-1-식품의약품안전처 공고제2022-343호
「약사법」제51조제1항에따른「대한민국약전」(식품의약품안전처
고시제2022-36호,2022.5.10.)을일부개정함에있어국민에게미리알
려의견을수렴하고자그취지,개정이유및주요내용을「행정절차
법」제46조에따라다음과같이공고합니다.
 2022년7월27일
 식품의약품안전처장
대한민국약전일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
「대한민국약전」기준·규격을국제조화하여의약품의적정한품질관
리를합리적으로지원하고,제형특성을고려하여최신과학수준에맞
게개선함으로서기준·규격을선진화하고우수한품질의의약품이유
통될수있도록함
2.주요내용
가.통칙,제제총칙및일반시험법의‘수액용고무마개시험법 ’을‘주사제용
고무마개시험법’으로개정하고적용대상을확대함.고무마개의성능시
험을추가하고동물시험을대체하는등시험법을국제조화
나.제제총칙중점안제항에점안제는원칙적으로이물이없음을정의항-2-에추가하고,현탁점안제는불용성이물시험적용을제외
다.각조제2부중‘가미소요산엑스과립’등9품목시험법개정
라.일반정보‘의약품시험방법유효성검증’중5.시험방법베리피케이션실
시5.2정량시험(낮은농도,예:순도시험의정량시험등)항목에서검출
한계삭제,5.4한도시험(정량한계와근접한기준농도)항목에서시험파
라미터를특이성,정확성,정밀성에서특이성,검출한계로수정,5.5.한
도시험(정량한계보다현저히높은기준농도)항목을삭제
3.의견제출
「대한민국약전」일부개정고시(안)에대하여의견이있는단체또는
개인은2022년9월25일까지다음사항을기재한의견서를식품의약품
안전처장(주소:(우)28159,충청북도청주시흥덕구오송읍오송생명2로
187식품의약품안전처 ,전자메일:pharmpolicy@korea.kr) 에게제출하여
주시기바랍니다.
가.예고사항에대한의견(찬,반여부와그사유)
나.성명(단체인경우단체명과그대표자성명),주소및전화번호
다.기타참고사항-3-식품의약품안전처 고시제2022-호
「약사법」제51조제1항에따른「대한민국약전」(식품의약품안전처
고시제2022-36호,2022.5.10.)을다음과같이개정고시합니다.
 2022년월일
식품의약품안전처장
대한민국약전일부개정고시(안)
대한민국약전일부를다음과같이개정한다.
별표1제5호5.10.중“수액용고무마개시험법 ”을“주사제용고무마개시험
법.”으로한다.
별표2Ⅱ제3호3.1.카목중“수액으로쓰는이제제중100mL이상의
주사제의유리용기에쓰는고무마개는따로규정이없는한수액용고무마
개시험법에적합한것을쓴다.”를“주사제에쓰는고무마개는따로규정이
없는한주사제용고무마개시험법에 적합한것을쓴다.”로한다.
별표2Ⅱ제4호4.1.아목중“이제제의용기의고무마개는따로규정이
없는한수액용고무마개시험법에 적합한것을쓴다.”를“이제제의용기의
고무마개는따로규정이없는한주사제용고무마개시험법에 적합한것을
쓴다”로한다.
별표2Ⅱ제6호6.1.가목중“점안제(點眼劑)는결막낭등의눈조직에-4-적용하는액상의무균제제또는쓸때녹이거나현탁하여쓰는고형의무
균제제이다.”를“점안제(點眼劑)는결막낭등의눈조직에적용하는액상의
무균제제또는쓸때녹이거나현탁하여쓰는고형의무균제제로,이물은
없어야한다.”로한다.
별표4가미소요산엑스과립의확인시험중“5)작약”항과“6)감초”항과
“7)목단피”항및“8)치자”항을삭제하고,“9)건강”을“5)건강”으로하
고,“10)박하”를“6)박하”로하며,“7)작약,감초,목단피및치자정
량법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타
낸다.”를신설한다.
별표4단삼의정량법중“희석시킨메탄올(75→100)을넣어정확하게50mL로
하여”를“희석시킨메탄올(75→100)을넣어정확하게5mL로하여”로
하고,“살비아놀산B(C36H30O16)의양(mg)=살비아놀산B표준품의양
(mg)×ST”를“살비아놀산B(C36H30O16)의양(mg)=살비아놀산B표준품의
양(mg)×ST×10”으로한다.
별표4마황의정량법중칼럼의길이“15∼20cm”를“15∼25cm”으로
한다.
별표4산사의확인시험2)중“아세트산에틸·헥산·메탄올·포름산혼합액(10
:4:4:0.5)”을“헥산·아세트산에틸·포름산혼합액(20:10:1)”로하고,“묽
은황산시액”을“분무용황산시액”으로한다.
별표4센나엽의정량법중칼럼의길이“15∼20cm”를“15∼25cm”으-5-로한다.
별표4쌍화탕액의확인시험중“1)작약”항을삭제하고,“2)당귀”를
“1)당귀”로하고,“3)숙지황”을“2)숙지황”으로하며,“4)천궁”을“3)
천궁”으로하고,“5)황기”를“4)황기”로하며,“6)감초”항을삭제하
고,“7)육계”를“5)육계”로하고,“8)대추”를“6)대추”로하며,“9)생
강”을“7)생강”으로하고,“8)작약,감초정량법에따라시험할때검
액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다.”를신설한다.
별표4쌍화탕엑스과립의확인시험중“1)작약”항을삭제하고,“2)당
귀”를“1)당귀”로하고,“3)숙지황”을“2)숙지황”으로하며,“4)천궁”
을“3)천궁”으로하고,“5)황기”를“4)황기”로하며,“6)감초”항을
삭제하고,“7)육계”를“5)육계”로하고,“8)대추”를“6)대추”로하며,
“9)생강”을“7)생강”으로하고,“8)작약,감초정량법에따라시험할
때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다.”를신설한다.
별표4육미지황탕엑스과립의확인시험중“2)목단피”항을삭제하고,
“3)복령”를“2)복령”으로하고,“4)산수유”를“3)산수유”로하며,“5)
산약”을“4)산약”으로하고,“6)택사”를“5)택사”로하며,“6)목단피
정량법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나
타낸다.”를신설한다.
별표4형개연교탕엑스과립의확인시험중“4)감초”항을삭제하고,“5)
당귀”를“4)당귀”로하고,“6)방풍”을“5)방풍”으로하며,“7)연교”를
“6)연교”로하고,“8)작약”항을삭제하며,“9)지실”을“7)지실”로하-6-고,“10)천궁”을“8)천궁”으로하며,“11)치자”항을삭제하고,“12)형
개”를“9)형개”로하며,“13)황금”항을삭제하고,“10)감초,작약,치
자및황금정량법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에
서피크를나타낸다.”를신설한다.
별표5중“34.수액용고무마개시험법 ”을“34.주사제용고무마개시험법 ”으
로하고,34.주사제용고무마개시험법 (현행34.수액용고무마개시험법 )을
다음과같이한다.
34.주사제용고무마개시험법
주사제용고무마개는 주사제용용기를막는데쓰는고무마개(플라스틱
등의재료로코팅또는라미네이트한것포함)를말한다.고무마개는내
용의약품과물리적또는화학적으로작용하여그성상및품질에영향
을미치지않고미생물의침입을방지하며주사제를쓰는데에기능성
등지장을주지않는것으로한다.
1)용출물시험고무마개를물로씻어실온에서말린다.표면적이약100±10
cm2가되도록검체를취하여(필요한경우표면적이100cm2에근접하도록여러
개의검체를취한다)경질유리용기에통째로넣고검체1cm2당2m
L가되도록정제수또는주사용수를넣어무게를단다.경질유리또
는이와유사한비반응성용기를마개로한다음고압증기멸균기를-7-써서20∼30분에121±2℃에도달하도록가열하고,30분간이온
도를유지한다.이때물과온도프로브를넣은용기를검체와함께
고압증기멸균기에넣어온도를제어한다.검체용기를꺼내어약30
분에걸쳐실온이될때까지방치하고정제수또는주사용수를넣어
원래의질량이되도록한다음
즉시흔들고기울여취한액을검액으로한다.따로정제수또는주
사용수200mL를가지고같은방법으로공시험액을만든다.검액및공시험
액을가지고다음시험을한다.다만,사)휘발성황화물의시험용검체
및비교액은따로조제한다.
가)탁도탁도시험법에따라육안법또는광전광도법으로비교하여
시험한다.
제1법육안법탁도시험법의육안법에따라시험할때검액은탁도비
교액II보다진하지않다.단,다회사용목적의고무마개로시험할때
검액은탁도비교액III보다진하지않다.
제2법광전광도법탁도시험법의광전광도법에따라적절히교정된탁도
계를써서탁도비교액들의탁도를측정한다.공시험액을같은방법으로
측정하여보정할때탁도비교액I,탁도비교액II,탁도비교액III및탁
도비교액IV는각각3,6,18및30NTU를나타낸다.교정된탁도계
를써서공시험액의탁도로보정한검액의탁도는6NTU이하이다.
단,다회사용목적의고무마개로시험할때공시험액의탁도로보정
한검액의탁도는18NTU이하이다.-8-나)색상색의비교액O3mL에묽은염산97mL를넣어표준액으로
한다.바닥이편평하고안지름이15∼25mm인무색투명한비반응
성재질의동일한시험관을써서,한쪽에는검액을40mm깊이로넣
고,다른한쪽에는색표준액을같은깊이로넣어흰색배경을써서
직사광선을피하여밝은빛아래에서수직으로관찰하여비교할때
검액의색은표준액보다진하지않다.
다)산또는알칼리검액20mL에브로모티몰블루용액0.1mL를넣
을때노란색일경우파란색이나타날때까지0.01mol/L수산화나트
륨액으로적정한다.파란색이나타나면다시노란색이나타날때까지
0.01mol/L염산으로적정한다.다만용액이초록색일때는중성이며
적정을할필요는없다.공시험액을가지고같은방법으로적정하여
보정한다.파란색이나타나는데소비된0.01mol/L수산화나트륨액
의소비량이0.3mL이하이거나,노란색이나타나는데소비된0.01
mol/L염산의소비량이0.8mL이거나또는적정을할필요가없을
때적합하다.
◦브로모티몰블루용액:브로모티몰블루50mg을0.02mol/L수산
화나트륨액4mL및에탄올(96)20mL의혼합액에녹이고물을넣
어100mL로한다.
라)환원성물질검액을만든다음4시간이내에시험한다.검액20.
0mL에묽은황산1mL및0.002mol/L과망간산칼륨용액20.0mL
를넣고3분동안끓인다.식힌다음요오드화칼륨1g을넣고즉시-9-전분시액0.25mL를지시약으로넣고0.01mol/L티오황산나트륨액
으로적정한다.같은방법으로공시험액을가지고적정한다.0.01mo
l/L티오황산나트륨액의소비량의차이를구할때3.0mL이하이다.
단,다회사용목적의고무마개로시험할때0.01mol/L티오황산나
트륨액의소비량의차이는7.0mL이하이다.
마)자외부흡수스펙트럼 검액을만든다음5시간이내에시험한다.
검액을공경0.45μm의불활성필터로여과하여처음몇mL는버리
고다음여액을쓴다.여액을가지고공시험을대조로하여1cm셀
을써서자외가시부흡광도측정법에따라시험할때파장220~360
nm에서의흡광도는0.2이하이다.다만,다회사용목적의고무마개
로시험할때흡광도는4.0이하이다.여액을희석하여측정한경우
는희석배수로보정한다.
바)암모늄검액5mL에물을넣어14mL로한다.필요하면1mol
/L수산화나트륨시액을넣어알칼리성으로하고물을넣어15mL로
한다.여기에알칼리성사요오드화수은칼륨용액0.3mL를넣고용기
를막아시험액으로한다.따로염화암모늄용액[1ppm의암모늄(NH
4+)]10mL에물5mL를넣고알칼리성사요오드화수은칼륨용액0.
3mL를넣고용기를막아비교액으로한다.시험액및비교액을5
분간방치할때시험액이나타내는노란색은비교액이나타내는색
보다진하지않다(시험액중암모늄(NH4+)2ppm).
◦알칼리성사요오드화수은칼륨용액:요오드화칼륨11g및요오드-10-화수은(II)15g을물에녹여100mL로한다.쓰기직전에이용액과
25%수산화나트륨용액을같은부피로섞는다.
사)휘발성황화물고무마개를필요하면자르고총표면적이20±
2cm2가되도록하여100mL플라스크에넣고2w/v%시트르산용
액50mL를넣어시험용검체로한다.동시에같은방법으로2w/
v%시트르산용액50mL에황화나트륨0.154mg을녹여비교액으로
한다.시험용검체및비교액의각플라스크입구에아세트산납지조
각을올려놓고그위에칭량병을거꾸로놓아아세트산납지를고정
한다.따로시험용검체에사용된것과비슷한플라스크에물50mL
를넣고고압증기멸균기의프로그램제어용온도프로브를담근다.
고압증기멸균기로가열하여20~30분이내에121±2℃에도달하
도록하고,30분간이온도를유지한다.약30분에걸쳐실온이될
때까지냉각할때시험용검체가나타내는아세트산납지의검은얼
룩은비교액이나타내는것보다진하지않다.
2)생물학적반응시험 이시험은검체의독성을평가하는시험으로시
험관내시험(in-vitro)과생체내시험(in-vivo)을포함한다.검체는
시험관내시험에적합하여야하며이에적합하지않을때는생체내
시험을실시하여최종판정한다.
가)시험관내시험(in-vitro)
이시험은규정된표면적에대해실시하는것이필수이나,검체의표
면적을측정할수없을때는1mL당0.1g을쓴다.검체의특성등-11-을고려하여다음방법중적절한방법에따라시험한다.
  시험법
시험대조재료(1)음성대조재료고밀도폴리에틸렌표준품
(2)양성대조재료0.1%디에틸디티오카르밤산아연또는0.25%디
부틸디티오카르밤산아연을함유하는폴리우레탄필름
세포배양액의조제세포주는L-929(ATCC세포주CCL1,NCTC
클론929;표준저장소로부터얻은다른세포주도적절한밸리데이
션을하여쓸수있다)포유동물섬유아세포를쓴다.배지는플라스
틱제의약품용기시험법의 세포독성시험에쓰는소혈청첨가(10
vol%)이글최소필수배지를쓴다.이배지mL당세포주를약105개
의밀도로심어계대배양한다.80%이상분화될때까지이산화탄
소농도가4∼6%,온도가36∼37℃인습윤배양기를써서24
시간이상배양한다.배양된세포를현미경으로관찰하여세포단층
이균일하고거의전체면을덮고있는지를확인한다.[주:세포시험
의재현성은세포배양액의균일한밀도에달려있다.]
추출용매염화나트륨주사액(0.9%염화나트륨을함유하는각조의
염화나트륨주사액)을쓴다.대신무혈청포유동물세포배양배지또
는혈청첨가포유동물세포배양배지를쓸수있다.혈청은37℃에
서24시간추출하는경우에첨가한다.
  장치
고압증기멸균기고압증기멸균기는온도계,압력계,배출콕이붙어-12-있고시험용기를수면위로올려놓을수있는선반과시험용기를
약20℃로냉각할수있는것으로121±2℃의온도를유지할수
있는것을쓴다.다만,멸균후냉각할때는약20℃아래로내려가
지않도록주의한다.
항온기작동온도50∼70℃범위에서±2℃의정밀도를가진기
계적인순환식항온기를쓴다.
배양기온도37±1℃및5±1%이산화탄소를유지할수있는습
윤배양기를쓴다.
추출용기앰풀이나나사식마개가달린배양시험관또는경질유리
로된동등한시험관과같은용기만을쓴다.배양시험관이나동등한
것을쓰는경우는적합한탄성고분자라이너가있는나사식마개로
닫는다.탄성고분자라이너의노출표면은두께50∼75μm의불
활성고체디스크로완전히덮는다.적당한디스크로는폴리테프
(polytef)로만든것을쓸수있다.
장치의준비모든유리기구를크롬산세척혼합액으로철저하게씻
고필요하면가열한질산,그다음멸균주사용수로장시간씻어낸다.
시험재료의추출,이동또는투여에쓰는용기와기구는적당한공
정으로멸균하고말린다.멸균약제로산화에틸렌을쓰는경우는48
시간이상에걸쳐완전히탈기한다.
  조작법
추출용검체의조제나)생체내시험의조작법에따른다.-13-추출액의조제생체내시험의조작법의추출액의조제에따라추출
용매로염화나트륨주사액(0.9%염화나트륨)또는무혈청포유동
물세포배양배지를써서만든다.[주:배양기를써서37℃에서24
시간추출하는경우는혈청이첨가된세포배양배지를쓴다.추출조
건은어떤조건에서도재료조각이약간흡착되는것을제외하고는
융해나용해와같은물리적변화를일으켜서는안된다.]
제1법한천확산법이시험은한천층을사용하여고분자검체로부
터침출가능한화학물질의확산을허용하는동안세포를기계적인
손상으로부터보호하기에적절한방법이다.
검체조제규정한대로조제한추출액을쓰거나표면적이100mm2
이상의편평한표면을가진검체부위를쓴다.
양성대조조제검체조제에따라조작한다.
음성대조조제검체조제에따라조작한다.
조작법세포배양액의조제에따라만든세포부유액7mL를취하여
지름60mm의플레이트에단층으로만든다.배양을하고단층으로
부터배지를제거하고2%이하의한천을함유하는혈청첨가배지
를넣는다.[주:한천의양은세포성장을조장하는데에적절해야한
다.한천층은유출된화학물질이확산할수있을정도로얇아야한
다.]검체,음성대조및양성대조의편평한표면또는이들을적절한
추출용매로추출한추출액을고화시킨한천표면과접촉하여두개
의배양액에넣는다.조제한배양플레이트마다3개의이하의검체를-14-쓴다.이들모두를가급적이산화탄소농도가4∼6%,온도가36
∼37℃인습윤배양기를써서24시간이상배양한다.필요하면적
절히염색하고현미경을써서각검체,음성대조및양성대조주변의
배양세포를관찰한다.
결과의판정생물학적반응성(세포변성및기형)은0∼4의등급
(표1)으로표시된다.각검체,음성대조및양성대조에대한세포배
양액의반응성을측정한다.세포배양시험시스템은관측된음성대조
에대한반응성이등급0(무반응성)이고,양성대조에대한반응성이
적어도등급3(중간)일때적합하다.검체는검체제제에대한반응
성이등급2(약한반응성)이하일때이시험의요건에적합하다.시
스템의적합성이확인되지않으면조작을반복한다.
표1.한천확산법및직접접촉법에따른반응성등급
-15-등급반응성반응성구역의성상
0무반응성검체주변이나아래에반응성구역이없
다.
1미약한반응성검체아래에기형이나변성된세포가약
간있다.
2약한반응성검체아래로기형이나변성이한정되고,
검체바깥의반응성구역이0.45cm미만
이다.
3중간반응성검체바깥의반응성구역이0.45∼1.0
cm확장되어있다.
4심한반응성검체바깥의반응성구역이1.0cm넘게
확장되어있다.
제2법직접접촉법이시험은세포에기계적인손상을줄수있는
밀도가매우낮거나높은재료에는적절하지않을수있다.
검체조제표면적이100mm2이상인편평한표면을가진시험재료부위
를쓴다.
양성대조조제검체조제에따라조작한다.
음성대조조제검체조제에따라조작한다.
조작법세포배양액의조제에따라만든세포부유액2mL를취하여
지름이35mm인배양플레이트에단층으로만든다.배양을하고배
양액으로부터배지를제거하고신선한배지0.8mL를넣는다.검체,
음성대조재료및양성대조재료를두개의배양액의각각에하나씩
넣는다.이들모두를가급적이산화탄소농도가4∼6%,온도가36
∼37℃인습윤배양기를써서24시간이상배양한다.필요하면적
절히염색하고현미경하에서또는육안으로검체,음성대조및양성-16-대조각각의주변배양액을관찰한다.
결과의판정한천확산법의결과의판정에따라시험한다.검체는조
제한검체에대한반응성이등급2(약한반응성)일때이시험의요
건에적합하다.시스템의적합성이확인되지않으면조작을반복한
다.
제3법용리법이시험은고밀도재료및용량-반응평가에적절하
다.
검액조제추출액의조제에따라추출용매로염화나트륨주사액
(0.9%염화나트륨)이나무혈청포유동물세포배양배지를써서만든
다.검체의표면적을쉽게측정할수없을때는추출용매mL당고
무마개0.1g의질량을달아쓸수있다.다른방법으로는생리적조
건에가깝게하기위해서는혈청첨가포유동물세포배양배지를쓴
다.이산화탄소농도가4∼6%인습윤배양기를써서24시간이
상배양하여추출액을만든다.추출온도는고온이면혈청단백질을
변성시키기때문에36∼38℃를유지한다.
양성대조추출액 조제검액조제에따라조작한다.
음성대조추출액 조제검액조제에따라조작한다.음성대조재료로
는고밀도폴리에틸렌표준품을쓴다.
조작법세포배양액의조제에따라만든세포부유액2mL를취하여
지름이35mm인배양플레이트에단층으로만든다.배양을하고단
층으로부터배지를제거하고검체,음성대조및양성대조의추출액-17-을넣는다.혈청첨가및무혈청세포배양배지추출액은희석하지
않고(100%)2회반복하여시험한다.염화나트륨주사액추출액은
혈청첨가세포배양배지로희석하여25%추출액농도로하고2회
반복하여시험한다.모든배양액을가급적이산화탄소농도가4∼6
%,온도가36∼38℃인습윤배양기를써서48시간배양한다.필
요하면적절히염색하고현미경하에서각각의배양액을관찰한다.
결과의판정한천확산법의결과의판정에따라조작하지만,표2를
사용하여판정한다.검체는검체추출액에대한반응성이등급2(약
한반응성)일때이시험의요건에적합하다.시스템의적합성이확
인되지않으면조작을반복한다.용량-반응성평가를위해서는검체
추출액을정량적으로희석하여조작을반복한다.
표2.용리법에따른반응성등급
-18-등급반응성모든배양액의상태
0무반응성세포질내과립의분리;세포용해는
없다.
1미약한반응성세포수의20%이하가둥글고느슨하
게붙어있으며세포질내과립이없
고,가끔용해된세포가존재한다.
2약한반응성세포수의50%이하가둥글고세포질
내과립이전혀없다.세포용해가심
하지않고,세포들사이에빈공간이
없다.
3중간반응성세포층의70%이하가둥근세포이거
나용해되어있다.
4심한반응성세포층이거의완전히파괴되어있다.
나)생체내시험(in-vivo)
이시험은검체가시험관내시험기준에적합하지않은경우에실시
하며생체내시험결과로최종판정한다.시험조작시추출을위한
특정표면적이필수적으로필요하나,시료의표면적을측정할수없
을때는추출용매mL당고무마개0.1g을쓴다.이시험은제1법
및제2법에따라시험한다.
이시험법의목적상정의를다음과같이규정한다.
검체시험재료또는그시험재료로부터만든추출액.
공시험액시험재료의추출에쓴같은양의추출용매로시험재료
없이동일하게처리한액.
음성대조시험조건에서반응을일으키지않는재료로서고밀도폴
리에틸렌표준품.-19-조작법은재료의열적저항에따라세가지표준온도,즉50,70및
121℃중한가지조건으로만든추출액을쓴다.
추출용매염화나트륨주사액(각조참조),0.9%염화나트륨을함유
하는염화나트륨주사액을쓴다.
염화나트륨주사액 ・에탄올혼합액(19:1)
폴리에틸렌글리콜400(각조참조)
식물유새로정제한참기름(각조참조)또는면실유(각조참조)또
는그밖의적당한식물유
의약품용제(해당되는경우)
주사용수(각조참조)
[주:새로정제한참기름(각조참조)또는면실유(각조참조)또는그
밖의적당한식물유는다음의추가요건에적합하다.가능한한새로
정제한참기름을구한다.적절하게사육한동물세마리를써서부위
당기름0.2mL의용량으로10개부위에피내주사하고24,48,72
시간에동물을관찰한다.관찰결과를표3에표시한점수로각부위
의등급을기록한다.세마리의토끼(30개주사부위)에대해각관
찰시점에서홍반에대한평균반응은0.5이하이고부종은1.0이하
이며전체지름이10mm이상의조직반응을나타내는부위는없다.
주사부위에서의기름잔류물이부종으로오인되어서는안된다.부종
조직은가볍게누르면희어진다.]-20-표3.피부반응평가1)
홍반및괴사딱지 점수
홍반이없음 0
매우미약한홍반(거의감지할수없음) 1
명확한홍반 2
중등도-심한홍반 3
심한홍반(홍당무홍색)-약간의괴사딱지형성(심부손상)4
부종형성2)점수
부종이없음 0
매우약한부종(거의인지할수없음) 1
약간의부종(부위의가장자리가명확하게올라옴)2
중등도부종(약1mm부어오름) 3
심한부종(1mm넘게부어오르고노출부위위로확장함)4
1)DraizeJH,WoodwardG,CalveryHO.Methodsforthestudyof
irritationandtoxicityofsubstancesappliedtopicallytotheskin
andmucousmembranes.JPharmacolExpTher1944;82:377–390.
2)공시험액또는추출용매로부터의비염증성(기계적)부종은제외한
다.
장치시험장치는다음과같다.
고압증기멸균기 가)의고입증기멸균기를쓴다.
항온기가)의항온기를쓴다.
추출용기가)의추출용기를쓴다.-21-장치의준비모든유리기구를크롬산세척혼합액으로철저하게씻
고,필요하면가열한질산,그다음물로장시간씻어낸다.절단도구
는검체를절단하기전에적절한방법으로깨끗이씻는다(예,아세
톤및염화메틸렌으로연속적인세척).그밖의모든장치는적당한
세제로철저히문질러닦고여러번물로잘씻어낸다.
추출,이동및투여에쓰는용기와장비는적당한공정으로멸균하고
말려둔다.[주:멸균제로산화에틸렌을쓰는경우는적절한시간방
치하여완전히탈기한다.]
조작법
검체의처리전신주사법및피내시험법은필요한경우모두동일한
추출액을써서시험하거나각시험별로별도의추출액을만들수있
다.표4에따라검체를준비하고검체또는음성대조재료를다음과
같이처리하여보풀이나자유입자와같은작은입자들을제거한다.
검체를유리마개가달린100mL의깨끗한경질유리눈금실린더에
넣고주사용수약70mL를넣는다.약30초간흔들고물을빼내고
이조작을반복한다.식물유로추출하기위해처리하는조각들은50
℃를넘지않는온도의건조기에서말린다.[주:검체는마른천이나
젖은천으로닦지않으며유기용매,계면활성제등으로씻어내거나
씻지않는다.]
추출액의조제적절하게처리한시험용검체를추출용기에넣고적
절한추출용매20mL를넣는다.시험에필요한각추출용매에대해-22-이조작을반복한다.따로주사용및비교용으로각추출용매를가지
고공시험액20mL씩을만든다.고압증기멸균기에서121℃,60분,
항온기에서70℃,24시간,또는50℃,72시간가열하여추출한다.
용기내의액체가추출온도에도달할때까지적절한시간방치한다.
[주:추출조건은어떤경우에도검체조각의용융이나융해와같은
물리적변화를일으켜가용표면적을감소시켜서는안된다.조각들
이약간흡착하는것은허용할수있다.추출용매에는씻은조각들을
항상개별적으로넣는다.식물유를써서고압증기멸균기에서추출하
는데쓰는배양시험관은나사캡을감압접착성의테이프로적절
히밀폐한다.
실온으로식히지만,20℃아래로내려가지않도록하고,몇분간격
렬하게흔들고각추출액을즉시무균조건에서마른멸균용기에
따라낸다.추출액은20∼30℃에저장하고24시간이지난것은시
험에쓰지않는다.중요한사항으로는추출제와플라스틱의사용표
면적과의접촉,추출하는동안의시간과온도,적당한냉각,진탕및
따르기공정,무균적취급과추출에이은추출액의저장이다.
표4.사용하는재료의표면적1)-23-재료의
형태두께추출용매20mL당
검체의양절단방법
필름
또는
시트<0.5mm양면의총표면적120
cm2에해당하는양약5×0.3cm의
스트림
0.5~1mm양면의총표면적60cm2에
해당하는양
판,튜빙
및
성형품>1mm총노출표면적60cm2에
해당하는양약5×0.3cm
이하의조각
고무마개>1mm총노출표면적25cm2에
해당하는양절단하지않음2)
1)검체의구조형상으로인하여표면적을측정할수없을때는추출용
매1mL당고무마개0.1g을쓴다.
2)고무마개는그대로쓴다.
제1법전신주사법이시험은마우스에주사하여시험재료의추출
액에대한전신반응을평가하는것이다.타당성이있을때는다른주
사경로를선택할수있다.
시험동물시험에쓴적이없는체중17∼23g의건강한알비노마
우스를쓴다.각시험군에는같은기원의마우스만을쓴다.물과일반
적으로사용되고조성을아는실험동물용식이를자유롭게먹도록한
다.
조작법각추출액은주사용량을취하기전에격렬하게흔들어추출
된물질이균일하게분포되도록한다.시험군의5마리마우스각각에
표5에정해진검체또는공시험액을주사한다.다만,폴리에틸렌글리-24-콜400으로조제한검체추출액과해당공시험액은각g당염화나트
륨주사액4.1용량으로희석하여mL당폴리에틸렌글리콜약200mg
이함유되도록한다.
표5.주사조작법-전신주사법
추출액또는공시험액 kg당용량경로
염화나트륨주사액 50mL IV
염화나트륨주사액·에탄올(96)
혼합액(19:1)50mL IV
폴리에틸렌글리콜40010gIP
의약품제제의용제
(해당되는경우)50mL IV
50mL IP
식물유 50mL IP
IV:정맥주사(수성의검체와공시험액)
IP:복강주사(유성의검체와공시험액)
주사후즉시동물을관찰하고,다시주사후4시간,그다음적어도
24,48,및72시간에관찰한다.관찰기간동안검체의추출액으로처
리한어느동물도공시험액으로처리한동물보다생물학적반응성이유
의하게더크게나타내지않으면검체는이시험의요건에적합하다.2
마리또는그이상이죽거나,경련이나탈진과같은비정상적인거동이
2마리또는그이상에서나타나거나,2g을넘게체중감소가3마리
또는그이상의마우스에서나타나면검체는이시험의요건에적합하-25-지않다.검체로처리한동물에서어떤동물이라도생물학적반응성을
약간이라도나타내거나,1마리이하의동물이전반적인생물학적반
응성을보이거나죽으면10마리의마우스를써서이시험을반복한
다.반복시험에서는시료로처리한10마리모두관찰기간중에공
시험액으로처리한동물이상의유의한생물학적반응성을나타내지
않는다.
제2법피내시험법이시험은토끼또는기니피그에피내주사하여
시험재료의추출액에대한국소반응을평가하는것이다.
시험동물건강한토끼또는기니피그로털을바짝깍을수있고피
부에기계적자극이나외상이없는것을쓴다.동물의취급에있어서
는관찰기간중에부종과기름잔류물을구별할때를제외하고는주
사부위에닿는것을피한다.
조작법주사용량을취하기전에추출물질이고르게분산될수있도
록세게흔든다.시험당일,충분히넓은시험면적위로동물의척추
양쪽등위의털을집게로꼭고정한다.기계적인자극이나외상을피한
다.흐트러진털은감압으로제거한다.필요한경우,묽은에탄올솜으
로가볍게닦고주사하기전에피부를말린다.시험결과에영향이없
을것으로결정되면,토끼또는기니피그한마리당해당검체에서얻
은한종류이상의추출액을쓸수있다.각검체에대해동물2마리를
쓰고각동물의한쪽에는검체를,다른한쪽에는공시험액을표6에나
타낸바와같이피내주사한다.다만,폴리에틸렌글리콜400으로조제-26-한검체추출액과해당하는공시험액은1g당염화나트륨주사액7.4
용량으로희석하여mL당폴리에틸렌글리콜약120mg의농도가되
도록희석한다.
표6.피내시험법
추출액또는공시험액동물당부위수부위당용량(μL)
검체 5 200
공시험액 5 200
주사부위에홍반,부종및괴사와같은조직반응의증거를조사한
다.필요하면,주사부위의판독을쉽게하기위하여피부를묽은에
탄올솜으로가볍게닦는다.주사후24,48및72시간에모든동물을
관찰한다.검체추출액과공시험액에대해표3을사용하여관찰결과
를점수로매긴다.관찰기간중에는필요한만큼털을클립으로다시
잡는다.각토끼또는기니피그에대해매점수부여간격(24,48및
72시간)마다평균홍반및부종점수를측정한다.72시간대점수를
측정한다음각검체와공시험액에대해구분하여모든홍반점수와
부종점수를합하여총점을계산한다.각각의총점을12(2마리×3
회의점수측정기간×2종의평가영역)로나누어각각의해당하는
공시험액에대한각검체의전체평균점수를구한다.검체와공시험-27-액의평균점수의차이가1.0또는그미만일때이시험의요건에적
합하다.어떤관찰기간에서도검체에대한평균반응이공시험액에
대한평균반응보다의심스럽게더큰경우에는토끼또는기니피그
3마리를추가하여시험을반복한다.검체와공시험액의평균점수의
차이가1.0또는그미만일때이시험의요건에적합하다.
3)기능시험
이시험은주삿바늘을쓰는고무마개에적용한다.재밀봉성은다회용
용기에쓰는고무마개일경우에만한다.
고무마개의투침성,파편화및재밀봉성은마개통째로시험하고,검
체는용출물시험의검액조제법에따라처리한고무마개를바람에
말린것을쓴다.각시험에서는바깥지름0.8mm(21게이지)이고윤
활처리된긴베벨(베벨각도12±2°)의새로운주삿바늘을가지고
각마개에대하여돌리지않고마개의표면에대해수직으로찌른다.
가)투침성10개의적합한바이알을물로표시용량까지채우고
검체로바이알을막고캡으로고정한다.각검체를찌르는데필요한
힘은±0.25N의정확도로측정할때10N이하이다.
나)파편화고무마개를수성제제에쓰는경우12개의깨끗한바
이알에표시용량에서4mL를뺀양에해당하는물을넣고,검체로
바이알을막고캡으로고정한다음16시간동안방치한다.고무마개
를건조제제에쓰는경우,검체로깨끗한바이알12개를막는다.깨
끗한주사기에끼운바늘을써서1mL의물을바이알에주입하고1-28-mL의공기를빼낸다.이조작을각마개에대해매번마개의다른
부위를찔러4회반복한다.각마개마다새바늘을쓰고시험하는
동안바늘이뭉툭해지지않는지확인한다.그다음공경0.5μm인필
터를써서바이알속의액체를여과하여육안으로볼수있는고무
파편의수를셀때총파편의수는5개이하이다.이한도는지름이
50μm이상인조각이육안으로보인다는가정을기반으로한것이
다.의심이있거나논란의여지가있을때는현미경으로조각을검사
하여그특성과크기를확인한다.
다)재밀봉성10개의바이알을물로채우고검체로바이알을막고
캡으로고정한다.각검체를매번다른부위를찔러10회반복한다.
바이알을0.1%메틸렌블루용액에똑바로세워담그고외부압력을
10분동안27kPa까지낮춘다.대기압으로복원하고바이알을30분
동안담근상태로둔다.바이알의외부를씻고관찰할때파란색조
를띠는것은없다.-29-별표616.의약품시험방법베리피케이션제4호중4.3을다음과같이한다.
4.3시험방법의분류
시험방법은목적(정량시험,확인시험등)에따라다양한방법이사용되므
로,서로다른목적에대해서는각기다른시험방법베리피케이션항목을
수행하는것이타당하다.시험방법베리피케이션이필요한4가지시험목
적과각목적별필요파라미터를제시하고자한다.
1)확인시험
2)정량시험(낮은농도)
3)정량및한도시험(높은농도)
4)한도시험(정량한계와근접한기준농도)
별표616.의약품시험방법베리피케이션제5호중5.2부터5.4까지를다음
과같이한다.
5.2정량시험(낮은농도,예:순도시험의정량시험등)
파라
미터수행
여부비고
특이성 ○
- 정확성 ○
정밀성 ○
정량한계
(LOQ)○-정량한계근처농도의시료분석-30-5.3정량및한도시험(높은농도,예:함량,용출시험등)
파라미터수행여부
특이성○
정확성○
정밀성○
5.4한도시험(정량한계와근접한기준농도)
파라
미터수행
여부설명
특이성 ○ -
검출한계
(LOD)○-검출한계근처농도의시료분석-31-부칙
제1조(시행일)이고시는고시후3개월이경과한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행후최초로제조업자가제조하거
나수입자가수입한의약품부터적용한다.
제3조(주사제용고무마개시험법 중카드뮴,납항목에관한경과조치)별
표5제34호카드뮴및납의개정규정에도불구하고「의약품의품목
허가·신고·심사규정」(식품의약품안전처 고시제2021-90호,2021.11.1
1.)제7조제2호다목4)나)(6)의규정에따른자료를제출하지아니한품
목은종전의카드뮴,납항목에관한시험법을적용해야한다.