OMCL + Abteilung Pharm akopöe Podophyllotoxin – Monographieentwurf  
18.03.2010 / lma/se/aha  
 
1 / 4 Podophyllotoxin 
 
Podophyllotoxinum  
 
 
 
C22 H22 O8       Mr 414,4 
CAS Nr.518-28-5 
 
Definition 
 
(1 R,2 R,3 R,4 R)-1-Hydroxy-2-hydroxymethyl-6,7-methylendioxy-4-(3’ ,4’,5’-trimethoxyphenyl)-1,2,3,4-
tetrahydronaphthalin-3-carbonsäure-lacton 
 
Gehalt:  mindestens 98,5 Prozent 
 
 
Eigenschaften 
 
Aussehen: weisses bis fast weisses, kristallines Pulver 
Löslichkeit:  praktisch unlöslich in Wasser, leicht löslich in A ceton, löslich in Methanol  
 
 
Prüfung auf Identität 
 
A. Dünnschichtchromatographie (2.2.27) 
Lösungsmittelmischung:  Methanol R, wasserfreie Essigsäure R (900:1 V/V) 
Untersuchungslösung:  10 mg Substanz werden in der Lösungsmittelmischung  zu 20 ml gelöst. 
Referenzlösung: 10 mg Podophyllotoxin RN werden in der Lösungsmittelmischung zu 20 ml gelös t. 
Platte:  DC-Platte mit Kieselgel GF 254  R 
Fliessmittel:  Methanol R, Toluol R (1:5 V/V) 
Auftragen:  10 µl, bandförmig 
Laufstrecke:  2/3 der Platte 
Trocknen:  an der Luft 
Detektion A:  Auswertung im ultravioletten Licht bei 254 nm 
Ergebnis A:  Der Hauptfleck im Chromatogramm der Untersuchungsl ösung entspricht in Bezug auf Lage, 
Farbe und Grösse dem Hauptfleck im Chromatogramm de r Referenzlösung. 
Detektion B:  Die Platte wird mit einer Mischung von 9 Volumteil en Methanol R und einem Volumteil 
Schwefelsäure R besprüht und 15 min lang bei 140 °C erhitzt. 
Ergebnis B:  Der Hauptfleck im Chromatogramm der Untersuchungsl ösung entspricht in Bezug auf Lage, 
Farbe und Grösse dem Hauptfleck im Chromatogramm de r Referenzlösung.  
 
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2 / 4 B. UV-Vis-Spektroskopie (2.2.25)  
Untersuchungslösung:  10 mg Substanz werden in Ethanol 96% R zu 20,0 ml gelöst. 1 ml Lösung wird mit 
Ethanol 96% R zu 25 ml verdünnt. Die Absorption dieser Lösung wi rd sofort gemessen. 
Spektralbereich:  200 bis 350 nm 
Absorptionsmaximum:  bei 292 nm 
Absorptionsminimum:  bei 260 nm 
 
C. Spezifische Drehung (2.2.7): –107,0 bis –112,0 ( getrocknete Substanz) 
0,20 g Substanz werden in wasserfreiem Ethanol R zu 20,0 ml gelöst. 
 
 
Prüfung auf Reinheit 
 
Aussehen der Lösung : Die Lösung muss klar (2.2.1) und darf nicht stärk er gefärbt sein als die 
Farbvergleichslösung BG 7 (2.2.2, Methode II). 
0,50 g Substanz werden in Aceton R zu 10,0 ml gelöst. 
 
Verwandte Substanzen: Flüssigchromatographie (2.2.29) 
Lösung A: Methanol R, wasserfreie Essigsäure  R (900:1  V/V ) 
Lösung B : Lösung A, Wasser  R (10:7  V/V ) 
Untersuchungslösung: 25,0 mg Substanz werden in 2,0 ml Lösung A gelöst. Die Lösung wird mit Lösung B zu 
25,0 ml verdünnt.  
Referenzlösung a: 1,0 ml Untersuchungslösung wird mit Lösung B zu 50, 0 ml verdünnt. 1,0 ml dieser Lösung 
wird mit Lösung B zu 20,0 ml verdünnt. 
Referenzlösung b: 25,0 mg Substanz werden in 2,5 ml wasserfreiem Etha nol R gelöst. Die Lösung wird mit 1,0 
ml einer Lösung von Natriumacetat R (82,0 g . l-1) versetzt und 15 h lang bei Raumtemperatur gerührt .  
Anschliessend wird die Mischung mit 0,1 ml wasserfr eier Essigsäure R und 3,0 ml Lösung A versetzt. 1,0 ml 
dieser Lösung wird mit Lösung B zu 20,0 ml verdünnt . 
Säule 
-  Grösse: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm 
-  Stationäre Phase: nachsilanisiertes, octadecylsi lyliertes Kieselgel zur Chromatographie R (5 µm) 1 
-  Temperatur: 40 oC 
Mobile Phase:  Methanol R, Wasser R (45:55 V/V), vorgemischt 
Durchflussrate:  1,0 ml . min -1 
Detektion: Spektrometer bei 240 nm 
Einspritzen: 10 µl 
Chromatographiedauer:  2,5 fache Retentionszeit von Podophyllotoxin 
Relative Retention  (bezogen auf Podophyllotoxin, tR etwa 18 min) 
-  Verunreinigung A: etwa 0,8  
-  Verunreinigung B: etwa 0,4 
Eignungsprüfung:  Referenzlösung b 
- Auflösung: mindestens 5,0 zwischen den Peaks von Verunreinigung A und Podophyllotoxin 
- Retentionszeit des Hauptpeaks: 18 ± 4 min 
                                                 
1 ODS Hypersil® ist geeignet  
 
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3 / 4  
Grenzwerte 
- Verunreinigungen A, B: jeweils nicht grösser als die Fläche des Hauptpeaks im Chromatogramm der 
Referenzlösung a (0,1 Prozent) 
- Nicht spezifizierte Verunreinigungen: jeweils nic ht grösser als die Fläche des Hauptpeaks im 
Chromatogramm der Referenzlösung a (0,10 Prozent) 
- Summe aller Verunreinigungen: nicht grösser als d as 5fache der Fläche des Hauptpeaks im 
Chromatogramm der Referenzlösung a (0,5 Prozent) 
- Ohne Berücksichtigung bleiben: Peaks, deren Fläch e kleiner ist als das 0,5fache der Fläche des 
Hauptpeaks im Chromatogramm der Referenzlösung a (0 ,05 Prozent) 
 
Trocknungsverlust  (2.2.32): höchstens 1,0 Prozent, mit 1,000 g Subst anz durch 2 h langes Trocknen im 
Vakuum bei 105 °C bestimmt 
 
Sulfatasche (2.4.14): höchstens 0,1 Prozent, mit dem Rückstand aus dem „Trocknungsverlust“ bestimmt  
 
 
Gehaltsbestimmung 
 
Der Gehalt wird aus den Ergebnissen der Prüfungen „ Verwandte Substanzen“, „Trocknungsverlust“ und 
„Sulfatasche“ berechnet. 
 
Lagerung  
 
Vor Licht geschützt, zwischen 2 und 8 °C  
 
 
Verunreinigungen 
 
Spezifizierte Verunreinigungen:  A, B 
 
 
 
A. Picropodophyllotoxin 
 
 
B. 4’-Demethylepipodophyllotoxin  
 
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4 / 4  
Podophyllotoxin RN  
C22 H22 O8 Mr 414,4 
CAS Nr. 518-28-5 
Weisses bis fast weisses, kristallines Pulver 
Die Substanz muss der Monographie „Podophyllotoxin“  entsprechen, mit Ausnahme der Prüfung auf Identitä t A 
sowie der Prüfungen auf Reinheit „Aussehen der Lösu ng“ und „Sulfatasche“.  
Kernresonanzspektroskopie (2.2.33):  
1H-NMR (500 MHz, J in Hz, CDCl 3): δ (ppm) = 2,73-2,85 (m, 2H); 3,75 (s, 6H); 3,81 (s, 3H); 4,07 (t, J=9,4, 1H); 
4,58-4,61 (m, 2H); 4,76 (t, J=8,6, 1H); 5,96 (d, J= 1,3, 1H); 5,98 (d, J=1,3, 1H); 6,37 (s, 2H); 6,51 ( s, 1H); 7,11 
(s, 1H). 
13C-NMR (125 MHz, CDCl 3): δ (ppm) = 40,8; 44,1; 45,3; 56,3; 60,8; 71,3; 72,8; 101,5; 106,3; 108,5; 109,8; 
131,2; 133,2; 135,4; 137,3; 147,7; 147,8; 152,6; 17 4,4.