中华人民共和国国家标准  
 
 GB/T xxxx—xxxx 
 
  
中华人民共和国卫生部    发布 xxxx -xx-xx发布  
 xxxx -xx-xx实施  
 食品安全国家标准  
红曲类产品中桔青霉素的测定  
  GB/T xxxx xxxxxxxx  
1 前    言 
本标准代替 GB 5009.222 -2008。 
本标准与 GB 5009.222 -2008相比，主要变化 如下：   
——修改了标准的中文名称， 标准中文名称改为 《食品安全国家标准  红区类产品中桔青霉素的测
定（理化方法） 》 ； 
——按照 GB//T20001.4 -2001对原标准的结构进行了修改 。 GB/T xxxx xxxxxxxx  
2 食品安全国家标准  
红曲类产品中桔青霉素的测定  
1  范围  
本标准规定了 红曲类产品中桔青霉素 的测定方法。  
本标准适用于 红曲米、红曲红（固态、液态）、红曲发酵液和用红曲菌生产的保健食品中桔青霉素
的测定。  
2 原理  
液态红曲类样品经乙醇提取、离心、过滤后经高效液相色谱仪 （HPLC）分析；固态红曲类样品
经甲  
苯-乙酸乙酯 -甲酸提取、超声波萃取、离心、过滤后经 HPLC分析，外标法定量 。 
3  试剂和材料  
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 符合 GB/T 6682 中规定的一级水。  
3.1 试剂 
3.1.1 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。  
3.1.2 磷酸（H3PO4）：色谱纯。  
3.1.3 甲醇（CH 3OH）：色谱纯。  
3.1.4 甲苯（C6H5CH 3）。 
3.1.5 乙酸乙酯 （C4H8O2）。 
3.1.6 甲酸（CH 2O2）。 
3.1.7 无水乙醇 （C2H5OH）：色谱纯。  
3.2 试剂配制  
    复合萃取剂 （TEF）：甲苯–乙酸乙酯 –甲酸（7+3+1），配制方法是将 7份体积的甲苯 （3.5）、
3份体积乙酸乙酯 （3.1.5）和1份体积酌甲酸 （3.1.6）混合而成。  
3.3 标准品 
    桔青霉素 （C13H14O5）标准品：纯度 >99%。 
3.4 标准溶液制备  
3.4.1 桔青霉素标准贮备 溶液（50 mg/L）：准确称取桔青霉素标准品，用甲醇溶 解并定容 至浓度为 50 
mg/L，密封后 4 ℃冰箱避光保存 。 
3.4.2 桔青霉素标准工作溶液 （5 mg/L）：用甲醇将 10mL的50 mg/L桔青霉素标准贮备溶液定容至 100 
mL，密封后 4 ℃冰箱避光保存，工作液现用现配。工作液从冰箱取出后应于室温下至少放置 10 min，
涡旋混匀后方可使用。  GB/T xxxx xxxxxxxx  
3 3.4.3 桔青霉素标准曲线工作液： 将标准储备液用甲醇系列稀释后，配成浓度为 0.1 mg/L、0.25 mg/L 、
1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L的标准曲线 工作溶液 。 
4  仪器和设备  
4.1 高效液相色谱 仪，配有荧光检测器 。 
4.2 超声波细胞破碎仪。  
4.3 电子天平（ 感量 0.000 1 g）。  
4.4 pH计（精度 0.01）。 
4.5 匀浆器。  
4.6 离心机。  
4.7 旋转蒸发仪。  
4.8 微孔有机滤膜 （孔径 0.45 µm）。 
4.9 数显恒温水浴锅（温度精度土 1 ℃）。  
4.10 涡旋混匀器。  
4.11 磁力搅拌器。  
5 分析步骤  
5.1试样制备  
5.1.1 液态红曲样品  
将带有菌丝体的液态发酵红曲样品匀浆后用吸量管吸取 10 mL（液态红曲红样品直接取样 10 mL），
置于 50 mL具塞试管中，加入 20 mL无水乙醇， 60 ℃水浴加热 1 h（期间不断振摇），冷却至室温后转
入塑料离心管中， 3 000 r/min 离心 15 min，上清液经 0.45 µm滤膜过滤后进行 HPLC分析。  
5.1.2 固态红曲制品  
用电子天平 （4.3）准确称取一定量固态红曲样品（色素用红曲米为 2 g，用红曲菌生产的保健食品
为3 g，酿酒用曲为 3 g）于 50 mL具塞比色管中，加入 20 mL TEF 溶液（3.2），超声提取 10 min（强度
40%，工作 5 s，间隔 5 s），3 000 r/min 离心 20 min，上清液转入 50 mL具塞试管中，残渣用 15 mL TEF
溶液（3.2）同上述步骤再提取两次，合 并三次提取上清液于 50 mL具塞比色管中， 40℃真空浓缩 （4.7）
至干后加入 30 mL甲醇溶解，经微 孔有机滤膜 （4.8）过滤后进行 HPLC分析。  
准确称取 1g粉状红曲红或红曲黄色素祥品，在磁力搅拌下缓缓加到盛有 20 mL TEF 溶液（3.2）的
烧杯中，继续搅拌 30 min后， 3 000 r/min 离心 20 min，以下按固态红曲样品同样的方法自 “上清液转入
50 mL具塞试管中 ”起，依法操作。  
5.2 分析步骤  
5.2.1 液相色谱分析条件  
    a）色谱柱： C18色谱柱（ 150 mm× 4.6 mm ，粒度 5 µ m）；  
    b）柱温： 28 ℃； 
    c）流动相：乙腈 （3.2）+水=35+65，水用色谱纯磷酸 （4.3）调pH至2.5； 
    d）流速： 1.0 mL/min； 
    e）检测器：荧光检测器，激发波长 331 nm，发射波长 500 n m； 
    f）进样量： 20 µ L。 
5.2.2 色谱分析  GB/T xxxx xxxxxxxx  
4 分别将 20 pL不同质量浓度 （0.1 mg/L、0.25 mg/L 、1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L）的桔青霉素标准溶
液（3.10.3）及制备后的样 品溶液（5.1）注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以桔青霉素质量浓度
与相对应的峰面积绘制工作曲线，获得线性回归方程及相关系数，以此计算样品中的桔青霉素含量。   
由于 HPLC分析中采用了荧光检测器，样品中的杂质对桔青霉素的出峰基本无干扰，因此一般情
况下无需确证，必要时用液相色谱 —质谱进行确证，条件如下：  
   a）毛细管电压： 3.78 kV； 
   b）锥孔电压： 30 V； 
   c）射频透镜电压： 0.5 V； 
   d）萃取锥孔电压： 5 V； 
   e）离子源温度： 100 ℃； 
   f）脱溶剂气温度： 250 ℃； 
   g）脱溶剂气流量： 320 L/h； 
   h）电子倍增电压： 650 V； 
   i）相对分子质量范围： 100～500。 
    桔青霉素的液相色谱图参见附录 A，质谱图参见附录 B。 
5.3 标准曲线的制 作 
将标准系列工作液分别注入 液相色谱 仪中，测定相应的 响应值，以标准工作液的浓度为横坐标，
以响应值（ 如：峰面积、峰高、吸收值等 ）为纵坐标，绘制标准曲线。  
5.4 平行试验  
将试样溶液注入 液相色谱 仪中， 得到 相应的响应值 ， 根据标准曲线得到待测液中 桔青霉素 的浓度，
平行测定次数不少于两次。  
6 分析结果的表述  
6.1固态样品中桔青霉素的含量按式 （l）计算：  
                              
式中：  
 c1——样品中桔青霉素含量，单位为毫克每千克 （mg/kg）； 
c——仪器检测的质量浓度，单位为毫克每升 （mg/L）； 
V——最终定容体积，单位为毫升 （mL）； 
m——样品质量，单位为克 （g）。 
6.2液态样品中桔青霉素的含量按式 （2）计算：  
                            
  
式中：  
c2——样品中桔青霉素含量，单位为毫克每升 （mg/L）； 
c——仪器检测的质量浓 度，单位为毫克每升 （mg/L）； 
V2——最终定容体积，单位为毫升 （mL）； 
V1——移取的样品体积，单位为毫升 （mL）。 
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字 （或小数点GB/T xxxx xxxxxxxx  
5 后几位）。 
注：如果分析结果在方法的检出限以下，可以用 “未检出”表述分析结果，但应注明检出限数值。  
 
 
 
 GB/T xxxx xxxxxxxx  
6 附  录A 
    （资料性附录）  
桔青霉素的液相色谱图  
 
 
 
 
 GB/T xxxx xxxxxxxx  
7   附  录B 
（资料性附录）  
桔青霉素质谱图