中华人民共和国国家标准  
 
GB ×××× —××××  
 
 
食品安全国家标准  
食品营养强化剂   血红素铁  
（征求意见稿）  
×××× -××-××发布  
 ×××× -××-××实施  
 GB ×××× —××××  
 1 食品安全国家标准  
食品营养强化剂  血红素铁  
1 范围 
本标准适用于以 检验检疫合格的动物血液或经离心分离得到的血球液 为原料，经酶解、分
离、干燥制得的食品营养强化剂血红素铁 。 
2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量  
2.1 化学名称  
血红素铁  
2.2 分子式 
C34H32FeN 4O4 
2.3 结构式 
 
2.4 相对分子质量  
616.48（按2018年国际相对原子质量）  
3 技术要求  
3.1 感官要求  
感官要求应符合 表1 的规定。  
表1 感官要求  
项    目 要    求 检验方法  
色泽 红褐色至黑褐色  取适量试样置于洁净、干燥的透明玻璃器 皿中，在
自然光下观察色泽、状态，嗅其气味，观察其杂质  状态 粉末或颗粒  GB ×××× —××××  
 2 气味 无味或轻微的血红素铁特征性气味  
杂质 无肉眼可见杂质  
3.2 理化指标  
理化指标应符合表 2的规定。  
表2  理化指标  
3.3 微生物限量  
微生物限量 应符合表 3的规定。  
表3 微生物限量  
项    目 限    量a 
检验方法  
n c m M 
沙门氏菌 /25g 5 0 0 - GB 4789.4  
金黄色葡萄球菌 /（CFU/g） 5 1 100 1000  GB 4789.10 第二法  
a样品的采样和处理按 GB 4789.1 执行。 
 
 项    目 指    标 检验方法  
铁（以 Fe计），w/%                  1.0～2.6 GB 5009.90  
血红素铁（以 C34H32FeN 4O4计），w/%   9.0～27.0 附录 A中A.3 
干燥减量，w/%                           ≤ 6.0 GB 5009.3 （直接干燥法）  
灼烧残渣， w/%                           ≤ 12.0 GB 5009.4  
铅（ Pb）/（mg/kg）                       ≤ 2.0 GB 5009.75 或GB 5009.12  
总砷（以 As计）/（mg/kg）                ≤ 2.0 GB 5009.76 或GB 5009.1 1 GB ×××× —××××  
 3 附录A 
检验方法  
A.1 一般规定  
本标准的检验方法中所用试剂和水， 在没有注明其他要求时， 均指分析纯试剂和 GB/T 6682
规定的三级水。试验中所用溶液在未标明用何种溶剂配制时，均指水溶液，所用溶液以 “%”表
示的均为质量分数。  
A.2 鉴别试验  
A.2.1 试剂和材料  
A.2.1.1  氢氧化钠 。 
A.2.1.2  吡啶。 
A.2.1.3  次亚硫酸钠 。 
A.2.1.4  硝酸：色谱纯 。 
A.2.1.5  氨水。 
A.2.1.6  1 mol/L氢氧化钠溶液：称取 40.0 g氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至 1 L。 
A.2.1.7  吡啶氢氧化钠溶液： 100 mL吡啶，加入 30 mL1 mol/L 氢氧化钠溶液，用水稀释至 300 
mL。 
A.2.2 仪器和设备  
A.2.2.1 分析天平：感量 0.0001 g。 
A.2.2.2 水浴箱。  
A.2.3  鉴别方法  
A.2.3.1 呈色试验  
将10 mg血红素铁溶解在 50 mL的吡啶氢 氧化钠溶液中，取 5 mL该溶液，加入 15 mg的
次亚硫酸钠，溶液变成红色。  
A.2.3.2 呈色试验  
将10 mg血红素铁放在 100 mL烧杯中，加入 5 mL硝酸，加热，变成黄色，冷却后用氨
水碱化，颜色变成橙黄色。  
A.2.3.3 紫外光谱法  
将10 mg血红素铁溶解在 50 mL的吡啶氢氧化钠溶液中， 在紫外光扫描谱图中， 在 399 nm
波长处具有最大吸收。  
A.3 血红素铁 (C34H32FeN4O4)含量的测定  
A.3.1 方法提要  
样品中的血红素铁用吡啶氢氧化钠溶解，用 C18色谱柱分离，液相色谱仪测定，外标法定
量。 
A.3.2 试剂和材 料 
除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水 。 
A.3.2.1 甲醇：色谱纯 。 
A.3.2.2 甲酸：色谱纯 。 
A.3.2.3 氢氧化钠 。 
A.3.2.4 吡啶。 GB ×××× —××××  
 4 A.3.2.5 羟高铁血红素（ C34H33FeN 4O5，CAS号： 15489 -90-4）标准品：含量 ≥98.0%。 
A.3.2.6 1 mol/L氢氧化钠溶液：称取 40.0 g氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至 1 L。 
A.3.2.7 吡啶氢氧化钠溶液： 100 mL吡啶，加入 30 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至
300 mL。 
A.3.2.8 羟高铁血红素标准储备 液：准确称取 100℃干燥 3小时的羟高铁 血红素 0.1028 g，用
吡啶氢氧化钠溶液（ A.3.2.7）溶解并定容至 100 mL，此溶液相当于血红素铁 1 mg/mL。0～4℃
避光保存， 使用期不超过 1 周。 
A.3.3 仪器和设备  
A.3.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器 。 
A.3.3.2 分析天平：感量 0.0001 g。 
A.3.3.3 超声波发生器：功率大于 180 W。 
A.3.3.4 离心机：大于 4000 r/min 。 
A.3.3.5 液相色谱参考条件  
A.3.3.5.1  色谱柱： C18柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 µ m 或等效色谱柱 。 
A.3.3.5.2 流动相：甲醇 +0.1%甲酸水溶液（ 70+30，V+V）。 
A.3.3.5.3 流速： 1.0 mL/min 。 
A.3.3.5.4 柱温： 30℃。 
A.3.3.5.5 进样量： 5.0 µ L。 
A.3.3.5.6 检测波长： 399 nm。 
A.3.3.6 分析步骤  
准确称取试样 0.1 g，精确至 0.001 g，用吡啶氢氧化钠溶液（ A.3.2.7）溶解，避光条件下超
声波助溶 10 min，转移至  50 mL容量瓶中，用 吡啶氢氧化钠溶液 定容至刻度，混匀，取该溶液
1 mL，用吡啶氢氧化钠溶液稀释 至10 mL，4000 r/min 离心 10 min，取上清液，过 0.45 µ m滤膜，
液相色谱测定 。并做空白试验，除 不加试样外，其他操作与测定试样相同。  
A.3.4 定性分析  
依据保留时间一致性进行定性识别的方法，根据血红素铁标准品的保留时间，确定样品中
血红素铁的色谱峰（见附录 B）。 
A.3.5 定量分析  
分别取羟高铁血 红素标准储备 液（A.3.2.8）0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、
5.00 mL于50 mL容量瓶中，用 吡啶氢氧化钠溶液（ A.3.2.7）定容，配制成相当于血红素铁溶
液浓度分别为 5 µ g/mL、10 µ g/mL、20 µ g/mL、40 µ g/mL、60 µ g/mL、100 µ g/mL的标准溶液，
液相色谱测定，以血红素铁浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线 。 
用标准工作曲线对试样进行定量， 标准工作溶液和试样中血红素铁的响应值均应在仪器的
检测线性范围内 。 
在A.3.3.5的色谱条件下，羟高铁血红素标准品和血红素样品的色谱图参见附录 B。 
A.3.6 结果计算  
血红素铁 (C34H32FeN 4O4)含量的质量分数
1w (%)计，按公式（ A.1）计算：  
 …………………… （A.1） 
式中：  
c——试样溶液中血红素铁的质量浓度，单位为微 克每毫升（ µg/mL）；  GB ×××× —××××  
 5 c0——空白试验中血红素铁的质量浓度，单位为微克每毫升（ µg/mL）；  
V——试样定容总体积，单位为毫升（ mL）；  
f——试样稀释倍数；  
m——试样称取质量，单位为克（ g）；  
取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于 2.0% 。 
 GB ×××× —××××  
 6 附录B 
液相色谱图  
羟高铁血红素标准品液相色谱图如图 B.1所示。  
 
B.1 羟高铁血红素标准品（浓度以血红素铁计）液相色谱图  
 
血红素铁样品液相色谱图如图 B.2所示。  
 
B.2 血红素铁样品液相色谱图