中华人民共和国国家标准  
 
GB xxxx—xxxx 
 
  
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  
 xxxx -xx-xx实施  
 食品安全国家标准  
食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定  
 GB xxxx—xxxx  
1 前    言 
本标准代替 GB/T 5009.111 —2003和GB/T 23503 —2009。 
本标准与 GB/T 5009.111 —2003和GB/T 23503 —2009相比，主要变化 如下：  
——修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《 食品安全国家标准  食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
的测定（理化方法）》；   
——按照 GB//T20001.4 -2001对标准的结构进行了修改 ； 
——新标准内容是由 GB/T 5009.111 —2003中的两个方法 和GB/T 23503 —2009共三个方法组成， 将
GB/T 5009.111 —2003中的两个 方法分别作为第一法 和第二法 ，而GB/T 23503 —2009的方法作为第 三法。 GB xxxx—xxxx  
2 食品安全国家标准  
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定  
 
1 范围  
本标准规定了食品中 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 的测定方法。  
本标准第一法和第二法适用于 谷物及其制品（蛋糕、 饼干、 面包等） 中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的 测定；
第三法适用于食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的 测定。  
 
第一法  薄层色谱测定法  
2 原理  
谷物及其制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和硅胶 G薄层展开后，加热薄层板。
由于在制备薄层板时 加入了三氯化铝，使脱氧雪腐镰刀菌烯醇在 365 nm紫外光灯下显蓝色荧光，与
标准比较。  
3 试剂和材料  
    除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。  
3.1 试剂 
3.1.1 三氯甲烷 （CHCl 3）。 
3.1.2 无水乙醇 （C2H6O）。 
3.1.3 甲醇（CH 3OH）。  
3.1.4 石油醚  60 ℃～90 ℃或 30 ℃～60 ℃。 
3.1.5 乙酸乙酯 （C4H8O2）。 
3.1.6 乙腈（CH 3CN）。 
3.1.7 丙酮（C3H6O）。 
3.1.8 异丙醇（C3H8O）。 
3.1.9 乙醚（C4H10O）。 
3.1.10 无水乙醚 （C4H10O）。 
3.1.11 氯化铝（ AlCl 3· 6H 2O）：化学纯。  
3.1.12 中性氧化铝：层析用，经 300 ℃活化 4 h，置干燥器中备用。  
3.1.13 活性炭： 20 g活性炭， 用 3 mol/L盐酸溶液浸泡过夜、 抽滤后， 用热蒸馏水洗至无氯离子， 在 120 ℃
烘干备用。  
3.14 硅胶 G：薄层层析用。  
3.2 标准品 GB xxxx—xxxx  
3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（以下简称 DON）标准：纯度≥98%。 
3.3 标准溶液配制   
3.3.1 DON标准储备溶液（ 0.5mg/mL）：精确称取 5.0 mg DON ，加乙酸乙酯 -甲醇（ 19+1）溶解。转入
10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯 -甲醇（ 19+1）稀释至刻度，此标准溶液含 DON 0.5 mg/mL ，避光冷藏保
存，可使用 3个月。 
3.3.2 DON标准工作溶液（ 25μg/mL）：吸取 DON标准储备溶液 0.5 mL，用乙酸乙酯 -甲醇（ 19+1）稀
释至 10 mL，此溶液 DON浓度为 25 μg/mL，可使用 7天。 
4 仪器和设备  
所列仪器为该方法所需要的主要仪器，一般实验室常用仪器不再列入。 某些仪器 和设备应 注明使
用规格。  
4.1 小型粉碎机。  
4.2 电动振荡器。  
4.3 75 mL玻璃蒸发皿。  
4.4 层析柱：内径 2 cm，长10 cm，不具活塞。  
4.5 10 mL具塞浓缩瓶：底部具 0.2 mL刻度尾管。  
4.6 玻璃板： 5 cm× 20 cm 。 
4.7 薄层涂布器： 0.3 mm。 
4.8 展开槽：内长 25 cm，宽 6 cm，高4 cm。 
4.9 紫外光灯： 365 nm。 
4.10 微量注射器： 10 μL，50 μL。 
4.11 50 mL平底管。  
4.12 双波长薄层扫描仪：带数据处理机。  
5 分析步骤  
5.1 提取 
称取 20 g粉碎试样置于 200 mL具塞锥瓶中，加 8 mL水和 100 mL三氯甲烷 -无水乙醇（ 8+2），密塞。
在瓶塞上涂层水，盖严防漏，震荡 1 h，通过折叠快速定性滤纸过滤，取 25 mL滤液于 75 mL玻璃蒸发
皿中，置 90 ℃水浴上通风挥干。  
5.2 净化 
5.2.1 液-液分配  
5.2.1.1 谷物：用 50 mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入 100 mL分液漏斗中，再用 20 mL（玉米
试样用 30 mL）甲醇 -水（ 4+1）分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。  
5.2.1.2 谷物制品（ 蛋糕、饼干、面包等）：用 100 mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣，洗入 250 mL
分液漏斗中，再用 30 mL甲醇 -水（ 4+1）分次洗涤蒸发皿，转入同一分液漏斗中。  
振摇分液漏斗 1.5 min，静置约 15 min使分层后，将下层甲醇 -水提取液过柱净化，不要将两相交界
处的白色絮状物放入柱内。  
5.2.2 柱净化  
5.2.2.1 小麦及其制品：在层析柱下端与小管连接处塞约 0.1 g脱脂棉，尽量塞紧，先装入 0.5 g中性氧化
铝，敲平表面，再加 0.4 g活性炭，敲紧。将层析柱下端小管插入一橡皮塞，塞在抽滤瓶上，抽滤瓶中
放一平底管接受过柱液，将抽滤瓶接上 水泵或真空泵，稍稍开启泵，使活性炭压紧，将分液漏斗中的GB xxxx—xxxx  
4 甲醇 -水提取液小心地沿管壁加入柱内，控制流速为每 15 S 18滴～ 20滴（ 3 mL/min），甲醇 -水提取液
过柱快完毕时，加入 10 mL甲醇 -水（ 4+1）淋洗柱，抽滤，直至柱内不再有液体流出。过柱速度控制
在2 mL/min～3 mL/min，速度太快净化效果不好，太慢耗时太长。  
5.2.2.2 玉米：同 5.2.2.1，只是将活性炭的用量改为 0.3 g。 
5.3 制备薄层层析用液  
将过柱后的洗脱液倒入 75 mL玻璃蒸发皿中，用少量甲醇 -水（ 4+1）洗涤平底 管。将蒸发皿置沸
水浴上浓缩至干。  
5.3.1 小麦：趁热加入 3 mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，使充分沸
腾将残渣中的 DON溶出，并将乙酸乙酯挥发至干，再加入 3 mL乙酸乙酯同样处理一次，将溶剂挥干，
最后加 3 mL乙酸乙酯，加热至沸，放冷至室温后转入浓缩瓶中，再用三份 1.5 mL乙酸乙酯洗涤蒸发皿，
并入浓缩瓶中。  
5.3.2 小麦制品、玉米：趁热加入 3 mL乙酸乙酯，加热至沸，在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次，
使充分沸腾，将残渣中的 DON溶出，放冷至室温后转入浓缩瓶中。加约 0.5 mL甲醇 -丙酮（ 1+2）于蒸
发皿中，用玻璃棒搅动溶解残渣，将蒸发皿置于水浴锅上挥干溶剂后，加入 3 mL乙酸乙酯，加热至沸，
转动蒸发皿，使充分沸腾，放冷至室温后转入同一浓缩瓶中，再用 0.5 mL甲醇 -丙酮（ 1+2）和 3 mL乙
酸乙酯同样处理一次，乙酸乙酯提取液并入浓缩瓶中。  
    将浓缩瓶置约 95 ℃水浴锅上，用蒸汽加热吹氮气浓缩至干，放冷至室温后加入 0.2 mL三氯甲烷 -
乙腈（ 4+1）溶解残渣留作薄层层析用。  
5.4 测定 
5.4.1 薄层板的制备： 4 g硅胶  G 加约 9 mL 15% 氯化铝（AlCl 3· 6H 2O）水溶液，研磨约 2 min至呈粘稠
状，铺成 5 cm ×20 cm的薄层板三块，置室温干燥后，于 105 ℃活化 1 h，贮干燥器中备用。  
5.4.2 点样：在每块薄层板上距下端 2.5 cm的基线上点样。  
第一块板：对每一个试样先点第一块薄层板。在距板左边缘 1.8 cm处点 25 μL样液，在距板上端 1.5 
cm处的横线上并与基线试样点相对应的位置上点 2 μL DON标准液（ 50 ng）。按 5.4.3.1条下横展薄层
板，挥干溶剂后再在薄层板上距左边缘 1 cm处的基线上点 2 μL DON标准液（ 50 ng）。  
第二块板：在第一块板上未显荧光的试样则需在第二块薄层板上距左边缘 0.8 cm～1 cm处滴加 25 
μL样液，加 1 μL标准液（ 25 ng），在距左边缘 2 cm处滴加 1 μL标准液（ 25 ng），在距右边缘 1.2 cm处
滴加 2 μL标准液。对阳性试样则进行概略定量：在薄层板上距左边缘 0.8 cm～1 cm处滴加样液点（根
据情况估计滴加量，或稀释后定量），在距板左边缘 2 cm处和在距右边缘 1.2 cm处分别滴加二个标准
点， DON的量可为 50 ng、75 ng、100 ng。再在距板上端 1.5 cm处的横线上点 三个 DON标准点（各约 50 
ng），使之与基线上的三个点相对应。  
5.4.3 展开  
横展剂：乙醚、乙醚 -丙酮（ 95+5）或无水乙醚。任选其中一种，使试样 DON点偏离原点 0.7 cm～
1 cm，刚好与杂质荧光分开。  
纵展剂：三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇（ 8+1+1）；  
        三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇 -水（ 7.5+1+1.5+0.1 ）。  
5.4.3.1 横展：在展开槽内倒入 10 mL横展剂。将点好样的薄层板靠样液点的长边斜浸入溶剂，展至板
端过 1 min～2 min，取出通风挥干 3 min。对小麦制品还须再用 10 mL石油醚（ 30 ℃～60 ℃）横展一次，
展至板端过 1 min，取出通风挥干 5 min。 
5.4.3.2 纵展：在展开槽内倒入 10 mL纵展剂。将横展挥干后的薄层板置展开槽内纵展 15 cm, 取出通风
挥干 10 min。由于 DON与杂质分离的效果受空气湿度影响较大，当板面分离效果不太好时即第一块薄
层板的试样点附近有杂质荧光干扰时，可按极性大小依次换用以下几种展开方式 ： GB xxxx—xxxx  
5 a）  三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇（ 8+1+1）。  
b）  三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇（ 8+1+1）并在展开槽盖内面贴上水饱和的滤纸。  
c）  三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇 -水（ 7.5+1+1.5+0.1 ）。  
d）  三氯甲烷 -丙酮 -异丙醇 -水（ 7.5+1+1.5+0.1 ）并在展开槽盖内面贴上水饱和的滤纸。改换纵展
方式，展开第二块薄层板。如展开槽内极性太大，会使 DON点变偏。  
5.4.4 显荧光：先观察未加热的薄层板可见到显蓝紫荧光的干扰点，这时 DON不显荧光，加热薄层板
后，杂质点仍显荧光，它在 DON荧光点附近，但不干扰 DON。然后将此薄层板置 130 ℃烘箱中加热 7 
min～10 min，取出放在冷的表面上 1 min～5 min后于 365 nm紫外光灯下观 察。  
5.4.5 观察与评定：薄层板经横展后，板上样液点的 DON移动约 0.7 cm～1 cm，正是根据这一点在纵展
后使试样 DON点摆脱了杂质荧光的干扰。 薄层板上端未经纵展的三个 DON标准点可分别作为横展后试
样DON点和二个标准 DON点的横向定位点，试样 DON点又可与纵展后的 DON标准点比较 Rf值而定性，
这样从横向和纵向两个方面确定试样 DON点的位置，达到定性的目的。二个标准 DON点的位置上均无
杂质荧光干扰。  
如在第一块薄层板上样液未显荧光，而在第二块薄层板上 25 μL样液 +25 ng标准所显荧光强度与 25 
ng标准 DON相等，则试样中 DON含量为阴性或 0.05 mg/kg 以下。阳性试样概略定量时，虽然薄层板上
三个 DON点在横展中都稍有移动，但对各点荧光强度无影响，两个标准点均可用于和试样 DON点比较
荧光强度。  
5.4.6 薄层光密度计测定：激发光波长 340 nm、发射光波长 400 nm。在薄层板上标准 DON荧光点至少
在100 ng、200 ng、400 ng时，测得的响应与 DON的量才呈线性关系。对 DON含量在 0.3 mg/kg 以上的
试样才用光密度计测定。当 DON含量在 0.3 mg/kg 时点 20 μL样液使测 得的 DON量落在 100 ng～200 ng
之间，用薄层光密度计测定时每块板上滴加二个标准 DON点， DON标准点的量为 100 ng，200 ng或200 
ng，400 ng，以测得的峰面积值为纵坐标， DON的量为横坐标，绘制标准曲线。  
6 分析结果的表述  
按式（ 1）计算：  
10001000
21
mDVVAX
     ……………….. ………… （1） 
式中：  
X－试样中 DON的含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； 
A—薄层板上测得样液点上  DON的量，单位为微克（ µg）； 
V1—加入三氯甲烷 -乙腈混合液溶解残渣的体积，单位为毫升（ mL）； 
V2—滴加样液的体积，单位为毫升（ mL）； 
D—样液的总稀释倍数；  
m—三氯甲烷 -乙腈混合液溶解残渣相当试样的质量，单位为克（ g）。 
 
第二法  免疫测定法（ ELISA） 
7 原理  
将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗体与待检试样（含有抗原）提
取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物。洗除多余抗体成分，然后加入酶
标记的抗免疫球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体复合物结合，加入酶底物。在GB xxxx—xxxx  
6 酶的催化作用 下，底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，根据
标准曲线计算被测试样中的抗原量。  
8 试剂和材料  
     除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。  
8.1 试剂 
8.1.1 抗体：杂交瘤细胞系 3D7产生的抗 DON的特异性单克隆抗体。  
8.1.2 抗原： DON与载体蛋白 -牛血清白蛋白（ BSA）的结合物（ DON -BSA）。  
8.1.3 牛血清白蛋白（ BSA），四甲基联苯胺，免抗鼠免疫球蛋白与辣根过氧化酶的结合物。  
8.1.4 吐温 -20。 
8.1.5 30%过氧化氢（ H2O2）。  
8.1.6 甲醇（CH 3OH）。 
8.1.7 三氯甲烷 （CHCl 3）。 
8.1.8 石油醚（60 ℃～90 ℃或30 ℃～60 ℃）。 
8.1.9 无水乙醇 （C2H6O）。 
8.1.10乙酸乙酯 （C4H8O2）。 
8.1.11中性氧化铝 （Al2O3）。 
8.1.12活性炭。  
8.2 试剂配制  
8.2.1 包被缓冲液为 pH9.6的碳酸盐缓冲液，配制方法为 ：称取 1.59 g碳酸钠（ Na2CO 3），2.93 g碳酸氢
钠（ NaHCO 3）加水稀释至 1 000 mL。 
8.2.2 洗涤液为含 0.05%吐温 -20的pH7.4的碳酸盐缓冲液（简称 PBS-T），配制方法为：称取磷酸二氢
钾（ KH 2PO 4）0.2 g，磷酸氢二钠（ Na2HPO 4· 12H 2O）2.9 g，氯化钠（ NaCl）8.0 g，氯化钾（ KCl）0.2 
g，吐温 -20 0.5 mL ，加水至 1 000 mL。 
8.2.3 底物缓冲液为 pH5. 0的磷酸 -柠檬酸缓冲液，配制方法为： 0.1 mol/L 柠檬酸（ C6H8O7·H2O），  
即称取柠檬酸 21.0 g，加水至 1 000 mL为甲液。  
8.2.4 0.2 mol/L 磷酸氢二钠（ Na2HPO 4）溶液：即称取磷酸氢二钠 28.4 g，加水至 1000 mL，为乙液；取
甲液 24.3 mL，乙液 25.7 mL，加水至 100 mL，即可。  
8.3 标准溶液 配制 
8.3.1 DON标准储备溶液  
准确称取 DON标准品， 用甲醇配成 1 mg/mL的DON贮备液， -20 ℃冰箱贮存。  
8.3.2 DON标准工作溶液  
于检测当天，精密吸取 DON标准贮备液，用 20%甲醇的 PBS（配制方法同 PBS-T，不加吐温 -20即
可）稀释成制备标准曲线的所需浓度。  
9 仪器  
所用玻璃器皿均用硫酸洗液浸泡，用自来水洗，蒸馏水冲洗。  
9.1 酶标检测仪；  
9.2 酶标微孔板（ 40孔或 96孔）；  
9.3 电动振荡器；  
9.4 电热恒温水浴锅；  GB xxxx—xxxx  
7 9.5 具0.2 mL尾管的 10 mL小浓缩瓶；  
9.6 250 mL分液漏斗。  
10 分析步骤  
10.1 提取 
称20 g粉碎并通过 20目筛的试样， 置 200 mL具塞三角烧瓶中。 加 8 mL水和 100 mL三氯甲烷 -无水乙
醇（ 4+1），在瓶塞上抹一层水盖严防漏。震荡 1 h后，通过快速定性滤纸过滤，取 25 mL滤液于蒸发皿
中，置 90 ℃水浴上通风挥干。用 50 mL石油醚分次溶解蒸发皿中残渣，倒入 250 m L分液漏斗中，再用
20 mL甲醇 -水（ 4+1）分次洗涤，转入同一分液漏斗中，振荡 1.5 min，收下层甲醇 -水提取液过层析柱
净化（层析柱的装备： 在层析柱下端与小管连接处塞约 0.1 g脱脂棉，尽量塞紧，先装入 0.5 g中性氧化
铝，敲平表面，再加 0.4 g活性炭，敲紧）。  
将过柱后的洗脱液倒入蒸发皿中，将蒸发皿置于水浴锅上浓缩至干，趁热加入 3 mL乙酸乙酯，加
热至挥干，再重复一次，最后加 3 mL乙酸乙酯，冷至室温后转入具尾管的 10 mL浓缩瓶中，用适量乙
酸乙酯洗涤蒸发皿，并入浓缩瓶中。将浓缩瓶置 95 ℃水浴锅上 用蒸汽加热，挥干，冷却后用 0.2 mL含
20%甲醇的 PBS定容，共 ELISA检测用。  
10.2 ELISA检测 
10.2.1 用DON -BSA（20 µ g/mL）包被酶标微孔板，每孔 100 µ L，4 ℃过夜。  
10.2.2 酶标板用 PBS-T洗3次，每次 3 min后，加入不同浓度的 DON标准溶液（制作标准曲线）或试样
提取液（检测试样中的毒素含量）与抗体溶液的混合液（ 1+1），每孔 100 µ L，该混合液应于使用的前
一天配好， 4 ℃过夜，备用，置 37 ℃ 1 h。 
10.2.3 酶标板洗 3次，每次 3min后，加入酶标二抗， 每孔 100 µ L，37 ℃ 1.5 h。 
10.2.4 同上述洗涤后，加入酶底物溶液 [即取 5 µ L TMB（10 mgTMB 溶于 1 mL二甲基甲酰胺中）溶液
加10 mL底物缓冲液加 10 µ L  30%过氧化氢，混匀 ]，每孔 100 µ L，37 ℃ 30 min。 
10.2.5 用2 mol/L硫酸溶液终止反应， 每孔 50 µ L，于 450 nm处测定吸光度值。  
11 分析结果的表述  
按式（ 2）计算：  
mDVVcX1
21
   …………… ………… ……（2） 
式中：  
X－DON浓度，单位 为纳克每克（ ng/kg）；         
   c—酶标微孔板上所测得的 DON的含量（根据标准曲线求得） ，单位为纳克（ ng）； 
  V1—试样提取液的体积，单位为毫升（ mL）； 
   V2—加入样液的体积，单位为毫升（ mL）； 
   D—样液的总稀释倍数；  
m—试样质量，单位为克（ g）。 
 
第三法  免疫亲和层析净化高效液相色谱法  
12 原理 GB xxxx—xxxx  
8 用提取液提取试样中的 DON，经免疫亲和柱净化后，用高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定
量。  
13  试剂和材料  
    除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为符 合GB/T 6682 规定的一级水。  
13.1 试剂 
13.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯 。 
13.1.2 乙腈（CH 3CN）：色谱纯 。 
13.1.3 聚乙二醇（相对分子质量 8 000，HO(CH 2CH 2O)nH）。 
13.2 试剂配制  
    PBS清洗缓冲液：称取 8.0 g氯化钠、 1.2 g磷酸氢二钠、 0.2 g磷酸二氢钾、 0.2 g氯化钾，用 990 ml
水将上述试剂溶解，然后用浓盐酸调节 PH至7.0，再用水稀释至 1 L。 
13.3 标准品 
 DON标准品：纯度 ≥98%。 
13.4 标准溶液配制 
13.4.1 DON标准储备液 （0.1 mg/ml ）：准确称取一定量的 DON标准品，用甲醇溶解，配成 0.1 mg/ml
的标准储备液，在 -20 ℃保存，可使用 3个月。  
13.4.2 DON标准工作液：根据使用需要，准确吸取一定量的 DON标准储备液，用流动相稀释，分别配
成相当于 0.1 µ g/mL、0.2 µ g/mL 、0.5 µ g/mL 、1.0 µ g/mL 、2.0 µ g/mL 、5.0 µ g/mL 的标准工作液， 4 ℃保
存，可使用 7天。  
13.5 材料 
13.5.1 DON免疫亲和柱。  
13.5.2玻璃纤维滤纸：直径 11 cm，孔径 1.5 µm。 
14  仪器和设备  
14.1 天平：感量 0.001 g。 
14.2 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。  
14.3 均质器：转速大于 10 000 r/min 。 
14.4 高速万能粉碎机：转速 10 000 r/min 。 
14.5 玻璃注射器： 10 mL。 
14.6 试验筛： 1 mm孔径。  
14.7 空气压力泵。  
15  分析步骤  
15.1 试样制备与提取  
15.1.1 粮食和粮食制品：将样品研磨，硬质的粮食等用高速 万能粉碎机磨细并通过试验筛（ 14.6），
不要磨成粉末。称 取25 g（精确到 0.01 g）磨碎的试样于 100 mL容量瓶中加入 5 g聚乙二醇（ 13.1.3），
用水定容至刻度，混匀，转移至均质杯中，高速搅拌 2 min。定量滤纸过滤后以玻璃纤维滤纸过滤至滤
液澄清，收集滤液 A于干净的容器中。  GB xxxx—xxxx  
9 15.1.2 酒类：取脱气酒类试样（含二氧化碳的酒类样品使用前先置于 4 ℃冰箱冷藏 30 min，过滤或超
声脱气）或其他不 含二氧化碳的酒类试样 20 g（精确到 0.01 g），加入 1 g聚乙二醇（ 13.1.3），用水定
容至 25.0 mL，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液 B于干净的容器中。  
15.1.3 酱油、醋 、酱及酱制品中： 称取 25 g（精确到 0.01 g），加入 5 g聚乙二醇（ 13.1.3），用水定容
至100.0 mL ，高速搅拌提取 2 min。定量滤纸过滤后，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液 C于
干净的容器中。  
15.2 净化   
将免疫亲和柱连接于玻璃注射器（ 14.5）下，准确移取 15.1中滤液  A 或 B 或 C 2.0 mL，注入玻
璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约 1 滴/S的流速通过免疫亲和
柱，直至空气进入亲和柱中。用 5 mL P BS清洗缓冲液（ 13.2）和 5 mL水先后淋洗免疫亲和柱，流速约
为1 滴/S～2 滴/S，直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。  
15.3 洗脱 
准确加入 1.0 mL甲醇洗脱， 流速约为 1 滴/S，收集全部洗脱液于干净的玻璃试管中， HPLC测定。  
15.4 高效液相色谱参考条件  
a) 色谱柱： C18柱， 5 µm，150 mm× 4.6 mm 或相当者；  
b) 流动相：甲醇 +水（ 20+80）；  
c) 流速： 0.8 mL/min ； 
d) 柱温： 35 ℃； 
e) 进样量： 50 µ L； 
f) 检测波长： 218 nm。 
15.5 定量测定  
以DON标准工作液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲
线对试样进行定量，标准工作溶液和试样溶液中 DON的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色
谱条件下， DON标准品色谱图参见图 A.1。 
15.6 空白试验  
除不加试样外，空白试验应与测定平行进行，并采用相同的分析步骤。  
15.7 平行试验 
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。  
16  分析结果的表述  
试样中 DON的含量按式（ 3）计算：  
                               
fmV ccX 10001000 ) (0 1  …………………………… （3） 
式中：  
X— 试样中 DON的含量， 单位为毫克每千克（ mg/kg）； 
c1—试样溶液中 DON的浓度，单位为微克每毫升（ µ g/mL）； 
c0—空白试样溶液中 DON的浓度，单位为微克每毫升（ µ g/mL）； 
V—甲醇洗脱液体积， 单位为毫升（ mL）； 
m—试样的质量，单位为 克（ g）； 
f—稀释倍数。  GB xxxx—xxxx  
10     检测结果以两次测定值的算数平均值表示。计算结果表示到小数点后 1位。  
 GB xxxx—xxxx  
11 附  录 A 
    （资料性附录）  
第三法中DON的液相色谱图  
 
图 A.1 DON的液相色谱图