中华人民共和国国家标准  
 
GB 4789.39—xxxx 
 
 
食品安全 国家标准  
食品微生物学检验  粪大肠菌群计数  
 
 
（征求意见稿）  
 
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  xxxx -xx-xx实施  GB 4789.39—xxxx  
I 前    言 
本标准代替 GB/T 4789.39 -2008《食品卫生微生物学检验  粪大肠菌群计数》 。 
本标准与 GB/T 4789.39 -2008相比，主要修改如下：  
——修改了标准的中英文名称；  
——增加了 LST培养24h±2h产气后进行复发酵试验的要求；  
——增加了附录 C，即五个连续稀释度中确定最适的三个连续稀释度方法。  GB 4789.39—xxxx  
1 食品安全国家标准  
食品微生物学检验  粪大肠菌群计数  
1 范围 
本标准规定了 食品中粪大肠菌群计数的方法。  
本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。  
2 术语和定义 
2.1 粪大肠菌群  faecal coliform  
一群在44.5℃培养24h～48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌
群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能
性。 
3 技术要求 设备和材料  
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：  
3.1 恒温培养箱： 36℃±1℃。 
3.2 冰箱： 2℃～5℃。 
3.3 恒温水浴箱： 44.5℃± 0.2℃。 
3.4 天平：感量 0.1g。 
3.5 均质器。  
3.6 振荡器。  
3.7 无菌吸管： 1mL（具 0.01mL刻度）、 10mL（具 0.1mL刻度）或微 量移液器及吸头。  
3.8 无菌锥形瓶：容量 500mL。 
3.9 无菌培养皿：直径 90mm。 
3.10 pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。  
4 培养基及试剂  
4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ Lauryl Sulfate Tryptose ，LST）肉汤：见附录 A中A.1。 
4.2 EC肉汤（ E.coli  Broth）：见附录 A中A.2。 
4.3 无菌生理盐水：称取 8.5ｇ氯化钠溶于 1000 mL 蒸馏水中， 121℃高压灭菌 15min。 GB 4789.39—xxxx  
2 4.4 1 mol/L NaOH ：称取 40g 氢氧化钠溶于 1000 mL 蒸馏水中。  
4.5 1 mol/L HCl ：移取浓盐酸 90mL，用蒸馏水稀释至 1000 mL。 
5 检验程序  
粪大肠菌群检验程序见图 1。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
图1 粪大肠菌群 MPN计数法检验程序  
6 操作步骤  
6.1 样品的稀释 
6.1.1 固体和半固体 样品：称 取25 g样品，置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌均质杯内 ，
8 000r/min ～10 000 r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液 ，或置225 mL稀释液的无菌均质袋
中，用拍打式均质器拍打 1min～2min，制成1:10的样品匀液 。 检 样 
25g(m L)样品 + 225mL 稀释液，均质  
10倍系列稀释  
月桂基硫酸盐胰蛋白胨 (LST)肉汤  
36℃± 1℃ 48h±2h 
不产气  产气  
EC肉汤  
44.5℃± 0.2℃ 24h±2h 
不产气  产气  
粪大肠菌群阴性管  粪大肠菌群阳性管  
查MPN表 
报告结果  GB 4789.39—xxxx  
3 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶(瓶
内预置适当数量的 无菌玻璃珠)中，充分混匀， 制成1:10的样品匀液。  
6.1.3 样品匀液的 pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用 1 mol/L氢氧化钠（ NaOH）或1 mol/L 盐
酸（HCl）调节。  
6.1.4 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液 1mL，沿管壁缓缓注入盛有 9mL磷酸盐缓冲液
或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1支1mL无菌吸
管反复吹打，使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。  
6.1.5 根据对样品污染 状况的估计,按上述操作，依 次制成十倍递增系列 稀释样品匀液。每递增稀释 1
次，换用 1支1mL无菌吸管或吸头。 从制备样品匀液至 样品接种 完毕，全过程不得超过 15min。 
6.2 初发酵试验  
每个样品，选择 3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种 3
管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST）肉汤，每管接 种1mL（如接种量需要超过 1mL，则用双料 LST肉汤），36℃
±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生， 24h产气者进行复发酵试验（ 6.3）；如未产气则继续
培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的 LST肉汤管数。未产气 者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行 复
发酵试验。  
如采用多个稀释度，最终 确定最适的三个连续稀释度方法 参加附录 C。 
6.3 复发酵试验  
用接种环从产气的 LST肉汤管中分别取培养物 1环，移种于预先升温至 44.5℃的EC肉汤管中。将所有
接种的EC肉汤管放入带盖的 44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内， 培养24h±2h，水浴箱的水面应高于肉汤培养
基液面； 记录EC肉汤管的产气情况 。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。  
定期以已知为 44.5℃产气阳性的大肠杆菌和 44.5℃不产气的产气肠杆菌或其它大肠菌群细菌作阳
性和阴性对照。  
6.4 粪大肠菌群 MPN计数的报告  
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数， 查粪大肠菌群 最可能数(MPN)检索表 （见附录 B） ， 报告每 g (mL)
粪大肠菌群的 MPN值。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 GB 4789.39—xxxx  
4 附录A 
培养基和试剂  
A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST）肉汤 
A.1.1 成分 
胰蛋白胨或胰酪胨  20.0ｇ 
氯化钠  5.0ｇ 
乳糖  5.0ｇ 
磷酸氢二钾（ K2HPO 4） 2.75ｇ 
磷酸二氢钾（ KH 2PO 4） 2.75ｇ 
月桂基硫酸钠 0.1ｇ 
蒸馏水  1 000.0 mL  
pH 6.8± 0.2   
A.1.2 制法  
将上述成分溶解于蒸馏水中，调 节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 10mL，121℃高压灭
菌15min。 
A.2 EC肉汤 
A.2.1 成分  
胰蛋白胨或胰酪胨  20.0ｇ 
3号胆盐或混合胆盐  1.5ｇ 
乳糖  5.0ｇ 
磷酸氢二钾（ K2HPO 4） 4.0ｇ 
磷酸二氢钾（ KH 2PO 4） 1.5ｇ 
氯化钠  5.0ｇ 
蒸馏水  1 000.0 mL  
pH 6.9± 0.1   
A.2.2 制法  
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 8mL，121℃高压灭
菌15min。 GB 4789.39—xxxx  
5 附录B 
粪大肠菌群最可能数（ MPN）表 
B.1 每g(mL)检样中粪大肠菌群最可能数（ MPN）的检索见表 B.1。 
表B.1 粪大肠菌群最可能数（ MPN）检索表  
阳性管数 
MPN 95%置信区间 阳性管数 
MPN 95%置信区间 
0.1 0.01 0.001 下限 上限 0.1 0.01 0.001 下限 上限 
0 0 0 <3.0 -- 9.5 2 2 0 21 4.5 42 
0 0 1 3.0 0.15 9.6 2 2 1 28 8.7 94 
0 1 0 3.0 0.15 11 2 2 2 35 8.7 94 
0 1 1 6.1 1.2 18 2 3 0 29 8.7 94 
0 2 0 6.2 1.2 18 2 3 1 36 8.7 94 
0 3 0 9.4 3.6 38 3 0 0 23 4.6 94 
1 0 0 3.6 0.17 18 3 0 1 38 8.7 110 
1 0 1 7.2 1.3 18 3 0 2 64 17 180 
1 0 2 11 3.6 38 3 1 0 43 9 180 
1 1 0 7.4 1.3 20 3 1 1 75 17 200 
1 1 1 11 3.6 38 3 1 2 120 37 420 
1 2 0 11 3.6 42 3 1 3 160 40 420 
1 2 1 15 4.5 42 3 2 0 93 18 420 
1 3 0 16 4.5 42 3 2 1 150 37 420 
2 0 0 9.2 1.4 38 3 2 2 210 40 430 
2 0 1 14 3.6 42 3 2 3 290 90 1,000 
2 0 2 20 4.5 42 3 3 0 240 42 1,000 
2 1 0 15 3.7 42 3 3 1 460 90 2,000 
2 1 1 20 4.5 42 3 3 2 1100 180 4,100 
2 1 2 27 8.7 94 3 3 3 >1100 420 -- 
注1：本表采用 3个稀释度 [0.1g(mL) 、0.01g(mL) 和0.001g(mL)] 、每个稀释度接种 3管。  
注2：表内所列检样量如改用 lg（mL）、0.1g(mL) 和0.01g(mL) 时，表内数字应相应降低 10倍；
如改用 0.01g(mL) 、0.001g(mL) 、0.0001g(mL) 时，则表内数字应相应增高 10倍，其余类推。  
 GB 4789.39—xxxx  
6 附录C 
粪大肠菌群最可能数（ MPN）表 
C.1 在10-1～10-5 五个连续稀释度中确定最适的三个连续稀释度方法如下：  
（1）有一个以上的稀释度 3管均为阳性。选择三管都是阳性结果的最高稀释度及其相连的两个更高稀
释度（见 表C.1例子 a,b）；在未选择的较高稀释度中还有阳性结果时，则顺次下移到下一个更高三个
连续稀释度（见 表C.1例子 c）；如果中间有某个稀释度没有阳性结果，但更高稀释度有阳性结果，则
将此阳性结果加到前一稀释度，进而确定三个连续稀释度（见 表C.1例子 d）；如果不能按照这个原则
找到三个合适的稀释度，则选择前一个较低的稀释度（见 表C.1例子e）。  
（2）没有任何一个稀释度 3管均为阳性。如果没有一个稀释度的 3管均为阳性，则选择三个最低稀释度
（见表C.1例子 f）；如果在更高的没有被选择的稀释度还有阳性结果，将此阳性结果加到选择的最高
稀释度，进而确定三个连续稀释度（见 表C.1例子 g）。  
 
表C.1 关于MPN计算的阳性结果的选择例子  
接种样品量  
例子编号  0.1g(mL)  0.01 g(mL)  0.001  g(mL)  0.0001  g(mL)  0.0001  g(mL)  选择的三个连续
稀释度阳性管数  MPN/  g(mL)  
a  3 3 1 0 0 3-1-0 430 
b  2 3 1 0 0 3-1-0 430 
c  3 2 2 1 0 2-2-1 280 
d  3 2 2 0 1 2-2-1 280 
e  3 3 3 3 2 3-3-2 110000  
f  0 0 1 0 0 0-0-1 3 
g  2 2 1 1 0 2-2-2 35