PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY -NOM -003-SAG/GAN -2016, Propóleos, producción y 
especificaciones para su procesamiento.  
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. - Secretaría de Agricultura, 
Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación.  
JUAN JOSÉ LINARES MARTÍNEZ, Director General de Normalización Agroalimentaria de la Secretaría de 
Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación con fundamento en los Artículos 35 fracción IV 
y XXII de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal; 4o. de la Ley Federal de Procedimiento 
Administrativo; 38 fracciones II y IX, 40 ú ltimo párrafo, 41, 43, 44, 45, 46, 47 fracción IV, 52, 62, 63, 64, 73 y 74 
de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 33 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrología y 
Normalización; 1, 2 inciso B fracción XVII, 17 fracciones I, XII y XXIII, 28, 29 fracción I del Reglamento Interior 
de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación.  
CONSIDERANDO  
Que es responsabilidad del Gobierno Federal impulsar el desarrollo agropecuario, sustentado en un sector 
agroalimenta rio productivo, competitivo, rentable, sustentable y justo, que garantice la seguridad alimentaria del 
país. 
Que es atribución de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural Pesca y Alimentación 
(SAGARPA), establecer programas y acciones que tiendan a fomentar la productividad y la rentabilidad de las 
actividades económicas rurales.  
Que la producción apícola es una actividad importante en el aspecto socioeconómico y ecológico, ya que se 
dedican más de 43 mil productores con 1.9 millones de col menas que generan una producción anual que supera 
las 57 mil toneladas de miel y la obtención de diferentes productos de la colonia de abejas, permite incrementar 
los recursos económicos del productor, lo que beneficia en forma directa o indirecta a los in tegrantes de la 
cadena apícola, así como el incremento en la producción agrícola, debido al efecto   de la polinización.  
Que los propóleos son un producto apícola que brindan alternativas económicas importantes al apicultor 
debido a las propiedades biológic as y microbiológicas que proporcionan grandes beneficios en salud animal, 
inocuidad agroalimentaria y fomentan la creación de nuevos espacios en el desarrollo del mercado nacional e 
internacional al implementar los propóleos como materia prima.  
Que en Méxi co existe un alto potencial de producción de propóleos y actualmente es limitada y de 
composición variable, debido a que no se cuenta con instrumentos que posibiliten estandarizar los sistemas de 
producción, recolección y procesamiento.  
Que es necesario cl asificar física, química y microbiológicamente los propóleos, debido a que sus 
características más importantes dependerán de aspectos productivos vinculados a la región, tipo de vegetación 
y temporada en que se colectan y que actualmente no se cuenta con m étodos de prueba reconocidos 
oficialmente.  
Que ante la creciente demanda de propóleos, se posibilita la adulteración o distribución de propóleos de 
dudosa composición, representando un riesgo para los consumidores y desprestigio para los productores 
apícolas, con la consecuente pérdida de dinero pa ra el productor.  
Que el fortalecimiento de los procedimientos para la producción, almacenamiento, procesamiento y 
comercialización de los propóleos permitirá a los apicultores obtener un producto altamente competitivo en el 
mercado nacional e internacional . 
Que con fecha 5 de agosto de 2016, el Subcomité Especializado en Ganadería aprobó recomendar al Comité 
Consultivo Nacional de Normalización Agroalimentaria de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo 
Rural, Pesca y Alimentación publicar el pre sente proyecto para fines de consulta pública en el Diario Oficial de 
la Federación.  
Que el presente Proyecto de Norma Oficial Mexicana se publica a efecto de que los interesados, dentro de 
los 60 días naturales siguientes a la fecha de publicación del mis mo, presenten sus comentarios ante el 
Subcomité Especializado en Ganadería, sito en Av. Municipio Libre 377, Col. Santa Cruz Atoyac, Del. Benito 
Juárez, Ciudad de México, C.P. 03310 y al correo electrónico rvazquez.dgg@sagarpa.gob.mx.  
PREFACIO  
Unidad Admin istrativa responsable de la elaboración de esta Norma:  Coordinación General de Ganadería.  
En la elaboración de esta Norma Oficial Mexicana participaron los siguientes organismos e instituciones:  
-Asociación Nacional de Médicos Veterinarios Especialistas en  Abejas A.C.  
-Comité Nacional Sistema Producto Apícola  
-Consejo Técnico Consultivo Nacional de Sanidad Animal.  
-Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán de la Universidad Nacional Autónoma de México.  
-Facultad de Estudios Superiores Iztacala de la Universidad Nacional Autónoma de México.  
-Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autónoma de México.  
-Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria.  
-Unive rsidad Autónoma de Campeche.  
Que en razón de lo anterior y en ejercicio de las atribuciones conferidas en el Artículo 29 fracción I del 
Reglamento Interior de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación, he 
tenido a bien  expedir el presente:  
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY -NOM -003-SAG/GAN -2016, PROPÓLEOS, 
PRODUCCIÓN Y ESPECIFICACIONES PARA SU PROCESAMIENTO.  
ÍNDICE.  
0.        Introducción  
1.        Objetivo y campo de aplicación.  
2.        Referencias.  
3.        Definiciones.  
4.        Consideraciones generales  
5.        Especificaciones físicas, químicas y microbiológicas  
6.        Métodos de prueba.  
7.        Evaluación de la conformidad.  
8.        Sanciones  
9.        Concordancia con normas y lineamientos internacionales  
10.        Bibliografía.  
11.        Disposiciones transitorias  
0. Introducción  
0.1. El avance en el conocimiento y usos de los propóleos, principalmente los de tipo medicinal, han 
generado un incremento en su consumo a nivel nacional e internacional y por consiguiente una mayor demanda 
por la sociedad.  
0.2.        Es importante que en Méx ico se fomente la producción de propóleos mediante sistemas de 
producción que permitan una recolección y procesamiento de manera estandarizada para garantizar que su 
composición química no se altere en perjuicio de sus propiedades.  
0.3.        La regulació n que garantice las características físicas, químicas y microbiológicas de los propóleos, 
beneficiará económicamente al sector apícola ya que fomentará su competitividad en el mercado nacional   e 
internacional.  
1. Objetivo y campo de aplicación.  
1.1. Esta Norma es de observancia obligatoria en todo el territorio nacional y tiene por objeto establecer las 
especificaciones de producción, características físicas, químicas y microbiológicas, que deben cumplir los 
propóleos y sus extractos para su procesami ento y comercialización en el país.  1.2. Esta Norma es aplicable a las unidades económicas pecuarias dedicadas a la producción, importación, 
acondicionamiento y almacenamiento con fines de distribución y comercialización de propóleos y sus extractos 
en el territorio nacional.  
1.3. La aplicación de las disposiciones contenidas en esta Norma compete a la Secretaría de Agricultura, 
Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación (SAGARPA), a través de la Coordinación General de 
Ganadería así como a las Deleg aciones de la SAGARPA en el ámbito de sus respectivas atribuciones y 
circunscripciones territoriales.  
2. Referencias.  
Para la correcta aplicación y complementación de esta Norma deben consultarse las siguientes:  
2.1. Norma Oficial Mexicana NOM -008-SCOFI -1993, Sistema General de Unidades de Medida, publicada 
en el Diario Oficial de la Federación el 14 de octubre de 1993.  
2.2. Norma Oficial Mexicana NOM -030-SCFI -1993, Información comercial -Declaración de cantidad en la 
etiqueta -Especificaciones, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 29 de octubre de 1993.  
2.3. Norma Oficial Mexicana NOM -051-SCFI -1994, Especificaciones generales de etiquetado para alimentos 
y bebidas no alcohólicas pre envasados, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 2 4 de enero de 1996.  
3. Definiciones.  
Para efectos de esta Norma, se entiende por:  
3.1. Acondicionamiento:  Todas las operaciones necesarias para envasar, empacar y etiquetar el producto, 
hasta llegar a la presentación final para su conservación, almacenamiento y distribución.  
3.2. Compuestos fenólicos:  Son compuestos aromáticos, que junto a los flavonoides, le confieren a los 
propóleos sus usos y aplicaciones biológicas; los principales compuestos fenólicos de los propóleos son: ácido 
cafeico, ácido ferúlico, entre otros.  
3.3. Constatación:  Procedimiento mediante el cual la Secretaría verifica que el producto cu mple con las 
especificaciones de composición establecidas en la presente norma  
3.4. Flavonoides:  Compuestos orgánicos derivados hidroxilados de la 2 -fenilbenzopiran -4-ona, y sistemas 
reducidos en C2 -C3 y/o C4 provenientes de exudados vegetales con múltiple s aplicaciones.  
3.5. Impurezas:  Elementos ajenos a los propóleos, que han sido incorporados durante el proceso de 
recolección y manipulación de éste.  
3.6. Materia prima:  Ingrediente de cualquier origen utilizado en la elaboración de productos terminados.  
3.7. Métodos promotores de cortinas de propóleos:  Son todos aquellos que crean espacios entre las 
cámaras de cría, alzas, tapas internas de la colmena y/o en las paredes de las mismas, dichos espacios pueden 
ser de dos centímetros o menos y sirven para pro mover la acumulación de propóleos en forma de cortina para 
bloquear la entrada de aire o intrusos a la colmena. Entre estos métodos se encuentran   los brasileños (CPI, 
pirassununga, bastidores, cuadros móviles, entre otros) y el Campechano de   origen mexic ano. 
3.8. Mallas y Rejillas plásticas:  Son dispositivos plásticos que presentan orificios de diferentes tamaños 
Mallas y Rejillas plásticas: son dispositivos plásticos que presentan orificios de diferentes tamaños que pueden 
ir desde los tejidos como las m allas mosquiteros que presentan hilos de un grosor de 0.5 mm y orificios de 
aproximadamente 1.0 por 1.0 mm de luz y las matrizadas (que se forma por medio del prensado en un molde 
caliente ), que son de una sola pieza y pueden presentar orificios desde 1.0  por 1.0 mm de luz y un grosor de 
1.0 mm; hasta las de 2.0 por 2.0 mm de luz y un grosor de 2.0 mm, y las tipo rejilla con orificios de 2.0 mm por 
5.0 cm de largo y un grosor de 2.0 mm, estas mallas y rejillas presentan una forma trapezoidal isósceles.  
3.9. Propóleos en greña o en bruto:  Son los propóleos obtenidos directamente de la colmena, sin ningún 
tipo de tratamiento.  
3.10. Propóleo o propóleos:  Nombre genérico que se da a las sustancias resinosas recolectadas y 
procesadas por las abejas de la vege tación circundante al apiario. De aspecto resinoso, su color puede variar 
dependiendo de su origen desde el rojo, amarillo -rojizo, amarillo -obscuro, verde castaño, pardo o negro, con 
sabor amargo y ligeramente picante.  
3.11. Secretaría:  Secretaría de Agric ultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación (SAGARPA).  
4. Consideraciones generales.  
4.1. Producción de propóleos.  La producción de los propóleos se debe realizar por medio del uso de rejillas, mallas plásticas o métodos 
promotores de cortina s de propóleos en las colmenas específicas para su cosecha.  
4.2. Recolección de propóleos.  
La recolección debe realizarse con materiales libres de residuos de algunas sustancias que puedan 
contaminarlo. Durante la cosecha, no debe exponerse a los rayos del  sol, evitar su almacenamiento cerca de 
fuentes de calor y no debe mezclarse con la cera que se encuentra en tapas o sobre los bastidores. Los 
propóleos en bruto contenido en las trampas se debe introducir a un congelador entre -10°C y -20°C por lo 
menos u na hora para que la resina se torne rígida y quebradiza para que facilite su obtención. En todos los 
casos se debe evitar la manipulación directa y la formación de conglomerados.  
5. Especificaciones físicas, químicas y microbiológicas.  
5.1. Especificaciones físicas.  
Características  Parámetros  
Color  Rojo, amarillo -rojizo, amarillo -obscuro, verde castaño, pardo o negro, variando 
conforme a su origen botánico.  
Aroma  Resinoso o balsámico, dependiendo de su origen botánico.  
Sabor  Variable, de suave, balsámico, a fuerte y picante, dependiendo de su origen botánico.  
Consistencia  A temperatura ambiente maleable o rígido, dependiendo de su origen botánico.  
 
5.2. Especificaciones químicas.  
Determinación cualitativa  Parámetros  
Flavonoides  Presencia  
Fenoles totales  Presencia  
Índice de oxidación  Máximo 22 segundos  
 
Determinación cuantitativa  Parámetros  
Compuestos fenólicos  Expresados como equivalentes de ácido gálico: mínimo 5% (m/m)  
Flavonoides  Expresados como equivalentes de quercetina: mínimo 0.5% (m/m)  
Actividad antioxidante (CA 50) Mínimo 100 µg/mL  
 
5.3. Especificaciones microbiológicas.  
Inhibición de crecimiento:  Staphylococcus aureus  (ATCCCDBB B -1005),  Escherichia coli  (ATCC CDBB -B-
1010) y  Candida albicans  (ATCC 14053).  
6. Métodos de prueba.  
6.1. Acondicionamiento de la muestra.  
Los propóleos en bruto o en greña debe acondicionarse eliminando las impurezas visibles tales como virutas 
de madera, restos de abejas, restos d e pinturas, restos vegetales, entre otros. Posteriormente debe ser 
refrigerada para favorecer su maceración, debe conservarse en refrigeración y protegida de la luz hasta el 
momento de realizar el análisis.  6.2. Para las especificaciones físicas.  
6.2.1. De terminación del color:  Colocar la muestra sobre una superficie blanca y comparar con una escala 
de colores; debe realizarse en un ambiente con buena iluminación. Se puede utilizar un microscopio 
estereoscópico para visualizar definidamente los colores pres entes utilizando el Catálogo Internacional de 
Colores.  
6.2.2. Determinación del aroma:  Retirar una porción de la muestra a fin de que el envase no interfiera en 
la percepción olfativa.  
6.2.3. Determinación del sabor:  Colocar una porción de la muestra en la  parte media de la lengua y analizar 
mediante la comparación de sus atributos de sabor con los que mejor lo distingan.  
6.2.4.  Consistencia a temperatura ambiente:  Retirar una porción de la muestra y colocarla en un vidrio de 
reloj, hasta que alcance la tem peratura ambiente. Determinar la consistencia tocándola con los dedos y 
comparar con el atributo que mejor la describa. Suave y maleable a temperaturas entre 20 y 40 º C y rígido a 
temperaturas inferiores a 20 º C.  
6.3. Para las Especificaciones químicas.  
6.3.1 Preparación del Extracto Etanólico de Propóleos (EEP):  Pesar una cantidad no menor a 50 gramos 
de los propóleos en bruto, previamente acondicionada, añadir etanol al 70% en una proporción 3:1 y dejar 
macerar por un período de 72 horas con agitación c onstante. Pasado este tiempo filtrar y el filtrado se concentra 
(utilizando preferentemente un rotovapor), pasar el extracto a un envase ámbar, empleando la mínima cantidad 
de etanol al 70%, y dejar a sequedad utilizando una bomba de vacío, debe conservars e en refrigeración y 
protegida de la luz hasta el momento de realizar el análisis.  
6.3.2. Prueba cualitativa de flavonoides.  
Para el aislamiento de flavonoides se recurre a la extracción con solventes de polaridad creciente o 
directamente con hidróxido de sodio (NaOH). El color amarillo intenso característico de los flavoniodes, flavonas 
y flavonoles.  
6.3.2.1. Preparación de reactivos.  
Acetato de plomo Pb (C 2H3O2)2 al 10%. Pesar 5 g y disolver en 15 mL de agua destilada, posteriormente 
aforar a 100 mL. Caducidad de 6 meses.  
Hidróxido de sodio (NaOH) al 20%. Pesar 10 g y disolver en 25 mL de agua destilada. Agitar después de 
enfriar y aforar a 100 mL Caducidad de 6 me ses. 
6.3.2.2. Procedimiento.  
a) Pesar 200 mg de los propóleos en bruto o EEP y añadir 5 mL de alcohol etílico y mezclar perfectamente.  
b) Añadir 1 mL de la solución preparada a dos tubos de ensaye marcados como a) y b).  
c) Tubo a): añadir una gota de NaOH al 20% y observar un cambio de coloración que va del amarillo a 
naranja de acuerdo a la cantidad de flavonoides presentes.  
d) Tubo b): añadir 500 µL (0.5 mL) de Pb (C 2H3O2)2 al 10%, y observar un cambio de coloración que va  de 
un amarillo y la presencia de un precipitado, lo que indica la presencia flavonoides.  
6.3.3. Prueba cualitativa de fenoles totales.  
La mayor parte de los fenoles dan disoluciones coloreadas (azul, verde, violeta, entre otros). Si el color es 
amarillo d ébil (mismo que el reactivo), la reacción se considera negativa. Algunos fenoles no dan coloración, 
como la hidroquinona, ya que se oxidan con el reactivo a quinona. Los ácidos, a excepción de los fenólicos, no 
dan la reacción aunque algunos dan disolucion es o precipitados de color amarillento.  
6.3.3.1. Preparación de reactivos.  
Cloruro férrico hexahidratado (FeCl 3·6H 2O) al 1%: Pesar 10 g y disolver en 100 mL de agua destilada 
caliente, posteriormente aforar a 100 mL. Caducidad de 6 meses.  
Etanol al 70%: Medir 355 mL de alcohol etílico y aforar a 500 mL con agua destilada.  
6.3.3.2 Procedimiento.  a) Colocar una pequeña muestra de los propóleos en bruto o EEP (aproximadamente del tamaño de una 
lenteja) en un vaso de precipitados de 10 mL y añadir 1 mL de etanol al 70%.  
b) Mezclar y agregar una gota de la solución de FeCl 3·6H 2O al 1% y observar el desar rollo de color.  
c) En caso de la presencia de fenoles, se observará un precipitado y una coloración de azul a negro.  
6.3.4. Índice de oxidación.  
El índice de oxidación es influenciado por el contenido de compuestos fenólicos. Esto indica que a mayor 
concen tración de fenoles totales, el tiempo de la reacción es más rápido (poder antioxidante de los propóleos, 
sobre la solución de permanganato de potasio).  
6.3.4.1. Preparación de reactivos.  
Permanganato de potasio (KMnO 4) 0.1 N. Pesar 3.2 g de KMnO 4 en un vid rio de reloj y disolver en 250 mL 
de agua destilada y agitar vigorosamente para su disolución. Filtrar la solución y añadir agua destilada hasta 
que todo el reactivo se disuelva y repetir la operación cuantas veces sea necesario hasta la completa disolució n 
del reactivo. Finalmente aforar a 1L, guardar en un recipiente de vidrio y protegido de la luz. En caso de presentar 
precipitado, es necesario filtrar antes de su uso. Ácido sulfúrico (H2SO4) al 20%. Colocar en un matraz aforado 
de 100 mL una pequeña can tidad de agua destilada y agregar lentamente 20.83 mL del ácido y aforar con agua 
destilada.  Precaución : la reacción libera calor.  
6.3.4.2. Procedimiento.  
a) Pesar 20 mg de los propóleos en bruto o EEP y añadir 5 mL de alcohol etílico.  
b) Añadir 100 mL de agua destilada, agitar hasta homogeneizar la mezcla y filtrar a gravedad.  
c) Tomar 10 mL de esta solución y aforar a 100 mL con agua destilada.  
d) Tomar 2 mL de la solución diluida y añadir 1 mL de H 2SO 4 al 20% y agitar un minuto.  
e) Añadir una gota de KMnO 4 0.1 N, sin tocar las paredes.  
f) Cronometrar y registrar el tiempo en que tarda en desaparecer el color rosa.  
6.3.5. Compuestos fenólicos: método de Folin -Ciocalteu.  
La concentración de fenoles totales (CFT) se mide por espectrofot ometría de absorción UV -VIS con base a 
una reacción colorimétrica de óxido -reducción, para ello el agente oxidante que se utiliza es el reactivo de Folin -
Ciocalteu (FC), 3H 2O-P2O5I3WO 3-5MoO 3-10H 2O (mezcla de ácido fosfotúngstico/fosfomolíbdico hexavalente) . 
6.3.5.1. Preparación de reactivos.  
Solución stock de ácido gálico (0.2 mg/mL): Disolver 20 mg de ácido gálico y aforar a 100 mL con agua 
destilada. Mantener en refrigeración y protegido de la luz.  
Carbonato de sodio (Na 2CO 3) al 20%: Disolver 20 g de carbonato de sodio anhidro en 70 mL de agua 
caliente. Dejar enfriar y aforar a 100 mL con agua destilada.  
6.3.5.2. Procedimiento.  
Trazado de la curva de calibración.  
a) A partir de la solución stock de ácido gálico de 0.2 mg/mL, tomar alícuotas correspondientes para obtener 
las concentraciones seriadas (0.00625, 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1 y 0.2 mg/mL).  
b) A cada una se le agrega el volumen correspondiente de agua destilada para obtener las concentraciones 
mencionadas a un volumen fi nal de 1 mL.  
6.3.5.3. Preparación de las muestras.  
Preparar una solución estándar de concentración 0.2 mg/mL de cada muestra de propóleos. Tomar   una 
alícuota de 250  μL de ésta y agregar 750  μL de agua destilada para obtener una concentración   de 0.05 mg/m L. 
Al tener los sistemas preparados se procede de la siguiente manera:  
a) Tomar 1 mL de cada concentración y añadir 6 mL de agua destilada.  
b) Adicionar 500 µL de reactivo de Folin -Ciocalteu y esperar 5 minutos.  c) Adicionar 1.5 mL de la solución de Na 2CO 3 y aforar con agua destilada hasta un volumen de 10 mL,   se 
observará un cambio de color a azul.  
d) Esperar 2 horas a temperatura ambiente para que se lleve a cabo la reacción y determinar la absorbancia 
a 760 nm en un espectrofotómetro de absorción UV -VIS. 
e) Realizar la prueba por triplicado y considerar el promedio.  
f) Graficar la concentración contra la absorbancia para obtener la curva patrón de ácido gálico.  
g) Los resultados se expresan como equivalentes de ácido gálico /g de extracto o en porcentaje  (%). 
6.3.6. Cuantificación de flavonoides . 
El principio básico del método colorimétrico de cloruro aluminio es que éste forma complejos estables de 
ácidos con el grupo cetona en C -4 o bien el grupo hidroxilo en C -3 o C -5 de flavonas y flavonoles. Además, 
también forma complejos lábiles ácidos con los grupos dihidroxilo en el anillo A o B de los flavonoides.  
6.3.6.1. Preparación de reactivos.  
Solución stock de quercetina (1 mg/mL). Pesar 10 mg de quercetina dihidratada y aforar a 10 mL de metanol 
grado reac tivo. Conservar protegido de la luz y en refrigeración.  
Tricloruro de aluminio, AlCl 3 (2%): Disolver 2 g de cloruro de aluminio en agua destilada y aforar a 100 mL 
con agua destilada con mucho cuidado ya que el producto es muy corrosivo e higroscópico.  
6.3.6.2. Preparación de la muestra.  
Pesar 500 mg del EPP y disolverlo en 10 mL de metanol grado reactivo.  
6.3.6.3. Procedimiento  
6.3.6.3.1 Preparación de la curva de calibración.  
A partir de la solución estándar de quercetina de1mg/mL, tomar alícuotas corr espondientes para obtener 
concentraciones seriadas de 1 a 90 µg/mL (ppm).  
6.3.6.3.2. Preparación del blanco de muestra.  
Tomar 3 mL de la solución del EEP (500 mg EEP/10 mL de metanol) y agregar 3 mL de metanol HPLC.  
Al tener todos los sistemas anteriores p reparados, se procede de la siguiente manera:  
a) Adicionar a cada tubo 3 mL de la solución de AlCl 3, esperar 10 minutos a que se lleve a cabo la reacción 
y determinar la absorbancia a 415 nm por espectrofotometría de absorción UV -VIS. 
b) Graficar la concentración contra la absorbancia para obtener la curva patrón de quercetina.  
c) El contenido total de flavonoides se expresa como mg de equivalentes de quercetina (QE)/g de extracto 
o en porcentaje (%).  
6.3.7. Actividad antioxidante: Método del 2,2 -difenil -1-picrilhidracilo (DPPH •). 
La reducción del DPPH• se monitorea por la disminución en la absorbancia a una longitud de onda 
característica. En su forma de radical libre, el DPPH• éste absorbe a 515 nm y cuando sufre reducción por un 
antioxid ante, esta absorción desaparece. En consecuencia, la desaparición del DPPH• proporciona un índice 
para estimar la capacidad del EEP de prueba para atrapar radicales.  
6.3.7.1. Preparación de reactivos.  
Solución stock de quercetina (1 mg/mL). Pesar 10 mg de quercetina y aforar a 10 mL con metanol grado 
HPLC. Conservar protegido de la luz y en refrigeración.  
Solución de DPPH• (100  μM). Pesar 1.9716 mg, disolver y aforar a 50 mL con metanol grado HPLC. 
Conservar protegido de la luz y en refrigeración.  
6.3.7.2. Preparación de la muestra.  
Pesar 10 mg del EEP y disolver en metanol grado reactivo, aforar a 10 mL.  
Las concentraciones a preparar y a evaluar son en un rango de 1 a 40 µg/mL.  
Al tener los sistemas anteriores preparados se procede de la siguiente manera:  
a) Colocar en tubos de ensaye, 250 µL de la muestra y 750 µL de solución de DPPH•.  b) Proteger de la luz y dejar reposar 30 minutos.  
c) Determinar la absorbancia a 540 nm en un espectrofotómetro de absorción UV -VIS. 
d) Como control negativo se utiliza meta nol y control positivo se utiliza quercetina a las mismas condiciones 
que el compuesto problema.  
e) Los resultados se reportan obteniendo el porcentaje de reducción y se calcula con la siguiente fórmula:  
% de reducción= Absorbancia del DPPH• - Absorbancia de la mezcla (DPPH• + compuesto problema)*100  
6.4. Para las especificaciones microbiológicas.  
6.4.1. Actividad antimicrobiana: difusión en agar.  
Esta es una prueba cualitativa que únicamente reflejará si la muestra a evaluar inhibe el crecimiento 
bacteriano. Se evalúa la actividad antifúngica del extracto de los propóleos, el cual se coloca en sensidiscos y 
difundirá sobre la placa de agar; si hay inhibición del crecimiento del microorganismo a evaluar se observará un 
halo alrededor del sensidisco.  
6.4.1.1. Preparación de reactivos.  
Estándar No. 0.5 de MacFarland: añadir 0.5 mL (500 µL) de sulfato de bario (BaSO 4) y aforar a 100 mL de 
H2SO 4 0.36 N.  
6.4.1.2.  Microorganismos de referencia.  
a) Bacterias:  
Staphylococcus aureus:  ATCC CDBB B -1005.  
Escherichia coli:  ATCC CDBB -B-1010.  
b) Levadura:  
Candida albicans  (ATCC 14053).  
6.4.1.3. Medio de cultivo.  
Caldo Müeller -Hinton.  
Para bacterias: Agar Müeller -Hinton (MH).  
Para levadura: Agar Müeller -Hinton (MH) suplementado con 2% de glucosa y 0.5 µg/mL de azul de metileno.  
Se prepara de acuerdo a especificaciones del proveedor.  
6.4.1.4. Preparación de la muestra.  
Pesar 160 mg del  extracto etanólico  de los propóleos (EEP) y disolver en 100 µL de alcohol etílico   al 70%.  
6.4.1.5. Preparación de la suspensión de microorganismos.  
a) Tomar una asada de las colonias sembradas del microorganismo a evaluar y sumergirla en 5 mL de caldo 
Muller -Hinton.  
b) Enjuagar bien en el líquido para descargar todo el material y retirar el asa.  
c) El tubo de cultivo se incuba a 37°C/ 24 horas para bacte rias y para levaduras por 35°C/48 horas.  
d) Ajustar la densidad del inóculo de acuerdo al tubo 0.5 del nefelómetro de MacFarland (aproximadamente 
1-5 x106 UFC/mL)  
e) La comparación de la turbidez se realiza a 640 nm en el espectrofotómetro.  
6.4.1.6. Prepar ación de sensidiscos.  
Se emplearán discos de papel Whatman N° 5, de 5 mm de diámetro (previamente esterilizados). Los discos 
se impregnarán con 10 µL de la solución de EEP (160 mg/100 µL) para que tengan una concentración de 16 
mg de EEP y se dejarán secar  a temperatura ambiente por 24 horas.  
6.4.1.7. Procedimiento.  a) A partir del inóculo con una concentración de 1 x 106 UFC/ mL, realizar con un hisopo estéril un sembrado 
masivo sobre las placas de agar MH para las bacterias y de SDA para las levaduras.  
b) Con ayuda de una aguja estéril, colocar los sensidiscos impregnados de la muestra de los propóleos 
procurando dejarlo en el centro de la caja.  
c) Permitir que el sensidisco se adhiera a la placa de agar, teniendo la precaución de evitar desplazamientos 
del disco. En caso de que se evalúen más de una muestra de EEP en la misma caja, se recomienda Dejar al 
menos 1.5 cm de distancia entre cada sensidisco y el borde de la caja.  
d) Incubar a 37°C / 24 horas para las bacterias y 35°C / 48 horas para la levadura.  
Como control negativo se empleará discos impregnados con 10 µL del disolvente utilizado.  
e) Como control positivo se emplearán discos de antibióticos y antifúngicos conocido de marca comercial.  
6.4.1.8. Resultados.  
Después del tiempo de incubación, con una regla calibrada de milímetros o de preferencia con un Vernier, 
medir el diámetro de los halos de inhibición y se repetirá la medición a las 48 horas para la levadura.  
6.4.1.9. Interpretación.  
La presencia de un halo de inhibición indica actividad antimicrobiana y se reportará el diámetro de los halos 
de inhibición (en mm). La ausencia de halo de inhibición indicará que no existe actividad antimicrobiana.  
7. Evaluación de la conformidad  
La evalu ación de la conformidad de los productos objeto de la presente Norma Oficial Mexicana, se llevará 
a cabo en laboratorios oficiales, laboratorios aprobados por la Secretaría y en laboratorios acreditados y 
aprobados en los términos de lo dispuesto por la Le y Federal sobre Metrología y Normalización.  
8. Sanciones  
El incumplimiento a las disposiciones contenidas en la presente Norma, será sancionado conforme a lo 
establecido en la Ley Federal sobre Metrología y Normalización.  
9. Concordancia con normas y linea mientos internacionales  
Esta Norma Oficial Mexicana no es equivalente con ninguna norma internacional al momento de su 
elaboración.  
10. Bibliografía.  
10.1.  Catálogo Internacional de Colores http://catalog.weidmueller.com.  
10.2.  Diario Oficial da República Federativa do Brasil. (2001). Ministerio de Agricultura e do Abastecimiento. 
Instruçao normativa Nº 3, de 19 de janeiro da 2001. Seçao1, p. 18 -23. Recuperado el 23 de junio de 2011 de 
www.extranet.agricultura.com.br  
10.3.  Norma Argentina, Instituto Argentino de Normalización (2008). Normas IRAM -INTA 15935 -1, Parte 1: 
Propóleos en bruto.  
10.4.  Norma Argentina, Instituto Argentino de Normalización (2008). Normas IRAM -INTA 15935 -2, Parte 2. 
Extractos de propóleos.  
10.5.  Norma Ramal Cubana (1994). Propóleos Materia Prima. Especificaciones. Apicultura NRAG -1135 -94. 
Ministerio de Agricultura. La Habana, Cuba.  
10.6.  Norma Ramal Cubana (1994). Extracto fluido y extracto blando, NRAG 1129 Ministerio de Agricultura. 
La Habana, Cuba.  
10.7.  Norma Rusa (1977). Propóleos. Métodos analíticos para el control de su calidad.  
10.8.  Norma Ramal Rusa RST -RSFSR -317-77. Diario Oficial de San Salvador. (2003).  
10.9.  Norma Salvadoreña Obligatoria NSO 65.19.02.03: Calidad de propóleo crudo. Recuperada el 15  de 
enero de 2013 de http://faolex.fao.org  
10.10.  González Guerra, A. (1997). Propóleos: un camino hacia la salud. La Habana, Cuba: Pablo   de la 
Torriente.  10.11.  Rodríguez Pérez, B. (2015). Perfil químico de propóleos mexicanos para su aplicación en medicina 
veterinaria. Tesis de maestría. Universidad Nacional Autónoma de México. México.  
11. Disposiciones transitorias  
Artículo único.  El presente Proyecto de Norma Oficial Mexicana estará a disposición de los interesados, 
para que presenten sus comentarios, por un periodo de 60 días naturales siguientes al de su publicación en el 
Diario Oficial de la Federación.  
Ciudad de México a 19 del  mes de agosto de 2016. - El Director General de Normalización Agroalimentaria 
de la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación,  Juan José Linares 
Martínez .- Rúbrica.