中华人民共和国国家标准  
 
GB 4789.5—xxxx 
 
 
食品安全 国家标准  
食品微生物学检验  志贺氏菌检验 
 
（征求意见稿）  
 
中华人民共和 国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  xxxx -xx-xx实施  GB 4789. 5-xxxx  
I 前    言 
本标准代替 GB/T 4789.5 －2003《食品卫生微生物学检验  志贺氏菌检验》。   
本标准与 GB/T 4789.5 -2003相比主要变化如下：  
——修改了标准的中英文名称；  
——修改了原标准中增菌部分；用 志贺氏菌增菌液代替了 原标准中的 GN增菌液，培养条件为
41.5℃厌氧培养；  
——用XLD琼脂和志贺氏菌显色培养基代替原标准中使用的 HE琼脂、 SS琼脂和 EMB琼脂；  
——在福氏志贺 氏菌各型和亚型、变种的型抗原和群抗原表中 增补了抗原型和亚型；  
——补充完善了志贺氏菌四个群的生 化特性；  
——修改了原标准中的进一步生化试验。  
 
 
 
 
 
 GB 4789. 5-xxxx  
1 食品安全国家标准  
食品微生物学检验   志贺氏菌 检验 
1 范围 
本标准规定了食品中志贺 氏菌(Shigella )的检验方法。  
本标准适用于食品中志贺 氏菌的检验。  
2  设备和材料  
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：  
2.1  恒温培养箱：  36 ℃± 1 ℃ 
2.2  冰箱： 2 ℃～5 ℃。 
2.3  厌氧培养装置： 41.5 ℃1 ℃。  
2.4  电子天平：感量 0.1 g。 
2.5  显微镜： 10×～100×。 
2.6  均质器。  
2.7  振荡器。  
2.8  无菌吸管： 1 mL（具 0.01 mL刻度） 、 10 mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。  
2.9  无菌锥形瓶：容量 100 mL、200 mL、2 000 mL 。 
2.10  无菌培养皿：直径 90 mm。 
2.11  pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。  
2.12  全自动微生物生化鉴定系统。  
3  培养基和试剂  
3.1 志贺氏菌增菌肉汤： 见附录 A 中A.1。 
3.2 麦康凯（ MAC）琼脂： 见附录 A 中A.2。 
3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（ XLD）琼脂： 见附录 A 中A.3。 
3.4 志贺氏菌显色培养基  
3.5 三糖铁（ TSI）琼脂： 见附录 A 中A.4。 
3.6 营养琼脂： 见附录 A 中A.5。 GB 4789. 5-xxxx  
2 3.7葡萄糖半固体管： 见附录 A 中A.6。 
3.8葡萄糖铵培养基： 见附录 A 中A.7。 
3.9 尿素琼脂： 见附录 A 中A.8。 
3.10 β-半乳糖苷培养基： 见附录 A 中A.9。 
3.11氰化钾（ KCN）培养基： 见附录 A 中10。 
3.12氨基酸脱羧酶试验培养基： 见附录 A 中A.11。 
3.13糖发酵管： 见附录 A 中A.12。 
3.14缓冲葡萄糖蛋白胨水（ MR和V-P试验用）：见附录 A 中A.13。 
3.15西蒙氏柠檬酸盐琼脂： 见附录 A 中A.14。 
3.16粘液酸培养基 ：见附录 A 中A.15。 
3.17蛋白胨水、靛基质试剂： 见附录 A 中A.16。 
3.18志贺氏菌属诊断血清。  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 GB 4789. 5-xxxx  
3 4 检验程序  
志贺氏菌检验程序见图 1。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
图1 志贺氏菌检验程序  
5  操作步骤  
5.1增菌 
以无菌操作 取检样25g（或 25 mL）,加入装有 灭菌225mL志贺氏菌增菌液 的均质杯， 用旋转刀
片式均质器以 以8 000～10 000 r/min 均质；或加入装有 225mL志贺氏菌增菌液 的均质袋中，用 拍击
式均质器 连续均质 1 min～2 min，。液体样品振荡混匀即可。 于41.5 ℃±１℃， 16 h～20 h厌氧培
养。 
5.2 分离 36 ℃±１℃，20 h～48 h 
   
 XLD琼脂 
 
挑取可疑菌落  
 TSI，葡萄糖半固体 ， 
营养琼脂斜面  MAC琼脂或志贺氏菌显色培养基  
 
生化鉴定  
报告 
 血清学分型  
志贺氏菌 属分群及分型结果  检样 
25 g（或25 mL）样品+志贺氏菌增菌肉汤 225 mL 
 
41.5 ℃±１℃， 
16 h～20 h厌氧培养  GB 4789. 5-xxxx  
4 取增菌后的志贺氏增菌肉汤分别划线接种于 XLD琼脂平板和 MAC琼脂平板或 志贺氏菌显色 培
养基平板上 ，于 36 ℃1 ℃培养 20 h～24 h，观察各个平板上生长的菌落 形态，志贺氏菌在不同选
择性琼脂平板上的菌落特征见表 1。宋内氏志贺氏菌的单个菌 落直径大于其它志贺 氏菌。若出现的
菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至 48 h再进行观察 。 
表 1   志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征  
选择性琼脂平板  志贺氏菌的菌落特征    
MAC琼脂 无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐 。 
XLD琼脂 粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐。  
志贺氏菌显色培养基  按照显色培养基的说明进行判定。  
5.3 初步生化试验  
5.3.1 选取平板上的 5个或 5个以上可疑菌落 ，分别接种 TSI、葡萄糖半固体 和营养琼脂斜面各一管，
置36 ℃1 ℃培养 20 h～24 h,分别观察结果 。 
5.3.2 培养物中出现下述情况之一者即可弃去：  
a）在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长；  
b）发酵乳糖或蔗糖的；  
c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的；  
d）产气的；  
e）有动力的；  
f）产生硫化氢的 。 
5.3.3  凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌 6型可产生少量气体），无动力的
菌株，应 进行血清学分型和进一步的生化试验。  
5.4 血清学分型和进一步的生化试验  
5.4.1 血清学分型  
挑取营养琼脂斜面上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种 志贺氏菌多价血清检查，如果由于
K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用 A1、A2、B群多价和 D
群血清分别试验。如系 B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚
型的型和群抗原见表 2。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型
因子血清检查。四种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价 1、2、3分别检查，并进一步
用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌 3～12型多价血清及各
型因子血清检查。  
表2 福氏志贺氏菌各型和 亚型的型抗原和群抗原  
型和亚型  型抗原  群抗原  在群因子血清中的凝集  
3,4 6 7,8 
1a Ⅰ 4 + - - 
1b Ⅰ （4），6  (+) + - 
2a Ⅱ 3,4 + - - 
2b Ⅱ 7,8 - - + 
3a Ⅲ （3，4）,6,7,8  (+) + + 
3b Ⅲ （3,4）,6 (+) + - 
4a Ⅳ (3,4)  (+) - - 
4b Ⅳ 6 - + - GB 4789. 5-xxxx  
5 型和亚型  型抗原  群抗原  在群因子血清中的凝集  
3,4 6 7,8 
4c Ⅳ 7,8 - - + 
5a Ⅴ （3,4） (+) - - 
5b Ⅴ 7,8 - - + 
6 Ⅵ 4 + - - 
X - 7,8 - - + 
Y - 3,4 + - - 
注： +凝集； -不凝集； （）有或无  
5.4.2 进一步的生化试验  
在做血清学分型的同时 ,应做进一步的生化试验 ,即: 葡萄糖铵，尿素， β-半乳糖苷酶， KCN生长 , 
赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的分解。除宋内氏菌和鲍氏 13型为鸟氨酸阳性 ;
宋内氏菌和痢疾 1型，鲍氏 13型β-半乳糖苷酶为阳性以外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必
要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的
菌株 ,即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集 ,仍不得判定为志贺氏菌属 . 志贺氏菌属四个生化群
的培养物，应符合该群的生化特性，但福氏志贺氏菌 6型的生化特征和 A群或 C群相似；某些不活
泼的大肠埃希氏菌（ anaerogenic E.coil. ）、A-D（Alkalescens -D isparbiotypes 碱性 -异型）菌的部分生
化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，需要进一步做西蒙氏柠檬酸盐、
粘液酸盐试验 (36 ℃培养 24 h～48 h)。这些反应志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、
A-D（碱性 -异型）菌至少有一项反应为阳性，见表 3。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化
鉴定系统。  
表3志贺氏菌属四个群的生化特征  
种和群  ß-半乳糖苷酶  靛基质  甘露醇  棉子糖  甘油  
 葡萄糖铵  西蒙氏柠檬酸
盐 粘液酸盐  
A群：痢疾志
贺氏菌  - -/+ - - (+) - - - 
B群：福氏志
贺氏菌  - (+) + + - - - - 
C群：鲍氏志
贺氏菌  - -/+ + - (+) - - - 
D群：宋内氏
志贺氏菌  + - + + d - - d 
大肠埃希氏菌  + +/- + + d + d + 
A-D菌 + + + d d + d d 
注:+阳性； -阴性； -/+多数阴性； +/-多数阳性； （ +）迟缓阳性；  d有不同生化型。  
5.5 结果报告  
综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告 25 g（mL）样品中检出或未检出 志贺氏菌。  GB 4789. 5-xxxx  
6 附录A 
培养基和试剂  
A.1志贺氏菌增菌肉汤 -新生霉素 （Shigella broth） 
A.1.1志贺氏菌增菌肉汤  
A.1.1.1成分 
胰蛋白胨  20.0 g 
葡萄糖   1.0 g 
磷酸氢二钾  2.0 g 
磷酸二氢钾  2.0 g 
氯化钠  5.0 g 
Tween 80  1.5 m L 
蒸馏水  1 000.0 mL 
pH7.00.2 
A.1.1.2 制法 
将以上成 分混合加热溶解 ，冷却至 25 ℃左右校正调至 pH7.00.2，分装适当的容器， 121 ° C 灭
菌15 min。取出后冷却至 50 ~55 °C，加入除菌过滤的新生霉素溶液（ 0.5 μg/mL） ，分装 225 mL备用。
（注：如不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存一个月。 ） 
A.1.2 新生霉素溶液  
A.1.2.1成分 
新生霉素     25.0 mg  
蒸馏水  1 000.0 mL  
A.1.2.2 制法 
将新生霉素溶解于蒸馏水中，用 0.2µm过滤膜除菌，如不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存一
个月。 
A.1.3 临用时每 225ml志贺氏菌增菌肉汤（ A1.1）加入 5ml新生霉素溶液（ A1.2） ，混匀。  
A.2麦康凯琼脂（ MAC） 
A.2.1 成分 
蛋白胨  20.0 g 
乳糖  10.0 g 
3号胆盐    1.5 g  
氯化钠  5.0 g 
中性红  0.03 g  
结晶紫 0.001 g  
琼脂  15.0 g  
蒸馏水  1 000.0 mL  
pH7.2±0.2 
A.2.2 制法 
将以上成分混合加热溶解，冷却至 25 ℃左右校正调至 7.2±0.2，分装， 121℃高压灭菌 15min。
冷却至45 ～50 ℃，倾注平板。 （ 注：如不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存二周。 ） 
A.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（ XLD） 
A3.1 成分 
酵母浸膏  3 .0 g GB 4789. 5-xxxx  
7 L-赖氨酸  5.0 g 
木糖  3.75 g 
乳糖  7.5 g 
蔗糖  7.5 g 
脱氧胆酸钠    2.5 g  
氯化钠  5.0 g 
硫代硫酸钠     6.8 g  
柠檬酸铁铵    0.8 g  
酚红    0.08 g 
琼脂  15.0 g  
蒸馏水  1 000.0 mL  
pH7.40.2  
A4.2 制法 
将上述成分（酚红除外）溶解于 1 000 mL 蒸馏水，加热溶解 , 冷却至 25 ℃左右校正调至 pH 7.4
±0.2。再加入指示剂，待冷却致 50 ℃—55 ℃倾注平皿。  
注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。
本培养基宜于当天制备，第二天使用。使用前必须去除平板表面上的水珠，在 37～55 ℃温度下，琼
脂面向下、平板盖亦向下烘干。另外 如配制好的培养基不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存二周。  
A4三糖铁琼脂 （TSI） 
A4.1 成分 
蛋白胨  20.0 g  
牛肉浸膏  5.0 g 
乳糖  10.0 g 
蔗糖  10.0 g  
葡萄糖  1.0 g  
硫酸亚铁铵 [Fe(NH 4)2·6H2O]    0.2 g 
氯化钠    5.0 g  
硫代硫酸钠        0.2 g 
酚红 0.025 g  
琼脂  12.0 g 
蒸馏水  1 000.0 mL 
pH 7.40.2  
A4.2 制法 
除酚红和琼脂外 ,将其它成分加于 400 mL水中 ,搅拌均匀 ,静置约 10 min,加热使完全溶化 , 冷却至
25 ℃左右校正调至 pH 7.40.2。另将琼脂加于 600 mL水中，静置约 10 min，加热使完全溶化。将两
溶液混合均匀， 加入 5%酚红水溶液 5 mL， 混匀， 分装小号试管， 每管约 3 mL。于 121 °C 灭菌 15 min，
制成高层斜面。冷却后呈桔红色。 如不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存一个月。  
A5 营养琼脂斜面  
A5.1 成分 
蛋白胨  5.0 g  
牛肉膏  3.0 g  
琼脂  15.0 g 
蒸馏水  1 000.0 mL  GB 4789. 5-xxxx  
8 pH 7.00.2 
A.5.2 制法 
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入 15%氢氧化钠 溶液约 2 mL，冷却至 25 ℃左右校正
调至 pH7.00.2。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。 分装小号试管，每管约 3 mL。于 121 °C 灭菌
15 min，制成斜面。 （注：如不立即使用，在 2 ~8 ℃条件下可储存二周。 ） 
A.6 葡萄糖半固体琼脂  
A.6.1 成分 
蛋白胨  1.0 g 
牛肉膏  0.3 g 
氯化钠  5.0 g  
1.6%溴甲酚紫酒精溶液    0.1 mL   
葡萄糖  1.0 g  
琼脂    0.3 g 
蒸馏水  100.0 mL  
pH7.4 
A.6.2 制法 
制法 :将蛋白胨，牛肉膏 和氯化钠加入于水中，校正 pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄
糖，分装小试管，灭菌 121℃ 15 min。  
A.7 葡萄糖铵培养基  
A.7.1 成分 
蛋白胨  1.0 g 
牛肉膏  0.3 g 
氯化钠  5.0 g  
硫酸镁（ MgSO4.7H 2O）   0.2 g  
磷酸二氢铵  1.0 g 
磷酸氢二钾      1.0 g 
葡萄糖  2.0 g 
琼脂  20.0 g 
0.2%溴麝香草酚蓝水溶液    40 mL 
蒸馏水  1 000.0 mL  
pH 6.8 
A.7.2 制法 
先将盐类和糖溶解于水内，校正 pH值，再加琼脂加热溶解，然后加入指示剂。混合均匀后分装
试管， 121 °C 高压灭菌 15 min。制成斜面备用。  
A.7.3 试验方法  
用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不到混浊，以每一接种
环内含菌数在 20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作
为对照。 于36 °C1 °C培养 24 h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但
在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果 。 
注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使
用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。  
A.8 尿素琼脂  
A8.1 成分 GB 4789. 5-xxxx  
9 蛋白胨  1.0 g 
氯化钠  5.0 g  
葡萄糖  1.0 g 
磷酸二氢钾  2.0 g 
磷酸氢二钾      1.0 g 
0.4%酚红溶液     3 mL 
琼脂  20.0 g 
20%尿素溶液  100 mL 
蒸馏水  900.0 mL 
pH 7.20.1 
A8.2 制法 
除酚红和尿素外的其它成分加热溶解， 冷却至25 ℃左右校正调至 pH 7.20.1，加入酚红指示剂，
混匀，于 121 °C灭菌 15 min。冷至约 55 °C，加入过滤除菌的 20%尿素水溶液 100 mL，混匀，以无菌操
作分装灭菌试管，每管约 3~4 mL，制成斜面后放冰箱备用。  
A8.3 试验方法  
挑取琼脂培养物接种，在 36 °C1 °C培养 24 h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变
为红色。  
A9 β-半乳糖苷酶试验  
A9.1 液体法（ONPG法） 
A9.1.1 成分 
邻硝基苯 β-D-半乳糖苷 (ONPG)  60.0 mg 
0.01mol/L 磷酸钠缓冲液 (pH7.5)   10.0 mL  
1%蛋白胨水 (pH7.5)  30.0 mL  
A9.1.2 制法 
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水， 以过滤法除菌， 分装于 10mm×75mm试管内， 每管 0.5mL，
用橡皮塞塞紧。  
A9.1.3 试验方法  
自琼脂斜面挑取培养物一满环接种， 于36 °C1 °C培养 1 h~3 h和24 h观察结果。如果 β-D-半乳糖苷
酶产生，则于 1 h~3 h变黄色，如无此酶则 24 h不变色。  
A.9.2 平板法（X-Gal法） 
A.9.2.1 成分 
蛋白胨    20.0 g 
氯化钠     3.0 g 
5-溴-4-氯-3-吲哚 -β-D-半乳糖苷 (X-Gal) 200.0 mg 
琼脂  15.0 g  
蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 7.20.1  
A.9.2.2 制法 
将上述各成分加热煮沸于 1L水中，冷却至25 ℃左右校正调至 pH 7.2，115 °C 高压灭菌 10 min。倾
注平板避光冷藏备用。  
A.9.2.3 试验方法  GB 4789. 5-xxxx  
10 挑取琼脂斜面培养物接种于平板，划线和点种均可， 于36 °C1 °C培养18 h~24 h观察结果。如果
β-D-半乳糖苷酶产生， 则平板上培养物颜 色变蓝色， 如无此酶则 培养物为 无色或不透明色， 培养48 h~72 
h后有部分转为淡粉红色。  
A.10 氰化钾（ KCN）培养基  
A.10.1 成分 
蛋白胨  10.0 g 
氯化钠  5.0 g 
磷酸二氢钾    0.225 g  
磷酸氢二钠    5.64 g 
0.5%氰化钾溶液    20.0 mL 
蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 7.6  
A.10.2 制法 
将除氢化钾以外的成分配好后分装容器， 121 °C灭菌 15 min。 放在冰箱内使其充分冷却。 每 100 mL
培养基加入 0.5%氢化钾 0.2 mL（最后浓度为 1：10 000），分装于灭菌小试管，每管 4 mL，立刻用灭菌
橡皮塞塞紧，放 4 °C冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氢化钾的培养基作为对照培养基，分
装试管备用。  
A.10.3 试验方法  
将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取 1环接种于氢化钾（ KCN）培养基。并另挑
取1环接种于对照培养基。在 36 °C1 °C培养 1d ~2 d，观察结果。如有细菌生长者即为阳性（不抑制），
经2d培养细菌不生长则为阴性（抑制）。  
注：氰化钾是剧毒药物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应 在冷房内进行。试
验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以至药物浓度降低，细菌生
长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。  
A.11氨基酸脱羧酶试验培养基  
A.11.1 成分 
蛋白胨  5.0g 
酵母浸膏  3.0g 
葡萄糖    1.0g 
1.6%溴甲酚紫 -乙醇溶液    1.0mL 
L-氨基酸或 DL-氨基酸  0.5g/100 mL 或1.0g/100 mL  
蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 6.8±0.1 
A.11.2 制法 
除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装 每瓶 100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸和鸟氨酸。 L-
氨基酸按 0.5%加入 ,DL-氨基酸按 1%加入 .再校正 pH至6.8±0.1。对照培养基不加氨基酸。分装于灭
菌的小试管内，每管 0.5mL，上面滴加一层石蜡油， 115°C 高压灭菌 10min。 
A.11.3 试验方法  
    从琼脂斜面上挑取培养物接种， 于36 °C1 °C培养 18 h～24 h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者
由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为
黄色。  
A.12 糖发酵管  GB 4789. 5-xxxx  
11 A.12.1 成分 
牛肉膏     5.0 g 
蛋白胨   10.0 g 
氯化钠     3.0 g 
磷酸氢二钠 （NA 2HPO 4.12H 2O） 15.0 g  
0.2%溴麝香草酚蓝溶液   12.0 mL 
蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 7.40.1 
A.12.2 制法 
A.12.2.1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按 0.5%加入葡萄糖， 在25℃下校正 pH7.1±0.1，分装于有
一个倒置小管的小试管内， 121°C 高压灭菌 15min。 
A.12.2.2 其它各种糖发酵管可按上述成分配好后 ,分装每瓶 100mL，121°C 高压灭菌 15min。另将各种
糖类分别配好 10%溶液，同时高压灭菌。将 5mL糖溶液加入于 100mL培养基内，以无菌操作分装小试
管。 
注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。  
A.12.3 试验方法  
    从琼脂斜面上挑取小量培养物接种， 于 36° C1° C培养， 一般观察 2d~3d。 迟缓反应需观察 14d~30d。 
A.13 缓冲葡萄糖蛋白胨水（ MR-VP试验） 
A.13.1 成分 
磷酸氢二钾     5.0 g 
多价胨   7.0 g 
葡萄糖   1.0 g 
蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 7.0±0.1 
A.13.2 制法 
溶化后调至 pH 7 .0±0.1， 分装试管， 每管 1 mL，121° C灭菌 15min。（注： 如不立即使用， 在 2 ~8 ℃
条件下可储存一个月。 ） 
A13.3 甲基红（ MR）试验 
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于 36°C1°C培养 2~5d，哈夫尼亚肠杆菌应在
22°C~25°C培养。滴加甲基红试剂 1滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：
10mg甲基红溶于 30mL95% 乙醇中，然后加入 20mL蒸馏水。  
A13.4 V-P试验 
用琼脂培养物 接种本培养基中，于 36°C1°C培养 2~4d，哈夫尼亚肠杆菌应在 22°C~25°C培养。加
入6%α-萘酚 -乙醇溶液 0.5mL和40%氢氧化钾溶液 0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻
或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在 36°C1°C培养 4h再进行观察。  
A.14 西蒙氏柠檬酸盐培养基  
A.14.1 成分 
氯化钠      5.0 g 
硫酸镁（ MgSO4.7H 2O）   0.2 g  
磷酸二氢铵       1.0 g 
磷酸氢二钾     1.0 g 
柠檬酸钠     5.0 g  
琼脂    20 g 
0.2%溴麝香草酚蓝溶液       40 mL  GB 4789. 5-xxxx  
12 蒸馏水    1 000.0 mL 
pH 6.80.2 
A.14.2 制法 
先将盐类溶解于水内，调至 pH 6.80.2，加入琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分
装试管， 121 °C灭菌 15 min。制成斜面备用。  
A.14.3 试验方法  
挑取少量琼脂培养物接种，于 36 °C1 °C培养 4 d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培
养基从绿色转为蓝色。  
A.15 醋酸盐利用试验  
A.15.1 成分 
氯化钠      5.0 g 
硫酸镁（MgSO4.7H 2O）   0.2 g  
磷酸二氢铵       1.0 g 
磷酸氢二钾     1.0 g 
醋酸钠   2.0 g  
琼脂    20.0 g  
0.2%溴麝香草酚蓝溶液       40 mL  
蒸馏水    1 000.0 mL 
 pH 6.8±0.1 
A.15.2 制法 
将各成分加热溶解 ，在25℃左右校正 pH值，加入指示剂后混匀、分装试管，于 121°C 高压灭菌
15 min。制成斜面备用。  
A15.3 试验方法  
将待测新鲜培养物制成菌悬液，涂布接种于斜面上， 于36 °C1 °C培养 7 d，每天观察结果，有菌
生长、培养基由绿色变为蓝色为阳性。  
A.16 粘液酸利用试验  
A.16.1 成分 
蛋白胨      10.0 g  
0.1mol/LNaOH 水溶液        25.0 ml  
0.2%溴麝香草酚蓝溶液      12.0 mL  
蒸馏水    1 000.0 mL  
粘液酸    10 mL  
A.16.2 制法 
除指示剂外将各成分加热溶解 ，冷却至25 ℃左右校正调至  pH 7.4±0.1，加入指示剂后混匀、分
装100 mL试剂瓶，然后将粘液酸加入使之浓度为 1.0%。混匀后重新调整 pH，分装试管，每管约 3 mL，
于115 °C 高压灭菌 15 min。 
A16.3 试验方法  
将待测新鲜培养物接种， 于36 °C1 °C培养 24 h~48  h观察结果，液体培养基如初为蓝色，渐变为
黄绿色至白色者为阳性，保持原色则为阴性。  
A.17蛋白胨水（ 靛基质试验用 ） 
A.17.1成分 
蛋白胨 (或胰蛋白胨 )      20.0 g 
氯化钠      5.0 ml  GB 4789. 5-xxxx  
13 蒸馏水    1 000.0 mL 
pH7.4   
A.17.2制法 
    按上述成分配制，分装小试管， 121℃高压灭菌 15min。（注：此试剂在 2 ~8 ℃条件下可储存一
个月。） 
A.17.3靛基质试剂  
A.17.3.1柯凡克试剂：将 5g对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸 25mL。 
A.17.3.2欧－波试剂：将 1g对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95% 乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸 20mL。 
A.17.4试验方法  
挑取小量培养物接种，在 36± 1℃培养 1～2d，必要时可培养 4～5d。加入柯凡克试剂约 0.5 
mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约 0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液
表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。  
注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用 ， 
此试剂在 2 ～8 ℃条件下可储存一个月。