中华人民共和国国家标准  
 
GB xxxx—xxxx 
 
  
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  
 xxxx -xx-xx实施  
 食品安全国家标准  
贝类中腹泻性贝类毒素的测定  
（征求意见稿）  
 GB xxxx—xxxx  
I 前    言 
本标准代替 GB/T 5009.212 -2008《贝类中 腹泻性贝类毒素的测定》 。 
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：   
—— GB/T 5009.212 -2008。 GB xxxx—xxxx  
1 食品安全国家标准  
贝类中腹泻性贝类毒素的测定  
1 范围 
本标准规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素 的测定方法。 
本标准适用于贝类及其制品中 腹泻性贝类毒素的 测定。 
2 术语和定义 
下列术语和定义适用于本标准。  
3.1 腹泻性贝类毒素 diarrhetic shellfish poinson ，DSP 
以大田软海绵酸（ okadaic acid，简称OA）及其衍生物为代表 、摄食后可产生以腹泻为主要特征
的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称。  
3.2 鼠单位 mouse unit ，MU 
对体重为 16 g～20 g的3只雄性 ICR小鼠腹腔各注射 1 mL贝类毒素提取液后，使 2只或 3只小鼠在24 
h内死亡的最低毒素量定义 为1个鼠单位。  
3 原理 
用丙酮提取贝类中 DSP毒素，经乙醚分配后，经减压蒸干，再以 含1%吐温 -60的生理盐水为分散介
质，制备 DSP-1%吐温 -60生理盐水混悬液，将该混悬液注射入小鼠腹腔，观察小鼠存活情况，计算其
毒力。  
4 试剂和材料  
除非另有说明， 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 
5.1 丙酮（C3H6O）。 
5.2 无水乙醚（C4H10O）。 
5.3  1%吐温 -60的生理盐水： 称取 1.0 g吐温 -60 (C 64H126O26)，溶于生理盐水（ 0.85％ NaCl）中，并
定容至 100.0  mL，4℃保存。 
5.4 小鼠：体重 为16 g～20 g的健康ICR品系雄性小鼠 。 
5 仪器和设备  
6.1  旋转蒸发器 。 
6.2  圆底烧瓶： 500 mL、250 mL、100 mL、50 mL。 
6.4  布氏漏斗 。 
6.5  天平：感量 0.1 g。 GB xxxx—xxxx  
2 6.8  一次性注射器： 1 mL。 
6 试样保存和制备  
7.1 样品的保存  
7.1.1  样品应有充分的代表性。去壳贝肉、带壳 贝类或罐装贝类样品等 ，均应采取足够的数 量并使贝
肉达 400 g以上。  
7.1.2  不能及时送检的样品，除 可常温保存的样品外 ，应将样品 置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带
壳样品，应按 7.2的方法开壳，去除水分后冷冻送检。  
7.2  样品的制备  
7.2.1 生鲜带壳样品的前处理  
用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其它 异物，取出贝肉 。
严禁以加热或药物方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织
呈暗绿色或褐绿色）。  
将去壳贝肉放在孔径约 2 mm的金属筛网上，沥水 5 min，按 7.2.3制备检样。  
7.2.2 冷冻样品的前处理  
在室温下使冷冻样品 融化呈半冷冻状态。带壳冷冻 的样品按 7.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此
时的贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片， 用吸水纸 轻轻抹去水分后，按 7.2.3制备检样；事
先已去除水分的冷冻去壳样品，室温 融化后，按 7.2.3制备检样。 
7.2.3 检样制备  
对于可以切取中肠腺 的贝类（扇贝、贻贝及牡蛎等），称量 200 g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，
将中肠腺称重后作为检样备用， 注意不要使中肠腺内容物污染制样工具； 不便切取中肠腺的贝类样品，
称量 200 g贝肉后，可将全部贝肉细切 后混合，作为检样。  
7 检验步骤  
8.1 试样提取  
8.1.1 将检样置于均质杯 中，加3倍量丙酮 后均质2 min以上。如为小均质杯，可分两次操作。  
8.1.2 将均质好的物质倒入布氏漏斗中抽滤，收集滤液。  
8.1.3 对残渣分别用残渣 2倍量的丙酮再清洗两次，滤液与 8.1.2滤液合并。  
8.1.4 将滤液移入 500 mL的圆底烧瓶中，56 ℃±1 ℃下，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出
油状物。  
8.1.5 用100 mL～200 mL乙醚溶解油状物，倒 入分液漏斗内， 再用少量的乙醚清洗 圆底烧瓶，合并
倒入分液漏斗内 ，以少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下
层）。  
8.1.6 用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次， 去除水层 ，再将乙醚层移入 250 mL或500 mL的圆底
烧瓶中，于 35℃±1℃减压浓缩去除乙醚。  
8.1.7 用少量乙醚将浓缩物移入 50 mL或100 mL圆底烧瓶 中，再次减压浓缩去除乙醚。  GB xxxx—xxxx  
3 8.1.8 以1%吐温 -60的生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到 10 mL，充分振摇，制成均匀
DSP-1%吐温 -60生理盐水混悬液。此时 1 mL溶液中相当于含有 20 g贝肉，以此悬浮液作为试验原液
进行动物实验。  
8.1.9 以试验原液注射小鼠， 24 h内2只或 3只小鼠死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。
稀释前，应先振荡使试液成均匀悬浮液，再取其部分以 1%吐温 -60生理盐水稀释 。 
8.2 小白鼠试验  
8.2.1 选择 16 g～20 g健康 ICR雄性小鼠 6只， 随机分为实验 组和空白对照组 （ 1%吐温 -60生理盐水）
两组，每组 3只。 
8.2.2 待测液（ 试验原液或其稀释液 ）混匀后。分别取1 mL待测液或 1%吐温-60生理盐水腹腔注射 动
物。注射过程中若有一滴以上提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕
至小鼠停止呼吸死亡的时间， 未死亡的应连续 观察24h。 
8.2.3 观察时限 24 h内，在空白对照组小鼠正常的情况下， 实验组若出现 2只或 3只小鼠死亡，则应
按表 1进行最小染毒量动物实验或最大稀释度实验。  
8.2.4 腹泻性贝类毒素是一 类剧毒的混合物 ，为避免腹泻性贝类毒 素对健康的危害， 实验过程自始至
终应戴手套操作。橡胶手套、玻璃制品等用过的器材应在 5%的次氯酸钠溶液中浸泡 1 h以上，方可清
洗或丢弃 。同样，废弃的提取液等也应以上述溶液 浸泡后处理。小鼠尸体应按 GB 14925 要求焚烧处
理，其排放物应达到污物焚烧排放规定要求。  
 
表 表1  注射量与毒力的关系  
试验液  注射量  
（mL） 检样量1） 
（g） 毒力  
（MU/g） 
原液  1.0 20 0.05 
原液  0.5 10 0.1 
4倍稀释液  1.0 5 0.2 
4倍稀释液  0.5 2.5 0.4 
16倍稀释液  1.0 1.25 0.8 
16倍稀释液  0.5 0.625  1.6 
注： 1）以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳肉量。  
 
8 结果计算和 表述   
9.1 观察时限 24 h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若实验组无小鼠死亡或仅有 1只小鼠死亡，
则报告受检样品中 DSP毒力为： < 0.05 MU/g 。 
9.2 观察时限 24 h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若实验组有 2只或 3只小鼠死亡，则按 8.2.3 
进行动物实验，并根据表 1计算待检样品中 DSP毒力，报告该样品的毒力为： × × ×  MU/g 。