식품의약품안전처 공고제2021-253호
- 1 -식품의약품안전처 공고제2021-253호
건강기능식품의 기준및규격
(식품의약품안전처고시 제2021-25호,
2021.3.25.)을일부개정함에있어국민에게미리알려의견을수렴하고자
그취지,개정이유및주요내용을
행정절차법
제46조에따라다음과
같이공고합니다.
 2021년6월10일
 식품의약품안전처장
「건강기능식품의 기준및규격」일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
비타민K의제조원료로비타민K2추가및관련시험법을신설하고,
판토텐산시험법개정,카테킨및카페인동시분석법을신설하고자함
2.주요내용
가.비타민K의원료추가(안제3.1.1-5)
1)비타민K2를비타민K의원료로사용할수있도록개정요구
2)영양성분중비타민K의원료로비타민K2를추가하고자함
3)비타민K제조시사용할수있는원료확대- 2 -나.개별성분별시험법개정(안제4.3.3-5,3-9,3-79)
1)시료채취량,분석조건개선등시험법개정필요
2)비타민K1시험법단일화,비타민K2시험법신설,판토텐산시험법
개선,카테킨및카페인동시분석법을신설하고자함
3)시험법개정으로효율적이고정확한분석가능
3.의견제출
「건강기능식품의 기준및규격」일부개정고시(안)에대하여의견이
있는단체또는개인은2021년8월10일까지다음사항을기재한의견서를식
품의약품안전처장(우편번호:28159,주소:충청북도청주시흥덕구오송읍오
송생명2로187오송보건의료행정타운 식품의약품안전처 ,참조:식품기준과,
(전화)043-719-2439,(팩스)043-719-2400)에게제출하여주시기바랍니다.
가.예고사항에대한항목별의견(찬․반여부와그이유)
나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 3 -식품의약품안전처 고시제2021-호
건강기능식품에관한법률
제14조및제15조에따른
건강기능식품의
기준및규격
(식품의약품안전처 고시제2021-25호,2021.3.25.)을다음과같이
개정고시합니다.
2021년월일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준및규격일부개정고시(안)
건강기능식품의기준및규격일부를다음과같이개정한다.
제3,1,1-5,1),(1)중(나)를(다)로하고(나)를다음과같이신설한다.
(나)비타민K2(Menaquinone-7, MK-7)
제4,3,3-5,3-5-1비타민K1(제1법)을삭제한다.
제4,3,3-5,3-5-2,1.중“역상컬럼”을“역상칼럼”으로,“포스트컬럼”을
“포스트칼럼”으로한다.
제4,3,3-5,3-5-2,2,“2.1.4증류플라스크(250mL)”을“2.1.4갈색부피플- 4 -라스크(50mL,100mL)”로,“2.1.5분액깔때기(500mL)”를“2.1.5원심분리
관”으로,“2.1.6감압농축기”를“2.1.6원심분리기”로,“2.1.7정제컬럼(1.0
cmID×30cm,유리컬럼)”을“2.1.7질소농축기”로,“2.1.8시험관(200×
24mmID)”를“2.1.8항온수조진탕기”로각각한다.
제4,3,3-5,3-5-2,2,“2.2.3컬럼”을“2.2.3칼럼”으로하고,2.2.3.1중
“분석컬럼”을“분석칼럼”으로,“컬럼”을“칼럼”으로각각하며,2.2.3.2중
“포스트컬럼”을“포스트칼럼”으로,“컬럼관”을“칼럼관”으로,“컬럼”을
“칼럼”으로,“※포스트컬럼”을“※포스트칼럼”으로각각한다.
제4,3,3-5,3-5-2,5,5.1,표1중“컬럼온도”를“칼럼온도”로한다.
제4,3,3-5,3-5-3을다음과같이신설한다.
3-5-3비타민K2(제3법)
1.시험방법의요약
본시험법은테트라하이드로퓨란과 에탄올로비타민K2(menaquinone-7,
MK-7)를추출하여역상칼럼으로분리하고자외부흡광광도검출기를 이용
하여정량하는방법이다.
2.장비와재료- 5 -2.1실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(25mL및50mL)
2.1.2용매용일회용실린지
2.1.3여과용멤브레인필터
2.2분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기 (UVDetector)
2.2.3칼럼오븐
2.2.4옥타데실실릴화한 칼럼(안지름4.6mm,길이150mm,충전입자
크기3μm)또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1VitaminK2((all-E)–2-(3,7,11,15,19,23,27-Heptamethyl-2,
6,10,14,18,22,26-octacosaheptaenyl)-3-methyl-1,4-naphthalenedion,
Menaquinone-7(MK-7))
분자식:C46H64O2,분자량:649,CASNo.:2124-57-4
3.2일반시약
- 6 -3.2.1에탄올(Ethanol,HPLCgrade)
3.2.2테트라하이드로퓨란 (Tetrahydrofuran)
3.2.3물(Water,HPLCgrade)
4.시험과정
4.1표준용액의조제
4.1.1비타민K2(MK-7)표준물질50mg을정밀하게취하여50mL
갈색부피플라스크에 넣는다.
4.1.2테트라하이드로퓨란 1mL을첨가하고에탄올로50mL정용한다.
4.1.3에탄올로적당량희석하여표준용액으로사용한다.
4.2시험용액의조제
4.2.1시료300mg을정밀하게취하여25mL갈색부피플라스크에 넣는다.
4.2.2테트라하이드로퓨란 1mL을첨가하고에탄올로25mL정용한다.
4.2.3위용액을에탄올을이용하여적당량희석한후0.45μm멤브레
인필터로여과한것을시험용액으로한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)- 7 -항목 조건
주입량 10μL
검출기파장 268 nm
칼럼온도 30℃
이동상 에탄올 :물(97: 3)
유속 0.6mL/분
5.2계산
5.2.1비타민K2(MK-7)(mg/g)=C×(a×b)/S×1/1,000
C:시험용액중비타민K2의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
제4,3,3-9,3-9-2,1.중“20mM인산완충용액”을“20mM인산이수소
칼륨용액”으로,“컬럼”을“칼럼”으로각각한다.
제4,3,3-9,3-9-2,2,2.2.4중“충전제Octadecylsilica”를“충전입자크
기5㎛”로한다.
제4,3,3-9,3-9-2,2,2.3분석장비의준비“이동상인2개의용매가사용- 8 -되는데A용액(20mM인산칼륨용액(pH2.1)),B용액(20mM인산칼륨용액
:아세토니트릴(80:20))으로A:B용액의비율을94:6의비율로분당
120μL씩충분한시간동안흘려칼럼과기기를안정화시킨다.”를“이동상
A용액(20mM인산이수소칼륨용액(pH2.1):아세토니트릴(99.5:0.5,v/v)
으로분당120μL씩충분한시간동안흘려칼럼과기기를안정화시킨다.”
로한다.
제4,3,3-9,3-9-2,3,3.1,3.1.1“D-Pantothenicacid(Calcium
D-pantothenate;VitaminB5)”를 “D-Pantothenicacid(Calcium
D-pantothenate;D-pantothenicacidhemicalciumsalt;VitaminB5)”한다.
제4,3,3-9,3-9-2,3,3.2,3.2.2“인산칼륨(Monopotassiumphosphate)”
를 “인산이수소칼륨(Potassiumdihydrogenphosphate)”로한다.
제4,3,3-9,3-9-2,3,3.2,“3.2.4아세토니트릴(Acetonitrile)”을신설한다.
제4,3,3-9,3-9-2,4,4.1“시약제조”를“시약조제”로하고,4.1.1“인산
칼륨용액”을“인산이수소칼륨용액”으로하며,4.1.1중“인산칼륨”을“인산
이수소칼륨”으로각각한다.
제4,3,3-9,3-9-2,4,4.2중“제조”를“조제”로,4.3중“제조”를“조제”- 9 -로각각한다.
제4,3,3-9,3-9-2,4,4.3,4.3.1“시료적당량을취하여마쇄기를이용하
여잘게부순후적당량을취한다”를“판토텐산으로서 1∼5mg이함유되
도록적당량의시료를칭량한다”로,4.3.2중“인산칼륨”을“인산이수소칼
륨”으로,4.3.3중“추출한다”를“추출한다”로,4.3.4중“인산칼륨”을“인
산이수소칼륨”으로,4.3.5중“3000”을“3,000”으로각각한다.
제4,3,3-9,3-9-2,5,5.1,표1을다음과같이한다.
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 35℃
이동상A:20mM인산이수소칼륨용액:ACN(99.5:0.5,v/v)
B:20mM인산이수소칼륨용액:ACN(80:20,v/v)
검출기파장 200nm
유량 120μL/분표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
제4,3,3-9,3-9-2,5,5.1,표2를다음과같이한다.- 10 -시간(분)이동상(%)
A용액 B용액
0 100 0
37 100 0
37.1 0 100
47 0 100
47.1 100 0
70 100 0표2.이동상조건
제4,3,3-9,3-9-2,5,5.2를다음과같이한다.
5.2계산
5.2.1판토텐산(mg/g)
=C×(a×b)/S×1/1,000×219.23/238.27
C:시험용액중판토텐산의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
219.23:판토텐산의분자량
238.27:판토텐산칼슘의분자량- 11 -제4.3.3-79카테킨및카페인동시분석법을다음과같이신설한다.
3-79카테킨및카페인동시분석법
1.시험방법의요약
본시험법은시료중카테킨및카페인을액체크로마토그래프 /자외부흡광
광도검출기를이용하여분석하는방법으로최대흡수파장인275nm에서
정량분석한다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(10mL및100mL)
2.1.2용매용일회용실린지
2.1.3여과용멤브레인필터
2.2분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기 (UVDetector)
2.2.3칼럼오븐
 2.2.4YMC-triartC18(안지름4.6mm,길이250mm,충전입자크기5
μm)칼럼또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약- 12 -3.1표준물질
3.1.1에피갈로카테킨((-)-epigallocatechin,EGC)
         분자식:C15H14O7,분자량:306.27,CASNo.:970-74-1
3.1.2에피갈로카테킨갈레이트 ((-)-epigallocatechin-gallate,EGCG)
분자식:C22H18O11,분자량:458.37,CASNo.:989-51-5
3.1.3에피카테킨((-)-epicatechin,EC)
분자식:C15H14O6,분자량:290.27,CASNo.:490-46-0
3.1.4에피카테킨갈레이트 ((-)-epicatechin-gallate,ECG)
분자식:C22H18O10,분자량:442.37,CASNo.:1257-08-5- 13 -
3.1.5카페인(Caffeine,1,3,7-trimethyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione,
1,3,7-trimethylxanthine,trimethylxanthine,theine,
methyltheobromine)
분자식:C8H10N4O2,분자량:194.19,CASNo.:58-08-2
3.2일반시약
3.2.1메탄올(Methanol)
3.2.2아세토니트릴(Acetonitrile,HPLCgrade)
3.2.3인산(Phosphoricacid)
3.2.4인산이수소칼륨(Potassiumphosphatemonobasic)
4.시험과정
4.1희석용매조제- 14 -4.1.120mM인산이수소칼륨용액:인산이수소칼륨2.7g을증류수에
녹이고전량을1L가되게한다.
4.1.220mM인산이수소칼륨용액700mL에메탄올약250mL를가
한후인산으로pH2.1이되도록조정하고메탄올을가하여1L가
되게한다.
4.2표준용액의조제
4.2.1표준물질(EGC,EGCG,EC,ECG)과카페인을각각50mg씩50
mL부피플라스크에넣는다.
4.2.2메탄올을표선까지채운다.
4.2.3희석용매로적당량희석하여표준용액으로사용한다(표준용액은
사용시조제한다).
※단,사용칼럼에따라표준물질의용출순서가바뀔수있으므로,
분석전에각각의표준물질의머무름시간을확인하고표준용액은
사용시조제한다.
4.3시험용액의조제
4.3.1에피갈로카테킨(EGC),에피갈로카테킨갈레이트 (EGCG),에피카
테킨(EC)및에피카테킨갈레이트 (ECG)의합으로서5∼10mg이
함유되도록적당량의시료를100mL부피플라스크에 달아희석용
매를가하여20분간초음파추출을행한다.
4.3.2실온까지식힌후희석용매로표선까지채운다음,0.45μm멤브
레인필터로여과한다.되도록시험용액은조제후즉시기기분석한다.- 15 -5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입량 10μL
검출기파장 275nm
칼럼온도 30℃
이동상A:0.1%인산용액,B:0.1%인산을함유한아세토니트릴
유속 1.0mL/분
표2.이동상조건(예)
시간(분)A용액(%)B용액(%)
0 90 10
5 90 10
10 87 13
20 85 15
25 70 30
30 70 30
31 90 10
40 90 10
5.2계산
5.2.1카테킨함량(mg/g)=EGC(mg/g)+EGCG(mg/g)+EC(mg/g)+ECG(mg/g)
개별카테킨(mg/g)=C×(a×b)/S×1/1,000- 16 -C:시험용액중개별카테킨의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
5.2.2카페인(mg/g)=C×(a×b)/S×1/1,000
C:시험용액중카페인의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수- 17 -부칙<제2021-호,2021...>
제1조(시행일)이고시는고시한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행이후최초로제조·가공또는수입
(선적일을기준으로한다.이하같다)한건강기능식품(원료를포함한다.
이하같다)부터적용한다.
제3조(경과조치)①이고시시행당시검사가접수되어진행중인사항
에대하여는종전의규정에따른다.
②이고시시행당시종전의규정에따라제조․가공․수입한건강기능식
품은그유통기한까지판매할수있다.- 18 -신․구조문대비표
현행 개정안
제1.∼2.(생략) 제1.∼2.(현행과같음)
제3.개별기준및규격
1.(생략)
1-1∼1-4(생략)제3.개별기준및규격
1.(현행과같음)
1-1∼1-4(현행과같음)
1-5비타민K
1)(생략)
(1)원료
(가)비타민K1(Phylloquinone,
Phytonadione)
<신설>
(나)식품원료를사용하여비
타민K를보충할수있도
록제조·가공한것
3)∼4)(생략)
1-6∼1-28(생략)
2.(생략)
2-1∼2-68(생략)1-5비타민K
1)(현행과같음)
(1)(현행과같음)
(가)(현행과같음)
(나)비타민K2(Menaquinone-7,
MK-7)
(다)(현행(나)와같음)
3)∼4)(현행과같음)
1-6∼1-28(현행과같음)
2.(현행과같음)
2-1∼2-68(현행과같음)
제4.건강기능식품시험법제4.건강기능식품시험법
1.∼2.(생략) 1.∼2.(현행과같음)- 19 -3.(생략)
3-1∼3-4(생략)3.(현행과같음)
3-1∼3-4(현행과같음)
3-5비타민K
3-5-1비타민K1(제1법)3-5비타민K
<삭제>
3-5-2비타민K1(제2법)
1.(생략)
--------------------
--------------------
---역상컬럼----------
포스트컬럼------
--------------------
2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1∼2.1.3(생략)
2.1.4증류플라스크(250mL)
2.1.5분액깔때기(500mL)
2.1.6감압농축기
2.1.7정제컬럼(1.0cmID×30cm,
유리컬럼)
2.1.8시험관(200×24mmID)3-5-2비타민K1(제2법)
1.(현행과같음)
---------------------
---------------------
---역상칼럼-----------
포스트칼럼------
--------------------
2.(현행과같음)
2.1(현행과같음)
2.1.1∼2.1.3(현행과같음)
2.1.4갈색부피플라스크(50mL,100mL)
2.1.5원심분리관
2.1.6원심분리기
2.1.7질소농축기
2.1.8항온수조진탕기- 20 -2.2(생략)
2.2.1∼2.2.2(생략)
2.2.3컬럼
2.2.3.1분석컬럼:------------
--컬럼---------------
----------------
------
2.2.3.2포스트컬럼:---------
--------------------
------------컬럼관---
----컬럼-------
※포스트컬럼----------------
------
2.3(생략)
--------------- 컬럼-
-------------
3.∼4.(생략)
5.(생략)
5.1(생략)2.2(현행과같음)
2.2.1∼2.2.2(현행과같음)
2.2.3칼럼
2.2.3.1분석칼럼:-------------
-칼럼-----------------
---------------------
------
2.2.3.2포스트칼럼:----------
---------------------
------------- 칼럼관---
----칼럼-------
※포스트칼럼----------------
-------
2.3(현행과같음)
---------------- 칼럼-
-------------
3.∼4.(현행과같음)
5.(현행과같음)
5.1(현행과같음)- 21 -항목 조건
주입량 10μL
컬럼온도 30℃
이동상Methanol:Dichloromethane
(900:100)에ZnCl21.37g,
CH3COONa0.41g,Glacial
aceticacid0.3g/Methanol5
mL을합하여이동상으로함
검출기
파장여기파장243nm,측정파장
430nm
유량 0.8mL/분표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
5.2(생략)항목 조건
------ -----
칼럼온도 -----
------------------------------
-------------------------
-------------------------
-------
---------------------------
------------------------
---- ----------표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
5.2(현행과같음)
<신설> 3-5-3비타민K2(제3법)
1.시험방법의요약
본시험법은테트라하이드로퓨란
과에탄올로 비타민
K2(menaquinone-7, MK-7)를추
출하여역상칼럼으로분리하고자
외부흡광광도검출기를 이용하여
정량하는방법이다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(25mL및- 22 -50mL)
2.1.2용매용일회용실린지
2.1.3여과용멤브레인필터
2.2분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기 (UV
Detector)
2.2.3칼럼오븐
2.2.4옥타데실실릴화한 칼럼(안
지름4.6mm,길이150
mm,충전입자크기3μm)
또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1VitaminK2((all-E)–
2-(3,7,11,15,19,23,
27-Heptamethyl-2,6,10,
14,18,22,
26-octacosaheptaenyl)-3–
m e th y l-- 23 -1,4-naphthalenedion,
Menaquinone-7(MK-7))
분자식:C46H64O2,분자량:
649,CASNo.:2124-57-4
3.2일반시약
3.2.1에탄올(Ethanol,HPLCgrade)
3.2.2테트라하이드로퓨란(Tetrahydrofuran)
3.2.3물(Water,HPLCgrade)
4.시험과정
4.1표준용액의조제
4.1.1비타민K2(MK-7)표준물
질50mg을정밀하게취하
여50mL갈색부피플라스크
에넣는다.
4.1.2테트라하이드로퓨란 1mL
을첨가하고에탄올로50
mL정용한다.
- 24 -4.1.3에탄올로적당량희석하여
표준용액으로사용한다.
4.2시험용액의조제
4.2.1시료300mg을정밀하게
취하여25mL갈색부피플라
스크에넣는다.
4.2.2테트라하이드로퓨란 1mL
을첨가하고에탄올로25
mL정용한다.
4.2.3위용액을에탄올을
이용하여적당량희석한
후0.45μm멤브레인
필터로여과한것을
시험용액으로한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입량 10μL
검출기파장268nm
칼럼온도 30℃
이동상에탄올:물(97:3)
유속 0.6mL/분- 25 -5.2계산
5.2.1비타민K2(MK-7)(mg/g)
=C×(a×b)/S×1/1,000
C:시험용액중비타민
K2의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
3-9-2(생략)
1.(생략)
본시험법은시료중존재하는
판토텐산을20mM인산완충용액으로
추출하여옥타데실실릴화한컬럼으로
판토텐산을분리하는방법으로
자외부흡광광도검출기를 이용하여
판토텐산의최대흡수파장인200
nm에서검출하여정량한다.3-9-2(현행과같음)
1.(현행과같음)
-----------------------------
---20mM인산이수소칼륨용액--
----------------------- 칼럼--
-----------------------------
-----------------------------
-----------------------------
------------------------.- 26 -2.(생략)
2.1∼2.2(생략)
2.2.1∼2.2.3(생략)
2.2.4옥타데실실릴화한 칼럼
(안지름1.5mm, 길이250
mm,충전제Octadecyl
silica)또는이와동등한것
  2.3(생략)
      이동상인2개의용매가사용
되는데A용액(20mM인산
칼륨용액(pH2.1)),B용액(20
mM인산칼륨용액:아세토
니트릴(80:20))으로A:B
용액의비율을94:6의비율
로분당120μL씩충분한
시간동안흘려칼럼과기기를
안정화시킨다.
 3.(생략)
3.1(생략)
3.1.1  D-Pantothenicacid(Calcium2.(현행과같음)
2.1∼2.2(현행과같음)
2.2.1∼2.2.3(현행과같음)
2.2.4----------------------
----------------------,  
충전입자크기5μm--------
----------------
  2.3(현행과같음)
      이동상A용액(20mM
인산이수소칼륨용액(pH2.1):
아세토니트릴(99.5:0.5,v/v)
으로분당120μL씩충분한
시간동안흘려칼럼과기기를
안정화시킨다.
 3.(현행과같음)
3.1(현행과같음)
3.1.1D-Pantothenicacid(Calcium- 27 -D-pantothenate;VitaminB5)
   분자식 :H O C H 2C (C H 3)2C H (O H )C O N H C H 2C H2C O2·1/2Ca
분자량 :238.27, CAS No.:137-08-6
  3.2(생략)
3.2.1(생략)
    3.2.2인산칼륨(Monopotassium
phosphate)
   3.2.3(생략)
<신설>
4.(생략)
4.1시약제조
    4.1.120mM인산칼륨용액
인산칼륨2.7g을
증류수에녹이고인산으로
pH2.1로조절한후전량을
1L가되게한다.
D-pantothenate;
D-pantothenicacid
hemicalciumsalt;VitaminB5)
-------------------------
  3.2(현행과같음)
3.2.1(현행과같음)
   3.2.2인산이수소칼륨(Potassium
dihydrogenphosphate)
3.2.3(현행과같음)
3.2.4아세토니트릴(Acetonitrile)
4.(현행과같음)
4.1시약조제
    4.1.1--인산이수소칼륨용액
인산이수소칼륨---------
-----------------------
-----------------------
----------------------.- 28 -  4.2표준용액제조
4.2.1∼4.2.2(생략)
  4.3시험용액제조
4.3.1시료적당량을취하여
마쇄기를이용하여잘게
부순후적당량을취한다.
4.3.250mL부피플라스크에
넣고20mM인산칼륨용액
을넣는다.
4.3.330분동안초음파추출한다.
4.3.420mM인산칼륨용액을
넣어표선까지맞춘다.
4.3.53000rpm에서원심분리
를하여상등액을취해0.45
μm멤브레인필터로여과
한것을시험용액으로한다.
5.(생략)
5.1(생략) 4.2----조제
4.2.1∼4.2.2(현행과같음)
  4.3----조제
4.3.1판토텐산으로서1∼5mg이
함유되도록적당량의시료를
칭량한다.
4.3.2---------------------
20mM인산이수소칼륨--
-----.
4.3.3------------- 추출한다.
4.3.420mM인산이수소칼륨----
----.
4.3.53,000----------------
-----------------.
5.(현행과같음)
5.1(현행과같음)- 29 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 35℃
이동상A:20mM인산칼륨용액
B:20mM인산칼륨:ACN(80:20)
검출기
파장200nm
유량 120μL/분표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
시간(분)이동상(%)
A용액B용액
096 4
3796 4
37.1 0100
470100
47.196 4
6096 4표2.이동상조건
5.2(생략)
5.2.1계산식
S:시험용액중의판토
텐산의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:시험용액의희석배수판토텐산
(mg/100 g)=S×a×b
×1 0 0
시료
채취량 (g)1 0 0 0항목 조건
-- -----
-- -----
--A:20mM인산이수소칼륨용액:ACN(99.5:0.5,v/v)
B:20mM인산이수소칼륨용액:ACN(80:20,v/v)
-- -----
-- -----표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
시간(분)이동상(%)
A용액B용액
--100 0
--100 0
------
------
--100 0
70100 0표2.이동상조건
5.2(현행과같음)
5.2.1판토텐산(mg/g)
=C×(a×b)/S×
1/1,000×219.23/238.27
C:시험용액중판토텐산의
농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수- 30 -S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
219.23:판토텐산의분자량
      238.27:판토텐산칼슘의
분자량
<신설> 3-79카테킨및카페인동시분석법
1.시험방법의요약
본시험법은시료중카테킨및
카페인을액체크로마토그래프 /
자외부흡광광도검출기를 이용하여
분석하는방법으로최대흡수파장
인275nm에서정량분석한다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(10mL및
100mL)
2.1.2용매용일회용실린지
2.1.3여과용멤브레인필터
2.2분석장비- 31 -2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기 (UV
Detector)
2.2.3칼럼오븐
2.2.4YMC-triartC18(안지름
4.6mm,길이250mm,
충전입자크기5μm)컬럼
또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1 에피갈로카테킨
((-)-epigallocatechin,EGC)
분자식:C15H14O7,분자량
:306.27,CASNo.:
970-74-1
3.1.2에피갈로카테킨갈레이트
((-)-epigallocatechin- 32 -–gallate,EGCG)
분자식:C22H18O11,분자량
:458.37,CASNo.:
989-51-5
3.1.3 에피카테킨
((-)-epicatechin,EC)
분자식:C15H14O6,분자량
:290.27,CASNo.:
490-46-0
3.1.4에피카테킨갈레이트
((-)-epicatechin–gallate,ECG)
분자식:C22H18O10,분자량
:442.37,CASNo.:
1257-08-5- 33 -
3.1.5카페인(Caffeine,1,3,7-
t r i m e th y l- 1H-
purine-2,6(3H,7H)-dione,
1,3,7–trimethylxanthine,
trimethylxanthine,theine,
methyltheobromine)
분자식:C8H10N4O2,분자량
:194.19,CASNo.:
58-08-2
3.2일반시약
3.2.1메탄올(Methanol)- 34 -3.2.2아세토니트릴(Acetonitrile,
HPLCgrade)
3.2.3인산(Phosphoricacid)
3.2.4인산이수소칼륨(Potassium
phosphatemonobasic)
4.시험과정
4.1희석용매조제
4.1.120mM인산이수소칼륨용액:
인산이수소칼륨2.7g을
증류수에녹이고전량을1L가
되게한다.
4.1.220mM인산이수소칼륨
용액700mL에메탄올약
250mL를가한후
인산으로pH2.1이되도록
조정하고메탄올을가하여
1L가되게한다.
4.2표준용액의조제
4.2.1표준물질(EGC,EGCG,
EC,ECG)과카페인을각각- 35 -50mg씩50mL
부피플라스크에넣는다.
4.2.2메탄올을표선까지
채운다.
4.2.3희석용매로적당량희석하여
표준용액으로 사용한다
(표준용액은사용시조제한다)
※단,사용칼럼에따라
표준물질의용출순서가바뀔수
있으므로,분석전에각각의
표준물질의머무름시간을확인하고
표준용액은사용시조제한다.
4.3시험용액의조제
4.3.1에피갈로카테킨(EGC),
에피갈로카테킨갈레이트 (EG
CG),에피카테킨(EC)및
에피카테킨갈레이트 (ECG)의
합으로서5∼10mg이함유되도록
적당량의시료를100mL
부피플라스크에 달아
희석용매를가하여20분간- 36 -초음파추출을행한다.
4.3.2실온까지식힌후희석용매로
표선까지채운다음,0.45μm
멤브레인필터로 여과한다.
되도록시험용액은조제후
즉시기기분석한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입량 10μL
검출기파장 275nm
칼럼온도 30℃
이동상A:0.1%인산용액,
B:0.1%인산을함유한아세토니트릴
유속 1.0mL/분
표2.이동상조건(예)- 37 -시간(분)A용액(%)B용액(%)
090 10
590 10
1087 13
2085 15
2570 30
3070 30
3190 10
4090 10
5.2계산
5.2.1카테킨함량(mg/g)=
EGC(mg/g)+EGCG(mg/g)
+EC(mg/g)+ECG(mg/g)
개별카테킨(mg/g)=C×
(a×b)/S×1/1,000
C:시험용액중개별
카테킨의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수
5.2.2카페인(mg/g)=C×- 38 -(a×b)/S×1/1,000
C:시험용액중카페인의
농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g)
1/1,000:단위환산계수