(57)【要約】  本発明は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法、並びにタキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬を提供することを目的とした。  PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現産物の量を指標として、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）を含む、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法：
（ａ）がん患者のがん組織を含む生体試料中の、
（ｉ）PDGFB遺伝子、又は
（ｉｉ）PDGFB遺伝子、並びにPCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子
の発現産物の量を測定する工程、
（ｂ）上記工程（ａ）で得られた発現産物の量（以下、総称して「遺伝子発現量」という）と、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の非有効群における対応の遺伝子発現産物の量（以下、総称して「対照の遺伝子発現量」という）とを比較する工程、及び
（ｃ）下記基準（Ａ）及び（Ｂ）を満たした場合に、該がん患者を有効群として判定する工程：
（Ａ）上記測定した遺伝子が、PDGFB遺伝子又はJMJD2A遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも高いこと、及び
（Ｂ）上記測定した遺伝子が、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、又はERLIN1遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも低いことを基準とする。
【請求項２】
工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子、並びにCISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、及びPLK2遺伝子であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記がんが胃がんである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬であって、
（Ｉ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー、又は
（ＩＩ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーと
配列番号２〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーとを含む
試薬。
【請求項８】
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬であって、
（ＩＩＩ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体、又は
（ＩＶ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体と、
配列番号１７〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体とを含む
試薬。
【請求項９】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項７又は８のいずれかに記載の試薬。
【請求項１０】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項７又は８のいずれかに記載の試薬。
【請求項１１】
前記がんが胃がんである、請求項７〜１０のいずれかに記載の試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法、並びにタキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんの治療方法としては、外科療法、薬物療法（化学療法）等が知られている。外科療法は、がん組織を切り取る治療法であり、がんの進行度が低い場合やがんの転移が全く認められない場合には、有効な治療法である。しかしながら、がんの進行度が高い場合やがんの転移が認められる場合、更にはがんの転移の可能性がある場合には、がん組織を完全に切除することが困難であると考えられ、外科療法と薬物療法を組み合わせた治療法、又は薬物療法のみによる治療法が必要となる。【０００３】
薬物療法は、通常、抗がん剤などを投与することによって行う。抗がん剤は、一般的にはDNA合成或いは何らかのDNAの働きに作用し、がん細胞の増殖を抑制すること又はがん細胞を死滅させることによって、抗がん作用を発揮する。このように、抗がん剤は、生体内の細胞が普遍的に有している機能に働きかけるため、正常細胞に対しても作用し、生体に副作用を生じさせ得る。【０００４】
一方、がんは、患者の遺伝的な素因等の違いにより多様であり、特定の抗がん剤の投与が有効な患者群及び有効ではない患者群がいることが知られている。従って、抗がん剤の投与が有効ではない患者に抗がん剤を投与すること、又は投与し続けることは、上記副作用による患者のQOLの低下を招き、さらには高額な抗がん剤を使用することによる治療費用の高額化につながり、好ましくない。このような状況に鑑み、各種抗がん剤による治療が有効である患者群を選別する方法、及び効果予測マーカーの開発が進められている。【０００５】
例えば、特許文献１には、タキサン系抗がん剤であるドセタキセルに対して耐性を有する前立腺がん細胞内においては、PDGFB遺伝子の発現量が比較的高い傾向にある旨、及びドセタキセルによる治療の有効群を選別する方法おいて、PDGFB遺伝子の発現量を指標とし得る旨が記載されている。【０００６】
また、非特許文献１には、白金錯体系抗がん剤であるシスプラチンに対して耐性を有する肝臓がん細胞内においては、PDGFB遺伝子の発現量が比較的高い傾向にある旨、及びシスプラチンによる治療の有効群を選別する方法において、PDGFB遺伝子の発現量を指標とし得る旨が記載されている。【０００７】
更に、非特許文献２には、フッ化ピリミジン系抗がん剤であるフルオロウラシルに対して耐性を有する結腸直腸がん細胞内においては、ATP7B遺伝子の発現量が比較的低い傾向にある旨、及びフルオロウラシルによる治療の有効群を選別する方法において、ATP7B遺伝子の発現量を指標とし得る旨が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】WO2010/037859
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Clinical Cancer Research. 2009;15(10:3462-3471)
【非特許文献２】Cancer Research. 2008;68(13:4977-4982), “Single-Cell Transcription Site Activation Predicts Chemotherapy Response in Human Colorectal Tumors”
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法、並びにタキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記３種の抗がん剤それぞれ単独で用いた場合については、上述の特許文献１並びに非特許文献１及び２に記載されているように特定遺伝子の発現量を指標として有効群を選別し得ることが知られている。具体的には、タキサン系抗がん剤の有効群においてはPDGFB遺伝子の発現量が比較的低いこと、白金錯体系抗がん剤の有効群においてはPDGFB遺伝子の発現量が比較的低いこと、フッ化ピリミジン系抗がん剤の有効群においてはATP7B遺伝子の発現量が比較的高いということが知られている。しかしながら、上記３種の抗がん剤を併用した場合についても、同一の遺伝子の発現量を指標として用いることができるのか、更には有効群における発現量と非有効群における発現量との違いが、同様の傾向を示すのかどうかについては、全く知られていない。【００１２】
本発明者等は、鋭意研究した結果、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群においては、非有効群に比べて、PDGFB遺伝子及びJMJD2A遺伝子の発現量が高い傾向にあること、並びにPCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子の発現量が低い傾向にあることを見出した。【００１３】
驚くべきことに、PDGFB遺伝子の発現量が非有効群よりも有効群において高い傾向にあるという傾向は、タキサン系抗がん剤、及び白金錯体系抗がん剤をそれぞれ単独で用いた場合（特許文献１、及び非特許文献１）と逆の傾向であった。また、ATP7B遺伝子の発現量が非有効群よりも有効群において低い傾向にあることは、フッ化ピリミジン系抗がん剤を単独で用いた場合（非特許文献２）と逆の傾向であった。【００１４】
上記知見に基づき、本発明者等は、更に鋭意研究を重ねた結果、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現産物の量を指標として、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別することができることを見出し、本発明を完成させるに至った。【００１５】
即ち、本発明は、下記の構成を有するものである。【００１６】
項１．  下記工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）を含む、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法：
（ａ）がん患者のがん組織を含む生体試料中の、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現産物の量を測定する工程、
（ｂ）上記工程（ａ）で得られた発現産物の量（以下、総称して「遺伝子発現量」という）と、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の非有効群における対応の遺伝子発現産物の量（以下、総称して「対照の遺伝子発現量」という）とを比較する工程、及び
（ｃ）下記基準（Ａ）及び（Ｂ）を満たした場合に、該がん患者を有効群として判定する工程：
（Ａ）上記測定した遺伝子が、PDGFB遺伝子又はJMJD2A遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも高いこと、及び
（Ｂ）上記測定した遺伝子が、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、又はERLIN1遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも低いことを基準とする。【００１７】
項１−２．  工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、
（ｉ）PDGFB遺伝子、又は
（ｉｉ）PDGFB遺伝子、並びにPCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子であることを特徴とする、項１に記載の方法。【００１８】
項２．  工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子、並びにCISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種であることを特徴とする、項１又は項１−２に記載の方法。【００１９】
項３．  工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、及びPLK2遺伝子であることを特徴とする、項１〜２に記載の方法。【００２０】
項４．  前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、項１〜３のいずれかに記載の方法。【００２１】
項５．  前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、項１〜３のいずれかに記載の方法。【００２２】
項６．  前記がんが胃がんである、項１〜５のいずれかに記載の方法。【００２３】
項７．  配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーを含む、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬。【００２４】
項７−２．  プローブ又はプライマーが、
（Ｉ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー、又は
（ＩＩ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー及び
配列番号２〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーである、
項７に記載の試薬。【００２５】
項８．  配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体を含む、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬。【００２６】
項８−２．  抗体が、
（ＩＩＩ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体、又は
（ＩＶ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体及び、配列番号１７〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体である、
項８に記載の試薬。【００２７】
項９．  前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、項７又は８のいずれかに記載の試薬。【００２８】
項１０．  前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、項７又は８のいずれかに記載の試薬。【００２９】
項１１．  前記がんが胃がんである、項７〜１０のいずれかに記載の試薬。【００３０】
項１２．  配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーの、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための使用。【００３１】
項１３．  配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーの、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬としての使用。【００３２】
項１４．  配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーの、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬の製造のための使用。【００３３】
項１５．  配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体の、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するため使用。【００３４】
項１６．  配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体の、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬としての使用。【００３５】
項１７．  配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体の、
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬の製造のための使用。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によれば、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を、高確率で選別することができる。さらに、PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子、並びにCISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現量を指標とすることによって、より高確率で有効群を選別することができる。又更には、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、及びPLK2遺伝子の発現量を指標とすることによって、更に高確率で有効群を選別することができる。有効群として選別された患者に対しては、積極的にタキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療を行うことができ、該患者のがんの回復につなげることができる。【００３７】
また、有効群として選別されなかった患者群、すなわち非有効群に対しては、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療を積極的に行わず、該患者群に対してより有効な、別の治療法を行うことができる。このことは、抗がん剤の投与によって生じ得る副作用を低減するとともに、不必要（無効）な治療を行うことによって生じる治療費用の高額化を低減するという両面において有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】：PDGFB遺伝子、CISH遺伝子、ANTXR2遺伝子、PLK2遺伝子、及びEGR1遺伝子について、有効群と非有効群における発現量の違いを、免疫染色によって調べた実験結果である。
【００３９】
【図２】：がん治療の有効群選別マーカーとしての有用性を検討した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
（１）本発明の選別方法
本発明の選別方法は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法であり、後述の工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）を含むものである。
【００４１】
（１−１）本発明の選別方法による選別の対象
本発明の選別方法による選別の対象は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群である。
【００４２】
がん種は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療を行うことができるがん種である限り特に限定されるものではないが、例えば、胃がん、肝がん、結腸・直腸がん、乳がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮体がん、卵巣がん、食道がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、胆道がん、胆管がん、前立腺がん等が挙げられる。これらの中でも、本発明の選別方法の正確性の観点から、胃がん、食道がん、頭頸部がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、及び子宮頸がんが好ましく、胃がん、食道がん、頭頸部がん、乳がん、及び肺がんがより好ましく、胃がんが特に好ましい。また、がんの進行度としては、好ましくはステージIII以上の進行度に分類されるがん、より好ましくはステージIVに分類されるがんが挙げられる。
【００４３】
治療方法は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療方法である。
【００４４】
タキサン系抗がん剤としては、ドセタキセル、パクリタキセル（タキソール）、タキサジエン、バッカチンIII、タクスチニンＡ、ブレビフォリオール、及びタキサスパインＤ等が挙げられ、本発明の選別方法の正確性の観点からは、ドセタキセル、又はパクリタキセルが好ましく、ドセタキセルがより好ましい。タキサン系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００４５】
白金錯体系抗がん剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、及びオキサリプラチンが挙げられ、本発明の選別方法の正確性の観点からは、シスプラチンが好ましい。白金錯体系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００４６】
フッ化ピリミジン系抗がん剤としては、テガフール、フルオロウラシル、及びフルシトシン等が挙げられ、本発明の選別方法の正確性の観点からは、テガフール又はフルオロウラシルが好ましく、テガフールがより好ましい。フッ化ピリミジン系抗がん剤としてテガフールを用いる場合は、さらにギメラシル及びオテラシルカリウムも併用することが好ましく、特にテガフール：ギメラシル：オテラシルカリウムのモル比が、例えば０．５〜２：０．２〜０．８：０．５〜２で配合された製剤、特に好ましくは１：０．４：１で配合された製剤が好ましい。フッ化ピリミジン系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００４７】
併用したがん治療の治療態様としては、フッ化ピリミジン系抗がん剤、タキサン系抗がん剤、及び白金錯体系抗がん剤全てを投与する治療態様として公知の方法であれば特に限定されないが、通常、１〜４週間程度の治療スケジュールを１コースとして、該コースを複数回繰り返して行う。該治療スケジュールは、本発明の選別方法の正確性の観点から、フッ化ピリミジン系抗がん剤を一定期間、好ましくは７日〜２８日、より好ましくは１０〜２１日、さらに好ましくは１２〜１６日の間毎日投与した後、一定期間、好ましくは４〜１０日、より好ましくは６〜８日の抗がん剤非投与期間を設け、フッ化ピリミジン系抗がん剤の投与期間のうちのいずれか１日にタキサン系抗がん剤及び白金錯体系抗がん剤を投与するというスケジュールが挙げられる。
【００４８】
本発明の選別方法によって選別する対象は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用した治療方法が有効な患者群である。より具体的には、実際に上記３種の抗がん剤の併用治療を行った場合に、好ましくは上記治療のコースを複数回繰り返して行った場合に、がん部の縮小、又はがんのダウンステージが認められる患者群である。有効群は、より好ましくは実際に上記治療のコースを１回行った場合の腫瘍縮小率が３％以上、更に好ましくは６％以上、特に好ましくは１０％以上である患者群である。
【００４９】
（１−２）工程（ａ）
本発明の工程（ａ）は、がん患者のがん組織を含む生体試料中の、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子の発現産物の量を測定する工程である。
【００５０】
生体試料は、がん患者のがん組織を含むものであれば特に限定されず、がん種に応じて、体液（血液、尿など）、組織、その抽出物及び採取した組織の培養物などが挙げられる。また、生体試料の採取方法は、生体試料の種類やがん種に応じた方法により適宜選択することができる。
【００５１】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子である。
【００５２】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、好ましくは、
（ｉ）PDGFB遺伝子、又は
（ｉｉ）PDGFB遺伝子、並びにPCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子が挙げられる。
【００５３】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、より好ましくは、
（ｉｉｉ）PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子、又は
（ｉｖ）PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子、並びにCISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子が挙げられる。
【００５４】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、さらに好ましくは、
（ｖ）PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、及びCISH遺伝子、又は
（ｖｉ）PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、及びCISH遺伝子、並びにANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子が挙げられる。
【００５５】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、よりさらに好ましくは、
（ｖｉｉ）PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、及びANXA5遺伝子、又は
（ｖｉｉｉ）PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、及びANXA5遺伝子、並びにANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子が挙げられる。
【００５６】
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、更により好ましくは、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、及びPLK2遺伝子である
工程（ａ）において測定する遺伝子は、本発明の選別方法の正確性の観点から、特に好ましくは、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子である。
【００５７】
これらの遺伝子の正式な遺伝子名、遺伝子シンボル、及びこれらの遺伝子の塩基配列を示した配列番号（配列番号１〜１５）、アミノ酸配列を示した配列番号（配列番号１６〜３０）を下記表１に示す。
【００５８】
【表１】
2012121324.tif 000002
【００５９】
測定される遺伝子の発現産物は、測定される遺伝子の遺伝子配列から転写されたmRNA、又は該mRNAから翻訳されたタンパク質である。
【００６０】
遺伝子の発現産物の測定方法は、mRNA又はタンパク質の量を定量できる測定方法であれば特に限定されず、公知の測定方法を使用することができる。このような測定方法としては、mRNAの量を測定する場合は、例えばPCR法、RT-PCR法、ノーザンブロット法、in situ ハイブリダイゼーション法、マイクロアレイ法等が挙げられ、タンパク質量を測定する場合は、例えばウェスタンブロット法、免疫染色法等が挙げられる。生体試料は、これらの測定方法に応じて、適切な処理をされることにより調製される。遺伝子発現産物の測定方法においては、プライマー、プローブ、又は抗体を含む試薬として、後述される本発明に係る試薬を用いることが出来る。
【００６１】
（１−３）工程（ｂ）
本発明の工程（ｂ）は、上記工程（ａ）で得られた発現産物の量（以下、総称して「遺伝子発現量」という）と、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の非有効群における対応の遺伝子発現産物の量（以下、総称して「対照の遺伝子発現量」という）とを比較する工程である。
【００６２】
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の非有効群とは、上記３種を併用した治療方法が有効ではないことが既知の患者群である。より具体的には、前述の治療コースを複数回繰り返して行った結果、がん部の縮小、又はがんのダウンステージが認められなかった患者群である。非有効群は、より好ましくは前述の治療コースを１回行った結果、腫瘍縮小率が３％未満、更に好ましくは６％未満、特に好ましくは１０％未満であった患者群である。
【００６３】
非有効群における対応の遺伝子発現産物の量とは、前述工程（ａ）で測定した遺伝子と同一の遺伝子の、非有効群における発現産物の量である。すなわち、工程（ａ）において測定した遺伝子の発現産物の量が、PDGFB遺伝子の発現産物の量である場合は、対応の遺伝子発現産物の量とは、非有効群であることが既知のがん患者のがん組織を含む生体試料におけるPDGFB遺伝子の発現産物の量である。
【００６４】
比較方法は、遺伝子発現産物の量が比較できる方法であれば特に限定されず、遺伝子発現産物の測定方法に応じて適宜選択できる。
【００６５】
（１−３）工程（ｃ）
本発明の工程（ｃ）は、下記基準（Ａ）及び（Ｂ）を満たした場合に、該がん患者を有効群として判定する工程である。
【００６６】
基準（Ａ）とは、上記測定した遺伝子が、PDGFB遺伝子又はJMJD2A遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも高いことである。
【００６７】
基準（Ｂ）とは、上記測定した遺伝子が、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、又はERLIN1遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも低いことである。
【００６８】
例えば、工程（ａ）で発現産物の量を測定した遺伝子が、PDGFB遺伝子及びPCGF3遺伝子である場合は、工程（ｃ）は、PDGFB遺伝子の遺伝子発現量が、PDGFB遺伝子の対照の遺伝子発現量よりも高く、かつPCGF3遺伝子の遺伝子発現量が、PCGF3遺伝子の対照の遺伝子発現量よりも低い場合に、被検がん患者を有効群として判定する工程である。
【００６９】
発現量の高低の判断方法は、測定方法及び／又は比較方法に準じて適宜選択される。
【００７０】
（２）本発明の試薬
本発明の試薬は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬であり、後述のように、プライマー又はプローブを含む試薬、又は抗体を含む試薬に分けられる。
【００７１】
（２−１）試薬の用途
本発明の試薬の用途は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を判定するためである。すなわち、本発明の試薬は、被検患者が、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群であるか、又は非有効群であるかを判定するために用いられるものである。効果の判定は、本発明の試薬を、上述の本発明の選別方法に使用することによって行うことができる。
【００７２】
がん種は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療を行うことができるがん種である限り特に限定されるものではないが、例えば、胃がん、肝がん、結腸・直腸がん、乳がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮体がん、卵巣がん、食道がん、肺がん、頭頸部がん、乳がん、胆道がん、胆管がん、前立腺がん等が挙げられる。これらの中でも、胃がん、食道がん、頭頸部がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、及び子宮頸がんが好ましく、胃がん、食道がん、頭頸部がん、乳がん、及び肺がんがより好ましく、胃がんが特に好ましい。また、がんの進行度としては、好ましくはステージII以上の進行度に分類されるがん、より好ましくはステージIII以上の進行度に分類されるがん、更に好ましくはステージIVに分類されるがんが挙げられる。
【００７３】
治療方法は、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療方法である。
【００７４】
タキサン系抗がん剤としては、ドセタキセル、パクリタキセル（タキソール）、タキサジエン、バッカチンIII、タクスチニンＡ、ブレビフォリオール、及びタキサスパインＤ等が挙げられ、ドセタキセル、又はパクリタキセルが好ましく、ドセタキセルがより好ましい。タキサン系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００７５】
白金錯体系抗がん剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、及びオキサリプラチンが挙げられ、シスプラチンが好ましい。白金錯体系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００７６】
フッ化ピリミジン系抗がん剤としては、テガフール、フルオロウラシル、及びフルシトシン等が挙げられ、テガフール又はフルオロウラシルが好ましく、テガフールがより好ましい。フッ化ピリミジン系抗がん剤としてテガフールを用いる場合は、さらにギメラシル及びオテラシルカリウムも併用することが好ましく、特にテガフール：ギメラシル：オテラシルカリウムのモル比が、例えば０．５〜２：０．２〜０．８：０．５〜２で配合された製剤、特に好ましくは１：０．４：１で配合された製剤が好ましい。フッ化ピリミジン系抗がん剤の投与量は、一日当り、例えば10〜200 mg/m2、好ましくは20〜120 mg/m2、より好ましくは40〜100 mg/m2が挙げられる。なお、「mg/m2」という単位は、体表面積1 m2当りの投与量を示す。
【００７７】
併用したがん治療の治療態様としては、フッ化ピリミジン系抗がん剤、タキサン系抗がん剤、及び白金錯体系抗がん剤全てを投与する治療態様として公知の方法であれば特に限定されないが、通常、１〜４週間程度の治療スケジュールを１コースとして、該コースを複数回繰り返して行う。該治療スケジュールは、本発明の選別方法の正確性の観点から、フッ化ピリミジン系抗がん剤を一定期間、好ましくは７日〜２８日、より好ましくは１０〜２１日、さらに好ましくは１２〜１６日の間毎日投与した後、一定期間、好ましくは４〜１０日、より好ましくは６〜８日の抗がん剤非投与期間を設け、フッ化ピリミジン系抗がん剤の投与期間の中間（該投与期間が１４日の場合は、好ましくは５〜１１日目のいずれか１日、好ましくは７〜９日目のいずれか１日）にタキサン系抗がん剤及び白金錯体系抗がん剤を投与するというスケジュールが挙げられる。
【００７８】
（２−２）プライマー又はプローブを含む試薬
本発明のプライマー又はプローブを含む試薬は、配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチド（但し、当該ポリヌクレオチドがＲＮＡの場合は、配列中の塩基「ｔ」は「ｕ」に読み替えられるものとする）からなるプローブ又はプライマーを含む試薬である。
【００７９】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーの配列としては、配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるものであれば特に限定されるものではない。
【００８０】
かかるポリヌクレオチドは、配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列内の、少なくとも１５塩基長〜配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の全塩基長、好ましくは２０塩基長〜配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の全塩基長、より好ましくは３０塩基長〜配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の全塩基長の連続した塩基配列と、特異的にハイブリダイズするように、上記に対応する塩基長を有するポリヌクレオチドとして設計される。
【００８１】
特異的にハイブリダイズするとは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下において、特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されないことをいう。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、常法に従ってハイブリッドを形成する核酸の融解温度（Tm）などに基づいて決定することができる。具体的なハイブリダイズ状態を維持できる洗浄条件として通常「1×SSC、0.1%SDS、37℃」程度の条件、より厳格には「0.5×SSC、0.1%SDS、42℃」程度の条件、さらに厳格には「0.1×SSC、0.1%SDS、65℃」程度の条件が挙げられる。
【００８２】
なおポリヌクレオチドは、配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の少なくとも１５塩基長の連続する塩基配列に対して相補的な塩基配列を有することが好ましいが、上記特異的なハイブリダイゼーションが可能であれば、完全に相補的である必要はない。かかるポリヌクレオチドとして、好ましくは配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列において連続する少なくとも１５塩基以上の塩基配列からなるポリヌクレオチド又はその相補ポリヌクレオチドと比較して、塩基配列において７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９８％以上の同一性を有するポリヌクレオチドである。ここで、塩基配列の同一性は、同一性検索、配列アラインメントプログラム、BLAST、FASTA、ClustalWなどにて計算することができる。
【００８３】
なお、これらのポリヌクレオチドは、配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の全塩基長に基づいて、例えば市販のヌクレオチド合成機によって常法に従って作製することができる。また配列番号１〜１５のいずれかに示される塩基配列の全塩基長を鋳型としてPCR法によって調製することもできる。
【００８４】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとしては、好ましくは、
（Ｉ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー（以下、「配列番号１を認識するプローブ又はプライマー」というように表現することもある）、又は
（ＩＩ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー及び
配列番号２〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー
が挙げられる。
【００８５】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとして、より好ましくは、
（Ｖ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、又は
（ＶＩ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、並びに配列番号３〜１５のいずれかを認識するプローブ又はプライマー
が挙げられる。
【００８６】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとして、さらに好ましくは、
（ＶＩＩ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、又は
（ＶＩＩＩ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、並びに配列番号４〜１５のいずれかを認識するプローブ又はプライマー
が挙げられる。
【００８７】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとして、よりさらに好ましくは、
（ＩＸ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号４を認識するプローブ又はプライマー、又は
（Ｘ）配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号４を認識するプローブ又はプライマー、並びに配列番号５〜１５のいずれかを認識するプローブ又はプライマー
が挙げられる。
【００８８】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとして、さらにより好ましくは、配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、配列番号４を認識するプローブ又はプライマー、配列番号５を認識するプローブ又はプライマー、配列番号６を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号７を認識するプローブ又はプライマーが挙げられる。
【００８９】
試薬に含まれるプローブ又はプライマーとして、特に好ましくは、配列番号１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号２を認識するプローブ又はプライマー、配列番号３を認識するプローブ又はプライマー、配列番号４を認識するプローブ又はプライマー、配列番号５を認識するプローブ又はプライマー、配列番号６を認識するプローブ又はプライマー、配列番号７を認識するプローブ又はプライマー、配列番号８を認識するプローブ又はプライマー、配列番号９を認識するプローブ又はプライマー、配列番号１０を認識するプローブ又はプライマー、配列番号１１を認識するプローブ又はプライマー、配列番号１２を認識するプローブ又はプライマー、配列番号１３を認識するプローブ又はプライマー、配列番号１４を認識するプローブ又はプライマー、及び配列番号１５を認識するプローブ又はプライマーが挙げられる。
【００９０】
本発明のプライマー又はプローブを含む試薬は、非標識または標識された上記ポリヌクレオチドからなるプライマー又はプローブを少なくとも１つ含むものである。また、プライマー又はプローブの他、必要に応じてハイブリダイゼーション用の試薬、緩衝液など、前述の本発明の選別方法における遺伝子の発現産物の測定に必要な他の試薬などを適宜含んでいてもよい。
【００９１】
（２−３）抗体を含む試薬
本発明の抗体を含む試薬は、配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体を含む試薬である。
【００９２】
本発明で用いられる抗体は、配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識し、検出できるものであれば制限されず、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のいずれであってもよい。検出できるとは、具体的には、公知のタンパク質検出方法でタンパク質の存在を検出できること、好ましくはウェスタンブロッティング、又は免疫染色法により、タンパク質の存在を検出できることを意味する。また抗体は、配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを免疫抗原として調製される抗体であっても、また配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを構成するアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体であってもよい。かかるポリペプチドは、配列番号１６〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列やそれをコードする塩基配列に基づき、通常、公知の方法で合成することができる。例えば、アミノ酸合成機による化学的合成手法や、遺伝子工学的手法を挙げることができる。
【００９３】
本発明に係る抗体は、常法に従って製造することができる（例えば、Current protocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987), Publish. John Wiley and Sons. Section 11.12-11.13）。例えば、ポリクローナル抗体の場合は、常法に従って大腸菌で発現し精製した上記ポリペプチドを用いて、或いは常法に従ってこれらの部分アミノ酸配列を有するよう合成したポリペプチドを用いて、実験動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、例えばモノクローナル抗体の場合は、常法に従って大腸菌等で発現し精製した上記ポリヌクレオチドを用いて、或いは常法に従ってこれらの部分アミノ酸配列を有するよう合成したポリペプチドを用いて、実験動物に免疫し、該実験動物から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマ細胞を合成し、該細胞中から得ることができる。
【００９４】
試薬に含まれる抗体としては、好ましくは
（ＩＩＩ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体（以下、「配列番号１６を認識する抗体」というように表現することもある）、又は
（ＩＶ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体及び、
配列番号１７〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体
が挙げられる。
【００９５】
試薬に含まれる抗体として、より好ましくは、
（ＸＩ）配列番号１６を認識する抗体、及び配列番号１７を認識する抗体、又は
（ＸＩＩ）配列番号１６を認識する抗体、及び配列番号１７を認識する抗体、並びに配列番号１８〜３０のいずれかを認識する抗体
が挙げられる。
【００９６】
試薬に含まれる抗体として、さらに好ましくは、
（ＸＩＩＩ）配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、及び配列番号１８を認識する抗体、又は
（ＸＩＶ）配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、及び配列番号１８を認識する抗体、並びに配列番号１９〜３０のいずれかを認識する抗体
が挙げられる。
【００９７】
試薬に含まれる抗体として、よりさらに好ましくは、
（ＸＶ）配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、配列番号１８を認識する抗体、及び配列番号１９を認識する抗体、又は
（ＸＶＩ）配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、配列番号１８を認識する抗体、及び配列番号１９を認識する抗体、並びに配列番号２０〜３０のいずれかを認識する抗体
が挙げられる。
【００９８】
試薬に含まれる抗体として、さらにより好ましくは、配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、配列番号１８を認識する抗体、配列番号１９を認識する抗体、配列番号２０を認識する抗体、配列番号２１を認識する抗体、及び配列番号２２を認識する抗体が挙げられる。
【００９９】
試薬に含まれる抗体として、特に好ましくは、配列番号１６を認識する抗体、配列番号１７を認識する抗体、配列番号１８を認識する抗体、配列番号１９を認識する抗体、配列番号２０を認識する抗体、配列番号２１を認識する抗体、配列番号２２を認識する抗体、配列番号２３を認識する抗体、配列番号２４を認識する抗体、配列番号２５を認識する抗体、配列番号２６を認識する抗体、配列番号２７を認識する抗体、配列番号２８を認識する抗体、配列番号２９を認識する抗体、及び配列番号３０を認識する抗体が挙げられる。
【０１００】
本発明の抗体を含む試薬は、非標識または標識された上記抗体を少なくとも１つ含むものである。また、抗体の他、必要に応じて抗原抗体反応用の試薬、緩衝液など、前述の本発明の選別方法における遺伝子の発現産物の測定に必要な他の試薬などを適宜含んでいてもよい。
【実施例】
【０１０１】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。【０１０２】
１．有効群と非有効群の分類
ステージＩＩＩ又はステージＩＶに分類される胃がんの患者２０人に対して、抗がん剤としてドセタキセル、シスプラチン、及びテガフールの３種を併用する治療を行い、該治療の有効群及び非有効群の分類を行った。【０１０３】
治療を行った患者の年齢、性別、及びがんの進行度は下記表２の通りである。【０１０４】
【表２】
2012121324.tif 000003
【０１０５】
治療は、患者に対してフッ化ピリミジン系抗がん剤であるテガフール、ギメラシル（テガフールがフルオロウラシル以外に代謝されることを防ぐ作用を有する）、及びオテラシルカリウム（フルオロウラシルの消化器毒性を軽減する作用を有する）をモル比１：０．４：１で含む抗がん剤TS-1（大鵬薬品工業）（80 mg/m2）を、２週間経口内服させ、該内服期間の８日目にタキサン系抗がん剤であるドセタキセル（60 mg/m2）、及び白金錯体系抗がん剤であるシスプラチン（60 mg/m2）を点滴投与し、上記２週間の内服期間の後に１週間の抗がん剤非投与期間を設ける、計３週間の治療スケジュールによって行った。【０１０６】
上記３週間の治療スケジュール終了後、転移巣をコンピュータ断層撮影法(Computed Tomography)によって撮影し、転移巣の腫瘍の長径を測定した。上記治療前に測定した転移巣の長径と、治療後に測定した転移巣の長径とを比較し、腫瘍縮小率（治療後の転移巣の長径／治療前の転移巣の長径）を求めた。【０１０７】
上記３週間の治療スケジュールによる腫瘍縮小率が、１０％以上の患者を有効群に分類し、１０％未満の患者を非有効群に分類した。結果を上記表２に示す。患者番号１〜１１の患者が有効群に分類され、患者番号１２〜１９の患者が非有効群に分類された。【０１０８】
２．有効群と非有効群との間の遺伝子発現の相違の解析
上記「１．有効群と非有効群の分類」において分類された有効群と非有効群との間の遺伝子発現の相違を解析するために、有効群及び非有効群それぞれに属する患者の胃がん組織における遺伝子発現量を、マイクロアレイ法、及び免疫染色法により解析した。【０１０９】
２−１．マイクロアレイ法
（１）治療前に上部消化管内視鏡検査を行い、胃癌組織を生検採取し、すぐに凍結保存する
（２）新鮮凍結薄切切片を作成し、マイクロダイセクション法により胃癌細胞または正常腺管のみを採取する
（３）採取した組織より常法に従いRNAを抽出する
（４）reverse transcriptaseによりRNAよりcDNAを作成する
（５）cDNAを断片化して蛍光色素Cy3で標識する
（６）41000個の全ヒトゲノムを搭載しているDNA チップとハイブリダイゼーションを行う
（７）DNA チップをスキャンしてイメージ画像を作成し、定量化した。【０１１０】
マイクロアレイの結果より、有効群と非有効群との間の遺伝子発現量の差を調べ、t検定により両群間で有意に異なる遺伝子２９個を選択した。このうち、有効群または非有効群において絶対的発現量が高い遺伝子、つまり染色で容易に同定しうることが予想される遺伝子１５個を選択した。【０１１１】
これら１５個の遺伝子は、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、JMJD2A遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子である。【０１１２】
これら１５個の遺伝子についてのマイクロアレイのデータを表３に示す。表中、数値は遺伝子発現量を示す。この結果より、PDGFB遺伝子及びJMJD2A遺伝子については、有効群における発現量が、非有効群における発現量よりも高い傾向にあることが明らかとなった。また、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、ANXA5遺伝子、ANTXR2遺伝子、B4GALT5遺伝子、PLK2遺伝子、ATP7B遺伝子、FAM116A遺伝子、HECA遺伝子、STYX遺伝子、EGR1遺伝子、AVPI1遺伝子、及びERLIN1遺伝子については、有効群における発現量が、非有効群における発現量よりも低い傾向にあることが明らかとなった。【０１１３】
【表３】
2012121324.tif 000004
【０１１４】
２−２．免疫染色法
次に、mRNAの上記発現傾向が、タンパク質レベルでも見られるか否かを免疫染色法で評価した。【０１１５】
有効群と非有効群とでタンパク質の発現量を比較した遺伝子は、PDGFB遺伝子、CISH遺伝子、ANTXR2遺伝子、PLK2遺伝子、EGR1遺伝子、ATP7B遺伝子、及びHECA遺伝子である。【０１１６】
免疫染色は、ストレプトアビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼ法により行った。すなわち、胃癌組織のフォルマリン固定標本より2μmの薄切切片を作成し、アルコールにより脱パラフィン処理をしたのち、0.3%H2O2で内因性ペルオキシダーゼを不活性化した。0.01Mクエン酸バッファーに浸して95℃15分間抗原賦活処理をしたのち、一次抗体を添加し、4℃一昼夜反応させた。スライドをリン酸バッファー(PBS)で十分洗浄したのち、ビオチン化二次抗体を反応させ、ペルオキシダーゼ・ストレプトアビジンと反応させた後 Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)を加えて発色した。【０１１７】
結果を図１に示す。この結果より、PDGFB遺伝子については、有効群における発現量が、非有効群における発現量よりも高い傾向にあることが明らかとなった。また、CISH遺伝子、ANTXR2遺伝子、PLK2遺伝子、EGR1遺伝子、ATP7B遺伝子、及びHECA遺伝子については、有効群における発現量が、非有効群における発現量よりも低い傾向にあることが明らかとなった。【０１１８】
３．各遺伝子の発現量を指標とした選別方法の正確性
上記１５遺伝子の発現量指標として、leave-one-out cross-validation法、N-fold法により、上記「１．有効群と非有効群の分類」で有効群か非有効群かを分類した患者群のそれぞれの患者が、有効群であるか又は非有効群であるかの予測を行った。【０１１９】
Leave-one-out cross validationは、まず全症例19例から1症例を抽出し、残りの18症例のデータから１症例が有効か非有効かの予測スコアを作成する。この作業をそれぞれの症例について合計19回行い、全予測スコアから効果予測を行うものである。【０１２０】
N-fold法は、全19症例をランダムにN群(N= 2-19)に分け、その中から1例をテストデータとして取り出し、残りのN-1例から有効か非有効かの予測スコアを作成する。この作業をN回繰り返し、全予測スコアから効果予測を行うものである。【０１２１】
結果を下記表４に示す。【０１２２】
【表４】
2012121324.tif 000005
【０１２３】
この結果より、上記１５遺伝子のほぼ全てについて、一つの遺伝子の発現量を指標とすることにより、有効群であるか非有効群であるかを約７０％以上の高い正確性で選別できることが明らかとなった。また、PDGFB及びPCGF3の発現量を指標とすることにより、より正確に選別できることが明らかとなった。さらに、PDGFB 及びPCGF3と、別の遺伝子を組み合わせた遺伝子群の発現量を指標とすることにより、約９５％という、極めて高い正確性で、選別できることが明らかとなった。【０１２４】
４．がん治療の有効群選別マーカーとしての有用性の検討
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群選別マーカーとしての、上記実験により見出された遺伝子の有用性を検討した。【０１２５】
具体的には、細胞中のPDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、又はANXA5遺伝子の遺伝子発現をsiRNAを用いてノックダウンし、該細胞の、フッ化ピリミジン系抗がん剤又はタキサン系抗がん剤に対する薬剤感受性の変化を検討した。【０１２６】
上記実験においては、PDGFB遺伝子の発現量は有効群において非有効群よりも高い傾向にあることが見出されている。従って、細胞中のPDGFB遺伝子をノックダウンすることにより、該細胞は人為的に非有効群（薬剤感受性が低い群）になることが予測される。【０１２７】
一方、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、又はANXA5遺伝子の発現量は、有効群において非有効群よりも低い傾向にあることが見出されている。従って、細胞中のPCGF3遺伝子、CISH遺伝子、又はANXA5遺伝子をノックダウンすることにより、該細胞は人為的に有効群（薬剤感受性が高い群）になることが予測される。【０１２８】
実験の詳細を以下に示す。【０１２９】
ヒト培養胃癌細胞株MKN45を用いて、PDGFB遺伝子、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、又はANXA5遺伝子に対するsiRNAを用いてこれらの遺伝子をノックダウンした。用いたsiRNA配列は下記表５の通りである。【０１３０】
【表５】
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【０１３１】
具体的には、MKN45細胞を96穴プレートに1.5×10/wellずつ培養し、トランスフェクション試薬としてsiPORT Amine 0.45μl、siRNA を30μM(/100μl OptiMEM培地)となるように添加してトランスフェクションを行った。６時間37℃ 5%CO2の条件下で培養後、培養液を、Fetal calf serum(FCS)を10%の濃度になるように加えたRPMI1640 に交換し、5-FU(TS-1は生体内で代謝され最終的に活性体である5-FUになる), ドセタキセル, またはシスプラチンを添加し、さらに48時間培養した後 MTT assayを行った。5-FU (TS-1の最終活性物質)は、終濃度がそれぞれ0 μM, 7.8μM, 15.6μM, 31.3μM, 62.5μM, 125μM, 250μM, 500μM, 又は1000μMになるように、ドセタキセルは0pM, 0.61pM, 2.44pM, 9.77pM, 39.0pM, 156pM, 525pM, 2500pM, 又は10000pMになるように、シスプラチンは0μM, 0.0240μM, 0.0980μM, 0.390μM, 1.560μM, 6.250μM, 250μM, 1000μM, 又は4000μMになるように添加した。【０１３２】
MTT assayにより得られたcell viabilityを、薬剤を加えないコントロール細胞を100％として算出した。各遺伝子のノックダウンにより変化した薬剤の結果を図２に示す。コントロール細胞には、同じ濃度のランダムsiRNAを加えたMKN45細胞を用いた。薬剤を加えない場合のcell viabilityに対して、50％のviabilityになる薬剤濃度をIC50として図２に示す。【０１３３】
図２より、ANXA5遺伝子をノックダウンした細胞では、5-FUに対する感受性が高まり、CISH遺伝子をノックダウンした細胞においても同様に5-FUに対する感受性が亢進した。また、PCGF3遺伝子をノックダウンした細胞ではドセタキセルに対する感受性が亢進した。一方、PDGFB遺伝子をノックダウンした細胞では5-FUに対する感受性が低下した。他の薬剤に対する感受性の変化は認められなかった。これらの結果は、上記した当初の予測に合致するものであった。すなわち、PDGFB遺伝子は、PCGF3遺伝子、CISH遺伝子、又はANXA5遺伝子は、がん治療の有効群選別マーカーとして有効であることが分かった。
【図１】
2012121324.tif 000007
【図２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成24年7月3日(2012.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）を含む、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の有効群を選別する方法：
（ａ）がん患者のがん組織を含む生体試料中の、
（ｉ）ＰＤＧＦＢ遺伝子、又は
（ｉｉ）ＰＤＧＦＢ遺伝子、並びにＰＣＧＦ３遺伝子、ＣＩＳＨ遺伝子、ＡＮＸＡ５遺伝子、ＡＮＴＸＲ２遺伝子、Ｂ４ＧＡＬＴ５遺伝子、ＰＬＫ２遺伝子、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子、ＦＡＭ１１６Ａ遺伝子、ＨＥＣＡ遺伝子、ＪＭＪＤ２Ａ遺伝子、ＳＴＹＸ遺伝子、ＥＧＲ１遺伝子、ＡＶＰＩ１遺伝子、及びＥＲＬＩＮ１遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種の遺伝子
の発現産物の量を測定する工程、
（ｂ）上記工程（ａ）で得られた発現産物の量（以下、総称して「遺伝子発現量」という）と、タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の非有効群における対応の遺伝子発現産物の量（以下、総称して「対照の遺伝子発現量」という）とを比較する工程、及び
（ｃ）下記基準（Ａ）及び／又は（Ｂ）を満たした場合に、該がん患者を有効群として判定する工程：
（Ａ）上記測定した遺伝子が、ＰＤＧＦＢ遺伝子又はＪＭＪＤ２Ａ遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも高いこと、及び／又は
（Ｂ）上記測定した遺伝子が、ＰＣＧＦ３遺伝子、ＣＩＳＨ遺伝子、ＡＮＸＡ５遺伝子、ＡＮＴＸＲ２遺伝子、Ｂ４ＧＡＬＴ５遺伝子、ＰＬＫ２遺伝子、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子、ＦＡＭ１１６Ａ遺伝子、ＨＥＣＡ遺伝子、ＳＴＹＸ遺伝子、ＥＧＲ１遺伝子、ＡＶＰＩ１遺伝子、又はＥＲＬＩＮ１遺伝子である場合は、遺伝子発現量が対照の遺伝子発現量よりも低いことを基準とする。
【請求項２】
工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、ＰＤＧＦＢ遺伝子及びＰＣＧＦ３遺伝子、並びにＣＩＳＨ遺伝子、ＡＮＸＡ５遺伝子、ＡＮＴＸＲ２遺伝子、Ｂ４ＧＡＬＴ５遺伝子、ＰＬＫ２遺伝子、ＡＴＰ７Ｂ遺伝子、ＦＡＭ１１６Ａ遺伝子、ＨＥＣＡ遺伝子、ＪＭＪＤ２Ａ遺伝子、ＳＴＹＸ遺伝子、ＥＧＲ１遺伝子、ＡＶＰＩ１遺伝子、及びＥＲＬＩＮ１遺伝子からなる群から選択される少なくとも１種であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）において発現産物の量を測定する遺伝子が、ＰＤＧＦＢ遺伝子、ＰＣＧＦ３遺伝子、ＣＩＳＨ遺伝子、ＡＮＸＡ５遺伝子、ＡＮＴＸＲ２遺伝子、Ｂ４ＧＡＬＴ５遺伝子、及びＰＬＫ２遺伝子であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記がんが胃がんである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬であって、
（Ｉ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマー、又は
（ＩＩ）配列番号１に示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーと
配列番号２〜１５のいずれかに示される塩基配列内の少なくとも１５塩基長の連続した塩基配列と特異的にハイブリダイズする、１５塩基長以上の塩基配列を有するポリヌクレオチドからなるプローブ又はプライマーとを含む
試薬。
【請求項８】
タキサン系抗がん剤、白金錯体系抗がん剤、及びフッ化ピリミジン系抗がん剤の３種を併用したがん治療の効果を予測するための試薬であって、
（ＩＩＩ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体、又は
（ＩＶ）配列番号１６に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体と、
配列番号１７〜３０のいずれかに示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを認識する抗体とを含む
試薬。
【請求項９】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、又は前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項７又は８のいずれかに記載の試薬。
【請求項１０】
前記タキサン系抗がん剤がドセタキセルであること、前記白金錯体系抗がん剤がシスプラチンであること、及び前記フッ化ピリミジン系抗がん剤がテガフールであることを特徴とする、請求項７又は８のいずれかに記載の試薬。
【請求項１１】
前記がんが胃がんである、請求項７〜１０のいずれかに記載の試薬。
【国際調査報告】
2012121324.tif 000009
2012121324.tif 000010
2012121324.tif 000011