식품의약품안전처 공고 제2013-166 호
- 1 -식품의약품안전처 공고 제2013-166 호
「축산물의가공기준및성분규격」(식품의약품안전처고시 제2013-137호,
2013.4.5)을일부개정함에있어국민에게미리알려의견을수렴하고자
그취지,개정이유및주요내용을「행정절차법」제46조에따라다음과
같이공고합니다.
 2013년9월5일
 식품의약품안전처장
축산물의 가공기준 및성분규격 일부개정고시 (안)행정예고
1.개정 이유
축산물가공품에식품원료로사용가능한유산균을첨가하여다양한축산물을
생산및수입을할수있는여건을마련하였으며,아이스크림(믹스)류및
알가공품의대장균군기준·규격에3군법의시료채취법을도입하여검사결과의
신뢰성을높였으며,조제유류중엔테로박터사카자키균시료채취기준및시
험법을개정하여영유아식품의관리효율성을높이고자함.
축산물중조제유류의비타민,무기질등일부영양성분의기준이식품이나
코덱스기준과상이한부분이있어수출․입무역시통상문제발생의
우려가있고,국내영․유아의성장발달에필요한영양성분의균형을
위하여국내영․유아의영양섭취기준및국내․외영양성분기준과 조화- 2 -시킬수있도록조제유류의일부영양성분의기준․규격을개선하고자함.
조제유류의비타민류시험법이오래되고전처리및기기분석이복잡하여
검사소요시간이길고검사시어려움이많아최신검사법을도입한연구
결과를통하여일부비타민시험법의전처리및기기분석법을개선하여
검사의효율성및신뢰성을높이고자함.
도축장(도계장)에서세균수및대장균의검사에자동화된검사법을적용
하여검사자에게편의제공뿐만아니라검사의효율성을증대시킴
2.주요 내용
가.공통기준 중유산균 단서조항 신설[안제1,6,가,(4)]
-축산물가공품에 식품원료로사용가능한유산균을첨가하여다양한
축산물을생산및수입을할수있어산업체활성및소비자욕구충족
나.조제분유 ․조제우유의 영양성분 기준 및규격 개정[안제2.1.
더.(4)(라),(바),(사),(아),(자),(차),(카),(타),(파),(하),(너)
(더),(머),(버),(서),(어),(저),(처),(커),(터),(퍼),(허),(고)]
-조제분유․조제우유의비타민,무기질등일부영양성분기준을국내․
외기준과조화시킬수있도록리놀레산,비타민A․D․C․B1․B2․
B6․E,니코틴산,엽산,판토텐산,칼륨,염소,칼슘,인,마그네슘,철,
요오드,구리,아연,망간기준을개정,셀레늄의기준을신설및
니코틴산의명칭을나이아신으로변경하여개정하고자함
다.성장기용 조제분유 ․성장기용 조제우유의 영양성분 기준 및규격- 3 -개정[안제2.1.더.(4)(라),(바),(사),(카),(타),(더),(어),(고)]
-성장기용조제분유․성장기용조제우유의일부영양성분의기준을
국내․외기준과조화시킬수있도록리놀레산,비타민A․B6․
D․E,인기준을개정,셀레늄의기준을신설및니코틴산의명칭을
나이아신으로변경하여개정하고자함
라.기타조제분유 ․기타조제우유의 영양성분 기준 및규격 개정[안
제2.1.더.(4)(카),(고)]
-기타조제분유․기타조제우유의 일부영양성분의기준을국내․외
기준과조화시킬수있도록셀레늄의기준을신설및니코틴산의
명칭을나이아신으로변경하여개정하고자함
마.조제유류 중엔테로박터 사카자키균 시료채취기준 및시험법 개정
[안제2,1,더,(4),(보)및제3,Ⅲ,9,머,(3)]
1)영유아식품은영유아의특성(빠른흡수,장기미성숙,고민감도)을
고려한안전관리가필요하며,시료의대표성과검사신뢰도확보를위해
통계적기법을이용한시료채취법도입
2)영유아가섭취하는식품의안전관리를강화하고,국내·외규격과의조화
바.아이스크림 (믹스 )류및알가공품의 대장균군에 통계적 개념의 미생물 
기준 ·규격 도입[안제2,1,러,(4),(라)및제2,1,버,(4),(라)및
제2,3,(4),(라)]
-아이스크림(믹스)류및알가공품의대장균군에국제식품규격위원회
(Codex),미국,EU등제외국에서운영하고있는통계적개념(3군법,- 4 -n,c,m,M))의미생물기준·규격도입하여미생물검사의대표성과
신뢰도을확보함에따라국민건강보호및수출입시무역마찰감소
사.조제유류의 비타민류 시험법 개정[안제3.Ⅲ.3,바,사,아]
-조제유류의비타민류시험법에대하여최신검사법을도입한연구
결과를반영하여비타민D․E․K1시험법의전처리및기기분석법
으로개정하고,비타민B1․B2․B6,엽산,니코틴산아미드에 대한
수용성비타민동시분석법을신설하고자함
아.세균수 및대장균 시험법 중자동화된 최확수법 검사대상 확대
[안제3,Ⅲ,9,다,(1),(다)및제3,Ⅲ,9,바,(3),(라)]
1)도축장(도계장)에서세균수및대장균의검사에자동화된검사법을
적용함으로써검사물량으로인한어려움해소하여검사자에게편의제공
2)검사효율성의증대로도축장(도계장)의위생관리를강화
3.의견 제출
「축산물의가공기준및성분규격」일부개정고시(안)에대하여의견이있는
단체또는개인은 2013 년10월7일까지다음사항을기재한의견서를식
품의약품안전처(우편번호:363-700,주소:충청북도청원군오송읍오송생
명2로187(연제리643번지)오송보건의료행정타운 식품의약품안전처,
참조:축산물기준과,전화043-719-3860,팩스043-719-3850)에게제출하여
주시기바랍니다.
가.예고사항에대한항목별의견(찬․반여부와그이유)- 5 -나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 6 -식품의약품안전처 고시 제2013- 호
「축산물위생관리법 」제4조제2항의규정에따른「축산물의가공기준
및성분규격」(식품의약품안전처 고시2013-137호,2013.4.5.)을다음과같
이개정고시합니다.
2013년월일
식품의약품안전처장
축산물의 가공기준 및성분규격 일부개정고시 (안)행정예고
축산물의가공기준및성분규격일부를다음과같이개정한다.
제1,6,가중“(4)”및“(5)”를각각“(5)”및“(6)”으로하고,“(4)”를다음
과같이신설한다.
(4)유산균을첨가한축산물가공품에서 일반세균수산정은총세균수에서
유산균수를제외한다
제2,1,더중(4)를다음과같이한다.
(4)성분규격- 7 -유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유최대권장기
준
(가)성상고유의색택과향미를가
지고이미·이취가없어야
한다.고유의색택과향미를가지고
이미·이취가없어야한다.고유의색택과향미를
가지고이미·이취가없
어야한다.
(나)수분(%)5.0이하
(단,액상제품제외)5.0이하
(단,액상제품제외)5.0이하
(단,액상제품제외)
(다)조단백질
(g/100kcal)1.8∼4.0 2.4∼5.5 -
(라)조지방(g/100kcal)
리놀레산(mg/100kcal)3.0∼6.0 3.0∼6.0
300이상-300이상1400
(마)유성분
(g/100kcal)12.0이상 12.0이상 -
(바)비타민A
(㎍/100kcal또는
IU/100kcal)60～180또는200～600250∼750또는75∼225 -
(사)비타민D
(㎍/100kcal또는
IU/100kcal)1.0～2.5
또는40～10040～120
또는1.0～3.0-
(아)비타민C
(㎎/100kcal)10.0이상 8.0이상 -
(자)비타민B1
(㎍/100kcal)60이상300 40이상 -
(차)비타민B2
(㎍/100kcal)80이상500 60이상 -
(카)나이아신
(㎍/100kcal)300이상1500 250이상 -
(타)비타민B6
(㎍/100kcal)
<단서신설>35이상175 45이상
(다만,단백질3.0g이상인
경우초과단백질1g당
비타민B615㎍의비율
이어야한다)-(다만,단백질2.3g이상인
경우초과단백질1g당
비타민B615㎍의
비율이어야한다)
(파)엽산
(㎍/100kcal)10.0이상50 4.0이상 -
(하)판토텐산
(㎍/100kcal)400이상2000 300이상 -
(거)비타민B12
(㎍/100kcal)0.1이상 0.15이상 -
(너)비타민K1
(㎍/100kcal)4.0이상27 4.0이상 -
(더)비타민E
(mgα-TE/100kcal또는
IU/100kcal)
<단서신설>0.7이상또는
0.5이상5.0또는7.00.7이상또는0.5이상
(다만,리놀레산1g이상인
경우리놀레산1g당
최소한0.5mgα-TE또는
0.7IU의비율이어야한다)-(다만,리놀레산1g이상인
경우리놀레산1g당
최소한0.5mgα-TE또는
0.7IU의비율이어야한다)
(러)나트륨
(mg/100kcal)20∼60 20∼85 -- 8 -유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유최대권장기
준
(머)칼륨
(㎎/100kcal)60～180 80이상 -
(버)염소
(㎎/100kcal)50～160 55이상 -
(서)칼슘
(㎎/100kcal)50이상140 90이상 -
(어)인
(㎎/100kcal)
<단서신설>25이상100 60이상
(다만,칼슘과인의비율이
1:1～2:1이어야한다)-(다만,칼슘과인의비율이
1:1～2:1이어야한다)
(저)마그네슘
(㎎/100kcal)5.0이상15 6.0이상 -
(처)철
(㎎/100kcal)0.45이상
(철분강화제품의 경우
1.0이상)1.0∼2.0 -
(커)요오드
(㎍/100kcal)10.0이상60 5.0이상 -
(터)구리
(㎍/100kcal)35이상 - -
(퍼)아연
(㎎/100kcal)0.5이상1.5 0.5이상 -
(허)망간
(㎍/100kcal)1.0이상100 5.0이상 -
(고)<신설>
셀레늄(㎍/100kcal)1.0～9.0 9.0이하 9.0이하
(노)인공감미료 검출되어서는아니된다검출되어서는아니된다검출되어서는아니된다
(도)타르색소검출되어서는아니된다검출되어서는아니된다검출되어서는아니된다
(로)세균수n=5,c=2,m=1,000/g,
M=10,000/g(조제우유는
음성이어야한다)
(단,유산균첨가제품의
경우유산균수를제외한
다)n=5,c=2,m=1,000/g,
M=10,000/g(성장기용조제
우유는음성이어야한다)
(단,유산균첨가제품의
경우유산균수를제외한다)n=5,c=2,m=1,000/g,
M=10,000/g(기타조제
우유는음성이어야한다)
(단,유산균첨가제품의
경우유산균수를제외
한다)
(모)대장균군 n=5,c=1,m<3,M=10n=5,c=1,m<3,M=10n=5,c=1,m<3,M=10
(보)엔테로박터
사카자키n=5,c=0,m=0/60g
(조제분유에한한다)-n=5,c=0,m=0/60g
(기타조제분유에한한다)
(소)탄화물
(scorchedparticle)100g당7.5mg이하100g당7.5mg이하100g당7.5mg이하
(오)바실러스세레우스1g당100이하(멸균제품의
경우음성이어야한다)1g당100이하(멸균제품의
경우음성이어야한다)1g당100이하(멸균제품의
경우음성이어야한다)
※비타민A1IU=0.30㎍,비타민D1IU=0.025㎍비타민E1mg=1.49IU,1mgα-TE(alpha-tocopherol
equivalent)=1mgd-α-tocopherol
※기타조제분유,기타조제우유의경우영양소는표시량이상어야한다.다만,제한할필요가있는영양소
는표시량이하도는표시량범위이내이어야한다.
주)조제우유및성장기용조제우유의 성분규격적용은조제분유및성장기용조제분유의수분규격
(5.0%)을기준으로하여각각의성분규격을환산적용한다.- 9 -유형
구분아이스크림
저지방아이스크림아이스밀크,샤베트,
비유지방아이스크림
(라)대장균군 n=5,c=2,m=10,M=100n=5,c=2,m=10,M=100
유형
구분아이스크림믹스
저지방아이스크림믹스아이스밀크믹스,
샤베트믹스,
비유지방아이스크믹스림
(라)대장균군 n=5,c=2,m=10,M=100n=5,c=2,m=10,M=100제2,1,러,(4)중(라)대장균군란을다음과같이한다.
제2,1,버,(4)중(라)대장균군란을다음과같이한다.
제2,3,(4)중(라)를다음과같이한다.
(라)대장균군:살균제품은n=5,c=1,m=10,m=100,비살균제품은n=5,
c=1,m=100,m=1000이어야한다(피단의경우에는n=5,c=0,m=0이어야한
다)
제3,Ⅲ,3,바,(1)중“고속액체크로마토그래피에의한정량”을“고속액
체크로마토그래피에의한정량(제1법)"으로하고,“(2)”를“(3)”으로하며,
(2)를다음과같이신설한다.
(2)고속액체크로마토그래피에의한정량(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조제분유및성장기용조제우유등조제
유류에적용한다.- 10 -(나)분석원리
시료중의비타민E를에탄올과피로갈롤에탄올용액으로비누화
시키고석유에테르로추출후감압건조시켜역상칼럼으로분리한후
고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를이용하여정량하는방
법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮환류냉각장치
㉯감압농축기
㉰용매여과장치
㉱초자기구:분액깔대기,농축플라스크(갈색,125mL또는250mL)
㉲분석저울:0.1mg까지측정이가능한것
(라)시약및시액
①에탄올,메탄올,석유에테르:액체크로마토그래피용또는이와동등
한것
②피로갈롤,수산화칼륨,페놀프탈레인,무수황산나트륨:특급시약또는
이와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ 이상인것
④10%피로갈롤에탄올용액:피로갈롤10g을에탄올에녹여100mL- 11 -이되게한다.
⑤90%수산화칼륨용액:수산화칼륨9g을증류수에녹여10mL이되게
한다.
⑥이동상:메탄올950mL에증류수50mL를혼합하고0.45μm나일
론필터로여과하고탈기하여사용한다.
(마)표준용액조제
①표준원액:토코페롤(α,β,γ,δ)를각각50mg을채취하여50mL용
량플라스크에넣고메탄올로용해하면서용량을맞춘다.
②표준용액:표준원액을1mL취하여메탄올로10mL까지채워100
㎍/mL이되도록조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액을0.2,0.5,1,2및5mL를각각취하여
10mL까지메탄올로채워2,5,10,20및50㎍/mL이되도록조제
한다.
(바)시험용액조제
시료약1g을정밀히달아농축플라스크에넣고에탄올30mL및
10%피로갈롤에탄올용액1mL를가하고이에90%수산화칼륨용액
3mL를가해환류냉각기를이용하여90℃비등수욕조중에서30분
간비누화한다.비누화후즉시실온으로냉각한후물30mL를가해
분액깔대기에옮긴다.플라스크는물10mL로씻고이어서석유에테르
30mL로씻은후분액깔대기에합한다.분액깔대기를세게흔들고,
10분간방치한후하층(물층)을다른분액깔대기에옮긴다.물층을석- 12 -유에테르30mL로2회추출하고추출액을합하여페놀프탈레인지시
약1∼2방울넣는다.분액깔대기에물10mL넣어1회씻고뒤이어
물50mL를넣어세게흔들고,여러차례반복하여분홍색이없어질
때까지석유에테르층을씻는다.분액깔대기중에서물을충분히분리
한후무수황산나트륨을가해탈수한후석유에테르층을플라스크에
옮긴다.잔존하는황산나트륨은다시석유에테르10mL씩으로2회씻
고씻은액을플라스크에모두합한다.이액을40～50℃에서감압건
조한후메탄올10mL를가하여용해시키고0.2μm나일론멤브레인
필터로여과하여시험용액으로한다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-칼럼:C8(4.6×150mm,5μm)또는C18(3.9×150mm,5μm)또는
이와동등한것
-칼럼온도:30℃
-이동상:95%메탄올
-유속:1.0mL/min
-검출파장:UV298nm
-주입량:10μL
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주입하고 피크의머무름시간을비교하여
동일물질인지 정성확인후표준용액의 피크면적 또는높이에의해- 13 -구한검량선을  사용하여 시험용액 중의비타민 E의농도(㎍/mL)를구
하고,검사시료중비타민 E의함량(mg/100g)을산출한다.
비타민 E 함량(mg/100g)=C×V/S×
C:검량선에서구한α,β,γ,δ-토코페롤의농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
 :단위환산
제3,Ⅲ,3,사,(1)중“고속액체크로마토그래프를이용한정량”을“고속액
체크로마토그래피에의한정량(제1법)”으로하고,(2)를다음과같이신설
한다.
(2)고속액체크로마토그래피에의한정량(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조제분유및성장기용조제우유등조제
유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의비타민D3를수산화칼륨에탄올용액으로비누화시키고
헥산추출및고체상카트리지로정제하여역상칼럼으로분리한후
고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를이용하여정량하는방
법이다.- 14 -(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮환류냉각장치
㉯감압농축기
㉰용매여과장치
㉱고체상추출장치
㉲진공펌프
㉳실리카카트리지(500mg,6mL)또는이와동등한것
㉴초자기구:분액깔대기,농축플라스크(갈색,125mL또는250mL)
㉵분석저울:0.1mg까지측정이가능한것
(라)시약및시액
①아세트산,아세토나이트릴,에틸아세테이트,디클로르메탄,에탄올,이
소프로판올,헥산,메탄올:액체크로마토그래피용또는이와동등한
것
②수산화칼륨,페놀프탈레인,무수황산나트륨:특급시약또는이와동
등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ 이상인것
④10%아세트산용액:아세트산10mL를100mL용량플라스크에넣
은후증류수로용량을맞춘다.-- 15 -⑤이소프로판올용액A:이소프로판올용액2mL를1L용량플라스크
에넣은후디클로르메탄으로용량을맞추고잘혼합한다.
⑥이소프로판올용액B:이소프로판올용액200mL를1L용량플라스
크에넣은후디클로르메탄으로용량을맞추고잘혼합한다.
⑦에탄올수산화칼륨용액:에탄올310mL에수산화칼륨140g을녹
인후증류수50mL을넣고혼합한다.
⑧1%페놀프탈레인용액:페놀프탈레인1g을100mL용량플라스크
에넣은후에탄올로용량을맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액:비타민D2(내부표준물질)및D3를각각30㎎을채취하여
200mL용량플라스크에넣고에탄올로용해하면서용량을맞춘다.
②표준용액:표준원액을각각4mL취하여에탄올로200mL까지채
워3㎍/mL이되도록조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액을각각4mL를취하여에탄올로200
mL까지채워0.06㎍/mL이되도록조제한다.
(바)시험용액조제
①비누화및추출
시료약2g을정밀히달아농축플라스크에넣고증류수15mL로
용해한다.(비타민D3표준용액을4mL취하여농축플라스크에넣
고증류수15mL를첨가하여시료와동일하게전처리한다.)시험용
액및표준용액에내부표준물질비타민D2를4mL씩첨가하고에- 16 -탄올수산화칼륨용액15mL를가한후환류냉각기를이용하여60℃
비등수욕조중에서30분간비누화한다.비누화후즉시실온으로냉
각한후분액깔대기에옮긴다.농축플라스크에증류수15mL를넣
고잘헹군후분액깔대기로옮기고이어서헥산60mL로잘헹군
후분액깔대기에합한다.분액깔대기를90초간격렬하게진탕한후
10분간방치하여층을분리시킨다.물층(하층)을버리고,증류수15
mL를넣고다시90초간격렬하게진탕한후하층을버린다.남아
있는헥산층에1%페놀프탈레인용액1방울과증류수15mL를넣고
분액깔대기를흔들면서중성(무색)이될때까지10%아세트산용액을
넣은후층이분리되면물층(하층)을버린다.상층인헥산층을무수
황산나트륨에통과시켜탈수하고농축플라스크에넣어40～50℃에
서감압건조한후이소프로판올용액A2mL에녹인다.
②정제
실리카카트리지에이소프로판올용액B4mL를흘려주고,뒤이어이
소프로판올용액A5mL를흘려카트리지를활성화시킨후①의추
출용액을통과시킨다.농축플라스크의잔류물을이소프로판올용액A
1mL로세척하고카트리지에통과시킨후이소프로판올용액A2
mL로카트리지를세척하고,이소프로판올용액A7mL로용출하여
질소하건조한다.건조잔류물에아세토나이트릴1mL를가하여용
해시키고0.45μm나일론멤브레인필터로여과하여시험용액으로
한다.- 17 -(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-분석칼럼:C18(6×250mm,5μm)또는이와동등한것
-가드칼럼:C18(4.6×10mm,5μm)또는이와동등한것
-칼럼온도:30℃
-검출파장:UV265nm
-주입량:250μL
-이동상:아세토나이트릴(A),메탄올(B),에틸아세테이트(C)
시간(분)유속(mL/min)A(%)B(%)C(%)
00.79190
330.79190
33.51.500100
361.500100
36.51.59190
381.59190
450.79190
＊이동상A와B를각각또는91:9로혼합하여사용한다.
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주입하여  피크의머무름시간을비교하
고동일물질인지 정성확인후내부표준법으로 농도비에 의해구한
검량선을  사용하여 시험용액 중의비타민D3의농도(㎍/mL)를구하
고,검사시료중비타민D3의함량(㎍/100g)을산출한다.
비타민D3함량(㎍/100g)=C×V/S×100- 18 -C:내부표준법으로구한비타민D3의농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
제3,Ⅲ,3,아,(1)중“고속액체크로마토그래피에의한정량”을“고속액체
크로마토그래피에의한정량(제1법)”으로하고,(2)를다음과같이신설한
다.
(2)고속액체크로마토그래피에의한정량(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조제분유및성장기용조제우유등조제
유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의비타민K1을분해효소로처리한후헥산으로추출하여
역상칼럼으로분리하고포스트칼럼으로환원시켜고속액체크로마토
그래프/형광검출기를이용하여정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/형광검출기(HPLC/FLD)
②기구
㉮항온수조- 19 -㉯질소농축기
㉰pHmeter
㉱원심분리기
㉲교반기
㉳진탕기
㉴용매여과장치
㉵초자기구:유리시험관,비이커
㉶분석저울:0.1mg까지측정이가능한것
(라)시약및시액
①에탄올,디클로르메탄,에틸아세테이트,헥산,이소프로판올,메탄올:
액체크로마토그래피용또는이와동등한것
②탄산칼륨,수산화칼륨,인산칼륨,무수초산나트륨,염화아연:특급시
약또는이와동등한것
③초산:Glacial급
④Lipase:Candidarugosa를기원으로하는것으로써약1000
unit/mg의활성이있는것또는동등한효소활성을가진것으로써
Pseudomonas와Rhizopus를기원으로하는것
⑤아연분말:입자60㎛이하인것또는이와동등한것
⑥증류수:3차증류수로18MΩ 이상인것
⑦40%수산화칼륨용액:수산화칼륨40g을100mL용량플라스크에
넣은후증류수로녹여용량을맞춘다.- 20 -⑧0.8M인산완충용액:인산칼륨55g을500mL비이커에넣은후
증류수350mL로녹인후40%수산화칼륨용액을이용해pH를7.9
∼8.0으로맞춘후500mL용량플라스크에옮긴후증류수로용량
을맞춘다.
⑨알콜혼합용매:에탄올과메탄올을95:5의부피비로혼합하여조제
한다.
⑩이동상:디클로르메탄900mL에메탄올100mL을혼합한용매에
메탄올5mL에녹인염화아연1.37g과초산0.3g및무수초산나
트륨0.41g을넣고혼합한후0.2μm나일론멤브레인필터로여
과하고탈기하여사용한다.
(마)표준용액조제
①표준원액:VitaminK10.025g을50mL용량플라스크에넣은후이
소프로판올로녹여조제한다.
②표준용액:표준원액을1mL취하여메탄올로100mL까지채워5
㎍/mL이되도록조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액을0.2,0.5,1,2및4mL를각각취하여
100mL까지메탄올로채워10,25,50,100및200ng/mL이되도록
조제한다.
(바)시험용액조제
①분해
시료약1g을시험관에넣고,38℃증류수15mL을넣은후잘흔- 21 -들어녹인다.여기에0.8M인산완충용액5mL을넣고,분해효소인
lipase1g을넣고교반기를이용하여녹인후,마개로시험관을막고
세게흔들어lipase가충분히분산되도록한다.38℃항온수조에서
20분간격으로15초간흔들면서120분간효소처리를한다음,알콜혼
합용액10mL을넣고흔든후탄산칼륨1g을넣고흔든다.
②추출
시험관에헥산30mL을넣고10분이상진탕기를이용하여세게흔
든다.이를냉암소에10분이상정치하여두층으로분리되는것을
확인하고(층분리가완전하지않으면1000rpm에서10분간원심분리
한다.),상층액1mL을별도의유리시험관으로옮겨질소농축기를이
용하여건조한후다시메탄올1mL을넣고진탕기를이용하여용
해한후0.45μm나일론멤브레인필터로여과하여시험용액으로한
다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-분석칼럼:C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
-포스트칼럼:C18(4.6×30mm)또는이와동등한것
 ※분석전아연분말을채우고분석칼럼과형광검출기사이에장착한다.
-칼럼온도:30℃
-이동상유속:1.1mL/min
-검출파장:여기파장265nm,측정파장430nm- 22 --주입량:10μL
②정량시험
표준용액과시험용액을각각주입하여피크의머무름시간을비교하고
동일물질인지정성확인후표준용액의피크면적또는높이에의해
구한검량선을사용하여시험용액중의비타민K1의농도(㎍/mL)를
구하고,검사시료중비타민K1의함량(㎍/100g)을산출한다.
비타민K1함량(㎍/100g)=C×V/S×100
C:검량선에서구한비타민K1의농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
제3,Ⅲ,3에타를다음과같이신설한다.
타.비타민B군동시분석법
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조제분유및성장기용조제우유등조제
유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의수용성비타민B군5종(B1,B2,B6,니코틴아미드 ,엽산 )을
헥산설폰산나트륨이함유된초산용액으로 추출정제하여 역상칼럼으로
분리한후고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기를이용하여정- 23 -량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮원심분리기
㉯진탕기
㉰용매여과장치
㉱원심분리관
㉲분석저울:0.1mg까지측정이가능한것
(라)시약및시액
①메탄올:액체크로마토그래피용또는이와동등한것
②초산,수산화나트륨,헥산설폰산나트륨:특급시약또는이와동등한
것
③증류수:3차증류수로18MΩ 이상인것
④이동상
㉮5mM헥산설폰산나트륨이함유된0.1%초산용액:초산1mL을
1L용량플라스크에넣은후증류수로약900mL까지채우고,헥산
설폰산나트륨을5mM농도가되도록넣고혼합한후증류수로1L
를맞춘다.- 24 -㉯5mM헥산설폰산나트륨이함유된메탄올:메탄올을약900mL
까지채우고,헥산설폰산나트륨을5mM농도가되도록넣고혼합한
후메탄올로1L를맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액
㉮VitaminB1,VitaminB6,니코틴아미드,:B10.01g,B60.01g,
니코틴아미드0.1g을100mL용량플라스크에넣고이동상㉮의
용액으로용해하면서용량을맞춘다.
㉯VitaminB2,엽산:B20.01g,엽산0.01g을100mL용량플라스
크에넣고0.1N수산화나트륨용액으로용량을맞춘다.
②표준용액:VitaminB1,B2,B6,엽산표준원액은1mL,니코틴아미드
의표준원액은1mL을취하여100mL용량플라스크에넣고이동
상㉮의용액으로용량을맞추어각각1㎍/mL및10㎍/mL이되
도록조제한다.
③검량곡선표준용액:VitaminB1,B2,B6,엽산표준용액은이동상㉮
로희석하여0.05,0.10,0.25,0.5및1㎍/mL이되도록조제한고,
니코틴아미드표준용액은이동상㉮로희석하여0.5,1,2.5,5및10
㎍/mL이되도록조제한다.
(바)시험용액조제
시료약1g을정밀히달아원심분리관에넣고5mM헥산설폰산나트
륨이함유된0.1%초산용액을20mL를넣어녹인다.15분간진탕기로
잘섞은후,이어서15분간초음파추출하고15,000rpm,-10℃에서- 25 -10분간원심분리한다.상층액의일부를0.2μm나일론멤브레인필터
로여과하여시험용액으로한다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-칼럼:C18(4.6×250mm,5μm)또는이와동등한것
-칼럼온도:30℃
-유속:0.6mL/min
-검출파장:UV270nm
-주입량:50μL
-이동상:5mM헥산설폰산나트륨이함유된0.1%초산용액(A)
5mM헥산설폰산나트륨이함유된메탄올(B)
시간(분)A(%)B(%)
08020
8.08020
16.04060
18.02080
18.10100
30.00100
30.18020
358020
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주입하여  피크의머무름시간을비교하고
동일물질인지 정성확인후표준용액의 피크면적 또는높이에의해
구한검량선을  사용하여 시험용액 중의비타민B군의농도(㎍/mL)를
구하고,검사시료중비타민B군의함량(㎍/100g)을산출한다.- 26 -비타민B군개별함량(㎍/100g)=C×V/S×100
C:검량선에서구한비타민B군의개별농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
＊비타민B1은첨가된형태만정량가능하며,부적합시개별정량법으로
확인검사를실시한다.
제3,Ⅲ,9,다,(1),(다)중“분유류에한한다”를“분유류,소,돼지,닭(오
리)도체에한한다”로한다.
제3,Ⅲ,9,바,(3),(라)중“식육추출가공품에한한다”를“식육추출가공품,
닭(오리)도체에한한다”로한다.
제3,Ⅲ,9,머,(3),(가)중“시료100g을무균적으로채취하여900mL의멸균
증류수에접종하여”를“시료60g을무균적으로채취하여540mL의멸균증류수
에접종하여”로한다.
부칙 <제2013- 호,2013. ..>
제1조(시행일)이고시는고시한날부터시행한다.다만,제2.1.더.(4)의
개정규정(셀레늄,엔테로박터사카자키관련부분제외)은2014년5월1- 27 -일부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는고시시행후최초로제조·가공또는수입(선적일
기준)하는축산물부터적용한다.
제3조(경과조치)이고시시행당시접수되어검사가진행중인사항에대
하여는종전의규정에따른다.- 28 -현행 개정안
유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유
(가)～(다)(생략)
(라)조지방(g/100kcal)
리놀레산(mg/100kcal)(생략)
270이상
<최대권장기준
신설>(생략)
270이상(생략)
(마)유성분(생략)제1.축산물에대한공통기준및규격
1.∼5.(생략)
6.축산물의성분규격
가.일반규격
(1)∼(3)(생략)
<신설>
(4)(생략)
(5)(생략)
나.～바.(생략)
7.～8.(생략)
제2.축산물별기준및규격
1.유가공품
가.∼너.(생략)
더.조제유류
(1)∼(3)(생략)
(4)성분규격
유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유최대권장
기준
(가)～(나)(현행과같음)
(라)조지방(g/100kcal)
리놀레산(mg/100kcal)(현행과같음)(현행과같음)
300이상(현행과같음)
300이상1400
(마)유성분(현행과같음)제1.축산물에대한공통기준및규격
1.∼5.(현행과같음)
6.축산물의성분규격
가.일반규격
(1)∼(3)(현행과같음)
(4)유산균을첨가한축산물가공품에서
일반세균수산정은총세균수에
서유산균수를제외한다.
(5)(현행과같음)
(6)(현행과같음)
나.～바.(현행과같음)
7.～8.(현행과같음)
제2.축산물별기준및규격
1.유가공품
가.∼너.(현행과같음)
더.조제유류
(1)∼(3)(현행과같음)
(4)성분규격
- 29 -유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유
(바)비타민A
(IU/100kcal또는
㎍/100kcal)250～500또는
75～150(생략)(생략)
(사)비타민D
(IU/100kcal또는
㎍/100kcal)40～80
또는1.0～2.0(생략)(생략)
(아)비타민C
(㎎/100kcal)8.0이상(생략)(생략)
(자)비타민B1
(㎍/100kcal)40이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(차)비타민B2
(㎍/100kcal)60이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(카)니코틴산
(㎍/100kcal)250이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(타)비타민B6
(㎍/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>
<단서신설>(생략)
<단서신설>(생략)
(파)엽산
(㎍/100kcal)4.0이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(하)판토텐산
(㎍/100kcal)300이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(거)(생략)
(너)비타민K1
(㎍/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(더)비타민E
(IU/100kcal또는
mgα-TE/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>
<단서신설>(생략)
<단서신설>(생략)
(러)(생략)
(머)칼륨
(㎎/100kcal)80～200(생략)(생략)
(버)염소
(㎎/100kcal)55～150(생략)(생략)
(서)칼슘
(㎎/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(어)인
(㎎/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>
<단서신설>(생략)
<단서신설>(생략)
(저)마그네슘
(㎎/100kcal)6.0이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(처)철
(㎎/100kcal)0.25이상
(생략)(생략)(생략)
(커)요오드
(㎍/100kcal)5.0이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(터)구리
(㎍/100kcal)60이상(생략)(생략)
(퍼)아연
(㎎/100kcal)(생략)
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
(허)망간
(㎍/100kcal)5.0이상
<최대권장기준
신설>(생략)(생략)
<신설><신설><신설><신설>유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유최대권장
기준
(바)비타민A
(㎍/100kcal또는
IU/100kcal)60～180또는200～600(현행과같음)(현행과같음)
(사)비타민D
(㎍/100kcal또는
IU/100kcal)1.0～2.5
또는40～100(현행과같음)(현행과같음)
(아)비타민C
(㎎/100kcal)10.0이상 (현행과같음)(현행과같음)
(자)비타민B1
(㎍/100kcal)60이상300(현행과같음)(현행과같음)
(차)비타민B2
(㎍/100kcal)80이상500(현행과같음)(현행과같음)
(카)나이아신
(㎍/100kcal)300이상1500(현행과같음)(현행과같음)
(타)비타민B6
(㎍/100kcal)(현행과같음)175(현행과같음)
(다만,단백질3.0g
이상인경우초과
단백질1g당비타민
B615㎍의비율
이어야한다)(현행과같음) (다만,단백질2.3g이상인경우
초과단백질1g당비타민B6
15㎍의비율이어야한다)
(파)엽산
(㎍/100kcal)10.0이상50(현행과같음)(현행과같음)
(하)판토텐산
(㎍/100kcal)400이상2000(현행과같음)(현행과같음)
(거)(현행과같음)
(너)비타민K1
(㎍/100kcal)(현행과같음)27(현행과같음)(현행과같음)
(더)비타민E
(mgα-TE/100kcal
또는IU/100kcal)(현행과같음)5.0또는
7.0(현행과같음)
(다만,리놀레산1g
이상인경우리놀레산
1g당최소한0.5mg
α-TE또는0.7IU의
비율이어야한다)(현행과같음)(다만,리놀레산1g이상인
경우리놀레산1g당
최소한0.5mgα-TE또는
0.7IU의비율이어야한다)
(러)(현행과같음)
(머)칼륨
(㎎/100kcal)60～180(현행과같음)(현행과같음)
(버)염소
(㎎/100kcal)50～160 (현행과같음)(현행과같음)
(서)칼슘
(㎎/100kcal)(현행과같음)140(현행과같음)(현행과같음)
(어)인
(㎎/100kcal)(현행과같음)10060이상
(다만,칼슘과
인의비율이
1:1～2:1이어야
한다)(현행과같음)
(다만,칼슘과인의비율이
1:1～2:1이어야한다)
(저)마그네슘
(㎎/100kcal)5.0이상15(현행과같음)(현행과같음)
(처)철
(㎎/100kcal)0.45이상
(현행과같음)(현행과같음)(현행과같음)
(커)요오드
(㎍/100kcal)10.0이상60(현행과같음)(현행과같음)
(터)구리
(㎍/100kcal)35이상 (현행과같음)(현행과같음)
(퍼)아연
(㎎/100kcal)(현행과같음)1.5(현행과같음)(현행과같음)
(허)망간
(㎍/100kcal)1.0이상100(현행과같음)(현행과같음)
(고)셀레늄
(㎍/100kcal)1.0～9.0 9.0이하9.0이하- 30 - 유형
구분아이스크림
저지방아이스크림아이스밀크 ,샤베트 ,
비유지방아이스크림
(가)∼(다)(생략)
(라)대장균군
(마)(생략)(생략)
1ml당10이하
(생략)(생략)
1ml당10이하
(생략)
 유형
구분아이스크림
저지방아이스크림아이스밀크 ,샤베트 ,
비유지방아이스크림
(가)∼(다)(생략)
(라)대장균군
(마)(생략)(생략)
1ml당10이하
(단,멸균제품은
음성이어야 한다 )
(생략)(생략)
1ml당10이하
(단,멸균제품은 음성
이어야한다 )
(생략)유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유
(고)～(로)(생략)
(모)엔테로박터
사카자키음성이어야한다
(생략)-음성이어야한다
(생략)
(보)∼(소)(생략)
※(생략)
※(생략)
주)(생략)
(5)(생략)
러.아이스크림류
(1)∼(3)(생략)
(4)성분규격
(5)(생략)
머.(생략)
버.아이스크림믹스류
(1)∼(3)(생략)
(4)성분규격
(5)(생략)
2.(생략)
3.알가공품
(1)∼(3)(생략)
(4)성분규격
(가)∼(다)(생략) 유형
구분아이스크림
저지방아이스크림아이스밀크 ,샤베트 ,
비유지방아이스크림
(가)∼(다)(현행과같음)
(라)대장균군
(마)(현행과같음)(현행과같음)
n=5, c=2, m=10, M=100
(현행과같음 )(현행과같음)
n=5, c=2, m=10, M =100
(현행과같음 )
 유형
구분아이스크림
저지방아이스크림아이스밀크 ,샤베트 ,
비유지방아이스크림
(가)∼(다)(현행과같음)
(라)대장균군
(마)(현행과같음)(현행과같음)
n=5, c=2, m=10, M=100
(단멸균제품은 n=5,
c=0, m=0이어야한다)
(현행과같음 )(현행과같음)
n=5, c=2, m=10, M =100
(단멸균제품은 n=5, c=0,
m=0이어야한다)
(현행과같음 )유형
항목조제분유
조제우유성장기용조제분유
성장기용조제우유기타조제분유
기타조제우유최대권장
기준
(노)～(모)(현행과같음)
(보)엔테로박터
사카자키n=5,c=0,m=0/60g
(현행과같음)-n=5,c=0,m=0/60g
(현행과같음)
(소)∼(오)(현행과같음)
※(현행과같음)
※(현행과같음)
주)(현행과같음)
(5)(현행과같음)
러.아이스크림류
(1)∼(3)(현행과같음)
(4)성분규격
(5)(현행과같음)
머.(현행과같음)
버.아이스크림믹스류
(1)∼(3)(현행과같음)
(4)성분규격
(5)(현행과같음)
2.(현행과같음)
3.알가공품
(1)∼(3)(현행과같음)
(4)성분규격
(가)∼(다)(현행과같음)- 31 -(라)대장균군:살균제품은1g
당10이하,비살균제품은
100이하이어야한다(피단의
경우에는음성이어야한
다)
(마)(생략)
(5)(생략)
제3.축산물시험방법
Ⅰ.～Ⅱ.(생략)
Ⅲ.일반시험법
1.～2.(생략)
3.비타민류
가.∼마.(생략)
바.비타민E
(1)고속액체크로마토그래피에의
한정량
<신설>(라)대장균군:살균제품은n=5c=1
m=10M=100,비살균제품은n=5,c=1,
m=100,M=1000이어야한다(피단의경
우에는n=5,c=0,m=0이어야
한다)
(마)(현행과같음)
(5)(현행과같음)
제3.축산물시험방법
Ⅰ.～Ⅱ.(현행과같음)
Ⅲ.일반시험법
1.～2.(현행과같음)
3.비타민류
가.∼마.(현행과같음)
바.비타민E
(1)고속액체크로마토그래피에의한정량
(제1법)
(2)고속액체크로마토그래피에의한정량
(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조
제분유및성장기용조제우유등
조제유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의비타민E를에탄올
과피로갈롤에탄올용액으로
비누화시키고석유에테르로추
출후감압건조시켜역상칼럼으
로분리한후고속액체크로마토
그래프/자외부흡광검출기를이- 32 -용하여정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부
흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮환류냉각장치
㉯감압농축기
㉰용매여과장치
㉱초자기구:분액깔대기,농축
플라스크(갈색,125mL또는
250mL)
㉲분석저울:0.1mg까지측정이
가능한것
(라)시약및시액
①에탄올,메탄올,석유에테르:
액체크로마토그래피용또는이
와동등한것
②피로갈롤,수산화칼륨,페놀프
탈레인,무수황산나트륨:특급
시약또는이와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ
이상인것
④10%피로갈롤에탄올용액:피
로갈롤10g을에탄올에녹여
100mL이되게한다.
⑤90%수산화칼륨용액:수산화
칼륨9g을증류수에녹여10
mL이되게한다.
⑥이동상:메탄올950mL에증- 33 -류수50mL를혼합하고0.45
μm나일론필터로여과하고
탈기하여사용한다.
(마)표준용액조제
①표준원액:토코페롤(α,β,γ,
δ)를각각50mg을채취하여50
mL용량플라스크에넣고메탄
올로용해하면서용량을맞춘
다.
②표준용액:표준원액을1mL
취하여메탄올로10mL까지
채워100㎍/mL이되도록조
제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액
을0.2,0.5,1,2및5mL를각
각취하여10mL까지메탄올로
채워2,5,10,20및50㎍
/mL이되도록조제한다.
(바)시험용액조제
시료약1g을정밀히달아농축
플라스크에넣고에탄올30mL
및10%피로갈롤에탄올용액1
mL를가하고이에90%수산화
칼륨용액3mL를가해환류냉각
기를이용하여90℃비등수욕조
중에서30분간비누화한다.비누
화후즉시실온으로냉각한후
물30mL를가해분액깔대기에옮
긴다.플라스크는물10mL로씻
고이어서석유에테르30mL로- 34 -씻은후분액깔대기에합한다.
분액깔대기를세게흔들고,10분
간방치한후하층(물층)을다른
분액깔대기에옮긴다.물층을석
유에테르30mL로2회추출하고
추출액을합하여페놀프탈레인
지시약1∼2방울넣는다.분액깔
대기에물10mL넣어1회씻고
뒤이어물50mL를넣어세게
흔들고,여러차례반복하여분
홍색이없어질때까지석유에테
르층을씻는다.분액깔대기중에
서물을충분히분리한후무수
황산나트륨을가해탈수한후석
유에테르층을플라스크에옮긴
다.잔존하는황산나트륨은다시
석유에테르10mL씩으로2회씻
고씻은액을플라스크에모두
합한다.이액을40～50℃에서
감압건조한후메탄올10mL를
가하여용해시키고0.2μm나일
론멤브레인필터로여과하여시
험용액으로한다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-칼럼:C8(4.6×150mm,5μm)
또는C18(3.9×150mm,
5μm)또는이와동등
한것
-칼럼온도:30℃- 35 -(2)(생략)
사.비타민D
(1)고속액체크로마토그래프를이용
한정량-이동상:95%메탄올
-유속:1.0mL/min
-검출파장:UV298nm
-주입량:10μL
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주
입하고피크의머무름시간을비
교하여동일물질인지 정성확인
후표준용액의 피크면적 또는높
이에의해구한검량선을  사용하
여시험용액 중의비타민E의
농도(㎍/mL)를구하고,검사시
료중비타민E의함량(mg/100
g)을산출한다.
비타민E함량(mg/100g)
=C×V/S×
C:검량선에서구한 α,β,γ,δ -
토코페롤합의농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
:단위환산
(3)(현행과같음 )
사.비타민D
(1)고속액체크로마토그래피에의한정량
(제1법)- 36 -<신설> (2)고속액체크로마토그래피에 의한정량
(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조
제분유및성장기용조제우유등
조제유류에적용한다.
(나)분석원리
시료중의비타민D3를수산화
칼륨에탄올용액으로비누화시
키고헥산추출및고체상카트
리지로정제하여역상칼럼으로
분리한후고속액체크로마토그
래프/자외부흡광검출기를이용
하여정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부
흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮환류냉각장치
㉯감압농축기
㉰용매여과장치
㉱고체상추출장치
㉲진공펌프
㉳실리카카트리지(500mg,6
mL)또는이와동등한것
㉴초자기구:분액깔대기,농축
플라스크(갈색,125mL또는
250mL)
㉵분석저울:0.1mg까지측정- 37 -이가능한것
(라)시약및시액
①아세트산,아세토나이트릴,에
틸아세테이트,디클로르메탄,
에탄올,이소프로판올,헥산,
메탄올:액체크로마토그래피
용또는이와동등한것
②수산화칼륨,페놀프탈레인,무
수황산나트륨:특급시약또는
이와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ 
이상인것
④10%아세트산용액:아세트산
10mL를100mL용량플라스
크에넣은후증류수로용량을
맞춘다.
⑤이소프로판올용액A:이소프
로판올용액2mL를1L용량
플라스크에넣은후디클로르
메탄으로용량을맞추고잘혼
합한다.
⑥이소프로판올용액B:이소프
로판올용액200mL를1L용
량플라스크에넣은후디클로
르메탄으로용량을맞추고잘
혼합한다.
⑦에탄올수산화칼륨용액:에탄
올310mL에수산화칼륨140
g을녹인후증류수50mL을
넣고혼합한다.- 38 -⑧1%페놀프탈레인용액:페놀
프탈레인1g을100mL용량
플라스크에넣은후에탄올로
용량을맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액:비타민D2(내부표준
물질)및D3를각각30㎎을
채취하여200mL용량플라스크
에넣고에탄올로용해하면서
용량을맞춘다.
②표준용액:표준원액을각각4
mL취하여에탄올로200mL
까지채워3㎍/mL이되도록
조제한다.
③검량곡선표준용액:표준용액
을각각4mL를취하여에탄
올로200mL까지채워0.06
㎍/mL이되도록조제한다.
(바)시험용액조제
①비누화및추출
시료약2g을정밀히달아농
축플라스크에넣고증류수15
mL로용해한다.(비타민D3표
준용액을4mL취하여농축플
라스크에넣고증류수15mL를
첨가하여시료와동일하게전처
리한다.)시험용액및표준용액
에내부표준물질비타민D2를4
mL씩첨가하고에탄올수산화
칼륨용액15mL를가한후환- 39 -류냉각기를이용하여60℃비등
수욕조중에서30분간비누화한
다.비누화후즉시실온으로냉
각한후분액깔대기에옮긴다.
농축플라스크에증류수15mL
를넣고잘헹군후분액깔대기
로옮기고이어서헥산60mL
로잘헹군후분액깔대기에합
한다.분액깔대기를90초간격렬
하게진탕한후10분간방치하
여층을분리시킨다.물층(하층)
을버리고,증류수15mL를넣
고다시90초간격렬하게진탕
한후하층을버린다.남아있
는헥산층에1%페놀프탈레인
용액1방울과증류수15mL를
넣고분액깔대기를흔들면서중
성(무색)이될때까지10%아세
트산용액을넣은후층이분리
되면물층(하층)을버린다.상층
인헥산층을무수황산나트륨에
통과시켜탈수하고농축플라스
크에넣어40～50℃에서감압건
조한후이소프로판올용액A2
mL에녹인다.
②정제
실리카카트리지에이소프로판
올용액B4mL를흘려주고,뒤
이어이소프로판올용액A5
mL를흘려카트리지를활성화- 40 -시킨후①의추출용액을통과
시킨다.농축플라스크의잔류물
을이소프로판올용액A1mL
로세척하고카트리지에통과
시킨후이소프로판올용액A2
mL로카트리지를세척하고,이
소프로판올용액A7mL로용
출하여질소하건조한다.건조
잔류물에아세토나이트릴1
mL를가하여용해시키고0.45
μm나일론멤브레인필터로
여과하여시험용액으로한다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-분석칼럼:C18(6×250mm,5
μm)또는이와동등한것
-가드칼럼:C18(4.6×10mm,5
μm)또는이와동등한것
-칼럼온도:30℃
-검출파장:UV265nm
-주입량:250μL
-이동상:아세토나이트릴(A),
메탄올(B),에틸아세테이트(C)
시간(분)유속
(mL/min)A(%)B(%)C(%)
00.79190
330.79190
33.51.500100
361.500100
36.51.59190
381.59190
450.79190- 41 -아.비타민K1
(1)고속액체크로마토그래피에의
한정량
<신설>＊이동상A와B를각각또는91:9로혼합하여사용한다.
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주
입하여  피크의머무름시간을
비교하고 동일물질인지 정성
확인후내부표준법으로 농도비
에의해구한검량선을  사용하
여시험용액 중의비타민D3의
농도(㎍/mL)를구하고,검사시
료중비타민D3의함량(㎍/100
g)을산출한다.
비타민D3함량(㎍/100g)
=C×V/S×100
C:내부표준법으로 구한비타민
D3의농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
아.비타민K1
(1)고속액체크로마토그래피에의한정량
(제1법)
(2)고속액체크로마토그래피에의한정량
(제2법)
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조
제분유및성장기용조제우유등
조제유류에적용한다.
(나)분석원리- 42 -시료중의비타민K1을분해효
소로처리한후헥산으로추출
하여역상칼럼으로분리하고포
스트칼럼으로환원시켜고속액
체크로마토그래프/형광검출기를
이용하여정량하는방법이다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/형광검
출기(HPLC/FLD)
②기구
㉮항온수조
㉯질소농축기
㉰pHmeter
㉱원심분리기
㉲교반기
㉳진탕기
㉴용매여과장치
㉵초자기구:유리시험관,비이커
㉶분석저울:0.1mg까지측정이
가능한것
(라)시약및시액
①에탄올,디클로르메탄,에틸아
세테이트,헥산,이소프로판올,
메탄올:액체크로마토그래피
용또는이와동등한것
②탄산칼륨,수산화칼륨,인산칼
륨,무수초산나트륨,염화아연
:특급시약또는이와동등한
것- 43 -③초산:Glacial급
④Lipase:Candidarugosa를
기원으로하는것으로써약
1000unit/mg의활성이있는
것또는동등한효소활성을
가진것으로써Pseudomonas
와Rhizopus를기원으로하
는것
⑤아연분말:입자60㎛이하인
것또는이와동등한것
⑥증류수:3차증류수로18MΩ 
이상인것
⑦40%수산화칼륨용액:수산화
칼륨40g을100mL용량플
라스크에넣은후증류수로
녹여용량을맞춘다.
⑧0.8M인산완충용액:인산칼
륨55g을500mL비이커에
넣은후증류수350mL로녹
인후40%수산화칼륨용액을
이용해pH를7.9∼8.0으로맞
춘후500mL용량플라스크
에옮긴후증류수로용량을
맞춘다.
⑨알콜혼합용매:에탄올과메탄
올을95:5의부피비로혼합하
여조제한다.
⑩이동상:디클로르메탄900
mL에메탄올100mL을혼합
한용매에메탄올5mL에녹- 44 -인염화아연1.37g과초산
0.3g및무수초산나트륨0.41
g을넣고혼합한후0.2μm
나일론멤브레인필터로여과
하고탈기하여사용한다.
(마)표준용액조제
①표준원액:VitaminK10.025g
을50mL용량플라스크에넣
은후이소프로판올로녹여조
제한다.
②표준용액:표준원액을1mL
취하여메탄올로100mL까지
채워5㎍/mL이되도록조제
한다.
③검량곡선표준용액:표준용액
을0.2,0.5,1,2및4mL를각
각취하여100mL까지메탄올
로채워10,25,50,100및
200ng/mL이되도록조제한
다.
(바)시험용액조제
①분해
시료약1g을시험관에넣고,
38℃증류수15mL을넣은후
잘흔들어녹인다.여기에0.8
M인산완충용액5mL을넣고,
분해효소인lipase1g을넣고
교반기를이용하여녹인후,마
개로시험관을막고세게흔들
어lipase가충분히분산되도록- 45 -한다.38℃항온수조에서20분
간격으로15초간흔들면서120
분간효소처리를한다음,알콜
혼합용액10mL을넣고흔든
후탄산칼륨1g을넣고흔든다.
②추출
시험관에헥산30mL을넣고
10분이상진탕기를이용하여
세게흔든다.이를냉암소에10
분이상정치하여두층으로분
리되는것을확인하고(층분리가
완전하지않으면1000rpm에서
10분간원심분리한다.),상층액
1mL을별도의유리시험관으로
옮겨질소농축기를이용하여건
조한후다시메탄올1mL을
넣고진탕기를이용하여용해한
후0.45μm나일론멤브레인필
터로여과하여시험용액으로한
다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-분석칼럼:C18(4.6×250mm,5
μm)또는이와동등한것
-포스트칼럼:C18(4.6×30mm)
또는이와동등한것
 ※분석전아연분말을채우고
분석칼럼과형광검출기사이에
장착한다.
-칼럼온도:30℃- 46 -자.∼카.(생략)
<신설>-이동상유속:1.1mL/min
-검출파장:여기파장265nm,
측정파장430nm
-주입량:10μL
②정량시험
표준용액과시험용액을각각주
입하여피크의머무름시간을
비교하고동일물질인지정성확
인후표준용액의피크면적또는
높이에의해구한검량선을사용
하여시험용액중의비타민K1
의농도(㎍/mL)를구하고,검사
시료중비타민K1의함량(㎍
/100g)을산출한다.
비타민K1함량(㎍/100g)
=C×V/S×100
C:검량선에서구한비타민K1의
농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
자.∼카.(현행과같음)
타.비타민B군동시분석법
(가)시험법적용범위
조제분유,조제우유,성장기용조
제분유및성장기용조제우유등
조제유류에적용한다.
(나)분석원리- 47 -시료중의수용성비타민B군5
종(B1,B2,B6,니코틴산아미드 ,엽
산)을헥산설폰산나트륨이함유된
초산용액으로 추출정제하여 역
상칼럼으로 분리한후고속액체
크로마토그래프/자외부흡광검출
기를이용하여정량하는방법이
다.
(다)장치및기구
①장치
고속액체크로마토그래프/자외부
흡광검출기(HPLC/UV)
②기구
㉮원심분리기
㉯진탕기
㉰용매여과장치
㉱원심분리관
㉲분석저울:0.1mg까지측정이
가능한것
(라)시약및시액
①메탄올:액체크로마토그래피용
또는이와동등한것
②초산,수산화나트륨,헥산설폰
산나트륨:특급시약또는이
와동등한것
③증류수:3차증류수로18MΩ
이상인
④이동상
㉮5mM헥산설폰산나트륨이
함유된0.1%초산용액:초- 48 -산1mL을1L용량플라스크
에넣은후증류수로약900
mL까지채우고,헥산설폰산
나트륨을5mM농도가되도
록넣고혼합한후증류수로1
L를맞춘다.
㉯5mM헥산설폰산나트륨이
함유된메탄올:메탄올을약
900mL까지채우고,헥산설폰
산나트륨을5mM농도가되
도록넣고혼합한후메탄올
로1L를맞춘다.
(마)표준용액조제
①표준원액
㉮VitaminB1,VitaminB6,니
코틴산아미드,:B10.01g,
B60.01g,니코틴산아미드
0.1g을100mL용량플라스
크에넣고이동상㉮의용액
으로용해하면서용량을맞
춘다.
㉯VitaminB2,엽산:B20.01
g,엽산0.01g을100mL용
량플라스크에넣고0.1N수
산화나트륨용액용액으로
용량을맞춘다.
②표준용액:VitaminB1,B2,B6,
엽산표준원액은1mL,니코
틴산아미드의표준원액은1
mL을취하여100mL용량플- 49 -라스크에넣고이동상 ㉮의
용액으로용량을맞추어각각
1㎍/mL및10㎍/mL이되
도록조제한다.
③검량곡선표준용액:Vitamin
B1,B2,B6,엽산표준용액은
이동상 ㉮로희석하여0.05,
0.10,0.25,0.5및1㎍/mL이
되도록조제한고,니코틴산아
미드표준용액은이동상㉮로
희석하여0.5,1,2.5,5및10
㎍/mL이되도록조제한다.
(바)시험용액조제
시료약1g을정밀히달아원심
분리관에넣고5mM헥산설폰산
나트륨이함유된0.1%초산용액
을20mL를넣어녹인다.15분간
교반기로잘섞은후,이어서15분
간초음파추출하고15,000rpm,
-10℃에서10분간원심분리한
다.상층액의일부를0.2μm나
일론멤브레인필터로여과하여
시험용액으로한다.
(사)시험조작
①고속액체크로마토그래프조건
-칼럼:C18(4.6×250mm,5μ
m)또는이와동등한것
-칼럼온도:30℃
-유속:0.6mL/min
-검출파장:UV270nm- 50 --주입량:50μL
-이동상:5mM헥산설폰산나
트륨이함유된0.1%초산용
액(A)5mM헥산설폰산나트
륨이함유된메탄올(B)
     시간(분)A(%)B(%)
08020
8.08020
16.04060
18.02080
18.10100
30.00100
30.18020
358020
②정량시험
표준용액과 시험용액을 각각주
입하여  피크의 머무름 시간을
비교하고 동일물질인지 정성확
인후표준용액의 피크면적 또는
높이에의해구한검량선을  사용
하여시험용액 중의비타민B군
의농도(㎍/mL)를구하고,검사
시료중비타민B군의함량(㎍
/100g)을산출한다.
비타민B군개별함량(㎍/100g)
=C×V/S×100
C:검량선에서구한비타민B군개
별농도(㎍/mL)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료채취량(g)
100:단위환산
＊비타민B1은첨가된형태만정량가능- 51 -4.∼8.(생략)
9.미생물시험법
가.∼나.(생략)
다.세균수
(1)일반세균수
(가)∼(나)(생략)
(다)자동화된최확수법
(AutomatedMPN)
우유류,저지방우유류,유당
분해우유,가공유류(유음료제
외),조제유류,분유류에한한다.
라.∼마.(생략)
바.대장균수(GenericE.coli)
(1)∼(2)(생략)
(3)시험방법
(가)∼(다)(생략)
(라)자동화된최확수법(AutomatedMPN)
자연치즈,식육추출가공품에
한한다.
사.～러(생략)
머.엔테로박터사카자키
[Enterobacter(Cronobacter)
sakazakii]하며,부적합시개별정량법으로확인검
사를실시한다.
4.∼8.(현행과같음)
9.미생물시험법
가.∼나.(현행과같음)
다.세균수
(1)일반세균수
(가)∼(나)(현행과같음)
(다)자동화된최확수법
(AutomatedMPN)
-------------------
------------------------------
------------------------ 분유류,
소,돼지,닭(오리)도체에한한다.
라.∼마.(현행과같음)
바.대장균수(GenericE.coli)
(1)∼(2)(현행과같음)
(3)시험방법
(가)∼(다)(현행과같음)
(라)---------------------
----------식육추출가공품,닭
(오리)도체에한한다.
사.～러.(현행과같음)
머.엔테로박터사카자키
[Enterobactersakazakii(Cronobacter
spp.)]- 52 -(1)∼(2)(생략)
(3)시험방법
(가)증균배양
시료100g을무균적으로채
취하여900mL의멸균증류수
에접종하여36℃에서18시간
증균배양한다.증균배양액10
mL를90mL의
Enterobacteriaceae
enrichmentbroth(EEbroth)에
첨가하여36℃에서18시간증
균배양한다.
(나)～(다)(생략)
버.～서.(생략)
10.～16.(생략)
Ⅳ.～Ⅸ.(생략)(1)∼(2)(현행과같음)
(3)시험방법
(가)증균배양
시료60g을무균적으로채취하여
540mL의멸균증류수에접종하여
-------------------------
------------------------- 
-----------------------------
-----------------------------
---------------------------------
------.
(나)～(다)(현행과같음)
버.～서.(현행과같음)
10.～16.(현행과같음)
Ⅳ.～Ⅸ.(현행과같음)