식품의약품안전처공고제2014-231호
대한민국약전외한약(생약)규격집
일부개정고시(안)행정예고
2014.8.13.
식품의약품안전처- 1 -식품의약품안전처공고제2014-231호
「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처고시제
2014-74호,2014.2.12)을일부개정함에있어국민에게미리알려의
견을수렴하고자그취지,개정이유및주요내용을「행정절차법」
제46조에따라다음과같이공고합니다.
2014년8월13일
식품의약품안전처장
대한민국약전외한약(생약)규격집일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
「대한민국약전외한약(생약)규격집」의의약품각조중일부기준·
규격을최신과학수준및국제적추세에맞게합리적으로개선함으로
써,한약(생약)등의기준·규격을선진화하고우수한품질의의약품이
유통될수있도록하고자함
2.주요내용
가.의약품각조제1부중「곽향」등3품목의확인시험신설및
개선,「목향」의함량규정및정량법신설(별표3)
1)생약의특성에기인한특이성있는이화학적확인시험및함량
규정,정량법도입필요- 2 -2)표준생약또는표준품을이용한박층크로마토그래프법확인시
험신설및개선,함량규정및액체크로마토그래프법을이용한
정량법신설
3)확인시험미설정된생약의확인시험설정과생약중지표성분
중심의함량기준및분석법제공을통한한약(생약)등의품질
기반확보
나.의약품각조제1부중「백수오」의순도시험추가신설(별표
3)
1)현행표준생약을이용한박층크로마토그래프법확인시험으로
「백수오」위품감별이어려움
2)유사종인이엽우피소의혼입여부를판별할수있도록순도시험
중「이엽우피소」에대한유전자분리및증폭반응(PCR)신설
3)위품에대한새로운감별법을제시함으로써한약(생약)등의
유통질서확립및소비자신뢰회복
다.의약품각조제2부중「계지탕엑스과립」등5품목의확인시
험개선(별표4)
1)현행한약(생약)제제등의확인시험의경우약전품을이용한
일반시험법으로제제의특성이반영되지않음
2)표준품을이용한박층크로마토그래프법확인시험개선및원료- 3 -한약재의주요성분을이용한액체크로마토그래프법동시확인
시험신설
3)제제별특성을반영한다양한확인시험제공으로민원인의편
의제공및기준·규격선진화확보
라.의약품각조제2부중「대두단백가수분해물」등9품목의시험
법명확화및명칭통일,오기등정정(별표4)
3.의견제출
「대한민국약전외한약(생약)규격집」일부개정고시(안)에대하여
의견이있는단체또는개인은2014년9월2일까지다음사항을기
재한의견서를식품의약품안전처장(우편번호:363-700,주소:충청북
도청주시흥덕구오송읍오송생명2로187식품의약품안전처,참조:
한약정책과,전화043-719-3362,팩스043-719-3350,전자우편:
kyounga1106@korea.kr)에게제출하여주시기바랍니다.
가.예고사항에대한의견(찬·반여부와그사유)
나.성명(단체인경우단체명과그대표자성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 4 -식품의약품안전처고시제2014-호
「약사법」제52조제1항에따른「대한민국약전외한약(생약)규격집」
(식품의약품안전처고시제2014-74호,2014.2.12.)을다음과같이개
정고시합니다.
2014년월일
식품의약품안전처장
대한민국약전외한약(생약)규격집일부개정고시(안)
대한민국약전외한약(생약)규격집일부를다음과같이개정한다.
별표3의약품각조제1부중곽향의성상다음에확인시험을다음과
같이신설한다.
확인시험이약의가루및곽향표준생약1g을각각달아메탄올20mL를넣
어30분간초음파추출한다음여과한다.여액을감압농축하고메탄올2mL에
녹여검액및곽향표준생약표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그
래프법에따라시험한다.검액및곽향표준생약표준액10μL씩을박층크로마토
그래프용실리카겔(형광제첨가)을써서만든박층판에점적한다.다음에디클로
로메탄･메탄올･물혼합액(60:13:2)을전개용매로하여약10cm전개한다음
박층판을바람에말린다.여기에분무용황산시액을고르게뿌린다음105℃에
서가열할때검액에서얻은여러개의반점은곽향표준생약표준액에서얻은- 5 -반점과색상및Rf값이같다.
별표3의약품각조제1부중목향의함량규정을“이약을건조한것
은정량할때코스투놀리드(C15H20O2:232.32),데히드로코스투스락톤
(C15H18O2:230.30)의합1.8%이상을함유한다.”로신설하며,엑스함
량을삭제하고,정량법을다음과같이신설한다.
정량법이약의가루약1.0g을정밀하게달아메탄올100mL에넣고45
분간초음파추출한액을여과한다.그여액에메탄올을넣어정확하게100mL
로하여검액으로한다.따로코스투놀리드표준품약10mg및데히드로코스투
스락톤표준품약10mg을정밀하게달아메탄올100mL에녹여표준액으로한
다.검액및표준액10μL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에
따라시험하여검액의코스투놀리드및데히드로코스투스락톤의피크면적ATa
및ATb와표준액의코스투놀리드및데히드로코스투스락톤의피크면적ASa및
ASb를측정한다.
코스투놀리드의양코스투놀리드표준품의양×
데히드로코스투스락톤의양데히드로코스투스락톤표준품의양×
조작조건
검출기:자외부흡광광도계(측정파장210nm)
칼럼:안지름4∼6mm,길이15∼25cm인스테인레스강관에5∼10μ
m의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다.- 6 -칼럼온도:30℃
이동상:물‧아세토니트릴(9:11)
유량:1.0mL/분
시스템적합성
시스템의재현성:표준액10μL씩을가지고위의조건으로시험을6회반복할
때코스투놀리드및데히드로코스투스락톤각각의피크면적의상대표준편차는
1.5%이하이다.
별표3의약품각조제1부중백수오의확인시험1)을확인시험으로하
고,확인시험2)를삭제하며,순도시험3)이산화항다음에4)이엽우
피소를다음과같이신설한다.
4)이엽우피소이약10g을멸균한막자와막자사발을사용하여액체질소로
순간적으로조직을얼린상태에서가루로하여사용한다.이약100mg을정밀
하게달아유전자증폭반응조작에따라DNA(이하유전자라한다)를분리․
정제하여검액으로한다.따로백수오표준생약약100mg을정밀하게달아검
액과같이조작하여대조액으로한다.
유전자분리및증폭반응(PCR,PolymeraseChainReaction)
가)유전자분리
이약100mg에500μL의lysis용액(20mMTris․HClpH8.0,2mM
SodiumEDTA,12%TritonX-100,Lysome20mg/mL)및proteinaseK용
액(600mAU/mL이상)10μL를넣고37℃항온에서1시간반응시킨다.그
후CTBA용액(0.1MTris․HClpH8.0,1.4MNaCl,20mMEDTApH8.0,
2%hexadecyltrimethylammoniumbromide,0.2%β-mercaptoethanol)400μL- 7 -를넣고65℃항온에서30분간반응시킨다.이반응물에페놀․클로로포름․
이소아밀알콜혼합액(25:24:1)600μL와정제수300μL를넣고20℃를유
지하며14,000rpm에서10분간원심분리하여상층액을취하고여기에이소프
로판올600μL를넣고20℃를유지하며14,000rpm에서10분간원심분리한
다.침전된유전자를70%에탄올500μL로2∼3회세척하고상온에서건조
시킨다.건조된유전자를멸균된정제수30μL로녹여4℃에서1시간방치한
다음RNase(100mg/mL,7,000units/mL)2μL를넣고37℃에서30분간반
응시킨다.분리된유전자는분광광도계를이용하여흡광도를측정한다음농도
및순도를다음과같이계산한다.
유전자농도(μg/mL)=50μg/mL×A260nm×희석배수
(단,A260nm=1일때유전자농도는50μg/mL인것으로하여희석한다.)
유전자순도:A260nm/A280nm=1.6∼2.0
(또는분리된유전자는1.0%아가로즈겔전기영동법으로농도및분리상태를
확인할수있다.)
※위시험과정은상용화된유전자분리․정제키트를사용할수있으며,해당
제조사의사용방법을참고하여유전자를분리한다.
※PCR법은증폭하고자하는주형유전자가미량존재하여도증폭되므로분리
된유전자이외의유전자가혼입되지않도록실험에사용되는기구및시약등
의실험실환경관리에주의해야한다.
-실험자는실험용고무장갑을착용하고,실험대는70%에탄올로깨끗이닦는
다.
-유전자를취급할때는외부공기와접촉이없는무균상자등의독립된공간
을이용하며,열에불안정한시액을제외한microtube/tip및증류수등은121
℃에서15분이상멸균하여사용한다.
-본실험에서증류수는특별한사유가없는한DNA,DNase등의오염이없- 8 -온도 시간 cycle수
최초변성(predenaturation) 94℃ 3분 1
변성(denaturation)
결합(annealing)
증폭(extension)94℃
55℃
72℃30초
30초
30초34
최종증폭(elongation) 72℃ 5분 1
보존 4℃ - -
TargetregionPrimer 염기서열는초순수를말한다.
나)유전자증폭반응(PolymeraseChainReaction,PCR)
샘플유전자에대한PCR은1회확인시험으로실시하되trnH-psbAbarcode
primer로PCR을진행하고,실험조건에의한오염을확인하기위해"blank"(주
형유전자대신멸균증류수첨가)을실험에포함시킨다.
유전자증폭반응은멸균된0.5mL튜브에PCR용완충액(10×amplification
buffer)에forwardprimer(10pmole)0.5μL,reverseprimer(10pmole)0.5μL
와분리한주형유전자(농도약20ng/μL)1μL를넣고멸균정제수로최종
반응액을20μL로한다.PCR반응조건은아래표와같다.
※상기PCR조건은기기및실험환경에따라변형할수있으며,PCR에사용
되는시약도상용화된키트를사용할수있으며제조사의권장조건을따른다.
※결합(annealing)온도는primer의Tm값과PCR결과에따라조정가능하
다.
*Primer- 9 -trnH-psbAtrnHf_055‘-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3'
psbA3F5'-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3'
다)전기영동
PCR증폭결과는아가로즈겔또는폴리아크릴아마이드겔을이용한전기영동
법으로확인하며,여기에서는아가로즈겔방법을제시한다.
아가로즈겔의첫번째홈에는PCR증폭산물의크기를식별할수있는사이즈
마커(100bpPCRsizemarker)를넣고두번째홈부터PCR증폭산물을넣는
다.이때검액은10μL를넘지않도록한다.전기영동의전압과시간은겔의
농도와크기에따라조절한다(아가로즈겔2%,전기영동100V,30분∼1
시간).전기영동이끝난겔은에티디움브로마이드(EtBr)염색법으로처리하여
증폭산물을확인한다.
※에티디움브로마이드(EtBr)는인체에해로운시액으로피부와직접접촉이없
도록장갑과마스크를착용하고취급에주의한다.폐액은반드시지정된폐기물
통을이용하여야한다.
라)결과확인및판정
염색이끝난아가로즈겔을영상분석장치(UVtrans-illuminator)를통해증폭밴
드를확인할수있다.검액에서확인된증폭밴드는대조액과다른증폭밴드가
검출되어서는안된다.본실험에대한결과판정은유전자분리부터증폭반응
까지2회반복실험을하여그결과가동일하게나타나야한다.
별표3의약품각조제1부중시라자의성상다음에확인시험을다음
과같이신설한다.- 10 -확인시험이약의가루1g을달아헥산10mL를넣어5분간방치한다음여
과하여검액으로한다.따로카르본표준품0.1mL을에탄올20mL에녹여표
준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다.검액
및표준액10μL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을써서만든
박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(20:1)을전개용매로하여
약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에자외선(주파장254n
m)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은
반점과색상및Rf값이같다.
별표3의약품각조제1부중식방풍의확인시험을다음과같이개정
한다.
확인시험이약의가루및식방풍표준생약1g을각각달아메탄올10mL를
넣어30분간초음파추출한다음여과한다.여액을감압농축하고메탄올1m
L에녹여검액및식방풍표준생약표준액으로한다.이들액을가지고박층크로
마토그래프법에따라시험한다.검액및식방풍표준생약표준액10μL씩을박층
크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을써서만든박층판에점적한다.다음
에디클로로메탄･메탄올･물혼합액(30:10:1)을전개용매로하여약10cm
전개한다음박층판을바람에말린다.여기에분무용황산시액발색후자외선
(주파장365nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점은식방풍표준생약
표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.
별표4의약품각조제2부중계지탕엑스과립의확인시험을다음과- 11 -같이개정한다.
확인시험이약을가지고계지탕연․건조엑스의확인시험에따라시험한다.
별표4의약품각조제2부중계지탕연・건조엑스의확인시험을다음
과같이개정한다.
확인시험(제1법)또는(제2법)또는(제3법)을실시한다.
(제1법)1)계지이약을가지고계지약1g에해당하는양을달아물10
mL를넣고5분간흔들어섞은다음디에틸에테르25mL을넣어30분간초음
파추출한다음여과한다.여액중디에틸에테르층을취하여감압농축하고디에
틸에테르2mL에녹여검액으로한다.따로신남산표준품1mg을달아메탄올
2mL에녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라
시험한다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨
가)을써서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸･포름산･물혼합
액(60:40:4:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에
말린다.여기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반
점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.
2)작약이약을가지고작약약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로패오니플로린표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물혼합액(20:3:- 12 -2)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에
4-메톡시벤즈알데히드･황산시액을고르게뿌린다음105℃에서가열할때검
액에서얻은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및
Rf값이같다.
3)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
4)생강이약을가지고생강약2g에해당하는양을달아물10mL를넣고
5분간흔들어섞은다음디에틸에테르25mL을넣어30분간초음파추출한다
음여과한다.여액중디에틸에테르층을취하여감압농축하고디에틸에테르2
mL에녹여검액으로한다.따로6-징게롤표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(1:1)을전개용
매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에4-디메틸아
미노벤즈알데히드시액을고르게뿌린다음105℃에서가열할때검액에서얻
은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이
같다.
5)감초이약을가지고감초약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로글리시리진산표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물･포름산혼합액(15
:2:1:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.
여기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1
개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.- 13 -(제2법)1)계지,작약및감초정량법에따라시험할때검액은표준액과
같은머무름시간에서피크를나타낸다.
2)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
3)생강(제1법)에따라시험한다.
(제3법)1)계지,작약,생강및감초이약약1g을달아50%메탄올
10mL를넣고30분간초음파추출한다음여과하여검액으로한다.따로신남
산표준품5mg을달아메탄올을넣어10mL로하여표준액으로한다.검액및
표준액10uL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라시험할
때표준액과같은머무름시간에서피크를나타내고,그림과같이신남산표준품
표준액과비교하여상대머무름시간을나타낸다.
조작조건
검출기:자외부흡광광도계(측정파장250nm,205nm)
칼럼:안지름약4～6㎜,길이15～25㎝인스테인레스강판에5～10
μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:이동상A및이동상B를가지고다음과같이단계적또는농도기울
기적으로제어한다.
이동상A-아세토니트릴
이동상B-0.01%인산액
시간(분)이동상A(vol%)이동상B(vol%)
0 10 90
15 25 75
25 40 60
35 70 30
40 100 0
유량:1.0mL/분- 14 -시스템적합성
시스템의성능:검액을가지고위의조건으로조작할때각각의피크가완전하
게분리되도록농도구배조건을조정한다.
시스템의재현성:표준액10μL씩을가지고위의조건으로시험을6회반복
할때신남산피크면적에대한상대표준편차는2.0%이하이다.또한,신남산의
머무름시간에대하여주요성분의상대머무름시간은다음의표와같이확인되
어야한다.
성분 상대머무름시간
①패오니플로린 0.50
② 신남산 1.00
③글리시리진산 1.20
④ 6-징게롤 1.31
(검출파장:250nm)
(검출파장:205nm)
①패오니플로린,②신남산,③글리시리진산,④6-징게롤- 15 -2)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
별표4의약품각조제2부중당귀건중탕엑스과립의확인시험을다음
과같이개정한다.
확인시험이약을가지고당귀건중탕연․건조엑스의확인시험에따라시험한
다.
별표4의약품각조제2부중당귀건중탕연・건조엑스의확인시험을
다음과같이개정한다.
확인시험(제1법)또는(제2법)또는(제3법)을실시한다.
(제1법)1)당귀이약을가지고당귀약1g에해당하는양을달아물5
mL를넣고5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추
출한다음여과하여검액으로한다.따로데쿠르신표준품1mg을달아메탄올
2mL에녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라
시험한다.검액및표준액5uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨
가)을써서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(1:1)을
전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에자외
선(주파장365nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1개의반점은
표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.
2)계지이약을가지고계지약1g에해당하는양을달아물10mL를넣고
5분간흔들어섞은다음디에틸에테르25mL을넣어30분간초음파추출한다
음여과한다.여액중디에틸에테르층을취하여감압농축하고디에틸에테르2- 16 -mL에녹여검액으로한다.따로신남산표준품1mg을달아메탄올2mL에녹
여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다.
검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을써
서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸･포름산･물혼합액(60:40
:4:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여
기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1개
의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.
3)생강이약을가지고생강약2g에해당하는양을달아물10mL를넣고
5분간흔들어섞은다음디에틸에테르25mL을넣어30분간초음파추출한다
음여과한다.여액중디에틸에테르층을취하여감압농축하고디에틸에테르2
mL에녹여검액으로한다.따로6-징게롤표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(1:1)을전개용
매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에4-디메틸아
미노벤즈알데히드시액을고르게뿌린다음105℃에서가열할때검액에서얻
은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이
같다.
4)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
5)작약이약을가지고작약약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로패오니플로린표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물혼합액(20:3:- 17 -2)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에
4-메톡시벤즈알데히드･황산시액을고르게뿌린다음105℃에서가열할때검
액에서얻은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및
Rf값이같다.
6)감초이약을가지고감초약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로글리시리진산표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물･포름산혼합액(15
:2:1:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.
여기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1
개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.
(제2법)1)계지,작약및감초정량법에따라시험할때검액은표준액과
같은머무름시간에서피크가나타난다.
2)당귀,생강(제1법)에따라시험한다.
3)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
(제3법)1)당귀,계지,생강,작약및감초이약약1g을달아50%
메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여과하여검액으로한다.따
로글리시리진산표준품5mg을달아메탄올을넣어10mL로하여표준액으로
한다.검액및표준액10uL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에
따라시험할때표준액과같은머무름시간에서피크를나타내고,그림과같이
글리시리진산표준품표준액과비교하여상대머무름시간을나타낸다.
조작조건- 18 -시간(분)이동상A(vol%)이동상B(vol%)
0 10 90
15 25 75
25 40 60
35 70 30
40 100 0
45 100 0
성분 상대머무름시간
①패오니플로린 0.42
② 신남산 0.84
③글리시리진산 1.00
④ 6-징게롤 1.09
⑤ 데쿠르신 1.23검출기:자외부흡광광도계(측정파장250nm,205nm)
칼럼:안지름약4～6㎜,길이15～25㎝인스테인레스강판에5～10
μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:이동상A및이동상B를가지고다음과같이단계적또는농도기울
기적으로제어한다.
이동상A-아세토니트릴
이동상B-0.01%인산액
유량:1.0mL/분
시스템적합성
시스템의성능:검액을가지고위의조건으로조작할때각각의피크가완전
하게분리되도록농도구배조건을조정한다.
시스템의재현성:표준액10μL씩을가지고위의조건으로시험을6회반복
할때글리시리진산피크면적에대한상대표준편차는2.0%이하이다.또한,
글리시리진산의머무름시간에대하여주요성분의상대머무름시간은다음의
표와같이확인되어야한다.- 19 -(검출파장:250nm)
(검출파장:205nm)
①패오니플로린,②신남산,③글리시리진산,④6-징게롤,⑤데쿠르신
2)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
별표4의약품각조제2부중대두단백가수분해물의확인시험중“중
아미노산확인시험법”을“「대한민국약전외의약품기준」[별표6]
일반시험법의4.아미노산시험법중1.확인시험”으로하고,정량법1)
대두단백가수분해중아미노산의“아미노산정량법”을“「대한민국약전
외의약품기준」[별표6]일반시험법의4.아미노산시험법중2.정
량법”으로,정량법2)대두단백가수분해물중총질소의“질소정량법”
을“이하「대한민국약전」[별표5]일반시험법의55.질소정량법”으
로한다.- 20 -별표4의약품각조제2부중마늘유의영문명“GalicOil”을“Garlic
Oil”로하고,“검화가”를“비누화가”로하며,과산화물가를다음과같
이개정한다.
과산화물가이약5g을정밀하게달아마개가달린250mL삼각플라스크에
넣고아세트산․클로로포름혼합액(3:2)30mL를넣어녹인다.이액에요오드
화칼륨용액(쓸때만든다)0.5mL를넣고정확하게1분간흔들어섞은다음
물30mL를넣는다.이액을가지고0.01mol/L티오황산나트륨액으로적정한
다.다만적정의종말점은액이노란색으로변할때로한다.따로공시험을하
여보정하고(이때공시험액에사용된0.01mol/L티오황산나트륨액의양은0.1
mL를넘지않도록한다),다음식에따라과산화물가를계산할때그값은6
이하이다.
과산화물가(mEq/kg)=[10×(VI-VO)]/W
VI:검액의적정에소비된0.01mol/L티오황산나트륨액의소비량(mL)
VO:공시험액의적정에소비된0.01mol/L티오황산나트륨액의소비량(mL)
W:이약의채취량(g)
별표4의약품각조제2부중세인트존스워트80%메탄올엑스․서양승
마추출액정의영문명“St.John'sWort80%MethanolExtract․
CimicifugaRhizomaExtractSolutionTablets”을“St.John'sWort
80%MethanolExtract․BlackCohoshExtractSolutionTablets”로- 21 -하고,제법중“서양승마추출액0.0364mg"을”서양승마추출액0.0364
mL”로한다.
별표4의약품각조제2부중서양승마추출액의영문명“Cimicifuga
RhizomaExtractSolution”을“BlackCohoshExtractSolution”으로
하고,별명을삭제하며,제법중“서양승마추출액0.0364mg"을”서양
승마추출액0.0364mL”로한다.
별표4의약품각조제2부중양파추출액의확인시험2)양파추출액중
플라보노이드의확인에서“디페닐보닐옥시에틸아민시액”을“디페닐붕
산2-아미노에틸에스테르시액”으로한다.
별표4의약품각조제2부중오소판물질의영문명“Osopan
Substance”를“OssopanSubstance”로하고,정량법3)콜라겐중“0.1
mol/L황산용액”을“0.01mol/L황산용액”으로,정량법5)미량원소
중“10～6,10～5,10～4mol/L용액”을“10-6,10-5,10-4mol/L
용액”으로하며,“불소농도는10～5mol/L이상”을“불소농도는10-5
mol/L이상”으로한다.
별표4의약품각조제2부중오소판물질정의영문명“Osopan
SubstanceTablets”을“OssopanSubstanceTablets”로하고,정량법- 22 -3)콜라겐중“0.1mol/L황산용액”을“0.01mol/L황산용액”으로한
다.
별표4의약품각조제2부중은행엽엑스의함량규정에서“빌로발라이
드”를“빌로발리드”로한다.
별표4의약품각조제2부중평위산연・건조엑스의확인시험을다음
과같이개정한다.
확인시험(제1법)또는(제2법)또는(제3법)을실시한다.
(제1법)1)창출이약을가지고창출로서약1g에해당하는양을정밀하
게달아물10mL를넣고5분간흔들어섞은다음메탄올100mL를넣고환
류냉각기를달고1시간가열한다음여과한다.여액을감압농축하여5mL로
하여검액으로한다.따로｢창출｣가루약1g을달아메탄올100mL을넣고
환류냉각기를달고1시간가열한다음여과한다.여액을감압농축하여10mL
로하여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험
한다.검액및표준액20μL씩을실리카겔GF254로만든박층판에점적하여클
로로포름・메탄올(10:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을
바람에말린다.여기에4-메톡시벤즈알데히드․황산시액을고르게뿌릴때검액
과표준액은같은Rf값에서같은색상의반점을나타낸다.
2)후박이약을가지고후박약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로호노키올표준품1mg을달아메탄올2mL에녹여- 23 -표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다.검
액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을써서
만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(2:1)을전개용매로
하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에자외선(주파장
254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1개의반점은표준액에서
얻은반점과색상및Rf값이같다.
3)진피이약을가지고진피약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로헤스페리딘표준품1mg을달아메탄올2mL에녹
여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한다.
검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을써
서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물･아세트산혼합액(13
:3:3:2)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.
여기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1
개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다
4)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
5)감초이약을가지고감초약1g에해당하는양을달아물5mL를넣고
5분간흔들어섞은다음메탄올10mL를넣고30분간초음파추출한다음여
과하여검액으로한다.따로글리시리진산표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에아세트산에틸･메탄올･물･포름산혼합액(15
:2:1:1)을전개용매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.
여기에자외선(주파장254nm)을쪼일때검액에서얻은여러개의반점중1
개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이같다.- 24 -6)건강이약을가지고건강약1g에해당하는양을달아물10mL를넣고
5분간흔들어섞은다음디에틸에테르25mL을넣어30분간초음파추출한다
음여과한다.여액중디에틸에테르층을취하여감압농축하고디에틸에테르2
mL에녹여검액으로한다.따로6-징게롤표준품1mg을달아메탄올2mL에
녹여표준액으로한다.이들액을가지고박층크로마토그래프법에따라시험한
다.검액및표준액10uL씩을박층크로마토그래프용실리카겔(형광제첨가)을
써서만든박층판에점적한다.다음에헥산･아세트산에틸혼합액(1:1)을전개용
매로하여약10cm전개한다음박층판을바람에말린다.여기에4-디메틸아
미노벤즈알데히드시액을고르게뿌린다음105℃에서가열할때검액에서얻
은여러개의반점중1개의반점은표준액에서얻은반점과색상및Rf값이
같다.
(제2법)1)진피,감초정량법에따라시험할때검액은표준액과같은머
무름시간에서피크가나타난다.
2)창출,후박,건강(제1법)에따라시험한다.
3)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
(제3법)1)후박,진피,감초및건강이약약1g을달아50%메탄올
10mL를넣고30분간초음파추출한다음여과하여검액으로한다.따로헤스
페리딘표준품5mg을달아메탄올을넣어10mL로하여표준액으로한다.검
액및표준액10uL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에따라
시험할때표준액과같은머무름시간에서피크를나타내고,그림과같이헤스페
리딘표준액과비교하여상대머무름시간을나타낸다.
조작조건
검출기:자외부흡광광도계(측정파장210nm,250nm)
칼럼:안지름약4～6㎜,길이15～25㎝인스테인레스강판에5～10- 25 -시간(분)이동상A(vol%)이동상B(vol%)
0 20 90
15 25 75
28 45 55
36 65 35
45 100 0μm의액체크로마토그래프용옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:이동상A및이동상B를가지고다음과같이단계적또는농도기울
기적으로제어한다.
이동상A-아세토니트릴
이동상B-0.03%인산액
유량:1.0mL/분
시스템적합성
  시스템의성능:검액을가지고위의조건으로조작할때각각의피크가완전하
게분리되도록농도구배조건을조정한다.
시스템의재현성:표준액10μL씩을가지고위의조건으로시험을6회반복
할때헤스페리딘피크면적에대한상대표준편차는2.0%이하이다.또한,헤스
페리딘의머무름시간에대하여주요성분의상대머무름시간은다음의표와같
이확인되어야한다.
성분 상대머무름시간
① 헤스페리딘 1.00
②글리시리진산 2.16
③ 6-징게롤 2.47
④ 호노키올 2.79
(검출파장:210nm)- 26 -
(검출파장:250nm)
①헤스페리딘,②글리시리진산,③6-징게롤,④호노키올
2)창출(제1법)에따라시험한다.
3)대추이약을가지고생약시험법중대추확인시험법에따라시험한다.
별표4의약품각조제2부중황백연조엑스(3.3→1)의정량법에서“인
산이수소소듐용액”을“인산이수소나트륨용액”로한다.
부칙
제1조(시행일)이고시는고시후3개월이경과한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행후최초로제조업자가제조하
거나수입자가수입한의약품부터적용한다.- 27 -제3조(경과조치)이고시시행당시이미허가를받거나신고가된품
목이개정규정에적합하지아니한경우에는이고시시행일로부터
3개월이내에위개정규정에적합하도록하여야한다.