식품의약품안전처 공고 제2014-177 호
- 2 -식품의약품안전처 공고 제2014-177 호
「건강기능식품의 기준 및규격 」(식품의약품안전처고시 제2014-124 호,
2014.6.5.) 을일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자
그취지,개정 이유 및주요 내용을 「행정절차법 」제46조에 따라 다음과
같이 공고합니다 .
 2014 년6월25일
 식품의약품안전처장
「건강기능식품의 기준 및규격 」일부 개정고시 (안)행정예고
1.개정 이유
 건강기능식품의 기준 및규격
 의기준 ․규격 적용을 명확하게 하고 ,
기능성 원료 중오메가 -3지방산 함유 유지를 EPA 및DHA 함유 유지로
명칭을 변경하며 ,시험법을 개선하여 영업자 및관계공무원 등의 이해를
도모하고 건강기능식품 산업 활성화에 기여 하고자 함.
2.주요 내용
가.기준 및규격 적용의 명확화 [안제1,6,제2,1-1, 제3,2-14,
제3,2-16, 제3,2-20, 제3,2-24]
1)기능성 원료별 기준 및규격의 추가 등재 명확화
2)건강기능식품에 사용할 수없는 원료 대상 명확화- 3 -3)기능성 원료인 오메가 -3지방산 함유 유지를 EPA 및DHA 함유
유지로 변경함
4)기준 및규격 적용대상을 명확히 하여 안전하고 기능성이 확보되는
건강기능식품 유통을 도모
나.시험법 개선 [안제4.]
1)분석 결과의 효율성을 높이기 위하여 시험법 제·개정
2)히알루론산 등7개성분 시험법 개선
3)시험법을 효율적으로 제·개정하여 산업체의 건강기능식품 관리에
도움
3.의견 제출
「건강기능식품의 기준 및규격 」일부개정고시 (안)에대하여 의견이
있는 단체 또는 개인은 2014년7월25일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 
식품의약품안전처장 (우편번호 :363-700, 주소 :충청북도 청원군 오송읍
오송생명 2로187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처 ,참조 :건강
기능식품기준과 ,(전화 )043-719-2457, (팩스 )043-719-2450) 에게 제출
하여 주시기 바랍니다 .
가.예고사항에 대한 항목별 의견 (찬․반여부와 그이유 )
나.성명 (단체 의경우 단체명과 그대표자의 성명 ),주소 및전화번호
다.기타 참고사항- 4 -식품의약품안전처 고시 제2014-000 호
 건강기능식품에 관한 법률
 제14조및제15조에 따른
 건강기능
식품의 기준 및규격
 (식품의약품안전처 고시 제2014-124 호,2014.6.5) 을
다음과 같이 개정 고시합니다 .
2014 년6월00일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준 및규격 일부개정고시 (안)
건강기능식품의 기준 및규격 일부를 다음과 같이 개정한다 .
제1,6을다음과 같이 한다 .
1)「건강기능식품 기능성 원료 및기준 ․규격 인정에 관한 규정 」에
따라 인정된 기능성 원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 「건강
기능식품의 기준 및규격 」제3.개별 기준 및규격에 추가로 등재
할수있다 .다만 당해 영업자가 자료의 보호가 필요하다고 요청
한경우 그타당성을 검토하여 기능성 원료로 인정받은 후품목
제조신고 또는 수입신고한 날로부터 추가등재를 5년이내에서
유예할 수있다 .
 (1)건강기능식품의 기능성 원료로 인정받은 후품목제조신고 또는
수입 신고한 날로부터 3년이 경과하였거나 3개이상의 영업자가 인- 5 -정받은 후품목제조신고 또는 수입신고한 경우
 (2)「건강기능식품에 관한 법률 」제14조제 2항의 규정에 의하여 인
정받은 자가 등재를 요청하는 경우(다만 인정받은 자가 3명이
상인 경우에는 3분의 2가건강기능식품공전에 등재를 요청하는
경우)
2)「건강기능식품 기능성 원료 및기준 ·규격 인정에 관한 규정 」제10조
제2항에 따른 기능성 내용 추가는 영업자가 인정받은 후1년이
경과한 경우(다만,인정받은 자가 건강기능식품공전에 등재를 요청하는 
경우는 제외 )
제2,1,1-1, 3)을다음과 같이 신설한다 .
3)
야생생물 보호 및관리에 관한 법률
 제2조제 2호및제3호에서 정한 
품목에 해당하는 것
제3,2,2-14, 2),(2)중“실리마린 (실리빈으로서 )”을“실리마린 ”으로 한다.
제3,2,2-16 중“오메가 -3지방산 함유 유지 ”를“EPA 및DHA 함유
유지 ”로한다 .
제3,2,2-20, 2),(2)중“식물스테롤에스테르 (식물스테롤에스테르를 원료
로”를“식물스테롤 (식물스테롤을 원료로 ”으로 한다.- 6 -시험항목 적용규정 시험방법 비고
수분
식품의
기 준 및
규 격
(식 품 공 전 )제10.일반시험법 1.1.1 수분
※Ⅱ.2.7.1 로얄젤리는 1.1.1.3 칼피셔법에 따름
회분 제10.일반시험법 1.1.2 회분
조지방 제10.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제10.일반시험법 1.1.5.3.1 산가
과산화물가 제10.일반시험법 1.1.5.3.5 과산화물가
환원당 제10.일반시험법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제10.일반시험법 2.4착색료
납 제10.일반시험법 7.1중금속 시험
카드뮴 제10.일반시험법 7.1중금속 시험
총수은 제10.일반시험법 7.1중금속 시험
총비소 제10.일반시험법 7.1중금속 시험
세균수 제10.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제10.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제10.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제10.일반시험법 3.11 살모넬라
세균발육 제10.일반시험법 3.6세균발육시험
테 트 라 싸이 클 린
클 로 르 테 트 라 싸 이 클 린제10. 일반시험법 5.3.49 옥시테트라싸이클린 ,클
로르테트라싸이클린 ,테트라싸이클린 ,독시싸이클린
총아플라톡신 제10.일반시험법 6.1.1 아플라톡신 (B1,B2,G1및G2)제3,2-24, 2)(3)중“cis-9 및trans-11 공액리놀레 산,trans-10 및
cis-12 공액리놀레 산함량(%)”을"cis-9 및trans-11 공액리놀레산과
trans-10 및cis-12 공액리놀레 산의 함량(%)”으로 한다.
[별표 4]시험법 적용표를 다음과 같이 한다 .- 7 -포도 당 당량(D .E .)제5.식 품 별 기 준 및규 격 6.포도 당 6)시 험 방 법 (1)포
도 당 당량(D.E.)
잔류 용매
(초산에틸)건 강 기 능 식
품 의 기 준
및규 격
(건 강 기 능
식 품 공 전 )제4.건강기능식품 시험법 2,2-5, 2-5-5초산에틸
잔류 용매
(이 소프로 필 알콜)식품첨가
물의기 준
및규 격
(식 품첨가 물
공 전)제4.품목별 규격 및기준 나.천연첨 가물 108.
글루코만난
잔류 용매제4.품목별 규격 및기준 나.천연첨 가물 80.파프
리카추출색소
제4,3,3-4, 3-4-2, 5,5.1을다음과 같이 한다 .
5.분석 및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 35℃
이동상 헥산:이소프로판올(98:2)
검출기파장 여기파장298nm,측정파장325nm
유량 0.5mL/ 분표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
 ※정량시험을 위해 시험용액1.0mL에토콜표준용액1.0mL를
가해 (S)이용액의10μL를분석한다 .또한 토코페 롤동족체각
각에대하여각각 토코페 롤표준용액1.0mL를취해 이에 토콜
표준용액1.0mL를가해 이용액의10μL를분석한다 .
S:시험용액에함유된 토콜의함량(mg)- 8 -제4,3,3-4, 3-4-3 비타민 E(제3법)를다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약
본시험법은 일반 식품인 경우 시료 중비타민 E를수산화칼륨용액과
피로갈롤·에탄올 용액을이용하여 비누화시키고헥산/초산에틸(9:1)
혼합용액으로 추출 후감압 건조시켜헥산을 가하여녹여형광 검
출기를 이용하는 방법과 유지식품의 경우 비누화조작을생략하고
헥산으로 추출한 후형광 검출기를 이용하여 여기파장298nm,측
정파장325nm에서 검출하고 정량한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로마토그래프 용유리병
 2.1.4갈색플라스크(100mL)
 2.1.5갈색부피플라스크(25, 100mL)
 2.1.6 원심분리기
 2.1.7갈색원심분리관 (50mL)
 2.1.8감압농축 기
2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프- 9 - 2.2.2형광 검출기 (Fluore scenceDetector,FLD)
 2.2.3 칼럼오븐
 2.2.4순상형칼럼(안지름 4.6mm,길이250mm,충전제NH2)
또는 이와동등한 것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서헥산과초산에틸을80:20으로혼합하여 분당 
1.0mL씩흘려줌으로서 칼럼과기기를 안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
 3.1.1 α-Tocopherol ((±)-α-Tocopherol; DL-all-rac-α-Tocopherol; 
VitaminE)
 분자식 :C29H50O2,분자량:430.71,CASNo.:10191-41-0
3.2일반시약
 3.2.1 에탄올 (Ethanol )
 3.2.2 피로갈롤(Pyrogallol )
 3.2.3증류 수(Distilledwater )
 3.2.4 수산화칼륨(Potassiumhydrox ide)
 3.2.5초산에틸(Ethylacetate )- 10 - 3.2.6헥산(n-Hexane )
4.시험과정
4.1시약 제조
 4.1.1 60%수산화칼륨용액
 수산화칼륨60g을증류 수에녹여100mL로조제한다 .
 4.1.2 1%염화나트륨용액
염화나트륨1g을증류 수에녹여100mL로조제한다 .
4.2표준용액제조
 4.2.1 토코페 롤동족체 표준용액
 4.2.1.1 표준원액:토코페 롤동족체 (α-,β-,γ-,δ-토코페 롤)을
각각 50mg씩정밀히취해 50mL갈색부피플라스크에
넣고헥산으로 표선까지채워 조제한다 .
 4.2.1.2 표준용액:각각 토코페 롤동족체 표준원액5mL씩
취하여 50mL갈색부피플라스크에넣고헥산으로 표선 까 지 
채워조제한 후갈색유리병에넣어질소로치환하여 밀전한 
후냉암 소에 보관한다 .
 4.2.1.3 검량곡 선표준용액:각각 표준원액을적당량취하여
갈색플라스크에넣고헥산으로희석하여 1∼10ug/mL 이
되도록조제한다 .보관 시에는질소로치환하여밀전한 
후냉암 소에 보관한다 .- 11 -4.3시험용액제조 (일반식품 )
 4.3.1 토코페 롤로서 약0.2mg에해당하는 시료를 정밀히취하여
갈색원심분리관에넣는다 .
 4.3.2 1%염화나트륨용액0.5mL을넣고3%피로갈롤에탄올 
용액10mL과60%수산화칼륨용액1mL을가하여 70℃
수욕중에 30분간진탕 하며 비누화한다 .
 4.3.3 이를흐르는 물에냉각 하고 1%염화나트륨용액22.5mL을
가한 후헥산․초산에틸(9:1)혼합용액을15mL가하여 10분간
진탕 한다 .
 4.3.4 2,000rpm에서 5분간원심분리하여 상층을갈색플라스크로
옮긴 다.
 4.3.5 하층에헥산․초산에틸(9:1)15mL을가하여 2회반복
추출하여 상층액 을합한다 .
 4.3.6 회수한 상층액 을감압 농축 한다 .
 4.3.7 위의잔류 물에 일정량의헥산을 가하여녹인것을 시험용액
으로 한다 .
4.4시험용액제조 (유지식품 )
 시료가 유지인 경우에는 비누화조작을생략하고 ,고속액체크로마토
그래프 에직접 주입할 수있다 .
 4.4.1 유지 약1g을정밀히취해 50mL부피플라스크에넣는다 .
 4.4.2헥산을넣어표선까지맞춘 다.- 12 - 4.4.3 위용액의일정량을취해헥산으로희석한 것을 시험용액으로 한다.
5.분석 및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 35℃
이동상 헥산:초산에틸(80 :20)
검출기파장 여기파장298nm,측정파장325nm
유량 1.0mL/ 분표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
5.2계산
α,β,γ,δ-토코페 롤의 함량(mg/100g)=C×(a×b)×100
S 1,000 
C：시험용액중의α,β,γ,δ-토코페 롤의농도(μg/mL )
a：시험용액의전량(mL)
b：시험용액의희석배수
S:시료채취량(g)
제4,3,3-26, 3-26-1 을다음과 같이 한다 .
1.시험방법의 요약
건조된 시료두개를 준비하고 이를 내열성α-아밀라아제 ,프로테아제 ,
아밀로글루코시다제 효소로연속적으로 분해하여 전분과 단백질 을
제거한다 .이때10%이상의 지방을 함유한 식품은 건조 전에 지방을 - 13 -제거하여 시험한다 .총식이섬유(TDF)정량은효소분해물에 녹아
있는 식이섬유를 에탄올 로처리하여침전시켜여과하고 에탄올 과
아세톤으로 세척한후,건조하여 그무게를 확인한다 .물불용성 식이
섬유(IDF)는효소분해물을 여과하여잔사를 따뜻한물로 세척하고
그무게를 확인하여 정량한다 .수용성식이섬유(SDF)는IDF의전처리
과정에서얻은여과액과세척액 을합하여 에탄올 로침전시킨후
여과하여 잔류 물을 건조하고 무게를 확인하여 정량한다 .총식이섬유,
물불용성 및수용성식이섬유함량계산 시잔사의 무게 중단백질 
및회분량은보정해준다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 비이커:400또는 600mLTall-form
2.1.2 유리여과기 :기공 40～60μm(ASTM 기준)의용융유리디스크가
있는 Pyrex 60mL(Corn ingNo.36060 Buchner 또는 이와동등
한것).525℃에서 하룻밤동안회화하고 회화로온도가130℃까지 
떨어지면 유리여과기를 상온에서 방냉한후,2%세척액 에
1시간동안담근 후물로씻고증류 수로헹군다음 아세톤
15mL을사용하여 마지막으로 세척하고 바람을불어대기 중
방치하여 건조시킨다.건조된 유리여과기에 규조토 약1.0g을
넣고130℃에서 항량한후,데시케이터에서 1시간동안실온에- 14 -방냉하여 규조토를포함한 유리여과기의 무게를 0.1mg까지
칭량하여 기록한다 .
2.1.3진공장치:조절장치를갖춘 진공펌프 나아스피레이터 ,1L
용량의여과용 가지달린플라스크및여과용 플라스크에
사용하는 고무 아답터
2.1.4 진탕 항온수조 :98±2℃까지 가온및온도의 유지가 가능하고
60℃로일정하게온도를 유지할 수있는 것
2.1.5저울:0.1mg까지측정이 유효한 것
2.1.6 회화로 :525±5℃유지할 수있는 것
2.1.7 오븐:105℃와130±3℃유지할 수있는 것
2.1.8데시케이터 :실리카겔이나 이와동등한 건조제가 있는 것
 건조제는 필요 시130℃에서 하룻밤동안건조하여 사용한다 .
2.1.9 pHmeter :온도보정이 되고pH4,7,10버퍼 용액으로
표준화 된것
2.1.10 피펫:일 회용팁이사 용가능 한 것으로 용량100～300uL및5mL
2.1.11디스펜서:15±0.5mL용3개(78%ethanol ,95%ethanol ,
acetone 용),40±0.5mL용1개(버퍼 용)
2.1.12 자석교반기 및마그네틱 바
3.표준물질및일반시약
3.2시액의제조- 15 -3.2.1 에탄올 수용액
(1)85%:1L정용 플라스크에95%에탄올 895mL을넣고물을
표선까지채워 조제한다 .
(2)78%:1L정용 플라스크에95%에탄올 821mL을넣고물을
표선까지채워 조제한다 .
3.2.2 내열성α-아밀라아제 용액:아래의효소분해능을 만족하거나 5)
효소활성 검증시회수율을 만족하는 것으로글리세롤이 없을 것,
0～5℃에 서 보관하며 사용한다 (Sigma 사Catalog No.A
3306 또는 이와동등한 것)
※(1)가 용 성 전 분 을 기질로하 는Nelson/Somogy ireducingsugar방 법 에
기초하 는 것:10,000±1,000units/mL(1unit:pH6.5,40℃에서 1분당 
1μmolereducingsugarequivalent s를만 드 는데필 요 한 효 소 의양)
※(2) 내열성α-글루코시다제의존재시기질로p-nitrophenyl -
malto saccharide를사용하는Ceralpha 방법에 기초한것:
3,000±300Ceralpha units/mL(1unit:pH6.5, 40℃에서 1분당 
1μmole p-nitrophenol 을만드는데필요한 효소의양)
3.2.3프로테아제 효소용액:아래의효소분해능을 만족하 거나 5)
효소 활성 검증시회수율을 만족하는 것으로써0～5℃에서
보관하고 MES/TRIS 완충액으로희석하여 50mg/mL 로사용 시
조제한다 (Sigma사Catalog No.P3910 또는 이와동등한 것).
※(1)Caseinassay:300～400units/mL(1unit:pH8.0, 40℃에서- 16 -가용성 casein으로부터 1분당 1μmole tyrosineequivalent s를
가수분해하는데필요한 효소의양);7～15units/mg(1unit:
pH7.5, 37℃에서 casein으로부터 1분당 1.0μmole tyrosine에
해당하는 색(Folin-Ciocalteau reagent )을내는데필요한 효소의양)
 (2)Azo-caseinassay:300～400units/mL(1unitendo -peptidase
activity:pH8.0,40℃에서 가용성 casein으로부터 1분당 1μmole 
tyrosineequivalent s를가수분해하는데필요한 효소의양)
3.2.4 아밀로글루코시다제 용액:아래의효소분해능을 만족하 거나
5)효소 활성 검증시회수율을 만족하는 것으로써0～5℃에서
보관하며 사용한다 .글리세롤이 없을 것(Sigma 사Catalog 
No.A9913 또는 이와동등한 것)
※ (1)Star ch/glu coseoxidase-perox idase방법 :2,000～3,300
units/mL(1unit:pH4.5, 40℃에서 1분당 1μmole 포도당을 
만드는데필요한 효소의양)
 (2) PNPBM(p-nitophenyl β-malto sidase)방법 :130～200
units/mL(1unit:β-글루코시다제가 과량존재할때,40℃에서 
1분당p-nitrophenyl β-malto sidase가1μmole p-nitrophenol 을
만드는데필요한 효소의양).
3.2.5 규조토 (Diatoma ceousearth ):산세척한것(Sigma 사Catalog 
No.C8656 또는FisherScientific사Catalog No.C-211,
산세척또는 그와동등한 것)- 17 -3.2.6 세척용액:실험실용액체 계면활성 세정제 (Internat ional
produ cts사의Micro혹은그와동등한 것)를2%수용액으로 
조제한다 .
3.2.7 MES:2-(N-Morphol ino)ethane sulfon icacid(Sigma 사
Catalog No.M-8250 또는 이와동등한 것)
3.2.8 TRIS :Tris(hydroxymethyl )aminomethane (Sigma 사
Catalog No.T-1503 또는 이와동등한 것)
3.2.9MES-TRIS 완충용액(0.05MMES,0.05MTRIS ,24℃에서
pH8.2) :MES19.52g과TRIS 12.2g을물1.7L에녹인후
6N수산화나트륨용액을가하여pH8.2로조절한 후,물을
가하여 2L가되게 조제한다 (24℃에서pH8.2로조절하는 것이 
중요하다 .만약버퍼 용액의온도가 20℃이면pH8.3으로
조절하고 ,28℃이면pH8.1로조절한다 ).
3.2.10염산용액(0.561N):1L정용 플라스크에물약700mL를
넣고6NHCl93.5mL을혼합한 후증류 수로 표선까지채워 
조제한다 .
4.시험과정
4.1시험용액의제조
4.1.1 시료 균질화
 건조된 시료의 총식이섬유를 확인하기 위해서 시료를 균질
화한 후,70℃진공오븐에서 하룻밤 동안건조시킨다.시료를- 18 -데시케이터에서 방냉하고 0.3～0.5mmmesh가되도록건식 분쇄
한다.열처리를 할수없는 시료의 경우 분쇄하기 전에냉동 
건조한다 .지방함량이높다면 (10%이상 )분쇄하기 전에 석유에
테르로탈지한다 (시료 1g당25mL씩3번처리 ).지방제거로 
인한 무게손실을 기록하고 이에 대한 총식이섬유함량(%)을
보정한다 .분석 전까지 건조 -분쇄된시료는 마개가 있는병에
담아데시케이터에서 보관한다 (만약 시료의 지방함량을모
른다면 ,식이섬유를측정하기 전에탈지한다 ).당함량이높은
제품은 식이섬유측정전에 85%에탄올 (10mL/g )로2～3회
추출한 다음 상등액을제거하고 40℃에서 하룻밤 동안건조한다 .
4.1.2 효소분해
 4개의 400mL(또는 600mL)tall-form 비이커에시료 1.000±
0.005g을정밀히달아2개의 검체 (M1,M2)를준비하고 2개의 
공시험 (B1, B2)을준비한다 .이에MES-TRIS 완충용액40mL씩
가하여 시료가뭉치 지않고완벽 하게 분산될때까지 자석교
반하여혼합한다 .저속으로혼합하면서 ,내열성α-아밀라아제
용액50μL을첨가한다 .비이커를알루미늄박 으로덮은후95
∼100℃수욕에서 15분동안계속교반하면서 반응한다 .수욕의
온도가 95℃에도달할때부터 시작한다 (보통 총35분이면 충분
하다 ).수욕에서 모든비이커를꺼내어 60℃로식힌다.알루
미늄박 을제거하고 비이커의벽또는 바닥에생긴겔형태 의- 19 -내용물을 시약 스푼으로긁어내어 용액속에 분산시킨다.비이커
벽과시약 스푼을10mL의물로씻어준다 .프로테아제 효소
용액100μL을각비이커에첨가한다 .알루미늄박 으로 비이커를
덮고60±1℃수욕에서 30분간계속해서교반하여 반응시킨다.
수욕의온도가 60℃에도달한후반응을시작한다 .알루미늄
박을제거한 후비이커를잘교반하면서 0.561NHCl5mL을
넣어준다 .60℃에서 1NNaO H,1NHCl를사용하여 용액을
pH4.0～4.7로조정한다 (※참고 :pH는낮은온도에서올라
가기 때문 에60℃에서pH를조정하고 확인하는 것이 중요하다 .
대부분의곡류 ,채소시료의 경우 ,pH조정이 없이도pH조건을
만족할 수있으므로이전에 확인된 시료의 경우 ,pH조정 과정을 
생략할수있다 .단,공시험의pH를예비단계로 확인하고 만약 
공시험의pH가올바른범위를벗어난다면 ,반드시 시료의
pH를점검한다 ).비이커를교반하면서 아미노글 루코시다제
용액300μL를첨가하고 알루미늄박으로덮은후60±1℃수욕
에서교반하면서 30분간항온한다 .수욕의온도가 60℃에도달
할때반응을시작한다 .
4.2총식이섬유(TDF)함량측정
4.2.1 실온기준 225mL95%에탄올 을60℃에서 효소 분해된각
각의시험용액에가한다 .이때에탄올 과시험용액의부피 비율
은4:1이되어야 한다.수욕에서 비이커를꺼내어 알루미늄박으- 20 -로덮고실온에서1시간침전시킨다.☆미리 규조토를넣고무게를
칭량한유리여과기에 78%에탄올 15mL을가하여 규조토를
분산시킨후흡인여과하여 규조토층이고르게형성되도록한
다.에탄올 처리된 효소 분해물을 준비된 유리여과기로 여과
하고 78%에탄올이들어있는 세척병 과고무재질의시약스푼를
이용하여 비이커의잔류 물을 유리여과기로 옮긴 다.이때효소
분해물에엷은막이생성될경우 ,시약 스푼으로 생성된막을
깨고여과한다 .진공을 유지하면서 78%에탄올 ,95%에탄올 ,아
세톤순으로각각 15mL씩2회잔류 물을씻는다 .★105℃에
서잔류 물이남아있는 유리여과기를 하룻밤 동안건조 시키
고,데시케이터에서 1시간동안방냉하여 항량한후,식이섬유
잔류 물및규조토를포함한 유리여과기의 무게를 0.1mg단위
까지 칭량한다 .미리 칭량하여 확인한 규조토를포함한 유리
여과기의 무게를빼서식이섬유의 무게를 계산한다 .같은두
개의 시료 중하나는 1.1.3.1 총질소및조단백질 에따라 단백
질함량을측정한다 .이때질소계수는 6.25를사용한다 .다른
하나는 1.1.2. 회분에 따라 회분량을확인한다 .이때525℃에서
5시간이상 회화하고 0.1mg단위까지 칭량한다 .미리 칭량하
여확인한 규조토를포함한 유리여과기의 무게를빼서회분
의무게를 결정한다 .
4.3물불용성 식이섬유(IDF)측정- 21 -4.3.1 미리 규조토를넣어항량하여 준비한 유리여과기에 물3mL
을가하여 규조토를 적시고 분산시킨후흡인여과하여 규조
토층을고르게 한다 .이에 시험용액조제에서얻어진효소분
해물을 유리 여과기를 통해 여과용 플라스크로여과한다 .비이
커를세척하면서 잔류 물을 70℃물10mL로2회세척한다 .
여액과물세척액 을합치고,미리 무게를 칭량한600mL비
이커로옮겨 9)수용성 식이섬유측정에 사용한다 .잔류물은곧
바로 78%에탄올,95%에탄올그리고 아세톤의순으로각각15
mL씩2회세척한다(주의:잔류물의세척을즉시하지않을경
우,IDF값이높아질수있다 ).7)총식이섬유함량측정과
정의★이하에 따라IDF의무게를 계산한다 .
4.4수용성 식이섬유(SDF)측정
4.4.1 물불용성 식이섬유측정에서 600mL비이커로옮긴 여액과물
세척액 의무게를 확인하여 부피를 확인하고 미리 60℃로가열된
95%에탄올 을측정한 부피의 4배량을가한다 .이때60℃에탄올의
일부를 이용하여 여과용 플라스크에남은여액과물세척액 을
세척한다 .여과액과물세척액 에에탄올 을4배량 가하기 위한
방법으로 물을첨가하여 여과액과물세척액 의무게를 80g
으로맞추고 ,60℃의95%에탄올 320mL을가할 수도 있다 .
그후,상온에서 1시간침전시킨후,7)총식이섬유함량측정
중☆이하에 따라SDF의함량을측정한다 .- 22 -5.계산
5.1계산
※총식이섬유함량은7)총식이섬유(TDF)함량측정을 독립적
으로 수행하여 결정하거나 8)물불용성 식이섬유(IDF)측정및
9)수용성 식이섬유(SDF)측정에서구한IDF와SDF의합으로 
결정할 수있다 .
 가)공시험 함량(B,mg)측정:
 B=[(B1R+B2R)/2]-PB-AB
 B1R,B2R:공시험 2반복에대한잔사의 무게 (mg)
 PB:공시험 (B1) 의단백질 무게 (mg)
 AB:공시험 (B2) 의회분 무게 (mg)
나)식이섬유함량(DF,g/100g)측정:
 

×
M1R,M2R:검체 2반복의잔사무게 (mg)
 P:잔사(M1R)중단백질 무게 (mg)
 A:잔사(M2R)중회분 무게 (mg)
 B:공시험 함량(mg)
M1,M2:검체의 무게 (mg)- 23 -제4,3,3-26, 3-26-2 를다음과 같이 한다 .
1.시험방법의 요약
난소화성말토덱스트린 (RMD) 등을 함유한 식품에 인산완충액을
이용한 효소 -중량법을 적용하여 에탄올 에의해침전되는 고분자의 
난소화성말토덱스트린과 같은 수용성 식이섬유(HMWS DF)를확인하고
에탄올 에녹는저분자의난소화성말토덱스트린과 같은 수용성 식이
섬유(LMWS DF)를탈염 하여농축 한후,액체크로마토그래피로 확인
하는 방법이다 .이방법에서 총식이섬유는 물불용성 식이섬유
(IDF)및HMWS DF와액체크로마토그래피로 확인한LMWS DF의
합으로 계산되어진다.즉효소-중량법으로구한식이섬유의함량에
알코올 에녹는수용성 식이섬유의 함량을합하여 총식이섬유의 함량
으로 한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1저울 :0.1mg까지측정이 유효한 것
2.1.2 비이커:500mLTall-form
2.1.3진탕항온수조 :98±2℃까지 가온하여온도유지 가 가능하 고 60℃로
일정하게온도를 유지할 수있는 것
2.1.4 유리여과기 :기공 40～60μm(ASTM 기준)의용융유리디스크가
있는 Pyrex 60mL(Corn ingNo.36060 Buchner 또는 이와- 24 -동등한 것).525℃에서 하룻밤 동안회화하고 회화로온도가 
130℃까지떨어지면 유리여과기를 상온에서 방냉한후,2%세척
액에1시간동안담근후물로씻고증류수로헹군다음 아세톤
15mL을사용하여 마지막으로 세척하고 바람을불어건조
시킨다.건조된 유리여과기에 규조토 약1.0g을넣고130℃
에서 항량한후,데시케이터에서 1시간동안실온에방냉하여 
규조토를포함한 유리여과기의 무게를 0.1mg까지 칭량하여
기록한다 .
2.1.5 유리 또는 플라스틱칼럼관:이온교 환수지를채우기 위한 것
으로 40∼70cm×15mm내경의 칼럼관
2.1.6 유리막대:20cm길이로끝을열처리한 것
2.1.7 일회용 주사기 :10mL
2.1.8파스퇴르피펫,10mL정용피펫
2.1.9저울 :4,000g용량
2.1.10 테프론막대:비이커의침전물을 모을 수있는 것
2.1.11 용량플라스크:10,50,250 및1,000mL
2.1.12감압농축 기
2.2분석장비
2.2.1 고소액체크로마토그래프
2.2.2 시차굴절계 (Refra ctiveIndex Detector)
2.2.3 칼럼오븐- 25 -3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1액체크로마토그래피머무름 시간확인용 표준물질:저분자의난
소화성말토덱스트린에 해당하는올리고당 [DP(Degree of
polymer ization)≥3]을포함한 DE(Dextro seequivalent )25또는
16.5～19.5의말토덱스트린 (Sigma사419699 또 는 이 와동등 한 것)
3.1.2 Glycerol
 분자식 :C3H8O3,분자량:92.09,CASNo.:56-81-5
3.2일반시약
3.2.1증류 수:3차증류 수
3.2.2 에탄올 :95%Technicalgrade
3.2.3 에탄올 수용액(78%)
 1L정용 플라스크에95%에탄올 821mL을넣고물을 표선까지 
채워 조제한다 .
3.2.4 인산수소나트륨(Na 2HPO4)및인산이수소나트 륨(NaH2PO4)
3.2.5 내열성α-아밀라아제 용액:Termamyl 120 또는 이와동등한 것,
글리세롤이 없을 것,0～5℃에서 보관하며 사용한다 (Sigma 사
Catalog No.A3403 또는 이와동등한 것)
3.2.6프로테아제 효소용액:1.1.4.3. 가.4)시약 및시액라)의효소
분해능을 만족하는 것으로써0～5℃에서 보관하고 인산완충- 26 -용액으로희석하여 10mg/mL 로사용 시조제한다 (Sigma 사
Catalog No.P3910 또는 이와동등한 것)
3.2.7 아밀로글루코시다제 용액:0～5℃에서 보관하며 사용한다 .
글리세롤이 없을 것(Sigma 사Catalog No.A9913 또는 이와 
동등한 것)
3.2.8 규조토 (Diatoma ceousearth ):산세척한것(Sigma 사Catalog 
No.C8656 또는FisherScientific사Catalog No.C-211,
acidwashed또는 이와동등한 것)
3.2.9각시료의탈염을위한 이온교환수지
 (1)m-1:25gAmberl iteIRA-67(OH-type)또는 이와동등한 것
 (2)m-2:25gAmberl ite200CT(HG)H(H-type )또는 이와
동등한 것
3.2.10황산암모늄
3.2.11덱스트로즈:액체크로마토그래피용 ,순도99.5%이상
3.3시액의제조
3.3.1 인산완충용액(0.08M,pH6.0)
 무수 인산수소나트륨1.4g(또는 2수화물 1.753g)과9.68g
인산이수소나트륨·1수화물 (또는 2수화물 10.94g)을700mL증류수 에
녹인후증류 수를 가하여 1L로조제한다 .이때pH를확인한다 .
3.3.2각시료의탈염을위한 이온교환수지
 (1)m-1:25gAmberl iteIRA-67(OH-type)또는 이와동등한 것- 27 - (2)m-2:25gAmberl ite200CT(HG)H(H-type)또는 이와동등한 것
각시험 용액의분석을 위해서 유리 칼럼에상기 2종의수지를
잘혼합하여 충진한다 .
 ․총이온교 환능 :1.74meq/mL
 ․유효 이온교 환능 (R-H교환능 ):1.6meq/mL (min.)
 ․상기 2종의수지를혼합하여 충진하기 전각수지를증류 수로
세척하고 세척액 의pH가m-1은7～8.8,m-2는4～7의값이
되도록한다 .
※ Amberl ite200CT(HG)H 가 없을 경우 ,Amberl ite200
(Na-type )또는 Amberl ite200CT를'H-type' 으로 전환하여 
사용한다 .이를 위해 Amberl ite200(Na-type)600mL(500g)을
유리 또는 플라스틱칼럼관(100 cm×40mmid)에채우고
2배부피의증류 수를 이용하여 60mL/m in의속도로 세척
하고 2배부피의 10%염산용액(1→3w/w )을 재차 60
mL/m in의속도로흘려준 후수지의 3배부피에 해당하는
증류 수를 이용하여 60mL/m in의속도로 세척하여염산을
제거한다 .3～6배의부피에 해당하는증류 수를 120mL/m in의
속도로 재차 세척하고 세척액 의pH가4～7인지 확인하여
염산용액의세척이제대로 이루어졌는지 확인하여 사용한다 .
3.3.3 수산화나트륨수용액(0.274N)
 NaO H11g을증류 수약700mL에녹인후증류 수를 가하여 - 28 -1L로조제한다 .
3.3.4염산용액(0.325N)
 1L정용 플라스크에1NHCl325mL을넣고증류 수를 가하여 
1L로조제한다 .
3.3.5글리세롤 표준용액(10mg/mL )
 비이커에글리세롤 (순도99.5%이상 )10g을달아1L정용
플라스크로물로씻어옮겨 표선까지채워 조제한다 .
3.3.6덱스트로즈-글리세롤 반응계수 확인용 표준용액(100mg/mL )
 비이커에글리세롤 (순도99.5%이상 )10g을달아100mL
정용플라스크에물로씻어옮겨 표선까지채워 조제한다 .
4.시험과정
4.1시료 균질화
4.1.1 제10,1,1.1, 1.1.4, 1.1.4.3. 식이섬유가.효소 -중량법6)시험
용액조제 가)와같이 준비한다 .당함량이높은 시료의 경우,
LMWS DF의손실을 고려하여 85%에탄올 세척과정은 생략한
다.
4.2효소분해
4.2.1 4개의 500mLtall-form 비이커에시료 1.000±0.005g을정
밀히달아2개의 검체 (M1,M2)를준비하고 2개의 공시험
(B1, B2)을준비한다 .이에 인산완충용액50mL씩가하고초- 29 -음파를이용하여 시료가뭉치지않고완벽하게 분산시킨다.내열
성α-아밀라아제 용액100μL을첨가한다 .비이커를알루미
늄박 으로덮은후95℃수욕에서 30분동안계속진탕 하면서
반응시킨다.수욕의온도가 95℃에도달할때부터 시작한다 (보
통총35분이면 충분하다 ).수욕에서 모든비이커를꺼내어 실
온으로 식힌다.알루미늄박 을제거하고 비이커에벽또는 바닥
에생긴겔형태 의내용물을 시약스푼으로 긁어내어 용액속
에분산시킨다.비이커벽과시약스푼을10mL의물로씻어
준다 .0.275N수산화나트륨용액으로pH를7.5±0.1로조정한
후,프로테아제 효소용액0.5mL를각비이커에첨가한다 .알
루미늄박 으로 비이커를덮고60℃수욕에서 30분간계속해서
교반하여 반응시킨다.수욕의온도가 60℃에도달한후반응
을시작한다 .실온으로 용액을식힌후,알루미늄박 을제거
한후비이커를잘교반해주면서 0.325NHCl로용액의pH
를4.5±0.2로조정한다 .비이커를교반해주면서 아미노글 루코
시다제 용액0.3mL를첨가하고 알루미늄박으로덮은후60℃
수욕에서 지속적으로 흔들 면서 30분간항온한다.수욕의온도가
60℃에도달할때반응을시작한다 .
4.3물불용성 식이섬유(IDF)및HMWS DF의함량측정
4.3.1 60℃로가열한95%에탄올 을 60℃수욕상의 효소 분해된각
각의시험용액에가한다 .이때에탄올과시험용액의부피의 비율은- 30 -4:1이되어야 한다 .수욕에서 비이커를꺼내어 알루미늄박
으로덮고실온에서 하룻밤 침전시킨다.미리 규조토를넣고
무게를 칭량한유리여과기에 있는 78%에탄올 15mL을가하
여규조토를 분산 시킨후흡인여과하여 규조토층이고르게형
성되도록한다.에탄올처리된 효소 분해물을 준비된 유리여과기
로여과하고 78%에탄올이들어있는 세척병 과고무재질의시
약스푼을이용하여 비이커의잔류 물을 유리여과기로 옮긴
다.이때효소분해물에 엷은막이생성될경우 ,시약스푼으
로생성된막을깨고여과한다 .진공을 유지하면서 20mL
78%에탄올 3회,10mL95%에탄올 로2회,10mL아세톤으
로2회씩잔류 물을씻어낸다.105℃에서잔류 물이 남아있는 유
리여과기를 하룻밤 건조시키고,유리여과기를데시케이터에서 1
시간동안항량한후,식이섬유잔류물및규조토를포함한유리
여과기의 무게를 0.1mg단위까지 칭량한다 .미리 칭량하여 
확인한 규조토를포함한 유리여과기의 무게를빼서식이섬유
의무게를 계산한다 .같은두개의 시료 중하나는 1.1.3.1 총
질소및조단백질 에따라 단백질 함량을측정한다 .이때질소
계수는 6.25를사용한다 .다른 하나는 1.1.2. 회분에 따라 회분
량을확인 한다.이때525℃에서 5시간이상 회화하고 0.1mg단
위까지 칭량한다 .미리 칭량하여 확인한 규조토를포함한 유리
여과기의 무게를 빼서회분의 무게를 결정한다 .- 31 -4.4여액회수 및탈염
4.4.1 4.3의여액을감압농축 기로농축 하여완전건고하고잔류 물을
소량의물로녹인후,이를 50mL정용플라스크에정량적으로 
옮긴다.이에글리세롤 표준용액10mL을넣고증류수로 표선까지 
채워 50mL로조제한다 .이를 Amberl iteIRA-67(m-1) 및
Amberl ite200CT(HG)H(m-2)각25g을완전히혼합하여
채운유리칼럼(75cm×15mmid)에통과시키고이후 ,250mL
증류수로 칼럼을통해 세척하며 추출한다 .이때유속은 0.8mL/m in
으로 조정한다 .이온교환칼럼을통과한초기용출액부터 250mL를
모아 정량적으로 500mL둥근 플라스크에옮기고완전건고
될때까지감압농축한다.이를 10mL정용플라스크로증류수를 
이용하여 정량적으로옮겨 10mL로조제한 후10mL일회용 
주사기에옮겨 0.2μm맴브레 인필터로 여과하여액체크로마토
그래피용 시험용액으로 한다 .
5.분석 및계산
5.1시험조작
5.1.1액체크로마토그래프 의측정조건
 -분석칼럼:TSK -GELG2500PWXL,7.8mmid×30cm를
연속하여 2개를연결한 것또는 이와동등한 것
 -가드 칼럼:TSK guard column PWXL ,6.0mmid×4cm- 32 -또는 이와동등한 것
 -칼럼온 도:80℃
 -이동상:증류 수
 -유속 :0.5mL/m in
 -주입량:20μL
 -검출기 :시차굴절계검출기 (RI),40℃유지
5.1.2RMD와액체크로마토그래피반응이동등한덱스트로즈로
반응계수 결정
 RMD의RI검출기의 반응에대한평가와 표준화를 위해
글리세롤 표준물질을사용한다 .LC분석에서RI검출기에서
얻은RMD의 피크면적은덱스트로즈와동등하며 내부표준
물질인글리세롤의 피크면적과덱스트로즈의농도에 따른
피크면적을 비교한다 .이렇게작성된 검량곡 선으로부터 시험
용액중RMD의함량을계산하는데사용할 반응계수를 결정한다 .
동량 의글리세롤과 3개농도수준으로덱스트로즈를100mL
정용플라스크에각각 넣은3개의 용액을준비한다 .이를 위해 
0.5,1.0,2.0g의덱스 트 로즈를3개 의구분 된 100mL정 용 플 라 스크에
정확히 칭량하여넣고덱스트로즈-글리세롤 반응계수 확인용 
표준용액10mL을각정용 플라스크에첨가한 후증류 수를
채워 100mL로조제한다 .조제된 3개의 표준용액20μL를
액체크로마토그래피에 주입하여각크로마토그래피에서덱- 33 -스트로즈와글리세롤의 피크면적을 확인하여글리세롤의 피
크면적에 대한덱스트로즈피크면적 비(y-축)와글리세롤 함량에
대한덱스트로즈함량비(x-축)을비교하여얻어진기울기의 
역수로부터 아래의식과 같이 반응계수를구한다 .
 반응계수 (Rf)=1/[(PA-dex/ PA-gly)×(Wt-gly/Wt -dex)]
 PA-dex:덱스트로즈피크면적
 PA-gly:글리세롤 피크면적
Wt-dex:표준용액중덱스트로즈함량
Wt-gly:표준용액중글리세롤 함량
5.1.3액체크로마토그래피의크로마토그램
그림1.표준용액및시험용액의크로마토그램- 34 -5.2식이섬유함량계산
※총식이섬유함량(TDF)은%(IDF+HMWS DF)와LMWS DF의
평균함량(%ALMWS DF)을합하여 계산한다 .
5.2.1 (IDF+HMWS DF)의함량계산
 (1)공시험 함량(B,mg)측정:
 B=[(B1R+B2R)/2]-PB-AB
 B1R,B2R:공시험 2반복에대한잔사의 무게 (mg)
 PB:공시험 (B1) 의단백질 무게 (mg)
 AB:공시험 (B2) 의회분 무게 (mg)
5.2.2 (IDF+HMWS DF)평균함량(g/100g)측정:
 

×
M1R,M2R:검체 2반복의잔사무게 (mg)
 P:잔사(M1R)중단백질 무게 (mg)
 A:잔사(M2R)중회분 무게 (mg)
 B:공시험 함량(mg)
M1,M2:검체의 무게 (mg)
5.2.3LMWS DF의평균함량
 5.2.3.1LMWS DF(mg)측정:- 35 -LMW SDF =PAS_LMW SDF×W tS_gly×Rf
PAS_gly
 PAS_LMWS DF:시험용액중LMWS DF(DP≥3)의피크면적
 PAS_gly :시험용액중글리세롤의 피크면적
WtS_gly :시험용액에첨가한글리세롤의 무게 (mg)
Rf:덱스트로즈-글리세롤 반응계수
 5.2.3.2각시료의LMWS DF의함량(g/100g)측정
%LMWS DF=LMWS DF×100
SW
SW:시료의 무게 (mg)
 5.2.3.3LMWS DF의평균함량(g/100g)
%ALMWS DF=%LMWS DF+%LMWS DF'
2
 %LMWS DF,%LMWS DF':각시료의LMWS DF의함량(g/100g)
제4,3,3-73폴리감마글루탐산을 다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중폴리감마글루탐산을 산분해한 후아미노산
자동분석기를 이용하여 분석하는 방법으로 570nm에서 정량분석한다 .- 36 -2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용 실린지
2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
2.1.3액체크로마토그래프 용유리병
2.1.4초음파진탕 기
2.1.5 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 아미노산자동분석기
2.2.2 이온교환칼럼으로 HRNA칼럼(안지름 4.6mm,길이200
mm,유리아미노산분석용 )또는 이와동등한 것
2.3분석장비의 준비
완충액,발색시약의 유무 ,칼럼항온조의온도를점검하고 ,자동완
충액전환기구및정유량펌프 ,유량을소정의 조건에 따라 설정
하고측정을 실시한다 .
2.3.1 아미노산자동분석기 관련시약
 2.3.1.1닌히드린시약 (Ninhydr inreagent ,기기조건에 적합한 용액으로 
조제하여 사용 )
 2.3.1.2구연 산리튬완 충액(Lithiumcitrate buffer ,기기조건에 적합한 
용액으로 조제하여 사용 )
 2.3.1.3완충액(기기조건에 적합한 용액으로 조제하여 사용 )- 37 -3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1폴리감마글루탐산(Poly-[gamma ]-glutam icacid)
 분자식 :C15H21N3O9X2,분자량:387.34,CASNo.:
84960-48-5
3.2일반시약
3.2.1염산(Hydro chloricacid)
3.2.2증류 수(Distilledwater )
3.2.3 메탄올 (Methanol )
4.시험과정
4.1표준용액제조
4.1.1 표준물질폴리감마글루탐산10mg을정밀히칭량하여 100mL
부피플라스크에넣는다 .
4.1.2증류 수를넣어표선까지맞추어 표준원액으로 한다 .- 38 -4.1.3 표준원액을0.02N염산용액으로 적정농도로희석하여 표준
용액으로 한다 .
4.2시험용액제조
4.2.1 시료 100mg을정밀히칭량하여 10mL부피플라스크에넣는다 .
4.2.2 적당량의증류 수를넣고잘흔들 어녹인다
4.2.3 10분간초음파로추출한다 .
4.2.4증류 수로 10mL가되게 정용한다 (A).
4.2.5 (A)액0.5mL를취하여 6N염산10mL를가한 후110℃에서 
24시간가수분해한다 .
4.2.6 위의 용액을50mL부피플라스크에옮겨 증류 수로 정용한
다음 0.02N염산용액으로 10배희석하여 시험용액으로 한다 .
4.2.7 시험용액을아미노산자동분석기로 분석하여 총글루탐산
함량(%)을구한다 .
4.2.8 산으로 가수분해 하지않은(A)액은0.02N염산용액으로 10배
희석하여 아미노산자동분석기로 분석하여 유리글루탐산함량
(%)을구한다 .
5.분석 및계산
5.1기기분석- 39 -항목 조건
주입량 20uL
칼럼온 도 38∼78℃
흡광 검출기파장 570nm
완충액 0.35mL/m in
반응액 닌히드린 시약 :0.30mL/m in
반응기온도 135℃표1.아미노산자동분석기조건 (예)
5.2계산
5.2.1폴리감마글루탐산함량(mg/g )=(총글루탐산함량×0.88)
-유리글루탐산함량
*총글루탐산함량(mg/g )=(H×V×D)/(S×1,000)
 H:가수분해한 시험용액의총글루탐산농도(μg/mL )
V:시험용액의전량(mL)
 D:희석배수
S:시료채취량(g)
*유리글루탐산함량(mg/g )=(C×V×D)/(S×1,000)
C:(A)액의유리글루탐산농도(μg/mL )
V:시험용액의전량(mL)
 D:희석배수
S:시료채취량(g)
*0.88=129 (폴리글루탐산중의글루탐산잔기의 분자량)/147
(글루탐산분자량)- 40 -제4,3,3-74 히알루론산을 다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터 추출한 히알루론산을 콘드로이티나아제
ABC를이용하여특이적으로 분해시켜얻은이당류를액체크로마토
그래프를사용하여 분석하는 방법이다 .음이온을가진이들분해산물을 
음이온교 환수지 칼럼을이용하여 232nm에서 정량분석한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용 실린지
2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
2.1.3액체크로마토그래프 용유리병
2.1.4초음파진탕 기
2.1.5 부피플라스크
2.1.6교반기
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6mm,길이250mm,충전제 - 41 -강염기성의암모늄이온교환수지로코팅 된실리카겔),Hyper sil
GOLDSAX또는 이와동등한 것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 0.05MNaCl (pH3.5)을분당 1.0mL씩흘려줌으로서 
칼럼과기기를 안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Hyaluron icacidsodiumsalt(Poly(β-glucuron icacid-[1→3]-
β-N-acetylglu cosamine-[1→4]),alternat ing)
 분자식 :(C14H21NaNO 11)n,분자량:401.3,CASNo.:
9067-32-7
3.2일반시약
3.2.1콘드로이티나아제 ABC(Chondro itinaseABC)
3.2.2 트리스염(Trisbase)
3.2.3 아세트산나트륨(Sodiumacetate )
3.2.4염산(Hydro chloricacid)- 42 -3.2.5증류 수(Distilledwater )
3.3시액의제조
3.3.1 33mMTris-HCl완충용액제조
 트리스염3.99g과아세트산나트륨2.7g을각각 취하여 900mL
증류수에녹인후염산을 이용하여pH8.0으로 조절한 후1L로
한다 .
4.시험과정
4.1표준용액제조
4.1.1 표준물질을정밀하게 칭량하고 33mMTris-HCl완충용액에
희석하고 60℃수욕상에서완전히녹인것을 표준원액으로 한다.
4.1.2 위의 표준원액을33mM Tris-HCl완충용액을이용하여
적절히희석한 용액을표준용액으로 한다 .
4.1.3 표준용액50uL에0.002unit/uL 콘드로이티나아제 ABC50uL
와33mMTris-HCl(pH8.0)완충용액400uL를넣고37℃
에서 3시간반응시킨다.
4.1.4 반응이완료되면 100℃에서 5분간가열하고 위의 용액을0.45μm의
멤브레 인필터로 여과하여 표준용액으로 한다 .
4.2시험용액제조
4.2.1 히알루론산으로서 0.5∼5mg이함유되도록적당량의시료를
칭량하여 50mL부피플라스크넣고33mMTris-HCl완충- 43 -용액으로 정용한 후혼합한다 .
4.2.2 마그네틱 바를넣고60℃에서 90분간강하게 추출 후실온에
식힌다.
4.2.3 시료추출액50uL에0.002unit/uL 콘드로이티나아제 ABC
50uL와33mMTris-HCl(pH8.0)완충용액400uL를넣고
37℃에서 3시간반응시킨다.
4.2.4반응이완료되면 100℃에서 5분간가열하고 용액을0.45μm의
멤브레 인필터로 여과하여 시험용액으로 한다 .
5.분석 및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 10uL
칼럼온 도 40℃
이동상 0.05MNaCl (pH3.5)
검출기파장 232nm
유량 1.0mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
5.2계산
5.2.1 히알루론산 표준용액에서얻은히알루론산의 피크면적으로
검량선을작성하고 ,검량선식을 이용하여 시험용액중의 히
알루론산의농도를구한후아래식을 이용하여 히알루론산 
함량을계산한다 .- 44 -히알루론산의 함량(mg/g )=A×B×C×378.3
D×1,000 401.3
 A:시험용액의전량(mL)
 B:희석배수
C:시험용액중의 히알루론산의 농도(μg/mL )
 D:시료채취량(g)
 1/1,000 :단위 환산 계수
 378.3 :히알루론산 이당류의분자량
 401.3 :히알루론산 나트륨이당류의분자량
제4,3,3-75 로사빈을 다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중로사빈을 메탄올 용액으로초음파로추출 한후
액체크로마토그래프/자외부흡광광 도검출기를 이용하여 분석하는
방법으로최대흡수파장인 250nm에서 정량분석한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용 실린지
2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
2.1.3액체크로마토그래프 용유리병- 45 -2.1.4초음파진탕 기
2.1.5 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6mm,길이250mm,충전제 
octade cylsilica)또는 이와동등한 것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서증류 수와 아세토니트릴을80:20으로혼합하여 분
당1.0mL씩흘려줌으로서 칼럼과기기를 안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 로사빈 (Rosavin)
 분자식 :C20H28O10,분자량:428.43,CASNo.:84954-92-7
- 46 -3.2일반시약
 3.2.1 메탄올 (Methanol )
 3.2.2 아세토니트릴(Aceton itrile)
 3.2.3증류 수(Distilledwater )
4.시험과정
4.1표준용액제조
4.1.1 표준물질로사빈 10mg을정밀히칭량하여 10mL부피
플라스크에넣는다 .
4.1.2 메탄올 을넣어표선까지맞춘 다.
4.1.3 위의 표준원액을메탄올 을이용하여 적정농도로희석하여 표준
용액으로 한다 .
4.2시험용액제조
4.2.1 시료 100mg을정밀히칭량하여 100mL부피플라스크에
메탄올 을가하여녹인다 .
4.2.2 10분동안초음파로추출 후실온에서냉각 하여 메탄올 로
정용한다 .
4.2.3 위의 용액을0.45 μm의멤브레 인필터로 여과하여 시험
용액으로 한다 .
5.분석 및계산- 47 -5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 30℃
이동상A:Distilledwater
B:Aceton itrile
검출기파장 250nm
유량 1.0mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
분이동상 (%)
A(Distilled water) B(Acetonitrile)
0 80 20
15 80 20
20 30 70
25 30 70
30 80 20
40 80 20표2.고속액체크로마토그래프 이동상조성 (예)
5.2계산
5.2.1. 로사빈 함량(mg/g )=C×(a×b)/S×(1/1,000)
C:시험용액중의 로사빈의농도(ug/mL )
S:시료채취량(g)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
제4,3,3-76 안토시아노사이드를 다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약- 48 -본시험법은 시료 중안토시아노사이드를염산을 이용하여 안토시
아니딘으로 분해한 후분광광 도기로 분석하는 방법으로 540nm의
파장으로흡광 도를구하여 정량분석한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용 실린지
2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
2.1.3 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 자외분광광 도계
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 안토시아니딘의함량이알려진바키늄 미르틸루스엑스
3.2일반시약
3.2.1 무수에탄올 (Ethanol ,anhydrou s)
3.2.2염산(Hydro chloricacid)
3.2.3증류 수(Distilledwater )
4.시험과정- 49 -4.1표준용액제조
4.1.1 안토시아니딘의함량이알려진바키늄미르틸루스엑스약20mg을
정밀히칭량하여 시험용액과같이 조작하여 표준용액으로 한다.
4.2시험용액제조
4.2.1 시료 20mg(안토시아니딘으로서 )을정밀히칭량하여 무수
에탄올 ·1.5mol/L 염산혼합액(17:3) 을넣어녹인후200mL
부피플라스크에정용한다 .
4.2.2 이액5mL를취하여 무수에탄올 ·1.5mol/L 염산혼합액(17:3) 을
넣어50mL로정용한 다음 여과하여 처음 여액20mL는
버리고 다음 여액을시험용액으로 한다 .
4.2.3 무수에탄올 ·1.5mol/L 염산혼합액(17:3) 을대조액으로 하여파장
540nm에서 시험용액및표준용액의흡광 도AT및AS를측정
한다 .
5.계산
5.1계산
5.1.1. 총안토시아노사이드의 함량(mg/g )=
표준품의 안토시아니딘양(mg)×AT×1.475×1
×1
AS S 1,000
 AT:시험용액의흡광 도
 AS:표준용액의흡광 도- 50 -S:시료채취량(mg)
 1.475: 안토시아니딘의안토시아노사이드 전환계수
 1/1,000 :단위 환산 계수
제4,3,3-77 알리인을 다음과 같이 신설한다 .
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중알리인의 함량을80%메탄올 용액으로초음파로
추출 한후액체크로마토그래프/자외부흡광광 도검출기를 이용하여
분석하는 방법으로 208nm에서 정량분석한다 .
2.장비와 재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용 실린지
2.1.2 여과용멤브레 인필터 및디스크형 멤브레 인필터
2.1.3액체크로마토그래프 용유리병
2.1.4초음파진탕 기
2.1.5 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 칼럼오븐- 51 -2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 3.0mm,길이150mm,
충전제octade cylsilica)또는 이와동등한 것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 A용액(20mM인산이수소나트 륨·10mM헵탄 설
폰산나트륨,pH2.0)을분당 0.4mL씩흘려줌으로서 칼럼과기기를 
안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 알리인 (L(+)Alliin)
 분자식 :C6H11NO 3S,분자량:177.22,CASNo.:556-27-4
3.2일반시약
3.2.1헵탄 설폰산나트륨(1-Heptane sulfon icacid,sodiumsalt,
HPLCgrade )
3.2.2 인산이수소나트 륨(Sodiumdihydrogenpho sphate ,anhydrou s)
3.2.3 인산 (Phosphor icacid)- 52 -3.2.4 아세토니트릴(Aceton itrile,HPLCgrade )
3.2.5증류 수(Distilledwater )
3.2.6 메탄올 (Methanol )
3.2.7포름산 (Form icacid)
3.3시액의제조
3.3.1 20mM인산이수소나트 륨·10mM헵탄 설폰산나트륨용액
 인산이수소나트 륨약2.4g과헵탄설폰산나트륨용액약2.0g을
물에녹여1L로정용하고 인산으로pH2.0로조절한다 .
3.3.2 80%methanol 용액(pH3.0)
Methanol :D.W를 80:20(v/v)의 비율로혼합하고포름산을
이용하여pH3.0로조절한다 .
4.시험과정
4.1표준용액제조
4.1.1 표준물질알리인 10mg을정밀히칭량하여 10mL부피
플라스크에넣는다 .
4.1.2. 80%메탄올 (pH3.0) 용액을넣어표선까지맞추어 표준
원액으로 한다 .
4.1.3 표준원액을80%메탄올 (pH3.0)용액으로 적정농도로희석하여 
표준용액으로 한다 .
4.2시험용액제조- 53 -4.2.1 시료 100mg을정밀히칭량하여 25mL부피플라스크에
넣는다 .
4.2.2 적당량의80%메탄올 (pH3.0)용액을넣고잘흔들 어녹인다
4.2.3 10분간초음파로추출한다 .
4.2.4 80%메탄올 (포름산으로pH3.0)로25mL가되게 정용한다 .
4.2.5 위의 용액을0.45 μm의멤브레 인필터로 여과하여 시험
용액으로 한다 .
5.분석 및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 30℃
이동상A:20mM인산이수소나트 륨·10mM
헵탄 설폰산나트륨용액(pH2.0),
B:아세토니트릴:이동상A(50:50)
검출기파장 208nm
유량 0.4mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)- 54 -min이동상 (%)
A B
0 100 0
5 70 30
25 46 54
30 0 100
32 0 100
37 100 0
45 100 0표2.고속액체크로마토그래프 이동상조성 (예)
5.2계산
5.2.1. 알리인 함량(mg/g )=C×(a×b)/S
C:시험용액중의 알리인의농도(mg/mL )
S:시료채취량(g)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수- 55 -부칙
제1조(시행일 )이고시는 고시한 날부터 시행한다 .다만 ,제4.건강
기능식품 시험법 중3-73폴리감마글루탐산,3-77 알리인은 2015 년
1월1일부터 시행하고 ,3-74 히알루론산 ,3-75 로사빈 ,3-76 안토시
아노사이드는 2016 년1월1일부터 시행한다 .
제2조(적용례 )이고시는 고시 시행 이후최초 로제조 ·가공 또는
수입한 건강기능식품 (원료를포함한다 )부터 적용한다 .
제3조(경과조치 )①이고시 시행 당시 검사가접수되어진행중인
사항에 대하여는종전의 규정에 따른다 .
②이고시 시행 당시종전의 규정에 따라 제조 ․가공 ․수입 (선적일을
기준으로 한다 )한건강기능식품은 종전의 규정에 따른다 .이경우 해당
건강기능식품은 유통기한까지판매 할수있다 .- 56 -현행 개정안
제1총칙
1.∼5.(생략)
6.기능성 원료별 기준 및규격의 추가 
등재
「건강기능식품 기능성 원료 및기준․
규격 인정에 관한 규정 」에따라
인정된 기능성 원료는 다음의 어느 
하나를 충족하면 「건강기능식품의 
기준 및규격 」제3.개별 기준
및규격에 추가로 등재할 수있다 .
다만 당해 영업자가 자료의 보호가 
필요하다고 요청한 경우 그타당성을 
검토하여 기능성 원료로 인정받은 후
품목제조신고 또는 수입신고한
날로부터 추가등재를 5년이내에서 
유예할 수있다 .
 1)건강기능식품의 기능성 원료로
인정받은 후품목제조신고 또는 
수입신고한 날로부터 3년이 경과
하였거나 3개이상의 영업자가
인정받은 후품목제조신고 또는 
수입신고한 경우
 2)「건강기능식품에 관한 법률 」
제14조제 2항의 규정에 의하여
인정받은 자가 등재를 요청하는 제1총칙
1.∼5.(현행과 같음 )
6.기능성 원료별 기준 및규격의 추가 
등재
1)「건 강 기 능 식 품 기 능 성 원 료 및기 준․
규격 인정에 관한 규정 」에따라 
인정된 기능성 원료는 다음의
어느 하나를 충족하면 「건강기능
식품의 기준 및규격 」제3.개별 
기준 및규격에 추가로 등재할 수
있다 .다만 당해 영업자가 자료의 
보호가 필요하다고 요청한 경우
그 타당성을 검토하여 기능성
원료로 인정받은 후품목제조신고 
또는 수입신고한 날로부터 추가
등재를 5년이내에서 유예할 수
있다 .
 (1)건강기능식품의 기능성 원료로 
인정받은 후품목제조신고 또는 
수입신고한 날로부터 3년이
경 과 하 였 거 나 3개이 상 의 영 업 자 가 
인정받은 후품목제조신고 또는 
수입신고한 경우
 (2)「건강기능식품에 관한 법률 」
제14조제 2항의 규정에 의하여 
인정받은 자가 등재를 요청
- 57 -경우 (다만 인정받은 자가 3명
이상인 경우에는 3분의 2가
건강기능식품공전에 등재를
요청하는 경우 )
<신설>하는 경우(다만 인정받은 자가 
3명이상인 경우에는 3분의 2가
건강기능식품공전에 등재를
요청하는 경우 )
2)「건강기능식품 기능성 원료 및
기준 ·규격 인정에 관한 규정 」
제10조제2항에 따른 기능성 내
용추가는 영업자가 인정받은 후1
년이 경과한 경우 (다만 ,인정받
은자가 건강기능식품공전에 등
재를 요청하는 경우는 제외 )
제2.공통기준 및규격
1.(생략)
1-1 건강기능식품 제조에 사용할 수
없는 원료는 다음 어느 하나와
같다 .
1)∼2)(생략)
<신설>
2.∼6.(생략)제2.공통기준 및규격
1.(현행과 같음 )
1-1 건강기능식품 제조에 사용할 수
없는 원료는 다음 어느 하나와
같다 .
1)∼2)(현행과 같음 )
3)
야생생물 보호 및관리에 관한
법률
 제2조제 2호및제3호에서
정한 품목에 해당하는 것
2.∼6.(현행과 같음 )
제3.개별기준 및규격
1.영양소
1)∼6)(생략)
1-1∼1-28 (생략)
2.기능성 원료제3.개별기준 및규격 
1.영양소
1)∼6)(현행과 같음 )
1-1∼1-28 (현행과 같음 )
2.기능성 원료- 58 -2-1∼2-13 (생략)
2-14밀크씨슬(카르두스마리아누스)
추출물
2)규격
 (2)실리마린 (실리빈으로서 )
2-15 (생략)
2-16 오메가 -3지방산 함유 유지
2-17∼2-19 (생략)
2-20 식물스테롤/식물스테롤에스테르
2)규격
 (2)식물스테롤에스테르 (식물스테롤
에스테르를 원료로 사용한 경
우)
2-21∼2-23 (생략)
2-24 공액리놀레 산
2)규격
 (3)cis-9 및trans-11 공액리놀레산,
trans-10 및cis-12 공액리놀
레산함량(%):공액리놀레 산
함량중90%이상2-1∼2-13 (현행과 같음 )
2-14밀크씨슬(카르두스마리아누스)
추출물
2)규격
 (2)실리마린
2-15 (현행과 같음 )
2-16 EPA 및DHA 함유 유지
2-17∼2-19 (현행과 같음 )
2-20 식물스테롤/식물스테롤에스테르
2)규격
 (2)식물스테롤 (식물스테롤을 원료로 
사용한 경우 )
2-21∼2-23 (현행과 같음 )
2-24 공액리놀레 산
2)규격
 (3)cis-9 및trans-11 공액리놀레산 과
trans-10 및cis-12 공액리놀
레산의 함량(%):공액리놀레 산
함량중90%이상
[별표 4]시험법 적용표 [별표 4]시험법 적용표- 59 -시험항목 적용규정 시험방법비
고
수분
식품의
기 준 및
규 격
(식품 공 전 )제10.일반시험법 1.1.1 수분
※ Ⅱ.2.7.1 로얄젤리는
1.1.1.3 칼피셔법에 따름
회분 제10.일반시험법 1.1.2 회분
조지방 제10.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제10.일 반 시 험 법 1.1.5.3.1 산가
과산화물가 제1 0 .일 반 시 험 법 1 .1 .5 .3 .5 과 산 화 물 가
환원당 제10.일 반 시 험 법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제10.일반시험법 2.4착색료
납 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
카드뮴 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
총수은 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
총비소 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
세균수 제10.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제10.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제10.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제10.일반시험법 3.11 살모넬라
세균발육 제10.일 반 시 험 법 3.6세 균 발 육 시 험
테 트 라 싸 이 클
린클 로 르 테 트 라
싸 이 클 린제10. 일반시험법 5.3.49 옥
시테트라싸이클린 ,클로르테
트라싸이클린 ,테트라싸이클
린,독시싸이클린
총 아플라
톡신제10.일반시험법 6.1.1 아플라
톡신 (B1,B2,G1및G2)
포도당당량
(D .E .)제5.식 품 별 기 준 및규 격 6.포
도 당 6)시 험 방 법 (1)포도 당 당
량(D.E.)
메탄올제5.식품별 기준 및규격
27-1탁주6)시험방법 (3)
메탄올
잔류 용매식품첨가물
의기 준 및
규 격
(식 품첨가 물
공 전)제4.품목별 규격 및기준 나.
천연첨 가물 80.파프 리카추출
색소
잔류 용매
(이소프로필
알콜)제4.품목별 규격 및기준
나.천연첨 가물 108.글루코
만난시험항목 적용규정 시험방법비
고
수분
식품의
기준 및
규격
(식 품 공전 )제10.일반시험법 1.1.1 수분
※ Ⅱ.2.7.1 로얄젤리는
1.1.1.3 칼피셔법에 따름
회분 제10.일반시험법 1.1.2 회분
조지방 제10.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제10.일 반 시 험 법 1.1.5.3.1 산가
과산화물가 제1 0 .일 반 시 험 법 1 .1 .5 .3 .5 과 산 화 물 가
환원당 제10.일 반 시 험 법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제10.일반시험법 2.4착색료
납 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
카드뮴 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
총수은 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
총비소 제10.일 반 시 험 법 7.1중 금 속 시 험
세균수 제10.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제10.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제10.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제10.일반시험법 3.11 살모넬라
세균발육 제10.일 반 시 험 법 3.6세 균 발 육 시 험
테 트 라 싸 이 클
린클 로 르 테 트 라
싸 이 클 린제10. 일반시험법 5.3.49 옥
시테트라싸이클린 ,클로르테
트라싸이클린 ,테트라싸이클
린,독시싸이클린
총 아플라
톡신제10.일반시험법 6.1.1 아플라
톡신 (B1,B2,G1및G2)
포도당당량
(D .E .)제5.식 품 별 기 준 및규 격 6.포
도 당 6)시 험 방 법 (1)포도 당 당
량(D.E.)
<삭제> <삭제>
잔류 용매
(초산에틸)건 강 기 능 식
품 의 기 준
및규 격
(건 강 기 능 식
품 공 전 )제4.건강기능식품 시험법 2,
2-5, 2-5-5초산에틸
잔류 용매
(이소프로필
알콜)식품첨가물
의기 준 및
규격
(식 품첨가 물
공 전)제4.품목별 규격 및기준
나.천연첨 가물 108.글루코
만난
잔류 용매제4.품목별 규격 및기준 나.
천연첨 가물 80.파프리카추출
색소
제4.건강기능식품 시험법
1.일반원칙(생략)
2.일반시험법 (생략)
3.개별 성분별 시험법제4.건강기능식품 시험법
1.일반원칙(현행과 같음 )
2.일반시험법 (현행과 같음 )
3.개별 성분별 시험법- 60 -3-1∼3-3 (생략)
3-4 비타민 E
3-4-1 비타민 E(제1법)(생략)
3-4-2 비타민 E(제2법)
1.∼4.(생략)
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 35℃
이동상 핵산 :이소프로판올 (98:2)
검출기
파장여기파장 298 nm,
측정파장 325 nm
유량 0.5mL/분표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
<신설>
 5.2계산 (생략)3-1∼3-3 (현행과 같음 )
3-4 비타민 E
3-4-1 비타민 E(제1법)(현행과 같음)
3-4-2 비타민 E(제2법)
1.∼4.(현행과 같음 )
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 35℃
이동상 헥산 :이소프로판올 (98:2)
검출기파장여기파장 298 nm,
측정파장 325 nm
유량 0.5mL/분표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
※정량시험을 위해 시험용액1.0mL에
토콜표준용액1.0mL를가해 (S)이
용액의10μL를분석한다 .또한
토코페 롤동족체각각 에대하여각
각토코페 롤표준용액1.0mL를
취해 이에 토콜표준용액1.0mL를
가해 이용액의10μL를분석한다 .
S:시 험 용액에함 유 된 토콜의함량(mg)
 5.2계산 (현행과 같음 )- 61 -<신설> 3-4-3 비타민 E(제3법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 일반 식품인 경우
시료 중비타민 E를수산화칼륨
용액과피로갈롤·에탄올용액을이용
하여 비누화시키고헥산/초산에틸
(9:1)혼합용액으로 추출 후감압 
건조시켜헥산을 가하여녹여형광
검출기를 이용하는 방법과 유지
식품의 경우 비누화조작을생략하고
헥산으로 추출한 후형광 검출기 를
이 용 하 여 여 기파장298nm,측정파장
325nm에서 검출하고 정량한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로마토그래프용유리병
 2.1.4갈색플라스크(100mL)
 2.1.5 갈색부피플라스크(25, 100mL)
 2.1.6 원심분리기
 2.1.7갈색원심분리관 (50mL)
 2.1.8감압농축 기
 2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 형광검 출 기 (Fluore scenceDetector,
FLD )
 2.2.3 칼럼오븐- 62 - 2.2.4순상형칼럼(안지름 4.6mm,
길이250mm,충전제NH2)
또는 이와동등한 것
 2.3분석장비의 준비
 이동상으로서헥산과초산에틸을
80:20으로혼합하여 분당 1.0mL
씩흘려줌으로서 칼럼과기기를
안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
 3.1표준물질
 3.1.1 α-Tocopherol ((±)-α-Tocopherol; 
DL-all-rac-α-Tocopherol; 
VitaminE)
 분자식 :C29H50O2,분자량:
430.71, CASNo.:10191-41-0
 3.2일반시약
 3.2.1 에탄올 (Ethanol )
 3.2.2 피로갈롤(Pyrogallol )
 3.2.3증류 수(Distilledwater )
 3.2.4 수 산 화 칼륨(Potassiumhydrox ide)
 3.2.5초산에틸(Ethylacetate )
 3.2.6헥산(n-Hexane )
4.시험과정
 4.1시약 제조
 4.1.1 60%수산화칼륨용액- 63 - 수산화칼륨60g을증류 수에 
녹여100mL로조제한다 .
 4.1.2 1%염화나트륨용액
염화나트륨1g을증류 수에
녹여100mL로조제한다 .
 4.2표준용액제조
 4.2.1 토코페 롤동족체 표준용액
 4.2.1.1 표 준 원액:토코페롤동족 체
(α-,β-,γ-,δ-토코페롤)을
각각 50mg씩정밀히
취해 50mL갈색부피
플라스크에넣고헥산으로 
표선까지채워 조제한다 .
 4.2.1.2 표준용액:각각토코페롤
동족체 표준 원액5mL씩
취하여 50mL갈색부피
플라스크에넣고헥산
으로 표선까지채워조제
한후갈색유리병에넣어
질소로치환하여밀전
한후냉암소에 보관한다 .
 4.2.1.3 검량곡 선표준용액:각각 
표준원액을적당량취하 여
갈색플라스크에넣고
헥산으로희석하여 1∼
10ug/mL 이되도록조제
한 다.보관 시에는질소로 
치환하여밀전한 후냉
암소에 보관한다 .
 4.3시험용액제조 (일반식품 )- 64 - 4.3.1 토코페 롤로서 약0.2mg에
해 당 하 는 시 료 를 정밀히취 하 여 
갈색원심분리관에넣는다 .
 4.3.2 1%염화 나 트륨용액0.5mL을
넣고3%피로갈롤에탄올 
용액10mL과60%수산화
칼륨용액1mL을가하여
70℃수욕중에 30분간진탕
하며 비누화한다 .
 4.3.3 이를흐르는 물에냉각 하고
1%염화 나 트륨용액22.5mL을
가 한 후헥산․초산 에틸(9:1)
혼합용액을 15mL가하여
10분간진탕 한다 .
 4.3.4 2,000rpm에서 5분간원심
분리하여 상층을갈색플라
스크로옮긴 다.
 4.3.5 하층에헥산․초산에틸(9:1)
15mL을가하여 2회반복
추출하여 상층액 을합한다 .
 4.3.6 회 수 한 상층액을감압농축 한 다.
 4.3.7 위 의잔류물 에 일 정량의헥산 을
가하여녹인것을 시험용액
으로 한다 .
 4.4시험용액제조 (유지식품 )
 시료가 유지인 경우에는 비누화
조작을생략하 고,고 속액체크로 마 토
그래프 에직접 주입할 수있다 .
 4.4.1 유지 약1g을정밀히취해 
50mL부 피 플 라 스크에넣는 다.- 65 -3-5∼3-25 (생략)
3-26 식이섬유
3-26-1 식이섬유(제1법)
1.시험방법의 요약 4.4.2헥산을넣어표선까지맞춘다.
 4.4.3 위용액의일정량을취 해헥산
으로희석한 것을 시험용액
으로 한다.
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 35℃
이동상헥산:초산에틸(80 :20)
검출기파장여기파장298nm,
측정파장325nm
유량 1.0mL/ 분표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
 5.2계산
α,β,γ,
δ-토코페 롤의
함량(mg/100g)=C×(a×b)
×100
S 1,000
C：시험용액중의 α,β,γ,δ
-토코페 롤의농도(μg/mL )
a：시험용액의전량(mL)
b：시험용액의희석배수
S:시료채취량(g)
3-5∼ 3-25 (현행과 같음 )
3-26 식이섬유
3-26-1 식이섬유(제1법)
1.시험방법의 요약- 66 -본시험법은 시료 중존재하는
지질과수용성 물질들 을제거한
후남은잔사물의 중량을측정하고 
이때조단백질량 ,회분량을측정
하여잔사물의 중량에서빼주는
방법으로 식이섬유의 함량을정량
한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 유리여과기 (기공 40～60μm,
용량60mL)
 525℃에서 한시간가열한 건조된 시료두개를 준비하고 이를 
내열성α-아밀라아제 ,프로테아제 ,
아밀로글루코시다제 효소로연속적
으로 분해하여 전분과 단백질 을
제거한다 .이때10%이상의 지방을 
함유한 식품은 건조 전에 지방을 
제거하여 시험한다 .총식이섬유
(TDF)정량은효소분해물에녹아
있는 식이섬유를 에탄올 로처리
하여침전시켜여과하고 에탄올 과
아세톤으로 세척한후,건조하여
그 무게를 확인한다 .물불용성
식이섬유(IDF)는 효소분해물을
여과하여잔사를 따뜻한 물로
세척하고 그무게를 확인하여 정량
한다.수 용성식 이섬유(SDF)는IDF의
전처리 과정에서얻은 여과액과
세척액 을합하여 에탄올 로침전
시킨후여과하여 잔류 물을 건조
하고 무게를 확인하여 정량한다 .
총식이섬유,물불용성 및수용
성식이섬유함량계산 시잔사의
무게 중단백질 및회분량은보
정해준다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 비이커:400 또는 600mL
Tall-form .- 67 -다음 식혀물로 세척하고
상온건조 하여셀라이트
0.5g을가한 후130℃에서 
항량이될때까지 건조한 
후데시케이터에옮겨 보관
한다 .
 2.1.2 회화로
 2.1.3감압펌프 (역류 방지장치가
부착된 것) 2.1.2 유리여과기 :기공 40～60
μm(ASTM 기준 )의 용융
유리디스크가있는 Pyrex 
60mL(Corn ingNo.36060
Buchner또 는 이 와동등 한 것).
525℃에서 하룻밤동안회화
하고 회화로온도가 130℃
까지떨어지면 유리여과기를 
상온에서 방냉한 후,2%
세척액 에1시간동안담근 
후물로씻고증류 수로헹
군다음 아세톤15mL을
사용하여 마지막으로 세척
하고 바람을불어대기 중
방치하여 건조시킨다.건조된 
유리여과기에 규조토 약
1.0g을넣고 130℃에서
항량한후,데시케이터에서
1시간동안실온에방냉하
여규조토를포함한 유리
여과기의 무게를 0.1mg까지 
칭량하여 기록한다 .
 2.1.3진공장치:조절장치를갖춘 
진공펌프 나 아스피레이터 ,- 68 - 2.1.4교반기
 2.1.5감압 건조기 또는 상압가열
건조기
 2.1.6 항온수조
 2.1.7데시케이터
 2.1.8pH측정기
 2.1.9 비커(200mL)
<신설>
<신설>
<신설>1L용량의여과용 가지달린
플라스크및여과용 플라
스크에사용하는 고무 아답터
 2.1.4 진탕 항온수조 :98±2℃까지 
가온및온도의 유지가 가능
하고 60℃로일정하게온도를
유지할 수있는 것
 2.1.5저울:0.1mg까지측정이
유효한 것
 2.1.6 회화로 :525±5℃유지할 수
있는 것.
 2.1.7 오븐:105℃와130±3℃유지
할수있는 것
 2.1.8데시케이터 :실리카겔이나
이 와동등 한건 조 제 가 있는것.
건조제는 필요 시130℃에서
하룻밤동안건조하여 사용
한다.
 2.1.9 pHmeter :온도보정이
되고pH4,7,10버퍼 용액
으로 표준화 된것
 2.1.10 피펫:일 회 용팁이사 용 가 능 한 
것으 로 용량100～300uL및
5mL
 2.1.11디스펜서:15±0.5mL용
3개(78%ethanol ,95%
ethanol ,acetone 용),
40±0.5mL용1개(버퍼 용)
 2.1.12 자석교반기 및마크네틱 바- 69 -3.(생략)
 3.1(생략)
 3.1.1∼3.1.8 (생략)
 3.2시액의제조
 3.2.1 85%에탄올 용액
 100%에탄올850mL에증류수 를
가하여 1,000mL로한다.
 3.2.2 78%에탄올 용액
 100%에탄올780mL에증류수 를
가하여 1,000mL로한다 .3.(현행과 같음 )
 3.1(현행과 같음 )
 3.1.1∼3.1.8 (현행과 같음 )
 3.2시액의제조
 3.2.1 에탄올 수용액
 (1) 85%:1L정용 플라스크에
95%에탄올 895mL을넣고
물을 표선까지채워 조제한다 .
 (2) 78%:1L정용 플라스크에
95%에탄올 821mL을넣고
물을 표선까지채워 조제한다 .
 3.2.2 내열성α-아밀라아제 용액:
아래의효소분해능을 만족하
거나 5)효소활성 검증시회
수율을 만족하는 것으로글
리세롤이 없을 것,0～5℃
에서 보관하며 사용한다
(Sigma사Catalog No.A
3306 또는이와 동등한 것)
※(1)가 용 성 전 분 을 기질로하 는
Nelson/Somogy ireducing
sugar방 법 에 기초하 는 것:
10,000±1,000units/mL(1
unit:pH6.5,40℃에서 1분
당1μmole reducingsugar 
equivalent s를 만드는데
필요한 효소의양)
※(2)내열성α-글루코시다제의
존재시기질로p-nitrophenyl 
-malto saccharide를사용- 70 - 3.2.3 세척용액
액상계면활성제 (Internat ional
Produ cts사의MICRO 제품
또 는 이 와동등 한 것)를증류수 에
희석하여 2%용액으로 한다 .하는Ceralpha 방법에 기초한
것:3,000±300Ceralpha 
units/mL (1unit:pH6.5,
40℃에서 1분당 1μmole 
p-nitrophenol 을만드는데
필요한 효소의양)
 3.2.3프로테아제 효소용액:아래의
효소분해능을 만족하 거나
5)효소활성 검증시회 수 율 을 
만족하는 것으로써0～5℃에 서
보 관 하 고 MES/TRIS 완충액으 로
희석 하 여 50mg/mL 로사 용시조 제
한 다(Sigma사Catalog No.P3910
또 는 이 와동등 한 것)
※(1)Caseinassay:300～400
units/mL(1unit:pH8.0, 4
0℃에서 가용성 casein으로부터 
1분당 1μmole tyrosine
equivalent s를가수분해하는데
필요한 효소의양);7～15
units/mg(1unit:pH7.5, 3
7℃에서 casein으로부터 1분당
1.0μmoletyrosine에해 당 하 는 색
(Folin-Ciocalteau reagent )을
내는데필요한 효소의양)
 (2)Azo-caseinassay:300～
400units/mL(1unitendo -
peptidaseactivity:pH8.0, 4
0℃에서 가용성 casein으로부터 
1분당 1μmole tyrosine- 71 - 3.2.4MES/TRIS 완충액
MES19.52g과TRIS 12.2g을
증류수1.7L에녹이고 6N
수산화 나트륨용액으로pH가
8.2가되도록조절한 후증
류수를 가하여 2L로한다.용
액의온도가 20℃이면 ,pH
8.1로,용액의온도가 28℃
이면pH8.3으로 조정한다 .
 3.2.5 0.561N염산용액
 6N염산93.5mL에증류수 를
가하여 1,000mL로한다 .equivalent s를가수분해하는데
필요한 효소의양)
 3.2.4 아밀로글루코시다제 용액:
아래의효소분해능을 만족
하거나 5)효소 활성 검증
시회수율을 만족하는 것으
로써0～5℃에서 보관하며 사
용한다 .글리세롤이 없을 것
(Sigma 사Catalog No.A
9913 또는 이와동등한 것)
※ (1)Starch/glucose
oxidase-perox idase방 법 :2,000～
3,300units/mL(1unit:pH4.5,4
0℃에 서 1분 당 1μmole포도 당 을
만 드 는데필 요 한 효 소 의양)
 (2)PNPBM(p-nitophenyl β
-malto sidase)방법 :13
0～200units/mL (1unit:
β-글루코시다제가 과량
존재할때,40℃에서 1분
당p-nitrophenyl β
-malto sidase가1μmole 
p-nitrophenol 을만드는데
필요한 효소의양)
 3.2.5 규조토 (Diatoma ceousearth )
:산 세척한것(Sigma사Catalog 
No.C8656 또는Fisher
Scientific사Catalog No.
C-211, 산세척또는 그와
동등한 것)- 72 -<신설>
<신설>
<신설>
<신설>
<신설> 3.2.6 세척용액:실험실용액체
계면활성 세정제 (Internat ional
produ cts사의Micro혹은
그와동등한 것)를2%수
용액으로 조제한다 .
 3.2.7MES:2-(N-Morphol ino)
ethane sulfon icacid(Sigma사
Catalog No.M-8250 또는
이와동등한 것)
 3.2.8TRIS :Tris(hydroxymethyl )
aminomethane (Sigma 사
Catalog No.T-1503 또는 이
와동등한 것)
 3.2.9MES-TRIS 완충용액(0.05M
MES,0.05MTRIS ,24℃에서 
pH8.2) :MES19.52g과
TRIS 12.2g을물1.7L에
녹인후6N수산화나트륨
용액을가 하 여pH8.2로조 절 한 
후,물을 가하여 2L가되게 
조제한다 (24℃에서pH8.2로
조절하는 것이중요하다 .만약 
버퍼 용액의온도가 20℃이면 
pH8.3으로 조절하고 ,28℃
이면pH8.1로조절한다 ).
 3.2.10염산 용액(0.561N):1L정 용
플라스크에물약700mL를
넣고6NHCl93.5mL을
혼합한 후증류 수로 표선
까지채워 조제한다 .- 73 -4.시험과정
 4.1시험용액의제조
 4.1.1 시험은두개의 시료 및공
시험을동시에 실시한다 .4.시험과정
 4.1시험용액의제조
 4.1.1 시료 균질화
 건조된 시료의 총식이섬유를 
확인하기 위해서 시료를
균질화 한 후,70℃진공 오븐에 서
하룻밤 동안 건조시킨다.
시료를데시케이터에서 방냉
하고 0.3～0.5mmmesh가
되 도록건 식 분쇄한 다.열처 리 를 
할수없는 시료의 경우
분쇄하기 전에냉동 건조
한다 .지방함량이 높다면
(10%이상 )분쇄하기 전에
석유에테르로탈지한다 (시료 
1g당25mL씩3번처리 ).
지방제거로 인한 무게손실을 
기록하고 이에 대한 총식이
섬유 함량(%)을 보정한다 .
분 석 전 까 지 건 조-분쇄된시료는 
마개가 있는병에담아데시
케이터에서 보관한다 (만약
시료의 지방함량을모른다면 ,
식이섬유를측정하기 전에
탈지한다 ).당함량이높은
제품은 식이섬유측정전에
85%에탄올 (10mL/g )로
2～3회추출한 다음 상등액을
제거하고 40℃에서 하룻밤 - 74 - 4.1.2 고운분말로한시료 약1.0g
2개(M1,M2)를200mL비
커에취한다 .지방이 10%
이상인 경우탈지하고 ,당을
많이함유한 경우 85%에탄
올용액으로시료 1g당10
mL씩으로 세척한다 .동안건조한다 .
 4.1.2 효소분해
 4개의 400mL(또는 600mL)
tall-form 비이커에 시료
1.000±0.005g을 정밀히
달아2개의 검체 (M1,M2)를
준비하고 2개의 공시험
(B1, B2)을준비한다 .이에
MES-TRIS 완충 용액40mL씩
가하여 시료가뭉치 지않고
완벽하게 분산될때까 지 자 석
교반하여혼합한다 .저속으로
혼합하면서 ,내열성α-아밀
라아제 용액50μL을첨가
한다 .비이커를알루미늄박
으로덮은후95∼100℃수
욕에서 15분동안계속교
반하면서 반응한다.수욕의
온도가 95℃에도달할때
부터 시작한다 (보통 총35
분이면 충분하다 ).수욕에서 
모든비이커를꺼내어 6
0℃로식힌다.알루미늄박 을
제거하고 비이커의벽또는 
바닥에생긴겔형태 의내
용물을 시약 스푼으로긁어
내어 용액속에 분산시킨다.
비이커벽과 시약 스푼을
10mL의물로씻어준다 .
프로 테 아 제 효 소 용액100μL을- 75 -각비이커에첨가한다 .알루
미늄박 으로 비이커를덮고
60±1℃수욕에서 30분간계속
해서교반하여 반응시킨다.
수욕의온도가 60℃에도달
한후반응을시작한 다.알 루
미늄박을제 거 한 후비이커를
잘교반하면서 0.561NHCl
5mL을넣어준다 .60℃에서 
1NNaOH,1NHCl를사용
하여용액을pH4.0～4.7로
조 정한 다(※참 고:pH는낮은
온도에서올라가기 때문 에
60℃에서pH를 조정하고
확인하는 것이 중요하다 .
대부분의곡류 ,채소시료의
경우,pH조정이 없이도pH
조건을 만족할 수있으므로
이전에 확인된 시료의 경우 ,
pH조정 과정을 생략할수
있다 .단,공시험의pH를
예비단계로 확인하고 만약
공 시 험 의pH가올바른범위를 
벗어난다면 ,반드시 시료의 
pH를점검한다 ).비이커를
교반하면서 아미노글루코시
다 제 용액300μL를첨가하 고
알 루 미늄박으 로덮은후60±
1℃수욕에서교반하면 서 30
분간항온한다.수욕의온도가 - 76 - 4.1.3MES/TRIS 용액40mL씩
가하고 마그네틱 교반하여 
충분히 분산 시킨다.
 4.1.4 내열성α-아밀라아제 용액
50μL를가하고 서서히저어
혼합한다 .
 4.1.5 알루미늄박 으로뚜껑 을한
후95～100℃의수욕에서
40분간교반한다 .
 4.1.6 반응이끝난 후60℃로식
히고 비커벽이나 바닥에
내용물이 부착 되어 있으면
시약스푼으로긁어분산시
키고증류 수10mL로스
푼과비이커벽을닦는다.
 4.1.7각각 의비커에프로테아제
용액100μL씩가하고 알루
미늄박 으로 뚜껑 을한후
약60℃에서 30분간교반
하면서 항온시킨다.
 4.1.8뚜껑 을제거하고 0.561N
염산용액5mL를가하여
흔들 어혼합후60℃에서
pH를4.0～4.7로조정한다 .
 4.1.9 아밀로글루코시다아제용액
300μL을넣고흔들어섞은
후알루 미늄박 으로뚜껑 을
한후 60℃에서 30분간60℃에도달할때반응을
시작한다 .
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>- 77 -교반을 유지하며 항온시켜
시험용액으로 한다 .
 4.2총식이섬유정량
 4.2.1 상기 [4.1] 시험용액각각 에
60℃의95%에탄올225mL을
가한다 .에탄올과시험용액의
용량비율은 4:1로한다 . 4.2총식이섬유(TDF)함량측정
 4.2.1 실온기준 225mL95%에
탄올 을60℃에서 효소 분해
된각각 의시험용액에가한
다.이때에탄올과시험용액
의부피 비율은 4:1이되어
야한다.수욕에서 비이커를
꺼내어 알루미늄박 으로덮
고실온에서1시간침전시
킨다.☆미리 규조토를넣
고무게를 칭량한유리 여과
기에 78%에탄올 15mL
을가하여 규조토를 분산시
킨후흡인여과하여 규조
토층이고르게형성되도록
한다 .에탄올 처리된 효소 
분해 물을 준비된 유리여과
기로 여과하고 78%에탄올
이들어있는 세척병 과고무
재질의시약스푼를 이용하
여비이커의잔류 물을 유리
여과기로옮긴 다.이때효
소분해물에엷은막이생
성될경우 ,시약 스푼으로 생
성된막을깨고여과한다 .진
공을 유지하면서 78%에탄
올,95%에탄올 ,아세톤순
으로각각 15mL씩2회잔- 78 - 4.2.2 실온에서 1시간방치하여
침전시킨다.
 4.2.3 미리셀라이트를넣어항량시
킨유리여과기에 78%에탄올 
15mL을가하여 분산시킨류물을씻는다 .★105℃에
서잔류 물이남아있는 유리
여과기를 하룻밤 동안건조
시키고,데시케이터에서 1시
간동안방냉하여 항량한후,
식이섬유잔류 물및규조토
를포함한 유리여과기의 무
게를 0.1mg단위까지 칭
량한다 .미리 칭량하여 확
인한 규조토를 포함한 유리
여과기의 무게 를빼서식 이
섬유 의 무 게 를 계산한다 .같은
두개의 시료중 하나는
1.1.3.1 총질소및조단백질
에따라 단백질 함량을측
정한다 .이때질소계수는
6.25를사용한다 .다른 하나
는1.1.2. 회분에 따라 회분
량을확인한다 .이때525℃
에서 5시간이상회화하고
0.1mg단위까지 칭량한다 .
미리 칭량하여 확인한 규
조토를포함한 유리여과기
의무게를빼서회분의 무
게를 결정한다 .
<삭제>
<삭제>- 79 -후흡인여과 하여셀라이트
층이고르게형성되도록한
다.
 4.2.4 위의 여과기에 시험용액을
넣어여과하고 용기의잔
류물을 78%에탄올 로씻
어준다 .
 4.2.5잔사는 78%에탄올 ,95%에
탄올 ,아세톤순으로각각 
15mL씩2회씻는다 .
 4.2.6 아세톤이잔류 하지않도록
충분히흡인시킨후105℃의
건조기에서 하룻밤 건조시
키고데시케이터에서 1시
간방냉하여 항량으로 한
후무게를달아여과기와
셀라이트의 무게를뺀다.
 4.2.7 하나의 여과기 (M1)잔사에
대하여질소량을측정하고
이에 6.25를곱하여 단백질
량으로 한다 .
 4.2.8 또다른 하나의 여과기 (M2)
잔사를 525℃에서 5시간
회화시킨후회분량을구
한다 .
 4.2.9 시료를 제외한 공시험을
하여 계산식에 따라 총
식이섬유의 함량을구한다 .
 4.3물불용성 식이섬유의 정량
 4.3.1 미 리셀라 이 트 를넣어항량시킨<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
 4.3물불용성 식이섬유(IDF)측정
 4.3.1 미리 규조토를넣어항량하- 80 -유리여과기에 물3mL을
가하여 분산시킨후흡인
여과 하여셀라이트층을
고르게 한다 .
 4.3.2 4.1의시험용액을여과하고 
잔류물 은 70℃의물10mL로
2회씻는다 .
 4.3.3 여액및세척액 은합하여
600mL비커에모아 [4.5] 
수용성식이섬유정량용으로 여준비한 유리여과기에 물
3mL을가하여 규조토를
적시고 분산시킨후흡인여
과하여 규조토층을고르게
한다.이에 시험용액조제에
서얻어진효소분 해물을 유
리여과기를 통해 여과용 플
라스크로여과 한다 .비이커
를세척하면서 잔류물을 7
0℃물10mL로2회세척한
다.여액과물세척액을합치
고,미 리 무 게 를 칭량한600
mL비이커로옮겨 9)수용
성식이섬유측정에 사용한
다.잔류 물은 곧바로 78%
에탄올 ,95%에탄올 그리고
아세톤의순으로각각 15
mL씩2회 세척한다 (주의 :
잔류 물의 세척을즉시하지
않을경우 ,IDF값이높아
질수있다 ).7)총식이섬유
함량측정과정의★이하에
따라IDF의무게를 계산한
다.
<삭제>
<삭제>- 81 -한다 .
 4.3.4잔류물은곧바로 78%에탄올,
95%에탄올 그리고 아세톤
순으로각15mL씩2회
세척한다 .
 4.3.5 여과기의잔사를 105℃의
건조기에서 하룻밤 건조시
키고데시케이터에서 1시
간방냉하여 항량으로 한
후무게를달아여과기와
셀라이트의 무게를뺀다.
 4.3.6 하나의 여과기 (M1)잔사에
대하여질소량을측정하고
이에 6.25를곱하여 단백질
량으로 한다 .
 4.3.7 또 다른 하나의 여과기
(M2)잔사를 525℃에서 5
시간회화시킨후회분양
을구한다 .
 4.3.8 시료 를 제외 한 공시 험을 하여
계 산 식 에 따 라 총식 이섬유 의
함량을구한다 .
 4.4수용성 식이섬유의 정량
 4.4.1 [4.3.3] 에서얻어진여액및
세척액 에60℃의95%에
탄올을4배정도 가하거나 여
액을물로 80g으로 한다 .<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
 4.4수용성 식이섬유(SDF)측정
 4.4.1 물불용성 식이섬유측정에서
600mL비이커로옮긴 여
액과 물 세척액 의무게를 
확인하여 부피를 확인하고
미리 60℃로 가열된95%
에탄올 을측정한 부피의 4- 82 - 4.4.2 60℃의95%에탄올320mL을
가한다 .
 4.4.3 한시간방치하여침전물을 
형성시킨다.
5.계산
 5.1계산
 5.1.1 공시험값B(mg)=공시험
평균잔사 무 게 (mg)-PB-A B
 PB:공시험 단백질량 (mg)
 AB :공시험 회분량(mg)
 5.1.2 식이섬유함량(%)=시료의 
평균잔사무게(mg)-P-A-B
/시 료 의평균무 게(mg)×100
 P:단백질량 (mg)배량 을가한다 .이때60℃
에탄올의일부를 이용하여
여과용 플라스크에남은
여액과물세척액 을세척
한다 .여과액과물세척액 에
에탄올 을4배량 가하기 위한 
방법으로 물을첨가하여
여과액과물세척액의무게를 
80g으로맞추고 ,60℃의
95%에탄올 320mL을가
할수도 있다 .그후,상온
에서 1시간침전시킨후,7)
총식이섬유함량측정중
☆이하에 따라SDF의함량을
측정한다 .
<삭제>
<삭제>
5.계산
 5.1계산
※총식이섬유함량은7)총식이
섬유(TDF)함량측정을 독립
적으로 수행하여 결정 하거나
8)물불용 성 식이섬유(IDF)측정
및9)수용성 식이섬유(SDF)
측정에서구한IDF와SDF의
합으로 결정할 수있다 .
 가)공시험 함량(B,mg)측정:- 83 - A:회분량(mg)
 B:공시험값(mg)
3-26-2 식이섬유(제2법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 주로 수용성섬유소
(삼당류이상 )을함유한 시료에
적용하며 ,액체크로마토그래프/
시차굴절계를 이용하여 정량한다 . B=[(B1R+B 2R)/2]-PB-AB
 B1R,B2R:공시험 2반복에대한 
잔사의 무게 (mg)
 PB:공 시 험 (B1)의단백질무 게(mg)
 AB:공시험 (B2)의회분 무게(mg)
 나)식 이섬유함량(DF,g/100g)측정:


×
M1R,M2R:검체 2반복의잔사
무게 (mg)
 P:잔사(M1R)중단백질무 게(mg)
 A:잔사(M2R)중회분 무게(mg)
 B:공시험 함량(mg)
M1,M2:검체의 무게 (mg)
3-26-2 식이섬유(제2법)
1.시험방법의 요약
난소화성말토덱스트린 (RMD)
등을 함유한 식품에 인산완충액을
이용한 효소 -중량법을 적용하여
에탄올 에의해침전되는 고분자의 
난소 화 성말토덱스 트 린 과 같 은 수 용 성 
식이섬유(HMWS DF)를확인하고
에탄올 에녹는저분자의난소화성 
말토덱스트린과 같은 수용성 식
이섬유(LMWS DF)를탈염 하여
농축 한후,액체크로마토그래피로
확인하는 방법이다 .이방법에서- 84 -2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로마토그래프용유리병
 2.1.4 부 피 플 라 스크(100mL,50mL)총식이섬유는 물불용 성 식 이섬유
(IDF)및HMWS DF와액체크로마
토그래피로 확인한 LMWS DF의
합으로 계산되어진다.즉효 소-중
량법으 로구한식이섬유의함량에
알코올 에녹는수용성 식이섬유
의함량을합하여 총식이섬유의
함량으로 한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1저울 :0.1mg까지측정이
유효한 것
 2.1.2 비이커:500mLTall-form
 2.1.3진탕항온수조 :98±2℃까지
가온하 여온도유 지 가 가 능 하 고 
60℃로일정하게온도를 유지
할수있는 것
 2.1 .4유 리 여 과 기 :기 공4 0～6 0μm(ASTM 
기준 )의 용융유리디스크가
있는 Pyrex 60mL(Corn ing
No.36060 Buchner 또는 이와 
동등한 것).525℃에서 하룻밤 
동안회화하고 회화로온도가 
130℃까 지떨어 지 면 유 리 여 과 기 를 
상온에서 방냉한후,2%세척
액에1시간동안담근후물로
씻고증류수 로헹군다 음 아세톤
15mL을사용하여 마지막으로 - 85 - 2.1.5 알루미늄호일
 2.1.6 비커(200mL)
 2.1.7 항온수조
 2.1.8 유 리 관 (안 지 름 2 0mm,길이3 0 0mm)
<신설>
<신설>
<신설>
<신설>
 2.2분석장비
 2.2.1∼2.2.3 (생략)
 2.2.4Sugar -Pak(안지름 6.5mm,
길이300mm,충진재8%
cross-linkedresin/calcium
ionicform )또는 이와동
등한 것
2.3분석장비의 준비세척하고 바람을불어건조
시킨다.건조된 유리여과기에
규조토 약1.0g을넣고13
0℃에서 항량한후,데시케
이터에서 1시간동안실온에
방냉하여 규조토를포함한 유리
여과기의 무게를 0.1mg까지 
칭량하여 기록한다 .
 2.1.5 유리 또는 플라스틱칼럼관:
이온교 환수지를채우기 위
한것 으 로 40∼70cm×15mm
내경의 칼럼관
 2.1.6 유리막대:20cm길이로
끝을열처리한 것.
 2.1.7 일회용 주사기 :10mL
 2.1.8파스퇴르피펫,10mL정 용 피펫
 2.1.9저울 :4,000g용량
 2.1.10 테프론막대:비이커의
침전물을 모을 수있는 것
 2.1.11 용량플라스크:10, 50,
250 및1,000mL
 2.1.12감압농축 기
 2.2분석장비
 2.2.1∼2.2.3 (현행과 같음 )
<삭제>
<삭제>- 86 - 이동상인증류 수를 분당 1mL씩
흘려기기와 칼럼을안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약
 3.1표준물질
 3.1.1 Glucose
 분자식 :C6H12O6,분자량:
180.16,CASNo.:50-99- 7
 3.1.2Sucrose
 분자식 :C12H22O11,분자량:
342.30,CASNo.:57-50-1
3.2일반시약
 3.2.1 내열성α-아밀라 아 제 (α-amyla se,
heat stable ,냉장보존)
 3.2.2프로테아제 (protea se)
냉장0～5℃보존하 며,사 용 시 에 
MES/TRIS 완충액으 로 50mg/mL
가되게 조제하여 사용한다 .3.표준물질및일반시약
 3.1표준물질
 3.1.1액체크로마토그래피머무름 
시간확인용 표준물질:저분
자 의난소 화 성말토덱스 트 린 에 
해 당 하 는올리 고 당 [DP(Degree 
ofpolymer ization)≥3]을포함
한DE(Dextro seequivalent )
25또는 16.5～19.5의말토덱
스트린 (Sigma사419699 또 는
이 와동등 한 것)
 3.1.2 Glycerol
 분자식 :C3H8O3,분자량:
92.09,CASNo.:56-81-5
3.2일반시약
 3.2.1증류 수:3차증류 수
 3.2.2 에탄올:95%Technicalgrade- 87 - 3.2.3 아밀로글루코시다아제 용액
(Amyloglu cosidase)
냉장0～5℃보존하 며,사 용 시 에 
조제하여 사용한다 .
 3.2.4 Amberl iteIRA-96(OH형)
 3.2.5 Amberl ite200(H형)
3.2.6 2-(N-Morphol ino)ethane sulfon ic
acid(MES)
 3 .2 .7Tris (hydroxymethyl )aminomethane (TRIS)
<신설> 3.2.3 에탄올 수용액(78%)
 1L정용 플라스크에95%
에탄올 821mL을넣고물을 
표선까지 채워 조제한다 .
 3.2.4 인산수소나트륨(Na2HPO4)및
인산이수소나트 륨(NaH2PO4)
 3.2.5 내열성α-아밀라아제 용액:
Termamyl 120 또는 이와
동등 한 것,글리 세 롤 이 없 을것,
0～5℃에서 보관하며 사용
한다 (Sigma 사Catalog No.
A3403 또 는 이 와동등 한 것).
 3.2.6프로테아제 효소용액:1.1.4.3.
가.4)시약 및시액라)의
효소 분해능을 만족하는 것
으로써0～5℃에서 보관하고 
인산완충용액으로희석하여 
10mg/mL 로사용 시조제
한다 (Sigma 사Catalog No.
P3910 또는 이와동등한 것).
 3.2.7 아밀로글루코시다제 용액:
0～5℃에 서 보 관 하 며 사 용 한 다 .
글리 세 롤 이 없을 것(Sigma 사
Catalog No.A9913 또는
이와동등한 것)
 3.2.8 규조토 (Diatoma ceousearth ):
산세척한것(Sigma사Catalog 
No.C8656 또는Fisher
Scientific사Catalog No.
C-211,acidwashed또는 - 88 -<신설>
<신설>
<신설>
3.3시액의제조
 3.3.1MES/TRIS 완충액
MES19.52g과TRIS 12.2g을
증류 수1.7L에녹이고 6N
수산 화나트륨용액으로pH가
8.2가되도록조절한 후증
류수를 가하여 2L로한다 .
용액의온도가 20℃이면 ,
pH8.1로,용액의온도가 28℃
이면pH8.3으로 조정한다 .
<신설>이와동등한 것)
 3.2.9각시료의탈염을위한 이온
교환수지
 (1)m-1:25gAmberl iteIRA-67
(OH -type)또 는 이 와동등 한 것
 (2)m-2:25gAmberl ite200
CT(HG)H(H-type)또는 이와 
동등한 것
 3.2.10황산암모늄
 3.2.11덱스트로즈:액체크로마토
그래피용 ,순도99.5%이상
3.3시액의제조
 3.3.1 인산완충용액(0.08M,pH6.0)
 무수 인산수소나트륨1.4g
(또는 2수화물 1.753g)과
9.68g인산이수소나트 륨·1수
화물 (또는 2수화물 10.94g)을
700mL증류수 에녹인후증류
수를 가하여 1L로조제한다 .
이때pH를확인한다 .
 3.3.2각시료의탈염을위한 이온
교환수지
 (1)m-1 :25gAmberl ite
IRA-67(OH-type)또는 이와
동등한 것
 (2)m-2 :25gAmberl ite200
CT(HG)H(H-type)또는 이와
동등한 것
각시 험 용액의분 석을 위해서 - 89 -유리칼럼에상 기 2종의수 지 를 
잘혼합하여 충진한다 .
 ․총이온교환능 :1.74meq/mL
 ․유효 이온교환능(R-H교환능)
:1.6meq/mL (min.)
 ․상기 2종의수지를혼합하여
충진하 기 전각수 지 를증류수 로
세척하고 세척액 의pH가
m-1은7～8.8,m-2는4～7의
값이되도록한다 .
※Amberl ite200CT(HG)H 가
없을 경우 ,Amberl ite200
(Na-type )또는 Amberl ite
200CT를'H-type' 으로 전환
하여 사용한다 .이를 위해
Amberlite2 0 0 (Na-type)6 0 0mL
(500g)을유리 또는 플라스틱
칼럼관(100 cm×40mm
id)에채우고 2배부피의증류
수 를이용하여 60mL/m in의
속도로 세척하고 2배부피의 
10%염산용액(1→3w/w )을
재차 60mL/m in의속도로
흘려준 후수지의 3배부피에 
해당하는 증류 수를 이용하여 
60mL/m in의속도로 세척
하 여염산 을 제 거 한 다 .3～6배의
부피에 해당하는증류 수를
120mL/m in의속도로 재차
세척하고 세척액 의pH가- 90 -<신설>
<신설>
<신설>
<신설>
4.시험과정
 4.1효소처리액의조제 
 4.1.1 시료 약1g을200mL비커에
정밀히칭량한다 .시료중의
지방질이많은경우 에테르
등을 이용하여 충분히탈지한
후사용한다 .4～7인 지 확 인 하 여염산용액의
세척이제대로 이루어졌는지 
확인하여 사용한다 .
 3.3.3 수산화나트륨수용액(0.274N)
 NaO H11g을증류 수약
700mL에녹인후증류수를
가하 여 1L로조제한다 .
 3.3.4염산용액(0.325N)
 1L정용 플라스크에1N
HCl325mL을넣고증류 수
를가하여 1L로조제한다 .
 3.3.5글리세롤 표준용액(10mg/mL )
 비이커에글리세롤 (순도99.5%
이상 )10g을달아1L정용
플라스크로물로씻어옮겨 
표선까지채워 조제한다 .
 3.3.6덱스트로즈-글리세롤 반응계수
확인용 표준용액(100mg/mL )
 비이커에글리 세롤 (순도99.5%
이상 )10g을달아100mL
정용 플라스크에물로씻어
옮겨표선까지채워조제한다 .
4.시험과정
 4.1시료 균질화
 4.1.1 제1 0 ,1 ,1 .1 ,1 .1 .4 , 1 .1 .4 .3 . 식 이섬유
가.효소 -중량법6)시험
용액조제가)와같이 준비
한다.당함량이높은시료의 
경우 ,LMWS DF의손실을
고려 하여 85%에탄올 세척- 91 - 4.1.2증류 수50mL을가하여 용
해한 후,0.1N염산용액
혹은수산화 나트륨용액으로
pH6.0으로 조정한다 .
 4.1.3 여기에 내열성α-아밀라아제
용액0.1mL을가하고 ,알루
미늄박으로뚜껑을하여끓
는수욕에서 30분간놓아둔
다.(5분간격으로 교반)
 4.1.4 실온냉각후0.1N수산화
나트륨용액으로pH7.5±0.1
로조정한다 .
 4.1.5프로테아제 0.1mL을가
하고 알루미늄박 으로봉
한 후 60℃ 수용액에서
30분간진탕 한다 .
 4.1.6 실온냉각 후0.1N염산
용액으로pH4.5±0.2로조
정한다 .
 4.1.7 아밀로글루코시 다 아 제 0.1mL을
가하고 알루미늄박 으로뚜
껑을하여 60℃수욕에서 30
분간진탕 후수욕중에 서 10
분간가열하 여효 소 를 실 활 시킨다.
 4.1.8 실온냉각 후100mL부피
플라스크에옮겨 증류 수를
표선까지채운액을효소처
리액(A)라고 한다 .과정은 생략한다 .
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>
<삭제>- 92 - 4.2효소처리액(A)중의포도당 정량
 4.2.1포도당 ,설탕의 표준품을
각각 100mL부피플라스
크에정밀히취 한 후증류수 로
가하여 표선까지채운다 .
단,시험용액중분석 하고자 
하는농도가 검량선내에
포함될수있도록표준용
액의농도를 적절히 조절
하여 사용한다 . 4.2효소분해
 4.2.1 4개의 500mLtall-form 
비이커에 시료 1.000±
0.005g을정밀히달아2개의
검체 (M1,M2)를준비하고 
2개의 공시험 (B1, B2)을
준비한다 .이에인산완충
용액50mL씩가 하 고초음파를
이용하여 시료가뭉치 지
않고완벽 하게 분산시킨다.
내열성α-아밀라아제 용액
100μL을첨가 한 다 .비 이커를
알루미늄박으로덮은 후
95℃수욕에서 30분동안
계 속진탕하 면서 반응시킨다.
수욕의온도가 95℃에도
달할때부터 시작한다 (보통 
총35분이면 충분하다 ).수
욕에서 모든비이커를꺼
내어 실온으로 식힌다.알
루미늄박 을제거하고 비
이커에벽또는 바닥에
생긴겔형태 의내용물을 
시약스푼으로긁어내어 용
액속에 분산 시킨다.비이
커벽과시 약 스푼을10mL의
물로씻어준다 .0.275N
수 산 화 나 트륨용액으 로
pH를7.5±0.1로조정한 후,
프로 테 아 제 효 소 용액0.5mL를- 93 - 4.2.2 효소처리액(A) 및표준용액을
시 험 용액과표 준 용액으 로 하 여
당의 함량을구한다 .
 4.3탈염 처리액(B)
 4.3.1 효 소 처 리액(A)50mL을취 하 여 
「5.분 석 및계 산 5.1.탈염조
건」에맞는이온교 환수지
칼럼에초당1～2방울의속
도로 통과시켜탈염 한칼럼
용출액을분취한다 .각비이커에첨가한다 .
알루미늄박 으로 비이커를
덮고60℃수욕에서 30분간
계속해서교반하여 반응시
킨다.수욕의온도가 60℃에
도달한후반응을시작한다.
실온으로용액을식힌후,
알루미늄박을 제거한 후
비이커를잘교반해주면서
0.325NHCl로용액의pH를
4.5±0.2로조정한다 .비이
커를교반해주면서 아미노
글루코시다제 용액0.3mL를
첨가하고 알루미늄박으로
덮은후60℃수욕에서 지
속적으로 흔들 면서 30분간
항온한다 .수욕의온도가
60℃에도달할때반응을
시작한다 .
<삭제>
 4.3 물불용성 식이섬유(IDF)및
HMWS DF의함량측정
 4.3.1 60℃로가열한95%에탄올을
60℃수욕상의 효소 분해된
각각의시험용액에가한다 .
이때에탄올과 시험용액의
부피의 비율은 4:1이되
어 야 한다.수욕에서비 이커를- 94 -꺼내어 알루미늄박으로덮고
실온에서하룻밤침전시킨다.
미리 규조토를넣고무게를 
칭량한유리여과기에 있는
78%에탄올15mL을가하여 
규조토를 분산 시킨후흡인
여과하여 규조토층이고르게 
형성되도록한다.에탄올처
리 된 효 소 분 해 물 을 준 비 된 
유리여과기로 여과하고
78%에탄올 이들어있는
세척병 과고무재질의시약 
스푼을이용하여 비이커의
잔류 물을 유리여과기로옮
긴다.이때효 소 분 해 물 에 엷은
막이생성될경우 ,시약스
푼으로 생성된막을깨고
여과한다 .진공을 유지하
면서 20mL78%에탄올 
3회,10mL95%에탄올 로
2회,10mL아세톤으로 2
회씩잔류 물을씻어낸다.
105℃에서잔류 물이 남아
있는 유리여 과기를 하룻밤 
건조시키고,유리여과기를 
데시케이터에서 1시간동안
항량한후,식이섬유잔류물
및규조토를포함한 유리
여과기의 무게를 0.1mg
단위까지 칭량한다.미리 칭- 95 - 4.3.2 상기 칼럼에증류 수약150
mL을초당1～2방울속도
로통과시킨칼럼용출액을
분취한다 .
 4.3.3 칼럼용출액200mL을감
압농축 하여 20mL부피플
라스크에옮기고 증류 수를
표선까지채운다 .
 4.3.4 이액을0.20μm의멤브레 인
필터로 여과한 것을 시험용
액으로 한다.
<신 설>량하여 확인한 규조토를 포
함한 유리여과기의 무게를 
빼서식이섬유의무게를 계
산 한 다 .같 은두개 의시료 중
하나는 1.1.3.1 총질소및
조단백질 에따라 단백질 함
량을측정한다 .이때질소
계수는 6.25를사용한다 .
다른 하나는 1.1.2. 회분에
따 라 회 분량을확 인한 다.이때
525℃에서 5시간이상 회
화하고 0.1mg단위까지
칭량한다 .미리 칭량하여
확인한 규조토를포함한
유리여과기의 무게를빼서
회분의 무게를 결정한다 .
<삭제>
<삭제>
<삭제>
 4.4여액회수 및탈염
4.4.1 4.3의여액을감압농축 기로 
농축 하여완전 건고하고- 96 -5.분석 및계산잔류 물을 소량의물로녹인
후,이를 50mL정용플라스
크에정량적으로옮긴다.이
에글리세롤 표준용액10
mL을넣고증류 수로 표선
까지채워 50mL로조제
한다 . 이를 Amberl ite
IRA-67(m-1) 및Amberl ite
200CT(H G )H (m-2)각25g을
완전히혼합하여채운유리
칼럼(75cm×15mmid)에
통과시키고이후 ,250mL
증류수로 칼럼을통해 세척
하며 추출한다 .이때유속은 
0.8mL/m in으로 조정한다 .
이온교환칼럼을통과한초
기용출액부터 250mL를
모아 정량적 으 로 500
mL둥근 플 라 스크에옮
기고완전건고될때까 지감
압농축한 다.이 를 10mL정용
플라스크로증류 수를 이용
하여 정량적으로 옮겨 10
mL로조제한 후10mL
일회용 주사기에옮겨 0.2
μm맴브레 인필터로 여과
하여액체크로마토그래피용
시험용액으로 한다 .
5.분석 및계산- 97 - 5.1탈염 조건
 -이온교환수 지AmberliteIRA -96(OH
형),Amberl ite-200(H형)을1
:1의비율로혼합한 것
 -칼럼크기:유 리 관 (안 지 름 20mm,
길이300mm)
 -용리액:증류 수
 -수지량:50mL
 이온교 환수지각각 OH형은
5%수산화나트륨용액으로 ,H
형은5%염산용액으로 하루정
도충분히 활성화 시킨후물로
수차례세척하여수산화나트륨
용액이나염산용액이잔존 하지
않도록하여 사용한다 . 5.1시험조작
 5.1.1액체크로 마 토 그래프의측정 조 건
 -분 석 칼럼:TSK- G ELG 2500PWXL,
7.8mmid×30cm를연속
하여 2개를연결한 것또는
이와동등한 것
 -가 드 칼럼:TSKguard column 
PWXL ,6.0mmid×4cm
또는 이와동등한 것
 -칼럼온 도:80℃
 -이동상:증류 수
 -유속 :0.5mL/m in
 -주입량:20μL
 -검출기 :시차굴절계검출기 (RI),
40℃유지
 5.1.2RMD와액체크로마토 그래피
반응이동등한덱스트로
즈로반응계수 결정
 RMD의RI검출기의 반응에
대한평가와 표준화를 위해 
글리세롤 표준물질을사용
한다 .LC분석에서RI검
출기에서얻은RMD의
피크면적은덱스트로즈와
동등하며 내부표준물질인
글리세롤의 피크면적과
덱스트로즈의농도에 따른 
피크면적을 비교한다 .이
렇게작성된 검량곡 선으로
부터 시험 용액중RMD의- 98 -함량을계산하는데사용할 
반응계수를 결정한다 .
동량의글리세롤과 3개농도
수 준 으 로덱스 트 로즈를100mL
정용플라스크에각각 넣은
3개의 용액을 준비한다 .
이를 위해 0.5,1.0,2.0g의
덱스트로즈를3개의구분된
100mL정용플라스크에정
확히 칭량하여넣고덱스
트로즈-글리세롤 반응계수
확인용 표준용액10mL을
각정용 플라스크에첨가
한후증류 수를채워 100
mL로조제한다 .조제된 3
개의 표준용액20μL를
액체크로마토그래피에 주
입하여각크로마토그래
피에서덱스트로즈와글
리세롤의 피크면적을 확인
하여글리세롤의 피크면적
에대한덱스트로즈피크
면적 비(y-축)와글리세롤
함량에 대한덱스트로즈
함량비(x-축)을비교하여
얻어진기울기의역수로
부터 아래의 식과 같이
반응계수를구한다 .
 반응계수(Rf)=1/[(PA-dex/PA-gly)
×(Wt-gly/Wt -dex)]- 99 -항목 조건표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)5.2기기분석 PA-dex:덱스트로즈피크면적
 PA-gly:글리세롤 피크면적
Wt-dex:표 준 용액중덱스 트 로즈함량
Wt-gly:표 준 용액중글리 세 롤 함량
 5.1.3액체크로 마 토 그래피 의크로 마 토 그램
그림1.표준용액및시험용액의
크로마토그램
 5.2식이섬유함량계산
※ 총식이섬유함량(TDF)은
%(IDF+HMWS DF)와- 100 -주입량 20μL
칼럼온도 70℃
이동상 증류수
유량 0.4mL/분LMWS DF의평균 함량
(%ALMWS DF)을 합하여
계산한다 .
 5.2.1 (IDF+HMWS DF)의함량계 산
 (1)공시험 함량(B,mg)측정:
 B=[(B 1R+B 2R)/2]-PB-AB
 B1R,B2R:공시험 2반복에
대한잔사의 무게 (mg)
 PB:공 시 험 (B 1)의단백질무 게(mg)
 AB:공 시 험 (B 2)의회 분 무 게(mg)
 5.2.2 (IDF+HMWS DF)평균
함량(g/100g)측정:


×
M1R,M2R:검체 2반복의잔사
무게 (mg)
 P:잔사(M1R)중단백질무 게(mg)
 A:잔사(M2R)중회분 무게(mg)
 B:공시험 함량(mg)
M1,M2:검체의 무게 (mg)
 5.2.3LMWS DF의평균함량
 5.2.3.1LMWS DF(mg)측정:
LMW SDF =PAS_LM W SDF×W tS_gly×Rf
PAS_gly 
 PAS_LMWS DF:시험용액
중LMWS DF(DP≥3)의피- 101 -5.3계산
 5.3.1포도 당 중량(mg)=Ax(B/C)/
1,000
 A:시험용액중당질의농도
(μg/mL )크면적
 PAS_gly :시험용액중
글리세롤의 피크면적
WtS_gly :시험용액에첨
가한글리세롤의 무게
(mg)
Rf:덱스트로즈-글리세롤
반응계수
 5.2.3.2각시료의LMWS DF의
함량(g/100g)측정
%LMWS DF=LMWS DF×100
SW
SW:시료의 무게 (mg)
 5.2.3.3LMWS DF의평균함량
(g/100g)
%ALMWS DF=%LMWS DF+%LMWS DF'
2 
 %LMWS DF,%LMWS DF':각
시 료 의LMWS DF의함량(g/100g)
<삭제>- 102 - B:시험용액전량(mL)
C:희석배수
 5.3.2난소 화 부 중량(mg)=A/BxC
 A:난소화부의 피크면적
 B:포도당의 피크면적
C:포도당의 중량(mg)
3-27∼3-72 (생략)
<신설>
3-27∼3-72 (현행과 같음 )
3-73폴리감마글루탐산
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중폴리감마
글루탐산을 산분해한 후아미노산
자동분석기를 이용하여 분석하는
방 법 으 로 570nm에서 정량분 석한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로 마 토 그래프용유 리병
 2.1.4초음파진탕 기
 2.1.5 부피플라스크
 2.2분석장비
 2.2.1 아미노산자동분석기
 2.2.2 이온교환칼럼으 로 HRNA
칼럼(안지름 4.6mm,길이
200mm,유리아미노산
분 석 용 )또 는 이 와동등 한 것- 103 - 2.3분석장비의 준비
완충액,발색시약의 유무 ,칼럼
항온조의온도를점검하고 ,
자동완충액전환기구및정유량
펌프 ,유량을소정의 조건에
따라 설정하고측정을 실시한다 .
 2.3.1 아미노산자동분석기 관련
시약
 2.3.1.1 닌히드린시약 (Ninhydr in
reagent ,기 기 조 건 에 적 합
한용액으 로 조 제 하 여 사 용)
 2.3.1.2구연산 리튬완충액(Lithium
citrate buffer ,기기
조 건 에 적 합 한 용액으 로
조제하여 사용 )
 2.3.1.3완충액(기 기 조 건 에 적 합 한 
용액으 로 조 제 하 여 사 용)
3.표준물질및일반시약 
 3.1표준물질
 3.1.1 폴리감마글루탐산(Poly- [gamma ]
-glutam icacid)
 분 자 식 :C15H21N3O9X2,분 자량:
387.34,CASNo.:84960-48-5
 3.2일반시약 - 104 - 3.2.1염산(Hydro chloricacid)
 3.2.2증류 수(Distilledwater )
 3.2.3 메탄올 (Methanol )
4.시험과정
 4.1표준용액제조
 4.1.1 표준물질폴리감마글루탐산
10mg을정밀히칭량하여
100mL부 피 플 라 스크에넣는 다.
 4.1.2증류 수를넣어표선까지
맞추어 표준원액으로 한다.
 4.1.3 표준원액을0.02N염산
용액으로 적정농도로희석
하여 표준용액으로 한다 .
 4.2시험용액제조
 4.2.1 시료 100mg을정밀히
칭량하여 10mL부피플라
스크에넣는다.
 4.2.2 적당량의증류 수를넣고
잘흔들 어녹인다 .
 4.2.3 10분간초음파로추출한다 .
 4.2.4증류 수로 10mL가되게
정용한다 (A).
 4.2.5 (A)액0.5mL를취하여
6N염산10mL를가한 후
110℃에서 24시간가수
분해한다 .
 4.2.6 위의 용액을50mL부피
플라스크에옮겨 증류 수로 
정용한 다음 0.02N염산- 105 -용액으로 10배희석하여
시험용액으로 한다 .
 4.2.7 시험용액을아미노산자
동분석기로 분석하여 총
글루탐산함량(%)을구
한다 .
 4.2.8 산으로 가수분해 하지않은
(A)액은0.02N염산용액
으로 10배희석하여 아미
노산 자동분석기로 분석
하여 유리글루탐산함량
(%)을구한다 .
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 20uL
칼럼온 도 38∼78℃
흡광 검출기파장 570nm
완충액 0.35mL/m in
반응액닌히드린 시약 :0.30mL/m in
반응기온도 135℃표1.아미노산자동분석기조건 (예)
 5.2계산 
 5.2.1폴리감마글루탐산 함량
(mg/g )=(총글루탐산
함량×0.88) -유리글
루탐산함량
*총글루탐산함량(mg/g )=
(H×V×D)/(S×1,000)
 H:가 수분해 한 시험 용액의
총글루탐산농도(μg/mL )- 106 -
<신설>V:시험용액의전량(mL)
 D:희석배수
S:시료채취량(g)
*유리글루탐산함량(mg/g )
=(C×V×D)/(S×1,000)
C:(A)액의유리글루탐산
농도(μg/mL )
V:시험용액의전량(mL)
 D:희석배수
S:시료채취량(g)
*0.88=129(폴리글루탐산 중 의 
글루탐산잔기의 분자량)/147
(글루탐산분자량)
3-74 히알루론산
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터 추출한 
히알루론산을 콘드로이티나아제
ABC를이용하여특이적으로
분해시켜얻은이당류를액체
크로마토 그래프 를사용하여 분석
하는 방법이다 .음이온을 가진
이들분해산물을 음이온교 환수지
칼럼을이용하여 232nm에서
정량분석한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및- 107 -디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로 마 토 그래프용유 리병
 2.1.4초음파진탕 기
 2.1.5 부피플라스크
 2.1.6교반기
 2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 자외부흡광광 도검출기 
 2.2.3 칼럼오븐
 2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼
(안지름 4.6mm,길이
250mm,충전제 강염기
성의암모늄이온교환수
지로코팅 된실리카겔),
Hyper silGOLDSAX
또는 이와동등한 것
 2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 0.05MNaCl (pH
3.5)을분당 1.0mL씩흘려줌
으로서 칼럼과기기를 안정화
시킨다.
3.표준물질및일반시약 
 3.1표준물질
 3.1.1 Hyaluron icacidsodium
salt(Poly(β-glucuron ic
ac id- [ 1→3 ] - β
-N-acetylglu cosamine
-[1→4]),alternat ing)
 분자식 :(C14H21NaNO 11)n,- 108 -분자량:401.3,CASNo.:
9067-32-7
 3.2일반시약
 3.2.1콘드로이티나아제 ABC
(Chondro itinaseABC)
 3.2.2 트리스염(Trisbase)
 3.2.3 아세트산나트륨(Sodium
acetate )
 3.2.4염산(Hydro chloricacid)
 3.2.5증류 수(Distilledwater )
 3.3시액의제조
 3.3.1 33mMTris-HCl완충용액
제조
 트리스염3.99g과아세 트
산나트륨2.7g을각각취
하 여 900mL증류수에녹인
후염산을 이용하여pH8.0
으로 조절한 후1L로한다.
4.시험과정
 4.1표준용액제조
 4.1.1 표준물질을정밀하게 칭량
하고33mMTris-HCl
완충용액에희석하고 60℃
수욕상에서완전히녹인- 109 -것을 표준원액으로 한다 .
 4.1.2 위의 표준원액을33mM
Tris-HCl완충용액을이용
하여 적절히 희석한 용액을
표준용액으로 한다 .
 4.1.3 표준용액50μL에0.002
unit/uL콘드로이티나아제
ABC50μL와33mM
Tris-HCl(pH8.0)완충
용액400μL를넣고37℃
에서 3시간반응시킨다.
 4.1.4 반응이완료되면 100℃에서 
5분간가열하고 위 의 용액을
0.45μm의멤브레 인필터로 
여 과 하 여 표 준 용액으 로 한 다.
 4.2시험용액제조
 4.2.1 히알루론산으로서 0.5∼
5mg이함유되도록적
당량의시료를 칭량하여
50mL부피플라스크넣고
33mMTris-HCl완충용액
으로 정용한 후혼합한다 .
 4.2.2 마그네틱 바를넣고60℃
에서 90분간강하게 추출
후실온에식힌다.
 4.2.3 시료추출액50uL에0.002
unit/uL 콘드로이티나아제
ABC50uL와33mM
Tris-HCl(pH8.0)완충용액
400uL를넣고37℃에서- 110 -3시간반응시킨다.
 4.2.4반응이완료되면 100℃에서 
5분간가열하고 용액을
0.45μm의멤브레 인필터로 
여과하여 시험용액으로 한다.
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10uL
칼럼온 도 40℃
이동상 0.05MNaCl (pH3.5)
검출기파장 232nm
유량 1.0mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
 5.2계산 
 5.2.1. 히알루론산 표준용액에서
얻은히알루론산의 피크
면적으로 검량선을 작성
하고,검량선식을 이용하 여
시험용액중 의 히알루 론산의 
농도를구한후아래식을 
이용하 여 히 알루론 산 함량을
계산한다 .
히알루론산의
함량(mg/g )=A×B×C
×378.3
D×1,000 401.3
 A:시험용액의전량(mL)
 B:희석배수
C:시 험 용액중 의 히 알 루 론 산 의 - 111 -<신설>농도(μg/mL )
 D:시료채취량(g)
 1/1,000 :단위 환산 계수
 378.3 :히알루론산 이당류의
분자량
 401.3 :히알루론산 나트륨
이당류의분자량
3-75 로사빈
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중로사빈을
메탄올 용액으로초음파로추출
한후액체크로마토그래프/자외부
흡광광 도검출기를 이용하여 분석
하는 방법으로 최대흡수파장인
250nm에서 정량분석한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3 액체크로 마 토 그래프용유 리병
 2.1.4초음파진탕 기
 2.1.5 부피플라스크
 2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 자외부흡광광 도검출기 
 2.2.3 칼럼오븐
 2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼- 112 -(안지름 4.6mm,길이
250mm,충전제octadecyl
silica)또는 이와동등
한것
 2.3분석장비의 준비
 이동상으로서증류 수와 아세토
니트릴을80:20으로혼합하여 
분당 1.0mL씩흘려줌으로서
칼럼과기기를 안정화 시킨다.
3.표준물질및일반시약 
 3.1표준물질
 3.1.1 로사빈 (Rosavin)
 분자식 :C20H28O10,분자량
:428.43,CASNo.:
84954-92-7
 3.2일반시약
 3.2.1 메탄올 (Methanol )
 3.2.2 아세토니트릴(Acetonitrile)
 3.2.3증류 수(Distilledwater )
4.시험과정
 4.1표준용액제조- 113 - 4.1.1 표준물질로사빈 10mg을
정밀히칭량하여 10mL
부피플라스크에넣는다 .
 4.1.2 메탄올 을넣어표선까지
맞춘 다.
 4.1.3 위의 표준원액을메탄올 을
이용하여 적정농도로희석
하여 표준용액으로 한다 .
 4.2시험용액제조
 4.2.1 시료 100mg을정밀히
칭량하여 100mL부피
플라스크에메탄올 을가
하여녹인다 .
 4.2.2 10분동안초음파로추 출 후
실온에 서냉각하 여 메탄올로
정용한다 .
 4.2.3 위의 용액을0.45μm의
멤브레 인필터로 여과하여 
시험용액으로 한다 .
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 30℃
이동상A:Distilledwater
B:Aceton itrile
검출기파장 250nm
유량 1.0mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
- 114 -<신설>분이동상 (%)
A(Distilled
water)B(Acetonitrile)
0 80 20
15 80 20
20 30 70
25 30 70
30 80 20
40 80 20표2.고속액체크로마토그래프이동상조성(예)
 5.2계산 
 5.2.1 로사빈 함량(mg/g )=C×
(a×b)/S×(1/1,000)
C:시험용액중의 로사빈의 
농도(ug/mL )
S:시료채취량(g)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
3-76 안토시아노사이드
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중안토시아
노사이드를염산을 이용하여 안
토시아니딘으로 분해한 후분광
광도기로 분석하는 방법으로 540
nm의파장으로 흡광 도를구하여
정량분석한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터- 115 - 2.1.3 부피플라스크
 2.2분석장비
 2.2.1 자외분광광 도계
3.표준물질및일반시약 
 3.1표준물질
 3.1.1 안토시아니딘의 함량이
알려진바키늄 미르틸루
스엑스
 3.2일반시약
 3.2.1 무 수 에탄올(Ethanol ,anhydrou s)
 3.2.2염산(Hydro chloricacid)
 3.2.3증류 수(Distilledwater )
4.시험과정
 4.1표준용액제조
 4.1.1 안토시아니딘의 함량이
알려진바키늄미르틸루스
엑스약20mg을정밀히
칭량하여 시험 용액과같이
조작하 여 표 준 용액으 로 한 다.
 4.2시험용액제조
 4.2.1 시료 20mg(안토시아니딘
으로서 )을정밀히칭량하여 
무수에탄올·1.5mol/L 염산
혼합액(17:3) 을넣어녹인후
200mL부피플라스크에
정용한다 .
 4.2.2이액5mL를취하여 무수
에탄올 ·1.5mol/L 염산혼- 116 -<신설>합액(17:3) 을넣어50mL
로정용한 다음 여과하여
처음 여액20mL은버
리고 다음 여액을시험
용액으로 한다 .
 4.2.3 무수에탄올·1.5mol/L 염산
혼합액(17:3) 을대조액으로 
하여파장540nm에서
시험용액및표준용액의
흡광도AT및AS를측정 한 다 .
5.계산
 5.1계산 
 5.1.1. 총안토시아노사이드의
함량(mg/g )
표준품의
안토시아니딘양
(mg)×AT
×1.475×1
×1
AS S 1,000
 AT:시험용액의흡광 도
 AS:표준용액의흡광 도
S:시료채취량(mg)
 1.475: 안토시아니딘의안토
시아노사이드 전 환계수
 1/1,000 :단위 환산 계수
3-77 알리인
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중알리인의
함량을80%메탄올용액으 로초음파로
추출 한후액체크로마토그래프/- 117 -자외부흡광광 도검출기를 이용하여
분석 하는 방법으로 208nm에서
정량분석한다 .
2.장비와 재료
 2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용매용일회용 실린지
 2.1.2 여과용멤브레 인필터 및
디스크형 멤브레 인필터
 2.1.3액체크로 마 토 그래프용유 리병
 2.1.4초음파진탕 기
 2.1.5 부피플라스크
 2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 자외부흡광광 도검출기 
 2.2.3 칼럼오븐
 2.2.4 옥타데실실릴화한 칼럼
(안 지 름 3 .0mm,길이1 5 0mm,
충전제octade cylsilica)
또는 이와동등한 것.
 2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 A용액(20mM
인산이수소나트 륨·10mM헵탄
설폰산나트륨,pH2.0)을분당
0.4mL씩흘려줌으로서 칼럼과
기기를 안정화 시킨다.
 3.표준물질및일반시약 
 3.1표준물질- 118 - 3.1.1 알리인 (L(+)Alliin)
 분자식 :C6H11NO 3S,분자량
:177.22,CASNo.:
556-27-4
 3.2일반시약 
 3.2.1 헵탄설폰산나트륨(1-Heptane 
sulfon icacid,sodiumsalt,
HPLCgrade )
 3.2.2 인산이수소나트 륨(Sodium
dihydrogenpho sphate ,
anhydrou s)
 3.2.3 인산 (Phosphor icacid)
 3.2.4 아세토니트릴(Acetonitrile,
HPLCgrade )
 3.2.5증류 수(Distilledwater )
 3.2.6 메탄올 (Methanol )
 3.2.7포름산 (Form icacid)
 3.3시액의제조
 3.3.1 20mM인 산 이 수 소 나 트륨·10
mM헵탄설폰산나트륨용액
 인산이수소나트륨약2.4g
과헵탄설폰산 나 트륨용액약
2.0g을물에녹여1L로
정 용 하 고 인 산 으 로pH2.0로- 119 -조절한다 .
 3.3.2 80%methanol 용액(pH3.0)
Methanol : D .W를
80:20(v/v)의비율로혼합
하고포름산을 이용하여
pH3.0로조절한다 .
4.시험과정
 4.1표준용액제조
 4.1.1 표준물질알리인 10mg을
정밀히칭량하여 10mL
부피플라스크에넣는다 .
 4.1.2. 80%메탄올 (pH3.0) 용
액을넣어표선까지맞
추어 표준원액으로 한다 .
 4.1.3 표준원액을80%메탄올
(pH3.0)용액으로 적정농
도로희석하여 표준용액
으로 한다 .
 4.2시험용액제조
 4.2.1 시료 100mg을정밀히
칭량하여 25mL부피플라
스크에넣는다.
 4.2.2 적당량의80%메탄올 (pH
3.0)용액을넣고잘흔들
어녹인다 .
 4.2.3 10분간초음파로추출한다 .
 4.2.4 80%메탄올 (포름산으로
pH3.0)로25mL가되게 
정용한다 .- 120 - 4.2.5 위의 용액을0.45 μm의
멤브레 인필터로 여과하여 
시험용액으로 한다 .
5.분석 및계산
 5.1기기분석
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 30℃
이동상A:20mM인산이수소나트 륨·10
mM헵탄 설폰산나트륨용액(pH2.0),
B:아세토니트릴:이동상A(50:50)
검출기
파장208nm
유량 0.4mL/m in표1.고속액체크로마토그래프 조건 (예)
min이동상 (%)
A B
0 100 0
5 70 30
25 46 54
30 0 100
32 0 100
37 100 0
45 100 0표2.고 속액체크로 마 토 그래프이동상조 성(예)
 5.2계산 
 5.2.1. 알리인 함량(mg/g )
 =C×(a×b)/S
C:시험용액중의 알리인의
농도(mg/mL )
S:시료채취량(g)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수- 121 -