中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
 
GB ×××× —××××  
 
 
 
食品安全国家标准  
食品添加剂   乳酸链球菌素  
（征求意见稿 ） 
 
201× -××-××发布 201× -××-××实施
       中 华 人 民 共 和 国          
      国家卫生和计划生育委员会     
 发布 GB ×××× —××××  
 食品安全国家标准  
食品添加剂   乳酸链球菌素  
1 范围  
本标准适用于经乳酸乳球菌 （Lactococcus lactis subsp lactis ）发酵后提取而制得的食品
添加剂乳酸链球菌素 (Nisin )产品。 
2 分子式、结构式和相对分子质量  
2.1  分子式  
C143H230O37N42S7 (Nisin A)  
C141H228O38N41S7 (Nisin Z)  
2.2  结构式  
 
Nisn A：第27位氨基酸为组氨酸 （His）， Nisn Z：第27位氨基酸为天冬酰胺 (Asn)  
2.3  相对分子质量  
Nisin A:3354.35 （按2013年国际相对原子质量 ） 
Nisin Z:3330.31 （按2013年国际相对原子质量 ） 
3 技术要求  
3.1 感官要求  
   感官要求应符合表 1 的规定。 
表1 感官要求  
项    目 要    求 检验方法  
色泽  浅棕色至乳白色  将适量试样均匀置于白搪瓷盘内 ，于自然光线下观察其色泽
和状态  状态  粉末  
3.2 理化指标  GB ×××× —××××  
    理化指标应符合表 2的规定。 
表2 理化指标  
3.3 微生物指标  
    微生物指标应符合表 3的规定。 
表3 微生物指标  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 项    目 指    标 检验方法  
效价 /（IU/mg)  ≥ 900 附录 A中的 A.3 
干燥减量 ，w/%  ≤ 3.0 GB5009.3  
氯化钠，w/% ≥ 50.0 GB/T5009.42  
铅（Pb）/(mg/kg ) ≤ 1.0 GB5009.75  
项    目 指    标 检验方法  
菌落总数 /(CFU/g)  ≤ 10 GB4789.2  
大肠菌群 /(MPN/g)  ＜ 3 GB4789.3  
大肠埃希氏菌 /(CFU/g)    25 g不得检出  GB4789.38  
沙门氏菌 /(CFU/g)   25 g不得检出  GB4789.4  GB ×××× —××××  
 附  录  A 
检验方法   
A.1 一般规定  
本标准除另有规定外 ，所用试剂的纯度应在分析纯以上 ，所用标准滴定溶液 、杂质测定
用标准溶液 、制剂及制品 ，应按 GB/T 601 、GB/T 602 、GB/T 603 的规定制备 ，实验用水应符
合GB/T 6682 中三级水的规定 。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时 ，均指水溶液 。 
A.2 鉴别试验  
A.2.1  试剂和材料  
A.2.1.1 盐酸溶液 ：0.02 mol/L 。 
A.2.1.2 氢氧化钠溶液 ：5 mol/L。 
A.2.1.3 脱脂牛奶 ：脂肪含量 <1%。 
A.2.1.4 石蕊牛奶培养基 。 
A.2.1.5 检测菌：乳酸链球菌 （A TCC11454,NCIMB 8586 ） 。 
A.2.2 分析步骤  
A.2.2.1 试样储备液制备  
取1 g试样 ,溶于 1 L盐酸溶液中 ,溶液效价为 1000 IU/mL 。 
A.2.2.2 对酸溶液的稳定性试验  
用盐酸溶液将试样储备液稀释至 50 IU/mL ，制成试样溶液 。将该试样溶液煮沸 5 min，
按效价测定方法 （A.3）测煮沸过的试样溶液中 Nisin效价。计算煮沸过 的试样中 Nisin 的
效价，计算结果在其效价值的 （100%±5%）内，表明无显著活性损失 。 
A.2.2.3  对碱溶液的稳定性试验  
用盐酸溶液将试样储备液稀释至 50 IU/mL ，制成试样溶液 。将该试样溶液煮沸 5 min，
用氢氧化钠溶液调 pH至11.0将溶液加热到 65 ℃保持 30 min，冷却。然后滴加盐酸调 pH
至2.0，用效价测定方法 （A.3）测定最终溶液中 Nisin的效价。在按照上述操作处理后会出
现抑菌活性的完全损失 。 
A.2.2.4 不同抑菌物质中 Nisin 的鉴别  
通过乳酸链球菌对高浓度 Nisin的耐受性将 Nisin和其他抑菌物质区分 。 
A.2.2.4.1  检测菌的培养  
乳酸链球菌 （生产菌株 ） （A TCC11454,NCIMB 8586 ）在无菌脱脂牛奶中培养 ，30 ℃培
养18 h。 
A.2.2.4.2  准备 1个或多个装有 100 ml石蕊牛奶的长颈烧瓶 ，在121 ℃灭菌 15 min，将0.1 
g试样加入该无菌的石蕊牛奶中混匀 ，在室温下静置 2 h后加入 0.1 mL检测菌，30℃下培养
24 h。 
A.2.2.4.3  检测菌（乳酸链球菌 ）可在该效价的试样 （约1000 IU/mL ）中生长，但不能在相
似浓度的其 他抑菌物质中生长 。 
A.3 效价  
A.3.1 试剂和材料  
A.3.1.1   乳酸链球菌素标准品 。 
A.3.1.2  盐酸溶液 ：0.02 mol/L 。 
A.3.1.3  吐温溶液 ：吐温 20∶水=1∶1。 GB ×××× —××××  
 A.3.1.4  培养基（S1），配比如下 ：胰蛋白胨 0.8%；酵母膏 0.5%；葡萄糖 0.5%；氯化钠 0.5%； 
磷酸氢二钠 0.2%；琼脂粉 1.5% ，灭菌后 pH 6.8~7.0 。 
A.3.1.5  检测菌：黄色微球菌 ，NCIB8166 。 
A.3.2 分析步骤  
A.3.2.1 检测菌（黄色微球菌 ：NCIB8166 ）的培养及菌悬液的制备  
A.3.2.1.1 检测菌的培养  
    用无菌接种环从甘油管或冻干管中取一环 NCIB8166 检测菌，接种在无菌的 S1平皿上，
进行自然分离 ，挑出饱满 、边缘光滑的菌落 ，扩大，接在 S1的试管斜面上 ，在30 ℃恒温箱
中培养 24 h，放入 2 ℃~5 ℃冰箱中，一个星期后使用 。 
A.3.2.1.2 菌株悬浮液的制备  
取在冰箱中保存了一个星期的 NCIB8166 检测菌，用无菌生理盐水洗脱下来 ，制成 108 
CFU/mL浓度的细胞悬液 ，备用。 
A.3.2.2  平板的制备  
A.3.2.2.1  实验室温度的控制 ：温度控制到最低点 ，尽量让指示菌在未加样前不生长或少生
长。 
A.3.2.2.2  平板的制备 ：配制 S1培养基 200 mL（按比例先把琼脂溶化 ，依次加入各组分溶解 ，
磷酸氢二钠溶解后加入 ）,经121 ℃、20 min灭菌后，放冷至 70 ℃左右，加入 4 mL吐温 20溶
液，充分摇匀 ，等冷却到 50 ℃～55 ℃左右，加入已制备好的菌悬液适量 ，使培养基中检测
菌的最终浓度为 1.0×106 个/mL，摇匀，倒入水平放置的已灭菌的平板中 ，等完全凝固后 ，
用直径为 7 mm打孔器，在平板上打出所需的孔数 ，小心挖掉孔内琼脂 ，移入洁净工作台中
吹风 1.5 h~3.0 h （吹风时间按空气中的湿度大小而定 ，同时控制室内温度最低 ，尽量不要让
检测菌生长 ），吹干后，置2 ℃~5 ℃冰箱中，到次日使用 。 
A.3.2.3 标准品溶液的配制  
    准确称取乳酸链球菌素标准品 （精确到 0.0001 g ），溶于盐酸溶液中 ，使最终浓度为 2 
mg/mL (2000 IU/mL ），摇匀，用盐酸稀释成 300倍、600倍，即成高、低剂量标准溶液 。 
A.3.2.4 试样溶液的配制  
称取一定量的试样 （精确到 0.0001 g），用盐酸溶液溶解后 ，稀释成高 、低剂量试样溶
液，其乳酸链球菌素含量 ，按估计单位高 、低剂量与标准品溶液大致相当 。 
A.3.2.5 滴加溶液  
    取出存放在冰箱中的平板 ，用移液器 ，取70~80 μL标准品高剂量溶液 ，随机滴加在平
板的孔中 ，滴6个孔，再取 70~80 μL标准品低剂量溶液 ，随机滴加在与高剂量溶液同一平板
其余孔的 6个孔中。 
    试样溶液和标准品溶液滴在同一平板上 ，其操作同标准品 。 
A.3.2.6 恒温培养  
    等孔内的溶液渗透完全后 ，移入 30 ℃恒温箱中培养 16 h~24 h 后，测量抑菌圈直径 。 
A.3.3  结果计算  
用卡尺测量抑菌圈直径 ，取其平均值 ，按式（A.1）计算效价 ： 
)1.() () () () (
BH SHBLSL BHSHBLBH SLSH
A kCCXXXXXXXX

          
式中： 
CSH—试样溶液的效价 ，单位为国际单位每毫克 （IU/mg）；  
CBH—标准溶液的效价 ，单位为国际单位每毫克 （IU/mg）；  GB ×××× —××××  
 XSH—高剂量试样溶液所致的抑菌圈直径 ，单位为毫米 （mm)； 
XSL—低剂量试样溶液所致的抑菌圈直径 ，单位为毫米 （mm)； 
XBH—高剂量标准溶液所致的抑菌圈直径 ，单位为毫 米（mm)； 
XBL—低剂量标准溶液所致的抑菌圈直径 ，单位为毫米 （mm)； 
k—高剂量与低剂量浓度的比值 。 
若试样估计值不在测定值的 90%-110%范围内，需重新估计试样效价 ，重测。