Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
SECRETARIA DE SALUD  
PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY -NOM -131-SSA1-2011, Productos y servicios. Fórmulas de inicio, 
continuación y para necesidades especiales de nutrición. Alimentos y bebidas no alcohólicas para lactantes y niños 
de corta edad. Disposiciones y especificaciones sanitarias y nutrimentales. Etiquetado y  métodos de prueba  
(Continúa en la Tercera Sección)  
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. - Secretaría de Salud.  
MIKEL ANDONI ARRIOLA PEÑALOSA, Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos 
Sanitarios y Presi dente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, 
con fundamento en lo dispuesto por el artículo 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 4 
de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 3 fracc ión XXII, 17 Bis fracción III,  115 fracciones IV y VI, 
194 fracción I, 195, 199, 210, 212, 215 fracciones I, II, III y IV y 216 de la Ley General de Salud; 3 fracción XI, 
38 fracción II, 40 fracciones I, XI y XII, 41, 43, 47 fracción I, 51 y 52 de la Ley F ederal sobre Metrología y 
Normalización; 28 y 33 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 1 fracción XII, 25, 
137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 y 151 del Reglamento Control Sanitario 
de Productos  y Servicios; 2 inciso C fracción X y 36 del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud; 3 
fracciones I incisos c, d y l, y II, 10 fracciones IV y VIII del Reglamento de la Comisión Federal para la 
Protección contra Riesgos Sanitarios, tengo a bien  ordenar la publicación en el Diario Oficial de la Federación 
del Proyecto de Norma Oficial Mexicana  PROY -NOM -131-SSA1 -2011, Productos y servicios. Fórmulas de 
inicio, continuación y para necesidades especiales de nutrición. Alimentos y bebidas no alcohólicas p ara 
lactantes y niños de corta edad. Disposiciones y especificaciones sanitarias y nutrimentales. Etiquetado y 
Métodos de prueba.  
El presente Proyecto se publica a efecto de que los interesados, dentro de los siguientes sesenta días 
naturales, contados a p artir de la fecha de su publicación, presenten sus comentarios por escrito y con el 
sustento técnico suficiente ante el Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento 
Sanitario, sito en Monterrey número 33, planta baja, colonia Roma, c ódigo postal 06700, México, D.F., 
teléfono 50805200, extensión 1333, correo electrónico rfs@cofepris.gob.mx.  
Durante el plazo mencionado, los documentos que sirvieron de base para la elaboración del Proyecto así 
como la Manifestación de Impacto Regulatorio  (MIR), estarán a disposición del público para su consulta en el 
domicilio del Comité.  
INDICE  
1. Objetivo y campo de aplicaci ón 
2. Referencias  
3. Definiciones  
4. Símbolos y abreviaturas  
5. Clasificaci ón 
6. Disposiciones sanitarias generales  
7. Disposicione s sanitarias para f órmulas o preparados  
8. Disposiciones sanitarias para alimentos y bebidas no alcoh ólicas para lactantes y niños de corta 
edad  
9. Muestreo y m étodos de prueba  
10. Etiquetado  
11. Envase y embalaje  
12. Concordancia con normas internacionale s 
13. Bibliograf ía 
14. Observancia de la norma  
15. Vigencia  
 Apéndices normativos  
 “A” Aditivos        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
 “B” Fuentes de vitaminas y minerales  
 “C” Métodos de prueba  
PREFACIO  
En la elaboración de la presente norma participaron los siguientes organismos e institucio nes: 
Secretaría de Salud.  
Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios.  
Centro Nacional de Equidad de Género y Salud Reproductiva.  
Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición “Salvador Zubirán”.  
Instituto Nacional de Pediatría.  
Instituto Nacional de Perinatología.  
Procuraduría Federal del Consumidor.  
Sistema para el Desarrollo Integral de la Familia del Distrito Federal.  
Instituto Politécnico Nacional.  
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas.  
Escuela de Dietética y Nutrición del ISSS TE. 
Cámara Nacional de Industriales de la Leche (CANILEC).  
Abbott Laboratories de México, S.A. de C.V.  
Asociación Pro Lactancia Materna.  
Bayer de México, S.A. de C.V.  
Bristol Myers Squibb de México, S. de R.L. de C.V.  
Grupo DANONE.  
Mead Johnson & Company. Nutricionales de México, S. de R.L. de C.V.  
Nestlé México, S.A. C.V.  
PBM Products México, S. de R.L. de C.V.  
Productos Gerber, S.A. de C.V.  
Vázquez Tercero y Asociados, S.C.  
Wyeth, S.A de C.V.  
1. Objetivo y campo de aplicaci ón 
1.1 Esta norma establece las disposiciones y especificaciones sanitarias, nutrimentales y de etiquetado 
que deben cumplir:  
● las fórmulas de inicio, sucedáneos de la leche materna,  
● las fórmulas de continuación,  
● las fórmulas para necesidades especiales de nutrición, y  
● los alimentos y bebidas no alcohólicas para lactantes y niños de corta edad  
Así como los métodos de prueb a. 
1.2 Esta norma es de observancia obligatoria para las personas físicas y morales que se dedican al 
proceso y/o importación de los productos objeto de la misma, que van a ser comercializados en el territorio 
nacional.  
2. Referencias  
Esta norma se complem enta con las siguientes Normas Oficiales Mexicanas, sus modificaciones o las que 
las sustituyen:  
2.1 Norma Ofi cial Mexicana NOM -007-SSA2 -1993,  Atención de la mujer durante el embarazo, parto y 
puerperio y del recién nacido. Criterios y procedimientos para la prestación del servicio.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
2.2 Norma Oficial Mexicana NOM -051-SCFI/SSA1 -2010,  Especificaciones generales de etiquetado para 
alimentos y bebidas no alcohólicas preenvasados. Información comercial y sanitaria.  
2.3 Norma Oficial Mexicana NOM -086-SSA1 -1994, B ienes y servicios. Alimentos y bebidas no alcohólicas 
con modificaciones en su composición. Especificaciones nutrimentales.  
2.4 Norma Ofi cial Mexicana NOM -130-SSA1 -1995,  Bienes y Servicios. Alimentos envasados en 
recipientes de cierre hermético y sometidos  a tratamiento térmico. Disposiciones y especificaciones sanitarias.  
2.5 Norma Ofi cial Mexicana NOM -251-SSA1 -2009,  Prácticas de higiene  para el proceso de alimentos, 
bebidas o suplementos alimenticios.  
3. Definiciones  
Para fines de esta norma se entiende p or: 
3.1. Ablactación , a la incorporación a la dieta del lactante de alimentos distintos a la leche materna o su 
sucedáneo, realizándose gradual y progresivamente a partir de los 6 meses de edad o de acuerdo a las 
necesidades específicas de cada lactante.  
3.2. Acidos grasos trans, a todos los  isómeros geométricos de ácidos grasos monoinsaturados y 
poliinsaturados que poseen en la configuración trans dobles enlaces carbono -carbono no conjugados.  
3.3. Aditivo, a cualquier substancia permitida que, sin tener pr opiedades nutritivas, se incluya en la 
formulación de los productos y que actúe como estabilizante, conservador o modificador de sus características 
organolépticas, para favorecer ya sea su estabilidad, conservación, apariencia o aceptabilidad.  
3.4. Agua p ara uso y consumo humano (agua potable), al agua que no contiene contaminantes 
objetables, químicos o agentes infecciosos y que no causa efectos nocivos para la salud.  
3.5. Alimento, a cualquier sustancia o producto, sólido, semisólido, natural o transform ado, que 
proporciona al organismo elementos para su nutrición.  
3.6. Alimentos  a base de cereales para lactantes y niños de corta edad , a los productos elaborados 
principalmente con uno o más cereales molidos, que constituirán al menos el 25 % de la mezcla final en base 
seca, adicionados o no de otros ingredientes, destinados a complementar la dieta de los lactantes a partir de 
los seis meses en adelante y para los niños de corta edad como parte de una dieta progresivamente 
diversificada.  
3.7. Alimentos desh idratados, aquellos en los que se ha eliminado agua por medios físicos a fin de evitar 
su descomposición y son reconstituidos mediante dilución, no incluye los alimentos a base de cereales.  
3.8. Alimentos y bebidas no alcohólicas preparados para ser admini strados directamente , a los 
sometidos a tratamiento térmico antes o después de ser envasados en recipientes herméticamente cerrados, 
los cuales deben ser comercialmente estériles . 
3.9. Alimentos y bebidas no alcohólicas para lactantes y niños de corta edad , zona los productos  
industrializados que se utilizan principalmente durante el período normal de ablactación de los lactantes o en 
la alimentación de los niños de corta edad. Se preparan para ser administrados directamente o deshidratados 
para ser reconst ituidos.  
3.10. Bajo peso al nacer , el que se refiere a un lactante que pesa al nacimiento menos de 2500 g.  
3.11. Contaminante , a cualquier agente biológico o químico, materia extraña u otras sustancias no 
añadidas intencionalmente a los alimentos y bebidas , que puedan comprometer la inocuidad o la aptitud de 
los alimentos.  
3.12. Chupón , al objeto de goma o plástico con forma de pezón que se les da a los bebés para que 
succione n la leche.  
3.13. Declaración de propiedades, a cualquier texto o representación q ue afirme, sugiera o implique que 
un alimento o bebida no alcohólica preenvasado tiene cualidades especiales por su origen, propiedades 
nutrimentales, naturaleza, elaboración, composición u otra cualidad cualquiera, excepto la marca del producto 
y el nombr e de los ingredientes.  
3.14. Declaración nutrimental, a la relación  o enumeración del contenido  de nutrimentos de un alimento 
o bebida no alcohólica preenvasado.  
3.15. Destete, a la suspensión de la lactancia al pecho.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
3.16. Envase , a cualquier recipiente o envoltura en el cual está contenido el producto preenvasado para 
su venta al consumidor.  
3.17. Etiqueta, a cualquier rótulo, marbete, inscripción, imagen u otra materia descriptiva o gráfica, escrita, 
impresa, estarcida, marcada, grabada en alto o bajo r elieve, adherida, sobrepuesta o fijada al envase del 
producto preenvasado o, cuando no sea posible por las características del producto, al embalaje.  
3.18. Fórmula o preparado de inicio, al sucedáneo de la leche materna especialmente fabricado para 
satisfa cer, por sí  solo, las necesidades nutricionales de los lactantes durante sus primeros meses de vida 
hasta la introducción  de la alimentación complementaria correspondiente.  
3.19. Fórmula o preparado de continuación , al alimento destinado a ser utilizado co mo componente 
líquido de la dieta de destete del lactante a partir del sexto mes y para niños de corta edad.  
3.20. Fórmula o preparado para necesidades especiales de nutrición,  al sucedáneo de la leche 
materna o de la fórmula, especialmente preparado para satisfacer, por sí  mismo o en combinación con la 
leche materna o fórmula de inicio o la fórmula de continuación, las necesidades nutricionales especiales de 
lactantes o niños de corta edad con trastornos, enfermedades o condiciones médicas específicas, inc luidos 
los fortificadores de leche.  
3.21. Fortificador de leche materna, al producto que puede añadirse a la leche humana para 
proporcionar nutrimentos adicionales en la alimentación de los lactantes con peso bajo y/o muy bajo peso al 
nacer y recién nacido s pretérmino.  
3.22. Inocuo , lo que no hace o causa daño a la salud.  
3.23. Información nutrimental, a toda descripción destinada a informar al consumidor sobre las 
propiedades nutrimentales de un alimento o bebida no alcohólica preenvasado. Comprende dos as pectos:  
● La declaración nutrimental obligatoria.  
● La declaración nutrimental complementaria.  
3.24. Lactantes , a los niños hasta los doce meses de edad.  
3.25. Leche materna, a secreción producida por las glándulas mamarias después del calostro y cuya 
función es a limentar al lactante. Esta leche contiene todos los nutrimentos que el lactante requiere para su 
crecimiento y desarrollo en los primeros meses de vida y le proporciona los anticuerpos o sustancias que lo 
protegen de las infecciones.  
3.26. Límite , a la can tidad establecida de nutrimentos, aditivos, microorganismos, materia extraña, 
plaguicidas, biotoxinas, residuos de medicamentos y metales pesados.  
3.27. Limpieza,  a la acción que tiene por objeto quitar la suciedad.  
3.28. Materia extraña , aquella sustancia , resto o desecho orgánico o inorgánico, que se presenta en el 
producto sea por contaminación o por manejo poco higiénico del mismo durante su elaboración, distribución y 
comercialización que resultan perjudiciales para la salud.  
3.29. Metal pesado o metal oide,  aquellos elementos químicos que causan efectos i ndeseables en el 
metabolismo, au n en concentraciones bajas. Su toxicidad depende de la dosis en que se ingieren, así como, 
de su acumulación en el organismo.  
3.30. Métodos de prueba , a procedimientos an alíticos utilizados en el laboratorio para comprobar que un 
producto satisface las especificaciones que establece la norma.  
3.31. Niños de corta edad , a los mayores de doce meses y hasta los treinta y seis meses de edad.  
3.32. Nivel superior de referencia , al que se aplica a los nutrientes sobre los que no se dispone de 
suficiente información para realizar una evaluación de riesgos basada en conocimientos científicos, dichos 
niveles son valores derivados considerando las necesidades nutricionales de los lac tantes y un historial 
establecido de uso aparente inocuo. Pueden ajustarse de acuerdo con los progresos científicos y tecnológicos 
pertinentes. La finalidad de un nivel superior de referencia es proporcionar orientaci ón a los fabricantes y no 
deberá n inter pretarse como valores deseables.  
3.33. Prácticas de higiene, a las medidas necesarias para garantizar la inocuidad de los productos.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
3.34. Proceso , al conjunto de actividades relativas a la obtención, elaboración, fabricación, preparación, 
conservación, me zclado, acondicionamiento, envasado, manipulación, transporte, distribución, 
almacenamiento y expendio o suministro al público de productos.  
3.35. Recién nacido pretérmino , al producto de la concepción menor a 37 semanas. Cuando no se 
conoce la edad gestac ional, se considerará así a un producto que pese menos de 2,500 gramos.  
4. Símbolos y abreviaturas  
Cuando en esta norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas se entiende por:  
A absorbancia  
ARA ácido araquidónico  
BPF buenas prácticas d e fabricación  
°C grados Celsius  
cm centímetro  
cm2 centímetro cuadrado  
DHA  ácido docosahexanoico  
EPA ácido eicosapentanoico  
g gramo  
h hora 
IDR ingesta diaria recomendada  
IDS ingesta diaria sugerida  
kcal kilocalorías  
kg kilogramo  
kJ kilojoules  
l litro 
L levógiro 
m masa  
mg miligramo  
min minutos  
ml mililitro  
mM milimolar  
mm milímetro  
m/m masa masa  
mOsm  miliosmol  
mv milivolt  
M molar  
N normal  
N.A. no aplica  
ng nanogramo  
nm nanómetro  
NMP  número más probable  
No número  
NSR  Nivel Superior de Referencia        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
pH potencial d e hidrógeno  
REP Relación de Eficiencia Proteica  
rpm revoluciones por minuto  
S.E. sin especificar  
T transmitancia  
UFC unidades formadoras de colonias  
U.I. unidad internacional  
µg microgramo  
µm micrómetro  
VNR  valores nutrimentales de referencia  
v/v volumen a  volumen  
/ por 
% por ciento  
NaCl  Cloruro de sodio  
≤ menor o igual  
> mayor que  
< menor que  
eq equivalente  
oz onza  
Cuando en esta Norma se mencionen los siguientes términos, debe entenderse:  
Acuerdo , el “Acuerdo por el que se determinan las sustancias permitidas como aditivos y coadyuvantes 
en alimentos, be bidas y suplementos alimenticios”.  
CICOPLAFEST , la Comisión Intersecretarial para el Control del Proceso y uso de Plaguicidas, Fertilizantes 
y Sustancias Tóxicas.  
Fórmula , las fórmulas o preparados.  
Productos, los regulados por este ordenamiento, según cor responda.  
Reglamento , el Reglamento de Control Sanitario de Productos y Servicios.  
Secretaría,  la Secretaría de Salud.  
5. Clasificaci ón 
Los productos se clasifican en:  
5.1 Fórmulas:  
5.1.1  De inicio, sucedáneos de la leche materna  
5.1.2  De continuación: par a lactantes y para niños de corta edad  
5.1.3  Para necesidades especiales de nutrición,  
5.2 Alimentos y bebidas no alcohólicas para lactantes y niños de corta edad:  
5.2.1  A base de cereales:  
5.2.1.1  Cereales que deben ser preparados para el consumo añadiend o leche u otros líquidos  nutritivos 
idóneos.  
5.2.1.2  Cereales que deberán utilizarse después de ser cocidos en agua hirviendo u otros líquidos 
apropiados,  incluidas las pastas.  
5.2.1.3  Galletas y otros productos de panificación  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
5.2.2  Listos para consumo  
5.2.3 Deshidratados.  
6. Disposiciones sanitarias generales  
Los establecimientos que se dediquen al proceso de los productos objeto de esta norma, deben:  
6.1 Cumplir con lo establecido en la Norma Oficial Mexicana  NOM -251-SSA1 -2009, señalada en el 
apartado de  referencias y para los productos importados lo correspondiente de esta norma.  
6.2 Instrumentar un plan de análisis de peligros y puntos críticos de control de conformidad con lo 
establecido en el Apéndice A de la Norma Oficial Mexicana NOM -251-SSA1 -2009, señalada en el apartado  de 
referencias.  
6.3 Los productos y materias primas utilizadas en su elaboración deben cumplir con lo establecido en el 
Reglamento, l as materias primas además:  
6.3.1 Deben estar limpias y ser inocuas.  
6.3.2 No deben exceder los lími tes máximos residuales de plaguicidas establecidos en el Catálogo Oficial 
de Plaguicidas de la CICOPLAFEST, ni contener cualquiera de los plaguicidas prohibidos en dicho catálogo, 
según corresponda por la naturaleza de la materia prima.  
6.3.3  Cumplir con l as normas oficiales mexicanas correspondientes.  
6.4 Los productos y las materias primas que se utilicen en su elaboración no deben ser tratados con 
radiaciones ionizantes.  
6.5 Todos los procedimientos de elaboración y de desecación de los productos se debe n llevar a cabo de 
manera que la pérdida de nutrimentos en los productos sea mínima, y se garanticen las cantidades de éstos 
que se declaran en la etiqueta.  
6.6 Los productos no deben contener residuos de hormonas, antibióticos y otros contaminantes o 
sustancias farmacológicamente activas.  
6.7 Los productos no podrán ser adicionados con flúor.  
6.8 El responsable del producto debe contar con la evidencia documental que demuestre que cumple con 
las especificaciones establecidas en esta norma, para cada produc to que elabore o comercialice.  
6.9 En la elaboración de los productos sólo se permite el uso de los aditivos señala dos en el Apéndice 
Normativo A.  
6.10 El responsable de la fabricación del producto debe disponer de:  
6.10.1  Medios tecnológicos y procedimien tos de elaboración que permitan la incorporación de los 
nutrimentos en forma satisfactoria, y  
6.10.2  Métodos de medición y control de las concentraciones de los nutrimentos añadidos a los productos.  
6.11 Los productos no podrán usar como ingrediente aceite s o grasas hidrogenadas comercialmente.  
7. Disposiciones sanitarias para las f órmulas o preparados  
7.1 Los responsables del expendio o suministro al público de fórmulas deben cumplir con el Código 
Internacional de Comercialización de Sucedáneos de la Leche  Materna y Resoluciones Posteriores de la 
Organización Mundial de la Salud.  
7.2 En las unidades médicas, no se permite la distribución gratuita ni la promoción de fórmulas de inicio 
sucedáneos de leche materna directamente a las madres, queda sujeta la ent rega y/o indicación de fórmulas 
de inicio para menores de cuatro meses únicamente bajo prescripción médica y con justificación por escrito en 
las unidades de atención del parto y en las de consulta externa.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
7.3 En las unidades médicas, guarderías o cualqui er otro establecimiento similar en donde se preparan o 
administran fórmulas, los responsables de su preparación deben seguir al pie de la letra las indicaciones 
sugeridas por el fabricante, en la reconstitución y conservación de la misma.  
7.4 Las fórmulas deben ser preparadas a base de leche de vaca o de otros animales o de mezclas de ellos 
y/o de otros ingredientes que se haya demostrado científicamente que son idóneos para la alimentación del 
grupo de edad al que van dirigidas y elaboradas de tal manera q ue eviten su deterioro o contaminación en 
todas las condiciones normales de manipulación, conservación y distribución.  
7.5 Una vez preparada según las instrucciones de uso dadas en la etiqueta, la fórmula estará exenta de 
grumos o partículas gruesas, para que pueda ser administrada mediante un chupón de goma o de plástico.  
7.6 Especificaciones  
7.6.1 Microbiológicas:  
Tabla No. 1 Fórmulas o preparado en polvo  
ESPECIFICACI ON LIMITE M AXIMO  
Mesofílicos aerobios  5 000 UFC/g  
Salmonella  spp en 25g  Ausente  
Entero bacteriaceas en 10 g  0 NMP  
Escherichia  coli Negativo  
Enterobacter sakazakii** ( especie de  Cronobacter)  Ausente en 300 g  
* No aplica para aquellos productos que contienen cultivos productores de ácido 
lácticos en su formulación.  
**Sólo aplica a fórmulas para lactantes y para necesidades especiales de nutrición en 
polvo, cuando se detecte presencia de enterobacterias.  
Tabla No. 2 Fórmulas líquidas  
Especificación  Límite máximo  
Mesofílicos anaerobios  Negativo  
Mesofílicos aerobios  Negativo  
Termofílicos ana erobios  Negativo  
Termofílicos aerobios  Negativo  
 
7.6.2 Fisicoquímicos  
7.6.2.1  Metales pesados o metaloides  
Tabla No. 3  
Especificaciones  Límite máximo (mg/kg)  
Arsénico (As)  0,10 
Mercurio (Hg)  0,05 
Plomo (Pb)  0,02*  
* Límite establecido para producto li sto para su consumo  
7.6.2.2  Materia extraña. Las fórmulas deben estar exentas de materia extraña.  
7.6.3 Nutrimentales  
7.6.3.1  Contenido energético  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
7.6.3.1.1  Las fórmulas de inicio deben proporcionar no menos de 60 kcal  (o 250 kJ) y no más de 70 kcal  (o 
295 kJ) por 100 ml del producto listo para el consumo, comercializado tal cual o reconstituido según las 
instrucciones del fabricante.  
7.6.3.1.2  Las fórmulas de continuación deben proporcionar no menos de  60 kcal (o 250 kJ) y no más de  85 
kcal (o 295 kJ) por 100 ml del producto listo para el consumo, comercializado tal cual o reconstituido según las 
instrucciones del fabricante.  
7.6.3.2  Vitaminas y minerales  
7.6.3.2.1 Las vitaminas y nutrimentos inorgánicos (minerales) que se adicionen a las fórmulas debe 
hace rse bajo las formas que se señalan  en el Apéndice Normativo B.  
7.6.3.2.2  Las fórmulas deben contener las siguientes vitaminas dentro de los límites que se señalan  a 
continuación,  
Tabla No. 4  
Vitaminas  Fórmulas de inicio y para necesidades 
especiales de nut rición  Fórmulas de continuación  
Mínimo/100 kcal  Máximo/100 kcal  NSR/  100 
kcal Mínimo/100 kcal  Máximo/100 kcal  
Vitamina A  250 U.I. o 60 g 
expresados en 
retinol  600 U.I. o 180 g 
expresados en 
retinol  - 250 U.I. o 75 g 
expresados en 
retinol  750 U.I. o 225 g 
expresados en 
retinol  
Vitamina D  1 g o 40 U.I.  2,5 g o 100 U.I  - 40 U.I. o 1 g 120 U.I. o 3 g 
Vitamina C  (Ac. 
Ascórbico)  10 mg  S.E. 70 mg(1) 8 mg  S.E. 
Tiamina (B 1) 60 g S.E. 300 g 40 g S.E. 
Riboflavina (B 2) 80 g S.E. 500 g 60 g S.E. 
Niacina (B 3) 300 g S.E. 1500 g 250 g S.E. 
Piridoxina (B 6) 35 g(2) S.E. 175 g 45 g(2) S.E. 
Acido Fólico (B 9) 10 g S.E. 50 g 4 g S.E. 
Acido Pantoténico (B 5) 400 g S.E. 2000 g 300 g S.E. 
Cianocobalamina (B 12) 0,1 g S.E. 1,5 g 0,15 g S.E. 
Vitamina K  4 g  S.E. 27 g 4 g S.E. 
Biotina (H)  1,5 g S.E. 10 g 1,5 g S.E. 
Vitamina E  (alfa 
tocoferol)  0.5 mg de alfa 
tocoferol/g de 
ácidos grasos 
poliinsaturados  (3) S.E. 5 0,7 U.I./g de ácido 
linoleico o por 
gramo de ácidos 
grasos 
poliinsaturados 
expresados en 
ácido linoleico 
pero en ningún 
caso menos de 
0,7 U.I. por 100 
kcal utilizables  S.E. 
1) En el caso de productos en polvo deberí a procurarse conseguir NSR más bajos.  
2) Las fórmulas que contengan más de 1,8 g de proteínas por cada 100 kcal contendrán, como mínimo  15 
g de vitamina B 6/g de proteína  
3) Aplicando los siguiente factores de equivalencia para adaptar el contenido mínimo de vitamina E al 
número de dobles enlaces de ácidos grasos en el preparado:0.5 mg de alfa  tocoferol/1g de ác. linoleico;  0.75 
mg de alfa to coferol/1g de ácido alfa linolenico; 1 mg de alfa tocoferol/1g de ARA;  1,25 mg de alfa tocoferol/1g 
de EPA;  1,5 mg alfa tocoferol/1g de DHA.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
7.6.3.2.3  Las fórmulas deben contener los siguientes nutrimentos inorgánicos (minerales) dentro de los 
límites que se señalan a continuación:  
Tabla No. 5  
Nutrimentos 
inorgánicos 
(minerales)  Fórmula de inicio y para necesidades  especiales de 
nutrición  Fórmula de continuación  
Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 Kcal  NSR/100 kcal  Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal  
Sodio (Na)  20 mg  60 mg  --- 20 mg  85 mg  
Potasio (K)  60 mg  180 mg  --- 80 mg  S.E. 
Cloro (Cl)  50 mg  160 mg  ---- 55 mg  S.E 
Calcio (Ca)  50 mg(1) S.E. 140 mg(1) 90 mg  S.E. 
Fósforo (P)  25 mg(1) S.E. 100 mg(1,2) 60 mg  S.E. 
Magnesio (Mg)  5 mg  S.E. 15 mg  6 mg  S.E. 
Hierro (Fe)  0,45 mg  S.E. S.E. 1 mg(2) 2 mg(2) 
Yodo (I)  10 g S.E. 60 g 5 g  S.E. 
Cobre (Cu)  35 g(3) S.E. 120 g(3) --- --- 
Cinc (Zn)  0,5 mg  S.E. 1,5 mg  0,5 mg  S.E. 
Manganeso (Mn)  1,0 g S.E. 100 g --- --- 
Selenio  1 g S.E. 9 g --- --- 
1) La relación Ca:P no será menor de 1,1 ni mayor de 2,1.  
2) Este lí mite debe ajustarse en razón de necesidades más altas en el caso de las fórmulas a base de soya.  
3) En los lugares con suministro hídrico con elevado contenido de cobre es necesario ajustar estos niveles.  
7.6.3.2.4  El contenido de nutrimentos en las fórmul as de inicio no debería por lo general superar los NSR a 
menos que no puedan evitarse niveles de nutrimentos más elevados debido a su contenido alto o variable en 
los ingredientes de las fórmulas o debido a razones técnicas. Cuando un tipo o forma de produ cto ha 
contenido normalmente niveles inferiores a los NSR los fabricantes no deberían aumentar los niveles de 
nutrimentos a fin de aproximarse a los NSR.  
7.6.3.2.5  Las fórmulas para necesidades especiales de nutrición se ajustarán a las disposiciones 
estab lecidas en los numerales 7.6.3.1, 7.6.3.2, 7.6.3.3, 7.6.3.4 y 7.6.3.5, excepto en determinadas 
especificaciones sobre la composición, que deberá modificarse para satisfacer los requerimientos 
nutrimentales especiales consecuentes al trastorno, condiciones médicas específicas o afección para cuyo 
tratamiento dietético se haya formulado, etiquetado y presentado cada tipo de fórmula.  
7.6.3.2.6  Además de los requisitos estipulados en el numeral 7.6.3.2.5, las fórmulas para necesidades 
especiales destinadas a re cién nacidos pretérmino deben cumplir con las especificaciones nutrimen tales 
señaladas en las tablas No s. 4 y 5 a excepción de las siguientes vitaminas.  
Tabla No. 6  
Vitamina  Límite máximo  
Vitamina A  550 g/100 kcal  
Vitamina D  333 UI/100 kcal o 8,5 g calciferol  
Vitamina E  8 mg/100 kcal  
 
7.6.3.2.7  Las fórmulas de inicio y para necesidades especiales de nutrición podrán adicionar además:  
Tabla No. 7  
Nutrimento  Fórmulas de inicio y para necesidades especi ales Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
de nutrición  
Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal NSR/100 kcal  
Colina  7 mg  S.E 50 mg  
Mioinositol  4 mg  S.E 40 mg  
L-carnitina  1,2 mg  S.E. - 
Taurina  - 12 mg  - 
DHA*  - S.E 0,5% de los 
ácidos grasos  
Nucleótidos  1,9 mg  16 mg  - 
* si se añade, el contenido  de ARA y EPA deberá ser al menos el mismo.  
7.6.3.2.8  Además, las fórmulas para necesidades especiales de nutrición podrán adicionar los nutrimentos 
siguientes en los límites señalados.  
Tabla No. 8  
Nutrimento  Fórmulas para  necesidades especiales de nutrici ón 
Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal  NSR/100 kcal  
Cromo (Cr)  1,5 g S.E 10 g 
Molibdeno (Mo)  1,5 g S.E 10 g 
 
7.6.3.2.9 Adicional a lo establecido en el numeral 7.6.3.2.3, las fórmulas elaboradas a partir de aislados de 
proteína de soya solos o mezclad os con las proteínas de la leche de vaca, deben de cumplir con los límites 
establecidos en la Tabla N o. 5 a excepción de los establecidos para el hierro y el fósforo, en cuyos casos; se 
debe cumplir con lo siguiente:  
Tabla No. 9  
Nutrimento  Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal  
Hierro (Fe) mg  0,45 2,0 
Fósforo (P) mg  30 100 
 
7.6.3.3 Proteínas  
7.6.3.3.1  Las fórmulas de acuerdo a su fuente de proteína se sujetarán a los siguientes límites.  
Tabla No. 10  
Fuente de proteína  Fórmulas de inicio  Fórmulas de continuaci ón 
Mín g/100 kcal 
utilizables  Máx g/100 kcal 
utilizables  Mín g/100 kcal 
utilizables  Máx g/100 kcal 
utilizables  
a) Leche de vaca  
b) Hidrolizados de proteína  
c) Aislados de proteína de 
soya sola o mezclada con 
proteínas de leche de vaca.  1,8 
2,25 
2,25 3 
3 
3 3,0 
2,25 
2,25 5,5 
S.E. 
S.E. 
 
7.6.3.3.2  La calidad nutritiva de las proteínas deberá determinarse empleando el método de la REP.  
7.6.3.3.3  La calidad de la proteína no debe ser inferior al 85% de la calidad de la caseína.  
7.6.3.3.4  Para mejorar la calid ad nutritiva de las proteínas, podrán añadirse aminoácidos esenciales, 
únicamente en las cantidades estrictamente necesarias, los cuales deben ser en su forma natural L, de 
acuerdo a lo que se indica en la tabla No . B.3 del Apéndice normativo B.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
7.6.3.4  Acidos grasos y lípidos o grasas . 
7.6.3.4.1  El contenido de lípidos o grasas y ácidos grasos en las fórmulas deben cumplir con lo establecido 
en la tabla No . 11. 
Tabla No. 11  
Nutrimento  Fórmulas de inicio y para necesidades 
especiales de nutrición  Fórmulas d e continuación  
Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal  Mínimo/ 100 kcal  Máximo/ 100 kcal  
Grasas  4,4 g  6 g 3 g 6 g 
Acido linole ico  300 mg  1400 NSR  300 mg  S.E. 
Acido alfa -linole nico 50 mg  S.E. 50 mg  S.E. 
La proporción de ácido linol eico/alfa -linole nico mínimo 5:1, máximo 15:1  
7.6.3.4.2  El contenido de ácidos grasos trans no será superior al 3% del contenido total de materia grasa.  
7.6.3.5  Hidratos de carbono.  
7.6.3.5 .1 El contenido mínimo de hidratos de carbono  totales debe ser de 9,0 g/100kcal y máximo de  14,0 
g/100Kcal.  
7.6.3.5. 2 La lactosa y glucosa deben ser los carbohidratos preferidos para las fórmulas a base de 
proteínas de la leche de vaca y de proteínas hidrolizadas.  
7.6.3.5 .3 Sólo podrán añadirse almidones naturalmente exentos de gluten precocidos y/o gelatinizados 
hasta un máximo de 30% del contenido total de hidratos de carbono y hasta un máximo de 2g/100 ml.  
7.6.3.5 .4 Debe evitarse el uso de sacarosa, así como la adición de fructosa como ingrediente, salvo 
cuando sea necesario por justificación tecno lógica.  
7.6.3.6  Nutrimentos o ingredientes opcionales.  
7.6.3.6 .1 En las fórmulas de inicio y para necesidades especiales de nutrición podrán añadirse otros 
nutrimentos/ingredientes que normalmente están presentes en la leche humana, su idoneidad e inocuida d 
deberá estar demostrada científicamente, y en cantidad suficiente para lograr el efecto deseado sobre  la base 
de las cantidades presentes en la leche materna y para asegurarse que sea adecuado como fuente única de 
la nutrición del lactante.  
7.6.3.6 .2 En las fórmulas de continuación, además de las vitaminas y minerales señalados, pueden 
añadirse otros nutrimentos/ingredientes, cuando sean necesarios para asegurar que el producto sea 
adecuado para formar parte de un plan de alimentación mixta, destinado a s er utilizado después del sexto 
mes de edad.  
7.6.3.6 .3 Se debe contar con evidencia científica que demuestre la utilidad de los nutrimentos/ingredientes 
opcionales que se utilicen y estar a dispo sición de la Secretaría cuando é sta lo solicite.  
7.6.3.6 .4 Para las fórmulas de continuación las concentraciones de sodio y potasio que derivan de los 
ingredientes vitamínicos y minerales deben ajustarse a los límites establecidos para el sodio y el potasio en la 
tabla N o. 5. 
7.6.3.6 .5 Sólo se podrán utilizar cultivo s que produzcan ácido láctico L(+), para el caso de las fórmulas 
para necesidades especiales de nutrición se podrán utilizar siempre y cuando se haya comprobado que son 
inocuos y adecuados para estas poblaciones vulnerables, el sustento deberá estar a disp osición de la 
Secretaría cuando é sta lo solicite.  
8. Disposiciones sanitarias para alimentos y bebidas no alcoh ólicas para lactantes y niños de corta 
edad  
8.1 Los productos que se modifiquen en su composición, deben c umplir con lo establecido en la  NOM -086-
SSA1 -1994, señalada en el apartado de referencias.  
8.2 Los ingredientes como carne de aves, bovino o pescado deben someterse a operaciones que 
aseguren la eliminación de trozos de hueso y espinas.  
8.2 Para los productos a base de cereales podrán utilizars e todos los cereales molidos aptos para el 
consumo humano.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
8.3 Las leguminosas deben ser sometidas a tratamiento térmico para eliminar, en la medida de lo posible, 
los factores antinutricios presentes normalmente, tales como las lectinas (hemaglutininas), así como los 
inhibidores de la tripsina y quimotripsina.  
8.4 No se permite el uso de las habas ( Vicia faba L. ), como ingrediente, en estos productos, debido al 
peligro de favismo.  
8.5 Los cereales, leguminosas y semillas oleaginosas deben tratarse previame nte para disponer de 
materias primas limpias y de buena calidad. Dentro de los tratamientos se pueden considerar los siguientes:  
8.5.1  Limpieza o lavado: para eliminar la suciedad, granos dañados, granos extraños y semillas nocivas, 
insectos y excrementos de insectos y cualquier material adherido.  
8.5.2  Descascarado: en caso de ser necesario, para las legumbres, semillas oleaginosas y determinados 
cereales, tales como avena, cebada, sorgo y mijo. Estos deben ser descascarados lo más completamente 
posible pa ra reducir el contenido de fibra cruda a niveles aceptables y para eliminar los taninos y otras 
sustancias fenólicas que puedan reducir la digestibilidad de las proteínas.  
8.6 Los productos comercialmente estériles deben cumplir con lo establecido en las d isposiciones 
sanitarias de la NOM -130-SSA1 -1995, señalada en el apartado de referencias.  
8.7 El cacao se podrá adicionar únicamente en aquellos productos que se destinen a niños mayores de 
nueve meses de edad, en una cantidad que no exceda de 5% m/m en bas e seca.  
8.8 Especificaciones  
8.8.1  Microbiológicas  
8.8.1.1  Deben estar exentos de microoganismos patógenos.  
8.8.1.2  Los alimentos a base de cereales, deben cumplir con lo siguiente:  
Tabla No. 12. Alimentos a base de cereales  
Microorganismos   Para lactante s (4 o 6 - 12 
meses de edad) para 
consumirse 
directamente, incluye las 
galletas y los bizcochos  Para lactantes y niños  de 
corta edad  (4 ó 6 - 36 meses 
de edad) que llevan 
tratamie nto térmico antes de 
su consumo  Alimentos a base de 
cereales para niños  de 
corta edad para 
consumirse 
directamente  
Mesofílicos aerobios  10 000 UFC/g  100,000 UFC/g  10 000 - 30 000 UFC/g  
Enterobacteriáceas  9,3 NMP  1 000 UFC/g  21 NMP  
Salmonella  spp Ausente / 25 g  Ausente / 25 g  Ausente / 25 g  
 
8.8.1.3  Los alimentos listos para c onsumo comercialmente estériles, deben cumplir con las pruebas de 
esterilidad comercial señaladas a continuación:  
Tabla No. 13 Alimentos comercialmente estériles.  
Productos  Microorganismos  Límite máximo  
pH > 4,6  Mesofílicos Aerobios  
Mesofílicos Anaerobio s 
Termofílicos Aerobios  
Termofílicos Anaerobios  Negativo  
Negativo  
Negativo  
Negativo  
pH  4,6 Mesofílicos Anaerobios  
Mesofílicos Aerobios  
Termofílicos  
Mohos y Levaduras  Negativo  
Negativo  
Negativo*  
Negativo  
* En algunos casos  por probabilidad estadística, puede existir la presencia de esporas 
termofílicas en alimentos ácidos con pH por abajo de 4,6.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
8.8.1.4 Los productos deshidratados deben cumplir con lo siguiente:  
Tabla No. 14 Alimentos deshidratados.  
Microorganismos  Límite  máximo  
Mesofílicos aerobios  
 
Salmonella spp en 25 g  
Coliformes totales  2 500 UFC/g o  
100,000 UFC/g*  
Ausente  
20 NMP/g  
* Si deben ser sometidos a tratamiento térmico antes de su consumo  
8.8.2 Contaminantes  
8.8.2.1  Los productos para lactantes y niños de c orta edad deben cumplir con las especificaciones de 
metales pesados y materia extraña perjudicial a la salud establecidas en el punto 7.6.2 para fórmulas, excepto 
en el límite de plomo, el cual será 0,20 ppm.  
8.8.2.2  Los alimentos a base de cereales no deb en exceder de 20 g aflatoxinas/kg de producto.  
8.8.3 Nutrimentales  
8.8.3 1 El contenido energético de los productos elaborados a base de cereales no debe ser inferior  a 0,8 
kcal/g.  
8.8.3.2 Contenido de sodio  
8.8.3.2.1  Para los alimentos a base de cereales  el contenido de sodio en el cereal seco y harinas de cereal 
no debe exceder de 100 mg/100 g del producto listo para ser consumido.  
8.8.3.2.2  Los demás alimentos para lactantes y niños de corta edad no deben exceder de 200 mg/100 g de 
producto, calculado e n relación con el producto preparado para el consumo de conformidad con las 
instrucciones de empleo, ni agregar sal (NaCl) a los productos de fruta y a los postres a base de fruta.  
8.8.3.3 Contenido de vitaminas  
8.8.3.3.1 En los alimentos a base de cereale s la cantidad de vitamina B1 (tiamina) no deberá ser inferior a 
50 g/100 kcal.  
8.8.3.4  Contenido de proteínas.  
8.8.3.4.1 Podrán añadirse aminoácidos esenciales (isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, 
treonina, triptófano, valina, arginina e  histidina) en sus formas naturales L , sólo en las cantidades necesarias 
para mejorar la calidad de la proteína presente.  
8.8.3.4.2  Cuando los alimentos a base de cereales deban prepararse con agua antes de ser consumidos 
deben contener un mínimo del 15% d e proteínas en base seca. El REP no debe ser inferior al 70% de la 
calidad de la caseína.  
8.8.3.5  Contenido de hidratos de carbono.  
8.8.3.5.1  Se podrán añadir los siguientes hidratos de carbono: lactosa, maltosa, sacarosa, glucosa, 
fructosa, miel y jugo de  frutas, maltodextrina, jarabe de glucosa, jarabe de glucosa deshidratada y sus 
combinaciones, almidón pretostado, almidón gelatinizado; l os dos últimos deben ser sin glu ten. 
8.8.3.5.2  La cantidad total de hidratos de carbono en alimentos dulces (jugos de fruta y verduras, néctares, 
platos de fruta y postres o cremas) no debe exceder de 25 g/100 g del producto.  
8.8.3.5.3  Para los productos a base de cereales la cantidad de azúcares añadidos no podrá ser superior a 
7,5 g/100 kcal cuando se agregue como sacar osa, glucosa, jarabes de glucosa o miel, si se añade como 
fructosa no podrá ser superior a 3,75 g/100kcal.  
8.8.3.6  Contenido de lípidos.  
8.8.3.6.1  La cantidad total de grasa no debe ser superior a 6g/100 kcal.  
8.8.3.6.2  Las galletas y otros productos de pa nificación no deben exceder un contenido máximo de  3,3 
g/100kcal, para los otros productos a base de cereales su contenido máximo no deberá ser superior  a 
4,5g/100kcal.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
8.8.3.7 Ingrediente facultativos:  
8.8.3.7.1 Sólo podrán utilizarse cultivos productores  de ácido láctico.  
9. Muestreo y m étodos de prueba  
9.1 El procedimiento de muestreo para los productos objeto de esta Norma se sujeta a lo que establece la 
Ley General de Salud.  
9.2 Para la verificación de las especificaciones sanitarias y nutrimentales qu e se establecen en esta 
Norma se deben aplicar los métodos de prueba señalados en el Apéndice Normativo C.  
10. Etiquetado  
10.1 La etiqueta de los productos debe cumplir con lo establecido en el Reglamento y en la  NOM -051-
SCFI/SSA1 -2010, señalada  en el apar tado de referencias, salvo los apartados referidos particularmente en 
este capítulo.  
10.1.1  Deben ostentar fecha de caducidad, a excepción de los productos comercialmente estériles que 
podrán declarar fecha de consumo preferente.  
10.1.2 Fórmulas  
10.1.2.1  Deben denominarse conforme a la clasificación señalada en el numeral 5.1, según corresponda.  
10.1.2.2 No podrán incluir ningún tipo de declaración de propiedades saludables.  
10.1.2.3 En la etiqueta figurará la lista completa de ingredientes, por orden decre ciente de proporciones, 
salvo las vitaminas y/o nutrimentos inorgánicos (minerales), que se podrán indicar como grupos separados.  
10.1.2.4 No deben ostentar imágenes o textos que sugieran a las fórmulas de inicio como idénticas y 
superiores a la leche mate rna, conforme a las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud para 
la comercialización de sucedáneos de la leche materna.  
10.1.2.5 No se deben utilizar términos como "humanizado", "maternizada" o similares.  
10.1.2.6 Las fórmulas de inicio y pa ra necesidades especiales de nutrición que contengan como mínimo  1 
mg de hierro por 100 kcal utilizables, deben ostentar la denominación “Fórmula con hierro para lactantes”.  
10.1.2.7  Las fórmulas no enriquecidas con hierro, deben ostentar una indicación pr ecisando que cuando el 
producto se administra a niños mayores de cuatro meses las necesidades totales de hierro deben satisfacerse 
mediante otras fuentes.  
10.1.2.8  Se debe indicar el origen de las proteínas en la lista de ingredientes.  
10.1.2.9  Las fórmula s que no contengan leche ni algún derivado lácteo deben incluir la leyenda:  "Fórmula 
no láctea".  
10.1.2.10  Las fórmulas para necesidades especiales de nutrición, deben indicar en términos descriptivos 
adecuados, cerca del nombre, la característica esencial  de la fórmula, pero no el estado o trastorno a que  está 
destinada.  
10.1.2.11  Información nutrimental, debe declararse el valor nutritivo del producto, como sigue:  
10.1.2.11.1 El contenido energético expresado en kilocalorías (kcal) o kilojoules (kJ) y la cantidad en 
gramos de proteínas, hidratos de carbono y grasas o lípidos por cada 100 g o 100 ml, así como por 100 ml del 
producto listo para el consumo que se haya preparado de acuerdo con las indicaciones señaladas en  la 
etiqueta.  
10.1.2.11 .2 La cantidad total en las unidades correspondientes de vitaminas y nutrimentos inorgánicos 
(minerales), colina y de cualquier otro nutrimento declarado en la lista de ingredientes por 100 g o 100 ml, así 
como por 100 ml del producto listo para el consumo que se haya pr eparado de acuerdo con las indicaciones 
señaladas en la etiqueta.  
10.1.2.11 .3 Además se podrá declarar el contenido de nutrimentos por cada 100 kcal.  
10.1.2.11 .4 En las fórmulas de inicio líquidas , además, se debe declarar el contenido energético y la 
cantidad en gramos de proteínas, carbohidratos, grasas y demás nutrimentos por presentación (envase). Y si 
se declara por 100 kcal se deberá indicar la cantidad de producto equivalente a 100 kcal.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
10.1.2.11 .5 Las fórmulas para necesidades especiales de nutrici ón deberán declarar la cantidad total de 
los nutrimentos específicos u otros componentes a los que se debe la característica esencial que hace que la 
fórmula se destine a esa necesidad especial por 100 g o 100 ml.  
10.1.2.12  Instrucciones para su almacenami ento, conservación, uso, preparación y consumo  
10.1.2.12.1  Deben ostentar la leyenda “Aviso Importante” o su equivalente. Posteriormente lo siguiente:  
10.1.2.12.2  Una leyenda donde se afirme la superioridad de la lactancia materna, por ejemplo “la leche 
materna es el mejor alimento para el beb é”. “La leche materna contiene hormonas, enzimas activas y otros 
compuestos que no pueden ser duplicados en ninguna fórmula infantil”, y señalar ”El uso de este producto 
debe hacerse bajo prescripción médica” o una ley enda equivalente, con un tamaño de letra que sea 
fácilmente visible, con negritas y en un fondo contrastante.  
10.1.2.12.3 Una leyenda sobre las consecuencias de una preparación y uso impropio del producto, tal 
como "La salud de su hijo depende de que siga cuidadosamente las instrucciones para la preparación y uso" o 
alguna equivalente.  
10.1.2.12.4 Las fórmulas para necesidades especiales de nutrición deben incluir una declaración 
destacada y en negritas que diga  “UTILICESE BAJO SUPERVISION MEDICA” separada de toda in formación 
escrita, impresa o grá fica. 
10.1.2.12.5 Las fórmulas deben ostentar una leyenda que indique que deben ser preparadas con agua 
hervida por cinco minutos y tibia. En caso de no contar con ésta se podrá utilizar agua purificada a 
temperatu ra ambiente.  
10.1.2.12.6 En las fórmulas de inicio y para necesidades especiales de nutrición se darán instrucciones en 
forma escrita y gráfica en la etiqueta , sobre la manera de prepararla y utilizarla de modo que no induzca a 
desistir de la lactancia mat erna. Asimismo deben incluirse instrucciones sobre la conservación del producto, 
antes y después de abrir el envase y una vez preparado el producto, incluyendo una declaración que indique 
que el almacenamiento prolongado y temperaturas excesivas deben evit arse. En el caso de fórmulas líquidas 
las instrucciones gráficas podrán incluirse en el envase colectivo únicamente.  
10.1.2.12.7 Las fórmulas de continuación deben contener instrucciones sobre la preparación en forma 
escrita y gráfica, uso, su almacenamien to y conservación antes y después de abrir el envase y en su caso una 
vez preparado el producto, incluyendo una declaración que indique que el almacenamiento prolongado y 
temperaturas excesivas deben evitarse.  
10.1.2.12.8 Las fórmulas de continuación deben  contener una declaración que indique que son parte de la 
ablactación. No deben ser introducidas antes del sexto mes de vida, cuando la alimentación es 
exclusivamente con leche materna, ni antes de los cuatro meses cuando la alimentación es con fórmulas de  
inicio o cuando el peso es menor o igual a 6 kg.  
10.1.2.12.9 En las fórmulas se debe incluir una leyenda indicando que no se debe calentar usando horno 
de microondas o alguno equivalente. Esto se debe al riesgo de causar graves quemaduras.  
10.1.2.12.10 Los fortificadores de leche materna deben incluir una declaración de stacada y en negritas 
que diga “ PARA USO HOSPITALARIO”.  
10.1.3 Alimentos y bebidas no alcohólicas para lactantes y niños de corta edad.  
10.1.3 .1 La denominación debe corresponder con lo esta blecido en los ordenamientos legales; en 
ausencia de éstos, puede indicarse el nombre de uso común, o bien, emplearse una descripción de acuerdo 
con las características básicas de la composición y naturaleza del producto, que no induzca a error o engaño 
al consumidor. Además, indicar el grupo al que va dirigido ejemplo “cereal seco para lactantes (y/o para niños 
de corta edad)”, “galletas para lactantes (y/o para niños de corta edad)”.  
10.1.3.2  Los productos con modificación en su composición deben cumplir con lo señalado en la  NOM -
086-SSA1 -1994, citada en el apartado de referencias.  
10.1.3 .3 En el caso de que haya sido objeto de algún tipo de tratamiento, se puede indicar el nombre  de 
éste, con excepción de aquellos que de acuerdo con los ordenam ientos corr espondientes sean de  carácter 
obligatorio.  
10.1.3 .4 Se debe indicar en cualquier parte de la etiqueta, el rango de edad al que está dirigido  el 
producto. Para los productos a base de cereales tal edad no podrá ser inferior a los seis meses.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
10.1.3.5  Cuando  el producto contenga remolacha o espinacas, se indicará en la etiqueta “Para niños de 
más de doce semanas”.  
10.1.3.6  Las instrucciones para su preparación y uso, así como sobre su almacenamiento y conservación 
antes y después de que se haya abierto el env ase deberán figurar en la etiqueta.  
10.1.3.7  Cuando el producto esté compuesto de ingredientes y aditivos exentos de gluten podrá incluirse 
en la etiqueta la declaración “exento de gluten”.  
10.1.3.8  Productos a base de cereales.  
10.1.3.8.1  Cuando el alimen to contenga menos del 15% de proteína en base seca, debe indicarse la 
leyenda "Utilícese leche pero no agua" para prepararlo o una indicación equivalente. Cuando contengan más 
del 15% de proteína en base seca, en las instrucciones para prepararlo, debe ind icarse que se puede utilizar 
agua, leche o jugo o una indicación equivalente.  
10.1.3.8 .2 Adicionalmente debe incluirse una leyenda que indique que la leche usada para preparar estos 
alimentos deberá ser recomendada por el médico.  
10.1.3.9  La sal yodada, de be declararse como tal en la lista de ingredientes . 
10.1.3.10  Cuando la declaración de fibra dietética, vitaminas y nutrimentos inorgánicos (minerales) se 
haga en porcentaje de los VNR se deberán considera r los valores que corresponda al grupo de edad al q ue va 
dirigido el producto, conforme a la Tabla No. 15. 
Tabla No. 15 Valores Nutrimentales de Referencia para  la Población Mexicana por segmento.  
Nutrimento/unidad de medida  Edad  
0-6 meses  7-12 meses  1-3 años  
Vitamina D µg (como colecaliciferol)  5** 5** 5** 
Vitamina E µg (equivalente de tocoferol)  4** 5** 6* 
Vitamina K µg  2** 2.5**  30** 
Tiamina (B 1) µg 0.2**  0.3**  0.4* 
Riboflavina (B 2) µg 0.3**  0.4**  0.4* 
Piridoxina (B 6) µg 0.1**  0.3**  0.4* 
Niacina mg  2** 4** 6* 
Vitamina B 12 µg (Cobalamina)  0.3**  0.5**  0.8* 
Acido fólico (folacina) µg  76** 96** 168**  
Vitamina C µg (ácido ascórbico)  40** 50** 15* 
Acido pantoténico mg  1.7**  1.8**  2** 
Calcio mg  210**  270**  500**  
Cobre mg  220**  220**  340* 
Cromo mg  0.2**  5.5**  11** 
Fósforo mg  100**  275**  460**  
Flúor mg  0.01**  0.45**  0.6**  
Hierro mg  - 16 13 
Yodo mg  - - 65* 
Magnesio mg  36** 90** 80* 
Selenio mg  14** 21** 20* 
Zinc mg  - 3.8**  4* 
* Corresponden a IDR;  ** Corresponden a IDS.  
11. Envase y embalaje  
11.1 Envase  
Los productos objeto de esta Norma se de ben envasar en recipientes elaborados con materiales inocuos y 
resistentes a distintas etapas del proceso, de tal manera que no reaccionen con el producto o alteren sus 
características físicas, químicas y sensoriales.  
11.2 Embalaje        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Se debe usar material re sistente que ofrezca la protección adecuada a los envases para impedir su 
deterioro exterior, a la vez que faciliten su manipulación, almacenamiento y distribución.  
12. Concordancia con normas internacionales  
Esta Norma es parcialmente equivalente a las si guientes normas:  
12.1 Norma del Codex para Fórmula para lactantes. Codex Stan 72 -1981, Rev. 2007.  
12.2 Norma de Codex para Alimentos envasados para lactantes y niños. Codex Stan 73 -1981 Rev. 1989.  
12.3 Norma del Codex para Alimentos elaborados a base de ce reales para lactantes y niños. Codex Stan 
74-1981, Rev.2006.  
12.4 Norma del Codex para Preparados complementarios. Codex Stan 156 -1987, enmienda 1989.  
12.5 Código Internacional de comercialización de sucedáneos de la leche materna y resoluciones posteriore s. 
13. Bibliograf ía 
13.1 Ley Federal sobre Metrología y Normalización. México, D.F.  
13.2 Ley General de Salud. México, D.F.  
13.3 Reglamento  de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización. México, D.F.  
13.4 Reglamento de la Control Sanitario de Producto s y Servicios. México, D.F.  
13.5 Reglamento de la Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios. México, D.F.  
13.6 Norma Mexicana NOM -Z-013/02. 1981. Guía para la Redacción, Estructuración y Presentación de las 
Normas Oficiales Mexicanas. M éxico, D.F.  
13.7 Norma Oficial Mexicana NOM -SCFI -008-2002. Sistema General de Unidades de Medida. México, D.F.  
13.8 Norma Oficial Mexicana NOM -031-SSA2 -1999. Para la atención a la salud del niño.  México, D.F.  
13.9 Norma general para el etiquetado y declara ción de propiedades de alimentos preenvasados para 
regímenes especiales. CODEX STAN 146 -1985. Enmendada 2009.  
13.10  Directrices sobre etiquetado nutricional. CXG -002s(1). Enmendada 2009.  
13.11  Code of Federal Regulations. 21 CFR 107.  
13.12  Code of Hygienic  Practice for Powdered Formulae for Infants and Young Children. CAC/RCP 66 – 2008.  
13.13  Agostoni, C., Braegger, C. 2009. Breast -feeding: A Commentary by the ESPAHAN Committee on 
Nutrition. J. Pediatr Gastroenterol Nutr, Vol. 49:112 –125. 
13.14  Agostoni, C. , Buonocore, G. 2010. Enteral Nutrient Supply for Preterm Infants: Commentary From 
the European Society for Pediatric  Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition Committee on Nutrition. J. 
Pediatr Gastroenterol Nutr. Vol. 50, No. 1.  
13.15  Canadian Food Ins pection Agency and Healht Canada. 2007. Requirements Related to Nutrition 
Information and Nutrition and Health Claims for Infant Formula.  
13.16  European Commission. 2003. Report of the Scientific Committee on Food on the Revision of 
Essential Requirements of Infant Formulae and Follow -on Formulae. SCF/CS/NUT/IF/65.  
13.17  FAO/WHO.  2004 and 2006. Enterobacter sakazakii  and Salmonella in powdered infant formula. 
Meeting Report. Assesment. Series No. 6.  
13.18  García, A. J. 1998. Papel de los cereales en la alim entación de ablactación, nutrición del lactante y 
preescolar. Acta Pediatr Méx; 19(S):17 -21. 
13.19  Kathleen, M.L., Escott, S.S. 2001. Nutrición y Dietoterapia d e Krause. Décima Edición.  Edit. 
McGraw -Hill. 
13.20  Makihiro S., Norifumi S., Taku N., Tadashi I. , Ichiro N. 1994. Profile of Nucleotides and Nucleosides 
of Human Milk. Received November 5.  
13.21  Real Decreto 867. 2008. Reglamentación Técnico -Sanitaria específica de los Preparados para 
lactantes y de los preparados de continuación; España.  25121 -25138 . Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
13.22  Sisk, M. P., Lovelady, A. Ch., Dillard, G. R., Gruber, J.K. 2006. Lactation Counseling for Mothers of 
Very Low Birth Weight Infants: Effect on Maternal Anxiety and Infant intake of Human Milk. Pediatric. 117;  
e67-e75. 
13.23  Udaeta -M, E., Toussaint -M, G. 2005. Uso de una fórmula para prematuros adicionada con ácidos 
poliinsaturados de cadena larga: aceptabilidad y tolerancia. Gac Méd Méx Vol. 141 No. 1.  
13.24  Rosado Jorge; Casanueva Esther y Bourges Héctor; Recomendaciones de ingestión de nutrimento s 
para la población mexicana. Bases Fisiológicas; Médica Panamericana, 2005.  
14. Observancia de la norma  
La vigilancia en el cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud, a los 
Gobiernos de las Entidades Federativas en el ámbito d e sus respectivas competencias,  
15. Vigencia  
La presente norma entrará en vigor a los  sesenta días naturales posteriores al de su publicación en el 
Diario Oficial de la Federación.  
Sufragio Efectivo. No Reelección.  
México, D.F., a 16 de enero de 2012 .- El Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos 
Sanitarios y Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario,  
Mikel Andoni Arriola Peñalosa .- Rúbrica.  
APENDICE NORMATIVO A  
A.1 L IMITES M AXIMOS PARA ADITIVOS  
Agentes espesantes.  
Nombre  Producto  Límite  
Dosis máxima en 
100 ml del producto 
listo para consumo  Observación  
Acetato de 
dialmidón  
SIN no reportado  Alimentos a base de cereales  5,000 mg/100g solo o 
mezclado con otros 
espesantes   
Adipato acetilado 
de di almidón  
SIN 1422  Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100g solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  5 g/100g  solo o 
mezclado   
Fórmulas de continuación  2,5 g/100ml solo o 
combinado  Solamente en 
fórmulas a base de 
proteí nas 
hidrolizadas o 
aminoácidos  
500 mg/100ml solo o 
mezclado  En fórmulas a base 
de soya  
Almidón oxidado  
SIN 1404  Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100g solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  5 g/100g   
Almidón ac etilado  
SIN 1420  Alimentos a base de cereales  5 g/100  g solos o 
combinados   
Almidón oxidado 
acetilado  
SIN 1451  Alimentos a base de cereales  5 g/100  g solo o 
combinados   
Carragenina  Fórmulas de inicio  0,03 g/100ml solo o  Fórmulas líquidas a       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
SIN 407  Fórmulas de continuación  mezclado  base de leche o a 
base de soya  
0,10 g/100 ml solo o 
mezclado  Fórmulas líquidas a 
base de proteína 
hidrolizada y/o 
aminoácidos  
Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  500 mg/100 g   
Dialmidón glicerol  
SIN 1411  Fórmulas de continuación  6 g/100 ml solo o 
combinado   
Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solo o 
mezclado   
 
Dialmidón glicerol 
acetilado  
SIN 1423  Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solo o 
mezclado con otros 
espesantes   
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  6 g/100 ml solo o 
combinado   
Fosfato de 
dialmidón acetilado  
SIN 1414  Fórmulas de inicio  
Fórmulas continuación  
Fórmulas para necesida des especiales  0,5 g/100 ml solo o 
combinado con otros 
espesantes  Fórmulas a base 
de soya  
2,5 g/100 ml solo o 
combinados con otros 
espesantes  Fórmulas a base 
de proteína 
hidrolizada y/o 
aminoácidos  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimen tos deshidratados  6 g/100 g solo o 
mezclado con otros 
espesantes   
Alimentos a base de cereales  5,000 mg/100g solo o 
mezclado con otros 
espesantes   
Fosfato de 
dialmidón  
SIN 1412  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades especi ales 
de nutrición  0,5 g/100ml  solo o en 
combinación con 
otros espesantes  Fórmulas a base 
de soya  
2,5 g/100 ml solo o en 
combinación con 
otros espesantes  Fórmulas a base 
de proteínas 
hidrolizadas y/o 
aminoácidos  
Alimentos para ser administrados 
directa mente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  5,000 mg/100 g   
Fosfato de 
monoalmidón  
SIN 1410  Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6,000 mg/100 g solos 
o mezclado   
Alimentos a base de cer eales  5000 mg/100 g solo o 
mezclado con otros 
espesantes   
Fosfato fosfatado 
de dialmidón  
SIN 1413  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades especiales 0,5 g/100 ml solo o 
combinados  Fórmulas a base 
de soya  
2,5 g /100 ml solo o Fórmulas a base Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
de nutrición  combinados  de proteínas 
hidrolizadas y/o 
aminoácidos  
Alimentos administrados directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  5,000 mg/100  g solo o 
mezclado   
Goma arábiga  
SIN 414 Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  1,000 mg/100 g solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  2,000 mg/100 g  Exentos de gluten  
 
Goma de algarrobo  
SIN 410  Fórmulas de inicio  
Fórmulas continuación  
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  0,1 g/100 ml   
Alimentos a base de cereales  1,000 mg/100 g solo o 
combinado   
 Alimentos a base de cereales  2,000 mg/100 g  Exentos de gluten  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  0,2 g/100 g   
Goma guar  
SIN 412  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  0,1 g/100 ml  Fórmulas líquidas 
que contengan 
proteínas 
hidrolizadas  
Fórmulas continuación  0,1 g/100 ml   
Alimentos a base de cereal es 1,000 mg/100 g solos 
o combinados   
Alimentos a base de cereales  2,000 mg/100 g  Exentos de gluten  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  0,2 g/100 g   
Goma xantana  
SIN 415  Alimentos a base de cereales  
Alimentos adminis trados directamente  
Alimentos deshidratados  1,000 mg/100 g solos 
o combinado   
Alimentos a base de cereales  2,000 mg/100 g  Exentos de gluten  
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  100 mg/100 ml solo o 
mezclado   
Hidroxipropil 
almidón  
SIN 14 40 Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solos o 
mezclados   
Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas especiales de nutrición  0,5 g/100 ml solo o en 
combinación  Fórmulas a base 
de soya  
2,5 g/100 ml solos o 
combinados  Fórmulas a base 
de proteínas       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
hidrolizadas y/o 
aminoácidos  
Octenilsuccinato 
sódico de almidón  
SIN 1450  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  6 g/100 g solo o 
combinado   
Alimentos a base de cereales  5,000  mg/100 g solo o 
mezclado   
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  2 g/100 ml   
 
Pectinas (aminadas 
y no aminadas)  
SIN 440  Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades especiales 
de nutrición  1 g/100 ml solo o 
mezclado   
Alimentos para s er administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  1 g/100 g solo o 
mezclado  Alimentos a base 
de fruta  
Alimentos a base de cereales  2,000 mg/100 g solo o 
mezclado  Exentos de gluten  
 
Antiaglomerantes  
Nombre  Producto  Límit e Dosis 
máxima en 100 ml 
del producto listo 
para consumo  Observaciones  
Cera blanca y amarilla 
de abeja  
SIN 901  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Dextrina  
SIN 1400  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  
Dióxido de silicio amorfo  
SIN 551  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  1,000 mg/100 g   
Alimentos a base de cereales  200 mg/100 g  Solo para cereales 
secos  
 
Antioxidantes  
Nombre  Producto  Límite  Observaciones  
Acido ascórbico y sus 
sales de calcio, potasio 
y sodio  
SIN 300  Fórmulas de continuación  5mg/100g 
expresados en ácido 
ascórbico  Incluidas las fórmulas 
para necesidades 
especiales de 
nutrición  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  50mg/100g 
expresados en ácido 
ascórbico   
d-alfa-Tocoferol 
concentrado  
SIN 307a  Fórmulas de continuación  3 mg/kg grasa solo 
o mezclado   
Alimentos a base de cereales  300 mg/kg de grasa 
solo o mezclado   
dl-alfa-Tocoferol  Alimentos para ser administrados 300 mg/kg de grasa  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
SIN 307c  directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  solo o mezclado  
Tocoferoles 
concentrados. (Mezcla)  
SIN 307b  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
espec iales de nutrición  1 mg/100 ml solo o 
en combinación   
Fórmulas de continuación  3 mg/100 ml solo o 
mezclado   
Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  300 mg/kg de grasa 
solo o mezclado   
Palmitat o de ascorbilo  
SIN 304  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  200 mg/kg de grasa   
Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  1 mg/100 ml solo o 
combinado   
Fórmulas d e continuación  5 mg/100 ml solo o 
mezclado   
 
Aromas y saborizantes  
Nombre  Producto  Límite  Dosis máxima 
en 100 ml del 
producto listo para 
consumo  Observaciones  
Etilvainillina  Fórmulas de continuación  5 mg/100  ml Incluyendo las fórmulas 
para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser 
administrados directamente  
Alimentos deshidratados  7 mg/100  g  
Extractos naturales 
de fruta  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutric ión 
Alimentos para ser 
administrados directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Extracto de vainilla  Fórmulas de continuación  
Alimentos para ser 
administrados directamente  BPF Incluyendo las fórmulas 
para necesidades 
especiales de nutrición        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  
Saborizantes 
naturales  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos para ser 
administrados directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Vainillina  Alimentos para ser 
administrados directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  7 mg/100  g  
Fórmulas de continuación  5 mg/100  ml Incluyendo las fórmulas 
para necesidades 
especiales de nutr ición 
 
Emulsificantes  
Nombre  Producto  Límite  Dosis 
máxima en 100 ml 
del producto listo 
para consumo  Observaciones  
Esteres acéticos de los 
mono y diglicéridos de 
los ácidos grasos  
SIN 472a  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidrat ados  
Alimentos a base de cereales  500 mg/100  g solos o 
mezclados   
Esteres cítricos de los 
mono y diglicéridos de 
los ácidos grasos  
SIN 472c  Alimentos a base de cereales  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  500 mg/100  g solo o 
mezclado   
Esteres de ácidos 
lácticos y grasos de 
glicerol  
SIN 472b  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  500 mg/100  g solo o 
mezclado   
Lecitina  
SIN 322 (i)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especia les de nutrición  0,5 g/100  ml Si se añade más de 
otro emulsificante el 
nivel máximo de cada 
uno se debe reducir 
proporcionalmente en 
función de las otras Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
sustancias presentes  
Fórmulas de continuación  0,5 g/100  ml  
Alimentos para ser administrados 
direc tamente  
Alimentos deshidratados  0,5 g/100  g  
Alimentos a base de cereales  1,5 g/100  g Con respecto al peso 
seco  
Monoglicéridos y 
diglicéridos de ácidos 
grasos:  
Monoestearato de 
glicerilo  
Monoglicéridos y 
diglicéridos de ácidos 
grasos  
Monopalmitato de 
glicerilo  
Monooleato de glicerilo  
SIN 471  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  0,4 g/100  ml  
Alimentos a base de cereales  1,5 g/100 g   
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshid ratados  0,15 g/100  g  
 
Leudantes  
Nombre  Producto  Límite  Dosis máxima 
en 100 ml del 
producto listo para 
consumo  Observaciones  
Carbonato hidrogenado 
de potasio  
SIN 501 (ii)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas necesidades especiales 
de nutr ición 
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Carbonato hidrogenado 
de sódio  
SIN 500 (ii)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas de necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos  para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  limitado al nivel 
máximo de sodio        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Carbonato hidrogenado 
de amonio  
SIN 503 (ii)  Alimentos a base cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Fórmulas deshidratados  BPF  
Carbonato de amonio  
SIN 503 (i)  Alimentos  a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Carbonato de calcio  
SIN 170 (i)  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  
Fosfato dihidrogenado 
de cálcio  
SIN 341 (i)  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Alimentos a base de cereales  440 mg solo o en 
combinación  Unicamente para 
regular la acidez  
Pirofosfato disódico  
SIN 450  (i) Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
 
Reguladores de pH  
Nombre  Producto  Límite  Dosis máxima 
en 100 g del producto 
con respecto al peso 
seco  Observaciones  
Acetato de calcio  
SIN 263  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Acetato de potasio  
SIN 261  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Acetato de sodio  
SIN 262 (i)  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Acido acético glacial  
SIN 260  Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Acido cítrico  
SIN 330  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Alimentos a base de cereales  
Acido clorhídrico  
SIN 507  Alimentos par a ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF   
Acido láctico  
SIN 270  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos a base de cereales  BPF   
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  0,2 g/100  g  
Acido L(+)tartárico  
SIN 334  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  
Alimentos a base de cereales  500 mg/100  g solo o 
combinado   
Acido D,L -málico  
SIN 296  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF   
 
Acido ortofosfórico  
Acido fosfórico  
SIN 338  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  0,1 mg como P 2O5 
solo o co mbinado  Como fósforo 
únicamente para 
regular la acidez  
Alimentos a base de cereales  440 mg solo o en 
combinación   
Carbonato hidrogenado 
de calcio  
SIN 170(ii)  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cere ales BPF  
Carbonato hidrogenado 
de potasio  
SIN 501 (ii)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites de potasio  
Fórmulas de continuación  
Alimentos para ser administrados 
directa mente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF   
Carbonato hidrogenado 
de sodio  
SIN 500  (ii) Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites de sodio  
Fórmulas de co ntinuación  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Carbonato de potasio  
SIN 501 (i)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro d e los 
límites de potasio  
Fórmulas continuación  BPF        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  
Carbonato de sodio  
SIN 500 (i)  Fórmulas de inicio  
Fórmulas  para necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites de sodio  
Fórmulas de continuación  
Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF   
Carbonato de calcio  
SIN 170  (i) Alimentos a base de cereales  BPF  
 
Citrato de calcio  
SIN 333  Fórmulas de inicio  
Fórmulas  continuación  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos a base de cereales  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  
Citrato tripotásico  
SIN 332  (ii) Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  BPF  Dentro de los 
límites para 
potasio.  
 Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Citrato tri sódico  
SIN 331  (iii) Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  BPF  Dentro de los 
límites para sodio  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Citrato monopotásico  
Citrato dihidrogenado de 
potasio  
SIN 332  (i) Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Citrato monosódico  
Citrato dihidrogenado de 
sodio.  
SIN 331 (i)  Fórmulas de inici o 
Fórmulas de continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  BPF  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Alimentos a base de cereales  
Cultivos productores de 
ácido l láctico y del ácido 
cítrico  Fórmulas de co ntinuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  BPF   
Glucono delta lactona  
SIN 575  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  500 mg/100  g  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Hidróxido de calcio  
SIN 526  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites de calcio  
Fórmulas de continuación  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
 
Hidróxido de potasio  
SIN 525  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  0,2 g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites de potasio  
Fórmulas de continuación  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Hidróxido de sodio  
SIN 524  Fórmulas de inicio  
Fórmulas para  necesidades 
especiales de nutrición  0,2g/100 ml solo o 
combinado  Dentro de los 
límites para sodio  
Fórmulas de continuación  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Lactato de calcio  
Unicamente en su forma 
L(+) 
SIN 327  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Lactato de potasio  
Unicame nte en su forma 
L(+) 
SIN 326  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  Dentro de los 
límites para 
potasio  
Lactato de sodio  
Unicamente en su forma 
L(+) 
SIN 325  Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  Dentro de los 
límites para sodio  
Ortofosfato dicálcico  
Fosfato hidrogenado de Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solo o 
combinado como        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
calcio  
SIN 341 (ii)  fósforo  
Ortofosfato dipotásico  
Fosfato hidrogenado 
dipotásico  
SIN 340 (ii)  Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solo o 
combinado  Como fósforo  
Ortofosfato disódico  
Fosfato hidrogenado 
disódico  
SIN 339  (ii) Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solo o en 
combinación  Como fósforo  
Ortofosfato monocálcico  
Fosfato dihidrogenado de 
calcio  
SIN 341 (i)  Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solo o en 
combinación  Como fósforo  
 
Ortofosfato monopotásico  
Fosfato dihidrogenado de 
potasio  
SIN 340  (i) Alimentos a base de cere ales 440 mg /100 g solo o en 
combinación  Como fósforo  
Ortofosfato monosódico  
Fosfato dihidrogenado de 
sodio  
SIN 339  (i) Alimentos a base de cereales  440 mg/100  mg solos o 
en combinación como 
fósforo   
Ortofosfato tricálcico  
Fostato tricálcico  
SIN 341  (iii) Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solos o 
en combinación  Como fósforo  
Ortofosfato tripotásico  
Fosfato tripotásico  
SIN 340  (iii) Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solos o 
en combinación  Como fósforo  
Ortofosfato trisódico  
Fosfato trisó dico 
SIN 339  (iii) Alimentos a base de cereales  440 mg/100  g solos o 
en combinación  Como fósforo  
Tartrato dipotásico 
únicamente en su forma 
L (+) 
SIN 336  (ii) Alimentos a base de cereales  500 mg solos o 
combinados como 
tartratos en residuo en 
bizcochos y galletas  En residuo en 
bizcochos y 
galletas  
Tartrato disódico  
L (+) -Tartrato de sodio  
SIN 335  (ii) Alimentos a base de cereales  500 mg solos o 
combinados como 
tartratos  En residuo en 
bizcochos y 
galletas  
Tartrato monopotásico  
Tartrato ácido de potasi o 
Tartrato monopotásico  
SIN 336  (i) Alimentos a base de cereales  500 mg solos o 
combinados como 
tartratos en residuo en 
bizcochos y galletas  En residuo en 
bizcochos y 
galletas  
Tartrato monosódico  
L (+)Tartrato monosódico  
SIN 335  (i) Alimentos a base de c ereales  500 mg solos o 
combinados como 
tartratos  En residuo en 
bizcochos y 
galletas  
Tartrato de sodio y 
potasio únicamente en su Alimentos a base de cereales  500 mg solos o 
combinados como En residuo en 
bizcochos y Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
forma L(+)  
Sal Rochelle  
Sal Seignette  
Dextrotartrato de sodio y 
potasio  
SIN 337  tartratos  galletas  
 
Gases de envasado  
Nombre  Producto  Límite  
Dosis máxima en 100 g 
del producto con 
respecto al peso seco  Observaciones  
Dióxido de carbono 
(coadyuvante, 
gasificante)  
SIN 290  Fórmulas de inicio  
Fórmulas continuación  
Fórmulas para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
Nitrógeno (propulsor)  
SIN 941  Fórmulas de inicio  
Fórmulas de continuación  
Fórmula s para necesidades 
especiales de nutrición  
Alimentos para ser administrados 
directamente  
Alimentos deshidratados  
Alimentos a base de cereales  BPF  
 
APENDICE NORMATIVO B  
SUSTANCIAS NUTRITIVAS  
Tabla B1. Sales Minerales  
Nutrimento  Fuente  
Calcio  Carbonato de  calcio  
Cloruro de calcio  
Citrato de calcio  
Fosfato cálcico monobásico  
Fosfato cálcico dibásico  
Fosfato cálcico tribásico  
Glicerofosfato cálcico  
Gluconato cálcico  
Hidróxido de cálcico  
L-Lactato de calcio  
Oxido cálcico  
Sulfato cálcico        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Fósforo  Acido fosfór ico 
Fosfato cálcico monobásico  
Fosfato cálcico dibásico  
Fosfato cálcico tribásico  
Fosfato magnésico dibásico  
Fosfato magnésico tribásico  
Fosfato potásico monobásico  
Fosfato potásico dibásico  
Fosfato sódico dibásico  
Ortofosfato fé rrico 
Glicerofosfato magnés ico 
Fosfato diácido de sodio (fosfato sódico monobásico)  
Fosfato Trisódico (Fosfato sódico tribásico)  
Glicerofosfato potásico  
Glicerofosfato de manganeso (II)  
 
Hierro  Bisglicinato ferroso  
Carbonato ferroso estabilizado con sacarosa  
Citrato ferroso  
Citrato  ferroamónico  
Citrato férrico  
Difosfato férrico (pirofosfato férrico)  
Fumarato ferroso  
Gluconato ferroso  
Hierro reducido de hidrógeno  
Hierro electrolítico  
Hierro carbonilo  
Lactato ferroso  
Ortofosfato férrico  
Sacarato férrico  
Succinato ferroso  
Sulfato ferro so 
Difosfato férrico de sodio  
Magnesio  Acetato magnésico  
Carbonato de magnesio  
Carbonato ácido de magnesio  
Cloruro magnésico  
Oxido magnésico  
Fosfato magnésico dibásico  
Fosfato magnésico tribásico  
Gluconato magnésico  
Glicerofosfato magnésico  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Hidróxido magn ésico  
Lactato magnésico  
Sales magnésicas de ácido cítrico  
Sulfato magnésico  
Sodio  Bicarbonato de sodio  
Carbonato de sodio  
Cloruro sódico  
Citrato sódico  
Gluconato sódico  
L- Lactato de sodio  
Fosfato sódico monobásico  
Fosfato sódico dibásico  
Fosfato sódico t ribásico  
Sulfato sódico  
Hidróxido de sodio  
 
Potasio  Bicarbonato potásico  
Carbonato de potasio  
Cloruro potásico  
Citrato potásico  
Glicerofosfato potásico  
Gluconato potásico  
Fosfato potásico monobásico  
Fosfato potásico dibásico  
Fosfato potásico tribásico  
L- Lactato de potasio  
Hidróxido de potasio   
Cobre  Gluconato de cobre  
Carbonato cúprico  
Citrato cúprico  
Sulfato cúprico  
Yodo  Yoduro potásico  
Yoduro sódico  
Yodato potásico  
Yodato sódico  
Zinc Acetato de zinc  
Carbonato de zinc  
Cloruro de zinc  
Gluconato de zinc  
Lactato de zinc  
Oxido de zinc        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Sulfato de zinc  
Manganeso  Carbonato de manganeso  II 
Cloruro de manganeso II  
Citrato de manganeso II  
Glicerofosfato de manganeso II  
Gluconato de manganeso II  
Sulfato de manganeso II  
Selenio  Selenato sódico  
Selenito sódico  
Selenito sódico hidró geno  
Cromo  Sulfato de cromo III  
Cloruro de cromo III  
Molibdeno  Molibdato de sodio  
Molibdato de amonio  
Flúor  Fluoruro de sodio  
Fluoruro de potasio  
Fluoruro de calcio  
 
Tabla B2. Vitaminas  
Vitamina  Fuente  
Vitamina A  Todo trans retinol  
Acetato de Retinilo  
Palmitato de retinol  
Provitamina A  Beta caroteno  
Vitamina D 2 Ergocalciferol  
Vitamina D 3 Colecalciferol   
Vitamina E  d-alfa tocoferol  
dl-alfa tocoferol  
d-alfa tocoferil acetato  
dl-alfa tocoferil acetato  
Succinato ácido d -alfa tocofe ril 
Succionato ácido dl -alfa tocoferil  
Succinato de dl -alfa tocoferil polietileno glicol 1000  
Tiamina  
(Vitamina B 1) Hidrocloruro de tiamina cloruro  
Tiamina mononitrato  
Riboflavina (Vitamina B 2) Riboflavina  
Riboflavina 5´ -fosfato sódico  
Niacina  Nicotin amida  
Acido nicotínico  
Vitamina B 6 Hidrocloruro de piridoxina  
Piridoxal 5 - fosfato  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Biotina (vitamina H)  D-biotina  
Acido fólico  Acido N -pteroil -L-glutámico  
L-metilfolato cálcico  
Acido pantoténico  D-Pantotenato cálcico  
D-Pantenol  
DL-Pantenol  
D-pantotenat o sódico  
Vitamina B 12 Cianocobalamina  
Hidroxocobalamina  
Vitamina K 1 Fitomenadiona (2 -metil -3-fitil-1,4-naftoquinona filoquinona / fitonadiona)  
Vitamina C  Acido L -ascórbico  
L-Ascorbato sódico  
L-Ascorbato cálcico  
Acido 6 - palmitil -L-ascórbico (palmitato d e ascorbilo)  
L-Ascorbato potásico  
 
Tabla B3. Aminoácidos y otros nutrimentos nitrogenados  
L-ácido glutámico  
L-glutamina  
L-alanina  
L-arginina -L aspartato  
L- cistina  
Diclorhidrato de L -cistina  
L-arginina  
Clorhidrato de L -arginina  
L-ácido aspártico  
L-citrulina  
L-ornitina  
Monoclorhidrato de L -ornitina  
N-acetil –L-cisteí na 
N-acetil –L-metionina  
Acetato de L -lisina  
L-aspartato de L -lisina  
L-glutamato dihidrato de L -lisina  
L-aspartato de magnesio  
L-glutamato de calcio  
L-glutamato de potasio  
Citidina 5 -monofosfato  
L-histidina  
Clorhidrato de L -histidina  
Glicina  
L-isoleucina        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Clorhidrato de L -isoleucina  
L-leucina  
Clorhidrato de L -leucina  
L-lisina  
Monoclorhidrato de L -lisina  
L-cisteína  
Clorhidrato de L -cisteina  
L-metionina  
L-fenilalanina  
L-prolina 
L-serina  
L-treonina  
L-triptófano  
L-tirosina  
L-valina  
 
L-carnitina  
Clorhidrato de l carnitina  
Tartrato de L -carnitina  
Adenosina 5´ -monofosfato  
Uridina 5´ -monofosfato y su sal disódica  
Guanosina 5´ -monofosfato y su sal disódica  
Inosina 5´ -monofosfato y su sal disódica  
Bitartrato de colina  
Citrato de colina  
Colina  
Cloruro de colina  
Hidrógeno tartrato de colina  
Mioinositol  
APENDICE NORMATIVO C.  
METODOS MICROBIOLOGICOS  
C.1. PREPARACI ON Y DILUCI ON DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU AN ALISIS 
MICRO BIOL OGICO.  
C1.1  Fundamento  
Se basa en la preparación de diluciones primarias, para obtener una distribución lo más uniforme posible 
de los microorganismos presentes en la porción de muestra.  
C1.2 Reactivos y materiales  
C1.2.1  Reactivos  
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua debe 
entenderse como agua destilada.  
C1.2.1.1  Preparación de reactivos  
C1.2.1.1.1  Solución de hidróxido de sodio 1,0 N  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Hidróxido de sodio  4,0 g  
Agua 100,0 ml  
 
Preparación : Disolver el hidróxido de sodio y llevar a 100 ml con agua.  
C.1.2.1.1.2  Soluciones diluyentes  
C.1.2.1.1.2.1  Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada).  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Fosfato de Sodio monobásico  34,0 g 
Agua  1,0 l 
 
Preparación : Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con  solución de hidróxido de 
sodio 1,0 N. Llevar a un litro con agua.  Esterilizar  durante  15 minutos  a 121° ± 1,0 °C. Conservar en 
refrigeración (solución concentrada ). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un  litro con agua 
(solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se req uiera. Esterilizar a 121° ± 1,0 °C 
durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes f inales de la solución de trabajo 
deberán ser iguales a los iniciales.  
C.1.2.1.1.2.2  Agua peptonada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  1,0 g  
Cloruro de sodio  8,5 g  
Agua  1,0 l 
 
Preparación:  Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el p H a 7 ± O,1 con hidróxido de sodio 
1,0 N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera.  
Esterilizar a 121 ± 1,0 °C durante 15 minutos. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales  de la 
solución de trabajo deberán ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, 
almacenar en lugar obscuro a una temperatura entre  0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en 
condiciones tales que no alteren su volumen o composición.  
C.1.2.2  Materiales  
● Pipetas bacteriológicas  para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 1 ml y 2 ml), con tapón de 
algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total.  
● Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.  
● Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca.  
● Utensilios esterilizables para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, 
etc. 
● Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio deberán 
esterilizarse me diante:  
● Horno, durante 2 h a 170 a 175°C o 1 h a 180 °C o Autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 121 
± 1,0 °C.  
● El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones 
deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por esterilización repetida y éste debe ser 
químicamente inerte.  
C.1.3  Aparatos e instrumentos  
● Horno  para esterilizar  que alcance  una temperatura  mínima de 170°C.  
● Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada con  termómetro de máximas y  mínimas.  
● Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro calibrado 
con divisiones de 0,1°C y que mantenga la temperatura a 45 ± 0,5°C.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
● Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato o bien un hom ogeneizador 
peristáltico (Stomacher).  
● Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas estériles para homogeneizador peristáltico.  
● Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g.  
C.1.4  Procedimiento  
C.1.4.1  Preparación de la dilución primaria.  
C.1.4 .1.1 A partir de muestras líquidas:  
Para muestras líquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc.) en las cuales la distribución de 
microorganismos es homogénea o fácilmente homogeneizable por medios mecánicos (agitación, etc.)  
Para muestras congeladas de un alimento originalmente líquido o licuable, fundir por completo en baño de 
agua de 40 a 45°C un tiempo máximo de 15 minutos y homogeneizar agitando vigorosamente.  
Para la parte líquida de una muestra heterogénea la cual sea considerada suficientemente  representativa 
de la muestra total (Por ejemplo la fase acuosa de grasas animales y vegetales).  
C.1.4.1.1.1  Agitar la muestra manualmente con 25 movimientos de arriba a abajo en un arco de 30 cm 
efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 1 ml de la mues tra y diluir con 9 ml del diluyente el cual debe 
encontrarse a una temperatura similar a ésta, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.  
C.1.4.1.1.2  Siempre que la cantidad de muestra lo permita, tomar alícuotas mayores, por ejemplo 
volúmenes de  10 u 11 ml, diluidos con 90 o 99 ml, de la misma forma que se describió anteriormente.  
C.1.4.1.2  A partir de muestras sólidas o semisólidas.  
Las muestras sólidas y semisólidas congeladas, deben descongelarse en refrigeración de 4 a 8°C durante 
18 horas y no más de 24 horas antes de proceder a su análisis.  
C.1.4.1.2.1  Pesar una cantidad de 10 u 11 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plástica 
estériles de tamaño adecuado.  
C.1.4.1.2.2  Adicionar un volumen de 90 a 99 ml del diluyente llevado a una temperatura similar a la de la 
muestra.  
C.1.4.1.2.3  Operar la licuadora o el homogeneizador peristáltico de 1 a 2 minutos hasta obtener una 
suspensión completa y homogénea según se indique en la técnica corres pondiente para cada alimento. Au n 
en los equipos más lentos, este tiempo no debe exceder de 2,5 minutos.  
C.1.4.1.2.4  Permitir que las partículas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada tomando de 
las capas superiores de la suspensión.  
Cuando la dilución primaria es muy viscosa o p egajosa, adicionar más diluyente, lo cual debe tomarse en 
cuenta para las operaciones subsecuentes o expresión de resultados.  
El homogeneizador peristáltico (Stomacher) puede no ser adecuado para algunos productos (por ejemplo, 
aquellos con partículas agud as o constituyentes que no se dispersen fácilmente). Debe ser utilizado sólo 
cuando exista evidencia (publicada o por ensayos comparativos) de que los resultados obtenidos no difieren 
significativamente con aquellos obtenidos con licuadora.  
C.1.4.2  Prepara ción de las diluciones decimales adicionales.  
C.1.4.2.1  Transferir 1 ml o un múltiplo, por ejemplo, 10 u 11 ml de la dilución primaria 1 + 9 (10-1), en otro 
recipiente conteniendo nueve veces el volumen del diluyente estéril a la temperatura apropiada, evi tando el 
contacto entre la pipeta y el diluyente.  
C.1.4.2.2  Mezclar cuidadosamente cada botella de diluyente siempre de la misma manera que se describe 
en C.1.4.1.1.1.  
C.1.4.2.3  La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se va n a inocular, 
dependen del número esperado de microorganismos en la muestra, con base a los resultados de análisis 
previos y de la información que se obtenga del personal de inspección que la haya colectado. En ausencia 
total de información, trabajar con l as diluciones de la primera a la sexta.  
C.1.4.2.4  Utilizar pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las cajas que se hayan 
seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe ser menor al 10% de la capacidad total de la pipeta.  
C.1.4.2.5  Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su capacidad total, 
escurrir aplicando la punta de la pipeta una sola vez en un área de la caja Petri sin líquido.  
C.1.4.2.6  Mientras se afora el líquido de la pipeta, la punta de ésta debe apoyarse en el interior del cuello 
del frasco y mantenerla en posición vertical, para lo cual este último debe inclinarse lo necesario.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
En estudios donde se busca la presencia o ausencia de una determinada especie de microorganismos en 
0,1 ml ó 0,1 g, no es necesario preparar  diluciones mayores.  
El criterio para seleccionar las diluciones a preparar de acuerdo con el número de microorganismos 
esperado es:  
Para la técnica del número más probable utilizar tres  tubos: donde sea posible demos trar el 
microorganismo en 10 ml de la dilución más alta.  
Para la técnica de cuenta en placa, considerar aquellas en las que se puedan contar de 25 a 250 colonias 
en un mínimo de una de tres diluciones en el método de cuenta de bacterias aerobias en placa. En el caso de 
otros grupos microbianos, considerar el número especificado de colonias en la Norma Oficial Mexicana 
correspondiente.  
C.1.4.3  Duración del procedimiento.  
En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente antes del a nálisis y éstas 
deben ser usadas para inocular el medio de cultivo dentro de los 20 minutos posteriores a su preparación.  
C.2. DETERMINACI ON DE BACTERIAS COLIFORMES. T ECNICA DEL N UMERO M AS PROBABLE.  
C.2.1  Fundamento  
El método se basa en que las bacterias c oliformes,  fermentan  la lactosa incubadas a 35 ± 1° C durante 24 
a 48 horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de 
fermentación.  
C.2.2 Reactivos y materiales  
Los reactivos que a continuación se mencionan deben se r grado analítico. Cuando se indique agua debe 
entenderse como agua destilada con pH cercano a la neutralidad.  
C.2.2.1  Reactivos  
C.2.2.1.1  Soluciones diluyentes  
C.2.2.1.1.1  Solución reguladora de fosfatos (solución concentrada)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantid ades  
Fosfato monopotásico  34,0 g  
Agua  1,0 l 
Preparación : Disolver  el fosfato  en 500 ml de agua y  ajustar el pH  a 7,2 con solución de hidróxido de 
sodio 1N. Llevar a un litro con agua. Esterilizar  durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C. Conservar en  refrigerac ión 
(solución concentrada). Tomar  1,25 ml  de la solución  concentrada  y llevar a un  litro con agua.  Distribuir  en 
porciones  de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1 °C. Después  de la 
esterilización,  el pH y los volúmenes finales  de la solución  de trabajo deben ser iguales a los iniciales.  
C.2.2.1.1.2 . Agua peptonada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  1,0 g  
Cloruro de sodio  8,5 g  
Agua  1,0 l 
 
Preparación: Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio 1 
N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo  de nueve según se requiera. 
Esterilizar  durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C. Después  de la esterilización  los volúmenes  finales de la solución 
de trabaj o deben ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar en lugar 
obscuro a una temperatura entre 0 a 5°C por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales que no 
alteren su volumen o composición.  
C.2.2.1.2  Medios d e cultivo.  
Caldo  lactosado  (medio de enriquecimiento para agua potable y hielo).  
Caldo lauril  sulfato triptosa  (medio de enriquecimiento selectivo).  
Caldo lactosa bilis verde brillante (medio de confirmación).  
En el caso del análisis de agua potable y hiel o puede utilizarse caldo lactosado o caldo lauril sulfato 
triptosa con púrpura de bromocresol (concentración 0,01 g/l de medio), como alternativa al uso de campanas 
de fermentación. Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a color amari llo. 
C.2.2.1.2.1  Caldo lactosado        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Ingrediente  Medio de concentración  
1,5 Medio de concentración sencilla  
Extracto de carne  4,5 g  3,0 g 
Peptona de gelatina  7,5 g  5,0 g  
Lactosa  7,5 g  5,0 g  
Agua destilada   1000,0 ml  1000,0 ml  
 
Disolver los ingredientes en  1 l de agua, calentando si es necesario o el medio completo deshidratado, 
siguiendo las instrucciones del fabricante. Ajustar el Ph final de tal manera que después de la esterilización 
éste sea de  6,9 ± 0,2  a 25°C. Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubo s con dimensiones de 16 x 160 mm el 
medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 1,5, cada 
tubo debe tener campana de fermentación. Esterilizar en autoc lave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C. Enfriar 
rápidamente p ara evitar una exposición excesiva al calor. El aspecto del caldo es claro y de color beige. Se 
puede utilizar una concentración doble del medio de cultivo, en cuyo caso se emplearán 10 ml del caldo 
preparado, cuando se agreguen 10 ml de la muestra.  
C.2.2. 1.2.2  Caldo lauril sulfato triptosa.  
Ingrediente  Medio de concentración  
1,5 Medio de  concentración sencilla  
Triptosa  30,0 g 20,0 g 
Lactosa  7,5 g 5,0 g 
Fosfato dipotásico   4,125 g  2,75 g  
Fosfato monopotásico  4,125 g  2,75 g  
Cloruro de sodio   7,50 g  5,0 g 
Lauril sulfato  de sodio  0,15 g  0,1 g 
Agua destilada  1000,0 ml  1000,0 ml  
 
Disolver los componentes  en 1 l de agua, calentando si es necesario o el medio de cultivo completo 
deshidratado, siguiendo las instrucciones del fabricante. Ajustar el pH de ta l manera que después de la 
esterilización éste sea de 6,8 ± 0,2 a 25 °C. Distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos con dimensiones de 16 
x 160 mm el medio de concentración sencilla y de 20 ml en tubos de 20 x 200 mm el medio de concentración 
1,5, cada tubo  debe tener campana de fermentación. Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 121 ± 1,0 °C.  
Se recomienda almacenar el medio una vez preparado. Las campanas de fermentación no deben de contener 
burbujas de aire después de la esterilización. Se puede utili zar una concentración doble del medio de cultivo, 
en cuyo caso se emplearán 10 ml de caldo preparado, cuando se agreguen 10 ml de muestra.  
C.2.2.1.2.3  Lactosa bilis verde brillante  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  10,0 g 
Lactosa  10,0 g 
Sales bil iares  20,0 g 
Verde brillante  0,0133 g  
Agua  1,0 l 
Disolver los componentes o  el medio completo deshidratado en agua, calentar si es necesario. Ajustar el 
pH, de tal manera que después de la este rilización éste sea de 7,2 a 25 °C. Distribuir el medio en ca ntidades 
de 10 ml en tubos de 16  X 160 mm conteniendo campana de fermentación. Esterilizar en autoc lave por 15 
minutos a 121 ± 1,0 °C. Las campanas de fermentación no deben contener burbujas de aire después de la 
esterilización.  
C.2.2.2  Materiales  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
● Pipetas  bacteriológicas para  distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de  11 y 2 ml), con  tapón  de 
algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en  volúmenes iguales a una décima de su volumen total.  
● Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.  
● Utensili os esterilizables  para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, 
etc. 
● Tubos de cultivo 20 x 200 mm y  de 16 x 160 mm con tapones metálicos o de  rosca.  
● Campanas de fermentación (tubos de Durham).  
● Pipetas bacteriológicas  graduadas de 10 y 1 ml  
● Gradillas.  
● Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro  
● Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:  
● Horno, durante 2 horas a 170 a 175°C o 1 h a 180 °C o aut oclave, durante 15 minutos como mínimo a 
121 ± 1,0 °C. 
● El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones 
deseadas. No debe usarse material de vidrio dañado por las esterilizaciones repetidas y éste debe 
ser químicamente inerte.  
C.2.3  Aparatos e instrumentos  
● Horno para esterilizar  que alcance  una temperatura  mínima  de 170°C. 
● Incubadora  con termostato  que evite  variaciones mayores de ± 1,0 °C, provista con termómetro 
calibrado.  
● Termómetro de máximas y mí nimas.  
● Autoclave que alcance una temperatura mínima de 121 ± 1,0 °C. 
● Potenciómetro con una escala mí nima de 0,1 unidades de pH a 25 °C. 
C.2.4  Preparación de la muestra  
Las muestras deben prepararse y diluirse, siempre que sea posible, de acuerdo al Métod o de Preparación 
y Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.  
C.2.5 Procedimiento  
C.2.5.1  Para alimentos.  
Preparar suficiente número de diluciones para asegurar que todos los tubos correspondientes a la última 
dilución rindan un res ultado negativo.  
C.2.5.1.1  Prueba presuntiva  
C.2.5.1.1.1  Inoculación. Tomar tres tubos de medio de enriquecimiento de mayor concentración.  Usar una 
pipeta estéril para transferir a cada tubo 10 ml de la muestra si es líquida o  10 ml de la dilución primaria  inicial, 
en el caso de otros productos.  
C.2.5.1.1.1.1  Tomar tres tubos de concentración sencilla del medio selectivo de enriquecimiento.  Usar una 
pipeta estéril para transferir a cada uno de estos tubos 1 ml de la muestra si es líquida o 1 ml de la diluci ón 
primaria en el caso de otros productos.  
C.2.5.1.1.1.2  Para las diluciones subsecuentes, continuar como se indica en el párrafo anterior, usando 
una pipeta diferente para cada dilución. Mezclar suavemente el inóculo con el medio.  
C.2.5.2.1.2  Incubació n. Incubar los tubos a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas y observar si hay formación de 
gas, en caso contrario prolongar la incubación hasta 48 ± 2 horas  
C.2.5.1.2  Prueba confirmativa  
De cada tubo que muestre formación de gas, tomar una asada y sembrar en un número  igual de tubos con 
medio de c onfirmación. Incubar a 35 ± 0,5 °C por 24 ± 2 horas o si la formación de gas no se observa en este 
tiempo, prolongar la incubación por 48 ± 2 horas.  
En esta Norma Oficial Mexicana se considera una combinación de tres tubos  por cada dilución de la serie. 
Para algunos productos y siempre que se requiera una mayor precisión en los resultados, será necesario 
inocular una serie de cinco o diez tubos.  
C.2.6  EXPRESI ON DE LOS RESULTADOS.  
Tomar la serie de tubos de la prueba confirmativa  que dé f ormación de gas después del peri odo de 
incubación requerido y buscar el NMP en los cuadros correspondientes.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
El cuadro 3 muestra algunos ejemplos que se pueden presentar.  
Ejemplos:  
Ejemplo 1.  Cuando só lo una dilución muestra tres tubos positivos, elegir ésta y las diluciones mayores 
posteriores.  
Ejemplo 2. Cuando más de una dilución muestra tre s tubos positivos y la última da  menos de tres, elegir 
esta última y las dos diluciones anteriores más bajas.  
Ejemplo 3. Cuando en ninguna dilución hay tres tubos positivos y éstos se encuentran en más de tres 
diluciones, seleccionar las dos diluciones mayores positivas y la siguiente.  
Ejemplos 4 y 5. Cuando los tubos positivos solo se encuentran en la muestra sin diluir (10 ml o 1 g) y en la 
primera dilución (1 ml o  10-1), seleccionar las tres primeras diluciones para el cálculo del número más 
probable.  
En cada caso se obtiene un número de tres cifras, lo cual es representado en los cuadros 4 al 7, según 
corresponda. En la columna que indica el número de tubos  positivos se busca el índice del NMP.  
La técnica de NMP puede admitir gran cantidad de variaciones. Los resultados obtenidos con esta técnica 
deben ser utilizados con precaución.  Los límites de confianza están representados en los cuadros 4 al 7. Por 
ejem plo, para una muestra sólida con un NMP de 70 coliformes por gramo, los límites de confianza en el 95% 
de los casos variarán de 10 a 230 coliformes por gramo (ejemplo 3 del cuadro 3) y en un producto con 24 de 
NMP de coliformes por gramo, los límites de co nfianza son de 3,6 a 130 coliformes por gramo (ejemplo 2 
cuadro 3).  
CUADRO 3. - Ejemplos de la selección de resultados positivos para el cálculo del NMP.  
E 
J 
E 
M 
P 
L 
O Número de tubos positivos obtenidos de tres   NMP  
Tubos incubados, para las siguientes c antidades de muestra 
inoculada por tubo    
Producto    
Liquido  (ml) 10 1 10-1 10-2 10-3  Producto  Otros  
Otros Productos  (g) 1 10-1 10-2 10-3 10-4 Liquido  Otros  
Mayor dilución = menor concentración  
 
       ml-1  g-1 
1 3 3 2 1 0 15 (5) 150 (6) 
2 3 3 3 0  24 (5) 240 (6 
3 2 2 1 1 0 7 (6) 70 (7) 
4 3 3 0 0 0 2.4 (4) 24 (5) 
5 2 2 0 1 0 0,21 (4) 2,1 (5) 
 
CUADRO 4. Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados 
positivos cuando son usados varios números de tubos. (Dil uciones 10, 1,0 y 0,1  g) 
 3 TUBOS POR DILUCIO N 5 TUBOS POR DILUCIO N 
Combinación 
de positivos  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  
bajo alto bajo alto 
0-0-0 < 0,03  <0,005  <0,09  <0,02  <0,005  <0,07  
0-0-1 0,03 <0,005  <0,09  0,02 <0,005  0,07 
0-1-0 0,03 <0,005  0,13 0,02 <0,005  0,07 
0-2-0 --- --- --- 0,04 <0,005  0,11 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
1-0-0 0,04 <0,005  0,20 0,02 <0,005  0,07 
1-0-1 0,07 0,01 0,21 0,04 <0,005  0,11 
1-1-0 0,07 0,01 0,23 0,04 <0,005  0,11 
1-1-1 0,11 0,03 0,36 0,06 <0,005  0,15 
1-2-0 0,11 0,03 0,36 0,06 <0,005  0,15 
2-0-0 0,09 0,01 0,36 0,05 <0,005  0,13 
2-0-1 0,14 0,03 0,37 0,07 0,01 0,17 
2-1-0 0,15 0,03 0,44 0,07 0,01 0,17 
2-1-1 0,20 0,07 0,89 0,09 0,02 0,21 
2-2-0 0,21 0,04 0,47 0,09 0,02 0,21 
2-2-1 0,28 0,10 1,50 ---- --- --- 
2-3-0 --- --- --- 0,12 0,03 0,28 
3-0-0 0,23 0,04 1,20 0,08 0,01 0,19 
3-0-1 0,39 0,07 1,3 0,11 0,02 0,25 
 
3-0-2 0,64 0,15 3,80 --- --- --- 
3-1-0 0,43 0,07 2,1 0,11 0,02 0,25 
3-1-1 0,75 0,14 2,3 0,14 0,04 0,34 
3-1-2 1,20 0,30 3,8 --- --- --- 
3-2-0 0,93 0,15 3,80 0,14 0,04 0,34 
3-2-1 1,50 0,30 4,40 0,17 0,05 0,46 
3-2-2 2,10 0,35 4,70 -- -- -- 
3-3-0 2,40 0,36 13,0 -- -- -- 
3-3-1  4,60 0,71 24,0 -- -- -- 
3-3-2 11,0 1,50 48,0 -- -- -- 
3-3-3 >11.0  >1,50  >48.0  -- -- -- 
4-0-0 -- --- --- 0,13 0,03 0,31 
4-0-1 -- --- --- 0,17 0,05 0,46 
4-1-0 -- --- --- 0,17 0,05 0,46 
4-1-1 -- -- --- 0,21 0,07 0,63 
4-1-2 -- -- --- 0,26 0,09 0,78 
4-2-0 -- -- --- 0,22 0,07 0,67 
4-2-1 -- --- --- 0,26 0,09 0,78 
4-3-0 -- --- --- 0,27 0,09 0,80       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
4-3-1 -- --- --- 0,33 0,11 0,93 
4-4-0 -- --- --- 0,34 0,12 0,93 
5-0-0 -- --- --- 0,23 0,07 0,70 
5-0-1 -- --- --- 0,31 0,11 0,89 
5-0-2 -- --- --- 0,43 0,15 1,14 
5-1-0 -- --- --- 0,33 0,11 0,93 
5-1-1 -- --- ---- 0,46 0,16 1,2 
5-1-2 -- --- --- 0,63 0,21 1,5 
5-2-0 -- --- --- 0,49 0,17 1,3 
5-2-1 -- --- --- 0,70 0,23 1,70 
5-2-2 -- --- --- 0,94 0,28 2,2 
5-3-0 -- --- --- 0,79 0,25 1,9 
5-3-1 -- --- --- 1,10 0,31 2,5 
5-3-2 -- --- --- 1,4 0,37 3,4 
 
5-3-3 -- --- --- 1,80 0,44 5,0 
5-4-0 -- --- --- 1,30 0,35 3,0 
5-4-1 -- --- --- 1,70 0,43 4,9 
5-4-2 -- --- --- 2,20 0,57 7,0 
5-4-3 -- --- --- 2,80 0,90 8,5 
5-4-4 -- --- --- 3,50 1,20 10,0 
5-5-0 --- --- --- 2,40 0,68 7,5 
5-5-1 --- --- --- 3,50 1,60 10,0 
5-5-2 --- --- --- 5,40 1,80 14,0 
5-5-3 ---- --- --- 9,20 3,0 32,0 
5-5-4 --- --- --- 16,09  6,40 58,0 
5-5-5 ---- --- --- --- --- --- 
 
CUADRO 5 . Indice del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados 
positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 1,0, 0,1 y 0,01  g) 
 3 TUBOS POR DILUCIO N 5 TUBOS POR DILUCIO N 
Combinación 
de positivos  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  
bajo alto bajo alto 
0-0-0 <0,3 <0,05  <0,9 <0,2 <0,05  <0,7 
0-0-1 0,3 <0,05  <0,9 0,2 <0,05 0,7 
0-1-0 0,3 <0,05  1,3 0,2 <0,05  0,7 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
0-2-0 --- --- --- 0,4 <0,05  0,11 
1-0-0 0,4 <0,05  2,0 0,2 <0,05  0,7 
1-0-1 0,7 0,1 2,0 0,4 <0,05  1,1 
1-1-0 0,7 0,1 2,3 0,4 <0,05  1,1 
1-1-1 1,1 0,3 3,6 0,6 <0,05  1,5 
1-2-0 1,1 0,3 3,6 0,6 <0,05  1,5 
2-0-0 0,9 0,1 3,6 0,5 <0,05  1,3 
2-0-1 1,4 0,3 3,7 0,7 0,1 1,7 
2-1-0 1,5 0,3 4,4 0,7 0,1 1,7 
2-1-1 2,0 0,7 8,9 0,9 0,2 2,1 
2-2-0 2,1 0,4 4,7 0,9 0,2 2,1 
2-2-1 2,8 1,0 15,0 --- --- --- 
2-3-0 --- --- --- 1,2 0,3 2,8 
 
3-0-0 2,3 0,4 12,0 0,8 0,1 1,9 
3-0-1 3,9 0,7 13,0 1,1 0,2 2,5 
3-0-2 6,4 1,5 38,0 -- -- -- 
3-1-0 4,3 0,7 21,0 1,1 0,2 2,5 
3-1-1 7,5 1,4 23,0 1,4 0,4 3,4 
3-1-2 12,0 3,0 38,0 -- -- -- 
3-2-0 9,3 1,5 38,0 1,4 0,4 3,4 
3-2-1 15,0 3,0 44,0 1,7 0,5 4,6 
3-2-2 21,0 3,5 47,0 -- -- -- 
3-3-0 24,0 3,6 130,0  -- -- -- 
3-3-1 46,0 7,1 240,0  -- -- -- 
3-3-2 110,0  15,0 480,0  -- -- -- 
3-3-3 >110,0  >15,0  >480,0  -- -- -- 
4-0-0 -- --- --- 1,3 0,3 3,1 
4-0-1 -- --- --- 1,7 0,5 4,6 
4-1-0 -- --- --- 1,7 0,5 4,6 
4-1-1 -- --- --- 2,1 0,7 6,3 
4-1-2 -- --- --- 2,6 0,9 7,8 
4-2-0 -- --- --- 2,2 0,7 6,7 
4-2-1 -- --- --- 2,6 0,9 7,8       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
4-3-0 -- --- --- 2,7 0,9 8,0 
4-3-1 -- --- --- 3,3 1,1 9,3 
4-4-0 -- --- --- 3,4 1,2 3, 
5-0-0 -- --- --- 2,3 0,7 7,0 
5-0-1 -- --- --- 3,1 1,1 8,9 
5-0-2 -- --- --- 4,3 1,5 11,4 
5-1-0 -- --- --- 3,3 1,1 9,3 
5-1-1 -- --- --- 4,6 1,6 12,0 
5-1-2 -- --- --- 6,3 2,1 15,0 
5-2-0 -- --- --- 4,9 1,7 13,0 
5-2-1 -- --- --- 7,0 2,3 17,0 
5-2-2 -- --- --- 9,4 2,8 22,0 
 
5-3-0 -- --- --- 7,9 2,5 19,0 
5-3-1 -- --- --- 11,0 3,1 25,0 
5-3-2 -- --- --- 14,0 3,7 34,0 
5-3-3 -- --- --- 18,0 4,4 50,0 
5-4-0 -- --- --- 13,0 3,5 30,0 
5-4-1 -- --- --- 17,0 4,3 49,0 
5-4-2 -- --- --- 22,0 5,7 70,0 
5-4-3 -- --- --- 28,0 9,0 85,0 
5-4-4 -- --- --- 35,0 12,0 100,0  
5-5-0 -- --- --- 24,0 6,8 75,0 
5-5-1 -- --- --- 35,0 12,0 100,0  
5-5-2 -- --- --- 54,0 18,0 140,0  
5-5-3 -- --- --- 92,0 30,0 320,0  
5-5-4 -- --- --- 161,0  64,0 580,0  
5-5-5 -- --- --- >161,0  >64,0  >580,0  
 
CUADRO 6. Indice  del NMP y límites de confianza 95% para varias combinaciones de resultados 
positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones 0,1, 0,001 y 0,0001 g)  
 3 TUBOS POR DILUCIO N 5 TUBOS POR DILUCIO N 
Combinación 
de positivos  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  
bajo Alto bajo alto 
0-0-0 <3 <0,5 <9 <2 <0,5 <7 
0-0-1 3 <0,5 <9 2 <0,5 7 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
0-1-0 3 <0,5 13 2 <0,5 7 
0-2-0 --- --- --- 4 <0,5 11 
1-0-0 4 <0,5 20 2 <0,5 7 
1-0-1 7 1 21 4 <0,5 11 
1-1-0 7 1 23 4 <0,5 11 
1-1-1 11 3 36 6 <0,5 15 
1-2-0 11 3 36 6 <0,5 15 
2-0-0 9 1 36 5 <0,5 13 
2-0-1 14 3 37 7 1,0 17 
2-1-0 15 3 44 7 1,0 17 
2-1-1 20 7 89 9 2 21 
2-2-0 21 4 47 9 2 21 
 
2-2-1 28 10 150 --- --- --- 
2-3-0 --- --- --- 12 3 28 
3-0-0 23 4 120 8 1 19 
3-0-1 39 7 13,0 11 2 25 
3-0-2 64 15 380 -- -- -- 
3-1-0 43 7 210 11 2 25 
3-1-1 75 14 230 14 4 34 
3-1-2 120 30 380 -- -- -- 
3-2-0 93 15 380 14 4 34 
3-2-1 150 30 440 17 5 46 
3-2-2 210 35 470 -- -- -- 
3-3-0 240 36 130,0  -- -- -- 
3-3-1 460 71 240,0  -- -- -- 
3-3-2 1100  150 480,0  -- -- -- 
3-3-3 >1100  >150  >480,0  -- -- -- 
4-0-0 -- --- --- 13 3 31 
4-0-1 -- --- --- 17 5 46 
4-1-0 -- --- --- 17 5 46 
4-1-1 -- --- --- 21 7 63 
4-1-2 -- --- --- 26 9 78 
4-2-0 -- --- --- 22 7 67       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
4-2-1 -- --- --- 26 9 78 
4-3-0 -- --- --- 27 9 80 
4-3-1 -- --- --- 33 11 93 
4-4-0 -- --- --- 34 12 93 
5-0-0 -- --- --- 23 7 7 
5-0-1 -- --- --- 31 11 89 
5-0-2 -- --- --- 43 15 114 
5-1-0 -- --- --- 33 11 93 
5-1-1 -- --- --- 46 16 120 
5-1-2 -- --- --- 63 21 150 
5-2-0 -- --- --- 49 17 130 
 
5-2-1 -- --- --- 70 23 170 
5-2-2 -- --- --- 94 28 220 
5-3-0 -- --- --- 79 25 190 
5-3-1 -- --- --- 110 31 250 
5-3-2 -- --- --- 140 37 340 
5-3-3 -- --- --- 180 44 500 
5-4-0 -- --- --- 130 35 300 
5-4-1 -- --- --- 170 43 490 
5-4-2 -- --- --- 220 57 700 
5-4-3 -- --- --- 280 90 850 
5-4-4 -- --- --- 350 120 1000  
5-5-0 -- --- --- 240 68 750 
5-5-1 -- --- --- 350 120 1000  
5-5-2 -- --- --- 540 180 1400  
5-5-3 -- --- --- 920 300 3200  
5-5-4 -- --- --- 1600  640 5800  
5-5-5 -- --- --- >1600  >640  >5800  
 
CUADRO 7 . Indice  del NMP y límites de confianza 95% para v arias combinaciones de resultados 
positivos cuando son usados varios números de tubos. (Diluciones  0,01, 0,001 y 0,0001 g)  
 3 TUBOS POR DILUCIO N 5 TUBOS POR DILUCIO N 
Combinación 
de positivos  Indice del 
NMP por g  95% Límites de confianza  Indice del 
NMP por  g 95% Límites de confianza  
bajo Alto bajo alto 
0-0-0 <30 <5 <90 <20 <5 <70 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
0-0-1 30 <5 <90 20 <5 70 
0-1-0 30 <5 130 20 <5 70 
0-2-0 --- --- --- 40 <5 110 
1-0-0 40 <5 200 20 <5 70 
1-0-1 70 10 210 40 <5 110 
1-1-0 70 10 230 40 <5 110 
1-1-1 110 30 360 60 <5 150 
1-2-0 110 30 360 60 <5 150 
2-0-0 90 10 360 50 <5 130 
2-0-1 140 30 370 70 10 170 
2-1-0 150 30 440 70 10 170 
2-1-1 200 70 890 90 20 210 
2-2-0 210 40 470 90 20 210 
 
2-2-1 280 100 1500  --- --- --- 
2-3-0 --- --- --- 120 30 280 
3-0-0 230 40 1200  80 10 190 
3-0-1 390 70 1300  110 20 250 
3-0-2 640 150 3800  -- -- -- 
3-1-0 430 70 2100  110 20 250 
3-1-1 750 140 2300  140 40 340 
3-1-2 1200  300 3800  -- -- -- 
3-2-0 930 150 3800  140 40 340 
3-2-1 1500  300 4400  170 50 460 
3-2-2 2100  350 4700  -- -- -- 
3-3-0 2400  360 13000  -- -- -- 
3-3-1 4600  710 24000  -- -- -- 
3-3-2 11000  1500  48000  -- -- -- 
3-3-3 >11000  >1500  >48000  -- -- -- 
4-0-0 -- --- --- 130 30 310 
4-0-1 -- --- --- 170 50 460 
4-1-0 -- --- --- 170 50 460 
4-1-1 -- --- --- 210 70 630 
4-1-2 -- --- --- 260 90 780 
4-2-0 -- --- --- 220 70 670 
4-2-1 -- --- --- 260 90 780 
4-3-0 -- --- --- 270 90 800 
4-3-1 -- --- --- 330 110 930 
4-4-0 -- --- --- 340 120 930 
5-0-0 -- --- --- 230 70 700       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
5-0-1 -- --- --- 310 110 890 
5-0-2 -- --- --- 430 150 1140  
5-1-0 -- --- --- 330 110 930 
5-1-1 -- --- --- 460 160 1200  
5-1-2 -- --- --- 630 210 1500  
5-2-0 -- --- --- 490 170 1300  
5-2-1 -- --- --- 700 230 1700  
5-2-2 -- --- --- 940 280 2200  
5-3-0 -- --- --- 790 250 1900  
5-3-1 -- --- --- 1100  310 2500  
5-3-2 -- --- --- 1400  370 3400  
5-3-3 -- --- --- 1800  440 5000  
5-4-0 -- --- --- 1300  350 3000  
5-4-1 -- --- --- 1700  430 4900  
 
5-4-2 -- --- --- 2200  570 7000  
5-4-3 -- --- --- 2800  900 8500  
5-4-4 -- --- --- 3500  1200  10000  
5-5-0 -- --- --- 2400  680 7500  
5-5-1 -- --- --- 3500  1200  10000  
5-5-2 -- --- --- 5400  1800  14000  
5-5-3 -- --- --- 9200  3000  32000  
5-5-4 -- --- --- 16000  6400  58000  
5-5-5 -- --- --- >16000  >6400  >58000  
 
C.2.7 Informe de la prueba  
Informar "Número más probable (NMP) de coliformes po r gramo o mililitro de muestra".  
En caso de muestras de agua informar NMP/100 ml.  
C.3. M ETODO PARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA.  
C.3.1 Fundamento  
El método permite determinar el número de microorganismos coliformes presentes en una muestra, 
utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en 
aproximadamente 24 h, dando como resultado la producción de gas y ácidos orgánicos, los cuales viran el 
indicador de pH y precipitan las sales  biliares.  
C.3.2  Reactivos y  materiales  
C.3.2.1  Reactivos  
Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser  grado analítico y cuando se indique agua debe 
entenderse como agua destilada.  
C.3.2.1.1  Soluciones diluyentes  
C.3.2.1.1.1  Solución reguladora  de fosfatos (solución concentrada)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Fosfato monopotásico  34,0 g  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Agua  1,0 l 
Preparación : Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de 
sodio 1,0 N. Llevar con agua a un litro. Es terilizar a 121  ± 1,0°C durante 15 minutos. Conservar en 
refrigeración (solución concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a un  litro con agua 
(solución de trabajo). Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterili zar durante 15 minutos 
a 121  ± 1,0°C. Después de la esterilización, el pH y los volúmenes finales de la solución de trabajo deben ser 
iguales a los iniciales.  
C.3.2.1.1.2  Agua Peptonada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  1,0 g  
NaCl  8,5 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con hidróxido de sodio  1,0 
N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml o en cualquier volumen múltiplo de nueve según se requiera. 
Esterilizar durante 15 minutos a 121 ± 1,0 °C. Después de la esterilización, los volúmenes  finales  de la 
solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales. Si este diluyente no es usado inmediatamente, almacenar 
en lugar obscuro a una temperatura entre 0 a 5°C  por un tiempo no mayor de un mes, en condiciones tales 
que no alteren su volumen o composición.  
C.3.2.1.2  Medio de Cultivo  
Agar -rojo- violeta -bilis-lactosa  (RVBA)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  7,0 g  
Extracto de levadura  3,0 g  
Lactosa  10,0 g  
Sales biliares  1,5 g  
Cloruro de s odio 5,0 g  
Rojo neutro  0,03 g  
Cristal violeta  0,002 g  
Agar  15,0 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Mezclar los componentes en el agua y dejar reposar  durante algunos minutos. Mezclar 
perfectamente y ajustar el pH a 7,4 con ácido  clorhídrico 0,1N o con hidróxid o de sodio 0,1N a 25°C, de forma 
que después del calentamiento se mantenga en este valor. Calentar con agitación constante y hervir durante 2 
minutos. Enfriar inmediatamente el medio en un baño  de agua  hasta que llegue a 45°C. Evitar el 
sobrecalentamiento del medio. No debe esterilizarse en  autoclave. Usar el medio dentro de las tres primeras 
horas después de su preparación. En el caso de utilizar medio de cultivo deshidratado, seguir las 
instrucciones del fabricante.  
C.3.2.2  Materiales  
● Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si  es necesario de 11 y 2 ml), con tapón de 
algodón.  Las pipetas  pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una  décima de su volumen total.  
● Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.  
● Tubos de  16 X 150 mm con tapón de rosca.  
● Utensilios esterilizables  para la obtención de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas, 
etc. 
● Cajas  Petri.  
● Todo el  material  e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio debe esteri lizarse 
mediante:        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
● Horno, durante 2 h a 170 - 175°C, o 1 h a 180°C; o en autoclave, durante 15 minutos como mínimo a 
121 ± 1,0°C.  
● El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones 
deseadas. No debe usars e material de vidrio dañado por las esterilizaciones repetidas y éste debe 
ser químicamente inerte.  
C.3.3 Aparatos e instrumentos  
● Horno para esterilizar que alcance una  temperatura  mínima  de 170°C.  
● Autoclave con termómetro y manómetro, calibrada  con te rmómetro de máximas y mínimas.  
● Baño de agua con control de temperatura y circulación mecánica, provista con termómetro c alibrado 
con divisiones de 0,1° C y que mantenga la temperatura a 45 ± 1,0°C.  
● Vasos para licuadora con tapa esterilizables o bolsas e stériles para homogeneizador peristáltico.  
● Incubadora con termostato que evite variaciones  mayores de ± 1,0° C, provista con termómetro 
calibrado.  
● Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadrículada y lente 
amplificado r. 
● Registrador mecánico o electrónico.  
● Microscopio óptico.  
● Potenciómetro con una escala mí nima de 0,1 unidades de pH a 25 °C. 
C.3.4  Preparación de la muestra  
La preparación de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en el método de Preparación  y Dilución 
de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.  
C.3.5 Procedimiento  
C.3.5.1  Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la  muestra líquida directa o de la dilución primaria, 
utilizando para tal propósito una pipeta estéril.  
C.3.5.2  Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando 
una pipeta  estéril diferente para cada dilución.  
C.3.5.3  Verter de 15 a 20 ml del medio RVBA fundido y mantenido  a 45 ± 1,0°C en baño de agua. En el 
caso de util izar cajas de Petri de plástico se vierte de 10 a 15 ml del medio. El  tiempo transcurrido entre la 
preparación de la dilución primaria y el momento en que se vierte el medio de cultivo, no debe exceder  de 20 
minutos.  
C.3.5.4  Mezclar cuidadosamente el inóc ulo con el medio con seis movimientos de derecha a izquierda, 
seis movimientos en el sentido de las manecillas del reloj, seis movimientos en el sentido contrario al de las 
manecillas del reloj y  seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa y niv elada. Permitir que la mezcla 
solidifique dejando las cajas Petri  reposar sobre una superficie horizontal fría.  
C.3.5.5  Preparar una caja control con 15 ml de medio para verificar la esterilidad.  
C.3.5.6 Después de que está el medio  completamente solidific ado en la caja, verter aproximadamente 4 ml 
del medio RVBA a 45 ± 1,0°C en la superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique.  
C.3.5.7  Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35°C, durante 24 ± 2 horas.  
C.3.5.8  Después del per iodo especif icado para la incubación, contar las colonias con el contador  de 
colonias.  
C.3.5.9  Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150  colonias. Las colonias típicas son de color 
rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un halo de  precipitación debido a las sales biliares, el 
cual es de color rojo claro o rosa, la morfología colonial es  semejante a lentes biconvexos con un diámetro de 
0,5 a 2,0 mm.  
C.3.6 Expresión de los resultados  
C.3.6.1 Cálculo del Método  
C.3.6.1.1  Placas  que contienen entre 1 5 y 150 colonias características.  
Separar las placas que contienen el número antes mencionado de colonias  características en dos 
diluciones consecutivas. Contar las colonias presentes. Calcular el número de coliformes por mililitro o por Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
gramo de producto,  multiplicando el número de colonias por el inverso de la dilución correspondiente, 
tomando los criterios del método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.  
C.3.6.1.2  Placas que contienen menos de 15 colonias características.  
Si cada una de las plac as tiene menos de 15 colonias características, reportar el número obtenido seguido 
de la dilución correspondiente.  
C.3.6.1.3  Placas con colonias no características.  
Si en las placas no hay colonias características, reportar el resultado como: menos de un c oliforme por 1/d 
por gramo, en  donde d es el factor de dilución.  
C.3.7 Informe de la prueba  
Informar: UFC/g o ml en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35°C durante 24 ± 2 h.  
En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar uti lizando como referencia la dilución 
más baja utilizada, por ejemplo dilución 10-1. 
En caso de no observar crecimiento en la muestra sin diluir se informa: "no desarrollo de coliformes por ml".  
C.4. M ETODO PARA LA DETERMINACI ON DE Salmonella  EN ALIMENTOS.  
C.4.1 Fundamento  
La presente técnica para la detección de  Salmonella  en alimentos, describe un esquema general que 
consiste de 5 pasos básicos:  
C.4.1.1  Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo no selectivo, 
que perm ite restaurar las células de  Salmonella  dañadas a una condición fisiológica estable.  
C.4.1.2  Enriquecimiento selectivo, empleado con el propósito de incrementar las poblaciones de 
Salmonella  e inhibir otros organismos presentes en la muestra.  
C.4.1.3  Selec ción en medios sólidos, en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el 
crecimiento de otros géneros diferentes a Salmonella  y permite el reconocimiento visual de colonias 
sospechosas.  
C.4.1.4  Identificación bioquímica, este paso permite la identificación gené rica de los cultivos de Salmonella  
y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.  
C.4.1.5  Serotipificación, es una técnica serológica que permite la identificación específica de un cultivo.  
C.4.2 Reactivos y materiales  
En caso de dispone rse de fórmulas comerciales deshidratadas, se deben seguir las instrucciones 
impresas en la etiqueta respectiva para su preparación.  
Las sustancias químicas usadas para preparar los medios de cultivo y los reactivos deben ser  grado 
analítico.  
C.4.2.1 React ivos 
C.4.2.1.1 Medios de pre -enriquecimiento  
C.4.2.1.1.1  Agua de peptona tamponada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  10,0 g  
Cloruro sódico  5,0 g  
Fosfato sódico dibásico  3,5 g  
Fosfato potásico monobásico  1,5 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Disolver l os componentes en agua, calentando si es necesario. Ajustar el pH, si es 
necesario, después de la esterilización a 7,0. Distribuir en recipientes de vidrio esterilizables con la capacidad 
necesaria para obtener las porciones necesarias para la prueba. Este rilizar por 20 min a 121 ± 1°C  
C.4.2.1.1.2  Caldo lactosado  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne  3,0 g        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Peptona  5,0 g  
Lactosa  5,0 g  
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 6,9 ± 0,2  
Preparación: Disolver los ingredientes en agua, calentando a 65°C.  Distribuir en porciones de 225 ml, en 
frascos de 500 ml.. Esterilizar durante 15 min a 121°C ± 1°C  
C.4.2.1.2 Caldo de enriquecimiento  
C.4.2.1.2.1  Caldo selenito -cistina  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Triptona o polipeptona  5,00 g  
Lactosa  4,00 g  
Fosfa to disódico  10,00 g  
Selenito ácido de sodio  4,00 g  
L-cistina  0,01 g  
Agua destilada  1,00 l  
pH final: 7,0 ± 0,2 a 25°C  
Preparación : Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y distribuir en volúmenes de 10 
y 225 ml en recipientes es tériles, según se requiera. El caldo así preparado es transparente. De preferencia 
usarlo el mismo día de su preparación. Si se desea conservar el medio por varios días, puede exponerse al 
calor en autoclave por 5 min a 110°C ± 1°C, tomando entonces un col or salmón.  
C.4.2.1.2.2  Caldo tetrationato  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Proteosa peptona o tristona  5,0 g  
Sales biliares  1,0 g  
Carbonato de calcio  10,0 g  
Tiosulfato de sodio pentahidratado  30,0 g  
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 7,0 ± 0,1  
Preparació n: Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril. Distribuir, agitando 
constantemente, en porciones de 10 y 225 ml, en recipientes estériles. Guardar en refrigeración. Antes de 
usar el medio, agregar 2 ml de una solución yodo -yoduro y 1 m l de solución de verde brillante al 0,1% por 
cada 100 ml de caldo. El medio una vez adicionado de yodo no debe calentarse y debe usarse el mismo día 
de su preparación.  
C.4.2.1.2.3  Vassiliadis -Rappaport  
Solución A  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Tristona  5,0 g  
Cloruro de sodio  8,0 g  
Fosfato de potasio dihidrogenado  1,6 g  
Agua destilada  1,0 l 
Disolver los componentes en agua por calentamiento cercano a 70°C  
Solución B  
FORMULA  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Ingredientes  Cantidades  
Cloruro de magnesio hexahidratado  400,0 g  
Agua dest ilada  1,0 l 
Disolver el cloruro de magnesio en agua. Como esta sal es muy higroscópica es conveniente disolver el 
contenido entero de cloruro de magnesio desde un recipiente recientemente abierto de tal modo que la 
concentración de la solución sea de 0,4 g/ml. Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente  
Solución C  
Ingredientes  Cantidades  
Oxalato de verde de malaquita  0,4 g 
Agua destilada  100,0 ml  
 
Disolver el oxalato de verde de malaquita en agua. Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente  
Medio completo  
Ingredientes  Cantidades  
solución A  1 000 ml  
solución B  100 ml  
solución C  10 ml  
 
Preparación:  Adicionar 1 000 ml de la solución A, 100 ml de la solución B y 10 ml de la solución C. Ajustar 
el pH si es necesario, de tal manera que después de  la esterilización sea de 5,2.  Distribuir  antes de usar 
dentro de tubos en cantidades de 10 ml. Almacenar en refrigeración.  
C.4.2.1.2.4  Caldo de Soya Tripticasa  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Tripticasa o triptosa  17,0 g  
Fitona  3,0 g  
Glucosa  2,5 g  
Cloruro de sodio  2,5 g  
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 7,3 ± 0,2  
Preparación:  Disolver los ingredientes en 1 litro de agua destilada, calentando lentamente hasta su 
disolución completa. Distribuir  porciones  de 225 ml dentro de matraces de 500 ml y esteriliz ar en autoclave 
durante 15 min a 121°C ± 1°C.  
C.4.2.1.2.5  Leche descremada reconstituida  
Suspender 100 g de leche descremada en polvo en un litro de agua destilada. Agitar circularmente hasta 
disolución. Distribuir en volúmenes de 225 ml en matraces Erlenm eyer de 500 ml. Esterilizar a 121 °C ± 1°C 
por 15 min. El volumen final debe corregirse para mantener 225 ml.  
C.4.2.1.2.6  Caldo soya tripticasa estéril adicionado con sulfito de potasio.  
Adicionar al caldo soya tripticasa 5 g de sulfito de potasio por cada 1000 ml de medio, quedando una 
concentración final de sulfito de potasio del 0,5%. Adicionar el sulfito de potasio antes de esterilizar en 
autoclave en la forma habitual.  
C.4.2.1.3 Medios de Aislamiento  
C.4.2.1.3.1  Agar verde brillante (VB)        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
FORMULA  
Ingred ientes  Cantidades  
Extracto de levadura  3,0000  g 
Polipeptona (Proteosa peptona No. 3)  10,0000  g 
Cloruro de sodio  5,0000  g 
Lactosa  10,0000  g 
Sacarosa  10,0000  g 
Rojo de fenol  0,0800  g 
Agar  20,0000  g 
Verde brillante  0,0125  g 
Agua destilada  1,0000  l 
pH final: 6,9 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada y calentar a ebullición, hasta 
disolución completa. Ajustar el pH. Esterilizar en autoclave por 15 min a 121°C ± 1°C. El sobrecalentamiento 
del medio disminuye su sele ctividad. Enfriar el medio a 50°C y distribuirlo en cajas de petri estériles. El 
aspecto del medio es obscuro, de color marrón.  
C.4.2.1.3.2  Agar con sulfito de bismuto  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne de res  5,000  g 
Mezcla de peptonas  10,000  g 
Glucosa  5,000  g 
Fosfato disódico (anhidro)  5,000  g 
Sulfato ferroso (anhidro)  0,300  g 
Sulfito de bismuto  8,000  g 
Verde brillante  0,025  g 
Agar  20,000  g 
Agua destilada  1,000  l 
pH final: 7,6 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en un l itro de agua. Calentar hasta su disolución completa, 
agitando frecuentemente. Ajustar el pH. Enfriar a 45°C y verter en cajas de petri estériles, distribuyendo de 
manera homogénea el precipitado propio del medio. El aspecto de las placas es opaco, de color  verde pálido 
y deben usarse el mismo día de su preparación. Si la coloración es parda, no deben utilizarse. El medio no 
debe esterilizarse en autoclave; el sobrecalentamiento afecta su selectividad.  
C.4.2.1.3.3  Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD)  
FORMUL A 
Ingredientes  Cantidades  
Xilosa  3,75 g 
L-lisina  5,00 g 
Lactosa  7,50 g 
Sacarosa  7,50 g 
Cloruro de sodio  5,00 g 
Extracto de levadura  3,00 g 
Rojo de fenol  0,08 g Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Agar  15,00  g 
Desoxicolato de sodio  2,50 g 
Citrato férrico -amónico  0,80 g 
Tiosulfato de sodio  6,80 g  
Agua destilada  1,00 l 
pH final: 6,9 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada, y calentar en baño de agua a 
55°C, agitando frecuentemente, hasta disolución completa. Ajustar el pH. Enfriar a 50°C y verte r en cajas de 
petri estériles. No se esterilice. El sobrecalentamiento produce una precipitación; la reactividad del medio 
puede ser satisfactoria, pero las colonias suelen ser muy pequeñas. El aspecto del medio es claro y de color 
rojo brillante.  
C.4.2.1. 3.4 Agar para Salmonella y Shigella (SS)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne  5,000  g 
Polipeptona *  5,000  g 
Lactosa  10,000  g 
Sales biliares  8,500  g 
Citrato de sodio dihidratado  8,500  g 
Tiosulfato de sodio pentahidratado  8,500  g 
Citrato  férrico  1,000  g 
Agar  13,500  g 
Rojo neutro  0,025  g 
Verde brillante  0,330  mg 
Agua destilada  1,000  l 
pH final: 7,0 ± 0,2  
* La polipeptona se puede sustituir por 2,5 g de peptona de caseína y 2,5 g de peptona de carne.  
Preparación:  Suspender los ingredie ntes en un litro de agua destilada estéril y calentar a ebullición hasta 
disolución completa. Ajustar el pH. No esterilizar en autoclave. Enfriar a 50°C y distribuir en cajas de petri 
estériles en condiciones asépticas. El aspecto del medio fundido es clar o y de color rosado.  
C.4.2.1.3.5  Agar entérico Hektoen  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Proteosa peptona  12,000  g 
Extracto de levadura  3,000  g 
Lactosa  12,000  g 
Sacarosa  12,000  g 
Salicina  2,000  g 
Sales biliares  9,000  g 
Cloruro de sodio  5,000  g 
Tiosu lfato de sodio  5,000  g 
Citrato amónico férrico  1,500  g 
Azul de bromotimol  0,064  g 
Fuscina ácida  0,100  g       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Agar  13,500  g 
Agua  1,000  l 
pH final: 7,5 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en agua destilada, hervir con agitación hasta completa 
disolución del agar. No sobrecalentar.  Dejar enfriar a 55 - 60°C y distribuir en cajas de petri estériles en 
condiciones asépticas.  
C.4.2.1.4 Medios para pruebas bioquímicas  
C.4.2.1.4.1  Agar de tres azúcares y hierro (TSI)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona de carne *  1,0 g 
Peptona de caseína *  1,0 g 
Cloruro de sodio  0,5 g 
Lactosa  1,0 g 
Sacarosa  1,0 g 
Glucosa  0,1 g 
Agar  1,3 g 
Rojo de fenol  2,5 mg 
Sulfato ferroso amónico -Pentahidratado  20,0 mg 
Tiosulfato de sodio  20,0 mg 
Agua destilada  100,0  ml 
pH final: 7,3 ± 0,2  
* Estas peptonas se pueden sustituir por 2 g de polipeptona.  
Preparación:  Suspender los ingredientes en 100 ml de agua destilada. Calentar a ebullición, agitando 
ocasionalmente, hasta disolución completa. Enfriar a 60°C y ajustar el pH . Distribuir en volúmenes de 3 ml en 
tubos de 13 x 100 mm y esterilizar a 121°C  ± 1°C durante 15 min. Inclinar los tubos de manera que el medio 
de cultivo en el fondo alcance una altura de 3 cm y una profundidad de 4 cm. El medio es de color rojo.  
C.4.2.1. 4.2 Agar de hierro y lisina (LIA)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona de gelatina  0,5 g 
Extracto de levadura  0,3 g 
Glucosa  0,1 g 
L-lisina  1,0 g 
Citrato férrico -amónico  50,0 mg 
Tiosulfato de sodio anhidro  4,0 mg 
Púrpura de bromocresol  2,0 mg 
Agar 1,5 g 
Agua destilada  100,0  ml 
pH final: 6,7 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en el agua destilada y mezclar bien, calentar hasta ebullición 
con agitación frecuente hasta conseguir la disolución completa. Ajustar el pH. Distribuir en volúm enes de 3 ml 
en tubos de 13 x 100 mm, con tapón de rosca. Esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C durante 12 min. Dejar 
que los tubos se enfríen en posición inclinada, de tal modo que se obtengan columnas de medio de 4 cm y 
una superficie inclinada de 2 cm.  
El medio ya preparado es de color púrpura.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
C.4.2.1.4.3  Agar nutritivo  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne  3,0 g 
Peptona  5,0 g 
Agar  15,0 g 
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 6,8 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los  ingredientes en agua.  Dejar r eposar de 5 a 10 min. Calentar a ebullición 
hasta disolución completa. Distribuir en tubos de 13 x 100 mm, en cantidades de 1/3 de su volumen. 
Esterilizar a 121°C ± 1°C por 15 min. Inclinar los tubos antes que el agar solidifique.  
C.4.2.1.4.4  Medio de SIM (para Sulfuro, Indol y Movilidad)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne  3,000  g 
Peptona  30,000  g 
Hierro peatonizado  0,200  g 
Tiosulfato de sodio  0,025  g 
Agua destilada  1,000  l 
pH final: 7,3 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en  el agua destilada, calentar a ebullición agitando 
frecuentemente hasta lograr una disolución completa. Enfriar a 50°C y ajustar el pH. Distribuir el medio en 
volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C durante 15 min . Se 
dejan enfriar los tubos en posición vertical.  
C.4.2.1.4.5  Agar citrato de Simmons   
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Fosfato de amonio  1,00 g 
Fosfato dipotásico  1,00 g 
Cloruro de sodio  5,00 g 
Citrato de sodio  2,00 g 
Sulfato de magnesio  0,20 g 
Azul de bromotimol  0,08 g 
Agar  15,00  g 
Agua destilada  1,00 l 
pH final: 6,8 ± 0,2  
Preparación : Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando 
frecuentemente hasta lograr una disolución completa. Ajustar el pH. Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml 
en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C durante 15 min. Dejar enfriar los tubos en 
posición inclinada.  
C.4.2.1.4.6  Caldo MR -VP (Rojo de metilo -Voges Proskauer)        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Peptona  7,0 g 
Dextrosa  5,0 g 
Difosfato de potasio  5,0 g 
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 6,9 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando 
frecuentemente hasta lograr una disolución completa. Ajustar el pH. Dist ribuir el medio en volúmenes de 3 ml 
en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C durante 15 min.  
C.4.2.1.4.7  Caldo manitol  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de carne  1,000  g 
Proteosa peptona  10,000  g 
Cloruro de sodio  5,000  g 
Rojo de fenol  0,018  g 
Manitol  10,000  g 
Agua  1,000 l  
pH final: 7,4 ± 0,2  
Preparación: Suspender 26 g del medio deshidratado en un litro de agua, mezclar y ajustar el pH. 
Distribuir en volúmenes  de 2 a 3 ml  en tubos  de 13 x 100 mm. Esterilizar a 121°C ±  1°C durante 15 min  
C.4.2.1.4.8  Caldo malonato  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Extracto de levadura  1,000  g 
Sulfato de amonio  2,000  g 
Fosfato dipotásico  0,600  g 
Fosfato monopotásico  0,400  g 
Cloruro de sodio  2,000  g 
Malonato  3,000  g 
Glucosa  0,250  g 
Azul de bromotimol  0,025  g 
Agua  1,000  l 
pH final: 6,7 ± 0,2  
Preparación:  Suspender los ingredientes en agua, mezclar y ajustar el pH. Distribuir en tubos de 13 x 100 
mm en cantidades de 3 ml. Esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C durante 15 min.  
C.4.2. 1.4.9  Caldo Urea  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Urea  20,00  g 
Extracto de levadura  0,10 g 
Fosfato monopotásico  9,10 g 
Fosfato disódico  9,50 g 
Rojo de fenol  0,01 g 
Agua  1,00 l 
pH final: 6,8 ± 0,2  
Preparación:  Disolver los ingredientes en agua destil ada. NO CALENTAR. Esterilizar por filtración a 
través de membrana 0,45 µm o en autoclave de 5 a 8 lb de presión durante 15 min. Distribuir asépticamente 
de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 x 100 mm.  
C.4.2.1.4.10  Caldo de urea rápido  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
FORMULA  
Ingrediente s Cantidades  
Urea  20,000  g 
Extracto de levadura  0,100  g 
Fosfato monopotásico  0,091  g 
Fosfato disódico  0,095  g 
Rojo de fenol  0,010  g 
Agua  1,000  l 
pH final: 6,8 ± 0,2  
Preparación:  Disolver los ingredientes en agua destilada. NO CALENTAR. Esterilizar p or filtración a 
través de membrana 0,45 µm. Distribuir asépticamente de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 x 100 mm.  
C.4.2.1.4.11  Caldo infusión cerebro corazón   
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Infusión cerebro corazón  200,0  g 
Infusión de corazón de re s 250,0  g 
Proteosa peptona  10,0 g 
Cloruro de sodio  5,0 g 
Fosfato disódico dodecahidratado  2,5 g 
Dextrosa  2,0 g 
Agua destilada  1,0 l 
pH final: 7,4 ± 0,2  
Preparación:  Disolver los ingredientes en agua destilada, calentar suavemente. Distribuir y esteri lizar a 
121°C ± 1°C durante 15 min.  
C.4.2.1.5 Soluciones  
C.4.2.1.5.1  Solución verde brillante al 0,1% (1:1000)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Verde brillante  0,1 g 
Agua destilada estéril  100,0 ml  
 
Disolver  0,1 g de verde brillante en agua destilada es téril hasta completar 100 ml.  
C.4.2.1.5.2  Solución de yodo -yoduro  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Cristales de yodo  6,0 g 
Yoduro de potasio  6,0 g 
Agua destilada  100,0 ml  
Disolver los cristales y el yoduro de potasio en agua destilada hasta completar 1 00 ml.  
Conservar en frasco ámbar  
C.4.2.1.5.3  Solución salina al 0,85%        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Cloruro de sodio  0,85 g 
Agua destilada  100,00  ml 
Disolver el cloruro de sodio en el  agua y esterilizar a 121°C ± 1 °C durante 15 min.  
C.4.2.1.5.4  Soluc ión salina formalizada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Solución de formaldehído (36 -38%)  6,0 ml 
Cloruro de sodio  8,5 g 
Agua destilada  1,0 l 
Disolver 8,5 g de cloruro de sodio en 1 litro de agua destilada. Esterilizar a 121°C ± 1°C durante 15 min. 
Enfriar a temperatura ambiente. Adicionar 6 ml de la solución de formaldehído. No esterilizar después de la 
adición de formaldehído.  
C.4.2.1.5.5  Reactivo de Kovac  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
p-dimetil -aminobenzaldehido  5,0 g 
Alcohol amílico  75,0 ml 
Acido clorhídrico concentrado  25,0 ml 
Disolver el p -dimetil -aminobenzaldehído en el alcohol amílico y después agregar el ácido clorhídrico 
lentamente. Conservar en frasco ámbar en refrigeración.  
C.4.2.1.5.6  Solución de alfa -naftol al 5%  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Alfa-naftol  5,0 g 
Alcohol  100,0 ml  
Disolver  5 g de alfa-naftol en alcohol hasta completar 100 ml.  
C.4.2.1.5.7  Solución de rojo de metilo  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Rojo de metilo  0,10 g 
Alcohol etílico  300,00  ml 
agua destilada c.b.p  500,00  ml 
Disolver el rojo de metilo en el alcohol etílico y adicionar agua hasta completar 500 ml.  
C.4.2.1.5.8  Solución de hidróxido de potasio al 40%  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Hidróxido de potasio  40,0 g 
Agua destilada  100,0 ml  
Disolver 40 g de hidróxido de potasio en agua hasta completar 100 ml.  
C.4.2.1.5.9  Solución de gelatinasa al 5%  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
FORMULA  
Ingredientes  Cantidades  
Gelatinasa  5,0 g 
Agua  100,0 ml  
Disolver 5 g de gelatinasa en 100 ml de agua destilada. NO CALENTAR.  
C.4.2.1.6 Antisueros  
● Antisuero polivalente somático (O)  
● Antisuero polivalente flagelar (H)  
● Antisuero Vi  
C.4.2.2 Material  
● Matraces Erlenmeyer de 500 ml  
● Recipientes de boca ancha , de capacidad apropiada para contener las muestras simples y 
compuestas  
● Angulos de vidrio  
● Cucharas, bisturís, cuchillos y pinzas  
● Tubos de ensaye de 16 x 150 mm y de 20 x 100 mm  
● Tubos para serología de 10 x 75 mm o de 13 x 100 mm  
● Pipetas bacteriológicas de  10,0 y 5,0 ml, graduadas en 0,1 ml y protegidas con tapón de algodón.  
● Pipetas de  1 ml, con graduaciones de 0,01 ml  
● Cajas de Petri estériles de vidrio o desechables  
● Rejillas para tubos de ensaye  
● Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro  
● Papel pH (intervalo de 6 -8) con graduaciones máximas de 0,4 unidades de pH para cambios de color  
Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:  
Horno, durante 2 horas a 170 -175°C o autoclave, durante 15 min como mínimo a 121°C ± 1°C  
C.4.3 Equipo  
● Horno para esterilizar que alcan ce los 180 °C 
● Incubadora con termostato  para evitar variaciones mayores de ± 0,1°C y termómetro.  
● Autoclave con termómetro o manómetro, probado con termómetro de máximas.  
● Baño maría con termostato y termómetro.  
● Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g  
● Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato, con vasos esterilizables (vidrio o 
aluminio).  
● Mecheros Bunsen o Fisher  
● Potenciómetro  
C.4.4 Procedimiento  
C.4.4.1  Preparación de los alimentos para el aislamiento de Salmonella  
Los siguientes métodos se basan en el análisis de 25 g de la muestra  analítica  en una proporción  de 1:9 
de muestra/ caldo. Esta cantidad puede variarse siempre que se mantenga la misma proporción. Se 
recomienda una muestra de 25 g o más.  
C.4.4.1.1  Procedimient o general para la preparación de muestras        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Pesar asépticamente 25 g de la muestra en un vaso estéril de licuadora o en bolsa estéril para trabajar en 
homogeneizador peristáltico (stomacher). Adicionar 225 ml del medio de preenriquecimiento estéril 
(generalm ente caldo lactosado, a menos que se indique otro) y licuar si es necesario durante un min. 
Transferir asépticamente la mezcla homogeneizada a un recipiente estéril de boca ancha con tapón de rosca 
y dejar reposar por 60 min a temperatura ambiente con la t apa bien enroscada. Mezclar bien y determinar el 
pH aproximado con papel pH. Ajustar, si es necesario, a un pH 6,8 ± 0,2 con hidróxido de sodio 1N o ácido 
clorhídrico  1N estériles. Mezclar y cubrir el recipiente enroscando suavemente la tapa.  
Incubar 24 ± 2 h a 35 °C. Continuar como se indica en C.4.4.2.1  
C.4.4.1.2  Procedimiento específico para la preparación  
C.4.4.1.2.1  Productos que contienen huevo en su formulación (pastas para sopa, rollos chinos, etc.); 
ensaladas preparadas (jamón, huevos, pollo, atún,  pavo); frutas frescas, congeladas o secas; crustáceos 
(camarones, cangrejos, jaibas, langostinos, langostas) y pescado.  
Preferentemente no descongelar la muestra antes de su análisis, si esto es necesario, utilizar caldo 
lactosado como medio de preenrique cimiento, licuar dos min. Continuar después de la incubación como en  
C.4.4.2.1  
C.4.4.1.2.2  Carnes, sustitutos de carnes, derivados cárnicos, sustancias de origen animal, productos 
glandulares y harinas (pescado, carne y hueso).  
C.4.4.1.2.2.1  Productos proc esados térmicamente y productos secos. Se sigue el procedimiento señalado 
en C.4.4.1.1 hasta la homogenización. Si la muestra es en polvo o molida, el licuado puede omitirse. Después 
de reposar, mezclar bien y ajustar el pH como se indica en el procedimien to general. Para emulsionar las 
grasas, agregar los detergentes en las mismas proporciones y con las mismas recomendaciones que para el 
coco. La cantidad de los mismos dependerá en gran medida de la composición del alimento. Los detergentes 
no serán necesa rios en los productos glandulares en polvo. Incubar las muestras como se indica en C.4.4.1.1.  
C.4.4.1.2.2.2  Productos crudos o altamente contaminados. Pesar porciones de 25 g de producto en dos 
vasos para licuadora. Si la muestra es en polvo o molida, el l icuado puede omitirse y el producto puede 
pesarse directamente en matraces Erlenmeyer estériles de 500 ml. Adicionar 225 ml de caldo selenito cistina 
o 225 ml de caldo tetrationato (sin verde brillante) a cada muestra analítica. Licuar por dos min y pasar 
asépticamente  a matraces  Erlenmeyer  de 500 ml. Dejar reposar y ajustar el pH como se indica en C.4.4.1.1  
Adicionar 2,25 ml de solución de verde brillante  0,1%  y 4,5 ml de solución yodo -yoduro a la muestra que 
se enriquecerá con caldo tetrationato. Homogeni zar e incubar. Continuar como se indica en  C.4.4.2.1  
C.4.4.2  Aislamiento de  Salmonella  
C.4.4.2.1  Cerrar firmemente el tapón de rosca de los matraces con los cultivos de preenriquecimiento y 
agitar suavemente, transferir respectivamente 1 ml de la mezcla  a un tubo que contenga 10 ml de caldo 
tetrationato y a otro con 10 ml de caldo selenito cistina. Como alternativa, en sustitución del caldo tetrationato 
puede emplearse el medio Vassiliadis -Rappaport.  
C.4.4.2.2  Incubar de 18 a 24 h a 35 °C o, para alimentos f uertemente contaminados a 42°C por el mismo 
período. Estriar los productos que fueron directamente enriquecidos en medios selectivos.  
C.4.4.2.3  Mezclar el tubo con caldo selenito cistina y estriar en  agar xilosa lisina desoxicolato (XLD), agar 
verde brilla nte (VB) y una tercera caja con cualquiera de los medios selectivos adicionales (agar entérico 
Hektoen, agar Sulfito de Bismuto o Agar SS).  
Efectuar el mismo procedimiento para el caldo tetrationato.  
Incubar las placas 24 ± 2 h a 35°C.  
C.4.4.2.4  Examinar l as placas para investigar la presencia de colonias típicas de Salmonella,  de acuerdo 
con las siguientes características:  
Agar XLD: colonias rosas o rojas que pueden ser transparentes con o sin centro negro. En algunos casos 
las colonias pueden aparecer com pletamente negras.  
Agar VB: colonias rojas o rosas que pueden ser transparentes rodeadas por medio enrojecido; las 
bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias amarillas.  
Agar entérico Hektoen: colonias verdes o azulverdes con o sin centro negro. En algunos casos las 
colonias pueden aparecer completamente negras.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Agar Sulfito de Bismuto: las colonias típicas de  Salmonella  pueden ser cafés, grises o negras; con o sin 
brillo metálico. Generalmente el medio circundante (halo) es café, tornándose posterio rmente negro. Algunas 
cepas producen colonias verdes sin la formación del halo oscuro. Si las placas no muestran colonias típicas o 
no se observa crecimiento, incubar 24 h adicionales.  
Agar SS: colonias translúcidas, ocasionalmente opacas. Algunas colonias  dan centro negro. Las colonias 
fermentadoras de la lactosa son rojas.  
C.4.4.3  Identificación bioquímica  
C.4.4.3.1  Seleccionar al menos dos colonias típicas de cada medio selectivo, que se encuentren  bien 
aisladas.  
Tocar levemente el centro de cada coloni a e inocular dos tubos, uno con agar triple azúcar hierro (TSI) y 
otro con agar hierro lisina (LIA), por estría en la superficie inclinada y por punción en el fondo.  
Incubar por 24 ± 2 h a 35 °C.  
Almacenar en refrigeración de 5 a 8 °C las placas con medios  selectivos por sí es necesario retomar más 
colonias.  
C.4.4.3.2  Observar el crecimiento en los tubos y considerar presuntivamente positivas para Salmonella  las 
colonias que den las siguientes reacciones:  
C.4.4.3.2.1  Agar TSI, en el fondo del tubo se observ a vire del indicador debido a la fermentación de la 
glucosa; en la superficie del medio se observa un color rojo más intenso que el medio original debido a la no 
fermentación de la lactosa ni de la sacarosa. En la mayoría de los casos se observa coloración  negra a lo 
largo de la punción debido a la producción de ácido sulfihídrico.  
C.4.4.3.2.2  Agar LIA, se observa intensificación del color púrpura en todo el tubo por la descarboxilación 
de la lisina. Considerar negativos aquellos cultivos que produzcan clar amente color amarillo en el fondo del 
agar. La mayoría de las cepas de Salmonella  producen ácido sulfihídrico en este medio con ennegrecimiento 
a lo largo de la punción.  
C.4.4.3.2.3  Retener todos los cultivos que muestren las reacciones características de Salmonella  en los 
medios TSI y LIA para las pruebas adicionales, indicadas en C.4.4.3.3  
C.4.4.3.3  Los cultivos con TSI que no parecen de Salmonella  pero que presentan reacciones en LIA 
típicos, deben trabajarse como cultivos presuntivos positivos, ya que e n estos casos, el medio LIA permitirá 
detectar  S. arizonae  y cepas atípicas de Salmonella  que utilicen lactosa o sacarosa. Descartar solamente los 
cultivos que muestren reacciones atípicas en ambos medios.  
C.4.4.3.4  Continuar el análisis a partir de los tu bos de TSI con reacciones típicas. Si el cultivo presenta 
reacciones atípicas en este medio, tomar colonias adicionales de las placas de donde se obtuvo el cultivo 
atípico anterior y sembrar las pruebas bioquímicas nuevamente.  
C.4.4.3.5  Continuar la identi ficación bioquímica y serológica a partir de los cultivos recuperados de TSI. Se 
recomienda trabajar seis cultivos por cada 25 g de unidad analítica seleccionando colonias procedentes de 
ambos medios de enriquecimiento.  
C.4.4.3.6  Prueba de ureasa  
C.4.4.3.6 .1 Prueba de ureasa (convencional). Con una asa estéril, tomar crecimiento del cultivo 
presumiblemente positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea. Utilizar un control de 
medio para comparar el vire púrpura de las reacciones positivas  con el color del medio original. Incubar 24 ± 2 
h a 35 °C. 
C.4.4.3.6.2  Prueba de ureasa (rápida). Tomar dos asadas de crecimiento del cultivo presumiblemente 
positivo de cada tubo de medio TSI e inocular tubos de caldo urea (rápida).  Incubar 2 h a 37 ± 0,5 °C en baño 
de agua.  
Descartar todos los cultivos que den ureasa positiva. Retener los cultivos que den la prueba negativa (sin 
cambio de color del medio).  
C.4.4.4  Identificación serológica  
C.4.4.4.1  Ensayo de los antígenos somáticos de Salmonella  (Antisuer o polivalente O).  
C.4.4.4.1.1  Colocar con una asa dos gotas separadas de solución salina estéril sobre un portaobjetos o en 
dos secciones de una placa para aglutinación. Suspender en cada una de las gotas, una porción del cultivo 
desarrollado en TSI.  
C.4.4 .4.1.2  Agregar a una de ellas una gota del antisuero polivalente somático (O) y mezclar con el canto 
del asa o empleando aplicadores de madera.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
C.4.4.4.1.3  Agitar inclinando la lámina hacia atrás y hacia adelante durante aproximadamente un min. 
Observar ba jo buena iluminación sobre un fondo oscuro.  
C.4.4.4.1.4  Considerar cualquier grado de aglutinación como positiva.  
La prueba positiva resulta cuando se presenta aglutinación en la gota con el cultivo y el antisuero y no 
aglutinación en la gota que contiene el cultivo y la solución salina.  
Si se observa aglutinación en ambas gotas, la prueba no es definitiva y se debe continuar con las pruebas 
bioquímicas complementarias.  
C.4.4.4.2  Cuando la aglutinación es positiva con el suero polivalente O, puede determina rse el subgrupo 
empleando antisueros para los diferentes subgrupos (los grupos B, C, D y E, suelen ser los más frecuentes).  
C.4.4.4.2.1  Si la aglutinación con el antisuero O es negativa, utilizar antisuero Vi y efectuar la prueba. Si 
hay aglutinación con V i calentar el cultivo a ebullición y repetir la aglutinación con el antisuero polivalente O.  
C.4.4.4.2.2  Si no se cuenta con los sueros grupoespecíficos, solicitar la tipificación de la cepa al 
Laboratorio de Enterobacterias del Centro Nacional de Diagnóst ico y Referencia de la Secretaría de Salud o  al 
Laboratorio Nacional de Salud Pública.  
C.4.4.4.3  Si se requiere, practicar el ensayo de los antígenos flagelares de Salmonella  (Antisuero 
polivalente H).  
C.4.4.4.3.1  Inocular el crecimiento del tubo de TSI en  agar infusión de cerebro corazón e incubar de 4 a  6 
h a 35 °C hasta que se observe crecimiento (para ensayo en el mismo día), o bien, en caldo soya tripticase ína 
e incubar por 24 ± 2 h a 35 °C (para ensayo al día siguiente). Adicionar 2,5 ml de solución s alina formalizada a 
5 ml del cultivo en caldo o al cultivo en agar cerebro corazón (BHI).  
C.4.4.4.3.2  Colocar 0,5 ml del antisuero polivalente flagelar (H) preparado en un tubo para serología  (13 x 
100 mm aproximadamente). Adicionar 0,5 ml del cultivo form alizado. Preparar un control de solución salina 
mezclando 0,5 ml de solución salina formalizada con 0,5 ml del antígeno formalizado. Incubar las m ezclas en 
baño de agua a 48 - 50°C. Observar a intervalos de 15 min por espacio de una h. Una prueba positiva e s 
cuando se observa aglutinación en la mezcla de prueba pero no en el control. Debe interpretarse como 
negativa una prueba en la que ninguna de las mezclas muestre agl utinación. Cuando ambas mezclas  se 
aglutinan, se considera la prueba inespecífica.  
C.4.4. 5 Pruebas bioquímicas complementarias  
Cuando las pruebas serológicas o bioquímicas iniciales, dan resultados atípicos o no concluyentes, 
realizar las pruebas que se describen a continuación:  
C.4.4.5.1  Inocular los cultivos positivos provenientes de TSI y L IA en: medio SIM, agar citrato de Simmons, 
caldo manitol y caldo RM -VP. Usar caldo malonato para confirmar la presencia de la especie S. arizonae.  
C.4.4.5.2  Interpretar los cambios en los medios inoculados conforme lo siguiente:  
C.4.4.5.2.1  Agar citrato Si mmons  
Inocular por estría el tubo  
Incubar 96 ± 2 h a 35 ± 2°C  
Prueba positiva: crecimiento  acompañado  de un cambio  de color de verde a azul.  
Prueba negativa: ausencia de  crecimiento  y sin cambio de color.  
C.4.4.5.2.2  Medio SIM  
Inocular por punción  
Incubar 24 h a 35 ± 2°C  
Movilidad  
Prueba positiva: crecimiento  a lo largo de la punción y en el seno del medio de cultivo.  
Prueba negativa: crecimiento  a lo largo  de la punción exclusivamente.  
Producción de ácido sulfihídrico  
Prueba positiva: desarrollo de un colo r negro a lo largo de la punción que puede extenderse a todo el medio.  
Prueba negativa: ausencia de color negro.  
Producción de indol  
Adicionar al tubo con medio SIM que presente crecimiento, de 0,2 a 0,3 ml de reactivo de Kovac.  
Prueba positiva: desarrollo  de un anillo de color rojo.  
Prueba negativa: sin cambio de color.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
C.4.4.5.2.3  Caldo RM -VP 
Inocular un tubo con el medio  
Incubar 48 ± 2 h a 35 ± 2°C para la prueba de VP y 96 h para la prueba RM  
C.4.4.5.2.3.1  Prueba de Voges -Proskauer (VP)  
Transferir a un tubo un ml del cultivo de 48 h  
Adicionar 0,6 ml de solución de alfa naftol  
Adicionar 0,2 ml de solución de hidróxido de potasio 40%  
Adicionar algunos cristales de creatinina (opcional)  
Interpretar los resultados después de incubar 2 h a 35 ± 2°C o 4 h a te mperatura ambiente  
Prueba positiva: desarrollo de color rojo ladrillo  
Prueba negativa: sin cambio de color  
Reincubar el resto del medio RM -VP 48 h más a 35 ± 2°C  
C.4.4.5.2.3.2  Prueba de rojo de metilo (RM)  
Adicionar  al medio de cultivo de 96 h de incubació n de dos a tres gotas de solución de rojo de metilo  
Interpretar los resultados inmediatamente  
Prueba positiva: desarrollo de color rojo  
Prueba negativa: desarrollo de color amarillo  
C.4.4.5.2.4  Caldo malonato  
Inocular un tubo conteniendo el medio  
Incubar 4 0 ± 2 h a 35 ± 2°C  
Prueba positiva: desarrollo de color azul  
Prueba negativa: sin cambio de color  
C.4.4.5.2.5  Caldo manitol  
Inocular un tubo conteniendo el medio  
Incubar 24 ± 2 h a 35 ± 2°C  
Prueba positiva: desarrollo de color amarillo  
Prueba negativa: sin  cambio de color  
C.4.4.5.3  Consultar los resultados obtenidos en el cuadro 2 para la identificación de los géneros de las 
bacterias investigadas.  
Nota : Los sistemas bioquímicos comerciales validados pueden ser usados como alternativa para las 
pruebas bioqu ímicas convencionales.  
C.4.5  Cálculo y expresión de resultados  
C.4.5.1  Interpretación de reacciones bioquímicas y serológicas.  
CUADRO 1  
REA CCIONES 
BIOQUI MICAS  REACCIONES 
SEROLO GICAS  INTERPRETACIO N 
Típica  Antígeno O,  Vi o H positivo   Cepas consideradas com o Salmonella   
Típica  Todas las  reacciones negativas   
Típica  No probada   Puede ser  Salmonella  
Reacciones atípicas  Antígeno O,  Vi o H positivo    
Reacciones atípicas  Todas las  reacciones negativas  No debe ser  considerada  Salmonella  
       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
C.4.5.2  Reacciones bi oquímicas y serológicas de Salmonella  
CUADRO 2  
PRUEBA O SUSTRATO  POSITIVO  NEGATIVO  REACCIO N 
Glucosa (TSI)   amarillo  rojo + 
Lisina descarboxilasa(LIA)  púrpura  amarillo  + 
H2S (TSI y LIA)   negro  no negro  + 
Ureasa  rojo-púrpura  no hay  cambio de  color  - 
Caldo de lisina descarboxilasa  púrpura  amarillo  + 
Caldo dulcitol  rojo de fenol  ³ amarillo o  gas no hay  ³ cambio de color, ni  gas +b 
Caldo KCN   crecimiento  no hay  crecimiento  - 
Caldo malonato   azul no hay  cambio de color  - 
Prueba de indol   superficie colo r violeta  superficie color amarillo  - 
Prueba del antígeno  flagelar  aglutinación  no hay aglutinación  + 
Prueba del antígeno  somático  aglutinación  no hay aglutinación  + 
Caldo lactosa rojo fenol   amarillo o gas  no hay cambio de  color, ni  gas - 
Caldo sacaro sa rojo  fenol  amarillo o gas  no hay  cambio de  color, ni  gas - 
Prueba  Voges -Proskauer  de rosa a  rojo no hay  cambio de color  - 
Prueba rojo de  metilo  rojo difuso  amarillo difuso  + 
Citrato de Simmons   crecimiento color azul  no hay crecimiento no hay  
cambio de color  v 
a +, 90 % o más positivos en 1 ó 2 días; -, 90 % o más negativas en 1 ó 2 días; v, variable.  
b La mayoría de los cultivos S. arizonae  son negativos.  
c La mayoría de los cultivos S. arizonae  son positivos.  
C.4.5.3  Informe de Resultados  
Informar:  presencia o ausencia de Salmonella  en ___________ g ó _______________ ml de muestra.  
C.5. M ETODO PARA LA DETERMINACI ON DE Staphylococcus aureus  EN ALIMENTOS.  
C.5.1  Fundamento  
Este método permite hacer una estimación del contenido de Staphylococcus aureus en alimentos, se 
efectúa directamente en placas de medio de cultivo selectivo y diferencial, con la confirmación mediante las 
pruebas de coagulasa y termonucleasa. Este método es adecuado para el análisis de alimentos en los cuales 
se esperen más de 100 cé lulas de Staphylococcus aureus  por g.  
C.5.2 Reactivos y materiales  
En caso de disponerse de fórmulas comerciales deshidratadas, para su preparación se deben seguir las 
instrucciones impresas en la etiqueta respectiva.  
Cuando se mencione agua debe entenders e que se trata de "agua destilada".  
Los reactivos a emplear en el método objeto de esta norma deben ser grado analítico.  
C.5.2.1  Reactivos  
C.5.2.1.1  Soluciones diluyentes  
C.5.2.1.1.1  Solución reguladora de fosfatos (Solución concentrada)  
FORMULA  
Ingredien tes Cantidad  
Fosfato monopotásico  34,0 g  
Agua  1,0 l Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Preparación:  Disolver el fosfato en 500 ml de agua y ajustar el pH a 7,2 con solución de hidróxido de 
sodio 1 N, aforar con agua a 1 l. Esterilizar durante 15 min a 121ºC ±1, conservar en refrigeració n (solución 
concentrada). Tomar 1,25 ml de la solución concentrada y llevar a 1 l con agua (solución de trabajo). Distribuir 
en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121ºC ±1 durante 15 min. Después de la 
esterilización, los volúmenes  finales y el pH de la solución de trabajo deben ser iguales a los iniciales.  
C.5.2.1.1.2  Agua peptonada  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Peptona  1,0 g  
Cloruro de sodio  8,5 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Disolver los componentes en un litro de agua. Ajustar el pH a 7,0 con solución de hidróxido 
de sodio 1N. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera. Esterilizar a 121ºC ±1 durante 15 min. 
Después de la esterilización los volúmenes finales y el pH de la solución de trabajo deben ser iguales a l os 
iniciales.  
C.5.2.1.2  Medios de cultivo  
C.5.2.1.2.1  Medio de Baird -Parker  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Medio base (C.6.1.2.1.1)  95,0 ml  
Solución de telurito de potasio (C.6.1.2.1.2)  1,0 ml  
Emulsión de yema de huevo (6.1.2.1.3)  5,0 ml  
Preparación:  Cuando el medio base esté a 45ºC, agregar los demás ingredientes y mezclar. Colocar de 
15 a 20 ml del medio completo, enfriar y dejar solidificar. Las placas pueden almacenarse por 48 h a 
temperatura de 0 a 5ºC.  
C.5.2.1.2.1.1.  Medio base de Baird -Parker  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Triptona  10,0 g  
Extracto de levadura  1,0 g  
Extracto de carne  5,0 g  
Glicina  12,0 g  
Cloruro de litio  5,0 g  
Piruvato de sodio  10,0 g  
Agar  20,0 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Disolver los ingredientes o el agar base en agua  y calentar con agitación constante y hervir 
durante 1 min. Esterilizar a 121ºC ±  1 durante 15 min. Enfriar y mantener el medio a 45ºC.  
C.5.2.1.2.1.2  Solución de telurito  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Telurito de potasio  1,0 g  
Agua  100,0 ml  
Preparación : Disolver el telurito de potasio en agua y esterilizar. La solución puede ser almacenada por 
varios meses a temperatura de 0 a 5ºC.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
C.5.2.1.2.1.3  Emulsión de yema de huevo  
Preparación. Lavar con agua y jabón los huevos frescos que sean necesarios y limpia rlos con una 
solución de tintura de yodo (solución alcohólica al 2%) o sumergirlos en solución de cloruro mercúrico 
(1:1000). Enjuagar con agua estéril y secar con gasa estéril. En campana de flujo laminar o en condiciones 
asépticas, abrir los huevos y vac iarlos en un separador de claras estéril. Transferir las yemas a una probeta 
hasta un volumen de 60 ml y completar a 90 ml con solución salina isotónica. Verter la emulsión a un matraz 
Erlenmeyer con perlas de vidrio estéril y agitar fuertemente para forma r la emulsión. Filtrar a través de gasa. 
Las placas deben utilizarse dentro de las 48 h siguientes a su preparación.  
C.5.2.1.2.1.4  Solución salina isotónica  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Cloruro de sodio  0,85 g  
Agua  100,0 ml  
Preparación: Disolver el  ingrediente en agua y esterilizar a 121ºC ±  1 durante 15 min.  
C.5.2.1.2.2  Caldo de infusión cerebro -corazón (BHI)  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Infusión de cerebro de ternera  200,0 ml  
Infusión de corazón de res  250,0 ml  
Peptona de gelatina  10,0 g  
Cloruro de sodio  5,0 g  
Fosfato disódico dodecahidratado  2,5 g  
Glucosa  2,0 g  
Agua  1,0 l 
Preparación:  Disolver los ingredientes en agua y calentar ligeramente si es necesario. Distribuir y 
esterilizar durante 15 min a 121ºC ±  1. 
C.5.2.1.2.3  Acido desox irribonucleico helicoidal de timo de ternera.  
FORMULA  
Ingredientes  Cantidad  
Acido desoxirribonucleico helicoi -dal de timo de ternera o equivalente  0,03 g  
Agar  1,00 g  
Cloruro de calcio anhidro (Solución 0,01 M) (6.1.2.3.1)  0,10 ml  
Cloruro de sodio  1,00 g  
Azul de toluidina (Solución 0,1 M) (6.1.2.3.2)  0,30 ml  
Tris-(hidroximetil -aminometano) (Tris solución 0,05 M, pH 9) (C.6.1.2.3.3)  100,00 ml  
Preparación : Disolver los ingredientes, excepto el azul de toluidina agitando hasta completar la disoluci ón 
del ácido desoxirribonucleico y calentar a ebullición. Agregar el azul de toluidina. Distribuir en frascos 
pequeños con tapón de hule. No es necesario esterilizar. Este medio es estable a temperatura ambiente hasta 
4 meses y funciona perfectamente aun d espués de fundir lo varias veces. Tomar un porta objetos limpio y 
agregar 3 ml del medio fundido esparciéndolo por la superficie. Cuando el agar solidifique, hacer orificios con 
la punta de una pipeta Pasteur. Conservar en refrigeración para evitar la deshid ratación.  
C.5.2.1.2.3.1  Solución de cloruro de calcio anhidro 0,01 M  
Cloruro de calcio PM = 110,99  
Disolver 0,1199 g de cloruro de calcio en 100 ml de agua.  
C.5.2.1.2.3.2  Solución de azul de toluidina 0,1 M  
Disolver 3,05 g de azul de toluidina en 100 ml de  agua.  Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
C.5.2.1.2.3.3  Solución amortiguadora 0,05 M Tris -(hidroximetilaminometano)  
(Tris pH 9) PM = 121,1  
Disolver 6,055 g de Tris en 100 ml de agua.  
C.5.2.1.3 Reactivo biológico:  
Plasma de conejo  
Emplear plasma de conejo deshidratado o rehidratado siguiend o las instrucciones del fabricante y agregar 
ácido etilendiaminotetracético (EDTA) en solución al 0,1% en plasma rehidratado. Si se utiliza plasma 
deshidratado diluir con agua estéril en proporción de 1:3. Puede emplearse plasma de conejo liofilizado 
adicionado de EDTA. No debe emplearse sangre citratada.  
C.5.2.2  Materiales  
Todos los instrumentos que se utilicen para trabajar la muestra deben esterilizarse mediante horno, 
durante 2 h de 170 -175ºC o como alternativa en autoclave durante 15 min como mínimo a 121ºC ±  1. 
● Cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas y separador de huevo.  
● Tubos de cultivo de 16 mm x 150 mm o frascos de 125 a 250 ml de capacidad.  
● Tubos de cultivo de 10 mm x 75 mm.  
● Cajas Petri de 90 a 100 mm de diámetro.  
● Pipetas bacteri ológicas de 1 ml y 10 ml de capacidad graduadas en 0,1 ml y 1 ml respectivamente y 
diámetro de 2 a 3 mm.  
● Pipetas Pasteur.  
● Probetas.  
● Varillas de vidrio de 3,5 mm de diámetro aproximadamente y 20 cm de largo dobladas en ángulo 
recto.  
● Matraz Erlenmeye r con perlas de vidrio  
● Cámara húmeda: consiste en una caja Petri en la cual se coloca una varilla de vidrio en forma de "V" 
rodeada de algodón humedecido con agua.  
C.5.3 Aparatos  
● Horno para esterilizar que alcance 180°C.  
● Autoclave con termómetro.  
● Baño de agua con regulador de temperatura de 35 ± 0,5ºC.  
● Baño de agua con regulador de temperatura de 45 ± 0,5ºC.  
● Balanza con capacidad no mayor de 2,500 g y sensibilidad de 0,1 g.  
● Incubadora a 35 ± 1ºC.  
C.5.4 Preparación de la muestra  
La preparación de la muestra se debe realizar de acuerdo a lo establecido en el método Preparación y 
Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.  
C.5.5 Procedimiento  
C.5.5.1  Utilizando diferentes pipetas de 1 ml para cada dilución, depositar 0,1 ml sobre la superficie de las 
placas de agar Baird -Parker.  
C.5.5.2  Distribuir el inóculo sobre la superficie del agar con varillas estériles de vidrio en ángulo recto, 
utilizando una para cada dilución.  
C.5.5.3  Mantener las placas en su posición hasta que el inóculo sea absorbido por el agar.  
C.5.5.4  Invertir las placas e incubar de 45 a 48 h a 35ºC.  
C.5.5.5  Seleccionar las placas que tengan entre 15 y 150 colonias típicas de Staphylococcus aureus ; si no 
es posible, seleccionar las placas de las diluciones más  altas no obstante tengan más de 150 colonias.  
C.5.5.6  Cuando las placas tengan menos de 15 colonias típicas también pueden ser utilizadas y al informe 
se debe agregar la nota de "valor estimado".        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
C.5.5.7  Las colonias típicas son negras, circulares, brilla ntes, convexas, lisas, de diámetro de 1 a 2 mm y 
muestran una zona opaca y un halo claro alrededor de la colonia.  
C.5.5.8  Seleccionar las colonias de acuerdo con el siguiente cuadro para realizar las pruebas de 
coagulasa y termonucleasa:  
NUMERO DE COLONIAS  NUMERO DE COLONIAS 
SOSPECHOSAS EN 
PLACA POR PROBAR  
Menos de 50  3 
51 a 100  5 
101 a 150 o más  7 
 
C.5.5.9  Seleccionar el número de colonias y sembrar cada una en tubos con 0,5 ml de caldo de infusión 
cerebro -corazón.  
C.5.5.10  Incubar a 35ºC durante 24 h.  
C.5.5.11  Inocular en la misma forma cepas conocidas de Staphylococcus aureus y Staphylococcus 
epidermidis como testigos positivo y negativo.  
C.5.5.12  Después del periodo de incubación pasar con una pipeta de 1 ml, 0,3 ml de cada cultivo a otro 
tubo de 10 mm x 75 mm y conservarlo para la prueba de termonucleasa. El resto del cultivo se usa para la 
prueba de coagulasa.  
C.5.5.13  Prueba de coagulasa  
C.5.5.13.1  Agregar a los 0,2 ml del cultivo anterior, 0,2 ml de plasma de conejo diluido volumen a volumen 
con s olución salina estéril.  
C.5.5.13.2 Incubar en baño de agua de 35 a 37ºC y observar durante 6 h a intervalos de 1 h; si no hay 
formación de coágulo, observar a las 24 h. Considerar positiva la prueba si hay formación de coágulo.  
Para comprobar la coagulabil idad del plasma de conejo se añade una gota de cloruro de calcio al 5% a  
0,5 ml de plasma reconstituido empleado, formándose un coágulo en 10 -15 seg.  
C.5.5.14  Prueba de termonucleasa  
C.5.5.14.1  Calentar durante 15 min, 0,3 ml de cultivo en caldo de infusi ón cerebro -corazón en baño de 
agua hirviendo.  
C.5.5.14.2  Pasar una gota de cada cultivo por medio de una pipeta Pasteur a un orificio del medio, incluye 
testigo.  
C.5.5.14.3  Incubar a 35ºC en cámara húmeda de 4 a 24 h.  
C.5.5.14.4  La aparición de un halo col or rosa extendido de por lo menos 1 mm alrededor de la perforación 
se califica como positiva.  
C.5.6 Cálculo y expresión de resultados  
C.5.6.1  Cálculo  
Hacer el cálculo del contenido de microorganismos en el producto tomando en cuenta el número de 
colonias t otales, el número de colonias confirmadas, la dilución y el volumen inoculado (0,1 ml).  
Ejemplo 1:  
Si la caja tiene 80 colonias en la dilución 1:1000  
Se toman 5 colonias para la prueba, de éstas dan 4 positivas, el cálculo es:  
80 x 4  = 64 x 1000 x 10 = 640  000 
5 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Ejemplo 2:  
Si la caja tiene 14 colonias en la dilución 1:10  
Se toman 3 colonias para la prueba, de éstas dan 2 positivas, el cálculo es:  
14 x 2 = 9,3 x 10 x 10 = 930  
3 
C.5.6.2  Expresión de los resultados:  
Según ejemplo 1:  
Informar como Staphylococcu s aureus  640 000 UFC/g  
Según ejemplo 2:  
Informar como Staphylococcus  aureus 930 UFC/g valor estimado  
Si las pruebas confirmativas resultan negativas en todas las colonias probadas, informar como:  
0 UFC/g en muestras directas  
-10 UFC/g en muestras de diluci ón 1:10  
-100 UFC/g en muestras de dilución 1:100  
En la práctica los resultados pueden variar, esto dependerá del técnico que trabaje el método y el grado de 
confiabilidad del mismo, que en el 95% de los casos es de ± 16% a ± 52%.  
C.6. DE LA ESTIMACI ON DE L A DENSIDAD MICROBIANA POR LA T ECNICA DEL N UMERO M AS 
PROBABLE. DETERMINACI ON DE BACTERIAS COLIFORMES, COLIFORMES FECALES Y Escherichia 
coli POR LA T ECNICA DE DILUCIONES EN TUBO MULTIPLE.  
Este método es aplicable a cualquier grupo bacteriano de interés sanit ario, especialmente en productos 
que se encuentran en bajas concentraciones de microorganismos (10 por gramo o ml). Ejemplo: Leche, agua, 
alimentos; que por su consistencia pueden interferir con la exactitud de la cuenta de Unidades Formadoras de 
Colonias (U.F.C.).  
C.6.1 Fundamento.  
Se basa en la dilución de la muestra en tubos múltiples, de tal forma que todos los tubos de la menor 
dilución sean positivos y todos los tubos de la dilución más alta sean negativos. El resultado positivo se 
demuestra por la pr esencia de gas o crecimiento microbiano.  
Para obtener el Número Más Probable (NMP) en los resultados se aplica la teoría de la probabilidad, lo 
cual tiene como condición lo siguiente:  
- Una distribución aleatoria de las bacterias que existen en la muestra.  
- Las bacterias se encuentran como entidades no agrupadas.  
- Los microorganismos presentes en la muestra crecerán en el medio, cuando son incubados y se mantengan  
en las condiciones adecuadas para su desarrollo.  
Si se espera una cuenta microbiana alta, la  muestra deberá diluirse para dar cumplimiento a las 
condiciones. La forma más común de realizar esta prueba es mediante diluciones decimales y usando un 
inóculo en series de 3, 5 o 10 tubos en serie. A medida que el número de tubos inoculados para cada di lución 
aumentan se reducen los límites de confianza.  
C.6.2 Equipo, materiales y reactivos . 
No aplica.  
C.6.3 Procedimientos.  
C.6.3.1  Uso de tablas de NMP con 95% de límite de confianza.  
Las tablas 1 -3 presentan la estimación estadística de los valores del N MP que corresponden al 95% de 
límite de confianza cuando se utilizan 3, 5 y 10 tubos. Otras combinaciones de resultados positivos y 
negativos no encontrados en estas tablas, tienen muy baja probabilidad de que se presenten. Si los resultados 
no están inclu idos en las tablas, se deberá repetir la prueba a partir de  la muestra original. Si no es posible, el 
NMP se puede obtener (para las combinaciones de 3 y 5 tubos) de las tablas 4 y 5; también se puede aplicar 
una ecuación (véase punto B.2) para obtener el NMP aproximado.        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
El intervalo del 95% de confianza se interpreta como sigue: si el analista supone que el número real de 
microorganismos cae dentro de los límites, entonces se asume que será correcto el 95% de las veces. El valor 
del NMP tabulado representa  un intervalo y no un valor absoluto.  
Cuando se preparan más de 3 diluciones de una muestra, el NMP deberá determinarse a partir de tres 
diluciones consecutivas (usando tablas 1 -3). Primero, para todas las diluciones que tengan todos los tubos 
positivos, s eleccionar la dilución mayor. Después usar las 2 siguientes diluciones mayores (A y B en las tablas 
6 y 7). Cuando en ninguna de las diluciones probadas hubiera crecimiento en todos los tubos, seleccionar (si 
es posible) las primeras tres diluciones consec utivas (volumen de muestra) para que la dilución media 
contenga resultados positivos (C de tablas 6 y 7).  
Con frecuencia es necesario el NMP desde el inicio con volúmenes diferentes de los enlistados en las 
tablas 1 -5. Si el volumen de muestra es mayor que  0,01 g multiplicar el NMP enlistado en la tabla por 10. El 
resultado de una determinación de 5 tubos que dé 3 tubos positivos en 0,01 g; 2 tubos positivos en 0,001 g y 1 
tubo positivo en 0,0001 g (3 -2-1) leer en la tabla No. 2 como 17 y multiplicar por 10  para así obtener 170 como 
el NMP actual por gramo de muestra. De igual forma si la cantidad más grande utilizada para la tabla de 
referencia es 1 g en lugar de 0,1 g, dividir el NMP derivado de la tabla entre 10. Por ejemplo el resultado de la 
determinaci ón del NMP en 3 tubos para Salmonella spp que dé 3 tubos positivos en 1 g; 1 tubo positivo en 0,1 
g y ningún positivo en 0,01 g (3 -1-0) leer en la tabla No. 1 como 43 y dividir entre 10, lo que da 4,3 como el 
NMP presuntivo por gramo de muestra.  
Un método alternativo para obtener el número más probable es usando la siguiente fórmula:  
(NMP/g de la tabla - 100) X factor de dilución del tubo de en  medio = NMP/g  
Para calcular el NMP/100 g multiplicar por 100.  
C.6.3.2  Cálculo aproximado del NMP y 95% de límite d e confianza.  
Debido a la inherente complejidad para calcular los límites de confianza del NMP lo más común es el uso 
de tablas. Generalmente estas tablas están limitadas al uso de 3, 5 y 10 tubos por dilución, incluso usando un 
método aceptado, pueden pres entarse datos irregulares o accidentes de laboratorio que causan pérdida de 1 
o más tubos de dilución. En este caso una serie de diluciones de por ejemplo: 5,4,4 puede dar una lectura de 
5-2-0. Para estos casos se puede aplicar una fórmula sencilla, la cua l no corresponde exactamente con los 
resultados obtenidos teóricamente; sin embargo, las desviaciones generalmente son pequeñas, esta fórmula 
no debe ser aplicada para fines de regulación. La fórmula no restringe el número de tubos o las diluciones y 
puede  aplicarse para todo tipo de pruebas. El cálculo aproximado está dado por la siguiente ecuación:  NMP/g 
= P/(N T )1/2 
Donde: P es el número de tubos positivos, N es la cantidad total de muestra (g) en todos los tubos 
negativos y T es la cantidad total de mu estra (g) en todos los tubos.  
Por ejemplo, considerando que se tuvieran serie de diluciones al doble:  
MUESTRA (G)  No. DE TUBOS  No. DE TUBOS POSITIVOS  
8 
4 
2 
1 
0,5 
0,25 5 
5 
5 
5 
5 
5 5 
4 
2 
0 
1 
0 
 
El número de tubos positivos es: P = (5 + 4 + 2+ 1) = 12; N = (8x0) + (4x1) + (2x3) + (1x5) + (0,5x4) + 
(0,25x5) = 18,25; y T = 5 (8+4+2+1+0,5+0,25) = 78,75  
NPM/g = 12/(18,25 x 78,75)1/2 = 0,32/g o 32/100 g  
Los límites de confianza del 95% estimados, pueden obtenerse del antilogaritmo de base 10 con la 
siguiente ecua ción:  
log (NMP/g) 1,08 (log a)/n)1/2 
Donde: a es el radio de dilución y n es el número de tubos por dilución. Esta expresión asume que el  radio 
de dilución es diferente de 1:10 (por ejemplo 1:2). Para diluciones de 1:10, la cantidad por restar o sumar 
debe rá ser de 1,14(n) ½ para la mejor estimación. Si el número de tubos por dilución (n i) es desigual  (por 
ejemplo: un accidente de laboratorio) para la dilución k reemplazar n por la expresión n H (media armónica) por 
el número de tubos por dilución (n i). Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
La me dia armónica se define como:  
nH = k / (1/ n i) 
k es el número de diluciones. Por ejemplo: Suponiendo que el resultado de 3 diluciones en n i fuera 5 -4-4. 
Por lo tanto n H = 3/ (1/5) + (1/4) + (1/4)½ = 3/0,70 = 4,3i 
Para el ejemplo anterior el NMP con n = 5 y un límite de confianza aproximado de 95% será el siguiente:  
log 0,32 (1,08) (log 2)/5)½ 
-0,495  0,265  
Entonces el límite inferior es el antilogaritmo ( -0-76) = 0.17/g o 17/100 g y el límite inferior es el 
antilogaritmo ( -0,23) = 0,59/g o 59/100 g. Cuando se  compara con las tablas el NMP podría ser 0,31/g con 
límites de confianza de 0,16/g y 0,57/g.  
Tabla No. 1 Selección del NMP con un límite de confianza de 95% para  la prueba de fermentación 
utilizando 3 tubos: con porciones de 0,1, 0,01 y 0,001 g (ml) de mu estra.  
No. de tubos positivos    95% de límite de confianza  
0,1 0,01 0,001  NMP/g (ml) b Inferior  Superior  
0 0 0 3 - - 
0 1 0 3+ 1 17 
1 0 0 4 1 21 
1 0 1 7+ 2 27 
1 1 0 7 2 28 
1 2 0 11+ 4 35 
2 0 0 9 2 38 
2 0 1 14+ 5 48 
2 1 0 15 5 50 
2 1 1 20+ 7 60 
2 2 0 21 8 62 
3 0 0 23 9 130 
3 0 1 39 10 180 
3 1 0 43 10 210 
3 1 1 75 20 280 
3 2 0 93 30 380 
3 2 1 150 50 500 
3 2 2 210+  80 640 
3 3 0 240 90 1400  
3 3 1 460 100 2400  
3 3 2 1100  300 4800  
3 3 3 1100  - - 
a Los resultados normales, obtenidos en un 95%  de las pruebas no están seguidos por un símbolo más 
(+). Menos del 4% de los resultados de las pruebas obtenidos están marcados por un símbolo más (+). 
Combinaciones de tubos positivos no encontrados en esta tabla se presentan en menos del 1% de las 
prueb as y si se presentaran con mayor frecuencia indican un error de técnica o que el valor del número más 
probable se encuentra en el límite. El NMP de combinaciones que no aparecen en la tabla, se puede obtener 
por extrapolación a la combinación cercana más e levada.  
b Multiplicar todos los valores de NMP/g (ml) por 100 para expresarlos como NMP/100 g (ml).        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
Tabla No. 2 Selección del NMP con un límite de confianza de 95% para   la prueba de fermentación 
utilizando 5 tubos: con porciones de 0,1, 0,01 y 0,001 g (ml ) de muestraa 
No. de tubos positivos    95% de límite de confianza  
0,1 0,01 0,001  NMP/g (ml) b Inferior  Superior  
      
0 0 0 2 - - 
 
0 0 1 2+ 1 10 
0 1 0 2 1 10 
1 0 0 2 1 11 
1 0 1 4+ 1 15 
1 1 0 4 1 15 
1 2 0 6+ 2 18 
2 0 0 4 1 17 
2 0 1 7+ 2 20 
2 1 0 7 2 21 
2 1 1 9+ 3 25 
2 2 0 9 3 25 
3 0 0 8 3 24 
3 0 1 11 4 29 
3 1 0 11 4 30 
3 1 1 14+ 6 35 
3 2 0 14 6 35 
3 2 1 17+ 7 40 
3 3 0 17+ 7 41 
4 0 0 13 5 38 
4 0 1 17 7 45 
4 1 0 17 7 46 
4 1 1 21 9 55 
4 2 0 22 9 56 
4 2 1 26+ 12 65 
4 3 0 27 12 67 
4 3 1 33+ 15 77 
4 4 0 34+ 16 80 
5 0 0 23 9 68 
5 0 1 31 13 110 
5 1 0 33 14 120 
5 1 1 46 20 150 
5 1 2 63+ 22 180 
5 2 0 49 21 170 
5 2 1 70 30 210 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
5 2 2 94+ 40 250 
5 3 0 79 30 250 
5 3 1 110 40 300 
5 3 2 140 60 360 
 
5 4 0 130 50 390 
5 4 1 170 70 480 
5 4 2 220 100 580 
5 4 3 280+  120 690 
5 4 4 350+  160 820 
5 5 0 240 100 940 
5 5 1 350 100 1300  
5 5 2 540 220 2000  
5 5 3 920 300 2900  
5 5 4 1600  600 5300  
5 5 5 1600  - - 
a Los resultados normales, obtenidos en un 95% de las pruebas, no están seguidos por un símbolo 
más(+). Menos del 4% de los resultados de las pruebas obtenidos están marcados por un símbolo más (+). 
Combinaciones de tubos positivos no encontrados en esta tabla se presentan en menos del 1% de las 
pruebas y si se presentaran con mayor fr ecuencia indican un error de técnica o que el valor del número más 
probable se encuentra en el límite. El NMP de combinaciones que no aparecen en la tabla, se pueden obtener 
por extrapolación a la combinación cercana más elevada.  
b Multiplicar todos los va lores de NMP/g (ml) por 100 para expresarlos como NMP/100 g (ml).  
Tabla No. 3 Selección del NMP con un límite de confianza de 95% para  la prueba de fermentación 
utilizando 10 tubos: con porciones de 0,1, 0,01 y 0,001 g (ml) de muestraa 
No. de tubos positiv os   95% de límite de confianza  
0,1 0,01 0,001  NMP/g (ml) b Inferior  Superior  
0 0 0 1 - - 
0 0 1 1+ 1 5 
0 1 0 1 1 5 
0 2 0 2+ 1 7 
1 0 0 1 1 5 
1 0 1 2+ 1 7 
1 1 0 2 1 7 
1 2 0 3+ 1 8 
2 0 0 2 1 7 
2 0 1 3+ 1 9 
2 1 0 3 1 9 
2 1 1 4+ 1 10 
2 2 0 4 2 10 
2 3 0 5+ 2 12 
3 0 0 3 1 9 
3 0 1 4 2 11       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
3 1 0 4 2 11 
3 1 1 5+ 2 13 
3 2 0 5 2 13 
3 2 1 6+ 3 14 
3 3 0 6+ 3 14 
4 0 0 4 2 12 
 
4 0 1 6 2 13 
4 1 0 6 2 14 
4 1 1 7 3 15 
4 2 0 7 3 15 
4 2 1 8 4 17 
4 3 0 8 4 17 
4 4 0 9+ 5 19 
5 0 0 6 2 15 
5 0 1 7 3 16 
5 1 0 7 3 17 
5 1 1 9 4 18 
5 2 0 9 4 18 
5 2 1 10+ 5 20 
5 3 0 10 5 20 
5 3 1 11+ 6 22 
5 4 0 11+ 6 22 
6 0 0 8 3 18 
6 0 1 9 4 20 
6 1 0 9 4 20 
6 1 1 11 5 22 
6 2 0 11 5 22 
6 2 1 12 6 24 
6 3 0 12 6 25 
6 3 1 14+ 7 27 
6 4 0 14+ 7 27 
6 5 0 15+ 8 29 
7 0 0 10 5 22 
7 0 1 12 6 24 
7 0 2 13+ 7 27 
7 1 0 12 6 25 
7 1 1 13 7 27 
7 1 2 15+ 8 30 
7 2 0 13 7 27 
7 2 1 15 8 30 
7 2 2 17+ 9 32 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
7 3 0 15 8 30 
7 3 1 17 9 33 
7 4 0 17 9 33 
7 4 1 19+ 10 36 
7 5 0 19+ 10 36 
 
8 0 0 13 6 28 
8 0 1 15 7 31 
8 0 2 17+ 8 34 
8 1 0 15 7 31 
8 1 1 17 9 34 
8 1 2 19+ 10 37 
8 2 0 17 9 35 
8 2 1 19 10 38 
8 2 2 21+ 12 42 
8 3 0 19 10 39 
8 3 1 21 12 42 
8 3 2 24+ 13 46 
8 4 0 22 12 43 
8 4 1 24 13 46 
8 5 0 24 13 47 
8 5 1 27+ 15 51 
8 6 0 27+ 15 52 
9 0 0 17 8 37 
9 0 1 19 10 41 
9 0 2 22+ 11 46 
9 1 0 19 10 42 
9 1 1 22 11 47 
9 1 2 25+ 13 52 
9 2 0 22 12 47 
9 2 1 25 13 53 
9 2 2 28+ 15 58 
9 3 0 25 13 54 
9 3 1 29 15 60 
9 3 2 32+ 18 66 
9 4 0 29 16 61 
9 4 1 33 18 67 
9 4 2 37+ 20 74 
9 5 0 33 18 69 
9 5 1 37 20 76 
9 5 2 42+ 23 83 
9 6 0 38 21 77       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
9 6 1 43+ 24 85 
9 7 0 44+ 24 87 
10 0 0 23 12 58 
10 0 1 27 14 67 
 
10 0 2 31+ 16 77 
10 1 0 27 14 69 
10 1 1 32 17 79 
10 1 2 38 20 92 
10 2 0 33 17 83 
10 2 1 39 20 96 
10 2 2 50 20 110 
10 2 3 50+ 30 120 
10 3 0 40 20 100 
10 3 1 50 20 120 
10 3 2 60+ 30 130 
10 3 3 70+ 30 150 
10 4 0 50 30 120 
10 4 1 60 30 140 
10 4 2 70 30 160 
10 4 3 80+ 40 170 
10 5 0 60 30 150 
10 5 1 70 40 170 
10 5 2 90 40 190 
10 5 3 100 50 210 
10 6 0 80 40 180 
10 6 1 90 50 200 
10 6 2 110 50 230 
10 6 3 120 60 250 
10 6 4 140+  70 270 
10 7 0 100 50 220 
10 7 1 120 60 250 
10 7 2 140 70 280 
10 7 3 150 80 310 
10 7 4 170+  90 340 
10 8 0 130 60 280 
10 8 1 150 80 320 
10 8 2 170 90 360 
10 8 3 200 100 400 
10 8 4 220 120 440 
10 8 5 250+  140 480 
10 9 0 170 90 380 Lunes 13 de febrero de 2 012 DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
10 9 1 200 100 430 
10 9 2 230 120 490 
10 9 3 260 140 560 
10 9 4 300 160 640 
 
10 9 5 350 180 720 
10 9 6 400+  210 820 
10 10 0 240 120 610 
10 10 1 290 150 750 
10 10 2 350 170 910 
10 10 3 400 200 1100  
10 10 4 500 300 1400  
10 10 5 700 300 1700  
10 10 6 900 400 2100  
10 10 7 1120  600 2700  
10 10 8 1160  800 3700  
10 10 9 2300  1100  6000  
10 10 10 2300  - - 
a Los resultados normales, obtenidos en un 95% de las pruebas, no están seguidos por un símbolo más 
(+). Menos del 4% de los result ados de las pruebas obtenidos están marcados por un símbolo más(+). 
Combinaciones de tubos positivos no encontrados en esta tabla se presentan en menos del 1% de las 
pruebas y si se presentaran con mayor frecuencia indican un error de  técnica o que el valo r del número más 
probable se encuentra en el límite. El NMP de combinaciones que no aparecen en la tabla, se pueden obtener 
por extrapolación a la combinación cercana más elevada.  
b Multiplicar todos los valores de NMP/g (ml) por 100 para expresarlos como NMP/100 g (ml).  
Tabla No. 4 Número más probable (NMP) para 1g de muestra cuando  se usan 3 tubos con porciones de 
0,1, 0,01 y 0,001  g 
Tubos Positivos  Tubos Positivos  Tubos Positivos  Tubos Positivos  
0,1 0,01 0,001  NMP  0,1 0,01 0,001  NMP  0,1 0,01 0,001  NMP  0,1 0,01 0,001  NMP  
0 0 0 3 1 0 0 3,6 2 0 0 9,1 3 0 0 23 
0 0 1 3 1 0 1 7,2 2 0 1 14 3 0 1 39 
0 0 2 6 1 0 2 11 2 0 2 20 3 0 2 64 
0 0 3 9 1 0 3 15 2 0 3 26 3 0 3 95 
0 1 0 3 1 1 0 7,3 2 1 0 15 3 1 0 43 
0 1 1  6,1 1 1 1 11 2 1 1 20 3 1 1 75 
0 1 2  9,2 1 1 2 15 2 1 2 27 3 1 2 120 
0 1 3 12 1 1 3 19 2 1 3 34 3 1 3 160 
0 2 0  6,2 1 2 0 11 2 2 0 21 3 2 0 93 
0 2 1  9,3 1 2 1 15 2 2 1 28 3 2 1 150 
0 2 2 12 1 2 2 20 2 2 2 35 3 2 2 210 
0 2 3 16 1 2 3 24 2 2 3 42 3 2 3 290 
0 3 0  9,4 1 3 0 16 2 3 0 29 3 3 0 240 
0 3 1 13 1 3 1 20 2 3 1 36 3 3 1 460 
0 3 2 16 1 3 2 24 2 3 2 44 3 3 2 1100        (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 13 de febrero de 2012  
0 3 3 19 1 3 3 29 2 3 3 53 3 3 3 1100  
(Continúa en la Tercera Sección)