中华人民共和国国家标准  
 
GB xxxx—xxxx 
 
  
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  
 xxxx -xx-xx实施  
 食品安全国家标准  
食品中生物胺含量的测定  
（征求意见稿）  GB xxxx—xxxx  
I 前    言 
本标准代替 GB/T 5009.208—2008《食品中生物胺含量的测定 》。 
本标准中附录 A为资料性附录 。 
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：   
—— GB/T 5009.208 —2008GB xxxx—xxxx  
1 食品安全国家标准  
食品中生物胺含量的测定  
1 范围  
本标准规定了 食品中色胺、 β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的测定方法。  
本标准适用于 酒类（葡萄 酒、啤酒、黄酒等）、调味品（醋酱油等）、水产品（鱼类及其制品、
虾类及其制品）、肉类及乳制品中生物胺的测定。  
2 规范性引用文件  
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版
本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。  
3 原理  
以1,7-二氨基庚烷为内标，以 5%三氯乙酸为提取溶液，振摇提取，以正已烷去除脂肪，经过三氯
甲烷 -正丁醇（ 1+1）液液萃取净化后，以丹磺酰氯为衍生剂， 60℃衍生 30min, 采用高效液相色谱的
C18柱分离，紫外检测器检测，内标法定量。  
4 试剂和材料  
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 超纯水。 
4.1  甲醇（ CH 3OH）:色谱纯。 
4.2  丙酮（ C3H6O）:色谱纯。  
4.3  乙醚（ C4H10O）:重蒸。  
4.4  正丁醇（ C4H10O）。 
4.5  三氯甲烷 (CHCl 3)。 
4.6  正已烷（ C6H14）:色谱纯。  
4.7  谷氨酸钠（ C5H8NNaO 4）。 
4.8  碳酸氢钠（ NaHCO 3）。 
4.9  氯化钠（ NaCl）。 
4.10 氢氧化钠（ NaOH）。 
4.11 浓盐酸（ HCl，37%）。 
4.12 三氯乙酸（ C2HCl 3O2）。 
4.13 组胺盐酸盐（ histamine dihydrochloride,C 5H9N3· 2HCl，CAS号： 51-45-6）标准品（纯度 >99%,计
算时应折算掉盐酸盐， C5H9N3/C5H9N3· 2HCl=155/184 ）。 
4.14 β-苯乙胺（β-phenylethylamine,C 8H11N，CAS号： 64-04-0）标准品（纯度 >98%）。 
4.15 酪胺盐酸盐（ tyramine hydrochloride,C 8H12ClNO  ，CAS号： 51-67-2）标准品（纯度 >98%，计算
时应折算掉盐酸盐， C8H11NO/C 8H11NO· HCl=137/174 ）。 
4.16 腐胺 (putre seine，C4H12N2 ，CAS号： 333-93-7)标准品 (纯度 >98％)。 
4.17 尸胺 (cadaverine ，C5H14N2， CAS号： 462-94-2)标准品 (纯度 >98％)。 GB xxxx—xxxx  
2 4.18 色胺 (tryptamine hydrochloride ，C10H12N2 ，CAS号： 61-54-1)标准品 (纯度 >99％)。 
4.19 亚精胺 (spermidine ，C7H19N3 ，CAS号： 124-20-9)标准品 (纯度 >97％)。 
4.20 精胺 (spermine ，C10H26N4， CAS号： 71-44-3 )标准品 (纯度 >97％)。 
4.21 1,7二氨基庚烷  (1,7一diaminoheptane ，C7H18N2 ，CAS号： 646-19-5)内标标准品 (纯度 >98％)。 
4.22 丹磺酰氯 (dansyl chloride ，C12H12ClNO2S ，CAS号： 605-65-2)标准品 (纯度 >95％)。 
4.23 标准溶液的 配制  
 
4.23.1 生物胺标准储备溶液的配制：准确称取各种生物胺标准品适量，分别置于 10 mL容量瓶中，用
0.1 mol／L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，配制成浓度为 1 000  mg／L(以各种生物胺单体计 )的标准储备
溶液，置 4℃冰箱储存。     
4.23.2 生物胺标准混合使用液的配制：分别吸取 1.00 mL各生物胺单组分标准储备溶液，置于同一个
10 mL容量瓶中，用 0.1 mol／L盐酸稀释至刻度，混匀，配制成生物胺标准混合使用液 (100 mg／L)。 
4.23.3 生物胺标准系列溶液 的配制：吸取 0.10 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.50 mL、
5.00 mL生物胺标准混合使用液 (100 mg／L)，分别置于 10 mL容量瓶中，用 0.1 mol／L盐酸溶液稀释
至刻度，混匀，使浓度分别为 1.00 mg／L、2.50 mg／L、5.00 mg／L、10.0 mg／L、15.0 mg／L、25.0 
mg／L、50.0 mg／L。 
4.23.4 内标标准储备溶液的配制：准确称取内标物质适量，置于 10 mL容量瓶中，用 0.1 mol／L盐酸
溶液稀释至刻度，混匀，配制成浓度为 1000 mg／L的内标标准储备溶液，置 4℃冰箱储存。  
4.23.5 内标标准使用液的配制：吸取 1.00 mL内标标准储备溶液，置 10 mL容量瓶中，用 0.1 mol／L
盐酸稀释至刻度，混匀，作为内标使用液 (100 mg／L)，置 4℃冰箱储存。  
 
4.24 试剂的配制  
 
4.24.1丹磺酰氯衍生剂溶液：准确称取丹磺酰氯适量，以丙酮为溶剂配制成浓度为 0.05 mg／L的衍生
剂标准使用液 (5 mg／mL丙酮溶液 )，置 4℃冰箱储存。  
4.24.2 5％三氯乙酸 溶液：准确称取 25g三氯乙酸于 250mL烧杯中，用适量超纯水完全溶解后转移至
250mL容量瓶中， 定容至刻度。 4.24.3  1 mol/L盐酸溶液： 准确量取 8.6mL浓盐酸， 用水定容至 100mL。 
4.24.3  0.1 mo l／L盐酸溶液：准确量取 1 mol/L盐酸溶液 10mL，用水定容至 100mL。 
4.24.3  0.1 mol/L 氢氧化钠溶液 ：称取 0.4g氢氧化钠，加入 100mL水完全溶解。  
4.24.4  正丁醇 /三氯甲烷（ 1+1）混合溶液 ：分别量取相同体积的正丁醇和三氯甲烷混合均匀即可。  
4.24.5  饱和碳酸氢钠溶液 ：称取 15g 碳酸氢钠，加入 100mL水溶解，取上清液即为饱和溶液。  
4.24.6  50 mg/mL 谷氨酸钠 溶液：准确称取 5.0g谷氨酸钠用饱和碳酸氢钠溶液溶解并定容至 100mL。 
 
5 仪器和设备  
5.1 高效液相色谱仪 (HPLC)，配紫外检测器 或二极管阵列检测器 。 
5.2 离心机：4000  r/min。 
5.3 旋涡混合器。  
5.4 恒温箱。  
5.5 氮气浓缩器。  
5.6 电子天平  0.1mg，0.01g。 
5.7 酸度计 : ±0.1pH。 
5.8 超纯水器。  GB xxxx—xxxx  
3 5.9 滤膜针头滤器 : 130.22 µ m。 
6 分析步骤  
6.1  试样制备   
6.1.1试样提取  
6.1.1.1  水产品、肉类、乳制品及以豆类为原料的调味品  
准确称取已经绞碎或匀浆后的水产品、 肉类、 乳制品或以豆类为原料的调味品 10g（精确至 0.01g），
置100 mL具塞锥形瓶中，加入 20 mL 5％三氯乙酸溶液和 2.0 mL  (100 mg／L)内标使用液，混匀，振
荡提取 60min，转移至 50 mL离心管中， 3600 r／min离心 10 min，取上清液，置 50 mL容量瓶中，
连续提取两次，合并上清液，用 5％三氯乙酸稀释至刻度，滤纸过滤，待净化。  
6.1.1.2  酒类、醋及醋饮料  
量取含酒类、醋或醋饮料 10.00 mL ，加入 0.4 mL(100 mg ／L)内标使用液，采用 6.1.2.2方法直接
萃取。  
6.1.2 试样净化  
6.1.2.1 除脂肪：移取上述试样提取液 10.00 mL ，置 25 mL具塞试管中，加入 10 mL正己烷，涡旋振  
荡5 min，弃去上层有机相，重复进行两次。  
6.1.2.2  萃取：将上述除脂肪后溶液加入适量氯化钠使溶液饱和。准确移取上述饱和后的试样提取液
5.00 mL，置于 15 mL离心管中，用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液调节片 pH至12.0。加入 5.0mL的正丁醇
三氯甲烷（ 1+1）混合溶液，涡旋振荡 5 min，3600r/min 离心 10 min，吸取上层有机相，再重复萃取
两次，合并萃取液，混匀， 取 3.0 mL萃取液并加入 0.2 mL 1 mol/L 盐酸，混合后 40℃水浴下氮气吹干，
加入 1.0mL  0.1 mol/L 盐酸涡旋振荡， 使残留物 完全溶解，待衍生。  
6.2  生物胺的衍生  
取上述待衍生的试样溶液  0.50 mL 置10 mL 具塞试管中，加入 1.5 mL 饱和碳酸氢钠溶液 , 1.0  
mL 丹磺酰氯衍生溶液，振荡使混匀。置 60℃水浴反应 30 min，期间每隔 10min振荡一次，取出，分
别加入100μL谷氨酸钠 溶液（50 mg/mL 饱和碳酸氢钠溶液），振荡混匀， 60℃保温 15 min。取出，
每个试管中加 入1 mL超纯水，在 40℃水浴下用氮气除去丙酮。加入 3 mL乙醚，振荡 2 min，静置分
层后，吸取出上层有机相（乙醚层），重复萃取两次，合并乙醚萃取液，氮气吹干。加入 1.0 mL 甲
醇使残留物溶解，振荡混匀， 0.22μm滤膜针头滤器过滤，滤液待测。  
分别移取 0.50 mL生物胺标准系列溶液，分别置 10 mL具塞试管中，依次加入 20μL（100 mg/L ）
内标使用液，加入 1.5 mL 饱和碳酸氢钠溶液、 1.0 mL丹磺酰氯衍生溶液，振荡使混匀。自 “置60℃培
养箱中……”，以下操作同试样的衍生步骤。  
6.3  液相色谱 参考条件  
色谱柱为Ｃ 18柱（ 150 mm× 4.6mm 内径，5μm），紫外检测波长  254 nm，进样量 20μL，柱温 : 
30℃，流动相 A为甲醇溶液， B为超纯水，流速： 1.5 mL/min 。梯度洗脱程序见表  1。 
表 1  梯度洗脱程序表  
 
组成  时间 /min 
0 7 14 20 27 30 35 36 45 
流动相 A 55 65 70 70 90 100 100 55 55 
流动相 B 45 35 30 30 10 0 0 45 45 
6.4  标准曲线的制作  
分别吸取上述 标准系列的 衍生溶液注入高效 液相色谱仪中，测定，记录色谱图 （附录  A）。计算
各生物胺和内标的峰面积比，以标准系列溶液的质量（ μg）为纵坐标，以各生物胺和内标的峰面积比GB xxxx—xxxx  
4 为横坐标，绘制标准曲线。  
6.5  试样溶液的测定  
将试样的衍生溶液注入高效液相色谱仪中，测定，记录色谱图。 根据标准曲线得到待测液中 各生
物胺的浓度， 平行测定次数不少于两次。  
 
7  分析结果的表述  
试样中生物胺含量按公式 （1）计算：  
               
fmm1A   
…………………………………… （1） 
式中：  
A—试样中生物胺 的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（ mg/kg或mg/L）；  
m1—试样中各生物胺色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的生物胺质量，单位为微克（ μg）； 
f—试样稀释倍数； (水产品、肉类、乳制品及以豆类为原料的调味品 稀释倍数为 100；酒类、醋及  
醋饮料稀释倍数为 20)。 
m—取样量，单位为克或毫克（ g或mL）。  
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。  
8 精密度  
在重复性条件下获得的两次独立测定结果 的绝对差值不得超过算术平均值的 10 %。 
9 其它 
本标准定量限  
a) 酒类、 醋等调味品 ： 色胺 3mg/kg、β-苯乙胺 10mg/kg、 腐胺 3mg/kg、 尸胺 7mg/kg、 组胺 10mg/kg、
酪胺 10mg/kg、亚精胺 5mg/kg、精胺 7mg/kg。 
b) 水产品、肉类、乳制品及以豆类为原料的调味品：色胺 15mg/kg、β-苯乙胺 40mg/kg、腐胺
15mg/kg、尸胺 35mg/kg、组胺 50mg/kg、酪胺 25mg/kg、亚精胺 25mg/kg、精胺 35mg/kg。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 附录 A GB xxxx—xxxx  
5 (资料性附录 ) 
 
 
8种生物胺及内标标准溶液衍生物的 HPLC色谱图  
 
 
 
 
 
 
1——色胺； 2——β-苯乙胺； 3——腐胺； 4——尸胺； 5——组胺； 6—— 1,7 二氨基庚烷；  
7——酪胺； 8——亚精胺； 9——精胺  
图1  8种生物胺及内标标准溶液衍生物的色谱图