식품의약품안전처 공고 제2015-324 호
- 1 -식품의약품안전처 공고 제2015-324 호
축산물위생관리법
제4조제2항의규정에따라
축산물의가공기준및
성분규격
을다음과같이개정함에있어개정의취지와내용을국민에게
미리알려의견을듣고자
행정절차법
제46조의규정에의하여다음과
같이공고합니다.
 2015년10월14일
 식품의약품안전처장
축산물의 가공기준 및성분규격
 일부개정고시 (안)행정예고
1.개정 이유
다양한제품생산․개발을위해유청을원료로하는치즈도정의에포함
될수있도록개정하고,유지방함량이낮은유가공품을원료로사용하여제
조한자연치즈가유지방규격을적용받지않도록단서조항을신설하고자함
제품의품질변화에영향을미치지않고국제적으로사용이허용된충전
포장가스인이산화탄소또는질소와이산화탄소가혼합한가스를조제유
류의충전포장시사용할수있도록허용하고,조제유류의셀레늄시험법
신설및국제적인조화가필요한일부시험법을개정하여기준·규격의신
뢰도를제고하고자함- 2 -2.주요 내용
가.자연치즈 정의 및규격 개정[안제2,1,타,(1)및(4)]
1)현행자연치즈는유청을제거하여생산하도록정의하고있어유청을
원료로하는치즈도정의에포함될수있도록개정
2)무지방·저지방우유류,탈지분유등지방함량이낮은유가공품을원료로
사용하여제조한치즈가유지방규격을적용받지않도록단서조항신설
나.조제유류의 가공기준 개정[안제2,1,러,(3),(라)]
1)제품의품질변화에영향을미치지않고국제적으로사용이허용된
충전포장가스의국내사용허용필요
2)조제유류의제품충전포장시이산화탄소또는질소와이산화탄소를
혼합한가스를사용할수있도록허용
다.조제유류 시험법 신설 및개정[안제3,Ⅲ,2,차및제3,Ⅲ,3,마
및제3,Ⅲ,3,차및제3,Ⅲ,8,나]
1)조제유류중셀레늄기준신설(식약처고시제2014-7호,‘14.2.6)에따른
시험법등재필요
2)조제유류비타민중나이아신과B12시험법의기기분석방법추가
3)이물시험법에포함되어있는조제유류의탄화물시험법을분리하여
해당품목이정확한시험방법을적용할수있도록세분화하여개정- 3 -라.우유류 등의 포스파타제 시험법 개정[안제3,Ⅴ,1,가,(7)]
1)현행포스파타제시험결과해석이실험자의주관적인판단으로이루
어지고있어객관화할수있는시험법마련필요
2)시험결과판정이객관적으로이루어질수있는정량시험법도입
3.의견 제출
축산물의가공기준및성분규격
일부개정고시(안)에대하여의견이
있는단체또는개인은 2015 년12월14일까지다음사항을기재한의견서를
식품의약품안전처 (우편번호:28159주소:충청북도청주시흥덕구오송읍
오송생명2로187(연제리643번지)오송보건의료행정타운 식품의약품안전처 ,
참조:축산물기준과,전화043-719-3856 ∼3860,팩스043-719-3850)로제출
하여주시기바랍니다.
가.예고사항에대한항목별의견(찬․반여부와그이유)
나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 4 -식품의약품안전처 고시 제2015- 호
축산물위생관리법
제4조제2항의규정에따른
축산물의가공기준및
성분규격
(식품의약품안전처 고시제2015-72호,2015.10.6.)을다음과같이
개정고시합니다.
2015년월일
식품의약품안전처장
축산물의 가공기준 및성분규격 일부개정고시 (안)
축산물의가공기준및성분규격일부를다음과같이개정한다.
제2.1.타.(1)을다음과같이한다.
(1)정의
자연치즈라함은원유또는유가공품에유산균,단백질응유효소,유기산
등을가하여응고시킨후유청을제거하여제조한것을말한다.또한,유
청또는유청에원유,유가공품등을가한것을농축하거나가열응고시
켜제조한것도포함한다.- 5 -항목
유형유고형분
(%)유지방
(%)
경성치즈 (현행과 같음) (현행과 같음)
반경성치즈 (현행과 같음) (현행과 같음)
연성치즈 (현행과 같음) (현행과 같음)
생치즈 (현행과 같음) (현행과 같음)제2.1.타.(4).(다)를다음과같이한다.
※단,유지방이없거나낮게조정한유가공품을원료로하여유지방함량이
3.6%미만이되도록제조한자연치즈는유지방성분규격적용을제외할수있다.
제2.1.러.(3).(라)를다음과같이한다.
(라)조제분유,성장기용조제분유,기타조제분유는질소,이산화탄소또는
질소와이산화탄소를혼합하여자동포장공정으로충전하여야한다.
제3.Ⅲ.2.차를다음과같이신설한다.
차.셀레늄
시료약0.5g을취하여초고압초음파분해용기에 넣고질산과과산화수
소를가한후분해한다.투명혹은미황색이된분해액을일정량으로한
것으로시험용액으로한다.시험용액중셀레늄의양은1∼10ng/mL
이되게조정하고Ⅲ.일반시험법.7.유해성금속시험법나.측정(3)
ICP-MS법에따라시험한다.
제3.Ⅲ.3.마.(3)을다음과같이신설한다.- 6 -(3)액체크로마토그래피에 의한정량
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조제분유및성장기용조제우유등조제유류에
적용한다.
(나)분석원리
시료중의나이아신을헥산설폰산나트륨이 함유된초산용액으로추출
하고역상칼럼으로분리한후액체크로마토그래 프/자외부흡광검출기를
이용하여정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
액체크로마토그래 프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮교반기
㉯원심분리기
㉰고체상추출장치
㉱진공펌프
㉲HLB카트리지(200mg,6mL)또는이와동등한것
㉳용매여과장치
㉴초자기구:메스플라스크,원심분리관
㉵분석저울:0.1mg까지측정이가능한것- 7 -(라)시약및시액
①메탄올,헥산:액체크로마토그래피용 또는이와동등한것
②초산,수산화나트륨,헥산설폰산나트륨 :특급시약또는이와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ 이상인것
④이동상
㉮5mM헥산설폰산나트륨이 함유된0.1%초산용액:초산1mL을1
L용량플라스크에넣은후증류수로약900mL까지채우고,헥산
설폰산나트륨을 5mM농도가되도록넣고혼합한후증류수로1
L를맞춘다.
㉯5mM헥산설폰산나트륨이 함유된메탄올:메탄올을약900mL
까지채우고,헥산설폰산나트륨을 5mM농도가되도록넣고혼
합한후메탄올로1L를맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액:나이아신0.1g,나이아신아미드0.1g을100mL용량플라
스크에넣고80%메탄올/증류수(5:5)로용해하면서용량을맞춘다.
②표준용액:표준원액1mL을취하여100mL용량플라스크에넣고
80%메탄올/증류수(5:5)로용량을맞추어10㎍/mL이되도록조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액을80%메탄올/증류수(5:5)로희석하여
0.01～5mg/L가되도록조제한다.
(바)시험용액조제- 8 -기기분석조건
컬럼C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
이동상A:0.1%초산/5mMhexanesulfonate
B:35%(0.1%초산/5mMhexanesulfonate)/65%MeOH①추출
균질화된시료1～5g을정밀히달아5mM헥산설폰산나트륨이 함유된
0.1%초산용액을넣어진탕하며녹이고100mL로정용한다.이용액을
30분간초음파추출한후추출액을원심분리기를사용하여0℃,9000
rpm에서30분간원심분리한다.상등액을취해membranesyringe
filter(poresize0.2㎛,25mm,)로여과하여시험용액으로한다.분석
시정제가필요할경우100%초산을이용하여pH를4.1～4.5가되도
록조정한후정용하고원심분리,필터여과를실시한후아래와같이
HLB카트리지를이용하여정제과정을추가로실시한다.
※정제
HLB카트리지에메탄올,증류수5mL을흘려주고,뒤이어①의추출
용액5mL을통과시킨다.헥산5mL로카트리지를세척하고,80%메
탄올5mL로나이아신을10mL메스플라스크에용출시킨후증류수를
가하여10mL로하였다.이용액을0.2μm나일론멤브레인필터로
여과하여시험용액으로한다.
(사)시험조작
①액체크로마토그래 프조건- 9 -유속 1mL/min
주입량 20uL
검출파장(UV) 260nm
컬럼온도 40℃
기울기용리시간(분)A(%)B(%)
0.0 99 1
3.0 99 1
13.0 70 30
20.0 70 30
②정량시험
표준용액과시험용액을각각주입하여피크의머무름시간을비교하고
동일물질인지정성확인후표준용액의피크면적또는높이에의해
구한검량선을사용하여시험용액중의나이아신의농도(㎍/mL)를구
하고,검사시료중나이아신의함량(㎍/100kcal)을산출한다.
나이아신,나이아신아미드함량(µg/100kcal)
=S×a×b/시료채취량(g)×100/1g당kcal
S:검량선에서구한나이아신혹은나이아신아미드농도(µg/mL)
a:시험용액의최종부피(mL)
b:시험용액의희석배수
니코틴산으로서의나이아신함량(㎍/g)=(니코틴산함량+1.008×
니코틴아미드함량)
제3.Ⅲ.3.차.(1)의제목중“고속액체크로마토그라 프”를“액체크로마토- 10 -그래프”로한다.제3.Ⅲ.3.차.(라).1)“고속액체크로마토그라 프”를“액체
크로마토그래프”로한다.
제3.Ⅲ.3.차.(2)를다음과같이신설한다.
(2)액체크로마토그래 프/질량분석기에의한정량
(가)시험법적용범위
조제유류에적용한다.
(나)장치및기구
①장치
액체크로마토그래 프/질량분석기(LC/MS/MS)
②기구
㉮질소농축기
㉯용매여과장치
㉰진공펌프
㉱HLB카트리지(200mg,6mL)또는이와동등한것
㉲초자기구:시험관
㉳분석저울:0.1mg까지측정이가능한것
(다)시약및시액
①증류수:3차증류수로18ΜΩ 이상인것
②클로로포름,메탄올,아세토나이트릴:액체크로마토그래피용 또는이와- 11 -동등한것
③암모늄포메이트,아세트산:특급시약또는이와동등한것
④20mMHCO2NH4:HCO2NH41.261g을증류수에녹이고전량을1L가
되게한다.
(라)표준용액의조제
①표준원액:비타민B12(Cyanocobalamin)100mg을100mL용량플라스크에
넣은후증류수로녹여조제한다.
②표준용액:표준원액을증류수로단계별희석하여조제한다.
(마)시험용액의조제
①추출
고체시료는약1g,액체시료는약10g을원심분리관에정밀히달아(고체
시료는증류수10mL로용해한다.)클로로포름10mL을가하여실온에서
5분간진탕한다.4℃에서9,000rpm으로15분간원심분리한다.상등액을
멤브레인필터로여과하여고체시료는정제과정을수행하고,액체시료의
경우는시험용액으로한다.
②정제
HLB카트리지에메탄올5mL을흘려주고,뒤이어물(아세트산으로pH
4.2로조정)5mL를흘려카트리지를활성화시킨후①의추출용액5
mL을통과시킨다.5%메탄올5mL을흘려주어세척하고시험관에메탄올
5mL로용출하여질소하건조한다.건조잔류물에물1mL을가하여- 12 -성분Precursorion(m/z)Fragmention(m/z)
비타민B12678 147,359용해시키고시험용액으로한다.
(바)시험조작
①액체크로마토그래 프/질량분석기의조건
-칼럼:C18(2.1mm×50mm,1.7㎛)또는이와동등한것
-칼럼온도:35℃
-이동상:20mMHCO2NH4:아세토나이트릴(80:20)에서(20:80)으로농도
균배한다.
-유속:0.4mL/min
-질량분석기조건
(1)Ionization:ESIpositive
(2)Capillarytemperature:500℃
(3)Collisiongas:Ar
(4)Nebulizergas:N2
(5)질량분석기분석을위한이온
②정량시험
표준용액과시험용액을각각주입하여피크의머무름시간등을비교하고
동일물질인지정성확인후표준용액피크의넓이또는높이에의해
구한검량선을사용하여시험용액의비타민B12농도(ng/mL)를구하고,- 13 -비타민B12
(μg/100kcal)=S×a×b
×100
×100
검체량(g)10001g당kcal다음식에의하여검체중비타민B12의함량(μg/100kcal)을구한다.
S:시험용액중의비타민B12의농도(ng/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:시험용액의희석배수
제3.Ⅲ.8.나.(3)의제목과본문을다음과같이한다.
(3)아이스크림분말,가당연유,가당탈지연유,전지분유,탈지분유,가당분유
검사시료100g을1L의비이커에넣고2%EDTA용액100mL를가하여
잘섞어서덩어리가없도록한후저으면서2%EDTA용액400mL를
천천히가한다.
저어섞는동안에차차황색의반투명한액체가되며약30분방치하면
완전히녹는다.이를브후나깔때기또는힐슈깔때기로흡인여과하여
여과지상의이물을검사한다.
제3.Ⅲ.8.나중(4).(5).(6)을각각(5).(6).(7)로하고(4)를다음과같
이신설한다.
(4)조제분유·조제우유,성장기용조제분유·성장기용조제우유,기타조제- 14 -분유·기타조제우유(탄화물)
1)분석원리
조제분유를2%EDTA용액에녹인후MilkSedimentDisk를통과
시켜서Disk상에남아있는이물이나탄화물의존재여부를관찰한다.
2)장치
가)MilkSedimentDisk:33mm
나)Filterationapparatus
다)브후나깔때기또는힐슈깔때기
라)진공펌프
3)시약및시액
2%EDTA(Ethylene-diamine-tetraaceticacid)solution:EDTA20
g을증류수980mL에넣고40℃항온수조에넣어잘용해시킨후
사용한다.
4)시험방법
검사시료100g을1L의비이커에넣고2%EDTA용액100mL를
가하여잘섞어서덩어리가없도록한후저으면서2%EDTA용액
400mL를천천히가한다.
저어섞는동안에차차황색의반투명한액체가되며약30분간방치
하면완전히녹는다.
브후나깔때기또는힐슈깔때기에MilkSedimentDisk를갈고시료- 15 -
용액을흡인여과하고,비이커에남아있는잔류물을증류수로씻어내어
흡인여과한다.
MilkSedimentDisk상에남아있는탄화물을판정표와비교하여육안
으로판정한다.
[탄화물표준판정표]
제3.Ⅴ.1.가.(7).(가)를다음과같이한다.
(가)비색법
1)시약
가)중성n-부탄올(비점116～118℃)
색이없는것이라야한다.
나)붕산염완충액
붕산(Na2B4O7
10H2O)28.427g을물900mL에녹이고수산화나트륨3.27g을
가하여녹인다음물을가하여1L로한다.
다)기질완충액
결정페닐인산2나트륨(C6H5PO4Na2)0.5g을작은시험관에넣고물5mL로
녹인다.다음붕산염완충액0.5mL를가하여잘섞고BQC시액0.04mL를
가하여충분히진탕혼합한후5분간정치한다.이때만일청색을나타내- 16 -면n-부탄올2mL를가하여잘흔들어섞고생성한인도페놀색소를
추출한다.정치한다음위의부탄올층을버리고아래층의남은액에붕산
염완충액100mL및물을가하여1L로한다.이액은분해되기쉬우므로
필요한양만을만들어냉장보존한다.pH9.6이다.
라)BQC시액
2-6-DibromoquinoneChlorimide(BQC)40mg을아세톤이함유하지않은
메탄올10mL에녹여착색병에넣어밀전하여냉장한다.
마)표준액
적색액:염화코발트(CoCl2
6H2O)59.59g을1%염산에녹여1L로한다.
청색액:황산동(CuSO4
5H2O)62.425g을1%염산에녹여1L로한다.
황색액:염화제2철(FeCl3
6H2O)45.05g을1%염산에녹여1L로한다.
위의액에서적색액0.4mL,청색액1.5mL및황색액0.5mL를취하여
이에물2.6mL를가하고혼합하여표준액으로한다.
2)시험방법
경질시험관에균일하게한검액0.5mL및기질완충액5mL를가하여진탕
혼합하고40～42℃의수욕중에서10분간보온한다.다음BQC시액6방울
(0.12mL)을가하여잘흔들어5분간방치하고이에n-부탄올5mL를가하여
시험관을10회거꾸로하여섞고원심분리한후정치하면상층에투명한
알코올층이분리된다.이알코올층의색을표준액의색과비교할때알코
올층의색이더진하여서는아니된다.
제3.Ⅴ.1.가.(7).(나)를다음과같이신설한다.- 17 -(나)흡광도측정법
1)분석원리
검액에서완충액,CQC시액,n-부탄올을이용하여상층의투명한알
코올층을분리후Spectrophotometer를이용하여흡광도측정후
phenol에대한표준정량곡선의값과비교한다.
2)장치
분광광도계:650nm파장을측정가능한것
3)시약및시액
가)n-부탄올(비점116-118°C)
나)Tergitoltype4(=Niaprooftype4)
음이온의이계면활성제는7-ethyl2-methyl-4-undecanolhydrogen
sulfate,sodiumsalt(SigmaNo.4)이다.이것이외의다른것을사용
해서는안된다.
다)물:증류수또는이와동등한것
라)6M염산액
마)AMP완충액
10.0g의2-amino-2-methyl-1-propanol을물에녹인다.6M염산액을
이용하여pH를10.1로맞추고10mLTernitoltype4를넣은후1L의
증류수를첨가한다.
바)기질완충액(Buffersubstrate)- 18 -0.5g의phenol-freecrystallinedisodiumphenylphosphate를AMP
buffer에넣고AMPbuffer500mL로희석한다.이는매일새로만
들어사용한다.
사)촉매시액
200mg의CuSO45H2O를증류수100mL에녹인다.
아)CQC시액
40mg의crystalline2,6-dichloro-quinone-chloroimide를10mL
MeOH에녹인후착색병에넣어밀전하여냉장보존한다.1주일이
지나거나색이갈색으로변한경우폐기한다.
자)CQC시액-촉매시액혼합액
동일양의CQC시액과촉매시액을섞는다.매일새로운용액을제조해
사용한다.
타)페놀표준액
①표준원액:1.000gpurephenol을측정하여1L의플라스크에넣어
0.1NHCl과혼합하여희석시킨다.(1mL=1mgphenol)이용
액은냉장보관으로2∼3개월간사용가능하다.
②표준용액:100㎕의표준원액을100mL의AMP완충액에희석시켜
섞는다.(1mL=1㎍phenol)매일새로만들어사용한다.
③검량선용표준용액- 19 -0.0,0.25,0.5,1.0,2.5,5.0mL의표준용액에각각5.0mL의AMP
완충액을넣는다.각각0.5mL의물을추가하여혼합한다.
4)시험방법
시료2개이상을0.5mL씩수집한다.하나는분석용시료이고,하나는
대조군으로사용한다.대조군으로사용할시료를2분동안끓는물에
가열하고얼음에식힌다.분석용시료와대조군시료에5mL의AMP
buffersubstrate를첨가하고vortex나inversion을이용하여섞어준다.
검사용시료,대조군용시료표준발색용액을15분동안40±1°C의
온탕수조에서정치시킨다.정치시키는동안시료를한번잘섞어주도록
한다.
온탕수조에서꺼낸후CQC시액-촉매시액혼합액을0.2mL추가한다.
잘섞어준후,40°C온탕수조에서다시5분간정치시킨다.이후온탕
수조에서꺼낸후얼음수조에서5분간냉각시킨다.
3mL의부탄올을첨가시킨튜브를6회가량뒤집으며흔들어준다.얼음
수조에서5분간냉각시키고2400xg에서5분간원심분리한다.
내부에있는부탄올층(상층)을분리한다.부탄올추출물에서흡광도를
흡광광도계를이용하여650nm에서측정한다.검량선용표준용액들로
검량선을구한다.각시료마다가열된대조군용시료에서의㎍
phenol/mL값을빼주어검사대상시료의페놀당량값(㎍phenol/mL
값)을구한다.최종값의페놀당량값이2㎍phenol/mL보다크면- 20 -안된다.0이하로값이계산되어나오면0으로기록한다.
부 칙<제2015- 호,‘15. ..>
제1조(시행일)이고시는고시한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행후최초로제조·가공또는수입(선
적일기준)하는축산물부터적용한다.
제3조(검사중인축산물에관한경과조치)이고시시행당시접수되어검사
가진행중인사항에대하여는종전의규정을적용한다.
제4조(자연치즈의정의및규격에관한경과조치)제2.1.타.(1)및(4)의
개정규정에도불구하고,이고시시행당시「식품위생법」제7조및
「식품의기준및규격(식품의약품안전처 고시)」을적용받는제품은
고시한날부터2년까지는종전의규정에따른다.- 21 -현 행 개정안
제1.(생략)
제2.축산물별기준및규격
1.유가공품
가.∼카.(생략)
타.자연치즈
(1)정의
자연치즈라함은원유또는유
가공품에유산균,단백질응유효소,
유기산등을가하여응고시킨
후유청을제거하여제조한것을
말한다.
(2)～(3)(생략)
(4)성분규격
(가)∼(나)(생략)
(다)유고형분및유지방
제1.(현행과같음)
제2.축산물별기준및규격
1.유가공품
가.∼카.(현행과같음)
타.자연치즈
(1)정의
-------------------------
-------------------------
-------------------------
-------------------------
말한다.또한,유청또는유청에
원유,유가공품등을가한것을
농축하거나가열응고시켜제조
한것도포함한다.
(2)～(3)(현행과같음)
(4)성분규격
(가)∼(나)(현행과같음)
(다)유고형분및유지방
- 22 -항목
유형유고형분
(%)유지방
(%)
경성치즈 (생  략) (생  략)
반경성치즈 (생  략) (생  략)
연성치즈 (생  략) (생  략)
생치즈 (생  략) (생  략)
<신설>
파.∼더.(생략)
러.조제유류
(1)∼(2)(생략)
(3)가공기준
(가)∼(다)(생략)
(라)조제분유,성장기용조제분유,
기타조제분유는 질소가스를
넣어자동포장공정으로
충전하여야한다.
(마)∼(사)(생략)
(4)∼(5)(생략)
머.∼서.(생략)
2.∼3.(생략)항목
유형유고형분
(%)유지방
(%)
경성치즈 (현행과 같음)(현행과 같음)
반경성치즈 (현행과 같음)(현행과 같음)
연성치즈 (현행과 같음)(현행과 같음)
생치즈 (현행과 같음)(현행과 같음)
※단,유지방이없거나낮게조정한
유가공품을원료로하여유지방
함량이3.6%미만이되도록제
조한자연치즈는유지방성분규격
적용을제외할수있다.
파.∼더.(현행과같음)
러.조제유류
(1)∼(2)(현행과같음)
(3)가공기준
(가)∼(다)(현행과같음)
(라)---------------------
------------- 질소,이산
화탄소또는질소와이산화
탄소를혼합하여자동포장
공정으로충전하여야한다.
(마)∼(사)(현행과같음)
(4)∼(5)(현행과같음)
머.∼서.(현행과같음)
2.∼3.(현행과같음)- 23 -
제3.축산물시험방법
Ⅰ～Ⅱ.(생략)
Ⅲ.일반시험법
1.(생략)
2.무기질
가.∼자.(생략)
<신설>
3.비타민류
가.∼라.(생략)
마.니코틴산(나이아신)
(1)∼(2)(생략)
<신설>제3.축산물시험방법
Ⅰ～Ⅱ.(현행과같음)
Ⅲ.일반시험법
1.(현행과같음)
2.무기질
가.∼자.(현행과같음)
차.셀레늄
시료약0.5g을취하여초고압
초음파분해용기에 넣고질산과
과산화수소를가한후분해한다.
투명혹은미황색이된분해액을
일정량으로한것으로시험용액
으로한다.시험용액중셀레늄의
양은1∼10ng/mL이되게조정
하고Ⅲ.일반시험법.7.유해성
금속시험법나.측정(3)
ICP-MS법에따라시험한다.
3.비타민류
가.∼라.(현행과같음)
마.니코틴산(나이아신)
(1)∼(2)(현행과같음)
(3)액체크로마토그래프에의한정량
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용
조제분유및성장기용조제우유- 24 -등조제유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의나이아신을헥산설
폰산나트륨이함유된초산용액
으로추출하고역상칼럼으로
분리한후액체크로마토그래프
/자외부흡광검출기를이용하여
정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
액체크로마토그래프/자외부흡광
검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮교반기
㉯원심분리기
㉰고체상추출장치
㉱진공펌프
㉲HLB카트리지(200mg,6
mL)또는이와동등한것
㉳용매여과장치
㉴초자기구:메스플라스크,원심
분리관
㉵분석저울:0.1mg까지측정이
가능한것
(라)시약및시액
①메탄올,헥산:액체크로마토- 25 -그래피용또는이와동등한것
②초산,수산화나트륨,헥산설
폰산나트륨:특급시약또는
이와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ 
이상인것
④이동상
㉮5mM헥산설폰산나트륨이 
함유된0.1%초산용액:
초산1mL을1L용량
플라스크에넣은후증류
수로약900mL까지채
우고,헥산설폰산나트륨을
5mM농도가되도록넣고
혼합한후증류수로1L를
맞춘다.
㉯5mM헥산설폰산나트륨이 
함유된메탄올:메탄올을
약900mL까지채우고,
헥산설폰산나트륨을 5
mM농도가되도록넣고
혼합한후메탄올로1L를
맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액:나이아신0.1g,나- 26 -이아신아미드0.1g을100
mL용량플라스크에넣고
80%메탄올/증류수(5:5)로
용해하면서용량을맞춘다.
②표준용액:표준원액1mL을
취하여100mL용량플라스
크에넣고80%메탄올/증류수
(5:5)로용량을맞추어10
㎍/mL이되도록조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액을
80%메탄올/증류수(5:5)로
희석하여0.01～5mg/L가
되도록조제한다.
(바)시험용액조제
①추출
균질화된시료1～5g을정밀히
달아5mM헥산설폰산나트
륨이함유된0.1%초산용액을
넣어진탕하며녹이고100
mL로정용한다.이용액을
30분간초음파추출한후추
출액을원심분리기를사용하여
0℃,9000rpm에서30분간
원심분리한다.상등액을취해
membranesyringefilter
(poresize0.2㎛,25mm,)로- 27 -기기분석조건
컬럼C18(4.6×250mm,5μm)
또는이와동등한것
이동상A:0.1%초산/5mM
hexanesulfonate여과하여시험용액으로한다.
분석시정제가필요할경우
100%초산을이용하여pH를
4.1～4.5가되도록조정한후
정용하고원심분리,필터여과를
실시한후아래와같이
HLB카트리지를이용하여
정제과정을추가로실시한다.
※정제
HLB카트리지에메탄올,증류수
5mL을흘려주고,뒤이어①의
추출용액5mL을통과시킨다.
헥산5mL로카트리지를세척
하고,80%메탄올5mL로
나이아신을10mL메스플라
스크에용출시킨후증류수를
가하여10mL로하였다.이
용액을0.2μm나일론멤브
레인필터로여과하여시험
용액으로한다.
(사)시험조작
①액체크로마토그래 프조건- 28 -B:35%(0.1%초산/5mM
hexanesulfonate)/65%
MeOH
유속1mL/min
주입량 20uL
검출파
장(UV)260nm
컬럼온도40℃
기울기
용리시간(분)A(%)B(%)
0.0991
3.0991
13.07030
20.07030
②정량시험
표준용액과시험용액을각각
주입하여피크의머무름시
간을비교하고동일물질인지
정성확인후표준용액의피
크면적또는높이에의해구한
검량선을사용하여시험용액
중의나이아신의농도(㎍
/mL)를구하고,검사시료중
나이아신의함량(㎍/100kcal)을
산출한다.
나이아신,나이아신아미드함
량(µg/100kcal)=S×a×b/시료채
취량(g)×100/1g당kcal
S:검량선에서구한나이아신혹- 29 -
바.∼자.(생략)
차.비타민B12
(1)고속액체크로마토그라 프(육방
전환밸브시스템)에의한정량
(라)시험조작
1)고속액체크로마토그래 프(육
방전환밸브시스템)의조건
<신설>은나이아신아미드농도
(µg/mL)
a:시험용액의최종부피(mL)
b:시험용액의희석배수
니코틴산으로서의나이아신함
량(㎍/g)=(니코틴산함량+
1.008×니코틴아미드함량)
바.∼자.(현행과같음)
차.비타민B12
(1)액체크로마토그래 프(육방전환
밸브시스템)에---------
(라)시험조작
1)액체크로마토그래 프(육방전
환밸브시스템)의조건
(2)액체크로마토그래 프/질량분석
기에의한정량
(가)시험법적용범위
조제유류에적용한다.
(나)장치및기구
①장치
액체크로마토그래 프/질량분석기
(LC/MS/MS)
②기구
㉮질소농축기
㉯용매여과장치
㉰진공펌프- 30 -㉱HLB카트리지(200mg,6mL)
또는이와동등한것
㉲초자기구:시험관
㉳분석저울:0.1mg까지측정이
가능한것
(다)시약및시액
①증류수:3차증류수로18ΜΩ 
이상인것
②클로로포름,메탄올,아세토
나이트릴:액체크로마토그
래피용또는이와동등한것
③암모늄포메이트,아세트산:
특급시약또는이와동등한것
④20mMHCO2NH4:HCO2NH4
1.261g을증류수에녹이고
전량을1L가되게한다.
(라)표준용액의조제
①표준원액:비타민B12(Cyanocobalamin)
100mg을100mL용량플라
스크에넣은후증류수로녹여
조제한다.
②표준용액:표준원액을증류수로
단계별희석하여조제한다.
(마)시험용액의조제
①추출
고체시료는약1g,액체시료는- 31 -약10g을원심분리관에정밀히
달아(고체시료는증류수10
mL로용해한다.)클로로포름
10mL을가하여실온에서5분간
진탕한다.4℃에서9,000rpm
으로15분간원심분리한다.상
등액을멤브레인필터로여과
하여고체시료는정제과정을
수행하고,액체시료의경우는
시험용액으로한다.
②정제
HLB카트리지에메탄올5mL을
흘려주고,뒤이어물(아세트산
으로pH4.2로조정)5mL를흘려
카트리지를활성화시킨후①의
추출용액5mL을통과시킨다.
5%메탄올5mL을흘려주어
세척하고시험관에메탄올5
mL로용출하여질소하건조한다.
건조잔류물에물1mL을가하여
용해시키고시험용액으로한다.
(바)시험조작
①액체크로마토그래 프/질량분
석기의조건
-칼럼:C18(2.1mm×50mm,1.7
㎛)또는이와동등한것- 32 -성분Precursor
ion(m/z)Fragment
ion(m/z)
비타민B12678147,359-칼럼온도:35℃
-이동상:20mMHCO2NH4:아세
토나이트릴(80:20)에서(20:80)
으로농도균배한다.
-유속:0.4mL/min
-질량분석기조건
(1)Ionization:ESIpositive
(2)Capillarytemperature:500℃
(3)Collisiongas:Ar
(4)Nebulizergas:N2
(5)질량분석기분석을위한이온
②정량시험
표준용액과시험용액을각각
주입하여피크의머무름시간
등을비교하고동일물질인지
정성확인후표준용액피크의
넓이또는높이에의해구한
검량선을사용하여시험용액의
비타민B12농도(ng/mL)를구
하고,다음식에의하여검체중
비타민B12의함량(μg/100
kcal)을구한다.- 33 -카.∼타.(생략)
4.∼7.(생략)
8.이물시험법
가.(생략)
나.품목별이물시험
(1)∼(2)(생략)
(3)아이스크림분말,무당연유,
가당연유,가당탈지연유,전지
분유,탈지분유,가당분유
및조제분유
검사시료100g을1L의비이커에
넣고2%EDTA용액100mL를
가하여잘섞어서덩어리가없
도록한후저으면서2%
EDTA용액400mL를천천히
가한다.
저어섞는동안에차차황색의×100
1g당kcal비타민B12
(μg/100kcal)=S×a×b×100
검체량(g)1000
S:시험용액중의비타민B12의농도
(ng/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:시험용액의희석배수
카.∼타.(현행과같음)
4.∼7.(현행과같음)
8.이물시험법
가.(현행과같음)
나.품목별이물시험
(1)∼(2)(현행과같음)
(3)아이스크림분말,가당연유,
---------------------
------------- 가당분유
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------
--------.
------------------------- 34 -반투명한액체가되며약30분
방치하면완전히녹는다.이를
브후나깔때기또는힐슈깔때기로
흡인여과하여여과지상의이
물을검사한다.
탄화물등이물검사에사용되는
여과지는MilkSedimentDisk를
이용하고검사결과는미국
ADPI의분유제품검사기준에서
정하고있는표준판과비교한다.
<신설>
------------------------
------------------------
------------------------
------------------------
------------.
<삭제>
(4)조제분유·조제우유,성장기용조
제분유·성장기용조제우유,기타
조제분유·기타조제우유(탄화물)
1)분석원리
조제분유를2%EDTA용액에
녹인후MilkSediment
Disk를통과시켜서Disk상에
남아있는이물이나탄화물의
존재여부를관찰한다.
2)장치
가)MilkSedimentDisk:33mm
나)Filterationapparatus
다)브후나깔때기또는힐슈
깔때기
라)진공펌프
3)시약및시액- 35 -2%EDTA(Ethylene-diamine
-tetraaceticacid)solution:
EDTA20g을증류수980
mL에넣고40℃항온수조에
넣어잘용해시킨후사용한다.
4)시험방법
검사시료100g을1L의비
이커에넣고2%EDTA용액
100mL를가하여잘섞어서
덩어리가없도록한후저으
면서2%EDTA용액400
mL를천천히가한다.
저어섞는동안에차차황색의
반투명한액체가되며약30
분간방치하면완전히녹는다.
브후나깔때기또는힐슈깔
때기에MilkSedimentDisk
를갈고시료용액을흡인여
과하고,비이커에남아있는
잔류물을증류수로씻어내어
흡인여과한다.
MilkSedimentDisk상에남아
있는탄화물을판정표와비교
하여육안으로판정한다.- 36 -(4)(생략)
(5)(생략)
(6)(생략)
9.∼16.(생략)
Ⅴ.가공품시험법
1.유가공품
가.우유류
(1)∼(6)(생략)
(7)포스파타제
(가)시약
<신설>
1)(생략)
2)(생략)
3)(생략)
4)(생략)
5)(생략)
(나)시험방법
(생략)
<신설>
[탄화물표준판정표]
(5)(현행과같음)
(6)(현행과같음)
(7)(현행과같음)
9.∼16.(현행과같음)
Ⅴ.가공품시험법
1.유가공품
가.우유류
(1)∼(6)(현행과같음)
(7)포스파타제
(가)비색법
1)시약
가)(현행과같음)
나)(현행과같음)
다)(현행과같음)
라)(현행과같음)
마)(현행과같음)
2)시험방법
(현행과같음)
(나)흡광도측정법- 37 -1)분석원리
검액에서완충액,CQC시액,
n-부탄올을이용하여상층의
투명한알코올층을분리후
Spectrophotometer를이용하여
흡광도측정후phenol에대한
표준정량곡선의값과비교한다.
2)장치
분광광도계:650nm파장을측정
가능한것
3)시약및시액
가)n-부탄올(비점116-118°C)
나)Tergitoltype4(=Niaprooftype4)
음이온의이계면활성제는
7-ethyl2-methyl-4-undecanol
hydrogensulfate,sodium
salt(SigmaNo.4)이다.이것
이외의다른것을사용해서는
안된다.
다)물:증류수또는이와동등한것
라)6M염산액
마)AMP완충액
10.0g의2-amino-2-methyl-1-propanol을
물에녹인다.6M염산액을이용
하여pH를10.1로맞추고10mL
Ternitoltype4를넣은후1L의- 38 -증류수를첨가한다.
바)기질완충액(Buffersubstrate)
0.5g의phenol-freecrystalline
disodiumphenylphosphate를
AMPbuffer에넣고AMP
buffer500mL로희석한다.이는
매일새로만들어사용한다.
사)촉매시액
200mg의CuSO45H2O를증
류수100mL에녹인다.
아)CQC시액
40mg의crystalline2,6-dichloro-
quinone-chloroimide를10mL
MeOH에녹인후착색병에넣어
밀전하여냉장보존한다.1주일이
지나거나색이갈색으로변한
경우폐기한다.
자)CQC시액-촉매시액혼합액
동일양의CQC시액과촉매시
액을섞는다.매일새로운용액을
제조해사용한다.
타)페놀표준액
①표준원액:1.000gpurephenol을
측정하여1L의플라스크에넣어
0.1NHCl과혼합하여희석시
킨다.(1mL=1mgphenol)- 39 -이용액은냉장보관으로2∼3
개월간사용가능하다.
②표준용액:100㎕의표준원액을
100mL의AMP완충액에희석
시켜섞는다.(1mL=1㎍
phenol)매일새로만들어
사용한다.
③검량선용표준용액
0.0,0.25,0.5,1.0,2.5,5.0mL의
표준용액에각각5.0mL의
AMP완충액을넣는다.각각
0.5mL의물을추가하여혼합
한다.
4)시험방법
시료2개이상을0.5mL씩수집
한다.하나는분석용시료이고,
하나는대조군으로사용한다.
대조군으로사용할시료를2분
동안끓는물에가열하고얼음에
식힌다.분석용시료와대조군
시료에5mL의AMPbuffer
substrate를첨가하고vortex나
inversion을이용하여섞어준다.
검사용시료,대조군용시료표준
발색용액을15분동안40±
1°C의온탕수조에서정치시킨다.- 40 -정치시키는동안시료를한번
잘섞어주도록한다.
온탕수조에서꺼낸후CQC시액
-촉매시액혼합액을0.2mL
추가한다.잘섞어준후,40°C
온탕수조에서다시5분간정치
시킨다.이후온탕수조에서꺼
낸후얼음수조에서5분간냉각
시킨다.
3mL의부탄올을첨가시킨튜
브를6회가량뒤집으며흔들
어준다.얼음수조에서5분간
냉각시키고2400xg에서5분간
원심분리한다.
내부에있는부탄올층(상층)을
분리한다.부탄올추출물에서
흡광도를흡광광도계를이용하여
650nm에서측정한다.검량선용
표준용액들로검량선을구한다.
각시료마다가열된대조군용
시료에서의㎍phenol/mL값을
빼주어검사대상시료의페놀
당량값(㎍phenol/mL값)을구
한다.최종값의페놀당량값이
2㎍phenol/mL보다크면안
된다.0이하로값이계산되어- 41 -
나.∼서.(생략)
2.∼3.(생략)
Ⅵ.～Ⅸ.(생략)
[별표1](생략)나오면0으로기록한다.
나.∼서.(현행과같음)
2.∼3.(현행과같음)
Ⅵ.～Ⅸ.(현행과같음)
[별표1](현행과같음)