- 1 -농림축산검역본부 공고 제 2016-213호
소독제 효력시험지침을 개정함에 있어 국민에게  미리 알려  의견을 듣고자 그 
개정취지 및 주요내용을 행정절차법 제46조의 규정에 의하여 다음과 같이 
공고합니다 .
                           2016년 5월 24일
농림축산검역본부장
소독제 효력시험지침 개정(안) 행정예고
1. 개정 이유
 ì« 국내 질병발생 및 방역여건을 고려한 소독제 효력시험을 다양화
하고, 효력시험용 공시제품에 대한 관리를 구체적으로 명시하는 
등 소독제 효력시험을 합리적으로 개선하기 위함
2. 주요 내용
 가. 국내 방역여건을 고려한 소독제 효력시험 다양화 추진 (제3조)
  ì« 기존 현탁액 시험법 이외의 ‘훈증 등 가스제형 소독제 효력시험 (별표 4)’ 추가
  ì« 신청업체에서 소독제 효력시험 온도조건 및 접촉시간을 다양화 
하여 효력시험 설계서 작성 •제출 가능토록 ‘선택시험 조건 ’ 추가
 나. 소독제 효력시험용 공시제품 관리기준 마련 (제4조 2)
  ì« 지정 검사기관에서 공시제품에 대한 함량검사를 실시 후 소독제 - 2 -효력시험기관에서 시험 및 업체에서 공시제품 보관의무 신설
   * 효력시험결과제출 관련 공시제품 함량검사 결과 제출 포함 (제5조제 3항)
  ì« 기타 소독제 효력시험기관 및 의뢰자의 임무와 신뢰성 조사 실시 등
 다. 국내 •외 동일한 규정 적용을 위한 바이러스 소독제 효력시험 관련  
국외 시험성적 예외 인정 규정 삭제 (별표 2. 5.)
 라. 소독제 권장희석배수 설정 강화 (제4조 및 별표 1~3.)
  ì« 바이러스 등과의 반응 후의 농도를 최종 희석배수로 정하되 , 국내 현장성  
등을 감안하여 80%값에 해당하는 희석배수를 권장희석배수로 설정
3. 의견제출
  이 고시 개정 (안)에 대하여 의견이 있는 개인 또는 단체 , 기관은 
2016. 6. 15 일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 농림축산검역본
부장(참조 : 동물약품관리과장 )에게 제출하여 주시기 바랍니다 . 기타 
자세한 사항은 농림축산검역본부 홈페이지 (http://www.qia.go.kr ) 
또는 동물약품관리과 까페 (http://cafe.daum.net/nvrqspharm )를 참
고하시거나 동물약품관리과로 문의하여 주시기 바랍니다 . 
 가. 행정예고 사항에 대한 항목별 의견 (찬•반 여부와 그 사유 )
개정(안) 수정 (안) 사유
  
 나. 성명(단체인 경우에는 단체명과 대표자명 ), 주소 및 전화번호
 다. 제출하는 곳 : 농림축산검역본부 동물약품관리과
  - 전화 : 054-912-0532 (FAX : 054-912-0530)
  - 주소 : 경상북도 김천시 혁신 8로 177(율곡동 960) 
  - 전자우편 (이메일) : sejang@korea.kr- 3 -현        행 개   정   안
제3조(표준시험법) 표준시험법에 관
한 구체적인 사항은 별표1의 「세
균 등의 소독제 효력시험」, 별표
2의 「바이러스의 소독제 효력시
험」, 별표3의 「곰팡이의 소독제 
효력시험」규정 에 따른다. 다만, 
아포세균, 결핵균, 곰팡이 및 특정 
병원체에 관한 세부시험과  기타 
이 지침에서 규정하지 않은 세부
사항은 농림축산검역본부장의 승
인을 받아 시험을 실시하는 것을 
원칙으로 한다 .제3조(표준시험법) -----------
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------
----------, 별표4의 「훈증 
등 가스제형 소독제 효력시험」 
규정--. -- 세부시험과 선택시험
조건 등  -- ---- -- -- -- -- 
-- -- -- ---- -- -- -- -- -
- -- -- -- -- --   실시하여야 
한다.
  ① (생  략)   ① (현행과 같음)
  <신  설>   ② “선택시험조건”이라 함은 표준
시험조건외에 제제 특성과 소독대
상 등에 따라 반응시간(1분, 5분, 
15분 등)과 반응온도(-10 ç, -
5ç, 10ç 등)를 추가로 선택하여 
처리하는 조건을 의미한다.
  ② (생  략)   ③  (현행 제2항과 같음)
  ③ (생  략)   ④  (현행 제3항과 같음)
  ④ (생  략)   ⑤  (현행 제4항과 같음)
  1.ㆍ2. (생  략)   1.ㆍ2. (현행과 같음)
  3. 공시제품에 대한 최종 희석배   3. ----------------------신ㆍ구조문대비표- 4 -수의 결정은 각각의 시험결과를 
상용대수로 환산하여 계산하되, 
20%의 오차범위내로 들어오는 
3반복시험결과 중 중위수(medi
an)로 한다.-----------------------
---------------------- 
각 실험의 결과값이 평균값의 2
0%(±10%) ---------------
-------.
  ⑤ (생  략)   ⑥  (현행 제5항과 같음)
제4조(효력시험결과 활용) 효력시험
의 결과를 권장희석배수로 정할 
경우에는 제2조제2항 의 소독대상 
분류에 따라 병원체명(질병명)별
로 희석배수를 구분하여 표기한
다.제4조(효력시험결과 활용) ------
------------------------
----- 최종 유효희석배수의 8
0%값에 해당하는 희석배수를 기
준으로 하여 제2조제2항 ------
---.
  <신  설> 제4조의2(공시제품의 관리 등) ① 
효력시험 실시 전 공시제품은 농
림축산식품부장관이 지정한 검사
기관(이하 “검사기관”이라 한다)
에서 함량검사를 받아야 하며, 함
량검사 결과는 유효성분 함량기준
(95~105%)에 적합하여야 한다.
  ② 효력시험 의뢰자(이하 “의뢰
자”라 한다)는 동일한 제조단위
(롯트)의 공시제품 최소 3개 이상
을 검사기관에 제공하여야 한다.
  ③ ①항에 따른 함량검사 결과가 
적합할 경우 검사기관은 공시제품 
2개 이상을 봉인하여 의뢰자에게 - 5 -송부하여야 하며, 이 경우 의뢰자
는 1개 이상은 효력시험기관에 제
공하여야 하며, 1개는 유효기간에 
1년을 더하여 보관하여야 한다.
  ④ 효력시험기관은 제공받은 공시
제품의 봉인 상태 및 함량시험 결
과를 확인하여 이상이 없는 경우 
시험을 실시하여야 한다.
  ⑤ 기타 소독제 효력시험기관 및 
의뢰자의 임무와 신뢰성 조사 등 
관리사항은 농림축산검역본장이 
정한 “동물용의약품등 임상시험 
관리지침”의 제12조, 제15조, 제1
8조 및 제19조를 준용한다.
제5조(효력시험결과제출) (생  략) 제5조(효력시험결과제출) (현행과 
같음)
  ② 세균, 바이러스 또는 곰팡이의 
특정 병원체를 소독대상으로 할 
경우에는 별표1부터 별표3 까지 
제시된 해당 시험방법에 따라 실
시한 성적을 제출한다. 다만, 소독
제 효능·효과 및 용법·용량 등을 
고려할 때 이 규정에 의한 표준시
험법으로 소독제 효력시험의 목적
을 달성할 수 없다고 판단되는 경
우에는 해당 세균, 바이러스 및 곰  ② ----------------------
------------------------
------------- 별표4 ------
------------------------
--------------. ---------
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------- 6 -팡이의 생물학적 특성에 따라 소
독제 효능을 검사할 있는 과학적
인 공인방법으로 제3조에 의거하
여 시험방법을 변경할 수 있다.------------------------
------------------------
------------------------
---------------------.
  ③ 안전성 유효성 심사를 위해 실
시하는 소독제의 효력시험결과 보
고서는 다음 각 호의 사항을 포함
하여야 한다.  ③ ----------------------
------------------------
------------------------
---------.
  1. ∼ 10. (생  략)   1. ∼ 10. (현행과 같음)
  <신  설>   11. 농림축산식품부 지정 검사기
관에서 실시한 공시제품 함량검
사 결과(검사기관에서 발행한 
결과서 첨부)
[별표 1] 
세균 등의 소독제 효력시험(제3조관련)[별표 1] 
세균 등의 소독제 효력시험(제3조관련)
3. 세균 소독제 효력시험
 ① ~ ② (생략)3. 세균 소독제 효력시험
  ① ~ ② (현행과 같음)
 ③(소독제의 희석법) 소독제의 유효 희석
배수의 대강의 범위를 알고 있는 경우
는 제품해당 농도의 123%를 경수로 1
00ml가 되도록 용해한 다음, 이를 1
0%씩의 농도차이를 두어 5개의 시험
관에 2.5ml씩 단계희석한 것을 넣는
다. 이때 원하는 희석농도가 5개의 시
험관 중 가운데가 되도록 배치하고, 이
렇게 소독제 희석액 처리가 완성된 시
험관을 4 ç가 되도록 한다.  
   *예시(200배의 소독액의 효력을 측정
할 경우): 200배로 희석할 해당제품 
0.5g을 100으로 볼 때 123%로 해당
되는 양에 해당되는 0.615g을 취하여 
경수로 100ml가 되도록 용해한 다음  ③(소독제 시험용액 준비) 시험에 사용하
는 소독제는 최종 시험균액과의 반응
액중에서 희석되는 농도를 고려하여 
소독제 희석액을 준비한다.
  *예시(최종 200배 희석된 소독액의 효
력을 측정할 경우) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml에 소독제 2.5
ml을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 
희석배수의 50%인 100배 희석된 소독
액을 준비한다.
 ④(소독제의 희석법) 소독제의 유효 예상 
희석배수가 500배 이하일 경우는 50, 
100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 
등으로 희석하되, 그 이상의 예상 희석- 7 -잘 혼합한 후 10ml를 꺼내어, 이중 2.
5ml는 시험관-1에 넣고 나머지 7.5m
l는 버린다. 남은 90ml의 소독액에 경
수 10ml를 넣어 잘 혼합한 후 10ml
를 꺼내어 2.5ml를 시험관-2에 넣고 
나머지 7.5ml는 버린다. 이와 동일한 
방법으로 시험관-3, -4, -5를 계속하
며, 이의 결과 시험관내의 유효성분은 
시험관 순서대로 123, 111, 100, 90, 
80%가 되어 이들의 시험관의 희석농
도는 차례로 10%의 차이가 있게되므
로 이 결과는 순서대로 약 1/160, 1/
180, 1/200, 1/220, 1/240 의 희석농
도가 되며, 이렇게 만든 소독액 시험
관을 4 ç에 보관한다.  배수 농도 및 더 정밀한 희석배수 산정
을 위해서는 희석배수 농도를 달리할 
수 있다.
[별표2] 
바이러스의 소독제 효력시험(제3조관련)[별표2] 
바이러스의 소독제 효력시험(제3조관련)
4. 바이러스 소독제 효력시험
 ① ~ ② (생략)4. 바이러스 소독제 효력시험
  ① ~ ② (현행과 같음)
 <신 설>  ③(소독제 시험용액 준비) 시험에 사용하
는 소독제는 최종 시험균액과의 반응
액중에서 희석되는 농도를 고려하여 
소독제 희석액을 준비한다.
  *예시(최종 200배 희석된 소독액의 효
력을 측정할 경우) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml에 소독제 2.5
ml을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 
희석배수의 50%인 100배 희석된 소독
액을 준비한다.
③(소독제의 희석법) 소독제의 유효 예상 
희석배수가500배 이하일 경우는 50, 1
00, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등
으로 희석하되, 그 이상의 예상 희석배
수 농도에서는 달리할 수 있다. 단, 정
밀한 희석배수가 요구되는 경우는  ④(소독제의 희석법) 소독제의 유효 예상 
희석배수가500배 이하일 경우는 50, 1
00, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등
으로 희석하되, 그 이상의 예상 희석배
수 농도 및 더 정밀한 희석배수 산정을 
위해서는 희석배수 농도를 달리할 수 - 8 -「세균 등의 소독제 효력시험」3의③
항의 방법에 따른다. 있다.
5. 구제역바이러스 소독제효력시험(국외)
 세계구제역표준연구소 등 농림축산검역
본부장이 인정하는 기관에서 소독제 
효력시험을 실시하는 경우에는 본 지
침에 부합하는 것으로 본다.<삭 제 >
[별표3] 
곰팡이의 소독제 효력시험(제3조관련)[별표3] 
곰팡이의 소독제 효력시험(제3조관련)
3. 곰팡이균 소독제 효력시험
 ① ~ ② (생략)3. 곰팡이균 소독제 효력시험
  ① ~ ② (현행과 같음)
 ③(소독제 희석액) 제2조의 경수 및 유기
물희석액을 이용하며, 경수구는 경수
로, 유기물처리구는 유기물희석액으로 
실시함을 원칙하되, 제3조의 규정에 따
라야 한다. ④(소독제 시험용액 준비) 시험에 사용하
는 소독제는 최종 시험균액과의 반응
액중에서 희석되는 농도를 고려하여 
소독제 희석액을 준비한다.
  *예시(최종 200배 희석된 소독액의 효
력을 측정할 경우) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml에 소독제 2.5
ml을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 
희석배수의 50%인 100배 희석된 소독
액을 준비한다.
 ④(소독제의 희석법의 예시) 정밀한 희석
배수가 요구되는 경우는 별표 1의 세
균 등의 소독제 효력시험 3.③항의 시
험방법에 따른다. ⑤(소독제의 희석법) 소독제의 유효 예상 
희석배수가500배 이하일 경우는 50, 1
00, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등
으로 희석하되, 그 이상의 예상 희석배
수 농도 및 더 정밀한 희석배수 산정을 
위해서는 희석배수 농도를 달리할 수 
있다.
< 신 설> [별표4] 
훈증 등 가스제형 소독제 효력시험(제3조관련)- 9 -[고시 개정 전문]
농림축산검역본부 고시 제 2016-  호
동물용의약품등 취급규칙 제7조제1항 및 제2항, “동물용의약품등 안전성 •유
효성심사에 관한 규정” 제7조제1항제6호다목의 규정에 의하여 “소독제 효력
시험지침”을 다음과 같이 개정합니다.
2016 년  월   일
농림축산검역본부장
소독제 효력시험지침
제정 2007.1.22. 국립수의과학검역원 고시 제 2007-10 호
개정 2008.9.8. 국립수의과학검역원 고시 제 2008-14 호
개정 2011.6.15. 농림수산검역검사본부 고시 제 2011-26 호
개정 2012.10. 4. 농림수산검역검사본부 고시 제 2012-156 호
개정 2013.3.23. 농림축산검역본부 고시 제 2013-34 호
개정 2016.3.9. 농림축산검역본부 고시 제 2016-29 호
개정 2016. 0. 0, 농림축산검역부본 고시 제 2016-00 호
제1조(목적) 이 지침은 ｢약사법 ｣ 제31조, 제42조, 제85조제1항, ｢동물용의
약품등 취급규칙 ｣ 제7조제1항 •제2항, “동물용의약품등 안전성 •유효성 심사- 10 -에 관한 규정” 제7조제1항제6호다목에 따라 제출되는 동물용의약외품인 
소독약품의 효력시험에 관한 세부사항을 정함을 목적으로 한다.
제2조(용어의 정의 ) 이 지침에서 사용하는 용어의 정의는 다음과 같다 .
  ① “ 소독제 ”라 함은 동물질병 방역의 목적으로 축사 , 양어장 등 소독대
상에 적용하여 병원미생물을 사멸 또는 증식억제 작용하는 제제를 말한다 .
  ② “ 소독대상 ”이라 함은 병원체에 오염되었거나 오염되었을 우려가 있
는 축체 (사체 포함 ), 축사바닥 , 축사공간 , 차량 및 운반용구 , 동물용 음
수, 오물 , 양어장 , 어류 , 기구 등을 말하며 ,  “소독대상의 분류 ”는 소독 
대상의 유기물 함량에 따라서 분류하되 , 일반적으로 축사바닥 , 오물 , 사
체, 농장차량 및 운반용구 등은 유기물이 많이 함유된 대상으로 , 축사공
간, 동물용 음수 , 축체표면 , 기구 , 양어장 , 어류 , 일반차량 등은 유기물이 
적게 함유된 대상으로 분류한다 .
  ③ " 유기물 "이라 함은 소독의 효력에 영향을 주는 것으로 탄수화물 , 지방 
또는 단백질 등과 이를 함유한 동물의 분비물 , 배설물 , 장내용물 , 혈액 , 
동물의 조직 , 사료찌꺼기 등을 말한다 .
  ④ “ 소독대상 병원체 ”라 함은 동물의 건강한 사육을 위하여 사멸 또는 
증식억제의 대상이 되는 병력을 갖고 있는 병원체들을 의미하며 , 다음 각 
호와 같이 구분한다 .
  1. “ 특정 병원체 ”라 함은 허가항목의 소독대상 병원체에 특정 병원체명 
(또는 특정 질병명 )을 기재하는 경우를 의미하고 ,
  2. “ 일반 병원체 ”라 함은 허가항목의 소독대상 병원체에 대표균주에 대
한 시험의 결과에 따라 포괄적으로 사용되는 것으로 특정 병원체명이 아
닌 ‘세균 , 아포 또는 곰팡이 ’ 등의 용어로 기재하는 경우를 말한다 .
  ⑤ “ 경수 ”라 함은 증류수 1 리터 (liter) 에 CaCl2 0.305g 과 MgCl2. ß‡6H2O - 11 -0.139g(w/v) 을 함유한 것을 의미한다 .
  ⑥ “ 유기물희석액 ”이라 함은 소독제의 희석을 위해 사용되는 유기물을 
함유한 경수를 의미하며 , 세균용 및 곰팡이용의 유기물희석액은 5%(w/v) 
효모추출물 (yeast extract) 을, 바이러스용의 유기물희석액은 5% 소태아혈
청(fetal bovine serum) 을 함유한 액체를 의미한다 . 이 중 세균용 및 곰팡
이용의 유기물희석액의 조제방법은 효모추출물 20%(w/v) 가 함유되도록 경
수에 용해한 다음 고압멸균 (121℃ 15 분)하여 4℃에 보관하면서 , 사용 시
에는 경수로 4배 희석하여 5% 함량의 유기물희석액으로 만들되 , 1N 수산화
나트륨액으로 pH7.0 이 되도록 조정한 것이다 . 이때 소독제의 성분이 요오
드포류 (iodophors) 인 경우는 6주 이상 보관 후 사용한다 .
제3조(표준시험법 ) 표준시험법에 관한 구체적인 사항은 별표1의 「세균 등
의 소독제 효력시험」, 별표2의 「바이러스의 소독제 효력시험」, 별표3의 
「곰팡이의 소독제 효력시험」,  별표4의 「훈증 등 가스제형 소독제 효력
시험」 규정 에 따른다. 다만, 아포세균, 결핵균, 곰팡이 및 특정 병원체에 
관한 세부시험과 선택시험조건 등 기타 이 지침에서 규정하지 않은 세부사
항은 농림축산검역본부장의 승인을 받아 시험을 실시하여야 한다.
  ① “ 표준시험조건 ”이라 함은 소독대상 병원체를 함유한 증류수희석액 , 
경수희석액 또는 유기물희석액을 각각 소독제를 함유한 증류수 , 경수 및 
유기물 희석액과 동량 혼합 후 4℃에서 30 분간 (결핵균 또는 아포는 60 분) 
처리하는 조건을 의미한다 .
  ② “ 선택시험조건 ”이라 함은 표준시험조건외에 제제 특성과 소독대상 
등에 따라 반응시간 (1 분, 5분, 15 분 등 )과 반응온도 (-10℃, -5℃, 10℃ 
등)를 추가로 선택하여 처리하는 조건을 의미한다 .
  ③ “소독제의 효력시험 설계시의 처리구 ”라 함은 다음 표의 내용과 같다- 12 -(독성대조 처리구는 바이러스의 소독제 효력시험에 한한다 ) 이때 표시 +
와 -는 각 처리구의 성분구성 여부를 의미하며 , 유기물의 저 ß‡고는 결과활
용시 소독대상의 유기물 함유정도를 의미한다 .
처리구 경수 유기물 소독제 비고
1(유기물 저) + - + 경수조건
2(유기물 고) + + + 유기물 /경수조건
3(병원체 대조 ) + - -처리구 1, 2의 
대조 
4(독성 대조 ) + - + 처리구 3의 대조
  ④ “유효희석배수 ”라 함은 유기물 저 또는 고 시험조건에서 효력이 인정
되는 최소량의 소독제 유효성분에 대한 희석액의 배수로 표기한다 .
  ⑤ “유효희석배수의 판정 ”은 경수희석액 , 유기물희석액의 2가지 조건에
서 실시한 각각의 시험결과에 대한 것이며 , 제3조제 2항의 시험설계에 따
른 처리구 -1 과-2 는 처리구 -3 을 대조로 하여 다음과 같이 판정한다 .
  1. 세균의 경우는 별표 1과 같이 시험하여 , 5개의 동일 소독제 희석배수의 
영양배지에서 4개 이상 증식되지 않는 최종 소독희석 단계를 유효농도로 
한다 .
  2. 바이러스의 경우는 원칙적으로 표준시험조건에서 병원체 대조군과 비
교하여 병원체가 ㎖당 104 배(또는 TCID50, EID50, LD50 등, 이하 “PFU"
라 한다 )( 상용대수로 환산한 값 4) 이상의 사멸 또는 불활화가 확인된 
희석배수를 유효농도로 한다 .
  3. 공시제품에 대한 최종 희석배수의 결정은 각각의 시험결과를 상용대수
로 환산하여 계산하되 , 각 실험의 결과값이 평균값의 20%(±10%) 의 오차
범위내로 들어오는 3반복시험결과 중 중위수 (median) 로 한다 .
  ⑥ 제1항부터 제 4항까지의 규정에도 불구하고 곰팡이용 소독제에 대한 시- 13 -험조건 , 처리구 , 유효희석 배수의 판정 등은 별표 3. 곰팡이의 소독제 효
력시험 기준에 따른다 .
제4조(효력시험결과 활용 ) 효력시험의 결과를 권장희석배수로 정할 경우에
는 최종 유효희석배수의 80%값에 해당하는 희석배수를 기준으로 하여 제
2조제2항 의 소독대상 분류에 따라 병원체명(질병명)별로 희석배수를 구분
하여 표기한다.
제4조의2( 공시제품의 관리 등 ) ① 효력시험 실시 전 공시제품은 농림축산식
품부장관이 지정한 검사기관(이하 “검사기관”이라 한다)에서 함량검사를 
받아야 하며, 함량검사 결과는 유효성분 함량기준(95~105%)에 적합하여
야 한다.
  ② 효력시험 의뢰자 (이하 “의뢰자 ”라 한다 )는 동일한 제조단위 (롯트 )의 
공시제품 최소 3개 이상을 검사기관에 제공하여야 한다 .
  ③ ①항에 따른 함량검사 결과가 적합할 경우 검사기관은 공시제품 2개 이
상을 봉인하여 의뢰자에게 송부하여야 하며 , 이 경우 의뢰자는 1개 이상은 
효력시험기관에 제공하여야 하며 , 1개는 유효기간에 1년을 더하여 보관하
여야 한다 .
  ④ 효력시험기관은 제공받은 공시제품의 봉인 상태 및 함량시험 결과를 확
인하여 이상이 없는 경우 시험을 실시하여야 한다 .
  ⑤ 기타 소독제 효력시험기관 및 의뢰자의 임무와 신뢰성 조사 등 관리사
항은 농림축산검역본부장이 정한 “동물용의약품등 임상시험 관리지침 ”
의 제 12 조, 제15 조, 제18 조 및 제 19 조를 준용한다 .
제5조(효력시험결과제출 ) 효력시험결과 제출에 적용하는 시험방법 및 보고
서 내용은 다음 각 항과 같다.
Œ9 세균 등의 제2조제4항제2호의 일반병원체를 소독대상으로 할 경우에는 - 14 -별표1의 대표균주에 대한 성적을 제출하여야 한다.
  ② 세균 , 바이러스 또는 곰팡이의 특정 병원체를 소독대상으로 할 경우에
는 별표 1부터 별표 4까지 제시된 해당 시험방법에 따라 실시한 성적을 제출
한다 . 다만 , 소독제 효능 ·효과 및 용법 ·용량 등을 고려할 때 이 규정에 
의한 표준시험법으로 소독제 효력시험의 목적을 달성할 수 없다고 판단되
는 경우에는 해당 세균 , 바이러스 및 곰팡이의 생물학적 특성에 따라 소독
제 효능을 검사할 있는 과학적인 공인방법으로 제 3조에 의거하여 시험방
법을 변경할 수 있다 .
  ③ 안전성 유효성 심사를 위해 실시하는 소독제의 효력시험결과 보고서는 
다음 각 호의 사항을 포함하여야 한다 .
  1. 시험제목 , 시험목적 및 시험성적요약
  2. 시험의뢰자 성명 및 소속기관
  3. 시험기관의 명칭 , 소재지 , 시험기관장 성명
  4. 시험책임자 및 담당자의 성명 , 소속 및 직책
  5. 공시품의 제품명 , 제조번호 , 제조일자 및 원료약품분량
  6. 시험기간 , 시험방법 , 시험성적 및 평가기준
  7. 공시세균 , 바이러스 및 곰팡이의 성상 , 수 및 출처
  8. 시험에 사용한 세포의 생물학적 특성 , 중화배지 중화능력 , 공시품의 세
포독성 (공시품의 세포독성은 바이러스의 소독제 효력시험에 한한다 .) 
  9. 공시품의 동물 , 취급자 , 사물 , 기구 및 환경 등에 미치는 영향 및 주의
사항
  10. 시험결과에 대한 시험책임자의 종합의견
  11. 농림축산식품부 지정 검사기관에서 실시한 공시제품 함량검사 결과
(검사기관에서 발행한 결과서 첨부 )- 15 -제6조(시험제한 ) 구제역 등 해외악성전염병의 소독제 시험은 국내시험을 제
한하며, 가축전염병 병원체로써 전염성의 우려가 있거나 공중위생상 특별
한 주의를 요하는 시험은 농림축산검역본부장의 사전허가를 받아야 한다.
제7조(보칙) 이 지침에서 규정하지 아니한 소독제의 효력에 관한 사항은 외
국의 사례 및 과학적 근거 등을 제시하여 농림축산검역본부장의 승인을 받
아 시험을 실시할 수 있다.
부  칙 (제2016-00 호, 2016.0.0.) 
제1조(시행일) 이 지침은 고시한 날부터 시행한다.
제2조(소독제 효력시험 설계서에 대한 경과조치) 종전 규정에 따라 소독제 
효력시험 설계서(변경을 포함한다)의 승인을 받은 것은 이 고시에 적합한 
것으로 보며, 이 고시 시행당시 종전의 규정에 따라 농림축산검역본부장에
게 접수된 소독제 효력시험 설계서(변경을 포함한다)는 종전의 규정에 따
라 처리한다.
제3조(재검토 기한) 농림축산검역본부장은 이 고시에 대하여 2016년 7월 1
일 기준으로 매3년이 되는 시점(매 3년째의 6월 30일까지를 말한다)마다 
그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.- 16 -[별표1] 
세균 등의 소독제 효력시험 (제3조관련 )
 1. 공시 세균
  효력시험에 사용하는 일반 병원체의  공시 균주는 다음 각 호의 대표균주를 사
용함을 원칙으로 하고 , 특정균주를 포함하여 시험에 사용된 균주의 성상  및 
출처를 입증할 수 있어야 한다 . 
①(세균의 대표균주 ) Salmonella typhimurium 으로 한다 .
②(아포세균의 대표균주 ) Clostridium perfringens 로 한다 .
③(항산성세균의 대표균주 ) Mycobacterium fortuitum 으로 한다 .
2. 배지시약 등
 ①(일반세균배지 ) 고압 멸균된 영양배지 (nutrient broth) 를 사용한다 .
 ②(아포세균배지 ) 아포세균배지 (cooked meat medium 또는 thioglycollate 
medium) 를 사용한다 .
 ③(항산성세균배지 ) 항산성배지 (middlebrook 7H9 broth 또는 middlebrook 
7H11 agar) 를 사용하며 배지에 0.05%(v/v) Tween80 을 추가한다 .
 ④(약품성분 중화배지 ) 영양배지에 비동화 (56℃ 에 30 분처리 )한 말혈청 5% 를 
함유한 배지를 의미한다 .
 ⑤(기타재료 ) 시험관 (5 X 150mm), 교반기 , 항온수조 (4℃), 항온기 (37℃), 배양기 
및 스톱워치 등
 ⑥(보관용 유기물희석액 ) 20%(w/v) 가 되도록 효모추출물 (yeast extract) 을 증
류수에 녹인 다음 고압멸균한다 .
 3. 세균 소독제 효력시험- 17 - ①(세균 배양 ) 계대 중의 세균을 배지에 심어 활력이 인정되는 22～26 시간(결
핵균은 7일) 동안 배양한 세균을 사용하되 사용당일까지 37℃를 유지시켜야 
하며, 사용 세균의 농도는   ml 당 10 8이상이어야 한다 .
 ②(세균 시험균주  및 소독제 희석액 ) 제2조의 경수나 유기물희석액을 이용하며 , 
경수처리구는 경수로 , 유기물처리구는 유기물희석액으로 실시함을 원칙하되 , 
제3조제1항의 규정에 따라야 한다 .
 ③(소독제 시험용액 준비 ) 시험에 사용하는 소독제는 최종 시험균액과의 반응
액중에서 희석되는 농도를 고려하여 소독제 희석액을 준비한다 .
  *예시(최종 200 배 희석된 소독액의 효력을 측정할 경우 ) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml 에 소독제 2.5ml 을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 희석배수의 50% 인 100 배 희석된 소
독액을 준비한다 .
 ④(소독제의 희석법 ) 소독제의 유효 예상 희석배수가 500 배 이하일 경우는 
50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등으로 희석하되 , 그 이상의 예상 희석
배수 농도 및 더 정밀한 희석배수 산정을 위해서는 희석배수 농도를 달리할 수 
있다.
 ⑤(소독제 반응조건 ) 37℃ 의 세균 4ml 를 4℃의 5% 유기물희석액 96ml 에 섞은  
후에, 혼합액 2.5ml 를 꺼내어 4℃ 항온수조에 보관된 위의 [④(소독제의 희석
법)] 5개 시험관에 넣고 혼합한 다음 , 4℃에서 정확히 30 분간(아포세균과 결
핵균은 60 분간) 반응을 시킨다 . 이 때 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격
으로 실시하며 , 도중에 10 분마다 혼합하여  준다.
 ⑥(중화반응 및 증식 ) 정확히 30 분간의 반응이 끝나면 소독제의 효능을 중화하기  
위하여 즉시 1.0ml 를 꺼내어 37℃의  9.0 ml 의 중화배지에 넣고 혼합한 다
음, 각 소독제 희석별로 0.1ml 씩 5개의 시험관의 영양배지가 들어있는 시험
관에 넣어 혼합한 후에 37℃항온실에서 48 시간(결핵균은 5～7일) 증식한다 .- 18 - ⑦(세균증식여부의 판정 ) 세균증식의 여부는 제 3조제4항제1호에 따른다 .
 ⑧(대조군의 검정 등 ) 병원체 대조군은 경수 조건에서 소독제 없이 실험하고 
위의[⑥(중화반응 및 증식 )] 단계에서 병원체의 역가가 ㎖당 2×105 이상이 
확인되어야 한다 .- 19 -[별표2] 
바이러스의 소독제 효력시험 (제3조관련 )
1. 공시 바이러스
 효력시험에 사용하는 공시 바이러스주는 성상 및 출처를 입증할 수 있어야 한다 .
 
2. 세포주 등
   바이러스 종류의 생물학적 특성에 따라 적합한 세포 , 발육란 또는 실험동물 
등을 시험에 사용한다 . 
3. 배지시약 등
 ①(희석액 )선정된 세포증식에 적합한 배지와 관련시약을 사용하며 , 경수희석액 
및 유기물 희석액은 세균의 시험법에 준한다 . 단, 유기물 희석액에는 효모추출
액 대신에 5% 소태아혈청을 사용한다 .
 ②(중화배지 )소독제의 약품성분 중화배지는 사용세포에 적합한 배지에 비동화
된 10% 소태아혈청을 함유한 배지를 사용한다 . 
4. 바이러스 소독제 효력시험 
 ①(바이러스 배양 ) 계대배양 중의 활력있는 바이러스를 사용하되 바이러스의 
증식이 최대인 싯점에서 채독하여 사용직전까지 단시간 동안 얼음물에서 보
관한다 .
 ②(바이러스 시험균주 및 소독제 희석액 ) 제2조의 경수 및 유기물희석액을 이
용하며 경수처리구는 경수로 , 유기물처리구는  유기물희석액으로 실시함을 원
칙하되 , 제3조제1항의 단서규정에 따라야 한다 .
 ③(소독제 시험용액 준비 ) 시험에 사용하는 소독제는 최종 시험균액과의 반응- 20 -액중에서 희석되는 농도를 고려하여 소독제 희석액을 준비한다 .
  *예시(최종 200 배 희석된 소독액의 효력을 측정할 경우 ) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml 에 소독제 2.5ml 을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 희석배수의 50% 인 100 배 희석된 소
독액을 준비한다 .
 ④(소독제의 희석법 ) 소독제의 유효 예상 희석배수가 500 배 이하일 경우는 50, 
100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등으로 희석하되 , 그 이상의 예상 희석
배수 농도 및 더 정밀한 희석배수 산정을 위해서는 희석배수 농도를 달리할 수 
있다.
 ⑤(소독제 반응 ) 위의 ①항에서 증식된 4℃의 바이러스액 1.0 ml 를 위의 ②항의 
4℃희석액 19.0 ml 에 각각 섞은 후에 , 1분 간격으로 혼합액 2.5ml 를 꺼내어 
4℃에 있는 동량의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 넣고 혼합한 다음 , 
4℃에서 정확히 30 분간 반응을 시키며 도중에 10 분마다 혼합하여 준다 . 이 
경우 대조구 (처리구 -3) 를 반드시 포함시켜 처리한다 .
 ⑥(중화반응 ) 소독제와 병원체의 반응이 끝나면 소독제의 효능을 중화하기 위
하여 즉시 1.0ml 를 꺼내어 37℃의 동량의 중화배지에 넣고 혼합한 다음 적
합한 양을 세포 또는 발육란에 접종하여 바이러스 함량을 측정한다 .
 ⑦(바이러스 감염력 상실 정도 측정 ) 바이러스의 감염력이 상실된 정도는 일반
적으로 microplate titration 이나 plaque assay 방법을 사용한다 . 발육란을 이
용한 시험에서는 희석배수당 5개 이상의 발육란을  사용하여 0.2ml 를 요막강
(allantoic cavity) 에 접종하고 37℃ 배양기에서 5일간 배양하고 매일 검란하
며 바이러스의 증식유무를 검사한다 .
 ⑧(바이러스 함유량 계산 ) Kaerber method 로 한다 .
 ⑨(대조군의 검정 등 ) 병원체 대조군은 경수조건에서 소독제 없이 실험하고 
위의[⑥(중화반응 )] 단계에서 병원체의 역가가 ㎖당 2×105 TCID50 이상이 - 21 -확인되어야 하며 , 독성대조군에서는 소독제에 의한 세포독성 (종란을 사용하는 
경우 종란독성 )이 일어나지 않았음을 확인하여야 한다 .
 ⑩(유효배수 평가 ) 유효배수의 평가는 제 3조제4항제2호에 따른다 .
 ⑪(세균 대표균주의 시험결과 동시제출 ) 바이러스의 소독제시험은 [별표1] 에
서 정의한 「세균의 대표균주 」의 시험결과를 동시에 제출하여야 한다 .
 ⑫(결과활용 ) 경수 또는 유기물처리구의 시험결과는 각각 바이러스와 세균의 
소독제 시험결과 희석배수와 비교하여 높은 소독제 농도를 최대 권장희석배
수로 정한다 .- 22 -[별표3] 
곰팡이의 소독제 효력시험 (제3조관련 )
1. 공시 곰팡이균
  효력시험에 사용하는 공시 곰팡이균은 다음 대표균주를 사용함을 원칙으로 하고 , 
특정균주를 포함하여 시험에 사용된 균주의 성상 및 출처를 입증할 수 있어야 한다 . 
- (곰팡이의 대표균주 ) Tricophyton mentagrophytes 로 한다 .
2. 배지시약 등
 ①(곰팡이균배양배지 ) Saboraud dextrose agar (Glucose 2%, Neopeptone 
1%, agar 2%, pH6.1-6.3) 의 사면배지 또는 agar 를 제외한 액체배지 (glucose 
broth) 를 사용한다 .
 ②(기타재료 ) 시험관 (25 X 150mm), 교반기 , 항온수조 (4℃), 항온기 (37℃), 배양기
(25～30℃), 스톱워치 , 혈구계산판 , 도립현미경 , 페놀, 생리적 식염수 , 4mm loop, 
면천 등
 3. 곰팡이균 소독제 효력시험
 ①(곰팡이시험균주 배양 ) 곰팡이 배양은 3개월 이내의 계대 곰팡이를 사면 배
지에 심어 10 일 미만 동안 25℃～30℃ 에서 배양한 곰팡이를 접종균주로 사
용하거나 2～5℃ 에서 보관하여야 한다 .
 ②(곰팡이시험균주 포자부유액준비 ) 고체평판배지의 중심부에 곰팡이균을 심
은 다음 25℃～30℃ 에서 10 일 이상 15 일 이하 배양 한다 . 배지표면에 배양
된 균사체를 모아서 25ml 의 0.85% NaCl 용액에 넣은 후 잘 분산시킨다 . 균
사를 제거하기 위하여 면천으로 부유액을 여과시킨 후에 혈구계산판에 놓고 
농도를 측정 후 2℃～10℃ 에서 보관하며 , 4주 이내에 사용한다 . 시험에 사용- 23 -할 때 부유액의 농도가 5×106 conidia/ml 이 되도록 희석하여 사용한다 .
 ③(소독제 희석액 ) 제2조의 경수 및 유기물희석액을 이용하며 , 경수구는 경수
로, 유기물처리구는 유기물희석액으로 실시함을 원칙하되 , 제3조의 규정에 
따라야 한다 .
 ④(소독제 시험용액 준비 ) 시험에 사용하는 소독제는 최종 시험균액과의 반응
액중에서 희석되는 농도를 고려하여 소독제 희석액을 준비한다 .
  *예시(최종 200 배 희석된 소독액의 효력을 측정할 경우 ) 경수 또는 유기물에 
혼합된 시험균액 2.5ml 에 소독제 2.5ml 을 넣어 반응시키는 경우 소독제 희
석액은 2배 희석이 이루어지므로 최종 희석배수의 50% 인 100 배 희석된 소
독액을 준비한다 .
 ⑤(소독제의 희석법 ) 소독제의 유효 예상 희석배수가 500 배 이하일 경우는 50, 
100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 등으로 희석하되 , 그 이상의 예상 희석배수 
농도 및 더 정밀한 희석배수 산정을 위해서는 희석배수 농도를 달리할 수 있다 .
 ⑥(소독제 반응조건 ) 2.5ml 의 소독제 희석 용액과 phenol 대조군 용액을 단계
희석배열로 시험관에 넣은 다음 4℃의 항온수조에 넣어둔다 . 준비된 분생자
(conidia) 0.25ml 을 소독제 희석 용액의 첫 번째 시험관에 넣은 후 잘 섞어
주고 다시 항온수조에 넣는다 . 1분마다 0.25ml 의 분생자부유액을 다음 소독제 
희석액이  들어있는 시험관에 넣어준 후 섞어주고 항온수조에 넣어둔다 . 마지
막 시험관까지 위를 반복한다 .
 ⑦(중화반응 및 증식 ) 30 분간 반응 후 중화하기 위해 반응액을 4㎜ loop(10㎕:
각도 3°)로 채취한 후 10㎖의 glucose broth 에 접종한다 . 이를 다시 동일한 
방법으로 채취하여 각 희석 시료당 3개의 특수 glucose broth(0.05% 
sodium thioglycolate, 1.5% isooctylphenoxy-polyetho xy- ethanol 함유 
또는 0.07% lecithin, 0.5% polysorbate 80) 10㎖ 가 들어 있는 시험관에 
접종한다 . 접종한 시험관은 25-30℃ 에서 배양한다 . 페놀시험의 경우 10 분- 24 -간 반응 후 20㎖ glucose broth 에 접종하여 배양한다 .
  ⑧(대조군의 검정 등 ) 병원체 대조군은 위와 동일하게 처리하되 , 병원체 대조
군은 소독액 대신 희석액을 대체하여 위의 [⑦(중화반응 및 증식 )] 단계에서 
이상없음을 확인하여야 한다 . 또한 페놀 처리 병원체 (conidia) 는 20℃, 10 분
간의 페놀 노출에서 1/60 의 희석액 시험에서는 생존해서는 안된다 )
  ⑨(곰팡이증식여부의 판정 ) 10 일후 곰팡이의 증식여부를 판정한다 . 3개의 시험
관 중 2개 이상의 시험관에서 곰팡이의 증식이 관찰될 경우 소독제 효력이 
없는 것으로 판정한다 .- 25 -[별표4] 
훈증 등 가스제형 소독제 효력시험 (제3조관련 )
1. 공시 미생물
  효력시험에 사용하는 일반 병원체의 공시 균주는 다음 각 호의 대표균주를 사용함을 
원칙으로 하고 , 특정균주를 포함하여 시험에 사용된 균주의 성상 및 출처를 입증할 
수 있어야 한다 . 
   (세균의 대표균주 ) Salmonella Typhimurium 으로 한다 .
   (아포세균의 대표균주 ) Clostridium perfringens 로 한다 .
   (곰팡이의 대표균주 ) Tricophyton mentagrophytes 로 한다 .
2. 배지시약 및 담체 준비
 ①(일반세균배지 ) 고압 멸균된 영양배지 (nutrient broth) 를 사용한다 . 
 ②(아포세균배지 ) 아포세균배지 (cooked meat medium 또는 thioglycolate medium) 
를 사용한다 . 그 외 특정세균을 사용할 경우 생물학적 특성에 따라 적합한 배지를 사
용한다 .
 ③(곰팡이배양배지 ) Saboraud dextrose agar 의 사면배지 또는 agar 를 제외한 액체
배지(glucose borth) 를 사용한다 .
 ④바이러스의 경우 선정된 세포증식에 적합한 배지와 관련시약을 사용한다 .
 ⑤(담체의 규격 )담체는 스텐리스 스틸 (AISI 304 이상의 규격 )을 사용하는 것을 기본
으로 하며 , 지름 2cm, 두께 1.2∼1.5mm 의 크기로 조작이 용이한 크기여야 한다 . 
 ⑥(담체의 전처리 )스텐리스 담체는 중성세제로 세척하고 마지막 헹굼 시에는 증류수
를 사용한다 . 건조된 담체는 고압멸균기를 이용하여 121℃에서 15 분간 멸균한 것을 
UV 등이 켜진 클린벤치에서 건조시켜 실험에 사용한다 . 
 ⑦(중화배지 ) 세균의 경우 영양배지에 20%(w/v) 가 되도록 효모추출물 (yeast 
extract) 를 증류수에 녹인 다음 고압멸균하여 사용하며 , 바이러스의 경우 20%(w/v) - 26 -가 되도록 소알부민 (bovine serum albumin) 을 증류수에 녹인 다음 0.45㎛ 포아 사
이즈 필터로 여과하여 사용한다 .
 ⑧(희석액 ) 세균, 곰팡이의 경우 0.85% 멸균생리식염수를 사용하고 바이러스의 경우 
세포증식에 적합한 배지를 희석액으로 사용한다 .
3. 미생물의 배양
 ①(세균, 곰팡이 ) 세균과 곰팡이의 배양은 「세균 등의 소독제 효력시험 」 및 「곰팡
이의 소독제 효력시험 」3의 ①,②항을 따른다 .
 ②(바이러스 ) 바이러스 종류의 생물학적 특성에 따라 적합한 세포 , 발육란 또는 실험
동물 등을 시험에 사용한다 .
4. 유기물 조건 및 미생물의 농도
   유기물은 균액과 1:1 로 섞어 최종농도가 각각 10% 가 되게 설정하여 사용하며 , 시험
에 사용할 미생물은 계대배양 중의 활력이 인정되는 미생물을 사용하되 농도는 세
균의 경우 1×108 CFU/mL, 108 EID àà 또는 TCID àà/mL 이상, 곰팡이의 경우 
5×10 à conidia/ml 을 사용해야 한다 .
   ①(세균, 곰팡이 ) 20% 효모추출물 또는 20% 탈지유를 균액과 1:1 비율로 희석하여 
담체에 100㎕씩 접종하고 유기물의 농도를 최종농도가 10% 가 되게 설정한다 .
   ②(바이러스 ) 20% 효모추출물 , 20% 소알부민를 사용하되 균액과 1:1 비율로 희석
하여 담체에 100㎕씩 접종하고 유기물의 농도를 최종농도가 10% 가 되게 설정한다 .
5. 시험군 및 대조군의 설정
 ①(시험군 및 대조군 수 )최소 3개 이상의 담체를 사용한다 .
 ②(독성대조군 )균액을 접종하지 않은 담체를 훈증 및 가스제형의 소독제에 노출시켜 
중화과정을 거친 후 세포 및 발육란에 접종하여 잔류 소독제로 인한 독성이 있는지 
여부를 판단한다 .
6. 균액을 접종한 담체의 건조- 27 -실험 공간의 부피 (m³)가스 및 훈증제 
발생 위치로부터 담체 거리 (m) 
30-40 2.6 
40-50 3.0 
50-60 3.3 
60-70 3.6 
70-80 3.9 
80-90 4.1 
90-100 4.4 
100-110 4.6 
110-120 4.8 
120-130 5.0 
130-140 5.2 
140-150 5.4    담체는 클린벤치 내에서 공기흐름이 있는 상태로 건조하며 건조시간은 60 분을 넘지 
않도록 하여야 하며 , 건조에 대한 회수율을 제시하여야 한다 . 건조 후 회수한 균액
은 세균 , 곰팡이의 경우 10 àCFU/ml 이상이어야 하며 , 바이러스의 경우 6.0 TCID à
à/ml 이어야 한다 .
7. 온도 및 습도 
   시험을 실시할 공간의 온도는 20±2℃, 습도는 65%∼70% 로 유지되어야 한다 . 제품
의 특성에 따라 달리 정할 수 있다 . 
8. 담체배치 및 위치설정
  ①(담체 배치 )시험을 실시한 공간을 위 , 중간, 아래로 나누고 담체를 위치시키며 , 가
스 또는 훈증제 발생위치로부터 수직과 수평하게 담체를 설치하여 담체의 배치나 위
치에 따른 효력변화가 없음을 밝히거나 공간의 위치에 따른 가스농도 차이가 없음을 
증명할 수 있는 자료를 제출하여야 한다 .
  ②(가스 및 훈증제 발생 위치로부터 담체 거리 )- 28 -9. 가스 농도 및 노출시간의 설정
   시험을 실시한 공간에 가스가 채워지는 시간에 대한 자료를 제출하여야 하며 가스농
도가 최고점이 되는 순간부터 노출시간을 설정하여야 한다 . 가스 및 훈증제의 농도
를 20-50ppm/m³ 차이를 두고 5개 군으로 설정하거나 공간의 크기를 달리하여 농
도를 조절하여 효력시험을 수행하여야 한다 . 다만 훈증제의 경우 제품의 용량 및 
특성에 따라 다르게 정할 수 있다 .
10. 중화반응
   소독제 노출 등의 조작 뒤 담체에 남아있는 균을 회수하기 위해서 세균의 경우 20% 
효모추출물 , 바이러스의 경우 20% 소알부민 10ml 이 들어있는 50ml 튜브에 담체를 
무균적으로 넣고 10 분 동안 강하게 교반한다 .
  ①(세균) 중화반응이 끝난 액체를 희석액을 이용하여 10 진 희석하여 고체배지에 접
종하여 세균 함량을 측정한다 . 
  ②(바이러스 ) 중화반응이 끝난 액체를 희석액을 이용하여 10 진 희석하여 세포 또는 
발육란에 접종하여 바이러스 함량을 측정한다 . 
11. 결과의 확인
   대조군 (소독제에 노출되지 않은 그룹 )과 비교하여 세균의 경우 10 à 감소/담체, 바이
러스의 경우 10⁴감소/담체, 아포세균의 경우 10³ 감소/담체, 곰팡이의 경우 10⁴
감소/담체를 소독효과가 있다고 인정하며 , 실험을 3회 반복하여 감소치 (reduction) 
값이 통계적으로 유의하여야 한다 .