식품의약품안전처 공고  제2016-48호
건강기능식품의  기준 및 규격
일부개정고시 (안)  행정예고
2016.  2.  5.
식품의약품안전처- 2 -식품의약품안전처 공고 제2016-48호
  「건강기능식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처고시 제2014-204호, 
2014.12.30.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 
취지, 개정 이유 및 주요 내용을 「행정절차법」 제46조에 따라 다음과 같이  
공고합니다.
                                                201 6년 2월 5일 
                                              식품의약품 안전처장
「건강기능식품의 기준 및 규격」일부 개정고시(안) 행정예고
1. 개정 이유
   ｢건강기능식품의 기준 및 규격 ｣의 시험법을 효율적으로 개정하여 영업자 
및 관계공무원의 이해를 도모하고, 건강기능식품의 기준 및 규격 적용을   
합리화하고자 함
2. 주요 내용
 가. 건강기능식품 시험법 추가 및 개선
  1) 분석 결과의 효율성을 높이기 위하여 시험법 개정
  2) 비타민 C, 아스타잔틴, 진세노사이드 시험법 추가 및 코엔자임Q10,  
유산간균 및 구균, 비피더스균, 플라보놀배당체 시험법 개선 - 3 -  3) 초산에틸, 비타민 A, 나이아신, 엽산, 비타민 B 12, 비타민 C 시험법의 
단위 표기 및 분석 장비 등 명확화
  4) 비타민 D, 비타민 E, 비타민 K, 칼슘, 식이섬유, 인지질 중 포스파티
딜콜린의 함량, 콜레스테롤, 식물스테롤 시험법 중 올바른 맞춤법과 
외래어 표기법에 따른 용어 수정
 나. 건강기능식품의 보존 및 유통기준 관련 규정 재정비
  1) 건강기능식품 원료 ß¶제품 소분 관련 제도 개선을 위해 상위법령에 근거가 
마련됨에 따라 관련 규정 삭제
  2) 건강기능식품에 관한 법률 시행규칙 제12조(영업자의 준수사항) 〔별표4〕 
너목 신설
3. 의견 제출
   「건강기능식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이   
있는 단체 또는 개인은 2016년 3월 4일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품
의약품안전처장(우편번호 : 363-700, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오
송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 건강기능식
품정책과, (전화) 043-719-2456, (팩스) 043-719-2450 에게 제출하여 주시기 
바랍니다.
   가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬 •반 여부와 그 이유)
   나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호
   다. 기타 참고사항- 4 -식품의약품안전처 고시 제2016-000호
   ｢건강기능식품에 관한 법률 ｣ 제14조 및 제15조에 따른 ｢건강기능식품의 
기준 및 규격 ｣(식품의약품안전처 고시 제2014-204호, 2014.12.30)을 다음과   
같이 개정 고시합니다.
2016년 월 일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)  
건강기능식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.
제 2. 5. 9)를 삭제하고, 제 2. 5. 10) 제 2. 5. 11) 및 2. 5. 1 2)를 각각 제 2. 
5. 9), 제 2. 5. 10) 제 2. 5. 11)로 한다. 
 
제 4. 2. 2-5 2-5-5 4. 4.1 4.1.1 중 “1.00 mL”을 “1 g”으로  하며, 4.1.3  “p
pm”을 “ μg/mL”으로, 4.2.3 “1, 2, 5 ppm”을 “5, 10, 20 μg/mL”으로 한다.
제 4. 3. 3-1 3-1-1 2. 2.1 2.1.2 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기” 로 한다.
제 4. 3. 3-1 3-1-1 4. 4.2. 4.2.8 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다. - 5 -제 4. 3. 3-1 3-1-1 4. 4.2. 4.2.9 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다. 
제 4. 3. 3-1 3-1-1 4. 4.2. 4.2.12 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기”로  
한다.
제 4. 3. 3-1 3-1-2 2. 2.1. 2.1.5 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다.
제 4. 3. 3-1 3-1-2 4. 4.3. 4.3.3 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다. 
제 4. 3. 3-1 3-1-2 4. 4.3. 4.3.4 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다. 
제 4. 3. 3-1 3-1-2 4. 4.3. 4.3.5 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다.  
제 4. 3. 3-1 3-1-2 4. 4.3. 4.3.8 중 “분액깔때기”를 “갈색분액깔때기 ”로 한다.
제 4. 3. 3-3 4. 4.3. 4.3.6 중 “분액깔대기”를 “분액깔때기”로 한다.
제 4. 3. 3-4 4. 4.3, 4.3.8 중 “분액깔대기”를 “분액깔때기”로 한다.
제 4. 3. 3-5 3-5-2 2. 2.1 2.1.5 중 “분액깔대기”를 “분액깔때기”로 하고 , 
“2.1.7”을 “2.1.6”으로 “2.1.8”을 “2.1.7”로, “2.1.9”를 “2.1 .8”로 한다.- 6 -제 4. 3. 3-8 3-8-3 1. 중 “니코틴산(나이아신)”을 “나이아신(니코틴산과 니코 틴
산아미드)”로 하고, 제 4. 3. 3-8 3-8-3 3. 3.1.2를 다음과 같이 신설한다.
 3.1.2 Nicotinamide(Pyridine-3-carboxamide)
     분자식 : C 6H6N2O, 분자량 : 122.13, CAS No. : 98-92-0
                  
제 4. 3. 3-8 3-8-3 5. 5.2. 5.2.1 중 “니코틴산”을 “나이아신”으로,  “C : 시험용액 
중의 니코틴산의 농도( μg/mL)”를 “C : 시험용액 중의 니코틴산 및 니코틴산아
미드 농도의 합( μg/mL)”으로 한다. 
제 4. 3. 3-11 3-11-2  2. 2.3 중 “A용액(5 mM sodium hexanesulfonate /0.1% 
초산 용액), B용액(5 mM sodium hexanesulfonate/0.1% 초산 용액: 메 탄올
(70:30))”을 “A(5 mM Tetrabutyl ammonium bromide 용액),  아세토니트릴”로 
한다.
제 4. 3. 3-12 3-12-2 1. 중 “존재하는 비타민B 12을 옥타데실화한 칼럼으로 피리
독신염산염을 분리하는 방법으로 비타민B 12의 측정파장 550 nm에서 검출하여 정
량한다.”를 “비타민B 12을 이동상으로 추출하고 액체크로마토그래프(육방전환밸- 7 -브시스템)/자외부흡광광도검출기를 이용하여 분석하는 방법으로 최대흡수파장인 
550 nm에서 정량분석 한다.”로 한다.
제 4. 3. 3-12 3-12-2 2. 2.2. 2.2.3 중 “Capcellpak MF C 8 (안지름 4.6 mm, 길이 
150 mm, 충진입자 크기 5 μm) 또는 이와 동등한 것”을 “육방전환밸브시스템”으
로 하고, 2.2.4 중 “Capcellpak MG C 18 (안지름 2.0 mm, 길이 35 mm, 충진입자 
크기 5 μm) 또는 이와 동등한 것”을 “전처리 컬럼 : Capcellpak MF C 8 (안지름 
4.6 mm, 길이 150 mm, 충진입자 크기 5 μm) 또는 이와 동등한 것”으로, 2.2.5 
중 “Capcellpak UG C 18 (안지름 1.5 mm, 길이 250 mm, 충진입자 크기 5 μm) 또는 
이와 동등한 것”을 “농축 컬럼 : Capcellpak MG C 18 (안지름 2.0 mm, 길이 35 
mm, 충진입자 크기 5 μm) 또는 이와 동등한 것”으로 한다.  
제 4. 3. 3-12 3-12-2 2. 2.2. 2.2.6을 다음과 같이 신설한다. 
2.2.6 분석 컬럼 : Capcellpak UG C 18 (안지름 1.5 mm, 길이 250 mm, 충진입자 크기 
5 μm) 또는 이와 동등한 것
제 4. 3. 3-12 3-12-2 2. 2.3을 다음과 같이 한다. 
2.3 분석장비의 준비
 이동상은 5 mM 인산이수소칼륨(KH 2PO4) 용액과 5 mM 인산이수소칼륨
(KH 2PO4) 용액 : 메탄올(80:20)을 이용하여 전처리칼럼은 분당 500 uL,  
분석칼럼은 분당 120 uL를 충분한 시간동안 흘려 안정화시킨다. - 8 -비타민 C(mg/100 g) = S × a×b×100
검체량(g) 1000제 4. 3. 3-12 3-12-2 5. 5.1 표 1. 중 주입량 조건인 주입량 “10 uL” 을 “200 
uL”로 하고, 이동상 조건인 “5 mM KH 2PO4/Methanol (80/20)”을 “전처리컬럼 
: 5mM 인산이수소칼륨(KH 2PO4) 용액, 분석컬럼 : 5 mM 인산이수소칼륨
(KH 2PO4) 용액 /메탄올(MeOH)(80:20)”로 하고, 유량의 조건인 “유량 120 uL/분”
을 “전처리칼럼 : 500 uL/분, 분석칼럼 : 120 uL/분”으로 한다.
제 4. 3. 3-14 3-14-3 5. 5.2. 5.2.3을 다음과 같이 한다. 
5.2.3 계산식
 
  S : 시험용액 중의 아스코르빈산의 농도( μg/mL)
  a : 시험용액의 전량(mL)
  b : 시험용액의 희석배수
제 4. 3. 3-14 3-14-4를 다음과 같이 신설한다.
3-14-4 비타민 C(제4법)
1. 시험방법의 요약
 본 시험법은 시료 중 존재하는 아스코르빈산팔미테이트를 메탄올로 균질화
시킨 후 옥타데실화된 칼럼을 연결하여 분리하는 방법으로 자외부흡광 
광도검출기를 이용하여 최대 흡수 파장인 245 nm에서 검출하여 정량한다.- 9 -2. 장비와 재료
  2.1 실험실 장비 및 소모품
   2.1.1 용매용 일회용 실린지
   2.1.2 여과용 멤브레인 필터 및 디스크형 멤브레인 필터
   2.1.3 가지달린 삼각플라스크(Filter flask)
   2.1.4 여지(Filter paper)
   2.1.5 액체크로마토그래프용 유리병
   2.1.6 부피플라스크
   2.1.7 원심분리관
  2.2 분석장비
   2.2.1 고속액체크로마토그래프
   2.2.2 자외부흡광광도검출기 
   2.2.3 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 150 mm, 충전제 : 
octadecyl silica) 또는 이와 동등한 것
  2.3 분석장비의 준비
    이동상은 2개의 용매가 사용되는데 0.05 M KH 2PO4 : 아세토니트릴(30 
: 70) 이 두 개의 용매를 분당 1 mL씩 충분한 시간동안 흘려 기기와 
칼럼을 안정화시킨다.
3. 표준물질 및 일반시약 
  3.1 표준물질
   3.1.1  Ascorbyl palmitate- 10 -분자식 : C 22H38O7, 분자량 : 414.53, CAS No. : 137-66-6
       
  3.2 일반시약
   3.2.1 메탄올(Methanol)
   3.2.2 아세토니트릴(Acetonitrile)
   3.2.3 증류수(Distilled water)
   3.2.4 인산칼륨(Potassium phosphate)
4. 시험과정
  4.1 표준용액 제조
   4.1.1 표준원액
    아스코르빈산팔미테이트 10 mg을 정밀히 달아, 메탄올에 녹여 100 mL로 
한 것을 표준원액으로 한다.
   4.1.2 표준용액
    필요한 경우 표준원액에 메탄올을 넣어 원하는 농도로 희석하여 사용
한다. 사용 시 조제한다.
  4.2 시험용액 제조
   4.2.1 아스코르빈산팔미테이트 약  5 mg에 해당하는 시료를 10 mL 메탄올을 
가하여 10분간 현탁시킨 후 적당량의 메탄올을 넣어 균질화한다.
   4.2.2 균질화된 시료를 100 mL 메스플라스크에 옮기고 소량의 메탄올로 - 11 -항목 조건
주입량 10 μL
칼럼온도 실온
이동상 0.05 M KH 2PO4 : 아세토니트릴(30 : 70)
검출기 파장 245 nm
유량 1 mL/min
비타민 C
(mg/100 g) = S × a × b
×100
× 0.4249검체량(g) 1,000용기를 씻은 후 메스플라스크에 합하여 100 mL로 한다.
   4.2.3 3,000 rpm에서 10～15분간 원심분리를 행하여 상등액을 취하고 메탄
올로 적당히 희석하여 시험용액으로 한다.
5. 분석 및 계산
  5.1 기기분석  
   표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
  
  5.2 정량시험 
   5.2.1 시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 얻은 피크의 넓이 
또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 아스코르빈산
팔미테이트의 농도를 구한다.
   5.2.2 계산식에 의해 시료 중 아스코르빈산의 함량을 산출한다. 
   5.2.3 계산식
   
    
        S : 시험용액 중의 아스코르빈산팔미테이트의 농도( μg/mL)
        a : 시험용액의 전량(mL)
        b : 시험용액의 희석배수- 12 -        0.4249 : 아스코르빈산팔미테이트의 아스코르빈산으로의 환산계수
 
제 4. 3. 3-16 3-16-3 “칼슘(제3법 원자흡광광도법)”을 “칼슘(제3법 유도결합 
플라즈마법)으로 한다.
제 4. 3. 3-26 3-26-1 4. 4.1. 4.1.6 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-34 3-34-1 2. 2.1. 2.1.4 중 “비이커”를 “비커”로 한다. 
제 4. 3. 3-34 3-34-1 4. 4.3 4.3.4 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-34 3-34-1 4. 4.4 4.4.1 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-34 3-34-2 2. 2.1 2.1.4 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-34 3-34-2 2. 2.1 2.1.5 중 “비이커”를 “비커”로 한다. 
제4. 3. 3-34 3-34-2 4. 4.3 4.3.4 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-34 3-34-2 4. 4.4. 4.4.1 중 “비이커”를 “비커”로 한다.
제 4. 3. 3-35 4. 4.2 4.2.2 4.2.2.5 중 “깔대기”를 “깔때기”로 한다 .
제 4. 3. 3-38 4. 4.2 4.2.2 4.2.2.5 중 “깔대기”를 “깔때기”로 한다 .
제 4. 3. “3-46 아스타잔틴”을 “3-46 아스타잔틴 3-46-1 아스타잔틴(제1- 13 -법)”으로 한다. 
제 4. 3. 3-46 3-46-2 아스타잔틴(제2법)을 다음과 같이 신설한다.
3-46-2 아스타잔틴(제2법)
1. 시험방법의 요약
 본 시험법은 시료 중 아스타잔틴을 아세톤으로 녹여 추출하고 cholesterol 
esterase를 넣어 아스타잔틴에 붙어있는 ester기를 분리시킨 후 정제하여 
이동상으로 녹인 용액을 액체크로마토그래피/자외부흡광광도검출기 및 순
상컬럼을 이용하여 분석하는 방법으로 최대 흡수파장인 474 nm에서 정량
분석 한다. 
2. 장비와 재료
  2.1 실험실 장비 및 소모품
   2.1.1 갈색부피플라스크(100 mL)
   2.1.2 액체크로마토그래프용 유리병
   2.1.3 용매용 일회용 실린지
   2.1.4 여과용 멤브레인필터 및 디스크형 멤브레인 필터
   2.1.5 원심분리기
   2.1.6 원심분리관(50 mL)
   2.1.7 시험관(50 mL)(사용되는 초자는 갈색의 유리기구를 사용한다)
   2.1.8 초음파진탕기
   2.1.9 수욕조- 14 -
   2.1.10 질소농축기
   2.1.11 질소가스
  2.2 분석장비
   2.2.1 자외분광광도계(UV/Visible Spectrophotometer)
   2.2.2 고속액체크로마토그래피
   2.2.3 자외부흡광광도 검출기(UV Detector) 또는 포토다이오드어레이 
검출기(Photodiode array)
   2.2.4 칼럼오븐 
   2.2.5 Luna silica 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 150 mm, 충진 입 자 크기 
3μm) 또는 이와 동등한 것 
  2.3 분석장비의 준비
     이동상인 헥산과 아세톤을 82 : 18로 분당 1.2 mL씩 충분한 시간  
동안 흘려 칼럼과 기기를 안정화 시킨다.
3. 표준물질 및 시약
  3.1 표준물질
   3.1.1 아스타잔틴(Astaxanthin)
    분자식 : C 40H52O4, 분자량 : 596.84, CAS No. : 19044-06-5
   
  3.2 일반시약- 15 -    3.2.1. 헥산(Hexane)
    3.2.2. 클로로포름(Chloroform)
    3.2.3. 아세톤(Acetone)
    3.2.4. 석유 에테르(Petroleum ether)
    3.2.5. 50 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.0)
    3.2.6. 무수황산나트륨(Sodium sulfate Anhydrous)
    3.2.7. Cholesterol esterase
4. 시험과정
  4.1 Cholesterol esterase 용액의 조제(사용직전에 조제)
   4.1.1 Cholesterol esterase가 4 unit/mL(1 unit : pH 7. 0, 37 ç에서 1분
당 1 μmole 콜레스테롤을 만드는데 필요한 효소의 양)이 되도록 
50 mM Tris-HCl 완충액(pH 7.0)에 용해시킨다.
  4.2. 표준원액의 조제
   4.2.1. 아스타잔틴 표준품 3 mg을 100 mL 갈색부피플라스크에 정밀히 
취한다. 
   4.2.2. 클로로포름 10 mL을 넣고 녹인다.
   4.2.3. 헥산으로 표선까지 맞춘다.
  4.3. 표준용액 조제
   4.3.1. 100 mL 갈색부피플라스크에 표준원액 5, 10, 15 mL을 정밀히  
취한다.
   4.3.2. 클로로포름 4 mL을 넣어 녹인다.- 16 -   4.3.3. 헥산으로 표선까지 맞춘다.
   4.3.4. 4.3.3용액의 헥산을 대조액으로 하여 474 nm에서 흡광도를 측정
한다.
   4.3.5. 4.3.3용액을 표준용액으로 하여 고속액체크로마토그래피로 분석한다. 
  4.4. 시험용액 조제
   4.4.1. 시료(아스타잔틴으로서) 약 1.5 mg을 100 mL 갈색부피플라스크에 
정밀히 취한다.
   4.4.2. 아세톤 100 mL을 넣어 완전히 용해시킨 후 표선까지 맞춘다.
   4.4.3. 4.4.2용액을 아세톤으로 5배 희석한 것을 시험용액으로 한다.
   4.4.4. 원심분리관에 시험용액 3 mL, Cholesterol esterase 용액 3 mL을 
넣는다.
   4.4.5. 37 ç 수욕에서 45분 동안 계속 교반하면서 반응시킨다.
   4.4.6. 효소 분해 후 무수황산나트륨 1 g과 석유에테르 4 mL을 첨가하여 
30초간 혼합한다.
   4.4.7. 3,000 rpm에서 3분간 원심분리하여 석유에테르층을 시험관에   
옮긴다.
   4.4.8. 물층에 석유에테르 4 mL을 가하여 1회 반복 추출하여 석유    
에테르층을 합한다.
   4.4.9. 탈수된 석유에테르층을 질소가스를 이용하여 완전히 건조시킨 
후, 이동상 3 mL을 넣고 용해시킨다.
   4.4.10. 위 용액을 0.45 um 멤브레인 필터로 여과한 것을 시험용액으로 - 17 -항목 조건
주입량 20 uL
칼럼온도 25 ç
이동상 헥산 : 아세톤 (82 : 18)
검출기 파장 474 nm
유속 1.2 mL/분한다.
5. 분석 및 계산
 5.1 기기분석
표 1. 아미노산분석계 조건(예)
 5.2 계산
   5.2.1 아스타잔틴 농도 (ug/mL) = (474 nm 흡광도 x 10,000) /  2,100
        2,100 : 474 nm에서 1cm cuvette 의 1 % 아스타잔틴의 기 준   
흡광도값
   5.2.2. 아스타잔틴 이성질체 용출 순서
       trans 아스타잔틴, 9-cis 아스타잔틴, 13-cis 아스타잔틴 순으로  
용출된다.
   5.2.3. 총 피크면적 = P trans + (1.2 x P 9-cis) + (1.6 x P 13-cis)
          P trans  : trans 아스타잔틴의 피크면적
          P 9-cis  : 9-cis 아스타잔틴의 피크면적
          P 13-cis  : 13-cis 아스타잔틴의 피크면적
          1.2 : 9-cis를 trans 아스타잔틴으로 전환계수
          1.6 : 13-cis를 trans 아스타잔틴으로 전환계수
   5.2.4. 아스타잔틴 함량 (%) = (C x a x b x 100) / (S x 1 ,000)- 18 -          C : 시험용액중의 아스타잔틴 농도( μg/mL)
          a : 시험용액의 전량(mL)
          b : 희석배수
          S : 시료 채취량(mg)
제 4. 3. 3-53 코엔자임Q10을 다음과 같이 한다.
3-53 코엔자임Q10
1. 시험방법의 요약
  본 시험법은 시료 중 코엔자임Q10을 헥산·무수에탄올혼합액으로 추출하여 
액체크로마로그래프/자외부흡광광도검출기를 이용하여 분석하는 방법으
로 최대흡수파장인 280 nm에서 정량분석 한다.
2. 장비와 재료
  2.1 실험실 장비 및 소모품
    2.1.1 용매용 일회용 실린지
    2.1.2 여과용 멤브레인필터 및 디스크형 멤브레인필터
    2.1.3 액체크로마토그래프용 유리병
    2.1.4 부피플라스크
    2.1.5 초음파진탕기
  2.2 분석장비
    2.2.1 고속액체크로마토그래프
    2.2.2 자외부흡광광도검출기- 19 -    2.2.3 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 150 mm, 충전제 
Octadecyl silica) 또는 이와 동등한 것
  2.3 분석장비의 준비
     이동상을 이용하여 용매를 분당 1.0 mL로 충분한 시간동안 흘려 안
정화 시킨다.
3. 표준물질 및 일반시약 
  3.1 표준물질
    3.1.1 코엔자임Q10(Coenzyme Q10, Ubiquinone, Ubidecar enone)
         분자식 : C 59H90O4, 분자량 : 863.37, CAS No. : 303-98-0
CH3
OO
H3CH3C
CH3HO
O6-10
  3.2 일반시약
    3.2.1 헥산(n-Hexane)
    3.2.2 에탄올(Ethanol)
    3.2.3 무수염화제이철(Ferric chloride, anhydrous)
    3.2.4 아세토니트릴(Acetonitrile)
    3.2.5 테트라하이드로퓨란(Tetrahydrofuran)
  3.3 시액의 조제
    3.3.1 1% 무수염화제이철용액
        무수염화제이철 1 g에 에탄올을 가하여 100 mL로 한다.- 20 - 4. 시험과정
  4.1 표준용액 제조
    4.1.1 표준물질인 코엔자임Q10 10 mg을 정밀히 칭량하여 10 mL   부
피플라스크에 넣어 헥산·무수에탄올혼합액(5 : 2)으로 용해한 후 
표선까지 정용한다.
    4.1.2 위의 표준원액을 헥산·무수에탄올혼합액(5 : 2)으로 적정농도로 
단계별 희석한다.
    4.1.3 4.1.2의 희석한 표준원액 10 mL를 취하여 1% 무수염화제이철 용
액 2.5 mL를 넣은 다음 무수에탄올로 정확하게 25 mL로 하여  
표준용액으로 한다. 
  4.2 시험용액 제조
    4.2.1 시료 약 10 mg(코엔자임Q10으로서)을 정밀히 칭량하여 100 mL 부
피플라스크에 넣는다.
    4.2.2 헥산·무수에탄올혼합액(5 : 2)을 넣어 시료가 전부 용해될 때 까지 
초음파 진탕기로 용해시킨 후 표선까지 정용한다. 
    4.2.3 이 액 10 mL를 취하여 25 mL 부피플라스크에 넣는다.
    4.2.4 여기에 1% 무수염화제이철용액 2.5 mL를 넣은 다음 무수에탄올을 
넣어 25 mL가 되게 정용한다.
    4.2.5 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 용액을 시험용액으로 한다.
5. 분석 및 계산
  5.1 기기 분석- 21 -항목 조건
주입량 10 μL
칼럼온도 40 ç
이동상 아세토니트릴:테트라하이드로퓨란:물(55 : 40 : 5)
검출기 파장 280 nm
유속 1.0 ㎖/min     표.1 고속액체크로마토그래프 조건(예)
  5.2 계산
     5.2.1 코엔자임Q10(mg/g) = C × a/S × P × 1/1,000
        C : 시험용액 중의 코엔자임Q10 농도( μg/mL)
        a : 시험용액의 전량(mL)
        S : 시료 채취량(g)
        P : 표준품의 순도
        1/1,000 : 단위 환산 계수
제 4. 3. 3-55 4. 4.2 4.2.4을 다음과 같이 신설한다.
4.2.4 젤리시료제품
  4.2.4.1 시료 약 3～4 g을 분액여두에 취하고 n-Hexane 100 mL 및 70 % 
메탄올 100 mL를 가하여 3시간동안 진탕 추출한다. 
  4.2.4.2 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 다음 하층을 환저플라스크에 취
하여 수욕 중에서 감압농축하고 농축물을 증류수 10 mL에 용해
한 후 여과(0.45 μm)하여 시험용액으로 한다.- 22 -제 4. 3. 3-58 “유산간균 및 구균”을 “유산균수”로 하고, 다음과 같이 한다. 
3-58 유산균수
1. 시험방법의 요약
  본 시험법은 시료에 함유된 유산균을 MRS 배지 또는 BL 배지를 사용
하여 배양하는 방법으로 배양 후 집락계산기로 정량한다.
2. 기기와 재료
  2.1 실험실 장비 및 소모품
   2.1.1 고압멸균기(Autoclave)
   2.1.2 고압멸균가능 병
   2.1.3 무균대(Clean bench)
   2.1.4 도말봉(Spreader, 스프레더)
   2.1.5 마개 있는 시험관
   2.1.6. 소독용 알콜 램프
   2.1.7. 항온배양기(Incubator)
3. 일반시약 및 일반시액
  3.1 일반시약
   3.1.1 에탄올(Ethanol)
  3.2 시액 및 배지의 조제
   3.2.1 멸균생리식염수(Saline)
    3.2.1.1 Sodium Chloride 8.5 g에 증류수를 가하여 1,000 mL 로 하고 
121 ç로 멸균한다.- 23 -   3.2.2 펩톤식염완충액(Buffered Peptone Water)
    3.2.2.1 Peptone 10 g, Sodium Chloride 5 g, Diso dium Phosphate 3.5 g, 
Mono-potassium Phosphate 1.5 g을 증류수 1,000 mL에 가하여 
pH를 7.2±0.2로 조정한 후 121 ç에서 15분간 고압 멸균한다.
   3.2.3 MRS 배지
    3.2.3.1 Enzyme Digest of Casein 10 g, Meat Extr act 10 g, Yeast Extract 
4 g, Glucose 20 g, Polysorbate 80(Tween 80) 1.08 g, 
Triammonium Citrate 2 g, Sodium Acetate 5 g, Magnesiu m 
Sulfate 7H 2O 0.2 g, Manganese Sulfate 4H 2O 0.05 g, 
Dipotassium hydrogen Phosphate 2 g, Agar 15 g을 증류수 
1,000 mL에 녹이고 pH를 5.7±0.1로 조정한 후 121 ç에서 15분
간 멸균한다.
   3.2.4 BL 한천배지(BL Agar)
    3.2.4.1 Beef Extract 3 g, Liver Extract 5 g, Ye ast Extract 5 g, Proteose 
Peptone 10 g, Tryptone 5 g, Soypeptone 3 g, Soluble Starch 
0.5 g, Glucose 10 g, Dipotassium Phosphate 1 g, 
Monopotassium Phosphate 1g, Magnesium Sulfate 0.2g, 
Sodium Chloride 0.01g, Manganese Sulfate 0.00674 g,  
L-Cysteine ß¶HCl ß¶H2O 0.5 g, Ferrous Sulfate  0.01 g, Polysorbate 
80(Tween 80) 1 g, Agar 15 g을 증류수 1,000 mL에 녹이고 
pH를 7.2로 조정한 후 121 ç에서 15분간 멸균하여, 50 ç로 냉각 - 24 -후 소, 말, 양 또는 사람의 탈섬유소 혈액을 5%가 되도록 첨가한다
(BL 한천배지 사용도 무관함).
4. 시험과정
  4.1 시험용액의 조제
   4.1.1 액상시료
    4.1.1.1 채취된 시료를 강하게 진탕하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.2 반유동상시료 
    4.1.2.1 채취된 시료를 멸균유리봉과 멸균스파테르 등으로 잘 혼합한다.
    4.1.2.2 그 일정량(10～25 mL)을 멸균용기에 취해 9배 양의 희석액과  
혼합 한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.3 고체시료 
    4.1.3.1 채취된 시료의 일정량(10～25 g)을 멸균된 가위와 칼 등으로   
잘게 자른다.
    4.1.3.2 희석액을 가해 균질기를 이용해서 가능한 한 저온으로 균질화
한다.
    4.1.3.3 여기에 희석액을 가해서 일정량(100～250 mL)으로 한 것을  
시험용액으로 한다.
   4.1.4 분말상시료
    4.1.4.1 시료를 멸균유리봉과 멸균스파테르 등으로 잘 혼합한다.
    4.1.4.2 그 일정량(10 g)을 멸균용기에 취해 9배 양의 희석액과 혼합한 
것을 시험용액으로 한다.- 25 -   4.1.5 캡슐제품류
    4.1.5.1 캡슐을 포함하여 시료의 일정량(10～25 g)을 취한다.
    4.1.5.2 9배 양의 희석액을 가해 균질기와 스토마커 등을 이용하여   
균질화한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.6 냉동제품
    4.1.6.1 냉동상태의 시료를 포장된 상태 그대로 40 ç이하에서 될 수  
있는 대로 단시간에 녹여 용기, 포장의 표면을 70% 알코올 솜
으로 잘 닦은 후 상기 4.1.1～4.1.5의 방법으로 시험용액을 조제
한다.
   4.1.7 시험용액조제 시 주의사항
    4.1.7.1 시험용액 제조 희석액은 멸균생리식염수 또는 펩톤식염완충액을 
사용한다.
    4.1.7.2 위와 같이 조제된 시험원액에 대해서는 희석액 9 mL에 시험원액  
1 mL를 취하여 10배 희석액으로 만든다.
    4.1.7.3 필요에 따라 100배, 1,000배 등 단계별 희석용액을 만들어 사용 
할 수 있다.
    4.1.7.4 시험용액의 조제 시 시료를 용기 포장한 대로 채취할 때에는 
그 외부를 물로 씻고 자연 건조시킨 다음 마개 및 그 하부 5～
10 cm의 부근까지 70% 알코올 탈지면으로 닦고, 화염멸균한 후 
냉각하고 멸균한 기구로 개봉 또는 개관하여 2차 오염을 방지하
여야 한다. 지방분이 많은 시료의 경우는 Polysorbate 80(Tween - 26 -80)과 같은 세균에 독성이 없는 계면활성제를 첨가할 수 있다.
    4.1.7.5 실험을 실시하기 직전에 잘 균질화 하고 검사시료에 따라 시험 
용액을 조제한다.
  4.2 시험의 조작
   4.2.1 유산균수 측정방법은 MRS 배지 또는 BL 한천배지를 사용하여 
유산균의 집락을 계수한다.
   4.2.2 시료 10 ∼25 g(mL)에 9배 희석액을 가하여 100 ∼250 mL이 되게 
하고 균질화한다(10-1용액). 
   4.2.3 시험용액(10-1용액) 1 mL에 희석액을 가하여 10 mL이 되게 하여 
10-2시험용액을 만든 후 동일하게 조작하여 희석한다.
   4.2.4 BL 한천배지 시험 조작
    4.2.4.1 각 희석 시험용액 0.1 mL씩을 BL 한천배지 2매 이상에 접종하며 
멸균초자봉으로 도말한다. 시료가 접종된 페트리접시(Pretridish)는 
35∼37 ç에서 48∼72±3시간  혐기배양한다. 배양 후 생성된   
집락수를 측정하고 희석배수를 곱하여 검사 시료 g당 균수를 
산출한다(접종량도 희석배수에 고려해야 한다).
   4.2.5 MRS 배지 시험 조작
    4.2.5.1 각 단계별 희석액 1 mL씩을 멸균 페트리접시(Pretridish) 2 매 이상씩에 
무균적으로 취한다.
    4.2.5.2 약 43～45 ç로 유지한 MRS 배지 약 15 mL을 무균적으로 분주한다.
    4.2.5.3 페트리접시(Pretridish) 뚜껑에 부착하지 않도록 주의하면서 조용- 27 -히 회전하여 좌우로 기울이면서 시료와 배지를 잘 섞고 냉각 
응고시킨다. 단, 시료를 취하여 배지를 가할 때까지의 시간은  
20분 이상 경과하여서는 안 된다.
    4.2.5.4 냉각 응고시킨 페트리접시(Pretridish)는 거꾸로 하여 35 ∼37 ç에서 
48∼72±3시간 배양한다.
    4.2.5.5 발생한 황색의 집락을 유산균의 집락으로 계측한다. 
   4.2.6 집락수 산정
    4.2.6.1 배양 후 즉시 집락 계산기를 사용하여 생성된 집락수를 계산한다. 
단, 부득이할 경우에는 5 ç에 보존시켜 24시간 이내에 산정한다.
    4.2.6.2 집락수의 계산은 확산집락이 없고(전면의 1/2이하 일 때에는  
지장이 없음) 1평판 당 30 ∼300개의 집락을 생성한 평판을 택하
여 집락수를 계산하는 것을 원칙으로 한다. 전 평판에 300개 
이상 집락이 발생한 경우 300에 가까운 평판에 대하여 밀집평판   
측정법에 따라 안지름 9 cm의 페트리접시(Pretridish)인 경우에
는 1 cm2내의 평균집락수에 65를 곱하여 그 평판의 집락수로 
계산한다. 전 평판에 30개 이하의 집락만을 얻었을 경우에는 가
장 희석배수가 얕은 것을 측정한다.
   4.2.7 유산균수의 기재보고
    4.2.7.1 시료 1 mL  중의 유산균수를 기재 또는 보고할 경우에 그것이 
어떤 제한된 것에서 발육한 집락을 측정한 수치인 것을 명확히 
하기 위하여 1평판에 있어서의 집락수는 상당 희석배수로 곱하고 - 28 -1 mL 중(1 g 중)의 유산균수 몇 개라고 기재보고하며 동시에  
배양온도를 기록한다. 숫자는 앞에서부터 두 번째 자리 숫자까지 
유효숫자로 하며 세 번째 자리숫자에서 반올림하여 그 이하를 
0으로 한다. 
제 4. 3. 3-59 “비피더스균 (Bifidobacterium) ”을 “유산간·구균 및 비피더스
균”으로 하고 다음과 같이 한다.
3-59 유산간·구균 및 비피더스균
1. 시험방법의 요약
 본 시험법은 유산간·구균과 비피더스균을 구분하여 산정해야 하는 경우에 
한하며, 유산간·구균은 BCP첨가 평판측정용배지를 사용하고 비피더스균
은 TOS-MUP 배지를 사용한 시험방법에 따라 시험한 후 산출한다.
2. 기구와 재료
  2.1 실험실 장비 및 소모품
  2.1.1 고압멸균기(Autoclave)
   2.1.2 고압멸균가능병
   2.1.3 무균대(Clean bench)
   2.1.4 도말봉(Spreader, 스프레더)
   2.1.5 마개 있는 시험관
   2.1.6. 소독용 알콜 램프
   2.1.7. 항온배양기(Incubator) - 29 -3. 일반시약 및 일반시액
  3.1 일반시약
   3.1.1 에탄올(Ethanol)
  3.2 시액 및 배지의 조제
   3.2.1 멸균생리식염수(Saline)
    3.2.1.1 Sodium Chloride 8.5 g에 증류수를 가하여 1,000 m L로 하고 
121 ç로 멸균한다.
   3.2.2 펩톤식염완충액(Buffered Peptone Water)
    3.2.2.1 Peptone 10 g, Sodium Chloride 5 g, Diso dium Phosphate 3.5 g, 
Mono-potassium Phosphate 1.5 g을 증류수 1,000 mL에 가하여 
pH를  7.2±0.2로 조정한 후 121 ç에서 15분간 고압 멸균한다.
   3.2.3 BCP첨가 평판측정용 한천배지(Plate Count Agar with Bro m 
Cresol Purple) 
    3.2.3.1 Yeast Extract 2.5 g, Peptone 5.0 g, Dext rose 1.0 g, 
Polysorbate 80(Tween 80) 1.0 g, L-Cysteine 0.1 g, A gar 15.0 
g(다만, 종균에 따라 적정 peptone을 사용하여야 함)을 증류수 
1,000 mL에 녹여 pH 6.8～7.0으로 조정한 후 BCP(Brom cresol 
purple)을 0.004 ∼0.006%가 되도록 가한다. 시판되는 BCP 첨
가 평판측정용 한천배지를 사용해도 무관하다.
    3.2.3.2 121 ç에서 15분간 멸균한다.
   3.2.4 TOS-MUP 배지- 30 -    3.2.4.1 Trypticase peptone 10 g, Yeast Extract 1 g, KH 2PO4 3 g, K 2HPO 4 
4.8 g, (NH 4)2SO4 3 g, Magnesium Sulfate 7H 2O 0.2 g, 
(R)-Cysteine-HCL·H 2O 0.5 g, Sodium propionate 15 g, 
TOS(Galactooligosaccharide) 10 g, Agar 15 g를 증류수 95 0 mL에 
녹이고 pH를 6.3±0.2로 조정한 후 115 ç에서 15분간 멸균하여 
50 ç정도로 식힌 다음 MUP(mupirocin) supplement(1 mg/mL)를 
주사필터(0.22 ㎛)한 후 50 mL을 위의 배지에 첨가한다.  
4. 시험과정
  4.1 시험용액의 조제
   4.1.1 액상시료
    4.1.1.1 채취된 시료를 강하게 진탕하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.2 반유동상시료 
    4.1.2.1 채취된 시료를 멸균유리봉과 멸균스파테르 등으로 잘 혼합한다.
    4.1.2.2 그 일정량(10 ∼25 mL)을 멸균용기에 취해 9배 양의 희석액과 
혼합한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.3 고체시료 
    4.1.3.1 채취된 시료의 일정량(10～25 g)을 멸균된 가위와 칼 등으로 잘
게 자른다.
    4.1.3.2 희석액을 가해 균질기를 이용해서 가능한 한 저온으로 균질화
한다.
    4.1.3.3 여기에 희석액을 가해서 일정량(100 ∼250 mL)으로 한 것을 시험용- 31 -액으로 한다.
   4.1.4 분말상시료
    4.1.4.1 시료를 멸균유리봉과 멸균스파테르 등으로 잘 혼합한다.
    4.1.4.2 그 일정량(10 g)을 멸균용기에 취해 9배 양의 희석액과 혼합한 
것을 시험용액으로 한다.
   4.1.5 캡슐제품류
    4.1.5.1 캡슐을 포함하여 시료의 일정량(10～25 g)을 취한다.
    4.1.5.2 9배 양의 멸균생리식염수를 가해 균질기와 스토마커 등을 이용
하여 균질화한 것을 시험용액으로 한다.
   4.1.6 냉동제품
    4.1.6.1 냉동상태의 시료를 포장된 상태 그대로 40 ç이하에서 될 수 있는 
대로 단시간에 녹여 용기, 포장의 표면을 70% 알코올 솜으로 잘 
닦은 후 상기 4.1.1 ∼4.1.5의 방법으로 시험용액을 조제한다.
   4.1.7 시험용액조제 시 주의사항
    4.1.7.1 시험용액 제조 희석액은 멸균생리식염수 또는 펩톤식염완충액
을 사용한다.
    4.1.7.2 위와 같이 조제된 시험원액에 대해서는 희석액 9 mL에 시험 
원액 1 mL를 취하여 10배 희석액으로 만든다.
    4.1.7.3 필요에 따라 100배, 1,000배 등 단계별 희석용액을 만들어 사용할  
수 있다.
    4.1.7.4 시험용액의 조제 시 시료를 용기 포장한 대로 채취할 때에는 - 32 -그 외부를 물로 씻고 자연 건조시킨 다음 마개 및 그 하부 5 ∼
10 cm의 부근까지 70% 알코올 탈지면으로 닦고, 화염멸균한 
후 냉각하고 멸균한 기구로 개봉 또는 개관하여 2차 오염을  
방지하여야 한다. 지방분이 많은 시료의 경우는 Polysorbate 
80(Tween 80)과 같은  세균에 독성이 없는 계면활성제를 첨가
할 수 있다.
    4.1.7.5 실험을 실시하기 직전에 잘 균질화 하고 검사시료에 따라 시험
용액을 조제한다.
  4.2 시험의 조작
   4.2.1 BCP첨가 평판측정용 배지를 사용한 경우
    4.2.1.1 3-58 유산균수 MRS 배지에 준하여 시험하고 35～37 ç에서   
48～72±3시간 호기 또는 혐기 배양한 후 발생한 황색의 집락을 
유산균으로 계수한다. 
   4.2.2 TOS-MUP 배지를 사용한 경우
    4.2.2.1 3-58 유산균수 MRS 배지에 시험하고, 35 ∼37 ç에서 48∼72±3
시간 혐기 배양한다.
    4.2.2.2 모든 시험에서는 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액    
0.1 mL을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인
한다.
   4.2.3 집락수의 산정
    4.2.3.1 3-58 유산균수의 4.2.6 집락수 산정에 따라 산정한다.- 33 -   4.2.4 유산균의 기재보고
    4.2.4.1 3-58 유산균수의 4.2.7 유산균의 기재보고에 따라 산정한다.
제 4. 3. 3-66 2. 2.3을 다음과 같이 신설한다.
  2.3 분석장비의 준비
이동상으로서 0.1% 인산을 함유한 아세토니트릴과 0.1% 인산용액을 
40 : 60으로 혼합하여 분당 1.0 mL씩 흘려줌으로서 칼럼과 기기를   
안정화 시킨다.
제 4. 3. 3-66 5. 5.1 표1 이동상 조건인 “A : 메탄올, B : 0.85% 인 산을 
함유한 증류수”를 “  0.1% 인산을 함유한 아세토니트릴 : 0.1% 인산용액 = 
40 : 60”으로 하고, 표2를 삭제한다. - 34 -부 칙
제1조(시행일)  이 고시는 고시한 날부터 즉시 시행한다. 
제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입
한 건강기능식품(원료를 포함한다)부터 적용한다.
제3조(경과조치)  ① 이 고시 시행 당시 검사가 접수되어 진행 중인 사항
에 대하여는 종전의 규정에 따른다.
  ② 이 고시 시행 당시 종전의 규정에 따라 제조 •가공 •수입(선적일을 기
준으로 한다)한 건강기능식품은 종전의 규정에 따른다. 이 경우 해당 건강
기능식품은 유통기한까지 판매할 수 있다.- 35 -현  행 개 정 안
제 1. 총칙
 (생  략)
제 2. 공통기준 및 규격
 1. ∼ 4. (생  략)
 5. 보존 및 유통기준
  1) ∼ 8) (생  략)  
  9) 포장된 건강기능식품은 소분 판
매하지 말아야 하며(다만, 우수
건강기능식품제조기준 적용업소가  
소비자가 직접 구매 가능하도록  
포장된 건강기능식품 이외의 제
품을 소분하도록 적합한 시설을  
갖추고 품목제조신고한 경우는  
제외한다),「건강기능식품의 표
시기준」(식품의약품안전처 고시)  
적합하지 않거나 표시가 없는  
것을 보존하거나 판매하지 말아야  
한다.
  10) 보관과정 중의 부주의로 인하
여 부패·변질 또는 파손된 제
품을 판매하여서는 아니 된다.
  11) 냉동건강기능식품을 해동시켜  
실온 또는 냉장건강기능식품제 1. 총칙
 (현행과 같음)
제 2. 공통기준 및 규격
 1. ∼ 4. (현행과 같음)
 5. 보존 및 유통기준
  1) ∼ 8) (현행과 같음)
  <삭  제>
 
  9) -------------------------
--------------------------
-------------------------.
  10) ------------------------
-------------------------신 •구조문대비표- 36 -으로 유통시켜서는 아니 되며, 
실온 또는 냉장건강식품을 냉
동시켜 냉동건강기능식품으로  
유통시켜서는 아니 된다. 또한  
냉장건강기능식품을 실온에서  
유통시켜서는 아니 된다.
  12) 「건강기능식품의 기준 및 규격」
에서 정하지 않은 보존 및 유통
기준은「식품의 기준 및 규격」을  
따른다.-------------------------
-------------------------
-------------------------
-------------------------
-------------------------
--------------------.
  11) ------------------------
------------------------
------------------------
--------.
제 3. 개별 기준 및 규격
 (생  략)
제 4. 건강기능식품 시험법
 1. (생  략)
 2. 일반시험법
  2-1 ∼ 2-4  (생  략)
  2-5 유해물질시험법
   2-5-5 초산에틸
    1. ∼ 3. (생  략)
    4. 시험과정
     4.1 표준용액의 조제
      4.1.1 초산에틸 1.00 mL을  취하여  
100 mL 부피플라스크에  
넣는다. 
      4.1.2 (생  략)
      4.1.3 4.1.2의 표준원액을 톨루엔제 3. 개별 기준 및 규격
 (현행과 같음)
제 4. 건강기능식품 시험법
 1. (현행과 같음)
 2. 일반시험법
  2-1 ∼ 2-4  (현행과 같음)
  2-5 유해물질시험법
   2-5-5 초산에틸
    1. ∼ 3. (현행과 같음)
    4. 시험과정
     4.1 표준용액의 조제
      4.1.1 ---------1 g을 -------  
     --------------------
          -------.
      4.1.2 (현행과 같음)
      4.1.3 --------------------  - 37 -으로 적절히 희석하여 
1250, 2500, 5000 ppm  표준
용액으로 사용한다.
      4.1.4 (생  략) 
     4.2 검량선 작성용액의 조제
      4.2.1 ∼ 4.2.2 (생  략)
      4.2.3 표준원액 1250, 2500,  
5000 ppm인  표준용액  
100 μL를 각각 넣은 후  
다음의 시험조작에서 검
량선 작성용액으로 사용
한다. 이 용액은 각각 1, 2,  
5 ppm의  농도가 된다.
     4.3 (생  략)  
    5. (생  략)         ------------------- 
      ------5000 μg/mL ----
           ---------------.
      4.1.4 (현행과 같음)
     4.2 검량선 작성용액의 조제
      4.2.1 ∼ 4.2.2 (현행과 같음)
      4.2.3 -------------------  
        μg/mL인 -----------
            -------------------
            -------------------
            -------------------
            --------------5, 10,  
        20 μg/mL의 -------.
     4.3 (현행과 같음) 
    5. (현행과 같음) 
 3. 개별성분별 시험법
  3-1 비타민 A
   3-1-1 비타민 A(제1법)
    1. (생  략)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 (생  략)
      2.1.2 분액깔때기
     2.2 ∼ 2.3 (생  략)
    3. (생  략)
    4. 시험과정 3. 개별성분별 시험법 
  3-1 비타민 A  
   3-1-1 비타민 A(제1법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 (현행과 같음)
      2.1.2 갈색분액깔때기
     2.2∼2.3 (현행과 같음)
    3. (현행과 같음)
    4. 시험과정- 38 -     4.1 (생  략)
     4.2 표준용액 제조
      4.2.1 ∼ 4.2.7 (생  략)
      4.2.8 위의 용액 250～300 mL 분
액깔때기에  옮긴다. 이 때  
침전물이 발생한 경우 침
전물을 씻어 옮길 필요는  
없다.
      4.2.9 분액깔때기에  1 N 수산화
칼륨액 100 mL을 가하여  
15초간 흔들어준 후 방치
한다.
      4.2.10 ∼ 4.2.11 (생  략)
      4.2.12 분액깔때기를  정치하여  
벤젠층과 물층을 완전히  
분리한다.
      4.2.13 ∼ 4.2.17 (생  략)
     4.3 ∼ 4.4 (생  략)
    5. (생  략)     4.1 (현행과 같음)
     4.2 표준용액 제조
      4.2.1 ∼ 4.2.7 (현행과 같음)
      4.2.8 ----------------갈색
분액깔때기에 ---------  
-------------------  
-------------------  
----.
     4.2.9 갈색분액깔때기에 ------
          --------------------
          --------------------
          -----.
      4.2.10 ∼ 4.2.11 (현행과 같음)
      4.2.12 갈색분액깔때기를 -----
            -------------------
            --------.
      4.2.13 ∼ 4.2.17 (현행과 같음)
     4.3 ∼ 4.4 (현행과 같음)
    5. (현행과 같음)
   
   3-1-2 비타민 A(제2법) 
    1. (생  략)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.4 (생  략)
      2.1.5 분액깔때기
      2.1.6 (생  략)
     2.2 ∼ 2.3 (생  략)   
   3-1-2 비타민 A(제2법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.4 (현행과 같음)
      2.1.5 갈색분액깔때기
      2.1.6 (현행과 같음)
     2.2 ∼ 2.3 (현행과 같음)- 39 -    3. (생  략)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (생  략)
     4.3 시험용액 제조
      4.3.1 ∼ 4.3.2 (생  략)
      4.3.3 신속히 냉각하여 물 30  
mL을 가하여 200 mL 분
액깔때기에 옮긴다.
      4.3.4 증류플라스크를 물 10 mL로  
씻어 분액깔때기에  합친다.
      4.3.5 증류플라스크를 석유에테르  
30 mL로 씻은 후 분액깔 때
기에 합한다.
      4.3.6 ∼ 4.3.7 (생  략)
      4.3.8 분액깔때기에서  물층을  
충분히 분리한 석유에테
르층을 취하여 무수황산
나트륨으로 탈수하여 증류
플라스크에 옮긴다.
      4.2.9 ∼ 4.3.11 (생  략)
    5. (생  략)    3. (현행과 같음)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (현행과 같음)
     4.3 시험용액 제조
      4.3.1 ∼4.3.2 (현행과 같음)
      4.3.3 --------------------
           ---------------갈색
분액깔때기에 -----.
      4.3.4 -------------------
           ---갈 색분액깔때기에  -.
      4.3.5 --------------------
           ------------갈색분액
깔때기에  -----.
      4.3.6 ∼ 4.3.7 (현행과 같음)
      4.3.8 갈색분액깔때기에서 ----
           -------------------
           -------------------
           -------------------
           --------------.
      4.2.9 ∼ 4.3.11 (현행과 같음)
    5. (현행과 같음)
 
  3-2 (생  략)
  3-3 비타민 D
   1. ∼  3. (생  략)
   4. 시험과정
    4.1 ∼ 4.2 (생  략)
    4.3 시험용액의 제조  
  3-2 (현행과 같음)
  3-3 비타민 D
   1. ∼  3. (현행과 같음)
   4. 시험과정
    4.1 ∼ 4.2 (현행과 같음)
    4.3 시험용액의 제조- 40 -     4.3.1 ∼ 4.3.5 (생  략)
     4.3.6 헥산층을 250 mL 분액깔
대기에  옮겨 1 N 수산화
칼륨 100 mL을 가하여  
15초간 강하게 진탕 혼합
한다.
     4.3.7 ∼ 4.3.11 (생  략)
   5. (생  략)     4.3.1 ∼ 4.3.5 (현행과 같음)
     4.3.6 -------------분액깔때 
기에 ----------------
          --------------------
          --------------------
          -----.
     4.3.7 ∼ 4.3.11 (현행과 같음)
   5. (현행과 같음)
 
  3-4 비타민 E
   3-4-1 (생  략)
   3-4-2 비타민 E(제2법)
    1. ∼ 3. (생  략)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (생  략)
     4.3 시험용액 제조(일반식품)
      4.3.1 ∼ 4.3.7 (생  략)
      4.3.8 분액깔대기에서  물층을  
충분히 분리한 석유에
테르층을 취하여 무수
황산나트륨으로 탈수하여  
증류플라스크에 옮긴다.
      4.3.9 ∼ 4.3.11 (생  략)
     4.4 (생  략)
    5. (생  략) 
  3-4 비타민 E
   3-4-1 (현행과 같음)
   3-4-2 비타민 E(제2법)
    1. ∼ 3. (현행과 같음)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (현행과 같음)
     4.3 시험용액 제조(일반식품)
      4.3.1 ∼ 4.3.7 (현행과 같음)
      4.3.8 분액깔때기에서 -------
           -------------------
           -------------------
           -------------------
           ------------------.
      4.3.9 ∼ 4.3.11(현행과 같음)
     4.4 (현행과 같음)
    5. (현행과 같음)
 
  3-5 비타민 K 
  3-5 비타민 K- 41 -   3-5-1 (생  략)
   3-5-2 비타민 K(제2법)
    1. (생  략) 
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.4 (생  략)
      2.1.5 분액깔대기(500 mL)
      2.1.7  감압농축기
      2.1.8  정제컬럼(1.0 cm ID ×  
30 cm, 유리컬럼)
      2.1.9  시험관(200 × 24 mm ID)
     2.2 (생  략)
    3. ∼ 5. (생  략)
  3-6 ∼ 3-7 (생  략)   3-5-1 (현행과 같음)
   3-5-2 비타민 K(제2법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.4 (현행과 같음)
      2.1.5 분액깔때기(500 mL)
      2.1.6  ----------
      2.1.7  -------------------
           ------------
      2.1.8  -------------------
     2.2 (현행과 같음)
    3. ∼ 5. (현행과 같음)
  3-6 ∼ 3-7 (현행과 같음)
  3-8 나이아신
   3-8-1 ∼ 3-8-2  (생  략)  
   3-8-3 나이아신(제3법)
    1. 시험방법의 요약
     본 시험법은 시료 중 니코틴산
(나이아신)을  이동상으로 추출,  
정제한 후 액체크로마토그래프/
자외부흡광광도검출기를 이용하여  
분석하는 방법으로 최대 흡수 파
장인 260nm에서 정량 분석한다.
    2. (생  략) 
    3. 표준물질 및 일반시약 
  3-8 나이아신
   3-8-1 ∼ 3-8-2 (현행과 같음)  
   3-8-3 나이아신(제3법)
    1. 시험방법의 요약
      ------------나이아신(니코
틴산과 니코틴산아미드)을  --
      ------------------------
      ------------------------
      ------------------------
     ------------------------.
    2. (현행과 같음) 
    3. 표준물질 및 일반시약- 42 -     3.1 표준물질
      3.1.1 (생  략) 
     <신  설>
     3.2 (생  략)
    4. (생  략)
    5. 분석 및 계산
     5.1 (생  략)
     5.2 계산
      5.2.1 니코틴산 (mg/100g) = C ×  
(a × b)/S × 100/1,000
      C : 시험용액 중의 니코틴산의  
농도(ug/mL)
      a : (생  략)
      b : (생  략)
      S : (생  략)     3.1 표준물질
      3.1.1  (현행과 같음)
      3.1.2   Nicotinamide(Pyridine-3-  
carboxamide) 분자식 : C 6H6N2O, 
분자량 : 122.13, CAS No. :  
98-92-0
     3.2 (현행과 같음)
    4. (현행과 같음)
    5. 분석 및 계산
     5.1 (현행과 같음)
     5.2 계산
      5.2.1 나이아신 (mg/100g) = C ×  
(a × b)/S × 100/1,000
      C : 시험용액 중의 니코틴산  
및 니코틴산아미드 농도
의 합(ug/mL)
     a : (현행과 같음)
     b : (현행과 같음)
     S : (현행과 같음)
 
  3-9 ∼ 3-10 (생  략)
  3-11 엽산
   3-11-1 (생  략) 
  3-9 ∼ 3-10 (현행과 같음)
  3-11 엽산
   3-11-1 (현행과 같음)- 43 -   3-11-2 엽산(제2법)
    1. (생  략) 
    2. 장비와 재료
     2.1 ∼ 2.2 (생  략)
     2.3 분석장비의 준비
     이동상은 A용액(5 mM sodium  
hexanesulfonate /0.1% 초산 용
액), B 용액(5 mM sodium  
hexanesulfonate/0.1% 초산 용
액 : 메탄올(70:30))을  이용하여  
분당 1.0 mL로 충분한 시간동안  
흘려 안정화 시킨다.
    3. ∼ 5. (생  략)   3-11-2 엽산(제2법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 ∼ 2.2 (현행과 같음)
     2.3 분석장비의 준비
     ------- A(5 mM Tetrabutyl  
ammonium  bromide 용액),  아
세토니트릴을  -------------
     ------------------------
     ------------------.
    3. ∼ 5. (현행과 같음)
 
  3-12 비타민 B 12
   3-12-1 (생  략)
   3-12-2 비타민 B 12(제2법)
    1. 시험방법의 요약
     본 시험법은 시료 중 존재하는  
비타민B 12을 옥타데실화한 칼럼
으로 피리독신염산염을 분리하는  
방법으로 비타민B 12의 측정파장  
550 nm에서  검출하여 정량한다.
    2. 장비와 재료
     2.1 (생  략) 
  3-12 비타민 B 12
   3-12-1 (현행과 같음)
   3-12-2 비타민 B 12(제2법)
    1. 시험방법의 요약
     --------------- 비타민B 12을 
이동상으로 추출하고 액체크로마
토그래프(육방전환밸브시스템)/
자외부흡광광도검출기를 이용하여  
분석하는 방법으로 최대흡수파장인  
550 nm에서 정량분석 한다.
    2. 장비와 재료
     2.1 (현행과 같음)- 44 -     2.2 분석장비
      2.2.1 ∼ 2.2.2 (생  략)
      2.2.3 Capcellpak MF C 8 (안지름  
4.6 mm, 길이 150 mm,  충
진입자 크기 5 μm) 또는  
이와 동등한 것
      2.2.4 Capcellpak MG C 18 (안지름  
2.0 mm, 길이 35 mm,  충
진입자 크기 5 μm) 또는  
이와 동등한 것   
      2.2.5 Capcellpak UG C 18 (안
지름 1.5 mm, 길이 250  
mm, 충진입자 크기 5 μ
m) 또는 이와 동등한 것  
      2.2.6. <신 설>
  
     2.3 분석장비의 준비
      이동상으로 사용되는 5mM  
KH2PO4 용액을 분당 500 μL씩 
흘려줌으롯써 기기와 칼럼을  
안정화 시킨다.     2.2 분석장비
      2.2.1 ∼ 2.2.2 (현행과 같음)
      2.2.3 육방전환밸브시스템
  
  
      2.2.4 전처리 컬럼 : Capcellpak  
MF C 8 (안지름 4.6 mm,  
길이 150 mm,  충진입자  
크기 5 μm) 또는 이와  
동등한 것   
      2.2.5 농축 컬럼 : Capcellpak  
MG C 18 (안지름 2.0 mm,  
길이 35 mm,  충진입자  
크기 5 μm) 또는 이와  
동등한 것   
      2.2.6 분석 컬럼 : Capcellpak UG  
C18(안지름 1.5 mm, 길이  
250 mm,  충진입자 크기  
5 μm) 또는 이와 동등한 것
     2.3 분석장비의 준비
      이동상은 5 mM 인산이수소  
칼륨(KH2PO4) 용액과 5 mM  
인산이수소칼륨( KH2PO4)용액:
메탄올(80:20)을 이용하여 전
처리칼럼은 분당 500 uL, 분석- 45 -    3. ∼ 4. (생  략)
    5. 분석 및 계산
     5.1 기기분석
  항목 조건
주입량 10 μL
칼럼온도 (생  략)
이동상5 mM KH2PO4/Methanol 
(80/20)
검출기 파장 (생  략)
유량 120 μL/분표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
 
     5.2 (생  략)  칼럼은 분당 120 uL를 충분한 
시간동안 흘려 안정화 시킨다.
    3. ∼ 4. (현행과 같음)
    5. 분석 및 계산
     5.1 기기분석
 항목 조건
주입량 200 μL
칼럼온도 (현행과 같음)
이동상전처리컬럼 : 5mM 
인산이수소칼륨( KH2PO4) 용액
분석컬럼 : 5 mM 
인산이수소칼륨( KH2PO4) 용액 
/메탄올(MeOH)(80:20)
검출기 파장 (현행과 같음)
유량 전처리컬럼: 500 μL/분
 분석컬럼: 120 μL/분표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
     5.2 (현행과 같음)
  3-13 (생  략) 
  3-14 비타민 C
   3-14-1 ∼ 3-14-2 (생  략)
   3-14-3 비타민 C(제3법)
    1. ∼ 4. (생  략)
    5. 분석 및 계산
     5.1 (생  략)
     5.2. 정량시험
      5.2.1 (생  략)
      5.2.2 (생  략)
      5.2.3 계산식   3-13 (현행과 같음)
  3-14 비타민 C
   3-14-1 ∼ 3-14-2 (현행과 같음)
   3-14-3 비타민 C(제3법)
    1. ∼ 4. (현행과 같음)
    5. 분석 및 계산
     5.1 (현행과 같음)
     5.2. 정량시험
      5.2.1 (현행과 같음)
      5.2.2 (현행과 같음)
      5.2.3 계산식 - 46 -비타민 C( μg/100 g) = S ×  a×b×100
검체량(g) 1000
  
    S : 시험용액 중의 아스코르빈
산의 농도(ng/mL)
    a : (생  략)
    b : (생  략)비타민 C(mg /100 g) = S ×  a×b×100
검체량(g) 1000
    S : ----------------------
        ----- 농도( μg/mL)
    a : (현행과 같음)
    b : (현행과 같음)
   <신  설>      
   3-14-4 비타민 C(제4법)
    1. 시험방법의 요약
     본 시험법은 시료 중 존재하는  
아스코르빈산팔미테이트를 메탄
올로 균질화시킨 후 옥타데실화된  
칼럼을 연결하여 분리하는 방법
으로 자외부흡광광도검출기를  
이용하여 최대 흡수 파장인 245  
nm에서 검출하여 정량한다.
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 용매용 일회용 실린지
      2.1.2 여과용 멤브레인 필터  
및 디스크형 멤브레인 필터
      2.1.3 가지달린 삼각플라스크
(Filter flask)
      2.1.4 여지(Filter paper)
      2.1.5 액체크로마토그래프용 유리병
      2.1.6 부피플라스크- 47 -
      2.1.7 원심분리관
     2.2 분석장비
      2.2.1 고속액체크로마토그래프
      2.2.2 자외부흡광광도검출기
      2.2.3 옥타데실실릴화한 칼럼(안
지름 4.6 mm, 길이 150  
mm, 충전제 :  octadecyl  
silica) 또는  이와 동등한 것
     2.3 분석장비의 준비
      이동상은 2개의 용매가 사용
되는데 0.05 M KH 2PO4 : 아
세토니트릴 (30 : 70) 이 두 개의  
용매를 분당 1 mL씩 충분한  
시간동안  흘려 기기 와 칼럼을  
안정화 시킨다.
    3. 표준물질 및 일반시약
     3.1 표준물질
      3.1.1 Ascorbyl palmitate
     분자식 : C 22H38O7, 분자량 :  
414.53, CAS No. : 137-66-6
 
     3.2 일반시약
      3.2.1 메탄올(Methanol)
      3.2.2  아세토니트릴(Acetonitrile)
      3.2.3  증류수(Distilled water)- 48 -      3.2.4 인산칼륨(Potassium phosphate)
    4. 시험과정
     4.1 표준용액 제조
      4.1.1 표준원액
       아스코르빈산팔미테이트 10  
mg을 정밀히 달아, 메탄올에  
녹여 100 mL로 한 것을 표준
원액으로 한다.  
      4.1.2 표준용액
       필요한 경우 표준원액에 메탄올을  
넣어 원하는 농도로  희석하여  
사용한다. 사용 시 조제한다.
     4.2 시험용액 제조
      4.2.1 아스코르빈산팔미테이트 약 
5 mg에 해당하는 시료를  
10 mL  메탄올을 가하여  
10분간 현탁시킨 후 적
당량의 메탄올을 넣어  
균질화한다.
      4.2.2 균질화된 시료를 100 mL 
메스플라스크에 옮기고  
소량의 메탄올 로 용기를  
씻은 후 메스플라스크에  
합하여 100 mL로 한다.
      4.2.3 3,000 rpm에서 10～15분간  
원심분리를 행하여 상등
액을 취하고 메탄올로 적- 49 -비타민 C
(mg/100 g)  =S × a × b
×100
×0.4249
검체량(g) 1,000당히 희석하여 시험용액
으로 한다.
    5. 분석 및 계산
     5.1 기기분석
항목 조건
주입량 10 μL
칼럼온도 실온
이동상0.05 M KH2PO4 : 아세토니트릴
(30 : 70)
검출기 파장 245 nm
유량 1.0 mL/min 표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예 )
    5.2 정량시험
     5.2.1 시험용액 및 표준용액을  
각각 10 μL씩 주입하여  
얻은 피크의 넓이 또는  
높이를 구하여  검량선을  
작성한 후 시험용액의 아
스코르빈산팔미테이트 의 
농도를 구한다.
     5.2.2 계산식에 의해 시료 중 아스
코르빈산의 함량을 산출한다.  
     5.2.3 계산식
        
    S : 시험용액 중의 아스코르빈 산팔
미테이트의 농도( μg/mL)
    a : 시험용액의 전량(mL)- 50 -    b : 시험용액의 희석배수
    0.4249 : 아스코르빈산팔미테이트의  
아스코르 빈산으로의 환산
계수
 
  3-15 (생  략) 
  3-16 칼슘 
   3-16-1 ∼ 3-16-2 (생  략) 
   3-16-3 칼슘(제3법 원자흡광광도법 )
    
    1. ∼ 4. (생  략) 
  3-15 (현행과 같음)
  3-16 칼슘 
   3-16-1 ∼ 3-16-2 (현행과 같음)
   3-16-3 칼슘(제3법 유도결합플라즈
마법)
    1. ∼ 4. (현행과 같음)
  
  3-17 ∼ 3-25 (생  략)
  
  3-26 식이섬유 
   3-26-1 식이섬유(제1법)
   1. ∼ 3. (생  략)
   4. 시험과정
    4.1 시험용액의 조제
     4.1.1 〜 4.1.5 (생  략)
     4.1.6 반응이 끝난 후 60 ç로 식
히고 비커 벽이나 바닥에  
내용물이 부착되어 있으면  
시약스푼으로 긁어 분산
시키고 증류수 10 mL로  
스푼과 비이커  벽을 닦는다.  
  3-17 ∼ 3-25 (현행과 같음)
  
  3-26 식이섬유
   3-26-1 식이섬유(제1법)
   1. ∼ 3. (현행과 같음)
   4. 시험과정
    4.1 시험용액의 조제
     4.1.1 〜 4.1.5 (현행과 같음)
     4.1.6 --------------------- 
---------------------
---------------------
---------------------
---------------------
----- 비커  ---------.- 51 -     4.1.7 〜 4.1.9 (생  략)
    4.2 ∼ 4.4 (생  략)
   5. (생  략)     4.1.7 〜 4.1.9 (현행과 같음)
    4.2 ∼ 4.4 (현행과 같음)
   5. (현행과 같음)
  
  3-27 ∼ 3-33 (생  략)
  
  3-34 인지질 중 포스파티딜콜린의 함량
   3-34-1 인지질 중 포스파티딜콜린의  
함량(제1법)
    1. (생  략)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.3 (생  략)
      2.1.4 비이커
      2.1.5 ∼ 2.1.6 (생  략)
    3. (생  략)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (생  략)
     4.3 시험조작
      4.3.1 ∼ 4.3.3 (생  략)
      4.3.4 식힌 후 비이커  및 시계접
시를 증류수로 씻어 여과
한다.
      4.3.5 ∼ 4.3.9 (생  략)
     4.4 인지질 중 인의 정량
      4.4.1 시험용액에서 100 μL를 
원추형 비이커에  취하고    
  3-27 ∼ 3-33 (현행과 같음)
  
  3-34 인지질 중 포스파티딜콜린의 함량
   3-34-1 인지질 중 포스파티딜콜린의  
함량(제1법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.3 (현행과 같음)
      2.1.4 비커
      2.1.5 ∼ 2.1.6 (현행과 같음)
    3. (현행과 같음)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (현행과 같음)
     4.3 시험조작
      4.3.1 ∼ 4.3.3 (현행과 같음)
      4.3.4 ---- 비커 ----------- 
-------------------
           -----.
      4.3.5 ∼ 4.3.9 (현행과 같음)
     4.4 인지질 중 인의 정량
      4.4.1 -------------------
비커에 -------------  - 52 -헥산을 제거한다.
      4.4.2 (생 략)
    5. 분석 및 계산(생  략)----------.
      4.4.2 (현행과 같음)
    5. 분석 및 계산(현행과 같음)
 
  3-34 인지질 중 포스파티딜콜린의 함량
   3-34-2 인지질 중 포스파티딜콜
린의 함량(제2법)
    1. (생  략)
     2. 장비와 재료
      2.1 실험실 장비 및 소모품
       2.1.1 ∼ 2.1.3 (생  략)
       2.1.4 비이커
       2.1.5 원추형 비이커  
      2.2 (생  략)
    3. (생  략)
    4. 시험과정
     4.1 ∼ 4.2 (생  략)
     4.3 포스파티딜콜린 중 인의 정량
      4.3.1 ∼ 4.3.3 (생  략)
      4.3.4 식힌 후 비이커  및 시계접
시를 증류수로 씻어 여과
한다.
      4.3.5 ∼ 4.3.6 (생  략)
     4.4 인지질 중 인의 정량
      4.4.1 시험용액에서 100 μL를 
원추형 비이커 에 취하고  
헥산을 제거한다. 
  3-34 인지질 중 포스파티딜콜린의 함량
   3-34-2 인지질 중 포스파티딜콜린
의 함량(제2법)
    1. (현행과 같음)
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1 ∼ 2.1.3 (현행과 같음)
      2.1.4 비커
      2.1.5 ----- 비커  
     2.2 (현행과 같음)
    3. (현행과 같음)
     4. 시험과정
      4.1 ∼ 4.2 (현행과 같음)
      4.3 포스파티딜콜린 중 인의 정량
       4.3.1 ∼ 4.3.3 (현행과 같음)
       4.3.4 ---- 비커 ------------  
             ---------------------
            --------.
       4.3.5 ∼ 4.3.6 (현행과 같음)
      4.4 인지질 중 인의 정량
       4.4.1 ------------------
            --비커 --------------
            -----------.- 53 -      4.4.2 (생  략)
    5. (생  략)       4.4.2 (현행과 같음)
     5. (현행과 같음)
  
  3-35 콜레스테롤
   1. ∼ 3. (생  략)
   4. 시험과정
    4.1 (생  략)
    4.2 시험용액의 조제
     4.2.1 (생  략)
     4.2.2 추출
      4.2.2.1 〜 4.2.2.4 (생  략)
      4.2.2.5 유리솜과 약 20 g의 무
수황산나트륨이 채워진  
유리깔대기를  통해 수
세한 톨루엔을 약 2 g  
무수황산나트륨이 채워
진 삼각플라스크로 흘려
주어 탈수한다. 
     4.2.3 (생  략)
   5. (생  략)  
  3-35 콜레스테롤
   1. ∼ 3. (현행과 같음)
   4. 시험과정
    4.1 (현행과 같음)
    4.2 시험용액의 조제
     4.2.1 (현행과 같음)
     4.2.2 추출
     4.2.2.1 〜 4.2.2.4 (현행과 같음)
      4.2.2.5 ------------------
            ------------------
            유리깔때기를  -------
            ------------------
            ------------------
            ------------------
            ---------- .
     4.2.3 (현행과 같음)
   5. (현행과 같음)
  
  3-36 ∼ 3-37 (생  략)
  
  3-38 식물스테롤
   1. ∼ 3. (생  략)
   4. 시험과정  
  3-36 ∼ 3-37 (현행과 같음)
  
  3-38 식물스테롤
   1. ∼ 3. (현행과 같음)
   4. 시험과정- 54 -    4.1 (생  략)
    4.2 시험용액의 제조 
     4.2.1 (생  략)
     4.2.2 추출
      4.2.2.1 〜 4.2.2.4 (생 략)
      4.2.2.5 유리솜과 약 20 g의 무
수황산나트륨이 채워진  
유리깔대기를  통해 수세한  
톨루엔 층을 약 2 g 무수
황산나트륨이 채워진 삼각
플라스크로 흘려주어  
탈수한다. 
      4.2.2.6 〜 4.2.2.8 (생  략)
   5. 분석 및 계산(생  략)      4.1 (현행과 같음)
    4.2 시험용액의 제조 
     4.2.1 (현행과 같음)
     4.2.2 추출
      4.2.2.1 〜 4.2.2.4 (현행과 같음)
      4.2.2.5 -------------------  
-------------------
유리깔때기를 --------
-------------------
------------------- 
-------------------
--------. 
      4.2.2.6 〜 4.2.2.8 (현행과 같음)
   5. 분석 및 계산(현행과 같음)  
  
  3-39 ∼ 3-45 (생  략)
  3-46 아스타잔틴
   <신  설>    
   <신  설>      
  3-39 ∼ 3-45 (현행과 같음)
  3-46 아스타잔틴
   3-46-1 아스타잔틴(제1법)  
  (현행 3-46 시험법 내용과 같음)
   3-46-2 아스타잔틴(제2법)
    1. 시험방법의 요약
     본 시험법은 시료 중 아스타잔
틴을 아세톤으로 녹여 추출하고  
cholesterol esterase를 넣어 아
스타잔틴에 붙어있는 ester기를  
분리시킨 후 정제하여 이동상- 55 -으로 녹인 용액을 액체크로마
토그래피/자외부흡광광도검출기  
및 순상컬럼을 이용하여 분석
하는 방법으로 최대 흡수파장인  
474 nm에서 정량분석 한다. 
    2. 장비와 재료
     2.1 실험실 장비 및 소모품
      2.1.1. 갈색부피플라스크(100 mL)
      2.1.2. 액체크로마토그래프용 유
리병
      2.1.3. 용매용 일회용 실린지
      2.1.4. 여과용 멤브레인필터 및  
디스크형 멤브레인 필터
      2.1.5. 원심분리기
      2.1.6. 원심분리관(50 mL)
      2.1.7. 시험관(50 mL) (사용되는  
초자는 갈색의 유리기구
를 사용한다.)
      2.1.8. 초음파진탕기
      2.1.9. 수욕조
      2.1.10. 질소농축기
      2.1.11. 질소가스
     2.2 분석장비
      2.2.1.  자외분광광도계(UV/Visible  
Spectrophotometer)
      2.2.2. 고속액체크로마토그래피
      2.2.3. 자외부흡광광도 검출기(UV  - 56 -
Detector) 또는 포토다이 
오드어레이 검출기
(Photodiode array)
      2.2.4. 칼럼오븐  
      2.2.5. Luna silica 칼럼(안지름  
4.6 mm, 길이 150 mm,  
충진 입자 크기 3 μm) 
또는 이와 동등한 것 
     2.3 분석장비의 준비
      이동상인 헥산과 아세톤을 82  
: 18로 분당 1.2 mL씩 충분한  
시간동안 흘려 칼럼과 기기를  
안정화 시킨다.
    3. 표준물질 및 시약
     3.1 표준물질
      3.1.1. 아스타잔틴(Astaxanthin)
      분자식 : C 40H52O4, 분자량 :  
596.84 , CAS No. : 19044-06-5
     3.2 일반시약
      3.2.1. 헥산(Hexane)
      3.2.2. 클로로포름(Chloroform)
      3.2.3. 아세톤(Acetone)
      3.2.4.  석 유  에 테 르 (Petroleum ether)- 57 -      3.2.5. 50 mM Tris-HCl 완충
액(pH 7.0)
      3.2.6.  무 수 황 산 나 트 륨 (Sodium  sulfate  
Anhydrous)
      3.2.7. Cholesterol esterase
    4. 시험과정
     4.1. Cholesterol esterase 용액의  
조제(사용직전에 조제)
      4.1.1. Cholesterol esterase가 4  
unit/mL(1 unit : pH  
7.0, 37 ç에서 1분당 1 μ
mole 콜레스테롤을 만
드는데 필요한 효소의  
양)이 되도록 50 mM  
Tris-HCl 완충액(pH  
7.0)에 용해시킨다.
     4.2. 표준원액의 조제
      4.2.1. 아스타잔틴 표준품 3  
mg을 100 mL 갈색부
피플라스크에  정밀히  
취한다 . 
      4.2.2. 클로로포름 10 mL을 넣고  
녹인다.
      4.2.3. 헥산으로 표선까지 맞춘다.
     4.3. 표준용액 조제
      4.3.1. 100 mL 갈색부피플라스
크에 표준원액 5, 10, 15  - 58 -mL을 정밀히 취한다.
      4.3.2. 클로로포름 4 mL을 넣어  
녹인다.
      4.3.3. 헥산으로 표선까지 맞춘다.
      4.3.4. 4.3.3용액의 헥산을 대조액
으로 하여 474 nm에서  
흡광도를 측정한다.
      4.3.5. 4.3.3용액을 표준용액으
로 하여 고속액체크로
마토그래피로 분석한다.  
     4.4. 시험용액 조제
      4.4.1. 시료(아스타잔틴으로서)  
약 1.5 mg을 100 mL  
갈색부피플라스크에 정
밀히 취한다.
      4.4.2. 아세톤 100 mL을 넣어  
완전히 용해시킨 후 표
선까지 맞춘다.
      4.4.3. 4.4.2용액을 아세톤으로  
5배 희석한 것을 시험
용액으로 한다.
      4.4.4. 원심분리관에 시험용액  
3 mL, Cholesterol esterase  
용액 3 mL을 넣는다.
      4.4.5. 37 ç 수욕에서 45분 동
안 계속 교반하면서 반
응시킨다.- 59 -      4.4.6. 효소 분해 후 무수황산
나트륨 1 g과 석유에테르  
4 mL을 첨가하여 30초간  
혼합한다.
      4.4.7. 3,000 rpm에서 3분간 원심
분리하여 석유에테르층을  
시험관에 옮긴다.
      4.4.8. 물층에 석유에테르 4 mL을  
가하여 1회 반복 추출하여  
석유에테르층을 합한다.
      4.4.9. 탈수된 석유에테르층을  
질소가스를 이용하여  
완전히 건조시킨 후, 이
동상 3 mL을 넣고 용
해시킨다.
      4.4.10. 위 용액을 0.45 um 멤
브레인 필터로 여과한  
것을 시험용액으로 한다.
    5. 분석 및 계산
     5.1 기기 분석
항목 조건
주입량 20 uL
칼럼온도 25 ç
이동상 헥산 : 아세톤 (82 : 18)
검출기 파장 474 nm
유속 1.2 mL/분표 1. 고속액체크로마토그래피 조건(예)
     5.2 계산- 60 -      5.2.1. 아스타잔틴 농도 (ug/mL) 
= (474 nm 흡광도 x  
10,000) / 2,100
       2,100 : 474 nm에서 1cm  
cuvette 의 1 % 아스타잔틴
의 기준 흡광도값
      5.2.2. 아스타잔틴 이성질체 용출  
순서
      trans 아스타잔틴, 9-cis 아스
타잔틴, 13-cis 아스타잔틴 순
으로 용출된다.
      5.2.3. 총 피크면적 = P trans + 
(1.2 x P 9-cis) + (1.6 x  
P13-cis)
      P trans : trans 아스타잔틴의 피
크면적
      P 9-cis : 9-cis 아스타잔틴의 피
크면적
      P 13-cis : 13-cis 아스타잔틴의  
피크면적
      1.2 : 9-cis를 trans 아스타잔
틴으로 전환계수
      1.6 : 13-cis를 trans 아스타잔
틴으로 전환계수
      5.2.4. 아스타잔틴 함량 (%) =  
(C x a x b x 100) /  
(S x 1,000)- 61 -      C : 시험용액중의 아스타잔틴 
농도( μg/mL)
      a : 시험용액의 전량(mL)
      b : 희석배수
      S : 시료 채취량(mg)
  
  3-47 ∼ 3-52 (생  략)
  3-53 코엔자임 Q10
   1. 시험방법의 요약
    본 시험법은 시료 중 코엔자임
Q10을 에탄올 용액으로  추출하여  
액체크로마로그래프/자외부흡광
광도검출기를 이용하여 분석하는  
방법으로 최대흡수파장인 275nm
에서 정량분석 한다.
   2. 장비와 재료
    2.1 실험실 장비 및 소모품
     2.1.1 ∼ 2.1.3 (생  략) 
     2.1.4 부피플라스크(50 mL)
     2.1.5 (생  략) 
    2.2 분석장비
     2.2.1 ∼ 2.2.2 (생  략)
     2.2.3 옥타데실실릴화한 칼럼(안
지름 4.6mm, 길이 250mm , 
충전제 Octadecyl silica)  
또는 이와 동등한 것  
  3-47 ∼ 3-52 (현행과 같음)
  3-53 코엔자임 Q10
   1. 시험방법의 요약
    --------------------------
    ----헥산·무수에탄올혼합액으로
    --------------------------
    --------------------------
    -------------------280 nm
    에서 -------------. 
   2. 장비와 재료
    2.1 실험실 장비 및 소모품
     2.1.1 ∼ 2.1.3 (현행과 같음)
     2.1.4 부피플라스크
     2.1.5 (현행과 같음)
    2.2 분석장비
     2.2.1 ∼ 2.2.2 (현행과 같음)
     2.2.3 --------------------
          ---------길이 150 mm , 
          --------------------
          --------------- 62 -    2.3 분석장비의 준비
     이동상은 메탄올과 에탄올 13:7로  
혼합한 용액을 이용하여  분당  
1.0 mL를 충분한 시간동안 흘려  
안정화 시킨다.
   3. 표준물질 및 일반시약
    3.1 표준물질
     3.1.1 코엔자임Q10(Coenzyme Q10,  
Ubiquinone, Ubidecarenone)
      분자식 : C 59H90O5, 분자량 :  
863.37, CAS No. : 303-98-0
CH3
OO
H3CH3C
CH3HO
O6-10
    3.2 일반시약
     3.2.1 에탄올(Ethanol)
     3.2.2 메탄올(Methanol)
    <신  설>
    <신  설>
    <신  설>    
    <신  설>
   
       2.3 분석장비의 준비
     이동상을 이용하여 용매를  ---
     -------------------------
     -----------.
   3. 표준물질 및 일반시약 
    3.1 표준물질
     3.1.1 ---------------------
          --------------------
          ----- : C 59H90O4, -----  
    : -------, : ---------
CH3
OO
H3CH3C
CH3HO
O6-10
    3.2 일반시약
     3.2.1 헥산(n-Hexane)
     3.2.2 에탄올(Ethanol)
     3.2.3  무 수 염 화 제 이 철 (Ferric chloride,  
anhydrous)
     3.2.4  아세토니트릴(Acetonitrile)
     3.2.5 테 트 라 하 이 드 로 퓨 란 (T etrahydrofuran)
    3.3 시액의 조제
     3.3.1 1% 무수염화제이철용액
     무수염화제이철 1 g에 에탄올을  
가하여 100 mL로 한다 .- 63 -   4. 시험과정
    4.1 표준용액의 조제
     4.1.1 코엔자임Q10 표준물질 50  
mg을 정밀히 측정한다.
     4.1.2 정밀히 측정한 표준물질을  
50 mL 부피플라스크에 넣
는다.
     4.1.3 에 탄 올 을  넣 어  표 선 까 지  맞 춘 다 .
  
     4.1.4 에탄올로 적당히 희석하여  
표준용액으로 한다.
    4.2 시험용액 제조
     4.2.1 시료(코엔자임Q10으로서)  
약 50 mg을 정밀히 측정
한다.
     4.2.2 정밀히 측정한 시료를 50  
mL 부피플라스크에 넣는다.   4. 시험과정
    4.1 표준용액 제조
     4.1.1 --------------------
          ------------ 칭량하여  
10 mL 부피플라스크에  
넣어 헥산·무수에탄올혼합
액(5 : 2)으로 용해한 후  
표선까지 정용한다.
     4.1.2 위의 표준원액을 헥산·무
수에탄올혼합액(5 : 2)으
로  적정농도로 단계별  
희석한다.
     4.1.3 4.1.2의 희석한 표준원액  
10 mL를 취하여 1% 무
수염화제이철용액 2.5  
mL를 넣은 다음 무수에
탄올로 정확하게 25 mL로  
하여 표준용액으로 한다. 
     <삭  제>
    4.2 시험용액 제조
     4.2.1 시료 약 10 mg(코엔자임
Q10으로서)을 정밀히 칭
량하여 100 mL 부피플라
스크에 넣는다.
     4.2.2 헥산·무수에탄올혼합액(5 :  
2)을 넣어 시료가 전부  - 64 -     4.2.3 여기에 에탄올을 20 mL를  
넣고 조심스럽게 흔든다.
     4.2.4 시료가 전부 용해될 때까
지 초음파진탕기로 용해
시킨다.
     4.2.5 에 탄 올 을  넣 어  표 선 까 지  맞 춘 다 .
     4.2.6 0.45 μm 멤브레인 필터로  
여과한 용액을 시험용액
으로 한다.
   5. 분석 및 계산
    5.1 기기분석
표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입량 20 μL
칼럼온도 35 ç
이동상 메탄올:에탄올(13:7)
검출기 파장 275 nm
유속 1.3 mL/분
    5.2 결과 분석
     코 엔 자 임 Q 1 0 ( m g / g ) =  
A×(B/S)×P×(1/1,000)
     A   : 시료의 농도( μg/mL)용해될 때까지 초음파 진탕
기로 용해시킨 후 표선까지  
정용한다.  
     4.2.3 이 액 10 mL를 취하여  
25 mL 부피플라스크에  
넣는다.
     4.2.4 여기에 1% 무수염화제이
철용액 2.5 mL를 넣은 다음  
무수에탄올을 넣어 25 mL가  
되게 정용한다.
     4.2.5 0.45 μm 멤브레인 필터로  
여과한 용액을 시험용액
으로 한다.
     <삭  제>
   5. 분석 및 계산
    5.1 기기분석
표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입량 10 μL
칼럼온도 40 ç
이동상아세토니트릴:테트라하이드로퓨란:물(55 : 
40 : 5)
검출기 
파장280 nm
유속 1.0 mL/분
    5.2 계산  
     5.2.1 코엔자임Q10(mg/g) = C  
× a/S × P × 1/1,000
     C : 시험용액 중의 코엔자임- 65 -     B  : 시험용액의 전량(mL)
     S   : 시료채취량(g)
     P   : 표준품의 순도Q10 농도(μg/mL)
     a : 시험용액의 전량(mL)
     S : 시료 채취량(g)
     P : 표준품의 순도
     1/1,000 : 단위 환산 계수
  
  3-54 (생  략)
  3-55 진세노사이드
   1. ∼ 3. (생  략)
   4. 시험과정
    4.1 (생  략)
    4.2 시험용액의 조제
     4.2.1 ∼ 4.2.3 (생  략)
     <신  설>      
  3-54 (현행과 같음)
  3-55 진세노사이드 
   1. ∼ 3. (현행과 같음)
   4. 시험과정
    4.1 (현행과 같음)
    4.2 시험용액의 조제
     4.2.1 ∼ 4.2.3. (현행과 같음)
     4.2.4 젤리시료제품
      4.2.4.1 시료 약 3～4 g을 분액
여두에 취하고 n-Hexane  
100 mL 및 70% 메탄올  
100 mL를 가하여 3시간
동안 진탕 추출한다. 
      4.2.4.2 층이 완전히  분리될 때
까지 정치한 다음 하층을  
환저플라스크에 취하여  
수욕 중에서 감압농축
하고 농축물을 증류수  
10 mL에 용해한 후 여
과(0.45 μm)하여 시험- 66 -   5. (생  략)용액으로 한다.
   5. (현행과 같음)
  
  3-56 ∼ 3-57 (생  략)
  
  3-58 유산간균 및 구균
   1. 시험방법의 요약
    본 시험법은 시료에 함유된 유
산균을 BCP 첨가 평판 배지를  
이용하여  배양하는 방법으로 배양  
후 집락계산기로 정량한다.
   2. 장비와  재료
    2.1 (생  략)
   3. 일반시약 및 일반시액
    3.1 일반시약
     3.1.1 에탄올(Ethanol)
    3.2 시액 및 배지의 조제
     3.2.1 BCP첨가 평판측정용 한
천배지(Plate Count Agar  
with Brom Cresol Purple)  
      3.2.1.1 Y east Extract 2.5 g, Peptone  
5.0 g, Dextrose 1.0 g,  
Polysorbate 80(Tween  
80) 1.0 g L-Cysteine  
0.1 g, Agar 15.0 g(다만,  
종균에  따라 적정    
  3-56 ∼ 3-57 (현행과 같음)
  
  3-58 유산균수
   1. 시험방법의 요약
    --------------------------
    ------MRS 배지 또는 BL 배
지를 사용하여  -------------
    ---------------------.
   2. 기기와  재료
    2.1  (현행과 같음)
   3. 일반시약 및 일반시액
    3.1 일반시약
     3.1.1 에탄올(Ethanol)
    3.2 시액 및 배지의 조제
     3.2.1 멸균생리식염수(Saline)
   
      3.2.1.1 Sodium Chloride 8.5 g에  
증류수를 가하여 1,000  
mL로 하고 121 ç로 멸
균한다.
  - 67 -peptone을 사용하여야 
함)을 증류수 1,000 mL에  
녹여 pH 6.8～7.0으로  
조정한 후 BCP(Brom  
cresol purple)을 0.00
4～0.006%가 되도록  
가한다. 시판되는 BCP  
첨가 평판측정용 한천
배지를 사용해도 무관
하다.
      3.2.1.2 121 ç에서 15분간 멸균
한다.
     <신  설>
     <신  설>
      <신  설>
        <삭  제>
     3.2.2 펩톤식염완충액(Buffered  
Peptone Water)
      3.2.2.1 Peptone 10 g, Sodium  
Chloride  5 g, Disodium  
Phosphate  3.5 g,  
M o n o - p o t a s s i u m  
Phosphate 1.5 g을 증
류수 1,000 mL에 가하여  
pH를 7.2±0.2로 조정한  
후 121 ç에서 15분간  
고압 멸균한다.
     3.2.3 MRS 배지
      3.2.3.1 Enzyme Digest of Casein  
10 g, Meat Extract 10 g, 
Yeast Extract 4 g, Glucose  - 68 -  
      <신  설>20 g, Polysorbate 80(Tween 
80), Triammonium Citrate  
2 g, Sodium Acetate 5 
g, Magnesium Sulfate  
7H2O 0.2 g, Manganese  
Sulfate 4H 2O 0.05 g,  
Dipotassium hydrogen  
Phosphate 2 g, Agar 
15 g을  증류수 1,000  
mL에 녹이고 pH를  
5.7±0.1로 조정한 후  
121 ç에서 15분간 멸균
한다.
     3.2.4 BL 한천배지(BL Agar)
      3.2.4.1 Beef Extract 3 g, Liver  
Extract 5 g, Yeast Extract  
5 g, Proteose Peptone 10 g,  
Tryptone 5 g, Soypeptone  
3 g, Soluble Starch  
0.5 g, Glucose 10 g,  
Dipotassium Phosphate  
1 g, Monopotassium  
Phosphate 1 g, Magnesium  
Sulfate 0.2g, Sodium  
Chloride 0.01g, M anganese  
Sulfate 0.00674 g,  
L-Cysteine ß¶HCl ß¶H2O 0.5 g,  - 69 -   4. 시험과정 
    4.1 시험용액의 조제
     4.1.1 (생  략)
     4.1.2 반유동상시료 
      4.1.2.1 (생  략)
      4.1.2.2 그 일정량(10～25 mL)을  
멸균용기에 취해 9배  
양의 멸균생리식염수와  
혼합한 것을 시험용액
으로 한다.
     4.1.3 고체시료 
      4.1.3.1 (생  략)
      4.1.3.2 멸균생리식염수를 가해  
균질기를 이용해서 가
능한 한 저온 으로 균질Ferrous Sulfate  0.01 g, 
Polysorbate 80 (Tween  
80) 1 g, Agar 15 g을  
증류수 1,000 mL에 녹
이고 pH를 7.2로 조정
한 후 121 ç에서 15분간  
멸균하여, 50 ç로 냉각  
후 소, 말, 양 또는 사람의  
탈섬유소  혈액을 5%가  
되도록 첨가 한다(BL 한
천배지 사용도 무관함).
   4. 시험과정
    4.1 시험용액의 조제
    4.1.1 (현행과 같음)
    4.1.2 반유동상시료 
     4.1.2.1 (현행과 같음)
     4.1.2.2 -------------------
            -------------------
            ------------희석액과
            -------------------
            -----------.
     4.1.3 고체시료 
      4.1.3.1 (현행과 같음)
      4.1.3.2 희석액을  가해 균질기를  
이용해서 가능한 한 저온
으로 균질화한다.- 70 -화한다.
      4.1.3.3 여기에 멸균생리식염수를  
가해서 일정량(100～
250mL)으로 한 것을  
시험용액으로 한다.
     4.1.4 분말상시료
      4.1.4.1 (생  략)
      4.1.4.2 그 일정량(10 g)을 멸균
용기에 취해 9배 양의  
멸균생리식염 수와 혼합
한 것을 시험용액으로  
한다.
     4.1.5 캡슐제품류
      4.1.5.1 (생  략)
      4.1.5.2 9배 양의 멸균생리식염
수를 가해 균질기와 스
토마커 등을 이용하여  
균질화한 것을 시험용
액으로 한다.
     4.1.6 시험용액조제 시 주의사항
      4.1.6.1 위와 같이 조제된 시험원
액에 대해서는 멸균생리
식염수 9 mL에  시험원액  
1 mL를 취하여 10배  
희석액으로 만든다.
      4.1.6.2 필요에 따라 102배, 103배, 
104배… 희석액을 만들어        4.1.3.3 ---------- 희석액을
             ------------------
             ------------------
             -------------.
     4.1.4 분말상시료
      4.1.4.1 (현행과 같음)
      4.1.4.2 ------------------
            -------------------
            희석액과  -----------
            -------------------
            ----.
     4.1.5 캡슐제품류
      4.1.5.1 (현행과 같음)
      4.1.5.2 ---------- 희석액을
            ------------------
            -------------------
            -------------------
            -------------.
     <삭  제>
  - 71 -사용한다.
      4.1.6.3 시험용액의 조제 시 시
료를 용기 포장한 대로  
채취할 때에는 그 외부를  
물로 씻고 자연 건조시킨  
다음 마개 및 그 하부  
5～10 cm의 부근까지  
70% 알콜 탈지면으로  
닦고, 화염멸균한 후  
냉각하고 멸균한 기구
로 개봉, 또는 Tween  
80과 같은 세균에 독성
이 없는 계면활성제를  
첨가하는 것이 좋다.  
개관하여 2차 오염을  
방지하여야 한다. 지방
분이 많은 시료의 경우
는 Tween 80과 같은  
세균에 독성이 없는 계
면활성제를 첨가하는  
것이 좋다.
     4.1.7  냉동제품
      4.1.7.1  냉동상태의 시료를 포장된  
상태 그대로 40 ç이하
에서 될 수 있는 대로  
단시간에 녹여 용기, 포
장의 표면을 70% 알코올       4.1.6  냉동제품
      4.1.6.1  ------------------
             ------------------
             ------------------
             ------------------
             ------------------- 72 -솜으로 잘 닦은 후 상기 
5.1.1～5.1.5의  방법으로  
시험용액을 조제한다.
     <신  설>
 
              ------------------
             4.1.1～4.1.5의  ------
             --------------.
     4.1.7 시험용액조제 시 주의사항
      4.1.7.1 시험용액 제조 희석액은  
멸균생리식염수 또는  
펩톤식염완충액을 사용
한다.
      4.1.7.2 위와 같이 조제된 시험원
액에 대해서는 희석액  9 
mL에 시험원액 1 mL
를 취하여 10배 희석액
으로 만든다.
      4.1.7.3 필요에 따라 100배, 1,000배  
등 단계별 희석용액을  
만들어  사용할 수 있다.
      4.1.7.4 시험용액의 조제 시 시
료를 용기 포장한 대로  
채취할 때에는 그 외부
를 물로 씻고 자연 건
조시킨 다음 마개 및  
그 하부 5～10 cm의  
부근까지 70% 알코올  
탈지면으로 닦고, 화염
멸균한 후 냉각하고 멸
균한 기구로 개봉 또는  
개관하여 2차 오염을  - 73 - 
 
    4.2 시험의 조작
     4.2.1 각 단계별 희석액 1 mL를  
멸균 페트리접시 2매 이상
씩에 무균적 으로 취한다.
    
     4.2.2 약 43～45 ç로 유지한  
BCP첨가 평판측정용배지  
약 15 mL를 무균 적으로  
5.2.1에 분주한다.
     4.2.3 페트리접시 뚜껑에 부착하지  
않도록 주의하면서 조용히  
회전하여  좌우로 기울이
면서 시료와 배지를 잘  
섞고 냉각 응고시킨다.  
단, 시료를 취하여 배지를  
가할 때까지의 시간은 20분  방지하여야 한다. 지방
분이 많은 시료의 경우는  
Polysorbate 80( Tween  
80)과 같은 세균에 독
성이 없는 계면활성제를  
첨가할 수 있다.  
      4.1.7.5 실험을 실시하기 직전에  
잘 균질화 하고 검사시
료에 따라  시험용액을  
조제한다.
 
    4.2 시험의 조작
     4.2.1 유산균수 측정방법은 MRS  
배지 또는 BL 한천배지를  
사용하여 유산균의 집락을  
계수한다.
     4.2.2 시료 10 ∼25 g(mL)에 9배  
희석액을 가하여 100 ∼
250 mL이 되게 하고 균
질화한다(10-1용액).  
     4.2.3 시험용액(10-1용액) 1 mL
에 희석액을 가하여 10  
mL이 되게 하여 10-2시험
용액을 만든 후 동일하게  
조작하여 희석한다.
    - 74 -이상 경과하여서는 안 된다.
     4.2.4 냉각 응고시킨 페트리접시는  
거꾸로 하여 35～37 ç에서 
72±3시간  배양한다.
     <신  설>
     4.2.5 발생한 황색의 집락을 유산
균의 집락으로 계측한다.
      <신  설>
      <신  설>     4.2.4 BL 한천배지 시험 조작
  
      4.2.4.1 각 희석 시험용액 0.1  
mL씩을 BL 한천배지  
2매 이상에 접종하며  
멸균초자봉으로  도말한다.  
시료가 접 종된 페트리
접시(Pretridish) 는 35∼
37 ç에서 48∼72±3시간  
혐기배양한다. 배양 후  
생성된 집락수를 측정
하고 희석배수를 곱하
여 검사 시료 g당 균
수를 산출한다(접종량도  
희석배수에 고려해야  
한다).
     4.2.5 MRS 배지 시험 조작
   
      4.2.5.1 각 단계별 희석액 1 mL
씩을 멸 균  페 트 리 접 시
(Pretridish)  2매 이상씩에  
무균적으로 취한다.
      4.2.5.2 약 43～45 ç로 유지한  
MRS 배지 약 15 mL을  
무균적으로 분주한다.- 75 -      <신  설>
  
      <신  설>
  
      <신  설>      4.2.5.3 페트리접시(Pretridish) 뚜
껑에 부착하지 않도록  
주의하면서 조용히 회
전하여 좌우로 기울이
면서 시료와 배지를 잘  
섞고 냉 각 응고시킨다.  
단, 시료를 취하여 배지를  
가할 때까지의  시간은  
20분 이상 경과하여서는  
안 된다.
      4.2.5.4 냉각 응고시킨 페트리
접시(Pretridish) 는 거꾸로  
하여 35∼37 ç에서 48
∼72±3시간 배양한다.
      4.2.5.5 발생한 황색의 집락을  
유산균의 집락으로 계
측한다.  
     4.2.6 집락수 산정
      4.2.6.1 배양 후 즉시 집락 계
산기를 사용하여 생성된  
집락수를 계산한다 . 단, 
부득이할 경우에는 5 ç에 
보존시켜 24시간  이내에  
산정한다.
      4.2.6.2 집락수의 계산은 확산
집락이 없고(전면의  
1/2이하 일 때 에는 지- 76 -  
      <신  설>장이 없음) 1평판 당 
30∼300개의 집락을 생
성한 평판을 택하여  집
락수를 계산하는 것을  
원칙으로 한다. 전 평
판에 300개 이상 집락
이 발생한 경우 300에  
가까운 평판에 대하여  
밀집평판 측정법에  따라 
안지름 9 cm의 페트리
접시(Pretridish) 인 경우
에는 1 cm2내의 평균
집락수에 65를 곱하여  
그 평판의 집락수로  
계산한다. 전 평판에  
30개 이하의 집락만을  
얻었을 경우에는 가장  
희석배수가 얕은  것을  
측정한다.
     4.2.7 유산균수의 기재보고
      4.2.7.1 시료 1 mL  중의 유산
균수를 기재 또는 보고
할 경우에 그것이 어떤  
제한된 것에서 발육한  
집락을 측정한 수치인  
것을 명확히 하기 위하여  
1평판에 있어서의 집락- 77 -   5. 분석 및 계산
    5.1 계산
     5.1.1 배양 후 즉시 집락 계산기를  
사용하여 생성된 집락수를  
계산한다 . 단, 부득이할 경
우에는 5 ç에 보존시켜 24
시간 이내에 산정한다.
     5.1.2 집락수의 계산은 확산집
락이 없고(전면의 1/2이하  
일 때에는 지장이  없음)  
1평판 당 30～300개의 집
락을 생성한 평판을 택하여  
집락수를 계산하는 것을  
원칙으로 한다. 전 평판
에 300개 이상 집락이 발
생한 경우 300에 가까운  
평판에 대하여 밀집평판  
측정법에  따라 안지름 9  수는 상당 희석배수로 
곱하고 1 mL  중(1 g  
중)의 유산균수 몇 개
라고 기재보고하며 동시에  
배양온도를 기록한다.  
숫자는  높은 단위로부터  
3단계를 반올림하여 유
효숫자를 2단계로  끊어  
이하를 0으로 한다.
   <삭  제>
  
 - 78 -cm의 페트리접시인 경우
에는 1 cm2내의 평균집
락수에 65를 곱하여 그  
평판의 집락수로 계산한
다. 전 평판에 30개 이하
의 집락만을 얻었을 경우
에는 가장 희석배수가 얕
은 것을 측정한다.
    5.2 유산균수의 기재보고
시료 1 mL  중의 유산균수를  
기재 또는 보고할 경우에 그것이  
어떤 제한된 것에서 발육한 집
락을 측정한 수치인 것을 명확히  
하기 위하여  1평판에 있어서의  
집락수는 상당 희석배수로 곱하고  
1 mL  중(1 g 중) 의 유산균수  
몇 개라고 기재보고하며 동시
에 배양온도를 기록한다. 숫자
는 높은 단위로부터 3단계를 4
사5입하여 유효숫자를 2단계로  
끊어 이하를 0으로 한다.
   5.3 균수 계산 (예)
    유산균수 (개/g) = A×희석배수
     A : plate 당 집락 수(개)  
  
  
  3-59 비피더스균(Bifidobacterium)
   1. 시험방법의 요약  
  3-59 유산간·구균 및 비피더스균
   1. 시험방법의 요약- 79 -    본 시험법은 시료에 함유된 유산균을  
BL 배지를 이용하여 배양하는 방법
으로 배양 후 집락계산기로 정량한다.
   2. 장비와  재료
    2.1 (생  략)
   3. 일반시약 및 일반시액
    3.1 일반시약
     3.1.1 에탄올(Ethanol)
    3.2 시액 및 배지의 조제
     3.2.1  펩톤식염완충액(Buffered  
Peptone Water)
      3.2.1.1  Peptone 10 g, Sodium  
Chloride 5 g, Disodium  
Phosphate  3.5 g,  
M o n o - p o t a s s i u m  
Phosphate 1.5 g을 1 L  
부피플라스크에 넣는다.
      3.2.1.2 증류수에 가하여 1,000  
mL로 하고 pH 7.2±0.2로  
조정한다.
      3.2.1.3 121 ç에서15분간 고압  
멸균한다.
     3.2.2 BL 한천배지(BL Agar)    본 시험법은 유산간·구균과 비피
더스균을 구분하여 산정해야 하는  
경우에 한하며, 유산간·구균은  
BCP첨가 평판측정용배지를 사용
하고 비피더스균은 TOS-MUP  
배지를 사용한 시험방법에 따라  
시험한 후 산출한다.
   2. 기구와  재료
    2.1 (현행과 같음)
   3. 일반시약 및 일반시액
    3.1 일반시약
     3.1.1 ----------
    3.2 시액 및 배지의 조제
     3.2.1 멸균생리식염수(Saline)
     
      3.2.1.1 Sodium Chloride 8.5 g에  
증류수를 가하여 1,000  
mL로 하고 121 ç로 멸
균한다.
    
      <삭  제>
      <삭  제>
     3.2.2 펩톤식염완충액(Buffered  - 80 -      3.2.2.1 Beef Extract 3 g, Liver  
Extract 5 g, Yeast  
Extract 5 g, Proteose  
Peptone 10 g, Tryptone  
5 g, Soypeptone 3 g,  
Soluble Starch 0.5 g, G lucose  
10 g, Dipotassium  
Phosphate 1 g,  
M o n o p o t a s s i u m  
Phosphate 1g,  
Magnesium Sulfate  
0.2g, Sodium Chloride  
0.01g, Manganese  
Sulfate 0.00674 g,  
L-Cysteine ß¶HCl ß¶H2O 
0.5 g, Ferrous Sulfate  
0.01 g, Polysorbate  
80(Tween 80) 1 g, 
Agar 15 g을 1 L 부
피플라스크에 넣는다.  
시판용 BL 한천배지  
사용도 무관하다.
      3.2.2.2 증류수를 이용하여 1,000  
mL로 하고, pH 7.2로  
조정한다.
      3.2.2.3 121 ç에서 15분간 멸균Peptone Water)
      3.2.2.1 Peptone 10 g, Sodium  
Chloride 5 g,  
Disodium Phosphate  3.5 
g, M ono-potassiu m 
Phosphate 1.5 g을 증
류수 1,000 mL에 가하
여 pH를 7.2±0.2로 조
정한 후  121 ç에서 15
분간 고압 멸균한다.
    
      <삭  제>
      <삭  제>- 81 -하여, 50ç로 냉각시킨다.
      3.2.2.4 소, 말, 양 또는 사람의  
탈섬유소 혈액을 5%  
되도록 첨가한다. 
     3.2.3 BS한천배지(유산균과 비
피더스균의 혼합제품에  
적용)
      3.2.3.1 BL agar 1 L에 Sodium  
Propionate 15 g,  
Praomomycin Sulfate  
50 mg, Neomycin 100 mg,  
Lithium Chloride 3 g을  
첨가하여 조제한다.
        
      3.2.2.3 121 ç에서 15분간 멸균
한다.
     <신  설>      <삭  제>
  
     3.2.3 BCP첨가 평판측정용 한천
배지(Plate Count Agar with  
Brom Cresol Purple)  
      3.2.3.1 Yeast Extract 2.5 g, Peptone  
5.0 g, Dextrose 1.0 g,  
Polysorbate 80(Tween  
80) 1.0 g, L-Cysteine 0.1  
g, Agar 15.0 g(다만, 종
균에 따라 적정 peptone을  
사용하여야 함)을 증류수  
1,000 mL에  녹여 pH 6.
8～7.0으로 조정한 후  
BCP(Brom cresol purple)을  
0.004∼0.006%가 되도록  
가한다. 시판되는 BCP  
첨가 평판측정용 한천배
지를 사용해도 무관하다.
      3.2.3.2  ------------------
            ----.
     3.2.4 TOS-MUP 배지
      3.2.4.1 Trypticase peptone 10 g,  
Yeast Extract 1 g,  
KH2PO4 3 g, K 2HPO 4 - 82 -   
   4. 시험과정
   4.1 시험용액의 조제
    4.1.1 (생  략)
    4.1.2 반유동상시료
     4.1.2.1 (생  략)
     4.1.2.2 그 일정량(10～25 mL)을  
멸균용기에 취해 9배 양의  
멸균생리식염수와  혼합한  
것을 시험용액으로 한다.4.8 g, (NH4)2SO4 3 g, 
Magnesium Sulfate  
7H2O 0.2 g,  
(R)-Cysteine-HCL·H 2O 
0.5 g, Sodium  
propionate 15 g,  
TOS(Galactooli gosaccha
ride) 10 g, Agar 15 g를  
증류수 950 mL에 녹이
고 pH를 6.3±0.2로 조
정한 후 115 ç에서 15
분간 멸균하여 50 ç정
도로 식힌 다음  
M U P ( m u p i r o c i n )  
supplement(1 mg/mL)를  
주사필터(0.22 ㎛)한 후  
50 mL을  위의 배지에  
첨가한다 . 
   4. 시험과정
   4.1 시험용액의 조제
    4.1.1 (현행과 같음)
    4.1.2 반유동상시료 
     4.1.2.1 (현행과 같음)
     4.1.2.2 --------------------
           --------------------
           희석액 과 ------------
           -------------------.- 83 -    4.1.3 고체시료
     4.1.3.1 (생  략)
     4.1.3.2 멸균생리식염수를 가해  
균질기를 이용해서 가
능한 한 저온 으로 균질
화한다.
     4.1.3.3 여기에 멸균생리식염수를  
가해서 일정량(100～250  
mL)으로  한 것을 시험
용액으로 한다.
    4.1.4 분말상시료
     4.1.4.1 (생  략)
     4.1.4.2 그 일정량(10 g)을 멸균
용기에 취해 9배 양의  
멸균생리식염수와  혼합한  
것을 시험용액으로 한다.
    4.1.5 (생  략)
    4.1.6 시험용액 조제 시 주의사항
     4.1.6.1 위와 같이 조제된 시험원
액에 대해서는 멸균생리식
염수 9 mL에  시험원액 1  
mL를 취하여 10배 희
석액으로 만든다.
     4.1.6.2 필요에 따라 102배, 103배, 
104배… 희석액을 만들어  
사용한다.
     4.1.6.3 시험용액의 조제 시 시    4.1.3 고체시료 
     4.1.3.1 (현행과 같음)
     4.1.3.2 희석액을  가해 균질기를  
이용해서 가능한 한 저
온으로 균질화한다.
     4.1.3.3 여기에 희석액을 가해서  
일정량(100∼250 mL)으로  
한 것을  시험용액으로  
한다.
    4.1.4 분말상시료
     4.1.4.1 (현행과 같음)
     4.1.4.2 -------------------
           -------------------
           희석액과  ------------
           ------------------.
    4.1.5 (현행과 같음)
    <삭  제>
  
  - 84 -료를 용기 포장한 대로 
채취할 때에는 그 외부를  
물로 씻고 자연건조시킨  
다음 마개 및 그 하부 
5～10 cm의 부근까지  
70% 알콜탈지면으로  
닦고, 화염 멸균한 후 냉각
하고 멸균한 기구로 개봉,  
또는 개관하여 2차 오
염을 방지하여야 한다.  
지방분이 많은 시료의  
경우는 Tween 80과 같은  
세균에 독성이 없는 계면
활성제를  첨가하는 것이  
좋다.
    4.1.7 냉동제품
     4.1.7.1  냉동상태의 시료를 포장
된 상태 그대로 40 ç이하
에서 될 수 있는 대로  
단시간에 녹여 용기,  
포장의 표면을 70% 알
코올 솜으로 잘 닦은 후  
상기 5.1.1～5.1.5의  방법
으로 시험용액을 조제한다.
    <신  설>  
    4.1.6  냉동제품
     4.1.6.1  -------------------
           -------------------
           -------------------
           -------------------
           -------------------
           -------------------
           ---- 4.1.1 ∼4.1.5의  ---
           ------------------.
    4.1.7 시험용액조제 시 주의사항
     4.1.7.1 시험용액 제조 희석액은  
멸균생리식염수 또는 펩톤- 85 - 
 
  식염완충액을 사용한다.
     4.1.7.2 위와 같이 조제된 시험
원액에 대해서는 희석
액 9 mL에 시험원액 1  
mL를 취하여 10배 희
석액으로 만든다.
     4.1.7.3 필요에 따라 100배, 1,000배  
등 단계별 희석용액을 만
들어 사용할 수 있다.
     4.1.7.4 시험용액의 조제 시 시
료를 용기 포장한 대로  
채취할 때에는 그 외부를  
물로 씻고 자연 건조시킨  
다음 마개 및 그 하부  
5∼10 cm의 부근까지  
70% 알코올 탈지면으로  
닦고, 화염멸균한 후 냉각
하고 멸균한 기구로 개봉  
또는 개관하여 2차 오
염을 방지하여야 한다.  
지방분이 많은 시료의  
경우는 Polysorbate  
80(Tween 80)과 같은  
세균에 독성이 없는 계
면활성제를 첨가할 수  
있다.
     4.1.7.5 실험을 실시하기 직전에  - 86 -   4.2 시험의 조작
    4.2.1 시험용액 1 mL에 펩톤식염
완충용액을 가하여 10 mL가  
되게 한 다음 잘 혼합한다.
    <신  설>
   
    4.2.2 위의 검액(10-1용액) 1 mL에  
희석액을 가하여 10 mL가  
되게하고  10-2 검액을 만든  
후, 동일하게 조작하여  
10-3, 10-4～10-7 검액을 조제
한다.
     <신  설>
    <신  설>
  잘 균질화하고 검사시료에 
따라 시험용액을 조제한다.
   4.2 시험의 조작
    4.2.1 BCP첨가 평판측정용 배지를  
사용한 경우
   
     4.2.1.1 3-58 유산균수 MRS 배
지에 준하여 시험하고  
35～37 ç에서 48～72±3
시간 호기  또는 혐기 배
양한 후 발생한 황색의  
집락을 유산균으로 계수
한다. 
    4.2.2 TOS-MUP 배지를 사용한  
경우
  
     4.2.2.1 3-58 유산균수 MRS 배
지에 시험하고, 35 ∼3
7ç에서 48∼72±3시간  
혐기 배양한다.
     4.2.2.2 모든 시험에서는 시험용
액을 가하지 아니한 동
일 희석액 0.1 mL을 대
조시험액으로 하여 시험- 87 -    4.2.3 각 희석검액 0.1 mL씩을  
각각 BL배지 (혹은 BS배
지) 상에 접종하여 멸균  
초자봉으로 도말(포)한다.
     <신  설>
    4.2.4 이때 대조시험으로 검액을  
가하지 아니한 동일 희석액  
0.1 mL을 배지에 가한 것을  
대조로하여 페트리접시, 희석
용액, 배지 및 조작이 무균적
이었는지 여부를 확인한다.
     <신  설>     
    4.2.5 배지를 혐기성 상자에 넣고  
37 ç, 48～72시간 배양한다.  
배양 후 집락을 계수하고  
희석배수(×10)을 곱하여 시료  
mL당 생균수를 산출한다.
   5. 분석 및 계산
    5.1 배양 후 BL 한천평판상의  
균의 성장조작의 무균여부를 확인
한다.
    4.2.3 집락수의 산정
   
     4.2.3.1 3-58 유산균수의 4.2.6  
집락수 산정에 따라 산
정한다.
    4.2.4 유산균의 기재보고
   
     4.2.4.1 3-58 유산균수의 4.2.7 유
산균의 기재보고에 따라  
산정한다.
    <삭  제>
  
   <삭  제>
  - 88 -     5.1.1. Bifidobacterium longum
      유갈색～황갈색의 반구상  
으로 융기된 중심부가 적  
갈색인 직경 약 1.0～2.0  
mm의 집락을 형성한다.
     5.1.2 Bifidobacterium bifidum
      유갈색～회색으로 융기된  
중심부가 적갈색인 직경 0.5～
1.5 mm정도의 원형집락을 형
성한다.
     5.1.3 Bifidobacterium breve
      유백색～유갈색의 반구형으로  
중심부가 융기된 직경 1.0～  
2.0 mm의 원형 집락을 형성한다.
    5.2 계산
     5.2.1 배양 후 즉시 집락 계산기를  
사용하여 생성된 집락수를  
계산한다 . 단, 부득이할 경
우에는 5 ç에 보존시켜 24
시간 이내에 산정한다.
     5.2.2 집락수의 계산은 확산집
락이 없고(전면의 1/2이하  
일 때에는 지장이 없음)  
1평판 당 30～300개의 집
락을 생성한 평판을 택하여  
집락수를 계산하는 것을  
원칙으로 한다. 전 평판에    
 
  
  
  
 - 89 -300개 이상 집락이 발생
한 경우 300에 가까운 평
판에 대하여 밀집평판 측
정법에  따라 안지름 9  
cm의 페트리접시인 경우
에는 1 cm2내의 평균 집
락수에 65를 곱하여 그  
평판의 집락수로 계산한
다. 전 평판에 30개 이하의  
집락만을 얻었을 경우에는  
가장 희석배수가 얕은 것을  
측정한다.
    5.3 비피더스균수의 기재보고
     시료 1 mL  중의 비피더스균수를  
기재 또는 보고할 경우에 그것이  
어떤 제한된 것에서 발육한 집
락을 측정한 수치인 것을 명확히  
하기 위하여  1평판에 있어서의  
집락수는 상당 희석배수로 곱하고  
1 mL 중(1 g 중)의  비피더스균
수 몇 개라고 기재보고하며 동
시에 배양온도를 기록한다. 숫
자는 높은 단위로부터 3단계를  
4사5입하여 유효숫자를 2단계로  
끊어 이하를 0으로 한다.
    5.4 계산
     비피더스 (개/g) = A × 희석배수  - 90 -      A : plate 당 집락 수(개)
  
  3-60 ∼ 3-65 (생  략)
  3-66 플라보놀 배당체
   1. (생  략)
   2. 장비와 재료
    2.1 ∼ 2.2 (생  략)
   <신  설>  
   3. ∼ 4. (생  략)   
   5. 분석 및 계산
    5.1 기기분석
표 1. 고속액체크로마토그래피 조건(예)
 항목 조건
주입량 20  μL
검출기 파장 (생  략)
컬럼온도 (생  략)
이동상A : 메탄올, B : 0.85% 
인산을 함유한 증류수
유속 (생  략)
   표 2. 이동상 조건  
  3-60 ∼ 3-65 (현행과 같음)
  3-66 플라보놀 배당체 
   1. (현행과 같음)
   2. 장비와 재료
    2.1 ∼ 2.2 (현행과 같음)
    2.3 분석장비의 준비
 이동상으로서 0.1% 인산을 함유한  
아세토니트릴과 0.1% 인산용액을  
40 : 60으로 혼합하여 분당 1.0  
mL씩 흘려줌으로서 칼럼과 기
기를 안정화 시킨다.
   3. ∼ 4. (현행과 같음)
   5. 분석 및 계산
    5.1 기기분석
항목 조건
주입량 10 μL
검출기 파장 (현행과 같음)
칼럼온도 (현행과 같음)
이동상 0.1% 인산을 함유한 
아세토니트릴 : 0.1% 
인산용액 = 40 : 60 
유속 (현행과 같음)표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
    <삭  제>- 91 - 시간(분)이동상(%)
A B
0
4
30
32
32.1
4030
30
5
5
30
3070
70
95
95
70
70
    5.2 (생  략)     5.2  (현행과 같음)