Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
SEGUNDA SECCION  
PODER EJECUTIVO  
SECRETARIA DE SALUD  
PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY -NOM -244-SSA1 -2016, Para evaluar la eficiencia en reducción 
bacteriana en equipos y sustancias germicidas para tratamiento doméstico de agua. Requisitos sanitarios.  
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. - Secretaría de Salud.  
JULIO SALVADOR SÁNCHEZ Y TÉPOZ , Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos 
Sanitarios y Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalizaci ón de Regulación y Fomento Sanitario, 
con fundamento en lo dispuesto por los artículos 39, de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 
4, de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 3o., fracción XXIV, 13, apartado A, fracciones I y II,  17 
bis, fracción III, 118, fracción II, 119, fracción II, 201, 210 y 214, de la Ley General de Salud; 38, fracción II, 40, 
fracciones I, II, XI y XII, 43 y 47, fracción I, de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 28 y 33, del 
Reglamento de la L ey Federal sobre Metrología y Normalización; 23, 167, fracción XI, 197, 214, fracciones IV 
y V, 224, 225, 226 y 227, del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de 
Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios; 3, fracc iones I, incisos n), o) y s), V, VI y XIII, así como 
10, fracciones IV y VIII, del Reglamento de la Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios, 
he tenido a bien expedir y ordenar la publicación en el Diario Oficial de la Federación del  
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY -NOM -244-SSA1 -2016, PARA EVALUAR LA 
EFICIENCIA EN REDUCCIÓN BACTERIANA EN EQUIPOS Y SUSTANCIAS GERMICIDAS PARA 
TRATAMIENTO DOMÉSTICO DE AGUA. REQUISITOS SANITARIOS  
El presente Proyecto se publica a efecto de que los in teresados, dentro de los 60 días naturales siguientes 
al de su publicación en el Diario Oficial de la Federación, presenten sus comentarios por escrito, en medio 
magnético, en idioma español y con el sustento técnico correspondiente, ante el Comité Consult ivo Nacional 
de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sitio en Oklahoma número 14, planta baja, colonia 
Nápoles, código postal 03810, México, Ciudad de México, teléfono 50805200, extensión 1333, correo 
electrónico rfs@cofepris.gob.mx.  
Durante el  plazo mencionado y de conformidad con lo dispuesto en los artículos 45 y 47, fracción I, de la 
Ley Federal sobre Metrología y Normalización, los documentos que sirvieron de base para la elaboración del 
presente Proyecto y la Manifestación de Impacto Regul atorio, estarán a disposición del público para su 
consulta en el domicilio del mencionado Comité.  
PREFACIO  
En la elaboración del presente Proyecto de Norma participaron las instituciones siguientes:  
SECRETARÍA DE SALUD  
Comisión Federal para la Protección c ontra Riesgos Sanitarios  
SECRETARÍA DE EDUCACIÓN PÚBLICA  
Instituto Nacional de la Infraestructura Física Educativa  
SECRETARÍA DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES  
COMISIÓN NACIONAL DEL AGUA  
Subdirección General de Agua Potable, Drenaje y Saneamiento  
INST ITUTO MEXICANO DE TECNOLOGÍA DEL AGUA  
Coordinación de Tratamiento y Calidad del Agua, Subcoordinación de Calidad del Agua.  
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA  
Unidad Iztapalapa -Ciencias Biológicas y de la Salud  
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO  
Instit uto de Ingeniería  
SISTEMA DE AGUAS DE LA CIUDAD DE MÉXICO  
Judicatura de Investigación Tecnológica       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
LABORATORIOS ABC, QUÍMICA, INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS, S.A. DE C.V.  
LABORATORIO FERMI, S.A. DE C.V.  
CONFEDERACIÓN PATRONAL DE LA REPÚBLICA MEXICANA  
ASOCIACIÓN D E DISTRIBUIDORES DE INSTRUMENTOS PARA USO CIENTÍFICO Y MATERIAL PARA 
LABORATORIO A.C.  
LABORATORIO ANALÍTICO ESPECIALIZADO, S.A. DE C.V.  
SERVICIOS ESPECIALIZADOS Y PRODUCTOS PARA TRATAMIENTOS DE AGUAS, S.A. DE C.V.  
ANÁLISIS & RESEARCH LAB., S.A. DE C.V.  
PRECISIÓN ANALÍTICA INTEGRAL, S.A. DE C.V.  
LABORATORIOS DE ESPECIALIDADES INMUNOLÓGICAS, S.A. DE C.V.  
ÍNDICE  
0. Introducción  
1. Objetivo  
2. Campo de aplicación  
3. Referencias normativas  
4. Términos y definiciones  
5. Símbolos y términos abreviados  
6. Especific aciones  
7. Evaluación de la conformidad  
8. Concordancia con Normas Internacionales y Mexicanas  
9. Bibliografía  
10. Observancia de la Norma  
11. Vigencia  
12. Apéndices  
APÉNDICE A NORMATIVO  
Método de prueba para evaluar la Eficiencia en Reducción Bacteriana e n equipos y sustancias Germicidas 
para el tratamiento doméstico de agua.  
APÉNDICE B INFORMATIVO  
Determinación de organismos Coliformes totales y E scherichia coli.  Método del sustrato cromogénico.  
APÉNDICE C INFORMATIVO  
Determinación de bacterias Coliformes  totales y Coliformes fecales. Método de filtración por membrana.  
APÉNDICE D INFORMATIVO  
Parámetros de riesgo y su evaluación para los materiales que se utilizan en la fabricación de equipos para 
tratamiento doméstico de agua.  
APÉNDICE E INFORMATIVO  
Criter ios para determinar la estabilidad de las sustancias Germicidas.  
APÉNDICE F INFORMATIVO  
Método para la determinación de colifagos.  
APÉNDICE G INFORMATIVO  
Montaje para la evaluación de equipos intradomiciliares o domésticos en la remoción de arsénico en Agu a 
para uso y consumo humano.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
0. Introducción  
El objetivo de los programas de abastecimiento de Agua para uso y consumo humano, es asegurar que 
toda persona tenga acceso, disposición y saneamiento de agua para consumo personal y doméstico en forma 
suficient e, salubre, aceptable y asequible. En México, se continúa este esfuerzo; sin embargo, no se ha 
alcanzado la cobertura total, por lo que un cierto número de usuarios recurre a fuentes alternativas y métodos 
domésticos para subsanar deficiencias de la calida d del Agua para uso o consumo humano.  
Los métodos domésticos para la potabilización de agua de consumo humano, consisten en el uso de 
equipos para tratamiento y aplicación de sustancias Germicidas orientados fundamentalmente al aspecto 
bacteriológico, cons iderado como de riesgo inmediato a la salud y en casos específicos, a la depuración de 
características físicas y/o químicas.  
1. Objetivo  
Esta Norma tiene por objeto, establecer las especificaciones sanitarias y características que deben cumplir 
los equipos  y sustancias Germicidas para el tratamiento doméstico de agua, a fin de obtener el Certificado de 
Efectividad Bacteriológica antes de su comercialización.  
2. Campo de aplicación  
Esta Norma es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las p ersonas físicas o morales que 
se dediquen al Proceso de equipos y/o sustancias Germicidas para el tratamiento doméstico de agua.  
Los tratamientos de potabilización del Agua para uso y consumo humano, de los sistemas de 
abastecimiento públicos y privados y plantas purificadoras de agua o cualquier persona física o moral que la 
distribuya en el territorio nacional, no son objeto de esta Norma, por lo que deberán cumplir los requisitos de  
la Modificación a la Norma Oficial Mexicana NOM -127-SSA1 -1994, Salud am biental. Agua para uso y 
consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su 
potabilización; de la Norma Oficial Mexicana NOM -201-SSA1 -2015, Productos y servicios. Agua y hielo para 
consumo humano, envasados y  a granel. Especificaciones sanitarias y de la Norma Oficial Mexicana  NOM -
230-SSA1 -2002, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano, requisitos sanitarios que se deben 
cumplir en los sistemas de abastecimiento públicos y privados durante el manejo de l agua. Procedimientos 
sanitarios para el muestreo, respectivamente.  
3. Referencias normativas  
Para la correcta aplicación de esta Norma, es necesario consultar las siguientes Normas Oficiales 
Mexicanas o las que las sustituyan:  
3.1 Norma Brasil ABNT NBR 1 4908  
3.2 Norma Mexicana NMX -AA-051-SCFI -2001, Análisis de agua - Determinación de metales por absorción 
atómica en aguas naturales, potables, residuales y residuales tratadas - método de prueba  
3.3 Norma Mexicana NMX -BB-040-SCFI -1999, Métodos generales de análisis -determinación de la 
actividad antimicrobiana en productos germicidas.  
3.4 Norma NSF/ANSI 42  
3.5 Norma Oficial Mexicana NOM -008-SCFI -2002, Sistema general de unidades de medida.  
3.6 Norma Oficial Mexicana NOM -073-SSA1 -2015, Estabilidad de fármacos y medicamentos, así como de 
remedios herbolarios.  
3.7 Norma Oficial Mexicana NOM -092-SSA1 -1994, Bienes y Servicios. Método para la Cuenta  de 
Bacterias Aerobias en Placa.  
3.8 Norma Oficial Mexicana NOM -110-SSA1 -1994, Bienes y servicios. Preparación y diluc ión de muestras 
de alimentos para su análisis microbiológico.  
3.9 Norma Oficial Mexicana NOM -117-SSA1 -1994, Bienes y servicios. Método de prueba para la 
determinación de cadmio, arsénico, plomo, estaño, cobre, fierro, zinc y mercurio en alimentos, agua pot able y 
agua purificada por espectrometría de absorción atómica.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
3.10 Modificación a la Norma Oficial Mexicana NOM -127-SSA1 -1994, Salud ambiental. Agua para uso y 
consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua par a su 
potabilización.  
3.11 Norma Oficial Mexicana NOM -201-SSA1 -2015, Productos y servicios. Agua y hielo para consumo 
humano, envasados y a granel. Especificaciones sanitarias.  
3.12 Norma Oficial Mexicana NOM -210-SSA1 -2014, Productos y servicios. Métodos de  prueba 
microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos 
patógenos.  
3.13 Norma Oficial Mexicana NOM -230-SSA1 -2002, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano, 
requisitos sanitarios que se deben cumplir en  los sistemas de abastecimiento públicos y privados durante el 
manejo del agua. Procedimientos sanitarios para el muestreo.  
4. Términos y definiciones  
Para los efectos de esta Norma, se aplicaran los términos y definiciones siguientes:  
4.1 Agua para uso y consumo humano,  al agua que no contiene contaminantes objetables, ya sean 
químicos o agentes infecciosos y que no causa efectos nocivos para la salud. También se denomina como 
agua potable.  
4.2 Bactericida,  a la sustancia o medio, que elimina o destruye a las bacterias.  
4.3 Bacteriostático,  a la sustancia o medio que tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de bacterias, 
sin eliminarlas o destruirlas.  
4.4 Caducidad,  a la fecha a partir de la cual la sustancia Germicida pierde su poder activo.  
4.5 Certif icado de Efectividad Bacteriológica (CEB),  a la constancia expedida por la autoridad sanitaria, 
a través de la COFEPRIS , a los equipos y sustancias Germicidas para tratamiento doméstico de agua, 
mediante la cual se comprueba el cumplimiento de los requisit os sanitarios establecidos en la presente 
Norma, el cual especificará el nivel o grado de Eficiencia en Reducción Bacteriana u otro parámetro 
manifestado y demostrado.  
4.6 Coliformes totales,  a las bacterias de la familia  Enterobacteriaceae , aerobios o ana erobios 
facultativos que se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, en 
un periodo de 48 h y con una temperatura de incubación de 308 ± 0.5 K (35 ± 0.5ºC). Incluyen a los 
Coliformes fecales o termotolerantes, y a que requieren de una temperatura de 317 ± 0.5 K (44 ± 0.5°C). Son 
considerados los indicadores más regularmente usados para la medición de la calidad del agua.  
4.7 Eficiencia en Reducción Bacteriana,  a la capacidad que tienen los diversos equipos o susta ncias 
utilizados para el tratamiento domestico del agua en el lugar de consumo para retener, eliminar o inhibir las 
bacterias patógenas que afectan la calidad del agua.  
4.8 Equipo para tratamiento doméstico de agua,  al que se instala en un punto de uso dom iciliario de 
agua (hogares, oficinas, bebederos escolares, edificios, entre otros lugares a los que acude la población), 
destinada al uso particular de las personas para beber o cocinar, con el propósito de retener, eliminar o inhibir 
los microorganismos p resentes en ella.  
4.9 Equipos para tratamiento doméstico de agua por origen de fabricación:  
4.9.1 Fabricación nacional,  a los productos cuya fabricación es realizada en el país, con componentes a 
su vez de origen nacional, o de origen extranjero.  
4.9.2 Fab ricación extranjera, importados con marca propia,  a los productos cuya fabricación es 
realizada en el extranjero pero que en su comercialización se emplea una marca nacional con razón social en 
el país.  
4.9.3 Fabricación extranjera, importados con marca pr opia extranjera,  a los productos cuya 
fabricación es realizada en el extranjero, y su comercialización se realiza conservando la marca y son 
importados por un distribuidor con razón social en el país.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
4.10 Germicida,  al agente químico, que destruye microor ganismos especialmente patógenos, no incluye 
la capacidad de destrucción de esporas.  
4.11 Lote de tratamiento,  a la cantidad de agua que puede contener el depósito del equipo que funciona 
por gravedad y que es tratada por éste, la cual deber estar especifi cada en el instructivo o manual de 
operación del fabricante en L.  
4.12 Mesófilos aerobios,  a las bacterias viables que determinan el grado de exposición del agua a la 
contaminación por microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento se encuentra ent re los 20 y 
37°C.  
4.13 Método de prueba,  al procedimiento analítico utilizado en el laboratorio para comprobar que un 
producto satisface las especificaciones que establece la presente Norma.  
4.14 Modelo,  al equipo con los mismos componentes y característic as que proporcionan tratamiento al 
agua, bajo las mismas eficiencias, y que generen el mismo flujo de agua tratada, así como acción y/o efecto 
Germicida.  
4.15 No. de Lote de fabricación, a la combinación numérica o alfanumérica que identifica 
específicamen te un lote de fabricación.  
4.16 Potencial de Hidrógeno, pH, a la medida de acidez o alcalinidad de una disolución e indica la 
concentración de iones hidrógeno presentes en determinadas disoluciones. Puede variar entre 0 y 14, en 
donde 0 es lo más ácido, 7 es neutral y las disoluciones alcalinas tienen un pH superior a 7.  
4.17 Proceso,  al conjunto de actividades relativas a la obtención, elaboración, fabricación, preparación, 
conservación, mezclado, acondicionamiento, envasado, manipulación, transporte, dist ribución, 
almacenamiento y expendio, o suministro de equipos y sustancias Germicidas.  
4.18 Tercero Autorizado,  a la persona autorizada por la Secretaría de Salud para emitir dictámenes 
respecto del cumplimiento de requisitos establecidos por la propia Secr etaría o en las normas 
correspondientes o para realizar estudios, para efectos de trámites o autorizaciones sanitarias.  
4.19 Vida útil,  a la cantidad de agua que puede tratar un equipo, cumpliendo con la función para la cual ha 
sido creado, conservando su Eficiencia en Reducción Bacteriana u otro parámetro manifestado.  
4.20 Volumen vacío, al cálculo del volumen del agua contenido en las tuberías del banco de pruebas y en 
el equipo y se utiliza para calcular la cantidad de agua que se inoculará en la prueba de Eficiencia en 
Reducción Bacteriana.  
5. Símbolos y términos abreviados  
Para los efectos de esta Norma se aplican los símbolos y términos abreviados siguientes:  
5.1 % Porcentaje  
5.2 > Mayor que  
5.3 ± Más/menos  
5.4 < Menor o igual  
5.5 > Mayor o igual  
5.6 °C Grado Celsius  
5.7 APST Agua de prueba inoculada sin tratar en UFC/ml o NMP/100 ml  
5.8 APT Agua de prueba tratada en UFC/ml o NMP/100 ml  
5.9 As+5 Arsénico pentavalente  
5.10 ATCC Colección Americana de Tipo de Cultivos; es un material biológico de referenc ia certificado  
5.11 BaCl 2 Cloruro de Bario  
5.12 CCAYAC Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
5.13 CAS Chemical Abstracts Service  
5.14 CENAM Centro Nacional de Metrología  
5.15 cm2 Centímetro cuadrado  
5.16 COFEPRIS Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios  
5.17 COT Carbono Orgánico Total  
5.18 DNPC Demasiado numerosas para contar  
5.19 EDTA Acido Tetracetico Etilen Diamina  
5.20 EMA Entidad Mexicana de Acreditación  
5.21 ENDO LES Medio de cultivo microbiológico, en el cual la  mayoría de los organismos gram negativos 
crecen bien  
5.22 EPA Environmental Protection Agency  
5.23 g gramo  
5.24 h Horas  
5.25 H2SO 4 Ácido Sulfúrico  
5.26 HCl Ácido Clorhídrico  
5.27 K Kelvin  
5.28 KCl Cloruro de potasio  
5.29 KH 2PO 4 Fosfato dihidrogenado de po tasio  
5.30 L Litro 
5.31 LED Del acrónimo inglés LED, light -emitting diode: 'diodo emisor de luz  
5.32 M Molar  
5.33 M -ENDO Medio de cultivo para el desarrollo y para el recuento de Coliformes totales en agua  
5.34 mg Miligramos  
5.35 mJ milijulio  
5.36 ml Mililitro 
5.37 mm milímetro  
5.38 MS -2 Colifago de la familia LEVIVIRIDAE  
5.39 mW milivatio  
5.40 N Normal, una medida de la concentración de una especie en disolución.  
5.41 NaCl Cloruro de sodio  
5.42 Na 2HPO 4 Fosfato Monohidrogenado de sodio  
5.43 Na 2HAsO 47H2O Arsenato de sodio heptahidratado  
5.44 NaOH Hidróxido de sodio  
5.45 nm Nanómetro  
5.46 NMP Número más probable  
5.47 No. Número  
5.48 NTU Unidades Nefelométricas de Turbiedad  
5.49 OMS Organización Mundial de la Salud  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
5.50 ONPG Orto-nitrofenil -ß-galactósido es un sustrato colorimétrico y espectrofotométrico para la 
detección de la actividad ß -galactosidasa.  
5.51 PBS Solución Salina Amortiguada por Fosfatos  
5.52 psi Unidad de presión en el sistema anglosajón de unidades, libra -fuerza por pulgada cuadrada  
5.53 PVC Policloruro de vinilo  
5.54 RBCT Reducción Bacteriana de Coliformes Totales  
5.55 RBMA Reducción Bacteriana de Mesófilos Aerobios  
5.56 SDT Sólidos disueltos totales  
5.57 TSA Agar Tripticasa soya  
5.58 TSB  Soya tripticaseína (Tryptic Soy Broth, TSB)  
5.59 UFC Unidades Formadoras de Colonias  
5.60 UFP/ml Unidades Formadoras de Placa por ml  
5.61 UV Ultra violeta  
5.62 xg Unidad de fuerza que expresa en número de veces que la fuerza centrífuga supera a la fuerza de 
gravedad  
6. Especificaciones  
Las personas físicas o m orales que se dediquen al Proceso de equipos y/o sustancias Germicidas para 
tratamiento doméstico de agua deberán de contar con el CEB expedido por la autoridad sanitaria 
(COFEPRIS), por cada Modelo de equipo y/o por cada tipo de presentación de sustancia Germicida antes de 
su comercialización, el cual tendrá una vigencia de 1 año.  
6.1 Mecanismo de Certificación: Tomando en cuenta el origen del equipo y/o sustancia Germicida, 
aplicará el siguiente mecanismo:  
6.1.1 Fabricación nacional o importado con marca propia: Únicamente podrá realizar los trámites de 
certificación el representante legal del fabricante o poseedor de la marca, cumpliendo con todos los requisitos 
respecto a pruebas sanitarias, manuales operativos y trazabilidad, así como de personalidad ju rídica que se le 
soliciten. En este caso el certificado saldrá a nombre del fabricante o poseedor de la marca, con su respectiva 
responsabilidad sobre el producto.  
6.1.2 Importado por distribuidor con marca extranjera: Lo podrá realizar un distribuidor o a sociación de 
distribuidores que mediante una carta de representación del fabricante en papel membretado, en español o en 
el idioma del país de origen con su respectiva traducción por perito traductor, en la cual el fabricante le 
otorgue derechos de comerci alización del producto con valor de representante o franquicia.  
Deberá cumplir con todos los requisitos establecidos en el inciso 6.1.1, de esta Norma.  
En este caso, el certificado se emitirá a nombre del distribuidor o asociación de distribuidores y recae rá en 
su totalidad la responsabilidad sobre él.  
6.1.3 Los distribuidores adicionales que deseen importar un producto que ya cuente con el CEB 
obtenido de otra persona física o moral, podrán obtener copia validada del certificado, pagando los derechos 
de ce rtificación y registrando los números de lotes a comercializar, además deberán de presentar la 
autorización escrita del representante legal del poseedor del CEB original. Una vez terminada la vigencia del 
CEB o, si quien tiene el CEB original no desea auto rizar al distribuidor o asociación de distribuidores durante 
la vigencia del mismo, entonces si sería posible que otro distribuidor realice el trámite cumpliendo con los 
requisitos establecidos en los incisos 6.1.1 y 6.1.2, de esta Norma.  
En este caso los gastos de pruebas o administrativos realizados anteriormente por el distribuidor o grupo 
de distribuidores que obtuvieron el CEB originalmente, serán absorbidos por los mismos sin perjuicio para 
importadores posteriores.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
6.2 Eficiencia en Reducción Bacteri ana por cada Modelo de Equipo para tratamiento doméstico  de 
agua  
6.2.1  Un laboratorio Tercero Autorizado por COFEPRIS deberá evaluar la Eficiencia en Reducción 
Bacteriana de conformidad con el Apéndice A Normativo de esta Norma, con las aguas de prueba ino culadas 
1 y 2 (Tablas A.3 y A.4, de esta Norma) en intervalos de 0, 50, 75 y 100% de la vida útil del equipo y los 
adicionales que requiera la persona física o moral, siguiendo las recomendaciones del fabricante y 
considerando el mantenimiento del mismo cu ando aplique, reportados en L de agua tratada.  
6.3 Eficiencia en Reducción Bacteriana para cada tipo de presentación de sustancia Germicida  
El interesado deberá declarar la Caducidad por cada presentación de la sustancia Germicida en función de 
los estudio s de estabilidad reportados a temperatura ambiente, si no cuenta con ellos podrá presentar 
estudios a temperatura acelerada, y en la renovación del CEB deberá de presentar el estudio de estabilidad a 
temperatura ambiente, esto permitirá conocer la Caducida d real de la sustancia.  
Un laboratorio Tercero Autorizado por COFEPRIS deberá evaluar la Eficiencia en Reducción Bacteriana 
de conformidad con el Apéndice A Normativo, de esta Norma, al inicio de la Caducidad declarada con base en 
la dosis, volumen de agua  a tratar y tiempo de contacto de la sustancia Germicida y al final con base en la 
fecha de Caducidad real determinada en los estudios de estabilidad a temperatura ambiente, dosis, volumen 
de agua a tratar y tiempo de contacto de la sustancia Germicida.  
El laboratorio que efectúe los estudios de estabilidad podrá ser un Tercero Autorizado por COFEPRIS, o 
realizados por un laboratorio o institución pública o privada reconocida a nivel nacional o internacional 
mediante un sistema de gestión de calidad ISO 170 25 (International Organization for Standardization, 
https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso -iec:17025:ed -2:v1:es) o NMX -EC-17025 -IMNC -2006 Requisitos 
generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración 
(http://integra.cimav.edu.mx/ intranet/data/files/calidad/documentos/externos/NMX -EC-17025 -IMNC -2006.pdf).  
Para el cumplimiento respecto a este inciso se podrá consultar el Apéndice E Informativo, de esta Norma.  
6.4 Otros parámetros a eliminar por cada Modelo de Equipo para tratamiento  doméstico de agua y/o 
sustancia Germicida  
Cuando el interesado indique que el Equipo para tratamiento doméstico de agua o sustancia Germicida, 
remueve o elimina otro(s) parámetro(s) microbiológico(s) y/o físico -químicos, debe presentar resultados de la 
eficiencia del equipo o sustancia Germicida en la reducción o eliminación de cada uno de los que manifieste, 
al 0, 50, 75 y 100% de la Vida útil, reportados en L de agua tratada del equipo o tratándose de la sustancia 
Germicida de acuerdo a la fecha de Caduc idad y a lo señalado en el inciso 6.3, de esta Norma.  
Si el solicitante demuestra la eficiencia del equipo o sustancia Germicida en estos parámetros adicionales, 
podrá incluir esta información en el manual de operación y mantenimiento o en la etiqueta. El CEB reflejará 
estos parámetros cuando así lo demuestren.  
Los resultados deberán ser emitidos por un Tercero Autorizado por la COFEPRIS, en caso de que  el(os) 
parámetro(s) a analizar no se encuentre(n) dentro del listado de Terceros Autorizados, podrá  presentar 
estudios practicados al equipo o sustancia Germicida por un laboratorio o institución pública o privada 
reconocida a nivel nacional o internacional mediante un sistema de gestión de calidad ISO 17025 
(International Organization for Standardization, https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso -iec:17025:ed -2:v1:es)  o 
en la Norma Mexicana NMX -EC-17025 -IMNC -2006 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de 
ensayo y de calibración (http://integra.cimav.edu.mx/intranet/data/files/calidad/do cumentos /externos/NMX -EC-17025 -
IMNC -2006.pdf) bajo un método normalizado y validado, y buenas prácticas de laboratorio para microbiología 
de la OMS. Cumpliendo con los límites máximos permisibles, dispuestos en la Norma Oficial Mexicana citada 
en el inciso  3.8, del Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma o las recomendaciones de la OMS (Guías  
para la calidad del agua potable http://www.who.int/water _sanitation_health/dwq/gdwq3_es_fulll_lowsres.pdf?ua=1  
Para el cumplimiento respecto a virus y/o Ars énico de este inciso se podrá utilizar el método establecido 
en los Apéndices F y G Informativos de esta Norma.  
Antes de que se efectúen las pruebas deberá presentar ante la COFEPRIS, un Protocolo de Estudio 
elaborado por el laboratorio seleccionado, el cu al deberá incluir:  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
6.4.1  La metodología (descripción del Proceso de evaluación de los equipos para tratamiento doméstico 
de agua), incluyendo un diagrama de flujo;  
6.4.2 Cantidades de remoción por cada parámetro manifestado en su escrito, a las cuales se s ometerán 
los equipos para demostrar su eficiencia;  
6.4.3 Etapas de L de agua tratada por los equipos a las que se realizarán las pruebas de eficiencia en 
reducción de los parámetros en comento (0, 50, 75 y 100% de la Vida útil y los adicionales que requier a la 
persona física o moral);  
6.4.4 Infraestructura a utilizar en el Proceso de evaluación de los equipos para tratamiento doméstico de 
agua, o sustancias Germicidas con evidencia fotográfica del banco de pruebas;  
6.4.5 Métodos analíticos;  
6.4.6 Cronograma  de actividades, y  
6.4.7 Reporte final incluyendo límites de detección y cuantificación, soporte técnico (como mínimo 
cromatogramas y curvas de calibración cuando aplique).  
6.5 Criterio para obtención del CEB y otros parámetros  
El CEB estará avalado por lo s informes de resultados de un Tercero Autorizado por COFEPRIS que 
efectúe el estudio de la Vida útil del Equipo para tratamiento doméstico de agua y sustancias Germicidas, 
utilizando los métodos de prueba indicados en esta Norma.  
Los equipos deberán ser s ometidos a prueba con el agua de prueba 1 y agua de prueba 2 (Tablas A.3 y 
A.4 de esta Norma), demostrando una Eficiencia en Reducción Bacteriana del 95% de Mésofilos aerobios  y 
99.99% de Coliformes totales.  
La obtención del CEB se otorgará cuando:  
6.5.1 Los dos equipos cubran el 100% de la Vida útil manifestada por el fabricante.  
Los dos equipos cubran al menos el 75% de la Vida útil que manifieste el fabricante, el CEB se emitirá 
indicando su Vida útil demostrada.  
6.5.2 Cuando uno de los dos equipos no c ubra al menos el 75% de la Vida útil manifestada por el 
fabricante, no se otorgará el CEB, en este caso se deberá realizar nuevamente la prueba manifestando una 
Vida útil menor.  
6.5.3 Las sustancias Germicidas sometidas a prueba deben demostrar su efectivi dad, acorde a las 
dosificaciones establecidas en el manual del fabricante.  
6.6 Criterios para obtener un CEB incluyendo otros parámetros  
Los equipos sometidos a prueba, deberán de demostrar que eliminan o reducen otros parámetros 
microbiológicos, físicos, químicos manifestados, bajo los criterios del inciso 6.3 de esta Norma.  
6.7 Materiales de fabricación del Equipo para tratamiento doméstico de agua  
Referente a los materiales de fabricación, deberá de presentar un listado de los componentes que estén 
en co ntacto con el agua, con evidencia documental o informe de resultados de laboratorio, emitido por un 
organismo, institución o laboratorio público o privado reconocido a nivel nacional o internacional que indique 
que los materiales que se utilizan para la fa bricación del equipo en su totalidad o de cada uno de los 
componentes que lo conforman, no liberan sustancias que puedan causar daño a la salud de los usuarios.  El 
laboratorio que realice el estudio deberá de cumplir lo establecido en el inciso 6.3 de est a Norma.  
Para el cumplimiento de este inciso se aceptará el informe de resultados emitido por el método establecido 
en el Apéndice D Informativo de esta Norma.  
6.8 Hoja de datos de seguridad de la sustancia Germicida  
Deberá de presentar la hoja de datos de  seguridad emitidos por el fabricante conforme a las disposiciones 
aplicables.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
6.9 Etiqueta del Equipo para tratamiento doméstico de agua  
Por cada Modelo de Equipo para tratamiento doméstico de agua se deberá ostentar en su etiqueta: 
nombre y Modelo (debe ser el mismo que se indica en el CEB, Vida útil en L de agua tratada y tiempo 
aproximado de Vida útil en condiciones de uso, presión de operación, flujo máximo (L/minuto) al que se puede 
operar el equipo, utilizar con agua de abastecimiento público, subter ránea de alta calidad o superficial, tipo de 
contaminante que trata por colores, observaciones, No. de Lote y la leyenda “véase instructivo anexo”, 
nombre y/o razón social del fabricante, distribuidor y/o importador, así como el domicilio del mismo).  La 
etiqueta sólo debe contener los parámetros aprobados por la COFEPRIS (Ver Tabla 1 de esta Norma).  
 
 Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
6.10 Instructivo o manual de operación del Equipo para tratamiento doméstico de agua  
El instructivo o manual de operación del Equipo para tratamiento domés tico de agua, debe ser específico 
para cada Modelo de equipo, indicando cuando menos la información en español siguiente:  
6.10.1 Finalidad de uso. Deberá de indicar los microorganismos, contaminantes físicos y/o químicos que el 
equipo elimina o retiene;  
6.10.2 Diagrama hidráulico de flujo. Debe incluir, los elementos de los que está constituido el equipo, y los 
componentes que proporcionan el tratamiento al agua, donde se debe describir de manera secuencial cómo 
opera el equipo para efectuar la desinfección  del agua, la manera en que el agua fluye a través de los 
componentes del equipo y el tratamiento que proporcionan éstos al agua;  
6.10.3 Las características de la calidad del agua de prueba (agua de abastecimiento público, subterránea 
de alta calidad o sup erficial), con la que se evaluó la efectividad bacteriológica del equipo, al 0, 50, 75 y 100% 
de la Vida útil y los adicionales que la persona física o moral indicó;  
6.10.4 El flujo de agua tratada en L por minuto que el equipo puede procesar para su potab ilización, y para 
el cual fue diseñado;  
6.10.5 La presión máxima del agua a la que el equipo debe operar;  
6.10.6 El procedimiento de mantenimiento o cambio de piezas del equipo incluyendo el de los 
componentes que proporcionan el tratamiento al agua, y  
6.10.7 Con base en los resultados de eficiencia en reducción bacteriológica, la Vida útil del equipo referida 
a volumen de agua tratada (en L) así como de los elementos que proporcionan el tratamiento al agua.  
6.11 Etiqueta de la sustancia Germicida para trat amiento doméstico de agua  
La etiqueta de la sustancia Germicida, debe usar un lenguaje claro y sencillo, la información que por el 
tamaño del envase no pueda formar parte del etiquetado, deberá presentarse en un folleto o instructivo que 
acompañe a cada en vase. En estos casos se imprimirá la leyenda “CONSULTE EL INSTRUCTIVO ANEXO”. 
La etiqueta de la sustancia Germicida debe ostentar la información en idioma español siguiente:  
6.11.1 Nombre comercial del producto;  
6.11.2 Nombre común del producto;  
6.11.3 Presentación;  
6.11.4 Composición porcentual del ingrediente activo, inerte y/o diluyentes;  
6.11.5 Contenido Neto;  
6.11.6 Finalidad de uso. Deberá de indicar los microorganismos que inhibe y/o elimina;  
6.11.7 Instrucciones de uso. Indicar la cantidad de produc to a aplicar por L de agua a desinfectar, 
dependiendo de su origen (agua de abastecimiento público, subterránea de alta calidad o superficial con  la 
que se evaluó la efectividad bacteriológica de la sustancia. Tiempo de contacto de la sustancia en la 
desinfección del agua;  
6.11.8 Condiciones de almacenamiento;  
6.11.9 Precauciones y advertencias de uso;  
6.11.10 Caducidad;  
6.11.11 No. de Lote de fabricación, y  
6.11.12 Nombre, dirección y teléfono del importador, distribuidor y/o comercializador. Si el produc to es 
fabricado o formulado en territorio nacional debe Imprimirse la leyenda “HECHO EN MÉXICO” En casos de 
productos de importación “HECHO EN…..” (País de origen), en caso de productos de importación a granel 
que sean envasados en México, debe imprimirse la leyenda “ENVASADO EN MÉXICO”.  
6.12 Las personas físicas o morales referidas en el inicio del Capítulo 6, de esta Norma, deben tener 
a disposición de la autoridad sanitaria para cuando ésta la requiera, la siguiente información:  
6.12.1 Ingredientes activ os, formulación de materias primas, componentes de las sustancias Germicidas y 
partes componentes del equipo, y  
6.12.2 País de origen de los ingredientes activos de la sustancia Germicida o, en su caso, indicar si es en 
su totalidad de producción nacional o de importación.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
7. Evaluación de la conformidad  
La evaluación de la conformidad podrá ser solicitada a instancia de parte, por el responsable sanitario, el 
representante legal o la persona que tenga las facultades para ello, ante la autoridad competente o las 
personas acreditadas o autorizadas para tales efectos.  
8. Concordancia con Normas Internacionales y Mexicanas  
Esta Norma Oficial Mexicana no coincide con ninguna Norma Internacional, ni Mexicana.  
9. Bibliografía  
9.1 Organización Mundial de la Salud. Guías para la calidad del agua potable, 2011 
(http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3rev/es/ ). 
9.2 Bacteriological Analytical Manual C. 8th. Edition. Rev. A. Food and Drug Administration. Division of 
Microbiology. 1999. EUA.  
9.3 EPA Guidance M anual Turbidity Provisions. Chapter 10. Turbidity through the Treatment Processes - 
April 1999.  
9.4 Mahmoud & Saffa (2002). Water desalination technologies utilizing conventional and renewable energy 
sources. Institute of Sustainable Energy Technology, Univ ersity of Nottingham, Nottingham NG7 2RD, UK.  
9.5 Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 1995. Washington D.C. EUA.  
9.6 NMX -BB-040-SCFI -1999. Métodos generales de análisis -determinación de la actividad antimicrobiana 
en pro ductos germicidas https://www.yumpu.com/es/document/view/14197834/nmx -bb-040-scfi-1999 -
metodos -generales -de-analisis -. 
9.7 Organización Mundial de la Salud. Evaluación de métodos para el tratamiento doméstico  del agua: 
metas sanitarias y especificaciones de Eficiencia microbiológica, 2012. 
http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/79186/1/9789243548227_spa.pdf?ua=1  
9.8 Shatat et al (2012). State of art Water Desalination Technologies using conventional and sustainable 
energy sources.  
9.9 Standard Methods fo r the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 
20th Ed. Washington D.C. 2001. EUA.  
9.10 The Desalting and Water Treatment Membrane Manual: A Guide to Membranes for Municipal Water 
Treatment, Water Treatment Technology Progra m, Report No. 1, September 1993, published by the United 
States Department of the Interior, Bureau of Reclamation, Denver Office, Research and Laboratory Services 
Division, Applied Sciences Branch.  
9.11 United States environmental protection agency. Guide standard and protocol for testing 
microbiological water purifiers, 1987.  
9.12 WHO International Scheme to Evaluate Household Water Treatment. Harmonized Testing Protocol: 
Technology Non -Specific, 2014. Geneva, Switzerland.  
10. Observancia de la Norma  
La vi gilancia en el cumplimiento de esta Norma corresponde a la Secretaría de Salud y a los gobiernos de 
las entidades federativas, en sus respectivos ámbitos de competencia.  
11. Vigencia  
La presente Norma Oficial Mexicana entrará en vigor a los 180 días natura les posteriores a su publicación 
en el Diario Oficial de la Federación.  
TRANSITORIO  
PRIMERO.  Esta Norma deja sin efectos a la Norma Oficial Mexicana NOM -244-SSA1 -2008, Equipos y 
sustancias germicidas para tratamiento doméstico de agua. Requisitos sanitario s, publicada en el Diario 
Oficial de la Federación el 4 de septiembre de 2009.  
SEGUNDO.  Los equipos o sustancias Germicidas que cuenten con un Dictamen de Efectividad 
Bacteriológica, tendrán un plazo de seis meses, contados a partir de la fecha de entrada en vigor de esta 
Norma, para solicitar el CEB con el fin de agotar las existencias de los productos con etiquetas o envases 
litografiados.  
Ciudad de México, a 2 de octubre de 2018. - El Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos 
Sanitarios y Pres idente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, 
Julio  Salvador Sánchez y Tépoz .- Rúbrica.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
12. Apéndices  
APÉNDICE A NORMATIVO  
Método de prueba para evaluar la Eficiencia en Reducción Bacteriana en equipos  y sustanc ias 
Germicidas para tratamiento doméstico de agua  
A.1 Introducción  
El agua que diariamente se suministra a la población, es empleada ya sea para beber; preparar comida; 
asearse, bañarse y satisfacer todas las necesidades higiénicas. El Agua para uso y cons umo humano debe 
ser salubre, aceptable y asequible.  
Para efectos de la protección contra riesgos sanitarios referidos al consumidor en todos sus niveles 
sociales, las fuentes naturales del agua deben mantenerse eficientemente vigiladas y protegidas. El líq uido 
captado debe ser sometido a un tratamiento previo, cumpliendo con las disposiciones aplicables al ser 
disponible para el usuario final.  
Sin embargo, en ocasiones se puede poner en riesgo la calidad del agua potabilizada o de procedencia 
natural y es n ecesario «el tratamiento del agua en el lugar de consumo» (en inglés, point -ofuse water  
treatment), principalmente para beber y preparar alimentos, lo anterior se logra mediante la utilización de 
equipos para tratamiento doméstico de agua o sustancias Germ icidas que aseguran la eliminación  de 
microorganismos patógenos o la eliminación de contaminantes químicos tóxicos.  
En el caso de equipos la Eficiencia en Reducción Bacteriana depende de factores como el Proceso  de 
tratamiento utilizado, característica d el agua a tratar, el modo de operación; y en caso de sustancias, de la 
composición química y cinética del ingrediente activo del Germicida. Dicha capacidad debe ser sometida  a 
prueba a fin de garantizar la salud de la población que hace uso de estos produ ctos para obtener Agua para 
uso y consumo humano.  
A.2 Objetivo  
Evaluar la Eficiencia en Reducción Bacteriana en equipos y en sustancias Germicidas, para comprobar 
que cumplen con las propiedades antimicrobianas para los cuales fueron creados y que le son a tribuidas por 
el fabricante.  
A.3 Fundamento  
El Método de prueba para determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana de equipos para tratamiento 
doméstico de agua y/o sustancias Germicidas descrito en el presente Apéndice, consiste en evaluar su 
desempeño  para retener, destruir o inactivar bacterias.  
La evaluación de los Equipos para tratamiento doméstico de agua, se lleva a cabo haciendo pasar agua 
de prueba 1 y agua de prueba 2 (Tablas A.3 y A.4 de esta Norma), a través de éstos, así como  agua 
inoculada  con bacterias vivas (cepa evaluada), en diferentes etapas de la Vida útil.  
Para evaluar las sustancias Germicidas, se probarán agregándolas al agua de prueba 1 y agua de prueba 
2 (Tablas A.3 y A.4, de esta Norma), considerando su Caducidad conforme a los estudios de estabilidad.  
A.4 Consideraciones generales  
A.4.1  El laboratorio de prueba que realice los análisis deberá ser un Tercero Autorizado por la COFEPRIS.  
A.4.2 Para obtener resultados significativos, es de suma importancia seguir fielmente y control ar 
cuidadosamente las condiciones en las que se lleva a cabo este método.  
A.4.3  Todo el material que esté en contacto con las muestras deberá estar estéril utilizando un ciclo de 
esterilización previamente validado por la CCAYAC.  
A.4.4  Equipos y Reactivos  
A.4.4.1 Todos los equipos los deberá tener incluidos el laboratorio de prueba que realice los análisis en un 
programa de calibración, mantenimiento preventivo y verificación, de acuerdo a las características del equipo. 
La calibración además deberá ser tra zable a un patrón nacional establecido conforme al CENAM. Los 
reactivos deberán ser de grado analítico.  
A.4.4.1.1  Potenciómetro. Deberán tener una precisión de verificación mínima de ± 0.1 unidades de pH a 
20°C - 25°C, deben verificarse el día de uso con s oluciones amortiguadoras trazables al CENAM u otro patrón 
nacional emitido por un Instituto Nacional de Metrología incorporado al Arreglo de Reconocimiento Mutuo del 
Comité Internacional de Pesas y Medidas.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
A.4.4.1.2  Balanza analítica. Deberán ser verifica das el día de uso utilizando un marco de pesas calibrado 
o verificado.  
A.4.4.1.3  Incubadora de aire con circulación mecánica, para operar a una temperatura de 35 ± 2°C. Las 
incubadoras y baños de agua, deberán demostrar mediante el muestreo en diferentes p untos de la cámara y 
durante un tiempo determinado, que asegure las condiciones de incubación de la prueba que pueden trabajar 
a los intervalos de temperatura indicados en los métodos.  
A.4.4.1.4  Baño de agua con circulación mecánica y mezcla de agua, para operar a una temperatura de 
44,5 ± 0,2°C.  
A.4.4.1.5  Autoclave con termómetro y manómetro, capaz de alcanzar temperatura de esterilización de 121 
± 2°C, probado con termómetro de máximas. Las autoclaves y hornos que se utilicen para la esterilización  de 
material y medios de cultivo, debe contar con instrumentos de medición calibrados. Cada ciclo de 
esterilización debe estar controlado paramétricamente (temperatura y presión) y con indicadores biológicos o 
contar con un programa de monitoreo con indicadores biológicos, considerando la frecuencia de uso y las 
condiciones de mantenimiento. El laboratorio debe contar con ciclos de esterilización que garanticen la 
esterilidad de los materiales sometidos a esterilización sin afectación de sus características, con el propósito 
de demostrar la distribución y la penetración del calor.  
A.4.4.1.6 Horno para esterilizar a 160 -180°C.  
A.4.4.1.7  Termómetros. Cuando se indique el uso de un termómetro, éste deberá estar dentro de un 
programa de calibración y/o verificación vi gente por parte del laboratorio que practique la prueba, esta última 
contra un termómetro patrón. Los equipos de incubación deberán contar con termómetros calibrados con 
división mínima de la mitad de la variación permitida al equipo por el método, por eje mplo cuando se indique 
una variación de ± 1°C el termómetro deberá tener una división mínima de 0.5°C.  
A.4.4.1.8  Espectrofotómetro con escala de Transmitancia o Nefelómetro de Mc Farland.  
A.4.4.1.9  Pipetas serológicas estériles de 1 y 10 ml de capacidad, c on graduación de una décima de su 
volumen total. (Se recomienda contar complementariamente con pipetas de 2, 5 y 11 ml de capacidad).  
A.4.4.1.10  Tubos de cultivo de 22 x 175 mm, 20 x 200 mm, 16 x 160 mm y 10 x 100 mm, con tapa 
metálica o de rosca.  
A.4.4.1. 11 Botellas de Roux.  
A.4.4.1.12  Asa de platino o nicromel.  
A.4.4.1.13 Contador manual.  
A.4.4.1.14  Contador de colonias con fondo oscuro.  
A.4.4.1.15  Cajas de Petri estériles de 100 X 15 mm.  
A.4.4.1.16  Mecheros Fisher o Bunsen.  
A.4.4.1.17  Solución salina est éril al 0,85% (8,5 g de cloruro de sodio grado analítico en 1000 ml de agua 
destilada o desionizada).  
A.4.5.  Medios de Cultivo  
A.4.5.1  Todos los medios de cultivo deberán usarse hasta haber aprobado el control de calidad adecuado 
para su uso, con excepción  de los medios de cultivo que tengan como restricción el tiempo de uso, en esos 
casos los resultados del análisis no podrán ser emitidos hasta haber completado su control de calidad.  
A.4.5.2  Pueden utilizarse medios de cultivo preparados en el laboratorio por ingrediente, medio de cultivos 
preparados en polvo o listo para su uso, siempre que éstos cumplan con la formulación descrita en el método.  
A.4.5.3  Debe realizarse control de calidad de los medios de cultivo, acorde a un método científico.  
A.4.5.4  Los reactivos a emplear en el método objeto, de esta Norma, deben ser grado analítico.  
A.4.6  Cepas de referencia  
A.4.6.1  Debido a la variabilidad inherente de los materiales biológicos es necesario demostrar que las 
cepas control utilizadas proceden de una col ección de microorganismos que asegure la identidad y las 
características de los microorganismos para su uso como patrones biológicos. Las cepas control utilizadas 
deberán demostrar trazabilidad a una colección de microorganismos reconocida y deberán demost rar la 
pureza y viabilidad de las mismas.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A.4.7 Agar nutritivo A  
Extracto de carne 3 g  
Peptona 5 g  
Agar libre de sales 15 g  
Agua destilada o desionizada 1000,0 ml  
Poner en ebullición durante tres minutos el extracto de carne y la peptona (Bacto o equivalen te); agregar el 
agar y calentar, agitando continuamente hasta disolver.  
Distribuir en tubos de 10 x 100 mm y esterilizar 20 minutos a 121°C (el medio no debe sufrir 
sobrecalentamiento, lo que se evita por un precalentamiento del autoclave).  
Utilizar este m edio para efectuar los subcultivos.  
A.4.8 Agar nutritivo B  
Preparar del mismo modo que el Agar nutritivo A, descrito en el inciso A.4.7, de esta Norma, pero 
agregando 30 g de agar libre de sales en lugar de los 15 g especificados en dicho inciso.  
Distribui r 20 ml del medio en cada botella de Roux o tubos de 22 x 175 mm.  
Utilizar este medio para preparar el cultivo de referencia.  
A.4.9 Solución neutralizante concentrada  
Mezclar 40 g de azolectina, con 280 ml de polisorbato 80 y 1,25 ml de solución amortiguad ora de fosfatos, 
diluir con agua hasta obtener un volumen final de un 1 L, ajustar el pH a 7,2 con solución volumétrica de 
NaOH o HCl, distribuir en porciones de 100 ml. Esterilizar en autoclave a 121°C por 20 minutos.  
A.4.10 Solución neutralizante diluida  
Mezclar 100 ml de la solución neutralizante concentrada con 25 ml de la solución amortiguadora de 
fosfatos 0.25 M, adicionar 1675 ml de agua, mezclar y distribuir en porciones de 9 ml en tubos con rosca. 
Esterilizar en autoclave a 121°C por 20 minutos.  
A.4.11 Caldo neutralizante  
Mezclar los siguientes componentes: Triptona 5 g, extracto de levadura 2,5 g, dextrosa 10 g, tioglicolato de 
sodio 1 g, tiosulfato de sodio 6 g, bisulfito de sodio 2,5 g, polisorbato 805 g, lecitina de soya 7 g, purpura  de 
bromocr esol 0.02g y agua destilada 1L, calentar a disolución, ajustar pH a 7,2 distribuir y esterilizar en 
autoclave a 121°C por 15 minutos.  
El caldo neutralizante se deberá utilizar para realizar las diluciones como lo indica el inciso A.10.6,  de esta 
Norma.  
A.5 Microorganismo de prueba  
Cepa de Escherichia coli ATCC 11229  
A.6 Preparación del cultivo de referencia  
Tomar una asada de la cepa de Escherichia coli y sembrar en una botella de Roux con Agar nutritivo B; 
incubar de 20 a 24 h a una temperatura de 35 ± 2°C , hacer por lo menos tres siembras.  
A.7 Preparación del subcultivo  
Tomar una asada de cada cultivo de referencia y resembrar en tubos independientes con Agar nutritivo A; 
incubar 20 -24 h a una temperatura de 35 ± 2°C.  
A.8 Preparación de la suspensión de Escherichia coli  
A.8.1  A partir del subcultivo en tubo ya desarrollado, adicionar 5 ml de solución salina al 0,85% estéril y 
agitar suavemente en forma manual, rotando verticalmente el tubo entre las dos manos, para obtener una 
suspensión bacteriana, la cual  se transfiere a un tubo estéril.  
A.8.2  Diluir la suspensión bacteriana con solución salina estéril al 0,85%, a la Transmitancia o Turbiedad 
elegida, de acuerdo con la concentración de bacterias establecida en los incisos A.8.2.1 y A.8.2.2,  de esta 
Norma.  
A.8.2.1  Método espectrofotométrico  
Determinar la concentración de bacterias en UFC/ml, utilizando la Tabla A.1, de esta Norma.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
Tabla A. 1 
370 
nm 420 
nm 490 
nm 530 
nm 550 
nm 580 
nm 650 
nm Longitud de onda en:  
nm 
% Transmitancia con filtros  UFC/ml x 109 
7,0 4,0 6,0 6,0 6,0 7,0 8,0 13,0 
8,0 5,0 7,0 7,0 7,0 8,0 9,0 11,5 
9,0 6,0 8,0 8,0 8,0 9,0 10,0 10,2 
10,0 7,0 9,0 9,0 9,0 10,0 11,0 8,6 
11,0 8,0 10,0 10,0 10,0 12,0 13,0 7,7 
13,0 9,0 12,0 12,0 12,0 13,0 15,0 6,7 
Nota.  La calibración del aparato debe real izarse con solución salina estéril.  
A.8.2.2  Método nefelométrico.  
Determinar la concentración de bacterias en UFC/ml, utilizando la Tabla A.2.  
Tabla A. 2 
Solución de BaCl 2 al 10 
% Solución de H 2SO 4 al 
1,0% ml  Escala de Mc Farland  UFC millones/ml  
0,1 9,9 4,0 300 
0,2 9,8 3,7 600 
0,3 9,7 3,5 900 
0,4 9,6 3,4 1200  
0,5 9,5 3,3 1500  
0,6 9,4 3,2 1800  
0,7 9,3 3,15 2100  
0,8 9,2 3,10 2400  
0,9 9,1 3,04 2700  
1,0 9,0 3,00 3000  
 
Diluir la suspensión bacteriana con solución salina estéril al 0,85%, a la Transmita ncia o Turbiedad 
elegida, de acuerdo con la concentración de bacterias de 5,000 a 10,000 UFC/ml para Mesófilos aerobios y > 
a 1,600 NMP/100 ml para Coliformes totales.  
A.9. Determinación de la cuenta viable  
A un matraz Erlenmeyer que contenga 99 ml de solu ción amortiguadora de fosfatos diluida estéril, 
transferir 1 ml de la suspensión de microorganismos de prueba y efectuar diluciones decimales necesarias 
para obtener placas con cuentas de entre 25 y 250 colonias. Colocar en cajas Petri estériles, por dupli cado 1 
ml de cada dilución, agregar a cada placa de 15 ml a 18 ml de agar para métodos estándar, homogeneizar y 
dejar solidificar invertir las cajas de Petri e incubar por 48 h a 30 -35°C. Contar las colonias de cada una de las 
cajas en un cuenta colonias d e acuerdo a la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.5 del Capítulo  de 
Referencias normativas, de esta Norma.  
A.10. Consideraciones para realizar la prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana en equipos y 
sustancias Germicidas  
A continuación se es tablecen las características fisicoquímicas del agua que debe emplearse para llevar a 
cabo las pruebas 1 y 2, tanto para los equipos como para las sustancias Germicidas.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A.10.1 Características fisicoquímicas del agua que se utilizará en la prueba para equi pos y/o 
sustancias Germicidas  
La prueba de la Eficiencia en Reducción Bacteriana tanto en equipos como en sustancias, se llevará a 
cabo con dos aguas de prueba, las cuales serán preparadas diariamente y verificadas conforme a las Tablas 
A.3 y A.4, de esta Norma.  
Los parámetros de las Tablas A.3 y A.4, de esta Norma, deberán ser analizados por un Tercero Autorizado 
por COFEPRIS.  
A.10.1.1  Agua de prueba 1  
Este tipo de agua representa a las aguas subterráneas de alta calidad o el agua de lluvia, y será inyecta da 
desde el inicio hasta el 50% de la Vida útil de cada equipo y por cada sustancia Germicida, la cual debe 
cumplir con las especificaciones siguientes:  
Tabla A. 3 
Agua de Prueba 1  
Constituyente  Especificación  Materiales de ajuste (# CAS 2) 
Cloro 1 (mg/L)  < 0,1 mg/L  Ninguno  
pH  6,5-9,0 
Unidades de pH  Ácido o una base inorgánica  
Ácido clorhídrico (7647 -01-0) 
Hidróxido de sodio (1310 -73-2) 
COT  (mg/L)3 1.5
 0.95 mg/L  Ácido tánico (1401 -55-4) 
Turbidez  (NTU)  <1 NTU  Ningún ajuste  
Temperatura  (°C) Temperatura ambiente  No aplica  
SDT (mg/L)  (mg/L)  
 50 mg/L  Sales del Mar  
1 Todo el cloro debe ser removido por debajo de los límites de detección sin añadir productos químicos y 
comúnmente se logra mediante el uso de carbón activado. El cloro debe ser medido antes d e la adición de los 
materiales de ajuste del agua de prueba. Los niveles de cloro en el agua de prueba 2 puede causar 
interferencias con la técnica analítica; Las mediciones deben hacerse antes de la adición de las Sales del Mar.  
2 Iniciales en Inglés del Servicio de Información de Sustancias Químicas de la Sociedad Americana de 
Química de los Estados Unidos de América (CAS).  
Si el agua de la llave tiene una composición similar a ésta, puede usarse directamente después de su 
decloración, deberá demostrarse con estudios si es el caso.  
A.10.1. 2  Agua de prueba 2  
Este tipo de agua representa a las aguas superficiales, pero en las peores condiciones, y será inyectada a 
partir del 51% hasta el 100% de la Vida útil de cada equipo y por cada sustancia Germicida, la  cual debe 
cumplir con las siguientes especificaciones:  
Tabla A.4  
Agua de Prueba 2  
Constituyente  Especificación  Materiales de ajuste (# CAS 2) 
Cloro 1 (mg/L)  < 0,1 mg/L  Ninguno  
pH  6,0-10,0 
Unidades de pH  Ácido o una base inorgánica  
Ácido clorhídrico (7 647-01-0) 
Hidróxido de sodio (1310 -73-2) 
COT  (mg/L)3  15
5mg/L  Ácido húmico (6813 -04-4)      (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
Turbidez  (NTU)3 40 
  10 NTU  Especificación ISO. Polvo de prueba 
fina 12103 -A2 
Temperatura  (°C) Temperatura ambiente  No aplica  
STD (mg/L)  (mg/L)  1500 
  150 mg/L  Sales del Mar  
1 Todo el cloro debe ser removido por debajo de los límites de detección sin añadir productos químicos y 
comúnmente se logra mediante el uso de carbón activado. El cloro debe ser medido antes de la adición de los 
materiales de ajuste del agua de  prueba. Los niveles de cloro en el agua de prueba 2, puede causar 
interferencias con la técnica analítica. Las mediciones deben hacerse antes de la adición de Sales del Mar.  
2 Iniciales en Inglés del Servicio de Información de Sustancias Químicas de la So ciedad Americana de 
Química de los Estados Unidos de América (CAS).  
A.10. 2 Preparación del agua de prueba 1 y del agua de prueba 2.  
Para preparar el agua de prueba 1 y 2 que se ajustará a los parámetros especificados en las Tablas A.3 y 
A.4, de esta Norma , se debe utilizar agua libre de Bactericidas y Bacteriostáticos (para garantizar lo anterior, 
se recomienda realizar dicha actividad mediante un equipo que contenga filtros de Carbón Activado).  
A.10.2.1  Los volúmenes de agua de prueba 1 se prepararán y se  harán pasar a través del equipo, hasta 
alcanzar el 50% de la Vida útil especificada por el fabricante, de acuerdo con el tiempo determinado de su 
operación o funcionamiento.  
A.10.2.2  Los volúmenes de agua de prueba 2 se prepararán y se harán pasar a travé s del equipo, 
después del 50% de la Vida útil, hasta alcanzar el 100% de la Vida útil especificada por el fabricante, de 
acuerdo con el tiempo determinado de su operación o funcionamiento.  
A.10.3 Inoculación del agua de prueba 1 y del agua de prueba 2  
Se inocularán un mínimo de 10 Volúmenes vacíos del agua de prueba 1 y del agua de prueba 2, cuando 
les aplique (considerando que cada Volumen vacío no debe ser menor a 1 L), con el volumen de suspensión 
bacteriana de Escherichia coli , hasta  alcanzar:  
A.10.3.1  Una carga total de Mesófilos aerobios de 5000 a 10000 UFC/ml y determinar la concentración 
real de conformidad con lo dispuesto en la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.5 del Capítulo de 
Referencias normativas, de esta Norma.  
A.10.3.2  Una concent ración de Coliformes totales mayor o igual a 1600 NMP/100 ml y determinar la 
concentración real mediante el Apéndice H Normativo de la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.4 del 
Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma o con los métodos al ternativos presentados en los 
Apéndices B y C Informativos de esta Norma.  
Las aguas de prueba 1 y 2 inoculadas, deben estar bien mezcladas antes de usarse.  
A.10.4 Muestreo  
El procedimiento de toma de muestras (desinfección y muestreo) se realizará de confo rmidad con lo 
establecido en la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.10 del Capítulo de Referencias normativas, de 
esta Norma.  
A.10.4.1 Neutralizadores químicos para las sustancias Germicidas y equipos que en su tratamiento 
utilizan sustancias desi nfectantes  
En el momento en el que se toman las muestras, el producto químico desinfectante presente en el agua 
deberá de neutralizarse inmediatamente (es decir, convertirse a una forma que carezca de actividad 
antimicrobiana), sino se sobreestimará la eli minación o inactivación microbiana, esto se realiza agregando un 
neutralizador idóneo a las muestras, según la sustancia que se trate, para lo cual el fabricante de la sustancia 
Germicida o equipo deberá indicar en el instructivo o manual de uso, el neutra lizador que aplique, indicando la 
concentración en porcentaje a aplicar por ml de la muestra, por ejemplo:  
Para muestras de agua con cloro residual libre, agregar 0.1 ml de tiosulfato de sodio a 3% por cada 120 ml 
de capacidad de los recipientes que conten drá la muestra.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A.10.5 Selección de los equipos  
Se seleccionarán dos equipos del mismo Modelo por el laboratorio Tercero Autorizado, en caso de 
equipos muestra prototipos o muestras de importación donde no pueda llevar a cabo la selección se tomarán 
los ex istentes debiendo justificar documentalmente por el interesado.  
A.10.6 Análisis microbiológicos  
Los análisis microbiológicos se realizarán determinando la concentración de microorganismos Mesófilos 
aerobios en UFC/ml de acuerdo con la Norma Oficial Mexican a citada en el inciso 3.5 del Capítulo de 
Referencias normativas, de esta Norma y la concentración de Coliformes totales de acuerdo con el Apéndice 
H Normativo, de la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.4, del Capítulo de Referencias normativas de  
esta Norma o con los métodos alternativos presentados en los Apéndices B y C Informativos, de esta Norma, 
referentes al agua tratada por los equipos y /o sustancias Germicidas.  
A.10.7 Bitácora  
El técnico de laboratorio asentará en la bitácora los registro s de los flujos de agua y presiones de partida, 
así como de los mismos en que termina diariamente. En la toma de muestras se deberán registrar en la 
bitácora los siguientes datos: fecha, hora, volumen en L de agua tratada, flujo en L por minuto y presión d e 
operación, así como el registro de las cantidades de microorganismos obtenidas antes y después del 
tratamiento.  
A.10.8 Etapas de evaluación  
Para documentar la reproducibilidad de la Eficiencia en Reducción Bacteriana y determinar su variabilidad, 
serán e valuados en paralelo con agua de prueba 1 y agua de prueba 2, dos equipos del mismo Modelo en las 
siguientes etapas de la Vida útil: al 0%, 50%, después del periodo de estancamiento de 48 h, al 75%, después 
del periodo de estancamiento de 48 h y finalmente , 100%, bajo el esquema mostrado en la Figura A.3, de esta 
Norma.  
Para documentar la reproducibilidad de la Eficiencia en Reducción Bacteriana y determinar su variabilidad, 
serán evaluadas por duplicado las sustancias Germicidas del mismo lote, agregándola s al agua de prueba 1 y 
agua de prueba 2, considerando su Caducidad de acuerdo a los estudios de estabilidad.  
Figura A.3. Verificación en operación continua de la Eficiencia en Reducción Bacteriana en equipos 
domésticos  
 
A.11. Proceso de evaluación en el banco de pruebas, de los Equipos en Sistema Continuo, por 
Lotes (Discontinuo) y de las Sustancias Germicidas, para determinar la Eficiencia en Reducción 
Bacteriana de la Vida útil.  
A.11.1 Equipos en sistema continuo  
Con base en las especificaciones que se indican en el manual o instructivo de uso y mantenimiento del 
equipo sujeto a prueba, se elabora un programa de evaluación de Eficiencia en Reducción Bacteriana de la 
Vida útil del equipo a ser evaluado, considerando:       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
La Vida útil de los componentes que da n tratamiento al agua, la sustitución de algún componente en el 
caso de que alguno de éstos tenga una Vida útil menor al equipo en su totalidad.  
El mantenimiento y/o limpieza que se debe de dar al equipo y/o sus componentes  
El flujo de agua en L por minuto  a la que se debe operar el equipo.  
Presión máxima de alimentación de agua a la que se opera el equipo.  
Cuando se opere el equipo con recirculación del agua de prueba 1 y 2 se deberán de mantener los 
parámetros ajustados (Tablas A.3 y A.4, de esta Norma), de acuerdo a la capacidad del banco de pruebas y 
gasto del equipo. En caso de no recircular el agua, se deberá de preparar la cantidad suficiente de agua de 
prueba 1 y 2 de acuerdo al gasto, presión y a los tiempos establecidos a los que operará el equipo.  
A.11.1.1 Banco de pruebas e instalación de equipos  
Verificar el adecuado funcionamiento de la instalación del banco de pruebas (válvulas, bombas, 
manómetros, etc.).  
Desinfectar el banco de pruebas y líneas de conducción con solución de Cloro al 0,2% duran te 30 minutos 
y enjuagar hasta eliminar los residuales de Cloro, se puede considerar el uso de otro desinfectante.  
Instalar en paralelo en el banco de pruebas, (sistema continuo Figura A1, de esta Norma), dos equipos del 
mismo Modelo, verificar que se encu entren debidamente armados e instalados.  
A.11.1.2 Acondicionamiento de los equipos  
Acondicionar y operar cada equipo de acuerdo con el programa elaborado para la evaluación de la 
Eficiencia en Reducción Bacteriana del equipo, considerando:  
Flujo de agua en  L/minuto: Ajustar las condiciones de flujo de acuerdo con las instrucciones 
proporcionadas por el fabricante, indicadas en el manual de uso y mantenimiento del equipo.  
Presión de alimentación de agua: Ajustar el medidor a cero, tomar las lecturas iniciale s de los dispositivos 
de medición e iniciar la presurización, hasta alcanzar la presión a la que se operará el equipo.  
Vida útil y mantenimiento o sustitución de los componentes del equipo que proporcionan tratamiento al 
agua: Se debe considerar en la prue ba, el ciclo de limpieza y/o el cambio de componentes (se deberá contar 
con los componentes necesarios que se sustituirán durante el desarrollo de la prueba).  
Tiempo de funcionamiento de los equipos: Será conforme a lo especificado por el fabricante. Si el  
fabricante no especifica el tiempo de funcionamiento diario del equipo a evaluar, éste debe ser máximo de 16 
h con un periodo de descanso de 8 h.  
A.11.1.3 Desarrollo  
Se llena el sistema de prueba, con agua de prueba 1, para purgar el aire del sistema.  
Para cada equipo, se dejan pasar dos Volúmenes vacíos de agua o lo que indique el manual y/o 
instructivo del fabricante.  
Inspeccionar el sistema hidráulico y equipos periódicamente, verificando que se encuentran debidamente 
armados e instalados, para comproba r que no se presentan fugas de agua en los 2 equipos ni en las 
conexiones y válvulas del banco de pruebas.  
El técnico de laboratorio asentará en la bitácora los registros de los flujos de agua y presiones de partida, 
así como de los mismos en que termina d iariamente.  
A.11.1.3.1 Para el 0% de la Vida útil del equipo  
Una vez iniciado el flujo de agua conforme a las indicaciones establecidas en el  programa para la 
evaluación del equipo, se harán pasar a través de los equipos por lo menos 2 volúmenes vacíos de agua de 
prueba 1.  
Posteriormente, se hacen pasar 10 volúmenes vacíos de agua de prueba 1 inoculada a través de los 
equipos  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 1 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con  un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inicial de microorganismos con los que se 
comienza.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A continuación se toman 2 muestras por equipo en el efluente (después del tratamiento de agua por el 
equipo), con un volumen de 100 ml, la inyección de la suspensión con los microorganismos en el flujo de 
alimentación continuará durante la toma de muestras hasta que el volumen sea suficiente para el análisis  de 
desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas conforme lo indicado en el inciso A.10.6, 
de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, conforme con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.1.3.2 Para el 50% de la  Vida útil del equipo  
Reiniciar el flujo de agua de prueba 1 de acuerdo con las indicaciones establecidas en el  Programa para la 
evaluación del equipo, se hará pasar ésta a través de los equipos hasta cubrir el 50% de la Vida útil.  
Posteriormente, se hacen  pasar 10 volúmenes vacíos de agua de prueba 1 inoculada a través de los 
equipos.  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 1 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (a ntes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inicial de microorganismos con los que se 
comienza.  
A continuación se toman 2 muestras por equipo en el efluente (después del tratamiento de agua por el 
equipo), c on un volumen de 100 ml, la inyección de la suspensión de los microorganismos en el flujo de 
alimentación continuará durante la toma de muestras hasta que el volumen sea suficiente para el análisis  de 
desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las mu estras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.1.3.3 Estancamiento 1  
Una vez cubierto el 50% de la Vida útil de los equipos, se tendrá un periodo de estancamiento de 48 h, es 
decir, no se hará pasar agua de prueba 1 inoculada y no inoculada. Esto permite la determinación de 
cualquier crecimiento microbiano a través del componente de tratamiento, o el paso de  microorganismos en 
reposo, cuando los equipos no estén sujetos a presión en línea.  
Terminado el periodo de estancamiento se continuará con el agua de prueba 2.  
A.11.1.3.4 Para el 75% de la Vida útil del equipo  
Reiniciar el flujo de agua de prueba 2, de ac uerdo con las indicaciones establecidas en el  programa para 
la evaluación del equipo, se hará pasar ésta a través de los equipos hasta cubrir el 75% de la Vida útil.  
Posteriormente, se hacen pasar 10 Volúmenes vacíos de agua de prueba 2 inoculada a través de los 
equipos.  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 2 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra in gresada, que dará la carga inicial de microorganismos con los que se 
comienza.  
A continuación se toman 2 muestras por equipo en el efluente (después del tratamiento de agua por el 
equipo), con un volumen de 100 ml, la inyección de la suspensión con los mic roorganismos en el flujo de 
alimentación continuará durante la toma de muestras hasta que el volumen sea suficiente para el análisis de 
desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6 , de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.1.3.5 Estancamiento 2  
Una vez cubierto el 75% de la Vida útil de los equipos, se tendrá un periodo de estancamiento de 48 h , es 
decir, no se hará pasar agua de prueba 2 inoculada y no inoculada. Esto permite la determinación de 
cualquier crecimiento microbiano a través del componente de tratamiento, o el paso de microorganismos en 
reposo, cuando los equipos no estén sujetos a presión en línea.  
Terminado el periodo de estancamiento se continuará con el agua de prueba 2.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de  octubre de 2018  
A.11.1.3.6 Para el 100% de la Vida útil del equipo  
Reiniciar el flujo de agua de prueba 2 de acuerdo con las indicaciones establecidas en el  Programa para la 
evaluación del equipo, se hará pasar ésta a través de los equipos hasta cubrir el 100% de la Vida útil.  
Posteriormente, se hacen pasar 10 volúmenes vacíos de agua de prueba 2 inoculada a través de los 
equipos.  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 2 inocul ada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inicial de microorganismos con los que  se 
comienza.  
A continuación se toman 2 muestras por equipo en el efluente (después del tratamiento de agua por el 
equipo), con un volumen de 100 ml, la inyección de la suspensión con los microorganismos en el flujo de 
alimentación continuará durante la to ma de muestras hasta que el volumen sea suficiente para el análisis de 
desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana , de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.1.4 Criterio para obtener el CEB  
El criterio para la obtención del CEB para los equipos y otros parámetros, será de acuerdo a lo indicado en 
el inciso 6.5, de esta Norma.  
A.11.1.5 Alternat iva para el cálculo de la carga microbiana en el agua de prueba  
Para sistemas continuos Figura A.1, de esta Norma, se puede calcular el flujo de solución concentrada de 
la carga bacteriana que deberá bombearse y mezclarse e inocularse en el agua de prueba 1 o 2, pueden 
realizarse los cálculos siguientes:  
 
Donde:  
CAP= Carga microbiana en el tanque de agua de prueba, UFC/ml o NMP/100 ml  
QAP = Flujo del tanque de agua de prueba, L/minuto.  
CTM = Carga microbiana en el tanque de la solución concentrada, UFC/ml  o NMP/100 ml  
QTM = Flujo de la solución concentrada, L/minuto.  
CT = Flujo total ingresado al equipo sometido a verificación, L/minuto.  
QT= Carga microbiana ingresada al equipo sometido a verificación, 1 x 104 UFC/ml   o 1.6 x 103 NMP/100 
ml 
Por lo general, los equipos domésticos operan en el intervalo de 1 -5 L/minuto, es decir que el volumen 
diario iría de 1,440 L - 7,200 L, por lo que el Flujo de la solución concentrada puede calcularse mediante:  
 
De la ecuación anterior puede observarse que la concentraci ón de la solución depende directamente del 
flujo total de operación pero inversamente proporcional al flujo de agua problema, por lo que deberá elegirse 
el factor técnico y operativamente conveniente de la relación:  
  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
 
      (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
A.11.2 Equipos por Lotes (Discont inuo)  
Con base en las especificaciones que se indican en el manual o instructivo de uso y mantenimiento del 
equipo sujeto a prueba, se elabora un programa de evaluación de Eficiencia en Reducción Bacteriana de la 
Vida útil del equipo a ser evaluado, consid erando:  
La Vida útil de los componentes que dan tratamiento al agua, la sustitución de algún componente en el 
caso de que alguno de éstos tenga una Vida útil menor al equipo en su totalidad.  
El mantenimiento y/o limpieza que se debe de dar al equipo y/o su s componentes.  
A.11.2.1 Banco de pruebas e instalación de equipos  
Verificar el adecuado funcionamiento de la instalación del banco de pruebas.  
Desinfectar el banco de pruebas y líneas de conducción con solución de Cloro al 0,2% durante 30 minutos 
y enjuaga r hasta eliminar los residuales de Cloro.  
Instalar en el banco de pruebas, dos equipos del mismo Modelo en el sistema por lotes (Figura A.2, de 
esta Norma) para documentar la reproducibilidad de la eficiencia y determinar su variabilidad, siguiendo las 
recomendaciones del fabricante y verificar que se encuentren debidamente armados e instalados, así mismo 
que no se presenten fugas en los equipos, ni en las conexiones.  
A.11.2.2 Acondicionamiento de los equipos  
Ajustar el flujo de agua, en caso de ser necesar io. 
A.11.2.3 Alternativa para probar a un equipo por lotes a un flujo continuo de agua  
De acuerdo a la Figura A.2, de esta Norma y partiendo de la carga máxima (volumen) del equipo y del 
tiempo de residencia de tratamiento del agua, se podrá establecer el modo de operación continuo.  
En un equipo por lotes se puede considerar la siguiente alternativa para probarlo a un flujo continuo de 
agua considerando como variables de operación el flujo de ingreso, tiempo de residencia y flujo de salida del 
equipo de tra tamiento, tal como se muestra en la Figura A.4, siguiente:  
 
Figura A.4. Variables de operación de un sistema por Lotes.  
 
 
Donde:  
Qi = Flujo de ingreso de agua cruda, L/minuto.  
Ci = Concentración inicial de contaminante, m/L, donde m = unidad másica resp ectiva.  
Qe = Flujo del efluente del agua tratada, L/minuto.  
Ce = Concentración residual del contaminante, m/L, donde m = unidad másica respectiva.  
 = tiempo de residencia, es el tiempo que el agua tarda en ser tratado dentro del volumen de tratamiento 
del equipo.  
Sin embargo, el tiempo de residencia (
 ) define la efectividad del Proceso puesto que el tiempo al que el 
agua es sometida al tratamiento indicado por el fabricante, por lo que puede dimensionarse la operación Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
continua del equipo manteniendo el ti empo de residencia indicado por el equipo calculando entonces los flujos 
de operación.  
El tiempo de residencia está dado por:  
 
Es decir, depende directamente del volumen de líquido (V) que el equipo puede tratar e inversamente 
proporcional al flujo del ef luente (Q e) que deberá ser el mismo para el efluente.  
Suponiendo que el equipo de la Figura A.3, de esta Norma, puede tratar 25 L de agua con un tiempo de 
residencia de 2 h, esto significa que el flujo del efluente será de:  
 
Por lo que realizando las conv ersiones correspondientes,  
 
Es decir, que mediante este flujo del influente cada unidad de volumen de agua tendrá un tiempo de 
residencia de 2 h a través del equipo, pero su factibilidad técnica dependerá del flujo mínimo de operación del 
banco de pruebas  instalado.  
A.11.2.4 Desarrollo  
Se llena el sistema de prueba, con agua de prueba 1, para purgar el aire del sistema.  
Inspeccionar el sistema hidráulico y equipos periódicamente, verificando que se encuentran debidamente 
armados e instalados.  
El técnico de  laboratorio asentará en la bitácora los registros de los flujos de agua y presiones de partida, 
así como de los mismos en que termina diariamente.  
A.11.2.4.1 Para el 0% de la Vida útil del equipo  
Una vez iniciado el flujo de agua de acuerdo con las indica ciones establecidas en el  programa para la 
evaluación del equipo, se harán pasar a través de los equipos por lo menos 2 lotes de agua de prueba 1.  
Posteriormente, se hacen pasar a través de los equipos 2 lotes de agua de prueba 1 inoculada.  
Se tomarán 2 mu estras del agua de prueba 1 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inic ial de microorganismos con los que se 
comienza.  
Se toman 2 muestras del agua tratada, después de que el volumen suficiente del agua de prueba 1 
inoculada ha pasado a través del equipo, asegurarse que la inyección de la suspensión con los 
microorganismos en  el flujo de alimentación continua durante la toma de muestras hasta que el volumen sea 
suficiente (100 ml) para el análisis de desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado  en el inciso 
A.10.6, de es ta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13 de esta 
Norma.  
A.11.2.4.2 Para el 50% de la Vida útil del equipo  
Se hacen pasar los lotes necesarios de agua de prueba 1 a través de los equipos, hasta  cubrir el 50% de 
la Vida útil  
Posteriormente, se hace pasar a través de los equipos 2 lotes de agua de prueba 1 inoculada.  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 1 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, co n un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inicial de microorganismos con los que se 
comienza.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
Se toman 2 muestras del agua tratada, después de que el volumen sufic iente del agua de prueba 1 
inoculada ha pasado a través del equipo, asegurarse que la inyección de la suspensión con los 
microorganismos en el flujo de alimentación continua durante la toma de muestras hasta que el volumen sea 
suficiente (100 ml) para el a nálisis de desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norm a. 
A.11.2.4.3 Estancamiento 1  
Una vez cubierto el 50% de la Vida útil de los equipos, se tendrá un periodo de estancamiento de 48 h, es 
decir, no se hará pasar agua de prueba 1 inoculada y no inoculada. Esto permite la determinación de 
cualquier crecimient o microbiano a través del componente de tratamiento, o el paso de microorganismos en 
reposo, cuando los equipos no estén sujetos a presión en línea.  
Terminado el periodo de estancamiento se continuará con el agua de prueba 2.  
A.11.2.4.4 Para el 75% de la V ida útil del equipo  
Se hacen pasar los lotes necesarios de agua de prueba 2 a través de los equipos, hasta cubrir el 75% de 
la Vida útil.  
Posteriormente, se hace pasar a través de los equipos 2 lotes de agua de prueba 2 inoculada.  
Se tomarán 2 muestras del  agua de prueba 2 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada, que dará la carga inicial de mic roorganismos con los que se 
comienza.  
Se toman 2 muestras del agua tratada, después de que el volumen suficiente del agua de prueba 2 
inoculada ha pasado a través del equipo, asegurarse que la inyección de la suspensión con los 
microorganismos en el flujo de alimentación continua durante la toma de muestras hasta que el volumen sea 
suficiente (100 ml) para el análisis de desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado  en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.2.4.5 Estancamiento 2  
Una vez cubierto el 75% de la Vida útil de los equipos, se tendrá un periodo de estancamiento de 48 h, es 
decir, no se hará pasar agua de prueba 2 inoculada y no inoculada. Esto permite la determinación de 
cualquier crecimiento microbiano a través del componente de tratamiento, o el paso de microorganismos en 
reposo, cuando los equipos no estén sujetos a presión en línea.  
A.11.2.4.6 Para el 100% de la Vida útil del equipo  
Se hacen pasar los lotes necesarios de agua de prueba 2 a través de los equipos, hasta cubrir el 100% de 
la Vida útil.  
Posteriormente, se hacen pasar a través de los equipos 2 lotes de agua de prueba 2 ino culada.  
Se tomarán 2 muestras del agua de prueba 2 inoculada por cada equipo (en la válvula de muestreo 
instalada en el banco de pruebas, con un volumen de 100 ml) en el influente (antes del tratamiento de agua 
por el equipo), esta es la muestra ingresada,  que dará la carga inicial de microorganismos con los que se 
comienza.  
Se toman 2 muestras del agua tratada, después de que el volumen suficiente del agua de prueba 2 
inoculada ha pasado a través del equipo, asegurarse que la inyección de la suspensión con  los 
microorganismos en el flujo de alimentación continua durante la toma de muestras hasta que el volumen sea 
suficiente (100 ml) para el análisis de desafío.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en e l inciso 
A.10.6, de esta Norma.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.2.5 Criterio para obtener el CEB  
El criterio para la obtención del CEB para los equipos y otros parámetros, será de acuerdo a lo indicado en 
el inciso 6.5, de esta Norma.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
 
 Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A.11.3 Procedimiento de la prueba para las sustancias Germicidas  
A.11.3.1 Desarrollo de la prueba, con el agua de prueba 1  
La Eficiencia en Reducción Bacteriana para las sustancias Germici das se realizará: (1). - Con un producto 
original de un lote y (2). - Para corroborar la Caducidad de la sustancia Germicida, se realizará a un producto 
del mismo lote que haya sido sometido a estudios de estabilidad efectuados a temperatura ambiente, si no 
cuenta con ellos podrá presentar un producto del mismo lote que haya sido sometido a estudios a temperatura 
acelerada, y en la renovación del CEB deberá de presentar un producto del mismo lote que haya sido 
sometido a estudio de estabilidad a temperatura a mbiente, esto nos permitirá conocer la Caducidad real de la 
sustancia. La prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana se realizará utilizando agua de prueba 1 y agua 
de prueba 2 (Tablas A.3 y A4, de esta Norma) conforme a lo siguiente:  
A dos piezas de la sustancia Germicida del mismo lote, previamente seleccionadas por el Tercero 
Autorizado, se les realizará la evaluación de Eficiencia en Reducción Bacteriana, considerando las siguientes 
especificaciones, que se indican en la etiqueta o instructivo de la s ustancia sujeta a prueba:  
Volumen de agua en L que trata la sustancia Germicida.  
Dosis del desinfectante químico (las indicadas en la etiqueta y/o instructivo de uso).  
Tiempo de contacto.  
Mezclado.  
Condiciones de almacenamiento del agua desinfectada.  
Agreg ar a dos recipientes el volumen de agua de prueba 1 Inoculada, indicado en la etiqueta o Instructivo.  
Tomar 3 muestras (con un volumen de 100 ml) del agua de prueba 1 inoculada, en cada uno de los 
recipientes (antes del tratamiento de agua por la sustancia  Germicida), esta es la muestra ingresada, que dará 
la carga inicial de microorganismos con los que se comienza.  
Agregar al agua de prueba 1 Inoculada, la dosis de la sustancia Germicida especificada en la etiqueta o 
instructivo.  
Dejar transcurrir el tiemp o de contacto indicado en la etiqueta o instructivo.  
Después de transcurrido el tiempo de contacto especificado en la etiqueta o instructivo, tomar tres 
muestras (con un volumen de 100 ml) del agua de prueba 1 inoculada y tratada por la sustancia Germicida . 
En el momento en el que se toman las muestras, el producto químico desinfectante presente en el agua 
deberá de neutralizarse inmediatamente (es decir, convertirse a una forma que carezca de actividad 
antimicrobiana), sino se sobreestimará la eliminación o inactivación microbiana, esto se realiza agregando un 
neutralizador idóneo a las muestras, según la sustancia que se trate.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.3.2 Desarrollo de la prueba, con el agua de prueba 2  
La Eficiencia en Reducción Bacteriana para las sustancias Germicidas se realizará: (1). - Con un producto 
original de un lote y (2). - Para corroborar la Caducidad de la sustancia Germicida, se realizará a un producto 
del mismo lote que haya sido sometido a estudios de estabilidad efectuados a temperatura ambiente, si no 
cuenta con ellos podrá p resentar un producto del mismo lote que haya sido sometido a estudios a temperatura 
acelerada, y en la renovación del CEB deberá de presentar un producto del mismo lote que haya sido 
sometido a estudio de estabilidad a temperatura ambiente, esto nos permit irá conocer la Caducidad real de la 
sustancia. La prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana se realizará utilizando agua de prueba 1 y agua 
de prueba 2 (Tablas A.3 y A.4, de esta Norma) conforme a lo siguiente:  
A dos piezas de la sustancia Germicida del  mismo lote, previamente muestreadas por el Tercero 
Autorizado, se les realizará la evaluación de Eficiencia en Reducción Bacteriana de la Vida útil, considerando 
las siguientes especificaciones, que se indican en la etiqueta o Instructivo de la sustancia sujeta a prueba:  
Volumen de agua en L que trata la sustancia Germicida.  
Dosis del desinfectante químico (medida en las unidades apropiadas).  
Tiempo de contacto.  
Mezclado.  
Condiciones de almacenamiento del agua desinfectada.  
Agregar a dos recipientes el vol umen de agua de prueba 2 Inoculada, indicado en la etiqueta o instructivo.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
Tomar 3 muestras (con un volumen de 100 ml) del agua de prueba 2 inoculada, en cada uno de los 
recipientes (antes del tratamiento de agua por la sustancia Germicida), esta es la mue stra ingresada, que dará 
la carga inicial de microorganismos con los que se comienza.  
Agregar al agua de prueba 2 Inoculada, la dosis de la sustancia Germicida especificada en la etiqueta o 
instructivo.  
Dejar transcurrir el tiempo de contacto indicado en l a etiqueta o instructivo.  
Después de transcurrido el tiempo de contacto especificado en la etiqueta o instructivo, tomar tres 
muestras (con un volumen de 100 ml) del agua de prueba 2 inoculada y tratada por la sustancia Germicida.  
En el momento en el que s e toman las muestras, el producto químico desinfectante presente en el agua 
deberá de neutralizarse inmediatamente (es decir, convertirse a una forma que carezca de actividad 
antimicrobiana), si no se sobreestimará la eliminación o inactivación microbiana,  esto se realiza agregando un 
neutralizador idóneo a las muestras, según la sustancia que se trate.  
Realizar el análisis microbiológico de las muestras recolectadas de acuerdo con lo indicado en el inciso 
A.10.6, de esta Norma.  
Determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana, de acuerdo con lo indicado en el inciso A.13, de esta 
Norma.  
A.11.3.3 Criterio para obtener el CEB de las sustancias Germicidas  
Las sustancias Germicidas deberán ser sometidas a prueba con el agua de prueba 1 y agua de prueba 2, 
demos trando una Eficiencia en Reducción Bacteriana igual o mayor al 95% de Mesófilos aerobios y mayor o 
igual al 99.99% de Coliformes totales.  
Cuando una de las dos sustancias Germicidas (producto del mismo lote sometido a estudios de 
estabilidad), no pase algu na prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana, no se otorgará el CEB.  
A.12. Consideraciones especiales para técnicas específicas que se deben tomar en cuenta durante 
la prueba para equipos y/o sustancias Germicidas para tratamiento doméstico de agua.  
La prueba para determinar la Eficiencia en Reducción Bacteriana depende del tipo de equipo o sustancia 
Germicida a evaluar, a continuación se muestran en las Tablas A.5, A.6, A.7 y A.8, de esta Norma, algunas 
consideraciones de las diversas técnicas para el t ratamiento doméstico de agua.  
Tabla A.5  
Técnica  Consideraciones  
Métodos combinados 
(multibarrera):  
Algunos sistemas combinados 
se comercializan en forma de 
gránulos, polvos o 
comprimidos que contienen 
un coagulante químico, como 
una sal de hierro o alumin io, y 
un desinfectante, como el 
cloro.   Si es apropiado para la técnica, podrá utilizarse la prueba por lotes.  
 Las pruebas de exposición deberán realizarse en condiciones 
aceptables y representativas respecto del volumen de agua que se ha 
de tratar (pero a l menos el mínimo de 20 L), la calidad del agua, el 
flujo (cuando se trate de un Proceso de flujo continuo), la dosis y la 
duración del tratamiento (duración del tratamiento).  
 Se deberán realizar la prueba con al menos tres valores de los 
parámetros de cal idad del agua, representativos de las condiciones 
máxima, mínima y promedio de las aguas de los lugares en los que se 
utilizará la técnica.  
 En el caso de los tratamientos combinados que incluyan un 
desinfectante químico, deberán medirse la dosis de desinfe ctante, la 
concentración residual de desinfectante en el agua tratada y el tiempo 
de contacto, y el desinfectante residual presente en el agua en el 
momento de la toma de muestras deberá neutralizarse químicamente 
antes de realizar los análisis microbiológ icos. 
 
Tabla A.6  
Técnica  Consideraciones  
Filtros de membrana o de medios porosos 
estructurados, tales como:  
 Filtros de tela o fibra.  
 Filtros de cerámica porosa (vela, olla).  
 Bloque poroso de carbón.  
 Filtros compuestos.   Los filtros de cerámica y algunos o tros filtros de 
medios porosos estructurados se limpian 
regularmente durante el uso doméstico.  En la 
prueba los  filtros se deberán limpiar siguiendo 
las recomendaciones del fabricante, en 
particular las relativas a la frecuencia y el 
método de limpieza.  
 En la evaluación de estas técnicas de filtración 
no deberán aplicarse a los filtros durante su 
limpieza desinfectantes ni otros agentes 
antimicrobianos. Si se recomienda el uso de 
desinfectantes se deben incluir en la categoría 
de técnicas «multibarrera».  
 Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Filtros de medio granular:  
Están formados por lechos de relleno, capas o 
superficies, que contienen arena, tierra de 
diatomeas u otro medio constituido por partículas, 
sobre los que se vierte o por los que se hace pasar 
el agua.   La mayoría de los filtros d e medio granular han 
de someterse a retro lavado u otro tipo de 
limpieza periódica del filtro, por lo que durante la 
prueba deberán realizarse siguiendo las 
recomendaciones del fabricante.  
 Se recomienda que la duración de la prueba 
para la evaluación de la  técnica abarque al 
menos un lote de tratamiento del filtro, con una 
etapa de limpieza, por ejemplo mediante retro 
lavado o rastrillado y decantación de la 
superficie de la arena, y el periodo posterior de 
operación del filtro hasta el final de la operació n 
o lote de tratamiento del filtro antes de la 
siguiente etapa de limpieza o mantenimiento.  
 Los filtros de medio granular con actividad 
biológica, como los filtros lentos de arena de uso 
intermitente, pueden «madurar» con el tiempo, y 
la eficiencia de este  tratamiento en la reducción 
de la carga de algunas bacterias puede no 
alcanzar su valor máximo u óptimo hasta que el 
filtro haya alcanzado su maduración biológica, 
en la prueba, la reducción de la carga bacteriana 
puede experimentar un aumento considerabl e 
después de un período de prueba mínimo de 14 
días debido a que el filtro aún estaba madurando 
y no había alcanzado su estado de eficiencia 
máxima. Para este tipo de filtros, debe 
recopilarse información sobre la eficiencia de la 
técnica obtenida en prueb as periódicas 
realizadas durante un periodo prolongado de 
uso para representar mejor la capacidad de 
reducción de la carga bacteriana del filtro en el 
entorno previsto y cuando se indique o prevea 
habitualmente el uso durante periodos largos 
(por ejemplo, varios meses por ciclo de 
operación del filtro).  
 
Tabla A.7  
Técnica  Consideraciones  
Técnicas de irradiación UV  (con LED y otros 
tipos de lámparas), tales como:  
 Lámparas de UV  
 Lámparas de vapor de mercurio a presión baja 
que producen radiación UV monocrom ática a 
una λ Germicida de 254nm.   Si el Proceso de tratamiento UV se realiza en un 
reactor de flujo continuo y el flujo puede variar 
en un intervalo especificado, las pruebas con 
agua inoculada se deberán realizar por 
duplicado, a los flujos promedio, máxim o y 
mínimo, para documentar la variación de la 
eficacia Germicida en todo el intervalo de flujos.  
 Deben seguirse las recomendaciones de uso del 
fabricante, en particular las relativas a las 
propiedades específicas de las lámparas, la 
potencia de entrada, e l recipiente de tratamiento 
del agua, el reactor de tratamiento, la orientación 
de las lámparas con respecto al agua sometida 
a tratamiento, la intensidad de la radiación UV 
incidente (en mW/cm2 u otras unidades 
pertinentes), la dosis estimada de UV 
admini strada (fluencia, basada en la intensidad y 
el tiempo de exposición), en unidades 
Normalizadas (por ejemplo, en mJ/cm2), y el 
flujo.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
 Los adenovirus son más resistentes a la 
desinfección por radiación UV que cualquier otro 
virus substituto no patógeno conoc ido. 
 El colífago substituto MS2 es relativamente 
resistente a la radiación UV y se puede utilizar 
para evaluar la Eficiencia de las técnicas de 
Tratamiento doméstico de agua por desinfección 
mediante radiación UV.  
 
Técnicas térmicas (basadas en el 
calent amiento):  
El calor se produce quemando combustible. El 
agua se hierve o se somete a condiciones de 
pasteurización (Normalmente > 63°C durante 30 
minutos).   Si el Proceso es un reactor de flujo continuo, 
deberán seguirse las instrucciones del fabricante 
relativas a las condiciones de funcionamiento.  
 En los Procesos de tratamiento térmico, el agua 
tratada tarda cierto tiempo en alcanzar la 
temperatura objetivo y cierto tiempo en enfriarse 
hasta la temperatura de consumo. Por lo tanto, 
deberá registrarse la evo lución de la 
temperatura del agua sometida a tratamiento, y 
los cambios de temperatura deberán 
compararse con los valores aceptables 
especificadas por el fabricante.  
 La velocidad y el grado de inactivación 
microbiana dependen de las condiciones de 
tiempo y  temperatura, de modo que es 
fundamental documentarlas en la evaluación de 
la Eficiencia en Reducción Bacteriana.  
 En la prueba se deberán utilizar condiciones de 
tiempo y temperatura consideradas aceptables 
de acuerdo con las especificaciones del 
fabricant e y que además sean representativas 
de las condiciones en que se usará la técnica.  
 
Tabla A.8  
Técnica  Consideraciones  
Desinfección química:  
 Yodo, oxidante fuerte en soluciones acuosas, 
comprimidos o resinas de polímeros sintéticos 
yodadas que liberan yod o activo lentamente 
(comprimidos de hidroperyoduro de tetraglicina 
que liberan yodo libre al agua).  
 Dióxido de cloro, así como de bromo, ozono u 
otros oxidantes.  
 Ácidos y bases fuertes.  
 Ferratos.  
 Metales antimicrobianos (plata y el cobre en 
forma soluble o  coloidal, o partículas metálicas 
solidas más grandes).  
 Cloro y Cloro libre (ácido 
hipocloroso/hipoclorito en solución o 
comprimidos).  
 Oxidantes clorados (diclorocianuratos, 
tricloroisocianuratos, cloraminas).   Se debe poner cuidado en preparar los cultivos  
concentrados de los microorganismos que se 
van a añadir de forma que no generen un 
exceso de demanda de cloro en el agua de 
prueba.  
 Puede ser preciso purificar los cultivos 
microbianos para reducir su demanda de cloro 
(u otro desinfectante usado en la pru eba) antes 
de añadirlos a las muestras en los estudios.  
 Es especialmente importante medir el pH del 
agua de la prueba, así como las 
concentraciones de ciertos solutos, dado que la 
eficacia Germicida de algunos desinfectantes 
químicos, como el cloro libre y  el dióxido de 
cloro, es distinta a pH bajo y a pH alto. La 
eficacia Germicida del cloro libre es mayor si 
actúa en forma de ácido hipocloroso, 
predominante a pH bajo ( < 6) que si actúa en 
forma de ion.  
 Hipoclorito, predominante a valores de pH más 
altos ( 9). Por el contrario, el efecto viricida del 
dióxido de cloro es mayor a pH alto que a pH 
bajo. Además, los solutos que reaccionan con el 
cloro libre, como el amoniaco y los compuestos 
orgánicos, puede hacer que disminuya la 
concentración de cloro libre  residual y reducir  la Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
actividad Germicida.  
 El efecto Germicida de las cloraminas, que se 
forman por la reacción de cloro libre con 
amoniaco, es menor que la del cloro libre, y el 
efecto Germicida de los compuestos orgánicos 
clorados resultantes de la rea cción del cloro con 
la materia orgánica natural es nulo.  
 
Coagulación -floculación y sedimentación:  
Algunos sistemas combinados se comercializan: en 
forma de gránulos, polvos o comprimidos que 
contienen un coagulante químico, como una sal de 
hierro o alumi nio, y un desinfectante, como el cloro.   Deberán tenerse en cuenta la dosis de 
coagulante (en su caso), las condiciones  de 
mezclado (por ejemplo, el método de agitación) 
y el método especificado recomendado para 
eliminar los flóculos del agua tratada (filt ración 
física, sedimentación, decantación, etc.).  
 La prueba se deberá realizar con los volúmenes 
de agua tratada especificados por el fabricante. 
Estos volúmenes se pueden basar en la unidad 
del tratamiento químico que se proporciona (por 
ejemplo, un compr imido o sobre).  
 Para el funcionamiento eficaz de los Procesos 
de coagulación -floculación pueden ser 
fundamentales las condiciones del mezclado 
(por ejemplo, la velocidad y la duración), así 
como la duración de la sedimentación posterior. 
Por consiguiente, la prueba se deberá realizar 
en las condiciones especificadas por el 
fabricante.  
 
Para equipos con medios de filtración y en función del tamaño de partícula mostrada en la Figura A.5, de 
esta Norma, el agua de prueba 1 o 2 no debería representar problema  alguno en su operación o desempeño. 
Es importante puntualizar que el objetivo primario de esta Norma es la verificación y, de ser el caso, 
aprobación de equipos y tecnologías para la calidad microbiológica del agua suministrada para uso doméstico 
a nivel bacteriano o hasta parasitario; sin embargo, para la remoción de contaminantes específicos como virus 
o compuestos coloidales, orgánicos e inorgánicos disueltos y que no pueden ser removidos por sistemas de 
tratamiento convencionales que por lo regular son  más económicos, existen las tecnologías denominadas 
como tecnologías de membranas.  
Las tecnologías de membranas que incluye la micro, ultra y nanofiltración así como la ósmosis inversa, por 
lo general se emplean para flujos de suministro en localidades me dias o grandes, como alternativa o 
complemento a un Proceso de potabilización convencional en sistemas de abastecimiento públicos y privados, 
o cuando se presentan problemas de intrusión salina en acuíferos sobreexplotados, o cuando la única y 
factible fue nte de agua es la procedente de los mares.  
Las tecnologías de membranas son eficientes y por lo general de infraestructura menor o compacta, y 
aunque sus costos en los últimos 10 años se han reducido drásticamente, siguen siendo de alta inversión, de 
perso nal especializado y de infraestructura superior a los Procesos convencionales. Factores como la dureza 
y el pH tienen especial efecto en el desempeño de las tecnologías; asimismo el Proceso de tratamiento del 
agua implica su posterior estabilización que le  devuelve la concentración de SDT que la OMS en las Guías de 
Calidad del Agua edición 2014 http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/44584/1/9789241548151_eng.pdf, 
establece en 600 mg/l como límite máximo permisible en el Agua para uso y consumo humano, tal  Proceso de 
estabilización también incluye el ajuste de la alcalinidad y el pH, que se realiza con óxido de calcio y otros 
polímeros o químicos que no están o pueden no estar presentes naturalmente en los cuerpos de agua 
sometidos a tratamiento; por lo que  pruebas de tratabilidad para cada tipo de agua deberán ser realizadas.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
Figura A.5. Otra consideración especial está en función del tamaño de partícula del contaminante, 
lo que dependerá el paso de agua de prueba 1 o 2.  
 
Long Term 1 Enhanced Surface Water  Treatment Rule (LT1ESWTR) Disinfection Profiling and 
Benchmarking Technical Guidance Manual (PDF)  
https://nepis.epa.gov/Exe/ZyPDF.cgi?Dockey=20002649.txt  
A.12.1 Otras técnicas  
Para todas aquellas técnicas que sean creadas para el tratamiento doméstico de agua y que no se 
contemplan en esta Norma, debido al constante crecimiento en el desarrollo tecnológico e investigación, 
deberán realizar la prueba de eficiencia en reducción bacteriológica, para la protección de la salud pública.  
A.13 Cálculos para la Efi ciencia en Reducción Bacteriana  
Considerando la media aritmética de las muestras (duplicado para equipos y triplicado para sustancias 
Germicidas) del agua de prueba inoculada sin tratar y agua tratada, se tiene:  
A.13.1  El Porcentaje en Reducción Bacteriana  de Mesófilos Aerobios (% RBMA) se calcula como 
sigue:  
 
En donde:  
APST : Agua de prueba inoculada sin tratar en UFC/ml.  
APT: Agua de prueba tratada en UFC/ml.  
A. 13.2  El Porcentaje en Reducción Bacteriana de Coliformes Totales (% RBCT) se calcula  como 
sigue: 
 
En donde:  
APST : Agua de prueba inoculada sin tratar en NMP/100 ml o UFC/ml.  
APT: Agua de prueba tratada en NMP/100 ml o UFC/ml.  
A.14. Resultados para la Eficiencia en Reducción Bacteriana  
La prueba será aceptable para cada equipo o sustancia Germicid a, si la Eficiencia en Reducción 
Bacteriana es de 95% para Mesófilos aerobios y 99.99% para Coliformes totales en las aguas de prueba 
después del tratamiento.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
A.15. Reporte  
A.15.1 El reporte de la Eficiencia en Reducción Bacteriana emitido por el Tercero A utorizado debe 
contener la siguiente información:  
A.15.1.1 Que indique que el equipo sometido a prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana se 
seleccionó en las instalaciones del usuario, por personal del laboratorio que realizó la prueba de eficiencia, 
presentar reporte de cadena de custodia;  
A.15.1.2 Que indique específicamente la Norma utilizada para determinar la concentración de (1).- 
organismos Mesófilos aerobios, así mismo (2).- Norma utilizada para determinar la concentración bacterias 
Coliformes t otales;  
A.15.1.3 Que indiquen el Nombre Comercial, número de Modelo, de acuerdo con el nombre señalado en 
la información técnica;  
A.15.1.4 Que indique el Nombre, No. de Modelo,  No. de serie de cada uno de los componentes que 
proporcionan tratamiento al agu a del equipo al que se le practicó la prueba de Eficiencia en Reducción 
Bacteriana ; 
A.15.1.5 Indicar que se utilizó como microorganismo de prueba la cepa Escherichia Coli ATCC 11229;  
A.15.1.6 Incluir los resultados de la concentración de organismos Mesófil os aerobios y la concentración de 
organismos Coliformes totales, de las muestras de agua de prueba sin tratar y de las muestras de agua 
tratada;  
A.15.1.7 Que la prueba de Eficiencia en Reducción Bacteriana se realizó de acuerdo con el Proceso 
descrito en e l Instructivo o Manual del usuario;  
A.15.1.8 Infraestructura utilizada en el Proceso de evaluación de los equipos para tratamiento doméstico 
de agua, o sustancias Germicidas, incluyendo evidencia fotográfica del banco de pruebas, y  
A.15.1.9 Presentar Origi nal de resultados.  
A.15.2 El reporte de estudio de eficiencia en reducción de otros parámetros a reducir y/o eliminar por un 
Equipo para tratamiento doméstico de agua y/o sustancia Germicida emitido por el laboratorio seleccionado 
debe contener la siguient e información:  
A.15.2.1 Introducción;  
A.15.2.2 Objetivos;  
A.15.2.3 Nombre de cada parámetro que reduce y/o elimina el Equipo para tratamiento doméstico de agua 
y/o sustancia Germicida;  
A.15.2.4 La metodología (descripción del Proceso de evaluación de los e quipos para tratamiento 
doméstico de agua), incluyendo un diagrama de flujo;  
A.15.2.5 Concentración máxima de eliminación y/o remoción por cada parámetro manifestado en su 
escrito a las cuales se sometieron los equipos para demostrar su eficiencia;  
A.15.2. 6 Etapas de L de agua tratada por los equipos, a las que se realizaran las pruebas de eficiencia en 
reducción de los parámetros en comento (0, 50, 75 y 100% de la Vida útil y los adicionales que requiera la 
persona física o moral);  
A.15.2.7 Infraestructura  utilizada en el Proceso de evaluación de los equipos para tratamiento doméstico 
de agua, o sustancias Germicidas, incluyendo evidencia fotográfica del banco de pruebas;  
A.15.2.8 Técnicas y métodos analíticos utilizados y su descripción;  
A.15.2.9 Cronogram a de actividades;  
A.15.2.10 Incluir soporte técnico: límites de detección y cuantificación, cromatogramas y curvas de 
calibración, cuando aplique;  
A.15.2.11 Incluir los resultados del análisis de los parámetros indicados en las Tablas A.3 y A.4, de esta 
Norma, realizados por el laboratorio Tercero Autorizado por COFEPRIS, correspondientes a las aguas de 
prueba 1 y 2;  
A.15.2.12 Resultados del estudio firmados por la persona responsable del Laboratorio;  
A.15.2.13 Conclusiones, y  
A.15.2.14 Evidencia documental  (copia del certificado) que indique que el Laboratorio seleccionado o 
institución pública o privada cuenta con un sistema de gestión de calidad ISO 17025 (Requisitos generales 
para la competencia de los laboratorios de ensayos y calibración (https://www.i so.org/obp/ui/#iso:std:iso -
iec:17025:ed -2:v1:es) o NMX -EC-17025 -IMNC -2006 2006 Requisitos generales para la competencia de los 
laboratorios de ensayo y de calibración 
(http://integra.cimav.edu.mx/intranet/data/files/calidad/documentos/externos/NMX -EC-17025 -IMNC -2006.pdf) 
de buenas prácticas de laboratorio.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE B INFORMATIVO  
Determinación de organismos Coliformes totales y Escherichia coli   Método del sustrato cromogénico  
B.1 Introducción  
La determinación de organismos coliformes por medio del sustrato cromogénico, se fundamenta en el uso 
de sustratos cromogénicos hidrolizables para la detección de enzimas de bacterias coliformes. Cuando se 
utiliza esta técnica, el grupo se define como todas las bacterias que poseen la enzima ß -D-galactosidasa y 
son capa ces de romper el sustrato cromogénico, dando como resultado una liberación del cromógeno. A 
diferencia del método de fermentación de lactosa que permite el crecimiento de muchos organismos aeróbicos 
y elimina o suprime algunos no coliformes con inhibidores  químicos, esta técnica provee nutrientes que son 
más selectivos y específicos para el crecimiento de coliformes. La prueba puede usarse tanto en tubos 
múltiples como en formato presencia -ausencia (muestras individuales de 100 ml). La obtención de resultad os 
válidos requiere la aplicación estricta de los procedimientos de control de calidad.  
B.2 Principio  
El sustrato cromogénico tal como el orto -nitrofenil -ß-D galactopiranósido u otro equivalente, es empleado 
para detectar la enzima ß -D-galactosidasa, la cu al es producida por bacterias Coliformes totales. La enzima  
ß-D-galactosidasa hidroliza al sustrato y provoca un cambio de color, el cual indica y sustenta una prueba 
positiva después de 24 a 28 h sin procedimientos adicionales. Las bacterias no Coliforme s, tales como las 
especies del género Aeromonas y Pseudomonas , que producen pequeñas cantidades de la enzima  ß-D-
galactosidasa, son suprimidas y no pueden producir una respuesta positiva durante las 28 h a menos de que 
más de 1X104 UFC por ml estén presen tes. 
B.3 Aplicaciones  
La prueba de coliformes con sustrato cromogénico se recomienda para el análisis de muestras de agua 
potable, agua purificada o agua limpia proveniente de cualquier fuente.  
Las muestras de agua que contienen materiales húmicos o de otr o tipo pueden estar coloreadas. Si hay 
color de fondo, se comparan los tubos inoculados con un tubo de control conteniendo únicamente muestra de 
agua. Ciertas aguas con alto contenido de sales de calcio pueden causar precipitación, pero ésta no debe 
afecta r la reacción.  
La prueba del sustrato cromogénico no se usa para verificar siembras presuntivas de coliformes o colonias 
de filtración con membrana porque el sustrato puede ser sobrecargado por el inóculo pesado de  ß-D-
galactosidasa débil producido por no -coliformes, causando resultados falsos positivos.  
En lo que se refiere a Escherichia coli , un sustrato fluorogénico como el 4 -metilumbeliferil -ß-D-glucorónido 
es utilizado para detectar la enzima ß -glucoronidasa, la cual es producida por E. coli . La enzim a  ß-
glucoronidasa hidroliza el sustrato, produciendo fluorescencia cuando el líquido es expuesto a la luz UV de 
onda larga (366 nm). La presencia de fluorescencia indica una respuesta positiva para E. coli . Algunas 
Shigella spp  también pueden producir una  respuesta positiva. Debido a que Shigella spp  son reconocidas 
como patógenas humanas, no están consideradas como perjudiciales para probar la calidad sanitaria del 
agua.  
B.4 Formulación del sustrato  
Las formulaciones del sustrato se presentan comercialmen te en tubos para el procedimiento de tubos 
múltiples o en recipientes para muestras de 100 ml para la determinación de presencia/ausencia. También 
son aprovechables porciones pre pesadas del reactivo para mezclar y dosificar en tubos múltiples para 
pruebas  de 10 ml u otros recipientes para muestras de 100 ml. Se debe evitar la exposición prolongada del 
sustrato a la luz directa del sol.  
La formulación en polvo contiene los siguientes compuestos anhidros (por L de sustrato preparado).  
Sulfato de amonio (NH 4)2SO 4 5,00 g  
Sulfato de manganeso, MnSO 4 0,0005 g  
Sulfato de zinc, ZnSO 4 0,0005 g  
Sulfato de magnesio, MgSO 4 0,10 g  
Cloruro de sodio, NaCl  10,0 g  
Cloruro de calcio, CaCl 2 0,05 g  
Sulfito de sodio, Na 2SO 3 0,04 g  
Amfotericina B  0,001 g  
O-Nitrofenil -ß-D-galactopiranósido  0,50 g  
4-Metilumbeliferil -ß-D-glucorónido  0,075 g  
Solanio  0,50 g  
Buffer Hepes de sal de sodio  5,3 g  
Buffer Hepes de ac, orgánicos  6,9 g   Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
B.5 Procedimiento  
B.5.1  Procedimiento de tubos múltiples. Seleccione el número apropiado de tub os por muestra con medio 
predosificado para la prueba de tubos múltiples y rotule. Siga las instrucciones del fabricante para preparar la 
serie de diluciones. Asépticamente, adicione 10 ml de muestra a cada tubo, tape herméticamente y agite 
vigorosamente p ara disolver. La mezcla resultante es incolora. Algunas partículas pueden resultar insolubles 
durante la prueba, esto no afectará su desarrollo.  
El procedimiento también puede ser desarrollado con la adición de cantidades apropiadas del sustrato 
reactivo a  la muestra, mezclando vigorosamente y dosificando en cinco o diez tubos estériles. Incube a 
35±0,5°C por 24 h.  
B.5.2  Procedimiento de presencia/ausencia. Adicione asépticamente sustrato enzimático prepesado a 100 
ml de muestra en un vaso, estéril, transpa rente, no fluorescente de borosilicato o en una botella o recipiente 
equivalente. Opcionalmente adicionar 100 ml. de muestra al sustrato enzimático en un recipiente provisto por 
el fabricante. Tape asépticamente y mezcle vigorosamente para disolver. Incube  a 35+0,5°C por 24 h.  
B.6 Interpretación  
Después de 24 h de incubación examine si existe cambio de color en los tubos o recipientes. Cuando el 
sustrato es orto -nitrofenil -ß-D-galactopiranósido es hidrolizado por la enzima de la bacteria para producir 
orton itrofenol amarillo; algunos sustratos usados en otras formulaciones pueden producir respuestas de 
diferente color. La respuesta cromogénica descrita es una reacción positiva para Coliformes totales. Si el 
cambio de color no es uniforme en todo el tubo, mez cle por inversión antes de la lectura. Comparar cada tubo 
nuevamente con el comparador de color disponible de la fuente comercial del sustrato. Si la intensidad del 
color es mayor o igual a la del comparador, los Coliformes totales están presentes.  
Las mue stras son negativas para Coliformes totales si no se observa color. Si la respuesta cromogénica 
es cuestionable después de 24 h, incube 4 h más. Si se intensifica el cromógeno, la muestra es positiva para 
Coliformes totales; si no sucede esto, la muestra e s negativa.  
Incidir luz UV para la presencia de E. coli , la muestra será positiva si se observa fluorescencia en las 
celdas positivas para Coliformes totales.  
B.7 Reporte  
Si se desarrolló el procedimiento de NMP, calcular el valor de NMP del número de tubo s o celdas 
positivos, de acuerdo con las tablas de NMP, correspondientes al sistema utilizado. Si se utiliza el 
procedimiento de presencia/ausencia, reportar resultados de Coliformes totales presentes a ausentes en 100 
ml de muestra.  
B.8 Control de calidad  
Pruebe cada Lote de sustrato comercial desarrollando la prueba por inoculación con tres bacterias de 
control; Escherichia coli , otra Coliforme total diferente a E. coli  (por ejemplo Enterobacter cloacae )) y una no 
coliforme. Evite el uso de inóculos pesad os. Si se usan Pseudomonas  como el no coliforme representativo, 
seleccione una especie no fluorescente. Incube estos controles a 35 ± 0,5°C por 24 h. Lea y registre los 
resultados.  
B.9 Bibliografía  
Edberg. S.C., M.J. Allen, D.B. Smith & the National Collab orative Study, 1988. National field evaluation of a 
defined substrate method for the simultaneous enumeration of total coliforms and Escherichia coli  from 
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American Water Works Research Foundation, Denver, Co.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE C INFORMATIVO  
Determinación de bacterias Coliformes totales y Coliformes fecales  Método de filtración por membrana  
C.1 Fundamento  
Este método se basa en la filtración de una muestra para concentrar células viables sobre la superficie de 
una membrana y transferirlas a un medio de cultivo apropiado, para posteriormente contar el número de UFC 
desarrolladas después de la incubación.  
C.2 Material  
C.2.1 Autoclave con termómetro y manómetro, capaz de alcanzar temperatura de esterilización de  121 ± 
2°C (a 15 psi), probado con termómetro y manómetro de máximas respectivamente;  
C.2.2 Material para envolver esterilizable (papel kraft, bolsas de polímero resistentes al calor, otros);  
C.2.3 Membranas para filtración, estériles, con poro de 0,45 milimicras y cojinetes absorbentes de 47 mm 
de diámetro;  
C.2.4 Sistema de filtración;  
C.2.5 Siste ma de luz UV para esterilización de las unidades de filtración;  
C.2.6 Bomba de vacío (20 -27 pulgadas Hg), tubería y aditamentos herméticos para mantener el vacío;  
C.2.7 Matraz Kitazato;  
C.2.8 Cajas Petri desechables o de vidrio estériles de 50 x 90 mm;  
C.2.9 Marcador indeleble o equivalente;  
C.2.10 Pinzas de acero inoxidable;  
C.2.11 Propipeta de 50 ml de capacidad;  
C.2.12 Botellas de borosilicato con capacidad de 150 ml y tapa de rosca;  
C.2.13 Pipetas serológicas de 1, 2, 5, 10 y 25 ml de capacidad, estéril es y protegidas con tapón de 
algodón;  
C.2.14 Utensilios estériles como: cucharas, cucharones, picahielos, destapadores, abrelatas, entre otros;  
C.2.15 Microscopio estereoscópico, óptico o equivalente;  
C.2.16 Incubadora de aire, con circulación mecánica, pa ra operar a una temperatura de 35 ± 2°C;  
C.2.17 Contador mecánico o manual de Tally;  
C.2.18 Recipientes estériles para muestras (frascos, botellas, jarras, bolsas, otros);  
C.2.19 Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g;  
C.2.20 Porta asa y asa bacterio lógica, y  
C.2.21 Portaobjetos.  
C.3 Reactivos y medios de cultivo  
C.3.1 Agar cuenta estándar  
Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabricante o por ingredientes:  
C.3.1.1 El pH final debe ser de 7.0 ± 0,2 después de esterilizar a 121º C durante 15 mi nutos.  
C.3.2 Agar ENDO LES  
C.3.2.1 Composición agar ENDO LES  
Ingredientes  Cantidad (g)  
Extracto de levadura  1,2 
Casitona o tripticasa  3,7 
Tiopeptona o tiotona  3,7 
Triptosa  7,5 
Lactosa  9,4 
Fosfato ácido de potasio - K2HPO 4 3,3 
Fosfato de potasio - K3PO 4 1,0 
Cloruro de sodio - NaCI  3,7 
Desoxicolato de sodio  0,1 
Lauril sulfato de sodio  0,05 Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
Sulfito de sodio - Na2SO 3 1,6 
Fucsina básica  0,8 
Agar  15,0 
Agua grado reactivo  1000,0 ml  
 
C.3.2.2 Preparación  
Rehidratar el medio en un L de agua que conteng a 20 ml de etanol no desnaturalizado al 95% (lo cual 
reduce el crecimiento y el tamaño de la colonia). Llevar hasta ebullición para disolver el agar, retirar del calor y 
enfriar a 45 -50ºC. No esterilizar en autoclave. El pH final debe ser 7,0 ± 0,2. Distri buir en cantidades de 5 a 7 
ml en cajas de Petri de 60 mm de vidrio o plástico. Si se utilizan placas de otro tamaño, ajustar la cantidad de 
medio. No exponer las placas a la luz directa del sol. Almacenar en la oscuridad de 4 a 8ºC, preferiblemente 
en bol sas de plástico selladas u otros recipientes para reducir la pérdida de humedad. Descartar el medio que 
no se utilizó después de 2 semanas.  
C.3.3 Medio ENDO  
C.3.3.1 Composición medio ENDO  
Ingredientes  Cantidad (g)  
Triptosa o polipeptona  10,0 
Tiopeptona o  tiotona  5,0 
Casitona o tripticasa  5,0 
Extracto de levadura  1,5 
Lactosa  12,5 
Cloruro de sodio - NaCI  5,0 
Fosfato ácido dipotásico - K2HPO 4 4,375  
Fosfato dihidrógeno potásico KH 2PO 4 1,375  
Lauril sulfato de sodio  0,05 
Desoxicolato de sodio  0,10 
Sulfito de sodio - Na2SO 3 2,1 
Fuscina básica  1,05 
Agar (opcional)  15,0 
Agua grado reactivo  1000,0 ml  
 
C.3.3.2  Rehidratar el medio en un L de agua que contenga 20 ml de etanol al 95%. Calentar hasta 
ebullición para disolver el agar, retirar del calor y enfr iar entre 45 -50ºC. Distribuir en cantidades de 5 a 7 ml a 
cajas de Petri desechables o de vidrio de 60 mm de diámetro. No esterilizar en autoclave. El pH final debe ser 
de 7,1 -7,3. 
C.3.3.3 Almacenar el medio (Caldo o Agar) en la oscuridad de 4 a 8ºC y desc arte cualquier caldo de medio 
sin usar después de 96 h y el agar sin usar después de 2 semanas.  
C.3.3.4 Medio líquido: 2 ml por placa, sin agar; se puede usar un cojinete absorbente si está certificado, 
libre de sulfito u otro agente tóxico a una concentra ción que pueda inhibir el desarrollo bacteriano.  
C.4 Procedimiento  
Generalmente, el enriquecimiento del medio de cultivo puede mejorar la valoración de la calidad del agua 
para beber. Sin embargo, este paso puede eliminarse en el análisis de rutina de este  tipo de agua ya que 
varios estudios mostraron que se obtienen resultados adecuados por la técnica simple de filtración por 
membrana en un solo paso. Sin embargo, se recomienda que, en lo posible, se verifiquen todas las muestras 
de agua que den resultados  positivos.  
C.4.1 Selección del tamaño de muestra  
El tamaño de muestra lo determina la densidad bacteriana, lo cual en muestras de agua para beber estará 
limitado sólo por el grado de turbiedad o por el crecimiento de bacterias no coliformes sobre el medio .  El 
volumen de muestra sugerida para prueba de Coliformes totales y coliformes fecales por esta técnica es de 
100 ml.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
C.4.2 Filtración de la muestra  
Utilizando pinzas estériles, colocar una membrana estéril (cuadriculado hacia arriba) sobre el portafiltr o 
poroso. Cuidadosamente coloque el embudo sobre el receptáculo y asegúrelo en su lugar. Filtre la muestra 
bajo vacío parcial, con el filtro aún en su lugar, enjuague el embudo mediante la filtración de tres porciones de 
20 a 30 ml de solución buffer estér il. Una vez complementado el enjuague final y que el Proceso de filtración 
haya concluido, quitar el embudo e inmediatamente después retire la membrana con pinzas estériles y 
colóquela sobre el medio selectivo con un movimiento circular a fin de evitar la entrada de aire. Meter un 
control de 100 ml de solución buffer estéril cada 10 muestras para estudiar una posible contaminación cruzada 
o buffer contaminado. Incubar el control bajo las mismas condiciones de la muestra.  
Usar unidades de filtración estérile s al principio de cada serie de filtraciones, como precaución mínima 
para prevenir contaminación accidental. Una serie de filtraciones se considera cuando hay un intervalo de 
interrupción de 30 minutos o más entre cada filtración de muestras. Después de ta les interrupciones, tratar 
cualquier muestra como una serie de filtración y esterilizar toda la unidad de filtración en uso. Descontaminar 
este equipo entre filtraciones sucesivas, ya sea por medio de luz UV o esterilizando apropiadamente en 
autoclave de a cuerdo con las características del equipo. No exponer la preparación de cultivo con el filtro de 
membrana al rango de radiación UV que pueda salir de la cabina de esterilización. Se recomienda protegerse 
los ojos, pueden usarse lentes de seguridad o de vid rio prescritos para la adecuada protección contra la luz 
UV de la columna de esterilización. Limpie el tubo de UV regularmente y cheque periódicamente su 
efectividad para asegurar que haya un 99,99% de muerte bacteriana en 2 minutos de exposición.  
C.4.3 Té cnica de enriquecimiento  
Colocar un cojinete absorbente en una caja de Petri estéril y pipetear 1,8 a 2,0 ml de caldo lauril triptosa 
para saturar el cojinete. Cuidadosamente remueva cualquier exceso de líquido del cojinete. Asépticamente 
colocar sobre el cojinete una membrana a través de la cual se haya filtrado una muestra de agua, incubar la 
membrana sin invertir la caja durante 15 a 20 h a 35 ± 0,5ºC en una atmósfera de 90% de humedad relativa.  
Si se usa el medio de agar base tipo ENDO, remover el enriq uecimiento de la incubadora, separar la 
membrana del cojinete con el enriquecimiento y colocar sobre la superficie del agar. La colocación incorrecta 
de la membrana a su vez se pone de manifiesto, porque partes de la membrana no se tiñen, lo cual indica 
entrada de aire. Donde suceda esto, cuidadosamente vuelva a colocar la membrana sobre la superficie de 
agar. Si se usa medio líquido, colocar un cojinete estéril nuevo en el fondo de la caja y saturar con 1,8 a 2,0 ml 
de medio M -ENDO; separar la membrana del  cojinete con el enriquecimiento y colocar sobre la superficie del 
M-ENDO, con las precauciones antes descritas. Descartar el cojinete de enriquecimiento utilizado.  
A continuación, con el medio ya sea agar o líquido (con cojinete), invertir las placas e in cubar de 20 a 22 h 
a 35 ± 0,5ºC.  
C.4.4 Técnica alternativa directa en paso simple  
Si se usa medio de agar base, colocar la membrana después de filtrar la muestra de agua, directamente 
sobre el agar como se describió anteriormente en el inciso C.4.3, de est a Norma e incubar durante 24 ± 2 h a 
35 ± 0,5ºC.  
Si se usa medio líquido, colocar un cojinete sobre la placa y saturar con 1,8 a 2,0 ml de medio M -ENDO. 
Colocar la membrana después de filtrar la muestra de agua, directamente sobre el cojinete; invierta la caja e 
incube durante 24 ± 2 h a 35 ± 0,5ºC.  
C.4.5  Conteo: para determinar la cuenta de colonias sobre el filtro de membrana, usar un microscopio 
binocular de disección de bajo poder (10 a 15 aumentos) u otro aparato óptico similar, con lámpara 
fluorescent e de luz blanca perpendicular, tanto como sea posible al plano del filtro.  
Las colonias típicas de Coliformes totales tienen color rojo oscuro con brillo metálico. El área brillante 
puede variar de tamaño, con brillo en la parte superior de la colonia o ha sta cubrir su superficie total, las 
colonias atípicas de coliformes pueden ser rojo oscuro o nucleadas sin brillo. Las colonias que no tengan brillo 
pueden ser rosas, rojas, blancas o incoloras y se consideran no coliformes. No existe correlación entre la 
cuenta de colonias (coliformes o no coliformes) sobre el medio tipo ENDO y el número total de bacterias 
presentes en la muestra original. Sin embargo, una cuenta alta de bacterias no coliformes puede interferir con 
el máximo desarrollo de coliformes. La re frigeración de los cultivos (después de 22 h de incubación) con alta 
densidad de colonias no coliformes de 0,5 a 1 h antes de contar, puede prevenir la dispersión y puede ayudar 
a discernir el brillo metálico. La incubación anaeróbica a 35º C por 24 h de a lgunas muestras de agua 
subterránea, pueden suprimir el desarrollo de colonias de no coliformes, pero debe ser cuidadosamente 
evaluada para asegurar no perder la recuperación de los coliformes.  
Las muestras de agua tratada, efluente o residual, puede inclu ir bacterias estresadas que crecen 
relativamente lento y producen un máximo brillo de 22 a 24 h. Los organismos de fuentes no tratadas pueden 
producir brillo de las 16 a 18 h y el brillo puede, subsecuentemente, disminuir después de 24 a 30 h.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
C.4.6 Verifi cación de los coliformes  
Ocasionalmente, las colonias de no coliformes aparecen como colonias típicas con brillo. Las colonias 
atípicas (rojo oscuro, nucleadas sin brillo metálico) ocasionalmente pueden ser coliformes. Es recomendable 
verificar ambos tipos  de colonias, mediante una prueba de fermentación de lactosa o por el uso de 
procedimientos alternativos, que involucren ambos una prueba rápida (4 h) o por reacciones bioquímicas 
típicas o un sistema multiprueba para especies.  
C.4.6.1 Fermentación de la l actosa  
Verificar colonias típicas y atípicas incluidas en la cuenta directa; probar un mínimo de cinco de tales 
colonias, por transferencia del crecimiento de cada colonia en caldo lauril triptosa, incubar a 35 ± 0,5º C 
durante 48 h.  
La formación de gas en  caldo lauril triptosa y su confirmación en caldo lactosa con verde brillante dentro 
de las 48 h verifica a la colonia probada como coliforme.  
C.4.6.2 Verificación alternativa de coliformes  
Aplicar este procedimiento alternativo de verificación de coliform es para colonias aisladas sobre el filtro de 
membrana. Si no hay colonias aisladas o si la separación entre las colonias es de menos de 2 mm, estriar el 
crecimiento a medio M -ENDO para asegurar la pureza del cultivo y transferir al tubo de fermentación.  
C.4.6.2.1 Prueba rápida  
Una verificación rápida de las colonias es la prueba de citocromo oxidasa y beta - galactosidasa (ONPG). 
La reacción de los coliformes es de citocromo oxidasa negativa y ONPG positiva con 4 h de incubación del 
tubo de cultivo o procedi miento de microprueba.  
C.4.6.2.2 Sistema multi -prueba comercial  
Verificar las colonias por estrías para su purificación, seleccionar colonias perfectamente aisladas e 
inocular dentro de un sistema multiprueba para enterobacterias que incluya reacciones de fermentación de 
lactosa, citocromo oxidasa y ONPG  
C.5 Cálculos  
Cálculo de la densidad de coliformes.  
Hacer el conteo, usando filtros de membrana con 20 a 80 colonias de coliformes y no más de 200 colonias 
para cualquier tipo de colonia según la siguiente e cuación:  
 
C.5.1 Agua para consumo humano (considerando las especificaciones establecidas en la Norma Oficial 
Mexicana citada en el inciso 3.8 del Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma.  
Con agua de buena calidad, la presencia general de colifor mes es mínima. Por lo tanto, se deben contar 
todas las colonias de coliformes (cajas con 20 a 80 colonias) y usar la fórmula dada anteriormente para 
obtener la densidad de coliformes.  
Si existe un crecimiento confluente, que es un desarrollo que cubre el á rea de filtración completa de la 
membrana o una porción y las colonias no están bien distribuidas, reportar los resultados como "crecimiento 
confluente con (sin) coliformes" y solicite un nuevo muestreo del mismo sitio. Si el número total de colonias 
bacte rianas, Coliformes o no Coliformes excede las 200 por membrana o si las colonias no son 
suficientemente distinguibles una de la otra para asegurar el conteo, reporte los resultados como DNPC. La 
presencia de coliformes en tales cultivos, se verifica median te la colocación del filtro de membrana completo 
dentro de un tubo estéril con caldo bilis verde brillante. Como alternativa arrastre la superficie completa del 
cultivo de la membrana con un asa estéril o con un hisopo de algodón estéril e inocule a un tub o de caldo 
lactosado y a otro de caldo bilis verde brillante.  
Si se produce gas de este cultivo dentro de las 48 ± 3 h a 35 ± 0,5º C, se concluye la presencia de 
coliformes.  
Se recomienda reportar "Crecimiento confluente" o "Demasiado numerosas para contar " con al menos una 
colonia de coliformes detectable (verificada) como una muestra positiva de coliforme total. No se recomienda 
reportar únicamente "Crecimiento confluente" o "Demasiado numerosas para contar".  
Cuando no se detectan coliformes, habiendo uti lizado volúmenes de muestra pequeños, se requiere una 
nueva muestra y seleccionar volúmenes más apropiados para la filtración por membrana. Normalmente se 
requieren volúmenes de 25, 50 o 100 ml para agua destinada al consumo humano.  
Para reducir interferen cia de sobrecrecimiento, en lugar de filtrar 100 ml, filtre porciones de 50 ml a través 
de dos diferentes membranas, porciones de 25 ml a través de cuatro diferentes membranas, y así 
sucesivamente. La cuenta de Coliformes totales observadas sobre todas las  membranas se suma y se reporta 
el número total en 100 ml.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE D INFORMATIVO  
Parámetros de riesgo y su evaluación para los materiales que se utilizan en la fabricación  de equipos 
de tratamiento de agua, tipo doméstico  
D.1 Introducción  
Los materiales utilizados para la fabricación de los equipos de tratamiento de agua tipo doméstico durante 
su operación pueden migrar o añadir algún tipo de contaminante al agua que provoque daños a la salud de los 
usuarios.  
D.2 Objetivo  
Este Apéndice Informativo, se emi te con el objeto de establecer los parámetros de riesgo, que pueden 
evaluarse por un Laboratorio Tercero Autorizado, un acreditado por EMA o una institución reconocida a nivel 
nacional o internacional que cuente con un sistema de gestión de calidad ISO1702 5 (Requisitos generales 
para la competencia de los laboratorios de ensayos y calibración https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso -
iec:17025:ed -2:v1:es) o NMX -EC-17025 -IMNC -2006, como parte de los requisitos para obtener el CEB, 
descritos en el inciso 6.5, d e esta Norma.  
D.3 Parámetros a evaluar a los materiales que se utilizan en la fabricación de equipos de 
tratamiento de agua, tipo doméstico  
Los materiales que están en contacto con el agua para beber no deben contener niveles de contaminantes 
extraíbles qu e rebasen los límites permisibles establecidos en la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 
3.8, del Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma, como se muestra en la Tabla D.1, de esta 
Norma.  
Tabla D.1  
Analito  Límite de 
detección  Resultado  Límite 
NOM -127-SSA1 -1994 
(mg/L)  Antes de filtro  Salida del filtro a las 24 h.  
Aluminio     0,2 
Arsénico     0,025  
Bario     0,70 
Benceno     0,010  
Cadmio     0,005  
Cobre     2.0 
Cromo total     0.05 
Etilbenzeno     0,3 
Hierro     0,30 
Manganeso     0,15 
Mercurio     0.001  
Níquel     0,07 
Plata     0,05 
Plomo     0,01 
Tolueno     0,7 
Xileno     0,5 
Zinc    5,0 
 
D.4 Métodos de Análisis  
Se realiza el estudio en base a la Norma NSF/ANSI 42, apartado 4.1, http://info.nsf.org/Certified/DWTU/  y 
a la Norma Brasil  ABNT NBR 14908 (http://www.inmetro.gov.br/legislacao/rtac/pdf/RTAC001117.pdf)  
D.4.1 Preparar un agua de prueba utilizando agua de abastecimiento público ajustada a las 
siguientes características:  
Sólidos Disueltos Totales de 100 
  5 mg/L  
Cloro Libre de 0. 5 
 1.0 mg/L  
pH de 6.75 
  0.25 
Temperatura de 23 
  2°C 
D.4.1.1 Condiciones de ensayo  
El sistema y/o los componentes deberán ser instalados y acondicionados de acuerdo al manual de uso o 
instructivo  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
D.4.1.2  Se toma y preserva una muestra de 2 L del agua de la red ajustada de acuerdo al procedimiento 
indicado en la Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.10, del Capítulo de Referencias normativas, de 
esta Norma.  
D.4.1.3  Se procede a llenar el sistema y/o los componentes, purgando el aire del equipo abrie ndo la 
válvula final, hasta quedar completamente lleno, dejar en estancamiento durante un periodo de 24 h.  
D.4.1.4  Pasadas las 24 h se toma una muestra de agua de 2 L después del filtro, conforme al 
procedimiento indicado en la Norma Oficial Mexicana citad a en el inciso 3.10, del Capítulo de Referencias 
normativas, de esta Norma.  
D.4.1.5  La muestra deberá ser analizada por duplicado, esto sirve como estándar de control de la 
medición.  
En caso de que en las dos muestras analizadas alguna de ellas rebase algú n límite establecido en la 
Norma Oficial Mexicana citada en el inciso 3.8, del Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma, se 
repetirá el análisis por duplicado para confirmar los resultados y reportarlo en el informe.  
D.4.2 Análisis  
El Análisis deb erá ser realizado por un Tercero Autorizado que tenga acreditado practicar los métodos de 
prueba para realizar las determinaciones de los parámetros indicados en la Tabla D.1, de esta Norma, 
utilizando los métodos expresados en la Tabla D.2, de esta Norma o algún otro método normalizado validado 
por la autoridad sanitaria o por la EMA.  
Tabla D.2 Métodos de prueba para la determinación de metales.  
Analito  Método  
Aluminio  NMX -AA-051-SCFI -2001  
Arsénico  NOM -117-SSA1 -1994  
Cadmio  NOM -117-SSA1 -1994  
Cobre  NOM -117-SSA1 -1994  
Cromo total  NMX -AA-051-SCFI -2001  
Hierro  NOM -117-SSA1 -1994  
Manganeso  NMX -AA-051-SCFI -2001  
Mercurio  NOM -117-SSA1 -1994  
Plomo  NOM -117-SSA1 -1994  
Zinc NOM -117-SSA1 -1994  
 
Nota: Para la determinación de los analitos, se pueden utilizar otros m étodos analíticos siempre y cuando 
estén aprobados por la COFEPRIS o por la EMA.  
D.4.2.1 Criterios de aceptación  
Los resultados de todas las muestras no deberán sobrepasar el límite establecido en la Norma Oficial 
Mexicana citada en el inciso 3.6, del Capí tulo de Referencias normativas, de esta Norma, indicado para cada 
parámetro en la Tabla D.1, de esta Norma.  
D.4.2.2 Informe  
El informe debe contener:  
D.4.2.2.1 Objetivo;  
D.4.2.2.2 Datos Generales del equipo evaluado incluyendo:  
D.4.2.2.2.1 Nombre completo y No. de Modelo del equipo;  
D.4.2.2.2.2 Nombre completo, No. de Modelo y de Serie de los Componentes que dan tratamiento al agua, 
que contiene el equipo, al practicársele la prueba;  
D.4.2.2.2.3 Procedimiento de Ensayo;  
D.4.2.2.2.4 Metodologías utilizadas p ara análisis de Metales;  
D.4.2.2.2.5 Tabla de resultados con los Límites de Detección y Cuantificación de los métodos utilizados, y  
D.4.2.2.2.6 Conclusión de cumplimiento con base en los límites establecidos en la Norma Oficial Mexicana 
citada en el inciso  3.8, del Capítulo de Referencias normativas, de esta Norma.  
5. Bibliografía  
Norma Brasileña ABNT NBR 14908  
NSF/ANSI Standards 42       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE E INFORMATIVO  
CRITERIOS PARA DETERMINAR LA ESTABILIDAD DE LAS SUSTANCIAS GERMICIDAS  
Este Apéndice Informativo, se emi te con el objeto de establecer los criterios que pueden efectuarse para 
determinar la Caducidad de las sustancias Germicidas que se comercialicen en México.  
E.1 Introducción  
El objetivo de los estudios de estabilidad es proporcionar evidencia documentada d e cómo los ingredientes 
que conforman a las sustancias Germicidas como productos desinfectantes de uso sanitario y doméstico, 
varía con el tiempo, bajo la influencia de factores ambientales como: temperatura, humedad y luz. Los 
estudios permiten establecer  las condiciones de almacenamiento, períodos de reanálisis y Vida útil.  
Es responsabilidad del fabricante, como parte del desarrollo de un producto desinfectante practicar 
estudios de estabilidad adecuados, considerando su formulación y envase, que permita n obtener información 
que demuestre la calidad del producto, durante el tiempo y bajo la influencia de las condiciones de 
almacenamiento a que es sometido.  
E.2 Factores que deben considerarse cuando se determina la Vida útil de un producto 
desinfectante  
Los factores más importantes que pueden influir en el grado y velocidad de deterioro de los productos 
desinfectantes son:  
E.2.1  Factores ambientales: tales como temperatura, humedad, luz y oxígeno.  
E.2.2.  Factores relativos al producto, que pueden incluir:  
E.2.2.1  Propiedades físicas y químicas del principio activo;  
E.2.2.2  Propiedades físicas y químicas de los componentes complementarios, y  
E.2.2.3  Presencia de ciertas impurezas como por ejemplo, sales o metales que puedan formar 
compuestos que afecten la ca lidad del producto.  
E.2.3  Factores relativos a la formulación y su composición:  
E.2.3.1  Proceso de fabricación, incluyendo las condiciones ambientales, los procedimientos tecnológicos y 
otros, como personal capacitado y los equipos, y  
E.2.3.2  Cambios de ma terias primas, incluyendo la pureza de éstas.  
E. 2.4  Factores relativos al envase:  
E. 2.4.1  El material del envase con el cual el producto desinfectante tiene contacto directo, y  
E. 2.4.2  El tipo de tapa del envase debe ser el adecuado para los distintos t ipos de productos.  
E.3 Diseño y protocolo  
Antes de comenzar los estudios se debe recolectar y analizar información relativa a la estabilidad 
intrínseca del o los principios activos y de acuerdo a esto será el diseño y protocolo a elegir. Para obtener 
resul tados acordes a lo esperado, es importante elegir las condiciones adecuadas, dependiendo de cada 
producto o formulación para los respectivos estudios.  
E.3.1  Tipos de estudios según principio activo y/o tipo de formulación:  
E.3.1.1 Para el caso de productos  desinfectantes, cuyos principios activos sean inestables como: 
Hipoclorito de sodio o Ácido Peracético, se deberán presentar estudios de estabilidad a tiempo real o de 
estantería, o en su defecto el estudio de estabilidad acelerado a 30°C por 6 semanas pa ra avalar un período 
de eficacia de 6 meses, que es el tiempo promedio de estabilidad de estos activos;  
E.3.1.2 En el caso de Hipoclorito de sodio de uso directo, si se desea avalar un periodo de eficacia mayor 
a éste, debe presentar el estudio de estabili dad correspondiente al período solicitado, y además los estudios 
de eficacia del producto tanto al inicio como al final de dicho periodo. Lo anterior es para comprobar, que 
aunque la concentración del principio activo está fuera de rango de las especificac iones de producto 
terminado, éste aún sigue siendo eficaz como desinfectante, y  
E.3.1.3 Para productos desinfectantes que sean generados in situ, a partir de un precursor y activador, 
como por ejemplo el dióxido de cloro, se debe presentar el estudio de es tabilidad a tiempo real o de 
estantería, tanto del precursor como del activador.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
En el caso que éste requiera ser almacenado, por periodos cortos de tiempo, como máximo un mes, 
deberá presentar los estudios de estabilidad a tiempo real o de estantería del producto terminado y en su 
envase de almacenamiento.  
E.3.2  Condiciones de almacenamiento:  
A continuación se detallan las condiciones de almacenamiento para avalar distintos periodos de eficacia, 
según las siguientes metodologías señaladas en la Tabla E1 de  la “Guía para la realización y presentación de 
estudios de estabilidad de productos plaguicidas de uso sanitario y doméstico”.  
En caso de que el solicitante cuente con un estudio de estabilidad con otras condiciones de 
almacenamiento, éste debe ser igualm ente presentado y serán parte de la evaluación del producto.  
Tabla E.1 Metodologías de Estudio de Condiciones de Almacenamiento  
Estudio  Condición de almacenamiento  Periodo de vigencia que se 
desea avalar  
Estabilidad tiempo real o de 
estantería  25°C ± 2°C / 60% ± 5%  
(temperatura ambiente)  6, 12, 18, 24 meses o más  
Estabilidad acelerada 
(Metodología CIPAC MT 46.3)  54°C ± 2 °C por 14 días  
50°C ± 2 °C por 4 semanas  
45°C ± 2 °C por 6 semanas  
40°C ± 2 °C por 8 semanas  
35°C ± 2 °C por 12 semanas  
30°C ± 2 °C por 18 semanas  
0°C ± 2 °C por 7 días sólo para 
formulaciones líquidas  24 meses  
Estudio de estabilidad acelerado 
parcializado  
(Metodología CIPAC MT 46.3)  35°C ± 2°C por 12 semanas  
30°C ± 2°C por 18 semanas  
0°C ± 2°C por 7 días sólo para 
formulaciones líquidas  12 meses  
Otros tipos de Estudios:  
Mixto: Estantería y acelerado  
Acelerado a tiempo prolongado  12 meses en estantería (a 25°C ± 
2°C / 60% ± 5%) y luego someter 
al producto a un estudio 
acelerado, según condiciones 
señaladas en Estabilidad 
acelerada.  
A cual quier temperatura elegida, 
señaladas en Estabilidad 
acelerada al doble de tiempo de 
almacenamiento.  36 meses  
 
E.3.3  Envases:  
El material del envase utilizado en el estudio de estabilidad acelerado o a tiempo real, debe ser el mismo 
con el que se comercia lizará el producto. Es recomendable realizar el estudio de estabilidad a tiempo real o de 
estantería en cada uno de los diferentes tipos de envases disponibles para un mismo producto. Cuando el 
envase tenga un tamaño tal que imposibilite realizar el estudi o acelerado (ejemplo: sacos de 5 kilos, bidón de 
contenido superior a 5 L), sólo se permite el estudio de estabilidad a tiempo real, salvo que se utilice un 
envase del mismo material y calidad al comercial, pero de menor escala, el cual tiene por único fin  la 
realización del estudio de estabilidad acelerado.  
E.3.4  Elección del Lote:  
El estudio de estabilidad debe ser realizado utilizando uno o más Lotes del producto que se desea 
registrar.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
E.3.5  Especificaciones y parámetros a evaluar:  
Los parámetros a eval uar deben corresponder a aquellos declarados en las especificaciones de calidad de 
producto terminado.  
Se deben considerar:  
E.3.5.1 Parámetros químicos como: cuantificación del o los principios activos, es decir, resultado numérico 
del análisis, y  
E.3.5.2 Parámetros físicos tales como color, olor, forma (cuando corresponda), densidad, pH, viscosidad, 
tamaño de partícula, entre otros, dependiendo del tipo de formulación.  
E.3.6  Metodología analítica:  
Se deben utilizar métodos Normalizados por un Tercero Autor izado por la COFEPRIS, por un laboratorio 
acreditado por EMA o institución pública o privada reconocida a nivel nacional o internacional mediante un 
sistema de gestión de calidad ISO 17025 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de 
ensayos y calibración (https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso -iec:17025:ed -2:v1:es) o NMX -EC-17025 -IMNC -
2006 2006 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de calibración 
(http://integra.cimav.edu.mx/intranet/data/files/calidad /documentos/externos/NMX -EC-17025 -IMNC -2006.pdf) 
de buenas prácticas de laboratorio.  
E.4 Desarrollo del estudio de estabilidad  
El estudio debe diseñarse de manera tal que de él se obtenga la información necesaria, para conocer el 
periodo de vigencia del pr oducto.  
En el estudio de estabilidad puede incluir los siguientes antecedentes:  
E.4.1  Laboratorio que realiza el estudio:  
E.4.1.1 Nombre del Laboratorio;  
E.4.1.2 Fecha recepción de la muestra;  
E.4.1.3 Fecha de inicio del estudio de estabilidad;  
E.4.1.4 Fecha de término del estudio de estabilidad, y  
E.4.1.5 Nombre y firma del responsable a cargo.  
E.4.2  Identificación del Producto:  
E.4.2.1 Nombre comercial en la solicitud de registro,  
E.4.2.2 Identificación de la fórmula presentada o al menos el principio act ivo y su concentración, y  
E.4.2.3 Tipo de formulación.  
E.4.3  Antecedentes de los Lotes:  
E.4.3.1 Lugar de fabricación;  
E.4.3.2 Fecha de fabricación;  
E.4.3.3 Número de Lote, y  
E.4.3.4 Material de envase.  
E.4.4  Condiciones del estudio:  
E.4.4.1 Tipo de estudio  (a tiempo real o acelerado);  
E.4.4.2 Tiempo y margen de tolerancia;  
E.4.4.3 Temperatura y margen de tolerancia;  
E.4.4.4 Humedad y margen de tolerancia (dependiendo de las condiciones de almacenamiento utilizadas 
en cada tipo de estudio);  
E.4.4.5 Luz (depe ndiendo de las condiciones de almacenamiento utilizadas en cada tipo de estudio);  
E.4.4.6 Método analítico utilizado;  
E.4.4.7 Resultados en Tabla, indicando la valoración del o los activos de forma numérica, y  
E.4.4.8 Conclusión y periodo de eficacia propu esto, el cual debe ser acorde a los resultados.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
E.4.5  Características a evaluar  
E.4.5.1 Físicas: Aspecto tales como color, olor, forma, densidad, pH, viscosidad, tamaño de partícula, 
entre otros, cuando correspondan.  
E.4.5.2 Químicas: Valoración o cuantifi cación del o los principios activos.  
E.4.5.3 Envase: Se debe realizar un análisis visual del envase, de acuerdo a las características de éste, 
como son color, forma, dureza, etc.  
E.4.6  Frecuencia de Análisis:  
La frecuencia de muestreo y análisis debe permi tir establecer el comportamiento de la estabilidad durante 
el periodo de eficacia propuesto.  
E.4.6.1 Para un estudio de estabilidad a tiempo real, es suficiente una frecuencia de muestreo y análisis a 
los 0, 3, 6 y 12 meses durante el primer año, cada 6 me ses durante el segundo año y una vez al año, a partir 
del tercer año.  
E.4.6.2 Para un estudio de estabilidad acelerado, es aceptable un mínimo de 3 meses, incluidos los 
efectuados a tiempo inicial, final y por lo menos una evaluación intermedia, a excepció n de la condición de 
almacenamiento acelerado a 54°C por 14 días, en que se aceptará las determinaciones inicial y final del 
estudio.  
E.5 Interpretación de resultados  
Los resultados obtenidos de los análisis realizados a los productos deben ser:  
E.5.1  Análisis físicos:  
Estos deben cumplir los parámetros señalados, según lo declarado por el solicitante; por ejemplo: el 
aspecto de un producto debe mantener sus características originales como color, olor o forma hasta el final 
del periodo de prueba, de lo cont rario, si el producto pierde sus propiedades originales, este no cumplirá con 
éste parámetro, afectando la calidad del producto. La pérdida de propiedades físicas como cambios en el 
color, olor, forma o turbidez de un producto pueden ser indicadores de des composición del producto.  
E.5.2  Análisis químicos:  
Estos deben cumplir los parámetros señalados, según lo declarado por el solicitante. Las valoraciones del 
activo o activos, deben encontrarse dentro de un rango de ± 10% del valor teórico declarado, a exce pción de 
que se haya declarado, otro rango de aceptación, el cual no debe superar a un 20% del valor teórico. Si los 
resultados de dichas valoraciones se escapan de los rangos establecidos, igualmente deben ser informados, 
para poder establecer el momento en que el producto comienza a ser inestable y/o a perder sus propiedades 
químicas.  
E.5.3  Análisis del envase:  
Estos deben cumplir los parámetros, según lo declarado por el solicitante; ya que la pérdida de 
propiedades como por ejemplo, dureza del material o fatiga de éste o de las tapas, influirá en la calidad del 
producto e incluso puede causar la descomposición de éste, o el derrame del producto, para el caso  de los 
líquidos.  
De los tres puntos anteriores, se puede concluir sobre la estabilidad del produc to y por tanto del periodo de 
eficacia de éste.  
Si alguno de estos puntos no cumple, quiere decir que tal vez no se eligieron las condiciones adecuadas 
para el estudio, o que el material del envase o las tapas de éste no son adecuadas para el tipo de produ cto,  o 
simplemente que el producto es inestable y no puede ser sometido a altas temperaturas, en el caso de 
estudios acelerados. Por ello es importante como se señaló en el inciso E.3 (Diseño y protocolo), de esta 
Norma, elegir las condiciones adecuadas p ara el estudio, dependiendo de la naturaleza de cada producto.  
E.6 Bibliografía  
Ministerio de Salud, Instituto de Salud Pública de Chile, “Guía para la realización y presentación de 
estudios de estabilidad de productos plaguicidas de uso sanitario y domést ico” Disponible en 
http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento/2013/12/Guia%20Estabilidad%20de%20productos%20Desinf
ectantes%20%2009 -12-13.pdf.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE F INFORMATIVO  
MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE COLIFAGOS  
F.1 Introducción  
Más de 140 virus patógeno s pueden ser transmitidos al hombre a través del agua. Estos son los virus 
entéricos eliminados a través de las heces de personas infectadas. Los más comunes son los virus causantes 
de gastroenteritis y el virus de la hepatitis. Algunos de estos virus (rot avirus, virus Norwalk) no generan 
memoria inmune por lo que la infección puede repetirse varias veces a lo largo de la vida.  
F.1.1 Se han propuesto dos tipos de fagos: colifagos somáticos y colifagos F específicos. Los argumentos 
que validan la propuesta s on: 
F.1.1.1 Los fagos se encuentran abundantemente en agua residual y agua contaminada;  
F.1.1.2 Las poblaciones de colifagos son mucho más grandes que las de los enterovirus;  
F.1.1.3 Los colifagos son incapaces de replicarse fuera del huésped bacteriano;  
F.1.1.4 Los colifagos se pueden aislar y contar usando métodos sencillos;  
F.1.1.5 Se obtienen resultados más rápidos cuando se analizan los colifagos que cuando se trabaja con 
enterovirus, y  
F.1.1.6 Ciertos colifagos son tan resistentes como los enterovirus  a los Procesos de desinfección.  
F.1.2 La Organización Mundial de la Salud 2014 [WHO International Scheme to Evaluate Household Water 
Treatment Technologies. Harmonized Testing Protocol: Technology Non -Specific. Geneva, Switzerland, 
http://www.who.int/hous ehold_water/scheme/HarmonizedTestProtocol.pdf], propone dos métodos de 
determinación de colifagos, sin que sea limitativo, para la evaluación del desempeño de equipos o sustancias 
que eliminan virus:  
F.1.2.1 Método descrito en el Anexo A, Sección A.8.2.2 o f NSF/ANSI 55: Ultraviolet Microbiological Water 
Treatment Systems (2012) http://www.nsf.org/newsroom/nsf -ansi-55-ultraviolet -microbiological -water -
treatment -systems; o  
F.1.2.2 Método NEN -EN-ISO 10705 -1 (Detection and enumeration of bacteriophages Part 2: Enumeration 
of somatic coliphages). https://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso:10705: -1:ed-1:v1:en  
F.1.3 Los análisis se realizarán por triplicado; la media geométrica y la desviación estándar para cada tipo 
agua, los cuales deben ser reportados.  
F.1.4 Las mu estras serán procesadas dentro de las primeras ocho h, después de la colecta.  
F.1.5 El volumen de muestra colectado deberá ser el suficiente para su procesamiento por triplicado y 
retener un volumen de 12 ml.  
F.2 Resumen  
Los colifagos MS -2 y Escherichia co li son usados como surrogados, para determinar el desempeño de 
sistemas para tratamiento de agua a nivel intradomiciliario, en la eliminación o inactivación de virus. Se 
describe uno de los métodos más utilizados para la preparación de la suspensión, titul ación y análisis de 
organismos de reto.  
Uno de los métodos más utilizados, confiables y sencillos es el que se describe a continuación, publicado 
en el Anexo A, Sección A.8.2.2 del NSF/ANSI 55: Ultraviolet Microbiological Water Treatment Systems (2012). 
http://www.nsf.org/newsroom/nsf -ansi-55-ultraviolet -microbiological -water -treatment -systems  
F.3 Equipo  
F.3.1 Autoclave;  
F.3.2  Incubadora, 35 ± 1°C;  
F.3.3 Refrigerador, 5 ± 3°C;  
F.3.4 Baño de agua 50 ± 1°C;  
F.3.5 Congelador;  
F.3.6 Horno de microondas;  
F.3.7 Vortex;  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
F.3.8 Espectrofotómetro UV -Visible;  
F.3.9 pH metro;  
F.3.10 Hematocitómetro;  
F.3.11 Contador de colonias, y  
F.3.12 Centrífuga  
F.4 Microorganismos  
Es deseable que las cepas para prueba se obtengan de la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC, 
por sus siglas en inglés), 19301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 -1776.  
Colifagos MS -2.- Coliphage (ATCC # 15597 -Bl), y  
Escherichia coli cepa hospedera (ATCC # 15597).  
F.5 Material  
F.5.1 Cajas Petri estériles, 20x60 mm y 15x100 mm;  
F.5.2 Pipetas estér iles, 1 ml y 10 ml;  
F.5.3 Tubos de centrífuga estériles, 10 ml y 50 ml;  
F.5.4 Botellas de tapón de rosca estériles para muestra, 125 ml;  
F.5.5 Tubos de ensaye estériles, 16x125 mm;  
F.5.6 Asas estériles para inoculación;  
F.5.7 Equipos para filtración por me mbrana, estériles;  
F.5.8 Membranas filtrantes de policarbonato estériles de 0.22 µm;  
F.5.9 Filtro Whatman # 1;  
F.5.10 Kit para determinación de cloro, y  
F.5.11 Envase estéril de polipropileno desechable.  
F.6 Reactivos  
F.6.1 Agua buffer estéril de dilución  
F.6.1.1 Solución concentrada del buffer de fosfato.  
Disolver 34 g de KH 2PO4 en 500 ml de agua destilada. Ajustar el pH de la solución concentrada a 7.2 con 
NaOH 1 N.  
F.6.1.2  Solución de cloruro de magnesio.  
Disolver 38 g de cloruro de magnesio (MgCl 2) en 1  L de agua destilada.  
F.6.1.3  Preparación del agua de dilución buffer estéril.  
Agregar 1,25 ml de solución concentrada del buffer de fosfato y 5 ml de la solución de cloruro de magnesio 
y diluir a 1 L con agua destilada.  
F.6.2 Buffer de fosfato salino (PBS ). 
F.6.2.1 Preparar una solución concentrada, disolviendo 80 g de NaCl, 2 g de KH 2PO4, 24 g de 
Na2HPO 4·12H 2O y 2 g de KCl, en un volumen final de 1 L.  
F.6.2.2  Preparar una solución de trabajo, diluyendo 1 volumen de solución concentrada por 9 volúmenes 
de agua. Ajustar el pH a 7.4 unidades de pH con HCl 0.1 N o NaOH 0.1 N, antes de su uso.  
F.6.3 Ácido etilendiaminotretracético (EDTA).  
F.6.4 Lisozima, Boehringer Mannheim, #1 243004. Conservar en refrigeración entre 2 y 8 °C.  
F.7 Medios de cultivo.  
F.7.1 Medi os de cultivo comerciales.  
Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Deberá monitorearse la calidad del medio de 
crecimiento examinando la promoción de crecimiento y esterilidad antes de su uso.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
F.7.2 Medio ATCC #271 para Escherichia coli.  
F.7.2.1 Solución A  
F.7.2.1.1 Triptona  
F.7.2.1.2 Extracto de levadura  
F.7.2.1.3 Cloruro de sodio  
F.7.2.1.4 Cloruro de sodio  
F.7.2.1.5 Agar (si se requiere)  
F.7.2.1.6 Agua desionizada  10 g 
1.0 g  
8.0 g  
0.5 g  
15 g 
950 ml  
 
F.7.2.2 Esterilizar en autoclave a 12 1°C. 
Asépticamente agregar lo siguiente:  
Solución B  
F.7.2.2.1 Glucosa  
F.7.2.2.2 Cloruro de calcio  
F.7.2.2.3 Tiamina  
F.7.2.2.4 Agua desionizada  1.0 g  
0.294 g  
10.0 mg  
50 ml  
 
F.7.3 Esterilizar mediante filtración y agregar asépticamente al medio estéril  
F.7.3.1 TSB (caldo soya triptona)  
F.7.3.1.1 Triptona  
F.7.3.1.2 Soytona  
F.7.3.1.3 Dextrosa  
F.7.3.1.4 Cloruro de sodio  
F.7.3.1.5 Fosfato dipotásico  
F.7.3.1.6 Agua desionizada  
F.7.3.1.7 pH 1.7 g  
0.3 g  
0.25 g  
0.5 g  
0.25 g  
100 ml  
7.3 ± 0.2  
 
Disolver por ebullición , ajustar el pH al final y distribuir alícuotas de 8 ml en tubos de ensaye de 16 x 150 
mm. Esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C a 15 psi por 20 minutos. Almacenar el caldo fío a 5 ± 3°C.  
F.7.4 TSA 1.5% (Agar soya triptona)  
F.7.4.1 Triptona  
F.7.4.2 Soyton a 
F.7.4.3 Cloruro de sodio  
F.7.4.4 Bacto -agar 
F.7.4.5 Agua desionizada  
F.7.4.6 pH 7.5 g  
2.5 g  
7.5 g  
7.5 g  
500 ml  
7.3 ± 0.2  
 
Disolver mediante ebullición, ajustar el pH y esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C a 15 psi por 20 
minutos. Verter el medio tempe rado en cajas Petri estériles. Almacenar las placas de agar a 5 ± 3°C. Antes de 
usar, temperar las placas a temperatura ambiente.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
F.7.5 TSA 1% agar para cubrir fagos  
F.7.5.1 Triptona  
F.7.5.2 Soytona  
F.7.5.3 Cloruro de sodio  
F.7.5.4 Agar  
F.7.5.5 Agua desion izada  
F.7.5.6 pH 7.5 g  
2.5 g  
7.5 g  
5 g 
500 ml  
7.3 ± 0.2  
 
Disolver mediante ebullición, ajustar el pH y esterilizar en autoclave a 121°C ± 1°C a 15 psi por 20 
minutos. Almacenar el agar a 5 ± 3°C. El día de la prueba, licuar y colocar en el baño de agua a 45 ± 1°C. Es 
muy importante conservar el agar para cubrir los Colifagos MS -2 a esta temperatura para evitar la 
solidificación del agar.  
F.8 Cultivo de los organismos de reto  
F.8.1 Propagación de Colifagos MS -2 y de Escherichia coli  
Esta sección describe lo s métodos de propagación y cosecha para las suspensiones concentradas de 
Colifagos MS -2 para su uso como reto.  
F.8.1.1 Propagación de la cepa de Escherichia coli  ATCC 15597  
F.8.1.1.1 Cepa liofilizada.  
F.8.1.1.2 Abrir el vial de acuerdo con las instruccione s incluidas en el paquete.  
F.8.1.1.3 Usando un tubo de caldo #271 (5 a 6 ml), retirar aproximadamente 0.5 a 1.0 ml con una pipeta. 
Rehidratar el pellet.  
F.8.1.1.4 Asépticamente, transferir este pellet rehidratado en el tubo de caldo. Mezclar perfectamente.  
F.8.1.1.5 Usar algunas gotas de la suspensión para inocular un tubo con medio sólido #271 inclinado y/o 
en placa.  
F.8.1.1.6 Incubar los tubos y placas a 37°C por 24 horas.  
F.8.1.1.7 Las colonias de E. coli  en placas de medio #271, son circulares, enteras,  brillantes, poco 
convexas, crema y translúcidas. Esta cepa crecerá en cualquier medio estándar. El medio descrito es el 
recomendado para la propagación de fagos. La temperatura de conservación criogénicamente congelada es 
de 80°C y de 2°C a 8°C si está li ofilizada.  
F.8.1.1.8  Si la cepa se adquirió en micro -crioviales de glicerol congelado, no es necesario rehidratar.  
F.8.1.1.9 Descongelar en baño de agua a 25 -30°C con agitación suave; en aproximadamente 3 minutos se 
habrán fundido los cristales de hielo.  
F.8.1.1.10 Inmediatamente después de la descongelación, limpiar el microbial con etanol al 70% y 
asépticamente transferir el contenido completo a un tubo de 5 -6 ml de caldo #271 o directamente inocular en 
placa o tubo inclinado conteniendo medio sólido #271 . 
F.8.1.1.11 Desechar el microvial vacío. No congelar las porciones que no se hayan utilizado, ya que la 
cepa perdería viabilidad.  
F.8.1.1.12 Incubar a 37°C por 24 h.  
F.8.1.1.13 Los microviales congelados en hielo seco, deben descongelarse inmediatamente a ntes de su 
uso o almacenar < 70°C hasta la fecha de Caducidad impresa en la etiqueta. El almacenamiento de corto 
plazo a -20°C es aceptable hasta por 3 meses.  
F.8.1.2 Preparación de la suspensión de Colifagos MS -2 
F.8.1.2.1 Usar ATCC 15597™ Escherichia col i cepa C3000 como bacteria hospedera.  
F.8.1.2.2 Para recuperar los fagos liofilizados o congelados del vial:  
F.8.1.2.2.1 En medio líquido, preparar un cultivo en crecimiento activo de la bacteria hospedera antes de 
abrir el microvial con los fagos. El cult ivo será de 6 h de edad. Evitar hacer pases repetidos del hospedero;  
F.8.1.2.2.2 Agregar aproximadamente 1.0 ml del caldo #271 a un vial de fagos liofilizados, o 0.5 ml a un 
criovial líquido;       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
F.8.1.2.2.3 Precalentar las cajas del medio sólido #271 en una i ncubadora. Cubrir la superficie con 2.5 ml 
de agar al 0.5% licuado (el mismo medio), el cual contiene una gota del cultivo de 6 h de la bacteria 
hospedera. Se mantendrá el agar suave entre 43°C y 45°C listo para verter. Puede ser conveniente usar un 
baño d e agua. Permitir que solidifique, y  
F.8.1.2.2.4 Los fagos rehidratados pueden ser diluidos serialmente, pasando 0.5 ml de los fagos en tubos 
con 4.5 ml de medio #271 líquido. Repetir tantas veces como sea necesario.  
F.8.2 Preparación de la suspensión conce ntrada de colifagos  
F.8.2.1 Un día antes de preparar la suspensión concentrada de Colifagos MS -2, descongelar la cepa 
hospedera de E. coli  criogénicamente congelada (e inocular un tubo de TSB con 0.1 ml de la suspensión de 
Colifagos preparada en el inciso F.8.1.2, de esta Norma. Incubar a 35 ± 1°C por 18 ± 2 h.  
F.8.2.2 El día de la preparación de la suspensión concentrada de Colifagos MS -2, licuar el TSA 1% y 
temperar el medio a 45 ± 1°C en baño de agua. Las cajas de TSA 1.5% también deberán estar a tempera tura 
ambiente.  
F.8.2.3 Hacer diluciones seriadas de la suspensión concentrada de Colifagos MS -2 (10-1 a 10-12) usando 
PBS estéril. Inocular por triplicado, cajas de TSA 1.5% con diluciones 10 -5 a 10 12. En un tubo estéril transferir 
1 ml de Colifagos MS -2 diluidos, inmediatamente agregar 0.1 ml de la bacteria hospedera E. coli  y 5 ml de 
TSA 1%. Homogenizar en el Vortex y verter. Mezclar para distribuir el inóculo uniformemente en la caja. Una 
vez que la capa del TSA 1% ha solidificado, invertir las placas e incubar a 35 ± 1°C por 18 ± 2 h.  
F.8.2.4 Seleccionar las placas que presenten lisis completa de las células hospederas de los Colifagos. 
Inunde la superficie de cada caja con 3 ml de TSB y retirar cuidadosamente la capa de TSA 1% usando un 
instrumento adec uado para raspar las células. Verter el contenido en dos tubos estériles de 50 ml para 
centrífuga y llevar a un volumen total de 40 ml con TSB. Agregar 0.2 g de EDTA y 0.026 g de lisozima a cada 
tubo. Incubar a temperatura ambiente por 2 h, mezclando cada 15 minutos.  
F.8.2.5 Después de las dos h de incubación, centrifugar los tubos a 9280 xg por 5 minutos , o a 2320 xg 
por 20 minutos , a 20 ± 1°C. Remover el sobrenadante resultante evitando el pellet. Asépticamente, armar el 
equipo de filtración en membrana, ensamblando la membrana de policarbonato estéril. Pre -tratar el filtro con 
10 ml de caldo TSB justo antes de la filtración para minimizar la adsorción de Colifagos MS -2 al filtro. Filtrar el 
sobrenadante.  
F.8.2.6 Para periodos de almacenamiento superiores a 28 días, agregar 1/10 de volumen de glicerol estéril 
a la suspensión, distribuir en crioviales alícuotas de 1 ml y 3 ml.  
F.8.2.7 Titular la suspensión de Colifagos MS -2 como se describe en el inciso 8.3, de esta Norma. La 
concentración de colifagos deber á ser de 10 10 a 10 12 UFP/ml.  
F.8.2.8 Los fagos se conservan a -80°C en congelación o entre 2 y 8°C si están liofilizados.  
F.8.3 Enumeración de placas de MS -2 
F.8.3.1 Descongelar la cepa hospedera de E. coli  criogénicamente congelada e inocular un tubo de T SB 
con 0.1 ml de la suspensión concentrada. Incubar a 35 ± 1°C por 18 ± 2 h.  
F.8.3.2 Licuar el TSA 1% y temperar el medio a 45 ± 1°C en baño de agua. Las cajas de TSA 1.5% 
también deberán estar a temperatura ambiente.  
F.8.3.3 Hacer diluciones seriadas de l a suspensión concentrada de Colifagos MS -2 (10-1 a 10-12) usando 
PBS estéril. Inocular por triplicado, cajas de TSA 1.5% con diluciones 10 -7 a 10 12. En un tubo estéril transferir 
1 ml de Colifagos MS -2 diluidos, inmediatamente agregar 0.1 ml de la bacteria  hospedera E. coli  y ~5 m de 
TSA 1%. Homogenizar en el Vortex y verter. Mezclar para distribuir el inóculo uniformemente en la caja. Una 
vez que la capa del TSA 1% ha solidificado, invertir las placas e incubar a 35 ± 1°C por 18 ± 2 h.  
F.8.3.4 Después de l a incubación, cuantificar distintas cajas que contengan entre 25 y 250 UFP, usando 
un contador de colonias. Calcular el título de la suspensión de Colifagos MS -2 multiplicando el número de 
UFP obtenidos por el inverso del factor de dilución. Expresar los r esultados como el número de UFP/ml. La 
concentración de colifagos deberá ser de 10 10 a 10 12 UFP/ml.  
F.9 Análisis de las muestras del influente y efluente  
F.9.1 Hacer diluciones seriadas de las muestras del influente y efluente (100 a 105) usando PBS estéri l. 
Inocular por duplicado, las diluciones en cajas de TSA 1.5% y agregar inmediatamente 0.1 ml de la cepa de E. 
coli hospedera y 5 ml de agar TSA 1% fundido. Homogenizar y verter. Mezclar para distribuir el inóculo 
uniformemente en la caja. Una vez que la capa del TSA 1% ha solidificado, invertir las placas e incubar a  35 ± 
1°C por 18 ± 2 h.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
F.9.2  Después de la incubación, cuantificar distintas cajas que contengan entre 25 y 250 UFP, usando un 
contador de colonias. Calcular el título de Colifagos MS -2, mul tiplicando el número de UFP obtenidos por el 
inverso del factor de dilución. Expresar los resultados como el número de UFP/ml.  
F.10 Otros detalles de la prueba  
F.10.1 Control no tratado  
El agua microbiológicamente inoculada que va a ser utilizada como la c oncentración de reto antes del 
tratamiento/influente, servirá también como el control no tratado.  
F.10.2 Muestra blanco  
Antes de iniciar la prueba, el producto será probado con agua general de prueba sin inóculo, para verificar 
que el producto llegó al lab oratorio libre de los organismos de reto. Para productos químicos, se adicionará el 
volumen apropiado para el tratamiento y muestreado para los organismos de reto. Asegurar siempre que se 
obtendrá el volumen de muestra necesario para el análisis de microor ganismos.  
F.10.3 Aseguramiento y control de calidad  
Los laboratorios de prueba se apegarán a los requerimientos de sus procedimientos de aseguramiento y 
control de calidad y deberán ser capaces de proporcionar la documentación de soporte, la cual incluirá al 
menos: verificación de la calidad de los stocks de organismos, instrumentos de calibración, controles 
ambientales durante el desarrollo de la prueba, entre otros.  
F.10.4 Producto residual  
Para productos que emplean un desinfectante, deberá verificarse l a neutralización del residual para las 
aguas de prueba. El control no tratado se destinará a aspectos de toxicidad del neutralizante. Los métodos de 
neutralización más frecuentemente utilizados son los siguientes:  
Tabla F.1  
Desinfectante  Neutralizante del residual  
Cloro y sus compuestos  Tiosulfato de sodio  
Iodo Tiosulfato de sodio  
Plata  Tiosulfato de sodio y tioglicolato de sodio  
Cobre  Tiosulfato de sodio y tioglicolato de sodio con 
adición de lecitina y Tween  
 
F.11 Precauciones y seguridad  
F.11.1 La m anipulación de muestras esterilizadas y equipo deben ser manipuladas con guantes 
protectores del calor antes de ser retiradas de la autoclave.  
F.11.2 Los viales de cultivos criogénicos, se manipulan con guantes crioprotectores.  
F.11.3 Todas las muestras mi crobiológicas, así como los materiales contaminados durante el ensayo, se 
esterilizan en autoclave a 121 ± 1°C a 15 psi por un tiempo mínimo de 20 minutos, antes de ser desechados.  
F.12 Bibliografía  
American Type Culture Collection. Producto Sheet. Escheri chia coli  (ATCC 15597) C -3000. Escherichia 
coli (Migula) Castellani y Chalmers.  
American Type Culture Collection. Producto Sheet. Escherichia coli  (ATCC 15597 -Mini-PakTM) C-3000. 
Escherichia coli  (Migula) Castellani y Chalmers.  
American Type Culture Collec tion. Product Sheet Escherichia coli  bacteriophage MS2 (ATCC  15597B1 
™). 
NSF. 2002. Apéndice A en: Ultraviolet microbiological water treatment systems. NSF/ANSI 55 -2002.  
World Health Organization. 2014. WHO International Scheme to Evaluate Household Water Treatment 
Technologies. Harmonized Testing Protocol: Technolo gy Non -Specific. Geneva, Switzerland.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
APÉNDICE G INFORMATIVO  
MONTAJE PARA LA EVALUACIÓN DE EQUIPOS INTRADOMICILIARES O DOMÉSTICOS EN LA 
REMOCIÓN DE ARSÉNICO EN AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
G.1. Introducción  
El arsénico es un metaloide que ocupa el lugar número 20 en abundancia en la corteza terrestre, en el 
lugar 14 en el agua de mar y en el lugar 12 en el cuerpo humano, incluso forma parte de la constitución de 
más de 245 minerales [Arsenic round the world: a review. Talanta, 58:201 -235.Mandal & Suzuki(5), 2002].  
Si bien se encuentra en concentraciones traza en varios tipos de suelos, acumulado en forma natural, las 
actividades antropogénicas, como el uso de plaguicidas y principalmente la extracción y explotación de 
minerales, han acelerado su acumulació n en el ambiente. Por su naturaleza geológica, nuestro país está 
considerado dentro de las 17 zonas en el mundo que presentan contaminación del agua por este metaloide 
[Arsenic -contaminated soils: I. risk assessment. Brandstetter(2) et al, 2000].  
La presen cia de arsénico disuelto en Agua para consumo humano ha cobrado importancia mundial, 
principalmente por sus efectos cancerígenos; esto ha originado la promulgación por parte de la EPA y de 
OMS de nuevos niveles permisibles [Arsenical removal from water/was tewater using adsorbents -A critical 
review. Journal of Hazardous Materials, Mohan & Pittman(6), 2007].  
Los seres humanos están expuestos al arsénico por el aire, por los alimentos y principalmente por el agua. 
La presencia de arsénico inorgánico en cuerpos  de agua con fines de consumo humano, cuya concentración 
natural varía de 0.5 a más de 5000 g L-1, fue identificada como el principal riesgo a la salud. Debido a la 
toxicidad de este metaloide y los problemas de salud que genera, la concentración máxima pe rmisible en 
Agua para consumo humano es de 10 ug L-1 [Technologies and costs for removal of arsenic from Drinking 
Water, USA, Environmetal Protection Agency(3), Dic. 2000].  
G.2. Objetivo  
Determinar si el equipo cumple, en complemento a la remoción de micro organismos patógenos, con la 
remoción de arsénico en agua, a la concentración máxima indicada por el fabricante bajo las condiciones de 
operación previamente descritas en el manual o instructivo del equipo.  
G.3. Fundamento  
El arsénico en agua se presenta e n diferentes especies que dependen de las propiedades químicas del 
medio, pudiendo existir con números de oxidación de -3, 0, +3, y +5 [A review of the source, behavior and 
distribution of arsenic in natural waters. Applied Geochemistry Smedley(7), P. L.; Kinniburgh, D. G. (2002). En 
agua a pH´s naturales se encuentra generalmente en forma inorgánica como arsenito (As +3) y/o arsenato 
(As+5). El As+3 es un ácido fuerte, forma complejos preferentemente con óxidos y con el nitrógeno y es 25 a 60 
veces más tóxi co que el arsenato. Por el contrario, el As+5 se comporta como un ácido débil, formando 
complejos con sulfuros [Environmental Inorganic Chemistry: Properties, Processes and Estimation Methods. 
Ed. Pergamon Press, Estados Unidos, Bodek(1), I.; Lyman, W.J.; Reechl, W.F.; Rosenblalt, D.H. (1998)].  
Las especies de arsenato predominan y son estables en ambientes aerobios ricos en oxígeno tales como 
las aguas superficiales, mientras que las especies de arsenito predominan en ambientes moderadamente 
reductores ana erobios tales como las aguas subterráneas [Tesis de maestría “Remisión de arsénico en agua 
por electrocoagulación”. UNAM 2010. García Espinosa J. E(4)]. Por lo que es importante determinar que las 
tecnologías a pequeña escala tipo intradomiciliarias y/o do méstico traten agua previamente aireada o de 
origen superficial.  
G.4. Metodología  
El montaje para la evaluación dependerá del modo de operación de los equipos o sustancias a evaluar. 
Pero la idea central es hacer pasar durante todo el tiempo de prueba la m isma concentración de arsénico 
máximo que el equipo establece que elimina, con lo que podrá acotarse con mayor precisión y confiabilidad el 
volumen máximo de Vida útil de los equipos. Partiendo de que la mayoría de los equipos comerciales son 
probados con agua de la red, sin la presencia de los diferentes parámetros de las aguas naturales promedio a 
nivel nacional y que influyen en la Eficiencia en la remoción del (de los) parámetro(s) de interés, por lo que la 
Eficiencia real de volumen de agua tratada deb e ser menor a la que realmente las empresas reportan.  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
G.4.1 Agua problema  
Para el desarrollo deberán probarse dos tipos de agua. En el caso del agua tipo I y mediante disoluciones 
de Na 2HAsO 47H2O la concentración de arsénico As+5 será ajustada en aproximad amente 100 ug L-1 en el 
agua problema, esta concentración de arsénico se ubica en el límite inferior dentro de los valores reportados 
frecuentemente en las zonas del país con problemas de arsénico en fuentes de abastecimiento para agua 
potable [Parga et al , 2003].  
Para el tipo de agua II deberá ser preparada adicionando los parámetros más comunes que afectan la 
Eficiencia de los sistemas convencionales de remoción de arsénico (Tabla G.1, de esta Norma), partiendo de 
lo que las autoridades sanitarias conside ren como prioritarios con base a los monitoreos nacionales de calidad 
del agua.  
Tabla G.1.  
Concentraciones máximas de parámetros que afectan la Eficiencia en la remoción 
de Arsénico  
Parámetro  Concentración problema  
Sílice  Mayor a 50 mg/L  
Fluoruro  Mayor a 2 mg/L  
Hierro  Mayor a 3 mg/L  
Manganeso  Mayor a 0.05 mg/L  
Sulfuros  Mayor a 0.2 mg/L  
Sulfatos  Mayor a 360 mg/L  
Sólidos Disueltos Totales  Mayor a 1.000 mg/L  
Carbono Orgánico Total  Mayor a 4 mg/L  
Calcio y magnesio (dureza), 
bario, sulfato y carbonato  Mayor a la saturación potencial  
Cloruros  Mayor a 250 mg/L  
Cloro libre  En función del tren de tratamiento empleado  
Turbiedad  Mayor a 0.3 NTU  
pH En función del tren de tratamiento empleado  
Fosfato  Mayor a 1.0 mg/L  
 
G.4.2 Modo de operación continúa con o sin recirculación para un flujo mínimo de 1 L/minuto  
Para la realización de las pruebas se construirá una unidad piloto (Figura G.1, de esta Norma), en cuyo 
arreglo se empleará tubería de PVC hidráulico de ½“. Tanques o tinacos con el volumen necesario p ara la 
operación continúa de 24 h al flujo establecido en el Manual de Operación del fabricante, que alimentara al 
equipo sometido a verificación mediante una bomba con los requerimientos teóricos de presión y flujo mínimo 
y máximo requeridos.  
La configura ción hidráulica del sistema deberá permitir controlar el flujo de salida y entradas del equipo 
hacia un tanque reservorio del agua tratada, donde podrá desecharse a la red de drenaje o hacia la red de 
recirculación, así como la toma de muestras durante tod o la configuración hidráulica. El equipo deberá 
contener un manómetro diferencial para verificar adicionalmente la presión real de operación del equipo, así 
como de rotámetros necesarios para la medición del flujo.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
 
 
 
 
 
 
 
Figura G.1. Montaje para la verif icación de equipos en la remoción de Arsénico en Agua para uso y consumo humano.  
 
 Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
En el caso de recirculación, podrá optarse por dos alternativas para alimentar la misma concentración de 
arsénico durante todo el tiempo de operación; la primera consist e en preparar Lotes del agua problema cada 
día de operación y mediante una modificación inicial agregar un tanque reservorio adicional; la segunda 
opción consiste en preparar una solución concentrada de arsénico y mediante el balance de masa (Figura 
G.2, d e esta Norma) en forma continua determinar el flujo de bombeo necesario que deberá mezclarse con el 
flujo de la red utilizada para generar aproximadamente la concentración de arsénico deseada.  
Figura G.2  
Esquema para el balance de masa para ajuste de la co ncentración inicial de arsénico en el flujo de 
recirculación.  
 
 
Donde:  
QAs= Flujo de agua suministrada a la red experimental de la solución concentrada (L s-1). 
CAs = Concentración de arsénico en la solución concentrada (mg L-1). 
CRec = Concentración de  arsénico en el flujo de recirculación (mg L-1). 
QRec= Flujo de agua recirculada (L s-1). 
CAsT = Concentración de arsénico en el flujo de entrada a la red (mg L-1). 
QT = Flujo total del agua de entrada a la red (L s-1). 
Con el planteamiento de la ecuación de balance siguiente, puede determinarse la concentración de flujo 
del agua de la solución concentrada con la presión adecuada para su mezcla con el flujo recirculado.  
 
Finalmente, el arreglo hidráulico deberá permitir el lavado químico de la red utilizad a entre cada equipo 
probado o para el caso de que se requiera verificar remoción de otro parámetro, seguido de un lavado con 
agua de la llave para eliminar cualquier residuo o impurezas desprendidas.  
La determinación de arsénico total inicial y el residual , podrá realizarse mediante espectrometría de 
absorción atómica, espectrofotometría o por cualquier otro método colorimétrico, confirmando su precisión con 
una muestra estándar por lo menos en el 10% del número de muestras totales determinadas.  
G.5. Desech o del agua de lavado contaminada con arsénico  
La EPA emitió en el año 2000 el documento denominado “Technologies and costs for removal of arsenic 
from Drinking Water, USA, Environmetal Protection Agency(3), Dic. 2000] en donde se proponen diferentes 
altern ativas para el tratamiento y disposición de lodos derivados de Procesos de remoción de arsénico 
seleccionados en función de los recursos económicos y de infraestructura disponibles. Sin embargo, en el 
caso de equipos a baja escala o con generación relativa mente baja de volumen de agua de desecho con 
arsénico se recomienda la dilución con base al criterio máximo permisible determinado por las disposiciones 
aplicables o por la concentración máxima natural endémica de la región en particular.       (Segunda Sección)  DIARIO OFICIAL  Lunes 22 de octubre de 2018  
En el esquema sig uiente se presenta el planteamiento para las ecuaciones de balance necesarios.  
Figura G.3 Diagrama del balance de masa para la disolución de arsénico en el agua vertida a la red  
 
A partir del esquema anterior se establece en balance de materia siguiente : 
 
Y considerando que el agua de la red que servirá para dilución es cero (0) CD As= 0, entonces:  
 
Finalmente el Volumen de dilución se determina:  
 
En la tabla siguiente se presentan los cálculos para diferentes condiciones hipotéticas de operación.  
Tabla G.2. Calculo del Volumen de agua requerido para dilución en función del volumen de agua de 
desecho, de su concentración y de la concentración final requerida.  
  Lunes 22 de octubre de 2018  DIARIO OFICIAL  (Segunda Sección)      
G.6. Bibliografía  
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JDVAhXC5SYKHW3LDoAQ6AEIPzAD#v=onepage&q =Brandstetter%2C%20A.%2C%20Lombi%2C%20E.%  
2C%20Wenzel%2C%20W.W.%2C%20Adriano%2C%20D.C%20in%20Remediation%20Engineering%20of%2
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G.6.3 Environmetal Protection Agency (EPA, Washington). Dic. 2000.  Technologies and costs for 
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G.6.4  García Espinosa J. E. Tesis de maestría  “Remisión de arsénico en agua por electrocoagulación”. 
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