食品安全国家标准  
食品营养强化剂   富硒酵母  
（征求意见稿 ） 
 
201× -××-××发布 201× -××-××实施中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB ×××× —×××× 
 
 
中 华 人 民 共 和 国 
国家卫生和计划生育委员 会  发布 GB ×××× —××××  
1 食品安全国家标准  
食品营养强化剂   富硒酵母  
1 范围  
本标准适用于 以适宜的发酵用营养物质接种 未经基因修饰的 酵母菌种 ，经发酵培养将培养基中含有的
亚硒酸钠转化为有机态硒 ，再经分离、干燥、包装制得 的食品营养强化剂 富硒酵母 。 
2 技术要求  
2.1 感官要求  
感官要求应符合表 1的规定。 
表1 感官要求  
项    目 要    求 检验方法  
色泽  淡黄色至棕黄色  取适量试样置于清洁 、干燥的无色玻璃烧杯中 ，在
自然光线下 ，观察其色泽和状态 。 状态  粉末  
2.2 理化指标  
理化指标应符合表 2的规定。 
表2 理化指标  
2.3 微生物指标  
微生物指标 应符合表 3的规定。 
 项    目 指    标 检验方法  
水分，w/% ≤ 6.0 GB 5009.3  
蛋白质，w/%  ≥ 40 GB 5009.5  
灰分，w/% ≤ 10 GB 5009.4  
总硒（Se）， mg/kg   1000～2500  GB 5009.93  
有机硒占总硒 质量百分比，w/% ≥ 97 附录 A中A.2 
硒代蛋氨酸占总硒质量百分比 ，w/%  60～85 附录 A中A.3 
铅（Pb）/（mg/kg） ≤ 1 GB 5009. 75 
砷（以As计）/（mg/kg） ≤ 1 GB 5009. 76 
汞（Hg）/（mg/kg） ≤ 1 GB/T 5009.17  
镉（Cd）/（mg/kg） ≤ 1 GB/T 5009.15  GB ×××× —××××  
2  
 
 
 
表3 微生物指标  
3 标签标识  
富硒酵母的标签标识应当注明 总硒含量 。 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 项    目 指    标 检测方法  
菌落总数 ，CFU /g ≤ 3000 GB 4789.2  
大肠菌群 ，CFU /g ≤ 10 GB 4789.3  平板计数法  
霉菌和酵母菌 ，CFU/g  ≤ 100 GB 4789.15  
大肠埃希氏菌 ，CFU /g ＜ 1.0 GB 4789. 38 平板计数法 
沙门氏菌   未检出 /25g GB 4789.4  
金黄色葡萄球菌   未检出 /25g GB 4789.10  定性检验  GB ×××× —××××  
3 附 录 A 
检验方法   
A.1 一般规定  
本标准除另有规定外 ，所用试剂的纯度 均为分析纯 ，所用标准滴定溶液 、杂质测定用标准溶液 、制剂
及制品，应按 GB/T 601 、GB/T 602 、GB/T 603 的规定制备 ，实验用水应符合 GB/T 6682 -2008中三级水的规
定。试验中所用溶液在未注明用何 种溶剂配制时 ，均指水溶液 。 
A.2 有机硒占总硒 质量百分比  
A.2.1 试剂和材料  
同GB 5009 .93-2010第一法。 
A.2.2 仪器和设备  
同GB 5009. 93 -2010第一法。 
A.2.3 无机硒测定的试样制备  
称取约 1 g试样，精确至0.0001 g，置于50 mL容量瓶中 ，加入约 25 mL水，超声溶解 10 min，使试样充
分溶解，加水定容至刻度 ，摇匀。将定容后的溶液置于 5000 r/min 的离心机中 ，离心 10 min，以下依GB 
5009.93 -2010中6.1.5.2“吸取 10.0 mL试样…… ”操作。同时做空白试验 。 
A.2.4 结果计算  
A.2.4.1 试样中无机硒含量 X1按式（A.1）计算： 
                        
1000 10001000
1050) (
10
1
mcc
X      ……… ……… ………………… （A.1） 
式中： 
    c ——  试样提取液测定浓度 ，单位为纳克每毫升 （ng/mL）； 
c0 ——  无机硒空白测定浓度 ，单位为纳克每毫升 （ng/mL）； 
m1 ——  无机硒测定时称取的试样质量 ，单位为克 （g）； 
50 ——  试样最初定容时的体积 ，单位为毫升（mL）； 
10 ——  试样最终测定时的体积，单位为毫升（mL）。 
结果保留三 位有效数字 。 
A.2.4.2 试样中有机硒含量 X2按式（A.2）计算： 
                                1 2 XX X     …………… ……………………… ……（A.2） 
式中： 
    X ——  试样中总硒的含量 ，单位为毫克每千克 （mg/kg）； 
X1 ——  试样中无机硒的含量 ，单位为毫克每千克 （mg/kg） 。 
A.2.4.3 试样中有机硒百分含量 w1按式（A.3）计算： 
                               %1002
1XXw     ………………………………………… （A.3） 
式中： 
X2 ——  试样中有机硒的含量 ，单位为毫克每千克 （mg/kg）； 
X ——  试样中总硒的含量 ，单位为毫克每千克 （mg/kg） 。 GB ×××× —××××  
4 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 。结果保留至小数点后一位 。 
A.3 硒代蛋氨酸 占总硒质量百分比  
A.3.1 方法原理  
富硒酵母中硒代蛋氨酸主要以蛋白形式存在 ，通过酶解 ，使蛋白质分解为单个的游离氨基酸 ，经过衍
生后，采用选择反应监测离子模式对衍生物进行 GC-MS测定，内标法定量 。 
A.3.2 试剂和溶液  
A.3.2.1  吡啶。 
A.3.2.2  无水乙醇。 
A.3.2.3  中性蛋白酶 。 
A.3.2.4  胰蛋白酶 。 
A.3.2.5  盐酸溶液 ：4 mol/L。 
A.3.2.6  三（羟甲基）氨基甲烷 （TRIS）缓冲液（0.1 mol/L）：称取三（羟甲基）氨基甲烷 1.21 g，加水
溶解，用盐酸溶液（A.3.2. 5）调节至 pH 7.4±0.1。 
A.3.2.7  双硫苏糖醇溶液 ：称取 80 mg双硫苏糖醇 于500 mL TRIS缓冲液（A.3.2.6） ，超声溶解 。 
A.3.2.8  1%氯甲酸乙酯溶液 ， ：量取 100 μL的氯甲酸乙酯 于9.9 mL的三氯甲烷中 ，混匀。 
A.3.2.9  硒代蛋氨酸标准贮备液 （200 μg/L）：准确称取 200.0 mg  L-硒代蛋氨酸 标准品（纯度≥99 %）于
100 mL容量瓶中 ，加水溶解 ，定容。4℃冰箱保存 ，保质期 2个月。 
A.3.2.10  氯苯丙氨酸 内标贮备液 （50 μg/L） ：准确称取 50 mg L-2-氯苯丙氨酸 标准品（纯度≥99 %）于100 
mL容量瓶中 ，加水溶解 ，定容。4℃冰箱保存 ，保质期 2个月。 
A.3.3 仪器和设备  
A.3.3.1  气相色谱 -质谱联用仪 （GC/MS/MS ）。 
A.3.3.2  恒温水浴摇床 。 
A.3.3.3  旋涡混合仪 。 
A.3.4 分析步骤  
A.3.4.1 样品处理  
称取 200 mg试样于50 mL水解管中 ，加入高纯水 5 mL在冰水浴下超声 5 min，然后 4000 r/min 下离心 10 
min，上清液转移至另一水解管 。沉淀重复上述超声 、离心三次 ，合并上清液 ，冻干。沉淀和上清液冻干
物分别加入中性蛋白酶 100 mg、胰蛋白酶 100 mg，双硫苏糖醇溶液 5 mL。在水浴摇床上 55±1.0℃℃，150 
r/min下反应 24 h。然后定容 250 mL，通过 0.45 μm滤膜，滤液备用 。 
A.3.4.2 标准系列制 备 
200 μg/m L硒代蛋氨酸 标准贮备液临用前配制成以下硒代蛋氨酸标准浓度系列 。 
编号  吸取硒代蛋氨酸标准贮备液 ，mL 定容体积 ，mL 硒代蛋氨酸标准系列浓度 ，μg/mL  
1 0 100 0 
2 0.4 100 0.8 
3 0.8 100 1.6 
4 1.2 100 2.4 
5 1.6 100 3.2 
6 2.0 100 4.0 
A.3.4.3 衍生化 
取稀释好的 试样酶解液及标准系列各 200 μL，加入氯苯丙氨酸 内标贮备液 200 μL、无水乙醇 200 μL、
吡啶 50 μL，充分混匀后 ，加入 50 μL氯甲酸乙酯 溶液，混匀，超声除气 ，加入 500μL氯甲酸乙酯溶液 ，充
分振荡混匀 ，静止分层 ，吸取三氯甲烷层上机测试 。 GB ×××× —××××  
5 A.3.4.4 上机测试  
A.3.4.4.1 GC参考条件 
a) 进样口温度 ：250℃； 
b) 色谱柱：HP-5MS柱（L30 m×Φ  0.25 mm Film  0.25 μm） ； 
c) 升温程序 ：50℃（保持 1 min）以30/ min℃升至 190℃，以5/ min℃升至 225℃，以30/ min℃升至 250℃
（保持 3 min） ； 
d) 流速：1 mL/min； 
e) 进样量：1 μL，不分流进样 ； 
f) 传输线温度 ：260℃。 
A.3.4.4.2 MS参考条件 
EI源220℃；电离能 70eV；扫描模式 ：SRM；碰撞离子 ：226.0、297.0；碰撞能 10V；碰撞压力 1.5mTorr；
监测离子 ：202.0、153.9；溶剂延迟 8 min。 
A.3.4.5  标准曲线 绘制 
标准系列衍生上机后 ，以标准系列的浓度为横坐标 ，以标准系列图谱中硒代蛋氨酸与内标物的峰面积
比为纵坐标作图 ，得到标准曲线回归方程 。 
A.3.5 结果计算  
试样中硒代蛋氨酸百分 含量 w 2按式（A.4）计算： 
                            %1002mfcw     ………………………… …………… （A.4） 
式中： 
c ——  试样图谱中硒代蛋氨酸与内标物质的峰面积比对应标准曲线中浓度 ，单位为微克每毫升
（μg/mL）； 
    f ——  试样稀释倍数 ； 
m ——  称取试样的质量，单位为克 （g）。 
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准 。