GB × × × ×—× × × × 
 
食品安全国家标准  
食品添加剂  核黄素5´-磷酸钠 
（征求意见稿）  
 
 
 
2011 -×× -××发布  ×××× -×× -××实施  中华人民共和国国家标准  
中华人民共和国卫生部    发布  食品安全国家标准  
食品添加剂  核黄素5´-磷酸钠 
1 范围 
本标准适用于以核黄素为原料，经磷酸化、中和、精制等步骤生产的食品添加剂核黄素 5´-磷酸
钠。  
2 分子式和相对分子质量  
2.1 分子式 
C17H20N4NaO 9P· 2H 2O 
2.2 相对分子质量  
514.36（按 2007年国际相对原子质量 ） 
3 技术要求  
3.1 感官要求：应符合表 1 的规定。  
表1 感官要求 
项     目 要    求 检验方法 
色泽 橙黄色 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然
光线下，观察其色泽和状态。  状态 结晶性粉末 
3.2 理化指标 ：应符合表 2的规定。 
表2 理化指标  
 
 
 
 
 
 项     目 指    标 检验方法  
核黄素（C17H20N4O6），w/%  73.0～79.0 附录 A中A.3 
比旋光度，[α]
25
D/（°）  +37.0～+42.0  附录 A中A.4 
pH  5.0~6.5  附录 A中A.5 
干燥减量 ，w/% ≤ 7.5 附录 A中A.6 
灼烧残渣 ，w/% ≤ 25.0 附录 A中A.7 
游离磷酸 ，w/% ≤ 1.0 附录 A中A.8 
游离核黄素 ，w/% ≤ 6.0 附录 A中A.9 
核黄素二磷酸盐 ，w/% ≤ 6.0 附录 A中A.9 
铅（Pb）/（mg/kg） ≤ 2.0 GB 5009. 12  附 录 A 
检验方法  
A.1 一般规定  
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 —2008中规定的三
级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均
按GB/T 601 、GB/T 602 、GB/T 603 的规定制备。 试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指
水溶液。 
A.2 鉴别试验  
A.2.1 试剂和材料  
A.2.1.1 盐酸溶液：取浓盐酸 1mL，用水稀 释至 3mL。 
A.2.1.2  氢氧化钠溶液：取氢氧化钠 1g，加水溶解并稀释至 25mL。 
A.2.2 鉴别方法  
称取约1.5 mg试样，加 100mL水溶解，此为试样液。试样液 在透射光下显淡黄绿色，并有强烈
的黄绿色荧光。 取试样液 25mL，加入 0.5mL盐酸溶液，荧光消失； 另取试样液 25mL，加入 0.1mL
氢氧化钠溶液，荧光消失。  
A.3 核黄素（ C17H20N4O6）的测定 
A.3.1 试剂和材料  
A.3.1.1 冰乙酸。 
A.3.1.2 乙酸钠溶液： 14 g/L。 
A.3.2 仪器和设备  
分光光度计。  
A.3.3 分析步骤  
避光操作。 称取约 100 mg样品， 精确至 0.0001 g， 置于 500mL容量瓶中， 加 1mL冰乙酸和 75mL
水。待样品溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取 10mL，置于 100mL容量瓶中，加入 7mL乙
酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀 。以水作空白 ，用光程为 1cm的比色杯，在444 nm波长处测定
样品溶液 的吸光度。核黄素的吸光系数（ E1%
1cm）以 328计。  
A.3.4 结果计算  
核黄素含量 以核黄素的质量分数 w0计，数值以 %表示，按公式（A.1）计算：  
100) 1( 32850
10 w mAw
…………………………（ A.1） 
式中：  
A——样品溶液的吸光度 值； 
m——样品质量 的数值，单位为 克（ g）； 
w1——实测样品干燥 减量的数值，%。 
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.0 %。  A.4 比旋光度 的测定 
A.4.1 试剂和材料  
盐酸溶液：取盐酸 27.0 mL，用水稀释、定容至 50 mL。 
A.4.2 仪器和设备  
旋光仪，精度 ± 0.01°。 
A.4.3 分析步骤  
避光操作。称取 0.75 g（以无水品计）样品，精确至 0.0001 g，置于 50mL容量瓶中，加盐酸溶
液溶解并稀释至刻度，在 15min内、（25± 1）℃条件下用旋光仪测定比旋光度。  
A.4.4 结果计算  
比旋光度
25
D按公式（ A.2）计算：  
        
cLD25 …………………………（ A.2） 
式中：  
α——观察到的 样品溶液的 旋光度值；  
c——样品溶液浓度 的数值，单位为克每毫升（ g/mL）； 
L——旋光管长度 的数值，单位为分米（ dm）。 
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.0 %。 
A.5 pH的测定 
A.5.1 仪器和设备  
酸度计，精度 ± 0.01。 
A.5.2 分析步骤  
称取 1.0g样品，精确至 0.0001g，置于 200mL清洁干燥的烧杯中，加水 100mL溶解，在 20 ℃
下用酸度计测定其 pH。 
A.5.3 结果计算  
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.0 %。 
A.6 干燥减量 的测定 
A.6.1 仪器和设备  
恒温真空干燥箱 。 
A.6.2 分析步骤  
称取约 2 g样品，精确至 0.0001 g，置于已干燥至恒重的称量瓶中，于 （100± 1）℃、0.01MPa
下干燥 5 h，然后置于干燥器中冷却至室温，称重。  
A.6.3 结果计算  
干燥减量以质量分数 w1计，数值以 %表示，按公式（ A.3）计算：  
100
32 1
1 mmmw
…………………………（ A.3） 
式中：   m1——干燥前样品和称量瓶质量 的数值，单位为克（ g）； 
m2——干燥后样品和称量瓶质量 的数值，单位为克（ g）； 
m3——干燥前样品质量 的数值，单位为克（ g）。 
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.0 %。 
A.7 灼烧残渣 的测定 
A.7.1 仪器和设备  
高温炉。 
A.7.2 分析步骤  
称取约 1g样品，精确至 0.001g，置于已在 600℃～700℃下灼烧至恒重的坩埚中，缓缓加热至样
品完全碳 化。将碳化的样品冷却，用 0.5mL的硫酸润湿残渣，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，并在 600℃～
700℃的高温炉中灼烧至恒重 。 
A.7.3 结果计算  
灼烧残渣 以质量分数 w2计，数值以 %表示，按公式（ A.4）计算：  
100
65 4
2 mm mw
…………………………（ A.4） 
式中：  
m4——残渣和空坩埚质量 的数值，单位为克（ g）； 
m5——空坩埚质量 的数值，单位为克（ g）； 
m6——样品质量 的数值，单位为克（ g）。 
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.0 %。 
A.8 游离磷酸 的测定 
A.8.1 试剂和材料  
A.8.1.1 标准磷酸盐溶液：准确称取 105 ℃干燥 2 h的磷酸二氢钾 0.22g，置于 1000mL容量瓶中，加
适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀，临用时再稀释 5倍。  
A.8.1.2 钼酸铵 [ (NH 4)6Mo 7O24•4H2O ]溶液： 70g/L。 
A.8.1.3 硫酸溶液： 3.75mol/L 。 
A.8.1.4 酸性钼酸铵溶液：将25mL钼酸铵溶液用水稀释至 200mL，然后缓缓加入 25mL硫酸溶液，
摇匀。  
A.8.1.5 硫酸亚铁溶液： 准确称取 10.0g的硫酸亚铁， 置于 100mL容量瓶中，加适量 的水和 2mL的硫
酸溶液溶解，并稀释至刻度， 摇匀。 
A.8.2 仪器和设备  
紫外—可见分光光度计。  
A.8.3 分析步骤  
A.8.3.1 样品溶液 的制备 
准确称取 300.0 mg样品（按无水品计），置于 100mL容量瓶中，加适量 的水溶解，并稀释至刻度，
摇匀。  A.8.3.2 测定  
准确量取标准磷酸盐溶液和样品溶液 各10.0mL，分别置于 50mL的锥形瓶中， 然后向各锥形瓶
中加入 10.0mL酸性钼酸盐溶液 和5mL硫酸亚铁 溶液，混匀 ，以10.0mL水、10.0mL酸性钼酸盐溶
液和5mL硫酸亚铁 溶液组成的混合液为空白 ，用光程为 1cm的比色杯，在700 nm波长处测定 各锥
形瓶中溶液 的吸光度。 样品溶液的吸光度不得大于 标准溶液的吸光度。  
A.8.4 结果计算  
实验结果以 平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.5 %。 
A.9 游离核黄素和核黄素二磷酸盐 的测定 
A.9.1 试剂和材料  
A.9.1.1 KH 2PO 4溶液：0.054mol/L 。 
A.9.1.2 甲醇：色谱纯。  
A.9.1.3 核黄素标准品：核黄素含量不低于 99.0%（质量分数） 。 
A.9.1.4 核黄素 5´-磷酸钠标准品：核黄素含量不低于 74.0%（质量分数） 。 
A.9.2 仪器和设备  
高效液相色谱仪 ，配荧光检测器 （激发波长 440 nm；发射波长 470 nm）。 
A.9.3 参考色谱条件  
A.9.3.1 色谱柱： C18柱， 3.9mm×300mm，或其他等效的色谱柱 。 
A.9.3.2 流动相： 按KH 2PO 4溶液∶甲醇 =85∶15（体积比） 配制，混合均匀后，用0.45μm滤膜过滤 ，
超声脱气后备用。  
A.9.3.3 柱温：室温。 
A.9.3.4 流动相流速 : 2.0mL/min。 
A.9.3.5 进样量： 100μL。 
A.9.4 分析步骤  
A.9.4.1 系统适应性试验溶液 的制备 
溶解 100mg的核黄素 5´-磷酸钠标准品于水中，使其质量浓度为 2.0mg/mL，加入等体积的流动
相，混匀。吸取 8mL，用流动相稀释至 50mL，混匀备用。 
A.9.4.2 标准溶液的制备 
精密称取 60.0mg核黄素标准品于250mL容量瓶中， 小心加入1mL盐酸溶解， 用水稀释至 刻度，
混匀。用移液管吸取 4mL的核黄素溶液于 100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀 备用。 
A.9.4.3 样品溶液的制备  
精确称取 100.0mg样品于 100mL容量瓶中，加 50mL水溶解，用流动相稀释至刻度，混匀 。用
移液管吸取 8mL溶液于 50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度 ，摇匀备用。 
A.9.4.4 测定 
分别将等体积（约100μ L）的核黄素标准 溶液、样品溶液和系统适应性试验溶液注 入色谱柱中
进行色谱分析。比较核黄素标准品与样品的图谱，确定 峰响应值 。通过与核黄素磷酸盐标准品的保
留时间比较，确定样品的 各色谱峰。核黄素 5´-磷酸的保留时 间约 20~25 min，各色谱峰出峰顺序如
表A.1所示，核黄素 4´-磷酸和核黄素 5´-磷酸峰之间的分离度 R应大于1.0。   
表A.1 各色谱峰出峰顺序  
成分  相对保留时间  
核黄素 3´,4´-二磷酸  
核黄素 3´,5´-二磷酸  
核黄素 4´,5´-二磷酸  
核黄素 3´-磷酸  
核黄素 4´-磷酸  
核黄素 5´-磷酸  
核黄素  0.23 
0.39 
0.58 
0.70 
0.87 
1.00 
1.63 
 
A.9.5 结果计算  
游离核黄素 含量以游离核黄素 的质量分数 w3计，数值以 %表示，按公式（A.5）计算：  
SF
sPPw w 6253
……………………………………（ A.5） 
核黄素二磷酸盐 含量以核黄素二磷酸盐 的质量分数 w4计，数值以 %表示，按公式（A.6）计算：  
SD
sPPw w 6254
……………………………………（ A.6） 
式中： 
ws——标准溶液中核黄素浓度 的数值，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； 
PF——样品中游离核黄素的峰面积百分比；  
PS——核黄素标准 品核黄素的峰面积百分比；  
PD——样品溶液中 三种核黄素二磷酸盐 的峰面积百分比的总和 。 
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。 在重复性条件下获得 的两次独立测定结果的绝对
差值不大于算术平均值的 1.5 %。 
 
___________________________