식품의약품안전청 공고 제2012-160 호
- 1 -식품의약품안전청 공고 제2012-160 호
「식품의기준및규격」(식품의약품안전청고시 제2012-48호,2012.7.
30)을일부개정함에있어국민에게미리알려의견을수렴하고자그
취지,개정이유및주요내용을「행정절차법」제46조에따라다음
과같이공고합니다.
 2012년8월8일
 식품의약품안전청장
농약,동물용의약품의잔류허용기준설정등에따른관련시험법신설
및개정을통하여검사의신뢰성을확보함으로써국민에게안전한식
품을공급하고자함.
가.잔류농약 분석법 신설 및개정
1)새로운농약이사용․등록됨에따라시험법마련및비효율적인
시험법개선이필요함
2)클레소딤,프로폭시딤및세톡시딤등12개시험법신설(7)및개정(5)
-클레소딤(Clethodim),프로폭시딤(Profoxydim)및세톡시딤(Sethoxydim)- 2 -[안제10,4.1.3.17]-개정
-보스칼리드(Boscalid),플루토라닐(Flutolanil),메프로닐(Mepronil)
및티플루자마이드(Thifluzamid)[안제10,4.1.3.30]-개정
-비페녹스(Bifenox),에탈풀루라린(Ethalfluralin),메토라클로르(Metolacholor),
옥시풀루오르펜(Oxyfluorfen),프레탈라클로르(Pretilachlor),테닐
클로르(Thenylchlor)및트리풀루라린(Thrifluralin)[안제10,4.1.3.31]
-개정
-싸이프로코나졸(Cyproconazole), 디니코나졸(Diniconazole),푸루실
라졸(Flusilazole), 펜코나졸(Penconazole) 및터부코나졸
(Tebuconazole)[안제10,4.1.3.32]-개정
-트리포린(Triforine)[안제10,4.1.3.38]-개정
-메타조설푸론(Metazosulfuron)[ 안제10,4.1.4.148]
-설폭사플로르(Sulfoxaflor)[안제10,4.1.4.149]
-시아조파미드(Cyazofamid)[안제10,4.1.4.150]
-옥시카복신(Oxycarboxin)[안제10,4.1.4.151]
-이미시아포스(Imicyafos)[안제10,4.1.4.152]
-이소피라잠(Isopyrazam)[안제10,4.1.4.153]
-플루오피람(Fluopyram)[안제10,4.1.4.154]
3)식품중농약시험법의신설및개정을통하여검사의신뢰성을
확보함으로써국민에게안전한식품을공급- 3 -나.잔류동물용의약품 시험법 신설 및개정
1)동물용의약품잔류허용기준신설에따른시험법마련및비효율
적인시험법개선이필요함
2)티암페니콜등6개시험법신설(5)및개정(1)
-티암페니콜(Thiamphenicol)[ 안제10,5.3.70]-개정
-메벤다졸(Mebendazole)[안제10,5.3.96]
-니트록시닐(Nitroxynil),클로술론(Clorsulon)[안제10,5.3.97]
-톨페남산(Tolfenamicacid)[안제10,5.3.98]
-툴라스로마이신(Tulathromycin)[ 안제10,5.3.99]
-시미아졸(Cymiazole)[안제10,5.3.100]
3)식품중동물용의약품시험법의개정을통하여검사의신뢰성을
확보함으로써국민에게안전한식품을공급
「식품의기준및규격」일부개정고시(안)에대하여의견이있는
단체또는개인은 2012 년10월8일까지다음사항을기재한의견서를
식품의약품안전청장 (우편번호:363-700,주소:충북청원군오송읍오
송생명2로187오송보건의료행정타운 식품의약품안전청 ,참조:식품기
준과,전화043-719-2420,팩스043-719-2400)에게제출하여주시기바
랍니다.
가.예고사항에대한항목별의견(찬·반여부와그이유)- 4 -나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),전화번호및주소
다.기타참고사항- 5 -식품의약품안전청 공고 제2012-160 호
「식품위생법」제7조제1항에따른「식품의기준및규격」(식품의
약품안전청고시제2012-48호,2012.7.30)을다음과같이개정고시합
니다.
2012년8월8일
식품의약품안전청장
“제10,4.1.3.17세톡시딤(Sethoxydim)및클레소딤(Clethodim)”을“제
10,4.1.3.17클레소딤(Clethodim),프로폭시딤(Profoxydim)및세톡시
딤(Sethoxydim)시험법”으로하고,다음과같이한다.
1)시험법적용범위
곡류,서류,콩류,견과종실류,과일류,채소류,버섯류등식품에적용
한다.
2)분석원리
검체중대상성분을메탄올/물혼합액(1/1,v/v)을가하여모화합
물및산화대사산물을 동시에추출하고클로로과산화벤조 익산
(m-CPB)으로산화반응시킨다.전환된술폰체(sulfone)를액-액
분배하여플로리실칼럼으로정제한후액체크로마토그래프로분
석한다.- 6 -3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:클레소딤및세톡시딤표준품을각각아세토니트릴
에녹여200mg/L가되게한다.프로폭시딤또는리튬염분
석용표준품을메탄올에녹여200mg/L가되게한다.
라)표준용액:클레소딤,프로폭시딤및세톡시딤의농도비가1:1:1이
되도록표준원액을혼합하고아세토니트릴에녹여적절한농도로
희석한다.
마)클로로과산화벤조 익산(m-chloroperoxybenzoic acid,m-CPB)
용액:디클로로메탄에1%가되도록녹이며사용직전조제
한다.
바)티오황산나트륨(sodiumthiosulfate)용액:10%수용액을조제
한다.
사)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60∼
100mesh)을130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보
관·사용한다.
아)기타시약:잔류농약시험용또는특급- 7 -5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류는약1kg을분쇄기로분쇄하여표준체420μm를
통과한분말상검체10g,채소류및과실류는약1kg을세
절혼합기에넣고0.5～1cm내외로분쇄한검체10g)를정밀
히달아균질기용기에넣는다.메탄올/물혼합액(1/1,v/v)
100mL를가한후2분간고속마쇄(10,000rpm이상)하여추
출한다.곡류등건조검체의경우추출전에미리30분간
방치,습윤화한다.추출물을여과지가깔려있는부흐너깔때기
로흡인여과하고메탄올/물혼합액(1/1,v/v)50mL로잔사
및용기를씻어내려앞서의여액과합한다.합한여액을500
mL용량의분액깔때기에옮기고포화식염수50mL,물50
mL,초산0.5mL및디클로로메탄50mL를차례로가한후
1분이상진탕한다.두층이완전히분리될때까지정치한후
하부디클로로메탄층을20g의무수황산나트륨층에통과,
탈수하여250mL용량의감압농축플라스크에받는다.수용액
층에재차디클로로메탄50mL를가한후위의분배추출과
정을반복한다.합친디클로로메탄추출액을40℃에서감압
농축,건고한후디클로로메탄25mL에재용해한다.
나)산화반응
위용액에1%m-CPB용액5mL를가한후가볍게진탕하- 8 -고30℃항온수조에서2분간정치,반응시킨다.반응후10%
티오황산나트륨수용액30mL를가한후3분간진탕,반응을
종결시킨다.반응액을250mL용량의분액깔때기에옮기고
잔류물을재차디클로로메탄10mL로씻어옮긴다.분액깔때
기에10%의염화나트륨수용액80mL와0.1N황산수용액2
mL를가하고진탕한후정치,하부디클로로메탄층을20g
의무수황산나트륨층에통과,탈수하여125mL용량의감압
농축플라스크에받는다.수용액층에재차디클로로메탄30
mL를가한후위의분배추출과정을반복한다.합한디클로
로메탄추출액을40℃에서감압농축,건고한후잔류물을디
클로로메탄10mL에재용해한다.
다)정제
안지름11mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실5g과
무수황산나트륨을약2cm높이로차례로충진한후디클로
로메탄25mL를가하여유출시켜버린다.고정상상단이노
출되기전에,‘가)추출’로부터얻은디클로로메탄10mL를가
하여유출시켜버리고,디클로로메탄5mL로용기및칼럼
벽면을씻어흘려버린다.고정상상단이노출되기전에아세
톤/디클로로메탄혼합액(10/90,v/v)40mL를유출시켜버리
고재차60mL의메탄올/아세톤혼합액(1/99,v/v)으로유출
시켜받는다.이를40℃에서감압농축,건고한후2mL의아- 9 -세토니트릴에재용해하고기기분석전에0.2%초산수용액과
1:1로혼합하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.0mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:아세토니트릴/0.1%초산함유물혼합액(35/65,v/v)
에서1분간정치한후75/25(v/v)로30분간직선적으로농도
구배한다.
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:256nm
(6)주입량:20μL
나)검량선의작성
농도별로아세토니트릴에조제한표준혼합용액일정량을반응
플라스크에취하고질소기류하에서증발건고한직후위의
m-CPB산화반응과정을동일하게수행한다.디클로로메탄추
출액을감압농축,건고한후아세토니트릴2mL에재용해하
고0.2%초산수용액과1:1로혼합하여액체크로마토그래프에
각각주입한다.얻어진크로마토그램상에서각대상성분술
폰체의피크면적또는높이를기준으로모화합물로환산하
여,검량선을작성한다.- 10 -다)표준품의크로마토그램
0 5 10 15 20 250369
0 5 10 15 20 250369
Retention time (min)Detector response (mV)가 나
21
3
123
0 5 10 15 20 250369
0 5 10 15 20 250369
Retention time (min)Detector response (mV)가 나
21
3
123
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
가.산화반응공시험액,나.표준품첨가후산화반응시험액
1.세톡시딤술폰체(11.5분),2.클레소딤술폰체(11.9분),
3.프로폭시딤술폰체(19.7분)
라)정량한계
0.04mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여
정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로각성분을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.1mm,3μm)또는이와동등한것- 11 -(2)이동상:아세토니트릴/0.1%초산함유물혼합액(35/65,v/v)
에서1분간정치한후75/25(v/v)로30분간직선적으로농도
구배한다.
(3)이동상유량:0.2mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:10μL
(6)이온화:ESIpositiveionmode
(7)분자량범위:100~500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
클레소딤술폰체16.1 391392
세톡시딤술폰체15.2 359360
프로폭시딤술폰체26.5 497498
제10,4.1.3중4.1.3.30에서4.1.3.32까지를다음과같이신설한다.
4.1.3.30보스칼리드(Boscalid),플루토라닐(Flutolanil),메프로닐(Mepronil)
및티플루자마이드(Thifluzamid)
1)시험법의적용범위
곡류,서류,콩류,과일류및채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상농약을아세톤으로추출하고플로리실칼럼으로정제
하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치- 12 -가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:보스칼리드,플루토라닐,메프로닐및티플루자마이드
표준품을메탄올에녹여500mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을각각메탄올에녹여적당한농도로혼합,희석
한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(약1kg을분쇄기로분쇄하여표준체420μm를통과한분
말상검체25g,채소류및과일류는약1kg을세절혼합기에
넣고0.5～1cm내외로분쇄한검체25g)를정밀히달아균질
기용기에넣는다.곡류등건조검체의경우추출전에미리30
분간방치,습윤화한다.이에아세톤100mL를가한후2분간
고속마쇄(10,000rpm이상)하여추출한다.추출물을여과지가깔
려있는부흐너깔때기로흡인여과하고아세톤40mL로잔사및
용기를씻어내려앞서의여액과합한다.합한여액을500mL
용량의분액깔때기에옮기고포화식염수50mL,물450mL및
헥산/디클로로메탄(80/20,v/v)혼합액100mL를차례로가한
후5분이상진탕한다.두층이완전히분리될때까지정치한후- 13 -유기용매층을무수황산나트륨층에통과,탈수하여250mL용량
의감압농축플라스크에받아40℃이하수욕상에서감압농축하
여건고한다.잔류물에아세토니트릴포화헥산40mL를가하여
녹인후250mL용량의분액깔때기에옮긴다.헥산포화아세토
니트릴40mL를분액깔때기에가하여5분간격렬하게흔들어
섞은후정치한다.분리된아세토니트릴층을125mL용량의감
압농축플라스크에옮기고,분액깔때기에남은헥산용액에다시
헥산포화아세토니트릴40mL를가하여위의과정을반복한다.
이를40℃이하의수욕상에서감압농축하여디클로로메탄10
mL에재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실10g과무
수황산나트륨2g을차례로충진한후헥산50mL를가하여유
출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에,‘가)추출’로부터얻
은디클로로메탄10mL를가하여유출시켜버리고,고정상상단이
노출되기전에헥산/디클로로메탄혼합액(70/30,v/v)100mL를
가하여유출시켜버린다.다시헥산/디클로로메탄혼합액(70/30,
v/v)100mL를가하여유출시켜버리고,헥산/에틸아세테이트혼
합액(75/25,v/v)150mL로유출시켜받는다.이를40℃이하수욕
상에서감압농축하고잔류물에58%아세토니트릴가하여최종부피
10mL가되게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:물/아세토나이트 릴혼합액(42/58,v/v)- 14 -(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)검출기파장:220nm
(6)주입량:20μL
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
4321
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
1.보스칼리드(7.4분),2.메프로닐(8.1분),3.플루토라닐(8.8분),
4.티플루자마이드(10.2분)
다)정량한계
0.04mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여- 15 -정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로각농약성분을확인한다.
가)액체크로마토그래프․질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.0mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/아세토니트릴(45/55,v/v)
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:100～600m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
보스칼리드 8.0342343
메프로닐 10.0269270
플루토라닐 11.1323324
티플루자마이드 14.9528529- 16 -4.1.3.31비페녹스(Bifenox),에탈풀루라린(Ethalfluralin),메토라클로르
(Metolachlor),옥시풀루오르펜(Oxyfluorfen),프레틸라클로르
(Pretilachlor), 테닐클로르(Thenylchlor) 및트리풀루라린
(Trifluralin)
1)시험법의적용범위
곡류,콩류,과실류,채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상농약을아세톤으로추출하고플로리실칼럼으로정제
하여기체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
나)기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:각농약표준품을헥산에녹여500mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을각각헥산에녹여적당한농도로혼합,
희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1kg을분쇄기로분쇄하여표준체420
μm를통과한분말상검체25g,채소류및과일류는약1kg을- 17 -세절혼합기에넣고0.5～1cm내외로분쇄한검체25g)를정밀
히달아균질기용기에넣는다.곡류및콩류등건조검체의경
우물20mL를첨가하고30분간방치,습윤화한다.이에아세톤
100mL를가한후2분간고속마쇄(10,000rpm이상)하여추출한
다.추출물을여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡인여과하고
아세톤40mL로잔사및용기를씻어내려앞서의여액과합한
다.합한여액을500mL용량의분액깔때기에옮기고포화식염
수50mL,물450mL및헥산/디클로로메탄(80/20,v/v)100
mL를차례로가한후5분이상진탕한다.두층이완전히분리
될때까지정치한후유기용매층을무수황산나트륨층에통과,
탈수하여250mL용량의감압농축플라스크에받아40℃이하수
욕상에서감압농축하여건고한다.잔류물에아세토니트릴포화
헥산40mL를가하여녹인후250mL용량의분액깔때기에옮
긴다.헥산포화아세토니트릴40mL를분액깔때기에가하여5
분간격렬하게흔들어섞은후정치한다.분리된아세토니트릴층
을125mL용량의감압농축플라스크에옮기고,분액깔때기에남
은헥산용액에다시헥산포화아세토니트릴40mL를가하여
위의과정을반복한다.이를40℃이하의수욕상에서감압농축하
여헥산10mL에재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실10g과무
수황산나트륨2g을차례로충진한후헥산100mL를가하여유
출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에‘가)추출’로부터얻
은헥산10mL를가하여유출시켜버린다.고정상상단이노출
되기전에헥산/디클로로메탄혼합액(90/10,v/v)150mL를가하- 18 -여유출시켜버리고,헥산/디클로로메탄혼합액(60/40,v/v)150
mL를가하여유출시켜감압농축플라스크에받는다.이유출액을
40℃이하수욕상에서감압농축하고잔류물에헥산10mL를가
하여잘녹인후에탈플루라린및트리풀루라린의 시험용액으로
사용하고,계속하여디클로로메탄/헥산/아세토니트릴혼합액
(50/49.5/0.5,v/v/v)150mL를가하여유출시켜받은후40℃이
하의수욕상에서감압농축한다.다시잔류물에헥산10mL를가
하여잘녹인후옥시풀루오르펜및비페녹스시험용액으로사용
하며,계속하여디클로로메탄/헥산/아세토니트릴혼합액(50/46/4,
v/v/v)150mL를가하여유출시켜받은후40℃이하의수욕상에
서감압농축하고잔류물에헥산10mL를가하여잘녹인후메
토라클로르,프레틸라클로르및테닐클로르의시험용액으로사용한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:DB-1(30m×0.53mm,0.5μm)또는이와동등한것
(2)이동상가스및유량：N2,10mL/min
(3)주입부온도:250℃
(4)오븐온도：140℃에서시험용액을주입하고4℃/분의비율로
온도를240℃까지상승시키고10℃/분의비율로280℃까지상
승시킨다.
(5)검출기온도:300℃
(6)주입부:직접주입법
(7)주입량:1μL
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정량취하여기체크로마토그래프에각각- 19 -주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
3 45
712
6
그림1.기체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
1.에탈풀루라린(5.1분),2.트리풀루라린(5.5분),3.
메토라클로르(10.2분),4.프레틸라클로르(14.1분),5.
옥시풀루오르펜(14.6분),6.테닐클로르(17.3분),7.
비페녹스(19.7분)
라)정량한계
에탈풀루라린및트리풀루라린(0.004mg/kg),메토라클로르및
프레틸라클로르(0.008mg/kg),옥시풀루오르펜(0.002mg/kg),테
닐클로르(0.02mg/kg),비페녹스(0.006mg/kg)
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여
정량한다.- 20 -8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로각농약성분을확인한다.
가)기체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-1MS(50m×0.25mm,0.25μm)또는이와동등한
것
(2)이동상가스및유량：He,2mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：80℃에서시험용액을주입하고10℃/분의비율로
온도를220℃까지상승시켜3분간유지한다.다시3℃/분의비
율로240℃까지상승시키고20℃/분의비율로280℃까지상승
시켜15분간유지한다.
(5)인터페이스온도:300℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부：Splitmode(30:1)
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:50～500m/z
표1.기체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
비페녹스 21.1341311,341,343
에탈풀루라린 5.2333276,316
메토라클로르 10.3283162,238
옥시풀루오르펜 14.5361252,300,361
프레틸라클로르 14.2311162,176,238
테닐클로르 18.2323127,288
트리풀루라린 5.3335264,306- 21 -4.1.3.32싸이프로코나졸(Cyproconazole), 디니코나졸(Diniconazole),푸루실
라졸(Flusilazole),펜코나졸(Penconazole) 및터부코나졸
(Tebuconazole)
1)시험법적용범위
곡류,서류,과일류및채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상성분을아세톤으로추출하고플로리실칼럼으로정제
하여기체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)
나)기체크로마토그래프-질량분석기(GC/MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:싸이프로코나졸(부분입체이성질체의혼합물),디니코
나졸(부분입체이성질체의혼합물),푸루실라졸,펜코나졸및터부코
나졸표준품을에틸아세테이트에녹여500mg/L가되게한다.
라)내부표준원액:4-dimethylamino-2-methylazobenzene (DAMAB)
표준품을에틸아세테이트에녹여500mg/L가되게한다.
마)표준용액1:싸이프로코나졸 및펜코나졸의농도비가1:1이되
도록표준원액을혼합하고에틸아세테이트에녹여적절한농도
로희석한다.GC검량용표준혼합용액은싸이프로코나졸기준으
로0.1～1mg/L농도범위가되도록하고내부표준물질
DAMAB의농도는항상0.4mg/L가되도록혼합하여에틸아세- 22 -테이트에조제한다.
바)표준용액2:디니코나졸,푸루실라졸및터부코나졸의농도비가
1:1:1이되도록표준원액을혼합하고에틸아세테이트에녹여적
절한농도로희석한다.GC검량용표준혼합용액은디니코나졸
기준으로0.1～1mg/L농도범위가되도록하고내부표준물질
DAMAB의농도는항상0.4mg/L가되도록혼합하여에틸아세
테이트에조제한다.
사)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60∼100
mesh)을130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용
한다.
아)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1kg을분쇄기로분쇄하여표준체420
μm를통과한분말상검체25g,채소류및과실류는약1kg을
세절혼합기에넣고0.5～1cm내외로분쇄한검체25g)를정밀
히달아균질기용기에넣는다.곡류및콩류등건조검체의경
우물20mL및40mL를각각첨가하고30분간방치,습윤화한
다.이에아세톤100mL를가한후2분간고속마쇄(10,000rpm
이상)하여추출한다.추출물을여과지가깔려있는부흐너깔때기
로흡인여과하고아세톤50mL로잔사및용기를씻어내려앞
서의여액과합한다.합한여액을1L용량의분액깔때기에옮
기고포화식염수50mL,물450mL및디클로로메탄50mL를
차례로가한후1분이상진탕한다.두층이완전히분리될때까
지정치한후하부디클로로메탄층을20g의무수황산나트륨- 23 -층에통과,탈수하여250mL용량의감압농축플라스크에받는
다.수용액층에재차디클로로메탄50mL를가한후위의분배
추출과정을반복한다.합한디클로로로메 탄추출액을40℃에서
감압농축,건고한다.비유지검체의경우잔류물을디클로로로
메탄10mL에재용해하여플로리실칼럼크로마토그래피에직접
공시한다.현미및콩류등유지검체의경우잔류물을미리아
세토니트릴로포화시킨헥산40mL에재용해한후125mL용
량의분액깔때기에정량적으로옮기고미리헥산으로포화시킨
아세토니트릴30mL를가한후1분이상격렬하게진탕한다.두
층이완전히분리될때까지정치한후하부아세토니트릴층을
250mL용량의감압농축플라스크에받는다.분액깔때기에미리
헥산으로포화시킨아세토니트릴30mL를재차가하여위의분
배추출과정을반복한다.합한아세토니트릴추출액을40℃에서
감압농축,건고한후잔류물을디클로로로메 탄10mL에재용해
한다.
나)정제
안지름11mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실5g과그
위에2cm높이로무수황산나트륨을차례로건식충전하고디
클로로로메탄25mL를유출시켜버린다.고정상상단이노출되기
전에,‘가)추출’로부터얻은디클로로로메 탄용액10mL를칼럼
에가하고여분의디클로로로메 탄5mL로용기및칼럼벽면을
씻어흘려버린다.고정상상단이노출되기전에에틸아세테이트/
디클로로메탄혼합액(4/96,v/v)50mL를유출시켜버리고,에틸
아세테이트/디클로로메탄혼합액(40/60,v/v)50mL로용출시켜
받는다.이를40℃에서감압농축,건고한후내부표준물질이0.4- 24 -mg/L의농도로함유되어있는에틸아세테이트5mL에재용해
하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:DB-5(30m×0.53mm,0.5μm)또는이와동등한것
(2)이동상가스및유량:He,10mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도:180℃(싸이프로코나졸,펜코나졸),190℃(디니코나
졸,푸루실라졸,터부코나졸)
(5)검출기온도:300℃
(6)주입부:직접주입법
(7)주입량:1μL
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정량취하여기체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
0246810121415202530354045
Retention time (min)Detector response ( pA)
1
23
그림1.기체크로마토그래프에서표준품(I)의크로마토그램
1.펜코나졸(4.5분),2.싸이프로코나졸(7.9분),3.
DAMAB(내부표준물질,10.3분)- 25 -0246810121415202530354045
12
43Detector response ( pA)
Retention time (min)그림2.기체크로마토그래프에서표준품(II)의크로마토그램
1.푸루실라졸(5.1분),2.디니코나졸(6.0분),3.
DAMAB(내부표준물질,6.8분),4.터부코나졸(8.8분)
라)정량한계
싸이프로코나졸,디니코나졸,푸루실라졸및펜코나졸(0.02
mg/kg),터부코나졸(0.03mg/kg)
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여
정량한다.
8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로각성분을확인한다.
가)기체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-5MS(30m×0.25mm,0.25μm)또는이와동등한
것
(2)이동상가스및유량:He,2mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도:45℃에서시험용액을주입한후2분간유지하고,- 26 -200℃까지20℃/분비율로온도를상승시켜2분간유지한후
280℃까지5℃/분비율로온도를상승시킨다.
(5)인터페이스온도:300℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부:Splitlessmode
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:100～500m/z
표1.기체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
싸이프로코나졸 18.1,18.2291222,224,139
디니코나졸 18.7325268,270
푸루실라졸 17.6315233,206
펜코나졸 15.5283248,159,161,250
터부코나졸 20.6307250,125
“제10,4.1.3.38트리포린(Triforine)”을다음과같이한다.
1)시험법적용범위
곡류,채소류및과일류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중트리포린을아세토니트릴로추출한후Dispersive-SPE로
정제하여액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)- 27 -4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:트리포린표준품을아세토니트릴에녹여500mg/L
가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴에녹여적당한농도로각
각혼합,희석한다.
마)Dispersive-SPE:PSA(Primary-secondary amine)25mg과황산
마그네슘150mg을1.5mL튜브에담아둔다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄한후10g을정밀히달아50mL원
심분리관에넣고(곡류등건조검체의경우물5mL를넣고20
분간습윤화),아세토니트릴10mL를넣은후15분간균질화한
다.이에황산마그네슘4g,염화나트륨1g,구연산나트륨1g,
제2구연산나트륨0.5g을첨가하고,1분간격렬히흔들어준다.
이를3,000rpm에서10분간원심분리한다.
나)정제
미리PSA와황산마그네슘을담아둔튜브에‘가)추출’로부터얻
은용액중상등액1mL를넣고1분간격렬히진탕한다.이를
3,000rpm에서10분간원심분리하고,상등액을시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(2.1mm×100mm,2.6μm)또는이와동등한것- 28 -(2)이동상:0.1%포름산함유물/0.1%포름산함유아세토니트
릴혼합액(70/30,v/v)에서2분간유지후0.1%포름산함유
물/0.1%포름산함유아세토니트릴혼합액(10/90,v/v)으로2
분간직선적으로농도구배하고1분간유지한다.
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:10μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:100~500m/z
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프-질량분
석기에각각주입한다.얻어진크로마토그램상의390(m/z)이온
의피크높이또는면적을구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
Retention Time (min)0 2 4 6Relative response
050000100000150000200000250000300000
그림1.액체크로마토그래프-질량분석기에서표준품의크로마토그램
트리포린(4.1분)
라)정량한계
0.005mg/kg
7)정량시험- 29 -위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는피크면적을검량선에대
입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로써트리포린을확인한다.
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름
시간(분)분자량
(MW)Precursor
ion(m/z)Fragment
ion(m/z)Collision
energy(V)
4.1435435390
21515
30
제10,4.1.4중4.1.4.148에서4.1.4.154까지를다음과같이신설한다.
4.1.4.148메타조설푸론(Metazosulfuron)
1)시험법적용범위
곡류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중메타조설푸론을 아세토니트릴로추출하고아미노프로필
카트리지로정제하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액- 30 -가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:메타조설푸론표준품을아세토니트릴에녹여1,000
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴에녹여적당한농도로각
각혼합,희석한다.
마)아미노프로필카트리지:아미노프로필(1g)이충진되어있는일회용
카트리지(용량6mL)를사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄하여표준체420μm를통과시키고
25g을정밀히달아삼각플라스크에넣고,물25mL를넣은
후혼합하여1시간정치한다.여기에아세토니트릴100mL를넣
은후1시간동안진탕하여여과지가깔려있는부흐너깔때기로
흡인여과하고아세토니트릴30mL로잔사및용기를씻어상기
여액과합하여500mL감압농축플라스크에받는다.이여액을
40℃이하의수욕상에서약10mL가될때까지감압농축하고
분액깔때기에옮긴다.이에포화식염수50mL,물50mL및에
틸아세테이트100mL를가하여심하게흔들어정치한후에틸
아세테이트층을무수황산나트륨20g에통과시켜탈수하여감압
농축플라스크에취한다.물층에다시에틸아세테이트50mL를
가하여심하게흔들어정치한후에틸아세테이트층을무수황산
나트륨20g에통과시켜탈수하여상기감압농축플라스크에합
한다.이를40℃이하수욕상에서감압농축한후잔류물에디클- 31 -로로메탄5mL를가하여용해한다.
나)정제
아미노프로필카트리지에디클로로메탄10mL를넣고고정상
상단에소량의디클로로메탄이남을정도까지유출시켜버린후,
‘가)추출’로부터얻은디클로로메탄5mL를고정상상단에가
한다.여기에아세톤/디클로로메탄혼합액(50/50,v/v)10mL을
유출시켜버린후,다시아세톤/디클로로메탄/초산혼합액
(20/80/1,v/v/v)10mL를15mL시험관에받는다.이유출액을
40℃이하수욕상에서질소농축한후잔류물에아세토니트릴을
가하여최종부피1mL가되게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/0.1%포름산함유아세토니트
릴혼합액(40/60,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:245nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램- 32 -Retention time (min)0 2 4 6 8Relative response
-202468101214
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
메타조설푸론(5.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는피크면적을검량선에대
입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로메타조설푸론을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(50mm×2.1mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/0.1%포름산함유아세토니트
릴혼합액(50/50,v/v)
(3)이동상유량:0.2mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:5μL- 33 -(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:200~500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
2.0 475 476
4.1.4.149설폭사플로르(Sulfoxflor)
1)시험법적용범위
과일류및채소류등의식품에적용한다.
2)분석원리
검체중설폭사플로르를 메탄올및1N염산으로추출한후아미
노프로필카트리지로정제하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:설폭사플로르표준품을아세토니트릴에녹여500
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴/0.2%아세트산함유물혼
합액(50/50)으로적당한농도로각각혼합,희석한다.- 34 -마)아미노프로필카트리지:아민(1g)고정상이충진되어있는일
회용카트리지(용량6cc)를사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질화한후20g을정밀히달아균질기
용기에넣고,1N염산용액5mL와메탄올45mL를가하여
혼합추출분쇄기로5분간균질화한다.이를여과지가깔려있는부
흐너깔때기로흡인여과하고,잔류물을메탄올30mL로씻어내려
앞의여액과합하여40℃이하수욕상에서감압농축한다.(추출물
이여과가잘되지않을경우여과지에Celite545를깔고여과
한다.)농축액을포화식염수100mL가담겨있는500mL분액깔
때기에옮긴후디클로로메탄100mL를가하여심하게흔들어
층이완전히분리될때까지정치한후,디클로로메탄층을무수
황산나트륨에통과시켜감압농축플라스크에받는과정을2회반
복한다.이를40℃이하수욕상에서감압농축한후잔류물을헥산
/아세톤혼합액(95/5,v/v)5mL로재용해한다.
나)정제
아미노프로필카트리지에헥산10mL를넣고고정상상단이노
출되기전에‘가)추출’로부터얻은헥산/아세톤혼합액(95/5,v/v)
5mL를가하여유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에헥
산/아세톤혼합액(95/5,v/v)5mL와헥산/아세톤혼합액(90/10,
v/v)5mL를가하여유출시켜버리고,헥산/아세톤혼합액(60/40,
v/v)10mL로유출시켜감압농축플라스크에취한다.이유출액을
40℃수욕상에서감압농축하고잔류물에아세토니트릴/0.2%아세- 35 -트산함유물혼합액(50/50,v/v)을가하여최종부피2mL가되
게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:물과아세토니트릴의농도구배조건에따라사용한
다.
시간(분)물(%)아세토니트릴(%)
070 30
570 30
1830 70
2070 30
2570 30
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:220nm
(6)주입량:40μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램- 36 -
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
설폭사플로르(7.9분,8.3분)
라)정량한계
0.05mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여
정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로설폭사플로르를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.01%포름산함유물과0.01%포름산함유아세토
니트릴의농도구배조건에따라사용한다.- 37 -시간(분)0.01%포름산함유
아세토니트릴(%)0.01%포름산함유물(%)
0 0 100
5 30 70
12 70 30
13 0 100
15 0 100
(3)이동상유량:0.2mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:100~500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
8.9,9.1 277 300
4.1.4.150시아조파미드(Cyazofamid)
1)시험법적용범위
과일류,채소류,서류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중시아조파미드를 아세톤으로추출한후플로리실칼럼으로
정제하여액체크로마토그래프로분석한다.- 38 -3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:시아조파미드표준품을아세토니트릴에녹여500
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴에녹여적당한농도로각
각혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄한후25g을정밀히달아삼각플
라스크에넣고,아세톤100mL를넣은후1시간동안진탕한다.
이를여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡인여과하고아세톤
30mL로잔사및용기를씻어상기여액과합하여500mL감
압농축플라스크에받는다.이여액을40℃이하의수욕상에서약
10mL가될때까지감압농축하고분액깔때기에옮긴다.이에포
화식염수50mL,물50mL및디클로로메탄100mL를가하여
심하게흔들어정치한후디클로로메탄층을무수황산나트륨15
g에통과시켜감압농축플라스크에받는다.물층에다시디클로
로메탄50mL를가하여심하게흔들어정치한후디클로로메탄- 39 -층을무수황산나트륨15g에통과시켜상기감압농축플라스크에
합한다.이를40℃이하수욕상에서감압농축한후잔류물에헥
산5mL를가하여용해한다.(대두등의유지작물의추가분배
를위하여건고물에아세토니트릴포화헥산50mL를가하여
녹인후250mL분액깔때기에옮긴다.헥산포화아세토니트릴
50mL를분액깔때기에가하여2분간격렬히진탕하고정치한다.
분리된아세토니트릴층을감압농축플라스크에옮기고,분액깔때
기에남은헥산용액에다시헥산포화아세토니트릴30mL를
가하여위의과정을되풀이한다.합친아세토니트릴여액을40℃
이하의수욕상에서감압농축하고헥산5mL를가하여용해한다.)
나)정제
안지름15mm,길이350mm의유리칼럼에플로리실10g과무
수황산나트륨3g을차례로충진한후헥산100mL를가하여
유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에‘가)추출’로부터
얻은헥산5mL를가하여유출시켜버리고,에틸아세테이트/헥
산혼합액(10/90,v/v)100mL를유출시켜버린후,다시에틸아
세테이트/헥산혼합액(30/70,v/v)100mL로유출시켜감압농축
플라스크에취한다.이유출액을40℃이하수욕상에서감압농
축하고잔류물에아세토니트릴을가하여최종부피5mL가되게하
여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:물/아세토니트릴혼합액(35/65,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min- 40 -(4)칼럼온도:35℃
(5)검출파장:280nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각
각주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적
을구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
Rentention time (min)0 2 4 6 8 10 12 14Relative response
-1012345
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
시아조파미드(8.8분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는피크면적을검량선에대
입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙- 41 -트럼으로써시아조파미드를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(50mm×2.1mm,2.6μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/0.1%포름산함유아세토니트
릴혼합액(40/60,v/v)
(3)이동상유량:0.2mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:2μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:100~400m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
1.9 324 325
4.1.4.151옥시카복신(Oxycarboxin)
1)시험법의적용범위
곡류,콩류,과일류,채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중옥시카복신을아세톤으로추출하고플로리실칼럼으로정제
하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액- 42 -가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:물또는이와동등한것
다)표준원액:옥시카복신표준품을메탄올에녹여500mg/L이되
게한다.
라)표준용액:표준원액을각각메탄올에녹여적당한농도로혼합,
희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1kg을분쇄기로분쇄하여표준체420
μm를통과한분말상검체25g,채소류및과일류는약1kg을
세절혼합기에넣고0.5～1cm내외로분쇄한검체25g)를정밀
히달아균질기용기에넣는다.곡류및콩류등건조검체의경
우물20mL를첨가하고30분간방치,습윤화한다.이에아세톤
100mL를가한후2분간고속마쇄(10,000rpm이상)하여추출한
다.추출물을여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡인여과하고
아세톤40mL로잔사및용기를씻어내려앞서의여액과합한
후40℃이하의수욕상에서감압농축한다.수기에아세톤10mL
를첨가한후분액깔때기에옮기고물450mL,포화식염수50
mL및디클로로메탄50mL를가하여5분간심하게흔들어섞
은후층이완전히분리될때까지정치하여디클로로메탄층을
취하고,다시디클로로메탄50mL를가하여5분간격렬하게흔
들어섞은후정치한다음디클로로메탄층을무수황산나트륨- 43 -에통과하여감압농축플라스크에받는다.위의디클로로메탄과
합한다.수용액층에재차디클로로메탄50mL를가한후위의
분배추출과정을반복한다.합한디클로로로메 탄추출액을40℃
에서감압농축한다.잔류물에아세토니트릴포화헥산40mL를
가하여녹인후250mL용량의분액깔때기에옮긴다.헥산포화
아세토니트릴을40mL를분액깔때기에가하여5분간격렬하게
흔들어섞은후정치한다.분리된아세토니트릴층을125mL용
량의감압농축플라스크에옮기고,분액깔때기에남은헥산용액
에다시헥산포화아세토니트릴40mL를가하여위의과정을
되풀이한다.합한아세토니트릴여액을40℃이하의수욕상에서
감압농축하여잔류물을디클로로메탄10mL에재용해한다.
나)정제
안지름11mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실10g과
그위에무수황산나트륨2g을충진한후헥산50mL를가하여
유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에‘가)추출’로부터
얻은디클로로메탄용액10mL를칼럼에가하고고정상상단이
노출되기전에디클로로메탄/헥산/아세토니트릴혼합액(50/45/5,
v/v/v)100mL를가하여유출시켜버리고,디클로로메탄/헥산/
아세토니트릴혼합액(50/40/10,v/v/v)150mL로유출시켜받는
다.이를40℃이하수욕상에서감압농축하고잔류물에아세토니
트릴을가하여최종부피10mL가되게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:물/아세토니트릴혼합액(65/35,v/v)- 44 -(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)검출파장:254nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
옥시카복신(8.5분)
라)정량한계
0.04mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머
무름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여
정량한다.- 45 -8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로각농약성분을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.0mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/아세토니트릴(65/35,v/v)
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:200～600m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
3.9 267 268
4.1.4.152이미시아포스(Imicyafos)
1)시험법적용범위
과일류,채소류및서류등의식품에적용한다.
2)분석원리
검체중이미시아포스를아세톤으로추출한후플로리실칼럼으로정
제하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)- 46 -나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:이미시아포스표준품을아세토니트릴에녹여500
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴에녹여적당한농도로각
각혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)
을130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질화한후20g을정밀히달아균질기
용기에넣고,아세톤100mL를가하여혼합추출분쇄기로2~3분
간균질화한다.이를여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡인여
과하고,아세톤30mL로잔사및용기를씻어내려앞의여액과
합하여1L용량의분액깔때기로옮긴다.이에포화식염수500
mL및헥산100mL를차례로가한후심하게흔들어층이완전
히분리될때까지정치한다.수용액층을별도의1L용량의분액
깔때기에옮긴후디클로로메탄100mL를가하여심하게흔들어
층이완전히분리될때까지정치한후무수황산나트륨에통과시
켜감압농축플라스크에받는과정을2회반복한다.이를40℃이
하수욕상에서감압농축한후잔류물을디클로로메탄10mL로
재용해한다.- 47 -나)정제
안지름11mm,길이400mm의유리칼럼에플로리실5g과무
수황산나트륨을약2cm높이로차례로충진한후디클로로메탄
50mL를가하여유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에
노출되기전에‘가)추출’로부터얻은디클로로메탄10mL를가
하여유출시켜버리고,디클로로메탄50mL및아세톤/디클로로
메탄혼합액(10/90,v/v)50mL를가하여유출시켜버린다.고정
상상단이노출되기전에아세톤/디클로로메탄혼합액(45/55,
v/v)100mL로유출시켜감압농축플라스크에취한다.이유출액
을40℃수욕상에서감압농축하고잔류물에아세토니트릴을가하
여최종부피2mL가되게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:아세토니트릴/물혼합액(25/75,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:25℃
(5)검출기파장:227nm
(6)주입량:10μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램- 48 -AU
- 0.0004- 0.00020.00000.00020.00040.00060.00080.00100.00120.00140.0016
분0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
이미시아포스(14.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무
름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량
한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로이미시아포스를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×3mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함유물/0.1%포름산함유아세토니트
릴혼합액(70/30,v/v)
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:25℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode- 49 -(7)분자량범위:100~500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
3.0 304 305
4.1.4.153이소피라잠(Isopyrazam)
1)시험법적용범위
채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중이소피라잠을아세토니트릴로추출하고플로리실칼럼으로정
제하여액체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:이소피라잠표준품을아세토니트릴에녹여500
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴에녹여적당한농도로각
각혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.- 50 -바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질화한후25g을정밀히달아균질기
용기에넣고,아세토니트릴100mL를가하여혼합추출분쇄기로
2~3분간균질화한다.이를여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡
인여과하고,아세토니트릴30mL로잔사및용기를씻어내려앞
의여액과합하여감압농축플라스크에받아약10mL가될때까
지40℃이하수욕상에서감압농축한다.이를1L용량의분액깔
때기에옮기고포화식염수50mL,물400mL및헥산50mL를
차례로가하여심하게흔들어층이완전히분리될때까지정치한
후,헥산층을무수황산나트륨에통과시켜감압농축플라스크에받
는과정을2회반복한다.이를40℃이하수욕상에서감압농축한
후잔류물을헥산5mL로재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이300mm의유리칼럼에플로리실10g과무
수황산나트륨을약2cm높이로차례로충진한후헥산50mL
를가하여유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에‘가)
추출’로부터얻은헥산5mL를가하여유출시켜버리고,헥산/
에틸아세테이트혼합액(90/10,v/v)100mL를가하여유출시켜
버린다.고정상상단이노출되기전에헥산/에틸아세테이트혼합
액(70/30,v/v)100mL로유출시켜감압농축플라스크에받는다.
이유출액을40℃이하수욕상에서감압농축하고잔류물에아세
토니트릴을가하여최종부피10mL가되게하여시험용액으로
한다.- 51 -6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6mm,5μm)또는이와동등한것
(2)이동상:물과아세토니트릴의농도구배조건에따라사용한다.
시간(분)물(%)아세토니트릴(%)
055 45
255 45
740 60
2540 60
2855 45
3055 45
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:254nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여액체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.액체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
이소피라잠(Syn-isomer25.1분,anti-isomer25.9분)- 52 -라)정량한계
0.05mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무
름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량
한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로이소피라잠을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×3mm,3μm)또는이와동등한것
(2)이동상:0.05%포름산함유물/0.05%포름산함유아세토니
트릴혼합액(50/50,v/v)
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ionmode
(7)분자량범위:100～500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
이소피라잠 머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
Syn-isomer 18.6 359360
Anti-isomer 17.9 359360- 53 -4.1.4.154플루오피람(fluopyram)
1)시험법적용범위
채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중플루오피람을아세톤으로추출하고플로리실칼럼으로정제
하여기체크로마토그래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
나)기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는특급
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:플루오피람표준품을아세톤에녹여500mg/L가되
게한다.
라)표준용액:표준원액을아세톤에녹여적당한농도로각각혼
합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크로마토그래프용플로리실(60~100mesh)을
130℃에서하룻밤가열한후데시케이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질화한후25g을정밀히달아균질기
용기에넣고,아세톤100mL를가하여혼합추출분쇄기로2~3분
간균질화한다.이를여과지가깔려있는부흐너깔때기로흡인여
과하고,아세톤30mL로잔사및용기를씻어내려앞의여액과- 54 -합한다.이를1L용량의분액깔때기에옮기고물450mL와포
화식염수50mL를넣고디클로로메탄50mL를차례로가하여
심하게흔들어층이완전히분리될때까지정치한후,디클로로
메탄층을무수황산나트륨에통과시켜감압농축플라스크에받는
과정을2회반복한다.이를40℃이하수욕상에서감압농축한후
잔류물을헥산10mL로재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이300mm의유리칼럼에플로리실5g과무수
황산나트륨을약2cm높이로차례로충진한후헥산100mL를
가하여유출시켜버린다.고정상상단이노출되기전에‘가)추출’
로부터얻은헥산10mL를가하여유출시켜버리고,아세톤/헥산
혼합액(5/95,v/v)50mL를가하여유출시켜버린다.고정상상단
이노출되기전에아세톤/헥산혼합액(20/80,v/v)50mL로유출
시켜감압농축플라스크에취한다.이유출액을40℃수욕상에서
감압농축하고잔류물에아세톤을가하여최종부피2mL가되게
하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정조건
(1)칼럼:DB-5(30m×0.25mm,0.25μm)또는이와동등한것
(2)이동상가스및유량：N2,1mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：80℃에서시험용액을주입하고1분간유지한후
30℃/분의비율로온도를상승시켜260℃이후10분간유지
한다.
(5)검출기온도:300℃- 55 -(6)주입부：Splitmode(30:1)
(7)주입량:1μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량취하여기체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토그램상의각피크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.기체크로마토그래프에서표준품의크로마토그램
플루오피람(9.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토그램상의피크가표준용액피크의머무
름시간과일치할때피크높이또는면적을검량선에대입하여정량
한다.
8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의머무름시간과질량분석스펙
트럼으로플루오피람을확인한다.- 56 -가)기체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-5MS(30m×0.25mm,0.25μm)또는이와동등한것
(2)이동상가스및유량：He,1mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：100℃에서시험용액을주입한후2분간유지하고
10℃/분의비율로온도를상승시켜280℃에서20분간유지한다.
(5)인터페이스온도:280℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부:Splitlessmode
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:50～500m/z
표1.기체크로마토그래프-질량분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량(MW)이온(m/z)
16.1 397223,173,145
“제10,5.3.70티암페니콜(Thiamphenicol)” 을다음과같이한다.
5.3.70티암페니콜(Thiamphenicol)
1)시험법적용범위
축·수산물등에적용한다.
2)분석원리
시료중의티암페니콜을 축,수산물의경우초산에틸/수산암모늄혼
합용액으로추출하고,유의경우에는20%TCA로추출하고헥산으
로지방을제거하여SPE(MCX)카트리지로정제한후액체크로마토- 57 -그래프-자외부흡광검출기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:티암페니콜표준품을정밀히달아아세토니트릴에
녹여100mg/L이되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세토니트릴/물혼합액(10/90,v/v)으로
희석하여사용한다.
마)MCX(Mixed-modeCation-Exchan ge,3mL,60mg)카트리지또
는이와동등한것
바)기타시약:특급또는이와동등한것
5)시험용액의조제
가)추출
(1)축·수산물
균질화된검체5g을50mL원심분리관에취하고초산에틸/수
산암모늄(98/2,v/v)혼합용액20mL을가하여5분간진탕하고
2,300G에서5분간원심분리하여상층액을100mL농축플라스
크에옮긴다.원심분리후남은잔사에초산에틸/수산암모늄
(98/2,v/v)혼합용액20mL를넣고다시2,300G에서5분간원심
분리하여나온상층액을앞의농축플라스크에합하여이액을추
출액으로한다.상층액이모아진농축플라스크에2mL의5%초
산을가하고이를40℃에서1∼2mL이남을때까지감압농축한
다.감압농축후남은액을15mL원심분리관에취하고농축플- 58 -라스크를5%초산1mL로세척하여이를앞의원심분리관에
합한다.원심분리관에핵산5mL를가하여1분간진탕한후
2,300G에서5분간원심분리한후상층액을제거하는과정을2회
반복하여지방을제거한다.이액을추출액으로한다.
(2)유
균질화된검체5g을50mL원심분리관에취하고20%TCA
5mL를가하여원심분리한후상층액을50mL를원심분리관에
취하여위과정을한번반복한다.상층액이모아진농축플라스크
에2mL의5%초산을가하고이를40℃에서1~2mL이남을때
까지감압농축한다.감압농축후남은액을15mL원심분리관
에취하고농축플라스크를5%초산1mL로세척하여이를앞의
원심분리관에합한다.원심분리관에핵산5mL를가하여1분
간진탕한후2,300G에서5분간원심분리한후상층액을제거하
는과정을2회반복하여지방을제거한다.이액을추출액으로
한다.
나)정제
미리메탄올2mL과물2mL로활성화시킨양이온교환카트리
지에흡착시키고2mL의5%초산으로카트리지를세척한후
메탄올/수산암모늄(90/10,v/v)혼합용액3mL로용출한다.용출
액을50℃에서질소농축하고30%아세토니트릴0.5mL을가하
여충분히녹인후0.45μm멤브레인필터로여과시켜시험용액
으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건- 59 -(1)칼럼：C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A:물
(나)이동상B:아세토니트릴
min A(%) B(%)
0 90 10
5 90 10
10 30 70
13 90 10
20 90 10
(4)유속:1mL/min
(5)주입량:20μL
(6)UV검출기파장:224nm
나)표준품크로마토그램
그림1.티암페니콜(9.7분)표준품의크로마토그램
다)정량한계
축·수산물:0.01mg/kg,유:0.01mg/L
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각액체크로마토그래프에주입한다.얻
어진피크머무름시간을비교하여티암페니콜의피크면적으로
검량선을작성하고시험용액중티암페니콜함량을구한다.- 60 -8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기로분석하였을때시험용액중표준
물질의m/z값은표준용액중표준물질의m/z값과일치하여야한
다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.1×100mm,1.8μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:실온
(3)이동상
(가)이동상A:물
(나)이동상B:메탄올
min A(%) B(%)
0 90 10
1 30 70
3 30 70
3.1 90 10
6 90 10
(4)유속:0.3mL/min
(5)주입량:10μL
(6)이온화방법:ESI(negative)
(7)Capillary:4,000V
(8)Nebulizer:40psi
(9)GasTemperature:350℃
(10)Gasflow:10L/min
(11)Collisionenergy- 61 -물질PrecursorIon
(m/z)Fragmention
(m/z)Collision
energy(eV)
티암페니콜 354 185,290 17,6
제10,5.3중5.3.96에서5.3.100까지를다음과같이신설한다.
5.3.96메벤다졸(Mebendazole)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체중메벤다졸및그대사물질을아세토니트릴로추출한후
MgSO4및Primarysecondaryamine(PSA)를이용하여정제하고
액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매：액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물：3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액：메벤다졸및대사물질(메벤다졸-아민및5-하이드록
시메벤다졸)표준품을정밀히달아메탄올에녹여100mg/L로
하고이를영하20℃에보관한다.사용시표준품을실온에두어
용액의온도가실온과동일해지면사용한다.
라)표준용액：표준원액을DMSO에적당한농도로희석하여사용하
며,냉장고에보관한다.- 62 -마)내부표준원액:5-OH-메벤다졸-d3표준품을정밀히달아메탄
올에녹여100mg/L로한다.조제된표준원액은냉동보관한다.
바)내부표준용액:내부표준원액을DMSO로희석하여1mg/L가
되게한다.
사)맥일바인(MacIlvaine)완충용액(pH2)：0.6M구연산(citric
acidmonohydrate)및0.3M제이인산나트 륨(disodiumhydrogen
phosphatedihydrate)물에녹인후HCl로pH를조절한다.
아)기타시약：특급
5)시험용액의조제
가)추출
(1)조직(간,신장),유(乳)
균질화한검체2g을50mL원심분리관에담아내부표준물질
인5-OH-메벤다졸-d3표준용액을첨가한다.15초동안혼합한
후염화나트륨1g을넣고균질화한후물2mL넣고1분간
균질화한다.여기에1%초산을포함한아세토니트릴10mL을
넣고15분간강하게균질화한후4,500rpm에서10분간원심분
리한후상징액을취한다.
(2)조직(근육),알(卵)
균질화한검체2g을50mL원심분리관에담아내부표준물질인
5-OH-메벤다졸-d3표준용액을첨가한다.15초동안혼합한후
염화나트륨1g을넣고균질화한후맥일바인완충용액2mL
넣고1분간균질화한다.여기에아세토니트릴:메탄올(9:1)
10mL을넣고15분간강하게균질화한후4,500rpm에서10분
간원심분리한후상징액을취한다.
나)정제- 63 -상징액을MgSO4900mg,PSA150mg포함한키트또는이와
동등한것을포함한15mL원심분리관에옮긴후30초간강하
게균질화한후4,500rpm에서10분간원심분리한후상징액을
유리튜브에옮긴후50℃,질소가스감압농축으로건조한후남
은잔사에500μLDMSO로용해한후여과하여시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼:C18(2.1×100mm,1.8μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A：20mM암모늄포메이트수용액
(나)이동상B：메탄올
min A(%)B(%)
07030
0.57030
12080
42080
4.17030
87030
(4)유속:0.25mL/분
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization:ESI(positive)
(2)Capillary:4,000V
(3)Nebulizer:45psi- 64 -(4)GasTemperature:350℃
(5)Gasflow:10L/min
(6)Collisionenergy
물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
메벤다졸 296264,10520,35
5-OH-메벤다졸 298160,26640,20
메벤다졸-아민23877,10540,30
내부표준물질(5-OH-
메벤다졸-d3)301160,26640,25
다)표준품크로마토그램
메벤다졸
5-OH-메벤다졸
메벤다졸 -아민
5-OH-메벤다졸 -d3
그림1.메벤다졸(4.7분),5-OH-메벤다졸(4.3분),메벤다졸
아민(4.2분),5-OH-메벤다졸-d3(4.9분)표준품의
크로마토그램
라)정량한계
축산물:0.005mg/kg,유:0.005mg/L- 65 -7)정량시험
시험용액및표준용액을각각질량분석기에주입한다.이후,각각
에서얻은크로마토그램으로부터머무름시간을비교하여,내부표
준물질5-OH-메벤다졸-d3의m/z160에대한메벤다졸m/z264,
5-OH-메벤다졸m/z160,메벤다졸-아민m/z77의면적비를각각
구하고검량선을작성하여시험용액중각각의함량을구한다.
5.3.97니트록시닐(Nitroxynil),클로술론(Clorsulon)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체중니트록시닐및클로술론을아세토니트릴로추출한후
MgSO4및Primarysecondaryamine(PSA)를이용하여정제하고
액체크로마토그래프-질량분석기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매：액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물：3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액：니트록시닐,클로술론표준품을정밀히달아메탄올
에녹여100mg/L로하고이를영하20℃에보관한다.사용시
표준품을실온에두어용액의온도가실온과동일해지면사용
한다.
라)표준용액：표준원액을DMSO에적당한농도로희석하여사용하
며,냉장고에보관한다.- 66 -마)내부표준원액:살리실아마이드표준품을정밀히달아메탄올에
녹여100mg/L로한다.조제된표준원액은냉동보관한다.
바)내부표준용액:내부표준원액을DMSO로희석하여1mg/L가
되게한다.
사)맥일바인(MacIlvaine)완충용액(pH2)：0.6M구연산(citric
acidmonohydrate) 및0.3M제이인산나트 륨(disodium
hydrogenphosphatedihydrate)물에녹인후HCl로pH를조
절한다.
아)기타시약：특급
5)시험용액의조제
가)추출
(1)조직(간,신장)
균질화한검체2g을50mL원심분리관에담아내부표준물
질인살리실아마이드표준용액을첨가한다.15초동안혼합한
후염화나트륨1g을넣고균질화한후물2mL넣고1분간
균질화한다.여기에1%초산을포함한아세토니트릴10mL
을넣고15분간강하게균질화한후4,500rpm에서10분간
원심분리한후상징액을취한다.
(2)조직(근육),알(卵),유(乳)
균질화한검체2g을50mL원심분리관에담아내부표준물
질인살리실아마이드표준용액을첨가한다.15초동안혼합한
후염화나트륨1g을넣고균질화한후맥일바인완충용액2
mL넣고1분간균질화한다.여기에아세토니트릴:메탄올(9
:1)10mL을넣고15분간강하게균질화한후4,500rpm에
서10분간원심분리한후상징액을취한다.- 67 -나)정제
상징액을MgSO4900mg,PSA150mg포함한키트또는이와
동등한것을포함한15mL원심분리관에옮긴후30초간강하
게균질화한후4,500rpm에서10분간원심분리한후상징액을
유리튜브에옮긴후50℃,질소가스감압농축으로건조한후남
은잔사에500μLDMSO로용해한후여과하여시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼:C18(2.1×100mm,1.8μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A:20mM암모늄포메이트수용액
(나)이동상B：메탄올
minA(%)B(%)
07030
0.57030
12080
42080
4.17030
87030
(4)유속:0.25mL/분
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization:ESI(negative)
(2)Capillary:4,000V- 68 -(3)Nebulizer:45psi
(4)GasTemperature:350℃
(5)Gasflow:10L/min
(6)Collisionenergy
물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
니트록시닐 289127,16225,10
클로술론 378,380342,3443,6
내부표준물질
(살리실아마이드)21292,6425,40
다)표준품크로마토그램
니트록시닐
살리실아마이드클로술론
그림1.니트록시닐(4.2분),클로술론(3.9분),
살리실아마이드(4.8분)표준품의크로마토그램
라)정량한계(니트록시닐,클로술론)
축산물:0.01mg/kg,유:0.01mg/L- 69 -7)정량시험
시험용액및표준용액을각각질량분석기에주입한다.이후,각각에
서얻은크로마토그램으로부터머무름시간을비교하여,내부표준
물질살리실아마이드의m/z92에대한니트록시닐m/z127,클로술
론m/z342의면적비를각각구하고검량선을작성하여시험용액
중각각의함량을구한다.
5.3.98톨페남산(Tolfenamicacid)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체중의톨페남산을아세토니트릴로추출하고,헥산으로지방및
불순물을제거한후pH조절과에틸아세테이트로 액-액추출하여
액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:톨페남산표준품을정밀히달아메탄올에녹여100
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을메탄올에녹여적당한농도로혼합희석한다.
마)기타시약:특급또는이와동등한것
5)시험용액의조제
검체5g에아세토니트릴10mL씩2회가한후20분간진탕한다.- 70 -4,000rpm에서10분간원심분리한다음상징액을취해헥산20
mL를가하고흔들어방치한다.하층을모아50℃질소기류하에
서건고시킨후잔류물을에테르4mL로재용해하여,10분간진탕
하고,2mMNaOH수용액10mL(4mL,4mL,2mL씩세번),
NaCl수포화용액을2mMNaOH수용액1mL당75μL를가하
여액-액추출로20분간흔들어준후4,000rpm에서10분간원심
분리한다.상층액인에테르를취하지아니하고,아래수층을취하
고새튜브에담은후600μL의1/50로희석한아세트산용액을
가하여약산성화시킨후40mL의에틸아세테이트(20mL,10mL,
10mL씩세번)를가하고액-액추출로20분간흔들어준후
4,000rpm에서5분간원심분리한다.상층액을취하여50℃질소
기류하에서건고시킨후다시에틸아세테이트5mL(2mL,2mL,
1mL씩세번)에용해하여50℃질소기류하에서건고시킨다.잔
류물을메탄올500μL을가하여10분간진탕하고,4,000rpm에서
2분간원심분리한후상징액을0.45μm멤브레인필터로여과하여
시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼：C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상:0.1%초산/아세토니트릴(50/50,v/v)
(4)유속:1.0mL/min
(5)주입량:10μL
(6)UV검출기파장:218nm
나)표준품크로마토그램- 71 -
그림1.톨페남산(12.6분)크로마토그램
다)정량한계
축산물:0.01mg/kg,유:0.01mg/L
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각액체크로마토그래프에주입한다.얻
어진피크머무름시간을비교하여톨페남산의피크면적으로검량
선을작성하고시험용액중톨페남산함량을구한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기로분석하였을때시험용액중표준
물질의m/z값은표준용액중표준물질의m/z값과일치하여야한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.0×150mm,3μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상A:0.2%초산암모늄
(4)이동상B:아세토니트릴
min A(%)B(%)
0 80 20
1 80 20
12 0100
13 0100
14 80 20
17 80 20- 72 -(5)유속:0.3mL/min
(6)이온화방법:ESI(negative)
(7)Capillarytemperature:300℃
(8)Collisionenergy
물질Precursorion
(m/z)Fragmention
(m/z)Collision
energy
(eV)
톨페남산 260216,26016
5.3.99툴라스로마이신(Tulathromycin)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
시료중의툴라스로마이신을 아세토니트릴로추출하고,개미산으로재
용해하여SPE(HLB)카트리지로정제한후액체크로마토그래프-질량분
석기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:툴라스로마이신 표준품을정밀히달아메탄올에녹
여1,000mg/L이되게한다.
라)표준용액:표준원액을메탄올로희석하여사용한다.- 73 -마)내부표준물질표준원액:아지스로마이신(Azithromycin)표준품
을정밀히달아메탄올에녹여1,000mg/L이되게한다.
바)내부표준물질용액:내부표준물질표준원액을메탄올로희석
하여사용한다.
사)HLB(HydrophilicLipophilicBalance,3mL)카트리지또는이
와동등한것
아)기타시약:특급또는이와동등한것
5)시험용액의조제
가)추출
검체10g에내부표준물질(아지스로마이신,5mg/L)1mL를가
하고아세토니트릴10mL를가하여5분간균질화한다.4℃,
3,500rpm에서20분간원심분리하고상징액을질소퍼지용튜브에
모은뒤,다시시료에아세토니트릴10mL를넣고30초간흔들
어준다음5분간균질화한다.4℃,3,500rpm에서20분간원심
분리하고상징액을이전의상징액과합한뒤,50℃질소기류하
에서건고한다.이를2%개미산수용액3mL로재용해하고헥
산500μL를가하여1분간균질화한뒤,4℃,13,000rpm에서20
분간원심분리한후헥산층을제거하여이액을추출액으로한
다.
나)정제
미리메탄올3mL과물3mL로활성화시킨HLB카트리지에
추출액을흡착시키고,2%개미산수용액3mL로세척한후2%
수산화암모늄을함유한메탄올3mL로용출시킨다.용출액은5
0℃질소기류하에서건고한후잔류물을2mL증류수에녹인
뒤1분간균질화한다.이액을4℃,13,000rpm에서20분간원심- 74 -분리한후0.45μm멤브레인필터로여과하여시험용액으로한
다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼：C18(2.1×150mm,5μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:30℃
(3)이동상
(가)이동상A:0.1%개미산을함유한물
(나)이동상B:0.1%개미산을함유한아세토니트릴
min A(%) B(%)
0 95 5
1.5 95 5
2 10 90
2.5 10 90
4 95 5
15 95 5
(4)유속:0.25mL/min
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization:ESI(positive)
(2)Capillarytemperature:350℃
(3)Collisiongas:Ar(아르곤)
(4)Collisionenergy- 75 -물질Precursorion
(m/z)Fragmention
(m/z)Collisionenergy
(eV)
툴라스로마이신 577116,15851,49
내부표준물질(아지
스로마이신)74983,15875,61- 76 -다)표준품크로마토그램
툴라스로마이신
아지스로마이신
그림1.툴라스로마이신(6.5분),아지스로마이신(6.5분)
표준품의크로마토그램
라)정량한계:0.05mg/kg
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각액체크로마토그래프에주입한다.얻
어진피크머무름시간을비교하여,내부표준물질아지스로마이신
의m/z83에대한툴라스로마이신 m/z116의면적비를각각구하
고검량선을작성하여시험용액중함량을구한다.- 77 -5.3.100시미아졸(Cymiazole)
1)시험법적용범위
벌꿀에적용한다.
2)분석원리
검체중의시미아졸을1%초산으로추출하고,SPE(MCX)카트리지
로정제하여액체크로마토그래프-자외부흡광검출기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광검출기(HPLC-UVD)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동등한것
다)표준원액:시미아졸표준품을정밀히달아아세토니트릴에녹
여1,000mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을이동상에녹여적당한농도로혼합희석한다.
마)MCX(Mixed-modeCation-Exchan ge)카트리지또는이와동등한것
바)기타시약:특급또는이와동등한것
5)시험용액의조제
검체5g에1%초산15mL를가하고10분간진탕한다.미리메탄
올3mL과1%초산3mL로활성화시킨MCX카트리지에추출
액을흡착시키고,메탄올3mL와1NHCl3mL로세척한후5%
수산화암모늄을포함한메탄올3mL로용출한다.용출액은50℃에
서질소농축한후잔류물은이동상1mL에녹인후0.45μm멤브레
인필터로여과하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건- 78 -(1)칼럼：C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:30℃
(3)이동상:0.1%초산/아세토니트릴(81/19,v/v)
(4)유속:1.0mL/min
(5)주입량:20μL
(6)UV검출기파장:264nm
나)표준품크로마토그램
그림1.시미아졸(8.3분)표준품의크로마토그램
다)정량한계:0.02mg/kg
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각액체크로마토그래프에주입한다.얻
어진피크머무름시간을비교하여시미아졸의피크면적으로검
량선을작성하고시험용액중시미아졸함량을구한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기로분석하였을때시험용액중표준
물질의m/z값은표준용액중표준물질의m/z값과일치하여야한다.
가)액체크로마토그래프-질량분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.0×150mm,3μm)또는이와동등한것
(2)칼럼온도:40℃- 79 -(3)이동상A:0.2%초산암모늄
(4)이동상B:아세토니트릴
min A(%) B(%)
0 80 20
1 80 20
8 10 90
9 10 90
10 80 20
15 80 20
(5)유속:0.3mL/min
(6)이온화방법:ESI(positive)
(7)Capillarytemperature:300℃
(8)Collisionenergy
물질Precursorion
(m/z)Fragmention
(m/z)Collisionenergy
(eV)
시미아졸 219105,144,17130
부 칙
제1조(시행일)이고시는고시후7일이경과한날부터시행한다.
제2조(경과조치)이고시시행당시검사가접수되어진행중인사항
에대하여는종전의규정에따른다.단- 80 -현행 개정안
제10. 일반시험법
1∼3(생략)
4.식품중잔류농약분석법
4.1∼4.1.3.16(생략)
4.1.3.17세톡시딤(Sethoxydim)
및클레소딤(Clethodim)
1)시험법적용범위
고구마,고추,대두,딸기,땅
콩,마늘,밤,배,배추,오이,
옥수수,완두콩,은행,양파,키
위,토란,토마토,파,호도,호
박등식품에적용한다.
2)분석원리
검체를메탄올로추출한후실
리카칼럼크로마토그래피로정
제하여액체크로마토그래프로제10. 일반시험법
1∼3(현행과같음)
4.식품중잔류농약분석법
4.1∼4.1.3.16(현행과같음)
4.1.3.17클레소딤(Clethodim),프
로폭시딤(Profoxydim)및
세톡시딤(Sethoxydim)
시험법
1)시험법적용범위
곡류,서류,콩류,견과종실류,
과일류,채소류,버섯류등식품
에적용한다.
2)분석원리
검체중대상성분을메탄올/
물혼합액(1/1,v/v)을가하여
모화합물및산화대사산물을
동시에추출하고클로로과산
화벤조익산(m-CPB)으로산화신∙구조문대비표- 81 -현행 개정안
측정한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프：자외부
흡광검출기(UV-Detector)를
사용한다.
4)시약및시액
가)용매：잔류농약시험용또
는이와동등한것
나)물：증류수또는이와동등
한것
다)실리카：칼럼크로마토그래
프용실리카(212～425μm)
을130℃에서하룻밤가열
한후데시케이터에서식
힌다.
라)표준원액：세톡시딤및클
레소딤을각각헥산에녹
여100mg/kg으로한다.
마)표준용액：각각의표준원액
을헥산에녹여적당한농
도로희석한다.
바)기타시약：잔류농약시험용
또는특급반응시킨다.전환된술폰체
(sulfone)를액-액분배하여
플로리실칼럼으로정제한후
액체크로마토그래프로분석한
다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외
부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:클레소딤및세
톡시딤표준품을각각아
세토니트릴에녹여200
mg/L가되게한다.프로폭
시딤또는리튬염분석용
표준품을메탄올에녹여
200mg/L가되게한다.
라)표준용액:클레소딤,프로- 82 -현행 개정안
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는표준
체420μm를통과하도록
분쇄한후그20g을달아
분액깔때기에옮긴다.채소
류,과실류,종실류및견과
류는약1kg을정밀히달
아필요하면적당량의물을
넣어균질화한후그20g
에상당하는양을달아분
액깔때기에옮긴다)에메탄
올100mL를넣고진탕기
로30분간심하게흔들어
섞은후정치하여여과보조
제를깔은흡인여과기로여
과하여여액을삼각플라스
크(Ⅰ)에옮긴다.잔류물은
다시분액깔때기에넣고메
탄올50mL를넣어위와
같이되풀이하여여과하여
여액을위의삼각플라스크
(Ⅰ)에합친다.이에물150폭시딤및세톡시딤의농
도비가1:1:1이되도록표
준원액을혼합하고아세토
니트릴에녹여적절한농
도로희석한다.
마)클로로과산화벤조 익산
(m-chloroperoxybenzoic
acid,m-CPB)용액:디클
로로메탄에1%가되도록
녹이며사용직전조제한
다.
바)티오황산나트륨(sodium
thiosulfate)용액:10%수
용액을조제한다.
사)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
아)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출- 83 -현행 개정안
mL및수산화칼슘4g을
넣고1분간흔들어섞은후
정치하여여과보조제를 깔
은흡인여과기로여과하여
여액을삼각플라스크(Ⅱ)에
옮긴다.다시물：메탄올
(1：1)의혼합액30mL로
삼각플라스크(Ⅰ)를씻고
이씻은액으로여지상의
잔류물을씻고여액을위의
삼각플라스크(Ⅱ)에합친다.
이에1N염산으로pH3～4
로조정하고과산화수소수
0.5mL를넣어50℃에서
16시간가열하고식힌후
분액깔때기에옮긴다.이에
염화나트륨5g및헥산50
mL를넣어진탕기로5분간
심하게흔들어섞은후정
치하여헥산층을버린다.
물층에디클로로메탄80
mL를넣고진탕기로5분간
심하게흔들어섞은후정검체(곡류는약1kg을분
쇄기로분쇄하여표준체
420μm를통과한분말상
검체10g,채소류및과실
류는약1kg을세절혼합기
에넣고0.5～1cm내외로
분쇄한검체10g)를정밀
히달아균질기용기에넣
는다.메탄올/물혼합액
(1/1,v/v)100mL를가한
후2분간고속마쇄(10,000
rpm이상)하여추출한다.
곡류등건조검체의경우
추출전에미리30분간방
치,습윤화한다.추출물을
여과지가깔려있는부흐너
깔때기로흡인여과하고메
탄올/물혼합액(1/1,v/v)
50mL로잔사및용기를
씻어내려앞서의여액과
합한다.합한여액을500
mL용량의분액깔때기에
옮기고포화식염수50mL,- 84 -현행 개정안
치하여디클로로메탄층을
분액깔때기에옮긴다.다시
물층에디클로로메탄80
mL를넣어위와같이2회
되풀이한후디클로로메탄
층을위의분액깔때기에합
친다.이에염화나트륨5g
및0.01N수산화나트륨용액
50mL를넣고진탕기로5
분간심하게흔들어섞은
후정치하여디클로로메탄
층을삼각플라스크에옮긴
다.물층에디클로로메탄
50mL를넣어위와같이
되풀이하여디클로로메탄층
을위의삼각플라스크에합
친다.디클로로메탄층을액
상분리용여과지로여과하
고40℃이하의수욕상에서
감압하에30mL로농축한
다.
나)설폰화
위의농축액에m-클로로과물50mL,초산0.5mL및
디클로로메탄50mL를차
례로가한후1분이상진
탕한다.두층이완전히분
리될때까지정치한후하
부디클로로메탄층을20g
의무수황산나트륨층에통
과,탈수하여250mL용량
의감압농축플라스크에받
는다.수용액층에재차디
클로로메탄50mL를가한
후위의분배추출과정을
반복한다.합친디클로로메
탄추출액을40℃에서감압
농축,건고한후디클로로메
탄25mL에재용해한다.
나)산화반응
위용액에1%m-CPB용
액5mL를가한후가볍게
진탕하고30℃항온수조에
서2분간정치,반응시킨다.
반응후10%티오황산나트
륨수용액30mL를가한- 85 -현행 개정안
안식향산약20mg을넣고
마개를하여때때로흔들어
섞으면서30℃에서10분간
방치한다.이에5%티오황
산나트륨용액30mL를넣
고진탕기로10분간심하게
흔들어섞은후정치하여
디클로로메탄층을삼각플라
스크에옮긴다.물층에디클
로로메탄20mL를넣고위
와같이되풀이하여디클로
로메탄층을위의삼각플라
스크에합친다.이를액상분
리여지로여과하여40℃이
하의수욕상에서감압하에
날려보낸다.잔사를에틸아
세테이트：헥산(2：3)의혼
합액10mL에녹인다.
다)정제
안지름15mm,길이300
mm의칼럼관에실리카10
g,다음에무수황산나트륨
약5g을각각에틸아세테후3분간진탕,반응을종
결시킨다.반응액을250
mL용량의분액깔때기에
옮기고잔류물을재차디클
로로메탄10mL로씻어옮
긴다.분액깔때기에10%의
염화나트륨수용액80mL
와0.1N황산수용액2mL
를가하고진탕한후정치,
하부디클로로메탄층을20
g의무수황산나트륨층에
통과,탈수하여125mL용
량의감압농축플라스크에
받는다.수용액층에재차
디클로로메탄30mL를가
한후위의분배추출과정
을반복한다.합한디클로
로메탄추출액을40℃에서
감압농축,건고한후잔류
물을디클로로메탄10mL
에재용해한다.
다)정제
안지름11mm,길이400- 86 -현행 개정안
이트：헥산(2：3)의혼합액
에현탁시켜충전한후그
상단에소량의에틸아세테
이트：헥산(2：3)의혼합액
이남을정도까지유출시킨
다.이칼럼에위의녹인액
을넣고에틸아세테이트 ∶
헥산(2∶3)의혼합액150
mL를넣어유출시켜버리고
이어서아세톤∶헥산(3∶7)
의혼합액200mL로용출
한다.용출액을40℃이하
의수욕상에서감압하에날
려보낸후잔사를디클로로
메탄에녹여서일정량으로
하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼충전제∶칼럼크로마
토그래프용실리카
(2)칼럼：안지름2～3mm,
길이200～500mm의스mm의유리칼럼에플로리
실5g과무수황산나트륨을
약2cm높이로차례로충
진한후디클로로메탄25
mL를가하여유출시켜버
린다.고정상상단이노출
되기전에,‘가)추출’로부터
얻은디클로로메탄10mL
를가하여유출시켜버리고,
디클로로메탄5mL로용기
및칼럼벽면을씻어흘려
버린다.고정상상단이노
출되기전에아세톤/디클로
로메탄혼합액(10/90,v/v)
40mL를유출시켜버리고
재차60mL의메탄올/아세
톤혼합액(1/99,v/v)으로
유출시켜받는다.이를4
0℃에서감압농축,건고한
후2mL의아세토니트릴에
재용해하고기기분석전에
0.2%초산수용액과1:1로
혼합하여시험용액으로한- 87 -현행 개정안
테인리스관
(3)검출기：254nm
(4)이동상：디클로로메탄：
메탄올(49：1)의혼합액
(5)유속：6-[2-(에틸설포닐)
프로필]-4-옥시-2-프로
필-4,5,6,7-테트라히
드로벤조옥사졸이 약
6～8분에서유출하는유
속으로조정한다.
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의
각피이크높이또는면적을
구하여검량선을작성한다.
7)정성시험
위의조건에서시험할때시험
결과는표준품과일치하여야
한다.
8)정량시험
정성시험과 똑같은조건에서다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.0
mm,5μm)또는이와동
등한것
(2)이동상:아세토니트릴
/0.1%초산함유물혼
합액(35/65,v/v)에서1
분간정치한후75/25
(v/v)로30분간직선적
으로농도구배한다.
(3)이동상유량:1
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:256nm
(6)주입량:20μL
나)검량선의작성
농도별로아세토니트릴에
조제한표준혼합용액일정
량을반응플라스크에취하
고질소기류하에서증발- 88 -현행 개정안
얻어진시험결과에의해피이
크높이법또는피이크면적법에
따라정량한다.건고한직후위의m-CPB
산화반응과정을동일하게
수행한다.디클로로메탄추
출액을감압농축,건고한
후아세토니트릴2mL에
재용해하고0.2%초산수
용액과1:1로혼합하여액
체크로마토그래프에각각
주입한다.얻어진크로마토
그램상에서각대상성분
술폰체의피크면적또는
높이를기준으로모화합물
로환산하여,검량선을작
성한다.
다)표준품의크로마토그램
0 5 10 15 20 250369
0 5 10 15 20 250369
Retention time (min)Detector response (mV)가 나
21
3
123
- 89 -현행 개정안
0 5 10 15 20 250369
0 5 10 15 20 250369
Retention time (min)Detector response (mV)가 나
21
3
123
그림1.액체크로마토그래프
에서표준품의크로마토그
램
가.산화반응공시험액,나.
표준품첨가후산화반응
시험액
1.세톡시딤술폰체(11.5분),
2.클레소딤술폰체(11.9분),
3.프로폭시딤술폰체(19.7
분)
라)정량한계
0.04mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검
량선에대입하여정량한다.- 90 -현행 개정안
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로각성분을
확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.1
mm,3μm)또는이와동
등한것
(2)이동상:아세토니트릴
/0.1%초산함유물혼합
액(35/65,v/v)에서1분
간정치한후75/25(v/v)
로30분간직선적으로
농도구배한다.
(3)이동상유량:0.2
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:10μL
(6)이온화:ESIpositiveion
mode
(7)분자량범위:100~500- 91 -현행 개정안
<신설>m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름시간
(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
클레소딤
술폰체16.1391392
세톡시딤
술폰체15.2359360
프로폭시딤
술폰체26.5497498
4.1.3.30보스칼리드(Boscalid),플
루토라닐(Flutolanil),메
프로닐(Mepronil)및티
플 루 자 마 이 드
(Thifluzamid)
1)시험법의적용범위
곡류,서류,콩류,과일류및
채소류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상농약을아세톤으
로추출하고플로리실칼럼으
로정제하여액체크로마토그래- 92 -현행 개정안
<신설> 프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외
부흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:보스칼리드,플
루토라닐,메프로닐및티
플루자마이드표준품을메
탄올에녹여500mg/L가
되게한다.
라)표준용액:표준원액을각
각메탄올에녹여적당한
농도로혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케- 93 -현행 개정안
<신설> 이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(약1kg을분쇄기로
분쇄하여표준체420μm를
통과한분말상검체25g,
채소류및과일류는약1
kg을세절혼합기에넣고
0.5～1cm내외로분쇄한
검체25g)를정밀히달아
균질기용기에넣는다.곡
류등건조검체의경우추
출전에미리30분간방치,
습윤화한다.이에아세톤
100mL를가한후2분간
고속마쇄(10,000rpm이상)
하여추출한다.추출물을
여과지가깔려있는부흐너
깔때기로흡인여과하고아
세톤40mL로잔사및용
기를씻어내려앞서의여- 94 -현행 개정안
<신설> 액과합한다.합한여액을
500mL용량의분액깔때기
에옮기고포화식염수50
mL,물450mL및헥산/디
클로로메탄(80/20,v/v)혼
합액100mL를차례로가
한후5분이상진탕한다.
두층이완전히분리될때
까지정치한후유기용매층
을무수황산나트륨층에통
과,탈수하여250mL용량
의감압농축플라스크에받
아40℃이하수욕상에서감
압농축하여건고한다.잔
류물에아세토니트릴포화
헥산40mL를가하여녹인
후250mL용량의분액깔
때기에옮긴다.헥산포화
아세토니트릴40mL를분
액깔때기에가하여5분간
격렬하게흔들어섞은후
정치한다.분리된아세토니
트릴층을125mL용량의- 95 -현행 개정안
<신설> 감압농축플라스크에옮기
고,분액깔때기에남은헥
산용액에다시헥산포화
아세토니트릴40mL를가
하여위의과정을반복한
다.이를40℃이하의수욕
상에서감압농축하여디클
로로메탄10mL에재용해
한다.
나)정제
안지름15mm,길이400
mm의유리칼럼에플로리
실10g과무수황산나트륨
2g을차례로충진한후헥
산50mL를가하여유출시
켜버린다.고정상상단이
노출되기전에,‘가)추출’로
부터얻은디클로로메탄10
mL를가하여유출시켜버리
고,고정상상단이노출되기
전에헥산/디클로로메탄혼
합액(70/30,v/v)100mL를
가하여유출시켜버린다.다- 96 -현행 개정안
<신설> 시헥산/디클로로메탄혼합
액(70/30,v/v)100mL를
가하여유출시켜버리고,헥
산/에틸아세테이트 혼합액
(75/25,v/v)150mL로유
출시켜받는다.이를40℃이
하수욕상에서감압농축하
고잔류물에58%아세토니
트릴가하여최종부피10
mL가되게하여시험용액
으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와동등
한것
(2)이동상:물/아세토나이
트릴혼합액(42/58,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)검출기파장:220nm
(6)주입량:20μL- 97 -현행 개정안
<신설> 나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
4321
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
1.보스칼리드(7.4분),2.메
프로닐(8.1분),3.플루토라
닐(8.8분),4.티플루자마이
드(10.2분)
다)정량한계
0.04mg/kg- 98 -현행 개정안
<신설> 7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검
량선에대입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로각농약성분
을확인한다.
가)액체크로마토그래프․질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.0
mm,3μm)또는이와동
등한것
(2)이동상:0.1%포름산함
유물/아세토니트릴
(45/55,v/v)
(3)이동상유량:0.3
mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL- 99 -현행 개정안
<신설>
<신설>(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100～600
m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름
시간(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
보스칼리드 8.0342343
메프로닐10.0269270
플루토라닐11.1323324
티플루자마이드 14.9528529
4.1.3.31비페녹스(Bifenox),에탈풀
루라린(Ethalfluralin),메토
라클로르(Metolachlor),옥
시풀루오르펜(Oxyfluorfen),
프 레틸라 클 로 르
(Pretilachlor),테닐클로르
(Thenylchlor)및트리풀루
라린(Trifluralin)
1)시험법의적용범위
곡류,콩류,과실류,채소류등- 100 -현행 개정안
<신설> 식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상농약을아세톤으
로추출하고플로리실칼럼으
로정제하여기체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-전자
포획검출기(GC-ECD)
나)기체크로마토그래프-질량
분석기(GC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:각농약표준품을
헥산에녹여500mg/L가되
게한다.
라)표준용액:표준원액을각
각헥산에녹여적당한농
도로혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크- 101 -현행 개정안
<신설> 로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1
kg을분쇄기로분쇄하여표
준체420μm를통과한분
말상검체25g,채소류및
과일류는약1kg을세절혼
합기에넣고0.5～1cm내
외로분쇄한검체25g)를
정밀히달아균질기용기에
넣는다.곡류및콩류등
건조검체의경우물20
mL를첨가하고30분간방
치,습윤화한다.이에아세
톤100mL를가한후2분
간고속마쇄(10,000rpm이
상)하여추출한다.추출물을- 102 -현행 개정안
<신설> 여과지가깔려있는부흐너
깔때기로흡인여과하고아
세톤40mL로잔사및용
기를씻어내려앞서의여
액과합한다.합한여액을
500mL용량의분액깔때기
에옮기고포화식염수50
mL,물450mL및헥산/디
클로로메탄(80/20,v/v)
100mL를차례로가한후
5분이상진탕한다.두층
이완전히분리될때까지
정치한후유기용매층을무
수황산나트륨층에통과,
탈수하여250mL용량의
감압농축플라스크에받아
40℃이하수욕상에서감압
농축하여건고한다.잔류물
에아세토니트릴포화헥산
40mL를가하여녹인후
250mL용량의분액깔때기
에옮긴다.헥산포화아세
토니트릴40mL를분액깔- 103 -현행 개정안
<신설> 때기에가하여5분간격렬
하게흔들어섞은후정치
한다.분리된아세토니트릴
층을125mL용량의감압
농축플라스크에옮기고,분
액깔때기에남은헥산용액
에다시헥산포화아세토
니트릴40mL를가하여위
의과정을반복한다.이를
40℃이하의수욕상에서감
압농축하여헥산10mL에
재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이400
mm의유리칼럼에플로리실
10g과무수황산나트륨2g
을차례로충진한후헥산
100mL를가하여유출시켜
버린다.고정상상단이노출
되기전에‘가)추출’로부터
얻은헥산10mL를가하여
유출시켜버린다.고정상상
단이노출되기전에헥산/디- 104 -현행 개정안
<신설> 클로로메탄혼합액(90/10,
v/v)150mL를가하여유출
시켜버리고,헥산/디클로로
메탄혼합액(60/40,v/v)150
mL를가하여유출시켜감압
농축플라스크에받는다.이
유출액을40℃이하수욕상
에서감압농축하고잔류물에
헥산10mL를가하여잘녹
인후에탈플루라린및트리
풀루라린의시험용액으로사
용하고,계속하여디클로로
메탄/헥산/아세토니트릴혼
합액(50/49.5/0.5,v/v/v)
150mL를가하여유출시켜
받은후40℃이하의수욕상
에서감압농축한다.다시잔
류물에헥산10mL를가하
여잘녹인후옥시풀루오르
펜및비페녹스시험용액으
로사용하며,계속하여디클
로로메탄/헥산/아세토니트릴
혼합액(50/46/4,v/v/v)150- 105 -현행 개정안
<신설> mL를가하여유출시켜받은
후40℃이하의수욕상에서
감압농축하고잔류물에헥산
10mL를가하여잘녹인후
메토라클로르,프레틸라클로
르및테닐클로르의시험용액
으로사용한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:DB-1(30m×0.53
mm,0.5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상가스및유량：N2,
10mL/min
(3)주입부온도:250℃
(4)오븐온도：140℃에서
시험용액을주입하고4℃
/분의비율로온도를24
0℃까지상승시키고10℃
/분의비율로280℃까지
상승시킨다.
(5)검출기온도:300℃- 106 -현행 개정안
<신설> (6)주입부:직접주입법
(7)주입량:1μL
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정
량취하여기체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
12
345
67
그림1.기체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
1.에탈풀루라린(5.1분),2.
트리풀루라린(5.5분),3.메
토라클로르(10.2분),4.프
레틸라클로르(14.1분),5.- 107 -현행 개정안
<신설> 옥시풀루오르펜(14.6분),6.
테닐클로르(17.3분),7.비
페녹스(19.7분)
라)정량한계
에탈풀루라린및트리풀루
라린(0.004mg/kg),메토라
클로르및프레틸라클로르
(0.008mg/kg),옥시풀루오
르펜(0.002mg/kg),테닐클
로르(0.02mg/kg),비페녹
스(0.006mg/kg)
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검
량선에대입하여정량한다.
8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로각농약성분
을확인한다.
가)기체크로마토그래프-질량- 108 -현행 개정안
<신설> 분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-1MS(50
m×0.25mm,0.25μm)
또는이와동등한것
(2)이동상가스및유량：He,
2mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：80℃에서시
험용액을주입하고10℃/
분의비율로온도를22
0℃까지상승시켜3분간
유지한다.다시3℃/분의
비율로240℃까지상승시
키고20℃/분의비율로
280℃까지상승시켜15분
간유지한다.
(5)인터페이스온도:300℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부：Splitmode(30:1)
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:50～500
m/z
표1.기체크로마토그래프-질량- 109 -현행 개정안
<신설>
<신설>분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름
시간(분)분자량
(MW)이온(m/z)
비페녹스21.1341311,341,
343
에탈풀루라린 5.2333276,316
메토라클로르 10.3283162,238
옥시풀루오르펜 14.5361252,300,
361
프레틸라클로르14.2311162,176,
238
테닐클로르18.2323127,288
트리풀루라린 5.3335264,306
4.1.3.32싸이프로코나졸
(Cyproconazole), 디니코나
졸(Diniconazole),푸루실라
졸(Flusilazole),펜코나졸
(Penconazole)및터부코
나졸(Tebuconazole)
1)시험법적용범위
곡류,서류,과일류및채소류
등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중대상성분을아세톤으- 110 -현행 개정안
<신설> 로추출하고플로리실칼럼으
로정제하여기체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-질
소․인검출기(GC-NPD)
나)기체크로마토그래프-질량
분석기(GC/MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:싸이프로코나졸
(부분입체이성질체의혼합
물),디니코나졸(부분입체이
성질체의혼합물),푸루실라
졸,펜코나졸및터부코나졸
표준품을에틸아세테이트에
녹여500mg/L가되게한다.
라)내부표준원액:
4-dimethylamino-2-methyl
azobenzene(DAMAB)표- 111 -현행 개정안
<신설> 준품을에틸아세테이트에
녹여500mg/L가되게한
다.
마)표준용액1:싸이프로코나
졸및펜코나졸의농도비가
1:1이되도록표준원액을
혼합하고에틸아세테이트에
녹여적절한농도로희석한
다.GC검량용표준혼합용
액은싸이프로코나졸 기준
으로0.1～1mg/L농도범
위가되도록하고내부표준
물질DAMAB의농도는항
상0.4mg/L가되도록혼
합하여에틸아세테이트에
조제한다.
바)표준용액2:디니코나졸,
푸루실라졸및터부코나졸
의농도비가1:1:1이되도록
표준원액을혼합하고에틸
아세테이트에녹여적절한
농도로희석한다.GC검량
용표준혼합용액은디니코- 112 -현행 개정안
<신설> 나졸기준으로0.1～1
mg/L농도범위가되도록
하고내부표준물질
DAMAB의농도는항상
0.4mg/L가되도록혼합하
여에틸아세테이트에조제
한다.
사)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케이
터에서보관·사용한다.
아)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1
kg을분쇄기로분쇄하여표
준체420μm를통과한분
말상검체25g,채소류및
과실류는약1kg을세절혼
합기에넣고0.5～1cm내
외로분쇄한검체25g)를- 113 -현행 개정안
<신설> 정밀히달아균질기용기에
넣는다.곡류및콩류등
건조검체의경우물20
mL및40mL를각각첨가
하고30분간방치,습윤화
한다.이에아세톤100mL
를가한후2분간고속마쇄
(10,000rpm이상)하여추
출한다.추출물을여과지가
깔려있는부흐너깔때기로
흡인여과하고아세톤50
mL로잔사및용기를씻어
내려앞서의여액과합한
다.합한여액을1L용량
의분액깔때기에옮기고포
화식염수50mL,물450
mL및디클로로메탄50
mL를차례로가한후1분
이상진탕한다.두층이완
전히분리될때까지정치한
후하부디클로로메탄층을
20g의무수황산나트륨층
에통과,탈수하여250mL- 114 -현행 개정안
<신설> 용량의감압농축플라스크에
받는다.수용액층에재차
디클로로메탄50mL를가
한후위의분배추출과정
을반복한다.합한디클로
로로메탄추출액을40℃에
서감압농축,건고한다.비
유지검체의경우잔류물을
디클로로로메 탄10mL에
재용해하여플로리실칼럼
크로마토그래피에직접공
시한다.현미및콩류등
유지검체의경우잔류물을
미리아세토니트릴로포화
시킨헥산40mL에재용해
한후125mL용량의분액
깔때기에정량적으로옮기
고미리헥산으로포화시킨
아세토니트릴30mL를가
한후1분이상격렬하게
진탕한다.두층이완전히
분리될때까지정치한후
하부아세토니트릴층을- 115 -현행 개정안
<신설> 250mL용량의감압농축플
라스크에받는다.분액깔때
기에미리헥산으로포화시
킨아세토니트릴30mL를
재차가하여위의분배추
출과정을반복한다.합한
아세토니트릴추출액을4
0℃에서감압농축,건고한
후잔류물을디클로로로메
탄10mL에재용해한다.
나)정제
안지름11mm,길이400
mm의유리칼럼에플로리
실5g과그위에2cm높
이로무수황산나트륨을차
례로건식충전하고디클로
로로메탄25mL를유출시
켜버린다.고정상상단이
노출되기전에,‘가)추출’로
부터얻은디클로로로메 탄
용액10mL를칼럼에가하
고여분의디클로로로메 탄
5mL로용기및칼럼벽면- 116 -현행 개정안
<신설> 을씻어흘려버린다.고정
상상단이노출되기전에
에틸아세테이트/디클로로메
탄혼합액(4/96,v/v)50
mL를유출시켜버리고,에
틸아세테이트/디클로로메탄
혼합액(40/60,v/v)50mL
로용출시켜받는다.이를
40℃에서감압농축,건고한
후내부표준물질이0.4
mg/L의농도로함유되어
있는에틸아세테이트5mL
에재용해하여시험용액으
로한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:DB-5(30m×0.53
mm,0.5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상가스및유량:He,10
mL/min
(3)주입부온도:260℃- 117 -현행 개정안
<신설> (4)오븐온도:180℃(싸이프
로코나졸,펜코나졸),19
0℃(디니코나졸,푸루실
라졸,터부코나졸)
(5)검출기온도:300℃
(6)주입부:직접주입법
(7)주입량:1μL
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일정
량취하여기체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
0246810121415202530354045
Retention time (min)Detector response ( pA)
1
23
그림1.기체크로마토그래프에서
표준품(I)의크로마토그
램- 118 -현행 개정안
<신설> 1.펜코나졸(4.5분),2.싸
이프로코나졸(7.9분),3.
DAMAB(내부표준물질,
10.3분)
0246810121415202530354045
12
43Detector response ( pA)
Retention time (min)그림2.기체크로마토그래프에서
표준품(II)의크로마토그
램
1.푸루실라졸(5.1분),2.
디니코나졸(6.0분),3.
DAMAB(내부표준물질,
6.8분),4.터부코나졸(8.8
분)
라)정량한계
싸이프로코나졸,디니코나
졸,푸루실라졸및펜코나
졸(0.02mg/kg),터부코나졸
(0.03mg/kg)- 119 -현행 개정안
<신설> 7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검
량선에대입하여정량한다.
8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로각성분을
확인한다.
가)기체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-5MS(30m×0.25
mm,0.25μm)또는이와
동등한것
(2)이동상가스및유량:He,2
mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도:45℃에서시
험용액을주입한후2분
간유지하고,200℃까지
20℃/분비율로온도를- 120 -현행 개정안
<신설>
4.1.4∼4.1.4.37(생략)
4.1.4.38트리포린(Triforine)
1)시험법적용범위상승시켜2분간유지한
후280℃까지5℃/분비
율로온도를상승시킨다.
(5)인터페이스온도:300℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부:Splitlessmode
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:100～500
m/z
표1.기체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
분석성분머무름
시간 (분)분자량
(MW)이온 (m/z)
싸이프로코나졸 18.1, 18.2 291222, 224,
139
디니코나졸 18.7 325 268, 270
푸루실라졸 17.6 315 233, 206
펜코나졸 15.5 283248, 159,
161, 250
터부코나졸 20.6 307 250, 125
4.1.4∼4.1.4.37(생략)
4.1.4.38트리포린(Triforine)
1)시험법적용범위- 121 -현행 개정안
가지,고추,구기자,기타곡류,
딸기,밀,보리,복숭아,사과,
수박,쌀,오이,옥수수,자두,
체리,토마토,피망,호박등
식품에적용한다.
2)분석원리
검체를아세톤으로추출한후
실리카칼럼크로마토그래피로
정제하여기체크로마토그래프
로측정한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프∶전자
포획검출기(ECD)를사용
한다.
4)시약및시액
가)용매：잔류농약시험용또
는이와동등한것
나)물：증류수또는이와동등
한것
다)셀룰로오즈(Cellulose)：칼럼크
로마토그래프용미결정셀룰로
오즈분말
라)실리카(silica)：칼럼크로마곡류,채소류및과일류등
식품에적용한다.
2)분석원리
검체중트리포린을아세토니
트릴로추출한후
Dispersive-SPE로정제하여
액체크로마토그래프-질량분석
기로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS/MS)를사
용한다.
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:트리포린표준
품을아세토니트릴에녹여
500mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴에녹여적당한
농도로각각혼합,희석한- 122 -현행 개정안
토그래프용실리카
마)표준원액：트리포린을아세
톤에녹여100mg/kg이
되게한다.
바)표준용액：표준원액을아세
톤에녹여적당한농도로
희석한다.
사)기타시약：잔류농약시험용또
는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류는약1kg을잘
혼합하여표준체420μm를
통과하도록분쇄한후그
20g을단다.채소류및과
실류는약1kg을정밀히
달아필요하면적당량의물
을넣고균질화한후그20
g에상당하는양을단다)
균질기에넣고아세톤150
mL를넣어5분간균질화한
후여과보조제를 깔은흡인
여과기로여과한다.잔류물다.
마)Dispersive-SPE:
PSA(Primary-secondary
amine)25mg과황산마그
네슘150mg을1.5mL튜
브에담아둔다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄
한후10g을정밀히달아
50mL원심분리관에넣고
(곡류등건조검체의경우
물5mL를넣고20분간습
윤화),아세토니트릴10mL
를넣은후15분간균질화
한다.이에황산마그네슘 4
g,염화나트륨 1g,구연산
나트륨 1g,제2구연산나트
륨0.5g을첨가하고 ,1분간
격렬히 흔들어 준다 .이를
3,000 rpm에서 10분간원심- 123 -현행 개정안
은다시균질기에넣고아
세톤50mL를넣어5분간
균질화한후위와같이되
풀이하여여과한다.여액을
합쳐40℃이하의수욕상에
서감압하에아세톤을거의
날려보낸다.잔류물은미리
5%염화나트륨용액200
mL및벤젠100mL를넣
은분액깔때기에옮기고진
탕기로5분간심하게흔들
어섞은후정치하여벤젠
층을삼각플라스크에옮긴
다.물층에벤젠100mL를
넣어위와같이되풀이하여
벤젠층을위의삼각플라스
크에합친다.벤젠층에적
당량의무수황산나트륨을
넣어때때로흔들어섞으면
서30분간방치한후여과
한다.다시벤젠20mL로
삼각플라스크를씻고이씻
은액으로여지상의잔류물분리한다 .
나)정제
미리PSA와황산마그네슘
을담아둔튜브에‘가)추
출’로부터얻은용액중상
등액1mL를넣고1분간
격렬히진탕한다.이를3,000
rpm에서10분간원심분리하
고,상등액을시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(2.1mm×100
mm,2.6μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.1%포름산함
유물/0.1%포름산함유
아세토니트릴혼합액
(70/30,v/v)에서2분간
유지후0.1%포름산함
유물/0.1%포름산함유
아세토니트릴혼합액- 124 -현행 개정안
을씻고여과한다.여액을
합쳐40℃이하의수욕상에
서감압하에날려보낸후
잔사를아세톤10mL에녹
인다.
나)정제
(1)활성탄,셀룰로오즈칼럼
크로마토그래프
안지름1.5cm,길이30
cm의칼럼관에활성탄：
셀룰로오즈(1：9)의혼합
물2g,다음에무수황산
나트륨약5g을각각아
세톤에현탁시켜충전한
후그상단에소량의아
세톤이남을정도까지유
출시킨다.이칼럼에위
의녹인액을넣고아세
톤100mL로용출한다.
용출액을40℃이하의수
욕상에서감압하에날려
보낸후잔사를아세톤：
헥산(1：9)의혼합액10(10/90,v/v)으로2분간
직선적으로농도구배하
고1분간유지한다.
(3)이동상유량:0.3
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:10μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100~500
m/z
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프-질량분석기에각각주
입한다.얻어진크로마토그
램상의390(m/z)이온의
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
- 125 -현행 개정안
mL에녹인다.
(2)실리카칼럼크로마토그래
프
안지름1.5cm,길이30
cm의칼럼관에실리카
10g,다음에무수황산나
트륨을각각아세톤：헥
산(1：9)의혼합액에현
탁시켜충전한후그상
단에소량의아세톤：헥
산(1：9)의혼합액이남
을정도까지유출시킨다.
이칼럼에위의녹인액
을넣고아세톤：헥산
(1：9)의혼합액150mL
로유출시킨후아세톤：
헥산(3：7)의혼합액100
mL로용출한다.용출액
을40℃이하의수욕상에
서감압하에날려보낸후
잔사를에틸아세테이트：
메탄올(1：1)의혼합액에
녹여서일정량으로하여Retention Time (min)0 2 4 6Relative response
050000100000150000200000250000300000
그림1.액체크로마토그래프-질
량분석기에서표준품의크
로마토그램
트리포린(4.1분)
라)정량한계
0.005mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는피크면적
을검량선에대입하여정량한
다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로써트리포린- 126 -현행 개정안
시험용액으로한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼충전제
(가)고정상담체：기체크로
마토그래프용규조토
(149～177μm)를6N
염산으로2시간환류시
켜씻고물로유출액이
중성이될때까지씻은
후건조하여메틸실라
잔처리[트리메틸클로로
실란：피리딘：헥사메
틸디실라잔(1：5：3)의
혼합액에침지하고10
분간물로씻어건조한
다]한다.
(나)고정상액체：5%기체
크로마토그래프용실리
콘
(2)칼럼：안지름3～4mm,길
이100～150cm의유리관을확인한다.
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름
시간
(분)분자량
(MW)Precursor
ion(m/z)Fragment
ion(m/z)Collision
energy
(V)
4.1435435390
21515
30- 127 -현행 개정안
(3)시험용액주입부및검출기
온도：240～300℃
(4)칼럼오븐온도：170～190℃
(5)캐리어가스및유량：질소
(트리포린이약3분에서유
출하는유속으로조정한다)
나)검량선의작성
표준용액을농도별로일
정량취하여기체크로마
토그래프에각각주입한
다.얻어진크로마토그램
상의각피이크높이또
는면적을구하여검량선
을작성한다.
다)정량한계
0.05mg/kg
7)정성시험
위의조건에서시험할때시
험결과는표준품과일치하여
야한다.
8)정량시험
정성시험과 똑같은조건에서
얻어진시험결과에의해피이- 128 -현행 개정안
크높이법또는피이크면적법에
따라정량한다.
4.1.4.39∼4.1.4.147(생략)
<신설>4.1.4.39∼4.1.4.147(현행과같음)
4.1.4.148메타조설푸론
(Metazosulfuron)
1)시험법적용범위
곡류등식품에적용한다.
2)분석원리
검체중메타조설푸론을 아세
토니트릴로추출하고아미노
프로필카트리지로정제하여
액체크로마토그래프로분석한
다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외
부흡 광검 출 기
(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는- 129 -현행 개정안
<신설> 특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:메타조설푸론
표준품을아세토니트릴에
녹여1,000mg/L가되게
한다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴에녹여적당한
농도로각각혼합,희석한
다.
마)아미노프로필카트리지:아
미노프로필(1g)이충진되어
있는일회용카트리지(용량6
mL)를사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄
하여표준체420μm를통
과시키고25g을정밀히달
아삼각플라스크에넣고,- 130 -현행 개정안
<신설> 물25mL를넣은후혼합
하여1시간정치한다.여기
에아세토니트릴100mL를
넣은후1시간동안진탕하
여여과지가깔려있는부흐
너깔때기로흡인여과하고
아세토니트릴30mL로잔
사및용기를씻어상기여
액과합하여500mL감압
농축플라스크에받는다.이
여액을40℃이하의수욕상
에서약10mL가될때까
지감압농축하고분액깔때
기에옮긴다.이에포화식
염수50mL,물50mL및
에틸아세테이트100mL를
가하여심하게흔들어정치
한후에틸아세테이트층을
무수황산나트륨20g에통
과시켜탈수하여감압농축
플라스크에취한다.물층에
다시에틸아세테이트50
mL를가하여심하게흔들- 131 -현행 개정안
<신설> 어정치한후에틸아세테이
트층을무수황산나트륨20
g에통과시켜탈수하여상
기감압농축플라스크에합
한다.이를40℃이하수욕
상에서감압농축한후잔류
물에디클로로메탄5mL를
가하여용해한다.
나)정제
아미노프로필카트리지에
디클로로메탄10mL를넣
고고정상상단에소량의
디클로로메탄이남을정도
까지유출시켜버린후,
‘가)추출’로부터얻은디클
로로메탄5mL를고정상
상단에가한다.여기에아
세톤/디클로로메탄혼합액
(50/50,v/v)10mL을유출
시켜버린후,다시아세톤/
디클로로메탄/초산혼합액
(20/80/1,v/v/v)10mL를
15mL시험관에받는다.- 132 -현행 개정안
<신설> 이유출액을40℃이하수
욕상에서질소농축한후
잔류물에아세토니트릴을
가하여최종부피1mL가
되게하여시험용액으로한
다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와동
등한것
(2)이동상:0.1%포름산함
유물/0.1%포름산함유
아세토니트릴혼합액
(40/60,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:245nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그- 133 -현행 개정안
<신설> 래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
Retention time (min)0 2 4 6 8Relative response
-202468101214
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
메타조설푸론(5.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는피크면적
을검량선에대입하여정량한- 134 -현행 개정안
<신설> 다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로메타조설푸
론을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(50mm×2.1
mm,3μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.1%포름산
함유물/0.1%포름산
함유아세토니트릴혼
합액(50/50,v/v)
(3)이동상유량:0.2
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:200~500
m/z- 135 -현행 개정안
<신설>
<신설>표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름
시간 (분)분자량
(MW)이온
(m/z)
2.0 475 476
4.1.4.149 설폭사플로르
(Sulfoxflor)
1)시험법적용범위
과일류및채소류등의식품
에적용한다.
2)분석원리
검체중설폭사플로르를 메탄
올및1N염산으로추출한
후아미노프로필카트리지로
정제하여액체크로마토그래프
로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부
흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량- 136 -현행 개정안
<신설> 분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:설폭사플로르
표준품을아세토니트릴에
녹여500mg/L가되게한
다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴/0.2%아세트산
함유물혼합액(50/50)으로
적당한농도로각각혼합,
희석한다.
마)아미노프로필카트리지:
아민(1g)고정상이충진
되어있는일회용카트리
지(용량6cc)를사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출- 137 -현행 개정안
<신설> 검체1kg을분쇄하여균질
화한후20g을정밀히달
아균질기용기에넣고,1
N염산용액5mL와메탄
올45mL를가하여혼합추
출분쇄기로5분간균질화한
다.이를여과지가깔려있
는부흐너깔때기로흡인여
과하고,잔류물을메탄올
30mL로씻어내려앞의여
액과합하여40℃이하수욕
상에서감압농축한다.(추출
물이여과가잘되지않을
경우여과지에Celite545
를깔고여과한다.)농축액
을포화식염수100mL가
담겨있는500mL분액깔때
기에옮긴후디클로로메탄
100mL를가하여심하게
흔들어층이완전히분리
될때까지정치한후,디
클로로메탄층을무수황산나
트륨에통과시켜감압농축- 138 -현행 개정안
<신설> 플라스크에받는과정을2
회반복한다.이를40℃이
하수욕상에서감압농축한
후잔류물을헥산/아세톤
혼합액(95/5,v/v)5mL로
재용해한다.
나)정제
아미노프로필카트리지에
헥산10mL를넣고고정상
상단이노출되기전에‘가)
추출’로부터얻은헥산/아세
톤혼합액(95/5,v/v)5mL
를가하여유출시켜버린다.
고정상상단이노출되기전
에헥산/아세톤혼합액
(95/5,v/v)5mL와헥산/
아세톤혼합액(90/10,v/v)
5mL를가하여유출시켜
버리고,헥산/아세톤혼합액
(60/40,v/v)10mL로유출
시켜감압농축플라스크에
취한다.이유출액을40℃
수욕상에서감압농축하고- 139 -현행 개정안
<신설> 잔류물에아세토니트릴
/0.2%아세트산함유물혼
합액(50/50,v/v)을가하여
최종부피2mL가되게하
여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:물과아세토니
트릴의농도구배조건
에따라사용한다.
시간(분)물(%)아세토니트릴
(%)
07030
57030
183070
207030
257030
(3)이동상유량:1
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:220nm- 140 -현행 개정안
<신설> (6)주입량:40μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
설폭사플로르(7.9분,8.3분)
라)정량한계
0.05mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검- 141 -현행 개정안
<신설> 량선에대입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로설폭사플로
르를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2
mm,3μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.01%포름산
함유물과0.01%포름
산함유아세토니트릴
의농도구배조건에따
라사용한다.
시간
(분)0.01%포름산
함유아세토
니트릴 (%)0.01% 포름산
함유물(%)
0 0 100
5 30 70
12 70 30
13 0 100
15 0 100
(3)이동상유량:0.2- 142 -현행 개정안
<신설>
<신설>mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100~500
m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름
시간 (분)분자량
(MW)이온
(m/z)
8.9, 9.1 277 300
4.1.4.150 시아조파미드
(Cyazofamid)
1)시험법적용범위
과일류,채소류,서류등식품
에적용한다.
2)분석원리
검체중시아조파미드를 아세
톤으로추출한후플로리실
칼럼으로정제하여액체크로
마토그래프로분석한다.- 143 -현행 개정안
<신설> 3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부
흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:시아조파미드
표준품을아세토니트릴에
녹여500mg/L가되게한
다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴에녹여적당한
농도로각각혼합,희석한
다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.- 144 -현행 개정안
<신설> 바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을혼합하고분쇄
한후25g을정밀히달아
삼각플라스크에넣고,아
세톤100mL를넣은후1
시간동안진탕한다.이를
여과지가깔려있는부흐너
깔때기로흡인여과하고아
세톤30mL로잔사및용
기를씻어상기여액과합
하여500mL감압농축플라
스크에받는다.이여액을
40℃이하의수욕상에서약
10mL가될때까지감압농
축하고분액깔때기에옮긴
다.이에포화식염수50
mL,물50mL및디클로
로메탄100mL를가하여
심하게흔들어정치한후
디클로로메탄층을무수황산- 145 -현행 개정안
<신설> 나트륨15g에통과시켜감
압농축플라스크에받는다.
물층에다시디클로로메탄
50mL를가하여심하게흔
들어정치한후디클로로메
탄층을무수황산나트륨15
g에통과시켜상기감압농
축플라스크에합한다.이를
40℃이하수욕상에서감압
농축한후잔류물에헥산5
mL를가하여용해한다.(대
두등의유지작물의추가
분배를위하여건고물에아
세토니트릴포화헥산50
mL를가하여녹인후250
mL분액깔때기에옮긴다.
헥산포화아세토니트릴50
mL를분액깔때기에가하여
2분간격렬히진탕하고정
치한다.분리된아세토니트
릴층을감압농축플라스크에
옮기고,분액깔때기에남은
헥산용액에다시헥산포- 146 -현행 개정안
<신설> 화아세토니트릴30mL를
가하여위의과정을되풀이
한다.합친아세토니트릴
여액을40℃이하의수욕상
에서감압농축하고헥산5
mL를가하여용해한다.)
나)정제
안지름15mm,길이350
mm의유리칼럼에플로리
실10g과무수황산나트륨
3g을차례로충진한후헥
산100mL를가하여유출
시켜버린다.고정상상단
이노출되기전에‘가)추
출’로부터얻은헥산5mL
를가하여유출시켜버리
고,에틸아세테이트/헥산혼
합액(10/90,v/v)100mL를
유출시켜버린후,다시에
틸아세테이트/헥산혼합액
(30/70,v/v)100mL로유
출시켜감압농축플라스크에
취한다.이유출액을40℃- 147 -현행 개정안
<신설> 이하수욕상에서감압농축
하고잔류물에아세토니트릴
을가하여최종부피5mL가
되게하여시험용액으로한
다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와동
등한것
(2)이동상:물/아세토니트
릴혼합액(35/65,v/v)
(3)이동상유량:1mL/min
(4)칼럼온도:35℃
(5)검출파장:280nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구- 148 -현행 개정안
<신설> 하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
Rentention time (min)0 2 4 6 8 10 12 14Relative response
-1012345
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
시아조파미드(8.8분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는피크면적
을검량선에대입하여정량한
다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석- 149 -현행 개정안
<신설> 기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로써시아조파
미드를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(50mm×2.1
mm,2.6μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.1%포름산
함유물/0.1%포름산함
유아세토니트릴혼합액
(40/60,v/v)
(3)이동상유량:0.2
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:2μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100~400
m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온- 150 -현행 개정안
<신설>
<신설>머무름
시간(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
1.9324325
4.1.4.151 옥시카복신
(Oxycarboxin)
1)시험법의적용범위
곡류,콩류,과일류,채소류등
식품에적용한다.
2)분석원리
검체중옥시카복신을아세톤
으로추출하고플로리실칼럼
으로정제하여액체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부
흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와- 151 -현행 개정안
<신설> 동등한것
다)표준원액:옥시카복신표
준품을메탄올에녹여500
mg/L이되게한다.
라)표준용액:표준원액을각
각메탄올에녹여적당한
농도로혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체(곡류및콩류는약1
kg을분쇄기로분쇄하여표
준체420μm를통과한분
말상검체25g,채소류및
과일류는약1kg을세절혼
합기에넣고0.5～1cm내
외로분쇄한검체25g)를- 152 -현행 개정안
<신설> 정밀히달아균질기용기에
넣는다.곡류및콩류등
건조검체의경우물20
mL를첨가하고30분간방
치,습윤화한다.이에아세
톤100mL를가한후2분
간고속마쇄(10,000rpm이
상)하여추출한다.추출물을
여과지가깔려있는부흐너
깔때기로흡인여과하고아
세톤40mL로잔사및용
기를씻어내려앞서의여
액과합한후40℃이하의
수욕상에서감압농축한다.
수기에아세톤10mL를첨
가한후분액깔때기에옮기
고물450mL,포화식염수
50mL및디클로로메탄50
mL를가하여5분간심하게
흔들어섞은후층이완전
히분리될때까지정치하여
디클로로메탄층을취하고,
다시디클로로메탄50mL- 153 -현행 개정안
<신설> 를가하여5분간격렬하게
흔들어섞은후정치한다
음디클로로메탄층을무
수황산나트륨에통과하여
감압농축플라스크에받는
다.위의디클로로메탄과
합한다.수용액층에재차
디클로로메탄50mL를가
한후위의분배추출과정
을반복한다.합한디클로
로로메탄추출액을40℃에
서감압농축한다.잔류물
에아세토니트릴포화헥산
40mL를가하여녹인후
250mL용량의분액깔때기
에옮긴다.헥산포화아세
토니트릴을40mL를분액
깔때기에가하여5분간격
렬하게흔들어섞은후정
치한다.분리된아세토니트
릴층을125mL용량의감
압농축플라스크에옮기고,
분액깔때기에남은헥산용- 154 -현행 개정안
<신설> 액에다시헥산포화아세
토니트릴40mL를가하여
위의과정을되풀이한다.
합한아세토니트릴여액을
40℃이하의수욕상에서감
압농축하여잔류물을디클
로로메탄10mL에재용해
한다.
나)정제
안지름11mm,길이400
mm의유리칼럼에플로리
실10g과그위에무수황
산나트륨2g을충진한후
헥산50mL를가하여유출
시켜버린다.고정상상단
이노출되기전에‘가)추출’
로부터얻은디클로로메탄
용액10mL를칼럼에가하
고고정상상단이노출되기
전에디클로로메탄/헥산/아
세토니트릴혼합액(50/45/5,
v/v/v)100mL를가하여
유출시켜버리고,디클로로- 155 -현행 개정안
<신설> 메탄/헥산/아세토니트릴혼
합액(50/40/10,v/v/v)150
mL로유출시켜받는다.이
를40℃이하수욕상에서감
압농축하고잔류물에아세
토니트릴을가하여최종부
피10mL가되게하여시
험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:물/아세토니트
릴혼합액(65/35,v/v)
(3)이동상유량:1
mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)검출파장:254nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정량- 156 -현행 개정안
<신설> 취하여액체크로마토그래프
에각각주입한다.얻어진크
로마토그램상의각피크높
이또는면적을구하여검량
선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
옥시카복신(8.5분)
라)정량한계
0.04mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할
때피크높이또는면적을검- 157 -현행 개정안
<신설> 량선에대입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로각농약성분
을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×2.0
mm,3μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.1%포름산
함유물/아세토니트릴
(65/35,v/v)
(3)이동상유량:0.3
mL/min
(4)칼럼온도:30℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:200～600
m/z- 158 -현행 개정안
<신설>
<신설>표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름시간(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
3.9267268
4.1.4.152 이미시아포스
(Imicyafos)
1)시험법적용범위
과일류,채소류및서류등의
식품에적용한다.
2)분석원리
검체중이미시아포스를아세톤
으로추출한후플로리실칼럼
으로정제하여액체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부
흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량분
석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는- 159 -현행 개정안
<신설> 특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:이미시아포스
표준품을아세토니트릴에
녹여500mg/L가되게한
다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴에녹여적당한
농도로각각혼합,희석한
다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질
화한후20g을정밀히달
아균질기용기에넣고,아- 160 -현행 개정안
<신설> 세톤100mL를가하여혼
합추출분쇄기로2~3분간균
질화한다.이를여과지가깔
려있는부흐너깔때기로흡
인여과하고,아세톤30mL
로잔사및용기를씻어내
려앞의여액과합하여1L
용량의분액깔때기로옮긴
다.이에포화식염수500
mL및헥산100mL를차
례로가한후심하게흔들
어층이완전히분리될때
까지정치한다.수용액층을
별도의1L용량의분액깔
때기에옮긴후디클로로메
탄100mL를가하여심하
게흔들어층이완전히분
리될때까지정치한후무
수황산나트륨에통과시켜
감압농축플라스크에받는
과정을2회반복한다.이를
40℃이하수욕상에서감압
농축한후잔류물을디클로- 161 -현행 개정안
<신설> 로메탄10mL로재용해한
다.
나)정제
안지름11mm,길이400
mm의유리칼럼에플로리실
5g과무수황산나트륨을약
2cm높이로차례로충진
한후디클로로메탄50mL
를가하여유출시켜버린다.
고정상상단이노출되기전
에노출되기전에‘가)추
출’로부터얻은디클로로메
탄10mL를가하여유출시
켜버리고,디클로로메탄50
mL및아세톤/디클로로메
탄혼합액(10/90,v/v)50
mL를가하여유출시켜버
린다.고정상상단이노출되
기전에아세톤/디클로로메
탄혼합액(45/55,v/v)100
mL로유출시켜감압농축플
라스크에취한다.이유출액
을40℃수욕상에서감압농- 162 -현행 개정안
<신설> 축하고잔류물에아세토니
트릴을가하여최종부피2
mL가되게하여시험용액
으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:아세토니트릴/
물혼합액(25/75,v/v)
(3)이동상유량:1
mL/min
(4)칼럼온도:25℃
(5)검출기파장:227nm
(6)주입량:10μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구- 163 -현행 개정안
<신설> 하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램AU
- 0.0004- 0.00020.00000.00020.00040.00060.00080.00100.00120.00140.0016
분0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00
그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
이미시아포스(14.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할때
피크높이또는면적을검량선
에대입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로이미시아포
스를확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건- 164 -현행 개정안
<신설>
<신설>(1)칼럼:C18(150mm×3
mm,3μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:0.1%포름산
함유물/0.1%포름산
함유아세토니트릴혼
합액(70/30,v/v)
(3)이동상유량:0.3mL/min
(4)칼럼온도:25℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100~500m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름
시간(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
3.0304305
4.1.4.153이소피라잠(Isopyrazam)
1)시험법적용범위
채소류등식품에적용한다.- 165 -현행 개정안
<신설> 2)분석원리
검체중이소피라잠을아세토니
트릴로추출하고플로리실칼럼
으로정제하여액체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)액체크로마토그래프-자외부
흡광검출기(HPLC-UVD)
나)액체크로마토그래프-질량
분석기(LC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:이소피라잠표
준품을아세토니트릴에녹
여500mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아
세토니트릴에녹여적당한
농도로각각혼합,희석한
다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크- 166 -현행 개정안
<신설> 로마토그래프용플로리실
(60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질
화한후25g을정밀히달
아균질기용기에넣고,아
세토니트릴100mL를가하
여혼합추출분쇄기로2~3분
간균질화한다.이를여과지
가깔려있는부흐너깔때기로
흡인여과하고,아세토니트릴
30mL로잔사및용기를씻
어내려앞의여액과합하여
감압농축플라스크에받아약
10mL가될때까지40℃이
하수욕상에서감압농축한
다.이를1L용량의분액깔
때기에옮기고포화식염수- 167 -현행 개정안
<신설> 50mL,물400mL및헥산
50mL를차례로가하여심
하게흔들어층이완전히분
리될때까지정치한후,헥
산층을무수황산나트륨에통
과시켜감압농축플라스크에
받는과정을2회반복한다.
이를40℃이하수욕상에서
감압농축한후잔류물을헥
산5mL로재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이300
mm의유리칼럼에플로리
실10g과무수황산나트륨
을약2cm높이로차례로
충진한후헥산50mL를
가하여유출시켜버린다.
고정상상단이노출되기전
에‘가)추출’로부터얻은
헥산5mL를가하여유출
시켜버리고,헥산/에틸아세
테이트혼합액(90/10,v/v)
100mL를가하여유출시켜- 168 -현행 개정안
<신설> 버린다.고정상상단이노
출되기전에헥산/에틸아세
테이트혼합액(70/30,v/v)
100mL로유출시켜감압농
축플라스크에받는다.이
유출액을40℃이하수욕상
에서감압농축하고잔류물
에아세토니트릴을가하여
최종부피10mL가되게하
여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:C18(250mm×4.6
mm,5μm)또는이와
동등한것
(2)이동상:물과아세토니트
릴의농도구배조건에따
라사용한다.- 169 -현행 개정안
<신설>
시간(분)물(%)아세토니트릴
(%)
05545
25545
74060
254060
285545
305545
(3)이동상유량:1
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)검출파장:254nm
(6)주입량:20μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여액체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
- 170 -현행 개정안
<신설> 그림1.액체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
이소피라잠(Syn-isomer
25.1분,anti-isomer25.9
분)
라)정량한계
0.05mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토
그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할때
피크높이또는면적을검량선
에대입하여정량한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로이소피라잠
을확인한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:C18(150mm×3
mm,3μm)또는이와
동등한것- 171 -현행 개정안
<신설>
<신설>(2)이동상:0.05%포름산
함유물/0.05%포름산
함유아세토니트릴혼합
액(50/50,v/v)
(3)이동상유량:0.3
mL/min
(4)칼럼온도:40℃
(5)주입량:5μL
(6)이온화:ESIpositive-ion
mode
(7)분자량범위:100~500
m/z
표1.액체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
이소피라잠머무름
시간(분)분자량
(MW)이온
(m/z)
Syn-isomer18.6359360
Anti-isomer17.9359360
4.1.4.154플루오피람(fluopyram)
1)시험법적용범위
채소류등식품에적용한다.- 172 -현행 개정안
<신설> 2)분석원리
검체중플루오피람을아세톤
으로추출하고플로리실칼럼
으로정제하여기체크로마토그
래프로분석한다.
3)장치
가)기체크로마토그래프-전자
포획검출기(GC-ECD)
나)기체크로마토그래프-질량
분석기(GC-MS)
4)시약및시액
가)용매:잔류농약시험용또는
특급
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:플루오피람표
준품을아세톤에녹여500
mg/L가되게한다.
라)표준용액:표준원액을아
세톤에녹여적당한농도
로각각혼합,희석한다.
마)플로리실(Florisil):칼럼크
로마토그래프용플로리실- 173 -현행 개정안
<신설> (60~100mesh)을130℃에서
하룻밤가열한후데시케
이터에서보관·사용한다.
바)기타시약:잔류농약시험
용또는특급
5)시험용액의조제
가)추출
검체1kg을분쇄하여균질
화한후25g을정밀히달
아균질기용기에넣고,아
세톤100mL를가하여혼
합추출분쇄기로2~3분간균
질화한다.이를여과지가
깔려있는부흐너깔때기로
흡인여과하고,아세톤30
mL로잔사및용기를씻어
내려앞의여액과합한다.
이를1L용량의분액깔때
기에옮기고물450mL와
포화식염수50mL를넣고
디클로로메탄50mL를차
례로가하여심하게흔들어
층이완전히분리될때까지- 174 -현행 개정안
<신설> 정치한후,디클로로메탄층
을무수황산나트륨에통과
시켜감압농축플라스크에
받는과정을2회반복한다.
이를40℃이하수욕상에서
감압농축한후잔류물을헥
산10mL로재용해한다.
나)정제
안지름15mm,길이300
mm의유리칼럼에플로리실
5g과무수황산나트륨을약
2cm높이로차례로충진한
후헥산100mL를가하여
유출시켜버린다.고정상상
단이노출되기전에‘가)추
출’로부터얻은헥산10mL
를가하여유출시켜버리고,
아세톤/헥산혼합액(5/95,
v/v)50mL를가하여유출
시켜버린다.고정상상단이
노출되기전에아세톤/헥산
혼합액(20/80,v/v)50mL
로유출시켜감압농축플라- 175 -현행 개정안
<신설> 스크에취한다.이유출액을
40℃수욕상에서감압농축
하고잔류물에아세톤을가
하여최종부피2mL가되
게하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼:DB-5(30m×0.25
mm,0.25μm)또는이와
동등한것
(2)이동상가스및유량：N2,1
mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：80℃에서시
험용액을주입하고1분
간유지한후30℃/분의
비율로온도를상승시켜
260℃이후10분간유지
한다.
(5)검출기온도:300℃
(6)주입부：Split
mode(30:1)- 176 -현행 개정안
<신설> (7)주입량:1μL
나)검량선작성
표준용액을농도별로일정
량취하여기체크로마토그
래프에각각주입한다.얻
어진크로마토그램상의각
피크높이또는면적을구
하여검량선을작성한다.
다)표준품의크로마토그램
그림1.기체크로마토그래프에서
표준품의크로마토그램
플루오피람(9.9분)
라)정량한계
0.02mg/kg
7)정량시험
위조건으로얻어진크로마토- 177 -현행 개정안
<신설> 그램상의피크가표준용액피
크의머무름시간과일치할때
피크높이또는면적을검량선
에대입하여정량한다.
8)확인시험
기체크로마토그래프-질량분석
기상의머무름시간과질량분
석스펙트럼으로플루오피람
을확인한다.
가)기체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼:DB-5MS(30m×0.25
mm,0.25μm)또는이와
동등한것
(2)이동상가스및유량：He,1
mL/min
(3)주입부온도:260℃
(4)오븐온도：100℃에서
시험용액을주입한후2
분간유지하고10℃/분의
비율로온도를상승시켜
280℃에서20분간유지한
다.- 178 -현행 개정안
<신설>
5.식품중잔류동물용의약품시
험법
5.1∼5.3.69(생략)
5.3.70티암페니콜(Thiamphenicol)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체를아세톤으로추출하여(5)인터페이스온도:280℃
(6)이온원온도:230℃
(7)주입부:Splitlessmode
(8)주입량:1μL
(9)분자량범위:50～500
m/z
표1.기체크로마토그래프-질량
분석기분석을위한특성이온
머무름
시간(분)분자량
(MW)이온(m/z)
16.1397223,173,145
5.식품중잔류동물용의약품시
험법
5.1∼5.3.69(현행과같음)
5.3.70티암페니콜(Thiamphenicol)
1)시험법적용범위
축·수산물등에적용한다.
2)분석원리
시료중의티암페니콜을 축,- 179 -현행 개정안
염화나트륨용액을넣고에틸
아세테이트로 추출하여에틸
아세테이트를 날려보낸후아
세토니트릴및n-헥산의혼합
액에녹여아세토니트릴층을
감압건고한다.에틸아세테이
트,초산(무수),피리딘을사용
하여아세틸화하여실리카칼
럼으로정제한후기체크로마
토그래프로측정한다.
3)장치
기체크로마토그래프/질소․인
검출기(GC/NPD)
4)시약및시액
가)유기용매：잔류농약시험용
나)표준원액：티암페니콜10
mg을정밀히달아아세톤
에녹여50mL로한다.
다)표준용액：티암페니콜표준
용액5mL를취해아세톤
을넣어50mL로한다.
라)실리카：칼럼크로마토그래
프용(100～200메쉬)수산물의경우초산에틸/수산
암모늄혼합용액으로추출하
고,유의경우에는20%TCA
로추출하고헥산으로지방을
제거하여SPE(MCX)카트리지
로정제한후액체크로마토그
래프-자외부흡광검출기로분
석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광
검출기(HPLC-UVD)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프
용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:티암페니콜표
준품을정밀히달아아세
토니트릴에녹여100
mg/L이되게한다.
라)표준용액:표준원액을아세
토니트릴/물혼합액(10/90,
v/v)으로희석하여사용한다.- 180 -현행 개정안
마)기타시약：최순품
5)시험용액의조제
가)추출
검체2g을달아아세톤30
mL를넣어균질기로균질하
게한후3,000～3,500rpm에
서5분간원심분리하여상등
액을취한다.다시잔류물에
아세톤20mL를10mL씩
나누어위의조작을되풀이
한후상등액을합하여다시
5분간원심분리한다.상등액
을분액깔때기에옮기고3%
염화나트륨용액150mL를
넣은후에틸아세테이트150
mL를넣고진탕하여에틸아
세테이트층을취한다.물층은
다시에틸아세테이트100
mL를50mL씩나누어위와
같이2회되풀이한후에틸
아세테이트층을합하여감압
건고한다.잔류물은아세토니
트릴10mL를5,3및2mL마)MCX(Mixed-mode
Cation-Exchan ge,3mL,60
mg)카트리지또는이와동
등한것
바)기타시약:특급또는이와동
등한것
5)시험용액의조제
가)추출
(1)축·수산물
균질화된검체5g을50mL
원심분리관에취하고초산에
틸/수산암모늄(98/2,v/v)혼합
용액20mL을가하여5분간
진탕하고2,300G에서5분간
원심분리하여상층액을100
mL농축플라스크에옮긴다.원
심분리후남은잔사에초산에
틸/수산암모늄(98/2,v/v)혼합용
액20mL를넣고다시2,300
G에서5분간원심분리하여나
온상층액을앞의농축플라스
크에합하여이액을추출액으
로한다.상층액이모아진농축- 181 -현행 개정안
로나누어녹여분액깔때기
에옮기고n-헥산30mL를
넣어진탕후아세토니트릴층
을취해감압건고한다.잔류
물에에틸아세테이트0.5
mL,초산(무수)0.5mL및
피리딘2방울을넣고혼합하
여30분간방치한다.
이액에물5mL를넣고혼
합한후클로로포름5mL씩
으로3회추출하여클로로포
름층을물5mL씩으로3회
씻는다.클로로포름층은황산
나트륨(무수)5g을넣어흔
들어섞으면서방치한후여
과한다.
나)정제
안지름10mm,길이300
mm의칼럼에실리카3g을
넣고그위에황산나트륨(무
수)1g을클로로포름에현
탁시켜넣은후충전물의상
단에소량의클로로포름이플라스크에2mL의5%초산을
가하고이를40℃에서1~2mL
이남을때까지감압농축한다.
감압농축후남은액을15mL
원심분리관에취하고농축플라
스크를5%초산1mL로세척
하여이를앞의원심분리관에
합한다.원심분리관에핵산5
mL를가하여1분간진탕한후
2,300G에서5분간원심분리한
후상층액을제거하는과정을2
회반복하여지방을제거한다.
이액을추출액으로한다.
(2)유
균질화된검체5g을50mL
원심분리관에취하고20%
TCA5mL를가하여원심분리
한후상층액을50mL를원심
분리관에취하여위과정을한
번반복한다.상층액이모아진
농축플라스크에2mL의5%
초산을가하고이를40℃에서
1~2mL이남을때까지감압- 182 -현행 개정안
남을때까지흘려버린다.이
칼럼에위의여액을넣고클
로로포름약30mL로씻은
후메탄올및클로로포름(2：
8)의혼합액50mL로용출시
킨다.이액을감압건고한후
잔류물을아세톤0.5mL로
녹여이를시험용액으로한
다.
6)시험조작
가)기체크로마토그래프의측정
조건
(1)칼럼충전제
(가)고정상담체：크로모솔브
W(AW)
(나)고정상액체：2%
OV-17
(2)칼럼：안지름3mm,길
이1mm유리관
(3)검출기온도：300℃
(4)칼럼온도：280℃
(5)캐리어가스및유량：질
소,60mL/분농축한다.감압농축후남은액
을15mL원심분리관에취하
고농축플라스크를5%초산1
mL로세척하여이를앞의원
심분리관에합한다.원심분리
관에핵산5mL를가하여1분
간진탕한후2,300G에서5분
간원심분리한후상층액을제
거하는과정을2회반복하여
지방을제거한다.이액을추출
액으로한다.
나)정제
미리메탄올2mL과물2mL
로활성화시킨양이온교환카트
리지에흡착시키고2mL의5%
초산으로카트리지를세척한후
메탄올/수산암모늄(90/10,v/v)
혼합용액3mL로용출한다.용
출액을50℃에서질소농축하고
30%아세토니트릴0.5mL을
가하여충분히녹인후0.45μ
m멤브레인필터로여과시켜
시험용액으로한다.- 183 -현행 개정안
7)정량시험
티암페니콜표준용액0.1,0.3,
0.5및1.0mL를취해감압건
고한후에틸아세테이트,초산
(무수)을각각0.5mL씩넣고
피리딘2방울을넣어잘혼합
한후30분간방치하여이후
5)시험용액의조제항에따라
조작하여얻은표준용액및
시험용액2μL를위의조건에
따라기체크로마토그래프에
주입한다.얻어진각피크의
머무름시간(Retentiontime)을
비교해서피크의높이또는
면적으로검량선을작성하여
검체중티암페니콜의함량을
구한다.6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정
조건
(1)칼럼：C18(4.6×250
mm,5μm)또는이와
동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A:물
(나)이동상B:아세토니
트릴
min A(%) B(%)
0 90 10
5 90 10
10 30 70
13 90 10
20 90 10
(4)유속:1mL/min
(5)주입량:20μL
(6)UV검출기파장:224
nm
나)표준품크로마토그램- 184 -현행 개정안
그림1.티암페니콜(9.7분)
표준품의크로마토그램
다)정량한계
축·수산물:0.01mg/kg,
유:0.01mg/L
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각
액체크로마토그래프에주입한
다.얻어진피크머무름시간
을비교하여티암페니콜의피
크면적으로검량선을작성하
고시험용액중티암페니콜
함량을구한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기로분석하였을때시험용액
중표준물질의m/z값은표준
용액중표준물질의m/z값과
일치하여야한다.- 185 -현행 개정안
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.1×100mm,
1.8μm)또는이와동등
한것
(2)칼럼온도:실온
(3)이동상
(가)이동상A:물
(나)이동상B:메탄올
min A(%) B(%)
0 90 10
1 30 70
3 30 70
3.1 90 10
6 90 10
(4)유속:0.3mL/min
(5)주입량:10μL
(6)이온화방법:
ESI(negative)
(7)Capillary:4,000V
(8)Nebulizer:40psi
(9)GasTemperature:35
0℃
(10)Gasflow:10L/min
(11)Collisionenergy- 186 -현행 개정안
<신설>물질Precursor
ion(m/z)Fragment
ion(m/z)Collision
energy
(eV)
티암페
니콜354185,29017,6
5.3.96메벤다졸(Mebendazole)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체중메벤다졸및그대사
물질을아세토니트릴로추출
한후MgSO4및Primary
secondaryamine(PSA)를이
용하여정제하고액체크로마
토그래프-질량분석기로분석
한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석
기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매：액체크로마토그래프
용또는이와동등한것
나)물：3차증류수또는이와동등- 187 -현행 개정안
<신설> 한것
다)표준원액：메벤다졸및대
사물질(메벤다졸-아민및
5-하이드록시메벤다졸)표
준품을정밀히달아메탄올
에녹여100mg/L로하고
이를영하20℃에보관한
다.사용시표준품을실온
에두어용액의온도가실
온과동일해지면사용한다.
라)표준용액：표준원액을
DMSO에적당한농도로희
석하여사용하며,냉장고에
보관한다.
마)내부표준원액:5-OH-메벤
다졸-d3표준품을정밀히
달아메탄올에녹여100
mg/L로한다.조제된표준
원액은냉동보관한다.
바)내부표준용액:내부표준원
액을DMSO로희석하여1
mg/L가되게한다.
사)맥일바인(MacIlvaine)완충- 188 -현행 개정안
<신설> 용액(pH2)：0.6M구연
산(citric acid
monohydrate)및0.3M제
이인산나트륨(disodium
hydrogenphosphate
dihydrate)물에녹인후HCl
로pH를조절한다.
아)기타시약：특급
5)시험용액의조제
가)추출
(1)조직(간,신장),유(乳)
균질화한검체2g을50
mL원심분리관에담아내
부표준물질인5-OH-메벤
다졸-d3표준용액을첨가한
다.15초동안혼합한후
염화나트륨1g을넣고균
질화한후물2mL넣고1
분간균질화한다.여기에
1%초산을포함한아세토
니트릴10mL을넣고15분
간강하게균질화한후
4,500rpm에서10분간원심- 189 -현행 개정안
<신설> 분리한후상징액을취한
다.
(2)조직(근육),알(卵)
균질화한검체2g을50
mL원심분리관에담아내
부표준물질인5-OH-메벤
다졸-d3표준용액을첨가한
다.15초동안혼합한후
염화나트륨1g을넣고균
질화한후맥일바인완충용
액2mL넣고1분간균질
화한다.여기에아세토니
트릴:메탄올(9:1)10
mL을넣고15분간강하게
균질화한후4,500rpm에서
10분간원심분리한후상징
액을취한다.
나)정제
상징액을MgSO4900mg,
PSA150mg포함한키트
또는이와동등한것을포
함한15mL원심분리관에
옮긴후30초간강하게균- 190 -현행 개정안
<신설> 질화한후4,500rpm에서
10분간원심분리한후상징
액을유리튜브에옮긴후
50℃,질소가스감압농축으
로건조한후남은잔사에
500μLDMSO로용해한
후여과하여시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조
건
(1)칼럼:C18(2.1×100
mm,1.8μm)또는이와
동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A：20mM암
모늄포메이트수용액
(나)이동상B：메탄올- 191 -현행 개정안
<신설> min A(%) B(%)
0 70 30
0.5 70 30
1 20 80
4 20 80
4.1 70 30
8 70 30
(4)유속:0.25mL/분
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization :
ESI(positive)
(2)Capillary:4,000V
(3)Nebulizer:45psi
(4)GasTemperature:35
0℃
(5)Gasflow:10L/min
(6)Collisionenergy- 192 -현행 개정안
<신설>
물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
메벤다졸 296 264, 105 20,35
5-OH-메벤
다졸298 160, 266 40,20
메벤다졸 -
아민238 77,105 40,30
내부표준
물질 (5-OH
-메벤다졸 -
d3)301 160, 266 40,25
다)표준품크로마토그램
메벤다졸
5-OH-메벤다졸
메벤다졸 -아민
5-OH-메벤다졸 -d3
그림1.메벤다졸(4.7분),
5-OH-메벤다졸(4.3
분),메벤다졸아민
(4.2분),5-OH-메벤
다졸-d3(4.9분)표준품
의크로마토그램
라)정량한계- 193 -현행 개정안
<신설>
<신설>축산물:0.005mg/kg,유:
0.005mg/L
7)정량시험
시험용액및표준용액을각각
질량분석기에주입한다.이후,
각각에서얻은크로마토그램
으로부터머무름시간을비교
하여,내부표준물질5-OH-메
벤다졸-d3의m/z160에대한
메벤다졸m/z264,5-OH-메
벤다졸m/z160,메벤다졸-아
민m/z77의면적비를각각
구하고검량선을작성하여시
험용액중각각의함량을구
한다.
5.3.97니트록시닐(Nitroxynil),클
로술론(Clorsulon)
1)시험법적용범위
축산물등에적용한다.
2)분석원리
검체중니트록시닐및클로
술론을아세토니트릴로추출- 194 -현행 개정안
<신설> 한후MgSO4및Primary
secondaryamine(PSA)를이용
하여정제하고액체크로마토그
래프-질량분석기로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석
기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매：액체크로마토그래프
용또는이와동등한것
나)물：3차증류수또는이와동등
한것
다)표준원액：니트록시닐,클
로술론표준품을정밀히
달아메탄올에녹여100
mg/L로하고이를영하
20℃에보관한다.사용시
표준품을실온에두어용
액의온도가실온과동일
해지면사용한다.
라)표준용액：표준원액을
DMSO에적당한농도로
희석하여사용하며,냉장고- 195 -현행 개정안
<신설> 에보관한다.
마)내부표준원액:살리실아마
이드표준품을정밀히달
아메탄올에녹여100
mg/L로한다.조제된표준
원액은냉동보관한다.
바)내부표준용액:내부표준원
액을DMSO로희석하여1
mg/L가되게한다.
사)맥일바인(MacIlvaine)완충
용액(pH2)：0.6M구연
산(citric acid
monohydrate)및0.3M제
이인산나트륨(disodium
hydrogenphosphate
dihydrate)물에녹인후HCl
로pH를조절한다.
아)기타시약：특급
5)시험용액의조제
가)추출
(1)조직(간,신장)
균질화한검체2g을50
mL원심분리관에담아- 196 -현행 개정안
<신설> 내부표준물질인살리실아
마이드표준용액을첨가
한다.15초동안혼합한
후염화나트륨1g을넣
고균질화한후물2mL
넣고1분간균질화한다.
여기에1%초산을포함
한아세토니트릴10mL
을넣고15분간강하게
균질화한후4,500rpm에
서10분간원심분리한후
상징액을취한다.
(2)조직(근육),알(卵),유(乳)
균질화한검체2g을50
mL원심분리관에담아
내부표준물질인살리실아
마이드표준용액을첨가
한다.15초동안혼합한
후염화나트륨1g을넣
고균질화한후맥일바인
완충용액2mL넣고1분
간균질화한다.여기에
아세토니트릴:메탄올(9- 197 -현행 개정안
<신설> :1)10mL을넣고15분
간강하게균질화한후
4,500rpm에서10분간원
심분리한후상징액을취
한다.
나)정제
상징액을MgSO4900mg,
PSA150mg포함한키트
또는이와동등한것을포
함한15mL원심분리관에
옮긴후30초간강하게균
질화한후4,500rpm에서
10분간원심분리한후상징
액을유리튜브에옮긴후
50℃,질소가스감압농축으
로건조한후남은잔사에
500μLDMSO로용해한
후여과하여시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼:C18(2.1×100
mm,1.8μm)또는이와- 198 -현행 개정안
<신설> 동등한것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상
(가)이동상A:20mM암
모늄포메이트수용액
(나)이동상B：메탄올
min A(%) B(%)
0 70 30
0.5 70 30
1 20 80
4 20 80
4.1 70 30
8 70 30
(4)유속:0.25mL/분
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization :
ESI(negative)
(2)Capillary:4,000V
(3)Nebulizer:45psi
(4)GasTemperature:350℃
(5)Gasflow:10L/min
(6)Collisionenergy- 199 -현행 개정안
<신설>
물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)*Collision
energy
(eV)
니트록시닐 289 127, 162 25,10
클로술론 378, 380 342, 344 3,6
내부표준물
질(살리실
아마이드 )212 92,64 25,40
다)표준품크로마토그램
니트록시닐
살리실아마이드클로술론
그림1.니트록시닐(4.2분),클로
술론(3.9분),살리실아마
이드(4.8분)표준품의
크로마토그램
라)정량한계(니트록시닐,클로
술론)
축산물:0.01mg/kg,유:- 200 -현행 개정안
<신설>
<신설>0.01mg/L
7)정량시험
시험용액및표준용액을각각
질량분석기에주입한다.이후,
각각에서얻은크로마토그램으
로부터머무름시간을비교하
여,내부표준물질살리실아마
이드의m/z92에대한니트록
시닐m/z127,클로술론m/z
342의면적비를각각구하고
검량선을작성하여시험용액
중각각의함량을구한다.
5.3.98톨페남산(Tolfenamicacid)
1)시험법적용범위
축산물(알은제외)에적용한
다.
2)분석원리
검체중의톨페남산을아세토
니트릴로추출하고,헥산으로
지방및불순물을제거한후
pH조절과에틸아세테이트로
액-액추출하여액체크로마토- 201 -현행 개정안
<신설> 그래프-자외부흡광검출기로분
석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광
검출기(HPLC-UVD)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프
용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:톨페남산표준
품을정밀히달아메탄올에
녹여100mg/L가되게한
다.
라)표준용액:표준원액을메탄올
에녹여적당한농도로혼합
희석한다.
마)기타시약:특급또는이와동
등한것
5)시험용액의조제
검체5g에아세토니트릴10
mL씩2회가한후20분간진
탕한다.4,000rpm에서10분- 202 -현행 개정안
<신설> 간원심분리한다음상징액을
취해헥산20mL를가하고
흔들어방치한다.하층을모
아50℃질소기류하에서건
고시킨후잔류물을에테르4
mL로재용해하여,10분간진
탕하고,2mMNaOH수용액
10mL(4mL,4mL,2mL씩
세번),NaCl수포화용액을
2mMNaOH수용액1mL당
75μL를가하여액-액추출
로20분간흔들어준후4,000
rpm에서10분간원심분리한
다.상층액인에테르를취하
지아니하고,아래수층을취
하고새튜브에담은후600
μL의1/50로희석한아세트산
용액을가하여약산성화시킨
후40mL의에틸아세테이트
(20mL,10mL,10mL씩세
번)를가하고액-액추출로
20분간흔들어준후4,000
rpm에서5분간원심분리한- 203 -현행 개정안
<신설> 다.상층액을취하여50℃질
소기류하에서건고시킨후
다시에틸아세테이트5mL(2
mL,2mL,1mL씩세번)에
용해하여50℃질소기류하
에서건고시킨다.잔류물을
메탄올500μL을가하여10분
간진탕하고,4,000rpm에서
2분간원심분리한후상징액
을0.45μm멤브레인필터로
여과하여시험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조
건
(1)칼럼：C18(4.6×250mm,
5μm)또는이와동등한
것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상:0.1%초산/아세
토니트릴(50/50,v/v)
(4)유속:1.0mL/min
(5)주입량:10μL
(6)UV검출기파장:218- 204 -현행 개정안
<신설> nm
나)표준품크로마토그램
그림1.톨페남산(12.6분)크로마
토그램
다)정량한계
축산물:0.01mg/kg,유:
0.01mg/L
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각
액체크로마토그래프에주입한
다.얻어진피크머무름시간
을비교하여톨페남산의피크
면적으로검량선을작성하고
시험용액중톨페남산함량을
구한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기로분석하였을때시험용액
중표준물질의m/z값은표준- 205 -현행 개정안
<신설> 용액중표준물질의m/z값과
일치하여야한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.0×150mm,
3μm)또는이와동등한
것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상A:0.2%초산암
모늄
(4)이동상B:아세토니트릴
min A(%) B(%)
0 80 20
1 80 20
12 0 100
13 0 100
14 80 20
17 80 20
(5)유속:0.3mL/min
(6)이온화방법:
ESI(negative)
(7)Capillarytemperature:
300℃
(8)Collisionenergy- 206 -현행 개정안
<신설>
<신설>물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
톨페남
산260 216, 260 16
5.3.99툴라스로마이신(Tulathromycin)
1)시험법적용범위
축산물(유,알은제외)에적용
한다.
2)분석원리
시료중의툴라스로마이신을
아세토니트릴로추출하고,개미
산으로재용해하여SPE(HLB)
카트리지로정제한후액체크
로마토그래프-질량분석기로분
석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-질량분석
기(LC-MS/MS)
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프
용또는이와동등한것- 207 -현행 개정안
<신설> 나)물:3차증류수또는이와동
등한것
다)표준원액:툴라스로마이신
표준품을정밀히달아메탄
올에녹여1,000mg/L이
되게한다.
라)표준용액:표준원액을메
탄올로희석하여사용한다.
마)내부표준물질표준원액:
아지스로마이신(Azithromycin)
표준품을정밀히달아메탄
올에녹여1,000mg/L이
되게한다.
바)내부표준물질용액:내부
표준물질표준원액을메탄
올로희석하여사용한다.
사)HLB(Hydrophilic
LipophilicBalance,3mL)
카트리지또는이와동등한
것
아)기타시약:특급또는이와동
등한것
5)시험용액의조제- 208 -현행 개정안
<신설> 가)추출
검체10g에내부표준물질
(아지스로마이신,5mg/L,)
1mL를가하고아세토니트
릴10mL를가하여5분간
균질화한다.4℃,3,500
rpm에서20분간원심분리하
고상징액을질소퍼지용튜
브에모은뒤,다시시료에
아세토니트릴10mL를넣고
30초간흔들어준다음5분
간균질화한다.4℃,3,500
rpm에서20분간원심분리하
고상징액을이전의상징액
과합한뒤,50℃질소기류
하에서건고한다.이를2%
개미산수용액3mL로재용
해하고헥산500μL를가하
여1분간균질화한뒤,4℃,
13,000rpm에서20분간원
심분리한후헥산층을제
거하여이액을추출액으로
한다.- 209 -현행 개정안
<신설> 나)정제
미리메탄올3mL과물3
mL로활성화시킨HLB카
트리지에추출액을흡착시키
고,2%개미산수용액3
mL로세척한후2%수산화
암모늄을함유한메탄올3
mL로용출시킨다.용출액은
50℃질소기류하에서건고
한후잔류물을2mL증류
수에녹인뒤1분간균질화
한다.이액을4℃,13,000
rpm에서20분간원심분리
한후0.45μm멤브레인필
터로여과하여시험용액으로
한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조건
(1)칼럼：C18(2.1×150mm,
5μm)또는이와동등한
것
(2)칼럼온도:30℃- 210 -현행 개정안
<신설> (3)이동상
(가)이동상A:0.1%개미
산을함유한물
(나)이동상B:0.1%개미
산을함유한아세토니
트릴
min A(%) B(%)
0 95 5
1.5 95 5
2 10 90
2.5 10 90
4 95 5
15 95 5
(4)유속:0.25mL/min
(5)주입량:5μL
나)질량분석기조건
(1)Ionization :
ESI(positive)
(2)Capillarytemperature:
350℃
(3)Collisiongas:Ar(아르
곤)
(4)Collisionenergy- 211 -현행 개정안
<신설>
<신설>물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
툴라스로마이신 577 116, 158 51,49
내부표준물질 (
아지스로마이신 )749 83,158 75,61
다)표준품크로마토그램
툴라스로마
이신
아지스로마
이신
그림1.툴라스로마이신(6.5분),
아지스로마이신(6.5분)
표준품의크로마토그램
라)정량한계:0.05mg/kg
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각
액체크로마토그래프에주입한
다.얻어진피크머무름시간
을비교하여,내부표준물질인- 212 -현행 개정안
<신설>
<신설>아지스로마이신의 피크면적비
에대한툴라스로마이신의 피
크면적비의면적비를구하고
검량선을작성하여시험용액
중툴라스로마이신의 함량을
구한다.
5.3.100시미아졸(Cymiazole)
1)시험법적용범위
벌꿀에적용한다.
2)분석원리
검체중의시미아졸을1%초
산으로추출하고,SPE(MCX)
카트리지로정제하여액체크로
마토그래프-자외부흡광검출기
로분석한다.
3)장치
액체크로마토그래프-자외부흡광
검출기
4)시약및시액
가)용매:액체크로마토그래프
용또는이와동등한것
나)물:3차증류수또는이와동- 213 -현행 개정안
<신설> 등한것
다)표준원액:시미아졸표준
품을정밀히달아아세토
니트릴에녹여1,000mg/L
가되게한다.
라)표준용액:표준원액을이동상
에녹여적당한농도로혼합
희석한다.
마)MCX(Mixed-mode
Cation-Exchange)카트
리지또는이와동등한것
바)기타시약:특급또는이와동
등한것
5)시험용액의조제
검체5g에1%초산15mL를
가하고10분간진탕한다.미리
메탄올3mL과1%초산3
mL로활성화시킨MCX카트
리지에추출액을흡착시키고,
메탄올3mL와1NHCl3mL
로세척한후5%수산화암모
늄을포함한메탄올3mL로
용출한다.용출액은50℃에서- 214 -현행 개정안
<신설> 질소농축한후잔류물은이동
상1mL에녹인후0.45μm
멤브레인필터로여과하여시
험용액으로한다.
6)시험조작
가)액체크로마토그래프측정조
건
(1)칼럼：C18(4.6×250mm,
5μm)또는이와동등한
것
(2)칼럼온도:30℃
(3)이동상:0.1%초산/아세
토니트릴(81/19,v/v)
(4)유속:1.0mL/min
(5)주입량:20μL
(6)UV검출기파장:264
nm
나)표준품크로마토그램
그림1.시미아졸(8.3분)표준품- 215 -현행 개정안
<신설> 의크로마토그램
다)정량한계:0.02mg/kg
7)정량시험
표준용액및시험용액을각각
액체크로마토그래프에주입한
다.얻어진피크머무름시간
을비교하여시미아졸의피크
면적으로검량선을작성하고
시험용액중시미아졸함량을
구한다.
8)확인시험
액체크로마토그래프-질량분석
기로분석하였을때시험용액
중표준물질의m/z값은표준
용액중표준물질의m/z값과
일치하여야한다.
가)액체크로마토그래프-질량
분석기의측정조건
(1)칼럼：C18(2.0×150mm,
3μm)또는이와동등한
것
(2)칼럼온도:40℃
(3)이동상A:0.2%초산암- 216 -현행 개정안
<신설> 모늄
(4)이동상B:아세토니트릴
min A(%) B(%)
0 80 20
1 80 20
8 10 90
9 10 90
10 80 20
15 80 20
(5)유속:0.3mL/min
(6)이온화방법:
ESI(positive)
(7)Capillarytemperature:
300℃
(8)Collisionenergy
물질Precursor
ion
(m/z)Fragment
ion
(m/z)Collision
energy
(eV)
시미아졸 219105, 144,
17130