GB × × × ×—× × × × 
 
食品安全国家标准  
食品添加剂  β-胡萝卜素 （发酵法）  
（征求意见稿）  
 
 
 
2010 -×× -××发布  ×××× -×× -××实施  中华人民共和国国家标准  
中华人民共和国卫生部    发布    
 食品安全国家标准  
食品添加剂  β-胡萝卜素（发酵法）  
1 范围 
本标准适用于以 玉米淀粉、玉米浆、大豆蛋白、植物油 等为主要原料经丝状真菌三孢布拉霉
（Blakeslea Trispora ）发酵而生产的 食品添加剂 β-胡萝卜素。其主要成分为反式β-胡萝卜素，还有
少量顺式 β-胡萝卜素和微量的 其它类胡萝卜素。β-胡萝卜素产品可含有用于 加工、贮存、 标准化、
溶解等工艺 目的的辅料，如 抗氧化剂、 食用植物油、糊精、 明胶或淀粉 等添加剂或食品原料。这些
辅料在β-胡萝卜素所使用的终端食品中不发挥作用 。 
2 分子式、结构式、 相对分子质量  
2.1 分子式 
C40H56 
2.2 结构式 
        
2.3 相对分子质量  
536.88（按 2007年国际相对原子 质量） 
3 技术要求  
3.1 感官要求：应符合表 1 的规定。  
表1 感官要求  
项     目 要    求 检验方法  
色泽  暗红色至棕红色  取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然
光线下，观察其色泽和状态。  组织状态  结晶或结晶性粉末  
3.2 理化指标 ：应符合表 2的规定。  
 
GB × × × ×—× × × ×  
 表2 理化指标  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 项     目 指    标 检验方法  
总β-胡萝卜素 含量（以C40H56计），w/% ≥ 96.0 附录 A中A.3 
吸光度  
比值  A455/A483  1.14～1.19 
附录 A中A.4 A455/A340 ≥ 0.75 
灼烧残渣，w/% ≤ 0.2 附录 A中A.5 
乙醇，w/% 
≤ 0.8（单独或两者之和）  
附录 A中A.6 乙酸乙酯 ，w/% 
异丙醇，w/% ≤ 0.1 
乙酸异丁酯 ，w/% ≤ 1.0 
重金属（以Pb计）/（mg/kg） ≤ 10 GB/T 5009. 74 
砷（以As计）/（mg/kg） ≤ 3 GB/T 5009 .76 GB × × × ×—× × × ×  
 附 录 A 
检验方法  
A.1 一般规定  
标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T6682 —2008中规定的三级
水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按
GB/T601 、GB/T602 、GB/T603 的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶
液。  
A.2 鉴别试验  
A.2.1 溶解性试验 
A.2.1.1 试剂和材料  
A.2.1.1.1  乙醇。 
A.2.1.1.2  植物油。 
A.2.1.2 分析步骤  
室温下称取一定量的 样品分别加入 到一定量水、乙醇和植物油 中，摇动 0.5min~5min，观察样品
的溶解情况。 β-胡萝卜素几乎 不溶于水和乙醇 [（溶质 /溶剂）＜（1/10000）]，微溶于植物油 [（1/100）
＜（溶质 /溶剂）＜（1/1000）]。 
A.2.2 类胡萝卜素试验  
A.2.2.1 试剂和材料  
A.2.2.1.1  丙酮。 
A.2.2.1.2  5%亚硝酸钠溶液 : 称取 50g亚硝酸钠 ，加水溶解，稀释并定容至 1000mL。 
A.2.2.1.3  0.5mol/L硫酸溶液 。 
A.2.2.2 分析步骤  
称取一定量的 样品加丙酮溶解，样品的 丙酮溶液的颜色在连续滴加 5%亚硝酸钠溶液和 0.5mol/L
硫酸溶液后逐渐消失。  
A.3 总β-胡萝卜素含量的测定 
A.3.1 试剂和材料 
A.3.1.1 三氯甲烷 。 
A.3.1.2 环己烷。 
A.3.2 仪器和设备  
紫外 -可见分光光度计 。 
A.3.3 分析步骤  
A.3.3.1 溶液A制备 
准确称取 0.05g试样，精确至 0.000 1 g，置于 100 mL容量瓶中，加 三氯甲烷 10mL溶解试样，
用环己烷定容至刻度 。取此试样液 5.0mL于100mL棕色容量瓶中，用 环己烷定容至刻度， 摇匀，即
得。 GB × × × ×—× × × ×  
 A.3.3.2 溶液B制备 
    取溶液 A 5.0mL 于50mL棕色容量瓶中，用环己烷定容至刻度，摇匀，即得。  
A.3.3.3 测定 
将溶液 B置于 1 cm比色皿中， 以环己烷做空白对照 ，用紫外 -可见分光光度计在（ 455±2）nm
范围内的最大吸收波长处测定吸光度。 （吸光度应控制在 0.3~0.7之间，否则应调整试样液浓度，再
重新测定吸光度。 ）  
A.3.4 结果计算  
总β-胡萝卜素含量以β-胡萝卜素（C40H56）的质量分数 w1计，数值以 %表示，按公式（ A.1）计
算：  
 
              ………………………（ A.1） 
 
式中：  
A——实际测定试样液吸光度 的数值； 
c——被测试样液浓度 的数值，单位为克每毫升（ g/mL）； 
2500——β-胡萝卜素在环己烷中的百分 吸收系数 (E1%
1cm)。 
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的 两次独立测定结果的绝对
差值不得超过算术平均值的 1.5 %。 
A.4 吸光度比值的测定  
A.4.1 试剂和材料  
A.4.1.1 三氯甲烷 。 
A.4.1.2 环己烷。 
A.4.2 仪器和设备  
紫外 -可见分光光度计 。 
A.4.3 分析步骤  
A.4.3.1 样品溶液 的制备 
溶液 A制备同 A.3.3.1，溶液 B制备同 A.3.3.2。 
A.4.3.2 A455/A483的测定 
将溶液 B置于 1 cm比色皿中，以环己烷做空白对照， 在波长 455nm和波长 483nm处分别测定吸光
度(A)，A455/A483的比值应在 1.14～1.19之间。  
A.4.3.3 A455/A340的测定  
将溶液 B和溶液 A分别置于 1 cm比色皿中，以环己烷做空白对照， 在波长 455nm处测定溶液 B的吸
光度（ A455），在波长 340nm处测定溶液 A的吸光度（ A340）， A455/A340的比值应 不小于 0.75。 
A.5 灼烧残渣的测定  
A.5.1 试剂和材料  
A.5.1.1 硫酸。 
A.5.2 分析步骤  
25001 A
1cwGB × × × ×—× × × ×  
 称取约2g试样，精确至 0.0001g，置于已在800℃± 25℃灼烧至 恒重的坩埚中，用小火缓缓加热
至试样完全炭化， 放冷后，加约 1.0mL硫酸使其湿润，低温加热至硫酸蒸 汽除尽后，移入高温炉中，
在800℃± 25℃灼烧至恒重。  
A.5.3 结果计算  
灼烧残渣以质量分数 w2计，数值以 %表示，按 公式(A.2)计算： 
                     
100mm mw2 1
2   …………………………………(A. 2) 
式中：   
 m1 ——残渣和空坩埚质量的数值，单位为克（ g ）；  
m2 ——空坩埚质量的数值，单位为克（ g ）；  
 m ——称取的试样质量的数值 ，单位为克（ g）。  
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 ，二次平行测定结果的绝对差值不大于 0.05%。 
A.6 残留溶剂的测定  
A.6.1 试剂和材料 
A.6.1.1 乙醇。 
A.6.1.2 异丙醇。 
A.6.1.3 乙酸乙酯 。 
A.6.1.4 乙酸异丁酯 。 
A.6.1.5 N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)：色谱纯 。 
A.6.2 仪器和设备  
气相色谱仪 ，带氢火焰离子 检测器（FID）和顶空进样器。  
A.6.3 参考色谱条件  
A.6.3.1 色谱柱： DB-624毛细管柱， 30m× 0.53mm ，膜厚 3.0µ m；或其他等效的色谱柱。  
A.6.3.2 载气：氦气或氮气。  
A.6.3.3 载气流量： 4.8 mL/min 。 
A.6.3.4 进样口温度： 250℃。 
A.6.3.5 柱温： 50℃，以 1℃/min升至 60℃，再以 9.2℃／min升至 115℃，再以 35℃／min升至 220℃
保持 6 min。 
A.6.3.6 检测器温度： 270℃。 
A.6.3.7 分流比： 5∶1。 
A.6.3.8 进样体积： 1mL定量环。 
A.6.4 顶空条件  
A.6.4.1 顶空瓶温 度：100℃。 
A.6.4.2 定量环温度： 110℃。 
A.6.4.3 传输线温度： 120℃。 
A.6.4.4 顶空瓶平衡时间： 50min。 
A.6.4.5 气相循环时 间： 30.0min。 
A.6.4.6 加压时间： 0.2min。 
A.6.4.7 定量环填充时间： 0.2min。 GB × × × ×—× × × ×  
 A.6.4.8 定量环平衡时间： 0.05min。 
A.6.4.9 进样时间： 1.0min。 
A.6.4.10  顶空瓶压力： 13.8psi。 
A.6.5 分析步骤  
A.6.5.1 对照液制备  
对照液制备 ：精密吸取乙醇 34μL、异丙醇 4.5μL、乙酸乙酯 30μL、乙酸异丁酯 38μL，置于 100mL
容量瓶中， 用DMF稀释至刻度，摇匀，移取 3.0m L至10mL顶空瓶中，封盖。该对照溶液中含有乙醇
0.2686mg/m L，异丙醇 0.035325mg/m L，乙酸乙酯 0.2703mg/m L, 乙酸异丁酯 0.3325mg/ mL。（乙醇密
度0.790g/m L，异丙醇密度 0.785g/m L，乙酸乙酯密度 0.901g/m L，乙酸异丁酯密度 0.875g/m L） 
灵敏度溶液 制备：精密吸取 5.0m L对照液于 50mL 容量瓶中，用 DMF稀释至刻度，摇匀，移取
3.0m L至10mL顶空瓶中，封盖。该溶液中含有乙醇 0.02686mg/m L（相对应于 试样中浓度约 0.08%），
异丙醇 0.0035325mg/m L（相对应于 试样中浓度约 0.01%），乙酸乙酯 0.02703mg/m L（相对应于 试样
中浓度约 0.08%），乙酸异丁酯 0.03325mg/m L（相对应于 试样中浓度约 0.1%）。 
A.6.5.2 试样液制备  
精确称取 试样约0.1g到10mL顶空瓶中，加 3.0m LDMF稀释，封盖，摇匀 ，此为试样液 。 
A.6.5.3 系统适应性要求  
分别移取上述 A.6.5.1对照液 3.0mL于6个10mL顶空瓶中，分别进样 ，各个峰理论板数应不小于
5000，峰面积 RSD不得大于 10.0%，灵敏度溶液中主峰信噪比应不小于 10。 
A.6.5.4 测定 
分别取对照液和 试样液顶空进样，用外标法计算样品中的残留溶剂含量。  
A.6.6 结果计算  
各残留溶剂 （乙醇、 异丙醇、乙酸乙酯 和乙酸异丁酯 ）的含量分别以质量分数 wi计，数值均以 %
表示，分别 按公式（ A.3）计算：  
%100C AC Aw
X RR X
i 
………………………………（ A.3） 
式中：  
AX——试样液色谱图中所测溶剂峰面积 值的数值 ； 
CR——对照液中 对应溶剂浓度 的数值，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； 
AR——对照液色谱图中所测溶剂 峰面积值的数值 ； 
CX——试样液浓度的数值，单位为毫克每毫升（ mg/mL）。 
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不得超过算术平均值的 20%。