식품의약품안전처 공고 제2015-295 호
- 2 -식품의약품안전처 공고 제2015-295 호
「건강기능식품의 기준 및 규격 」(식품의약품안전처고시 제2014-204 호,
2014.12.30.) 을일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그
취지,개정 이유 및주요 내용을 「행정절차법 」제46조에 따라 다음과 같이
공고합니다 .
 2015 년9월11일
 식품의약품안전처장
「건강기능식품의 기준 및규격 」일부 개정고시 (안)행정예고
1.개정 이유
 건강기능식품의 기준 및규격
 의기능성 원료를 확대하고 ,추가되는 
기능성 원료의 시험법을 신설하여 건강기능식품의 건전한 유통과 산업활성
화에 기여하고자 함.
2.주요 내용
가.기 능 성 원 료 별 기 준 및규 격 의 추 가 등 재[안제3,2-61, 2-62, 2-63, 2-64,
2-65, 2-66, 2-67, 2-68, 2-69, 2-70, 2-71, 2-72, 2-73, 2-74, 2-75, 2-76, 2-77,
2-78, 2-79, 2-80, 2-81, 2-82, 2-83, 2-84, 2-85, 2-86]
1)정어리펩타이드 등26개기능성 원료의 기준 및규격 신설- 3 -2)정어리펩타이드 ,참당귀뿌리추출물 ,초록입홍합추출오일 ,히비스커스등복
합추출물 ,황금추출물등복합물 ,프랑스해안송껍질추출물 ,라피노스 ,피브로
인효소가수분해물 ,올리브잎주정추출물 ,분말한천 ,크레아틴 ,콩발효추출물 ,
폴리코사놀 -사탕수수왁스알코올 ,솔잎증류추출액 ,메론추출물 ,유단백가수
분해물 ,프랑스해안송껍질추출물등복합물 ,표고버섯균사체분말 ,알부민 ,L-
글루타민 ,상황버섯 추출물 ,토마토추출물 ,곤약감자추출물 ,헛개나무과병추출
물,당귀혼합추출물 ,원지추출분말의 기준 및규격 신설
3)건강기능식품 기능성 원료의 확대로 다양한 제품 생산을 유도하여
산업활성화 및소비자 확대
나.건강기능식품 시험법 신설 [안제4,2-5, 2-5-6, 2-5-7, 2-5-8, 2-5-9, 3-78,
3-79, 3-80, 3-81, 3-82, 3-83, 3-84, 3-85, 3-86, 3-87, 3-88, 3-89, 3-90, 3-91,
3-92, 3-93, 3-94, 3-95, 3-96, 3-97, 3-98, 3-99, 3-101, 3-102, 3-103, 3-104,
3-105, 3-106]
1)기 능 성 원 료 신 설 에 따 른 시 험 법 필 요
2)디시안디아미드 ,디하이드로트라이진 ,아세톤 ,헥산 ,바릴티로신 ,정어
리펩타이드 중펩타이드 ,데커신 ,(+)-allo-HCA Lactone, L-카르니틴 ,
바이칼린 ,카테킨 ,프랑스해안송껍질추출물 HPLC 확인 시험법 ,프로시
아니딘 ,올리유로핀 ,크레아틴 모노하이드레이트 ,알파글루코시다제 (α
-Glucosidase) 활성 억제능 ,Tris, 지방족 알코올 ,테르피놀렌 ,3-카렌 ,
리모넨 ,SOD 활성 ,αS1-casein(f91-100), 알파글루칸 ,0.19- 알부민 ,L-
- 4 -글루타민 ,라이코펜 ,글루코실 세라마이드 ,퀘세틴 ,노다케닌 ,피오니플
로린 ,클로로겐산 ,TMCA 등33개시험법을 신설함 
3.의견 제출
「건강기능식품의 기준 및규격 」일부개정고시 (안)에대하여 의견이
있는 단체 또는 개인은 2015년10월11일까지 다음 사항을 기재한 의견서를
식품의약품안전처장 (우편번 호:363-700, 주소:충청북 도청주시흥덕구 오송
읍오송생명2로187 오송보건의료행정타운식품의약품안전처 ,참조:건강 기
능식품정책과,(전화 )043-719-2456, (팩스)043-719-2450) 에게 제출하여
주시기 바랍니다 .
가.예고사항에 대한 항목별의견 (찬․반여부와그이유 )
나.성명(단체 의경우단체명과그대표자의 성명),주소 및전화번호
다.기타 참고사항- 5 -식품의약품안전처 고시 제2015-295 호
 건강기능식품에관한법률
 제14조및제15조에 따른
 건강기능 식품의
기준 및규격
 (식품의약품안전처 고시 제2014-204 호,2014.12.30) 을다음과
같이 개정 고시합니다 .
2015 년9월11일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준 및규격 일부개정고시 (안)
건강기능식품의 기준 및규격 일부를 다음과 같이 개정한다 .
제3,2-61 정어리펩타이드를 다음과 같이 신설한다 .
2-61 정어리펩타이드
1)제조기준
(1)원재료:정어리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 가열하여pH조정후효소 분해하여
원심분리하고 활성탄처리하여 분획,여과 ,살균,분무 건조하여 제조
하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:바릴티로신 50.0±25(㎎/100g),펩타
이드 650.0 이상 (㎎/g)이상 함유하고 있어야함
- 6 -2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)바릴티로신 ,펩타이드
 (가)원료성 제품:표시량이상 (펩타이드에 한함 )
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):5.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:혈압 이높은사람의혈압 을조절하는데 도움을줄수
있음
(2)일일섭취량:바릴티로신으로서 250～400㎍
(3)섭취시주의사항
 바릴티로신섭취량은6㎎/일을 초과하지않아야함
4)시험법
(1)바릴티로신:제4.3-78 바릴티로신- 7 -(2)펩타이드:제4.3-79 정어리펩타이드 중펩타이드
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-62 참당귀뿌리추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-62 참당귀뿌리추출물
1)제조기준
(1)원재료:참당귀 (AngelicagigasNakai)의뿌리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 95%의주정으로추출하고 여과 ,
농축 ,건조하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 ):데커신 (Decursin) 을126㎎/g이상 함유
하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)데커신 (Decursin)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):0.5이하
- 8 - (다)총수은 (㎎/kg):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:노화로저하된인지능력개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:데커신으로서 800㎎
(3)섭취시주의사항
(가)소화불량 ,속쓰림 등이 나타날수있음
(나)혈액응고방지제 또는혈당강하제를 복용하는 사람은의사의 상담후
섭취
4)시험법
(1)데커신:제4.3-80 데커신
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-63 초록입홍합추출오일을 다음과 같이 신설한다 .
2-63 초록입홍합추출오일
1)제조기준- 9 -(1)원재료:초록입홍합 (Perna canaliculus )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 고압처리후슬러 리처리하여동결
건조하고 분쇄하고 초임계 추출하여 D-α-Tocopherol을혼합하여
제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 ):EPA, DHA, DPA 및α-리놀렌산의 합으로
240∼440㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)EPA, DHA, DPA, α-리놀렌산의 합
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/kg):1.0이하
 (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:관절건강에 도움을줄수있음
- 10 -(2)일일섭취량:초록입홍합추출오일 로서 200㎎
(3)섭취시주의사항
혈전용해제를 복용하는 사람은의사와상담후섭취
4)시험법
(1)EPA, DHA, DPA, α-리놀렌산:제4.3-32 지방산
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-64 히비스커스등복합추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-64 히비스커스등복합추출물
1)제조기준
(1)원재료
 (가)키토산
 (나)키토올리고당 (평균분자량15,000±5,000)
 (다)히비스커스꽃물추출물 (히비스커스꽃물추출물 80%,말토덱스
트린 20%)
 (라)L-카르니틴 (L-carnitine)
(2)제조방법
 (가)키토산:키토산 가온,교반 ,용해 ,농축 ,분말- 11 - (나)키토올리고당:용해 ,효소분해 ,한외여과 ,염제거,농축 분말화
 (다)히비스커스꽃물추출물:원료건조 ,열수추출 ,농축 ,여과 ,
말토덱스트린첨가,건조
 (라)L-카르니틴:DL-carnitine amide에서 전기투석 ,분멸결 정,
황산첨가,가수분해 공정 등을거쳐 제조
 (마)키토산 25.9%,키토올리고당 13.0%,히비스커스꽃물추출물 
41.6%,L-카르니틴 19.5%의비율로혼합 하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:키토산 27%이상 ,(+)-allo-hydroxy
citric acid lactone 7.5%이상 ,L-카르니틴 17.5%이상 함유하고 있어야
함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)키토산 ,(+)-allo-hydroxycitric acid lactone, L-carnitine
(가)원료성 제품:표시량이상
(나)최종 제품:표시량의80%이상
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/kg):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
- 12 -(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:체지방 감소에 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:히비스커스등복합추출물로서 2,079㎎
(3)섭취시주의사항
 체지방 감소는반드시 식사조절과운동 이병행되어야효과적임
4)시험법
(1)키토산:제4.3-29키토산 (총글루코사민으로)
(2)HCA lactone:제4.3-81 HCA(Hydroxycitric acid) lactone
(3)L-카르니틴:제4.3-82 L-카르니틴
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-65 황금추출물등복합물을 다음과 같이 신설한다 .
2-65 황금추출물등복합물
1)제조기준
(1)원재료
(가)황금 (Scutellariabaicalensis ,뿌리 )- 13 -(나)아선약(Uncariagambir,잎,가지 )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료의 분말을각각 제조 하여 황금 물추출
분말 80%,아선약물추출 분말 20%의비율로혼합 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:바이칼린으로153∼207㎎/g,
카테킨으로15∼45㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)바이칼린 ,카테킨
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:관절건강에 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:황금추출물등복합물로서 1,100㎎
- 14 -(3)섭취시주의사항
관절관련 질환의치료목적으 로사용될수없음
4)시험법
(1)바이칼린 :제4.3-83 바이칼린
(2)카테킨:제4.3-84 카테킨
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-66 프랑스해안송껍질추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-66 프랑스해안송껍질추출물
1)제조기준
(1)원재료:프랑스해안송 (Pinuspinaster )껍질
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 주정을 이용하여연속 추출한후
농축 ,분획,초막여과분리 ,정제하여 건조 하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:프로시아니딘 600～800㎎/g이상
함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함- 15 -(2)카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,페룰 산이 확인되어야함
(3)프로시아니딘
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(4)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:활성산소 제거와 혈소판응집 억제 에도움을줄수있음
(2)일일섭취량
 (가)인체에 유해한 활성산소를 제거하는데 도움을줄수있음:
프랑스해안송껍질추출물로서 50～300㎎
 (나)혈액의흐름을방해할수있는혈소판응집 을억제하는데 도움을줄수
있음:프랑스해안송껍질추출물 로서 100～300㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)임산부와12세이하의 어린이는섭취전의사와의상담이필요
 (나)수술전후에는섭취에 주의할것
- 16 -4)시험법
(1)카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,페롤 산:제4.3-85 프랑스해안송껍질
추출물 HPLC 시험법
(2)프로시아니딘:제4.3-86 프로시아니딘
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-67 라피노스를 다음과 같이 신설한다 .
2-67 라피노스
1)제조기준
(1)원재료:사탕무 (Betavulgarisvar.saccharifera )
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 여과하여 이온크로마토그래피후
농축 ,조결정화하여 분리 ,용해 ,여과 ,결정화 ,분리 ,건조 ,분쇄하여
제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:라피노스 980.0 ㎎/g이상 함유
하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함- 17 -(2)라피노스
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.3이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.3이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용
 (가)장내 유익균의 증식과 유해균의 억제에 도움을줄수있음
 (나)배변 활동을원활히 하는데 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:라피노스로서 3～5g
(3)섭취시주의사항
섭취량이상섭취시 설사를 유발할수있음
4)시험법
(1)라피노스:[별표 4]참조
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
- 18 -(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-68 피브로인효소가수분해물을 다음과 같이 신설한다 .
2-68 피브로인효소가수분해물
1)제조기준
(1)원재료:누에고치
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 정련(세리신 단백질 제거)하여 중성염
용해후탈염․여과한뒤효소가수분하여살균,농축 ,동결 건조 하여
제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:티로신 7.0㎎/g이상 ,알라닌 8.0
㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)티로신 ,알라닌
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하- 19 - (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:기억력개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:피브로인효소가수분해물로서 200～400㎎
(3)섭취시주의사항
(가)성장기 어린이의 기억력증진효과가 아님
(나)임산부 및수유여성은섭취에 주의
4)시험법
(1)티로신 ,알라닌:제4.3-22 아미노산<유리아미노산>
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-69 올리브잎주정추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-69 올리브잎주정추출물
1)제조기준
(1)원재료:올리브 (Olea europaea L.)잎
- 20 -(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 분쇄하여 80%주정추출 ,여과 ,농축
한뒤아라비아검을첨가하여살균(121℃,30초),분무건조 ,이산화규소를 
첨가하여 혼합 하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:올리유로핀 (Oleuropein) 140～210
㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)올리유로핀
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):5.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):2.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:건강한혈압 의유지 에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:올리브잎주정추출물로서 1,000㎎- 21 - (올리유로핀으로서 90～180㎎)
(3)섭취시주의사항
혈압 약을 복용하는 사람은의사와상담후섭취
4)시험법
(1)올리유로핀:제4.3-87 올리유로핀
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-70 분말한천을 다음과 같이 신설한다 .
2-70 분말한천
1)제조기준
(1)원재료:우뭇가사리 (Gelidiumamansil Lamourous )
(2)제조방법:상기 (1)의원재 료를 1～2%가성소다 ,70℃로알칼리처리
하고 ,수세 ,산처리 (황산으로pH6.5～7.5가되게 중화 )하여 자숙후
추출,여과,응고,탈수,세절,건조,분쇄하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:총식이섬유80.0%이상 함유하고
있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
- 22 -(2)총식이섬유
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)열탕불용해잔사물 (%):4.0이하
(4)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.3이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.3이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:배변 활동에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:2～5g
(3)섭취시주의사항
 (가)어린이나임산부 ,수유부는섭취를 주의해야함
 (나)충분한 물과 함께섭취해야함
 (다)과다섭취시미약한 설사 ,구토,배변량 증가 ,배변빈 도증가 ,
복부팽만 ,두통등의 부작용을 일으킬 수있음
4)시험법- 23 -(1)식이섬유:제4.3-26 식이섬유4.2총식이섬유함량측정
(2)열탕불용해잔사물:[별표 4]참조
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-71 크레아틴을 다음과 같이 신설한다 .
2-71 크레아틴
1)제조기준
(1)원재료:Sodiumsarcosinate 수용액 ,cyanamide수용액
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 80～85℃90분동안반응 하여 80℃에서 
2시간가열교반 한후냉각 하여결정화 ,감압여과하여 세척후분말
회수하여 40℃,20mbar에서 진공 건조하여 제조 하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:Creatinemonohydrate 990㎎/g
이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)크레아틴
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
- 24 -(3)디시안디아미드 (㎎/㎏):50.0 이하
(4)디하이드로트리아진 (㎎/㎏):불검 출
(5)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(6)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:근력 운동 시에운동 수행능력향상에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:크레아틴으로서 3g
(3)섭취시주의사항
(가)신장에영향을미치는약물을 복용하거나신장 이상의위험이 있 는 사람은
의사와상담후에섭취하여야함
 (나)어린이 ,임산부 ,수유부는섭취를삼가
 (다)카페인은 크레아틴의 기능을 감소시킬수있음
 (라)크레아틴의섭취는탈수를동반할 수있으므로충분한 물과 함께
섭취하여야함
 (마)과다섭취하지 말것- 25 -4)시험법
(1)크레아틴:제4.3-88 크레아틴 모노하이드레이트
(2)디시안디아미드:제4.2-5-6 디시안디아미드
(3)디하이드로트라이진 :제4.2-5-7 디하이드로트라이진
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-72 콩발효추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-72 콩발효추출물
1)제조기준
(1)원재료:콩(Glycinemax.)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 세척․침지하여찐뒤자연냉각 후
맥아를첨가및발효 (Asp.oryzae이용 )하여염장,발효 (30℃,약1년),
세척
정제 ,건조 ,열수추출 (125℃),정제
 여과 ,감압농축 ,살균(135℃)한
뒤분말화 (20mesh)하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:
α-글루코시다제 (Glucosidase) 활성 억제능 (IC50)0.018～0.4㎎/㎖함유하
고있어야하며,Tris(2-Amino-2-(hydroxym ethyl)-1,3-propanediol) 가
확인되어야함.
- 26 -2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)α-글루코시다제 ,Tris(2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)총아플라톡신(㎍/㎏):15이하 (B1은10이하 )
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:식후혈당상승억제 에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:콩발효추출물로서 900㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)대두에알레르기를 나타내는 사람은섭취시주의
 (나)임산부 ,수유부 및어린이는섭취시주의
4)시험법- 27 -(1)α-글루코시다제 활성 억제능:제4.3-89 알파글루코시다제 활성
억제능
(2)Tris:제4.3-90 Tris
(3)아플라톡신:[별표 4]참조
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-73 폴리코사놀 -사탕수수왁스알코올을 다음과 같이 신설한다 .
2-73 폴리코사놀 -사탕수수왁스알코올
1)제조기준
(1)원재료:사탕수수 (SaccharumofficinarumL.)의잎과줄기
(2)제조방법:상기 (1)의원재료 에서 추출한 왁스에 헥산 ,에탄올,아세
톤의 용매를이용하여 지방산 1차알코올을 추출 정제하여 분말화 하여
제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:폴리코사놀 990㎎/g이상 함유하고 
있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)폴리코사놀
- 28 - (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)총지방족 알코올 (㎎/g):900.0 이상
 (가)1-tetracosanol:0.1-20.0
 (나)1-hexacosanol:30.0-100.0
 (다)1-heptacosanol:1.0-30.0
 (라)1-octacosanol:600.0-700.0
 (마)1-nonacosanol:1.0-20.0
 (바)1-triacontanol:100.0-150.0
 (사)1-dotriacontanol :50.0-100.0
 (아)1-tetratriacontanol :1.0-50.0
※단,1-tetracosanol 은원료제품에 한하여적용
최종제품은 기능성분 중총지방족 알코올만표 시 하며이 에 대 한 규 격만적용받음
(4)잔류용매
 (가)아세톤 (g/㎏):불검 출
 (나)헥산 (g/㎏):0.005 이하
(5)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하- 29 -(6)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:높은혈중콜레스테롤수치의개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:폴리코사놀 로서 5～20㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)일일섭취량보 다과다하게섭취하지않도록 주의
 (나)콜레스테롤함성에영향 을줄수있으므 로임산부 ,수유부 ,영
유아 ,
어린이 ,청소년은섭취하지않는것이좋음
 (다)콜레스테롤저하를위한의약품과 함께섭취하지않도록 하여야함
 (라)혈액응고를저해할수있으므 로주의하여 사용하여야함
4)시험법
(1)지방족 알코올:제4.3-91 지방족 알코올
(2)아세톤:제4.2.2-5-8 아세톤
(3)헥산:제4.2.2-5-9 헥산
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-74 솔잎증류농축 액을 다음과 같이 신설한다 .
2-74 솔잎증류농축 액
- 30 -1)제조기준
(1)원재료:적송(Pinus densiflora )솔잎
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 수증기로 증류 ,농축 ,분리 하여
수증기로 재증류한후숙성하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:3-카렌 (3-carene) 125～165㎎/g,
리모넨 (limonene) 50～100㎎/g,테르피놀렌 (terpinolene) 180～260㎎/g,
이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)3-카렌 ,리모넨 ,테르피놀렌
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.1이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건- 31 -(1)기능성 내용:건강한혈당의 유지 에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:솔잎증류추출액으로서 1,350 ㎎
(3)섭취시주의사항
기관지천식,해소 기침이나 기도에심한염증이 있는사람은섭취에 주의
4)시험법
(1)3-카렌:제4.3-92 3-카렌
(2)리모넨:제4.3-93 리모넨
(3)테르피놀렌:제4.3-94 테르피놀렌
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-75 메론추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-75 메론추출물
1)제조기준
(1)원재료:칸달로프 메론 (Cucumismelo)
(2)제조방법
 (가)상기 (1)의원재료 를씨앗 ,씨방,껍질을 제거한후원심분리하여
용액을 제조하여 여과 ,농축 ,동결 ,분쇄하여 분말화함
 (나)밀글루텐을20～50℃알코올 추출하여 원심분리한후60～95%
- 32 -알코올로 40～50℃에서 15～24시간동 안분말화함
 (다)말토덱스트린액 (증류수 )과 글루텐추출물분말액 (증류수/주정 )의
혼합액 (15±5℃,40분)과메론분말액 (증류수 )를혼합하여 165±10℃
에서 분 무
 건조 하 여 분 말 화 한후500㎛로두번거른후제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:SOD 활성 1.0IU/㎎이상 함유
하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)SOD 활성
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):1.0이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:산화스트레스로부터인체를보호하는데 도움을줄수있음- 33 -※밀단백으로코팅된형태에한함
(2)일일섭취량:SOD 활성으로서 500～1,000IU
(3)섭취시주의사항
     밀단백질에 알레르기를 나타내는 사람은섭취에 주의
4)시험법
(1)SOD 활성:제4.3-95 SOD 활성
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-76 유단백가수분해물을 다음과 같이 신설한다 .
2-76 유단백가수분해물
1)제조기준
(1)원재료:탈지우유
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 원심분리하여 카제인 (Casein) 을분리
하고 알칼리화하여 트립신가수분해 ,산성화하여열처리한후건조하여
선별하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:알파에스 1카제인 (αS1-casein) (f91-100)
을18～27㎎/g이상 함유하고 있어야함
- 34 -2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)알파에스 1카제인 (f91-100)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:스트레스로 인한긴장완화에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:유단백가수분해물로서 150㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)임산 부,수 유 여 성 및어린이는섭취에주의
 (나)우유 및유제품에 대하여 알레르기를 나타내는 사람은섭취에 주의
4)시험법
(1)알파에스 1카제인 (f91-100):제4.3-96 알파에스 1카제인 (f91-100)
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조- 35 -(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-77 프랑스해안송껍질추출물등복합물을 다음과 같이 신설한다 .
2-77 프랑스해안송껍질추출물등복합물
1)제조기준
(1)원재료
(가)프랑스해안송 (P inuspinaster )껍질 추출물 2.6557%
 (나)비타민 C(L-ascorbicacid) 53.0966%
 (다)비타민E(D-α-토코페롤 )8.8501%
 (라)달맞 이꽃종 자유 35.3976%
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 칭량 하여 혼합 한후여과 및탈기
하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:프로시아니딘 14.9～22.3㎎,비타민 C
424.8～796.5㎎,비타민E47.4～88.9㎎,감마리놀렌산 25.5～38.2㎎
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)프로시아니딘 (㎎/g)
 (가)원료성 제품:14.9～22.3
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)비타민 C(㎎/g)
- 36 - (가)원료성 제품:424.8～796.5
 (나)최종 제품:표시량의80〜120%
(4)비타민E(㎎α-TE/g)
 (가)원료성 제품:47.4～88.9
 (나)최종 제품:표시량의80〜120%
(5)감마리놀렌산 (㎎/g)
 (가)원료성 제품:25.5～38.2
 (나)최종 제품:표시량의80〜120%
(6)중금속
 (가)납(㎎/㎏):3.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):3.0이하
(7)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:햇볕또는 자외선에의한 피부손상으로부터피부건강을
유지하는데 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:프랑스해안송껍질추출물 등복합물로서 1,130 ㎎
(3)섭취시주의사항- 37 -(가)임산부 ,수유부 및어린이는섭취를 피해야함
 (나)‘달맞 이꽃종 자유’에과민증이 있는 사람을섭취를삼가야함
 (다)과량섭취시위장장애등의 부작용이 있을 수있음
 (라)기타 질병을보유하고 있는 사람및수술전후환자는섭취를
삼가야하며섭취시의사와상담해야함
4)시험법
(1)프로시아니딘:제4.3-86 프로시아니딘
(2)비타민 C:제4.3-14 비타민 C
(3)비타민E:제4.3-4 비타민 C
(4)감마리놀렌산:제4.3-32 지방산
(5)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(6)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-78 표고버섯균사체분말을 다음과 같이 신설한다 .
2-78 표고버섯균사체분말
1)제조기준
(1)원재료:표고버섯 (Lentinus edodes )균사체
(2)제조방법
 (가)상기 (1)의 원재료를 액체배양하여 α-아밀라아제 ,펙티나아제 ,
- 38 -프로테아제로 효소처리하여 원심분리한후상층액을농축
멸균하여 
부형제첨가,동결 건조 ,분쇄하여 제조하여야함
 (나)상기 (1)의원재료를 액체종균제조하고 121℃,65～90분살균하여
제조한배지에접종
배양하여열수추출 ,농축,동결건조하여 분쇄하여 
제조하여야함
 (다)균 을접종
배양 하 여 분쇄한것과배양후고압추 출 하 여탈지 대두분
10%(w/v)을혼 합 하 여 50℃열풍건 조후분쇄한것을2:1로혼 합 하 여 제 조
하 여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량
 (가)면역 기능증진:알파글루칸 (α-glucan) 200～370㎎/g함유하고
있어야함
 (나)간기능:베타글루칸 (β-glucan) 12.8～200㎎/g함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)알파글루칸 (α-glucan),베타글루칸 (β-glucan)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)아플라톡신(B1,B2,G1,G2)(㎍/㎏):15.0 이하 (아플라톡신B1은10.0이하)
(4)중금속
 (가)납(㎎/㎏):2.0이하- 39 - (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):10.0 이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:면역 기능 증진 ,간기능에 도움을줄수있음
(2)일일섭취량
 (가)면역 기능 증진에 도움을줄수있음:표고버섯균사체분말로서 1.
8～3.6g
 (나)간기능에 도움을줄수있음:표고버섯균사체분말로서 0.35～1.
8g
(3)섭취시주의사항
임산부는섭취에 주의할것
4)시험법
(1)알파글루칸:제4.3-97 알파글루칸
(2)베타글루칸:제4.3-25베타글루칸
(3)아플라톡신:[별표 4]참조
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
- 40 -제3,2-79 알부민을 다음과 같이 신설한다 .
2-79 알부민
1)제조기준
(1)원재료:소맥(Triticumaestivum)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료에 수용성 전분유액을넣어원심분리한 
후염산으로pH3.0이하로 조정하여 3시간동 안교반 하여 원심분리함 .
알긴산나트륨을첨가한후실온에서 자연강하시킨후알부민침전물에 
염화칼슘,활성탄,물을첨가하여 필터한수용액을탈염
농축 하여 25%
이상동결 건조하여 0.7mm로파쇄
건조 하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:0.19- 알부민 250～350㎎/g이상
함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)0.19 알부민
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하- 41 - (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:급격한 식후혈당상승을억제하는데 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:알부민으로서 1.2～1.5g
(3)섭취시주의사항
소맥알레르기 체질인 사람은섭취에 주의할것
4)시험법
(1)0.19 알부민:제4.3-98 0.19 알부민
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-80 L-글루타민을 다음과 같이 신설한다 .
2-80 L-글루타민
1)제조기준
(1)원재료:Corynebacterium glutam icum
- 42 -(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 이용하여 발효 ,이온교환 (발효액에
황산첨가pH조절 ,이온교환 수지 사용 글루타민흡착 후암모니
아사용 분리/정제 ),결정,탈수,용해
 여과 ,결정,숙성하여 여과
 건
조하여 분쇄하여제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:L-글루타민을 985㎎/g이상
함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)L-글루타민
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.4이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):5.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:과도한운동 후신체저항능력향상에 도움을줄수- 43 -있음
(2)일일섭취량:과도한운동 직후 3～5g섭취
(3)섭취시주의사항
 (가)정균제 ,항경련 제,하제의 효과를경감시킬우려가 있음
 (나)신장 및간질환이있는환자는섭취를 주의해야함
 (다)임산부 ,수유부는 의사의 처방없이는섭취를삼가야함
4)시험법
(1)L-글루타민:제4.3-99 글루타민
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-81 상황버섯추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-81 상황버섯추출물
1)제조기준
(1)원재료:상황버섯 (Phellinus linteus ,3～4년생 건조물 )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 분쇄하여 110℃,96～100시간물추출
하여 여과하여 건조한후분쇄하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:베타글루칸 (β-glucan) 을87～162
㎎/g이상 함유하고 있어야함
(4) 제조 시유의사항:원재료인 상황버섯 (Phellinus linteus ,3～4년생
- 44 -건조물 )은ITS- 5.8S rDNAsequence 분석에의하여 Phellinus
linteus종으 로확인된종균을 사용하고 ,외부로부터미생물 오염을
차단할수있는 용기에영양분을갖춘 고형배 지를넣고살균한후
버섯종균을접종 하고 3～4년간재배하여 ,포자형성이 확인된흑갈
색의자실체형태 로성장한 상황버섯을채취하여야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)베타글루칸 (β-glucan)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:면역 기능 개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:상황버섯추출물로서 3.3g- 45 -4)시험법
(1)베타글루칸:제4.3-25베타글루칸
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-82 토마토추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-82 토마토추출물
1)제조기준
(1)원재료:토마토 (LycopersiconEsculentum)
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 분쇄하여 스크리닝하여 원심분리한
후토마토펄프를 초산에틸로추출하여 용매를제거한후표준화하여 
제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:(all-trans)-lycopene 을40～80㎎/g
함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)(all-trans)-lycopene
 (가)원료성 제품:표시량이상
- 46 - (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:항산화에 도움을줄수있음
(2)일일섭취량:(all-trans)-lycopene으로서 5.7～15㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)알 레 르 기 체 질 이 신 분 은 개 인 에 따 라 과 민반응을나 타낼수있 음
 (나)라 이 코 펜 이 함 유된식 품 을 과량섭취시피 부색이오 렌 지색으로변할수있 음
(다)임산 부,수 유 여 성 및어린이는섭취에주의
4)시험법
(1)(all-trans)-lycopene:제4.3-100 라이코펜
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조- 47 -제3,2-83 곤약감자추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-83 곤약감자추출물
1)제조기준
(1)원재료:곤약감자 (AmorphophalluskonjacK.Koch)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를 주정 추출하여농축 한후정제하여
여과 및농축 후베타-시클로덱스트린을 30(추출물 ):70(베타-시클로덱
스트린 )의비율로혼합하여 건조,분쇄하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:글루코실세라미드 (Glucosylceramide)
22.5～24㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)글루코실세라마이드
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):1.0이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
- 48 -(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:피부보습 에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:글루코실세라마이드 로서 1.2～1.8㎎
(3)섭취시주의사항
임산부와수유기 여성은섭취를 피할것
4)시험법
(1)글루코실세라마이드 :제4.3-101 글루코실세라마이드
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-84 헛개나무과병추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-84 헛개나무과병추출물
1)제조기준
(1)원재료:헛개나무 과병
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료를 4시간,95～100℃에서열수추출을
2회하여냉각 ,여과 ,진공농축 한후덱스트린을 10(헛개나무 추출물 ):
6(덱스트린 )의비율로혼합하여 분무건조 ,분쇄및분채하여 제조하여야함- 49 -(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:퀘세틴 (Quercetin) 을5.9～８ .9㎎
/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)퀘세틴
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:알콜성손상으로부터간을보호하는데 도움을줄수
있음
(2)일일섭취량:헛개나무과병추출물로서 2,460㎎
(3)섭취시주의사항
임산 부,수 유 여 성 및어린이는섭취에주의
- 50 -4)시험법
(1)퀘세틴:제4.3-102 퀘세틴
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-85 당귀혼합추출물을 다음과 같이 신설한다 .
2-85 당귀혼합추출물
1)제조기준
(1)원재료:당귀뿌리 ,천궁뿌리 ,백작약뿌리
(2) 제조방법:상기 (1)의각각 동량 의원재료에 정제수를첨가하여
중탕한후냉각
 여과 ,감압농축 하여 여과한것과,여과한 원료 일부에 
주정을첨가하여 정치하여 조다당체를회수한것을배합하여 제조하
여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함량:노다케닌 (nodakenin) 50～150㎎
/100g,피오니플로린 (paeoniflorin) 200～400㎎/100g,클로로겐산
(chlorogenic acid)25～60㎎/100g함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함- 51 -(2)노다케닌 ,피오니플로린 ,클로로겐산
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
(5)세균수:100/g이하
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:면역 기능 개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:당귀등혼합추출물로서 20～40g
(3)섭취시주의사항
 (가)임신부,수유중인 여성,월경불순 이나 출혈성질환이있는 여성의
경우의사와상담하여섭취할것
 (나)6세미만의소아는섭취시키지말것
 (다)천궁,백작약은섭취시 발열및알러지를 유발할수있으므 로
주의할것
- 52 -4)시험법
(1)노다케닌:제4.3-103 노다케닌
(2)피오니플로린:제4.3-104 피오니플로린
(3)클로로겐산:제4.3-105 클로로겐산
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
제3,2-86 원지추출분말을 다음과 같이 신설한다 .
2-86 원지추출분말
1)제조기준
(1)원재료:원지(Polygalatenuif oliaWilldenow)뿌리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료를선별하여 세척후수침및탈수하여
1차추출 (주정 ,물)후여과하고잔사를 2차추출하여 혼합하여 감압
농축 하여 120℃20분동안멸균하여 분무건조하여 제조하여야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량:TMCA( Trimethoxycinnamicacid) 을
0.3～0.9㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1)성상:고유의색택 과향미를 가지며이미
 이취가없어야함
(2)TMCA(Trimethoxycinnamicacid)
 (가)원료성 제품:표시량이상- 53 - (나)최종 제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:성인의 기억력개선에도움을줄수있음
(2)일일섭취량:원지추출분말로서 300㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)과 다섭취시구토,설 사,메 스꺼움등 의위장관장애가나타날수있으며 
위장장애가있는 사람은섭취에 주의 
(나)임산부,수유 여성,어린이는섭취에 주의
4)시험법
(1)TMCA(Trimethoxycinnamicacid):제4.3-103 TMCA(Trimetho
xycinnamicacid)
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
- 54 -제4.[별표 4]를다음과 같이 한다.
[별표 4]시험법적용표
시험항목적용규정 시험방법 비고
수분
식품의
기 준 및규 격
(식 품 공 전 )제9.일반시험법 1.1.1 수분
※Ⅱ.2.7.1 로얄젤 리는 1.1.1.3 칼피셔법에
따름
회분 제9.일반시험법 1.1.2회분
조지방 제9.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제9.일반시험법 1.1.5.3.1 산가
과산화물가 제9.일반시험법 1.1.5.3.5 과산화물가
환원당 제9.일반시험법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제9.일반시험법 2.4착색 료
납 제9.일반시험법 7.1중금속시험
카드뮴 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총수은 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총비소 제9.일반시험법 7.1중금속시험
세균수 제9.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제9.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제9.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제9.일반시험법 3.11살모넬라
세균발육 제9.일반시험법 3.6세균발육시험
테트라싸이클린
클 로 르 테 트 라싸이 클 린제9.일반시험법 5.3.49옥시테트라싸이클린 ,
클로르 테트라싸이클린 ,테트라싸이클
린,독시싸이클린
총아플라톡신제9.일반시험법 6.1.1 아플라톡신(B1,B2,
G1및G2)
포도 당 당량(D .E.)제5.식품별 기준 및규격 6.포도당 6)시험방
법(1)포도당당량(D.E.)
라 피 노 스제5.식품별 기준 및규격 10.올리고당류 6)시
험방법 (1)올리고당③갈락토올리고당 (전
이갈락토올리고당 )
열탕불용 해잔사 물제6.수 산 물 에 대 한 규 격2.시험방법 9)열탕불용
해잔사물
잔류용매
(초산에틸)건강기능식품
의기준 및
규격
(건강기능식
품공전 )제4.건강기능식품 시험법 2,2-5, 2-5-5
 초산에틸
잔류용매 식 품첨가물 의 
기 준 및규 격
(식 품첨가 물 공 전 )제4.품목별규격 및기준 나.천연첨 가물 80.
파프리카추출색소
잔류용매
(이 소 프 로 필 알콜)제4.품목별규격 및기준 나.천연첨가물108.
글 루 코만난- 55 -제4,2,2-5, 2-5-6 디시안디아미드 (Dicyandiamide)을다음과 같이 신설한다 .
2-5-6 디시안디아미드 (Dicyandiamide)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 디시안디아마이드를 추출하고 고속액체
크로마토그래프/자외부흡광광 도검출기를 사용하여최대흡수파장인 280
nm에서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.3.Nucleosil5SA,ET250/4(Macherey-Nagel사)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 디시안디아마이드 (Dicyandiamide)
분자식:C2H4N4,분자량:84.08, CasNo.:461-58-5
3.2일반시약
3.2.1. 인산 2수소암모늄(ammoniumdihydrogenphosphate)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
- 56 -4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 디시안디아미드 표준품을 증류수에 25～1,000 ng/㎖의농도로
용해시켜표준용액으로한다 (검량선 작성을위해3개이상의농도조제 )
4.2시험용액
4.2.1 시료 250㎎을정밀히달아증류수를 가해 용해시킨후100㎖로
정용하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 상온
이동상2.3%ammoniumdihydrogenphosphate
(pH4.0, 인산으로조절 )
검출기 파장 225 nm
유량 20㎕표1.고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕를주입하여앞의조건에 따라 시험한다 .
표준용액 중디시안디아미드 면적 에의해구한검량선 에따라
시험용액 중디시안디아미드 농도를구하고 다음 식에 따라 디시
안디아미드 함량을구한다 .- 57 -디시안디아미드 함량(㎎/kg)= C× P×V
W
 C:시험용액 중디시안디아미드 함량(ng/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
 P:표준품의순도
제4,2,2-5, 2-5-7 디하이드로트라이진 (Dihydrotriazine)을다음과 같이
신설한다 .
2-5-7 디하이드로트라이진 (Dihydrotriazine)
1.시험방법의 요약본시험법은 시료로부터추출한 디하이드로트라이진을
고속액체크로마토그래프/자외부흡광광 도검출기를 사용하여 분석하는
방법으로최대흡수파장인 280 nm에서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.3.Nucleosil5SA,ET250/4(Macherey-Nagel사)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
- 58 -3.1표준물질
3.1.1 디하이드로트리아진 (Dihydrotriazine)
3.2일반시약
3.2.1. 인산 2수소암모늄(ammonium dihydrogen phosphate)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 디하이드로트라이진 표준품을 증류수에 25～1,000 ng/㎖의농도로 
용해시켜표준용액으로한다 (검량선 작성을위해3개이상의농도조제 )
4.2시험용액
4.2.1 시료 250㎎을정밀히달아증류수를 가해 용해시킨후100㎖로
정용하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 상온
이동상2.3%ammoniumdihydrogenphosphate
(pH4.0, 인산으로조절 )
검출기 파장 225 nm
유량 20㎕표1.고속액체크로마토그래프조건 (예)- 59 -5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕를주입하여앞의조건에 따라 시험한
다.표준용액 중디하이드로트라이진 면적 에의해구한검량선 에
따라 시험용액 중디하이드로트라이진 농도를구하고 다음 식에
따라 디하이드로트라이진 함량을구한다 .
디하이드로트라이진 함량(㎎/㎏)= C× P×V
W
 C:시험용액 중디하이드로트라이진 함량(ng/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
 P:표준품의순도
제4,2,2-5, 2-5-8 아세톤을 다음과 같이 신설한다 .
2-5-8 아세톤
1.시험방법의 요약
본시험법은 건강기능식품 중휘발성물질을 추출하기위하여헤드스페이
법을거친 후가스크로마토그래프/수소염이온화검출기 (FID)를사용하여
분석한다 .
2.장비와재료
- 60 -2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,20㎖)
2.2분석장비
2.2.1 기체크로마토그래프
2.2.2 수소염이온화검출기 (FID)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 6%polycyanopropylphenylsiloxane, 94%polydimethylpolysiloxane
으로충전한컬럼(예:DB-624 (30m×0.32mm× 1.8㎛))또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 아세톤 (aceton)
 분자식:C3H6O,분자량:58.08, CasNo.:67-64-1
3.2일반시약
3.2.1 DMF(N,N-Dimethylformamide)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 100ml용량플라스크에 DMF(N,N-Dimethylformamide) 20ml를미
리채우고 여기에 0.5g의아세톤을각각 넣고DMF로정용한후- 61 -항목 조건
주입구온도 200℃
칼럼온 도 초기온도50℃(8분),승온 20℃/분,최종온 도220℃
검출기온도 240℃
캐리어 가스 질소
splitratioo 10:1
헤드스페이스①헤드스페이스평형온 도:90℃
②Loop온도:95℃
③Transfer Line온도:100℃
④주입시간및주입량:1분,1ml(가스로서 )
⑤압력 &Loop충진시간:각0.5분
⑥바이알 가스배출:On
⑦바이알평형 시간:30분
⑧GC Cycle시간:30분
⑨Shaking:On잘섞는다 .이액1ml을취해 100ml용량플라스크로옮기고 DMF
로정용한후잘섞는다 .이액4ml을취하여 20ml용량플라스크
로옮기고 DMF로정용한후잘섞는다 .희석액을 5ml을취하여
3개의헤드스페이스 바이알에각각 취하고봉인한다 .(표준용액의
농도:10ppm )
4.2시료 약0.2g을정밀하게달아DMF20ml을가하여 정용한후헤
드스페이스 바이알에 5ml씩분취하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
- 62 -5.2.1 표준용액과 시험용액을각각 헤드스페이스 분석조건에서 주입
하여앞의조건에서 시험한다 .상대머무름시간을비교한후각
피크면적으 로부터아래와 같이 정량한다 .
잔류용매량 (ppm )=(AT/AS)×(WS/W T)×(DT/DS)×역가×10,000
AT:검액의 크로마토그램에서얻은각성분잔류용매에의한 피크면적
AS:표준액의 크로마토그램에서얻은각성분잔류용매의3회평균피크
면적
WS:표준액 조제를위해취한각성분 유기용매의무게값(g)
WT:검액조제를위해취한 시료검체의 무게 (g)
DT:검액조제를위한희석배 수
DS:표준액 조제를위한희석배 수(50,000배)
역가:이용된표준 유기용매의순도(%)
10,000:ppm 단위환산계수
제4,2,2-5, 2-5-9 헥산을 다음과 같이 신설한다 .
2-5-9 헥산
1.시험방법의 요약
본시험법은 건강기능식품 중휘발성물질을 추출하기위하여헤드스페이
법을거친 후가스크로마토그래프/수소염이온화검출기 (FID)를사용하여- 63 -분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,20㎖)
2.2분석장비
2.2.1 기체크로마토그래프
2.2.2 수소염이온화검출기 (FID)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 6%polycyanopropylphenylsiloxane, 94%polydimethylpolysiloxane
으로충전한컬럼(예:DB-624 (30m×0.32mm× 1.8㎛))또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 헥산 (hexane)
 분자식:C6H14,분자량:86.18, CasNo.:110-54-3
3.2일반시약
3.2.1 DMF(N,N-Dimethylformamide)
4.시험과정
- 64 -항목 조건
주입구온도 200℃
칼럼온 도 초기온도50℃(8분),승온 20℃/분,최종온 도220℃
검출기온도 240℃
캐리어 가스 질소
splitratioo 10:1
헤드스페이스①헤드스페이스평형온 도:90℃
②Loop온도:95℃
③Transfer Line온도:100℃
④주입시간및주입량:1분,1ml(가스로서 )
⑤압력 &Loop충진시간:각0.5분
⑥바이알 가스배출:On
⑦바이알평형 시간:30분4.1표준용액의 조제
4.1.1 100㎖용량플라스크에 DMF(N,N-Dimethylformamide) 20㎖를
미리채우고 여기에 0.5g의아세톤을각각 넣고DMF로정용한
후잘섞는다 .이액1㎖을취해 100㎖용량플라스크로옮기고
DMF로정용한후잘섞는다 .이액4㎖을취하여 20㎖용량플라
스크로옮기고 DMF로정용한후잘섞는다 .희석액을 5㎖을취
하여 3개의헤드스페이스 바이알에각각 취하고봉인한다 .(표준
용액의농도:10ppm )
4.2시료 약0.2g을정밀하게달아DMF20㎖을가하여 정용한후
헤드스페이스 바이알에 5㎖씩분취하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기체크로마토그래프조건 (예)- 65 -⑧GC Cycle시간:30분
⑨Shaking:On
5.2계산
5.2.1 표준용액과 시험용액을각각 헤드스페이스 분석조건에서 주입
하여앞의조건에서 시험한다 .상대머무름시간을비교한후각
피크면적으 로부터아래와 같이 정량한다 .
잔류용매량 (ppm )=(AT/AS)×(WS/W T)×(DT/DS)×역가×10,000
AT:검액의 크로마토그램에서얻은각성분잔류용매에의한 피크면적
AS:표준액의 크로마토그램에서얻은각성분잔류용매의3회평균피크면적
WS:표준액 조제를위해취한각성분 유기용매의무게값(g)
WT:검액조제를위해취한 시료검체의 무게 (g)
DT:검액조제를위한희석배 수
DS:표준액 조제를위한희석배 수(50,000배)
역가:이용된표준 유기용매의순도(%)
10,000:ppm 단위환산계수
제4,3,3-78 바릴티로신을 다음과 같이 신설한다 .
3-78 바릴티로신
- 66 -1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 바릴티로신을 고속액체크로마토그래프/
자외부흡광광 도검출기를 사용하여 분석하는 방법으로최대흡수파장인
280 nm에서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Sep-Pak카트리지컬럼(C18)
2.1.2vaccummanifold
2.1.3 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4역상분배형 칼럼(안지름4.6mm,길이250mm)또는 이와동등
한것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 0.1%Trifluoroacetic acid를함유한 2%acetonitrile 용액을 
분당 0.55㎖씩흘려줌으로서칼럼과기기를 안정화 시킨다 .
3.표준물질 및일반시약- 67 -3.1표준물질
3.1.1 바릴티로신 (Val-Tyr)
 분자식:C14H20N2O4,분자량:280.32, CasNo.:3061-91-4
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 에탄올(Ethanol)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
3.2.4 트리플루오로아세트산 (trifluoroacetic acid)
3.2.5 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1시험조작
4.1.1검체600㎎을정밀하게달아50㎖용량플라스크에넣고물로
표선을채운 다
4.1.2 미리 준비한 Sep-Pak카트리지컬럼(C18)을vacuummanifold 에
고정시키고,펌프를연결 한다 .
4.1.3 Sep-Pak은메탄올5㎖,물5㎖의순서로펌프로흡인시켜세정
한다 .
4.1.4 4.3.1 에서만든용액 2㎖를Sep-Pak에부하하고 ,반드시 자유
낙하시킨다 .
4.1.5 다시 자유낙하로 물2㎖로세정후,3%에탄올(W/V )2㎖를
- 68 -항목 조건
주입량 200㎕
칼럼온 도 35℃
이동상A액:0.1%Trifluoroacetic acid를 함유한 2%
acetonitrile 용액
B액:0.1%Trifluoroacetic acid를 함유한 25%
acetonitrile 용액
A액으로10분간유지후,B액으로0∼31%/80분의
lineargradient
검출기 파장 280 nm
유량 0.55㎖/min넣어역시자유낙하로 용출액을 분취한다 .
4.1.6 용출액을 감압건조후A액500㎕로희석하여 HPLC 분석에
제공한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
5.2.1 바릴티로신 표준용액을 이용한검량선*으로구한다 .표준용액에서
구한검량선 에의하여 시험용액속에함유된바릴티로신 양을
소정의계산식으로구한다 .
*검량선:바릴티로신표준용액사이에서5점의피크면적의해석을한다.
5.1.2 바릴티로신 표준품 6㎎을달아100㎖용량플라스크에넣고A액
으로표선을채운 다
5.1.3 0.5, 1,2,4,5㎖을각각 취해 5개의 10㎖용량플라스크에넣고- 69 -A액으로표선을채운 다.
5.1.4위와 동일한 HPLC 조건으로각각 측정한 5개피크의면적으 로
검량선 을그린다
5.1.5Y축은바릴티로신 피크의면적으 로하고 ,X축은바릴티로신량
(단위㎍/200㎕)으로한다 .
5.2.1 바릴티로신 표준용액을 이용하여검량선 을작성하고 ,검량선 식을
이용하여 시험용액 중의 바릴티로신 의양를구한후아래식을
이용하여 바릴티로신 함량을계산한다 .
바릴티로신의 함량(㎎/100g)=X×B
C
 바릴티로신의검량선 Y=aX+b에서X=(Y-b)/a
X:시험용액의 전량(㎖)
B:희석액량(500㎕))/HPLC 주입량(200㎕)=2.5
 C:(검체량(g)/희석용량(50㎖))×Sep-pak부하량(2㎖)×1,000/100
제4,3,3-79 정어리 펩타이드 중펩타이드를 다음과 같이 신설한다 .
3-79 정어리 펩타이드 중펩타이드
1.시험방법의 요약
본시험법은 정어리 펩타이드 시료로부터조단백질량과아미노산량을
구하여 펩타이드량을산출해내는 분석법이다 .
- 70 -2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 분해촉진제
2.1.2 50㎖용량플라스크
2.1.3 원심분리관
2.1.4 0.45㎛여과지
2.1.5 Shim-packISC-07/S1504Na또는 이와동등한컬럼
2.2분석장비
2.2.1킬달 분해관
2.2.2 아미노산 분석계
3.일반시약
3.1일반시약
3.2.1 황산 (Sulfuric acid)
3.2.2탈이온수
3.2.3 수산화나트륨(Sodium chloride)
3.2.4구연산나트륨 (Sodium citrate)
3.2.5붕산(boric acid)
3.2.6 에탄올(Ethanol)
3.2.7 차아염소산나트륨(SodiumHypochloride)- 71 -3.2.8 프탈알데히드 (phthalaldehyde)
3.2.9 폴리옥시에틸렌라우릴에테르 (polyoxyethylene alkylehter)
3.2.10N-아세틸시스틴 (N-acetylcystein)
3.2.11 알카리완충 액
3.2.12구연 산삼나트륨(Trisodiumcitrate)․2H 2O
3.2.13과염소산 (Perchloric acid)
3.2.14 n-카프릴산 (n-Caprylicacid)
4.시험과정
4.1시험조작
4.1.1 조단백질량
 4.1.1.1검체1～2g을킬달 분해관에넣고분해촉진제 약3g,진한
황산 25㎖을가하여 분해용 가열장치에서 가열분해한다 .분해
종료후,탈이온수로 250㎖로정용하여검체분해액으로만든다.
 4.1.1.2검체분해액 3∼5㎖를채취하여 중화용 (中和用 )의수산화나트
륨용액을 가하여 수증기증류장치에서 증류한다 .
 4.1.1.3 증류후의액을 0.02NNaOH 에서적정하여적정치에서 전질
소량을산출한다 .
 4.1.1.4 산출한 전질소량에단백환산계수6.25를곱하여 조단백질량을
산출한다 .
4.1.2 유리아미노산량
- 72 -항목 조건
칼럼온 도 55℃
이동상A액:0.2N구연 산나트륨액(pH3.2)(7%에탄올함유 )
B액:0.6N구연 산나트륨액,0.2M붕산액 (pH10.0)
C액::0.2M수산화나트륨액
유량 0.3㎖/min4.1.2.1검체약1g을정밀하게달아50㎖용량플라스크에넣고표선을
채운 후그1㎖를원심분리관에정확하게 취한다 .
 4.1.2.2 에탄올3㎖를첨가하여교반 후3,000 rpm(1408.68×g)으로
원심분리한다 .상징액을 용량플라스크로 이동한다 .
 4.1.2.3 원심분리관에물1㎖,에탄올2㎖를더첨가하여교반 후
다시 원심분리하고 상징액을먼저의용량플라스크로 이동한다 .
 4.1.2.4 다시 ,물1㎖,에탄올2㎖를첨가후,교반 ,원심분리하여
상징액을 용량플라스크로 이동한다 .
4.1.2.5 용량플라스크로 이동한액를 감압건조하고구연 산완충 액(pH2.2)
※5㎖를첨가하여검체를 용해시킨다 .0.45㎛여지로검액를 여과하
여아미노산 분석계 에제공한다 .
※구연 산완충 액(pH2.2):구연 산삼나트륨․2H 2O9.8g,과염소산
(60%)8㎖,n-카프릴산 0.05㎖를넣고증류수로 500㎖로표선을
맞춘 다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.아미노산분석계 조건 (예)- 73 -반응 액1액:0.4㎖차아염소산나트륨수용액 (1ℓ알칼리완
충액)
(0.384 M탄산나트륨,0.216 M붕산,0.108 M황산칼
륨의수용액 )
2액)0.8g프탈알데히드/14㎖에탄올
 0.4g폴리옥시에틸렌라우릴에테르
 1gN-아세틸시스틴/1ℓ알칼리완충 액
반응 액유속 0.2㎖/min
검출기 FLD-6A
표2.이동상조건 (예)
시간(분) A용액%B용액%B용액%
0～5 100 0 0
5～22 100～86 0～14 0
22～26 86 14 0
26.01～40 40～0 60～100 0
40～50 0 100 0
50.01～55 0 0 100
55～88 100 0 0
5.2계산
5.2.1 표준아미노산 (1nmol/10㎕)의용출시간에따라 ,검체의각아미
노산을 확인하고 그면적으 로부터유리아미노산량을환산한다 .
5.2.2 펩타이드량을산출한다 .
조단백질량(%)-②유리아미노산량(%)=펩타이드량(%)
제4,3,3-80 데커신을 다음과 같이 신설한다 .
3-80 데커신
- 74 -O O OO
DecursinO1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 데커신을 고속액체크로마토그래프/자외부
흡광광 도검출기를 사용하여 분석하는 방법으로최대흡수파장인 230 nm에
서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛필터
2.2분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.2 CadenzaC18(4.6×250mm,5um)컬럼또는 이와동등한컬럼
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 데커신
 분자식:C19H20O5,분자량:328.36 ,CASNo.:5928-25-6
- 75 -3.2일반시약
3.2.1 로릴황산나트륨(Sodiumlaurylsulfate)
3.2.2 인산수소제이나트 륨(SodiumPhosphatedibasic)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
3.2.4 메탄올(Methanol, HPLCgrade)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 데커신 표준품 약15㎎을정밀하게 취하여 100㎖용량플라스
크에넣고,HPLC 용methanol을약80㎖넣어균일하게섞고,
실온에서 5분간초음파 조사한다 (sonication). 다시methanol을
가하여 표선을맞춘 후,균일하게 혼합하여 이액을 0.45㎛멤브
레인 필터로여과하여 표준액으로한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1 참당귀뿌리추출분말을 적당히 취하여 유발에넣고유봉으로잘
혼합한후약150㎎(데커신으로서 약15㎎해당량)을정밀하게
측정하여 100㎖volumetric flask에넣고,HPLC 용methanol을약
80㎖넣어균일하게섞고,실온에서 10분간초음파 조사한다
(sonication). 다시methanol을가하여 표선을맞춘 후,균일하게 혼
합하여 이액을 0.45㎛멤브레인 필터로여과하여검액으로한다 .
- 76 -항목 조건
주입량 5㎕
칼럼온 도 30℃
이동상50%아세토니트릴 1000㎖+1.5gSodiumlauryl
sulfate +2gSodiumPhosphatedibasic
검출기 파장 230 nm
유량 1.0㎖/min5.분석및계산
5.1기기 분석
 표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
 ××
 A:표준품채취량(㎎)
B:시료채취량(g)
 C:시료 피크면적
 S:표준품 피크면적
 P:표준품의순도
제4,3,3-81 (+)-allo-HCA(Hydroxycitric acid) lactone 을다음과 같이 신
설한다 .
3-81 (+)-allo-HCA(Hydroxycitric acid) lactone
1.시험방법의 요약- 77 -본시험법은 10mM황산용액을 이용하여 시료 중(+)-allo-Hydroxycitric
acid lactone 을추출하여 고속액체크로마토그래프를 통해 분석하는 방법으
로자외부흡광광 도검출기를 이용하여 정성 및정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
 2.1.2 여과용멤브레인 필터
 2.1.3 액체크로마토그래프용 유리병
2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 자외부흡광광 도검출기
 2.2.3역상분배형 컬럼(ODS컬럼,안지름4.6mm,길이250mm,5㎛)
또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
 3.1.1 (+)-allo-Hydroxycitric acid lactone
3.2일반시약
 3.2.1 황산 (Sulfuric acid)
 3.2.2 증류수 (Distilledwater)
- 78 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상 10mM황산용액
검출기 파장 210 nm
유속 1.0㎖/min4.시험과정
4.1표준용액의 조제
 4.1.1 HCA 표준품 약300㎎을이동상에녹여50㎖로한다 .이용액
을이동상으로희석하여 HCA 로서 3.0, 1.5, 0.75㎎/㎖로하여
농도별검량선 을작성한다
4.2시험용액의 조제
 4.2.1검체약1g을정밀히달아이동상을넣어용해 (초음파 진탕 )시킨
후50㎖가되도록 정용한다
 4.2.2 이액을 여과지로 여과시키고마이크로 필터(0.45 ㎛멤브레인 필
터또는 이와동등한것)로여과한것을시험용액으로한다
5.분석및계산
5.1기기분석
 표1.고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
 5.2.1 표준물질의검량선 에의거하여농도를 산출한다 .
제4,3,3-82 L-카르니틴을 다음과 같이 신설한다 .- 79 -3-82 L-카르니틴
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중L-카르니틴을 추출하여 고속액체크로마토그래프를
이용하여 자외부흡광 광도기로 분석하여 정량하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Sep-pakC18 카트리지
2.1.2 0.45㎛필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.2.2 자외부흡광광 도기
2.2.3. ODS 칼럼(3.9×300nm,10㎛)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 L-카르니틴
 분자식:C7H15NO3,분자량:161.199,CASNo.:541-15-1
3.2일반시약
3.2.1 아세토니트릴 (Acetonitrile)
- 80 -항목 조건
주입량 10㎕
칼럼온 도 35℃
이동상 아세토니트릴:0.4heptafluorobutyricacid%=10:90
검출기 파장 227 nm
유량 1.0㎖/min3.2.2heptafluorobutyricacid
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 L-카르니틴 표준품 1.2을정밀히달아물에녹여최종100㎖로한다.
이액을 물로희석하여 L-카르니틴으로서 6.0,3.0,1.5㎎/㎖로하여 표준
물질의농도별검량선 을작성한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1검체1.0g을정밀히달아물을넣어30분간용해 (초음파진탕 )시킨
후물로 50㎖로정용한후여과지로거른다 .미리 활성화시킨
(메탄올10㎖,물10㎖)Sep-pakC18 카트리지에 2㎖/분의속도로 
처리한 약을 0.45㎛마이크로필터로여과 하여 시험 용액으로한다
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)- 81 -
5.2계산
5.2.1 표준물질의검량선 에따라농도를 산출한다
제4,3,3-83 바이칼린 (Baicalin) 을다음과 같이 신설한다 .
3-83 바이칼린 (Baicalin)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중바이칼린을 추출하여 고속액체크로마토그래프를
이용하여 자외부검출기로 분석하여 정량하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (50㎖,100㎖)
2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.2.2 PhenomenexLuna C18 (4.6㎜×250㎜,5㎛)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 바이칼린
- 82 - 분자식:C21H18O11,분자량:446,CASNo.:21967-41-9
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 테트라히드로푸란 용액 (tetrahydrofuran)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile)
3.2.4 인산완충 용액 (Phosphoric acid)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 바이칼린을 메탄올로녹여서 200㎍/㎖함유의 표준원액을 조제한다 .
표준원액을 사용하여 바이칼린은 12.5, 25, 50, 100㎍/㎖함유되게
80/20-메탄올/테트라하드로퓨란 용액으로희석하여 제조한다 .이
용액 을0.45㎛의멤브레인 필터로여과하여얻은여과액을 표준용액
으로한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1검체약200㎎을정밀히달아100㎖용량플라스크에넣고메탄
올80㎖를넣어초음파 진탕기로 20분간용해시킨 다음 80/20-메
탄올/테트라하이드로퓨란 용액을넣어정확히 100㎖로한다 .이
용액 5㎖를취하여 50㎖용량플라스크에넣고80/20-메탄올/테
트라하이드로퓨란 용액으로표선을맞춘 다.이용액을 0.45㎛의멤
브레인 필터로여과하여얻은 여과액을 시험용액으로한다 .- 83 -시간(분) A용액% B용액%
0 80 20
3 80 20
22 20 80
24.5 20 80
24.6 80 20
30 80 20항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상 A-0.1%인산용액 ,B-아세토니트릴
검출기 파장 275 nm
유량 1.0㎖/min5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
표.2이동상조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 20㎕를상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래피에
주입하여얻어진 피이크의면적으 로부터검량선 을작성한다 .
5.2.2 시험용액 20㎕를상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래피에
주입한다 .얻어진 피이크의머무름시간을비교해서 정성을 하고
표준용액의검량선으 로부터검체중의 바이칼린농도(S,㎎/㎖)를
구하여 아래의식으로부터각각 의함량(%)을산출한다 .
5.2.3 바이칼린 (%)=S(㎎/㎖)x50(㎖)x20/검체채취량(㎎)x표준품순도(%)
 S:바이칼린의농도(㎎/㎖)
- 84 -
그림1바이칼린 표준품의 크로마토그램
제4,3,3-84 카테킨을 다음과 같이 신설한다 .
3-84 카테킨
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중카테킨 (catechin)을추출하여 고속액체크로마토그래
프를 이용하여 자외부검출기로 분석하여 정량하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛의멤브레인 필터
2.1.3 초음파 진탕기
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)- 85 -2.1.2 자외부흡광광 도기
2.1.3 PhenomenexLuna C18 (4.6㎜×250㎜,5㎛)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 카테킨 (catechin)
 분자식:C15H14O6, 분자량:290.27
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 카테킨을 500㎍/㎖의농도가 되게 50/50-메탄올/물용액으로녹여
표준원액을 조제한다 .표준원액을 사용하여 62.5, 125, 250, 500㎍/
㎖의농도가 되게 50/50-메탄올/물용액으로희석하여 제조한다 .
이용액을 0.45㎛의멤브레인 필터로여과하여얻은여과액을
표준용액으로한다 .
4.2시험 용액의 조제
4.2.1검체약250㎎을정밀히달아100㎖용량플라스크에넣고
50/50-메탄올/물용액 80㎖를넣어초음파 진탕기로 20분간용해
- 86 -시간(분) A용액% B용액%
0 85.0 15.0
7 85.0 15.0
12 10.0 90.0
16.5 10.0 90.0
16.6 85.0 15.0
24 85.0 15.0항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상 A-0.1%인산용액 ,B-아세토니트릴
검출기 파장 275 nm
유량 1.0㎖/min시킨 다음 50/50-메탄올/물용액을넣어정확히 100㎖로한다 .이
용액을 0.45㎛의멤브레인 필터로여과하여얻은여과액을 시험
용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기 분석
 표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
 표.2이동상조건 (예)
5.2계산
5.2.1 시험용액 20㎕를상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래피에
주입한다 .얻어진 피이크의머무름시간을비교해서 정성을 하고
표준용액의검량선으 로부터검체중의 카테킨농도(S,㎎/㎖)를
구하여 아래의식으로부터각각 의함량(%)을산출한다 .- 87 - 카테킨 (%)=S(㎎/㎖)x100(㎖)/검체채취량(㎎)x표준품순도(%)
 S:카테킨의농도(㎎/㎖)
그림1카테킨 표준품의 크로마토그램
제4,3,3-85 프랑스 해안송껍질추출물 HPLC 확인 시험법을 다음과 같이
신설한다 .
3-85 프랑스 해안송껍질추출물 HPLC 확인 시험법
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중카테킨 (catechin), 카페인산 (caffeic acid),탁시폴린
(taxifolin),페롤 산(feulic acid) 을 추출하여 고속액체크로마토그래프를
이용하여 자외부흡광광 도기로 분석하여 확인하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 0.45㎛멤브레인 필터
2.1분석장비
- 88 -2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도기
2.1.3Base-deactivatedpackingL7(C8, 5㎛,4.6㎜×15㎝또는 25㎝)또는 
이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 카테킨 (catechin)
 분자식:C15H14O6, 분자량:290.27
3.1.2 카페인산 (caffeic acid)
 분자식:C9H8O4, 분자량:180.16, CASNo.:331-39-5
3.1.3탁시폴린 (taxifolin)
 분자식:C9H8O4, 분자량:304.25
3.1.4페롤 산(ferulic acid)
 분자식:C10H10O4, 분자량:194.18, CASNo.:1135-24-6
3.1.5 해송추출물 표준품 (USP　MarinepineextractRS)
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 인산용액 (Phosphoric acid)
4.시험과정- 89 -항목 조건
주입량 10～20㎕
칼럼온 도 40℃
이동상 A-메탄올,B-0.1%(1→1000) 인산용액
검출기 파장 280 nm
유량 1.0㎖/min4.1표준용액의 조제
4.1.1 표준용액Ⅰ의조제
 카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,페룰 산을 정밀히달아메탄올에 1㎎/㎖
의농도로녹인다음 0.45㎛멤브레인 필터로여과한것을표준용
액으로한다 .
4.1.2 표준용액Ⅱ의조제
 해송추출물 표준품 (USPMaritimepineextractRS)을정밀히달아
메탄올에 2㎎/㎖의농도로녹인다음 0.45㎛멤브레인 필터로여과
한것을표준용액으로한다 .
4.2시험 용액의 조제
4.2.1검체약2㎎을정밀히달아메탄올을 가하여 10㎖로한다음 10분
간초음파 분해한후0.45㎛멤브레인 필터로여과한다 .(여액의최
초4㎖는제거한후사용한다 .)
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
표.2이동상조건 (예)
- 90 -시간(분) A용액%B용액% Linear
0 8 92 6
40 34 66 6
45 2 98 6
50 2 98 6
52 8 92 6
57 8 92 6
5.2계산
5.2.1 표준용액Ⅰ,표준용액Ⅱ및시험용액의 크로마토그램을얻은후,
표준용액Ⅰ에서 카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,페룰 산의 피크머무
름시간과표준용액Ⅱ에서 크로마토그램의피크머무름시간을
확인하고 ,시험용액의 크로마토그램과비교확인한다 .
단,탁시폴린 (taxifolin) 과페룰 산(ferulic acid) 사이의 분리도
(resolution,R)는3.0이상이어야하고탁시폴린에 대한 tailing
factor 는2.0이하이어야한다 .
그림1.시험용액 크로마토그래프예시
제4,3,3-86 프로시아니딘을 다음과 같이 신설한다 .
3-86 프로시아니딘
1.시험방법의 요약- 91 -본시험법은 메탄올을 이용하여 시료로부터프로시아니딘을 추출하여
분광광 도계를이용하는 분석법으로,프로시아니딘의 최대흡수파장인
546 nm에서흡광 도를측정하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
 2.1.1 용량플라스크 (10㎖)
2.2분석장비
 2.2.1 분광광 도계
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 해송추출물 표준품 (USP　MarinepineextractRS)
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 n-부탄올(n-Butanol)
3.2.3염산(Hydrochloric acid)
3.2.4암모늄황산 제2철(Ferric ammoniumsulfate)
3.2.5 아세트산 (Acetic acid)
4.시험과정
- 92 -4.1표준용액의 조제
4.1.1 해송추출물 표준품 (USPMaritimepineextractRS)을정밀히달아
C시액에 0.25㎎/㎖의농도가 되게 한다 .이액에 C시액을 가하여
0.05, 0.0625, 0.075㎎/㎖농도가 되도록 표준용액을 조제하고 시험
조작에준하여 액층1㎝,546㎚에서흡광 도를측정하고검량선 을
작성한다 .
4.2시험 용액의 조제
4.2.1 원료를 정밀히달아C시액에 약25㎎/㎖농도가 되게 한다 .
4.3시험조작
4.3.1 10㎖용량플라스크에 시험용액 1.0㎖를넣고,A시액 6.0㎖,B시액 
0.25㎖를각각 가한 다음 혼합하여뚜껑 을씌워 밀봉한후,수욕
상에서 40분간반응 시킨 다음얼음물을 이용하여 실온으 로냉각
시킨다 .각각 의시험관에A시액첨가하여최종 용량이10㎖가
되도록 한다 .시험용액의 공시험용으로시험용액 대신 C시액 1.0
㎖를사용하여 이하 시험용액의 시험조작과동일하게 조작한다 .
시험용액은 액층1cm,파장 546㎚에서 공시험용액을 대조액으로
하여흡광 도를측정한다 .
5.분석및계산
5.1계산식
총프로시아니딘 (%)=200×C×S/W× 100- 93 - C:표준곡선으 로부터얻은시험용액의농도(㎎/㎖)
 S:표준품의순도(%)
W:검체채취량(g)
제4,3,3-87 올리유로핀 (Oleuropein)을다음과 같이 신설한다 .
3-87 올리유로핀 (Oleuropein)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 올리유로핀을 고속액체크로마토 그래프/자외
부흡광광 도검출기를 사용하여 분석하는 방법으로최대흡수파장인 233 nm에서
검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,1L)
2.1.2 HPLC 용유리병
2.1.3 용매용일회용실린저
2.1.4 초음파진탕기
2.1.5 원심분리기
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
- 94 -2.2.2 C18(60Å,3.9mm×150mm,4μm)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Oleuropein
 분자식:C25H32O13,분자량:540.51, CASNo.:32619-42-4
3.2일반시약
3.2.1 Sodiumcitrate dibasic sesquihydrate
3.2.2 메탄올(Methanol)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1시험용매
4.1.1 1.0g의sodiumcitrate dibasic sesquihydrate 를600㎖의증류수
에녹이고 ,400㎖의methanol과혼합한다 .
4.2표준용액 제조
 4.2.1 올리유로핀 3～5㎎을정밀히달아서 시험용매100㎖에녹여
표준용액으로한다 .(제조시점기준 24시간이내 사용 )
4.3시험용액 제조
 4.3.1 시료 30～50㎎을측량 하여 시험용매70㎖에넣어녹인후10분
동안상온에서 ultra sonicbath로완전히녹인다 .
 4.3.2 시험용매로100㎖맞춘 후원심분리하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산- 95 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 25℃
이동상 isocratic (시험용매)
유속 1.0㎖/분
검출기 파장 (UV) 233 nm표1.고속액체크로마토그래프조건5.1기기분석
5.2계산
 올리유로핀 함량(㎎/g)=AxB/Sx1,000
 A:시험용액 중올리유로핀의농도(μg/㎖)
B:시험용액전량(㎖)
 S:검체채취량(g)
제4,3,3-88 크레아틴 모노하이드레이트를 다음과 같이 신설한다 .
3-88 크레아틴 모노하이드레이트
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중크레아틴을 추출하여 액체크로마토그래피/자외부
흡광 광도검출기를 이용하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
- 96 -2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 여과용멤브레인 필터
2.1.3 액체크로마토그래피용 유리병
2.1.4 용매용일회용실린지
2.1.5 초음파진탕기
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 양이온교환 컬럼Nucleosil 100-5 SA(4.6×250mm)또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Creatinemonohydrate(2-(methylguanidino)ethanoic acid)
 분자식:C4H9N3O2․H2O, 분자량:149.15, CASNo.:6020-87-7
3.2일반시약
3.2.1 인산 2수소암모늄(Ammoniumphosphate, HPLCgrade)
3.2.2 수산화나트륨(Sodiumhydroxide)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정- 97 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 40℃
이동상 2.3%Ammoniumphosphate(pH5.5)
유속 0.5㎖/분
검출기 파장 (UV) 225 nm4.1표준용액의 조제
4.1.1 표준물질을 정밀하게칭량 하고 증류수로녹여100㎖로한것을
 표준용액으로한다 .
4.1.2위표준용액을 증류수로적절히희석하여 표준용액으로사용한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1 크레아틴으로서 10～40㎎이함유되도록적당량의시료를달아
100㎖부피 플라스크에넣고증류수를 50㎖넣는다 .
4.2.2 시료를잘흔들 어추출한후초음파 진탕기로 2분간더추출한다 .
4.2.3 증류수로 표선까지맞춘 다
4.2.4 0.45㎛멤브레인 필터로여과한 용액을 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래피조건 (예)
5.2계산
5.2.1 크레아틴 표준용액의 피크면적으 로검량선 을작성하고 ,검량선 식
을이용하여 시험용액 중의 크레아틴농도를구한후아래식을
이용하여 크레아틴 함량을계산한다 .
- 98 -크레아틴 함량(㎎/g) =A×B×C
D×1000
A:시험용액의 전량
B:희석배 수
C:시험용액 중의 크레아틴의농도(㎍/㎖)
D:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
제4,3,3-89 알파글루코시다제 (α-Glucosidase) 활성 억제능 을다음과 같이
신설한다 .
3-89 알파글루코시다제 (α-Glucosidase) 활성 억제능
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 알파 글루코시다제를 발색시켜분광광 도
계로정량하는 방법이다 .
.※α-GlucosidaseIC50:α-Glucosidase 의활성을 50%저해하는 신청원료의농도
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 메스실린더
2.1.2pHmeter
2.1.3 마그네틱 바(Magnetic stirrer)- 99 -2.1.4 항온수조 (waterbath)
2.1.5 초음파파쇄기(ultrasonicator)
2.1.6 진탕기 (Vortex)
2.1.7 원심분리기
2.2분석장비
2.1.1 분광광 도계(Spectrophotometer)
3.시약목록
3.1표준시약
3.1.1Intestinal acetonepowders fromrat
3.1.2 Glucosekit(AutokitGlucose,Wako사)
3.2일반시약
3.2.1 자당 (Sucrose)
3.2.2 수산화나트륨(Sodiumhydroxide)
3.2.3 아세트산 (Acetic acid, 99.7%)
3.2.4 증류수 (Distilledwater)
3.2.5 인산
4.시험과정
4.1시약 제조
- 100 -4.1.1 50mMphosphatebuffer(pH7.0)
 250mMphosphatebuffer 를제조하여 5NNaOH 로pH7.0 을맞춘 
후5배희석하여 50mMphosphatebuffer(pH7.0)를시험에 사용
한다 .
4.1.2 0.2Nacetic acid (100㎖)
 0.2Nacetic acid 용액을만들어상온보관 하여 사용한다 .
4.1.3 0.2NNaOH (100㎖)
 0.2NNaOH 용액을만들어상온보관 하여 사용한다 .
4.1.4 글루코즈측정용 발색제
 실험직전에 2.1.2glucosekit의 2.1.2.①완충 제용액 (150㎖)에2.1.2.
②분말발색제(150㎖)을혼합하여 사용한다 .
4.1.5 100㎎/㎖Ratintestinal acetonepowdersolution( 효소 원액 )
Intestinal acetonepowders fromrat 2g를정확히칭량 하여
50mMphosphatebuffer(pH7.0) 20㎖를가하여 혼합한후얼음
위에서 50watt로2분동안,10분간격으로2회sonication 한다 .
원심분리 (10,000 rpm,10분,4˚C)후상징액을 취하여 1.5㎖용의
tube에 소분하여냉동 보관 하며,분석전에 해동하여 50mM
phosphatebuffer(pH7.0)로5배희석하여 사용한다 .
4.1.6 20mMSucrose solution( 기질용액 ,200㎖)
 20mMSucrose 용액을만들어냉장보관 하여 사용한다 .- 101 -항목 기질용액 (㎕)Touchi extract
용액 (㎕)증류수 (㎕) 효소희석액 (㎕)Total
volume( ㎕)
공대조구 100 0 100 0 200
공시험구 100 0 50 50 200
대조구1 100 12.5 87.5 0 200
대조구2 100 25 75 0 200
대조구3 100 50 50 0 200
시험구1 100 12.5 37.5 50 200
시험구2 100 25 25 50 200
시험구3 100 50 0 50 2004.2시험용액 제조
4.2.1 시험용액 (콩발효 추출물 용액 )제조
 시료 50㎎을정확히칭량 하고 증류수 1㎖를가하여 진탕기로 혼합
한다 .원심분리 (10,000 rpm,10분,상온)후,상징액을 50배희석하여
(20㎕원액 +980㎕증류수 )표1의시험용액 (콩발효 추출물 용액 )
으로사용한다 .
5.분석및계산
5.1알파글루코시다제 저해활성측정
5.1.1 시험관에아래의표1과같이 기질용액 ,증류수 ,시험용액 (콩발효
추출물 용액 )을첨가한다 .
표1
5.1.2 효소를첨가하는 시험관은항온수조에넣어37˚C에서 5분간예비
가열하고 효소를첨가하지않는시험관은실온에서 실험한다 .
- 102 -알파글루코시다제
활성저해율(%)=100 -A545시험구-A545대조구
× 100
A545공시험구-A545공대조구5.1.3 효소를첨가하는 시험관에효소희석액50㎕첨가하여 30분간
항온수조에서반응 시킨다 .(각시험관의반응 시간이정확하게 30분
간이되도록 20초마다첨가한다 .)
5.1.4 30분후,20초마다반응 정지액 0.2NNaOH 를150㎕를첨가
하여 혼합한다 .
5.1.5 효소를첨가하지않은시험관에도 0.2NNaOH 를150㎕를첨가한다 .
5.1.6 모든시험관에0.2Nacetic acid를150㎕를첨가하고 혼합하여
중화시킨다 .
5.1.7 모든시험관에혼합한 발색제(3.1.4) 를500㎕를첨가하고 혼합한다 .
5.1.8 모든시험관을항온수조에넣고37˚C에서 30분간반응 시킨다 .
5.1.9 분광광 도계545 nm에서흡광 도를측정한다 .
5.2계산
알파글루코시다제 활성 억제능IC50(㎎/㎖)은시험용액 (콩발효 추출물 용액 )
농도의 대수와저해율의관계 를나타내는 그래프에서 α-glucosidase 의
활성을 50%저해하는농도를계산한다 .알파글루코시다제 의활성저해
율(%)을구하는 공식은 아래와 같다 .
4.2.1 알파글루코시다제 활성저해율- 103 -제4,3,3-90 Tris(Tris-hydroxym ethyl-aminomethane) 을다음과 같이 
신설한다 .
3-90 Tris(Tris-hydroxym ethyl-aminomethane)
1.시험방법의 요약
본시험법은 아세토니트릴을 이용하여 시료 중Tris 의검출시간과동일
한시간의표준품의 피크를 확인한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Screw-toptest tube
2.1.2 원심농축 기(Centrifugalconcentrator)
2.1.3 필터(ultra filter, 3KDafilter)
2.1.4 오일배스(oilbath)
2.1.5 진탕기 (Vortex)
2.1.6 원심분리기 (Centrifuge)
2.2분석장비
2.1.1 가스크로마토그래프(GC)/불꽃 이온화검출기 (FID)
2.1.2 OV-1칼럼(25m⨯0.32mm,직경 0.12μm)또는 이와동등한것
- 104 -
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Tris (hydroxym ethyl)aminomethane (Tris)
 분자식:NH2C(CH 2OH) 3,분자량:121.24, CASNo.:77-86-1
3.2일반시약
 3.2.1 증류수 (Distilledwater, HPLCgrade)
 3.2.2 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
 3.2.3염화메틸렌(Dichloromethane, HPLCgrade)
 3.2.4Bis(Trimethylsilyl)trifluoroacetoamide(BSTFA)
4.시험과정
4.1표준용액 제조
4.1.1 Trimethylsilylation(TMS) 하기위해서 표준물질 약100㎎에아세
토니트릴 0.5㎖를가하여충분히녹인후BSTFA0.5㎖를첨가
한다 .오일배스에서 160℃,2시간동 안유지하는데 초기 30분동안
은10분마다 ,30분후에는 30분마다샘플을교반 시킨다 .반응 이
끝나면냉각 시키고12,000 rpm,30분동안원심분리후상징액을
표준용액으로사용한다 .- 105 -항목 조건
컬럼 OV-1,25m⨯0.32mm,직경 0.12μm
컬럼온 도100℃에서 2분정체
1℃/분으로100～140℃
10℃/분으로140～230℃
캐리어가스 헬륨
Splitratio 1:100
주입량 2～5㎕
주입온도 230℃
검출기온도 250℃4.2시험용액 제조
4.2.1 10%콩발효 추출물 용액을 12,000 rpm,10분동안원심분리후
상징액500㎕를취하여 3KDafilter 로14,000g,100분동안여과한
다.여과액을 원심농축 기로 건조시킨후염화메틸렌1㎖를가하
여녹인후진공건조시킨다 .
4.2.2 TMS 화를위해서 아세토니트릴 0.5㎖를가하여충분히녹인후
BSTFA0.5㎖를첨가한다 .오일배스(oilbath)에서 160℃로2시
간동 안유지하는데 초기 30분동안은 10분마다 ,30분후에는 30분
마다샘플을교반 시킨다 .반응 이끝나면냉각 시키고12,00rpm,30
분동안원심분리후상징액을 시험용액으로사용한다 .
5.분석및확인
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
- 106 -5.2확인
TMS 화한 시험용액을 GC 분석하여 ,TMS 화한Tris 의검출시간과동일
한시간의피크를 확인한다 .
제4,3,3-91 지방족 알코올을 다음과 같이 신설한다 .
3-91 지방족 알코올
3-91-1 지방족 알코올 (제1법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 지방족 알코올을 가스 크로마토 그래프
분석하는 방법으로형광검 출기를 이용하여 분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (250㎖,100㎖)
2.1.2 캡튜 브(10㎖)
2.1.3 질소농축 기
2.2분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (FlameIonization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4J&W-DB5(30m×0.53mm× 1.5um)또는 이와등등한것- 107 -3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 1-tetracosanol
3.1.2 1-hexacosanol
3.1.3 1-heptacosanol
3.1.4 1-octacosanol
3.1.5 1-triacontanol
3.1.6 MSTFA(N-methyl,N-Trimethylsyliltrifluoroacetamide)
3.1.7 1-eicosanol
3.2일반시약
3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 내부표준용액 1-eicosanol 110㎎을250㎖용량플라스크에 정확히
취하여 클로로포름으 로용해후정용한다 .
4.1.2 1-Hexacosanol 12㎎,1-octacosanol 130㎎,1-tricontanol 28㎎을
정확히 취하여각각 100㎖용량플라스크에넣은후클로로포름으
로용해후정용한다 .
4.1.3 1-tetracosanol 6㎎을정확히 취하여 100㎖용량플라스크에넣은
- 108 -후클로로포름으 로용해후정용한다 .이용액을 50배희석한다 .
4.1.4 1-heptacosanol 9㎎을정확히 취하여 100㎖용량플라스크에넣은
후클로로포름으 로용해후정용한다 .이용액을 5배희석한다 .
4.1.5 4.1.2 용액 ,50배희석한4.1.3 용액 ,5배희석한4.1.4 용액을각각 
500㎕씩10㎖캡튜 브에넣은후40℃에서 질소로 용매를건조시킨다 .
 ※각표준용액의농도:1-tetracosanol 0.0006㎎/0.5㎖
 1-hexacosanol 0.06㎎/0.5㎖
 1-heptacosanol 0.009㎎/0.5㎖
 1-octacosanol 0.65㎎/0.5㎖
 1-triacontanol 0.14㎎/0.5㎖
4.1.6 캡튜 브에 내부표준용액 150㎕, MSTFA (N-methyl,
N-Trimethylsyliltrifluoroacetamide)50㎕를첨가하여캡을닫은
후heatingblock에서 65℃에서 15분간유도체시키고방냉하여
표준용액으로사용한다 .
4.2시험용액
4.2.1 10㎖캡튜 브에 폴리코사놀로서 20㎎에해당되는 시료량을정확히
취한다 .
4.2.2 내부표준용액 3㎖을첨가하고캡을닫은후40℃에서 15분간
가열한다음 5분간초음파 처리를 하여 시료를 용해시킨다 .
4.2.3 방냉후3000rpm으로원심분리한다 .
4.2.4 상등액 150㎕를10㎖캡튜 브에넣고50㎕MSTFA를첨가한다 .- 109 -항목 조건
오븐온 도250℃에서 분당 8℃씩승온 하여
318℃에서 10분간유지
캐리어가스 수소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎕
주입온도 320℃
검출기온도 330℃4.2.5 Heatingblock에서 65℃에서 15분간유도체시키고방냉하여 시험
용액으로사용한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액 및시험용액을 기체크로마토그래프내에 주입하여각지방족 
알코올의 그래프를얻는다 .이그래프를 표준용액 그래프와비교
하여 해당 피크를 확인한다 .각지방족 알코올의 함량은피크의
면적으 로다음 식에 따라 산출한다 .
알코올
함량(%)=시료의
피크면적
×표준품
취한량(㎎)
×1
×Dilution 
factor3
×0.5×표준품
순도×100
표준품의
피크면적시료
취한량(㎎)100 0.15
※Dilution factor:1-Hexacosanol, 1-octacosanol, 1-tricontanol=1.0
 1-heptacosanol=0.2, 1-tetracosanol=0.02
총지방족 알코올 함량(%)=개별 지방족 알코올의 합(%)
- 110 -5.2.2. 1-nonacosanol, 1-dotriacontanol, 1-tetratriacontanol 은상용 화된
표준품이없으므 로아래의식과 같은각화합물의RT와내부표준
용액의RT를가지고 비교한다 .
RRT =각화합물의RT
내부표준용액의 RT
 -1-nonacosanolRRT:3.24
 -1-dotriacontanol RRT:4.21
 -1-tetratriacontanol RRT:5.14
5.2.3. 1-nonacosanol 은1-octacosanol 로1-dotriacontanol, 1-tetratriacontanol 은
1-triacontanol 로계산한다 .
3-91-2 지방족 알코올 (제2법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 지방족 알코올을 가스 크로마토 그래프
분석하는 방법으로형광검 출기를 이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (5㎖)- 111 -2.1.2캡튜 브
2.2분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (FlameIonization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4J&W-DB1(30m×0.32mm× 0.25um)또는 이와등등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 1-tetracosanol
3.1.2 1-hexacosanol
3.1.3 1-heptacosanol
3.1.4 1-octacosanol
3.1.5 1-triacontanol
3.2일반시약
3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
3.2.2BSTFA(N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 1-tetracosanol 약 0.02㎎,1-hexacosanol 약 1.5㎎,
- 112 -1-heptacosanol 약0.3㎎1-octacosanol 약15.0㎎,1-tricontanol
약3.3㎎을정확히 취하여각각 5㎖용량플라스크에넣은후내
부표준용액 3.0㎖을첨가하고 40℃에서 가온하여 용해시킨후냉
각하여 클로로포름으 로정용한다 .
4.1.2 캡튜 브에 4.1.1 용액 150㎕,BSTFA
(N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide)100㎕를첨가하여캡을닫
은후heatingblock70℃에서 15분간유도체시키고방냉하여 표
준용액으로사용한다 .
4.2시험용액
4.2.1 5㎖용량플라스크에 폴리코사놀로서 10㎎에해당되는 균질화된시료를 
정확히 취한다 .
4.2.2 내부표준용액 3㎖을첨가하여 마개를닫은후40℃에서 15분간
가열한다음 5분간초음파 처리를 하여 시료를 용해시킨다 .
4.2.3 방냉후클로로포름으 로정용한다 .
4.2.4 4.2.3 용액 150㎕를10㎖캡튜 브에넣고100㎕BSTFA를첨가한
다.
4.2.5 Heatingblock에서 70℃15분간유도체시키고방냉하여 시험용액
으로사용한다 .
5.분석및계산- 113 -항목 조건
오븐온 도230℃에서 분당 3℃씩305℃까지승온 한후분당
20℃로350℃까지승온 하여 15분간유지
캐리어가스 수소 또는 질소
Splitflow 1.5㎖/min
주입량 1㎕
주입온도 320℃
검출기온도 330℃
알코올
함량(㎎/g)=표준용액
내부표준물질의
피크면적 ×시험용액의
피크면적
×표준품 취한량
(㎎)
×표준품
순도 시험용액
내부표준물질의
피크면적 표준용액의
피크면적시료 취한량
(g)5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액을 기체크로마토그래프내에 주입하여각
지방족 알코올의 그래프를얻는다 .이그래프를 표준용액 그래프
와비교하여 해당 피크를 확인한다 .각지방족 알코올의 함량은
피크의면적으 로다음 식에 따라 산출한다 .
총지방족 알코올 함량(㎎/g)=개별 지방족 알코올의 합(㎎/g)
5.2.2 1-nonacosanol 은 1-octacosanol 로1-dotriacontanol, 1-tetratriacontanol 은
1-triacontanol 로계산한다 .
- 114 -5.2.3 1-nonacosanol, 1-dotriacontanol, 1-tetratriacontanol 은상용화된
표준품이없으므 로아래의식과 같은각화합물의RT와내부
표준용액의RT를가지고 비교한다 .
RRT =각화합물의RT
내부표준용액의 RT
 -1-nonacosanolRRT:5.11
 -1-dotriacontanol RRT:7.01
 -1-tetratriacontanol RRT:8.27
제4,3,3-92 테르피놀렌 (terpinolene) 을다음과 같이 신설한다 .
제4,3,3-92 테르피놀렌 (terpinolene)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 테르피놀렌을 가스 크로 마토 그래프분석하
는방법으로형광검 출기를 이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (FlameIonization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%Polyetylene Glycol)을충전한 칼럼- 115 -(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이와동등이상인것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 테르피놀렌 (terpinolene)
분자식:C10H16,분자량:136.24, CASNo.99-86-5
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드 (methylene chloride)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 테르피놀렌 표준품을각각 0.1g을취하여 10㎖플라스크에넣고
각각 의플라스크에 10㎖가되도록 메칠렌클로라이드 용액을
정확히채워10,000㎍/㎖농도의 표준원액을 준비한다 .표준원액
들을10배희석하여 1,000㎍/㎖가되도록 메칠렌클로라이드로
녹여표준용액을 조제한후,검량선 작성을위하여 표준용액이 10,
50,100, 200, 500㎍/㎖가되도록희석하여검량선 을작성한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에 0.1g을정밀하게달아50㎖메칠렌클로
라이드를첨가하여잘혼합한후메칠렌클로라이드를 첨가하여
100㎖로정용하여 시험용액으로한다 .
- 116 -항목 조건
오븐온 도 초기온도50℃(2분),승온 (8℃/분),최종온 도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각각 1㎕씩주입하여앞의조건에서 따라
시험한다 .각표준물질의농도별 피크면적 을이용하여검량선 을
작성한후시험용액의 피크면적 을이용하여 테르피놀렌의농도를
구한후다음 식에 따라 함량을구한다 .
테르피놀렌 함량(㎎/g)= C×V
× 1,000
W
C:시험용액 중테르피놀렌 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료채취량(㎎)
제4,3,3-93 3-카렌 (3-carene) 을다음과 같이 신설한다 .
제4,3,3-93 3-카렌 (3-carene)- 117 -1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 3-카렌을 가스 크로 마토 그래프분석하는
방법으로형광검 출기를 이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (FlameIonization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%Polyetylene Glycol)을충전한 칼럼
(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이와동등이상인것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 3-카렌 (3-carene)
분자식:C10H16,,분자량:136.24, CASNo.13466-78-9
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드 (methylene chloride)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 3-카렌 표준품을각각 0.1g을취하여 10㎖플라스크에넣고각각
- 118 -항목 조건
오븐온 도 초기온도50℃(2분),승온 (8℃/분),최종온 도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃의플라스크에 10㎖가되도록 메칠렌클로라이드 용액을 정확
히채워10,000㎍/㎖농도의 표준원액을 준비한다 .표준원액들을
10배희석하여 1,000㎍/㎖가되도록 메칠렌클로라이드로 녹여
표준용액을 조제한후,검량선 작성을위하여 표준용액이 10,50,
100, 200, 500㎍/㎖가되도록희석하여검량선 을작성한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에 0.1g을정밀하게달아50㎖메칠렌클로
라이드를첨가하여잘혼합한후메칠렌클로라이드를 첨가하여
100㎖로정용하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각각 1㎕씩주입하여앞의조건에서 따라
시험한다 .각표준물질의농도별 피크면적 을이용하여검량선 을- 119 -작성한후시험용액의 피크면적 을이용하여 3-카렌의농도를
구한후다음 식에 따라 함량을구한다 .
3-카렌 함량(㎎/g)= C×V
× 1,000
W
C:시험용액 중3-카렌 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료채취량(㎎)
제4,3,3-94 리모넨 (limonene) 을다음과 같이 신설한다 .
제4,3,3-94 리모넨 (limonene)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 리모넨을 가스 크로 마토 그래프분석하는
방법으로형광검 출기를 이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (FlameIonization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%Polyetylene Glycol)을충전한 칼럼
(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이와동등이상인것
- 120 -3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 리모넨 (limonene)
분자식:C10H16,,분자량:136.24
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드 (methylene chloride)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 리모넨 표준품을각각 0.1g을취하여 10㎖플라스크에넣고각각
의플라스크에 10㎖가되도록 메칠렌클로라이드 용액을 정확히
채워10,000㎍/㎖농도의 표준원액을 준비한다 .표준원액들을10
배희석하여 1,000㎍/㎖가되도록 메칠렌클로라이드로 녹여표
준용액을 조제한후,검량선 작성을위하여 표준용액이 10, 50,
100, 200, 500㎍/㎖가되도록희석하여검량선 을작성한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에 0.1g을정밀하게달아50㎖메칠렌클로
라이드를첨가하여잘혼합한후메칠렌클로라이드를 첨가하여
100㎖로정용하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산- 121 -항목 조건
오븐온 도 초기온도50℃(2분),승온 (8℃/분),최종온 도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각각 1㎕씩주입하여앞의조건에서 따라
시험한다 .각표준물질의농도별 피크면적 을이용하여검량선 을
작성한후시험용액의 피크면적 을이용하여 리모넨의농도를
구한후다음 식에 따라 함량을구한다 .
리모넨 함량(㎎/g)= C×V
× 1,000
W
C:시험용액 중리모넨 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료채취량(㎎)
제4,3,3-95 SOD 활성을 다음과 같이 신설한다 .
3-95 SOD 활성
1.시험방법의 요약
- 122 -본시험법은 시료 내SOD 활성을검출하기위해키트를 이용하여 분석
을한다 .
2.장비와재료
2.1장비 및소모품
2.1.1Fluka19160 SOD determinationkit
 2.1.1.1WST solution 5㎖1EA
 2.1.1.2Enzym eSolution 100㎕lx1
 2.1.1.3Buffer Solution 100㎖x1
 2.1.1.4 DilutionBufferEnzym e50㎖x1
 2.1.1.5 Manual 1Booklet
2.2분석장비
2.2.1 Plate reader (450 nmfilter)
2.2.2 96-wellmicroplate
2.2.3 10㎕&100-200㎕pipettes,multi channelpipette
2.2.4Incubator
2.2.5 Superoxidedismutase (SOD)
 (필요시저해도곡선(inhibition curve)을조제 )
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질- 123 -3.1.1 SOD 용액
3.2일반시약
3.2.1 증류수 (Distilledwater, HPLCgrade)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1WSTworkingsolution
WST 용액 1㎖에Buffer Solution 19㎖을혼합하여희석시킨다 .
4.1.2Enzym eworkingsolution
Enzymetube용액을 5초간원심분리 한후pipeting을이용하여 혼
합하고 15㎕EnzymeSolution 을DilutionBuffer 2.5㎖로희석한다 .
4.1.3 SOD 용액 (필요 시)
 SOD와DilutionBuffer 로다음과 같이 SOD 표준물질을 제조한다 .
 200U/㎖,100U/㎖,50U/㎖,20U/㎖,10U/㎖,5U/㎖,1U/㎖,
0.1U/㎖,0.05U/㎖,0.01U/㎖,0.001U/㎖
4.2시험용액
4.2.1 1.2g의메론 추출물을넣고7㎖의증류수를첨가한다 .
4.2.2Vortexing:2분수행
4.2.3 Sonicate:15분수행
4.2.4Vortexing:2분수행
4.2.5 6～8℃의온도에서 1,600rpm속도로 25분간원심분리
- 124 -4.2.6투명 한용액층을분리하여갈색 10㎖플라스크에옮겨담고,증류
수로 10㎖을맞춘 다(solution A)
 solution A의메론추출물농도(㎎/㎖)=120.0
4.2.7 solution A를각well에다음의농도를 따르도록 한다 (㎍/㎖)
<S1=150/S2=250/S3=350/S4=450/S5=550/S6=650>
예)농도별 sample의준비 (단위:㎕)
Sample solutions =S
S1 S2 S3 S4 S5 S6
150㎍/㎖250㎍/㎖350㎍/㎖450㎍/㎖550㎍/㎖650㎍/㎖
Volume(Vi)Solution A 30 50 70 90 110 130
Volume(Vf)(H2O) 1970 1950 1930 1910 1890 1870
※Sample전처리 시주의점
-Vortexing및Sonication 을충분한 시간동 안수행한다 .원심분리를 1,600
rpm에서 25분시행한후,용액의 상층액을 취할때아래에녹지않은
powder가나오지않게한다 .
4.3시험조작
4.3.1.well에준비된용액을 준비한다 .SOD 표준용액을 사용할경우
샘플과 같은 방법으로setup한다
4.3.2각samplewell과2번blankwell에20㎕sample용액을 가한다 .각
blank1번과3번well에20㎕2차증류수를 가한다 .
4.3.3 200㎕WSTworkingsolution 을각well에가하고 혼합한다 .- 125 -SOD 활성=(Ablank1-Ablank3)-S sample-Ablank2
×100
Ablank1-Ablank34.3.4Blank2와3well에DilutionBuffer 20㎕를첨가한다 .
4.3.5각sample과blank1well에Enzym eworkingsolution 20㎕를
가한후완전하게 혼합한다 .
4.3.6plate를37℃에서 20분간incubation 시킨다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
5.1.1 Micro-plate Leader 로450 nm에흡광 도를측정한다
5.2계산
5.2.1 다음의 식을 사용하여 SOD 활성 (inhibition rate%)계산한다 .
제4,3,3-96 알파에스 1카제인 (αS1-casein)(f91-100) 을다음과 같이 신설한
다.
3-96 알파에스 1카제인 (αS1-casein)(f91-100)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 알파에스 1카제인 (f91-100) 을고속액체크
로마토 그래프분석하는 방법으로자외부흡광광 도검출기를 이용하여 분석
한다 .
- 126 -2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (50㎖)
2.1.2 HPLC 용유리병
2.1.3 용매용일회용실린지
2.1.4 여과용멤브레인 필터(PTFE,0.45㎛)
2.1.5교반 기(Stirrer)
2.2분석장비
 2.2.1 고속액체크로마토그래프
 2.2.2 자외부흡광 광도검출기 (UVDetector)
 2.2.3 C18XTerraⓇ,(4.6mm× 250㎜,5㎛)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Decapeptide(SyntheticαS1-casein (f91-100))
 분자식:C60H94N14O16분자량:1267.50
3.2일반시약
3.2.1 트리플루오로아세트산 (trifluoroacetic acid)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)- 127 -4.시험과정
4.1표준용액 제조
4.1.1 Synthetic 알파에스 1카제인 (f91-100) 표준물질 (CatNo.:51872,
ingredia nutritional,FRANCE,LotNo.:P080329-XY51872,
Purity:95.94%)약10㎎(±0.1㎎)을취하여 50㎖의용기에
넣고이동상A,B가혼합된용액 (74:26(v:v))으로녹인다 .
4.1.2 알파에스 1카제인 (f91-100)으로서최종1㎎/㎖의농도가 되도록 한다.
4.1.3 30분간stirring한후표준원액을적절히희석(예;1:20)하여
검량선 작성용 표준용액을 조제한다 .
4.1.4 0.45㎛멤브레인 필터로여과한것을표준용액으로한다 .
4.2시험용액 제조
4.2.1 원료 약20㎎(±0.1㎎)을50㎖의용기에 취하여 이동상A,B가
혼합된용액 (74:26(v:v))으로녹인다 .
4.2.2 유단백 가수분해물로서 2㎎/㎖의농도가 되도록 한다 .
4.2.3 30분간stirring한후0.45㎛멤브레인 필터로여과한것을
시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
- 128 -항목 조건
주입량 100μl
칼럼온 도 37℃
이동상A용매–0.1%trifluoroacetic acidwithwater
B용매–0.1%trifluoroacetic acidwith
acetonitrile
유속 0.8㎖/분
검출기 파장 280 nm표1.고속액체크로마토그래프조건
시간 (분)용매
A(%) B(%)
0 74 26
20.0 66 34
20.1 1 99
25.0 1 99
25.1 74 26
34.0 74 26표2.이동상조건
5.2계산
αS1-casein (f91-100) 함량(㎎/g)=A×B×C/S
 A:시험용액 중αS1-casein (f91-100) 의농도(㎎/㎖)
B:희석용량(㎖)
 C:표준품순도
 S:시료채취량(g)
제4,3,3-97 알파글루칸을 다음과 같이 신설한다 .- 129 -3-97 알파글루칸
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료의 알파글루칸을 효소처리하여 글루코오스형태 로
분해 하고 발색시켜분광광 도계로정량하는 방법이다 .이때글루코오스를 
표준물질으로사용하며최대흡수파장인 505 nm에서 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 분석저울
2.1.2 항온수조
2.1.3pH미터
2.1.4 피펫
2.1.5 시험관
2.1.6 메스플라스크
2.2분석장비
2.2.1 분광광 도계
3.표준물질 및시약
3.1표준물질 및표준용액
3.1.1 글루코스 (Glucose)
- 130 - 분자식:C6H12O6분자량:180.16 CASNo.:50-99-7
 글루코스 CⅡ테스트와코키트에첨부된글루코스 표준액Ⅰ,글루코스 
표준액Ⅱ를사용해서각농도의 글루코스 표준액을 조제
3.1.2 0.5㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)1.0㎖를정확하게 취해 이온교환 수를
더해정확히 10㎖로한다 .
3.1.3 1.0㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)2.0㎖를정확하게 취해 이온교환 수를
더해정확히 10㎖로한다 .
3.1.4 2.0㎎/㎖글루코스 표준액
글루코스 표준액Ⅰ을그대로 사용한다 .
3.1.5 3.0㎎/㎖글루코스 표준액
글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)6.0㎖를정확하게 취해 이온교환 수를
더해정확히 10㎖로한다 .
3.2시약
3.2.1 아밀로글루코시다제 (Amyloglucosidase, fromAspergillusniger,～70units/㎎)
3.2.2 초산 (Acetic acid)
3.2.3 초산나트륨3수화물 (Sodiumacetate trihydrate)
3.2.4 글루코스 CⅡ테스트와코
 [키트의구성]
 (1)완충 액- 131 - -인산완충 액(pH7.1)
 -페놀
 (2)발색제
 -무타로타아제 (돼지신장유래),
 -글루코스옥시다아제 (GOD) (미생물유래)
 -페록시다아제 (POD) (서양와사비 유래)
 -4-아미노안티피린
 -아스코르브산옥시다아제 (AOD) (호박유래)
 (3)글루코스 표준액Ⅰ(2㎎/㎖)
 (4)글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)
3.2.5 이온교환 수(deionizedwater) 
3.2.6 200mM초산염완충 액(pH4.8)
초산나트륨3수화물 13.6g을이온교환 수약480㎖에녹여여기에 초산을 
더해pH4.8로조정해 이온교환 수를더해500㎖로한다 .(냉장보존)
3.2.7 아밀로글루코시다제 용액
아밀로글루코시다제 10㎎을200mM초산염완충 액(pH4.8)에녹여서
10㎖로한다 .(사용 시조제 )
3.2.8 발색시약
발색제1병을완충 액1병과섞어서 조제한다 .(조제후2～10℃에서
1개월 사용 가능)
- 132 -4.시험조작
4.1시료 약100㎎을정밀하게 취해 이온교환 수로녹여정확히 10㎖
로해시료용 액으로한다 .
4.22개의 시험관각각 에시료용액 1㎖를정확하게 취한뒤,이시험관
각각 에200mM초산염완충 액（pH4.8）1㎖를더해서섞고한쪽을
Sample용액 ,다른 한쪽을SampleBlank용액으로한다 .별도로
2개의 시험관각각 에이온교환 수1㎖를정확하게 취한뒤,이시험관
각각 에 200mM초산염완충 액（pH4.8）1㎖를더해서 섞고한쪽을
효소Blank용액 ,다른 한쪽을발색시약Blank용액으로한다
4.3Sample용액 및효소Blank용액각각 에아밀로글루코시다제 용액
2㎖를더해서 혼합한다 .별도로 SampleBlank용액 및발색시약
Blank용액각각 에200mM초산염완충 액（pH4.8）2㎖를더해
혼합한다 .
4.4각각 의시험관에유리구슬 을올려 가볍게마개를 해서 50℃의수욕
중에 1시간반응 시킨다 .
4.51시간경과후,즉시빙냉(氷冷 )해효소반응 을정지시킨다 .
4.6 Sample용액 ,SampleBlank용액 ,효소Blank용액 ,발색시약
Blank용액 및각글루코스 표준액 10μL를각각 별도의 시험관에
취해 글루코스 CⅡ테스트와코에 부속하는 발색시약 1.5㎖를더해
혼합한다 .
4.737℃의수욕중에 5분간반응 시킨다 .- 133 -항목 조건
UV 505 nm4.8발색후각검체에 자외가시흡광 도측정법에 따라 물을 대조로 파장
505 nm에서흡광도를측정한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기기분석조건
5.2계산
글루코스 표준액의흡광 도로부터구한검량선（y=Ax+B)을이용해서
각검체중의 글루코스 Glu）함량을구해알파글루칸 함량을산출한다 .
 [Glu total](㎎/㎖)=(ABSST－ABSEB－B)/A
　　 [Glu free](㎎/㎖)=(ABSSB－ABSCB－B)/A
　　 [Gluglucan](㎎/㎖)=([Glu total]－[Glu free])×4
 알파글루칸 (㎎)=[Gluglucan]×10
 알파글루칸 (㎎/g)=α-glucan (㎎)/M×0.9
A：검량선 의기울기
B：검량선 의y절편
Glu total：총글루코스양
Glu free：프리 글루코스양
Gluglucan：α-glucan 유래의글루코스양
- 134 -ABSST：Sample용액의흡광 도
ABSEB：효소Blank용액의흡광 도
ABSSB：SampleBlank용액의흡광 도
ABSCB：발색시약Blank용액의흡광 도
M：시료중량（g）
0.9：α-glucan(C 6H10O5)n:162.1n 과글루코스 nC 6H12O6:180.1n 의분자량비
제4,3,3-98 0.19- 알부민을 다음과 같이 신설한다 .
3-98 0.19- 알부민
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 알부민을 고속액체크로마토 그래프/자외부
흡광광 도검출기를 사용하여 분석하는 방법으로최대흡수파장인 280 nm에서
검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 자외부흡광광 도검출기- 135 -2.2.3 CapcellpaKC8, 4.6×250mm,5㎛(Shiseido 사)또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 소맥알부민표준품
※ 0.19- 알부민은 상용화된표준품이없으므 로 제조사 (NISSIN
PHARMINC:25,KANDA-NISHIKI-CHO 1-CHOMO,
CHIYODA-KU,TOKYO,101-8441JAPAN)에서 제공한 0.19- 알
부민 함량이알려진 원료를 소맥알부민표준품으로사용
3.2일반시약
3.2.1삼불 화초산용액 (Trifluoroacetic acid)
3.2.2 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 소맥알부민표준품 일정량을100㎖용메스플라스크에 정밀히달아
0.1%삼불 화초 산용액 (TFA)90㎖를가하여 1시간동안교반 하여
완전용해후100㎖로채운 다.이를 0.45㎛멤브레인 필터로여과
한것을적절히희석하여검량선 작성표준용액 (100, 200, 300㎎
- 136 -항목 조건
주입량 20μL
컬럼온 도 50℃
이동상A용액 물:삼불 화초산용액 (TFA)=1000:1
B용액 아세토니트릴:물:TFA=800:200:1
A용액:B용액=65:35
검출기파장 280 nm
유속 0.8㎖/분/㎖)으로한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료 0.1～3g을100㎖용메스플라스크에 정밀히달아0.1%삼불
화초산용액 (Trifluoroacetic acid) 90㎖를가하여 1시간동안교반 하여 
완전용해후100㎖로채운 다.이를 0.45㎛멤브레인 필터로여과
한것을시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
※분석시간은약30분이며,분석종료후B용액으로15분간흘려불순물을제거한다.
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액을 20㎕주입하여앞의조건에 따라 시험한다 .
표준용액 중0.19- 알부민면적 에의해구한검량선 에따라 시험용액 
중0.19- 알부민의농도를구하고 다음 식에 따라 0.19- 알부민 함량
을구한다 .- 137 -0.19- 알부민 함량(㎎/g)= C×V
× 1,000
W
 C:시험용액 중0.19- 알부민 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
제4,3,3-99 L-글루타민을 다음과 같이 신설한다 .
3-99 L-글루타민
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 L-글루타민을 고속액체크로마토 그래프
분석하는 방법으로형광검 출기를 이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 0.45μm멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.2.2 ODS C18컬럼(4.6×250mm,5㎛)또는 이와동등한것
2.2.3형광검 출기 (FLD)
3.표준물질 및일반시약
- 138 -3.1표준물질
3.1.1 L-Glutamine
분자식:C5H10N2O3, 분자량:146.15, CASNo.56-85-9
3.2일반시약
3.2.1 수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
3.2.2붕산(Boric acid)
3.2.3 OPA(O-Phthaldialdehyde)
3.2.4 2-Mercaptoethanol
3.2.5 증류수 (Distilledwater)
3.2.6 테트라하이드로푸란 (Tetrahydrofuran, THF)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 L-글루타민 표준품 일정량을증류수에녹여서 1㎎/㎖의농도로
조제하여 표준원액으로한다 .표준원액을적절히희석한후0.45μ
m멤브레인 필터로여과하여검량선 작성용 표준용액으로한다 .
(수용액 상에서는쉽게분해될수있으니사용 전에 조제한다 )
4.2시험용액
4.2.1 Potassiumborate 용액의 조제
 61.8g의Boric acid와52.5g의Potassiumhydroxide를증류수 일정량에
용해하고KOH용액으로pH를10.4로조절한후2L로정용한다 .- 139 -4.2.2 OPA(O-Phthaldialdehyde) 용액의 조제
 OPA 0.25g을바이알에넣고메탄올을 3㎖넣어OPA 를완전히 용해
하고 2-Mercaptoethanol 0.4㎖을첨가하여 사용한다 .(냉장상태에서
일주일까지보관 가능 )
4.2.3 시료 약50㎎을정밀히달아증류수에 용해한후50㎖로정용한다 .
이용액을 증류수로 10배로희석하고 0.45μm의멤브레인 필터로
여과한후시험용액으로한다 .(수용액 상에서는쉽게분해될수
있으니사용 전에 조제한다 )
4.3시험조작
4.3.1 주입량및유도체 조건
4.3.1.1 자동주입기 사용 (injectorprogramme사용 시)
4.3.1.1.1 바이얼2번(Potassiumborate 용액 )에서 200㎕/min의속도
로5.0㎕를뽑는다 .
4.3.1.1.2 시료에서 200㎕/min의속도로 1.0㎕를뽑는다 .
4.3.1.1.3 공기 중에서 500㎕/min의속도로 6.0㎕를섞는다 .(6회반복)
4.3.1.1.4 0.5min기다린다 .
4.3.1.1.5 바이얼3번(물)에서 0.0㎕를뽑는다 .(바늘세척)
4.3.1.1.6 바이얼1번(OPA 시약 )에서 200㎕/min의속도로 1.0㎕를뽑
는다 .
4.3.1.1.7 공기 중에서 500㎕/min의속도로 7.0㎕를섞는다 .(10회반복)
4.3.1.1.8 바이얼3번(물)에서 0.0㎕를뽑는다 .(바늘세척)
- 140 -4.3.1.1.9 주입한다 .
4.3.1.2 자동주입기 사용 (injectorprogramme미사용 시)
 4.3.1.2.1 시약 및시액의 조제②OPA(O-Phthaldialdehyde) 용액의
조제에서 조제된OPA 용액 전량을Potassiumborate 용
액으로50㎖정용한다 .(혼합한 OPA 용액은냉장보관 하며
빛에노출 시분석능이급격히떨어진다 .)
위에서 제조된용액과 표준용액 (시험용액 )을동량으 로혼
합되도록 조작하여 기기에 주입한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건 (예)
항목 조 건
주입량 10μL
검출기 파장 여기파장:340 nm,측정파장:450 nm
칼럼온도 10℃
이동상A용액:Tetrahydrofuran(THF)=1870:130
※A용액은 35.5g의Na2HPO 4・H2O와13.4g의Sodium
acetate・3H 2O를증류수 일정량에용해한후pH를7.0
조절하고 2L로정용하여 사용한다 .
유속 1.0㎖/분
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액동일한 양을 주입하여앞의시험조작에- 141 -따라 시험하여 다음과 같이 L-글루타민의 함량을구한다 .
L-글루타민 함량(㎎/g)= A×B
× C×1
S 1,000
A:시험용액중 L-글루타민의농도(μg/㎖)
B:시험용액의 전량(㎖)
S:시료채취량(g)
C:희석배 수
제4,3,3-100 라이코펜 (lycopene) 을다음과 같이 신설한다 .
3-100 라이코펜 (lycopene)
1.시험방법의 요약
본시험법은염화메틸렌을 이용하여 시료 중all-trans- 라이코펜을 추출
하고 고속액체크로마토그래피/자외부흡광광 도검출기를 이용하여 정량분
석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (50㎖,100㎖)
2.1.2 여과용멤브레인 필터
2.1.3 액체크로마토그래피용 유리병
2.1.4 용매용일회용실린지
2.1.5 초음파 진탕기
- 142 -
2.1.6 시험관
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 분광광 도계
2.2.3 자외부흡광광 도검출기
2.2.4옥타데실실릴화한컬럼(4.6×250mm)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 all-trans-lycopene(Ψ,Ψ-carotene,2,6,10,14,19,23,27,31-Octa methyl
 -dotriaconta-2,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,30-tridecaene)
분자식:C40H56, 분자량:536.87, CASNo.:502-65-8
3.2일반시약
3.2.1 부틸히드록시톨루엔(Butylatedhydroxytoluene, HPLCgrade)
3.2.2 디이소프로필아민 (Diisopropylamine)
3.2.3 메탄올(Methanol, HPLCgrade)
3.2.4 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
3.2.5염화메틸(Dichlromethane, HPLCgrade)
3.2.6 헥산 (n-Hexane, HPLCgrade)- 143 -4.시험과정
4.1부틸히드록시톨루엔시액 조제
4.1.1 500㎖의용량플라스크에 부틸히드록시톨루엔2.5g을넣고염화메
틸렌으로정용한다 .빛을차단하여 4℃에보관할 경우3개월까지
사용이 가능하다 .
4.시험과정
4.2희석액조제
4.2.1 1ℓ의용량플라스크에 아세토니트릴 ,메탄올,염화메틸렌,헥산
및부틸히드록시톨루엔시액을각600:150:150:100:0.5(v/v% )비율
로혼합하고 디이소프로필에틸아민을 0.05%가되도록 가하여잘
섞은것을희석액으로한다 .
4.3표준원액의 조제 (A용액 )
4.3.1 100㎖의용량플라스크에 표준물질이 6～8㎎이되도록 취하고염
화메틸렌10㎖을가하여 2분초음파 (sonification) 처리한다 .
4.3.2 표준물질이완전히 용해된것을확인하고희석액으로정용한다 .
4.4표준용액의 조제 (B용액 )
4.4.1 100㎖의용량플라스크에 표준원액 A2㎖를취하고 알코올과
 부틸히드록시톨루엔시액 1:1(v/v% )로섞은액을 20㎖를가한
후n-헥산으로정용한다 .
4.4.2 분광광 도계472㎚에서흡광 도를측정한다 .
- 144 -표준용액 A의
농도 (㎍/㎖)=Ax
×a
×b
3450 s c4.4.3위의과정을 3회반복측정값의평균값을흡광 도값이라 한다 .
4.4.4 별도로 알코올과 부틸히드록시톨루엔시액 및n-헥산을
 10:10:80(v/v% )으로혼합한 액을 대조액으로사용한다 .
Ax:표준용액B를3회측정한흡광 도값
3,450:n-헥산 중472㎚분광광 도계흡광계 수
s:표준물질채취량(g)
a:표준원액 A최종 정용량(㎖)
c:표준원액 A채취량(㎖)
b:표준원액B최종 정용량(㎖)
4.2시험용액의 조제
4.2.1적당량의시료를달아100㎖부피플라스크넣고부틸히드록시
톨루엔시액 10㎖와염화메틸렌30㎖을넣는다 .
4.2.2 시료를잘흔들 어추출한후초음파진탕기로 1분간더추출한다 .
4.2.3희석액으로표선까지맞춘 다.
4.2.4 0.45μm멤브레인 필터로여과한 용액을 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석- 145 -항목 조건
주입량 10㎕
칼럼온 도 40℃
이동상Acetonitrile:Methanol:Dichloromethane:n-Hexane:
Diisopropylethylamine=(475:475:25:25:0.05,v/v)
유속 1㎖/분
검출기 파장 472 nm표1.고속액체크로마토그래프조건
all-trans- 라이코펜 함량(㎎/g) =A×B× C
D×1,0005.2계산
5.2.1 all-trans- 라이코펜 표준용액의 피크면적으 로검량선 을작성하고 ,
검량선 식을 이용하여 시험용액 중의 all-trans- 라이코펜의농도를
구한후아래식을 이용하여 all-trans- 라이코펜 함량을계산한다 .
A:시험용액의 전량(㎖)
B:희석배 수
C:시험용액중의 all-trans- 라이코펜의농도(μg/㎖)
D:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
제4,3,3-96 글루코실 세라마이드 (Glucosylceramide)을다음과 같이
신설한다 .
3-96 글루코실 세라마이드 (Glucosylceramide)
- 146 -1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 글루코실 세라마이드 (Glucosylceramide)을
고속액체크로마토 그래프분석하는 방법으로ELSD검출기를 이용하여
정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (10㎖)
2.1.2삼각 플라스크 (100㎖)
2.1.3 분액여두(200㎖)
2.1.4 0.45μm멤브레인 필터
2.2분석장비
2.1.1 고속액체크로마토 그래프
2.1.2Inertsil 100A (3.0×150mm,5um,GLscience) 또는 이와동등한것
2.1.3 증기화광산란검출기 (ELSD,EvaporativeLightScatteringDetector)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 글루코실 세라마이드 (Glucosylceramide)
(제조사:UnitikaLtd, 23Uji-Kozakura,Uji-Shi,Kyoto611-0021,Japan)
3.2일반시약- 147 -3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
3.2.2 메탄올(Methanol)
3.2.3 수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
3.2.4 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 10㎖용량플라스크에 Glucosylceramide표준물질 10㎎을정밀하게 
달아클로로포름:메탄올=9:1혼합액 일정량을넣어초음파처리하여
방냉후정용한것(1.0㎎/㎖)을표준원액이라 한다 .표준원액을
적절히희석하여 0.1,검량선 작성용 표준 용액을 조제한다 .
4.2시험용액
4.2.1 100㎖삼각 플라스크에 시료 약1g을취한후0.4N메탄올성KOH
용액 50㎖을첨가하여 상온에서 2시간교반 하여 알칼리 처리를
한다 .
4.2.2 200㎖분액여두에알칼리 처리액을옮긴후증류수 40㎖로삼각 
플라스크를 세척하여 분액여두에옮긴후다시 클로로포름 45㎖
로삼각 플라스크를 세척하여 분액여두로옮긴다.
4.2.3 분액여두를약10분간진탕한후정치시켜층을분리시킨후
클로로포름층 을취한다 .
4.2.4위클로로포름 추출과정을 2회반복하여회수된클로로포름층 을
- 148 -항목 조건
시료주입량 10㎕
가스 유량 2L/min
칼럼온 도 37℃
이동상A용액 -클로로포름
.B용액 -클로로포름:메탄올=1:1혼합액
유속 0.6㎖/분
검출기 파장 ELSD
검출기 drift tube온도 70℃표1.고속액체크로마토그래프조건
시간 (분) A용액 (%) B용액 (%)
Initial 99 1
5 97 3
10 35 65
22 1 99
27 99 1합한다 .
4.2.5 클로로포름 을감압농축 을통하여농축 한다 .
4.2.6농축된 잔류물을 클로로포름:메탄올=9:1혼합액에 용해시켜20㎖
로정용한후0.45μm멤브레인 필터로여과한것을시험용액으로
한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표2.이동상조건- 149 -글루코실세라미드
함량(㎎/g)=시험용액의
농도(㎎/㎖)×시 험 용 액 의 전량(㎖)
× 1,000
시료채취량(㎎)5.2계산
5.2.1 표준용 액및시험용액동일한 양을 주입하여앞의시험조작에따라
시험하여 다음과 같이 글루코실세라미드 함량을구한다 .
제4,3,3-102 퀘세틴 (quercertin) 을다음과 같이 신설한다 .
3-102 퀘세틴 (quercertin)
3-102-1 퀘세틴 (quercertin)( 제1법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 메탄올을 이용하여 시료 중 퀘세틴을충분히 추출하여
액체크로마토그래프를 통해 분석하는 방법으로 자외선흡광광 도검출기 를
이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 HPLC 용유리병
- 150 -2.1.3 용매용일회용실린지
2.1.4 여과용멤브레인필터(PTFE,0.45μm)
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 다이오드어레이검출기(Diode ArrayDetector)
2.2.3 Column:Sunfire™RP-C18(5 μm,4.6x250mm)또는 이와
동등한것.
2.2.4 Guard Column:Sunfire™RP-C18 (5μm,4.6x20mm)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 퀘르세틴 (Quercetin)
 분자식:C15H10O7,분자량:302.24, CASNo.:117-39-5
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol,J.T.Baker,HPLCgrade)
3.2.2포름 산(Formicacid,Extragrade)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
3.2.4 에틸아세테이트 (ethylacetate)
4.시험과정
4.1표준용액 제조- 151 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 35℃
이동상A용매–1%Formicacid:MeOH=0.38:0.62
B용매–메탄올(MeOH)
유속 1㎖/분
검출기 파장 365 nm표1.고속액체크로마토그래프조건4.1.1 표준품 약10.0㎎을정밀히달아10㎖용량플라스크에넣고100%
메탄올에녹여표준원액을 제조하며,이를적절히희석하여 표준
용액으로사용한다 .
4.2시험용액 제조
4.1.1 시료 10g을물50㎖에용해시켜분획깔대기에넣고여기에
에틸아세테이트 (ethylacetate) 100㎖를넣고흔들어10분정치시킨
후에틸아세테이트층을모은다 .이과정을 2회더반복시행한다 .
4.1.2 모두모은 에틸아세테이트 용액 300㎖을농축플라스크에넣어40℃
로감압건조한다 .
4.1.3 건조물에 메탄올5㎖을넣어녹인후10㎖메스플라스크옮기고
이후건조물에 메탄올3㎖,2㎖을더넣어녹인후메스플라스크
에넣어표선까지채운 다.
4.1.4 0.45㎛syringefilter 로여과하여검액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
- 152 -××××시간 (분)용매
A(%) B(%)
0 100 0
7 100 0
10 0 100
15 0 100
16 100 0
20 100 0표2.이동상조건
5.2계산
A:시험 용액 중퀘세틴의농도(ug/㎖)
B:시험 용액의 전량(㎖)
S:시료채취량(㎎)
P:표준품의순도
n:희석배수
3-97-2 퀘세틴 (quercertin)( 제2법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 메탄올을 이용하여 유제품 시료 중퀘세틴을충분히 추출하여
액체크로마토그래프를 통해 분석하는 방법으로 자외선흡광광 도검출기 를
이용하여 정성 및정량분석을한다 .- 153 -2.장비와재료
2.1. 실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용실린지
2.1.2 여과용멤브레인 필터및디스크형멤브레인 필터
2.1.3 원심분리관
2.1.4 원심분리기
2.1.5 250㎖둥근바닥플라스크
2.1.6KD수기
2.1.7 감압농축 기
2.1.8Vortex
2.1.9 500㎖분획여두
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외선흡광광 도검출기 (UVDetector)
2.2.3 Column:Sunfire™RP-C18(4.6x250mm,5μm)또는 이와동
등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1Quercetin(Sigma-Aldrich,Q4951,≥purity95%)
3.2일반시약
- 154 -3.2.1 초산 (Acetic acid, HPLCgrade≥purity99.9%)
3.2.2 증류수 (DistilledWater)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile:TEDIA,HPLCgrade)
3.2.4 초산에틸(EthylAcetate,Extragrade)
3.2.5 메탄올(Methanol, HPLCgrade)
3.2.6 황산나트륨(SodiumSulfate, ultragrade)
4.시험과정
4.1시약제조
4.2표준용액의 조제
4.2.1 퀘세틴 표준품 10㎎을정밀히측정한다 .
4.2.2 정밀히측정한 표준물질을 100㎖메스플라스크에넣는다 .
4.2.3 메탄올을넣어메스플라스크의 표선까지채워넣는다 .
4.2.4 이용액을 표준용액으로하여 메탄올로희석하여각각의표준용액 
농도3.12∼50㎍/㎖이되게검량선 을작성한다 .
4.3. 시험용액 조제
4.3.1 퀘세틴으로10∼30㎍/g에상당하는 양(제품 1병,140㎖)의무게
를측정하여 원심분리관(corningtube)최대용량의50%이하가
되게끔분주한다 .
4.3.2 분주량과동량 의ethylacetate 를가하여 1분이상 강하게vortex
한다 .- 155 -4.3.3 6,000 rpm(RCF로4,500xg이상 )20min조건으로원심분리
한후,맑은상층을중간층 이혼입되지않도록 주의하며500㎖
separation funnel 에모은다 .Ethylacetate 를가하여 추출하는 과
정을 3회실시한다 .
4.3.4 모은 상층은sodiumsulfate 를통과시켜수분을 제거하며250㎖
round-bottomflask에옮긴후50℃bath의evaporator 에서최대
한농축 한다 .
4.3.5잔류물을KD수기 (KD-1) 에옮기고잔류물이담겼던 
round-bottomflask를적량 (3㎖가량)의ethylacetate 로세척
하여KD수기 (KD-1) 에담는과정을 3회반복한다 .이어 50℃
bath의evaporator 를이용하여 ethylacetate 를완전히 제거한
다.이때시료가넘치지않도록 주의하여야한다 .
4.3.6잔류물이담겼던 round-bottomflask를적량 (3㎖가량)의
methanol로세척하여 evaporator 로ethylacetate 를완전히 제거
한KD수기 (KD-1) 에옮기고 약하게 (넘치지않도록 )15초간
vortex한후50℃bath에서 1분이상 정치한후얻어지는 상층을
새로운KD수기 (KD-2) 로옮기는 과정을 3회실시한다 .이어 5
0℃bath의evaporator 를이용하여 2㎖이하로농축 한다 .이때
시료가넘치지않도록 주의하여야한다 .
4.3.7잔류물에methanol을가하여 2㎖로제조한후0.45μm멤브레
인필터로여과하여얻은여과액을 시험용액으로한다 .
- 156 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 25∼35℃
이동상A:2%Acetic acid
B:2%Acetic acid/45%Acetonitrile 수용액
유속 1㎖/분
검출기 파장 355 nm표1.고속액체크로마토그래프조건
시간 (분) 유속용매
A(%) B(%)
0 1 50 50
18 1 0 100
20 1 50 50
22 1 50 50표2.이동상조건5.분석및계산
5.1기기분석
5.2계산
5.2.1 시험용액의면적값을표준검량선 산출식에 대입한다 .
5.2.2 나온값을다음 식에 대입한다 .
wCBAmLug Quercetin ´´=)/(의농도
 A:[7.1] 에서 나온검액의농도
B:1회섭취량(㎖)
 C:최종 시험용액 용량(㎖)
W:희석배 수- 157 -5.2.3 헛개나무과병추출분말 함유 유음료 1회섭취량중퀘세틴 함량
CBA´=
 A:[7.2] 에서 나온값
B:1회섭취량중헛개나무과병추출분말 함량(2.46g)
 C:1회섭취량(㎖)
제4,3,3-103 노다케닌 (nodakenin) 을다음과 같이 신설한다 .
3-103 노다케닌 (nodakenin)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 노다케닌 (nodakenin) 을고속액체크로마토
그래프분석하는 방법으로자외부흡광광 도검출기를 이용하여 정성 및
정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×250mm(Shiseido) 또는 이와동등한것
- 158 -표준용액 노다케닌농도(㎎/100㎖)
1 0.1000
2 0.2500
3 0.5000
4 1.0000
5 5.0000
순도(%) 1003.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 노다케닌 (nodakenin)
분자식:C20H24O9,분자량:408
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조
각표준물질을 80%메탄올에녹여아래와 같이 제조한다 .
 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25배의80%메탄올을 가하여완전히
용해한후시험용액으로사용하며,시험용액을 0.45μm필터로
여과하여 고속액체크로마토그래프로 분석함- 159 -항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상A:0.1%phosphoric acid inWater
이동상B:0.1%Phosphoric acid inAcetonitrile
검출기 파장 230 nm
유속 1㎖/분
Time Mobile phase A(%) Mobile phase B(%)
0 100 0
30 75 25
33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100
검체중 함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×시험용액총량나)×희석배수
검체채취량다)5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
표2.이동상조건
5.2계산
5.2.1 노다케닌의검체중함량은다음식에 따라계산한다 .
가)시험용액의농도값(단위:㎎/100㎖)
나)검체(액상 )를80%메탄올로 용해시킨후시험용액총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
- 160 -제4,3,3-104 피오니플로린 (paeoniflorin) 을다음과 같이 신설한다 .
3-104 피오니플로린 (paeoniflorin)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 피오니플로린 (paeoniflorin) 을고속액체크
로마토 그래프분석하는 방법으로자외부흡광광 도검출기를 이용하여 정성
및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×250mm(Shiseido) 또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 피오니플로린 (paeoniflorin)
분자식:C23H23O,분자량:480.47, CASNo.:23180-57-6
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)- 161 -표준용액 피오니플로린농도(㎎/100㎖)
1 0.2010
2 0.5025
3 1.0050
4 2.0101
5 10.0503
순도(%) 99.5
항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상A:0.1%phosphoric acid inWater
이동상B:0.1%Phosphoric acid inAcetonitrile
검출기 파장 230 nm4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조
각표준물질을 80%메탄올에녹여아래와 같이 제조한다 .
 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25배의80%메탄올을 가하여완전히
용해한후시험용액으로사용하며,시험용액을 0.45μm필터로
여과하여 고속액체크로마토그래프로 분석함
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
- 162 -유속 1㎖/분
Time Mobile phase A(%) Mobile phase B(%)
0 100 0
30 75 25
33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100
검체중 함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×시험용액총량나)×희석배수
검체채취량다)표2.이동상조건
5.2계산
5.2.1 피오니플로린의검체중함량은다음식에 따라계산한다 .
가)시험용액의농도값(단위:㎎/100㎖)
나)검체(액상 )를80%메탄올로 용해시킨후시험용액총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
제4,3,3-105 클로로겐산 (chlorogenic acid) 을다음과 같이 신설한다 .
3-105 클로로겐산 (chlorogenic acid)
1.시험방법의 요약- 163 -본시험법은 시료로부터추출한 클로로겐산 (chlorogenic acid) 을고속액체
크로마토 그래프분석하는 방법으로자외부흡광광 도검출기를 이용하여
정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×250mm(Shiseido) 또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 클로로겐산 (chlorogenic acid)
 분자식:C16H18O9,분자량:354.31, CASNo.:327-97-9
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조
각표준물질을 80%메탄올에녹여아래와 같이 제조한다 .
- 164 -표준용액 클로로겐산 (chlorogenic acid)농도(㎎/100㎖)
1 0.1171
2 0.2929
3 0.5857
4 1.1714
5 5.8571
순도(%) 98
항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상A:0.1%phosphoric acid inWater
이동상B:0.1%Phosphoric acid inAcetonitrile
검출기 파장 230 nm
유속 1㎖/분
Time Mobile phase A(%) Mobile phase B(%)
0 100 0
30 75 25 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25배의80%메탄올을 가하여완전히
용해한후시험용액으로사용하며,시험용액을 0.45μm필터로
여과하여 고속액체크로마토그래프로 분석함
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
표2.이동상조건- 165 -33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100
검체중 함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×시험용액총량나)×희석배수
검체채취량다)
5.2계산
5.2.1 클로로겐산의 체중함량은다음식에 따라계산한다 .
가)시험용액의농도값(단위:㎎/100㎖)
나)검체(액상 )를80%메탄올로 용해시킨후시험용액총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
제4,3,3-106 TMC A(Trimethoxycinnamicacid) 을다음과 같이 신설한다 .
3-106 TMCA(Trimethoxycinnamicacid)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 TMCA 를고속액체크로마토 그래프분석하는 
방법으로자외부검출기를 이용하여 정량분석을한다 .
- 166 -2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (25㎖,100㎖)
2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래프
2.1.2YMCJ'sphereODS H80(C 185㎛,4.6mm× 15cm)또는 이와동등한것
2.1.3 자외부검출기 (UV)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 TMCA
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준품 TMCA 0.250g을정밀히달아25㎖의용량플라스크에넣고
70%메탄올에 용해시킨후표선까지채운 것을표준원액으로한다 .
표준원액 0.5, 1,3및5㎖를정확히 취하여각각 100㎖의용량플라
스크에옮겨 넣은것을표준용액으로한다 .- 167 -항목 조건
칼럼온 도 40℃
이동상A액-50mM이수소인산나트륨용액 (NaH 2PO 4)
B액-아세토니트릴
검출기 파장 293 nm
유속 1㎖/분4.2시험용액
4.2.1검체200㎎을정밀히달아70%메탄올을 정확히 가하여 20㎖로
한다음완전히 용해시키고0.45㎛멤브레인 필터로여과한것을
시험용액으로한다 .(여액의최소4㎖는제거한후사용한다 .)
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕를주입하여앞의조건에 따라 시험한
다.표준용액 중TMCA 는면적 에의해구한검량선 을사용하여
시험용액 중TMCA농도를구하고 ,다음 식에 따라검체중
TMCA 함량(%)을구한다 .
<계산식>
 TMCA 함량(%)=C×V/W ×1/10,000
 C:시험용액중의 TMCA농도(ppm )
V:시험용액의 전량(㎖)
- 168 -W:시료채취량(g)
 1/10,000:단위환 산- 169 -부칙
제1조(시행일 )이고시는 고시한날부터1년후시행한다 .
제2조(적용례 )이고시는 이고시 시행 이후최초로 제조·가공 또는 수입
한건강기능식품 (원료를포함한다 )부터적용한다 .
제3조(경과조치 )①이고시 시행 당시검사가접수되어 진행 중인 사항
에대하여는종전의 규정에 따른다 .
②이고시 시행 당시종전의 규정에 따라 제조․가공․수입 (선적 일을 기
준으로한다 )한건강기능식품은종전의 규정에 따른다 .이경우해당 건강
기능식품은 유통기한까지판매할 수있다 .
- 170 -현행 개정안
제3.개별 기준 및규격
1.영양소
1-1～1-28( 생략)
2.기능성 원료
2-1～2-60( 생략)제3.개별 기준 및규격
1.영양소
1-1～1-28(현행과 같음 )
2.기능성 원료
2-1～2-60(현행과 같음 )
<신 설> 2-61 정어리펩타이드
1)제조기준
(1)원재료:정어리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를가열하여pH조정후효소
분해하여 원심분리하고 활성탄
처리하여 분획,여과 ,살균,분
무건조하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:바릴티로신 50.0±25(㎎
/100g),펩타이드 650.0 이상 (㎎
/g)이상 함유하고 있어야함
2)규격
- 171 -(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)바릴티로신 ,펩타이드
 (가)원료성 제품:표시량이상
(펩타이드에 한함 )
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):5.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:혈압 이높은사
람의혈압 을조
절하는데 도움
을줄수있음
(2) 일일섭취량:바릴티로신으로
서250～400㎍
- 172 -(3)섭취시주의사항
1일바릴티로신섭취량은6㎎을
초과하지않아야함
4)시험법
(1)바릴티로신:제4.3-78 바릴
티로신
(2)펩타이드:제4.3-79 정어리
펩타이드 중펩타이드
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-62 참당귀뿌리추출물
1)제조기준
(1)원재료:참당귀 (Angelicagig
asNakai)의뿌리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를 95%의 주정으로 추출하
고 여과 ,농축 ,건조하여 제
조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 ):데- 173 -커신 (Decursin) 을126㎎/g이
상,함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)데커신 (Decursin)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/kg):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:노화로저하된
인지능력개선에도움을줄수
- 174 -있음
(2)일일섭취량:데커신으로서 800
㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)소화불량 ,속쓰림 등이 나
타날수있음
 (나)혈액응고방지제 또는혈당강
하제를 복용하는 사람은의사
의상담후섭취
4)시험법
(1)데커신:제4.3-80 데커신
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-63 초록입홍합추출오일
1)제조기준
(1)원재료:초록입홍합 (Perna ca
naliculus )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를고압처리후슬러 리처리하- 175 -여동결 건조하고 분쇄하고 초
임계 추출하여 D-α-Tocopher
ol을혼합하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 ):EP
A,DHA, DPA 및α-리놀렌산
의합으로240∼440㎎/g이
상함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없
어야함
(2)EPA, DHA, DPA, α-리놀렌산
의합
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/kg):1.0이하
- 176 - (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:관절건강에 도움
을줄수있음
(2) 일일섭취량:초록입추출오일
로서 200㎎
(3)섭취시주의사항
혈전용해제를 복용하는 사람은의
사와상담후섭취
4)시험법
(1)EPA, DHA, DPA, α-리놀렌산
:제4.3-32 지방산
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-64 히비스커스등복합추출물
1)제조기준
(1)원재료- 177 - (가)키토산
 (나)키토올리고당 (평균분자량
15,000±5,000)
 (다)히비스커스꽃물추출물 (히
비스커스꽃물 추출물 
80%,말토덱스트린 20%)
 (라)L-carnitine
(2)제조방법
 (가)키토산:키토산 가온,교반 ,
용해 ,농축 ,분말
 (나)키토올리고당:용해 ,효소분
해,한외여과 ,염제거,농축 분
말화
 (다)히비스커스꽃물추출물:
원료건조 ,열수추출 ,농축 ,여
과,말토덱스트린첨가,건조
(라) L-carnitine :
DL-carnitine amide에서
전기투석 ,분멸결 정,황산
첨가,가수분해 공정 등을
거쳐 제조
- 178 -(마)키토산 25.9%,키토올리고
당13.0%,히비스커스꽃
물 추출물 41.6%,
L-carnitine 19.5%의비율
로 혼합 하여 제조하여야
함
(3)기능성 분 (또는 지표 성분 )의함량:
키토산 27% 이상 ,
(+)-allo-hydroxycitric acid
lactone 7.5% 이상 ,
L-carnitine 17.5%이상 함유하
고있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없
어야함
(2)키토산 , (+)-allo-hydroxy
citric acid lactone, L-carnitine
(가)원료성 제품:표시량이상
(나)최종 제품:표시량의80%- 179 -이상
(3)중금속
 (가)납(㎎/kg):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/kg):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/kg):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/kg):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:체지방 감소에
도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:히비스커스등복
합추출물로서 2,079㎎
(3)섭취시주의사항
 체지방 감소는반드시 식사조절
과운동 이병행되어야효과적임
4)시험법
(1)키토산:제4.3-29키토산 (총
글루코사민으로)
(2)HCA lactone:제4.3-81 HC
- 180 -A(Hydroxycitric acid) lactone
(3)L-카르니틴:제4.3-82 L-카
르니틴
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-65 황금추출물등복합물
1)제조기준
(1)원재료
(가)황금 (Scutellariabaicalensis ,
뿌리 )
(나)아선약(Uncariagambir,잎,
가지 )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
의분말을각각 제조 하여 황금
물추출 분말 80%,아선약물
추출 분말 20%의비율로혼합 
제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:바이칼린으로 153∼207
㎎/g,카테킨으로15∼45㎎/g- 181 -이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)바이칼린 ,카테킨
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종제품:표시량의80～120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:관절건강에 도움
을줄수있음
(2) 일일섭취량:황금 등복합물
로서 1,100㎎
(3)섭취시주의사항
- 182 -관절관련 질환의치료목적으 로
사용될수없음
4)시험법
(1)L-바이칼린:제4.3-83 바이
칼린
(2)카테킨:제4.3-84 카테킨
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-66 프랑스해안송껍질추출물
1)제조기준
(1) 원재료:프랑스해안송 (P inus
pinaster )껍질
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를주정을 이용하여연속 추출
한후농축 ,분획,초막여과분
리,정제하여 건조 하여 제조하
여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:프로시아니딘 600～800- 183 -㎎/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2) 카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,
페룰 산을 확인하여야함
(3)프로시아니딘
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종제품:표시량의80～12
0%
(4)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:활성산소 제거
- 184 -와혈소판응집 
억제 에 도움을
줄수있음
(2)일일섭취량
(가)인체에 유해한 활성산소를
제거하는데 도움을줄수
있음:프랑스해안송껍질추
출물로서 50-300 ㎎
(나)혈액의흐름을방해할수있는
혈소판응집 을억제하는데 도움
을줄수있음:프랑스해안
송껍질추출물 로서 100-300
㎎
(3)섭취시주의사항
(가)임산부와12세이하의 어린이
는섭취전의사와의상담이
필요
(나)수술전후에는섭취에 주의
할것
4)시험법- 185 -(1) 카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,
페롤 산:제4.3-85 프랑스해
안송껍질 추출물 HPLC 시험
법
(2)프로시아니딘:제4.3-86 프
로시아니딘
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-67 라피노스
1)제조기준
(1) 원재료:사탕무 (Betavulgaris
var.saccharifera )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를여과하여 이온크로마토그래
피후농축 ,조결정화하여 분리 ,
용해 ,여과 ,결정화 ,분리 ,건조 ,
분쇄하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:라피노스 980.0 ㎎/g이상
함유하고 있어야함
- 186 -2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)라피노스
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.3이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.3이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용
(가)장내 유익균의 증식과 유해
균의 억제에 도움을줄수
있음- 187 -(나)배변 활동을원활히 하는데 도
움을줄수있음
(2)일일섭취량:라피노스로서 3～5
g
(3)섭취시주의사항
섭취량이상섭취시 설사를 유발
할수있음
4)시험법
(1)라피노스:[별표 4]참조
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-68 피브로인효소가수분해물
1)제조기준
(1)원재료:누에고치
(2) 제조방법:상기 (1)의원재료
를정련(세리신 단백질 제거)하
여중성염용해후탈염․여과
한뒤효소가수분하여살균,농
축,동결 건조 하여 제조하여야
- 188 -함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:티로신 7.0㎎/g이상 ,알
라닌 8.0㎎/g이상 함유하고
있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)티로신 ,알라닌
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성- 189 -3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:기억력개선에
도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:피브로인효소가
수분해물로서 200～400㎎
(3)섭취시주의사항
(가)성장기 어린이의 기억력증
진효과가 아님
(나)임산부 및수유여성은섭취
에주의
4)시험법
(1) 티로신 ,알라닌:제4.3-22
아미노산<유리아미노산>
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-69 올리브잎주정추출물
1)제조기준
(1)원재료:올리브 (Olea europaea L.)
- 190 -잎
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를분쇄하여 80%주정추출 ,여
과,농축 한뒤아라비아검을첨
가하여살균(121℃,30초),분무
건조 ,이산화규소를첨가하여
혼합 하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:Oleuropein 140～210㎎
/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)Oleuropein
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):5.0이하- 191 - (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):2.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:건강한혈압 의
유지 에도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:올리브잎주정추
출물로서 1,000㎎
(Oleuropein으로서 90～180㎎)
(3)섭취시주의사항
혈압 약을 복용하는 사람은의사
와상담후섭취
4)시험법
(1)올리유로핀:제4.3-87 올리
유로핀
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
- 192 -<신 설> 2-70 분말한천
1)제조기준
(1) 원재료:우뭇가사리 (Gelidium
amansil Lamourous )
(2)제조방법:상기 (1)의원재 료
를 1～2%가성소다 ,70℃로
알칼리처리하고 ,수세 ,산처리
(황산으로pH6.5～7.5가되게
중화 )하여 자숙후추출,여과,
응고,탈수,세절,건조,분쇄하여
제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:총식이섬유80.0%이상
함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)총식이섬유- 193 - (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)열탕불용해잔사물 (%):4.0이
하
(4)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.3이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.3이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:배변 활동에도움
을줄수있음
(2)일일섭취량:2～5g
(3)섭취시주의사항
 (가)어린이나임산부 ,수유부는
섭취를 주의해야함
 (나)충분한 물과 함께섭취해야
함
- 194 -(다)과다섭취시미약한 설사 ,
구토,배변량 증가 ,배변빈
도증가 ,복부팽만 ,두통
등의 부작용을 일으킬 수
있음
4)시험법
(1)식이섬유:제4.3-26 식이섬
유4.2총식이섬유함량측정
(2)열탕불용해잔사물:[별표 4]참
조
(3)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(4)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-71 크레아틴
1)제조기준
(1) 원재료:Sodium sarcosinate
수용액 ,cyanamide 수용액
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를80～85℃90분동안반응 하- 195 -여 80℃에서 2시간가열교반
한후냉각 하여결정화 ,감압
여과하여 세척후분말회수하
여40℃,20mbar에서 진공건조
하여 제조 하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:Creatinemonohydrate
990㎎/g이상 함유하고 있어
야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)크레아틴
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)디시안디아미드 (㎎/㎏):50.0 이
하
(4)디하이드로트리아진 (㎎/㎏):불검
- 196 -출
(5)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(6)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:근력 운동 시에
운동 수행능력향상에 도움을
줄수있음
(2)일일섭취량:3g
(3)섭취시주의사항
(가)신장에영향을미치는약물을
복용하거나신장 이상의위험
이있는 사람은의사와상담후
에섭취 하여야함
(나)어린이 ,임산부 ,수유부는섭
취를삼가
(다)카페인은 크레아틴의 기능을- 197 -감소시킬수있음
(라)크레아틴의섭취는탈수를동
반할 수있으므 로충분한 물
과함께섭취하여야함
(마)과다섭취하지 말것
4)시험법
(1)크레아틴:제4.3-88 크레아
틴모노하이드레이트
(2)디시안디아미드 :제4.2-5-6
디시안디아미드
(3)디하이드로트라이진 :제4.2-
5-7 디하이드로트라이진
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-72 콩발효추출물
1)제조기준
(1)원재료:콩(Glycinemax.)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를세척․침지하여찐뒤자연
- 198 -냉각 후맥아를첨가및발효
(Asp.oryzae이용 )하여염장,
발효 (30℃,약1년),세척
정제 ,
건조 ,열수추출 (125℃),정제
 여
과,감압농축 ,살균(135℃)한뒤
분말화 (20mesh)하여 제조하여
야함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량
:α-Glucosidase 활성 억제능
(IC50)0.018～0.4㎎/㎖함유하
고 있어야 하며,
Tris(2-Amino-2-(hydroxym et
hyl)-1,3-propanediol) 이확인되어
야함.
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)α-Glucosidase, Tris(2-Amino-2
-(hydroxymethyl)-1,3-propanedio- 199 -l)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)총아플라톡신(㎍/㎏):15이하
(B1은10이하 )
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:식후혈당상승
억제 에도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:콩발효추출물로
서900㎎
(3)섭취시주의사항
(가)대두에알레르기를 나타내는
사람은섭취시주의
- 200 -(나)임산부,수유부 및어린이는섭
취시주의
4)시험법
(1)α-글루코시다제 활성 억제능:
제4.3-89 알파글루코시다제
활성 억제능
(2)Tris:제4.3-90 Tris
(3)아플라톡신:[별표 4]참조
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-73 폴리코사놀 -사탕수수왁스알코올
1)제조기준
(1) 원재료:사탕수수 (Saccharum
officinarumL.)의잎과줄기
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
에서 추출한 왁스에 헥산 ,에탄
올,아세톤의 용매를이용하여
지방산 1차알코올을 추출 정
제하여 분말화 하여 제조하여야
함- 201 -(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:폴리코사놀 990㎎/g이
상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)폴리코사놀
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)총지방족 알코올 (㎎/g):900.
0이상
 (가)1-tetracosanol:0.1-20.0
 (나)1-hexacosanol:30.0-100.0
 (다)1-heptacosanol:1.0-30.0
 (라)1-octacosanol:600.0-700.0
 (마)1-nonacosanol:1.0-20.0
 (바)1-triacontanol:100.0-150.0
 (사)1-dotriacontanol:50.0-100.0
- 202 - (아)1-tetratriacontanol :1.0-50.0
※단,1-tetracosanol 은원료제품
에한하여적용
최종 제품은 기능성분 중총지방족
알코올만표 시 하며이 에 대 한 규 격만
적용받음
(4)아세톤 (g/㎏):불검 출
(5)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(6)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:높은혈중콜레
스테롤수치의개선에도움을
줄수있음
(2) 일일섭취량:폴리코사놀 로서
5～20㎎
(3)섭취시주의사항- 203 -(가)일일섭취량보 다과다하게섭
취하지않도록 주의
(나)콜레스테롤함성에영향 을
줄수있으므 로임산부 ,수
유부 ,영․유아 ,어린이 ,청
소년은섭취하지않는것이
좋음
(다)콜레스테롤저하를위한의약
품과 함께섭취하지않도록 하
여야함
(라)혈액응고를저해할수있으
므로 주의하여 사용하여야
함
4)시험법
(1)지방족 알코올:제4.3-91 지
방족 알코올
(2)아세톤:제4.2.2-5-8 아세
톤
(3)헥산:제4.2.2-5-9 헥산
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
- 204 -[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-74 솔잎증류농축 액
1)제조기준
(1)원재료:적송(Pinus densiflora )
솔잎
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를수증기로 증류 ,농축 ,분리
하여 수증기로 재증류한후숙
성하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:3-carene 125～165㎎/g,
limonene 50～100㎎/g,
terpinolene 180～260㎎/g,이상
함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)3-carene, limonene, terpinolene
 (가)원료성 제품:표시량이상
(나)최종 제품:표시량의80～12- 205 -0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
(라)총비소 (㎎/㎏):0.1이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:건강한혈당의
유지 에 도움을
줄수있음
(2) 일일섭취량:솔잎증류추출액
으로서 1,350 ㎎
(3)섭취시주의사항
기관지천식 ,해소 기침이나 기도
에심한염증이 있는사람은섭취에
주의
4)시험법
(1)3-카렌:제4.3-92 3-카렌
- 206 -(2)리모넨:제4.3-93 리모넨
(3)테르피놀렌:제4.3-94 테르
피놀렌
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-75 메론추출물
1)제조기준
(1) 원재료:칸달로프 메론 (
Cucumismelo)
(2)제조방법
 (가)상기 (1)의원재료 를씨앗 ,
씨방,껍질을 제거한후원
심분리하여 용액을 제조하
여여과 ,농축 ,동결 ,분쇄하
여분말화함
 (나)밀글루텐을20～50℃알코
올 추출하여 원심분리한
후60～95%알코올로 40～
50℃에서 15～24시간동안분
말화함- 207 - (다)말토덱스트린액 (증류수 )과
글루텐추출물분말액 (증류
수/주정 )의 혼합액 (15±5℃,
40분)과 메론분말액 (증류
수)를혼합하여 165±10℃에
서분무
 건조 하 여 분 말 화 한
후500㎛로두번거른후
제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:SOD 활성 1.0IU/㎎이
상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)sod 활성
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
- 208 - (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):1.0이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:산화스트레스로부
터인체를보호하는데 도움을줄
수있음
※밀단백으로코팅된형태에한함
(2)일일섭취량:SOD 활성으로서
500～1,000IU
(3)섭취시주의사항
    밀단백질에 알레르기를 나타내
는사람은섭취에 주의
4)시험법
(1)SOD 활성:제4.3-95 SOD
활성
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조- 209 -(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-76 유단백가수분해물
1)제조기준
(1)원재료:탈지우유
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를원심분리하여 Casein 을분
리하고 알칼리화하여 트립신가
수분해 ,산성화하여열처리한
후건조하여선별하여 제조하
여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:αS1-casein(f91-100) 을1
8～27㎎/g이상 함유하고 있
어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)αS1-casein(f91-100)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
- 210 -0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:스트레스로 인한
긴장완화에도
움을줄수있
음
(2) 일일섭취량:유단백가수분해
물로서 150㎎
(3)섭취시주의사항
(가)임산 부,수 유 여 성 및어린이는
섭취에주의
(나)우유 및유제품에 대하여 알레
르기를 나타내는 사람은섭취
에주의- 211 -4)시험법
(1)알파에스 1카제인 (f91-100):제
4.3-96 알파에스 1카제인 (f91-100)
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-77 프랑스해안송 껍질추출물등복합물
1)제조기준
(1)원재료
(가)프랑스해안송 (P inuspinaster )
2.6557%
(나)비타민 C(L-ascorbicacid) 53.0966%
(다)비타민E(D-α-토코페롤)8.8501%
(라)달맞 이꽃종 자유 35.3976%
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를칭량 하여 혼합 한후여과
및탈기하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:프로시아니딘 14.9～22.3
㎎,비타민 C424.8～796.5㎎,
비타민E47.4～88.9㎎,감마
- 212 -리놀렌산 25.5～38.2㎎
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)프로시아니딘 (㎎/g)
 (가)원료성 제품:14.9～22.3
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)비타민 C(㎎/g)
 (가)원료성 제품:424.8～796.5
 (나)최종 제품:표시량의80〜
120%
(4)비타민E(㎎α-TE/g)
 (가)원료성 제품:47.4～88.9
 (나)최종 제품:표시량의80〜
120%
(5)감마리놀렌산 (㎎/g)
 (가)원료성 제품:25.5～38.2
 (나)최종 제품:표시량의80〜- 213 -120%
(6)중금속
 (가)납(㎎/㎏):3.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):3.0이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:햇볕또는 자외선
에의한 피부손상으로부터피부건
강을 유지하는데 도움을줄수
있음
(2)일일섭취량:프랑스해안송 껍질
추출물 등 복합물로서 1,130 
㎎
(3)섭취시주의사항
(가)임산부 ,수유부 및어린이
는섭취를 피해야함
 (나)‘달맞 이꽃종 자유’에과민증
이있는 사람을섭취를삼
- 214 -가야함
 (다)과량섭취시위장장애등
의부작용이 있을 수있음
 (라)기타 질병을보유하고 있는
사람및수술전후환자는
섭취를삼가야하며섭취
시의사와상담해야함
4)시험법
(1)프로시아니딘:제4.3-86 프
로시아니딘
(2)비타민 C:제4.3-14 비타민 C
(3)비타민E:제4.3-4 비타민 C
(4)감마리놀렌산:제4.3-32 지방산
(5)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(6)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-78 표고버섯균사체분말
1)제조기준
(1) 원재료:표고버섯 (Lentinus- 215 -edodes )균사체
(2)제조방법
 (가)상기 (1)의원재료를 액체
배양하여 α-아밀라아제 ,펙
티나아제 ,프로테아제로 효
소처리하여 원심분리한후
상층액을농축
멸균하여 부
형제첨가,동결건조,분쇄하여
제조하여야함
 (나)상기 (1)의원재료를 액체
종균제조하고 121℃,65～
90분살균하여 제조한배지
에접종
배양하여열수추출 ,
농축 ,동결건조하여 분쇄하여
제조하여야함
 (다)균 을접종
배양 하 여 분쇄한것
과배양후고압추 출 하 여탈
지 대두분10%(w/v)을혼 합 하
여50℃열풍건 조후분쇄한
것을2:1로혼 합 하 여 제 조 하 여
야함
- 216 -(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량
 (가)면역 기능증진:알파글루칸
(α-glucan) 200～370㎎/g
함유하고 있어야함
 (나)간기능:베타글루칸 (β
-glucan) 12.8～200㎎/g
함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)알파글루칸 (α-glucan),베타글루
칸(β-glucan)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)아플라톡신(B1,B2,G1,G2)(㎍/
㎏):15.0 이하 (아플라톡신B1
은10.0 이하 )
(4)중금속- 217 - (가)납(㎎/㎏):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):10.0 이하
(5)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:면역 기능 증진 ,
간기능에 도움을줄수있음
(2)일일섭취량
 (가)면역 기능 증진에 도움을줄
수있음:표고버섯균사체분
말로서 1.8～3.6g
 (나)간기능에 도움을줄수있
음:표고버섯균사체분말로
서0.35～1.8g
(3)섭취시주의사항
임산부는섭취에 주의할것
4)시험법
(1)알파글루칸:제4.3-97 알파
- 218 -글루칸
(2)베타글루칸:제4.3-25베타
글루칸
(3)아플라톡신:[별표 4]참조
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-79 알부민
1)제조기준
(1) 원재료:소맥(Triticum
aestivum)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
에수용성 전분유액을넣어원
심분리 한후염산으로pH
3.0이하로 조정하여 3시간동 안
교반 하여 원심분리함 .알긴산
나트륨을첨가한후실온에서
자연강하시킨후알부민침전
물에염화칼슘,활성탄,물을첨
가하여 필터한수용액을탈염
농축 하여 25%이상동결 건조하
여0.7mm로파쇄
건조 하여 제- 219 -조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:0.19- 알부민 250～350㎎
/g이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야함
(2)0.19 알부민
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:급격한 식후혈
- 220 -당상승을 억제하는데 도움을
줄수있음
(2) 일일섭취량:알부민으로서 1.
2～1.5g
(3)섭취시주의사항
소맥알레르기 체질인 사람은섭
취에 주의할것
4)시험법
(1)0.19 알부민:제4.3-98 0.19
알부민
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-80 L-글루타민
1)제조기준
(1)원재료:Corynebacterium glutamicum
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를이용하여 발효 ,이온교환 (발
효액에 황산첨가pH조절 ,- 221 -이온교환 수지 사용 글루타민
흡착 후암모니아 사용 분리/
정제 ),결정,탈수,용해
 여과 ,
결정,숙성하여 여과
 건조하여
분쇄하여제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:L-글루타민을 985㎎/g
이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)L-글루타민
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.4이하
- 222 - (라)총비소 (㎎/㎏):5.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:과도한운동 후
신체저항능력향상에 도움을
줄수있음
(2) 일일섭취량:과도한운동 직
후3～5g섭취
(3)섭취시주의사항
 (가)정균제 ,항경련 제,하제의
효과를경감시킬우려가
있음
 (나)신장 및간질환이있는환
자는섭취를 주의해야함
 (다)임산부 ,수유부는 의사의
처방없이는섭취를삼가
야함
4)시험법
(1)L-글루타민:제4.3-99 글루- 223 -타민
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-81 상황버섯추출물
1)제조기준
(1) 원재료:상황버섯 (Phellinus
linteus ,3～4년생 건조물 )
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를분쇄하여 110℃,96～100시
간물추출하여 여과하여 건조한
후분쇄하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:베타글루칸 (β-glucan) 을
87～162㎎/g이상 함유하고
있어야함
(4) 제조 시유의사항:원재료인
상황버섯 (Phellinus linteus ,
3～4년생 건조물 )은ITS-
5.8S rDNAsequence 분석에
의하여 Phellinus linteus종으
- 224 -로 확인된종균을 사용하고 ,
외부로부터미생물 오염을차
단할수있는 용기에영양분
을갖춘 고형배 지를넣고살
균한후버섯종균을접종 하고
3～4년간재배하여 ,포자형성
이 확인된흑갈색 의 자실체
형태 로성장한 상황버섯을채
취하여야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)베타글루칸 (β-glucan)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하- 225 - (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:면역 기능 개선에
도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:상황버섯추출물
로서 3.3g
4)시험법
(1)베타글루칸:제4.3-25베타
글루칸
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-82 토마토추출물
1)제조기준
(1) 원재료:토마토 (Lycopersicon
Esculentum)
- 226 -(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를분쇄하여 스크리닝하여 원
심분리한후토마토펄프를 초
산에틸로추출하여 용매를제거
한후표준화하여 제조하여야
함
(3)기능성분 (또는 지표성분 )의함량
:(all-trans)-lycopene 을40～
80㎎/g함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)(all-trans)-lycopene
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.5이하- 227 - (다)총수은 (㎎/㎏):0.5이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:항산화에 도움을
줄수있음
(2) 일일섭취량:(all-trans)-lycop
ene으로서 5.7～15㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)알 레 르 기 체 질 이 신 분 은 개 인 에
따 라 과 민반응을나 타낼수있
음
 (나)라 이 코 펜 이 함 유된식 품 을 과량
섭취시피 부색이오 렌 지색으로변
할수있 음
(다)임산 부,수 유 여 성 및어린이는
섭취에주의
4)시험법
(1)(all-trans)-lycopene:제4.3-
- 228 -100 라이코펜
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-83 곤약감자추출물
1)제조기준
(1) 원재료: 곤약감자
(AmorphophalluskonjacK.
Koch)
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를주정 추출하여농축 한후정
제하여 여과 및농축 후베타-
시클로덱스트린을 30(추출물 ):
70(베타-시클로덱스트린 )의비율
로혼합하여 건조,분쇄하여 제조
하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:Glucosylceramide22.5～
24㎎/g이상 함유하고 있어야
함- 229 -2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)Glucosylceramide
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):2.0이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):1.0이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):1.0이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:피부보습 에도
움을줄수있음
(2)일일섭취량:Glucosylceramide
로서 1.2～1.8㎎
(3)섭취시주의사항
- 230 -임산부와수유기 여성은섭취를
피할것
4)시험법
(1)글루코실세라마이드 :제4.3-
101 글루코실세라마이드
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-84 헛개나무과병추출물
1)제조기준
(1)원재료:헛개나무 과병
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를 4시간,95～100℃에서열수
추출을 2회하여냉각 ,여과 ,진
공농축 한후덱스트린을 10(헛
개나무추출물 ):6(덱스트린 )의비
율로혼합하여 분무건조 ,분쇄
및분채하여 제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함- 231 -량:퀘세틴 (Quercetin) 을 5.
9～８ .9㎎/g이상 함유하고
있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)퀘세틴 (Quercetin)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～1
20%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:알콜성손상으
- 232 -로부터간을보호하는데 도움
을줄수있음
(2) 일일섭취량:헛개나무과병추
출물로서 2,460㎎
(3)섭취시주의사항
임산 부,수 유 여 성 및어린이는섭취
에주의
4)시험법
(1)퀘세틴:제4.3-102 퀘세틴
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-85 당귀혼합추출물
1)제조기준
(1) 원재료:당귀뿌리 ,천궁뿌리 ,
백작약뿌리
(2) 제조방법:상기 (1)의각각 
동량 의원재료에 정제수를첨
가하여 중탕한후냉각
 여과 ,- 233 -감압농축 하여 여과한것과,여
과한 원료 일부에 주정을첨
가하여 정치하여 조다당체를
회수한것을배합하여 제조하
여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량:노다케닌 (nodakenin) 5
0～150㎎/100g,피오니플로린
(paeoniflorin) 200～400㎎/100
g,클로로겐산 (chlorogenic aci
d)25～60㎎/100g함유하고
있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2)노다케닌 (nodakenin), 피오니플
로린 (paeoniflorin), 클로로겐산
(chlorogenic acid)
 (가)원료성 제품:표시량이상
- 234 - (나)최종 제품:표시량의80～12
0%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):0.5이하
 (나)카드뮴(㎎/㎏):0.1이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.2이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):0.5이하
(4)대장균군:음성
(5)세균수:100/g이하
3)최종 제품의 요건
(1)기능성 내용:면역 기능 개선에
도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:당귀등혼합추출
물로서 20～40g
(3)섭취시주의사항
 (가)임신부,수유중인 여성,월경
불순이나 출혈성질환이있
는여성의경우의사와상
담하여섭취할것
 (나)6세미만의소아는섭취시키- 235 -지말것
 (다)천궁,백작약은섭취시 발
열및알러지를 유발할수
있으므 로주의할것
4)시험법
(1)노다케닌:제4.3-103 노다케
닌
(2)피오니플로린:제4.3-104 피
오니플로린
(3)클로로겐산:제4.3-105 클로
로겐산
(4)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(5)대장균군:[별표 4]참조
<신 설> 2-86 원지추출분말
1)제조기준
(1)원재료:원지(Polygalatenuif olia
Willdenow)뿌리
(2)제조방법:상기 (1)의원재료
를선별하여 세척후수침및
- 236 -탈수하여 1차추출 (주정 ,물)후
여과하고잔사를 2차추출하여
혼합하여 감압농축 하여 120℃
20분동안멸균하여 분무건조하
여제조하여야함
(3) 기능성분 (또는 지표성분 )의함
량: TMCA( Trimethoxy
cinnamicacid) 을0.3～0.9㎎/g
이상 함유하고 있어야함
2)규격
(1) 성상:고유의색택 과향미를
가지며이미
 이취가없어야
함
(2) TMCA( Trimethoxycinnamic
acid)
 (가)원료성 제품:표시량이상
 (나)최종 제품:표시량의80～
120%
(3)중금속
 (가)납(㎎/㎏):1.0이하- 237 - (나)카드뮴(㎎/㎏):0.2이하
 (다)총수은 (㎎/㎏):0.1이하
 (라)총비소 (㎎/㎏):1.0이하
(4)대장균군:음성
3)최종 제품의 요건
(1) 기능성 내용:성인의 기억력
개선에 도움을줄수있음
(2) 일일섭취량:원지추출분말로
서300㎎
(3)섭취시주의사항
 (가)과 다섭취시구토,설 사,메 스
꺼움등 의위장관장애가나타
날수있으며위장장애가있는
사람은섭취에 주의 
(나)임산부,수유 여성,어린이는
섭취에 주의
4)시험법
(1) TMCA(Trimethoxycinnamic
acid):제4.3-103 TMCA(T
- 238 -rimethoxycinnamicacid)
(2)납,카드뮴,총수은 ,총비소:
[별표 4]참조
(3)대장균군:[별표 4]참조
시험항목적용규정 시험방법 비고
수분
식품의
기준 및규격
(식품공전 )제9.일반시험법 1.1.1 수분
※Ⅱ.2.7.1 로얄젤 리는 1.1.1.3 칼
피셔법에 따름
회분 제9.일반시험법 1.1.2회분
조지방 제9.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제9.일반시험법 1.1.5.3.1 산가
과산화물
가제9.일반시험법 1.1.5.3.5 과산화물가
환원당 제9.일반시험법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제9.일반시험법 2.4착색 료
납 제9.일반시험법 7.1중금속시험
카드뮴 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총수은 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총비소 제9.일반시험법 7.1중금속시험
세균수 제9.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제9.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제9.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제9.일반시험법 3.11살모넬라
세균발육 제9.일반시험법 3.6세균발육시험
테트라싸
이클린
클 로 르 테 트
라싸이 클 린제9.일반시험법 5.3.49옥시테트라
싸이클린 ,클로르 테트라싸이
클린 ,테트라싸이클린 ,독시싸
이클린
총아플
라톡신제9.일반시험법 6.1.1 아플라톡신
(B1,B2,G1및G2)
포도 당 당량
(D .E.)제5.식품별 기준 및규격 6.포도당
6)시험방법 (1)포도당당량
(D.E.)
<신설> <신설>
<신설> <신설>
잔류용매
(초 산 에
틸)건강기능식
품의 기준
및규격
(건강기능식
품공전 )제4.건강기능식품 시험법 2,2-5,
2-5-5 초산에틸
잔류용매식품첨가물의 
기준 및규격
(식 품첨가 물 공 전 )제4.품목별규격 및기준 나.천연
첨가물 80. 파프리카추출색
소
잔류용매
(이소프로
필 알콜)제4.품목별규격 및기준 나.천연첨
가물108. 글루 코만난제4.[별표 4]
[별표 4]시험법 적용표
시험항목적용규정 시험방법 비고
수분
식품의
기준 및규격
(식품공전 )제9.일반시험법 1.1.1 수분
※Ⅱ.2.7.1 로얄젤 리는 1.1.1.3 칼
피셔법에 따름
회분 제9.일반시험법 1.1.2회분
조지방 제9.일반시험법 1.1.5.1 조지방
산가 제9.일반시험법 1.1.5.3.1 산가
과산화물
가제9.일반시험법 1.1.5.3.5 과산화물가
환원당 제9.일반시험법 1.1.4.1.2 환원당
타르색소 제9.일반시험법 2.4착색 료
납 제9.일반시험법 7.1중금속시험
카드뮴 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총수은 제9.일반시험법 7.1중금속시험
총비소 제9.일반시험법 7.1중금속시험
세균수 제9.일반시험법 3.5세균수
대장균군 제9.일반시험법 3.7대장균군
대장균 제9.일반시험법 3.8대장균
살모넬라 제9.일반시험법 3.11살모넬라
세균발육 제9.일반시험법 3.6세균발육시험
테트라싸
이클린
클 로 르 테 트
라싸이 클 린제9.일반시험법 5.3.49옥시테트라
싸이클린 ,클로르 테트라싸이
클린 ,테트라싸이클린 ,독시싸
이클린
총아플
라톡신제9.일반시험법 6.1.1 아플라톡신
(B1,B2,G1및G2)
포도 당 당량
(D .E.)제5.식품별 기준 및규격 6.포도당
6)시험방법 (1)포도당당량
(D.E.)
라 피 노 스제5.식품별 기준 및규격 10.올리
고당류 6)시험방법 (1)올리고당③
갈락토올리고당 (전이갈락토올리고당 )
열탕불용 해
잔사 물제6.수산 물에 대 한 규 격2.시험방법
9)열탕불용해잔사물
잔류용매
(초 산 에
틸)건강기능식
품의 기준
및규격
(건강기능식
품공전 )제4.건강기능식품 시험법 2,2-5,
2-5-5 초산에틸
잔류용매식품첨가물의 
기준 및규격
(식 품첨가 물 공 전 )제4.품목별규격 및기준 나.천연
첨가물 80. 파프리카추출색
소
잔류용매
(이소프로
필 알콜)제4.품목별규격 및기준 나.천연첨
가물108. 글루 코만난제4.[별표 4]
[별표 4]시험법 적용표
제4.건강기능식품 시험법
1.일반원칙
2.일반시험법
2-1～2-5( 생략)제4.건강기능식품 시험법
1.일반원칙
2.일반시험법
2-1～2-5(현행과 같음 )- 239 -2-5-1～2-5-5( 생략) 2-5-1～2-5-5(현행과 같음 )
<신 설> 2-5-6 디시안디아미드 (Dicyandiamide)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 디
시안디아마이드를 추출하고 고속액
체크로마토그래프/자외부흡광광
도검출기를 사용하여최대흡수파
장인 280 nm에서검출하여 정량
분석한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.3.Nucleosil5SA,ET250/4
 (Macherey-Nagel사)또는
이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 디시안디아마이드 (Dicyandiamide)
- 240 -분자식:C2H4N4,분자량:84.08,
CasNo.:461-58-5
3.2일반시약
3.2.1. 인산 2수소암모늄(ammonium
dihydrogenphosphate)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 디시안디아미드 표준품을
증류수에 25～1,000 ng/
㎖의농도로 용해시켜표
준용액으로한다 (검량선 작
성을위해3개이상의농도조
제)
4.2시험용액
4.2.1 시료 250㎎을정밀히달아
증류수를 가해 용해시킨후
100㎖로 정용하여 시험용
액으로한다 .- 241 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 상온
이동상2.3%ammoniumdihydrogen
phosphate
(pH4.0, 인산으로조절 )
검출기
파장225 nm
유량 20㎕
디시안디아미드 함량(㎎/kg)=C×P×V
W5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
(예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕
를주입하여앞의조건에 따
라 시험한다 .표준용액 중
디시안디아미드 면적 에 의
해구한검량선 에 따라
시험용액 중 디시안디아미
드농도를구하고 다음 식
에따라 디시안디아미드 함
량을구한다 .
C:시험용액 중디시안디아미드 함
- 242 -량(ng/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
P:표준품의순도
<신 설> 2-5-7 디하이드로트라이진 (Dihydrotriazine)
1.시험방법의 요약본시험법은 시
료로부터추출한 디하이드로트라
이진을 고속액체크로마토그래프/
자외부흡광광 도검출기를 사용하
여분석하는 방법으로최대흡수파
장인 280 nm에서검출하여 정량
분석한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.3. Nucleosil5SA,ET250/4
 (Macherey-Nagel사)또는 이
와동등한것- 243 -3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 디하이드로트리아진 (Dihydrotriazine)
3.2일반시약
3.2.1. 인산 2수소암모늄(ammonium
dihydrogenphosphate)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 디하이드로트라이진 표준품
을증류수에 25～1,000 ng/㎖의
농도로 용해시켜표준용액으로한
다(검량선 작성을위해3개이상
의농도조제 )
4.2시험용액
4.2.1 시료 250㎎을정밀히달아
증류수를 가해 용해시킨후100
㎖로정용하여 시험용액으로한
다.
- 244 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 상온
이동상2.3%ammoniumdihydrogen
phosphate
(pH4.0, 인산으로조절 )
검출기 파장 225 nm
유량 20㎕
디하이드로트라이진
함량(㎎/㎏)=C×P×V
W5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
(예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕
를 주입하여앞의 조건에
따라 시험한다 .표준용액 중
디하이드로트라이진 면적 에
의해구한검량선 에 따라
시험용액 중 디하이드로트
라이진농도를구하고 다음
식에 따라 디하이드로트라
이진 함량을구한다 .
C:시험용액 중디하이드로트라이
진함량(ng/㎖)- 245 -V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
P:표준품의순도
<신 설> 2-5-8 아세톤
1.시험방법의 요약
본시험법은 건강기능식품 중휘발
성물질을 추출하기위하여헤드스
페이법을거친 후가스크로마토그
래프/수소염이온화검출기 (FID)를
사용하여 분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,20㎖)
2.2분석장비
2.2.1 기체크로마토그래프
2.2.2 수소염이온화검출기 (FID)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 6%polycyanopropylphenylsiloxane,
94%polydimethylpolysiloxane
으로충전한컬럼(예:DB-624
(30m×0.32mm× 1.8㎛)또는
- 246 -이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 아세톤 (aceton)
 분자식:C3H6O, 분자량:
58.08, CasNo.:67-64-1
3.2일반시약
3.2.1 DMF(N,N-Dimethylformamide)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 100ml 용량플라스크에
DMF(N,N-Dimethylformami
de) 20ml를미리채우고 여
기에 0.5g의아세톤을각각 
넣고DMF로정용한후잘
섞는다 .이액1ml을취해
100ml용량플라스크로옮기
고DMF로정용한후잘섞
는다 .이액4ml을취하여- 247 -항목 조건
주입구온도 200℃
칼럼온 도초기온도50℃(8분),승온 20℃/분,
최종온 도220℃
검출기온도 240℃
캐리어 가스 질소
splitratioo 10:1
헤드스페이스①헤드스페이스평형온 도:90℃
②Loop온도:95℃
③Transfer Line온도:100℃
④주입시간및 주입량:1분,
1ml(가스로서 )
⑤압력 &Loop충진시간:각
0.5분
⑥바이알 가스배출:On20ml용량플라스크로옮기고
DMF로정용한후잘섞는
다.희석액을 5ml을취하여
3개의헤드스페이스 바이알
에각각 취하고봉인한다 .
(표준용액의농도:10ppm )
4.2 시료 약0.2g을정밀하게달
아DMF20ml을가하여 정용한후
헤드스페이스 바이알에 5ml씩분취
하여 시험용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기체크로마토그래프조건 (예)
- 248 -⑦바이알평형 시간:30분
⑧GC Cycle시간:30분
⑨Shaking:On
5.2계산
5.2.1 표준용액과 시험용액을각
각헤드스페이스 분석조건
에서 주입 하여앞의조건
에서 시험한다 .상대머무
름시간을비교한후각피
크면적으 로부터아래와 같
이정량한다 .
잔류용매량(ppm)=(AT/AS)×(WS/WT)×(DT/DS)×
역가×10,000
AT:검액의 크로마토그램에서얻은
각성분잔류용매에의한 피크
면적
AS:표준액의 크로마토그램에서얻
은각성분잔류용매의3회평균피
크면적
WS:표준액 조제를위해취한각
성분 유기용매의무게값(g)
WT:검액조제를위해취한 시료
검체의 무게 (g)- 249 -DT:검액조제를위한희석배 수
DS:표준액 조제를위한희석배 수
(50,000배)
역가:이용된표준 유기용매의순도
(%)
10,000:ppm 단위환산계수
<신 설> 2-5-9 헥산
1.시험방법의 요약
본시험법은 건강기능식품 중휘발
성물질을 추출하기위하여헤드스
페이법을거친 후가스크로마토그
래프/수소염이온화검출기 (FID)를
사용하여 분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,20㎖)
2.2분석장비
2.2.1 기체크로마토그래프
2.2.2 수소염이온화검출기 (FID)
2.2.3 칼럼오븐
- 250 -2.2.4 6%polycyanopropylphenylsiloxane,
94%polydimethylpolysiloxane
으로충전한컬럼(예:
DB-624 (30m×0.32mm× 1.8
㎛))또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 헥산 (hexane)
 분자식:C6H14,분자량:86.18,
CasNo.:110-54-3
3.2일반시약
3.2.1 DMF(N,N-Dimethylformamide)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 100ml 용량플라스크에
DMF(N,N-Dimethylformami
de) 20ml를미리채우고 여
기에 0.5g의아세톤을각각 
넣고DMF로정용한후잘- 251 -항목 조건
주입구온도 200℃
칼럼온 도초기온도50℃(8분),승온 
20℃/분,최종온 도220℃섞는다 .이액1ml을취해
100ml용량플라스크로옮기
고DMF로정용한후잘섞
는다 .이액4ml을취하여
20ml용량플라스크로옮기고
DMF로정용한후잘섞는
다.희석액을 5ml을취하여
3개의헤드스페이스 바이알
에각각 취하고봉인한다 .
(표준용액의농도:10ppm )
4.2 시료 약0.2g을정밀하게달
아DMF20ml을가하여 정용
한후헤드스페이스 바이알에
5ml씩분취하여 시험용액으
로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기체크로마토그래프조건 (예)
- 252 -검출기온도 240℃
캐리어 가스 질소
splitratioo 10:1
헤드스페이스①헤드스페이스평형온 도:90℃
②Loop온도:95℃
③Transfer Line온도:100℃
④주입시간및 주입량:1분,
1ml(가스로서 )
⑤압력 &Loop충진시간:각
0.5분
⑥바이알 가스배출:On
⑦바이알평형 시간:30분
⑧GC Cycle시간:30분
⑨Shaking:On
5.2계산
5.2.1 표준용액과 시험용액을각
각헤드스페이스 분석조건
에서 주입 하여앞의조건
에서 시험한다 .상대머무
름시간을비교한후각피
크면적으 로부터아래와 같
이정량한다 .
잔류용매량(ppm)=(AT/AS)×(WS/WT)×(DT/DS)×역가×10,000
AT:검액의 크로마토그램에서얻은
각성분잔류용매에의한 피크
면적
AS:표준액의 크로마토그램에서얻- 253 -은각성분잔류용매의3회평균피
크면적
WS:표준액 조제를위해취한각
성분 유기용매의무게값(g)
WT:검액조제를위해취한 시료
검체의 무게 (g)
DT:검액조제를위한희석배 수
DS:표준액 조제를위한희석배 수
(50,000배)
역가:이용된표준 유기용매의순도
(%)
10,000:ppm 단위환산계수
3.개별성분별 시험법
3-1～3-77 (생략)
<신 설> 3-78 바릴티로신
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 바
릴티로신을 고속액체크로마토그래
프/자외부흡광광 도검출기를 사용
하여 분석하는 방법으로최대흡수
파장인 280 nm에서검출하여 정량
- 254 -분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Sep-Pak카트리지컬럼(C18)
2.1.2vaccummanifold
2.1.3 부피플라스크
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4역상분배형 칼럼(안지름4.6
mm,길이250mm)또는
이와동등한것
2.3분석장비의 준비
 이동상으로서 0.1%Trifluoroacetic
acid를함유한 2%acetonitrile 용
액을분당 0.55㎖씩흘려줌으로서 
칼럼과기기를 안정화 시킨다 .
3.표준물질 및일반시약- 255 -3.1표준물질
3.1.1 바릴티로신 (Val-Tyr)
 분자식:C14H20N2O4,분자량:
280.32, CasNo.:
3061-91-4
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 에탄올(Ethanol)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile, HPLCgrade)
3.2.4 트리플루오로아세트산 (trifluoroacetic acid)
3.2.5 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1시험조작
4.1.1검체600㎎을정밀하게달
아50㎖용량플라스크에넣
고물로 표선을채운 다
4.1.2 미리 준비한 Sep-Pak카트
리지컬럼(C18)을vacuum
manifold 에고정시키고,펌
프를연결 한다 .
- 256 -항목 조건
주입량 200㎕
칼럼온 도 35℃
이동상A액:0.1%Trifluoroacetic acid를
함유한 2%acetonitrile 용액
B액:0.1%Trifluoroacetic acid를
함유한 25%acetonitrile 용액
A액으로10분간유지후,B액으로
0∼31%/80분의 lineargradient4.1.3 Sep-Pak은메탄올5㎖,물
5㎖의순서로펌프로흡인
시켜세정한다 .
4.1.4 4.3.1 에서만든용액 2㎖
를Sep-Pak에부하하고 ,반
드시 자유낙하시킨다 .
4.1.5 다시 자유낙하로 물2㎖로
세정후,3%에탄올(W/V )
2㎖를넣어역시자유낙
하로 용출액을 분취한다 .
4.1.6 용출액을 감압건조후A액
500㎕로희석하여 HPLC
분석에제공한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)- 257 -검출기 파장 280 nm
유량 0.55㎖/min
5.2계산
5.2.1 바릴티로신 표준용액을 이
용한검량선*으로구한다 .
표준용액에서구한검량선
에의하여 시험용액속에
함유된바릴티로신 양을
소정의계산식으로구한다 .
*검량선:바릴티로신표준용액사이
에서5점의피크면적의해석을한
다.
5.1.2 바릴티로신 표준품 6㎎을
달아100㎖용량플라스크
에넣고 A액으로 표선을
채운 다
5.1.3 0.5, 1,2,4,5㎖을각각 취
해5개의 10㎖용량플라스
크에넣고A액으로표선을
채운 다.
5.1.4위와 동일한 HPLC 조건으
로각각 측정한 5개피크의
면적으 로검량선 을그린
- 258 -다
5.1.5Y축은 바릴티로신 피크의
면적으 로하고 ,X축은바릴
티로신량(단위μg/200μ
L)으로한다 .
5.2.1 바릴티로신 표준용액을 이
용하여검량선 을작성하고 ,
검량선 식을 이용하여 시험
용액 중의 바릴티로신 의양
를구한후아래식을 이
용하여 바릴티로신 함량을
계산한다 .
바릴티로신의 함량
(㎎/100g)=X×B
C
바릴티로신의검량선 Y=aX+b에서
X=(Y-b)/a
X:시험용액의 전량(㎖)
B:희석액량(500μL)/HPLC 주입량
(200μL)=2.5
C:(검체량(g)/희석용량(50㎖))×
Sep-pak부하량(2㎖)×- 259 -1,000/100
<신 설> 3-79 정어리펩타이드 중펩타이드
1.시험방법의 요약
본시험법은 정어리 펩타이드 시료
로부터조단백질량과아미노산량을
구하여 펩타이드량을 산출해내는
분석법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 분해촉진제
2.1.2 50㎖용량플라스크
2.1.3 원심분리관
2.1.4 0.45㎛여과지
2.1.5 Shim-packISC-07/
 S1504Na또는 이와동등한컬럼
2.2분석장비
2.2.1킬달 분해관
2.2.2 아미노산 분석계
- 260 -3.일반시약
3.1일반시약
3.2.1 황산 (Sulfuric acid)
3.2.2탈이온수
3.2.3 수산화나트륨(Sodium chloride)
3.2.4 구연산나트륨 (Sodium citrate)
3.2.5붕산(boric acid)
3.2.6 에탄올(Ethanol)
3.2.7 차아염소산나트륨(SodiumHypochloride)
3.2.8 프탈알데히드 (phthalaldehyde)
3.2.9 폴리옥시에틸렌라우릴에테르
(polyoxyethylene alkylehter)
3.2.10 N-아세틸시스틴 (N-acetylcystein)
3.2.11 알카리완충 액
3.2.12구연 산삼나트륨(Trisodium
citrate)․2H 2O
3.2.13과염소산 (Perchloric acid)
3.2.14 n-카프릴산 (n-Caprylicacid)
4.시험과정
4.1시험조작- 261 -4.1.1 조단백질량
 4.1.1.1검체1～2g을킬달 분해
관에넣고 분해촉진제
약3g,진한 황산 25㎖
을가하여 분해용 가열
장치에서 가열분해한다 .
분해종료후,탈이온수로
250㎖로정용하여검체
분해액으로만든다.
 4.1.1.2검체분해액 3∼5㎖를채
취하여 중화용 (中和用 )의
수산화나트륨용액을 가하
여 수증기증류장치에서
증류한다 .
 4.1.1.3 증류후의액을 0.02N
NaOH 에서적정하여적
정치에서 전질소량을산
출한다 .
4.1.1.4 산출한 전질소량에단백
환산계수6.25를곱하여
조단백질량을산출한다 .
- 262 -4.1.2 유리아미노산량
4.1.2.1검체약1g을정밀하게
달아 50㎖용량플라스크
에넣고표선을채운 후
그1㎖를원심분리관에
정확하게 취한다 .
 4.1.2.2 에탄올3㎖를첨가하여
교반 후 3,000
rpm(1408.68×g)으로원
심분리한다 .상징액을 용
량플라스크로 이동한다 .
 4.1.2.3 원심분리관에물1㎖,
에탄올2㎖를더첨가
하여교반 후다시 원
심분리하고 상징액을먼
저의용량플라스크로 이
동한다 .
 4.1.2.4 다시 ,물1㎖,에탄올2
㎖를첨가후,교반 ,원
심분리하여 상징액을 용
량플라스크로 이동한다 .- 263 -항목 조건
칼럼온 도 55℃
이동상A액:0.2N구연 산나트륨액(pH3.2)(7%
에탄올함유 )
B액:0.6N구연 산나트륨액,0.2 M붕
산액 (pH10.0)
C액::0.2M수산화나트륨액
유량 0.3㎖/min
반응 액1액:0.4㎖차아염소산나트륨수용액 (1
ℓ알칼리완충 액)4.1.2.5 용량플라스크로 이동한
액를 감압건조하고구연
산완충 액(pH2.2)
※5㎖를첨가하여검체를 용해
시킨다 .0.45㎛여지로검액를
여과하여 아미노산 분석계 에
제공한다 .
※구연 산완충 액(pH2.2):구연
산삼나트륨․2H 2O9.8g,과
염소산 (60%)8㎖,n-카프릴
산0.05㎖를넣고증류수로
500㎖로표선을맞춘 다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.아미노산분석계 조건 (예)
- 264 -(0.384 M탄산나트륨,0.216 M붕산,
0.108 M황산칼륨의수용액 )
2액)0.8g프탈알데히드/14㎖에탄올
 0.4g폴리옥시에틸렌라우릴에테르
 1gN-아세틸시스틴/1ℓ 알칼리완
충액
반응 액
유속0.2㎖/min
검출기 FLD-6A
시간(분) A용액%B용액%B용액%
0～5 100 0 0
5～22 100～86 0～14 0
22～26 86 14 0
26.01～40 40～0 60～100 0
40～50 0 100 0
50.01～55 0 0 100
55～88 100 0 0표2.이동상조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준아미노산 (1nmol/10㎕)
의용출시간에따라 ,검체의
각아미노산을 확인하고 그
면적으 로부터유리아미노산
량을환산한다 .
5.2.2 펩타이드량을산출한다 .
조단백질량(%)-②유리아미노산량
(%)=펩타이드량(%)
<신 설> 3-80 데커신
1.시험방법의 요약- 265 -본시험법은 시료로부터추출한 데
커신을 고속액체크로마토그래프/자
외부흡광광 도검출기를 사용하여 분
석하는 방법으로최대흡수파장인
230nm에서 검출하여 정량분석한
다.
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛필터
2.2분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도검출기
2.1.2 CadenzaC18(4.6×250mm,
5um)컬럼또는 이와동등
한컬럼
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 데커신
- 266 -O O OO
DecursinO분자식:C19H20O5,분자량:328.36 ,
CASNo.:5928-25-6
3.2일반시약
3.2.1 로릴황산나트륨(Sodium
laurylsulfate)
3.2.2 인산수소제이나트 륨(Sodium
Phosphate dibasic)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile,
HPLCgrade)
3.2.4 메탄올(Methanol, HPLC
grade)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 데커신 표준품 약 15㎎을
정밀하게 취하여 100㎖용
량플라스크에넣고,HPLC
용methanol 을약80㎖넣- 267 -어균일하게섞고,실온에
서5분간초음파 조사한다
(sonication). 다시
methanol을가하여 표선을
맞춘 후,균일하게 혼합하
여이액을 0.45㎛멤브레
인필터로여과하여 표준액
으로한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1 참당귀뿌리추출분말을 적당
히취하여 유발에넣고유
봉으로잘혼합한후약
150㎎(데커신으로서 약 15
㎎해당량)을정밀하게측
정하여 100㎖volumetric
flask에넣고,HPLC 용
methanol을 약 80㎖넣어
균일하게섞고,실온에서 10
분간 초음파 조사한다
(sonication). 다시methanol
- 268 -항목 조건
주입량 5㎕
칼럼온 도 30℃
이동상50%아세토니트릴 1000㎖+1.5g
Sodiumlaurylsulfate +2g
SodiumPhosphatedibasic
검출기 파장 230 nm
유량 1.0㎖/min을가하여 표선을맞춘 후,
균일하게 혼합 하여 이액을
0.45㎛멤브레인 필터로여
과하여검액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
××
A:표준품채취량(㎎)
B:시료채취량(g)
C:시료 피크면적
S:표준품 피크면적
P:표준품의순도
<신 설> 3-81 HCA(Hydroxycitric acid)
lactone- 269 -1.시험방법의 요약
본시험법은 10mM황산용액을 이
용하여 시료 중
(+)-allo-Hydroxycitric acid lactone
을추출하여 고속액체크로마토그래
프를 통해 분석하는 방법으로자외
부흡광광 도검출기를 이용하여 정성
및정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 여과용멤브레인 필터
2.1.3 액체크로마토그래프용 유리병
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3역상분배형 컬럼(ODS컬럼,
안지름4.6mm,길이250
mm,5㎛)또는 이와동등한
것
- 270 -3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Hydroxycitric acid lactone
3.2일반시약
3.2.1 황산 (Sulfuric acid)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 HCA 표준품 약300㎎을이
동상에녹여50㎖로한다 .
이용액을 이동상으로희석
하여 HCA 로서 3.0, 1.5,
0.75㎎/㎖로 하여농도별
검량선 을작성한다
4.2시험용액의 조제
4.2.1검체약1g을정밀히달아
이동상을넣어용해 (초음파
진탕 )시킨후50㎖가되도
록정용한다- 271 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상 10mM황산용액
검출기 파장 210 nm
유속 1.0㎖/min4.2.2 이액을 여과지로 여과시키
고 마이크로 필터(0.45 ㎛
멤브레인 필터또는 이와동
등한것)로여과한것을시험
용액으로한다
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
(예)
5.2계산
5.2.1 표준물질의검량선 에의거
하여농도를 산출한다 .
<신 설> 3-82 L-카르니틴
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중L-카르니틴을
추출하여 고속액체크로마토그래프
를이용하여 자외부흡광 광도기로
- 272 -분석하여 정량하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Sep-pakC18 카트리지
2.1.2 0.45㎛필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.2.2 자외부흡광광 도기
2.2.3. ODS 칼럼(3.9×300nm,10
㎛)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 L-카르니틴
 분자식:C7H15NO3,분자량:
161.199,CASNo.:541-15-1
3.2일반시약
3.2.1 아세토니트릴 (Acetonitrile)
3.2.2heptafluorobutyricacid
3.2.2 증류수 (Distilledwater)- 273 -4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 L-카르니틴 표준품 1.2을정밀
히달아물에녹여최종100㎖
로한다.이액을 물로희석하
여L-카르니틴으로서 6.0, 3.0,
1.5㎎/㎖로하여 표준물질의
농도별검량선 을작성한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1검체1.0g을정밀히달아물
을넣어30분간용해 (초음파
진탕 )시킨후물로 50㎖로
정용한후여과지로거른다 .
미리 활성화시킨 (메탄올
10㎖,물 10㎖)Sep-pak
C18 카트리지에 2㎖/분의속
도로 처리한 약을 0.45㎛마
이크로필터로여과 하여 시
험용액으로한다
- 274 -항목 조건
주입량 10㎕
칼럼온 도 35℃
이동상아세토니트릴:0.4
heptafluorobutyricacid%=
10:90
검출기 파장 227 nm
유량 1.0㎖/min5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준물질의검량선 에따라
농도를 산출한다
<신 설> 3-83 바이칼린 (Baicalin)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중바이칼린을
추출하여 고속액체크로마토그래프
를 이용하여 자외부검출기로 분석
하여 정량하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (50㎖,100㎖)- 275 -2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.2.2 PhenomenexLuna C18
(4.6㎜×250㎜,5㎛)또는
이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 바이칼린
 분자식:C21H18O11,분자량:
446,CASNo.:21967-41-9
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 테트라히드로푸란용액(tetrahydrofuran)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile)
3.2.4 인산완충용액(Phosphoric acid)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 바이칼린을 메탄올로녹여서
- 276 -200㎍/㎖함유의 표준원액
을조제한다 .표준원액을 사용
하여 바이칼린은 12.5, 25,50,
100㎍/㎖함유되게 80/20-메
탄올/테트라하드로퓨란 용액
으로희석하여 제조한다 .이
용액 을0.45㎛의멤브레인
필터로여과하여얻은여과
액을 표준용액으로한다 .
4.2시험용액의 조제
4.2.1검체약200㎎을정밀히
달아100㎖용량플라스크
에넣고메탄올80㎖를넣
어초음파 진탕기로 20분간
용해시킨 다음 80/20-메탄
올/테트라하이드로퓨란 용
액을넣어정확히 100㎖로
한다 .이용액 5㎖를취하
여 50㎖용량플라스크에
넣고 80/20-메탄올/테트라
하이드로퓨란 용액으로표선- 277 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상A-0.1%인산용액 ,
B-아세토니트릴
검출기 파장 275 nm
유량 1.0㎖/min
시간(분) A용액%B용액%
0 80 20
3 80 20
22 20 80
24.5 20 80
24.6 80 20
30 80 20을맞춘 다.이용액을 0.45
㎛의멤브레인 필터로여과
하여얻은 여과액을 시험
용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프 조건
(예)
표.2이동상조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 20㎕를상기의
조건에 따라 고속액체크로
- 278 -
그림1바이칼린 표준품의 크로마토그램마토그래피에주입하여얻어
진 피이크의면적으 로부터
검량선 을작성한다 .
5.2.2 시험용액 20㎕를상기의
조건에 따라 고속액체크로
마토그래피에 주입한다 .얻
어진 피이크의머무름시간
을비교해서 정성을 하고
표준용액의검량선으 로부터
검체중의 바이칼린농도
(S,㎎/㎖)를구하여 아래의
식으로부터각각 의 함량
(%)을산출한다 .
5.2.3 바이칼린 (%)=S(㎎/㎖)x50
(㎖)x20/검체채취량(㎎)x표
준품순도(%)
S:바이칼린의농도(㎎/㎖)
<신 설> 3-84 카테킨- 279 -1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중 카테킨
(catechin)을 추출하여 고속액체크
로마토그래프를 이용하여 자외부검
출기로 분석하여 정량하는 방법이
다.
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛의멤브레인 필터
2.1.3 초음파 진탕기
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도기
2.1.3 PhenomenexLuna C18
(4.6㎜×250㎜,5㎛)또는
이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
- 280 -3.1표준물질
3.1.1 카테킨 (catechin)
 분자식:C15H14O6, 분자량:
290.27
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 카테킨을 500㎍/㎖의농도
가되게 50/50-메탄올/물용
액으로녹여표준원액을 조
제한다 .표준원액을 사용하
여62.5, 125, 250, 500㎍/㎖
의농도가 되게 50/50-메탄
올/물용액으로희석하여 제
조한다 .이용액을 0.45㎛의
멤브레인 필터로 여과하여
얻은여과액을 표준용액으
로한다 .- 281 -항목 조건
주입량 20㎕
칼럼온 도 35℃
이동상A-0.1%인산용액 ,
B-아세토니트릴
검출기 파장 275 nm
유량 1.0㎖/min4.2시험 용액의 조제
4.2.1검체약250㎎을정밀히달
아 100㎖용량플라스크에
넣고 50/50-메탄올/물용
액80㎖를넣어초음파 진
탕기로 20분간용해시킨 다
음 50/50-메탄올/물 용액을
넣어정확히 100㎖로한다 .
이용액을 0.45㎛의멤브레
인필터로여과하여얻은여
과액을 시험 용액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프 조건
(예)
표.2이동상조건 (예)
- 282 -시간(분) A용액%B용액%
0 85.0 15.0
7 85.0 15.0
12 10.0 90.0
16.5 10.0 90.0
16.6 85.0 15.0
24 85.0 15.0
5.2계산
5.2.1 시험용액 20㎕를상기의
조건에 따라 고속액체크로
마토그래피에 주입한다 .얻
어진 피이크의머무름시간
을 비교해서 정성을 하고
표준용액의검량선으 로부터
검체중의 카테킨농도(S,
㎎/㎖)를구하여 아래의식
으로부터각각 의함량(%)을
산출한다 .
 카테킨 (%)=S(㎎/㎖)x100(㎖)/
검체채취량(㎎)x표준품순도(%)
S:카테킨의농도(㎎/㎖)- 283 -
그림1카테킨 표준품의 크로마토그램
<신 설> 3-85 프랑스해안송껍질추출물 HPLC
확인 시험법
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중 카테킨
(catechin), 카페인산 (caffeic acid),
탁시폴린 (taxifolin),페롤 산(feulic
acid) 을추출하여 고속액체크로마토
그래프를 이용하여 자외부흡광광 도
기로 분석하여 확인하는 방법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 0.45㎛멤브레인 필터
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피(HPLC)
2.1.2 자외부흡광광 도기
- 284 -2.1.3Base-deactivatedpacking
L7(C8, 5㎛,4.6㎜×15㎝또
는25㎝)또는 이와동등
한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 카테킨 (catechin)
 분자식:C15H14O6, 분자량:
290.27
3.1.2 카페인산 (caffeic acid)
 분자식:C9H8O4, 분자량:
180.16, CASNo.:331-39-5
3.1.3탁시폴린 (taxifolin)
 분자식:C9H8O4, 분자량:
304.25
3.1.4페롤 산(ferulic acid)
 분자식:C10H10O4, 분자량:
194.18, CASNo.:1135-24-6
3.1.5 해송추출물 표준품 (USP　
MarinepineextractRS)- 285 -3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 인산용액 (Phosphoric acid)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 표준용액Ⅰ의조제
 카테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,
페룰 산을 정밀히달아메탄
올에 1㎎/㎖의농도로녹인
다음 0.45㎛멤브레인 필터
로여과한것을표준용액으
로한다 .
4.1.2 표준용액Ⅱ의조제
 해송추출물 표준품 (USP
MaritimepineextractRS)을
정밀히달아메탄올에 2㎎/
㎖의농도로녹인다음 0.45
㎛멤브레인 필터로여과한
것을표준용액으로한다 .
4.2시험 용액의 조제
- 286 -항목 조건
주입량 10～20㎕
칼럼온 도 40℃
이동상A-메탄올,
B-0.1%(1→1000) 인산용액
검출기 파장 280 nm
유량 1.0㎖/min
시간(분)A용액%B용액% Linear
0 8 92 6
40 34 66 6
45 2 98 6
50 2 98 6
52 8 92 6
57 8 92 64.2.1검체약2㎎을정밀히달아
메탄올을 가하여 10㎖로한
다음 10분간초음파 분해한
후0.45㎛멤브레인 필터로
여과한다 .(여액의최초 4㎖
는제거한후사용한다 .)
5.분석및계산
5.1기기 분석
표.1고속액체크로마토그래프 조건
(예)
표.2이동상조건 (예)
5.2계산
5.2.1 표준용액Ⅰ,표준용액Ⅱ및
시험용액의 크로마토그램을- 287 -
얻은후,표준용액Ⅰ에서 카
테킨 ,카페인산 ,탁시폴린 ,
페룰 산의 피크머무름시간
과표준용액Ⅱ에서 크로마
토그램의피크머무름시간
을 확인하고 ,시험용액의
크로마토그램과비교확인
한다 .
단,탁시폴린 (taxifolin) 과페
룰산(ferulic acid) 사이의
분리도 (resolution,R)는
3.0이상이어야하고탁시폴
린에 대한 tailingfactor 는
2.0이하이어야한다 .
그림1.시험용액 크로마토그래프예시
<신 설> 3-86 프로시아니딘
1.시험방법의 요약
- 288 -본시험법은 메탄올을 이용하여 시
료로부터프로시아니딘을 추출하여
분광광 도계를이용하는 분석법으로,
프로시아니딘의 최대흡수파장인
546 nm에서흡광 도를측정하는 방
법이다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (10㎖)
2.2분석장비
 2.2.1 분광광 도계
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 해송추출물 표준품 (USP　
MarinepineextractRS)
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
3.2.2 n-부탄올(n-Butanol)
3.2.3염산(Hydrochloric acid)- 289 -3.2.4암모늄황산 제2철(Ferric
ammoniumsulfate)
3.2.5 아세트산 (Acetic acid)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 해송추출물 표준품 (USP
Maritimepine extractRS)
을 정밀히달아 C시액에
0.25㎎/㎖의농도가 되게 한
다.이액에 C시액을 가하여
0.05, 0.0625, 0.075㎎/㎖농도
가되도록 표준용액을 조제
하고 시험조작에준하여 액
층1㎝,546㎚에서흡광 도를
측정하고검량선 을작성한다 .
4.2시험 용액의 조제
4.2.1 원료를 정밀히달아C시액
에약25㎎/㎖농도가 되게 한다 .
4.3시험조작
4.3.1 10㎖용량플라스크에 시험
- 290 -용액 1.0㎖를넣고,A시액
6.0㎖,B시액 0.25㎖를각각 
가한 다음 혼합하여뚜껑 을
씌워 밀봉한후,수욕상에서
40분간반응 시킨 다음얼음
물을 이용하여 실온으 로냉
각시킨다 .각각 의시험관에
A시액첨가하여최종 용량
이10㎖가 되도록 한다 .시
험용액의 공시험용으로 시
험용액 대신 C시액 1.0㎖를
사용하여 이하 시험용액의
시험조작과동일하게 조작
한다 . 시험용액은 액층
1cm,파장 546㎚에서 공시
험용액을 대조액으로 하여
흡광 도를측정한다 .
5.분석및계산
5.1계산식
총프로시아니딘 (%)=200×C×S/W× 100- 291 -C:표준곡선으 로부터얻은시험용
액의농도(㎎/㎖)
S:표준품의순도(%)
W:검체채취량(g)
<신 설> 3-87 올리유로핀 (Oleuropein)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 올
리유로핀을 고속액체크로마토 그래프/
자외부흡광광 도검출기를 사용하여 분
석하는 방법으로최대흡수파장인 233
nm에서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖,1L)
2.1.2 HPLC 용유리병
2.1.3 용매용일회용실린저
2.1.4 초음파진탕기
2.1.5 원심분리기
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
- 292 -2.2.2 C18(60Å,3.9mm×150
mm,4μm)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Oleuropein
 분자식:C25H32O13,분자량:
540.51, CASNo.:32619-42-4
3.2일반시약
3.2.1 Sodiumcitrate dibasic
sesquihydrate
3.2.2 메탄올(Methanol)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1시험용매
4.1.1 1.0g의 sodiumcitrate
dibasic sesquihydrate 를
600㎖의증류수에녹이고 ,
400㎖의methanol과혼합
한다 .
4.2표준용액 제조
 4.2.1 올리유로핀 3～5㎎을정- 293 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 25℃
이동상 isocratic (시험용매)
유속 1.0㎖/분
검출기 파장 (UV) 233 nm밀히달아서 시험용매100
㎖에녹여표준용액으로한
다.(제조시점기준 24시간
이내 사용 )
4.3시험용액 제조
 4.3.1 시료 30～50㎎을측량 하
여시험용매70㎖에넣어
녹인후10분동안상온에
서ultra sonicbath로완전
히녹인다 .
 4.3.2 시험용매로100㎖맞춘 후
원심분리하여 시험용액으
로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
5.2계산
올리유로핀 함량(㎎/g)=AxB/S
x1,000
A:시험용액 중올리유로핀의농도
- 294 -(μg/㎖)
B:시험용액전량(㎖)
S:검체채취량(g)
<신 설> 3-88 크레아틴 모노하이드레이트
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 중크레아틴을
추출하여 액체크로마토그래피/자외
부흡광 광도검출기를 이용하여
정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 여과용멤브레인 필터
2.1.3 액체크로마토그래피용
 유리병
2.1.4 용매용일회용실린지
2.1.5 초음파진탕기
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 자외부흡광광 도검출기- 295 -2.2.3 양이온교환 컬럼Nucleosil
 100-5 SA(4.6×250mm)
 또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Creatine
monohydrate(2-(methylguanidino)et
hanoic acid)
 분자식:C4H9N3O2․H2O,
분자량:149.15, CASNo.:
6020-87-7
3.2일반시약
3.2.1 인산 2수소암모늄(Ammonium
phosphate, HPLCgrade)
3.2.2 수산화나트륨(Sodium
hydroxide)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액의 조제
4.1.1 표준물질을 정밀하게칭량
- 296 - 하고 증류수로녹여100㎖
 로한것을표준용액으로
 한다 .
4.1.2위표준용액을 증류수로적
절히희석하여 표준용액으로사용한
다.
4.2시험용액의 조제
4.2.1 크레아틴으로서 10～40㎎이
함유되도록적당량의시료
를달아100㎖부피 플라스
크에넣고증류수를 50㎖
넣는다 .
4.2.2 시료를잘흔들 어추출한
후초음파 진탕기로 2분간
더추출한다 .
4.2.3 증류수로 표선까지맞춘 다
4.2.4 0.45㎛멤브레인 필터로여
과한 용액을 시험용액으로
한다 .
5.분석및계산- 297 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 40℃
이동상2.3%Ammonium
phosphate(pH5.5)
유속 0.5㎖/분
검출기
파장 (UV)225 nm
크레아틴 함량
(㎎/g)=A×B×C
D×10005.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래피조건(예)
5.2계산
5.2.1 크레아틴 표준용액의 피크
면적으 로검량선 을작성하
고,검량선 식을 이용하여
시험용액 중의 크레아틴농
도를구한후아래식을 이
용하여 크레아틴 함량을계
산한다 .
A:시험용액의 전량
B:희석배 수
C:시험용액 중의 크레아틴의농
도(㎍/㎖)
D:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
- 298 -<신 설> 3-89 알파글루코시다제 (α-Glucosidase)
 활성 억제능
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한
알파 글루코시다제를 발색시켜분광
광도계로정량하는 방법이다 .
※α-GlucosidaseIC50:α-Glucosidase 의
활성을 50%저해하는 신청원료의농도
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 메스실린더
2.1.2pHmeter
2.1.3 마그네틱 바(Magnetic stirrer)
2.1.4 항온수조 (waterbath)
2.1.5 초음파파쇄기(ultrasonicator)
2.1.6 진탕기 (Vortex)
2.1.7 원심분리기
2.2분석장비- 299 -2.1.1 분광광도계(Spectrophotometer)
3.시약목록
3.1표준시약 
3.1.1Intestinal acetonepowders
fromrat
3.1.2 Glucosekit(Autokit
Glucose,Wako사)
3.2일반시약
3.2.1 자당 (Sucrose)
3.2.2 수산화나트륨(Sodiumhydroxide)
3.2.3 아세트산 (Acetic acid, 99.7%)
3.2.4 증류수 (Distilledwater)
3.2.5 인산
4.시험과정
4.1시약 제조
4.1.1 50mMphosphatebuffer(pH
7.0) 250mMphosphate
buffer 를 제조하여 5N
NaOH 로pH7.0 을맞춘 후
- 300 -5배희석하여 50mM
phosphatebuffer(pH7.0)를
시험에 사용한다 .
4.1.2 0.2Nacetic acid (100㎖)
 0.2Nacetic acid 용액을만
들어상온보관 하여 사용한다 .
4.1.3 0.2NNaOH (100㎖)
 0.2NNaOH 용액을만들어
상온보관 하여 사용한다 .
4.1.4 글루코즈측정용 발색제
 실험직전에 2.1.2glucosekit
의 2.1.2.①완충 제용액 (150
㎖)에 2.1.2.②분말발색제(150
㎖)을혼합하여 사용한다 .
4.1.5 100㎎/㎖Ratintestinal
acetonepowder solution( 효소
원액 )
Intestinal acetonepowders
fromrat2g를정확히칭량
하여 50mMphosphate- 301 -buffer(pH7.0) 20㎖를가하
여혼합한후얼음위에서 50
watt로2분동안,10분간격
으로2회sonication 한다 .원
심분리 (10,000 rpm,10분,4˚
C)후상징액을 취하여 1.5
㎖용의 tube에소분하여냉
동보관 하며,분석전에 해동
하여 50mMphosphate
buffer(pH7.0)로5배희석하
여사용한다 .
4.1.6 20mMSucrose solution( 기
질용액 ,200㎖)
 20mMSucrose 용액을만들
어냉장보관 하여 사용한다 .
4.2시험용액 제조
4.2.1 시험용액 (콩발효 추출물 용
액)제조
 시료 50㎎을정확히칭량 하고
- 302 -항목기질
용액
(㎕)Touc
hi
extra
ct
용액
(㎕)증류
수
(㎕)효소
희석
액
(㎕)Total
volu
me
(㎕)
공대
조구100 0 100 0 200
공 시 험 100 0 50 50 200증류수 1㎖를가하여 진탕기
로 혼합한다 .원심분리 (10,000
rpm,10분,상온)후,상징액을
50배희석하여 (20㎕원액 +
980㎕증류수 )표1의시험용
액(콩발효 추출물 용액 )으로사
용한다 .
5.분석및계산
5.1 알파글루코시다제 저해활성
측정
5.1.1 시험관에아래의표1과같
이기질용액 ,증류수 ,시험
용액 (콩발효 추출물 용액 )을
첨가한다 .
표1- 303 -구
대조구1 100 12.5 87.5 0 200
대조구2 100 25 75 0 200
대조구3 100 50 50 0 200
시험구1 100 12.5 37.5 50 200
시험구2 100 25 25 50 200
시험구3 100 50 0 50 200
5.1.2 효소를첨가하는 시험관은
항온수조에넣어37˚C에서
5분간예비가열하고 효소를
첨가하지않는시험관은실온
에서 실험한다 .
5.1.3 효소를첨가하는 시험관에
효소희석액50㎕첨가하여
30분간항온수조에서반응
시킨다 .(각시험관의반응
시간이정확하게 30분간이
되도록 20초마다첨가한
다.)
5.1.4 30분후,20초마다반응 정
지액 0.2NNaOH 를150㎕
를첨가 하여 혼합한다 .
5.1.5 효소를첨가하지않은시험
관에도 0.2NNaOH 를150㎕
를첨가한다 .
- 304 -5.1.6 모든시험관에0.2Nacetic
acid를150㎕를첨가하고
혼합하여 중화시킨다 .
5.1.7 모든시험관에혼합한 발색
제(3.1.4) 를500㎕를첨가하
고혼합한다 .
5.1.8 모든시험관을항온수조에
넣고37˚C에서 30분간반응
시킨다 .
5.1.9 분광광 도계545 nm에서흡
광도를측정한다 .
5.2계산
알파글루코시다제 활성 억제능
IC50(㎎/㎖)은시험용액 (콩발효 추출
물용액 )농도의 대수와저해율의
관계 를 나타내는 그래프에서 α
-glucosidase 의활성을 50%저
해하는농도를계산한다 .알파글
루코시다제 의 활성저해율(%)을- 305 -알파
글루
코시
다제
활성
저해
율(%)= 100-A545시험구 -A545대조구
× 100
A545공시험구 -A545공대조구구하는 공식은 아래와 같다 .
4.2.1 알파글루코시다제 활성저해율
<신 설> 3-90 Tris(Tris-hydroxymethyl-aminomethane)
1.시험방법의 요약
본시험법은 아세토니트릴을 이용
하여 시료 중Tris 의검출시간과
동일한 시간의표준품의 피크를 확
인한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 Screw-toptest tube
2.1.2 원심농축 기(Centrifugal
concentrator)
2.1.3 필터(ultra filter, 3KDa
filter)
2.1.4 오일배스(oilbath)
- 306 -
2.1.5 진탕기 (Vortex)
2.1.6 원심분리기 (Centrifuge)
2.2분석장비
2.1.1 가스크로마토그래프
(GC)/불꽃 이온화검출기 (FID)
2.1.2 OV-1칼럼(25m⨯0.32mm,
직경0.12μm)또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Tris (hydroxym ethyl)
aminomethane (Tris)
 분자식:NH2C(CH2OH)3
,분자량:121.24, CASNo.:77-86-1
3.2일반시약
 3.2.1 증류수 (Distilledwater,
HPLCgrade)- 307 - 3.2.2 아세토니트릴 (Acetonitrile,
HPLCgrade)
 3.2.3염화메틸렌(Dichloromethane,
HPLCgrade)
 3.2.4Bis(Trimethylsilyl)
trifluoroacetoamide(BSTFA)
4.시험과정
4.1표준용액 제조
4.1.1 Trimethylsilylation(TMS) 하
기위해서 표준물질 약100
㎎에아세토니트릴 0.5㎖를
가하여충분히녹인후
BSTFA0.5㎖를첨가한다 .
오일배스에서 160℃,2시간
동안유지하는데 초기 30분
동안은 10분마다 ,30분후에
는30분마다샘플을교반 시
킨다 .반응 이끝나면냉각 시
키고12,000 rpm,30분동안
원심분리후상징액을 표준
- 308 -용액으로사용한다 .
4.2시험용액 제조
4.2.1 10%콩발효 추출물 용액을
12,000 rpm,10분동안원심
분리후상징액500㎕를취
하여 3KDafilter 로14,000g,
100분동안여과한다 .여과액
을원심농축 기로 건조시킨
후염화메틸렌1㎖를가하
여녹인후진공건조시킨다 .
4.2.2 TMS 화를위해서 아세토니
트릴 0.5㎖를가하여충분
히녹인후BSTFA0.5㎖
를첨가한다 .오일배스(oil
bath)에서 160℃로2시간동
안 유지하는데 초기 30분
동안은 10분마다 ,30분후
에는 30분마다샘플을교반
시킨다 .반응 이끝나면냉
각시키고 12,00rpm,30분- 309 -항목 조건
컬럼OV-1,25m⨯0.32mm,직경
0.12μm
컬럼온 도100℃에서 2분정체
1℃/분으로100～140℃
10℃/분으로140～230℃
캐리어
가스헬륨
Splitratio 1:100
주입량 2～5㎕
주입온도 230℃
검출기
온도250℃동안원심분리후상징액을
시험용액으로사용한다 .
5.분석및확인
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2확인
TMS 화한 시험용액을 GC분석하여 ,
TMS 화한 Tris 의검출시간과동일한
시간의피크를 확인한다
<신 설> 3-91 지방족 알코올
3-91-1 지방족 알코올 (제1법)
1.시험방법의 요약
- 310 -본시험법은 시료로부터추출한 지
방족 알코올을 가스 크로마토 그래프
분석하는 방법으로형광검 출기를
이용하여 분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (250㎖,100㎖)
2.1.2 캡튜 브(10㎖)
2.1.3 질소농축 기
2.2분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (Flame
Ionization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 J&W-DB5(30m×0.53mm× 1.5um)
또는 이와등등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 1-tetracosanol- 311 -3.1.2 1-hexacosanol
3.1.3 1-heptacosanol
3.1.4 1-octacosanol
3.1.5 1-triacontanol
3.1.6 MSTFA (N-methyl,
N-Trimethylsyliltrifluoroaceta
mide)
3.1.7 1-eicosanol
3.2일반시약
3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 내부표준용액 1-eicosanol
110㎎을 250㎖용량플라스
크에 정확히 취하여 클로로
포름으 로용해후정용한다 .
4.1.2 1-Hexacosanol 12㎎,
1-octacosanol 130㎎,
1-tricontanol 28㎎을 정확
히취하여각각 100㎖용량
- 312 -플라스크에넣은후클로로
포름으 로 용해후정용한
다.
4.1.3 1-tetracosanol 6㎎을정확
히취하여 100㎖용량플라
스크에넣은후클로로포름
으로용해후정용한다 .이
용액을 50배희석한다 .
4.1.4 1-heptacosanol 9㎎을정확
히취하여 100㎖용량플라스
크에넣은후클로로포름으
로용해후정용한다 .이용
액을 5배희석한다 .
4.1.5 4.1.2 용액 ,50배희석한
4.1.3 용액 ,5배희석한4.1.4
용액을각각 500㎕씩10㎖
캡튜 브에넣은후40℃에서
질소로 용매를건조시킨다 .
※각표준용액의농도:
1-tetracosanol 0.0006㎎/0.5㎖
1-hexacosanol 0.06㎎/0.5㎖- 313 -1-heptacosanol 0.009㎎/0.5㎖
1-octacosanol 0.65㎎/0.5㎖
1-triacontanol 0.14㎎/0.5㎖
4.1.6 캡튜 브에 내부표준용액 150
㎕,MSTFA(N-methyl,
N-Trimethylsyliltrifluoroa
cetamide)50㎕를첨가하
여캡을닫은후heating
block에서 65℃에서 15분
간유도체시키고방냉하
여표준용액으로사용한
다.
4.2시험용액
4.2.1 10㎖캡튜 브에 폴리코사놀
로서 20㎎에해당되는 시료
량을정확히 취한다 .
4.2.2 내부표준용액 3㎖을첨가하
고캡을닫은후40℃에서
15분간 가열한다음 5분
간초음파 처리를 하여 시
료를 용해시킨다 .
- 314 -항목 조건
오븐온 도250℃에서 분당 8℃씩
승온 하여
318℃에서 10분간유지
캐리어가스 수소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎕
주입온도 320℃
검출기온도 330℃4.2.3 방냉후3000rpm으로원심
분리한다 .
4.2.4 상등액 150㎕를10㎖캡튜 브
에넣고50㎕MSTFA를첨
가한다 .
4.2.5heatingblock에서 65℃에서
15분간유도체시키고 방냉
하여 시험용액으로 사용한
다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액 및시험용액을 기체
크로마토그래프내에 주입하여- 315 -알코
올함
량
(%)=시료의
피크
면적×표준품
취한량
(㎎)×1
×Dil
uti
on
fac
tor3
×0.5×표준
품순
도시료
취한량
(㎎)표준품
의피크
면적100 0.15각지방족 알코올의 그래프
를얻는다 .이그래프를 표
준용액 그래프와비교하여
해당 피크를 확인한다 .각
지방족 알코올의 함량은피
크의면적으 로 다음 식에
따라 산출한다 .
※Dilution factor:1-Hexacosanol,
1-octacosanol, 1-tricontanol=1.0
1-heptacosanol=0.2,1-tetracosanol=0.02
총지방족 알코올 함량(%)=개별
지방족 알코올의 합(%)
5.2.2. 1-nonacosanol, 1-dotriacontanol, 
1-tetratriacontanol 은 상용
화된표준품이없으므 로아
래의식과 같은각화합물의
RT와내부표준용액의 RT
를가지고 비교한다 .
- 316 -RRT=각화합물의RT
내부표준용액의RT
-1-nonacosanolRRT:3.24
-1-dotriacontanol RRT:4.21
-1-tetratriacontanol RRT:5.14
5.2.3. 1-nonacosanol 은1-octacosanol 로
1 - d o t r i a c o n t a n o l ,
1 - t e t r a t r i a c o n t a n o l 은
1-triacontanol 로계산한다 .
<신 설> 3-91-2 지방족 알코올 (제2법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 지
방족 알코올을 가스 크로마토 그래프
분석하는 방법으로형광검 출기를
이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 용량플라스크 (5㎖)
2.1.2캡튜 브
2.2분석장비- 317 -2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (Flame
Ionization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 J&W-DB1(30m×0.32mm× 0.25um)
또는 이와등등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 1-tetracosanol
3.1.2 1-hexacosanol
3.1.3 1-heptacosanol
3.1.4 1-octacosanol
3.1.5 1-triacontanol
3.2일반시약
3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
3.2.2 BSTFA
(N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetami
de)
4.시험과정
- 318 -4.1표준용액
4.1.1 1-tetracosanol 약 0.02㎎,
1-hexacosanol 약 1.5㎎,
1-heptacosanol 약 0.3㎎
1-octacosanol 약 15.0㎎,
1-tricontanol 약3.3㎎을정
확히 취하여각각 5㎖용량
플라스크에넣은후내부표
준용액 3.0㎖을첨가하고 4
0℃에서 가온하여 용해시킨
후냉각 하여 클로로포름으
로정용한다 .
4.1.2 캡튜브에 4.1.1 용액 150㎕,
B S TF A
(N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacet
amide)100㎕를첨가하여캡
을닫은후heatingblock7
0℃에서 15분간 유도체시
키고 방냉하여 표준용액으
로사용한다 .- 319 -4.2시험용액
4.2.1 5㎖용량플라스크에 폴리코사
놀로서 10㎎에해당되는 균질
화된시료를 정확히 취한다 .
4.2.2 내부표준용액 3㎖을첨가하
여마개를닫은후40℃에
서15분간가열한다음 5
분간초음파 처리를 하여
시료를 용해시킨다 .
4.2.3 방냉후클로로포름으 로정
용한다 .
4.2.4 4.2.3 용액 150㎕를10㎖캡
튜브에넣고100㎕BSTFA
를첨가한다 .
4.2.5heatingblock에서 70℃15
분간유도체시키고 방냉하
여시험용액으로사용한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
- 320 -항목 조건
오븐온 도230℃에서 분당 3℃씩
305℃까지승온 한후
분당
20℃로350℃까지승온 하여
15분간유지
캐리어가스 수소 또는 질소
Splitflow 1.5㎖/min
주입량 1㎕
주입온도 320℃
검출기온도 330℃
알코올
함량
(㎎/g)=표준
용액
내부표
준물질
의
피크
면적 ×시험
용액
의
피크
면적
×표준품
취한량(㎎)
×표준품
순도 시험
용액
내부
표준물
질의
피크
면적 표준
용액
의
피크
면적시료 취한량
(g)5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액을 기
체크로마토그래프내에 주입
하여각지방족 알코올의
그래프를얻는다 .이그래
프를 표준용액 그래프와비
교하여 해당 피크를 확인한
다.각지방족 알코올의 함
량은 피크의면적으 로다
음식에 따라 산출한다 .
총지방족 알코올 함량(㎎/g)=개별
지방족 알코올의 합(㎎/g)- 321 -RRT=각화합물의RT
내부표준용액의 RT5.2.2 1-nonacosanol 은1-octacosanol 로
1 - d o t r i a c o n t a n o l ,
1 - t e t r a t r i a c o n t a n o l 은
1-triacontanol 로계산한다 .
5.2.3 1-nonacosanol,
1 - d o t r i a c o n t a n o l ,
1-tetratriacontanol 은 상용
화된표준품이없으므 로아
래의식과 같은각화합물
의RT와내부 표준용액의
RT를가지고 비교한다 .
-1-nonacosanolRRT:5.11
-1-dotriacontanol RRT:7.01
-1-tetratriacontanol RRT:8.27
<신 설> 3-92 테르피놀렌 (terpinolene)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 테
르피놀렌을 가스 크로 마토 그래프분
석하는 방법으로형광검 출기를 이용
- 322 -하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (Flame
Ionization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%
Polyetylene Glycol)을충전한 칼
럼(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이
와동등이상인것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 테르피놀렌 (terpinolene)
분자식:C10H16,분자량:136.24,
CASNo.99-86-5
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드
(methylene chloride)- 323 -4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 테르피놀렌 표준품을각각 
0.1g을취하여 10㎖플라스
크에넣고각각 의플라스
크에 10㎖가되도록 메칠
렌클로라이드 용액을 정
확히채워10,000㎍/㎖농
도의 표준원액을 준비한다 .
표준원액들을10배희석하
여1,000㎍/㎖가되도록
메칠렌클로라이드로 녹여
표준용액을 조제한후,검
량선 작성을위하여 표준용
액이 10, 50, 100, 200, 500
㎍/㎖가되도록희석하여
검량선 을작성한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에
0.1g을정밀하게달아50㎖
- 324 -항목 조건
오븐온 도초기온도50℃(2분),승온
(8℃/분),최종온
도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃메칠렌클로라이드를 첨가하
여잘혼합한후메칠렌클
로라이드를첨가하여 100㎖
로 정용하여 시험용액으로
한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각
각1㎕씩주입하여앞의조
건에서 따라 시험한다 .각
표준물질의농도별 피크면
적을이용하여검량선 을작
성한후시험용액의 피크면- 325 -테르피놀렌 함량
(㎎/g)=C×V
× 1,000
W적을이용하여 테르피놀렌
의농도를구한후다음 식
에따라 함량을구한다 .
C:시험용액 중테르피놀렌 함량(㎎
/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료
채취량(㎎)
<신 설> 3-93 3-카렌 (3-carene)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 3-
카렌을 가스 크로 마토 그래프분석하
는방법으로형광검 출기를 이용하여
정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (Flame
Ionization Detector)
- 326 -2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%
Polyetylene Glycol)을충전한 칼
럼(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이
와동등이상인것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 3-카렌 (3-carene)
분자식:C10H16,,분자량:136.24,
CASNo.13466-78-9
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드
(methylene chloride)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 3-카렌 표준품을각각 0.1g
을취하여 10㎖플라스크에
넣고각각 의 플라스크에
10㎖가되도록 메칠렌클로- 327 -라이드 용액을 정확히채워
10,000㎍/㎖농도의 표준원
액을 준비한다 .표준원액들
을10배희석하여 1,000㎍/
㎖가되도록 메칠렌클로라
이드로녹여표준용액을 조
제한후,검량선 작성을위
하여 표준용액이 10, 50,
100, 200, 500㎍/㎖가되도
록희석하여검량선 을작성
한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에
0.1g을정밀하게달아50㎖
메칠렌클로라이드를 첨가하
여잘혼합한후메칠렌클
로라이드를첨가하여 100㎖
로정용하여 시험용액으로
한다 .
5.분석및계산
- 328 -항목 조건
오븐온 도초기온도50℃(2분),
승온 (8℃/분),
최종온 도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃
3-카렌
함량(㎎/g)=C×V
× 1,000
W5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각
각1㎕씩주입하여앞의조
건에서 따라 시험한다 .각
표준물질의농도별 피크면
적을이용하여검량선 을작
성한후시험용액의 피크면
적을 이용하여 3-카렌의
농도를구한후다음 식에
따라 함량을구한다 .
C:시험용액 중3-카렌 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료- 329 -채취량(㎎)
<신 설> 3-94 리모넨 (limonene)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 리
모넨을 가스 크로 마토 그래프분석하
는방법으로형광검 출기를 이용하여
정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.2.1 가스크로마토그래프
2.2.2불꽃 이온화검출기 (Flame
Ionization Detector)
2.2.3 칼럼오븐
2.2.4 폴리에칠렌글리콜(100%
Polyetylene Glycol)을충전한 칼
럼(30m×0.25mm× 0.25㎛)또는 이
와동등이상인것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
- 330 -3.1.1 리모넨 (limonene)
분자식:C10H16,,분자량:136.24
3.2일반시약
3.2.1 메틸렌클로라이드
(methylene chloride)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 리모넨 표준품을각각 0.1g
을취하여 10㎖플라스크에
넣고각각 의플라스크에 10
㎖가되도록 메칠렌클로라
이드 용액을 정확히채워
10,000㎍/㎖농도의 표준원
액을 준비한다 .표준원액들
을10배희석하여 1,000㎍/
㎖가되도록 메칠렌클로라
이드로녹여표준용액을 조
제한후,검량선 작성을위
하여 표준용액이 10, 50,
100, 200, 500㎍/㎖가되도- 331 -항목 조건
오븐온 도초기온도50℃(2분),
승온 (8℃/분),
최종온 도230℃(1.75 분)
캐리어가스 질소
Splitflow 20㎖/min
주입량 1㎖
주입온도 200℃
검출기온도 230℃록희석하여검량선 을작성
한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료를 100㎖플라스크에
0.1g을정밀하게달아50㎖
메칠렌클로라이드를 첨가하
여잘혼합한후메칠렌클
로라이드를첨가하여 100㎖
로 정용하여 시험용액으로
한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프조건
5.2계산
5.2.1. 표준용액과 시험용액을각
각1㎕씩주입하여앞의조
- 332 -리모넨
함량(㎎/g)=C×V× 1,000W건에서 따라 시험한다 .각
표준물질의농도별 피크면
적을이용하여검량선 을작
성한후시험용액의 피크면
적을이용하여 리모넨의농
도를구한후다음 식에 따
라함량을구한다 .
C:시험용액 중리모넨 함량(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)W:시료
채취량(㎎)
<신 설> 3-95 SOD 활성
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료 내SOD 활성을
검출하기위해키트를 이용하여 분
석을한다 .
2.장비와재료
2.1장비 및소모품
2.1.1Fluka 19160 SOD- 333 -determinationkit
 2.1.1.1WST solution 5㎖1EA
 2.1.1.2Enzym eSolution 100㎕l
x1
 2.1.1.3Buffer Solution 100㎖
x1
 2.1.1.4 DilutionBufferEnzym e
50㎖x1
 2.1.1.5 Manual 1Booklet
2.2분석장비 
2.2.1 Plate reader (450 nm
filter)
2.2.2 96-wellmicroplate
2.2.3 10㎕&100-200㎕
pipettes,multi channelpipette
2.2.4Incubator
2.2.5 Superoxide dismutase
(SOD) 
(필요시저해도곡선(inhibition
curve)을조제 )
- 334 -3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 SOD 용액
3.2일반시약
3.2.1 증류수 (Distilledwater,
HPLCgrade)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1WSTworkingsolution 
WST 용액 1㎖에Buffer
Solution 19㎖을혼합하여희석
시킨다 .
4.1.2Enzym eworkingsolution
Enzymetube용액을 5초간원
심분리 한후pipeting을이용
하여 혼합하고 15㎕Enzyme
Solution 을DilutionBuffer 2.5
㎖로희석한다 .
4.1.3 SOD 용액 (필요 시)
 SOD와DilutionBuffer 로다음- 335 -과같이 SOD 표준물질을 제조
한다 .
 200U/㎖,100U/㎖,50U/
㎖,20U/㎖,10U/㎖,5U/
㎖,1U/㎖,0.1U/㎖,0.05
U/㎖,0.01U/㎖,0.001U/㎖
4.2시험용액
4.2.1 1.2g의메론 추출물을넣고
 7㎖의증류수를첨가한다 .
4.2.2Vortexing:2분수행 
4.2.3 Sonicate:15분수행 
4.2.4Vortexing:2분수행 
4.2.5 6～8℃의온도에서
1,600rpm속도로 25분간원심분리 
4.2.6투명 한용액층을분리하여갈
색10㎖플라스크에옮겨담고,
증류수로 10㎖을맞춘 다
(solution A)
solution A의 메론추출물농도(㎎/
㎖)=120.0
4.2.7 solution A를각well에다음의
- 336 -농도를 따르도록 한다 (㎍/㎖)
<S1=150/S2=250/S3=350/S4=450/S5
=550/S6=650>
예)농도별 sample의준비 (단위:
㎕)
Samplesolutions=S
S1 S2 S3 S4 S5 S6
150
㎍/
㎖250
㎍/
㎖350
㎍/
㎖450
㎍/
㎖550
㎍/
㎖650
㎍/
㎖
Volume(Vi)
Solution A30 50 70 90 110 130
Volume(Vf)(H2O)197
0195
0193
0191
0189
0187
0
※Sample전처리 시주의점
-Vortexing및Sonication 을충분한
시간동 안 수행한다 .원심분리를
1,600 rpm에서 25분시행한후,용
액의 상층액을 취할때아래에녹
지않은powder가나오지않게
한다 .
4.3시험조작
4.3.1.well에준비된용액을 준비
한다 .SOD 표준용액을 사용
할경우샘플과 같은 방
법으로setup한다- 337 -4.3.2각samplewell과2번blank
well에 20㎕sample용액을
가한다 .각blank1번과3번
well에20㎕2차증류수를
가한다 .
4.3.3 200㎕WSTworking
solution 을각well에가
하고 혼합한다 .
4.3.4Blank2와3well에
DilutionBuffer 20㎕를
첨가한다 .
4.3.5각sample과blank1well
에Enzym eworking
solution 20㎕를 가한후
완전하게 혼합한다 .
4.3.6plate를37℃에서 20분간
incubation 시킨다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
5.1.1 Micro-plate Leader 로450
- 338 -SOD
활성=(A blank1- A blank3)-S 
sample-A blank 2×100
 A blank1 - A blank3nm에흡광 도를측정한다
5.2계산
5.2.1 다음의 식을 사용하여 SOD
활성 (inhibition rate%)계산한다 .
<신 설> 3-96 알파에스 1카제인 (αS1-casein)(f91-100)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 알
파에스 1카제인 (f91-100) 을고속액체
크로마토 그래프분석하는 방법으로
자외부흡광광 도검출기를 이용하여
분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (50㎖)
2.1.2 HPLC 용유리병
2.1.3 용매용일회용실린지
2.1.4 여과용멤브레인 필터- 339 -(PTFE,0.45㎛)
2.1.5교반 기(Stirrer) 
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외부흡광 광도검출기
(UVDetector)
2.2.3 C18XTerraⓇ,(4.6mm× 250
㎜,5㎛)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 Decapeptide(Synthetic α
S1-casein (f91-100))
 분자식:C60H94N14O16
 분자량:1267.50
3.2일반시약
3.2.1 트리플루오로아세트산
(trifluoroacetic acid)
3.2.2 증류수 (Distilledwater)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile,
HPLCgrade)
- 340 -4.시험과정
4.1표준용액 제조
4.1.1 Synthetic 알파에스 1카제인
(f91-100) 표준물질 (Cat
No.: 51872, ingredia
nutritional,FRANCE,Lot
No.: P080329-XY51872, 
Purity:95.94%)약10㎎
(±0.1㎎)을취하여 50㎖의
용기에넣고이동상A,B
가 혼합된용액 (74:26
(v:v))으로녹인다 .
4.1.2 알파에스 1카제인 (f91-100)으
로서최종1㎎/㎖의농도가
되도록 한다.
4.1.3 30분간stirring한후표준
원액을적절히희석(예;
1:20)하여검량선 작성용 표
준용액을 조제한다 .
4.1.4 0.45㎛멤브레인 필터로여
과한것을표준용액으로한- 341 -항목 조건
주입량 100μl
칼럼온 도 37℃
이동상A용매–0.1%
trifluoroacetic acidwithwater
B용매–0.1%
trifluoroacetic acidwith
acetonitrile
유속 0.8㎖/분
검출기 파장 280 nm다.
4.2시험용액 제조
4.2.1 원료 약20㎎(±0.1㎎)을
50㎖의용기에 취하여 이동
상 A,B가혼합된용액
(74:26(v:v))으로녹인다 .
4.2.2 유단백 가수분해물로서 2
㎎/㎖의농도가 되도록 한
다.
4.2.3 30분간stirring한후0.45
㎛멤브레인 필터로여과
한것을시험용액으로한
다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
- 342 -시간 (분)용매
A(%) B(%)
0 74 26
20.0 66 34
20.1 1 99
25.0 1 99
25.1 74 26
34.0 74 26표2.이동상조건
5.2계산
αS1-casein (f91-100) 함량(㎎/g)
=A×B×C/S
 A:시험용액 중αS1-casein
(f91-100) 의농도(㎎/㎖)
B:희석용량(㎖)
 C:표준품순도
 S:시료채취량(g)
<신 설> 3-97 알파글루칸
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료의 알파글루칸을
효소처리하여 글루코오스형태 로
분해 하고 발색시켜분광광 도계로
정량하는 방법이다 .이때글루코오스
를표준물질으로사용하며최대흡
수파장인 505 nm에서 정량분석- 343 -한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 분석저울
2.1.2 항온수조
2.1.3pH미터
2.1.4 피펫
2.1.5 시험관
2.1.6 메스플라스크
2.2분석장비
2.2.1 분광광 도계
3.표준물질 및시약
3.1표준물질 및표준용액
3.1.1 글루코스 (Glucose)
 분자식:C6H12O6분자량:
180.16 CASNo.:50-99-7
 글루코스 CⅡ테스트와코키트
에첨부된글루코스 표준액Ⅰ,
글루코스 표준액Ⅱ를 사용해서
- 344 -각농도의 글루코스 표준액을 조
제
3.1.2 0.5㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)1.0
㎖를정확하게 취해 이온교환 수
를더해정확히 10㎖로한다 .
3.1.3 1.0㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)
2.0㎖를정확하게 취해 이온교
환수를더해정확히 10㎖로
한다 .
3.1.4 2.0㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅰ을그대로 사
용한다 .
3.1.5 3.0㎎/㎖글루코스 표준액
 글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)6.0
㎖를정확하게 취해 이온교환 수
를더해정확히 10㎖로한다 .
3.2시약
3.2.1 아밀로글루코시다제
(Amyloglucosidase, fromAspergillusniger,- 345 -～70units/㎎)
3.2.2 초산 (Acetic acid)
3.2.3 초산나트륨3수화물 (Sodium
acetate trihydrate)
3.2.4 글루코스 CⅡ테스트와코
[키트의구성]
(1)완충 액
-인산완충 액(pH7.1)
-페놀
(2)발색제
-무타로타아제 (돼지신장유래),
-글루코스옥시다아제 (GOD) (미생
물유래)
-페록시다아제 (POD) (서양와사비
유래)
-4-아미노안티피린
-아스코르브산옥시다아제 (AOD)
(호박유래)
(3)글루코스 표준액Ⅰ(2㎎/㎖)
(4)글루코스 표준액Ⅱ(5㎎/㎖)
3.2.5 이온교환 수 (deionized
- 346 -water) 
3.2.6 200mM 초산염완충 액(pH
4.8)
초산나트륨3수화물 13.6g을이온
교환 수약480㎖에녹여여기에
초산을 더해pH4.8로조정해 이
온교환 수를더해500㎖로한
다.(냉장보존)
3.2.7 아밀로글루코시다제 용액
아밀로글루코시다제 10㎎을 200
mM초산염완충 액(pH4.8)에녹여서
10㎖로한다 .(사용 시조제 )
3.2.8 발색시약
발색제1병을완충 액1병과섞
어서 조제한다 .(조제후2～1
0℃에서 1개월 사용 가능)
4.시험조작
4.1 시료 약100㎎을정밀하게
취해 이온교환 수로녹여정확
히10㎖로해시료용 액으로- 347 -한다 .
4.22개의 시험관각각 에시료용액
1㎖를정확하게 취한뒤,이
시험관각각 에200mM초산염
완충 액（pH4.8）1㎖를더
해서섞고한쪽을Sample용
액,다른 한쪽을 Sample
Blank용액으로한다 .별도로
2개의 시험관각각 에이온교환
수1㎖를정확하게 취한뒤,
이시험관각각 에 200mM초
산염완충 액（pH4.8）1㎖를더
해서 섞고한쪽을효소Blank
용액 ,다른 한쪽을 발색시약
Blank용액으로한다
4.3 Sample용액 및효소Blank
용액각각 에 아밀로글루코시
다제 용액 2㎖를더해서 혼
합한다 . 별도로 Sample
Blank용액 및 발색시약
Blank용액각각 에200mM
- 348 -초산염완충 액（pH4.8）2㎖
를더해혼합한다 .
4.4각각 의 시험관에 유리구슬 을
올려 가볍게마개를 해서 5
0℃의수욕중에 1시간반응
시킨다 .
4.5 1시간경과후,즉시빙냉(氷
冷)해효소반응 을정지시킨다 .
4.6 Sample용액 ,SampleBlank
용액 ,효소Blank용액 ,발색
시약Blank용액 및각글루
코스 표준액 10μL를각각 별
도의 시험관에취해 글루코스
CⅡ테스트와코에 부속하는
발색시약 1.5㎖를더해혼합한
다.
4.737℃의수욕중에 5분간반응
시킨다 .
4.8 발색후각검체에 자외가시
흡광 도측정법에 따라 물을 대
조로 파장 505 nm에서흡광- 349 -항목 조건
UV 505 nm도를측정한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.기기분석조건
5.2계산
글루코스 표준액의흡광 도로부터
구한검량선（y=Ax+B)을이용
해서각검체중의 글루코스 Glu）
함량을구해 알파글루칸 함량을
산출한다 .
[Glu total](㎎/㎖)=(ABSST－ABSEB－
B)/A
[Glu free](㎎/㎖)=(ABSSB－ABSCB－
B)/A
[ G l ugl u c a n ] (㎎/㎖)=( [ G l u t o t a l ]－
[Glu free])×4
알파글루칸 (㎎)=[Gluglucan]×10
알파글루칸 (㎎/g)=α-glucan
- 350 -(㎎)/M×0.9
A：검량선 의기울기
B：검량선 의y절편
Glu total：총글루코스양
Glu free：프리 글루코스양
Gluglucan：α-glucan 유래의 글루코스
양
ABSST：Sample용액의흡광 도
ABSEB：효소Blank용액의흡광 도
ABSSB：SampleBlank용액의흡광
도
ABSCB：발색시약Blank용액의흡
광도
M：시료중량（g）
0.9：α-glucan(C 6H10O5)n:162.1n 과 글
루코스 nC 6H12O6:180.1n 의분자량비
<신 설> 3-98 0.19- 알부민
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 알
부민을 고속액체크로마토 그래프/자외
부흡광광 도검출기를 사용하여 분석하
는방법으로최대흡수파장인 280 nm- 351 -에서검출하여 정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 자외부흡광광 도검출기
2.2.3 CapcellpaKC8, 4.6×250mm,
5㎛(Shiseido 사)또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 소맥알부민표준품
※0.19- 알부민은 상용화된표준품
이없으므 로 제조사 (NISSIN
PHARMINC: 25,
KAND A -NIS HIKI - C H O
1-CHOMO, CHIYODA-KU,
- 352 -TOKYO, 101-8441JAPAN)에서
제공한 0.19- 알부민 함량이알려
진원료를 소맥알부민표준품으로
사용
3.2일반시약
3.2.1 삼불 화초산용액
(Trifluoroacetic acid)
3.2.2 아세토니트릴 (Acetonitrile,
HPLCgrade)
3.2.3 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 소맥알부민표준품 일정량을
100㎖용메스플라스크에 정
밀히달아0.1%삼불 화초
산용액 (TFA) 90㎖를가하
여1시간동안교반 하여완
전용해후100㎖로채운 다.
이를 0.45㎛멤브레인 필터
로여과한것을적절히희- 353 -항목 조건
주입량 20μL
컬럼온 도 50℃
이동상A용액 물:삼불 화초산용액 (TFA)
=1000:1
B용액 아세토니트릴:물:TFA=
800:200:1
A용액:B용액=65:35
검출기파장 280 nm
유속 0.8㎖/분석하여검량선 작성표준용
액(100, 200, 300㎎/㎖)으로
한다 .
4.2시험용액
4.2.1 시료 0.1～3g을100㎖용메
스플라스크에 정밀히달아
0.1%삼불 화초산용액
(Trifluoroacetic acid) 90㎖를
가하여 1시간동안교반 하여 
완전용해후100㎖로채운
다.이를 0.45㎛멤브레인 필
터로여과한것을시험용액
으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
- 354 -0.19- 알부민
함량(㎎/g)=C×V× 1,000
W※분석시간은약30분이며,분석종료후B용
액으로15분간흘려불순물을제거한다.
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액을 20㎕
주입하여앞의조건에 따라
시험한다 .표준용액 중0.19-
알부민면적 에의해구한검
량선 에 따라 시험용액 중
0.19- 알부민의농도를구하
고다음 식에 따라 0.19- 알
부민 함량을구한다 .
C:시험용액 중0.19- 알부민 함량
(㎎/㎖)
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(㎎)
<신 설> 3-99 L-글루타민
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 L-
글루타민을 고속액체크로마토 그래프- 355 -분석하는 방법으로형광검 출기를
이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 0.45μm멤브레인 필터
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
(HPLC)
2.2.2 ODS C18컬럼(4.6×250mm,5
㎛)또는 이와동등한것
2.2.3형광검 출기 (FLD)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 L-Glutamine
분자식:C5H10N2O3, 분자량:
146.15, CASNo.56-85-9
3.2일반시약
3.2.1 수산화칼륨(Potassium
hydroxide)
- 356 -3.2.2붕산(Boric acid)
3.2.3 OPA(O-Phthaldialdehyde)
3.2.4 2-Mercaptoethanol
3.2.5 증류수 (Distilledwater)
3.2.6 테트라하이드로푸란
(Tetrahydrofuran, THF)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 L-글루타민 표준품 일정량
을증류수에녹여서 1㎎/㎖의농
도로 조제하여 표준원액으로한
다.표준원액을적절히희석한후
0.45μm멤브레인 필터로여과하
여검량선 작성용 표준용액으로
한다 .(수용액 상에서는쉽게분
해될수있으니사용 전에 조제
한다 )
4.2시험용액
4.2.1 Potassiumborate 용액의
조제- 357 - 61.8g의Boric acid와52.5g의
Potassiumhydroxide를증류수
일정량에용해하고KOH용액으
로pH를10.4로조절한후2L
로정용한다 .
4.2.2 OPA(O-Phthaldialdehyde)
용액의 조제
 OPA 0.25g을 바이알에넣고
메탄올을 3㎖넣어OPA 를완
전히 용해하고
2-Mercaptoethanol 0.4㎖을첨
가하여 사용한다 .(냉장상태에서
일주일까지보관 가능 )
4.2.3 시료 약50㎎을정밀히달아
증류수에 용해한후50㎖로
정용한다 .이용액을 증류수
로10배로희석하고 0.45μ
m의멤브레인 필터로여과
한후시험용액으로 한다 .
(수용액 상에서는쉽게분
해될수있으니사용 전에
- 358 -조제한다 )
4.3시험조작
4.3.1 주입량및유도체 조건
4.3.1.1 자동주입기 사용 (injector
programme사용 시)
4.3.1.1.1 바이얼 2번
(Potassiumborate
용액 )에서 200㎕
/min의속도로 5.0
㎕를뽑는다 .
4.3.1.1.2 시료에서 200㎕/min
의속도로 1.0㎕를뽑는
다.
4.3.1.1.3 공기 중에서 500㎕
/min의속도로 6.0㎕
를섞는다 .(6회반
복)
4.3.1.1.4 0.5min기다린다 .
4.3.1.1.5 바이얼3번(물)에서
0.0㎕를뽑는다 .(바
늘세척)- 359 -4.3.1.1.6 바이얼1번(OPA 시
약)에서 200㎕/min
의속도로 1.0㎕를
뽑는다 .
4.3.1.1.7 공기 중에서 500㎕
/min의속도로 7.0
㎕를섞는다 .(10회
반복)
4.3.1.1.8 바이얼3번(물)에서
0.0㎕를뽑는다 .(바
늘세척)
4.3.1.1.9 주입한다 .
4.3.1.2 자동주입기 사용
(injectorprogramme
미사용 시)
 4.3.1.2.1 시약 및시액의 조제
②OPA(O-Phthaldialdehyde)
용액의 조제에서 조제
된OPA 용액 전량을
Potassiumborate 용
액으로 50㎖정용한
- 360 -항목 조 건
주입량 10μL
검출기
파장여기파장:340 nm,측정파장:450 nm
칼럼
온도10℃
이동상A용액:Tetrahydrofuran(THF)=1870
:130
※A용액은 35.5g의Na2HPO 4・H2O와
13.4g의Sodiumacetate・3H 2O를증
류수 일정량에용해한후pH를7.0
조절하고 2L로정용하여 사용한다 .
유속 1.0㎖/분다.(혼합한 OPA 용
액은냉장보관 하며빛
에노출 시분석능이
급격히떨어진다 .)위
에서 제조된용액과
표준용액 (시험용액 )을
동량으 로 혼합되도록
조작하여 기기에 주입
한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
(예)
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액동일- 361 -L-글루타민 
함량(㎎/g)=A×B
×C×1
S 1,000한양을 주입하여앞의시
험조작에 따라 시험하여
다음과 같이 L-글루타민의 
함량을구한다 .
A:시험용액중 L-글루타민의농도
(μg/㎖)
B:시험용액의 전량(㎖)
S:시료채취량(g)
C:희석배 수
<신 설> 3-100 라이코펜 (lycopene)
1.시험방법의 요약
본시험법은염화메틸렌을 이용하
여 시료 중 all-trans- 라이코펜을
추출하고 고속액체크로마토그래피/
자외부흡광광 도검출기를 이용하
여정량분석한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
- 362 -2.1.1 부피플라스크 (50㎖,100㎖)
2.1.2 여과용멤브레인 필터
2.1.3 액체크로마토그래피용 유리
병
2.1.4 용매용일회용실린지
2.1.5 초음파 진탕기
2.1.6 시험관
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래피
2.2.2 분광광 도계
2.2.3 자외부흡광광 도검출기
2.2.4옥타데실실릴화한 컬럼
(4.6×250mm)또는 이와
동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 all-trans-lycopene(Ψ,Ψ
-carotene,2,6,10,14,19,23,27,31
-Octamethyl-dotriaconta-2,6
,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,30- 363 -
-tridecaene)
분자식:C40H56, 분자량:536.87,
CASNo.:502-65-8
3.2일반시약
3.2.1 부틸히드록시톨루엔
(Butylatedhydroxytoluene,
HPLCgrade)
3.2.2 디이소프로필아민
(Diisopropylamine)
3.2.3 메탄올(Methanol, HPLC
grade) 
3.2.4 아세토니트릴 (Acetonitrile,
HPLCgrade)
3.2.5염화메틸(Dichlromethane,
HPLCgrade) 
3.2.6 헥산 (n-Hexane, HPLC
grade)
4.시험과정
- 364 -4.1부틸히드록시톨루엔시액 조제
4.1.1 500㎖의 용량플라스크에
부틸히드록시톨루엔2.5g을
넣고염화메틸렌으로정용
한다 .빛을차단하여 4℃에
보관할 경우3개월까지 사
용이 가능하다 .
4.시험과정
4.2희석액조제
4.2.1 1ℓ의용량플라스크에 아
세토니트릴 ,메탄올,염화메
틸렌,헥산 및부틸히드록
시톨루엔 시액을각
600:150:150:100:0.5(v/v% )
비율로혼합하고 디이소프
로필에틸아민을 0.05%가되
도록 가하여잘섞은것을
희석액으로한다 .
4.3표준원액의 조제 (A용액 )
4.3.1 100㎖의용량플라스크에 표- 365 -준물질이 6～8㎎이되도록
취하고염화메틸렌10㎖을
가하여 2분 초음파
(sonification) 처리한다 .
4.3.2 표준물질이완전히 용해된
것을확인하고희석액으로
정용한다 .
4.4표준용액의 조제 (B용액 )
4.4.1 100㎖의용량플라스크에 표
준원액 A2㎖를취하고 알
코올과 부틸히드록시톨루엔
시액 1:1(v/v% )로섞은액
을20㎖를가한후n-헥산
으로정용한다 .
4.4.2 분광광 도계472 nm에서흡
광도를측정한다 .
4.4.3위의과정을 3회반복측정
값의평균값을흡광 도값이
라한다 .
4.4.4 별도로 알코올과 부틸히드
록시톨루엔시액 및n-헥
- 366 -표준용액
A의
농도 (㎍/
㎖)=Ax
×a
×b
3450 s c산을 10:10:80(v/v% )으로
혼합한 액을 대조액으로사
용한다 .
Ax:표준용액B를3회측정한흡광
도값
3,450:n-헥산 중472㎚분광광 도
계흡광계 수
s:표준물질채취량(g)
a:표준원액 A최종 정용량(㎖)
c:표준원액 A채취량(㎖)
b:표준원액B최종 정용량(㎖)
4.2시험용액의 조제
4.2.1적당량의시료를달아100
㎖부피플라스크에 넣고부
틸히드록시톨루엔시액 10
㎖와염화메틸렌30㎖를넣
는다
4.2.2 시료를잘흔들 어추출한후
 초음파진탕기로 1분간더추- 367 -항목 조건
주입량 10㎕
칼럼온 도 40℃
이동상Acetonitrile:Methanol:
Dichloromethane:n-Hexane:
Diisopropylethylamine=(475:
475:25:25:0.05,v/v)
유속 1㎖/분
검출기 파장 472 nm 출한다 .
4.2.3희석액으로표선까지맞춘
 다.
4.2.4 0.45μm멤브레인 필터로
 여과한 용액을 시험용액으
 로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
(예)
5.2계산
5.2.1 all-trans- 라이코펜 표준용
액의 피크면적으 로검량선
을작성하고 ,검량선 식을
이용하여 시험용액 중의
all-trans- 라이코펜의농도
- 368 -all-trans- 라이코펜
함량(㎎/g)=A×B× C
D×1,000를구한후아래식을 이
용하여 all-trans- 라이코펜
함량을계산한다 .
A:시험용액의 전량(㎖)
B:희석배 수
C:시험용액중의
 all-trans- 라이코펜의농도(μg/㎖)
D:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
<신 설> 3-101 글루코실 세라마이드 (Glucosylceramide)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 글루
코실 세라마이드 (Glucosylceramide)을
고속액체크로마토 그래프 분석하는
방법으로ELSD검출기를 이용하여
정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료- 369 -2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (10㎖)
2.1.2삼각 플라스크 (100㎖)
2.1.3 분액여두(200㎖)
2.1.4 0.45μm멤브레인 필터
2.2분석장비
2.1.1 고속액체크로마토 그래프
2.1.2Inertsil 100A (3.0×150mm,
5um,GLscience) 또는 이와동등한
것
2.1.3 증기화광산란검출기 (ELSD,
Evaporative Light Scattering
Detector)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 글루코실 세라마이드
(Glucosylceramide)
3.2일반시약
3.2.1 클로로포름 (Chloroform)
3.2.2 메탄올(Methanol)
- 370 -3.2.3 수산화칼륨(Potassium
hydroxide)
3.2.4 증류수 (Distilledwater)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 10㎖용량플라스크에
Glucosylceramide 표준물질
10㎎을정밀하게 달아클로
로포름:메탄올=9:1 혼합액
일정량을넣어초음파처리하
여방냉후정용한것(1.0㎎
/㎖)을 표준원액이라 한다 .
표준원액을적절히희석하
여0.1,검량선 작성용 표준
용액을 조제한다 .
4.2시험용액
4.2.1 100㎖삼각 플라스크에 시료
약1g을취한후0.4N메탄
올성KOH 용액 50㎖을첨
가하여 상온에서 2시간교- 371 -반하여 알칼리 처리를 한다 .
4.2.2 200㎖분액여두에알칼리 처
리액을옮긴후증류수 40㎖
로삼각 플라스크를 세척
하여 분액여두에옮긴후
다시 클로로포름 45㎖로삼
각플라스크를 세척하여 분
액여두로옮긴다.
4.2.3 분액여두를약10분간진탕
한후정치시켜층을분리
시킨후클로로포름층 을취
한다 .
4.2.4위클로로포름 추출과정을
2회반복하여회수된클로
로포름층 을합한다 .
4.2.5 클로로포름 을감압농축 을
통하여농축 한다 .
4.2.6농축된 잔류물을 클로로포
름:메탄올=9:1혼합액에 용
해시켜20㎖로 정용한후
- 372 -항목 조건
시료주입량 10㎕
가스 유량 2L/min
칼럼온 도 37℃
이동상A용액 -클로로포름
B용액 -클로로포름:메탄올
=1:1혼합액
유속 0.6㎖/분
검출기 파장 ELSD
검출기 drift tube
온도70℃표1.고속액체크로마토그래프조건
시간 (분) A용액 (%) B용액 (%)
Initial 99 1
5 97 3
10 35 65
22 1 99
27 99 10.45μm멤브레인 필터로여
과한것을시험용액으로한
다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표2.이동상조건
5.2계산
5.2.1 표준용 액및시험용액동일한
양을 주입하여앞의시험조작
에따라 시험하여 다음과 같- 373 -글루코실
세라미드
함량
(㎎/g)=시험용액
의
농도(㎎/
㎖)×시험 용 액
의전량
(㎖)×1,000
시료채취
량(㎎)이 글루코실세라미드 함량을
구한다 .
<신 설> 3-102 퀘세틴 (quercertin)
3-102-1 퀘세틴 (quercertin)( 제1법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 메탄올을 이용하여 시료
중 퀘세틴을충분히 추출하여
액체크로마토그래프를 통해 분석하는
방법으로 자외선흡광광 도검출기 를
이용하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (100㎖)
2.1.2 HPLC 용유리병
2.1.3 용매용일회용실린지
2.1.4 여과용멤브레인필터(PTFE,
- 374 -0.45μm)
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 다이오드어레이검출기(Diode
 ArrayDetector)
2.2.3 Column:Sunfire™
RP-C18(5 μm,4.6x250mm)
 또는 이와동등한것
2.2.4 Guard Column:Sunfire™
RP-C18 (5μm,4.6x20mm)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 퀘르세틴 (Quercetin)
 분자식:C15H10O7,분자량:
302.24, CASNo.:117-39-5
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol,J.T.Baker,
HPLCgrade)
3.2.2포름 산(Formicacid,Extra
grade)- 375 -3.2.3 증류수 (Distilledwater)
3.2.4 에틸아세테이트 (ethylacetate)
4.시험과정
4.1표준용액 제조
4.1.1 표준품 약10.0㎎을정밀히
달아10㎖용량플라스크에
넣고100%메탄올에녹여
표준원액을 제조하며,이를
적절히희석하여 표준용액
으로사용한다 .
4.2시험용액 제조
4.1.1 시료 10g을물50㎖에
용해시켜 분획깔대기에
넣고여기에 에틸아세테이트
 (ethylacetate) 100㎖를넣고
흔들어 10분 정치시킨후
에틸아세테이트층을 모은다 .
이 과정을 2회더반복
시행한다 .
4.1.2 모두모은 에틸아세테이트
- 376 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 35℃
이동상A용매–1%Formicacid:
MeOH=0.38:0.62
B용매–메탄올(MeOH)
유속 1㎖/분
검출기
파장365 nm표1.고속액체크로마토그래프조건 용액 300㎖을
농축플라스크에넣어40℃로
감압건조한다 .
4.1.3 건조물에 메탄올 5㎖을
넣어녹인후10㎖
메스플라스크옮기고 이후
건조물에 메탄올3㎖,2
㎖을더넣어녹인후
메스플라스크에 넣어
표선까지채운 다.
4.1.4 0.45㎛syringefilter 로
여과하여검액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
- 377 -××××시간 (분)용매
A(%) B(%)
0 100 0
7 100 0
10 0 100
15 0 100
16 100 0
20 100 0표2.이동상조건
5.2계산
A:시험 용액 중퀘세틴의농도(ug/㎖)
B:시험 용액의 전량(㎖)
S:시료채취량(㎎)
P:표준품의순도
n:희석배수
3-102-2 퀘세틴 (quercertin)( 제2법)
1.시험방법의 요약
본시험법은 메탄올을 이용하여
유제품 시료 중 퀘세틴을충분히
추출하여 액체크로마토그래프를 통해
분석하는 방법으로 자외선 흡광 
광도검출기 를 이용하여 정성 및
정량분석을한다.
- 378 -2.장비와재료
2.1. 실험실 장비 및소모품
2.1.1 용매용일회용실린지
2.1.2 여과용멤브레인 필터및
디스크형멤브레인 필터
2.1.3 원심분리관
2.1.4 원심분리기
2.1.5 250㎖둥근바닥플라스크
2.1.6KD수기
2.1.7 감압농축 기
2.1.8Vortex
2.1.9 500㎖분획여두
2.2분석장비
2.2.1 고속액체크로마토그래프
2.2.2 자외선흡광광 도검출기 (UV
Detector)
2.2.3 Column: Sunfire™
RP-C18(4.6x250mm,
5μm)또는 이와동등한
것- 379 -
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1Quercetin(Sigma-Aldrich,
Q4951,≥purity95%)
3.2일반시약
3.2.1 초산 (Acetic acid, HPLC
grade≥purity99.9%)
3.2.2 증류수 (DistilledWater)
3.2.3 아세토니트릴 (Acetonitrile:
TEDIA,HPLCgrade)
3.2.4 초산에틸(EthylAcetate,
Extragrade)
3.2.5 메탄올(Methanol, HPLC
grade)
3.2.6 황산나트륨(Sodiumsulfate,
ultragrade)
4.시험과정
4.1시약제조
4.2표준용액의 조제
- 380 -4.2.1 퀘세틴 표준품 10㎎을정
밀히측정한다 .
4.2.2 정밀히측정한 표준물질을
100㎖메스플라스크에 넣
는다 .
4.2.3 메탄올을넣어메스플라스
크의 표선까지채워넣는
다.
4.2.4 이용액을 표준용액으로하여
메탄올로희석하여각각의표
준용액 농도3.12∼50㎍/㎖
이되게검량선 을작성한다 .
4.3. 시험용액 조제
4.3.1 퀘세틴으로10∼30㎍/g에
상당하는 양(제품 1병,140
㎖)의무게를측정하여 원
심분리관(corningtube)최
대용량의50%이하가 되게
끔분주한다 .
4.3.2 분주량과동량 의 ethyl
acetate 를가하여 1분이상- 381 -강하게vortex한다 .
4.3.3 6,000 rpm(RCF로4,500x
g이상 )20min조건으로
원심분리 한후,맑은상층
을중간층 이혼입되지않도
록 주의하며500㎖
separation funnel 에모은다 .
Ethylacetate 를가하여 추
출하는 과정을 3회실시한
다.
4.3.4 모은 상층은sodiumsulfate
를통과시켜수분을 제거
하며250㎖round-bottom
flask에옮긴후50℃bath
의evaporator 에서최대한
농축 한다 .
4.3.5잔류물을KD수기 (KD-1) 에
옮기고잔류물이담겼던 
round-bottomflask를적량
(3㎖가량)의 ethyl
acetate 로 세척하여KD수
- 382 -기(KD-1) 에담는과정을
3회반복한다 .이어 50℃
bath의 evaporator 를 이용
하여 ethylacetate 를완전
히제거한다 .이때시료가
넘치지않도록 주의하여야
한다 .
4.3.6잔류물이담겼던 
round-bottomflask를적량 
(3㎖가량)의methanol로
세척하여 evaporator 로
ethylacetate 를완전히 제
거한KD수기 (KD-1) 에옮
기고 약하게 (넘치지않도
록)15초간vortex한후5
0℃bath에서 1분이상 정
치한후얻어지는 상층을
새로운KD수기 (KD-2) 로
옮기는 과정을 3회실시한
다.이어 50℃bath의
evaporator 를 이용하여 2- 383 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온 도 25∼35℃
이동상A:2%Acetic acid
B:2%Acetic acid/45%
Acetonitrile 수용액
유속 1㎖/분
검출기
파장355 nm표1.고속액체크로마토그래프조
건(예)
시간
(분)유속용매
A(%) B(%)
0 1 50 50
18 1 0 100
20 1 50 50
22 1 50 50표2.이동상조건㎖이하로농축 한다 .이때
시료가넘치지않도록 주의
하여야한다 .
4.3.7잔류물에methanol을가하
여2㎖로제조한후0.45
μm멤브레인 필터로여과
하여얻은여과액을 시험용
액으로한다 .
5.분석및계산
5.1기기분석
- 384 -5.2계산
5.2.1 시험용액의면적값을표준
검량선 산출식에 대입한다 .
5.2.2 나온값을다음 식에 대입
한다 .
wCBAmLug Quercetin ´´=)/(의농도
A:[7.1] 에서 나온검액의농도
B:1회섭취량(㎖)
C:최종 시험용액 용량(㎖)
W:희석배 수
5.2.3 헛개나무과병추출분말 함유
유음료 1회섭취량중퀘세
틴함량
CBA´=
A:[7.2] 에서 나온값
B:1회섭취량중헛개나무과병추
출분말 함량(2.46g)
C:1회섭취량(㎖)
<신 설> 3-103 노다케닌 (nodakenin)- 385 -1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 노
다케닌 (nodakenin) 을 고속액체크로
마토 그래프분석하는 방법으로자외
부흡광광 도검출기를 이용하여 정
성및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×
250mm(Shiseido) 또는 이와동등한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 노다케닌 (nodakenin)
분자식:C20H24O9,분자량:408
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
- 386 -표준용액 노다케닌농도(㎎/100㎖)
1 0.1000
2 0.2500
3 0.5000
4 1.0000
5 5.0000
순도(%) 1004.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조
각표준물질을 80%메탄올에녹
여아래와 같이 제조한다 .
 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25
배의80%메탄올을 가하여
완전히 용해한후시험용액
으로사용하며,시험용액을
0.45μm필터로여과하여 고
속액체크로마토그래프로 분
석함
5.분석및계산- 387 -항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상 A:0.1%
phosphoric acid in
Water
이동상B:0.1%
Phosphoric acid in
Acetonitrile
검출기 파장 230 nm
유속 1㎖/분
TimeMobile phase
A(%)Mobile phase
B(%)
0 100 0
30 75 25
33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100
검체중
함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×
시험용액총량나)×
희석배수
검체채취량다)5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건 
표2.이동상조건
5.2계산
5.2.1 노다케닌의검체중함량은
다음식에 따라계산한다 .
가)시험용액의농도값(단위:
㎎/100㎖)
- 388 -나)검체(액상 )를80%메탄올
로 용해시킨후시험용액
총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
<신 설> 3-104 피오니플로린 (paeoniflorin)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 피
오니플로린 (paeoniflorin) 을 고속액
체크로마토 그래프분석하는 방법으
로자외부흡광광 도검출기를 이용
하여 정성 및정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×
250mm(Shiseido) 또는 이와동등한것- 389 -표준용액 피오니플로린농도(㎎/100㎖)
1 0.2010
2 0.5025
3 1.0050
4 2.0101
5 10.0503
순도(%) 99.53.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 피오니플로린 (paeoniflorin)
분자식:C23H23O,분자량:480.47,
 CASNo.:23180-57-6
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조
각표준물질을 80%메탄올에
녹여아래와 같이 제조한다 .
 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25
배의80%메탄올을 가하여
- 390 -항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상 A:0.1%
phosphoric acid in
Water
이동상B:0.1%
Phosphoric acid in
Acetonitrile
검출기 파장 230 nm
유속 1㎖/분
TimeMobile phase
A(%)Mobile phase B(%)
0 100 0
30 75 25
33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100완전히 용해한후시험용
액으로사용하며,시험용액
을0.45μm필터로 여과하
여고속액체크로마토그래프
로분석함
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건 
표2.이동상조건
5.2계산- 391 -검체중
함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×
시험용액총량나)×
희석배수
검체채취량다)5.2.1 피오니플로린의 검체중함
량은다음식에 따라계산한
다.
가)시험용액의농도값(단위:
㎎/100㎖)
나)검체(액상 )를80%메탄올
로 용해시킨후시험용액
총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
<신 설> 3-105 클로로겐산 (chlorogenic acid)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한 클
로로겐산 (chlorogenic acid) 을 고속
액체크로마토 그래프분석하는 방법
으로자외부흡광광 도검출기를 이
용하여 정성 및정량분석을한다 .
- 392 -2.장비와재료
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래피
2.1.2 분광광 도계
2.1.3 자외부흡광광 도검출기
2.1.4 CapcellPakC18, 5μm,4.6×
 250mm(Shiseido) 또는 이와동등
 한것
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 클로로겐산 (chlorogenic
acid)
분자식:C16H18O9,분 자량:354.31, CAS
No.:327-97-9
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준용액의 제조- 393 -표준용액클로로겐산 (chlorogeni
acid)농도(㎎/100㎖)
1 0.1171
2 0.2929
3 0.5857
4 1.1714
5 5.8571
순도(%) 98각표준물질을 80%메탄올에녹
여아래와 같이 제조한다 .
 (표준용액제조예시)
4.2시험용액
4.2.1검체(액상 )약1g에약25
배의80%메탄올을 가하여
완전히 용해한후시험용액
으로사용하며,시험용액을
0.45μm필터로여과하여 고
속액체크로마토그래프로 분
석함
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건
- 394 -항목 조건
칼럼온 도 상온
이동상이동상 A: 0.1%
phosphoric acid inWater
이동상B: 0.1%
Phosphoric acid in
Acetonitrile
검출기
파장230 nm
유속 1㎖/분
TimeMobile phase
A(%)Mobile phase B(%)
0 100 0
30 75 25
33 75 25
35 0 100
40 0 100
50 0 100
검체중 함량
(㎎/100g)=시험용액의농도값가)×
시험용액총량나)×
희석배수
검체채취량다)표2.이동상조건
5.2계산
5.2.1 클로로겐산의 체중함량은
다음식에 따라계산한다 .
가)시험용액의농도값(단위:
㎎/100㎖)- 395 -나)검체(액상 )를80%메탄올
로 용해시킨후시험용액
총량 (㎖)
다)검체채취량(g)
<신 설> 3-106 TMCA(Trimethoxycinnamicacid)
1.시험방법의 요약
본시험법은 시료로부터추출한
TMCA 를고속액체크로마토 그래프분
석하는 방법으로 자외부검출기를
이용하여 정량분석을한다 .
2.장비와재료
2.1실험실 장비 및소모품
2.1.1 부피플라스크 (25㎖,100㎖)
2.1.2 0.45㎛멤브레인 필터
2.1분석장비
2.1.1 고속액체크로마토그래프
2.1.2YMCJ'sphereODS H80(C 185
㎛,4.6mm× 15cm)또는 이와동등한
것
- 396 -2.1.3 자외부검출기 (UV)
3.표준물질 및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 TMCA
3.2일반시약
3.2.1 메탄올(Methanol)
4.시험과정
4.1표준용액
4.1.1 표준품 TMCA 0.250g을정
밀히달아25㎖의용량플라
스크에넣고 70%메탄올에
용해시킨후표선까지채운 
것을표준원액으로한다 .표
준원액 0.5, 1,3및5㎖를정
확히 취하여각각 100㎖의
용량플라스크에옮겨 넣은
것을표준용액으로한다 .
4.2시험용액
4.2.1검체200㎎을정밀히달아- 397 -항목 조건
칼럼온 도 40℃
이동상A액-50mM이수소인산나트륨용액
(NaH 2PO 4)
B액-아세토니트릴
검출기 파장 293 nm
유속 1㎖/분70%메탄올을 정확히 가하
여20㎖로한다음완전히
용해시키고0.45㎛멤브레인
필터로여과한것을시험용
액으로한다 .(여액의최소4
㎖는제거한후사용한다 .)
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건 
5.2계산
5.2.1 표준용액 및시험용액 20㎕
를 주입하여앞의 조건에
따라 시험한다 .표준용액 중
TMCA 는면적 에의해구한
검량선 을 사용하여 시험용
액중TMCA농도를구하
고,다음 식에 따라검체중
- 398 -TMCA 함량(%)을구한다 .
<계산식>
TMCA 함량(%)=C×V/W ×
1/10,000
C:시험용액중의 TMCA농도(ppm )
V:시험용액의 전량(㎖)
W:시료채취량(g)
1/10,000:단위환 산