離または精製するためには、当該分野で周知慣用の通常の酵素の単離または精製法を用いることができる。例えば、本発明のポリペプチドが本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞外に本発明のポリペプチドが分泌される場合には、その培養物を遠心分離等の手法により処理し、可溶性画分を取得する。その可溶性画分から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒による沈澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰＡ−７５（三菱化学）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用い、精製標品を得ることができる。
本発明のポリペプチドが本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞内に溶解状態で蓄積する場合には、培養物を遠心分離することにより、培養物中の細胞を集め、その細胞を洗浄した後に、超音波破砕機、フレンチプレス、マントンガウリンホモジナイザー、ダイノミル等により細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。その無細胞抽出液を遠心分離することにより得られた上清から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒による沈澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰＡ−７５（三菱化学）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用いることによって、精製標品を得ることができる。
【００９０】
また、本発明のポリペプチドが細胞内に不溶体を形成して発現した場合は、同様に細胞を回収後破砕し、遠心分離を行うことにより得られた沈澱画分より、通常の方法により本発明のポリペプチドを回収後、そのポリペプチドの不溶体をポリペプチド変性剤で可溶化する。この可溶化液を、ポリペプチド変性剤を含まないあるいはポリペプチド変性剤の濃度がポリペプチドが変性しない程度に希薄な溶液に希釈、あるいは透析し、本発明のポリペプチドを正常な立体構造に構成させた後、上記と同様の単離精製法により精製標品を得ることができる。
【００９１】
また、通常のタンパク質の精製方法［Ｊ．Ｅｖａｎ．Ｓａｄｌｅｒら：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，８３，４５８］に準じて精製できる。また、本発明のポリペプチドを他のタンパク質との融合タンパク質として生産し、融合したタンパク質に親和性をもつ物質を用いたアフィニティークロマトグラフィーを利用して精製することもできる［山川彰夫，実験医学（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），１３，４６９〜４７４（１９９５）］。例えば、Ｌｏｗｅらの方法［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７〜８２３１（１９８９）、ＧｅｎｅｓＤｅｖｅｌｏｐ．，４，１２８８（１９９０）］に記載の方法に準じて、本発明のポリペプチドをプロテインＡとの融合タンパク質として生産し、イムノグロブリンＧを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる。
【００９２】
また、本発明のポリペプチドをＦＬＡＧペプチドとの融合タンパク質として生産し、抗ＦＬＡＧ抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７（１９８９）、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐ．，４，１２８８（１９９０）］。
【００９３】
さらに、本発明のポリペプチド自身に対する抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーで精製することもできる。本発明のポリペプチドは、公知の方法［Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＮＭＲ，６，１２９〜１３４、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，１１６２〜１１６４、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１０，１６６〜１６８（１９９１）］に準じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写・翻訳系を用いてを生産することができる。
【００９４】
上記で取得されたポリペプチドのアミノ酸情報を基に、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法によっても本発明のポリペプチドを製造することができる。また、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｓｙｎｔｈｅｃｅｌｌ−Ｖｅｇａ、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ、島津製作所等のペプチド合成機を利用し化学合成することもできる。
【００９５】
精製した本発明のポリペプチドの構造解析は、タンパク質化学で通常用いられる方法、例えば遺伝子クローニングのためのタンパク質構造解析（平野久著、東京化学同人発行、１９９３年）に記載の方法により実施可能である。
【００９６】
本発明ポリペプチドのアミノ酸の欠失、置換もしくは付加は、出願前周知技術である部位特異的変異誘発法により実施することができる。かかる１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １〜３８，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７〜１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，６４８７（１９８２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７９，６４０９（１９８２）、Ｇｅｎｅ，３４，３１５（１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３，４４３１（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２，４８８（１９８５）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８１，５６６２（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２４，１４３１（１９８４）、ＰＣＴ  ＷＯ８５／００８１７（１９８５）、Ｎａｔｕｒｅ，３１６，６０１（１９８５）等に記載の方法に準じて調製することができる。
【００９７】
（免疫治療）
本明細書において「ワクチン」とは、身体中に投与されて、活性な免疫を生成する、通常感染性因子または感染因子のある部分またはそのような因子または部分を生成することができる因子（例えば、遺伝子配列など）を含む組成物（例えば、懸濁液または溶液）をいう。ワクチンを構成する抗原性部分は、微生物（例えば、ウイルスまたは細菌など）または微生物から精製された天然の産生物、合成生成物または遺伝子操作したタンパク質、ペプチド、多糖または同様な産生物、あるいはそのようなタンパク質をコードする核酸配列を含む核酸分子であり得る。ワクチンは、中和抗体を生起することによって、その効果を発現する。ワクチンは、遺伝子ワクチンであってもよく、遺伝子ワクチンとは、ワクチンのうち、投与される被検体において発現され、その発現物がワクチンの作用を有するような因子（代表的には、核酸分子）を含む組成物（例えば、懸濁液または溶液など）をいう。代表的な遺伝子ワクチンは、抗原性を有する遺伝子産物をコードする核酸配列を含む核酸分子（例えば、ベクター、プラスミド、Ｎａｋｅｄ  ＤＮＡなど）であり得る。
【００９８】
本明細書においてワクチンの免疫学的な効果は、当該分野において公知の任意の方法を用いて確認することができる。そのような方法としては、例えば、ＣＴＬ前駆細胞頻度分析、ＥＬＩＳＰＯＴ法、テトラマー法、リアルタイムＰＣＲ法などが挙げられるがそれらに限定されない。例示的な説明として、ＣＴＬ前駆細胞頻度分析では、末梢血リンパ球または抗原ペプチドおよびＩＬ−２存在下で培養したリンパ球を限界希釈し、ＩＬ−２とフィーダー細胞との共存下で培養し、増殖したウェルをワクチンまたはその候補で刺激し、ＩＦＮ−γ産生の有無をＥＬＩＳＡなどで測定する。ここで陽性ウェルをポアソン分析に従ってＣＴＬ前駆細胞の頻度を算出し、ワクチンの効力を評価することができる。ここで、陽性の細胞数が抗原特異的ＣＴＬ数であり、その数が多いほどワクチンとして効力が高いといえる。
【００９９】
本明細書において「アジュバント」とは、投与された免疫原と混合するとき、免疫応答を増加するか、あるいはそうでなければ変更する物質である。アジュバントは、例えば、鉱物、細菌、植物、合成または宿主の産生物に場合に応じて分類される。
【０１００】
本明細書において「病原体」とは、宿主に対して疾患または障害を発生し得る生物または因子をいう。
【０１０１】
本明細書において「予防」（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓまたはｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）とは、ある疾患または障害について、そのような状態が引き起こされる前に、そのような状態が起こらないように処置することをいう。
【０１０２】
本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害について、そのような状態になった場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好ましくは、軽減、さらに好ましくは消長させることをいう。
【０１０３】
このような治療活性または予防活性は、本発明のワクチンについて判定されるとき、好ましくは、ヒトでの使用の前にインビトロで、そして次いでインビボで試験される。例えば、本発明のワクチンの、治療有用性または予防有用性を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプルに対するワクチンの特異的結合の効果が挙げられる。そのような試験は、当業者に公知である技術（例えば、ＥＬＩＳＡなどの免疫学的アッセイ）を利用して決定され得る。インビボ試験としては、例えば、中和抗体を惹起する能力があるかどうかを試験する方法が挙げられるがそれらに限定されない。
【０１０４】
本明細書において「被験体」（ｓｕｂｊｅｃｔ）とは、本発明の処置が適用される生物をいい、「患者」（ｐａｔｉｅｎｔ）ともいわれる。患者または被験体は好ましくは、ヒトであり得る。
【０１０５】
本発明は、被験体への有効量の本発明のワクチンの投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい局面において、本発明のワクチンは実質的に精製されたものであり得る（例えば、その効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質が実質的に存在しない状態が挙げられる）。
【０１０６】
本明細書中、「投与する」とは、本発明のワクチンなどまたはそれを含む医薬組成物を、単独で、または他の治療剤と組み合わせて処置が意図される宿主に与えることを意味する。組み合わせは、例えば、混合物として同時に、別々であるが同時にもしくは並行して；または逐次的にかのいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤等が、治療混合物としてともに投与される提示を含み、そして組み合わせた薬剤等が、別々であるが同時に（例えば、同じ個体へ別々の粘膜を通じての場合）投与される手順もまた含む。「組み合わせ」投与は、第１に与えられ、続いて第２に与えられる化合物または薬剤等のうちの１つを別々に投与することをさらに含む。
【０１０７】
本発明におけるワクチンの投与は、どのような手法を用いて行ってもよいが、好ましくは、針無し注射を用いることが有利である。患者に過度の負担を与えることなく投与を行えるからである。
【０１０８】
ここで本発明における針無注射器とは、注射針を用いずに、ガス圧または弾性部材の弾力によりピストンを移動させて薬液を皮膚に噴射し、薬剤等の成分を皮下、より好ましくは皮下の細胞内に投与する医療機器を意味する。具体的には例えば、シマジェットＴＭ  （島津製作所製）、メディ・ジェクター  ビジョン（Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔｏｒ  Ｖｉｓｉｏｎ）ＴＭ  （Ｅｌｉｔｅｍｅｄｉｃａｌ社製）、ペンジェット（ＰｅｎＪｅｔ）ＴＭ  （ＰｅｎＪｅｔ社製）などが市販されている。
【０１０９】
本発明の方法による予防処置の終了の判断は、市販のアッセイもしくは機器使用によって惹起される抗体を確認することによって行うことができる。
【０１１０】
本発明はまた、本発明の医薬を含む容器を備える薬学的パッケージまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような容器に任意に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関する政府機関による承認を表す。
【０１１１】
（本明細書において用いられる一般的技術）
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分野の技術範囲内にある、糖鎖科学、マイクロフルイディクス、微細加工、有機化学、生化学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。
【０１１２】
微細加工については、例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｓ．Ａ．（１９９６）．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｚａｕｔ，Ｐ．Ｖ．（１９９６）．Ｍｉｃｒｏｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｍａｄｏｕ，Ｍ．Ｊ．（１９９７）．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ，ＣＲＣ１  ５  Ｐｒｅｓｓ；Ｒａｉ−Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ，Ｐ．（１９９７）．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙ，Ｍｉｃｒｏｍａｃｈｉｎｉｎｇ，＆  Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ：Ｍｉｃｒｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙなどに記載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
【０１１３】
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法、糖鎖科学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒおよびその３ｒｄ  Ｅｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ，１０１５８（２０００）；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．（１９９０）．ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｉｎｎｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）．ＰＣＲ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．ＰＣＲ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃ  ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｍｅｔｈｏｄ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２３０、２４２、２４７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９４；別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用される。
【０１１４】
（好ましい実施形態の説明）
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。
【０１１５】
（エピトープ）
１つの局面において、本発明は、配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）またはその改変配列のうち、少なくともＥを含む少なくとも５連続アミノ酸の配列を含むかまたはＥがＱに変化したとき４８７位のＣおよび４８９位のＧが保存された配列を含む、ＨＨＶ−６Ｂに特異的なエピトープを提供する。好ましくは、本発明のエピトープは配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）からなる。
【０１１６】
１つの実施形態では、本発明のエピトープは、配列番号２の４８４位〜４９６位に示すアミノ酸配列（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰ）またはその改変配列のうち少なくとも６連続アミノ酸、好ましくは７連続アミノ酸、８連続アミノ酸、９連続アミノ酸、１０連続アミノ酸、１１連続アミノ酸、１２連続アミノ酸、あるいは１３連続アミノ酸（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰの全長の長さ）を含む。好ましくは、ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰのうち少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも６連続アミノ酸、好ましくは７連続アミノ酸、８連続アミノ酸、９連続アミノ酸、１０連続アミノ酸、１１連続アミノ酸、１２連続アミノ酸、あるいは１３連続アミノ酸（ＱＡＬＣＥＧＧＨＶＦＹＮＰの全長の長さ）を含む。このようなエピトープは、本発明のこの情報を用いて当該分野において周知の方法を用いてより特定することができる。
【０１１７】
本発明のエピトープは上記に限定されない。すなわち、以下のように、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎのような公知の技術を用いて、本明細書に記載される情報に基づいて、本発明の中和エピトープは当業者が適宜さらに具体的配列を作成することができることが理解される。
【０１１８】
別の実施形態では、中和活性におけるｇＱ１とｇＱ２との複合体形成の重要性も本発明における一つの重要な特徴の一つである。したがって、中和活性におけるｇＱ１とｇＱ２との複合体形成に基づいて、本発明の中和エピトープは当業者が適宜さらに具体的配列を作成することができることが理解される。
【０１１９】
（抗原）
１つの局面において、本発明は、本発明のエピトープを含む抗原を提供する。本発明の抗原において含まれるべきエピトープは、本明細書中（エピトープ）に記載される任意の実施形態を取りうることが理解される。
【０１２０】
１つの実施形態では、本発明の抗原は、配列番号２のアミノ酸１位〜４８４位および本発明のエピトープを含む。１つの具体的実施例では、本発明の抗原は、配列番号２のアミノ酸１位〜４９６位を含む。１つの具体的実施例では、本発明の抗原は、ＢｇＱ１（配列番号２）の全長を含む。
【０１２１】
（抗体）
１つの局面では、本発明は、本発明のエピトープに対する抗体を提供する。
【０１２２】
したがって、好ましい抗体、その抗原結合性断片またはＨＨＶ−６Ｂ結合分子は、重鎖および軽鎖の可変ドメインはヒト由来であり、例えば、本明細書において具体的に記載される抗体の改変体（たとえば、１または数個のアミノ酸の置換・挿入、付加もしくは欠失を含むものが挙げられるがこれに限定されない。）において示される配列を有しうる。定常領域ドメインはまた、好ましくは、適当なヒト定常領域ドメイン、例えば、Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈに記載されているものが含まれる。可変領域のアミノ酸配列をＫａｂａｔらにより作成された抗体のアミノ酸配列のデータベース（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３）にあてはめて、相同性を調べることによりＣＤＲ領域を見いだすことが出来る。ＣＤＲ領域の配列は、本発明の所望する生物学的活性（たとえば、結合活性または中和活性）が保持される範囲内であれば、少なくとも１つの付加・挿入、置換または欠失による改変体も本発明に含まれる。また、各ＣＤＲ領域との相同性が９０〜１００％の配列であるものが挙げられる。
【０１２３】
すべてのヒトに天然に見られるタンパク質に対し生ずるモノクローナル抗体は、典型的に、非ヒト系、例えばマウスで生産することができる。この直接の結果として、ヒトに投与されたとき、ハイブリドーマにより産生されるような異種個体抗体は、異種個体免疫グロブリンの定常部分により優勢的に仲介される望ましくない免疫応答を顕在化する。これは、長期間にわたり投与できないような抗体の使用を明らかに制限する。そのため、単一鎖、単一ドメイン、キメラ、ＣＤＲ移植、または特に、ヒトに投与したときに実質的なアレルギー応答を示さないと予測されるヒトの抗体の使用が特に好ましい。好ましくは、本発明のモノクローナル抗体は、配列番号１０に示す配列を含む軽鎖および配列番号１２に示す配列を含む重鎖を含む（好ましくは、これらの配列は、全長配列である。）。別の実施形態では、本発明の抗体または抗体結合断片は、配列番号１０に示す配列を含む軽鎖および配列番号１２に示す配列を含む重鎖のうち１または複数のＣＤＲ、および／または１または複数のフレームワーク領域を含むことが理解される。これらのフレームワークおよびＣＤＲについては、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ   Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ））およびＣｌｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照することができる。
【０１２４】
周知のように、１アミノ酸もしく複数のアミノ酸の欠失、付加、挿入または置換のようなのマイナーチェンジによって、実質的に同一性を有するオリジナルタンパク質に対応するタンパク質を生産することができる。
【０１２５】
ヒト重鎖の定常部分は、γ１、γ２、γ３、γ４、μ、α１、α２、δまたはεタイプ、好ましくはγタイプ、より好ましくはγ１タイプであり得、一方、ヒト軽鎖の定常部分は、κまたはλタイプ（λ１、λ２およびλ３サブタイプを含む）であり得るが、好ましくはκタイプである。すべてこれら定常部分のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔらより提供される。
【０１２６】
本発明の抗体は、当該分野において周知の任意の方法を用いて生産することができる。そのような方法の例示は、実施例に記載されるがそれに限定されない。まず、抗原を用いて動物を免疫することによって、抗体が産生される。
【０１２７】
ここで、抗原の調製は、組換えＤＮＡ法または化学合成により調製した抗原の一部のアミノ酸配列の一部のペプチドなどが挙げられる。そのような方法は、実施例において例示されている。得られたペプチド等は、アジュバントと混合し抗原として用いる。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイントの不完全アジュバント等が挙げられ、これらの何れのものを混合してもよい。
【０１２８】
また、モノクローナル抗体は、それらの哺乳動物から脾臓またはリンパ節を採取し、それらから得られた抗体産生細胞を骨髄腫（ミエローマ）細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを得ることができる。細胞融合の方法は既知の方法で行うことができ、例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５〜４９７（１９７５））に従って作製することができる。目的タンパク質を認識する特異抗体を作製するために、上記に記載した方法に従って目的動物（たとえば、マウス）を免疫する。十分に血中抗体力価が上昇していることを確認し、採血または脾臓細胞を分離する。モノクローナル抗体、特に、Ｃ末端やリングを認識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、このようにして分離した脾臓細胞とミエローマ細胞を融合して作製し得る。脾臓細胞は前記で免疫した動物、好ましくはマウス由来である。ミエローマ細胞は、哺乳類由来であり、好ましくはマウスミエローマ細胞である。細胞の融合にはポリエチレングリコールなどを用い得る。融合により得られたハイブリドーマをスクリーニングおよびクローニングすることにより、望ましいハイブリドーマを選択し得る。モノクローナル抗体を作製するには、得られたハイブリドーマをインビトロまたはインビボで培養する。好ましくは、インビボで培養する。例えば、マウスモノクローナルを含む腹水を産生させるために、マウスの腹腔内に前記ハイブリドーマを投与する。モノクローナル抗体は、産生された腹水から、当業者に公知の方法により容易に精製され得る。最終免疫後３〜１０日目に免疫動物から脾臓細胞を採取することが好ましいがこれに限定されない。
【０１２９】
得られた免疫細胞からハイブリドーマを得るには、例えば、「分子細胞生物学基礎実験法」（南江堂  堀江武一ら１９９４）等に記載されている方法により、継体培養可能な細胞とすることを目的として、例えば、センダイウイルス、ポリエチレングリコール存在下、形質細胞腫細胞と抗体を産生する免疫細胞とを融合させて、ハイブリドーマを得ることができる。ここで用いられる形質細胞腫細胞は、同じ恒温動物でも同種の恒温動物由来の形質細胞腫細胞を用いることが望ましく、例えばマウスを免疫動物として得られた脾臓細胞と融合させる場合、マウスミエローマ細胞を用いることが好ましい。形質細胞腫細胞は公知のものを利用できる。
【０１３０】
ハイブリドーマは、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン添加培地）により選択し、コロニーが確認された段階で、培養上清に分泌される抗体と抗原との結合を調べる（スクリーニングする）ことにより目的の抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる。
【０１３１】
スクリーニングする方法としては、例えば、スポット法、凝集反応法、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法などの一般に抗体の検出に用いられている種々の方法が挙げられるが、好ましくは、例えば実施例に例示されるように、ハイブリドーマの培養上清について、目的とするペプチドとの反応性を指標とするＥＬＩＳＡ法に従い実施される。このスクリーニングによって、目的とするペプチド等の抗原と特異的に反応する目的抗体産生株をスクリーニングすることができる。
【０１３２】
スクリーニングの結果得た目的抗体産生株のクローニングは、通常の限界希釈法、軟寒天法などにより実施できる。クローニングされたハイブリドーマは、必要に応じて、血清培地または無血清培地で大量培養することができる。この培養によれば、比較的高純度の所望抗体を培養上清として得ることができる。また、ハイブリドーマと適合性のある哺乳動物、例えばマウスなどの腹腔に、ハイブリドーマを接種して、所望抗体をマウス腹水として大量に回収することもできる。本発明の抗体産生ハイブリドーマの培養上清およびマウスなどの腹水は、そのまま粗製抗体液として用いることができる。またこれらは常法に従って、硫酸アンミモニウム分画、塩析、ゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー法などにより精製して、精製抗体とすることができる。
【０１３３】
ポリクローナル抗体は、例えば免疫原で免疫した哺乳動物から採血することにより得られる。該方法において、免疫原で免疫される哺乳動物としては、一般には、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、マウス、ラットなどが用いられる。
【０１３４】
免疫方法は一般的方法により、例えば免疫原を哺乳動物に静脈内、皮内、皮下、腹腔内注射などにより投与することにより行い得る。より具体的には、例えば免疫原を生理食塩水含有リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、生理食塩水などで適当濃度に希釈し、所望により通常のアジュバントと併用して、供試動物に２〜３週間間隔で数回投与する。マウスを用いる場合は、一回の投与量を一匹あたり５０〜１００μｇ程度とする。ここで前記アジュバントとは抗原と共に投与したとき、非特異的に抗原に対する免疫反応を増強する物質をいう。通常用いられるアジュバントとしては、百日咳ワクチン、フロインドアジュバントなどを例示できる。最終免疫後３〜１０日目に哺乳動物の採血を行うことによって、抗血清を得ることができる。抗血清についてはそのままでも、また精製してポリクローナル抗体としても使用できる。
【０１３５】
ポリクローナル抗体の精製方法としては非特異的精製法と特異的精製法が挙げられる。非特異的精製法とは塩析法やイオン交換クロマトグラフィー法などにより主にイムノグロブリン画分を取得することを目的とする。特異的精製法としては固定化抗原によるアフィニティークロマトグラフィー法などが挙げられる。
【０１３６】
本明細書において抗体を作製するときに使用される「免疫原」とは、本明細書で使用される場合、生物において免疫応答を生じる、または引き起こす能力を有する物質を表す。本発明の抗体の製造に用いられる免疫原は、活性化ハプテンとキャリアタンパク質を用いて、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（１９８９）（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）等に記載されている活性エステル法により作製することができる。またＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（１９８９）（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）等に記載のその他の方法、例えば、カルボジイミド法やグルタルアルデヒド法やジアゾ法によっても作製できる。
【０１３７】
本明細書において抗体を作製するときに使用される「キャリアタンパク質」には、抗原性を高めることが知られている各種のタンパク質をいずれも使用できる。その例としては、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ウシチオグロブリン（ＢＴＧ）、キーホールリンペット（カギアナカサガイ）のヘモシアニン（ＫＬＨ）などの高分子物質のほかに合成ポリペプチドなどを例示できる。
【０１３８】
本明細書において抗体を作製するときに使用される「ハプテン」とは、部分的な、または不完全な抗原である。ハプテンは主として低分子量の物質であり、単独では抗体の産生を刺激する能力はないが、化学的方法や架橋剤によりキャリアタンパク質と結合させて人工抗原として免疫するとハプテンに対する抗体を得ることができる。
【０１３９】
本発明の抗体を用いて免疫測定方法を実施することができる。このような免疫測定方法に用いる単一特異的な抗体としては、安定的に供給しうるモノクローナル抗体が望ましいがそれに限定されず、任意の分子を用いることができる。以下、モノクローナル抗体を用いて例示する。抗体（第１のモノクローナル抗体）を固相に固定し、抗原を含む資料と共にインキュベートする工程、さらに標識した第２のモノクローナル抗体を加えて、得られた混合物をインキュベートする工程、および混合物中の生成した標識された抗原抗体複合体を検出する工程を包含するサンドイッチ免疫学的測定法が例示される。また、本発明の免疫学的測定法では、サンプルと、固相化した第１のモノクローナル抗体および標識した第２のモノクローナル抗体とを同時にインキュベートしてもよい。サンドイッチ免疫学的測定法としては、その検出方法により、サンドイッチ放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、サンドイッチ酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、サンドイッチ蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、サンドイッチ発光免疫測定法（ＣＬＩＡ法）、サンドイッチ発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、サンドイッチ法に基づく免疫クロマトグラフ法などの全てのサンドイッチ免疫測定法が応用しうる。定量のためには、ＲＩＡ法、ＥＩＡ法が好ましい。本明細書において「交差反応性（以下、ｃｒｏｓｓ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙともいう。）」は、免疫交差反応性のことをいう。ある抗原で免疫することにより得られた抗体が別の抗原（関連抗原）とも結合反応を示すときに、この反応を交差反応という。目的とする抗原とその抗体の反応量を基準とした場合に関連抗原とその抗体との反応量の程度を交差反応性として示すことができる。本明細書中においては代表的には１％、または２％、３％、あるいは０．５％、０．２％、０．１％などの親和性の相対値（％）で示すものであれば交差反応性が低いといえる。値が低いほど交差反応性が低く、目的の抗原に対して特異性を有することを示す。主に目的抗原と関連抗原の構造が非常に類似しているために起こることが多い。
【０１４０】
本発明の抗ＨＨＶ−６Ｂ抗体、その抗原結合性断片またはＨＨＶ−６Ｂ結合分子は、マイクロタイタープレート、ビーズ、チューブ、メンブレン、濾紙、プラスチック性カップなどの担体に固相することができ、特に、ポリエチレンビーズが好適に用いられる。測定するサンプルは、ヒトの血漿、血清、血液、尿などＨＨＶ−６Ｂを含むサンプルであり得る。本発明の抗体、その抗原結合性断片または、ＨＨＶ−６Ｂ結合分子は、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質、または目視判定可能な官位測定法などでは金コロイドや着色ラテックスなどにより標識され得る。標識に用いられる放射性同位元素としては、14Ｃ、3Ｈ、32Ｐ、125Ｉ、131Ｉなどであり、特に、125Ｉが好適に用いられる。これらは、クロラミンＴ法、ペルオキシダーゼ法、Ｉｏｄｏｇｅｎ法、ボルトハンター法などにより、モノクローナル抗体に結合され得る。標識に用い得る酵素としては、例えば、βガラクトシダーゼ（βＧＡＬ）、アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）などを含む。これらは、過ヨウ素酸架橋法（仲根法）、石川らの方法（医学書院；酵素免疫測定法，第３版，７５〜１２７，（１９８７）．）などによりモノクローナル抗体に結合され得る。標識に用いる蛍光物質としては、フルオレセイン、フルオレサミン、フルオレセインイソチオシアネート、テトラメチルローダミンイソチオシアネートなどがある。標識に用いる発光物質としては、ルシフェリン、ルミノール誘導体、アクリジニウムエステルなどがある。簡易測定法などでは、金コロイドや着色ラテックスを用いてもよい。
【０１４１】
好ましい実施態様によれば、サンドイッチＲＩＡ法が行われ得る。サンドイッチＲＩＡ法は、具体的には、標準溶液またはサンプルに、第１のモノクローナル抗体を固相したビーズを加えて混和し、４℃から４５℃、好ましくは２５℃から３７℃で、１から４時間、好ましくは２時間インキュベートする（第１反応）。洗浄後、例えば125Ｉで標識した第２の
モノクローナル抗体を含む溶液を加え、４℃〜４５℃、好ましくは２５℃から３７℃で、１から４時間好ましくは２時間インキュベートし、ビーズ上に抗体／抗体複合体を形成する（第２反応）。洗浄後、ビーズに結合した抗原抗体複合体の放射活性をガンマーカウンターなどで検出することによりの量を測定し得る。他の好ましい実施態様によれば、サンドイッチＥＩＡ法が行われ得る。サンドイッチＥＩＡ法は、具体的には、標準溶液またはサンプルに、第１のモノクローナル抗体を固定したビーズを加えて混和し、４℃から４５℃、好ましくは２５℃から３７℃で、１から４時間、好ましくは２時間インキュベートする（第１反応）。洗浄後、酵素標識、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した第２のモノクローナル抗体を含む溶液を加え、４℃〜４５℃、好ましくは２５℃〜３７℃で、１〜４時間好ましくは２時間インキュベートし、ビーズ上に抗体−抗体からなる免疫複合体を形成する（第２反応）。ビーズ上の酵素活性を、酵素に特異的な基質、例えば、標識酵素がＨＲＰであればテトラメチルベンヂチン（ＴＭＢ）を介して比色法により測定し、それによりビーズ上の捕獲された量を測定し得る。比色定量は、通常の分光光度計などで行われ得る。
【０１４２】
抗原結合能の測定は、次のようにして測定することができる。抗原結合測定のためのＣｅｌｌ  ＥＬＩＳＡプレートでは、次のようにして調製する。適宜の細胞を、細胞培養用９６穴プレートの６０穴に１×１０６個の細胞数で播き込む。これをＣＯ２インキュベーターで１日培養し（１０％の牛胎児血清（ＧＩＢＣＯ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地）、細胞を接着させる。培養液を捨て、３００μｌのＰＢＳで各穴を２回洗浄する。４％のパラホルムアルデヒドを含むＰＢＳ（以下、ＰＦＡ／ＰＢＳとも称する。）を各穴に１００μｌ加え、氷上で１０分間静置し、細胞を固相化する。ＰＦＡ／ＰＢＳを捨て、３００μｌのＰＢＳで各穴を２回洗浄後、２５０μｌのＤＢでブロッキングする。抗体１００μｌを各穴に加え、室温にて２時間インキュベートしＲＢで洗浄後、ＤＢで１０００倍に希釈したアルカリフォスファターゼ結合第２抗体１００μｌを加える。室温にて１時間インキュベートしＲＢで洗浄ののち、基質溶液を加え、次に４０５／６５５ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で測定する。
【０１４３】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、中和抗体である。中和活性は、抗体依存性細胞傷害活性を指標に測定することが出来る。抗体依存性細胞傷害活性は以下のようにして測定することができる。すなわち、クロミウム遊離試験による抗体依存性細胞傷害活性を解析することができる。ヒト末梢血単核球（Ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ、ＰＢＭＣ）は、健常者の末梢血からＦｉｃｏｌｌ‐ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を用いて添付文書に従って分離する。分離したＰＢＭＣは、４×１０６個／ｍｌになるように１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭを加える。
【０１４４】
適切な数（例えば、１×１０６個）の適宜の細胞を含むＤＭＥＭに、５１Ｃｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｎｅｒ社製）を含む生理食塩水を加え、３７℃で１時間反応させる。その後、ＤＭＥＭで適宜洗浄し、規定化された量（たとえば、５×１０４個/ｍｌ）になるようにＤＭＥＭを加える。この細胞に本発明の抗体またはコントロール抗体（例えば、マウスＩｇＧ２ａ；ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を加え、たとえば、３７℃で１時間反応させ、適量（たとえば、１００μｌ／ウェル）になるように９ウェルｖ底プレートに加える。その後、適量、たとえば１００μｌのＰＢＭＣを加え、３７℃で２時間反応させる。その後、プレートを５分間、５００×ｇ、室温で遠心し、１００μｌの上清のγ線を測定器（たとえば、ＡＲＣ‐７００１（アロカ社製））にて測定する。抗体特異的な細胞傷害活性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，％）は、次の計算式を用いる。
【０１４５】
細胞傷害活性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，％）＝（実験値−自然遊離）／（最大遊離−自然遊離）×１００
当該分野での技術常識によれば、当業者は、例えばＣＤＲグラフティング法（例えば、欧州特許第２３９４００号）により、ヒト化抗体を作製することができる。
【０１４６】
本発明の抗体は、キメラ抗体として作製することができ、そのようなキメラ抗体の発現ベクターは、Ｈ鎖Ｖ領域をコードするＤＮＡ断片がクローニングされれば、これらのマウスＶ領域をコードするＤＮＡを、ヒト抗体定常領域をコードするＤＮＡと連結して発現させることによってキメラ抗ヒト抗体が得られる。キメラ抗体を作製するための基本的な方法は、クローン化されたｃＤＮＡに存在するリーダー配列およびＶ領域配列を、哺乳類細胞の発現ベクター中にすでに存在するヒト抗体Ｃ領域をコードする配列に連結することを含む。あるいは、クローン化されたｃＤＮＡに存在するマウスリーダー配列およびＶ領域配列をヒト抗体Ｃ領域をコードする配列に連結した後、哺乳類細胞発現ベクターに連結することを包含する。ヒト抗体Ｃ領域の断片は、任意のヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域およびヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域のものとすることができ、例えばヒトＨ鎖のものについてはＣγ１、Ｃγ２、Ｃγ３またはＣγ４、およびＬ鎖のものについてはＣλまたはＣκを各々挙げることができる。
【０１４７】
１つの実施形態では、本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。１つの実施形態では、本明細書に記載されるモノクローナル抗体ＭＡｂ  ＫＨ−１である。
【０１４８】
本発明の抗体は、ＨＨＶ−６Ｂに対して反応し、ＨＨＶ−６Ａに対して交差反応性を有しない。
【０１４９】
（組成物・医薬）
１つの局面において、本発明は、本発明の抗原を含む組成物を提供する。本発明の組成物において含まれる抗原は、本明細書中（エピトープ）、（抗原）の項において記載された任意の実施形態を用いることが出来ることが理解される。
【０１５０】
１つの実施形態では、この組成物は、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和抗体を生成するための組成物でありうる。
【０１５１】
好ましい実施形態では本発明において用いられる抗原は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１である。理論に束縛されることを望まないが、この全長を用いることによって中和活性が顕著に刺激されることが確認されているからである。
【０１５２】
１つの実施形態では、本発明の組成物は、さらにＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を含む。理論に束縛されることを望まないが、ｇＱ２を加えたほうが好ましいのは、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１を認識するが、ＨＨＶ−６ＡｇＱ１をＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２と共発現させた方が、その認識が強くなることがわかったからである。すなわち、ｇＱ１とｇＱ２が相互作用することによって、形成されるｇＱ１の立体構造を本発明において作製した中和抗体が認識すると考えられる。ｇＱ１とｇＱ２とが結合することによって形成される立体構造は、ＨＨＶ−６Ｂ感染中和のターゲットとなること、そしてこの結合を阻止する分子を同定することによって治療薬の開発にも繋げることができるという点で有用である。
【０１５３】
１つの好ましい実施形態では、本発明の組成物において含まれるＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は複合体を形成したものである。理論に束縛されることを望まないが、ｇＱ１とｇＱ２との複合体形成が感染中和のターゲットにおいて重要である可能性が高いということが本発明において見出されたからである。理論に束縛されることを望まないが、ＨＨＶ−６は、おそらく、細胞内経路によって細胞に侵入する。エンベロープ糖タンパク質ｇＨ／ｇＬ／ｇＱ１／ｇＱ２（ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ）およびｇＢは、ウイルス接着および貫通の過程において機能する。ＨＨＶ−６Ａは、ヒトＣＤ４６を細胞レセプターとして利用するが、ＨＨＶ−６Ｂはそうではないようであるからである。
【０１５４】
１つの実施形態では、本発明の組成物において含まれるＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現される。理論に束縛されることを望まないが、本発明で作製したモノクローナル抗体は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１を認識するものの、ＨＨＶ−６Ａ  ｇＱ１をＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２と共発現させた方が、その認識が強くなることから、複合体形成には、共発現が好ましいと考えられるからである。本発明の組成物は、医薬でありうる。
【０１５５】
別の局面において、本発明は、本発明の抗原を含む医薬を提供する。本発明の医薬において含まれる抗原は、本明細書中（エピトープ）、（抗原）、（組成物・医薬）のうちの組成物に関する項において記載された任意の実施形態を用いることができることが理解される。本発明の化合物またはその製薬上許容される塩は、そのまま単独で投与することも可能であるが、通常各種の医薬製剤として提供するのが好ましい。また、それら医薬製剤は、動物および人に使用される。
【０１５６】
（治療活性または予防活性の証明）
本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にインビトロで、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試験される。例えば、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性を証明するためのインビトロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプルに対する化合物の効果が挙げられる。細胞株および／または組織サンプルに対する化合物または組成物の効果は、当業者に公知である技術（細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決定され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定するために用いられ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイが挙げられ、このアッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そして化合物に曝されるか、そうでなければ化合物が投与され、そして、組織サンプルに対するそのような化合物の効果が観察される。
【０１５７】
本発明は、被験体への有効量のワクチン等の成分または組成物の投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい局面において、本発明成分は実質的に精製されたものであり得る（例えば、その効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じる物質が実質的に存在しない状態が挙げられる）。被験体は好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれらに限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そして最も好ましくはヒトである。
【０１５８】
本発明が医薬として使用される場合、本発明の医薬は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。
【０１５９】
本発明の組成物、医薬、ワクチン等の投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが好ましく、経口または例えば、直腸内、口腔内、皮下、筋肉内、静脈内等の非経口をあげることができる。投与形態としては、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤等がある。経口投与に適当な、例えば乳剤およびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビット、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ゴマ油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を使用して製造できる。また、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニット等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製造できる。
【０１６０】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはその改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。
【０１６１】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０１６２】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。
【０１６３】
非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性製剤からなる。例えば、注射剤の場合、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。
【０１６４】
局所製剤は、活性化合物を１種もしくはそれ以上の媒質、例えば鉱油、石油、多価アルコール等または局所医薬製剤に使用される他の基剤中に溶解または懸濁させて調製する。腸内投与のための製剤は、通常の担体、例えばカカオ脂、水素化脂肪、水素化脂肪カルボン酸等を用いて調製し、座剤として提供される。
【０１６５】
本発明では、非経口剤においても、経口剤で例示したグリコール類、油類、フレーバー類、防腐剤（抗酸化剤を含む）、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤等から選択される１種もしくはそれ以上の補助成分を添加することもできる。
【０１６６】
本発明の医薬、ワクチン等は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬等は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬等は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。
【０１６７】
本発明の医薬等は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第十六改正、その追補またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、所望の程度の純度を有する糖鎖組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。
【０１６８】
本発明の処置方法において使用される糖鎖組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日〜数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回〜１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間〜１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
【０１６９】
本発明の化合物もしくはその製薬上許容される塩の有効用量および投与回数は、投与形態、患者の年令、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度等により異なるが、通常、投与量は、１日当たり０．０１〜１０００μｇ／人、好ましくは５〜５００μｇ／人であり、投与回数は、１日１回または分割して投与するのが好ましい。
【０１７０】
ある局面において、本発明は、本発明の抗原を含むワクチンを提供する。本発明のワクチンにおいて含まれる抗原は、本明細書中（エピトープ）、（抗原）、（組成物・医薬）のうちの組成物および医薬に関する項において記載された任意の実施形態を用いることができることが理解される。
【０１７１】
本明細書においてワクチンの免疫学的な効果は、当該分野において公知の任意の方法を用いて確認することができる。そのような方法としては、例えば、ＣＴＬ前駆細胞頻度分析、ＥＬＩＳＰＯＴ法、テトラマー法、リアルタイムＰＣＲ法などが挙げられるがそれらに限定されない。例示的な説明として、ＣＴＬ前駆細胞頻度分析では、末梢血リンパ球または抗原ペプチドおよびＩＬ−２存在下で培養したリンパ球を限界希釈し、ＩＬ−２とフィーダー細胞との共存下で培養し、増殖したウェルをワクチンまたはその候補で刺激し、ＩＦＮ−γ産生の有無をＥＬＩＳＡなどで測定する。ここで陽性ウェルをポアソン分析に従ってＣＴＬ前駆細胞の頻度を算出し、ワクチンの効力を評価することができる。ここで、陽性の細胞数が抗原特異的ＣＴＬ数であり、その数が多いほどワクチンとして効力が高いといえる。
【０１７２】
本発明のワクチンは、アジュバントとともに調製されてもよい。アジュバントは、当該分野において公知のものを利用することができ、ミョウバンなどを利用することができる。
【０１７３】
本発明のワクチンは、ＨＨＶ−６Ｂに起因する疾患（例えば、突発性発疹等）の予防または治療またはその両方に使用することができる。
【０１７４】
（スクリーニング）
１つの局面において、本発明は、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするための方法を提供する。この方法は、Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２を提供する工程；Ｂ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させる工程；ならびにＣ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２との結合を観察する工程であって、該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される、工程、を包含する。
【０１７５】
本発明の実施において、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は、当該分野において任意の方法で提供することができる。例えば、天然物から単離したものを用いてもよいし、本明細書に開示されたか、または公知の配列を用いて組み換え手法に基づいて発現させたものを用いてもよい。あるいは、細胞に発現させたものそのものを提供してもよい。
【０１７６】
本発明において使用されるＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件は、当該分野において公知の任意の条件を用いてよく、免疫沈降する任意の条件が典型的であり例えば、実施例において記載されるものが例示されるが、実施例に記載される条件を適宜改変して用いてもよい。
【０１７７】
本発明において実施される該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２との結合を観察は、当該分野において公知の任意の技術を用いて実施することができる。そのような観察の技術としては、例えば、実施例において記載されるもの（例えば、ウェスタンブロットなど）が例示され、あるいは、実施例に記載される条件を適宜改変して用いてもよい。
【０１７８】
１つの実施形態では、本発明で用いられる前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現された形態で用いることができる。
【０１７９】
１つの実施形態では、本発明のスクリーニング方法では、Ａ）工程において、さらに、ｇＬおよびｇＨが提供されうる。理論に束縛されることを望まないが、立体構造の形成にｇＬやｇＨが存在するほうが天然の状態に近く、天然の状態を模倣したスクリーニングになると考えられるからであるが、本発明はこれに限定されず。ｇＬおよびｇＨがなくてもスクリーニング自体は実施しうることが理解される。
【０１８０】
別の局面では、本発明は、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするための方法を提供する。この方法は：Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する工程；Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる工程；およびＣ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する工程、を包含する。
【０１８１】
この方法は、当該分野において公知の任意の技術を用いて実施することができる。そのようなエピトープが結合する条件、および接触させる技術としては、例えば、実施例において記載されるものが例示され、あるいは、実施例に記載される条件を適宜改変して用いてもよい。結合の観察は、当該分野において公知の任意の技術を用いて実施することができる。そのような観察の技術としては、例えば、実施例において記載されるもの（例えば、ウェスタンブロットなど）が例示され、あるいは、実施例に記載される条件を適宜改変して用いてもよい。抗体またはその抗原結合断片に結合した複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列の決定もまた、当該分野において公知の任意の技術（例えば、ペップスキャン）を用いて実施することができる。本発明では、配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片は、必要に応じてフレームワーク配列または抗体の全長配列を含んでいても良い。
【０１８２】
（キット）
１つの局面において、本発明は、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤をスクリーニングするためのキットを提供する。このキットは、Ａ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１；Ｂ）ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２；およびＣ）該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件を提供する手段を備え、該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２とが結合する条件で、被験物質を接触を該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および該ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２に接触させたときに該結合が阻害された場合、該被験物質がＨＨＶ−６Ｂウイルスの阻害剤であると判定される。本発明のキットでは、（スクリーニング）の項に記載された任意の実施形態を利用することが理解される。
【０１８３】
１つの実施形態では、本発明のキットにおいて本発明で用いられる前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１および前記ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２は細胞に共発現された形態で提供されうる。
【０１８４】
１つの実施形態では、本発明のキットは、ｇＬおよびｇＨをさらに備えていてもよい。
【０１８５】
別の局面では、本発明は、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの中和エピトープをスクリーニングするためのキットを提供する。このキットは：Ａ）配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する手段；Ｂ）該抗体またはその抗原結合断片に対して候補となる複数のペプチドを、エピトープが結合する条件下で接触させる手段；およびＣ）該抗体またはその抗原結合断片に結合した前記複数のペプチドにおいて同一または類似性のある配列を決定し、該同一または類似性のある配列を中和エピトープとして選択する手段、を備える。本発明のキットでは、（スクリーニング）の項に記載された任意の実施形態を利用することが理解される。本発明では、配列番号１０および配列番号１２における抗原決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片は、必要に応じてフレームワーク配列または抗体の全長配列を含んでいても良い。
【０１８６】
上述のいずれの局面の実施形態においても、本発明のキットは、指示書を備えていてもよい。この指示書は、本発明のスクリーニングする方法などを実施者に対して記載したものである。この指示書は、本発明のスクリーニングする手順を指示する文言が記載されている。この指示書は、必要であれば本発明が実施される国の監督官庁が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、瓶に貼り付けられたフィルム、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ（ウェブサイト）、電子メール）のような形態でも提供され得る。
【０１８７】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【０１８８】
以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【０１８９】
以下の実施例で用いた動物の取り扱いは、大阪大学において規定される基準を遵守した。【０１９０】
（実施例１：ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体の作製）
本実施例では、モノクローナル抗体ＢｇＱ２０２（ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１）またはＫＨ−１（抗ＨＨＶ−６Ｂ）を作製した。【０１９１】
概略は以下のとおりである。
１．  ＨＨＶ−６Ｂ  （ＨＳＴ株）  感染細胞上清中からウイルス粒子を精製
２．  ＵＶにより不活化したウイルス粒子をＢＡＬＢ／ｃ  マウスに免疫
３．  ウイルス粒子構成因子に対する抗体を産生するハイブリドーマを作製
４．  そのうち、ＨＨＶ−６Ｂに対する中和能を有する抗体を複数分離
以下にその手順等を示す。【０１９２】
（材料および方法）
＜マウス＞
雌性のＢＡＬＢ／ｃマウス（近交系、日本エスエルシー株式会社）の４週齢を使用した。【０１９３】
＜ウイルス＞
ＨＨＶ−６Ｂウイルスは、単核細胞（ＣＢＭＣｓ）を用いたＨＳＴ株（Ｋ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，３１６１〜３１６３，１９８９）の培養上清から精製した。具体的には、感染細胞からのビリオンを含む上清を収集し（２５００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。）、そのウイルスを０．９％のＮａＣｌの存在下で、２０％ポリエチレングリコール（分子量２０ｋＤａ）を用いて沈降させた。沈澱物を再懸濁させ、５〜５０％Ｈｉｓｔｏｄｅｎｚ（Ｓｉｇｍａ）の層勾配の上に配置し、２７，０００ｒｐｍで１時間遠心分離し（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｐ４０ＳＴ−１６８９  ｒｏｔｏｒ，  Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｈｉｇｈ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＨＨＶ−６Ｂウイルスの粒子を分離精製した（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．３７８，  ２６９，  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｓｅｓを参照した）。【０１９４】
＜不活化＞
上記精製したＨＨＶ−６ＢウイルスをＵＶ照射により不活化した。具体的には、適宜のＵＶ光源を用いて、上記精製したＨＨＶ−６Ｂウイルス粒子をＵＶ光に暴露することにより、ウイルスの不活化を行なった。【０１９５】
ウイルスストック（５００μｌ）を３５ｍｍ組織培養ディッシュ（ＩＷＡＫＩ）に配置し、２，５００Ｊ／ｍ２のＵＶ光を照射した。【０１９６】
＜免疫＞
上記不活化ＨＨＶ−６Ｂウイルス粒子を、適切な量の抗原量で腹腔内注射によりＢＡＬＢ／ｃマウスに投与し、免疫した。【０１９７】
＜ハイブリドーマの作製＞
上記不活化ＨＨＶ−６Ｂウイルス粒子構成因子に対する抗体を産生するハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマは、定法に従い、骨髄細胞腫と抗体産生細胞とを融合することによって作製した。抗体産生細胞として、上記免疫されたＢＡＬＢ／ｃマウスの脾細胞を用いた。骨髄細胞腫として、同一種マウスのものを使用した。【０１９８】
より特定すると、ハイブリドーマは、過剰免疫マウスからの脾臓細胞を非産生骨髄腫細胞株Ｓｐ２／０−Ａｇ１４と融合させることによって樹立した。ヒポキサンチン／アミノプテリン、チミジンを含む培地中での選択後、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分泌する細胞を、間接免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）によってスクリーニングした。ＨＨＶ−６Ｂ（ＨＳＴ株）に感染したＭＴ細胞およびバキュロウイルス±ＲＥＰ−（Ｂａｃ±ＲＥＰ）に感染したＳｆ９細胞に対して反応性の抗体を分泌するクローンを拡大し、限界希釈法によってクローニングした。次いで、高度の抗体力価を有する腹水を、プリスタン（Ｓｉｇｍａ）で処置したマウスに腹腔内にクローニングしたハイブリッド細胞を注入することによって蓄積させた（Ｊ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．８３，  Ｐ８４８，  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍＡｂｓを参照した）。【０１９９】
手順としては、具体的には、各々すり潰した上記骨髄細胞腫：上記抗体産生細胞を適宜の比でポリエチレンチューブを用いて混合し、遠心分離して培地を除去し、細胞融合促進物質としてポリエチレングリコールを用いて骨髄細胞腫と抗体産生細胞とを融合させた。その後、遠心分離した。ついで、上清を除去して適宜の培地で培養した。脾細胞濃度は適切な細胞数／ｍｌになるよう調整した。【０２００】
次に、抗原（ＨＨＶ−６Ｂウイルス）をコートしたプレートの各ウェルに、上記培地で培養したハイブリドーマの上清を分注した。このプレートを培養器を用いて、室内培養した。適宜培地の半量を吸引除去し、培地を加えた。このような操作を適宜繰り返した。抗体活性は随時酵素抗体法により測定した。またモノクローン性を確保するため、限界希釈法によって順次クローニングを行なった。【０２０１】
なお、上記において培養したハイブリドーマの上清は、イオン交換クロマトグラフィーにより分離精製して回収した。このように、ハイブリドーマの上清を精製してモノクローナル抗体産生材料として用いた。【０２０２】
＜抗体＞
上記のようにして得られたモノクローナル抗体産生材料のうち、ＨＨＶ−６Ｂに対する中和能を有する抗体を適宜の方法で分離した。【０２０３】
上記中和能は、中和活性は、公知の手法に基づいて分析した。例えば、抗体依存性細胞傷害活性を指標に測定することが出来る。抗体依存性細胞傷害活性は以下のようにして測定することができる。すなわち、クロミウム遊離試験による抗体依存性細胞傷害活性を解析することができる。ヒト末梢血単核球（Ｈｕｍａｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ、ＰＢＭＣ）は、健常者の末梢血からＦｉｃｏｌｌ‐ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を用いて添付文書に従って分離する。分離したＰＢＭＣは、４×１０６個／ｍｌになるように１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭを加え、観察することによって分析する。【０２０４】
（ＢｇＱ２０２Ａ−１  作製方法）
モノクローナル抗体ＢｇＱ２０２Ａ−１  は、ＨＨＶ−６Ｂ（ＨＳＴ株）ｇＱ１のＮ  末端領域を組み換えタンパクとして大腸菌にて発現させ、精製したタンパクをＢＡＬＢ／ｃマウスに免疫し、脾臓を採取、脾臓細胞とミエローマ細胞であるＳＰ２細胞とをポリエチレングリコールにより融合させ、ハイブリドーマを作製、その後スクリーニングを行い、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１を特異的に認識することが確認された抗体として分離した。【０２０５】
本抗体を得るため、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１のＮ末端領域の組み換えタンパクの作製を行った。具体的な方法としては、ＢＵ１００−ｂａｍＦおよびＢＵ１００ｐｓｔＲ  プライマーを用い、ＨＨＶ−６Ｂ  ＨＳＴ株のｃＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行い、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１のＮ末端領域を増幅した。このＰＣＲ産物を制限酵素ＢａｍＨＩおよびＰｓｔＩにて切断し、同様の制限酵素で切断した大腸菌発現用プラスミドｐＱＥ３０（ＱＩＡＧＥＮ）にクローニングした。本プラスミドを大腸菌ＢＬ２１株に導入し、Ｎ末端にヒスチジンタグが付加された組み換えタンパクＢｇＱ１−Ｎを発現させた。大腸菌内で大量に発現させたＢｇＱ１−Ｎはニッケルカラムを用いた精製を行った。【０２０６】
（結果）
その結果、モノクローナル抗体ＢｇＱ２０２（ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１）またはＫＨ−１（抗ＨＨＶ−６Ｂ）が作製された。【０２０７】
（ＫＨ−１の特徴付け＝配列決定）
中和抗体であるＫＨ−１をさらに特徴付けるため、この抗体の遺伝子配列を決定した。アミノ酸の配列決定はハイブリドーマから得られる抗体をコードする遺伝子配列を含む核酸配列に基づいて決定した。【０２０８】
以下にそのアミノ酸配列を示す。
・軽鎖＜配列番号１０＞
LIRLTIGQAVVSTQSTWGLMRIAVISXGPKFKDKMDFQVQIFSFLLISASVILSRGQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSISYMHWYQQKPGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISNMESEDAATYYCHQRSRYHTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGS＜Xは任意のアミノ酸＞
・重鎖＜配列番号１２＞
NTTHYRASSGINAEYMGINICPMSSPQSLKTLTITMGWTWIFILILSVTTGVHSEVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKRLEWIGNIDPYYGGASYNQKFKGKATLTVDKSSTTAYMQLQSLTSEDSAVYYCARGGYGRYFDVWGAGTAVTVSSAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYF
このように、上記配列を有する抗体が中和活性を有することが示された。【０２０９】
（実施例２：ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体によって認識されるウイルスタンパク質の決定）
本実施例では、ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体によって認識されるウイルスタンパク質を決定した。【０２１０】
（材料および方法）
ＨＳＴ感染したＭＴ４細胞は、感染後（ｐ．ｉ．）１２時間、２４時間、４８時間および７２時間後に収集した。この細胞を、一次抗体とともに、冷アセトン中で固定し、３７℃で１時間インキュベートした。抗ＲＥＰｍＡｂであるＯＨＶ−２は、早期の段階で発現する核タンパク質であるＯＨＶ−３を認識し、後期の段階で発現するＨＨＶ−６Ｂ糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）を認識する。当該分野において通常使用されるＰＢＳでの１０分の洗浄後、マウスＩｇＧに対するフルオレセイン結合したヤギ抗体を加え、これに飽和４’、６’−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で１：１００の希釈率で加えた。この細胞を２０分間インキュベートした。上記のように洗浄した後、シグナルを共焦点顕微鏡で検出した（Ｊ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．８３，  Ｐ８４８，  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＨＳＴ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ＭＴ４  ｃｅｌｌｓを参照した）。【０２１１】
ＨＳＴ感染したＭＴ４細胞において、モックおよびＨＨＶ−６Ｂの株を１６時間代謝標識（３５Ｓメチオニン）し、融解し、そしてモノクローナル抗体ＢｇＱ２０２（ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１）またはＫＨ−１（抗ＨＨＶ−６Ｂ）で免疫沈降させた（ＩＰ）。いずれの抗体も、実施例１において産生したものを用いた。【０２１２】
免疫沈降は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって解像した（４−１２％Ｔｒｉｓ−グリシンゲル；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。ゲルを固定し、乾燥させ、そして暴露することによって行なった。この結果は、抗ＨＨＶ−６Ｂモノクローナル抗体が、糖タンパク質Ｑ１を認識しうることを示す。【０２１３】
（結果）
結果を図１に示す。図１は、ＨＨＶ−６Ｂに対するモノクローナル抗体によって認識されるウイルスタンパク質の決定を示す。図１に示すように、糖タンパク質Ｑ１を認識しうる抗ＨＨＶ−６Ｂビリオンモノクローナル抗体は、ＫＨ−１と命名した。【０２１４】
（実施例３：抗ｇＱ１モノクローナル抗体によってＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞におけるｇＨ／ｇＬ／ｇＱの検出）
本実施例では、抗ｇＱ１モノクローナル抗体によってＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞におけるｇＨ／ｇＬ／ｇＱを検出する実験を行なった。【０２１５】
（材料および方法）
モックまたはＨＨＶ−６Ｂに感染した細胞溶解物を、抗ｇＱ１モノクローナル抗体ＫＨ−１で免疫沈降させ、そして還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを電気的にＰＶＤＦ膜にトランスファーし、ｇＱ１、ｇＨおよびｒｇＬに対するモノクローナル抗体を用いて検出を行なった。【０２１６】
具体的には、ＨＨＶ−６感染した細胞および偽（ｍｏｃｋ）感染した細胞を、放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液（０．０１ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ［ｐＨ  ７．４］，  ０．１５Ｍ  ＮａＣｌ，  １％デオキシコール酸ナトリウム，  １％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０，  ０．１％ドデシル硫酸ナトリウム［ＳＤＳ］，  １  ｍＭ  ＥＤＴＡ，  １  ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオリド）中で溶解した。溶解したタンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）によって分離させ、免疫ブロットのためポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜にエレクトロトランスファーさせた（Ｊ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．７８，  ｎｏ．１５，  Ｐ４６１０，  Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ、及びＪ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．７８，  ｎｏ．９，  Ｐ７９７２，  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｕｌｓｅ−ｃｈａｓｅ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃａｌｌｙ  ｌａｂｅｌｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．を参照した）。【０２１７】
（結果）
結果を図２に示す。図２は、抗ｇＱ１モノクローナル抗体によってＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞におけるｇＨ／ｇＬ／ｇＱの検出を示す。モックまたはＨＨＶ−６Ｂに感染した細胞溶解物を、抗ｇＱ１モノクローナル抗体ＫＨ−１で免疫沈降させ、そして還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。ゲルを電気的にＰＶＤＦ膜にトランスファーし、ｇＱ１、ｇＨおよびｒｇＬに対するモノクローナル抗体を用いて検出を行なった。ＫＨ−１の反応性の結果、ｇＱ１、ｇＬおよびｇＨと共沈殿することから、ＫＨ−１は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１と特異的に反応することが示されたことになる。【０２１８】
本実施例では、抗ｇＱ１モノクローナル抗体によってＨＨＶ−６Ｂ感染した細胞においてｇＨ／ｇＬ／ｇＱが検出され、これらが複合体を形成しているようであることが判明した。【０２１９】
（実施例４：抗ｇＱ１抗体ＫＨ−１の中和活性確認）
本実施例では、抗ｇＱ１抗体ＫＨ−１の中和活性を確認する実験を行なった。【０２２０】
（材料および方法）
中和アッセイのために、タイターしたＨＨＶ−６Ｂ株ＨＳＴウイルスのストックを、コントロール抗体またはＫＨ−１に３０分間３７℃で加えた。インキュベーション後、得られた溶液をＭＴ４細胞と１時間３７℃で混合した。ウイルス溶液を取り出し、洗浄し、細胞を１２時間新鮮な培地中でインキュベートし、抗ＩＥ１ウサギ血清を用いた間接免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）によって染色した。【０２２１】
（結果）
図３に結果を示す。図３は、抗ｇＱ１抗体であるＫＨ−１は中和活性を有することを示す結果である。【０２２２】
（実施例５：ｇＱ１一過性発現系における抗体で認識されたタンパク質の発現）
本実施例では、ｇＱ１一過性発現系における抗体で認識されたタンパク質の発現を確認した。【０２２３】
（材料および方法）
２９３Ｔ細胞をｇＱ１およびｇＱ２を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。細胞をＩＦＡについてトランスフェクト後７２時間、抗ｇＱ１抗体を用いて共染色した。【０２２４】
（結果）
結果を図４に示す。図４は、ｇＱ１一過性発現系における抗体で認識されたタンパク質の発現を示す。ＫＨ−１抗体によって認識されるｇＱ１の発現量は、ｇＱ２の添加によって増大する。【０２２５】
（実施例６：種々のカルボキシ末端検出変異体を用いたＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１遺伝子の模式的ダイアグラムおよびモノクローナル抗体ＫＨ−１に対する反応）
本実施例では、種々のカルボキシ末端検出変異体を用いたＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１遺伝子の模式的ダイアグラムおよびモノクローナル抗体ＫＨ−１に対する反応性を調べた。【０２２６】
（材料および方法）
２９３Ｔ細胞を、ｇＱ１または種々のｇＱ１検出変異体を発現するプラスミドおよびｇＱ２を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。具体的手法は、実施例５のものと同様であった。細胞をＩＦＡについて、抗ｇＱ１抗体を用いてトランスフェクト後７２時間共染色した。具体的手法は、実施例５のものと同様であった。【０２２７】
（結果）
図５に結果を示す。図５は、種々のカルボキシ末端検出変異体を用いたＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１遺伝子の模式的ダイアグラムおよびモノクローナル抗体ＫＨ−１に対する反応性を示す。２９３Ｔ細胞を、ｇＱ１または種々のｇＱ１検出変異体を発現するプラスミドおよびｇＱ２を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。細胞をＩＦＡについて、抗ｇＱ１抗体を用いてトランスフェクト後７２時間共染色した。図５に示されるように、１位〜４９６位、１位〜５０４位、１位〜５１６位のものは、ＫＨ−１に対する反応性を有していた。１位〜４８３位、１位〜４６６位、１位〜４５１位のものは、ＫＨ−１に対する反応性を有していなかった。したがって、ＫＨ−１が認識する部位は、ＨＨＶ−６ＢのｇＱ１の４８４位と４９６位との間に存在する。【０２２８】
図５に示すように、種々のカルボキシ末端検出変異体を用いたＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１遺伝子の模式的ダイアグラムおよびモノクローナル抗体ＫＨ−１に対する反応性が示される。【０２２９】
（実施例７：ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６ＢのｇＱ１の中和部位の同定）
本実施例では、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６ＢのｇＱ１の中和部位の同定を行なった。【０２３０】
本実施例において、本発明者らは、実施例６で確認された情報等に基づいて中和部位をマッピングした。図６Ａに、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６ＢのｇＱ１のアミノ酸配列アラインメントを示す。図６Ａから明らかなように、ｇＱ１のカルボキシ末端欠失によって、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１配列においてアミノ酸残基４８４位〜４９６位が、モノクローナルＫＨ−１によって認識されることが判明した。次に、この領域におけるＨＨＶ−６Ｂ特異的アミノ酸残基について検索するために、本発明者らは、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６ＢのｇＱ１アミノ酸配列を比較した。配列比較を行なったところ、アミノ酸４８８位は、ＨＨＶ−６Ｂでは特異的にＧｌｕであった。他方、ＨＨＶ−６Ａについては、対応する残基は、Ｇｌｎであった。【０２３１】
また、ＫＨ−１が認識するＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１エピトープ部位の同定のため、Ｃ末端における点変異体のＫＨ−１反応性の有無も確認した。２９３Ｔ細胞にてＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１野生型および点変異体を発現させ、ＫＨ−１を用いたＩＦＡによりその反応の有無を確認した。その図を図６Ｂに示す。【０２３２】
図６Ｂに示すように、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１およびＥ４８８Ｑでは、反応性が保持されたが、Ｃ４８７Ｗ  Ｅ４８８ＱおよびＥ４８８Ｑ  Ｇ４８９Ｖでは反応性が消失していた。したがって、ＫＨ−１が認識するｇＱ１のエピトープ部位は４８８位のグルタミンを含む領域であることが判明した。【０２３３】
（実施例８：ワクチン）
本実施例では、本発明の中和抗原をもちいてワクチンを生産する。このワクチンは免疫学的防御量の抗原を含み、そして慣用の技術により調製できる。【０２３４】
ワクチン製剤は、例えば、一般にＰｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．６１  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ−ｔｈｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ  編、Ｐｌｅｎｕｒｎ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９５  ；  Ｎｅｗ  Ｔｒｅｎｄｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，  Ｖｏｌｌｅｒ  ら編、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐａｒｋ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．１９７８等に記載されている。各ワクチン剤型中のタンパク質の量は、典型的なワクチンにおいて有意に有害な副作用なく免疫防御応答を誘導する量として選定される。かかる量はどの特異的な免疫原を使用するかに依存して変わりうる。一般に、各剤型は１〜１０００μｇのタンパク質、好ましくは２〜１００μｇ、最も好ましくは４〜４０μｇのタンパク質を含むがこれに限定されない。【０２３５】
本実施例では、実施例１〜７の実験に基づいて決定されたエピトープ部位を含むペプチドまたはポリペプチド（例えば、配列番号２の１〜４９６位を含むもの）を当該分野において公知の手法に基づいてキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などのタンパク質をコンジュゲートさせることによってタンパク質結合ワクチンを製造することができる。【０２３６】
そして、このようなワクチンは、例えば、ミョウバン、水酸化アルミニウム等の適切なアジュバントと合わせワクチン製剤として製造することができる。【０２３７】
特定のワクチンについての最適な量は抗体力価及び被検体におけるその他の応答の検討を包含する標準試験により確認できる。最初の接種に続き、被検体に約４週間目において追加免疫を与えてよい。このようなワクチンの抗体力価は上記ワクチン製剤をマウス等に接種し試験することによって確認することができる。【０２３８】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０２３９】
本発明によって、ＨＨＶ−６Ｂの有効なワクチンおよび有効な治療薬、ならびにそのスクリーニング方法を提供する。本発明は製薬業において利用可能性を見出す。
【配列表フリーテキスト】
【０２４０】
配列番号１は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１の全長アミノ酸配列をコードする核酸配列である。配列番号２は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ１の全長アミノ酸配列である。
配列番号３は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２の全長アミノ酸配列をコードする核酸配列である。配列番号４は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＱ２の全長アミノ酸配列である。
配列番号５は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＨの全長アミノ酸配列をコードする核酸配列である。
配列番号６は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＨの全長アミノ酸配列である。
配列番号７は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＬの全長アミノ酸配列をコードする核酸配列である。
配列番号８は、ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＬの全長アミノ酸配列である。
配列番号９は、抗体ＫＨ−１の軽鎖の核酸配列である。
配列番号１０は、抗体ＫＨ−１の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１１は、抗体ＫＨ−１の重鎖鎖の核酸配列である。
配列番号１２は、抗体ＫＨ−１の重鎖鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１３は、配列番号２の４８４位〜４９６位に対応する部分のヒトヘルペスウイルス６Ａ型（ＨＨＶ−６Ａ）のアミノ酸配列である（図６、図１０）。
配列番号１４は、配列番号２の４８４位〜４９６位に対応する部分のＨＨＶ−６Ｂ  Ｅ４８８Ｑ改変配列のアミノ酸配列である（図６）。
配列番号１５は、配列番号２の４８４位〜４９６位に対応する部分のＨＨＶ−６Ｂ  Ｃ４８７Ｗ  Ｅ４８８Ｑ改変配列である（図６）。
配列番号１６は、配列番号２の４８４位〜４９６位に対応する部分のＨＨＶ−６Ｂ  Ｅ４８８Ｑ  Ｇ４８９Ｖ改変配列である（図６）。
【図１】
2012060025.tif 000002
【図２】
2012060025.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2012060025.tif 000010
【図１０】
2012060025.tif 000011
【配列表】
2012060025000001.app
【国際調査報告】
2012060025.tif 000012
2012060025.tif 000013
2012060025.tif 000014
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