LA GACETA  Nº 29 DEL 11 DE FEBRERO DEL 2010  
 
SERVICIO NACIONAL DE SALUD ANIMAL  
DIRECCIÓN GENERAL  
AVISOS  
Directriz -DG-SENASA -13-2009 .—La Dirección General y la Dirección de 
Medicamentos Veterinarios,  
Considerando : 
1º—Que es potestad de la Dirección de Medic amentos Veterinarios del Servicio 
Nacional de Salud Animal según lo establecen la Ley General del Servicio Nacional de 
Salud Animal (SENASA) Nº 8495 del 6 de abril del 2006 y los Decretos Ejecutivos 
número 28861 -MAG del12 de agosto del 2002; Reglamento de Registro y Control de 
Medicamentos Veterinarios y 34319 -MAG del 27 de febrero del 2008, Reglamento de 
Estructura Organizativa del SENASA, establecer y poner en ejecución las pruebas de 
eficacia de ixodicidas registrados y de nuevo registro.  
2º—Que existen numerosas quejas de usuarios por la poca o ninguna eficacia de los 
productos utilizados para el control de garrapata en sus explotaciones.  
3º—Que se ha demostrado científicamente que en Costa Rica existe una marcada 
resistencia de la garrapata Rhipicephalu s (Boophilus) microplus a los productos 
organofosforados y piretroides sintéticos; y existen indicios de resistencia a las 
amidinas.  
4º—Que es obligación del Estado promover y mantener estándares adecuados en el 
medio ambiente y en especial en la salud de la población y que por tanto es necesario 
coordinar las acciones en materia de Salud Pública, también, desde el punto de vista de 
la salud animal, la cual incide directamente en la salud humana.  
5º—Que igualmente de conformidad con la Ley Nº 8495 antes cit ada, es obligación 
fundamental del Servicio de Salud Animal del Ministerio de Agricultura y Ganadería, el 
fomentar la producción pecuaria, proteger el hato nacional y dictar las medidas 
requeridas para ello.  
6º—Que dentro de los objetivos y funciones del S ervicio Nacional de Sanidad Animal 
está el establecer las medidas necesarias relativas al registro, importación, 
desalmacenaje, producción, control de calidad, almacenamiento, transporte, venta y 
correcta utilización de los medicamentos de uso veterinario.  
7º—Que los ixodicidas son productos químicos que pertenecen al grupo de los 
plaguicidas y por sus características de uso y aplicación son objeto de vigilancia por 
parte de diversas autoridades, a fin de garantizar al usuario su calidad y efectividad, dada  su naturaleza tóxica, para prevenir los riesgos a la Salud Pública y los efectos 
adversos al medio ambiente.  
8º—Que al utilizar productos ineficaces para el control de la garrapata Boophilus 
microplus, se induce a un incremento en los costos de producción , debido a los 
aumentos en las dosificaciones, aumentos en la frecuencia de aplicación y 
debilitamiento de los animales.  
9º—Al aumentar las dosis y frecuencias de aplicación se incrementan los riesgos de 
contaminación al ambiente, eliminación de organismo s no blanco del producto y 
contaminación de aguas superficiales ocasionando daños a la Salud Pública.  
10.—Que los expedientes de registro actuales de estos productos no cuentan con los 
estudios de efectividad local contra la garrapata Rhipicephalus (Booph ilus) microplus 
que es la especie más importante desde el punto de vista de distribución e impacto 
económico para los productores nacionales. Por tanto : 
EL DIRECTOR GENERAL DEL SERVICIO NACIONAL DE SALUD ANIMAL  
Y EL DIRECTOR DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS, RESUELVEN : 
1º—Créase la norma oficial costarricense de efectividad biológica para registro de los 
ixodicidas de uso en bovinos y método de prueba, la cual se regirá por el siguiente 
clausulado y por la legislación vigente aplicable y que dirá:  
NORMA OFICIAL  COSTARRICENSE DE EFECTIVIDAD  
BIOLÓGICA PARA REGISTRO DE LOS IXODICIDAS  
DE USO EN BOVINOS Y MÉTODO DE PRUEBA  
ÍNDICE  
1. Objetivo y Campo de Aplicación  
2. Definiciones  
3. Consideraciones Generales  
4. Procedimientos para el Inicio de las Pruebas  
5. Requis itos de Efectividad Biológica  
6. Método de Evaluación Biológica  
7. Bibliografía  
1. Objetivo y Campo de Aplicación . La presente Norma es de observancia 
obligatoria en todo el territorio nacional y tiene por objeto establecer los métodos de prueba y los p arámetros de efectividad biológica que deben cumplir los 
productos ixodicidas para uso en bovinos.  
Los ixodicidas de uso en medicina veterinaria, cuya finalidad sea el control de la 
garrapata en ganado bovino, que pretendan la aprobación oficial de 
comerci alización ante Servicio de Salud Animal (SENASA), serán objeto de esta 
Norma, independientemente de su presentación, familia química y formulación.  
Los productos mosquicidas de uso pecuario, en cuya formulación se utiliza un 
principio activo con efecto gar rapaticida, deberán sujetarse a lo establecido en la 
presente Norma.  
La vigilancia y aplicación de las disposiciones previstas de esta Norma 
corresponde al SENASA.  
2. Definiciones .  Para efectos de esta Norma, se entiende por:  
C.I.O.:  Concentración de inhi bición de la ovoposición, y es un parámetro utilizado 
para estimar el porcentaje de huevos ovipositados en un lote tratado, con respecto 
al lote control.  
C.I.E.:  Concentración de inhibición de la eclosión, y es un parámetro utilizado 
para estimar el porcen taje de emergencia de larvas en un lote tratado, con respecto 
al lote control.  
Ingrediente activo : Componente químico que confiere a cualquier compuesto el 
carácter plaguicida específico del mismo.  
Ixodicida : Plaguicida destinado a prevenir, controlar o c ombatir las infestaciones 
debidas a las garrapatas.  
Ixodicida  formulado : Producto resultante de la combinación del plaguicida 
técnico con otros ingredientes, que por sus características físicas, químicas y, en su 
caso, biológicas, está listo para su diluci ón y/o aplicación por el consumidor.  
Laboratorio aprobado : Laboratorio reconocido por la Dirección de 
Medicamentos Veterinarios del SENASA para realizar servicios de constatación 
en materia de medicamentos veterinarios.  
LANASEVE : Acrónimo de Laboratorio N acional de Servicios Veterinarios del 
SENASA  
Material biológico : Organismos y microorganismos vivos que son utilizados para 
la ejecución de los ensayos a que se refiere la prueba biológica.  
Ministerio : Ministerio de Agricultura y Ganadería.  
Muestreo de b andera : Metodología utilizada para estimar la densidad poblacional 
de las fases de vida libre de los ixodicidas en su hábitat natural.  
Norma : La Norma Oficial Costarricense que establece los Requisitos de 
efectividad biológica para los ixodicidas de uso e n bovinos y método de prueba.  
Plaguicida : Es una sustancia o compuesto que se destina a prevenir, controlar o 
combatir cualquier plaga, incluidos los vectores.  
Plaguicida técnico : Es la máxima concentración del ingrediente activo, obtenida 
como resultado  final de su fabricación, a partir de la cual se inicia la preparación 
de una fórmula plaguicida. Por su estado físico, puede ser sólido, líquido o 
gaseoso.  Prueba biológica : Examen o constatación ha la que es sometido un producto 
químico farmacéutico o b iológico, que mediante un diseño experimental que 
involucra organismos vivos, se confirma la eficacia o efectividad del producto para 
el control de la plaga o agente causante de la enfermedad.  
Prueba de campo : Modalidad de la prueba biológica realizada baj o condiciones 
en que se encuentran naturalmente los animales, que implica una infección natural 
de los mismos  
Prueba de establo : Modalidad de la prueba biológica, que es realizada en su 
totalidad bajo condiciones controladas, tanto de manejo de los animale s, como de 
exposición al agente productor de la enfermedad.  
Prueba de laboratorio : Modalidad de la prueba biológica, en que el ensayo es 
realizado en su totalidad bajo condiciones de laboratorio.  
SENASA : Servicio Nacional de Salud Animal  
3. Consideraciones  Generales . Las pruebas biológicas a las que estarán sujetos los 
productos a evaluar serán de laboratorio, establo y si las condiciones lo permiten 
de campo, para lo cual el Departamento dictará las medidas específicas para cada 
evaluación de campo, siendo  obligatorias en todos los casos además de las que 
dicte, la supervisión por parte de personal oficial y el cumplimiento de protocolos 
establecidos de antemano.  
Los plaguicidas aprobados como acaricidas, mosquicidas y endectocidas de uso 
pecuario, en cuya formulación se incluya un ingrediente activo con actividad 
ixodicida y que no hayan aprobado como tales, deberán incluir en su etiqueta y 
publicidad impresa, una leyenda que especifique: ―Este producto no deberá ser 
utilizado para el tratamiento de infesta ciones por garrapata‖.  
En el caso de las vacunas contra la garrapata que no son garrapaticidas químicos, 
deberán ser evaluadas para su regulación, debido a que están destinadas al control 
de garrapatas Boophilus spp. La evaluación deberá realizarse en esta blo y campo, 
para ello el laboratorio de pruebas preparará un protocolo apegado, en lo general, a 
la metodología establecida en el texto de la presente Norma. Dicho protocolo 
deberá ser discutido y convenido con el laboratorio que presenta la solicitud de 
regulación.  
Los elementos básicos que debe contener el protocolo son:  
a) Producto de la evaluación: se deberá lograr al menos un 80% promedio de 
control sobre garrapata Boophilus.  
b) La aplicación de la vacuna no deberá provocar lesiones o reacciones secun darias 
imputables a la vacunación.  
4. Procedimiento para el Inicio de las Pruebas . El laboratorio interesado deberá 
enviar al laboratorio aprobado lo siguiente:  
a) Una muestra del producto formulado, previamente valorado y con el certificado 
analítico de l a muestra.  
b) Información sobre las características químicas, fisicoquímicas, de estabilidad, 
farmacológicas, toxicológicas, de efectividad biológica; así como la 
concentración de residuos en tejidos y fluidos de origen animal en el producto a 
evaluar.  5. Requisitos de Efectividad Biológica . El porcentaje de efectividad promedio de 
todas las pruebas sobre el potencial reproductivo mínimo que deberá lograr un 
producto en la evaluación en garrapatas Boophilus spp., será de 98%; si éste fuera 
inferior en algún  ensayo de los obligatorios pero no menor a 95%, se considerará 
en función de los otros resultados obtenidos en las pruebas.  
6. Evaluación Biológica . 
6.1. Pruebas de laboratorio . 
6.1.1  Inmersión de hembras repletas a la concentración recomendada . El 
objet ivo de esta prueba es determinar el porcentaje de control que ofrece un 
producto a la concentración comercial recomendada sobre garrapatas 
hembras repletas Boophilus spp. bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección del material biológico . Se seleccionan las garrapatas hembras 
eliminando aquellas demasiado pequeñas o muy grandes, deformes o con 
claros signos de estar dañadas. Para cada producto a evaluar se necesitan 
lotes de 50 especímenes dividiéndolos en cinco grupos de 10 garrapatas 
cada uno y otros má s como testigos. Las hembras ingurgitadas se pesan 
en una balanza analítica y se colocan en cajas petri de 9.0 cm de 
diámetro con un papel filtro Whatman Nº 1 en el fondo, cada una de las 
cajas se identifica debidamente con los siguientes datos: lote, grup o, 
cepa, producto utilizado, concentración y fecha de tratamiento. Los datos 
de los pesos se anotan en un formato, el cual contendrá la información 
adicional arriba mencionada. Como requisito mínimo se considera 
necesario desafiar cada producto con una cep a susceptible de Boophilus 
microplus, Para el caso de Boophilus, el porcentaje de efectividad 
propuesto se basa en experiencias obtenidas en el Laboratorio Nacional 
de Servicios Veterinarios (LANASEVE) del SENASA del Ministerio de 
Agricultura y Ganadería. Solicitar un porcentaje de efectividad mayor, 
sería muy difícil de lograr para los ixodicidas y esto haría en muchos de 
los casos que tuviera que elevar sus concentraciones en partes por 
millón, lo cual sería  de alguna manera  riesgoso para la salud  de l os 
animales y de los encargados de aplicar los ixodicidas. Por otro lado, un 
producto que alcanza el 98%, garantiza que la descendencia no 
sobrevivirá y por lo tanto el control es mucho mayor al reducir 
drásticamente la población.  
b) Preparación de compue stos. Una vez que han sido pesados los grupos, 
seleccionados e identificados como testigos y tratados, se procederá a 
preparar el ixodicida a evaluar. Para este tipo de ensayos se requiere un 
mínimo de 250 ml de solución para tratar a 50 especímenes. La me zcla 
se afora con agua destilada para llevarla al volumen final.  
c) Tratamiento . En un frasco de vidrio limpio de boca ancha tipo 
―Gerber‖, se añade una porción de la solución garrapaticida, en la que se 
sumergen los especímenes de un grupo durante un min uto; transcurrido 
este tiempo, se vacía el contenido en otro recipiente provisto de un 
colador, eliminando el excedente sobre un papel secante. Las garrapatas 
se alojarán en su caja de petri respectiva y el grupo testigo se tratará con 
agua solamente.  d) Incubación . Todas las cajas con las garrapatas tratadas se colocan en 
una estufa de incubación a una temperatura de 27°C y una humedad 
relativa de 80%; catorce días después del tratamiento, se evalúa la 
capacidad del producto de inhibir la ovoposición en la s garrapatas 
tratadas. Este día se procede a retirar los huevos ovipositados, los cuales 
se pesan y se colocan en viales de vidrio que se tapan con una torunda de 
algodón, incubándose bajo las mismas condiciones de temperatura y 
humedad antes descritas. Lo s pesos de los huevos se registran en las 
formas específicas. Para determinar el efecto sobre la eclosión de los 
huevos se mantienen en la estufa durante 25 días; transcurrido ese 
tiempo, se procede a sacrificar por calor (45°C) las larvas resultantes 
tanto de los grupos testigos como los tratados. El contenido se 
homogeniza perfectamente y se toman 5 alícuotas para realizar los 
conteos de cascarones y huevos en cada uno de ellos; de esta manera se 
calcula el porcentaje de eclosión alcanzado en cada grupo y  lote. 
e) Análisis de resultados . Con los datos del peso de garrapatas en cada 
grupo y el peso de la ovoposición, se calcula el porcentaje de inhibición 
de ovoposición como sigue, aplicando la siguiente fórmula:  
  P Lt - PHLt  
 % I.O. = __________________ __ x 100  
  pLT  PHLT  
Donde:  
P Lt   = Peso de hembras del lote tratado.  
P LT  = peso de hembras del lote testigo.  
PHLt = Peso de huevos del lote tratado.  
PHLT = Peso de huevos del lote testigo.  
Para determinar el porcentaje de control es necesario calcul ar la 
reproducción estimada por un grupo, mediante la fórmula propuesta por 
Drummond, en donde:  
  peso de huevos  
 RE: ______________________________X 20,000 x % de Eclosión   
  peso de hembras por grupo  
Una vez calculadas las RE de ambos lotes, tratados y testigos, se procede 
a calcular el porcentaje de control como sigue:  
  RET - REt  
 %C = _________________ x 100    RET  
Donde:  
RET= Reproducción estimada en el lote testigo.  
REt= Reproducción estimada en el lote tratado.  
De esta manera se obtiene el pa rámetro principal de la evaluación ―in 
vitro‖ de ixodicidas a la concentración recomendada para su uso en los 
animales, sobre garrapatas hembras repletas.  
f) Rango de aceptación . 100% de control obligatorio.  
6.2. Pruebas en vivo . 
6.2.1  Prueba  de cámaras pa ra evaluación de productos para tratamiento 
de aspersión . El objetivo de esta prueba consiste en la evaluación de un 
ixodicida al ser aplicado en áreas seleccionadas de un bovino infestado 
artificialmente previo al tratamiento, de tal forma que al momento de 
administrar el producto sea posible conocer su efectividad sobre los 
diversos estadios de desarrollo de las garrapatas. Esta prueba fue adaptada 
de la propuesta realizada originalmente por Dowing y cols., con el fin de 
realizar ensayos con productos quí micos en áreas localizadas de un bovino, 
en las cuales se practican infestaciones artificiales periódicamente, previas 
al tratamiento.  
La prueba proporciona información útil acerca de la efectividad que 
alcanzan productos ixodicidas cuando son aplicados en  bovinos o sobre 
tales áreas y en las cuales se encuentran presentes garrapatas en distintos 
estadios de desarrollo parásito, incluyendo aquellas en fase de muda. Por 
otro lado, la oportunidad de realizar seguimientos ―in vitro‖ de los 
especímenes recolect ados durante el periodo posterior al tratamiento, 
complementa y enriquece los resultados de estas evaluaciones.  
a) Selección del material biológico . Se utilizarán 6 bovinos de razas 
europeas con un peso de 200 -300 kg, los cuales serán mantenidos 
durante la  ejecución de la prueba en infestaderos especiales con agua y 
alimento de alta calidad, proporcionada ―ad libitum‖.  
Garrapatas: La elección se realizará previa realización de la prueba. Las 
garrapatas a utilizarse deberán ser del género o cepa de la misma 
especie, descrita en el acápite 1.1.a) del punto 6 de esta Norma.  
b) Preparación de los animales . Sobre el dorso y lomo de los animales, se 
seleccionarán de 4 a 6 partes que ofrezcan las mejores condiciones para 
la prueba, trazándose sobre cada uno un círc ulo de aproximadamente 20 
cm de diámetro; alrededor de los círculos se rasura una franja de 4 -5 cm 
de ancho, para facilitar el pegado de las mangas de tela. Las mangas se 
confeccionan con tela de punto, la cual proporciona la elasticidad 
requerida en su ma nejo y evita el escape de larvas. Dichas mangas se 
adhieren utilizando pegamento de contacto, un día antes de iniciar las 
infestaciones, con el fin de favorecer la volatilización de los solventes 
presentes en el adhesivo.  c) Sistema de infestaciones . Gener almente en los trabajos con Boophilus 
se realizan 10 infestaciones cada tercer día para cumplir un periodo de 
27 días entre la primera y la última infestación. Esto permite que la 
mayoría de los especímenes de las primeras infestaciones completen su 
fase p arásita y puedan ser utilizados como controles para determinación 
de efectividad.  
En cada infestación se colocan por cámara entre 15 y 20 mg de larvas, 
que equivalen aproximadamente a 300 -400 especímenes, entre 15 y 45 
días de eclosionadas.  
d) Tratamiento . La aplicación de productos químicos en los animales o 
sobre las áreas infestadas se realiza de acuerdo con las recomendaciones 
y posología o concentración sugerida por el laboratorio productor. En 
caso de ixodicidas convencionales, se utilizan 500 ml de l íquido 
preparado para cada cámara, retirando la manga de infestación, el cual se 
aplica mediante una aspersora de gatillo con la apertura de boquilla que 
facilite una buena impregnación del área sujeta a tratamiento. Las áreas 
seleccionadas como testigo se rán asperjadas solamente con agua, 
utilizando el mismo volumen indicado para el producto.  
e) Seguimiento . Una vez que los animales o las áreas han sido tratados, se 
adhieren nuevas mangas, iniciando así el periodo de observaciones sobre 
el efecto de las g arrapatas. Diariamente se realizarán recolectas de todos 
los especímenes que se desprendan, registrándose y clasificándolos de 
acuerdo con sus características y condiciones. Las hembras repletas y 
semirepletas que presenten signos vitales serán alojadas en  cajas de petri, 
colocándose en incubadora bajo condiciones ambientales óptimas, con 
objeto de que continúen su ciclo biológico. También es registrado el 
peso de la ovoposición y el porcentaje de eclosión alcanzado por estos 
especímenes.  
f) Evaluación de r esultados . Los datos obtenidos en los seguimientos de 
pre y pos -tratamiento en los grupos testigo y tratado serán utilizados para 
realizar comparaciones en los parámetros biológicos siguientes: - 
Número de garrapatas producidas. - Efecto sobre la ovoposició n en las 
garrapatas del grupo tratado, que alcancen repleción pese a la aplicación 
del producto químico a evaluar. - Potencial reproductivo obtenido en base 
al número de larvas viables que se produzcan en cada grupo de trabajo. 
Los parámetros biológicos pro puestos se calcularán de acuerdo a las 
siguientes ecuaciones:  
- Efecto sobre la repleción:  
  A x D  
 % de E = 100 [ 1 - __________ ]  
  B x C  
Donde:  A = Número de garrapatas en el lote testigo pre tratamient o. 
B = Número de garrapatas en el lote testigo  pos tratamiento.  
C = Número de garrapatas en el lote tratado pre tratamiento.  
D = Número de garrapatas en el lote tratado pos tratamiento . 
-  Efecto sobre la ovoposición:  
  O / P T - O / P t  
 % I.O. = _____________________________ X 100  
  O / P T  
Dond e: 
I.O. = Inhibición de la ovoposición  
O / P = Peso de huevos/peso de garrapatas x 20,000 T = Lote testigo.  
t = Lote tratado  
- Efecto sobre el potencial reproductivo:  
  A(XL) x D (XL)  
 % E / P.R. = 100 [ 1 - __________________ ]  
  B(XL) x C (XL)  
Donde :  
A, B, C, D, son los mismos parámetros para calcular efectividad.  
(XL) = Número promedio de larvas, que se calcula de la siguiente 
manera:  
(P.O. x 20,000 x F.C. % Ecls.) / Nº O  
P.O. = Peso de la ovoposición  
F.C. % Ecls. = Fracción centesimal del porcenta je de eclosión  
Nº O = Número de garrapatas hembras repletas seleccionadas  
6.2.2  Prueba de establo con infestación libre . Esta prueba está diseñada para 
evaluar el efecto de la aplicación simple de un producto ixodicida a una 
concentración o dosis determin ada sobre animales infestados 
artificialmente de tal forma que, en el momento del tratamiento, se 
encuentren presentes en cantidades significativas todos los estadios de 
desarrollo de garrapata Boophilus, la cual deberá realizarse bajo el 
siguiente procedi miento:  
a) Selección del material biológico . Se utilizarán 6 bovinos de razas 
europeas con un peso de 200 -300 kg, los cuales serán mantenidos 
durante la ejecución de la prueba en infestaderos especiales con agua y 
alimento de alta calidad, proporcionada ―a d libitum‖.  Para las infestaciones se utilizan larvas de garrapatas Boophilus 
susceptibles a los acaricidas a probar. Su edad debe ser de entre 15 a 30 
días de eclosionadas.  
b) Alojamiento . Los animales sujetos a experimentación son colocados en 
compartimi entos específicos denominados infestaderos, donde es posible 
realizar los procedimientos de que consiste la prueba, con un mínimo de 
riesgos para los operarios y que a la vez permite al animal echarse o estar 
de pie. Los bovinos deben permanecer en estas c ondiciones durante toda 
la prueba.  
c) Infestaciones . Una vez que se cuenta con el número adecuado de 
animales se inicia el programa de infestaciones que consiste en colocar 
sobre el dorso y lomo de los animales, la cantidad de larvas previamente 
calculada,  de acuerdo con el modelo de la prueba seleccionada. Cada 
tercer día se colocan 500 mg de larvas, que equivalen a 10,000, 
realizándose de 9 a 10 infestaciones, dependiendo de la cepa utilizada; el 
tratamiento se aplicará 2 días después de la última.  
Este s istema de infestación permite tener garrapatas repletas unos 6 a 8 
días antes de aplicar el producto, que son necesarias como controles en 
los grupos testigo y tratado, así como para el cálculo de los porcentajes 
de efectividad diario, por fase y global. D e estas garrapatas se toman 
alícuotas representativas de 30 especímenes al día por bovino, para 
mantenerlas en condiciones óptimas de temperatura y humedad, con 
objeto de que completen la fase reproductiva.  
d) Tratamiento. Con la finalidad de evitar difere ncias significativas en 
cuanto a las condiciones y número de garrapatas por lote de trabajo, los 
bovinos sujetos a prueba se reparten de acuerdo a la media de garrapatas 
obtenidas en el periodo pre tratamiento, de tal forma que sean lo más 
homogéneo posibl e. 
La aplicación del producto químico se realiza de acuerdo a las 
condiciones y recomendaciones expresadas por el laboratorio productor, 
tanto en la posología o concentración, como en la vía de aplicación. El 
tratamiento se da al grupo de animales marcado como tratados, al 
segundo día de la última infestación programada.  
e) Seguimiento. Después de la aplicación del producto a evaluar, durante 
25 días como mínimo se realizarán observaciones, conteos y recolectas 
diarias de los bovinos; o bien, hasta que se d ejen de obtener garrapatas 
repletas en todos los animales. Todos los especímenes producidos por el 
lote tratado, así como una alícuota significativa del testigo, se 
mantendrán en condiciones óptimas de temperatura y humedad para 
permitir que continúen su f ase reproductiva.  
Los datos derivados de las observaciones y recolectas como: condiciones 
generales de salud de los bovinos; número y peso de garrapatas 
obtenidas; peso de la ovoposición y porcentaje de eclosión por grupo de especímenes por día por animal,  serán registrados en formas específicas 
para control adecuado de la información.  
Los datos obtenidos en los seguimientos de pre y pos -tratamiento en los 
grupos testigo y tratado serán utilizados para realizar comparaciones en 
los parámetros biológicos des critos en el punto 6.II.1 inciso f).  
6.2.3  Prueba de establo para la evaluación de productos de aplicación 
tópica denominados Pour -on. Mediante este tipo de ensayo, el ixodicida 
es desafiado sobre cantidades significativas de garrapatas en sus diferentes 
fases de desarrollo parásita como larvas, ninfas y adultos; aplicándose el 
tratamiento tal como lo sugiere el laboratorio productor, simulando 
condiciones naturales. Los indicadores biológicos de actividad a determinar 
son:  
- Efecto diario, global y por fa ses de desarrollo, sobre el número de 
garrapatas que alcancen la repleción pese a la aplicación del producto.  
- Efecto sobre la ovoposición diaria, global y por fases en garrapatas 
hembras repletas.  
- Efecto sobre el potencial reproductivo diario, por fa ses y global en 
garrapatas hembras repletas.  
- Variantes en el peso diario en garrapatas hembras repletas pos 
tratamiento.  
Esta prueba deberá realizarse bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección del material biológico. Se utilizarán 6 bovinos de raz as 
europeas con un peso de 200 -300 kg, los cuales serán mantenidos 
durante la ejecución de la prueba en infestaderos especiales con agua y 
alimento de alta calidad, proporcionada ―ad libitum‖.  
Las garrapatas que se utilizarán para las infestaciones serán larvas de 
garrapatas Rhipicephalus (Boophilus) microplus resistente a ixodicidas 
organofosforados y/o piretroides, con una edad aproximada de 15 a 30 
días de eclosionadas.  
b) Procedimiento de infestaciones . El procedimiento de infestación 
consiste en colo car sobre el lomo y dorso de cada animal, la cantidad de 
150 mg de larvas que equivalen a 3000 aproximadamente, cada dos, días 
hasta completar un total de once infestaciones. Este sistema permite 
obtener garrapatas hembras repletas entre cuatro y seis días  previos al 
tratamiento, las cuales son necesarias como controles en el grupo testigo 
y tratado, para hacer comparaciones válidas en ambos y estimando los 
parámetros biológicos establecidos con anterioridad.  
c) Seguimiento  pre tratamiento . Una vez detecta da la presencia de 
garrapatas hembras repletas, se inicia el seguimiento que comprende el 
conteo y colecta en todos los animales de experimentación, cuyo 
procedimiento continuará de igual forma hasta el final de la prueba. El número de especímenes por cont eo será registrado en las formas 
respectivas para este tipo de ensayo.  
Dada la característica particular de aplicación y para determinar los 
indicadores de actividad propuestos, las observaciones, conteos y 
colectas, así como el seguimiento pos tratamient o, se llevará a cabo 
tomando en cuenta tres zonas corporales del bovino, de acuerdo al 
siguiente esquema:  
Zona 1 Lomo y flancos  
Zona 2 Cabeza, cuello y pecho  
Zona 3 Entrepierna y vientre  
d) Tratamiento. Con el objeto de evitar variaciones significativas en 
cuanto a las condiciones y número de garrapatas por lote de trabajo, los 
bovinos serán agrupados de acuerdo al promedio general de especímenes 
registrados en el periodo de pre tratamiento, de tal forma que sean lo más 
homogéneo posible. Tres días poster iores a la última infestación, los 
animales serán pesados para determinar la dosis de producto para cada 
uno. La aplicación del producto se llevará a cabo en la línea media del 
cuerpo, desde la cruz hasta la región caudal, de acuerdo a la posología 
propues ta por el laboratorio.  
e) Seguimiento pos tratamiento. Posterior a la aplicación del producto, se 
realizarán observaciones, conteos y colectas diariamente, hasta que ya no 
se obtengan hembras repletas en todos los animales y se indicará la 
procedencia de los especímenes colectados, que serán registrados según 
la región corporal donde se localicen. Las hembras repletas, una vez 
pesadas, se incubarán a 27°C + 1 y 80% H.R., para la continuación de su 
ciclo vital.  
Con el objeto de detectar el efecto sobre la ovoposición, a los 14 días pos 
incubación, los huevos serán pesados y mantenidos en las condiciones 
anteriormente descritas, por 21 días, para calcular los porcentajes de 
eclosión respectivos. Ambos parámetros son útiles para calcular 
finalmente el efecto sobre el potencial reproductivo de los especímenes 
sujetos a tratamiento comparados con los controles.  
f) Procesamiento de datos. Con la información obtenida durante el ensayo 
se calcularán los parámetros biológicos propuestos con las mismas 
ecuaciones de l punto 6.II.1. Inciso f).  
6.3 Prueba  de campo para la evaluación de productos de aspersión con 
garrapata Boophilus spp. Estas pruebas están diseñadas con la idea de 
proporcionar un punto de vista objetivo sobre la efectividad de los productos 
cuando son a plicados en ganado naturalmente infestado y bajo condiciones de 
uso normales en el campo.  
El objetivo de esta metodología es el de encontrar la concentración o dosis 
mínima que alcanza una efectividad igual o superior al 98%, para que de esta manera se pue da calcular el factor de garantía que el producto dado ofrece 
cuando se aplica siguiendo las instrucciones de uso. Esta prueba se realizará 
bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección  de material biológico . Animales de experimentación: En estos 
ensayos s e requiere utilizar bovinos infestados naturalmente, con un mínimo 
de 40 garrapatas por lado, en proceso de repleción final. La edad o sexo de 
los animales no representa, en este caso, ninguna limitación; sin embargo, es 
recomendable realizar las pruebas c on ganado europeo de manejo para evitar 
trabajo excesivo en la manipulación de animales y conteo de especímenes.  
Garrapatas: Boophilus spp.  
b) Procedimiento experimental. Los lotes de trabajo serán determinados de 
acuerdo con las condiciones especificada s de aplicación del producto a 
evaluar. En el caso de ixodicidas convencionales, se realizarán en la misma 
explotación, tratamientos por aspersión, por lo que se deberán seleccionar 
predios que cuenten con las instalaciones adecuadas y un mínimo de 50 
anim ales infestados, repartidos como a continuación se indica:  
30 para tratamiento por aspersión.  
De los 30 bovinos seleccionados para la prueba de aspersión, deberán 
repartirse a su vez, en lotes de 5 animales cada uno, siguiendo el 
procedimiento de mantene r una cantidad uniforme en todos. Uno de estos 
lotes será retenido como testigo y los otros cinco se utilizarán para ser 
tratados con cada uno a las cinco concentraciones diferentes del producto a 
evaluar. Para la identificación de los animales, habrá que marcarlos con 
crayón para piel en la región pélvica, por ambos lados, y siguiendo una 
numeración progresiva.  
Para ambos tipos de pruebas, los grupos testigos deberán colocarse en un 
potrero diferente a aquel destinado a los bovinos en experimentación, sob re 
todo en los casos que se tenga conocimiento acerca de propiedades volátiles 
de los productos, como en el caso de ciertos piretroides que puedan interferir 
en el curso de la evaluación.  
Si el producto a probar requiere de un método de aplicación diferen te, se 
seguirán criterios similares en cuanto a su posología para los dos grupos de 
trabajo señalados.  
c) Conteos pre tratamiento. Con el objeto de determinar el número promedio 
de garrapatas Boophilus spp. En proceso de repleción final por animal previo 
al tratamiento, se realizarán al menos dos conteos por animal, un día antes y 
el día de la aplicación del producto. Sólo serán incluidas las hembras con un 
tamaño de 4.5 a 8 mm de longitud, que se encuentren localizadas en 
cualquiera de los dos lados en qu e pueda dividirse un animal, izquierdo o 
derecho, incluyendo además la cola desde los pliegues anales. Los conteos 
sucesivos deben realizarse en el mismo lado en que se iniciaron, haciéndolo 
general a todos los animales seleccionados para la prueba.  d) Tratamiento. En todos los casos, independientemente del tipo de producto y 
su forma de aplicación, se considera indispensable la realización de 
tratamientos con cinco dosis o concentraciones progresivamente más bajas a 
la recomendada por el laboratorio, inclu yendo ésta como la más elevada, para 
ser aplicada a lote de cinco animales infestados naturalmente en cada caso. 
Asimismo, en otro grupo de 25 animales se aplicará tratamiento de acuerdo a 
las recomendaciones y sugerencias de aplicación del laboratorio pro ductor. 
Para ambos casos deberá contarse con lotes testigos que se encuentren en las 
mismas condiciones de parasitosis que los tratados.  
e) Conteos pos tratamiento. Con el fin de evaluar el efecto de los tratamientos 
aplicados, se realizarán conteos diari os durante los 7 días posteriores. Todas 
las hembras repletas que se encuentren durante estas prácticas deberán ser 
recolectadas para llevar a cabo el seguimiento ―in vitro‖. Si esto es posible, 
las observaciones sobre los animales incluidos en la prueba s erán continuadas 
hasta el día 25 cada 48 horas.  
f) Seguimiento clínico. Tomando en cuenta los riesgos que los tratamientos 
pueden implicar para los animales sometidos a la prueba, se realizarán 
observaciones clínicas para detectar posibles consecuencias t óxicas en el 
periodo crítico después del tratamiento; para lo cual será necesario contar con 
los antídotos que permitan contrarrestar los efectos adversos.  
g) Análisis de resultados. Todos los datos derivados de la ejecución de la 
metodología expuesta será n anotados en hojas especiales de registro, para 
facilitar su procesamiento estadístico. Cuando el número de garrapatas 
presentes en los animales y las condiciones de la prueba lo permitan, se 
aplicará la forma de evaluación descrita para la prueba de esta blo; en caso 
contrario se utilizará la fórmula basada en la comparación del número de 
garrapatas presentes en los lotes tratados y testigo, antes y después del 
tratamiento.  
6.4. Prueba de campo para la evaluación de productos de aplicación 
tópica Pour -on. El objetivo de la prueba es corroborar los resultados obtenidos 
en los ensayos de establo y determinar el comportamiento del producto bajo 
condiciones de campo.  
A través de la prueba se busca determinar el efecto diario y global sobre la 
repleción de las  hembras; así como determinar en garrapatas hembras repletas 
los efectos sobre la ovoposición y el potencial reproductivo diario y global.  
Este bioensayo, deberá realizarse bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección del material biológico.  
Los bovino s se elegirán de un rancho que reúna las siguientes características:  
- Contar con un número de animales suficientes para seleccionar 30 con un 
mínimo de 40 garrapatas por lado en proceso de repleción. La edad o sexo 
de los animales no representa en este c aso ninguna limitación.  
- Posibilidad de separar físicamente el grupo tratado del control.  - Facilidades de manejo del ganado dentro del rancho, para realizar las 
observaciones durante el tiempo de la prueba.  
Garrapatas: Boophilus spp. de campo.  
b) Procedimiento experimental.  
Se formarán dos grupos de animales, el primero con 10 bovinos no recibirá 
ningún tratamiento y será utilizado como control; los 20 restantes se tratarán 
con el producto a evaluar de acuerdo a las recomendaciones técnicas 
propuestas para su uso en campo.  
Las observaciones pos tratamiento se llevarán a cabo los días 1, 3, 5, 7, 14 y 
21 posteriores al tratamiento, con la finalidad de determinar el tiempo de 
protección a la re infestación.  
6.5 Prueba de establo para evaluación de garra paticidas de aplicación 
sistémica mediante prueba de cámaras. Mediante esta prueba, se pretende 
establecer los porcentajes de efectividad de los garrapaticidas administrados 
por vía parenteral. Los parámetros a valorar son los mismos que se 
determinaron en  las pruebas de inmersión, aspersión o tópicos, consistentes en:  
- El porcentaje de supervivencia y efectividad diaria, por fase parásita y global 
sobre el total de garrapatas hembras que alcancen la repleción pese al 
tratamiento.  
- El efecto sobre la ovo posición diaria por fase parásita y global en garrapatas 
hembras repletas.  
- El porcentaje de control diario, por fase y global sobre el potencial 
reproductivo en garrapatas hembras repletas.  
Esta prueba deberá realizarse bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección del material biológico . Se utilizarán seis bovinos de raza europea 
con un peso aproximado de 300 kg, que serán alojados en infestaderos 
individuales para facilitar el manejo, los conteos y las observaciones diarias 
durante la fase experimenta l.  
En los costados de cada animal se seleccionarán 2 áreas de infestación, en 
donde se procederá a afeitar una franja de 5 cm. de ancho, obteniéndose una 
zona central con pelo, de un diámetro aproximado de 88 cm2. En cada uno de 
estos sitios se colocará u na cámara de tela de 35 x 25 cm a manera de manga, 
fijándose ésta a la piel del animal con pegamento de contacto. El extremo 
libre quedará cerrado por medio de un hilo elástico para facilitar las 
observaciones y colectas de especímenes, así como para evita r la fuga de los 
mismos.  
Garrapatas: Rhipicephalus (Boophilus) microplus cepa susceptible a 
ixodicidas organofosforados y piretroides sintéticos.  b) Procedimiento experimental. Se realizarán 10 infestaciones en cada cámara 
los días lunes, miércoles y vier nes, por un periodo de 30 días entre la primera 
y última infestación; colocándose 15 mg de larvas equivalentes a 300 
especímenes, con una edad de 15 días de eclosionadas.  
c) Conteo pre tratamiento. Una vez detectada la presencia de garrapatas 
hembras repl etas en la cámara, se inicia el seguimiento diario que consiste en 
recolectas y conteos de todos los especímenes recién desprendidos, siguiendo 
este procedimiento de igual forma hasta la culminación de la fase 
experimental en los infestaderos. El número de  especímenes por conteo será 
registrado en las formas específicas. Las hembras repletas serán pesadas e 
incubadas en condiciones óptimas de temperatura y humedad relativa.  
d) Tratamiento. A tres días de iniciada la recolecta de especímenes, se 
procederá a aplicar el tratamiento en 4 bovinos y los dos restantes serán 
controles, la aplicación del producto será por inyección subcutánea en la 
parte frontal o posterior de la escápula a la dosis recomendada por el 
laboratorio solicitante de la evaluación.  
e) Conteo pos tratamiento Los especímenes recolectados en cada una de las 
cámaras durante esta fase de trabajo, serán clasificados y alojados en cajas de 
petri desechables de 100 x 15 mm. Las garrapatas hembras repletas se 
pesarán e incubarán a 27°C y 80 % de hu medad relativa. A los 14 días pos 
incubación, los huevos serán retirados y pesados, anotándose todos los datos 
resultantes en las hojas de registro respectivas.  
Los huevos se alojarán en viales de vidrio e incubados en las condiciones de 
microambiente desc ritas con anterioridad, por 25 días, para posteriormente 
calcular los porcentajes de eclosión. Tanto la ovoposición, como la eclosión, 
son parámetros biológicos necesarios para que finalmente, se pueda calcular 
el efecto total sobre el potencial reproducti vo de los especímenes sujetos a 
tratamiento comparados con los controles.  
f) Análisis de resultados. Con la información obtenida durante el ensayo, se 
calcularán los parámetros biológicos propuestos con las mismas ecuaciones 
matemáticas del punto 6.2.1. In ciso f).  
6.6 Prueba de campo para evaluación de garrapaticidas de aplicación 
sistémica. El procedimiento en su totalidad es similar al de las pruebas de 
campo para la evaluación de productos de aplicación tópica, variando 
únicamente en lo relativo a la fo rma de aplicación del producto.  
6.7 Prueba de campo para evaluación de garrapaticidas de aplicación 
mediante bolos de liberación lenta. Tiene como finalidad determinar la 
efectividad de un ixodicida intrarruminal de liberación lenta en ganado bovino 
natur almente infestado, utilizando como parámetros de evaluación, los mismos 
que se usan en las otras pruebas de campo consideradas en esta Norma.  
Esta prueba se realizará bajo el siguiente procedimiento:  
a) Selección  del material biológico.  Se seleccionarán 30 bovinos de la raza 
Pardo Suizo o similar, con un peso aproximado de 200 a 250 kg. Los 
animales que reciban el tratamiento no podrán ser utilizados para consumo 
humano por 210 días, a partir del día de que el bolo fue administrado.  
Garrapatas: Boophilus  spp. de campo.  b) Procedimiento  experimental . Debido a las características de este trabajo y a 
la limitada oportunidad de realizar observaciones frecuentes sobre los 
animales seleccionados, se utilizará un lote experimental con un mínimo de 
20 bovinos y un grupo control con 5 o 10 animales. Como el tipo de 
tratamiento no implica alguna posible vía de contaminación de los animales 
testigos por parte de los tratados, no será necesaria la separación de los 
grupos de trabajo. La prueba tendrá una duración de 5 meses a partir del 
inicio de ensayo.  
c) Conteos  pre tratamiento . Antes de la administración de los bolos 
intrarruminales con ivermectina y placebo, se deberán realizar dos conteos de 
garrapatas de ambos géneros, para lograr una mayor homogeneidad en los  
lotes experimentales y tener una referencia en los cálculos de efectividad 
respectivos.  
En el caso de garrapatas Boophilus spp. sólo serán sujetos de registro 
aquellos especímenes en proceso de repleción con un tamaño entre 0.4 a 0.8 
cm de largo y que se  presenten en el lado derecho del animal, incluyendo cola 
y muslo.  
d) Tratamiento. La administración de los bolos intrarruminales se realizará a 
uno de los dos grupos dejando al otro como testigo, haciendo la aplicación se 
realizará de acuerdo a las instru cciones que al respecto proporcione el 
laboratorio productor, una vez que finalice el segundo conteo.  
e) Conteos pos tratamiento . Siguiendo los criterios señalados para el conteo de 
especímenes, se realizarán visitas de inspección los días 7, 14, 21, 42, 63, 84, 
105, 120 y 135 para lograr un total de 9 observaciones, en un lapso de 4.5 
meses. Siempre que sea posible, se realizarán recolectas de especímenes para 
su seguimiento en el laboratorio aprobado, para determinar capacidad de 
supervivencia y potencia l reproductivo en los adultos.  
f) Análisis  estadístico.  Los resultados obtenidos serán sujetos a un análisis 
estadístico para determinar la efectividad del tratamiento en forma mensual y 
por el periodo total, aplicando las ecuaciones establecidas para cad a uno los 
parámetros biológicos a consideración, como son: sobrevivencia, capacidad 
de muda, efectos sobre ovoposición y potencial reproductivo.  
7. Bibliografía Álvarez, V., R. Bonilla & I. Chacón. 1999. Determinación de la 
resistencia de la garrapata Rhip icephalus (Boophilus) microplus (Acari: 
Ixodidae) a organofosforados y piretroides en Costa Rica. Rev. Cien. Vet. 22 
(2): 41 - 60. 
Anónimo. 1980. Informe Final Proyecto Estudio de Factibilidad para el 
Control de la Garrapata, p. 1 -118. San José. Costa Rica.  
Anónimo. 2001. Cálculo de parámetros biológicos de la prueba biológica y 
bioensayos con concentraciones múltiples (Probit), p. 40. In M. Santamaría & 
N. Soberanes (eds.). Curso – Taller sobre Diagnóstico de Resistencia a 
Ixodicidas en Garrapatas Boophilus  microplus. Jiutepec, Morelos, México.  
2º—Transitorio Único : Todos los ixodicidas de uso en bovinos, inscritos en la 
Dirección de Medicamentos Veterinarios deberán aplicar y pasar la prueba de eficacia 
realizada en el LANASEVE como requisito para su Renova ción de Registro.  3º—Rige a partir de su publicación en el Diario Oficial La Gaceta . Se ordena 
igualmente su publicación en la página electrónica del SENASA.  
Dado en Heredia, Barreal de Ulloa, a las ocho horas del diecisiete de diciembre del dos mil nueve. —Yayo Vicente Salazar, Director 
General, Servicio Nacional de Salud Animal. —Dr. Benigno Alpízar, Director de Medicamentos Veterinarios. —1 vez. —O.C. Nº 8971. —
Solicitud Nº 41445. —C-704670. —(IN2010010302).