1  
QUY CHUẨN KỸ THUẬT QUỐC GIA 
ĐỐI VỚI CHẤT ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ BỔ SUNG VITAMIN A  
VÀO THỰC PHẨM 
 
 
National technical regulation 
on substances may be added for vitamine A fortification in foods  
 
 
I.   QUY ĐỊNH CHUNG 
1. Phạm vi điều chỉnh 
Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia này (sau đây gọi tắt là Quy chuẩn) quy định yêu 
cầu kỹ thuật đối với chất  và quản lý được sử dụng để bổ sung vitamin A vào thực 
phẩm. 
2.  Đối tượng áp dụng 
Quy chuẩn này áp dụng đối với: 
2.1.Tổ chức, cá nhân sản xuất, kinh doanh, nhập khẩu, các chất  được sử dụng 
để bổ sung vitamin A (bao gồm Retinol, Retinyl palmitate, Retinyl acetate và β-
Caroten) vào thực phẩm (sau đây gọi tắt là tổ chức, cá nhân). 
2.2. Cơ quan quản lý nhà nước có liên quan. 
3. Giải thích từ ngữ và chữ viết tắt: 
3.1. Mã số C.A.S (Chemical Abstracts Service): Mã số đăng ký hóa chất của 
Hiệp hội Hóa chất Hoa Kỳ. 
3.2. TS (test solution): Dung dịch thuốc thử. 
3.3. IU (International Units): là một đơn vị đo lường được dùng để thể hiện hoạt 
lực của vitamin A. 1 IU của Vitamin A  tương đương là 0,3 µg retinol và tương đương 
với hoạt lực các retinol ester khác như sau: 1 IU của Vitamin A  tương đương là 
0,344 µg retinol acetat; 0,550 µg retinol palmitat; 0,6 µg beta- caroten. 
 
II. YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ 
1. Yêu cầu kỹ thuật đối với chất được sử dụng để bổ sung vitamin A vào thực 
phẩm được quy định tại các phụ lục ban hành kèm theo Quy chuẩn này như sau: 
Phụ lục 1: Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử đối với Retinol 
Phụ lục 2: Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử đối với Retinyl acetat 
Phụ lục 3: Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử đối với Retinol palmitat 
Phụ lục 4: Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử đối với β-caroten 
Dự thảo ngày 
19/4/2018 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
2
2. Phương pháp thử đối với chất được sử dụng để bổ sung vitamin A vào thực 
phẩm được quy định tại Phụ lục 1, Phụ lục 2, Phụ lục 3, Phụ lục 4 của Quy chuẩn 
này hoặc có thể thử theo các phương pháp tương đương khác. 
III. YÊU CẦU QUẢN LÝ 
1. Các chất được sử dụng để bổ sung vitamin A vào thực phẩm phải đảm bảo 
các yêu cầu theo quy định tại Quy chuẩn này.  
2. Việc kiểm tra các chất được sử dụng để bổ sung vitamin A vào thực phẩm 
được thực hiện theo quy định của pháp luật hiện hành. 
IV.   TRÁCH NHIỆM CỦA TỔ CHỨC, CÁ NHÂN 
Tổ chức, cá nhân sản xuất, kinh doanh, nhập khẩu phải tự chịu trách nhiệm về 
sản phẩm và đảm bảo sản phảm phù hợp với yêu cầu theo quy định tại Quy 
chuẩn này và các quy định có liên quan. 
V.    TỔ CHỨC THỰC HIỆN 
1. Giao Cục An toàn thực phẩm chủ trì, phối hợp với các cơ quan chức năng có 
liên quan hướng dẫn triển khai và tổ chức việc thực hiện Quy chuẩn này.  
2. Căn cứ vào yêu cầu quản lý, Cục An toàn thực phẩm có trách nhiệm kiến 
nghị Bộ Y tế sửa đổi Quy chuẩn này. 
3. Trường hợp hướng dẫn của quốc tế về phương pháp thử và các quy định 
của pháp luật viện dẫn trong Quy chuẩn này được sửa đổi hoặc thay thế thì áp dụng 
theo văn bản mới. 
 
 
 
 
 
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
3
PHỤ LỤC 1 
YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI RETINOL 
 
1. 
Đ
ịnh nghĩa
 
Tên hóa học
 
(2E,4E,6E,8E)-3,7-Dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohex-1-
enyl)nona-2,4,6,8-tetraen-1-ol 
Công thức phân tử 
 
Mã số C.A.S 68-26-8 
Công thức hóa học C
20
H
30
O 
Khối lượng phân tử 286,4516 
2. C
ảm quan
 
 
Có thể ở dạng lỏng hoặc rắn; có thể chứa tá dược, chấ
t 
kháng sinh, chất khuếch tán và chất chống oxy hóa. 
3. Ch
ức năng
 
Bổ sung Vitamin A vào thực phẩm. 
4. Yêu c
ầu kỹ thuật
 
4.1. Định tính  
Độ tan Có thể hòa tan trong dầu ăn, Clorofom, Dietyl Ete. 
Phản ứng mầu với 
Antimony III Xuất hiện màu xanh không bền. 
Sắc ký lớp mỏng Vết màu xanh xuất hiện, giá trị R
f
 xấp xỉ 0,1. 
Tỉ lệ hấp thụ - Đối với quy trình 1: Tỉ lệ [A
325
] đã hiệu chỉnh/A
325
 
quan sát 
được không ít hơn 0,85. 
- Đối với quy trình 2: cực đại hấp thụ trong khoảng 325-
327nm. Tỉ lệ hấp thụ như sau:  A 
300
 / A 
326
 không nhiề
u 
hơn 0,60;  
A 
350
 / A 
326
 không nhiều hơn 0,54;  
A 
370
 / A 
326
 không nhiều hơn 0,14. 
4.2 Hàm lượng Không ít hơn  95% lượng đơn vị Vitamin hoạ
t tính ghi trên 
nhãn. 
5. Phương pháp th
ử
 
5.1. Định tính  QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
4
Độ tan Khả năng tan của một chất là chất thử hòa tan đượ
c trong 
dung môi tạo thành một dung dịch trong, đồng nhấ
t, không 
còn những phần tử của chất thử. 
Tiến hành: Cho dung môi vào chất thử ở nhiệt độ 25±2
 o
C 
trong 30 giây, cứ cách 5 phút lại lắc 30 giây. 
Độ tan được biểu thị như sau: 
Độ tan Số ml dung môi hòa 
tan 1 g chất thử 
Rất tan Dưới 1 
Dễ tan 1-10 
Tan 10-30 
Hơi tan 30-100 
Khó tan 100-1 000 
Rất khó tan 1 000-10 000 
Thực tế không tan Trên 10 000 
 
Phản ứng màu 
với Antimony III  Chuẩn bị dung dịch thử: Chứ
a 6 µg/ml Retinol trong 
Clorofom. Với 1 ml dung dịch thử, thêm vào 10 ml Antimony
 
Triclorid TT.  
Antimony triclorid TS: hòa tan 20 g A
ntimony triclorid trong 
clorofom và điền đến vạch 100 ml với clorofom. Lọc nế
u 
cần. 
Sắc ký lớp mỏng  Dung dịch chuẩn : Hòa tan chất chuẩn Retinyl Acetate 
và 
Retinyl Palmitate trong Metylen Chloride, mỗi dung dị
ch 
tương đương với 0,2 mg/ml Retinol (C
20
H
30
O). 
Dung dịch thử dạng lỏng : Hòa tan thể tích mẫu 
tương 
đương 5 mg Retinol trong Methylene 
Clorit thành 10 ml 
dung dịch. 
Dung dịch thử dạng rắn : Chuyển lượng tương đương vớ
i 5 
mg Retinol vào phễu tách, thêm 75 ml nước cất, lắc mạ
nh 
khoảng 1 phút. Chiết với 10 ml Methylene Clorid bằ
ng cách 
lắc trong 1 phút, ly tâm để làm trong dịch chiết Methylene
 
Clorid. 
Điều kiện sắc ký lớp mỏng: 
- Chất hấp phụ: lớp Silicagel sắc ký dày 0,25 mm 
- Thể tích chấm: Dung dịch chuẩn: 15µl; Dung dịch thử
: 10 
µl  
- Dung môi triển khai: Hỗn hợp của Cyclohexan và Ete (4:1)
 
- Thuốc thử phun: Axit Phosphomolybdic TT. 
Axit phosphomolypdic TT: hòa tan 20 g axit
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
5
phosphomolypdic trong Alcohol để tạo thành 100 ml. Lọ
c 
dung dịch và chỉ sử dụng dịch lọc trong.  
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Chấm mẫ
u dung 
dịch chuẩn. Sắc ký đồ phải thể hiện 2 vế
t chính xanh lá cây 
– xanh lục với các este tương ứng. Giá trị R
f 
là 0,45 ±0,1 
đối với Retinyl Acetate và 0,7±0,1 đối với Retinyl Palmitate.
 
Tiến hành : Chấm mẫu với dung dịch chuẩn và dung dị
ch 
thử. Cho phép dung môi di chuyển khoảng cách 10 cm, lấ
y 
tấm sắc ký ra, sấy khô trong không khí, phun với thuốc thử
 
phun. 
Tỉ lệ hấp thụ  Tiến hành phép thử này khi phép thử định lượng sử dụ
ng 
phương pháp hóa học. 
Mẫu: sử dụng lượng Vitamin A phù hợp. Tiế
n hành theo 
phần định lượng Vitamin A, phương pháp hóa họ
c, quy 
trình 1 hoặc quy trình 2.  
5.2. Định lượng 
I.
 
 
Phương pháp hóa h
ọ
c:
 
Quy trình 1: Xác định Vitamin A trong các thành phần bổ
 
sung và thành phần dược. Quá trình tiến hành trong điề
u 
kiện giảm tối thiểu ánh sáng, oxy, các chấ
t oxy hóa khác, 
sử dụng dụng cụ thủy tinh tối màu. 
Dung dịch thử : Cân chính xác lượng mẫ
u tương đương 
không nhỏ hơn 0,15 mg Retinol nhưng không nhiề
u hơn 1 
g chất béo. Nếu ở dạng không thể xà phòng hóa hiệu quả
, 
thêm 10ml nước cất, hồi lưu trong bể cách thủy khoả
ng 10 
phút, nghiền chất rắn còn lại bằng que thủy tinh, làm ấ
m 
thêm 5 phút. 
Chuyển mẫu vào bình thủy tinh borossilicat phù hợ
p, thêm 
30 ml Alcohol, 3 ml dung dịch KOH (9/10). Hồi 
lưu trong 
thiết bị thủy tinh borossilicat khoảng 30 phút. Làm nguộ
i 
dung dịch, thêm 30 ml nước cất, chuyển vào phễu tách. 
Thêm 4 g bột Na
2
SO
4
.10H
2
O, thêm 150 ml Ete, lắ
c trong 2 
phút (nếu tạo thành dạng nhũ tương; chiết thêm 3 lần, mỗ
i 
lần sử dụng 25 ml Ete; gộp dịch chiết lại; rửa dịch chiết vớ
i 
50 ml nước cất. Lặp lại quá trình rửa thêm 3 lần, mỗi lầ
n 
với 50 ml nước cất. Chuyển dịch chiết Ete đã rử
a vào bình 
định mức 250 ml; thêm Ete tới vạch định mức. 
Làm bay hơi 25 ml dịch chiết Ete thành 5 ml, không d
ùng QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
6
nhiệt, sử dụng thiết bị có dòng khí trơ hoặ
c máy hút chân 
không, tiếp tục làm bay hơi tới 3 ml. Hòa tan phần còn lạ
i 
với lượng Isopropyl Alcohol vừa đủ để tạo ra nồng độ
 
khoảng 3-5 µg/ml Retinol có độ hấp thụ trong dải 0,5-0,8 ở
 
325 nm.  
Điều kiện thiết bị :  máy UV, bước sóng phân tích ở 
310, 
325, 334 nm. Cuvet dày 1 cm, mẫu trắng sử dụ
ng Isopropyl 
Alcohol. 
Tiến hành : với dung dịch thử, xác định độ hấp thụ củ
a dung 
dịch thử ở 310, 325, 334 nm. Hàm lượng Vitamin A đượ
c 
tính theo Retinol (C
20
H
30
O) theo công thức: 
* Trường hợp [A
325
]/1,030≤ A
325
≤[A
325
]/0,970 :  
Kết quả (mg) =  0,549×A
325
/(L×C) 
* Trường hợp [A
325
]≤A
325
/1,030 : 
Kết quả (mg) =  0,549×[A
325
]/(L×C) 
L là chiều dày của cuvet đo; C là nồng độ mẫu thử 
trong 
dung dịch Isopropyl Alcohol (g/100ml) hoặc (UI/100 ml). 
 [A
325
] là độ hấp thụ hiệu chỉnh ở 325 nm. 
A
325
 là độ hấp thụ quan sát được. 
 [A
325
] = 6,815A
325
 – 2,555A
310
 – 4,260A
334 
1 mg Vitamin A tính theo Retinol tương đương với 3333 
IU 
Vitamin A. Độ tin cậy : ±8% ở P=0,05. 
Bao gói và b
ảo quả
n
 
Giữ ở nơi mát, trong bao bì kín, tránh ánh sáng, để 
trong 
khí trơ. 
Nhãn phải ghi dạng Vitamin A, ghi rõ sự có mặt của chấ
t 
kháng sinh, chất phân tán, chất chống oxy hóa, các chấ
t 
phụ gia. 
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
7
PHỤ LỤC 2 
YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI  
RETINYL ACETATE 
1. Định nghĩa  
Tên hóa học  (2E,4E,6E,8E)-3,7-Dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohex-1-
en-1-yl)nona-2,4,6,8-tetraen-1-yl Acetate 
Công thức cấu tạo 
 
Mã số C.A.S 127-47-9 
Công thức hóa học C
22
H
32
O
2
 
Khối lượng phân tử 328,50 
2. Cảm quan Có thể ở dạng lỏng hoặc rắn; có thể chứa tá dược, chấ
t 
kháng sinh, chất khuếch tán và chất chống oxy hóa. 
3. Chức năng Bổ sung Vitamin A vào thực phẩm. 
4. Yêu cầu kỹ thuật 
4.1. Định tính  
Độ tan
                             
Có thể hòa tan trong dầu ăn, Clorofom, Dietyl ete 
Phản ứng tạo màu  
với Antimony III Xuất hiện màu xanh không bền. 
Sắc ký lớp mỏng Vết màu xanh xuất hiện, giá trị R
f
  xấp xỉ 1. 
Tỉ lệ hấp thụ - Đối với quy trình 1: Tỉ lệ [A
325
] đã hiệu chỉnh/ A
325
 
quan 
sát được không ít hơn 0,85. 
- Đối với quy trình 2: Cực đại hấp thụ trong khoảng 325-
327. Các tỷ lệ hấp thụ: 
A
300
/ A
326
 không nhiều hơn 0,6.  
A
350
/ A
326
 không nhiều hơn 0,54. 
A
370
/ A
326
 không nhiều hơn 0,14 
4.2 Hàm lượng Không ít hơn 95% lượng đơn vị Vitamin hoạ
t tính ghi trên 
nhãn. 
5. Phương pháp thử  
5.1 Định tính  
 Độ tan  Khả năng tan của một chất là chất thử hòa tan đượ
c trong 
dung môi tạo thành một dung dịch trong, đồng nhấ
t, không 
còn những phần tử của chất thử. 
Tiến hành: Cho dung môi vào chất thử ở nhiệt độ 25±2
 o
C 
trong 30 giây, cứ cách 5 phút lại lắc 30 giây. 
Độ tan được biểu thị như sau: QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
8
Độ tan Số ml dung môi hòa 
tan 1 g chất thử 
Rất tan Dưới 1 
Dễ tan 1-10 
 Tan 10-30 
Hơi tan 30-100 
Khó tan 100-1 000 
Rất khó tan 1 000-10 000 
Thực tế không tan Trên 10 000 
 
Phản ứng màu 
với Antimony III  Chuẩn bị dung dịch thử: Chứ
a 6 µg/ml Retinol trong 
Clorofom. Thêm vào 1 ml dung dịch thử vào 
10 ml 
Antimony1 triclorite TT.  
Thuốc thử Antimony triclorid TT: hòa tan 20 g A
ntimony 
triclorid trong clorofom và điền đến vạch 100 ml vớ
i 
clorofom. Lọc nếu cần. 
Sắc ký lớp mỏng  Dung dịch chuẩn : Hòa tan chất chuẩn Retinyl acetate 
và 
Retinyl palmitate trong Methylen chloride, mỗi dung dị
ch 
tương đương với 0,2 mg/ml Retinol (C
20
H
30
O). 
Dung dịch thử dạng lỏng : Hòa tan thể tích tương đư
ơng 5 
mg Retinol trong Methylene clorid thành 10 ml dung dịch. 
Dung dịch thử dạng rắn : Chuyển lượng tương đương vớ
i 5 
mg Retinol vào bình tách, thêm 75 ml nước cất, lắc mạ
nh 
khoảng 1 phút, lắc với 10 ml Methylene cloride 
trong 1 
phút, ly tâm để làm trong dịch chiết Methylene Cloride. 
Hệ thống sắc ký : Sắc ký lớp mỏng;  
- Chất hấp phụ: Silicagel sắc ký dày 0,25 mm;  
- Thể tích chấm: dung dịch chuẩn 15µl; Dung dịch thử 
10 
µl;  
- Dung môi triển khai: Hỗn hợp củ
a Cyclohexan và Ete 
(4:1);  
- Thuốc thử phun: Axit Phosphomolybdic TT. 
Axit phosphomolypdic TT: hòa tan 20 g axit
 
phosphomolypdic trong Alcohol để tạo thành 100 ml. Lọ
c 
dung dịch và chỉ sử dụng dịch lọc trong.  
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Chấm mẫ
u dung 
dịch chuẩn. Sắc ký đồ phải thể hiện 2 vế
t chính xanh lá 
cây – xanh lục với các este tương ứng. Giá trị R
f 
là 0,45 
±0,1 đối với Retinyl Acetate và 0,7±0,1 đối với 
Retinyl QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
9
Palmitate. 
Tiến hành : Chấm mẫu với dung dịch chuẩn và dung dị
ch 
thử. Cho phép dung môi di chuyển khoảng cách 10 cm, lấ
y 
tấm sắc ký ra, sấy khô trong không khí, phun với thuốc thử
 
phun. 
Tỉ lệ hấp thụ  Tiến hành phép thử này khi phép thử định lượng sử dụ
ng 
phương pháp hóa học. 
Mẫu: Sử dụng lượng Vitamin A phù hợp. Tiế
n hành theo 
phần định lượng Vitamin A, phương pháp hóa họ
c, quy 
trình 1 và quy trình 2.  
5.2 Định lượng 
I.
 
 
Phương pháp hóa h
ọ
c:
 
Quy trình 1:  Xác định Vitamin A trong các thành phần bổ
 
sung và thành phần dược. Quá trình tiến hành trong điề
u 
kiện giảm tối thiểu ánh sáng, oxy, các chấ
t oxy hóa khác, 
sử dụng dụng cụ thủy tinh tối màu. 
Dung dịch thử : Cân chính xác lượng mẫ
u tương đương 
không nhỏ hơn 0,15 mg Retinol nhưng không nhiề
u hơn 1 
g chất béo. Nếu ở dạng không thể xà phòng hóa hiệu quả
, 
thêm 10ml nước cất, hồi lưu trong bể cách thủy khoả
ng 10 
phút, nghiền chất rắn còn lại bằng que thủy tinh, làm ấ
m 
thêm trong 5 phút. 
Chuyển mẫu vào bình thủy tinh borossilicat phù hợ
p, thêm 
30 ml Alcohol, 3 ml dung dịch KOH (9/10). Hồ
i lưu trong 
thiết bị thủy tinh borossilicat khoảng 30 phút. Làm nguộ
i 
dung dịch, thêm 30 ml nước cất, chuyển vào phễu tách. 
Thêm 4 g bột Na
2
SO
4
.10H
2
O, 150 ml Ete, lắ
c trong 2 phút 
(nếu tạo thành dạng nhũ tương; chiết thêm 3 lần, mỗi lầ
n 
sử dụng 25 ml Ete; gộp dịch chiết lại; rửa dịch vớ
i 50 ml 
nước cất. Lặp lại quá trình rửa thêm 3 lần, mỗi lần vớ
i 50 
ml nước cất. Chuyển dịch chiết Ete đã rửa vào bình đị
nh 
mức 250 ml; thêm Ete tới vạch định mức. 
Làm bay hơi 25 ml dịch chiế
t Ete thành 5 ml, không dùng 
nhiệt, sử dụng thiết bị có dòng khí trơ hoặ
c máy hút chân 
không, tiếp tục làm bay hơi tới 3 ml. Hòa tan phần còn lạ
i 
với lượng Isopropyl Alcohol vừa đủ để tạo ra nồng độ
 
khoảng 3-5 µg/ml Retinol có độ hấp thụ trong dải 0,5-0,8 ở
 
325 nm.  
Điều kiện thiết bị :  máy UV, bước sóng phân tích ở 
310, QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
10
325, 334 nm. Cuvet dày 1 cm, mẫu trắng sử dụ
ng 
Isopropyl Alcohol. 
Tiến hành : với dung dịch thử, xác định độ hấp thụ củ
a 
dung dịch thử ở 310, 325, 334 nm. Hàm lượ
ng Vitamin A 
được tính theo Retinol (C
20
H
30
O) theo công thức: 
* Trường hợp [A
325
]/1,030≤ A
325
≤[A
325
]/0,970 :  
Kết quả (mg) =  0,549A
325
/LC 
* Trường hợp [A
325
]≤A
325
/1,030 : 
Kết quả (mg) =  0,549[A
325
]/LC 
L là chiều dày của cuvet hấp thụ; C là nồng độ mẫu thử
 
trong dung dịch Isopropyl Alcohol (g/100ml) hoặ
c (UI/100 
ml). 
 [A
325
] là độ hấp thụ hiệu chỉnh ở 325 nm. 
A
325
 là độ hấp thụ quan sát được. 
 [A
325
] = 6,815A
325
 – 2,555A
310
 – 4,260A
334 
1 mg Vitamin A tính theo Retinol tương đương với 3333 
IU 
Vitamin A. Độ tin cậy : ±8% ở P=0,05 
Quy trình 2:  Sử dụng để xác định Vitamin A là thành phầ
n 
bổ sung và các thành phần dược ở dạng R
etinyl ester tinh 
khiết hoặc điều chế từ Retinyl ester tinh khiết cùng vớ
i tá 
dược. 
Dung dịch thử : Hòa tan chính xác 25-100 mg mẫu 
trong 5 
ml Pentan, pha loãng với Isopropyl Alcohol để tạ
o ra dung 
dịch có nồng độ tương đương 3-4,5 µg/ml Retinol. 
Điều kiện thiết bị:  Máy UV, bước sóng phân tích ở 
326 nm, 
Cuvet dày 1 cm, sử dụng mẫu trắng là Isopropyl Alcohol. 
Tiến hành : đo độ hấp thụ của dung dịch thử.  
Tính toán hàm lượng Vitamin A (mg) tính 
theo Retinol  
theo công thức: 
Kết quả (mg) =  (0,570 x A
326
)/(L x C) 
A
326 
là
 
độ hấp thụ ở 326 nm 
L là chiều dày cuvet đo (cm) 
C là nồng độ của dung dịch thử (g/100 ml) QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
11
1 mg Vitamin A tính theo Retinol (C
20
H
30
O) = 3333 UI 
Vitamin A. 
II. Phương pháp sắc ký: 
Phương pháp này xác định Vitamin A ở dạng thành phầ
n 
dược, thành phần bổ sung, hoặc là một thành phầ
n trong 
thực phẩm bổ sung hoặc dược phẩm. 
Trong suốt quy trình này, dung dịch thử và dung dị
ch 
chuẩn nên để trong môi trường khí trơ và sử dụng dụng cụ
 
thủy tinh tối màu. 
Quy trình 1: Quy trình này dùng để xác đị
nh Vitamin A 
trong nguyên liệu thô. 
Pha động : n-Hexan 
Dung dịch chuẩn 1 : Dung dich chuẩn Retinyl Acetate 
trong 
n-Hexan có hàm lượng 15 µg/ml Retinol. 
Dung dịch chuẩn 2 : Dung dich chuẩn Retinyl Palmitate
 
trong n-Hexan có hàm lượng 15 µg/ml Retinol. 
Dung dịch phù hợp hệ thống : Trộn thể 
tích tương đương 
dung dịch chuẩn 1 và dung dịch chuẩn 2 
Dung dịch thử : Cân chính xác lượng Retinyl acetate 
tương 
đương với 15 mg Retinol vào bình định mứ
c 100 ml, hòa 
tan và pha loãng bằng n-Hexan tới vạch định mức, trộ
n 
đều. Hút 5 ml dung dịch này vào bình định mứ
c 50 ml, pha 
loãng với n-Hexan tới vạch định mức, trộn đều. 
Điều kiện sắc ký : HPLC; Detector: UV 325 nm; Cộ
t: 4,6 
mm x 15 cm, 3µm, C18; Tốc độ dòng: 1ml/phút; Thể 
tích 
tiêm: 40 µl 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : sử dụng dung dị
ch 
phù hợp hệ thống, dung dịch chuẩn. 
Yêu cầu: Độ phân giải không ít hơn 10 đối với All-trans-
retinyl acetate và All-trans-retinyl palmitate, của dung dị
ch 
đánh giá phù hợp hệ thống; Độ lệch chuẩn tương đố
i 
không lớn hơn 3,0% đối với dung dịch chuẩn 1. 
Tiến hành : Tiêm mẫu dung dịch chuẩn 1, dung dịch thử.  
Tính % Vitamin A so với lượng ghi trên nhãn tính 
theo 
Retinol C
20
H
30
O theo công thức: 
 Hàm lượng (mg) = (r
u
/r
s
) x C
s
/C
u 
x 100 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
12
Trong đó: 
r
u
 là đáp ứng pic của Retinyl acetate từ dung dịch thử
 
tương ứng.  
r
s
 là đáp ứng pic của Retinyl acetate  từ dung dịch chuẩn 1.
 
C
s
 (µg/ml)  là nồng độ Vitamin A tính theo Retinol từ 
dung 
dịch chuẩn 1. 
C
u
 (µg/ml) là nồng độ Vitamin A, tính 
theo Retinol trong 
dung dịch thử. 
Quy trình 2: Quy trình này sử dụng xác định mẫu có chứ
a 
lẫn Vitamin A, D, E;  
Pha động:  n-Hexan và Etyl acetate (tỷ lệ 99,7:0,3) 
Dung dịch Axit Sulfuric - Methanolic 3N
: Thêm 9 ml axit 
Sulfuric vào 80 ml Methanol trong bình định mứ
c 100 ml. 
Làm nguội, pha loãng với Methanol tới vạch định mức. 
Dung dịch Natri Ascorbate-Pyrogallol : Chuyể
n 10 g Natri 
Ascorbate và 5 g Pyrogallol vào bình định mứ
c 100 ml, 
thêm đủ nước cất để hòa tan. Thêm 1,
7 ml axit Sulfuric, 
pha loãng bằng nước cất tới vạch định mức. 
Dung dịch Lecitin:  5 mg/ml Lecitin trong 2,2,4 –
Trimetylpentan. 
Dung dịch chuẩn 1 : Dung dịch chuẩn Retinyl acetate 
có 
hàm lượng tương đương Retinol 15 µg/ml trong  2,2,4–
trimetylpentan. 
Dung dịch chuẩn 2 : Dung dịch chuẩn Retinyl palmitate 
có 
hàm lượng tương đương Retinol 15 µg/ml trong 2,2,4–
trimetylpentan. 
Dung dịch phù hợp hệ thống : Trộn thể tích bằ
ng nhau 
dung dịch chuẩn 1 và dung dịch chuẩn 2. 
Dung dịch thử:  Sử dụng lượng mẫu tương ứng từ 0,4 -
2,5 
mg Retinol. Thêm 0,5 g Natribicacbonat; 1,5 ml dung dị
ch 
Lecithin, và 12,5 ml 2,2,4-trimethylpentane, và trộn bằ
ng 
máy voltex. Thêm 6 ml dung dịch Ascorbat-pyrogalol n
atri, 
lắc chậm để giải phóng khí. Tiếp tục lắc cho đến khi hế
t 
khí, và sau đó lắc th
êm 12 phút. Thêm 6 ml Dimethyl 
sulfoxid, trộn bằng máy voltex để tạo thành dạng huyề
n 
phù, và lắc trong 12 phút. Thêm 6 ml dung dị
ch Methanolic 
- Axit Sunfuric 3 N, voltex để tạo thành một huyề
n phù, và QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
13
lắc trong 12 phút. Thêm 12,5 ml 2,2,4-t
rimethylpentane, 
trộn trên máy voltex để tạo thành dạng huyền phù, và lắ
c 
trong 10 phút. Ly tâm trong 10 phút để phá vỡ nhũ t
ương 
và tách dịch trong phía trên. Nếu cần thiết, pha loãng dị
ch 
trong trên với 2,2,4-trimethylpentane để đạt được nồng độ
 
gần với nồng độ dung dịch chuẩn. 
Điều kiện sắc ký : HPLC, Detector UV 325 nm, Cột: 4,6 mm
 
x 25 cm, 5µm chứa L24; Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút; Thể
 
tích tiêm: 40 µl. 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : sử dụng dung dị
ch 
phù hợp hệ thống. 
Yêu cầu: Độ phân giải không ít hơn 8 đối với All-trans-
retinyl acetate và All-trans-retinyl palmitate; Độ lệch chuẩ
n 
tương đối không lớn hơn 3,0%. 
Tiến hành : Tiêm mẫu dung dịch chuẩn 1 và dung dị
ch 
chuẩn 2, dung dịch thử. 
Tính hàm lượng (mg) Vitamin A tính theo Retinol C
20
H
30
O
 
theo công thức: 
 Hàm lượng (mg) = (r
u
/r
s
) x C
s
/C
u 
x 100 
Trong đó:
 
r
u
 là đáp ứng pic của All-trans-retinyl acetate từ dung dị
ch 
thử.  
r
s
 là đáp ứng pic của Retinyl acetate  từ dung dịch chuẩn 1.
 
C
s
 (µg/ml)  là nồng độ tính theo Retinol của chất chuẩn 1. 
C
u
 (µg/ml) là nồng độ danh nghĩa  củ
a Vitamin A, tính theo 
Retinol trong dung dịch thử. 
Sử dụng 26,5 ml là thể tích cuối của dung dịch thử để 
tính 
nồng độ danh nghĩa. 
Quy trình 3: Quy trình này dùng xác đị
nh Vitamin A trong 
các dạng rắn, lỏng hòa tan trong dầu, nướ
c, hòa tan trong 
dầu-nước. 
Pha động : n-Hexane và Isopropyl alcohol (tỷ lệ 92:8) 
Dung môi ly trích : n-Hexane và Methylene chloride (3:1). 
Dung dịch KOH : 800 mg/ml KOH trong nước cất. 
Dung môi pha loãng:  10 mg/ml Pyrogallol trong cồn. 
Dung dịch chuẩn : Pha loãng chất chuẩn Retinyl acetate
 
với dung môi pha loãng để đạt được nồng độ  
tương QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
14
đương 8,5 μg/ml Retinol (C
20
H
30
O). Chuyể
n 10,0 ml dung 
dịch này vào bình tam giác 125 ml có nút đậy 
và thêm 5 ml 
nước cất, 5 ml dung môi pha loãng và 3 ml dung dị
ch 
KOH. Lắp chặt nắp, lắc trong 15 phút trong bể cách thủy ở
 
60
o
 ± 5, và làm nguội đến nhiệt độ phòng. Thêm 7 ml nướ
c 
cất và 25,0 ml dung môi ly trích. Lắp chặt nắp, và lắc mạ
nh 
trong 60 giây. Rửa thành bình tam giác bằng 60 ml nướ
c 
cất, và để yên trong 10 phút cho đến khi tách lớp. Thu hồ
i 
lớp hữu cơ để tiêm mẫu vào sắc ký. Dung dịch chuẩ
n này 
chứa 3,4 μg/ml Retinol. 
Dung dịch thử : Cho lượng mẫu tương đương với 1,3 mg
 
Retinol, vào bình tam giác 125 ml có nút đậy
. Thêm 5 ml 
nước cất, 15 ml dung môi pha loãng, và 3 ml dung dị
ch 
KOH. Lắp chặt nắp, lắc trong 15 phút trong bể cách thủ
y 
duy trì ở 60
o
 ± 5, và để nguội ở nhiệt độ 
phòng. Thêm 7 ml 
nước cất và 25,0 ml dung môi ly trích. Đậy chặt nắp, và lắ
c 
mạnh trong 60 giây hoặc lâu hơn, nếu cần, để 
ly trích hoàn 
toàn. Rửa thành bình tam giác bằng 60 ml nước cất, và để
 
yên trong 10 phút cho đến khi tách lớp. (Không lắc, bở
i vì 
có thể hình hình thành nhũ tương). Thu hồi lớp hữ
u cơ, và 
pha loãng nếu cần với dung môi ly trích, để có nồng độ 
3,4 
μg/ml Retinol. 
Hệ thống sắc ký : LC; Detector UV 335 nm; Cột: 6,2-
mm x 
8 cm, L3; Nhiệt độ cột: 40
o
; Tốc độ dòng: 4 ml/phút; Thể
 
tích tiêm: 50 μL 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Tiến hành sắ
c ký 
với dung dịch chuẩn. Độ lệch chuẩn tương đố
i không quá 
3,0%. 
Tiến hành :  Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩ
n và dung 
dịch thử.  
Tính tỷ lệ phần trăm Vitamin A so với lượng vitamin A g
hi 
trên nhãn tính theo retinol (C
20
H
30
O): 
 Kết quả = (r
T1
 / r
T2
) × (C
S 
/ C
U
) × 100 
Trong đó: 
r
T1
 = Tổng các đáp ứng pic của Este All-trans-retinyl
 
Acetate và este 13-cis-retinyl acetate từ dung dịch thử. 
r
T2
 = Tổng các đáp ứng pic của Este All-trans-retinyl
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
15
acetate và este 13-cis-retinyl acetate từ dung dịch chuẩn. 
C
S
 = nồng độ Retinol (C
20
H
30
O) trong dung dịch chuẩ
n 
(μg/ml) 
C
U
 = nồng độ danh nghĩa của vitamin A, tính 
theo Retinol 
(C
20
H
30
O), trong dung dịch thử (μg/ml) 
Quy trình 4: Quy trình này có thể được sử dụng để 
xác 
định vitamin A trong dịch Vitamin hòa tan trong dầu-nước. 
Pha động:  Methanol, Acetonitrile, và n-H
exane (46,5: 46,5: 
7,0) 
Dung môi pha loãng : Tetrahydrofuran và Acetonitrile (1:1) 
Dung dịch chuẩn : Dung dịch chuẩn Retinyl acetate 
pha 
trong dung môi pha loãng có hàm lượ
ng 0,33 mg/ml 
Retinol (C
20
H
30
O) 
Dung dịch thử dạng lỏng : Cân chính xác và chuyển lượ
ng 
mẫu tương đương 3,3 mg Retinol vào phễ
u tách 500 ml 
chứa 10 ml nước cất  và 20 ml Alcohol dehy
drate. Thêm 
150 ml dung môi hexane, đậy nắp, và lắ
c trong 1 phút. 
Thêm tiếp 150 ml dung môi hexane, đậy nắp, lắc, và để
 
tách lớp. Bỏ lớp nước và lọc dịch chiết hexan qua Na
2
SO
4 
khan vào bình đáy tròn 500 ml. Làm bay hơi dung dịch tớ
i 
khô bằng thiết bị bay hơi cô quay trên bể cách thủ
y duy trì 
ở 65
o
. Ngay lập tức bổ sung 10,0 ml dung môi pha loãng
, 
lắc để hòa tan cặn và lọc. 
Hệ thống sắc ký : LC; Detector UV 265 nm; Cộ
t 4,6 mm x 
50 cm L1 (lắp từ hai cột 4,6 mm x 25 cm); Nhiệt độ cộ
t: 
40
o
; 
Tốc độ dòng chảy: 1,5 ml/phút; Thể tích tiêm: 20 μL 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống: Tiêm dung dị
ch 
chuẩn vào máy sắc khí. Yêu cầu độ lệch chuẩn tương đố
i 
không lớn hơn 5,0%. 
Tiến hành : Tiến hành chạy sắc ký với dung dịch chuẩ
n và 
dung dịch thử.  
Tính tỷ lệ phần trăm vitamin A so với lượng ghi trên nhãn,
 
tính theo Retinol (C
20
H
30
O), theo công thức: 
Kết quả = (r
U 
/ r
S
) × (C
S
 / C
U
) × 100 
r
U
 là đáp ứng pic của Ester All-tran-Retinyl acetate từ 
dung QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
16
dịch thử. 
r
S
 là đáp ứng pic của Este All-tran-retinyl acetate từ 
dung 
dịch chuẩn. 
C
S
 = nồng độ Retinol (C
20
H
30
O) trong dung dịch chuẩ
n 
(μg/ml) 
C
U
 = nồng độ danh nghĩa của vitamin A, tính 
theo Retinol 
(C
20
H
30
O), trong dung dịch thử (μg/ml) 
Sử dụng giá trị 0,872 để chuyển đổi Retinyl acetate 
thành 
tương đương Retinol. 
Sử dụng giá trị 0,546 để chuyển đổi Retinyl palmitate
 
thành tương đương Retinol. 
6. Bao gói  
và bảo quản Giữ ở nơi mát, trong bao b
ì kín, tránh ánh sáng trong khí 
trơ.  
Nhãn phải ghi dạng Vitamin A, ghi rõ sự có mặt của chấ
t 
kháng sinh, chất phân tán, chất chống oxy hóa, các chấ
t 
phụ gia. 
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
17
PHỤ LỤC 3 
YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI RETINYL PALMITATE 
1. Định nghĩa  
Tên hóa học  (2E, 4E, 6E, 8E)-3,7-Dimethyl-9-(2,6,6- trimethyl-1-
cyclohexenyl)nona-2,4,6,8- tetraenyl] hexadecanoate 
Công thức cấu tạo 
 
Mã số C.A.S 79-81-2 
Công thức hóa học C
36
H
60
O
2
 
Khối lượng phân tử 524,86 
2. Cảm quan Có thể ở dạng lỏng hoặc rắn; có thể chứa tá dược, chấ
t 
kháng sinh, chất khuếch tán và chất chống oxy hóa. 
3. Chức năng Bổ sung Vitamin A vào thực phẩm. 
4. Yêu cầu kỹ thuật 
4.1. Định tính  
Độ tan
                             
Có thể hòa tan trong dầu ăn, Clorofom, Dietyl ete 
Phản ứng tạo màu  
với Antimony III Xuất hiện màu xanh không bền. 
Sắc ký lớp mỏng Vết màu xanh xuất hiện, giá trị R
f
  xấp xỉ 1. 
Tỉ lệ hấp thụ Qui trình 1: Tỉ lệ [A
325
] đã hiệu chỉnh/ A
325
 quan sát đượ
c 
không ít hơn 0,85. 
Qui trình 2: Cực đại hấp thụ trong khoảng 325-327 nm
. 
Các tỷ lệ hấp thụ: 
A
300
/ A
326
 không nhiều hơn 0,6.  
A
350
/ A
326
 không nhiều hơn 0,54. 
A
370
/ A
326
 không nhiều hơn 0,14 
4.2 Hàm lượng Lớn hơn 95% hoạt tính so với lượng ghi trên nhãn. 
5. Phương pháp thử  
5.1 Định tính  
Độ tan Khả năng tan của một chất là chất thử hòa tan đượ
c trong 
dung môi tạo thành một dung dịch trong, đồng nhấ
t, không 
còn những phần tử của chất thử. 
Tiến hành: Cho dung môi vào chất thử ở nhiệt độ 25±2
 o
C 
trong 30 giây, cứ cách 5 phút lại lắc 30 giây. 
Độ tan được biểu thị như sau: 
Độ tan Số ml dung môi hòa tan 1 g chất 
thử 
Rất tan Dưới 1 
Dễ tan 1-10 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
18
 Tan 10-30 
Hơi tan 30-100 
Khó tan 100-1 000 
Rất khó tan 1 000-10 000 
Thực tế không tan Trên 10 000 
 
Phản ứng màu 
với Antimony III  Chuẩn bị dung dịch thử : Chứ
a 6 µg/ml Retinol trong 
Clorofom. Thêm vào 1 ml dung dịch thử vào 
10 ml 
Antimony1 TriClorite TT. Thuốc thử được pha theo hướ
ng 
dẫn của nhà sản xuất. 
Antimony triclorid TS: hòa tan 20 g A
ntimony triclorid trong 
clorofom và điền đến vạch 100 ml với clorofom. Lọc nế
u 
cần. 
Sắc ký lớp mỏng  Dung dịch chuẩn : Hòa tan chất chuẩn Retinyl acetate 
và 
Retinyl palmitate trong Methylen Chloride, mỗi dung dị
ch 
tương đương với 0,2 mg/ml Retinol (C
20
H
30
O). 
Dung dịch thử dạng lỏng : Hòa tan thể 
tích tương đương 5 
mg Retinol trong Methylene Clorit thành 10 ml dung dịch. 
Dung dịch thử dạng rắn : Chuyển lượng tương đương vớ
i 5 
mg Retinol vào bình tách, thêm 75 ml nước cất, lắc mạ
nh 
khoảng 1 phút, lắc với 10 ml Methylene Cloride 
trong 1 
phút, ly tâm để tách dịch chiết Methylene Cloride. 
Hệ thống sắc ký : Sắc ký lớp mỏng;  
- Chất hấp phụ lớp Silicagel dày 0,25 mm;  
- Thể tích tiêm dung dịch chuẩn: 15µl; Dung dịch thử
: 10 
µl;  
- Dung môi triển khai: Hỗn hợp củ
a Cyclohexan và Ete 
(4:1);  
- Thuốc thử phun: Axit Phosphomolybdic TT. 
Axit phosphomolypdic TT: hòa tan 20 g axit
 
phosphomolypdic trong Alcohol để tạo thành 100 ml. Lọ
c 
dung dịch và chỉ sử dụng dịch lọc trong.  
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Chấm mẫ
u dung 
dịch chuẩn. Yêu cầu là sắc ký thể hiện 2 vế
t chính xanh lá 
cây – xanh lục với các este tương ứng. Giá trị R
f 
là 0,45 
±0,1 đối với Retinyl acetate và 0,7 ±0,1 đối với 
Retinyl 
palmitate. 
Tiến hành : Chấm mẫu với dung dịch chuẩn và dung dị
ch QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
19
thử. Cho phép dung môi di chuyển khoảng cách 10 cm, lấ
y 
tấm sắc ký ra, sấy khô trong không khí, phun với thuốc thử
 
phun. 
Tỉ lệ hấp thụ  Tiến hành phép thử này khi phép thử định lượng sử dụ
ng 
phương pháp hóa học. 
Mẫu: sử dụng lượng Vitamin A phù hợp. Tiế
n hành theo 
phần định lượng Vitamin A, phương pháp hóa họ
c, quy 
trình 1 và quy trình 2.  
5.2 Định lượng 
I. Phương pháp hóa h
ọ
c:
 
Quy trình 1:  Xác định Vitamin A trong các thành phần bổ
 
sung và thành phần dược. Quá trình tiến hành trong điề
u 
kiện giảm tối thiểu ánh sáng, oxy, các chất oxy hóa khác,
 
sử dụng dụng cụ thủy tinh tối màu. 
Dung dịch thử : Cân chính xác lượng mẫ
u tương đương 
không nhỏ hơn 0,15 mg Retinol nhưng không nhiề
u hơn 1 
g chất béo. Nếu ở dạng không thể xà phòng hóa hiệu quả
, 
thêm 10ml nước cất, hồi lưu trong bể cách thủy khoả
ng 10 
phút, nghiền chất rắn còn lại bằng que thủy tinh, làm ấ
m 
thêm trong 5 phút. 
Chuyển mẫu vào bình thủy tinh borossilicat phù hợ
p, thêm 
30 ml Alcohol, 3 ml dung dịch KOH (9/10). Hồ
i lưu trong 
thiết bị thủy tinh borossilicat khoảng 30 phút. Làm nguộ
i 
dung dịch, thêm 30 ml nước cất, chuyển vào phễu tách. 
Thêm 4 g bột Na
2
SO
4
.10H
2
O, thêm 150 ml Ete, lắ
c trong 2 
phút (nếu tạo thành dạng nhũ tương; chiết thêm 3 lần, mỗ
i 
lần sử dụng 25 ml Ete; gộp dịch chiết lại; rửa dịch vớ
i 50 
ml nước cất. Lặp lại quá trình rửa thêm 3 lần, mỗi lần vớ
i 
50 ml nước cất. Chuyển dịch chiết Ete đã rử
a vào bình 
định mức 250 ml; thêm Ete tới vạch định mức. 
Làm bay hơi 25 ml dịch chiế
t Ete thành 5 ml, không dùng 
nhiệt, sử dụng thiết bị có dòng khí trơ hoặ
c máy hút chân 
không, tiếp tục làm bay hơi tới 3 ml. Hòa tan phần còn lạ
i 
với lượng Isopropyl alcohol vừa đủ để tạo ra nồng độ
 
khoảng 3-5 µg/ml Retinol có độ hấp thụ trong dải 0,5-0,8 ở
 
325 nm.  
Điều kiện thiết bị :  máy UV, bước sóng phân tích ở 
310, 
325, 334 nm. Cuvet dày 1 cm, mẫu trắng sử dụ
ng 
Isopropyl Alcohol. QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
20
Tiến hành : Tiến hành với dung dịch thử, xác định độ hấ
p 
thụ của dung dịch thử ở 310, 325, 334 nm. Hàm lượ
ng 
Vitamin A được tính theo Retinol (C
20
H
30
O) theo công 
thức: 
* Trường hợp [A
325
]/1,030≤ A
325
≤[A
325
]/0,970 :  
Kết quả (mg) =  0,549A
325
/LC 
* Trường hợp [A
325
]≤A
325
/1,030 : 
Kết quả (mg) =  0,549[A
325
]/LC 
L là chiều dày của cuvet hấp thụ 
C là nồng độ mẫu thử trong dung dị
ch Isopropyl Alcohol 
(g/100ml) hoặc (UI/100 ml). 
 [A
325
] là độ hấp thụ hiệu chỉnh ở 325 nm. 
A
325
 là độ hấp thụ quan sát được. 
 [A
325
] = 6,815A
325
 – 2,555A
310
 – 4,260A
334 
1 mg Retinol tương đương với 3333 IU Vitamin A. 
Độ tin cậy : ±8% ở P=0,05 
Quy trình 2:  Sử dụng để xác định Vitamin A là thành phầ
n 
bổ sung và các thành phần dược ở dạng este tinh khiế
t 
hoặc được pha chế từ ester retinyl tinh khiế
t trong tá 
dược. 
Dung dịch thử : Hòa tan chính xác 25-100 mg mẫu 
trong 5 
ml Pentan, pha loãng với Isopropyl alcohol để tạ
o ra dung 
dịch có nồng độ tương đương 3-4,5 µg/ml Retinol. 
Điều kiện thiết bị : Máy UV, bước sóng phân tích ở 
326 nm, 
Cuvet dày 1 cm, sử dụng mẫu trắng là Isopropyl Alcohol. 
Tiến hành : Tiến hành với dung dịch thử
. Tính toán hàm 
lượng Vitamin A (mg) tính theo Retinol  theo công thức: 
Kết quả (mg) =  0,57A
326
/LC 
Trong đó : 
A
326 
là
 
độ hấp thụ ở 326 nm 
L là chiều dày cuvet đo (cm) 
C là nồng độ của dung dịch thử (g/100 ml) 
1 mg Vitamin A tính theo Retinol (C
20
H
30
O) tương đương
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
21
3333 UI Vitamin A. 
II. Phương pháp sắc ký: 
Phương pháp này xác định Vitamin A ở dạng thành phầ
n 
dược, thành phần bổ sung, hoặc là một thành phầ
n trong 
thực phẩm bổ sung hoặc dạng dược. Trong suố
t quy trình 
này, dung dịch thử và dung dịch chuẩn nên để 
trong môi 
trường khí trơ và sử dụng dụng cụ thủy tinh tối màu. 
Quy trình 1: Quy trình này dùng để xác đị
nh Vitamin A 
trong nguyên liệu thô. 
Pha động : n-Hexan 
Dung dịch chuẩn 1 : Dung dich chuẩn Retinyl acetate 
trong 
n-Hexan có hàm lượng 15 µg/ml Retinol. 
Dung dịch chuẩn 2 : Dung dich chuẩn Retinyl palmitate
 
trong n-Hexan có hàm lượng 15 µg/ml Retinol. 
Dung dịch phù hợp hệ thống : Trộn thể 
tích tương đương 
dung dịch chuẩn 1 và dung dịch chuẩn 2 
Dung dịch thử : Cân chính xác lượng Retinyl palmitate
 
tương đương với 15 mg Retinol vào bình định mứ
c 100 
ml, hòa tan và pha loãng bằng n-Hexan tới vạch định mứ
c, 
trộn đều. Hút 5 ml dung dịch này vào bình định mứ
c 50 ml, 
pha loãng với n-Hexan tới vạch định mức, trộn đều. 
Điều kiện sắc ký:  HPLC; Detector: UV 325 nm; Cộ
t: 4,6 
mm x 15 cm, 3µ chứa L8; Tốc độ dòng: 1ml/phút; Thể 
tích 
tiêm: 40 µl 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : sử dụng dung dị
ch 
phù hợp hệ thống, dung dịch chuẩn 2. Độ phân giả
i không 
ít hơn 10 đối với All-trans-retinyl acetate và All-trans-
retinyl 
palmitate, của dung dịch phù hợp hệ thống. Độ lệch chuẩ
n 
tương đối không lớn hơn 3,0% đối với dung dịch chuẩn 2. 
Tiến hành : Tiêm mẫu dung dịch chuẩn 2, dung dịch thử
 
tương ứng.  
Tính % Vitamin A so với lượng ghi trên nhãn tính 
theo 
Retinol C
20
H
30
O theo công thức: 
 Hàm lượng (mg) = (r
u
/r
s
) x C
s
/C
u 
x 100 
Trong đó: 
r
u
 là đáp ứng pic của Retinyl palmitate từ dung dịch thử.  QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
22
 r
s
 là đáp ứng pic của Retinyl palmitate  từ dung dịch chuẩ
n 
2. 
C
s
 (µg/ml)  là nồng độ tính theo Retinol  của dung dị
ch 
chuẩn 2. 
C
u
 (µg/ml) là nồng độ Vitamin A, tính theo Ret
inol trong 
dung dịch thử. 
Quy trình 2: Quy trình này sử dụng để xác định mẫ
u có 
chứa lẫn Vitamin A, D, E; 
Pha động : n-Hexan và Etyl acetate (99,7:0,3) 
Dung dịch Methanolic – Axit Sulfuric 3N
: Thêm 9 ml axit 
Sulfuric vào 80 ml Methanol trong bình định mứ
c 100 ml. 
Làm nguội, pha loãng với Methanol tới vạch định mức. 
Dung dịch Natri Ascorbat-Pyrogallol : Chuyể
n 10 g Natri 
Ascorbat và 5 g Pyrogallol vào bình định mứ
c 100 ml, 
thêm đủ nước cất để hòa tan. Thêm 1,
7 ml axit Sulfuric, 
pha loãng bằng nước cất tới vạch định mức. 
Dung dịch Lecitin:  5 mg/ml Lecitin trong 2,2,4 –
Trimetylpentan 
Dung dịch chuẩn 1 : Dung dịch chuẩn Retinyl acetate 
có 
hàm lượng tương đương Retinol 15 µg/ml trong  2,2,4 –
Trimetylpentan. 
Dung dịch chuẩn 2 : Dung dịch chuẩn Retinyl palmitate 
có 
hàm lượng tương đương Retinol 15 µg/ml trong 2,2,4 –
Trimetylpentan. 
Dung dịch phù hợp hệ thống:  Trộn thể tích bằ
ng nhau 
dung dịch chuẩn 1 và dung dịch chuẩn 2, 
Dung dịch thử : Sử dụng lượng mẫu tương ứng từ 0,4 mg-
2,5 mg Retinol. Thêm 0,5 g Natribicacbonat; 1,5 ml dung 
dịch Lecithin, và 12,5 ml 2,2,4-trimethylpentane, và trộ
n 
bằng máy voltex. Thêm 6 ml dung dịch Natri Ascorbat-
Pyrogalol, lắc chậm để giải phóng khí. Tiếp tục lắc cho đế
n 
khi hết khí, và sau đó lắ
c thêm 12 phút. Thêm 6 ml 
Dimethyl Sulfoxid, trộn bằng máy voltex để tạo thành dạ
ng 
huyền phù, và lắc trong 12 phút. Thêm 6 ml dung dị
ch 
Methanolic-axit Sunfuric 3 N, voltex để tạo thành mộ
t 
huyền phù, và lắc trong 12 phút. Thêm 12,5 ml 2,2,4-
Trimethylpentane, voltex để tạo thành dạng huyề
n phù, và 
lắc trong 10 phút. Ly tâm trong 10 phút để phá vỡ nh
ũ QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
23
tương và tách dịch trong phía trên. Nếu cần thiế
t, pha 
loãng dịch trong trên với 2,2,4-Trimethylpentane để đạ
t 
được nồng độ gần với nồng độ dung dịch chuẩn. 
Điều kiện sắc ký : HPLC, Detector UV 325 nm, Cộ
t: 4,6 mm 
x 25 cm, 5µm chứa L24; Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút; Thể
 
tích tiêm: 40 µl. 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Tiến hành sắ
c ký 
với dung dịch phù hợp hệ thống. Độ phân giả
i không ít 
hơn 8 giữa All-trans-retinyl acetate và All-trans-
retinyl 
palmitate; Độ lệch chuẩn tương đối không lớn hơn 3,0%. 
Tiến hành : Tiêm mẫu dung dịch chuẩn 2, dung dịch thử. 
Tính % hàm lượng Vitamin A tính theo Retinol C
20
H
30
O 
so 
với lượng ghi trên nhãn theo công thức: 
 Hàm lượng (%) = (r
u
/r
s
) x C
s
/C
u 
x 100 
Trong đó: 
r
u
 là đáp ứng pic của All-trans-retinyl palmitate từ 
dung 
dịch thử.  
r
s
 là đáp ứng pic của Retinyl palmitate  từ dung dịch chuẩ
n 
2. 
C
s
 (µg/ml)  là nồng độ tính theo Retinol của chất chuẩn 2. 
C
u
 (µg/ml) là nồng độ danh nghĩa  của Vitamin A, tính 
theo 
Retinol trong dung dịch thử. 
Sử dụng 26,5 ml là thể tích cuối của dung dịch thử để 
tính 
nồng độ danh nghĩa. 
Quy trình 3: Quy trình này dùng xác đị
nh Vitamin A trong 
các dạng Vitamin A rắn, lỏng hòa tan trong dầu, nướ
c, hòa 
tan trong dầu-nước. 
Pha động : n-Hexane và Isopropyl Alcohol (92:8) 
Dung môi ly trích:  n-Hexane và Methylene Chloride (3:1). 
Dung dịch KOH : 800 mg/ml KOH trong nước cất. 
Dung môi pha loãng : 10 mg/ml Pyrogallol trong Alcohol. 
Dung dịch chuẩn : Pha loãng chất chuẩn Retinyl palmitate
 
với dung môi pha loãng để đạt được nồng độ  
tương 
đương 8,5 μg/ml Retinol (C
20
H
30
O). Chuyể
n 10,0 ml dung 
dịch này vào bình tam giác 125 ml có nút đậ
y và thêm 5 ml 
nước cất, 5 ml dung môi pha loãng và 3 ml dung dị
ch 
KOH. Lắp chặt nắp, lắc trong 15 phút trong bể cách thủy ở
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
24
60
o
 ± 5, và làm nguội đến nhiệt độ phòng. Thêm 7 ml nướ
c 
cất và 25,0 ml dung môi ly trích. Lắp chặt nắp, và lắc mạ
nh 
trong 60 giây. Rửa thành bình tam giác bằng 60 ml nướ
c 
cất, và để yên trong 10 phút cho đến khi tách lớp. Thu hồ
i 
lớp hữu cơ để chạy sắc ký. Dung dịch chuẩn này chứa 3,
4 
μg/ml Retinol. 
Dung dịch thử : Cho lượng mẫu tương đương vớ
i 1,3 mg 
Retinol, vào bình tam giác có nút đậ
y 125 ml. Thêm 5 ml 
nước cất, 15 ml dung môi pha loãng, và 3 ml dung dị
ch 
KOH. Lắp chặt nắp, lắc trong 15 phút trong bể cách thủ
y 
duy trì ở 60
o
 ± 5, và để nguội ở nhiệt độ 
phòng. Thêm 7 ml 
nước cất và 25,0 ml dung môi chiết. Đậy chặt nắp, và lắ
c 
mạnh trong 60 giây hoặc lâu hơn, nếu cần, để 
ly trích hoàn 
toàn. Rửa thành bình bằng 60 ml nước, và để 
yên trong 10 
phút cho đến khi tách lớp. (Không lắc, bởi vì có thể 
hình 
hình thành nhũ tương). Thu hồi lớp hữu cơ, và pha lo
ãng 
nếu cần, với dung môi ly trích, để có nồng độ 
3,4 μg/ml 
Retinol. 
Hệ thống sắc ký : LC; Detector UV 335 nm; Cột: 6,2mm x 
8 cm, L3; Nhiệt độ cột: 40
o
; Tốc độ dòng: 4 ml/phút; Thể 
tích tiêm: 50 μL. 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Tiến hành sắ
c ký 
với dung dịch chuẩn. Độ lệch chuẩn tương đố
i không quá 
3,0% 
Tiến hành : Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩ
n và dung 
dịch thử.  
Tính tỷ lệ phần trăm so với lượng vitamin A ghi trên nhãn
 
tính theo Retinol (C
20
H
30
O): 
 Kết quả = (r
T1
 / r
T2
) × (C
S 
/ C
U
) × 100 
Trong đó: 
r
T1
 = tổng các đáp ứng pic của Este All-tran-r
etinyl 
Palmitate và este 13-Cis-Retinyl palmitate từ dung dị
ch 
thử. 
r
T2
 = tổng các đáp ứng pic của Este All-tran-r
etinyl 
Palmitate và este 13-cis-retinyl Palmitate từ dung dị
ch 
chuẩn. 
C
S
 = nồng độ Retinol (C
20
H
30
O) trong dung dịch chuẩ
n QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
25
(μg/ml). 
C
U
 = nồng độ danh nghĩa của vitamin A, tính 
theo Retinol 
(C
20
H
30
O), trong dung dịch thử (μg/ml). 
Quy trình 4: Quy trình này có thể được sử dụng để 
xác 
định vitamin A trong dịch Vitamin. 
Pha động : Methanol, Acetonitrile, và n-Hexane 
(46,5: 46,5: 
7,0) 
Dung môi pha loãng : Tetrahydrofuran và Acetonitrile (1:1) 
Dung dịch chuẩn : Dung dịch chất chuẩn Retinyl Palmitate
 
pha trong dung môi pha loãng có hàm lượ
ng 0,33 mg/ ml 
Retinol (C
20
H
30
O). 
Dung dịch thử dạng lỏng : Chuyển chính xác lượng mẫ
u 
tương đương 3,3 mg Retinol vào phễu tách 500 ml chứ
a 
10 ml nước cất  và 20 ml Alcohol 
dehydrate. Thêm 150 ml 
dung môi Hexane, đậy nắp, và lắ
c trong 1 phút. Thêm 150 
ml dung môi Hexane, đậy nắp, lắc, tách lớp. Bỏ lớp nướ
c 
và lọc dịch chiết Hexan qua Na
2
SO
4 
khan vào bình 
đáy 
tròn 500 ml. Làm bay hơi dịch lọc tới khô bằng thiết bị 
bay 
hơi cô quay trong bể cách thủy duy trì ở 65
o
. Ngay lập tứ
c 
bổ sung 10,0 ml dung môi pha loãng, lắc để hòa tan cặ
n 
và lọc. 
Hệ thống sắc ký : LC; Detector UV 265 nm; Cộ
t 4,6 mm x 
50 cm (lắp từ hai cột 4,6 mm x 25 cm) chứa L1; Nhiệt độ
 
cột: 40
o
; 
Tốc độ dòng chảy: 1,5 ml/phút; Thể 
tích tiêm: 20 
μL 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống: Tiêm dung dị
ch 
chuẩn vào máy sắc khí. Yêu cầu độ lệch chuẩn tương đố
i 
không lớn hơn 5,0%. 
Tiến hành : Mẫu tiêm với dung dịch chuẩn và dung dị
ch 
thử.  
Tính tỷ lệ phần trăm so với hàm lượ
ng vitamin A ghi trên 
nhãn, tính theo Retinol (C
20
H
30
O), theo công thức: 
Kết quả = (r
U 
/ r
S
) × (C
S
 / C
U
) × 100 
r
U
 là đáp ứng pic của Este All-tran-Retinyl Palmitate từ
 
dung dịch thử. 
r
S
 là đáp ứng pic của Este All-tran-Retinyl Palmitate từ
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
26
dung dịch chuẩn. 
C
S
 = nồng độ Retinol (C
20
H
30
O) trong dung dịch chuẩ
n 
(μg/ml) 
C
U
 = nồng độ danh nghĩa của vitamin A, tính 
theo Retinol 
(C
20
H
30
O), trong dung dịch thử (μg/ml). 
Sử dụng giá trị 0,872 để chuyển đổi Retinyl Acetate 
thành 
tương đương Retinol. 
Sử dụng giá trị 0,546 để chuyển đổi Retinyl Palmitate
 
thành tương đương Retinol. 
6. Bao gói  
và bảo quản Giữ ở nơi mát, trong bao b
ì kín, tránh ánh sáng trong khí 
trơ.  
Nhãn phải ghi dạng Vitamin A, ghi rõ sự có mặt của chấ
t 
kháng sinh, chất phân tán, chất chống oxy hóa, các chấ
t 
phụ gia. 
 
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
27
PHỤ LỤC 4 
YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI  β-CAROTEN 
1. 
Đ
ịnh nghĩa
 
Tên hóa học
 
β-Caroten 
Công thức hóa học C
40
H
56
 
 Công thức phân tử 
 
Khối lượng phân tử 536,88 
CAS 7235-40-7 
2. C
ảm quan
 
Dạng rắn hoặc lỏng. 
3. Ch
ức năng
 
Bổ sung Vitamin A vào thực phẩm. 
4. Yêu c
ầu kỹ thuật
 
4.1. Định tính  
Độ tan Không tan trong nước, axit; kiề
m. Nhưng tan trong 
Cacbon disunfi
t và Clorofom, tan ít trong Ete, Hexane; 
dầu thực vật; không tan trong Methanol và Ethanol. 
Phổ hấp thụ tử ngoại  - Phổ hấp thụ UV của dung dịch thử có vai ở 
427 nm, 
đỉnh hấp thụ cực đại ở 455 nm, đỉnh hấp thụ cực đạ
i 
khác ở 483 nm. Tỷ lệ A
455
/A
483
 ở giữa 1,14 và 1,18. 
- Thời gian lưu của pic cực đại của dung dịch thử 
tương 
ứng với thời gian lưu của dung dịch chuẩn, xác đị
nh 
trong phần phương pháp thử hàm lượng β-Caroten. 
4.2. Độ tinh khiết  
- Tro còn lại sau nung Không nhiều hơn 2%. 
Hàm lượng nước Không nhiều hơn 8% đối với chế phẩm rắn, không nhiề
u 
hơn 1% đối với chế phẩm lỏng. 
Hàm lượng Alpha 
Caroten:  Không nhiều hơn 1%.   
Hàm lượng từng thành 
phần tương đương khác Không nhiều hơn 1% 
Tổng hàm lượng các 
thành phần tương đương Không nhiều hơn 5% QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
28
khác. 
4.3 Hàm lượng 
 Không ít hơn 95%  và không nhiều hơn 130% lượng β-
Caroten tổng ghi trên nhãn tính theo C
40
H
56
 trong chế
 
phẩm khan. 
Chứa không ít 95% All-trans-β-Caroten so với tổ
ng hàm 
lượng β-Caroten.  
5. Ph
ương pháp th
ử
 
5.1. Đ
ịnh tính
 
 
Độ tan Khả năng tan của một chất là chất thử hòa tan đượ
c 
trong dung môi tạo thành một dung dịch trong, đồ
ng 
nhất, không còn những phần tử của chất thử. 
Tiến hành: Cho dung môi vào chất thử ở nhiệt độ 25±2
 
o
C trong 30 giây, cứ cách 5 phút lại lắc 30 giây. 
Độ tan được biểu thị như sau: 
Độ tan Số ml dung môi hòa 
tan 1 g chất thử 
Rất tan Dưới 1 
Dễ tan 1-10 
Tan 10-30 
Hơi tan 30-100 
Khó tan 100-1 000 
Rất khó tan 1 000-10 000 
Thực tế không tan Trên 10 000 
 
Quang phổ  
A
. 
Du
ng d
ị
ch th
ử
: Chuy
ể
n 5 ml dung d
ị
ch th
ử
 
g
ố
c A và 
dung dịch thử gốc B chuẩn bị như phầ
n phương pháp 
thử ở phần xác định hàm lượng Carotenoid tổ
ng vào 
bình định mức 100 ml, pha loãng bằng cyclohexan tớ
i 
vạch.  
Ghi phổ UV-VIS từ 300-600 nm. Xác định độ hấp thụ
 
của dung dịch B ở 455nm và ở 483 nm. 
B. Tiến hành như phần xác định hàm lượng β-Caroten. 
5.2. Đ
ộ tinh khiết
 
 
Tro còn lại 
sau khi nung Nung chén nung (bằng silica, plati, thạch anh hoặc xứ) ở
 
600
o
C ± 50
 trong 30 phút, làm nguội trong bình hút ẩ
m, 
cân khối lượng. Cân chính xác 1 g mẫ
u vào chén nung. 
Làm ẩm mẫu với 1 ml Axit Sulfuric, đun cho tới khi mẫ
u 
bị hóa than, làm nguội, thêm 1 ml Axit Sulfuric, đun cho
 
tới khi không còn khói trắng bay ra, nung ở 600
o
C ± 50
 
cho tới khi mẫu bị đốt hoàn toàn (không tạo thành ngọ
n 
lửa trong quá trình thí nghiệm). Làm nguội trong b
ình hút QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
29
ẩm, cân và tính phần trăm tro. 
Nếu lượng tro còn lại vượt quá giới hạn quy định, lặp lạ
i 
mẫu, làm ẩm với axit Sulfuric và nung, thời gian nung 
30 
phút, cho đến khi hai lần cân tro liên tiếp không 
chênh 
lệch nhiều hơn 0,5 mg hoặc cho đến khi tỷ lệ phầ
n trăm 
tro còn lại phù hợp với giới hạn trong chuyên khảo. 
Tiến hành nung trong tủ hút. 
Hàm lượng nước 
Thử theo TCVN 2309:2009 (ISO 760: 1978) 
Hàm lượng Alpha Caroten
 
và các thành phần tương 
đương khác.  Pha động, dung dịch phù hợp hệ thống, dung dịch thử
 
và hệ thống sắc ký tiến hành theo quy trình xác đị
nh 
hàm lượng β-Caroten. 
Tiến hành : Tiến hành đối với dung dịch thử, thể 
tích tiêm 
là 20µl. 
Phần trăm α-Caroten và các thành phần khác 
theo công 
thức: 
  Kết quả  = (r
u
/r
t
) x100 
Trong đó: 
r
u 
là diện tích pic của α-Caroten hoặc các thành phầ
n 
khác. 
r
t
 là tổng diện tích pic của tất cả các pic. 
5.3. Đ
ịnh l
ư
ợng
 
 
Hàm lượng β-Caroten  Sử dụng dụng cụ thủy tinh tối màu. 
Pha động : Cân 50 mg Butylate hydroxytoluen 
vào bình 
định mức 1 lít, hòa tan với 20 ml 2-P
ropanol. Thêm 0,2 
ml                    n-Etyldi-isopropylamin, 25 ml dung dị
ch 
Ammonium acetate 0,2%, 455 ml A
cetonitrile, 450ml 
Methanol. Để ở nhiệt độ phòng, thêm Methanol tới vạ
ch 
định mức, trộn đều. 
Dung môi pha loãng : 50µg/ml Butylat hydroxytoluen 
trong Alcohol. 
Dung dịch phù hợp hệ thống : Chuyển 20 mg β-
Caroten 
chuẩn vào bình định mức 50 ml. Thêm 1 ml nước cất
, 4 
ml Tetrahydrofuran, và siêu âm trong 5 phút, làm nguộ
i 
tới nhiệt độ phòng, lọc qua màng lọc 0,45 µm. 
Dung dịch chuẩn gốc : 60µg/ml chất chuẩn β-
Caroten 
trong Tetrahydrofuran. QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
30
Dung dịch chuẩn A : Chuyển 5,0 ml dung dịch chuẩn gố
c 
vào bình định định mứ
c 100 ml, thêm 5 ml 
Tetrahydrofuran và pha loãng với dung môi pha loãng
 
đến vạch định mức. Nồng độ All-trans-β-c
aroten trong 
dung dịch này được xác định bằng quy trình 
đo quang 
sử dụng dung dịch chuẩn B. 
Dung dịch chuẩn B : Chuyển 5 ml dung dịch chuẩn gố
c 
vào bình định mức 100 ml, pha loãng bằng C
yclohexan 
tới vạch định mức. Chuẩn bị 3 lần mẫu. 
* Xác định hàm lượng β-Caroten tổ
ng (mg/ml) tính theo 
All-trans-β-caroten (C
40
H
56
) trong dung dịch chuẩn B: 
Điều kiện thiết bị : Máy quang phổ, bướ
c sóng phân tích 
ở 457 nm, cuvet dày 1 cm, sử dụng Cyclohexan 
làm 
mẫu trắng. Tiến hành đo với dung dịch chuẩn B.  
Hàm lượng β-Caroten tổng (mg/ml) tính theo All-trans-β-
caroten (C
40
H
56
) trong dung dịch chuẩn B:    
Kết quả = A/F. 
Trong đó: 
A là độ hấp thụ trung bình của 3 mẫu dung dịch B. 
F là độ hấp thụ của All-trans-β-caroten tinh khiế
t trong 
Cyclohexan = 250,5. 
Dung dịch thử gốc A (đối với dạng rắn):  Chuyển lượ
ng 
mẫu tương đương với 10 mg β-Caroten vào bình đị
nh 
mức 250 ml, thêm 250 mg Butylat h
ydroxytoluen, 0,5 ml 
Protease kiềm R, thêm 15 ml nước cấ
t. Nghiêng bình 
đều để làm ướt toàn bộ các chất. Siêu âm dung dịch ở
 
50
o
 trong 30 phút, lắc dị
ch trong 10 phút. Thêm 100 ml 
Alcohol, lắc mạnh. Thêm 135 ml Methylene Cloride, lắ
c 
lại. Để hỗn hợp trong tối cho tới nhiệt độ phòng (khoả
ng 
2 h). Pha loãng với Methylene Cloride tới vạch đị
nh 
mức, lắc mạnh, để dịch ở trong tối. 
Dung dịch thử gốc B : (đối với dạng dịch lỏng trong dầ
u): 
Chuyển lượng mẫu tương đương với 20 mg β-
Caroten 
vào bình định mức 250 ml. Thêm 250 mg Butylate
 
Hydroxytoluen, 120 ml Methylene Cloride
, và 100 ml 
Alcohol. Lắc bình cho tới khi mẫu hòa tan hoàn toàn. Để
 
hỗn hợp trong tối cho tới nhiệt độ 
phòng (2h). Thêm 
Methylene Cloride tới vạch định mức, lắc mạnh lại. 
Dung dịch thử : Chuyển 5 ml dung dịch thử gốc A hoặ
c 
dung dịch thử gốc B vào trong bình định mứ
c 50 ml, hòa QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
31
tan với hỗn hợp Methylene Cloride và 
dung môi pha 
loãng (1:1) tới vạch định mức. Lọc qua màng lọ
c 0,45 
µm. 
Điều kiện sắc ký : Mode: LC ; Detector: UV 448 nm; Cột 
: 
4,6 mm x25 cm, 5µm chứa L68; Nhiệt độ cột 30
o
; Tốc độ
 
dòng 0,6 ml/ phút; Cỡ mẫu tiêm: 20 µl. 
Yêu cầu về tính phù hợp của hệ thống : Thờ
i gian lưu 
tương đối của các thành phần trong dung dịch phù hợ
p 
hệ thống được liệt kê trong bảng sau: 
Ch
ấ
t phân tích
 
Th
ờ
i gian 
lưu tương 
đối 
H
ệ
 
s
ố
 
đáp 
ứng tương 
đối 
All-trans-α-caroten 0,93 1,1 
All-trans-β-caroten 1,00 1,0 
9-Cis-β-caroten 1,07 1,0 
13-Cis-β-caroten 1,17 1,2 
15-Cis-β-caroten 1,21 1,4 
 
 
Yêu cầu:  
- Độ tương đồng sắc ký đồ : Sắc ký đồ của dung dịch 
phù 
hợp hệ thống tương tự với các sắc khí đồ tham chiếu. 
- Độ phân giải : không ít hơn 1,5 giữa β-Caroten và α-
Caroten; giữa β–Caroten và 9-Cis-β-caroten củ
a dung 
dịch phù hợp hệ thống. 
- Hệ số đối xứng : không nhiều hơn 2,0 đối với pic β-
Caroten của dung dịch chuẩn A. 
- Độ lệch chuẩn tương đối : không nhiều hơn 2% đối vớ
i 
pic β-Caroten từ các lần tiêm lặp lại của dung dịch chuẩ
n 
A. 
Tiến hành: 
Tiến hành đối với dung dịch chuẩn A và dung dịch thử
. 
(Hệ số đáp ứng tương đối đối của 13-Cis-β-c
aroten và 
15-Cis-β-caroten là 1,2 và 1,4). 
Ghi các sắc ký đồ, xác định các pic của các chấ
t phân 
tích trong sắc ký đồ của dung dịch thử bằ
ng cách so 
sánh với pic trong sắc ký đồ của dung dịch phù hợp hệ
 
thống. Xác định các diện tích pic. 
Kết quả : Phần trăm β-Caroten tổng trong mẫ
u theo công 
thức: QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
32
  Kết quả = (r
u
/r
s
) x (C
s
/C
u
) x 100 
r
s
 = diện tích pic của All-trans-β-caroten từ dung dị
ch 
chuẩn A. 
r
u
 = [(diện tích pic của All-trans-β-caroten) + (diệ
n tích 
pic của 9-Cis-β-caroten) + (diện tích pic của 13-Cis-β-
caroten x 1,2) + (diện tích pic của 15-Cis-β-c
aroten x 
1,4) + tổng diện tích pic của các dạng đồ
ng phân cis 
khác của β-Caroten)] trong dung dịch thử. 
C
s
 là nồng độ của All-trans-β-caroten trong dung dị
ch 
chuẩn A được xác định bằng quy trình 
đo quang 
(mg/ml). 
C
u
 là nồng độ danh  nghĩa của dung dịch thử (mg/ml). 
Tính toán % All-trans-β-caroten trong mẫ
u theo công 
thức: 
 Kết quả = (r
u
/r
s
) x (C
s
/C
u
) x 100 
Trong đó: 
R
s
 = diện tích pic của All-trans-β-caroten từ dung dị
ch 
chuẩn A. 
R
u
 = diện tích pic của All-trans-β-caroten trong dung dị
ch 
thử. 
C
s
 là nồng độ của All-trans-β-caroten trong dung dị
ch 
chuẩn A được xác định bằng quy trình 
đo quang 
(mg/ml). 
C
u
 là nồng độ danh nghĩa của dung dịch thử (mg/ml). 
Đơn vị tính: 
1 UI Vitamin A = 0,6 mcg β-Caroten 
1mcg Retinol = 1 mcg RAE 
1 mcg RAE = 2 mcg supplemental β-Caroten 
1 mcg RAE = 12 mcg β-Caroten 
1 mcg RAE = 24 mcg α-Caroten 
RAE viết tắt của từ Retinol Activity Equivalen. 
6. Yêu cầu bao gói và b
ảo 
quản Bảo quản trong vật chứa kín, tránh oxy. Lưu kho ở 
nơi 
mát. 
Nhãn ghi tên và hàm lượng của các chất mang, chấ
t 
chống oxy hóa, hàm lượng Carotenoid tổng theo β-
Caroten. 
 QCVN 3-7:2018/BYT
 
 
33