中华人民共和国国家标 准
 
GB  ××××—××××
 
 
食品安全国家标准 
食品添加剂  乳酸链球菌素 
                    （征求意见稿） 
 
202×‐××‐×× 发布          202×‐××‐×× 实施GB ××××—×××× 
前   言 
本标准替代 GB 1886.231-2016 《食品添加剂  乳酸链球菌素》  
本标准与 GB 1886.231-2016 相比，主要变化如下：  
——修改了氯化钠的检测方法，原来的 GB/T 5009.42 修改为 GB 5009.44-2016 第三法；  
——修改了效价的检测方法。  GB ××××—×××× 
食品安全国家标准  
食品添加剂   乳酸链球菌素  
1 范围 
本标准适用于以酵母抽提物或其他含氮物质为主要原料，经乳酸乳球菌（ Lactococcus 
lactis subsp lactis ）发酵后提取而制得的食品添加剂乳酸链球菌素。  
2 分子式、结构式和相对分子质量 
2.1  分子式 
C143H230O37N42S7 (Nisin A) 
C141H229O38N41S7 (Nisin Z) 
2.2  结构式 
 
Nisn A：第 27位氨基酸为组氨酸（ His）； Nisn Z：第 27位氨基酸为天冬酰胺 (Asn) 
2.3  相对分子质量 
Nisin A: 3354.35 （按 2018年国际相对原子质量）  
Nisin Z: 3330.31 （按 2018年国际相对原子质量）  
3 技术要求 
3.1 感官要求 
感官要求应符合表 1的规定。 GB ××××—×××× 
表 1 感官要求  
项    目  要    求  检验方法  
色泽  浅棕色至乳白色  
将适量试样均匀置于白瓷盘内， 于自然光线下观察其色泽和
状态 状态  粉末 
气味  无异味 
3.2 理化指标 
理化指标应符合表 2的规定。  
表 2 理化指标  
3.3 微生物指标 
微生物指标应符合表 3的规定。  
表3 微生物指标  
 项    目  指    标  检验方法  
效价 /(IU/mg)                  ≥  900 附录 A中的 A.3 
干燥减量， w/%                ≤  3.0 GB 5009.3 
氯化钠， w/%                  ≥  50.0 GB/T 5009.44-2016 第三法  
铅（Pb）/(mg/kg)                ≤  1.0 GB 5009.75 或GB 5009.12 
注：商品化的乳酸链球菌素产品应以符合本标准的乳酸链球菌素为原料，可添加氯化钠、乳固体等辅
料而制成，其效价符合声称。  
项    目 采样方案a及限量 
检验方法  
n c m 
菌落总数 / ( C F U / g )           5 2 10 GB 4789.2 
大肠菌群 / ( M P N / g )          5 0 ＜3.0 GB 4789.3 
大肠埃希氏菌 / ( M P N / g )       5 0 ＜3.0 GB 4789.38 
沙门氏菌   5 0 不得检出 /25g GB 4789.4 
a样品的采样按 GB 4789.1 执行 GB ××××—×××× 
附录 A 
检验方法   
A.1 一般规定 
本标准除另有规定外，所用试剂的纯度应在分析纯以上，所用标准滴定溶液、杂质测定
用标准溶液、制剂及制品，应按 GB/T 601 、GB/T 602 、GB/T 603 的规定制备，实验用水应符
合GB/T 6682 中三级水的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。  
A.2 鉴别试验 
A.2.1 试剂和材料 
A.2.1.1 盐酸溶液： 0.02 mol/L 。 
A.2.1.2 氢氧化钠溶液： 5 mol/L。 
A.2.1.3 脱脂牛奶：脂肪含量 <1%。 
A.2.1.4 石蕊牛奶培养基。  
A.2.1.5 检测菌：乳酸乳球菌（ ATCC11454 ，NCIMB 8586 ）。 
A.2.2 分析步骤 A.2.2.1 试样储备液制备  
称取适量试样溶于盐酸溶液中，使其溶液效价约为 1000 IU/mL 。  
A.2.2.2 对酸溶液的稳定性试验  
用盐酸溶液将试样储备液稀释至约 50 IU/mL ，制成试样溶液。将该试样溶液煮沸 5min，
按效价测定方法测煮沸过的试样溶液中 Nisin效价。计算煮沸过的试样中 Nisin的效价，计
算结果在其效价值的 (100%±5%) 内，表明无显著活性损失。  
A.2.2.3 对碱溶液的稳定性试验  
用盐酸溶液将试样储备液稀释至约 50 IU/mL ，制成试样溶液。 将该试样溶液煮沸 5 min，
用氢氧化钠溶液调 pH至11.0，将溶液加热到 65℃保持 30 min，冷却，然后滴加盐酸调 pH
至2.0，用效价测定方法测定最终溶液中 Nisin
的效价。在按照上述操作处理后会出现抑菌
活性的几乎完全损失。  
A.2.2.4 不同抑菌物质中 Nisin的鉴别  
通过乳酸链球菌对高浓度 Nisin的耐受性将 Nisin和其他抑菌物质区分。  
A.2.2.4.1  乳酸乳球菌的培养：乳酸乳球菌 (工作菌株 )(ATCC11454 ，NCIMB8586) 在无菌脱
脂牛奶中培养， 30℃培养 18h。 
A.2.2.4.2  准备 1个或多个装有 100 mL石蕊牛奶培养基的长颈烧瓶， 在121℃灭菌 15 min，
将0.1 g试样加入该无菌的石蕊牛奶培养基中混匀， 在室温下静置 2 h后加入 0.1 mL检测菌，
30 ℃下培养 24 h。 
A.2.2.4.3  检测菌(乳酸乳球菌 )可在该效价的试样 (约1000IU/mL) 中生长，但不能在相似浓
度的其他抑菌物质中生长。  
A.3 效价 
A.3.1 试剂和材料 
A.3.1.1  乳酸链球菌素标准品（效价≥ 1×106 IU/g）。  
A.3.1.2  盐酸溶液： 0.02 mol/L 。 
A.3.1.3  吐温溶液：吐温 20∶水 =1∶1。 
A.3.1.4  培养基 (S1)：胰蛋白胨 0.8%；酵母膏 0.5%；葡萄糖 0.5%；氯化钠 0.5%；磷酸氢二
钠0.2%；琼脂粉 1.2%~1.5% ，灭菌后 pH 6.8~7.0 。 GB ××××—×××× 
A.3.1.5  检测菌：黄色微球菌， NCIMB8166 。 
A.3.1.6  0.85%无菌生理盐水。  
A.3.2 仪器和设备 
A.3.2.1  打孔器。 
A.3.2.2  培养箱。 
A.3.2.3  移液器。 
A.3.2.4  温度计。 
A.3.2.5  灭菌锅。 
A.3.2.6  电子分析天平。  
A.3.3 分析步骤 A.3.3.1  检测菌（ NCIMB8166 ）的培养及菌悬液的制备  
A.3.3.1.1  检测菌的培养  
用无菌接种环从甘油管或冻干管中取一环检测菌 (NCIMB8166) ，接种在无菌的 S
1平皿
上，进行自然分离，挑出饱满、边缘光滑的菌落，扩大，接在 S1的试管斜面上，在 30℃恒温
箱中培养 24 h，放入 2℃~5℃冰箱中。  
A.3.3.1.2  菌株悬浮液的制备  
取在冰箱中的检测菌 (NCIMB8166) ，用无菌生理盐水洗脱下来，制成 108 C F U / m L 浓度
的细胞悬液，备用。  
A.3.3.2  平板的制备  
配制 S1培养基 200 mL(按比例先把琼脂溶化，依次加入各组分溶解，磷酸氢二钠溶解后
加入 )，经 121℃、 20 min灭菌后，放冷至不低于 70℃，加入 4 mL吐温 20溶液，充分摇匀，等
冷却到 50℃~55℃左右，加入已制备好的菌株悬浮液适量，使培养基中检测菌的最终浓度为
1.0×106 个/mL，摇匀，倒入水平放置的已灭菌的平板中 ,等完全凝固后用直径为 7 mm 打孔
器在平板上打出所需的孔数，小心挖掉孔内琼脂，置2℃ ~5℃冰箱中，准备使用前，移入洁
净工作台中吹风 1.5 h~3.0 h( 吹风时间按空气中的湿度大小而定，同时控制室内温度最低，尽
量不要让检测菌生长)，吹干后使用。  
A.3.3.3 标准品溶液的配制  
准确称取乳酸链球菌素标准品 (精确到 0.0001g)，溶于盐酸溶液中，使最终浓度为 2000 
IU/mL ，摇匀，用盐酸稀释成 300倍、 600倍，即成高、低剂量标准溶液。  
A.3.3.4  试样溶液的配制  
称取一定量的试样 (精确到 0.0001g)，用盐酸溶液溶解后，稀释成高、低剂量试样溶液，
其乳酸链球菌素含量，按试样估价（ CBH）高、低剂量与标准品溶液高、低剂量大致相当。  
A.3.3.5  滴加溶液   
取出存放在冰箱中的平板，用移液器，取 70 μL~80 μL标准品高剂量溶液，随机滴加在
平板的孔中，滴 6个孔，再取 70 μL~80 μL标准品低剂量溶液，随机滴加在与高剂量溶液同一
平板其余孔的 6个孔中。试样溶液和标准品溶液滴在同一平板上，其操作同标准品。  
A.3.3.6  恒温培养  
等孔内的溶液渗透完全后，移入 30℃恒温箱中培养 16 h~24 h 后，使得直径范围在
18mm~24 mm 之间，测量抑菌圈直径。  
A.3.4 结果计算 
用卡尺测量抑菌圈直径，取其平均值，按式 (A.1)计算效价：  
)1.() () () () (
BH SHBL SL BH SHBL BH SL SH
A k C CX X X XX X X X

          GB ××××—×××× 
式中：  
CSH—试样的效价，单位为国际单位每毫克（ IU/mg）；  
CBH—试样的估价，单位为国际单位每毫克（ IU/mg）；  
XSH—高剂量试样溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米（ mm)； 
XSL—低剂量试样溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米（ mm)； 
XBH—高剂量标准溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米（ mm)； 
XBL—低剂量标准溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米（ mm)； 
k—高剂量与低剂量浓度的比值。  
若试样估计值不在测定值的 90%-110% 范围内，需重新估计试样效价，重测。