中华人民共和国国家标准  
 
GB 4789.31—xxxx 
 
 
 
 
  
 
食品安全 国家标准  
沙门氏菌、 志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌
的肠杆菌科噬菌体检验方法  
 
 
（征求意见稿）  
 
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  xxxx -xx-xx实施  GB 4789.31—xxxx  
I 前    言 
本标准代替 GB/T 4789.31 －2003《食品卫生微生物学检验  沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希
氏菌的肠杆菌科噬菌体检验方法》 。  
本标准与 GB/T 4789.31 -2003相比主要变化如下：  
——修改了滴加噬菌体的方法，用一次性 1mL注射器或 移液器代替原标准中的 输液器接管加上
4½号针头滴加；  
——增加了附录 B增菌液灵敏度测定方法。  GB 4789.31—xxxx  
1 食品安全国家标准  
沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的  
肠杆菌科噬菌体检验方法  
1 范围 
本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断方法 检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌
的噬菌体检验方法。  
2  设备和材料  
除微生物实验室常规灭菌、培养 的设备外，其他设备和材料如下：  
2.1  恒温培养箱 : 36±1℃, 42±1℃， 50±1℃ 
2.2  厌氧培养装置： 41.5±0.5℃。  
2.3  显微镜： 10×～100×。 
2.4  水平仪：噬菌体试验的工作台面必须调整至水平位置。  
2.5  已灭菌 1mL一次性注射器，针头无编号，使用前测定每滴 5~10  L（每 mL有100~200 滴）可用。
必需用塑料材质的， 这样易于控制每一滴噬菌体的流速。 不 能用玻璃材质的， 玻璃注射器活塞极易下滑。  
2.6  微量移液器及吸头 （10 L和5 L） 
2.7  定量移液器及吸头 （100 L和50 L） 
2.8  灭菌吸管 : 10 mL，5 mL，1 mL。 
2.9  灭菌毛细管  
2.10 灭菌培养皿 : 90 mm。 
2.11 灭菌棉签  
2.12 带盖的灭菌小试管 : 8×50 mm。 
2.13 载物玻片  
3  培养基和试剂  
3.1 亚硒酸盐胱氨酸（ SC）增菌液（见附录 A，下同）  
3.2 四硫磺酸钠煌绿（ TTB）增菌液  
3.3 志贺氏菌（ BCT）增菌液  GB 4789.31—xxxx  
2 3.4 营养肉汤（ NB） 
3.5 营养琼脂（ NA） 
3.6 营养半固体琼脂（ NSA） 
3.7  三糖铁琼脂 （TSI） 
3.8  葡萄糖铵琼脂  
3.9  肠杆菌科诊断用噬菌体， 7种和 3种。必要时可再购置大肠埃希氏菌分型噬菌体（ 6种）一套。
安瓿启开后用无菌毛细管吸出移入灭菌小试管内，如果每次使用量很少，可分装于 2~3支试管内。保
存于 5℃冰箱备用。  
3.10  沙门氏菌因子血清，志贺氏菌分型因子血清，致泻大肠埃希氏菌分型因子血清。因子血清的种
类视需要而定。  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 GB 4789.31—xxxx  
3 －,－  + 4  检验程序  
4.1检验沙门氏 菌的程序如下：  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 检   样 
O-1裂解  
其他均不裂解  
非如左述的  
各种反应结果  
沙门氏菌  
血清学试验证实  非沙门氏菌  沙门氏菌  
血清学试验证
实 
 沙门氏菌  
血清学试验 证实  
 非沙门氏菌  非沙门氏菌  
报   告 前增菌、增菌和分离、按 GB 4789.4 ，见正文  
挑取可疑菌落  
TSI(斜面、底面、产气、 H2S) 
蛋白胨水（靛基质）  
尿素（ pH7.2）,KCN,赖氨酸  
H2S+,靛基质—， 
尿素—，KCN—，       
赖氨酸＋ 
 
 噬菌体试验  
H2S+，靛基质 +， 
尿素—，KCN—， 
赖氨酸 + 各种噬菌体  
均不裂解  非如左述的  
各种裂解结果  
H2S—，靛基质 —， 
尿素—，KCN—， 
赖氨酸 +/－ 
ONPG  甘露醇、山梨醇  
－ ＋,＋ 
- GB 4789.31—xxxx  
4 4.2检验志贺氏菌的程序如下：  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 噬菌体试验  
Sh裂解，并呈现  
各种裂解模式  
 Sh不裂解  
血清学试验与裂解模式相符  
且被 1 RTD Sh裂解  血清学试验与裂模式不相符  
或不被 1 RTD  Sh 裂解  
生化分群试验  葡萄糖铵试验  
必要时加做乙酸钠、克氏柠檬酸盐、
粘液酸、七叶苷、水杨苷试验  
七叶苷 \水杨苷试验  
志贺氏菌属  
分群及分型结果  葡萄糖铵 + 
或任何其他阳性结果  
非志贺氏菌  
报 告 非志贺氏菌  
 非志贺氏菌  非如左述的各
种反应结果  检 样 
挑取可疑菌落  
TSI，葡萄糖半固体  增菌和分离 ,按GB 4789.5 ，见正文  
TSI底层产酸 ,斜面产碱， H2S－ 
不产气，无动力  GB 4789.31—xxxx  
5 4.3检验致泻大肠埃希氏菌的程序如下：  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 检    样 
E和或 Sh、E－4 
噬菌体不裂解  
其他噬菌体裂解  
不同来源分离的菌株  
其裂解模式  
具有同一性  
 TSI，靛基质，  
pH7.2尿素， KCN,  
赖氨酸，动力  
TSI底层＋， H2S－, 
KCN－，尿素－  非如左述  
各种反应 结果  
血清学试验  
ETEC+  增菌和分离 ，按GB 4789.6,GB 4789.36  
E和或 Sh、E－4 
噬菌体裂解  各种噬菌体均不裂解  
氧化酶－， G－杆菌  
EPEC+  
 
产肠毒素大肠  
埃希氏菌  非大肠  
埃希氏菌  赖氨酸－，靛基质 +， 
动力－ (O124动力 +/－) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 肠毒素 + EIEC+  非如左述  
各种反应结果  
 
非大肠  
埃希氏菌  
 非致泻大  
肠埃希氏菌  
 肠道侵袭性  
大肠埃希氏菌  肠道致病性  
大肠埃希氏菌  乳糖发酵或不发酵  
的菌落 3~5个 
噬菌体试验  
STEC(O157)  
stx1,stx2,hly + 
产志贺毒素  
大肠埃希氏菌  
报告  eae+ 
 GB 4789.31—xxxx  
6 5  操作步骤  
5.1 前增菌、增菌和分离  
5.1.1检验沙门氏菌的前增菌、增菌和分离，按 GB 4789.4 进行。标准规定的目标是要在 25 g食品样
品中检出 1 cfu的沙门氏菌。沙门氏菌的前增菌有提高增菌液灵敏度的作用，但是只提高 1~2个指数
级，所以对于沙门氏菌增菌液灵敏度的测定还是重要的（测定方法见附录 B） 。在食品行业从业人员的
肠道沙门氏菌带菌检 验时，采集的标本不需要前增菌，但是必须增菌。食物中毒事件中有关的标本也
不需要前增菌。所采集的标本可以做增菌和不增菌的各一份。  
5.1.2  检验志贺氏菌的增菌和分离，按 GB 4789.5 进行。没有厌氧培养条件的实验室可以采用附录 A
中的 BCT增菌液。菌痢爆发时患者的粪便标本可做增菌和不增菌各一份。  
5.1.3  检验致泻大肠埃希氏菌的增菌和分离，按 GB 4789.6 和GB 4789.36 进行。致泻大肠埃希氏菌感
染爆发时，所采集的标本应同时做增菌的和不增菌的各一份。  
5.2 噬菌体试验  
5.2.1 培养基的准备  
营养琼脂平板（含琼脂 1%~1.5% ，琼脂量视其凝固性而定，约为一般用量的四分之三，为防止变
形杆菌的蔓延生长，可按 0.02%量加入十二烷基硫酸钠） ，营养琼脂加热溶化后，加入每个 9 cm平皿
中约 20~25  mL， 放在水平台面上待其凝固。 翻转平板， 在 361℃培养箱内半开皿倒置约 1 h，或 501℃
培养箱内 半开皿倒置约 30 min，以烘干培养基表面水分，并使琼脂具有显著的吸水性。  
5.2.2 试验菌液的准备  
从选择性鉴别平板上挑取菌落，一般应多挑几个菌落，以防遗漏。检验沙门氏菌时，不但应挑取
乳糖阴性产 H2S和不产 H2S的菌落，还应挑取乳糖阳性产 H2S的菌落。检验大肠埃希氏菌时应挑取乳
糖阳性或阴性的菌落 3~5个。检验志贺氏菌时应挑取可疑菌落接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体管，于
361℃培养箱内培养 14~24  h，次日选取三糖铁底层产酸、斜面产碱，不产 H2S，不产气无动力的培养
物。下述两种方法可供选用。  
5.2.2.1 方法一： 将待试菌落接种于营养肉汤管内，于 361℃培养 14~24  h。挑取此肉汤培养物 1满
环（约 5 L） ，稀释于盛有 1~2 mL的营养肉汤管内，使成为 1:200~1 :400稀释菌液，含菌量约 为1×
106/mL。 
5.2.2.2 方法二： 用接种针在鉴别平板上轻轻蘸取可疑菌落，挑取菌量不宜过多，稀释于盛有 1~2 mL
营养肉汤管内，使其含菌量约与方法一相似。  
5.2.3 涂抹试验菌液  
5.2.3.1 斑点涂抹法： 将营养琼脂表面自圆心起分为三等分或二等分，每等分可供涂抹 1株细菌培养
物。每挑取试验菌液 1满环，涂抹直径约 1 cm的菌斑一个。每株培养物涂抹菌斑 7个，外圈 5个，内
圈2个。  
5.2.3.2 棉签涂抹法： 用无菌棉签蘸取试验菌液并略挤去过多液体，在如上琼脂平板表面三分之一的
区域内涂抹。三个涂抹区之间 保持适当距离。  
略等数分钟，待菌液干燥。  
5.2.4 滴加噬菌体  
用定量为 1 mL的一次性注射器（针头无编号， 1 mL约有 100~200 滴，每滴相当于 5~10  L） ，在
每一个菌斑上滴加噬菌体。或用定量为 10 L或5 L的微量移液器在每一个菌斑上滴加噬菌体一滴，
每滴加一种噬菌体必须更换一副注射器或一个吸头，但是每副注射器或每一个吸头可以滴完各株细菌
的同一种噬菌体。滴加的噬菌体依次为 O-I、C、Sh、E、CE、E-4和Ent。滴加噬菌体时必须将琼脂
平板放在水平台面上，液滴必须悬空滴下，不要污染针头或滴头。 待7种噬菌体均滴加完毕后，略等GB 4789.31—xxxx  
7 数分钟待噬菌体液干燥。翻转平板，放在 36℃培养 5~6 h，和 14~24  h各观察一次结果。  
如果仅有少数几株细菌作噬菌体试验，可用直径为 3 mm的接种环挑取噬菌体，每一满环相当于
5 L，依次加在菌斑上。灼热的接种环必须完全冷却后方可挑取噬菌体，故可以用两个接种环烧灼后
轮换使用。噬菌体试剂内没有任何防腐剂 `，除了防止污染外，还要尽量减少在室温放置的时间。  
5.2.5 试验结果的判定  
按表 1判定噬菌体试验的结果。必要（例如不能测定到完整的血清型）时，可吸取少许剩余的蛋
白胨水培养物 作靛基质试验，大肠埃希氏菌一般为靛基质阳性，沙门氏菌为靛基质阴性。  
表1 肠杆菌科噬菌体诊断表  
序号  噬菌体裂解模式  判定结果  
O-I C Sh E CE E-4 Ent 
1 CL - - - - - - 沙门氏菌属  
2 CL - - - - CL - 沙门氏菌属 (靛基质 -),大肠埃希氏菌 (靛基质 +) 
3 - CL - - (-) (-) - 弗劳地氏柠檬酸杆菌群 * 
4 - - CL v v v - 志贺氏菌属 **,大肠埃希氏菌  
5 CL - CL v v v - 大肠埃希氏菌  
6 v - - CL v v - 大肠埃希氏菌  
7 - - - - CL v - 弗劳地氏柠檬酸杆菌群 *,大肠埃希氏菌  
8 - - - - - CL - 大肠埃希氏菌  
9 - (-) v - - - CL 阴沟肠杆菌  
0 - - - - - - - 噬菌体不裂解培养物 ,用生化试验鉴定  
注：   CL 融合性裂解，   – 不裂解，   v 裂解或不裂解    * 含弗劳地氏柠檬酸杆菌、杨氏柠檬酸杆菌、布雷克氏柠
檬酸杆菌、沃克曼氏柠檬酸杆菌和吉伦氏柠檬酸杆菌   **按表 3检索并做血清学分型试验  
5.2.6 供快速检验 沙门氏菌的噬菌体简化诊断法  
采用如下 3种噬菌体： （ 1）沙门氏菌 O-I噬菌体； （ 2）E多价噬菌体，内含 E和Sh；（3）C多价
噬菌体，内含 C、CE和Ent。培养基和试验菌液的准备均同前法。  
涂抹试验菌液：斑点涂抹法将琼脂平板表面分为 4等分或 6等分，每等分可供涂抹一株细菌培养
物，每株培养物涂抹 3个菌斑，外圈 2个，内圈 1个。棉签涂抹法可将试验菌液在琼脂平板上涂抹成
带状，每个平板约可涂抹 5条菌带。略等数分钟，待菌斑干燥。  
依次滴加上述 3种噬菌体。斑点涂抹法，一般可把 O-I噬菌体滴加在内圈的菌斑上。带状涂抹法，
可将 O-I噬菌体滴加在菌带的左边。待噬菌体液滴干燥后，翻转平板，在 36℃培养 5~6 h，和 14~24  h
各观察一次结果。按表 2判定结果。  
表2  三滴法噬菌体试验简化诊断法   
O-I E多价  C多价  判定结果  
CL - - 沙门氏菌属  GB 4789.31—xxxx  
8 v CL v 大肠埃希氏菌  
- - CL 弗劳地氏柠檬酸杆菌群 * 
- - - 噬菌体不裂解培养物  
CL 融合性裂解， - 不裂解， v 裂解或不裂解， * 除表 1的注中所述外，并含阴沟肠杆菌和少数大肠埃希氏菌  
5.3 噬菌体不裂解培养物的补充生化试验  
有少数的沙门氏菌培养物不被 O-I噬菌体裂解，并有少数的大肠埃希氏菌培养物不被相应噬菌体
裂解，故应将不被各种噬菌体裂解的培养物接种三糖铁琼脂，按 GB 4789.4做5项生化试验，也可以
做商品化生化鉴定系统的试验，接着做血清学分型鉴定判定结果。  
5.4 血清学分型鉴定及其他补充试验  
5.4.1 沙门氏菌分型鉴定  按GB 4789.4 进行。如果判定为沙门氏菌时，必须得出完整的血清学分型鉴
定的结果。如果不能得出完整的血清学分型鉴定结果，例如确定了 O抗原，但是 H分型因子血清均不
凝集，判定的结果可能是错误的。  
5.4.2 致泻大肠埃希氏菌鉴定   按GB 4789. 6和GB 4789. 36进行。 但是各项标准提出的都是必须进行
分子生物学的试验认定，或必须做肠毒素试验证实。目前许多基层实验室还没有有关的实验条件，如
果检验标本系来自食物源性感染事件， 必然会采集到多份标本， 并分离出相应的大肠埃希氏菌培养物。
所以，这时除了完成必须做的生化试验和血清学分型外，可以首先要求初步同源性的认定，即所分离
的菌株应该同时被同样的几个噬菌体裂解。进一步可以用大肠埃希氏菌分型噬菌体试验，这些菌株应
该具有相同的裂解模式。并且应该测定 1 RTD噬菌体的裂解情况。至于在鉴定程序后面 所述的分子生
物学试验和肠毒素试验，可以要求上级实验室进行。  
5.4.2.1 产肠毒素大肠埃希氏菌，应该有肠毒素试验的证实。  
5.4.2.2 侵袭性大肠埃希氏菌，至少应该有生化试验的证实。即赖氨酸脱羧酶试验阴性、无动力、产
气或不产气（ O124血清型亦可以为有动力、不产气） ，靛基质试验应该是阳性。必要时应该做豚鼠角
膜试验结果应该为阳性， 质粒电泳应证明具有 120~140  Mdal大质粒， PCR试验应证明具有 ipaC或ipaH
基因。  
5.4.2.3 产志贺毒素大肠埃希氏菌 O157 :H7，典型的生化特性为：乳糖、蔗糖 产酸，葡萄糖产酸并多
数产气，硫化氢阴性，靛基质阳性，山梨醇迟缓发酵。应做 PCR试验证明具有产志贺毒素基因 stx1，
stx2和溶血毒素基因 hly。还可以做 1RTD的E-2噬菌体裂解试验，能被 1RTD的E-2噬菌体裂解（裂
解程度包括从 CL到少数几个噬斑） ， 现在已有许多其它血清型的大肠埃希氏菌被证明具有产志贺毒素
基因和溶血毒素基因。如有发现，应按照上述的程序进行鉴定。  
5.4.2.4 肠道致病性大肠埃希氏菌  应具有大肠埃希氏菌的典型生化特性，测定 eae基因（黏附屏蔽基
因）的 PCR试验为阳性。但应注意有的产志贺毒素 大肠埃希氏菌 eae试验也可为阳性。也可以做 EAF
（黏附因子质粒基因）或 bfp（菌毛捆绑形成基因）的 PCR试验。  
5.4.3 志贺氏菌分型鉴定  
5.4.3.1 记录噬菌体试验的结果，并按表 3判定血清学分型鉴定的方向。已知全部的志贺氏菌培养物
都能被 Sh噬菌体裂解，故 Sh噬菌体不裂解的培养物不属于志贺氏菌。且将 Sh噬菌体稀释到 1 RTD
时，仍有 99.0%的志贺氏菌培养物可被裂解。  
表3  噬菌体试验的结果和志贺氏菌血清学分型鉴定的方向  
序
号 噬菌体裂解模式  志贺氏菌血清学分型鉴定的方向  
O-I C Sh E CE E-4 Ent GB 4789.31—xxxx  
9 4-1 - - CL CL CL CL - 福氏 1-5,(鲍氏 11) 
4-2 - - CL CL CL - - 福氏 1,4,痢疾 2,鲍氏 5,7,11,16,17,( 宋内氏 I) 
4-3 - - CL CL - - - 宋内氏 I,痢疾 2,福氏 4,鲍氏 5,16.  
4-4 - - CL CL - CL - 宋内氏 II,福氏3… 
4-5 - - CL - - - - 福氏 6,鲍氏 1~4,偶数型 6~18(除16外),痢疾 3~12  
4-6 - - CL - CL - - 鲍氏 9,15 
4-7 - - CL - - CL - 痢疾 1,(宋内氏 II) 
5-1 CL - CL - - - - 鲍氏 13* 
CL 融合性裂解    - 不裂解   ( ) 内为罕见的结果   *鲍氏13型DNA同源性测定不符合志贺氏菌  
挑取三糖铁琼脂上的培养物，按噬菌体裂解模式，选用相应的志贺氏菌分型因子血清，做玻片凝
集试验。  
5.4.3.2 如按噬菌体裂解模式提示为福氏志贺氏菌 1~5型，可先用福氏多价血清做凝集试验。如呈现
凝集，再分别用各型和群因子血清检查，以确定所属血清型和亚型（见 GB 4789.5）。 
5.4.3.3 如按噬菌体裂解模式提示为福氏 6型，鲍氏各型或痢疾 3~12型，可先用福氏 6型血清做凝
集试验。福氏 6型血清不凝集者，可用鲍氏多价血清或痢疾 3~12型多价血清做凝集试验，如果呈现
凝集，再分别用各型因子血清检查。  
5.4.3.4 如按噬菌体裂解模式为宋内氏 II相菌而不被宋内氏血清凝集时，可直接按噬菌体裂解模式和
粗糙型菌落特征判定之。  
5.4.3.5 按噬菌体裂解模式所提示的方向做血清学试验不凝集者，或虽发现其被某一个分型因子血清
凝集而与噬菌体裂解模式不相符者，或虽与噬菌体裂解模式相符但不被 1 RTD的Sh噬菌体裂解者，
均应做葡萄糖铵试验以与大肠埃希氏菌相鉴别。葡萄糖铵试验阳性者为大肠埃希氏菌。必要时还可以
做如下的生化试验，即：醋酸盐、克氏柠檬酸盐和粘液酸的利用试验，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验，
七叶苷分解试验。 除宋内氏菌鲍氏 13型为鸟氨酸脱羧酶阳性， 并有少数宋内氏菌菌株可利用粘液酸外，
志贺氏菌属的培养 物均为阴性结果。 这些试验中任何阳性结果均提示为大肠埃希氏菌 （按 GB 4789.5）。 
5.4.3.6 检出的志贺氏菌培养物应符合该群的生化特性。但是福氏志贺氏菌 6型符合鲍氏志贺氏菌的
特性。靛基质阳性的志贺氏菌血清 型有痢疾 2型、 7型和 8型，鲍氏 5、7、9、11、13、15、16和17
型。福氏志贺氏菌 1~5型的靛基质反应较弱。靛基质阴性的志贺氏菌血清型为痢疾 1型、3~6型、9~12
型、福氏 6型、鲍氏 1~4、6、8、10、12、14和18型、宋内氏菌。  
5.4.3.7 鲍氏志贺氏菌 13型是唯一可被沙门氏菌 O-I裂解的菌株，而且此菌株只被高效价的 Sh噬菌
体裂解，此菌与志贺氏菌属各个血清型和大肠埃希氏菌低于 70%的DNA同源性，不属于种内关系。  
5.5 结果报告  
5.5.1 沙门氏菌检验的结果报告  
5.5.1.1  O-I噬菌体裂解，其他噬菌体均不裂解者，经沙门氏菌血清分型后报告。  
5.5.1.2  各种噬菌体不裂解，但生化试验提示为沙门氏菌，经沙门氏菌血清分型后报告，但是不可以
报告为未定型。 。  
5.5.2 志贺氏菌检验的结果报告  
5.5.2.1 Sh噬菌体裂解，呈现各种裂解模式，血清学试验与裂解模式相符者，可报告志贺氏菌血清型。
罕见血清型要求被 1 RTD Sh 噬菌体裂解，并符合志贺氏菌生化分群结果。  GB 4789.31—xxxx  
10 5.5.2.2非如上述的试验结果均报告非志贺氏菌。  
5.5.3 致泻大肠埃希氏菌检验的结果报告  
5.5.3.1  E和或 Sh、E-4噬菌体裂解，不同来源菌株的裂解模式具有同一性，或各种噬菌体均不裂解，
经血清学分型确定者可分别报告为产肠毒素大肠埃希氏菌 （要求有肠毒素试验结果） ， 侵袭性大肠埃希
氏菌 （要求赖氨酸阴性、 动力阴性， 但 O124亦可为动力阳性） ， 产志贺毒素大肠埃希氏菌 （限于 O157:H7
和O157:NM，应为 stx1, stx2, hly试验阳性）或肠道致病性大肠埃希氏菌（要求 eae试验阳性） 。  
5.5.3.2 非如 4.5.3.1的结果均报告为非大肠埃希氏菌或非致泻大肠埃希氏菌。  GB 4789.31—xxxx  
11 附录 A 
培养基及试剂  
A.1 亚硒酸盐胱氨酸（ SC）增菌液  
A.1.1  成分 
蛋白胨  5.0 g  
乳糖  4.0 g  
亚硒酸氢钠  4.0 g  
1% L -胱氨酸溶液  1.0 mL  
磷酸氢二钠（无水）  4.5 g  
磷酸二氢钠（无水）  5.5 g  
蒸馏水  加至 1 000.0mL  
pH 7.0~7.1   
A.1.2  制法 
称取 L-胱氨酸 0.1g（或 DL-胱氨酸  0.2g） ，加入 1 mol/L氢氧化钠溶液 1.5 mL，使胱氨酸溶解，
再加入蒸馏水 8.5 mL，即为 1% L -胱氨酸溶液。  
将蛋白胨、乳糖、胱氨酸加入于蒸馏水 800 mL中，为基础液。  
将亚硒酸氢钠加入于 100 mL蒸馏水中，为 A液。  
将磷酸氢二钠和磷酸二氢钠加入于 100 mL蒸馏水中，为 B液。  
    取基础液 4.0 mL，A液0.5 mL，B液0.5 mL混合，测定 pH。如果其 pH在7.0~7.1之间，可将此
3份溶液分别包装，在 120℃高压灭菌 15 min（从高压灭菌器开始加热到取出不超过 1 h） ，待其冷却
至常温后放入 5℃冰箱内保存。临用前将 3份溶液按比例混合，分装试管。  
如果 3份溶液混合后，其 pH偏酸，不到 7.0，则应调整磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的用量，同时也
要调整亚硒酸氢钠的用量。见 表1。在理论上，亚硒酸氢钠和两种磷酸盐加入溶液内以后，是呈离子
状态存在的，所以也可以用亚硒酸钠或者亚硒酸来配制。按其分子量进行计算，这几种试剂的用量已
在表 1中列出。如果亚硒酸氢钠是纯净的化学试剂，按照规定用量配制的增菌液，应当正好是 pH7.0。
使用前必须测定其增菌灵敏度，方法见附录 B。 
A.1.3  用途  供沙门氏菌增菌培养用。  
表1  不同亚硒酸盐和磷酸盐的用量  
亚硒酸盐的种类和用量 (g) 磷酸盐的种类和用量 (g) 
其中主要种类  用量  NaH 2PO 4(无水 ) Na2HPO 4(无水 ) 
亚硒酸钠 •H2O(100%)  5.0 8.6 0.8 
亚硒酸钠 •H2O (75%)  4.75 7.8 1.25 
亚硒酸钠 •H2O (50%)  4.5 7.0 2.65 
亚硒酸氢钠 (75%)  4.25 6.25 3.58 
亚硒酸氢钠 (100%)  4.0 5.5 4.5 
亚硒酸氢钠 (75%)  3.85 4.7 5.4 
亚硒酸氢钠 (50%)  3.7 3.9 6.35 
亚硒酸 (75%)  3.55 3.1 7.28 
亚硒酸 (100%)  3.4 2.3 8.2 
表中所列均为在 1000mL增菌液中的用量。  GB 4789.31—xxxx  
12 A.2  四硫磺酸钠煌绿（ TTB）增菌液  
A.2.1. 成分 
A.2.1.1. 基础液      
多价胨或初蛋白胨  3.0 g  
胆盐  1.0 g  
碳酸钙  10.0 g  
硫代硫酸钠  30.0 g  
0.1%煌绿水溶液  10.0 mL  
蒸馏水  加至 1 000.0 mL  
pH7.00.1  
A.2.1.2. 碘液        
碘 6.0 g  
碘化钾  5.0 g  
蒸馏水  20.0 mL  
    先将碘化钾溶解于蒸馏水中，再加入碘片，振摇至碘片完全溶解。贮于棕色瓶内，密塞备用。  
A.2.2. 制法   基础液配好后，经高压灭菌 120℃， 15 min。冷却后保存备用。临用前将基础液与碘液
混合，分装试管。 使用前必须测定其增菌灵敏度，方法见附录 B。 
A.2.3. 附注   为了防止变形杆菌的过度生长，可以在 1000  mL中加入磺胺噻脞 1.25 mg.。 
A.2.4. 用途  供沙门氏菌增菌培养用。  
A.3. 志贺氏菌（ BCT）增菌液  
A.3.1. 成分 
蛋白胨  20.0 g  
复合氨基酸  2.0 g  
牛肉膏  5.0 g  
三号胆盐  4.5 g  
柠檬酸钠  4.5 g  
硫代硫酸钠  4.5 g  
蒸馏水  加至 1 000 .0 mL 
pH7.20.1  
A.3.2. 制法  将蛋白胨、复合氨基酸和牛肉膏加入于 700 mL蒸馏水中，振摇使其溶解。将三号胆盐、
柠檬酸钠、 硫代硫酸钠分别溶解于各 100 mL蒸馏水中， 振摇使其溶解。 将 4种溶液分别高压灭菌 120℃，
15 min，冷却后，将 4种溶液按比例混合，校正 pH，记下所需的 NaOH溶液的量。临用前将 4种溶液
和所需的 NaOH溶液按比例混合，分装试管备用。  
A.4. 营养肉汤（ NB） 
A.4.1. 成分 
蛋白胨  15.0 g  
牛肉膏  3.0 g  
NaCl  5.0 g  
蒸馏水  加至 1 000.0  mL 
pH7.20.2  
A.4.2. 制法   配好后高压灭菌 120℃，20 min，备用。  
A.4.3. 用途   用于分离菌落，做成纯培养物，及供作靛基质试验用。  GB 4789.31—xxxx  
13 A.5. 营养琼脂（ NA） 
A.5.1. 成分和制法   在1000  mL营养肉汤内加入琼脂 15 g（如用作噬菌体试验，只加琼脂 10 g） ，高
压灭菌后趁热摇匀备用。  
A.5.2. 用途   用作菌落计数，菌种纯分离，普通琼脂斜面，和噬菌体试验。  
A.6. 营养半固体琼脂（ NSA） 
A.6.1. 成分和制法   在1000  mL营养肉汤内加入琼脂 3 g，高压灭菌后趁热摇匀备用。  
A.6.2, 用途  分装在小试管内，供作动力试验和保存菌种  
A.7. 三糖铁琼脂（ TSI） 
A.7.1成分 
蛋白胨  20.0 g  
牛肉膏  3.0 g  
乳 糖 10.0 g  
蔗 糖 10.0 g  
葡萄糖  1.0 g  
硫酸亚铁铵（含 6个结晶水）  0.5 g  
酚 红 0.025 g或5 g／L溶液 5 mL  
NaCl  5.0 g  
硫代硫酸钠  0.5 g  
琼 脂 12.0 g  
蒸馏水  加至 1 000.0  mL 
pH7.4± 0.1   
A.7.2制法   除酚红和琼脂外，将其它成分加入 400 mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约 10 min，加热煮
沸至完全溶解，调至 pH7.4±0.1。另将琼脂加入 600 mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约 10 min，加热
煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入酚红指示剂，混匀，分装试管（ 12 mm×100 mm），
每管约 2～4 mL，高压灭菌 120℃ 10 min或115℃ 15 min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。  
A.8.葡萄糖铵琼脂  
A.8.1成分 
NaCl  5.0 g  
MgSO 4· 7H 2O 0.2 g  
NH 4H2PO 4 1.0 g  
K2HPO 4 1.0 g  
葡萄糖  5.0 g  
琼脂  20.0 g  
0.2%溴麝香草酚蓝  40.0 mL  
蒸馏水  加至  1 000.0 mL  
pH6.80.1  
A.8.2制法   先将盐类和糖溶解于水内，校正 pH，再加琼脂，加热溶化，再加指示剂，混和均匀后分
装试管，高压灭菌 121℃ 15 min，放置成斜面。  
A.8.3 试验方法   用接种针轻轻触及培养物的表面， 在盐水管内做成极稀的悬液， 肉眼观察不到混浊，
以每一接种环内含菌数在 20~100  cfu之间为宜。将 接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普GB 4789.31—xxxx  
14 通斜面一支作为对照。 于36 °C1 °C培养 24 h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者
不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。  
A.8.4.试验原理   大肠埃希氏菌可以在只含有无机铵盐和葡萄糖或醋酸盐的培养基内生长，而志贺氏
菌则必须在培养基内添加一些氨基酸和生长因子后才能生长。醋酸盐试验原理与葡萄糖铵试验相同，
葡萄糖铵试验可在 24 h内获得阳性结果，醋酸盐试验需要培养 2~7 d。 
A.8.5.附注  容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热
灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。 所以做葡萄糖铵试验时，切
忌将原来细菌培养液内的氨基酸和生长因子带入。  GB 4789.31—xxxx  
15 附录 B  
增菌液灵敏度测定方法  
B.1. 沙门氏菌增菌液灵敏度测定方法  
    影响沙门氏菌增菌液灵敏度的原因如下： （ 1）在亚硒酸盐胱氨酸 (SC)增菌液中，亚硒酸盐和蛋白
胨共同加热高压灭菌，会产生一种红色化合物，增菌灵敏度下降。因此规定此增菌液不能高压灭菌，
只能煮沸灭菌。煮沸时是没有彻底灭菌的，所以规 定只能当天使用，不能保存。 （ 2）现在商家将它的
全部成分混合在一起，做成粉末状半成品培养基，以供使用。这种培养基当然也不能高压灭菌，只能
煮沸灭菌。这种培养基在保存过程中会逐步降低其增菌灵敏度，如果在生产当时培养基有 1 cfu的灵
敏度，到用户测定时可能至少有两个月以上，最好的有 100 cfu的灵敏度。到培养基粉末出现红色时，
其灵敏度从 103 cfu直至继续下降到 106 cfu。（3）市售的商品亚硒酸钠或亚硒酸氢钠的成分很不固定，
多次发生标签上载明是亚硒酸钠，实际上是亚硒酸氢钠，标签上载明是亚硒酸氢钠，实际上是亚 硒酸。
除了调整 pH外，还要注意调整亚硒酸盐的用量。 （ 4）有的单位配制好增菌液以后，保存在冷库内要
连续使用一周，往往是开始一天有阳性结果，以后就没有了，仔细观察，有的增菌液已经显示轻度混
浊了。 （ 5）试验表明， SC增菌液是可以高压灭菌的，不过各种成分要分开配制，冷却以后才可以混合。
而且在高压灭菌器内的时间不能超过 1 h。 所以应该使用小型的高压灭菌器， 并及时取出培养基待其冷
却。 （ 6）在四硫磺酸钠煌绿 (TTB)增菌液中，临时加入碘液的效果好，非临时加入的效果差。测定增
菌液灵敏度的方法如下：  
B.1.1  试验菌株   沙门氏菌鼠伤寒血清型，沙门氏菌肠炎血清型。  
B.1.2  干扰菌株   大肠埃希氏菌。  
B.1.3 将试验菌株和干扰菌株接种营养肉汤管，在 361℃培养 18~24  h。此时菌液的浓度大约在 109 
cfu/mL左右。大肠埃希氏菌菌液不必测定，在 0.1 mL中大约有 108 cfu的大肠埃希氏菌；沙门氏菌鼠
伤寒血清型和肠炎血清型的细菌数必须测定。按照后面所述的方法，进行测定。  
B.1.4   每组 8支15150 mm试管，单号试管内每管加入灭菌生理盐水 4.5 mL，双号试管内每管加入
灭菌生理盐水 5.0 mL。 
B.1.5  在1号管内加入沙门氏菌营养肉汤培养液 0.5 mL，在 2号管内加入沙门氏菌培养液 0.05 mL。
再从 2号管内吸取沙门氏菌稀释菌液，加入到 3号管内 0.5 mL，加入到 4号管内 0.05 mL。按此法继
续稀释到 8号管。每次稀释必须要更换一支吸管。这种稀释方法是以百倍递增稀释为主，目的是为了
减少在稀释过程中产生的误差。如果注意操作细节，误差可以减少到 5%以内。  
B.1.6   沙门氏菌菌落计数：吸取 6号管内的稀释菌液各 0.1 mL，分别点加在 2个营养琼脂平板上，
用弯曲的接种环将菌液均匀涂布，待平板表面的菌液 干燥后，于 361℃培养 14~24  h。计算平板上生
长的沙门氏菌菌落数，取其平均数。一般应该在 100个左右。  
B.1.7   紧接 B.1.5后，排好若干组每组 10支需要测定的增菌液，从后面起，第 8~10管，都加入 8号
稀释管的稀释菌液各 0.1 mL；然后，从第 7管到第 1管，逆顺序加入该稀释度的稀释菌液各 0.1 mL。 
B.1.8   然后，从后面起，逆顺序向每管内加入未稀释的大肠埃希氏菌菌液 0.1 mL。振摇各管，使加
入的菌液混合均匀。在 361℃培养 18~24  h。 
B.1.9 振摇各管，使培养物混合均匀。挑取 培养物，划线接种到鉴别培养基上，使能够出现单个菌落。
在361℃培养 18~24  h。 GB 4789.31—xxxx  
16 B.1.10  观察在鉴别培养基上沙门氏菌和大肠埃希氏菌菌落的生长情况。 按下面的标准， 记录增菌培养
的结果： ++++ 沙门氏菌菌落数在 90%以上， 大肠埃希氏菌的菌落很少；  +++  沙门氏菌菌落数在 80%
左右；  ++  沙门氏菌和大肠埃希氏菌的菌落数大约各占一半；  +  平板上生长的以大肠埃希氏菌的
菌落为主，但是沙门氏菌的菌落能见到，一般只有少数几个；   -  平板上生长的都是大肠埃希氏菌的
菌落，没有沙门氏菌的菌落。  
B.1.11 判定增菌液的灵敏度，是以  ++++ 和 +++ 的结果为准。 8~10号管 3管中有 1管或 1管以上
达到  ++++ ，或 +++ 的增菌效果，就可以认定已经达到这一管的灵敏度（一般就是  1 cfu）。 ++  和 
+  的结果，在实际工作中或许还能够被检出，也可能被疏忽。  
B.2 沙门氏菌增菌液灵敏度简易测定方法  
如果增菌液的灵敏度已经测定过，重新配制增菌液以后想再核对一下，可用简易方法测定。方法
如下：  
B.2.1   试验菌株、干扰菌株，及将菌株接种到营养肉汤和培养的方法均同 B.1.1~B.1.3. 。 
B.2.2  试验方法   准备 15150 mm灭菌试管 2支，分别加入灭菌生理盐水 5 mL。用直径为 3 mm的
接种环挑取试验菌株的营养肉汤培养物 1满环（ 5 L） ，稀释到 5 mL生理盐水中，此时相当于 1∶103 
稀释。再挑取此稀释液 1满环，稀释到另一支 5 mL生理盐水管中，此时相当于 1∶106 稀释。吸取此
稀释液 0.1 mL，涂布接种于一个营养琼脂平板上，以供作菌落计数，此时的菌落数大约在 80~100个
之间。再将此稀释液做成 1∶10和1∶100稀释。  
B.2.3  在2~4支增菌液管内，各加入未稀释的大肠埃希氏 菌肉汤培养物 0,1 mL，再在其中一管内加
入上述 1∶10稀释的试验菌液 0.1 mL，另外的 1~3支增菌液管内各加入上述 1∶100稀释的试验菌液
0.1 mL，将试管内液体振摇使其均匀。在 361℃培养 14~24  h。划线接种鉴别培养基，在 361℃培养
14~24  h后观察结果。接种上述 1∶10稀释的试验菌液的管相当于 B.1.试验方法中的第 7管，后面各管
相当于第 8~10管。  
B.3  志贺氏菌增菌液灵敏度测定方法  
    目前所用的志贺氏菌增菌液都不可能达到 1 cfu的灵敏度，只是测定是否比 GN肉汤好。再则志贺
氏菌与大肠埃希氏菌亲缘关系十分密切，各株大肠埃希氏菌作为干扰菌测定的结果差异颇大，故必须
用10株菌同时测定，以作比较。现在已有用厌氧培养的方法作为志贺氏菌的增菌方法，建议进行灵敏
度测定以作确证。  
B.3.1   试验菌株   福氏志贺氏菌 2a型，鲍氏志贺氏菌 4型，痢疾志贺氏菌 2型，宋内氏志贺氏菌各
1株。  
B.3.2   干扰菌株   大肠埃希氏菌 10株。  
B.3.3   对比增菌液，以 GN肉汤作为对比增菌液，以判定所测定的增菌液是否优于 GN肉汤。