GB ××××—××××  
 
食品安全国家标准  
食品营养强化剂   低聚半乳糖  
（征求意见 稿） 
 
201×-××-×× 发布  201×-××-×× 实施  中华人民共和国国家标准  
中 华 人 民 共 和 国 
国家卫生和计划生育委员 会  发布 
 
 GB ××××—××××  
1 食品安全国家标准  
食品营养强化剂   低聚半乳糖  
1 范围 
本标准适用于 以乳糖为原料， 经 环状芽孢杆菌 及GB 2760 批准使用的菌种 生产的β-半乳糖苷酶 催化水
解半乳糖苷键， 将乳糖水解成为半乳糖和葡萄糖，同时通过转移半乳糖苷的作用，将水解下来的半乳糖苷
转移到乳糖分子，生成的食品 营养强化剂 低聚半乳糖。  
2 结构式、分子式和相对分子质量  
2.1 结构式 
 
 
 
2.2 分子式 
（C6H11O5）n，n为2～8。 
2.3 相对分子质量  
300～2000（按 2007年国际相对原子质量 ） 
3 产品分类 
按形态分为：  
3.1 低聚半乳糖 粉 
低聚半乳糖液的直接干燥产品 。 
3.2 低聚半乳糖 液 
低聚半乳糖 的液体产品。 
4 技术要求  
4.1 感官要求： 应符合表 1的规定。  
 GB ××××—××××  
2 表1 感官要求  
4.2 理化指标： 应符合表 2的规定。  
表2 理化指标 
4.3 微生物指标： 应符合表 3的规定。  
表3 微生物指标  项     目 指    标 
检验方法  
粉末 液体 
色泽与状态 白色或微黄色粉末 淡黄色至黄色黏稠液体 取适量试样置于清洁、干燥的
白瓷盘或烧杯中，在自然光线
下，观察其色泽和状态，并嗅
（品）其味  气味 无异味 无异味 
滋味 味甜 味甜 
项     目 指    标 
检验方法  
粉末  液体  
低聚半乳糖 含量（以干基计 ）,w/% ≥ 57 57 附录 A中 A.2 
乳糖含量 （以干基计） ,w/% ≤ 23 23 附录 A中 A.3 
葡萄糖含量 （以干基计） ,w/% ≤ 22 22 附录 A中 A.4 
可溶性固形物含量 ,w/% ≥ — 73 附录 A中 A.5 
水分,w/% ≤ 5.0 — GB 5009.3 直接干燥法a  
硫酸灰分 ,w/% ≤ 0.3 0.3 附录 A中 A.6 
pH  — 2.8～5.5 附录 A中 A.7 
铅（以Pb计）/（mg/kg）  ≤ 0.5 0.5 GB 5009 .12 
a 取样量 1g，精确至 ±0.1mg；干燥温度和时间 分别为105 ℃± 2 ℃和3 h。 
注：商品化的 低聚半乳糖 产品应以符合本标准的 低聚半乳糖 为原料，可添加符合质量规格 标准要求的麦芽糊精、乳清蛋白粉
制成的产品。  
项     目 指    标 检验方法  
菌落总数 /（CFU  /g） ≤ 3000  GB 4789 .2 
大肠菌群[MPN/g（mL）] ≤ 3.0 GB 4789 .3 
霉菌 /（CFU  /g） ≤ 50 GB 4789 .15  
酵母菌 /（CFU  /g） ≤ 50 GB 4789 .15 
凝固酶阳性的葡萄球 菌（ 1g）  不得检出  SN/T 2154  
沙门氏菌   未检出 /25 g GB 4789 .4 GB ××××—××××  
3 附 录 A 
检验方法 
A.1 一般规定  
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 -2008中规定的三级水。
试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按 GB/T 601、
GB/T 602、GB/T 603的规定制备。 试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。  
A.2 低聚半乳糖 含量的测定  
A.2.1 高效液相色谱双柱法  
A.2.1.1 方法提要  
试样用水提取后，分别利 用钙型阳离子交换 柱、氨基柱 分离，高效液相色谱 -示差检测器测定，面积
归一化法进行定量。 
A.2.1.2 试剂和材料  
    除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水 。 
A.2.1.2.1  乙腈：色谱纯。 
A.2.1.2.2  半乳糖、葡萄糖、乳 糖、低聚半乳糖 三糖、低聚半乳糖 四糖、低聚半乳糖 五糖、低聚半乳糖
六糖、低聚半乳糖七糖、低聚半乳糖八糖 混合溶液 (20 mg/mL)。 
分别称取适量的半乳糖、葡萄糖、乳 糖、低聚半乳糖 三糖、低聚半乳糖 四糖、低聚半乳糖 五糖、低聚
半乳糖六糖 标样，用适量的水溶解 ，配制成 20 mg/mL的各标准溶液 。 
A.2.1.2.3  半乳糖二糖 、 乳糖、异乳糖混合溶液 （20 mg/mL）。 
称取适量的半乳糖二糖 、乳糖、异乳糖标 样，用适量的水溶解 ，配制成 20 mg/mL的各标准溶液 。 
A.2.1.3 仪器和设备  
A.2.1.3.1  高效液相色谱仪 ，带示差检测器。 
A.2.1.3.2  超声清洗器 。 
A.2.1.4 分析步骤  
A.2.1.4.1  试样液的制备  
称取试样 1.0 g，加适量的水溶解， 于超声波振荡器中振荡 10 min，用水定容至 100 mL刻度，混匀，
0.2 μm微孔滤膜过滤 ，用于钙型阳离子交换柱 测定；称取试样 5.0 g，加适量的水溶解， 于超声波振荡器中
振荡 10 min，用水定容至 100 mL刻度，混匀， 0.2 μm微孔滤膜过滤 ，用于氨基柱测定。 
A.2.1.4.2  参考色谱条件  
A.2.1.4.2.1  钙型阳离子交 换柱参考色谱条件  
A.2.1.4.2.1.1  钙型阳离子交换柱 （6.5 mm×300 mm, 5 µm）；或具有同等性能的色谱柱 。 
A.2.1.4.2.1.2  检测器温度： 40℃。 
A.2.1.4.2.1.3  流动相流速： 0.5 mL/min。 
A.2.1.4.2.1.4  柱温： 80℃。GB ××××—××××  
4  
A.2.1.4.2.1.5  进样量： 20 µL。 
A.2.1.4.2.1.6  流动相：高纯 水。 
A.2.1.4.2.2  氨基柱参考色谱条件  
A.2.1.4.2.2.1  氨基柱（ 250 mm×4.6 mm，5 µm）；或具有同等性能的色谱柱 。 
A.2.1.4.2.2.2  流动相：乙腈：水＝ 70：30。 
A.2.1.4.2.2.3  流动相流速： 1.0 mL/min。 
A.2.1.4.2.2.4  检测器温度： 40℃。 
A.2.1.4.2.2.5  柱温： 35℃。 
A.2.1.4.2.2.6  进样量： 20 µL。 
A.2.1.5 定性测定  
A.2.1.5.1  按照钙型阳离子交换柱 参考色谱条件（ A.2.1.4.2.1）稳定好高效液相色谱，将半乳糖、葡萄糖、
乳糖、低聚半乳糖 三糖、低聚半乳糖 四糖、低聚半乳糖 五糖、低聚半乳糖六糖 混合标准溶液（ A.2.1.2.2），
注入高效液相色谱仪中， 记录不同聚合度糖的保留时间，与待测样品中组分的保留时间进行定性 ，面积归
一化法测定各组分相对百分含量， 定性色谱图参见附录 B。 
A.2.1.5.2  按照氨基柱参考色谱条件 （A.2.1.4.2.2）稳定好高效液相色谱，将 半乳糖二糖 、乳糖、异乳糖
混合标准溶液（ A.2.1.2.3）注入高效液相色谱仪中， 面积归一化法测定各组分相对百分含量， 定性色谱图
参见附录 B。 
A.2.1.6 结果计算    
A.2.1.6.1  钙型阳离子交换柱 ，试样中组分 i占总糖的相对百分比含量 按照式（A.1）计算： 
100i
i
iADPA

 …………………………………… （A.1） 
式中：   
DP i  ——  试样中组分 i占总糖的百分含量 ，%； 
Ai  ——  试样中组分 i的峰面积；  
∑Ai  ——  试样中所有各组分的峰面积的总和。 
A.2.1.6.2  氨基柱， 试样中乳糖在总二糖中 的百分比含量 按照公式（ A.2）计算。 
    
100AXA A A乳
乳
乳 半异  …………………………………… （A.2） 
式中：  
X乳 ——  试样中的乳糖在总二糖中的百分含量，%； 
A半 ——  试样中的半乳二糖 的峰面积 ； 
A异 ——  试样中的异乳糖的峰面积 ； 
A乳 ——  试样中的乳糖的峰面积 。 
A.2.1.6.3  试样中低聚二糖（含二糖）以上组分占 总糖中的百分比 含量按照公式 （A.3）计算。 
Gn
=100-
DP半- 
DP葡-
X乳×
DP2 …………………………………… （A.3） 
式中： 
Gn —— 试样中的低聚二糖（含二糖）以上组分占 总糖中的百分含量 (占干物质 )，%； 
DP半 —— 试样中的半乳糖在总糖中的 百分含量， %； 
DP葡 —— 试样中的葡萄糖 在总糖中的 百分含量， %； 
DP 2 —— 总二糖（半乳糖二糖 、乳糖、 异乳糖）在总糖中的 百分含量，%。 
A.2.1.7 精密度 
在重复性测定条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过其算术平均值的 5%。 GB ××××—××××  
5 A.2.2 高效离子交换色谱 法（仲裁法）  
A.2.2.1 方法提要  
用磷酸盐缓冲液提取 试样中游离的 低聚半乳 糖和乳糖 ，采用半乳糖苷酶 将提取液中 低聚半乳糖 和乳糖
酶解，将提取的 初始溶液 和酶处理过的溶液 分别用高效离子色谱仪 测定。第一步测定初始溶液中游离的半
乳糖和乳糖，第二步测定从 低聚半乳糖 和乳糖中释放出的半乳糖总量。 利用乳糖和半乳糖的 含量计算试样
中低聚半乳糖 的含量。 
A.2.2.2 试剂和材料 
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水 。  
A.2.2.2.1  磷酸二氢钾 。 
A.2.2.2.2  三水磷酸氢二钾 。 
A.2.2.2.3  浓盐酸。 
A.2.2.2.4  氢氧化钠 。 
A.2.2.2.5  无水醋酸钠。 
A.2.2.2.6  乙腈：色谱级。  
A.2.2.2.7  半乳糖苷酶 ：活性约 50000  U/g，来源于米曲霉的 。 
A.2.2.2.8  无水半乳糖 ：纯度≥ 99%。 
A.2.2.2.9  乳糖：纯度≥ 99%。  
A.2.2.2.10  磷酸盐缓冲液 （0.2M，pH6.0） 
分别称取 22.0 g磷酸二氢钾和 6.0 g三水磷酸氢二钾 ，于适量的水中溶解，用水稀释至 1 L，120℃高压灭
菌器中灭菌 30 min，备用。 
A.2.2.2.11  盐酸溶液（ 0.1mol/L） 
    吸取 0.83 mL浓HCl加水稀释至 100 mL。 
A.2.2.2.12  氢氧化钠溶液 （50%，碳酸钠 杂质含量小于 1%） 
     称取 100 g氢氧化钠 ，加100 mL水，搅拌至完全溶解， 静置至碳酸钠沉淀，上层液体澄清（约需 10天） 。
不用时密封。  
A.2.2.2.13  氢氧化钠溶液（ 0.1M） 
取5.4 mL氢氧化钠溶液（ A.2.2. 2.12） ，加无二氧化碳 的水定容至 100 mL。 
A.2.2.2.14  β-半乳糖苷酶溶液 （2000  U/mL） 
     取适量半乳糖苷酶 （A.2.2.2.7）混悬于磷酸盐缓冲液中，制成最终活 力单位为2000 U/mL 的酶溶液，使
用前充分振摇混悬液 ，酶混悬液制备后 8 h内使用。  
A.2.2.2.15  乙腈溶液（ 20%，体积比） 
取200 mL乙腈（ A.2.2.2.6）加水稀释 定容至1 L。 
A.2.2.2.16  氢氧化钠溶液 （250 mmol/L） 
     取13.9 mL氢氧化钠溶液 （A.2.2.2.12），转移至 1 L容量瓶中， 去离子水定容至刻度 ，使用前脱气 30 min。 
A.2.2.2.17  乙酸钠溶液 （1 mol/L） 
     称取 82.04 g无水乙酸钠，用适量的水溶解并转移至 1 L容量瓶中， 水定容至刻度 ，0.2 μm滤膜过滤。使
用前脱气 30 min。 
A.2.2.2.18  半乳糖标准储备液（1000  mg/mL） 
取一定量 半乳糖在 105℃烘箱中干燥 4 h，准确称取100 mg干燥后的 半乳糖，加水溶解并转移 至100 mL
容量瓶中，用水稀释至刻度。   
A.2.2.2.19  乳糖标准储备液（ 950mg/mL） 
取一定量 乳糖在 105℃烘箱中干燥 4 h。准确称取 100 mg干燥后的 乳糖，加水溶解并转移 至100 mL容量
瓶中，用水稀释至刻度 。 
注：上述烘干后的乳糖 乘以 0.95即为无水乳糖重量。  GB ××××—××××  
6 A.2.2.2.20  葡萄糖标准储备液（ 1000 mg/L） 
称取一定量葡萄 糖在 105℃烘箱中干燥 4 h，准确称取100 mg干燥后的 葡萄糖，加水溶解并转移 至100 
mL容量瓶中，用水稀释至刻度。  
A.2.2.2.21  半乳糖、乳糖、葡萄糖混合工作液（ 100 mg/L） 
分别移取半乳糖、乳糖、葡萄糖的标准储备液（ 1000 mg/L）各10.0  mL，于 100 mL容量瓶中，用水稀
释至刻度。  
A.2.2.3 仪器和设备 
A.2.2.3.1  高效离子色谱仪：配备 脉冲安培检测器（ PAD）。 
A.2.2.3.2  色谱柱： 阴离子交换色谱柱（250 mm×3 mm） ，保护柱（ 50 mm×3 mm）。 
A.2.2.3.3  pH计。 
A.2.2.3.4  分析天平：精度 0.1 mg。 
A.2.2.3.5  水浴锅振荡器。  
A.2.2.3.6  移液器： 100 μL及1000  μL 
A.2.2.3.7  离心机：在11000× g操作。  
A.2.2.3.8  离心管： 2.0 mL。  
A.2.2.3.9  超声清洗机 ：带有脱气功能 。 
A.2.2.3.10  涡旋混合器 。 
A.2.2.4 色谱参考条件  
A.2.2.4.1  柱温： 30℃；  
A.2.2.4.2  流动相：洗脱梯度见表 A.1； 
表A.1梯度洗脱程序表  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
A.2.2.4.3  流动相流 速：0.4 mL/min； 
A.2.2.4.4  进样量： 20 μL。 
A.2.2.5 分析步骤  
A.2.2.5.1  标准溶液的制备  
 分别量取半乳糖、乳糖和葡萄糖混合 标准工作液（A.2.2.2.21）0.5 mL、1.0mL、2.0 mL、 时间（ min） A%氢氧化钠溶液
（250 mmol /L） B%醋酸钠溶液  
（1 mol/L） C%水 
0.00 8.0 0.0 92.0 
10.00 8.0 0.0 92.0 
12.00 6.0 0.0 94.0 
25.00 6.0 0.0 94.0 
26.00 50.0 50.0 0.0 
36.00 50.0 50.0 0.0 
36.50 50.0 0.0 50.0 
42.00 50.0 0.0 50.0 
43.00 8.0 0.0 92.0 
48.00 8.0 0.0 92.0 GB ××××—××××  
7 5.0mL、10.0mL置于 100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度 ，制成系列混合 标准工作溶液 ，见表 A.2。按照色谱
条件A.2.2.4进行测定，以各组分的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。  
表A.2  半乳糖、乳糖和葡萄糖 标准溶液  
半乳糖（μg/mL） 乳糖（μg/mL） 葡萄糖（μg/mL） 
0.50 0.475  0.50 
1.00 0.95 1.00 
2.00 1.90 2.00 
5.00 4.95 5.00 
10.00 9.50 10.00  
 
A.2.2.5.2  试样液的制备  
准确称取 取0.1 g试样（精确至 0.001 g），用适量的磷酸盐缓冲溶液 （A.2.2.2.10）溶解并转移到 100 mL
容量瓶中，摇匀， 盐酸溶液（ A.2.2.2.11）和用氢氧化钠 溶液（ A.2.2.2.13）调节 pH至5.7~6.3之间，然后
用磷酸盐缓冲溶液 （A.2.2.2.10）定容至刻度，混匀 。 
A.2.2.5.3  试样液的处理  
A.2.2.5.3.1  乳糖和总 低聚半乳糖 的酶解试样的 制备 
吸取制备的试样液10 mL（A.2.2.5.2），移入100 mL容量瓶中，标记为 A1，吸取 1 mL半乳糖苷酶溶液
（A.2.2.2.14），放入 A1中，用铝箔纸密闭，轻轻摇匀。  
A.2.2.5.3.2  乳糖和半乳糖的 初始试样溶液制备  
吸取 1 mL半乳糖苷酶溶液 （A.2.2.2.14 ），加入 100 mL容量瓶中，标记为 A0，在 100℃水浴加热 10 mi
n使酶失活，放至室温，再吸取 制备的试样液10 mL（A.2.2.5.2）放入 A0中，用铝箔纸密闭，轻轻摇匀。  
A.2.2.5.3.3  试样酶解 
将含有活性酶 A1和失活酶 A0的2个100 mL容量瓶在 (60±2)℃水浴中持续温和振摇 30 min（从混合物温
度达到 60℃开始计算加热时间 ，振摇过程中避免形成水沫或空气泡沫） ，然后将 A0、A1两个处理溶液，用
冰浴冷却 至室温。  
A.2.2.5.3.4  向A0、A1两个100 mL容量瓶中，各加入 20%乙腈溶液 （A.2.2.2.15 ）5 mL，用水定容 ，混
匀。分别取适量上述处理后溶液 至离心管中， 10000 ×g离心 10 min，上层水相用 0.2 μm滤膜过滤 。 
A.2.2.5.4  试样测定 
分别吸取离心后的 试样溶液适当稀释后 ，稀释倍数为 D，按照色谱条件（ A.2.2.4）进样测定样液中的
半乳糖、乳糖 含量，根据标准品的保留时间 进行试样中各糖组分的色谱峰 的定性；根据标准工作曲线计算
试样中的半乳糖、乳糖 含量，试样及标准品的色谱图见附录 C。 
A.2.2.6 结果计算  
根据色谱分析结果，按照下列公式计算初始 试样 A0中游离的半乳糖、乳糖含量， 酶解产物 A1中总半
乳糖含量，最终计算出 低聚半乳糖 的含量。  
A.2.2.6.1  样液A0中游离半乳糖 的计算 
试样 A0中游离半乳糖 含量以半乳糖的质量分数 w1计（占干物质 ），数值以 %表示，按式（ A.4）计算： 
10010
36
2 1 1
1 
VmDVVAw
 ………………… ……………… （A.4） 
    式中： GB ××××—××××  
8 w1 —— 试样中游离半乳糖 的含量，单位为（ g/100g） 
    A1 —— 标准曲线上查得的半乳糖的含量 ，单位为微克每毫升（μg/mL）； 
    V1 —— 试样制备定容体积 （mL）； 
    V2 —— 试样酶解 处理后定容体积 （mL）； 
    D —— 样液 A0的稀释倍数 ； 
    m —— 试样质量，单位为克（ g）； 
    V3 —— 试样酶解时取试样制备的 体积（mL）。 
A.2.2.6.2  样液A0中游离乳糖 的计算 
试样 A0中游离乳糖含量以乳糖的质量分数 w2计（占干物质 ），数值以 %表示，按式（ A.5）计算：  
10010
36
2 1 2
2 
VmDVVAw
 ……………… ………… ……（A.5） 
式中： 
    w2 —— 试样中游离乳糖的含量，单位为（ g/100g）； 
    A2 —— 标准曲线上查得的乳糖的浓度， 单位为微克每毫升（ μg/mL）； 
    V1 —— 试样制备定容体积（ mL）； 
    V2 —— 试样酶解处理后定容体积（ mL）； 
    D —— 稀释倍数；  
    m —— 试样质量，单位为克（ g）； 
    V3 —— 试样酶解时取试样制备的体积（ mL）。 
A.2.2.6.3  计算游离的乳糖 酶解释放的半乳糖含量  
试样 A0中游离的乳糖水解释放的半乳 糖以半乳糖的质量分数 w3计（占干物质 ），数值以 %表示，按式
（A.6）计算：  
9.1/2 3w w
 ………………… ……………… （A.6） 
  式中： 
w3 —— 游离的乳糖水解释放的半乳糖 含量，单位为（ g/100g）； 
 1.9 —— 折算系数。  
A.2.2.6.4  样液A1中总半乳糖的计算  
试样 A1中总半乳糖含量以半乳糖的质量分数 w4计（占干物质 ），数值以 %表示，按式（ A.7）计算： 
10010
36
2 1 3
4 
VmDVVAw
 ……………… ……………… （A.7） 
式中： 
w4 —— 试样中总半乳糖 含量含量，单位为（ g/100g）； 
    A3 —— 标准曲线上查得的 A1液中半乳糖的浓度， 单位为微克每毫升（ μg/mL）； 
    V1 —— 试样制备定容体积（ mL）； 
    V2 —— 试样酶解处理后定容体积（ mL）； 
    D —— 稀释倍数；  
    m —— 试样质量，单位为克（ g）； 
    V3 —— 试样酶解时取试样制备的体积（ mL）。 
A.2.2.6.5  样液A1中低聚半乳糖水解释放半乳糖 的计算 
样液A1中低聚半乳糖水解释放半乳糖 的含量以半乳糖的质量分数 w5计（占干物质 ），数值以 %表示，
按式（ A.8）计算： GB ××××—××××  
9 
3 1 4 5 ww w w  ………………… ……………… （A.8） 
  式中： 
w5 —— 样液A1中低聚半乳糖水解释放半乳糖 的含量（ g/100g）。 
A.2.2.6.6  试样中低聚半乳糖含量 的计算   
试样中低聚半乳糖 的质量分数 w6计（占干物质 ），数值以 %表示，按式（ A.9）计算： 
kw w5 6
 ………………… ……………… （A.9） 
式中： 
w6 ——  试样中低聚半乳糖的含量 ，单位为（ g/100g）； 
k ——低聚半乳糖 与酶解释放的半乳糖换算系数，
k 的推荐值为 1.3559，也可按照附录 D进行测定。  
A.2.2.7 精密度  
在重复性测定条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过其算术平均值的 5%。 
A.3 乳糖含量的测定   
A.3.1 高效液相色谱双柱法  
A.3.1.1 分析步骤  
       同A.2.1.4， 
A.3.1.2 结果计算  
    试样中乳糖的质量分数 W乳计（占干物质），数值以 %表示，按式（ A.10）计算： 
                                    W乳=
X乳×
DP2 ……………………………………  （A.10） 
W乳 ——  试样中的乳糖的含量， %； 
X乳 ——  试样中的乳糖在总二糖中的百分含量， %； 
DP 2 —— 总二糖（半乳糖二糖 、乳糖、 异乳糖）在总糖中的 百分含量， %。 
A.3.1.3 精密度  
在重复性测定条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过其算术平均值的 5%。 
A.3.2 高效离子交换色谱法  
A.3.2.1 分析步骤  
    吸取制备的试样 液10mL（A.2.2.5.2 ），移入100mL容量瓶中 ，加水定容至 100mL混匀，溶液过 0.22µm 
滤膜过滤， 适当稀释后进离子色谱仪测定 ，稀释倍数为 D4。 
A.3.2.2 结果计算  
     乳糖含量以乳糖的质量分数 w乳计（占干物质 ） ，数值以 %表示，按式（ A.11）计算：  
1001010w6
1 2
mDVA
乳
 ……………… ………… ……（A.11） 
式中： 
    W乳—— 试样中乳糖的含量，单位为（ g/100g）； 
    A2 —— 标准曲线上查得的 乳糖的浓度， 单位为微克每毫升（ μg/mL）； 
    V1 —— 试样制备定容体积（ mL）； 
    D —— 稀释倍数；  
    m —— 试样质量，单位为克（ g）； GB ××××—××××  
10 A.3.2.3 精密度  
在重复性测定条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过其算术平均值的 5%。 
A.4 葡萄糖含量的测定  
A.4.1 高效液相色谱双柱法  
A.4.1.1 分析步骤  
     同A.2.1.4。 
A.4.1.2 结果计算  
     同A.2.1.6.1。 
A.4.2 高效离子交换色谱法  
A.4.2.1 分析步骤  
     吸取制备的试样 液10 mL（A.2.2.5.2 ），移入100 mL容量瓶中 ，加水定容至  100mL 混匀，溶液过  0.
22 um 滤膜过滤， 适当稀释后进离子色谱仪测定。  
A.4.2.2 结果计算  
 葡萄糖含量以葡萄糖的质量分数 w葡计（占干物质 ），数值以 %表示，按式（ A.12）计算：  
1001010w6
1 2
葡 
mDVA
 ……………… ………… ……（A.12） 
式中： 
    w葡—— 试样中葡萄糖的含量，单位为（ g/100g）； 
    A2 —— 标准曲线上查得的 葡萄糖的浓度， 单位为微克每毫升（ μg/mL）； 
   V1 —— 试样制备定容体积（ mL）； 
   D —— 稀释倍数；  
   m —— 试样质量，单位为克（ g）； 
A.4.2.3 精密度  
在重复性测定条件下 获得的两次独立测定结果的绝对差值不超 过其算术平均值的 5%。 
A.5 可溶性固形物含量 的测定 
A.5.1 仪器和设备 
A.5.1.1 手持糖量计  
A.5.2 分析步骤  
A.5.2.1 仪器校正  
分开两面棱镜，用洁净 玻璃棒取 2滴重蒸蒸馏水 于固定的棱镜面上，立即闭合棱镜，停留几秒钟，使
试样达到棱镜温度，以 重蒸蒸馏水 在20℃，相当于固形物含量为零，对准光源，观察明暗分界线。若明暗
分界线不在零点，调节糖量计的调节螺母，直至明暗分界线与零点重合。  
A.5.2.2 测定 
清洁棱镜面并保持干燥，用玻璃棒取少量 试样于固定的棱镜面上，立即闭合棱镜，停留几秒钟，使 试
样达到棱镜温度。从标尺上读取固形物质量分数，再重复检测一次，每个 试样至少测定二次，取算术平均
值报告其结果。  
A.6 硫酸灰分的测定  GB ××××—××××  
11 A.6.1 仪器和设备  
高温炉。 
A.6.2 试剂和材料  
硫酸。 
A.6.3 分析步骤  
称取试样 1 g（精确至0.0001  g），放入 已灼烧至恒重的瓷坩埚中，在电炉上缓缓灼烧 至完全炭化，冷
却至室温。加入 0.5 mL硫酸使湿润，低温加热至硫酸蒸汽出尽。然后移入高温炉中 800 ℃± 25 ℃灼烧至
恒重。 
A.6.4 结果计算 
     灼烧残渣 以质量分数 w8计，数值以 %表示，按 公式（A.13）计算： 
%100
6 46 5
8 m mm mw
 ………………………………… (A.13) 
式中： 
    w8 ——  试样中的硫酸灰分 的质量分数，数值以 %表示； 
     m5 —— 灼烧后瓷坩埚与残渣质量， 单位为克（ g）； 
     m6 ——  空坩埚质量， 单位为克（ g）； 
     m4 ——  试样与空坩埚质量 ，单位为克（ g）。 
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值 与
算术平均值的 比值不大于 1%。 
A.7 pH的测定 
A.7.1 仪器 
A.7.1.1 酸度计：精度 0.01pH，备有玻璃电极和甘汞电极（或复合电极） 。  
A.7.2 分析步骤  
按仪器使用说明书调试和校正酸度计。  
用新煮沸冷却的中性蒸馏水配制 30%的低聚半乳糖液 待测液。然后，用水冲洗电极探头，用滤纸轻轻
吸干，将电极插入 待测样液 中，调节温度调节器，使仪器指示温度与溶液温度相 同，稳定后读数。  
所得结果表示至一位小数。  GB ××××—××××  
12 附 录 B 
（资料性附录）  
双柱法测定低聚半乳糖的谱图  
 
 
    图 B.1钙型阳离子交换柱 测定低聚半乳糖 的色谱图  
  
  
 
图 B.2 氨基柱测定 低聚半乳糖 的色谱图  
 
 
 
 
 
 
 GB ××××—××××  
13 附 录 C 
（资料性附录）  
高效离子交换色谱法 测定低聚半乳糖的谱图  
 
图C.1  高效离子交换色谱法测定 半乳糖、葡萄糖和乳糖 的色谱图  
 
图C.2  高效离子交换色谱法测定样品酶解的色谱图  
 
图C.3  高效离子交换色谱法测定灭活样品的色谱图  
 GB ××××—××××  
14 附 录 D 
（资料性附录）  
低聚半乳糖 中半乳糖平均分子数测定方法  
D.1 方法提要  
试样用水提取后，分别利用 钙型阳离子交换 柱、氨基柱 分离，高效液相色谱 -示差检测器测定，面积归
一化法进行定量测定 ，计算低聚半乳糖 中半乳糖 平均分子数，然后按照公式计算 k值。 
D.2 试剂和材料  
同A.2.1.2。 
D.3 仪器和设备  
同A.2.1.3。 
D.4 分析步骤  
同A.2.1.4。 
D.5 参考色谱条件  
同A.2.1. 4.2。 
D.6 定性测定  
同A.2.1.6。 
D.7 试样测定 
同A.2.2.5.4。 
D.8 结果计算   
D.8.1 钙型阳离子交换柱 测定组分的计算  
试样中组分 i占总糖的相对百分比按照式（ D.1）计算。  
100i
i
iADPA

 ……………… ………………………… （D.1） 
 式中：   
DP i ——  试样中组分
i占总糖的百分含量， %； 
 Ai  ——  试样中组分
i的峰面积； 
∑Ai ——  试样中所有各组分的峰面积的总和。  
D.8.2 氨基柱测定组分计算  GB ××××—××××  
15 试样中低聚二糖 在总二糖中的百分比含量 按照式（D.2）计算。 
22'AADP DPA A A半异
乳 半异
 ………………………………… （D.2） 
    式中：  
DP′2 —— 聚合度为 2的低聚二糖在总糖中的百分比含量 ； 
A半 —— 半乳二糖在总糖中的百分比含量；  
A异 —— 异乳糖在总糖中的百分比含量；  
A乳 —— 乳糖在总糖中的百分比含量；  
DP 2 —— 总二糖（ 半乳糖二糖 、乳糖、 异乳糖）在总糖中的百分比含量。  
D.8.3 低聚半乳糖 中半乳糖 平均分子数计算 
根据式（ D.1）, 式（D.2）计算的各组分占总低聚半乳糖的百分 含量和组分的聚合度， 按式（D.3）
计算低聚半乳糖 的平均聚合度。 
             
ii
DP DP DPm DP DP DPm....)...3 ()2 (
3 23 2 ………………………………… （D.3） 
式中：  
m
——  低聚半乳糖 的平均聚合度；  
 DP 1 ——  组分 i的百分比含量， %； 
    m ——  组分 i的聚合度 ,其中
m =2~8。 
根据式（D.4）计算低聚半乳糖 中半乳糖 平均分子数。 
                       n= 
m- 1…………………… ………………… ………………………… （D.4） 
式中：  
m
——  低聚半乳糖 中平均聚合度；  
n——低聚半乳糖 中半乳糖 平均分子数； 
D.8.4 低聚半乳糖 与酶解释放的半乳糖换算系数（
k ）的计算 
低聚半乳糖 与酶解释放的半乳糖换算系数 k值按式（D.4）计算：  
  
nnk180162 180 ……………………… …………… ……………… （D.5） 
k
——低聚半乳糖 与酶解释放的半乳糖换算系数  
n——低聚半乳糖 中半乳糖 平均分子数。 
 
 
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