Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
SECRETARIA DE SALUD 
PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-244-SSA 1-2005, Equipos y sustancias germicidas para 
tratamiento doméstico de agua. Requisitos sanitario s. 
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice : Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud. 
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY-NOM-244-SSA 1-2005, EQUIPOS Y SUSTANCIAS 
GERMICIDAS PARA TRATAMIENTO DOMESTICO DE AGUA. REQU ISITOS SANITARIOS. 
MIGUEL ANGEL TOSCANO VELASCO, Comisionado Federal p ara la Protección contra Riesgos 
Sanitarios y Presidente del Comité Consultivo Nacio nal de Normalización de Regulación y Fomento Sanita rio, 
con fundamento en el artículo 39 de la Ley Orgánica  de la Administración Pública Federal; 4o. de la Le y 
Federal del Procedimiento Administrativo; 3o. fracc ión XXIV, 13 apartado A, fracciones I y II, 17 bis fracciones 
II y III, 194 fracción I, 197, 199, 201, 210, 214 y  demás aplicables de la Ley General de Salud; 38 fr acción II, 
40 fracciones I, II, XI y XII, 41, 43, 46 y 47 frac ción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normali zación; 28 y 
33 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrologí a y Normalización; 167 fracción XI, 214 fracciones IV y V, 
227 y demás aplicables del Reglamento de la Ley Gen eral de Salud en Materia de Control Sanitario de 
Actividades, Establecimientos, Productos y Servicio s; 2o. literal C fracción X y 36 del Reglamento Int erior de la 
Secretaría de Salud; 3o. fracción I inciso O, fracc ión II, 10 fracciones IV y VIII, 12 fracción III y demás 
aplicables del Reglamento de la Comisión Federal pa ra la Protección contra Riesgos Sanitarios, me perm ito 
ordenar la publicación en el Diario Oficial de la F ederación el Proyecto de Norma Oficial Mexicana PRO Y-
NOM-244-SSA1-2005, Equipos y sustancias germicidas para tratamiento doméstico de agua. Requisitos 
sanitarios. 
El presente Proyecto se publica a efecto de que los  interesados, dentro de los siguientes 60 días 
naturales, contados a partir de la fecha de su publ icación, presenten sus comentarios por escrito en i dioma 
español y con el sustento técnico suficiente ante e l Comité Consultivo Nacional de Normalización de 
Regulación y Fomento Sanitario, sita en Monterrey n úmero 33, planta baja, colonia Roma, código postal 
06700, México, D.F., Tel. 50-80-52-00, Ext. 1480, f ax 55-11-14-99, correo electrónico rfs@salud.gob.mx . 
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY-NOM-244-SSA 1-2005, EQUIPOS Y SUSTANCIAS 
GERMICIDAS PARA TRATAMIENTO DOMESTICO DE AGUA. REQU ISITOS SANITARIOS 
Prefacio 
En la elaboración de este Proyecto de Norma Oficial  Mexicana participaron las unidades administrativas  e 
instituciones siguientes: 
SECRETARIA DE SALUD 
Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios 
Centro Nacional de Vigilancia Epidemiológica y Cont rol de Enfermedades 
COMISION NACIONAL DEL AGUA 
Subdirección General Técnica 
Subdirección General de Infraestructura Hidráulica y Urbana 
INSTITUTO MEXICANO DE TECNOLOGIA DEL AGUA 
Coordinación de Tratamiento y Calidad de Agua 
FEDERACION MEXICANA DE INGENIERIA SANITARIA Y CIENC IAS AMBIENTALES, A.C. 
DIAFRA, S.A. DE C.V. 
INSTAPURA, S.A. DE C.V. 
LION BUSSINESS, S.A. DE C.V. 
MERCK DE MEXICO, S.A. de C.V.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
INDICE 
0. Introducción 
1.  Objetivo 
2. Campo de aplicación 
3. Referencias 
4. Definiciones 
5. Símbolos y abreviaturas 
6. Especificaciones 
7.  Procedimiento para la evaluación de la conformidad  
8. Concordancia con normas internacionales y mexicanas  
9. Bibliografía 
10.  Observancia de la Norma 
11.  Vigencia 
 Apéndice Normativo A 
 Apéndice Informativo A 
 Apéndice Informativo B 
0. Introducción 
El objetivo de los programas de abastecimiento de a gua para uso y consumo humano es asegurar que 
toda la población alcance una dotación adecuada de agua de buena calidad. En México, se continua este 
esfuerzo; sin embargo, no se ha alcanzado la cobert ura total, por lo que un cierto número de usuarios recurre 
a fuentes alternativas y métodos intradomiciliarios  para subsanar deficiencias de la calidad del agua para uso 
o consumo humano. 
Los métodos intradomiciliarios o domésticos para pu rificar el agua de consumo humano, consisten en el 
uso de equipos de tratamiento y aplicación de susta ncias germicidas, orientados fundamentalmente al as pecto 
bacteriológico, considerado como de riesgo inmediat o a la salud y, en casos específicos, a la depuraci ón de 
características físicas y/o químicas. 
1. Objetivo 
Esta Norma Oficial Mexicana establece los requisito s sanitarios y características que deben cumplir lo s 
equipos y sustancias germicidas para tratamiento do méstico de agua. 
2. Campo de aplicación 
Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia oblig atoria en el territorio nacional para las personas 
físicas o morales que se dediquen al proceso e impo rtación de los equipos y sustancias germicidas a qu e se 
refiere esta Norma. 
3. Referencias 
Para la correcta aplicación de esta Norma Oficial M exicana es necesario consultar las siguientes: 
3.1  NOM-008-SCFI-2002. Sistema general de unidades de medida. 
3.2  NOM-092-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Método para  la cuenta de bacterias aerobias en placa. 
3.3 NOM-110-SSA1-1993. Bienes y Servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su 
análisis bacteriológico. 
3.4  NOM-112-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Determinaci ón de bacterias coliformes. Técnica del número 
más probable. 
3.5  Modificación a la NOM-127-SSA1-1994. Salud Ambient al. Agua para uso y consumo humano. Límites 
permisibles de calidad y tratamientos a que debe so meterse el agua para su potabilización. 
3.6  NOM-201-SSA1-2002. Productos y Servicios. Agua y h ielo para consumo humano, envasados y a 
granel. Especificaciones sanitarias. Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
3.7  NOM-213-SSA1-2002. Productos y Servicios. Producto s y servicios. Productos cárnicos procesados. 
Especificaciones sanitarias. Métodos de prueba. 
3.8  NOM-230-SSA1-2002. Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Requisitos sanitarios que 
se deben cumplir en los sistemas de abastecimiento públicos y privados durante el manejo del agua. 
Procedimientos sanitarios para el muestreo. 
4. Definiciones 
Para efectos de este Proyecto de Norma aparte de la s definiciones dadas en la Ley General de Salud, Le y 
General del Equilibrio Ecológico y la Protección al  Ambiente y la Ley de Aguas Nacionales se entiende por: 
4.1 Agua para uso y consumo humano,  agua que no contiene contaminantes objetables, ya sean 
químicos o agentes infecciosos y que no causa efect os nocivos para la salud. También se denomina como 
agua potable. 
4.2 Bactericida , a la sustancia o medio, que elimina o destruye a las bacterias. 
4.3 Bacteriostático , a la sustancia o medio que tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de bacterias, 
sin eliminarlas o destruirlas. 
4.4 Caducidad,  al tiempo que es útil la sustancia germicida conse rvando su poder activo. 
4.5 Equipo de tratamiento de agua de tipo doméstico ,  al que se instala en punto de uso domiciliario de 
agua para beber o cocinar, con capacidad máxima de 12 litros por minuto con el propósito de retener, e liminar 
o inhibir los microorganismos presentes en ella. 
4.6 Germicida , al agente químico (cloro, bromo, yodo, ozono u ot ro producto), que destruye 
microorganismos especialmente patógenos, lo que no necesariamente incluye la capacidad de destrucción de 
esporas. 
4.7 Método de prueba,  al procedimiento analítico utilizado en el laborat orio para comprobar que un 
producto satisface las especificaciones que estable ce la norma. 
4.8 Mesófilos aerobios, bacterias viables que determinan el grado de exposi ción del agua a la 
contaminación por microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento se encuentra entre los 20 y 
37° C. 
4.9. Modelo,  equipo con el mismo principio de actividad bacteri cida. 
4.10 Organismos coliformes termotolerantes,  son organismos capaces de formar aeróbicamente 
colonias a 317 ± 0.5 K (44 ± 0.5° C) en un medio de cultivo lactosado selectivo y diferencial, con prod ucción de 
ácido y aldehído dentro de un periodo de 24 horas. 
4.11 Proceso, el conjunto de actividades relativas a la elaboraci ón, fabricación, preparación conservación, 
acondicionamiento, manipulación, almacenamiento y e xpendio de equipos y sustancias germicidas. 
4.12 Vida útil,  es el lapso durante el cual el equipo está en cond iciones de realizar su función de manera 
óptima. 
5. Símbolos y abreviaturas 
El significado de los símbolos y abreviaturas utili zados en esta Norma es el siguiente: 
5.1 NMP Número más probable. 
5.2 pH Potencial de hidrógeno. 
5.3 UFC Unidades formadoras de colonias. 
6. Especificaciones 
6.1 Las personas físicas o morales que se dediquen al p roceso o importación de equipos y sustancias 
germicidas para tratamiento de agua de tipo domésti co, deben tener a disposición de la autoridad sanit aria , un 
informe de resultados de laboratorio sobre prueba d e potabilidad por cada modelo de equipo cada dos añ os o 
lote de sustancia en particular, de conformidad con  el método de prueba para evaluar la eficiencia en 
reducción bacteriana, descrito en el Apéndice Norma tivo A de esta Norma. El laboratorio que efectúe es tos 
análisis debe ser acreditado o tercero autorizado p ara el método de prueba de esta Norma. 
La prueba de potabilidad es aceptable, cuando el po rcentaje en reducción bacteriana es igual o mayor a  
95% para organismos mesófilos aerobios e igual o ma yor a 99.99% para organismos coliformes totales.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
6.2  La Secretaría de Salud determinará de acuerdo con el dictamen o solicitud fundamentada 
técnicamente de dependencias, organismos oficiales y empresas privadas, o por queja de un usuario, los  
casos en que un equipo de tratamiento de agua, comp lementariamente a la prueba de eficiencia en reducc ión 
bacteriana, debe ser sometido a pruebas de eficienc ia referidas a vida útil, la cual se efectuará de a cuerdo con 
la normatividad correspondiente; así como, cuando e l agua tratada con una sustancia germicida para el 
tratamiento de agua de tipo doméstico, complementar iamente a la prueba de eficiencia de reducción 
bacteriana, deba ser sometida a análisis de sustanc ias tóxicas provenientes de los ingredientes que 
componen dicha sustancia. 
6.3  Los equipos para el tratamiento de agua de tipo do méstico deben ostentar una etiqueta con las 
siguientes leyendas: Utilizar con agua de abastecim iento público y véase instructivo anexo. 
6.4  El instructivo o manual de operación del equipo de  tratamiento de agua de tipo doméstico, debe 
contener cuando menos la siguiente información en e spañol: 
6.4.1  Finalidad de uso. 
6.4.2  Instrucciones de operación. 
6.4.3  Condiciones de operación y en su caso, las restric ciones referentes a características de calidad de 
agua a considerar para llevar a cabo el método de p rueba o de verificación sanitaria. 
6.4.4 Procedimiento de mantenimiento. 
6.4.5 Vida útil referida a volumen de agua tratada o a ti empo. 
6.5 La etiqueta de la sustancia germicida, debe contene r cuando menos la siguiente información en 
español: 
6.5.1  Utilizar con agua de abastecimiento público. 
6.5.2 Finalidad de uso. 
6.5.3 Instrucciones de uso. 
6.5.4  Caducidad. 
6.5.5  No. de lote de fabricación. 
6.6 Las personas físicas o morales referidas en el punt o 6.1 de este apartado, deben tener a disposición 
de la autoridad sanitaria cuando ésta la requiera, la siguiente información: 
6.6.1 Ingredientes activos, formulación de materias prima s, componentes de las sustancias germicidas y 
partes componentes del equipo. 
6.6.2 País de origen de los ingredientes activos de la su stancia germicida o, en su caso, indicar si es en s u 
totalidad de importación. 
7. Evaluación de la conformidad 
Las personas físicas y morales que se dediquen al p roceso e importación de los equipos y sustancias 
germicidas a que se refiere esta Norma podrán solic itar a la Comisión Federal para la Protección contr a 
Riesgos Sanitarios (COFEPRIS) el DICTAMEN SANITARIO  DE EFECTIVIDAD BACTERIOLOGICA DE 
EQUIPOS O SUSTANCIAS GERMICIDAS PARA POTABILIZACION  DE AGUA TIPO DOMESTICO. 
Para lo cual deben realizar su pago de derechos por  la fracción 195-K-3 y presentar ante el Centro Int egral 
de Servicios de la COFEPRIS el FORMATO DE SOLICITUD ES inscrito en el Registro Federal de Trámites y 
Servicios, debidamente requisitado junto con los si guientes anexos: 
a)  Información técnica del producto: instructivo de u so u operación, hoja de seguridad del productos 
formulado o de las sustancias que formen parte del equipo, así como las características de dicho 
equipo. 
b)  Informe de pruebas de eficiencia bactericida o ger micida del producto, realizadas por la Comisión de 
Control Analítico y Ampliación de la Cobertura o po r Laboratorios Terceros Autorizados, y conforme a 
lo establecido en esta Norma 
c)  Etiqueta comercial del producto. Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
Los criterios de resolución están en base de: 
1.- El llenado correcto del formato oficial. 
2.- El pago de derechos. 
3.- Cumplimiento de las especificaciones sanitarias es tablecidas en la presente Norma. 
La COFEPRIS contará con 15 días hábiles contados a partir de la recepción de la SOLICITUD para emitir 
el dictamen correspondiente, en caso de que al térm ino del plazo ésta no ha respondido se entenderá qu e la 
solicitud fue resuelta en sentido negativo. 
8. Concordancia con normas internacionales y mexica nas 
Esta Norma Oficial Mexicana no es equivalente a nin guna norma internacional ni mexicana. 
9. Bibliografía 
9.1  Bacteriological Analytical Manual C. 8th. Edition.  Rev. A. Food and Drug Administration. Division of 
Microbiology. 1999. EUA. 
9.2  Methods of Analysis of the Association of Official  Analytical Chemists. 1995. Washington D.C. EUA. 
9.3  Procedimiento Normalizado de Operación CCAyAC-M-15 3 para la Evaluación de Germicidas. 
Laboratorio Nacional de Salud Pública. Gerencia de Investigación y Desarrollo de Pruebas Microbiológic as. 
COFEPRIS. México, D.F. 2005. 
9.4  Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 
20th Ed. Washington D.C. 2001. EUA. 
10. Observancia de la norma 
La vigilancia en el cumplimiento de la presente Nor ma corresponde a la Secretaría de Salud y a los 
gobiernos de las entidades federativas, en sus resp ectivos ámbitos de competencia. 
11. Vigencia 
El presente Norma Oficial Mexicana entrará en vigor  a los 60 días naturales después de su publicación en 
el Diario Oficial de la Federación. 
La presente Norma al entrar en vigor cancela a las siguientes normas oficiales mexicanas: 
/uni25CF NOM-180-SSA1-1998. Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Equipos de tratamiento 
de tipo doméstico. Requisitos sanitarios, publicada  en el Diario Oficial de la Federación el 30 de 
octubre de 2000. 
/uni25CF NOM-181-SSA1-1998. Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Requisitos sanitarios 
que deben cumplir las sustancias germicidas para tr atamiento de agua, de tipo doméstico, publicada 
en el Diario Oficial de la Federación el 20 de octu bre de 2000. 
Atentamente 
México, Distrito Federal, a catorce de mayo de dos mil ocho.- El Comisionado Federal para la Protecció n 
contra Riesgos Sanitarios y Presidente del Comité C onsultivo Nacional de Normalización de Regulación y  
Fomento Sanitario, Miguel Angel Toscano Velasco .- Rúbrica. 
 
APENDICE NORMATIVO A 
METODO DE PRUEBA PARA EVALUAR LA EFICIENCIA EN REDU CCION BACTERIANA 
1. Introducción 
La eficiencia de un equipo en la reducción bacteria na y la eficiencia de una sustancia germicida, está  dada 
por su capacidad para retener, destruir o liminar l a carga microbiana presente en el agua cuando exist e 
alguna contaminación. Esta eficiencia depende del d iseño del equipo, el principio en que esté basada s u 
actividad y la composición química de la sustancia germicida. 
2. Objetivo 
Determinar y demostrar si el equipo o la sustancia cumple con las propiedades que le son atribuidas po r el 
fabricante, bajo las condiciones de operación descr itas por él mismo.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
3. Método 
Se inocula una fuente de agua con un número conocid o de microorganismos seleccionados para probar la 
eficiencia del equipo o la sustancia germicida. Pos teriormente, el agua se somete al proceso descrito en el 
instructivo del equipo o a la acción de dicha susta ncia germicida, proporcionado por el fabricante. 
Se toman muestras del agua de prueba antes y despué s de haberse sometido al tratamiento, de acuerdo 
con la NOM-230-SSA1-2002 citada en el apartado de r eferencias. Se efectúan cuentas microbianas en dich as 
muestras para constatar que se redujo el número de gérmenes en el agua tratada. 
4. Material y equipo 
■ Autoclave con termómetro y manómetro, capaz de alc anzar temperatura de esterilización de 121 ± 
2° C, probado con termómetro de máximas. 
■ Espectrofotómetro con escala de Transmitancia o Ne felómetro de Mc Farland. 
■ Horno para esterilizar a 160-180° C. 
■ Incubadora de aire, con circulación mecánica, para  operar a una temperatura de 35 ± 2° C. 
■ Baño de agua, con circulación mecánica y mezcla de  agua, para operar a una temperatura de 44,5 ± 
0,2° C. 
■ Potenciómetro. 
■ Pipetas serológicas estériles de 1 y 10 mL de capa cidad, con graduación de una décima de su 
volumen total. (Se recomienda contar complementaria mente con pipetas de 2, 5 y 11 mL de 
capacidad). 
■ Tubos de cultivo de 22 x 175 mm, 20 x 200 mm, 16 x  160 mm y 10 x 100 mm, con tapa metálica o de 
rosca. 
■ Botellas de Roux. 
■ Asa de platino o nicromel. 
■ Contador manual. 
■ Contador de colonias, con fondo oscuro. 
■ Cajas de Petri estériles de 100 X 15 mm. 
■ Mecheros Fisher o Bunsen. 
■ Solución salina estéril al 0,85% (8,5 g de cloruro  de sodio grado analítico en 1000 mL de agua 
destilada o desionizada). 
5. Medios de cultivo 
5.1 Agar nutritivo A. 
- Extracto de carne 3,0 g 
- Peptona 5,0 g 
- Agar libre de sales 15,0 g 
- Agua destilada o desionizada 1000,0 mL 
Poner a ebullición durante tres minutos el extracto  de carne y la peptona (Bacto o equivalente); agreg ar el 
agar y calentar, agitando continuamente hasta disol ver. 
Distribuir en tubos de 10 x 100 mm y esterilizar 20  minutos a 121° C (el medio no debe sufrir 
sobrecalentamiento, lo que se evita por un precalen tamiento del autoclave). 
Utilizar este medio para efectuar los subcultivos. 
5.2. Agar nutritivo B. 
Preparar del mismo modo que el Agar nutritivo A, de scrito en el punto 5.1, pero agregando 30 g de agar  
libre de sales en lugar de los 15 g especificados e n dicho punto. 
Distribuir 20 mL del medio en cada botella de Roux o tubos de 22 x 175 mm. 
Utilizar este medio para preparar el cultivo de ref erencia. Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
6. Microorganismo de prueba 
Cepa de Escherichia coli  ATCC 11229 
7. Preparación del cultivo de referencia 
Tomar una asada de la cepa de Escherichia coli  y sembrar en una botella de Roux con agar nutritiv o B; 
incubar de 20 a 24 horas a una temperatura de 35 ± 2° C, hacer por lo menos tres siembras. 
8. Preparación del subcultivo 
Tomar una asada de cada cultivo de referencia y res embrar en tubos independientes con Agar nutritivo A ; 
incubar 20-24 horas a una temperatura de 35 ± 2° C. 
9. Preparación de la suspensión de Escherichia coli  
9.1.  A partir del subcultivo en tubo ya desarrollado, a dicionar 5 mL de solución salina al 0,85% estéril y  
agitar suavemente en forma manual, rotando vertical mente el tubo entre las dos manos, para obtener una  
suspensión bacteriana, la cual se transfiere a un t ubo estéril. 
9.2.  Determinación de la concentración de organismos me sófilos aerobios en la suspensión de Escherichia  
coli , utilizando uno de los dos métodos que se presenta n en los puntos 9.2.1 y 9.2.2. 
9.2.1 Método espectrofotométrico. 
Determinar la concentración de bacterias en UFC/mL,  utilizando la Tabla 1. 
Tabla 1 
370 420 490 530 550 580 650 LONGITUD DE ONDA EN 
nm 
% TRANSMITANCIA CON FILTROS UFC/mL x 10 9 
7,0 4,0 6,0 6,0 6,0 7,0 8,0 13,0 
8,0 5,0 7,0 7,0 7,0 8,0 9,0 11,5 
9,0 6,0 8,0 8,0 8,0 9,0 10,0 10,2 
10,0 7,0 9,0 9,0 9,0 10,0 11,0 8,6 
11,0 8,0 10,0 10,0 10,0 12,0 13,0 7,7 
13,0 9,0 12,0 12,0 12,0 13,0 15,0 6,7 
Nota. La calibración del aparato debe realizarse con solu ción salina estéril. 
9.2.2 Método nefelométrico. 
Determinar la concentración de bacterias en UFC/mL,  utilizando la Tabla 2. 
Tabla 2 
Solución de BaCI 2 al 10% ml Solución de H 2SO 4 al 1,0% ml Escala de Mc Farland UFC 
millones/ml 
0,1 9,9 4,0 300 
0,2 9,8 3,7 600 
0,3 9,7 3,5 900 
0,4 9,6 3,4 1 200 
0,5 9,5 3,3 1 500 
0,6 9,4 3,2 1 800 
0,7 9,3 3,15 2 100 
0,8 9,2 3,10 2 400 
0,9 9,1 3,04 2 700 
1,0 9,0 3,00 3 000 
 
9.3 Diluir la suspensión bacteriana con solución salina  estéril al 0,85%, a la transmitancia o turbiedad 
elegida, de acuerdo con la concentración de bacteri as establecida en el punto 10.2. 
10. Preparación de agua de prueba 
10.1  El agua de prueba se debe preparar con agua del si stema de abastecimiento público, ajustada o que 
cumpla con los límites permisibles de la Modificaci ón a la NOM-127-SSA1-1994, en los parámetros que 
incidan o afecten la eficiencia del equipo de trata miento, conforme al contenido de su instructivo, 
proporcionado por el fabricante o distribuidor al l aboratorio acreditado que efectúe la prueba.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
10.2  Preparar para el caso de los equipos un volumen de  100 litros y para el caso de las sustancias 
germicidas 1 litro de agua de prueba, libre de bact ericidas y bacteriostáticos, para operar el equipo inoculando 
el volumen de suspensión de Escherichia coli  requerido, para alcanzar una carga total de bacter ias 
(organismos mesófilos aerobios) de 5 000 a 10 000 U FC/mL y una concentración de organismos coliformes 
totales mayor o igual a 1600 NMP/100 mL o UFC/100 m L. 
10.3  Determinar para el agua de prueba la concentración  real de organismos mesófilos aerobios en 
UFC/mL de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM -092-SSA1-1994 y la concentración real de 
organismos coliformes totales de acuerdo con la Nor ma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994 o con los 
métodos alternativos presentados en los Apéndices I nformativos A y B. 
11. Desarrollo de la prueba para los equipos 
11.1  Instalar el equipo y operarlo con agua de prueba, de acuerdo con el instructivo del fabricante o 
distribuidor. 
11.2  Alimentar el equipo con agua de prueba. 
11.3  Después de 10 minutos de operar el equipo, tomar t res muestras de agua de prueba sin tratar y a 
continuación tres muestras de agua tratada; determi nar la concentración de organismos mesófilos aerobi os en 
UFC/mL de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM -092-SSA1-1994 y la concentración de organismos 
coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994 o con los métodos 
alternativos presentados en los Apéndices Informati vos A y B. 
12. Desarrollo de la prueba para las sustancias ger micidas 
12.1 Agregar la sustancia germicida al agua de prueba, d e acuerdo con las instrucciones del fabricante o 
distribuidor, especificadas en la etiqueta o instru ctivo. 
12.2 Después de transcurrido el tiempo de contacto espec ificado en la etiqueta o instructivo, tomar tres 
muestras de agua de prueba sin tratar y a continuac ión, tres muestras de agua tratada; determinar la 
concentración de organismos mesófilos aerobios en U FC/mL de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana 
NOM-092-SSA1-1994 y la concentración de organismos coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial 
Mexicana NOM-112-SSA1-1994 o con los métodos altern ativos presentados en los Apéndices Informativos A 
y B. 
13. Cálculos 
Con los resultados de cuenta de organismos mesófilo s aerobios y la concentración de organismos 
coliformes totales en agua de prueba sin tratar y t ratada (media aritmética), calcular los porcentajes  en la 
reducción bacteriana de acuerdo con las fórmulas es pecificadas en los puntos 12.1 y 12.2. 
13.1 Porcentaje en reducción bacteriana de organismos me sófilos aerobios: 
100   x  
aerobios)   mesófilos   s (organismo aerobios)   mesófilos    organismos ( - aerobios)   mesófilos    organismos (
RBMA   %
APST APT APST =
 
En donde: 
% RBMA.- Porcentaje en reducción bacteriana de orga nismos mesófilos aerobios. 
(organismos mesófilos aerobios) APST.- Cuenta de or ganismos mesófilos aerobios en UFC/mL de agua 
de prueba sin tratar. 
(organismos mesófilos aerobios) APT.- Cuenta de org anismos mesófilos aerobios en UFC/mL de agua de 
prueba tratada. 
13.2 Porcentaje en reducción bacteriana de organismos co liformes totales. 
100   x  
totales)   s (coliforme totales)   s (coliforme - totales)   s (coliforme 
RBCT   %
APST APT APST =
 
En donde: 
% RBCT. Porcentaje en reducción bacteriana de organ ismos coliformes totales. 
(coliformes totales) APST.- Cuenta de organismos co liformes totales en NMP/100 mL o UFC/100 mL de 
agua de prueba sin tratar. 
(coliformes totales) APT.- Cuenta de organismos col iformes totales en NMP/100 mL o UFC/100 mL de 
agua de prueba tratada. 
14. Reporte 
Prueba de potabilidad aceptable, si el porcentaje e n reducción bacteriana es igual o mayor a 95% para 
organismos mesófilos aerobios e igual o mayor a 99, 99% para organismos coliformes totales. Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
APENDICE INFORMATIVO A 
DETERMINACION DE ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES Y ES CHERICHIA COLI. METODO DEL 
SUSTRATO CROMOGENICO (ver Nota 1 a pie de página) 
1. Introducción 
La determinación de organismos coliformes por medio  del sustrato cromogénico, se fundamenta en el uso 
de sustratos cromogénicos hidrolizables para la det ección de enzimas de bacterias coliformes. Cuando s e 
utiliza esta técnica, el grupo se define como todas  las bacterias que poseen la enzima ß-D-galactosida sa y 
capaces de romper el sustrato cromogénico, dando co mo resultado una liberación del cromógeno. A 
diferencia del método de fermentación de lactosa qu e permite el crecimiento de muchos organismos aerób icos 
y elimina o suprime algunos no-coliformes con inhib idores químicos, esta técnica provee nutrientes que  son 
más selectivos y específicos para el crecimiento de  coliformes. La prueba puede usarse tanto en tubos 
múltiples como en formato presencia-ausencia (muest ras individuales de 100 mL). La obtención de result ados 
válidos requiere la aplicación estricta de los proc edimientos de control de calidad. 
2. Principio 
El sustrato cromogénico tal como el orto-nitrofenil -ß-D galactopiranósido (ONPG) u otro equivalente, e s 
empleado para detectar la enzima ß-D-galactosidasa,  la cual es producida por bacterias coliformes tota les. La 
enzima ß-D-galactosidasa hidroliza al sustrato y pr ovoca un cambio de color, el cual indica y sustenta  una 
prueba positiva después de 24 a 28 horas sin proced imientos adicionales. Las bacterias no coliformes, tales 
como las especies del género Aeromonas y Pseudomona s, que producen pequeñas cantidades de la enzima 
ß-D-galactosidasa, son suprimidas y no pueden produ cir una respuesta positiva durante las 28 horas a m enos 
de que más de 1X10 4 unidades formadoras de colonias (UFC) por mL estén  presentes. 
3. Aplicaciones 
La prueba de coliformes con sustrato cromogénico se  recomienda para el análisis de muestras de agua 
potable, agua purificada o agua limpia proveniente de cualquier fuente. 
Las muestras de agua que contienen materiales húmic os o de otro tipo pueden estar coloreadas. Si hay 
color de fondo, se comparan los tubos inoculados co n un tubo de control conteniendo únicamente muestra  de 
agua. Ciertas aguas con alto contenido de sales de calcio pueden causar precipitación, pero ésta no de be 
afectar la reacción. 
La prueba del sustrato cromogénico no se usa para v erificar siembras presuntivas de coliformes o colon ias 
de filtración con membrana porque el sustrato puede  ser sobrecargado por el inóculo pesado de ß-D-
galactosidasa débil producido por no-coliformes, ca usando resultados falsos positivos. 
En lo que se refiere a Escherichia Coli , un sustrato fluorogénico como el 4-metilumbelifer il-ß-D-glucorónido 
(MUG) es utilizado para detectar la enzima ß-glucor onidasa, la cual es producida por E. Coli . La enzima ß-
glucoronidasa hidroliza el sustrato, produciendo fl uorescencia cuando el líquido es expuesto a la luz 
ultravioleta de onda larga (366 nm). La presencia d e fluorescencia indica una respuesta positiva para E. coli . 
Algunas Shigella spp  también pueden producir una respuesta positiva. De bido a que Shigella spp  son 
reconocidas como patógenas humanas, no están consid eradas como perjudiciales para probar la calidad 
sanitaria del agua. 
4. Formulación del sustrato 
Las formulaciones del sustrato se presentan comerci almente en tubos para el procedimiento de tubos 
múltiples o en recipientes para muestras de 100 mL para la determinación de presencia/ausencia. Tambié n 
son aprovechables porciones prepesadas del reactivo  para mezclar y dosificar en tubos múltiples para 
pruebas de 10 mL u otros recipientes para muestras de 100 mL. Se debe evitar la exposición prolongada del 
sustrato a la luz directa del sol. 
La formulación en polvo contiene los siguientes com puestos anhidros (por litro de sustrato preparado) (ver 
Nota 2 a pie de página). 
Sulfato de amonio (NH 4)2SO 4 5,00 g 
Sulfato de manganeso, MnSO 4 0,0005 g 
                                                 
1 Aprobado por el Committee of Standard Methods, 1992 .  
2 Alternativamente se pueden utilizar productos con dif erentes formulaciones, debidamente acreditados.        (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
Sulfato de zinc, ZnSO 4 0,0005 g 
Sulfato de magnesio, MgSO 4 0,10 g 
Cloruro de sodio, NaCl 10,0 g 
Cloruro de calcio, CaCl 2 0,05 g 
Sulfito de sodio, Na 2SO 3 0,04 g 
Amfotericina B 0,001 g 
O-Nitrofenil-ß-D-galactopiranósido 0,50 g 
4-Metilumbeliferil-ß-D-glucorónido 0,075 g 
Solanio (ver Nota 3 a pie de página) 0,50 g 
Buffer Hepes de sal de sodio 5,3 g 
Buffer Hepes de ac, orgánicos (ver Nota 4 a pie de página) 6,9 g 
5. Procedimiento 
5.1 Procedimiento de tubos múltiples. Seleccione el núm ero apropiado de tubos por muestra con medio 
predosificado para la prueba de tubos múltiples y r otule. Siga las instrucciones del fabricante para p reparar la 
serie de diluciones. Asépticamente, adicione 10 mL de muestra a cada tubo, tape herméticamente y agite  
vigorosamente para disolver. La mezcla resultante e s incolora. Algunas partículas pueden resultar inso lubles 
durante la prueba, esto no afectará su desarrollo. 
El procedimiento también puede ser desarrollado con  la adición de cantidades apropiadas del sustrato 
reactivo a la muestra, mezclando vigorosamente y do sificando en cinco o diez tubos estériles. Incube a  
35±0,5° C por 24 horas. 
5.2 Procedimiento de presencia/ausencia. Adicione asépt icamente sustrato enzimático prepesado a 100 
mL de muestra en un vaso, estéril, transparente, no  fluorescente de borosilicato o en una botella o re cipiente 
equivalente. Opcionalmente adicionar 100 mL. de mue stra al sustrato enzimático en un recipiente provis to por 
el fabricante. Tape asépticamente y mezcle vigorosa mente para disolver. Incube a 35+0,5° C por 24 horas . 
6. Interpretación 
Después de 24 horas de incubación examine si existe  cambio de color en los tubos o recipientes. Cuando  
el sustrato es orto-nitrofenil-ß-D-galactopiranósid o (ONPG) es hidrolizado por la enzima de la bacteri a para 
producir ortonitrofenol amarillo; algunos sustratos  usados en otras formulaciones pueden producir resp uestas 
de diferente color. La respuesta cromogénica descri ta es una reacción positiva para coliformes totales . Si el 
cambio de color no es uniforme en todo el tubo, mez cle por inversión antes de la lectura. Comparar cad a tubo 
nuevamente con el comparador de color disponible de  la fuente comercial del sustrato. Si la intensidad  del 
color es mayor o igual a la del comparador, los col iformes totales están presentes. 
Las muestras son negativas para coliformes totales si no se observa color. Si la respuesta cromogénica  es 
cuestionable después de 24 horas, incube 4 horas má s. Si se intensifica el cromógeno, la muestra es po sitiva 
para coliformes totales; si no sucede esto, la mues tra es negativa. 
Incidir luz ultravioleta para la presencia de E. coli , la muestra será positiva si se observa fluorescen cia en 
las celdas positivas para coliformes totales. 
7. Reporte 
Si se desarrolló el procedimiento de NMP, calcular el valor de NMP del número de tubos o celdas 
positivos, de acuerdo con las tablas de número más probable, correspondientes al sistema utilizado. Si  se 
utiliza el procedimiento de presencia/ausencia, rep ortar resultados de coliformes totales presentes a ausentes 
en 100 mL de muestra. 
8. Control de calidad 
Pruebe cada lote de sustrato comercial desarrolland o la prueba por inoculación con tres bacterias de 
control; Escherichia coli , otra coliforme total diferente a E. coli  (por ejemplo Enterobacter cloacae ) y una no 
coliforme. Evite el uso de inóculos pesados. Si se usan Pseudomonas como el no coliforme representativ o, 
seleccione una especie no fluorescente. Incube esto s controles a 35 ± 0,5° C por 24 horas. Lea y regist re los 
resultados. 
                                                 
3 Solanio es una mezcla de diversos químicos incluyendo ant ibióticos. Es propiedad de Environetics, Branford, Conn .  
4 N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-ácido etano sulfónico.  Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
9. Bibliografía 
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APENDICE INFORMATIVO B 
DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y COL IFORMES FECALES-METODO DE 
FILTRACION POR MEMBRANA 
1. Fundamento 
Este método se basa en la filtración de una muestra  para concentrar células viables sobre la superfici e de 
una membrana y transferirlas a un medio de cultivo apropiado, para posteriormente contar el número de 
unidades formadoras de colonias (UFC) desarrolladas  después de la incubación. 
2. Material 
/uni25CF Autoclave con termómetro y manómetro, capaz de alc anzar temperatura de esterilización de 121 ± 
2° C, probado con termómetro de máximas. 
/uni25CF Material para envolver esterilizable (papel kraft,  bolsas de polímero resistentes al calor, otros). 
/uni25CF Membranas para filtración estériles con poro de 0, 45 milimicras y cojinetes absorbentes de 47 mm de 
diámetro. 
/uni25CF Sistema de filtración. 
/uni25CF Sistema de luz ultravioleta para esterilización de  las unidades de filtración. 
/uni25CF Bomba de vacío (20-27 pulgadas Hg), tubería y adit amentos herméticos para mantener el vacío. 
/uni25CF Matraz Kitazato. 
/uni25CF Cajas Petri desechables o de vidrio estériles de 5 0 x 90 mm. 
/uni25CF Marcador indeleble o equivalente. 
/uni25CF Pinzas de acero inoxidable. 
/uni25CF Propipeta de 50 mL de capacidad. 
/uni25CF Botellas de borosilicato con capacidad de 150 mL y  tapa de rosca. 
/uni25CF Pipetas serológicas de 1, 2, 5, 10 y 25 mL de capa cidad, estériles y protegidas con tapón de algodón.  
/uni25CF Utensilios estériles como: cucharas, cucharones, p icahielos, destapadores, abrelatas, entre otros.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
/uni25CF Microscopio estereoscópico, óptico o equivalente. 
/uni25CF Incubadora de aire, con circulación mecánica, para  operar a una temperatura de 35 ± 2° C. 
/uni25CF Contador mecánico o manual de Tally. 
/uni25CF Recipientes estériles para muestras (frascos, bote llas, jarras, bolsas, otros). 
/uni25CF Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g. 
/uni25CF Portaasa y asa bacteriológica. 
/uni25CF Portaobjetos. 
3. Reactivos y medios de cultivo 
3.1 Agar cuenta estándar 
Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabri cante o por ingredientes: 
El pH final debe ser de 7.0 ± 0,2 después de esteri lizar a 121ºC durante 15 minutos. 
3.2 Agar ENDO LES 
3.2.1  Ingredientes Cantidad (g) 
Extracto de levadura 1,2 
Casitona o tripticasa 3,7 
Tiopeptona o tiotona 3,7 
Triptosa 7,5 
Lactosa 9,4 
Fosfato ácido de potasio - K 2HPO 4 3,3 
Fosfato de potasio - K 3PO 4  1,0 
Cloruro de sodio - NaCI 3,7 
Desoxicolato de sodio 0,1 
Lauril sulfato de sodio 0,05 
Sulfito de sodio - Na 2SO 3  1,6 
Fucsina básica 0,8 
Agar 15,0 
Agua grado reactivo 1000,0 ml 
3.2.2  Preparación 
Rehidratar el medio en un litro de agua que conteng a 20 mL de etanol al 95%, no desnaturalizado (lo cu al 
reduce el crecimiento y el tamaño de la colonia). L levar hasta ebullición para disolver el agar, retir ar del calor y 
enfriar a 45-50ºC. No esterilizar en autoclave. El pH final debe ser 7,0 ± 0,2. Distribuir en cantidad es de 5 a 7 
mL en cajas de Petri de 60 mm de vidrio o plástico.  Si se utilizan placas de otro tamaño, ajustar la c antidad de 
medio. No exponer las placas a la luz directa del s ol. Almacenar en la oscuridad de 4 a 8ºC, preferibl emente 
en bolsas de plástico selladas u otros recipientes para reducir la pérdida de humedad. Descartar el me dio que 
no se utilizó después de 2 semanas. 
3.3 Medio ENDO 
3.3.1 Ingredientes Cantidad (g) 
Triptosa o polipeptona 10,0 
Tiopeptona o tiotona 5,0 
Casitona o tripticasa 5,0 
Extracto de levadura 1,5 Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
Lactosa 12,5 
Cloruro de sodio - NaCI 5,0 
Fosfato ácido dipotásico - K 2HPO 4 4,375 
Fosfato dihidrógeno potásico - KH 2PO 4 1,375 
Lauril sulfato de sodio 0,05 
Desoxicolato de sodio 0,10 
Sulfito de sodio - Na 2SO 3  2,1 
Fuscina básica 1,05 
Agar (opcional) 15,0 
Agua grado reactivo 1000,0 mL 
3.3.1 Rehidratar el medio en un litro de agua que conteng a 20 mL de etanol al 95%. Calentar hasta 
ebullición para disolver el agar, retirar del calor  y enfriar entre 45-50ºC. Distribuir en cantidades de 5 a 7 mL a 
cajas de Petri desechables o de vidrio de 60 mm de diámetro. No esterilizar en autoclave. El pH final debe ser 
de 7,1-7,3. 
Almacenar el medio (Caldo o Agar) en la oscuridad d e 4 a 8ºC y descarte cualquier caldo de medio sin 
usar después de 96 horas y el agar sin usar después  de 2 semanas. 
Medio líquido: 2 mL por placa, sin agar; se puede u sar un cojinete absorbente si está certificado, lib re de 
sulfito u otro agente tóxico a una concentración qu e pueda inhibir el desarrollo bacteriano. 
4. Procedimiento 
Generalmente, el enriquecimiento del medio de culti vo puede mejorar la valoración de la calidad del ag ua 
para beber. Sin embargo, este paso puede eliminarse  en el análisis de rutina de este tipo de agua ya q ue 
varios estudios mostraron que se obtienen resultado s adecuados por la técnica simple de filtración por  
membrana en un solo paso. Sin embargo, se recomiend a que, en lo posible, se verifiquen todas las muest ras 
de agua que den resultados positivos. 
4.1 Selección del tamaño de muestra 
El tamaño de muestra lo determina la densidad bacte riana, lo cual en muestras de agua para beber estar á 
limitado sólo por el grado de turbiedad o por el cr ecimiento de bacterias no coliformes sobre el medio . 
El volumen de muestra sugerida para prueba de colif ormes totales y coliformes fecales por esta técnica  es 
de 100 ml. 
4.2 Filtración de la muestra 
Utilizando pinzas estériles, colocar una membrana e stéril (cuadriculado hacia arriba) sobre el portafi ltro 
poroso. Cuidadosamente coloque el embudo sobre el r eceptáculo y asegúrelo en su lugar. Filtre la muest ra 
bajo vacío parcial, con el filtro aun en su lugar, enjuague el embudo mediante la filtración de tres p orciones de 
20 a 30 mL de solución buffer estéril. Una vez comp lementado el enjuague final y que el proceso de fil tración 
haya concluido, quitar el embudo e inmediatamente d espués retire la membrana con pinzas estériles y 
colóquela sobre el medio selectivo con un movimient o circular a fin de evitar la entrada de aire. Mete r un 
control de 100 mL de solución buffer estéril cada 1 0 muestras para checar posible contaminación cruzad a o 
buffer contaminado. Incubar el control bajo las mis mas condiciones de la muestra. 
Usar unidades de filtración estériles al principio de cada serie de filtraciones, como precaución míni ma 
para prevenir contaminación accidental. Una serie d e filtraciones se considera cuando hay un intervalo  de 
interrupción de 30 minutos o más entre cada filtrac ión de muestras. Después de tales interrupciones, t ratar 
cualquier muestra como una serie de filtración y es terilizar toda la unidad de filtración en uso. Desc ontaminar 
este equipo entre filtraciones sucesivas, ya sea po r medio de luz ultravioleta (UV) o esterilizando 
apropiadamente en autoclave de acuerdo con las cara cterísticas del equipo. No exponer la preparación d e 
cultivo con el filtro de membrana al rango de radia ción UV que pueda salir de la cabina de esterilizac ión. Se 
recomienda protegerse los ojos, pueden usarse lente s de seguridad o de vidrio prescritos para la adecu ada 
protección contra la luz UV de la columna de esteri lización. Limpie el tubo de UV regularmente y chequ e 
periódicamente su efectividad para asegurar que hay a un 99,99% de muerte bacteriana en 2 minutos de 
exposición.       (Primera Sección) DIARIO OFICIAL Miércoles 2 de julio de 2008 
4.3 Técnica de enriquecimiento 
Colocar un cojinete absorbente en una caja de Petri  estéril y pipetear 1,8 a 2,0 mL de caldo lauril tr iptosa 
para saturar el cojinete. Cuidadosamente remueva cu alquier exceso de líquido del cojinete. Asépticamen te 
colocar sobre el cojinete una membrana a través de la cual se haya filtrado una muestra de agua, incub ar la 
membrana sin invertir la caja durante 15 a 20 horas  a 35 ± 0,5ºC en una atmósfera de 90% de humedad 
relativa. 
Si se usa el medio de agar base tipo ENDO, remover el enriquecimiento de la incubadora, separar la 
membrana del cojinete con el enriquecimiento y colo car sobre la superficie del agar. La colocación inc orrecta 
de la membrana a su vez se pone de manifiesto, porq ue partes de la membrana no se tiñen, lo cual indic a 
entrada de aire. Donde suceda esto, cuidadosamente resitúe la membrana sobre la superficie de agar. Si  se 
usa medio líquido, colocar un cojinete estéril nuev o en el fondo de la caja y saturar con 1,8 a 2,0 mL  de medio 
M-ENDO; separar la membrana del cojinete con el enr iquecimiento y colocar sobre la superficie del M-EN DO, 
con las precauciones antes descritas. Descartar el cojinete de enriquecimiento utilizado. 
A continuación, con el medio ya sea agar o líquido (con cojinete), invertir las placas e incubar de 20  a 22 
horas a 35 ± 0,5ºC. 
4.4 Técnica alternativa directa en paso simple 
Si se usa medio de agar base, colocar la membrana d espués de filtrar la muestra de agua, directamente 
sobre el agar como se describió anteriormente en el  apartado 4.3 e incubar durante 24 ± 2 horas a 35 ±  0,5ºC. 
Si se usa medio líquido, colocar un cojinete sobre la placa y saturar con 1,8 a 2,0 mL de medio M-ENDO . 
Colocar la membrana después de filtrar la muestra d e agua, directamente sobre el cojinete; invierta la  caja e 
incube durante 24 ± 2 horas a 35 ± 0,5ºC. 
4.5 Conteo: para determinar la cuenta de colonias sobre  el filtro de membrana, usar un microscopio 
binocular de disección de bajo poder (10 a 15 aumen tos) u otro aparato óptico similar, con lámpara 
fluorescente de luz blanca perpendicular, tanto com o sea posible al plano del filtro. 
Las colonias típicas de coliformes totales tienen c olor rojo oscuro con brillo metálico. El área brill ante 
puede variar de tamaño, con brillo en la parte supe rior de la colonia o hasta cubrir su superficie tot al, las 
colonias atípicas de coliformes pueden ser rojo osc uro o nucleadas sin brillo. Las colonias que no ten gan brillo 
pueden ser rosas, rojas, blancas o incoloras y se c onsideran no coliformes. No existe correlación entr e la 
cuenta de colonias (coliformes o no coliformes) sob re el medio tipo ENDO y el número total de bacteria s 
presentes en la muestra original. Sin embargo, una cuenta alta de bacterias no coliformes puede interf erir con 
el máximo desarrollo de coliformes. La refrigeració n de los cultivos (después de 22 horas de incubació n) con 
alta densidad de colonias no coliformes de 0,5 a 1 hora antes de contar puede prevenir la dispersión y  puede 
ayudar a discernir el brillo metálico. La incubació n anaeróbica a 35ºC por 24 horas de algunas muestra s de 
agua subterránea, pueden suprimir el desarrollo de colonias de no coliformes, pero debe ser cuidadosam ente 
evaluada para asegurar no perder la recuperación de  los coliformes. 
Las muestras de agua tratada, efluente o residual p uede incluir bacterias estresadas que crecen 
relativamente lento y producen un máximo brillo de 22 a 24 horas. Los organismos de fuentes no tratada s 
pueden producir brillo de las 16 a 18 horas y el br illo puede, subsecuentemente, disminuir después de 24 a 30 
horas. 
4.6 Verificación de los coliformes 
Ocasionalmente, las colonias de no coliformes apare cen como colonias típicas con brillo. Las colonias 
atípicas (rojo oscuro, nucleadas sin brillo metálic o) ocasionalmente pueden ser coliformes. Es recomen dable 
verificar ambos tipos de colonias, mediante una pru eba de fermentación de lactosa o por el uso de 
procedimientos alternativos, que involucren ambos u na prueba rápida (4 horas) o por reacciones bioquím icas 
típicas o un sistema multiprueba para especies. 
4.6.1 Fermentación de la lactosa. 
Verificar colonias típicas y atípicas incluidas en la cuenta directa; probar un mínimo de 5 de tales c olonias, 
por transferencia del crecimiento de cada colonia e n caldo lauril triptosa, incubar a 35 ± 0,5ºC duran te 48 
horas. Miércoles 2 de julio de 2008 DIARIO OFICIAL (Primer a Sección)      
La formación de gas en caldo lauril triptosa y su c onformación en caldo lactosa con verde brillante de ntro 
de las 48 horas verifica a la colonia probada como coliforme. 
4.6.2 Verificación alternativa de coliformes. 
Aplicar este procedimiento alternativo de verificac ión de coliformes para colonias aisladas sobre el f iltro de 
membrana. Si no hay colonias aisladas o si la separ ación entre las colonias es de menos de 2 mm, estri ar el 
crecimiento a medio M-ENDO para asegurar la pureza del cultivo y transferir al tubo de fermentación. 
4.6.2.1 Prueba rápida. 
Una verificación rápida de las colonias es la prueb a de citocromo oxidasa (CO) y Beta-galactoxidasa 
(ONPG). La reacción de los coliformes es de CO nega tiva y ONPG positiva con 4 horas de incubación del 
tubo de cultivo o procedimiento de microprueba. 
4.6.2.2 Sistema multiprueba comercial. 
Verificar las colonias por estrías para su purifica ción, seleccionar colonias perfectamente aisladas e  
inocular dentro de un sistema multiprueba para ente robacterias que incluya reacciones de fermentación de 
lactosa, CO y ONPG. 
5. Cálculos 
Cálculo de la densidad de coliformes. 
Hacer el conteo, usando filtros de membrana con 20 a 80 colonias de coliformes y no más de 200 colonia s 
para cualquier tipo de colonia según la siguiente e cuación:  
100   x  
filtrados   muestra   de   ml contadas   coliformes   de   Colonias 
ml   0 totales/10   coliformes   de   olonias C =
 
5.1 Agua para consumo humano (considerando las especifi caciones establecidas en la Modificación de la 
NOM-127-SSA1-1994). 
Con agua de buena calidad, la presencia general de coliformes es mínima. Por lo tanto, se deben contar  
todas las colonias de coliformes (cajas con 20 a 80  colonias) y usar la fórmula dada anteriormente par a 
obtener la densidad de coliformes. 
Si existe un crecimiento confluente, que es un desa rrollo que cubre el área de filtración completa de la 
membrana o una porción y las colonias no están bien  distribuidas, reportar los resultados como “crecim iento 
confluente con (sin) coliformes” y solicite un nuev o muestreo del mismo sitio. Si el número total de c olonias 
bacterianas, coliformes o no coliformes excede las 200 por membrana o si las colonias no son suficient emente 
distinguibles una de la otra para asegurar el conte o, reporte los resultados como “Demasiado numerosas  para 
contar” (DNPC). La presencia de coliformes en tales  cultivos, se verifica mediante la colocación del f iltro de 
membrana completo dentro de un tubo estéril con cal do bilis verde brillante. Como alternativa arrastre  la 
superficie completa del cultivo de la membrana con una asa estéril o con un isopo de algodón estéril e  inocule 
a un tubo de caldo lactosado y a otro de caldo bili s verde brillante. 
Si se produce gas de este cultivo dentro de las 48 ± 3 horas a 35 ± 0,5ºC, se concluye la presencia de  
coliformes. 
Se recomienda reportar “Crecimiento confluente” o “ Demasiado numerosas para contar” con al menos una 
colonia de coliformes detectable (verificada) como una muestra positiva de coliforme total. No se reco mienda 
reportar únicamente “Crecimiento confluente” o “Dem asiado numerosas para contar”. 
Cuando no se detectan coliformes, habiendo utilizad o volúmenes de muestra pequeños, se requiere una 
nueva muestra y seleccionar volúmenes más apropiado s para la filtración por membrana. Normalmente se 
requieren volúmenes de 25, 50 o 100 mL para agua de stinada al consumo humano. 
Para reducir interferencia de sobrecrecimiento, en lugar de filtrar 100 mL, filtre porciones de 50 mL a 
través de 2 diferentes membranas, porciones de 25 m L a través de 4 diferentes membranas, y así 
sucesivamente. La cuenta de coliformes totales obse rvadas sobre todas las membranas se suma y se repor ta 
el número total en 100 mL. 
___________________::