中华人民共和国国家标准  
 
GB 5009.97—2011 
 
  
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  
 xxxx -xx-xx实施  
 食品安全国家标准  
食品中环己基氨基磺酸钠的测定  
 
 
 GB xxxx—xxxx  
I 前  言 
本标准代替GB/T 5009. 97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定 》。 
本标准与GB/T 5009.97 -2003相比主要变化如下： 
——气相色谱法增加毛细管柱分析测定条件 ；根据样品特性修订了 样品的处理方式，使用打碎均
质法替代加 海沙或硅胶研磨方式，利用超声提取替 代普通振摇提取 ，使用沉淀剂沉淀蛋白和石油醚除
脂；将单管标准衍生处理、分体积进样定量分析改为标准系列 溶液衍生处理、进样 1 µL定量分析 ；将
100 mL比色管改为 50 mL带盖离心管， 将正己烷改为正庚烷， 液体取样 量、固体处理液取样量、 正庚
烷用量、衍生化试剂用量减半 ；优化了样品处理 、衍生化和测定的条件。 
——增加液相色谱 法。 
——删除GB/T 5009. 97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定 》中的第二法 比色法和 第三法薄
层色谱法 。 
 GB xxxx—xxxx  
1 食品安全国家标准  
食品中环己基氨基磺酸钠的测定  
 
1  范围 
本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠 （甜蜜素） 的两种测定方法 ——气相色谱法、液相色谱法。  
本标准气相色谱法适用于饮料、凉果、 配制酒、 果酱、糕点、酱菜、冰淇淋、雪糕、果冻、调味
料、咸菜、腐乳等食品中环己基氨基磺酸钠的测定。  
本标准液相色谱法适用于饮料、凉果、 果酱、糕点、酱菜、冰淇淋、葡萄酒 、果冻、 咸菜等食品
中环己基氨基磺酸钠的测定。   
第一法 气相色谱法  
2  原理 
食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取， 在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应， 生成环己
醇亚硝酸酯，利用氢火焰离子化检测器气相色谱法进行分离及分析，保留时间定性，外标法定量。  
3 试剂和材料  
除特别规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的二级水。 
3.1  试剂 
3.1.1 正庚烷 (CH 3(CH 2)5CH 3)：重蒸。  
3.1.2 氯化钠（NaCl）。 
3.1.3 石油醚（ C5H12O2） ：沸程为 30℃-60℃。 
3.1.4 氢氧化钠 (NaOH)。 
3.1.5 硫酸（H2SO4）。 
3.1.6 亚铁氰化钾（ K4[Fe(CN) 6]·3H2O）。 
3.1.7 硫酸锌（ ZnSO 4·7H2O）。 
3.1.8 亚硝酸钠（ NaNO 2）。 
3.2  试剂配制  
3.2.1  氢氧化钠溶液（ 40g/L）：称取20 g氢氧化钠，溶于水并稀释至 500 mL。 
3.2.2 硫酸溶液 （200g/L）：称取100 g硫酸小心加入 400 mL水中，后加水 至500 mL。 GB xxxx—xxxx  
2 3.2.3 亚铁氰化钾 溶液（150g/L）：称取15g亚铁氰化钾， 溶于水并稀释至 100 mL。 
3.2.4 硫酸锌溶液（300 g/L）：称取30 g硫酸锌， 溶于水并稀释至 100 mL。   
3.2.5 亚硝酸钠溶液（ 50g/L）：称取25 g亚硝酸钠 ，溶于水并稀释至 500 mL。  
3.3 环己基氨基磺酸钠标准品（ C6H12NSO3Na）：纯度≥ 99%。 
3.4  环己基氨基磺酸钠标准 溶液配制 
3.4.1 环己基氨基磺酸钠标准储备液（ 5.00mg/mL ） ：精确称取环己基氨基磺酸钠标准品，用水溶解并
定容至浓度为 5.00mg/mL ，置于1℃-4℃冰箱保存，可保存两个月。  
3.4.2 环己基氨基磺酸钠标准使用液（ 0.50mg/mL ） ：用水将 10.0 mL环己基氨基磺酸钠标准储备液稀
释定容至 100mL；临用时配制。  
4 仪器与设备  
4.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（ FID）。 
4.2 旋涡混合器。  
4.3 离心机： 转速≥4000 r/min。 
4.4 超声波振荡器。 
4.5 样品均质器。  
4.6 10 μL微量注射器。  
5 分析步骤  
5.1 试样制备  
5.1.1 试样处理  
5.1.1.1 液体试样  
一般液体试样摇匀后可直接取样。含二氧化碳的试样 ：称取50.0g试样于烧杯中，放置电热板上加热
以除二氧化碳，待除尽后，放冷，用水补足至 50.0g制成试样 备用。含酒精的试样 ：称取50.0g试样
于烧杯中， 用氢氧化钠溶液 （3.2.1）调至碱性，放置电热板上加热以除酒精，待除尽后，放冷，用水
补足至50.0g制成试样 备用。 
5.1.1.2 固体、半固体试样  
凉果、蜜饯类等固体试样先将其去核， 坚果和籽类等 先将其去壳， 固体样品置于粉碎机打碎、均质，
将粉碎好的样品放入食品保鲜袋中，待取样用。冰棒、雪糕、冰淇淋等分别放置 于250 mL烧杯中，待
融化后搅匀 可直接称取。固体 、半固体试样根据基质的不同 按下列步骤进行处理 ： 
5.1.1.2.1  低脂、低蛋白样品（果酱、果肉、山楂饼、蜜饯、凉果、浓缩的果汁、果粒汁、甜点、
酱菜、咸菜等）  
称取5.00g-10.00g样品于50 mL离心管中，  加40 mL水 ，振摇，超声 提取20 min ，混匀，离心
（2000 r/min ）10 min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液 并定容至100 mL，混匀备用。  GB xxxx—xxxx  
3 5.1.1.2.2  高蛋白样品 （酸乳、果冻、雪糕、冰激凌等奶制品及豆制品、腐乳等 ） 
称取5.00g-10.00 g样品于50mL离心管中，  加40 mL水 ，超声提取20 min ，加3 mL亚铁氰化钾
溶液（3.2.3），混匀，再加入 3 mL硫酸锌溶液（3.2.4），混匀,离心（2000 r/min）10 min，过滤，
用水分次洗涤残渣，收集滤液 并定容至100 mL，混匀备用。  
5.1.1.2.3  高脂样品 （奶油制品、坚果和籽类 等） 
称取 5.00g-10.00 g样品于50 mL离心管中，加入 25 mL石油醚（3.1.3），振摇，超声 提取3 min ，
再混匀， 离心（1000 r/ min以上）10 min，弃石油醚，再用 25 mL石油醚提取一次，弃石油醚， 60 ℃
水浴挥发去除石油醚， 残渣加40 mL水 ，混匀，超声 提取20min，加3 mL亚铁氰化钾 溶液（3.2.3），
混匀，再加入 3 mL硫酸锌溶液（3.2.4），混匀，离心 （2000 r/min）10min，过滤，用水洗涤残渣，
收集滤液 并定容至100 mL，混匀备用。  
5.1.2 试样溶液的制备  
液体试样 （5.1.1.1）直接称取 2.00g-10.00 g于50 mL带盖的离心管中，易乳化 或浓度高试 样可减
小取样量并加水至 10 mL。固体、半固体 试样移取上述已处 理好的样液 （5.1.1.2）10.0 mL于50 mL
带盖离心管中。以备衍生化用。  
5.2 标准溶液系列的制备  
准确移取0.50 mg/mL环己基氨基磺酸钠标准使用溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、
5.0 mL、10.0 mL于50 mL带盖离心管中，加水至 10 mL。配成衍生化后 进样液浓度 相当于0.01mg/mL、
0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.25mg/mL、0.50 mg/m L、1.0mg/mL的标准溶液系列。  
5.3 试样溶液及标准系列 溶液的衍生化  
把上述装有标准系列 溶液（5.2）和试样溶液（5.1.2）的离心管放置在试管架上，置冰浴中，加 入
2.5 mL 亚硝酸钠溶液 （3.2.5），2.5 mL 硫酸溶液 （3.2.2），盖紧离心管盖，摇匀，在冰浴中放置 30 
min，其间振摇 3-5次；后准确加 入5.0 mL正庚烷（3.1.1），2.5 g氯化钠（3.1.2），盖上盖后置旋
涡混合器上振动 1 min(或振摇60-80次)，离心（ 3000 r/min）10min分层或静置 20 min至澄清分层
后取上清液以备进样用。  
5.4 测定 
5.4.1 色谱条件  
5.4.1.1 气相色谱参考条件一  
a) 色谱柱: 弱极性石英毛细管柱（ 内涂5%苯基甲基聚硅氧烷 ，30 m×0.32 mm×0.5 μm）或等效柱。  
b) 柱温升温程序：初温 60℃保持2 min，10 ℃/min升温至90 ℃保持0.5 min，20 ℃/min升温至
220 ℃保持3 min。 
c) 进样口：温度 230 ℃；进样量1 µL，分流进样，分流比 1∶10(分流不分流可根据色谱条件调整） 。 
d) 检测器：氢火焰离子化检测器（ FID） ，温度260℃。 
e) 载气：高纯氮气，流量 2.0 mL/min，尾吹30 mL/min。 
f) 氢气：30 mL/min；空气330 mL/min（载气、氢气、空气流量大小可据仪器 条件进行调整） 。  GB xxxx—xxxx  
4 5.4.1.2 气相色谱参考条件二  
a) 色谱柱:长2 m或3m 内径3 mm的不锈钢填充柱 ,内填涂以 10% 甲基聚硅氧烷 粒度为
0.150mm-0.177mm（ 80-100目）经酸洗硅烷化的白色 硅藻土。  
b) 柱温 :80 ℃。 
c) 进样口：温度 150 ℃，进样量 1 µL。 
d) 检测器：氢火焰离子化检测器（ FID） ，温度150℃。 
e) 载气：高纯氮气，流 量40 mL/min。 
f) 氢气：40 mL/min；空气400 mL/min（载气、氢气、空气流量大小可根据仪器进行调整） 。  
5.4.2 色谱分析  
分别吸取 1 µL衍生化处理的标准系列各浓度溶液 （5.3），注入气相色谱仪中，可测得不同浓度被测
物的响应值峰面积或峰高，以浓度为横坐标，相应的峰面积值或峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。  
同样进样 1 µL衍生化处理的试样 待测液（5.3），保留时间定性，测得峰面积 或峰高，根据标准曲线得
到进样液中的组分浓度 ；试样待测液响应值若超出线性范围，应 用正庚烷稀释后再进样分析。 平行测
定次数不少于两次。  
6 分析结果的表述 
  试样中环己基氨基磺酸 钠含量按式（1）计算： 
                X1 =
fmC5 ……………… ……………………… ……………… (1) 
式中： 
X1——试样中环己基氨基磺酸 钠的含量，单位为克每千克 (g/kg)； 
C——由标准曲线 计算出进样液中环己基氨基磺酸钠的浓度 ，单位为毫克每 毫升（mg/mL）； 
m——试样质量，单位为克 (g) ； 
5——正庚烷加 入量，单位为 毫升(mL) ； 
f
——待测液稀释倍数 。 
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。  
注：环己基氨基磺酸钠与环己基氨基磺酸的换算系数为 0.8909。 
7 精密度 
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。 
8 检出限、线性范围 、回收率 及色谱图  
毛细管柱测定 法标准浓度的线性范围 0.01 ~1.0 mg/mL ；以3倍基线噪音 确定质量最低 检出限1 ng；
液体取样 10 g计，方法检出限 (LOD)0.5 mg/kg,方法定量限 (LOQ)1.7 mg/kg；固体取样 10 g，处理液
定容体积 100 mL，取10 mL衍生化计，方法最低检出限 5 mg/kg，方法定量限 17 mg/kg 。 
填充柱测定法标准浓度的线性范围 0.10 ~4.0 mg/mL，最低检出限 0.04 µg。 GB xxxx—xxxx  
5  
第二法 高效液相色谱 法 
9 原理 
食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取后， 在强酸性溶液中与次氯酸钠反应， 生成 N,N-二氯环己胺，
用正己烷萃取后，利用高效液相色谱法检测，保留时间定性，外标法定量。  
10 试剂和材料  
除非另有说明， 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 
10.1  试剂 
10.1.1  正己烷(CH 3(CH 2)4CH 3)：色谱纯。 
10.1.2  乙腈（ CH 3CN）：色谱纯。  
10.1.3  硫酸（H2SO4）。 
10.1.4  次氯酸钠 （NaCLO）。 
10.1.5  碳酸氢钠 （NaHCO 3）。 
10.1.6  乙酸锌（Zn(CH 3COO) 2·2H2O）。 
10.1.7  亚铁氰化钾（ K4[Fe(CN) 6]·3H2O）。 
10.2  试剂配制  
10.2.1  硫酸溶液（ 1+1）：50 mL硫酸小心加入 50mL水中。 
10.2.2  次氯酸钠溶液 ：用市售次氯酸钠溶液稀释，保持 有效氯含量 50g/L以上。 
10.2.3  碳酸氢钠溶液 （50g/L）：称取5 g碳酸氢钠 ，用水溶解并稀释至 100 mL。 
10.2.4  乙酸锌溶液 （219g/L）：称取21.9g乙酸锌加入1.5 mL乙酸。  
10.2.5  亚铁氰化钾溶液 （106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾， 用水溶解并 稀释至100 mL。 
10.3  环己基氨基磺酸钠标准品（ C6H12NSO3Na ）：纯度≥ 99%。 
10.4  环己基氨基磺酸钠标准溶液配制  
10.4.1  环己基氨基磺酸钠标准储备液（ 1000 µg/mL ）：精确称取环己基氨基磺酸钠标准品，用水溶
解定容环己基氨基磺酸钠浓度为 1000 µg/mL ，置于1℃-4℃冰箱保存，可保存 两个月。 
10.4.2  环己基氨基磺酸钠标准中间液 （ 200 µg/mL ） ： 用水将 10.0mL标准储备液 （ 10.4.1） 定容至50mL。
放置于1℃-4℃冰箱可保存两周 。 
10.4.3  环己基氨基磺酸钠标准曲线系列工作液：分别吸取标准中间液（ 10.4.2）0.50 mL、1.0 mL、
2.5 mL、5.0 mL、10.0 mL至10 mL容量瓶中， 用水定容。 该标准系列浓度分别为 10.0 µg /mL、20.0 µg/mL、
50.0 µg/mL、100 µg/mL、200 µg/mL。临用现配。  GB xxxx—xxxx  
6 11  仪器和设备  
11.1  液相色谱仪 , 配有紫外检测器 或二极管阵列检测器 。 
11.2  水浴锅。 
11.3  离心机： 转速≥5000r/min 。 
12   分析步骤  
12.1  试样溶液制备  
12.1.1 固体类和半固体类  
称取均质后试样 5.00g，加入40 mL水，在沸水浴中加热 20 min，边加热边搅拌，冷却后定容至
50 mL，离心分离后准 确取上清液 10 mL备用。 
12.1.2 液体类 
12.1.2．1 果汁类饮料样品摇匀后可直接称取样品 5.00g-10.00g，定容至 10mL备用。 
12.1.2．2 含乳类饮料 称取试样20.00 g，加入3.0 mL乙酸锌溶液（ 10.2.4）和3.0 mL亚铁氰化钾
溶液（10.2.5），混匀，用水定容至 50 mL，离心分层后准确 移取上清液 10 mL备用。 
12.1.3 试样溶液的衍生化 
 在上述已制备好的 试样溶液（12.1）中加入 2.0 mL硫酸溶液 (10.2.1),5.0mL正己烷(10.1.1)，和
1.0 mL次氯酸钠溶液（ 10.2.2），剧烈振荡 1min，静置分层，除去水层后在正己烷层中加入 25 mL
碳酸氢钠溶液（ 10.2.3），振荡 1min。静置取上层有机相经 0.45 µm微孔有机相滤膜 抽滤，滤液备 进
样用。 
12.2  仪器参考条件  
   色谱参考条件  
   色谱柱： ODSC 18柱, 5 µm，150 mm×3.9 mm,或同等性能的色谱柱。  
   流动相：乙腈 +水（70+30）。 
   流速：0.8 mL/min。 
   进样量： 10 µL。 
   柱温：40 ℃。 
检测器： 紫外检测器或 二极管阵列 检测器。  
检测波长： 314 nm。 
12.3  标准曲线的制作  GB xxxx—xxxx  
7 移取10 mL环己基氨基磺酸钠 标准系列 工作液（10.4.3）按12.1.3衍生化。 取过0.45 µm微孔有机
相滤膜后的溶液10 µL分别注入 液相色谱 仪中，测定相应的 峰面积，以标准 使用溶液的浓度为横坐标 ，
以响应值峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。  
12.4  样品的测定 
将衍生后试样溶液 （12.1.3）10 µL注入液相色谱 仪中，得到 峰面积，根据标准曲线得到待测液中
环己基氨基磺酸钠 的浓度，平行测定次数不少于两次。  
13  分析结果的表述  
试样中环己基氨基磺酸钠 含量按公式（2）计算： 
                                  X2
1000mVc  …………………………………… ………（2） 
式中： 
X2——  试样中环己基氨基磺酸钠 的含量， 单位为克每千克 （g/kg）； 
c ——  由标准曲线计算出 试样定容溶液中环己基氨基磺酸钠的浓度， 单位为微克每 毫升（µg/mL）； 
V——试样的最后定容体积  ,单位为毫升（mL）。 
m——试样的质量，单位为克（ g）。 
1000——由µg/g换算成 g/kg的换算因子。  
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 结果保留三位有效数字 。 
14  精密度 
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10 % 。 
15 检出限及色谱图  
质量检出限为 10 ng，定量限为 30 ng。固体样品取样 5.0 g计，检测限为 5.0 mg/kg，最低定量
限为15 mg/kg。果汁等液体类样品取样 10 g计，检测限为 0.5 mg/kg,最低定量限为 1.5 mg/kg；含
乳饮料类样品取样 20 g计,检测限为 1.3 mg/kg ，最低定量限为 4.0 mg/kg 。 
 
 
 GB xxxx—xxxx  
8 附录A 
（资料性附录 ） 
环己基氨基磺酸钠溶液衍生化处理后的色谱图  
A.1 环己基氨基磺酸钠 标准溶液 衍生后的气相色谱图 
 
图1 甜蜜素标准溶液衍生 化处理后的气相色谱图（ 0.50mg/mL ） 
A.2 检出环己基氨基磺酸 钠的芒果汁衍生后的气相色谱图  
 
图2 检出环己基氨基磺酸 钠试样芒果汁衍生后的气相色谱图（ 0.26g/kg ） 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 GB xxxx—xxxx  
9  
A.3 环己基氨基磺酸钠 衍生后的产物 N,N-二氯环己胺标准液相色谱图  
5.351AU
0.0000.0020.0040.0060.008
分钟1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00
 
.            图3 环己基氨基磺酸钠 衍生后的产物 N,N-二氯环己胺标准 液相色谱图  
 
A.4 试样衍生后的产物 N,N-二氯环己胺 的液相色谱图  
 
5.137AU
0.0000.0020.0040.0060.0080.0100.012
分钟0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00
 
图4检出环己基氨基磺酸 钠的衍生产物N,N-二氯环己胺 的试样蜜饯加应子的 液相色谱 图