-1-식품의약품안전처 공고제2023-147호
「약사법」제51조제1항에따른「대한민국약전」(식품의약품안전처
고시제2023-2호,2023.1.12.)을일부개정함에있어국민에게미리알
려의견을수렴하고자그취지,개정이유및주요내용을「행정절차
법」제46조에따라다음과같이공고합니다.
 2023년3월20일
 식품의약품안전처장
대한민국약전일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
「대한민국약전」기준·규격을국제조화하여의약품의적정한품질관
리를합리적으로지원하고,의약품등의개발및제약업계의수요사항
등을반영한일부일반정보를최신과학수준에맞게신설함으로써
우수한품질의의약품이유통될수있도록함
2.주요내용
가.시험법정확도개선및현대화(안별표3,4)
나.‘알킬설폰산에스테르류 분석법’및‘재조합C인자를이용한엔도톡
신시험법’신설(안별표6)-2-3.의견제출
「대한민국약전」일부개정고시(안)에대하여의견이있는단체또는
개인은2023년월일까지다음사항을기재한의견서를식품의약품안
전처장(주소:(우)28159,충청북도청주시흥덕구오송읍오송생명2로1
87식품의약품안전처 ,전자메일:pharmpolicy@korea.kr) 에게제출하여
주시기바랍니다.
가.예고사항에대한의견(찬,반여부와그사유)
나.성명(단체인경우단체명과그대표자성명),주소및전화번호
다.기타참고사항-3-식품의약품안전처 고시제2023-호
「약사법」제51조제1항에따른「대한민국약전」(식품의약품안전처
고시제2023-2호,2023.1.12.)을다음과같이개정고시합니다.
 2023년월일
식품의약품안전처장
대한민국약전일부개정고시(안)
대한민국약전일부를다음과같이개정한다.
별표3니모디핀확인시험,순도시험을다음과같이한다.
확인시험이약및니모디핀표준품을 가지고적외부스펙트럼측정법
의브롬화칼륨정제법에 따라측정할때같은파수에서같은강도의흡
수를나타낸다.
순도시험유연물질이약약40mg을정밀하게달아테트라히드로
푸란2.5mL에녹인다음이동상을넣어정확하게25mL로하여검액
으로한다.따로니모디핀표준품약40mg을정밀하게달아테트라히드
로푸란2.5mL에녹인다음이동상을넣어정확하게25mL로하고이
액1mL에이동상을넣어정확하게100mL로하여표준원액(1)로한
다.니모디핀유연물질 Ⅰ[2-메톡시에틸-1-메틸에틸-2,6-디메틸-4-(3-
니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트 ]표준품약20mg을정밀하
게달아테트라히드로푸란 2.5mL에녹인다음이동상을넣어정확하게-4-25mL로하고이액5mL에이동상을넣어정확하게100mL로하여
표준원액(2)로한다.표준원액(1)2mL에이동상을넣어정확하게10
mL로하여표준액(1)로한다.표준원액(1)2.5mL및표준원액(2)1
mL를취하여25mL용량플라스크에넣고이동상을넣어정확하게25
mL로하여표준액(2)로한다.검액,표준액(1)및표준액(2)20μL를
가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하여검액의
각유연물질의피크면적AT,표준액(2)의유연물질Ⅰ의피크면적AS1
및표준액(1)의니모디핀피크면적AS2를구할때유연물질Ⅰ의양은
0.1%이하이고이외유연물질의양은0.2%이하이며총유연물질의
양은0.5%이하이다.
유연물질I의양(%)=(AT1/AS1)×(CS1/CT1)×100
AT1:검액중유연물질I의피크면적
AS1:표준액(2)중유연물질I의피크면적
CS1:표준액(2)중유연물질I의농도(μg/mL)
CT1:검액중니모디핀의농도(μg/mL)
이외유연물질의양(%)=(AT2/AS2)×(CS2/CT2)×100
AT2:검액중유연물질I이외의유연물질의피크면적-5-AS2:표준액(1)중니모디핀의피크면적
CS2:표준액(1)중니모디핀의농도(μg/mL)
CT2:검액중니모디핀의농도(μg/mL)
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장235nm)
칼럼:안지름약4.6mm,길이약12.5cm인스테인레스강관에 3
∼10μm의액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
칼럼온도:40℃부근의일정온도
이동상:물·메탄올·테트라히드로푸란 혼합액(3:1:1)
유량:2.0mL/분
시스템적합성
시스템의성능:표준액(2)20μL를가지고위의조건으로조작할때
유연물질Ⅰ피크및니모디핀피크의상대유지시간은각각약0.9및
1.0이며이들피크의분리도는1.5이상이다.
시스템의재현성:표준액(1)20μL씩을가지고위의조건으로시험
을5회반복할때니모디핀피크면적의상대표준편차는2.0%이하
이다.
측정범위:니모디핀유지시간의4배범위
별표3니모디핀주사액확인시험,순도시험및정량법중조작조건을-6-다음과같이한다.
확인시험정량법의검액및표준액에서얻은주피크의유지시간및
200∼400nm에서의자외부흡수스펙트럼은 같다.
순도시험유연물질이약을검액으로한다.필요한경우이약을가
지고표시량에따라니모디핀(C21H26N2O7)약2mg에해당하는양을정
확하게취하여무수에탄올을넣어정확하게10mL로하여검액으로한
다.검액1mL를정확하게취하여이동상을넣어정확하게100mL로
하고다시2mL를정확하게취하여이동상을넣어정확하게10mL로
하여표준액(1)로한다.따로니모디핀유연물질I[2-메톡시에틸-1-메틸
에틸-2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트 ]표준
품약2mg을정밀하게취하여무수에탄올을넣어정확하게20mL로
하고다시1mL를정확하게취하여무수에탄올을넣어정확하게100m
L로하여표준액(2)로한다.검액,표준액(1)및표준액(2)20μL를가지
고다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하여검액에서얻
은니모디핀유연물질 I의피크면적AT1및표준액(2)에서얻은니모디핀
유연물질I의피크면적AS1을구한다.또검액에서얻은니모디핀유연물
질I을제외한개개유연물질의피크면적AT2및표준액(1)에서얻은니
모디핀피크면적AS2를구한다.니모디핀유연물질 I의양은0.5%이하
이고이외유연물질의양은0.2%이하이며총유연물질의양은0.5%
이하이다.-7-유연물질I의양(%)=(AT1/AS1)×(CS1/CT1)×100
AT1:검액중니모디핀유연물질 I의피크면적
AS1:표준액(2)중니모디핀유연물질 I의피크면적
CS1:표준액(2)중니모디핀유연물질 I의농도(μg/mL)
CT1:검액중니모디핀유연물질 I의농도(μg/mL)
이외유연물질의양(%)=(AT2/AS2)×(CS2/CT2)×100
AT2:검액중유연물질I이외의유연물질의피크면적
AS2:표준액(1)중니모디핀의피크면적
CS2:표준액(1)중니모디핀의농도(μg/mL)
CT2:검액중니모디핀의농도(μg/mL)
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장235nm)
칼럼:안지름약4.0mm,길이약12.5cm인스테인레스강관에 5
μm의액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
칼럼온도:30℃부근의일정온도
이동상:물·테트라히드로푸란 ·아세토니트릴(16:6:3)
유량:1.5mL/분-8-시스템적합성
시스템의성능:시스템적합성용액20μL를가지고위의조건으로조
작할때니모디핀및니모디핀유연물질 I의분리도는1.5이상이고,니
모디핀피크의대칭계수는2.0이하이다.
시스템의재현성:표준액(1)20μL씩을가지고위의조건으로시험을
6회반복할때니모디핀피크면적의상대표준편차는2.0%이하이
다.
◦시스템적합성용액:니모디핀표준품및니모디핀유연물질 I표준품
약2mg씩을정확하게취하여무수에탄올을넣어정확하게20mL로
하고다시1mL를정확하게취하여무수에탄올을넣어100mL로하
여시스템적합성용액으로한다.
정량법
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장235nm)다만,확인시험시광
다이오드검출기(200∼300nm)로한다.
칼럼:안지름약4.0mm,길이약15cm인스테인레스강관에 3∼1
0μm의액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:물·테트라히드로푸란 ·아세토니트릴혼합액(16:6:3)
유량:1.2mL/분-9-별표3디시클로민염산염정량법을다음과같이한다.
정량법이약약40mg을정밀하게달아희석액을넣어녹여정확하
게100mL로하여검액으로한다.따로디시클로민염산염표준품약10
mg을정밀하게달아희석액을넣어녹여정확하게25mL로하여표준
액으로한다.검액및표준액50μL씩을가지고다음조건으로액체크
로마토그래프법에 따라시험하여디시클로민염산염의피크면적AT및
AS를측정한다.
디시클로민염산염(C19H35NO2·HCl)의양(mg)
=디시클로민염산염표준품의양(mg)×(AT/AS)×4
◦희석액:아세토니트릴·물혼합액(7:3)
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장215nm)
칼럼:안지름약4.6mm,길이약15cm인스테인레스강관에 5μm
의액체크로마토그래프용 옥틸실릴실리카겔을충전한것
이동상:아세토니트릴·pH7.5인산이수소칼륨완충액혼합액(70:30)
◦pH7.5인산이수소칼륨완충액:인산이수소칼륨 2.72g을물900
mL에녹이고수산화나트륨용액 (1→10)을넣어pH7.5로조정한다음-10-물을넣어1000mL로한다.
유량:1mL/분
시스템적합성
시스템의성능:표준액50μL를가지고위의조건으로조작할때디
시클로민염산염피크의대칭계수는2.0이하이다.
시스템의재현성:표준액50μL씩을가지고위의조건으로시험을6
회반복할때디시클로민염산염의피크면적의상대표준편차는2.0%
이하이다.
별표3디펜히드라민확인시험을다음과같이한다.
확인시험이약및디펜히드라민표준품을가지고적외부스펙트럼측
정법의브롬화칼륨정제법에 따라측정할때같은파수에서같은강도의
흡수를나타낸다.
별표3l-멘톨정량법을다음과같이한다.
정량법이약약1g을정밀하게달아내부표준액을넣어정확하
게100mL로하여검액으로한다.따로멘톨표준품약100mg을정밀
하게달아내부표준액을넣어정확하게10mL로하여표준액으로한다.
검액및표준액0.5μL씩을가지고다음조건으로기체크로마토그래프
법에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검액및표준액에
서의멘톨의피크면적의비QT및QS를구한다.-11-멘톨(C10H20O)의양(mg)=멘톨표준품의양(mg)×(QT/QS)×10
내부표준액1-부탄올의헥산용액(1→100)
조작조건
검출기:불꽃이온화검출기
칼럼:안지름약0.18mm,길이약20m인용융실리카관에기체크
로마토그래프용 폴리에틸렌글리콜15,000을0.18μm의두께로입힌
다.
검체도입부온도:250℃부근의일정온도
검출기온도:260℃부근의일정온도
칼럼온도:처음60℃에서1분당20℃의속도로110℃가될때까
지온도를올려110℃로10분간유지한다.
운반기체:수소
유량:0.9mL/분
분할비:50:1
시스템적합성
시스템의성능:표준액0.5μL를가지고위의조건으로조작할때내
부표준액의상대유지시간은0.27,멘톨의상대유지시간은1.0이다.
시스템의재현성:표준액0.5μL씩을가지고위의조건으로시험을6-12-회반복할때내부표준물질에대한멘톨의피크면적비의상대표준편
차는2.0%이하이다.
별표3현탁주사용벤자틴페니실린G확인시험을다음과같이한다.
확인시험이약및벤자틴페니실린G수화물표준품을가지고브롬화칼
륨정제법에따라측정할때같은파수에서같은강도의흡수를나타낸
다.
별표3벤프로페린인산염정용출시험을다음과같이한다.
용출시험이약1정을취하여시험액으로용출시험법제2액900mL
를써서제2법에따라매분50회전으로시험한다.용출시험시작45
분후에용출액을취하여여과한다.처음여액10mL는버리고다음여
액을취하여검액으로하거나,여액VmL를정확하게취하여시험액을
넣어정확하게V’mL로하여표시량에따라1mL중벤프로페린인산
염약29.3μg을함유하도록한액을검액으로한다.따로벤프로페린인
산염표준품약30mg을정밀하게달아시험액을넣어정확하게100
mL로한다음다시이액5mL를정확하게취하여시험액을넣어정확
하게50mL로하여표준액으로한다.검액및표준액20μL씩을정확하
게취하여다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하여각액
의벤프로페린인산염(C21H27NO·H3PO4)의피크면적AT및AS를측
정한다.이약의45분간의용출률이75%이상일때적합하다.-13-벤프로페린인산염(C21H27NO·H3PO4)의표시량에대한용출률(%)
=WS×(V‘/V)×(AT/AS)×(1/C)×90
WS:벤프로페린인산염표준품의양(mg)
C:1정중벤프로페린인산염(C21H27NO·H3PO4)의표시량(mg)
별표3염화나트륨·아세트산나트륨수화물 ·염화칼륨·염화칼슘·염화마그
네슘·포도당투석액정량법중2)칼륨및3)칼슘을다음과같이한다.
순도시험2)칼륨이약을표시량에따라칼륨(K)30mg에해당하는
양을정밀하게취하여물을넣어정확하게200mL로한다.이액10
mL를정확하게취하여물을넣어정확하게100mL로하여검액으로
한다.따로염화칼륨표준시약을105℃에서2시간건조하여약190mg
을정밀하게달아물을넣어1000mL로하여표준원액으로한다(칼륨
약100μg/mL).또염화나트륨표준시약1.689g을정밀하게달아물을
넣어녹여100mL로하고이액10.0mL씩을취하여여기에표준원액
을넣어칼륨0∼20μg/mL농도의액을만들어표준액으로한다.검
액및표준액을가지고다음의조건으로원자흡광광도법에 따라시험한
다.표준액의흡광도로부터얻은검량선을사용하여검액중의칼륨
(K)함량을구한다.
사용기체:용해아세틸렌-공기-14-램프:칼륨중공음극램프
파장:766nm
3)칼륨이약을표시량에따라칼슘(Ca)20mg에해당하는양을정밀
하게취하여물을넣어정확하게100mL로한다.다시이액20mL를
정확하게취하여산화란타늄시액20mL를넣고물을넣어정확하게
100mL로하여검액으로한다.따로염화칼슘표준시약약1.249g을
정밀하게달아물50mL및염산10mL를넣어녹이고물을넣어정확
하게1000mL로하여표준원액으로한다(칼슘약500μg/mL).표준원
액을가지고칼슘0∼50μg/mL농도의액을만들어표준액으로한다.
검액및표준액을가지고다음의조건으로원자흡광광도법에 따라시험
한다.표준액의흡광도로부터얻은검량선을사용하여검액중의칼슘
(Ca)양을구한다.
사용기체:용해아세틸렌-공기
램프:칼슘중공음극램프
파장:422.7nm
별표3옥시라세탐순도시험중2)암모늄을다음과같이한다.
순도시험2)암모늄이약약1g을정밀하게달아시험관에넣고
물14mL를넣어녹인다.필요시2mol/L수산화나트륨시액을 넣어검
액을알칼리성으로만들어준다.물을넣어15mL로하고네슬러시액
0.3mL를넣는다.따로암모늄표준액10mL를정확하게취하여시험관-15-에넣고물5mL와네슬러시액0.3mL를넣는다.시험관입구를닫고
5분간방치했을때검액에서나타나는노란색은비교액의색보다진하
지않다(0.001%이하)
◦암모늄표준액염화암모늄약0.741g을정밀하게달아물을넣어
녹여정확하게1000mL로하고이액1mL를정확하게취하여물을
넣어정확하게100mL로한다.다시이액1mL를정확하게취하여
물을넣어정확하게25mL로하여암모늄표준액으로한다.(1ppm
NH4)
◦네슬러시액요오드화칼륨11g과요오드화수은(II)15g을물에
넣어녹여100mL가되게한다.따로수산화나트륨25g을물에녹여
100mL가되게한다.두가지액을1:1비율로섞어만들며쓸때만
든다.
별표3자일리톨순도시험8)중“환류냉각기”를“감압농축기”로한다.
별표3주사용테이코플라닌정량법원통평판법(1)중“가)(2)(가)③㉯
의배지”를“가)(2)(가)①㉮의배지”로한다.
별표3펜톡시필린확인시험,순도시험중6)및정량법을다음과같이
한다.
확인시험1)이약및펜톡시필린표준품을가지고적외부스펙트럼측-16-정법의브롬화칼륨정제법에 따라측정할때같은파수에서같은강도의
흡수를나타낸다.
2)정량법의검액및표준액에서얻은주피크의유지시간은같다.
순도시험  6)유연물질이약약35mg을정밀하게달아이동상에녹
여정확하게100mL로하여검액으로한다.펜톡시필린표준품약7
mg을정밀하게달아이동상에녹여정확하게100mL로하고다시이
액1mL를정확하게취하여이동상을넣어정확하게100mL로하여
표준액으로한다.검액및표준액20μL씩을가지고다음조건으로액
체크로마토그래프법에 따라시험하여검액에서얻은개개유연물질의
피크면적AT및표준액에서얻은펜톡시필린피크면적AS를구할때
검액의개개유연물질의양은0.2%이하이고총유연물질의양은0.5%
이하이다.
유연물질의양(%)=　(AT/AS)×(CS/CT)×100
CS:표준액중펜톡시필린의농도(mg/mL)
CT:검액중펜톡시필린의농도(mg/mL)
조작조건
정량법의조작조건에따른다.
측정범위:펜톡시필린유지시간의5배이상의범위-17-시스템적합성
시스템의성능:시스템적합성용액20μL를가지고위의조건으로조
작할때카페인과펜톡시필린피크간의분리도는10.0이상이다.
시스템의재현성:표준액20μL를가지고위의조건으로시험을6회
반복할때펜톡시필린피크면적의상대표준편차는5.0%이하이다.
◦시스템적합성용액:카페인약7mg을달아이동상을넣어녹여
정확하게100mL로한다.다시이액1mL와펜톡시필린표준품약
35mg을정밀하게달아100mL용량플라스크에 넣고이동상으로
100mL로하여시스템적합성용액으로한다.
정량법이약약50mg을정밀하게달아이동상을넣어녹여정확
하게100mL로하고다시이액10mL를정확하게취하여이동상을넣
어정확하게100mL로하여검액으로한다.따로펜톡시필린표준품약
5mg을정밀하게달아이동상을넣어녹여정확하게100mL로하여표
준액으로한다.검액및표준액10μL씩을가지고다음조건으로액체
크로마토그래프법에 따라시험하여각액의펜톡시필린의피크면적AT
및AS를측정한다.
펜톡시필린의양(mg)=펜톡시필린표준품의양(mg)×(AT/AS)
×10
조작조건-18-검출기:자외부흡광광도계 (측정파장273nm)
칼럼:안지름약4.6mm,길이약25cm인스테인레스강관에 5μm
의액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:과염소산용액(1→1000)·아세토니트릴·테트라히드로푸란 ·메
탄올혼합액(80:15:2.5:2)
유량:0.7mL/분
시스템적합성
시스템의성능:시스템적합성용액10μL를가지고위의조건으로조
작할때카페인과펜톡시필린피크간의분리도는10.0이상이다.
시스템의재현성:표준액10μL를가지고위의조건으로시험을6회
반복할때펜톡시필린피크면적의상대표준편차는2.0%이하이다.
◦시스템적합성용액:카페인약6mg및펜톡시필린표준품약12
mg을정밀하게달아이동상을넣어녹여정확하게50mL로한다.이
액10mL를정확하게취하여이동상을넣어정확하게50mL로하여
시스템적합성용액으로한다.
별표3펜톡시필린서방정확인시험및정량법을다음과같이하고,순
도시험을정량법이전에다음과같이한다.
확인시험정량법의검액및표준액에서얻은주피크의유지시간및
200∼400nm에서의자외부흡수스펙트럼은 같다.
순도시험유연물질정량법검액원액10mL를정확하게취하여희-19-석액으로정확하게25mL로하여검액으로한다.따로펜톡시필린표준
품약9.6mg을정밀하게달아메탄올0.8mL를넣어1분간섞고희석
액을넣어정확하게100mL로한다.이액10mL를정확하게취하여
희석액으로정확하게50mL로하고다시이액5mL를정확하게취하
여희석액으로정확하게100mL로한액을표준액으로한다.검액및
표준액10μL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라
시험하여검액에서얻은개개유연물질의피크면적AT및표준액에서
얻은펜톡시필린피크면적AS를구할때검액의개개유연물질의양은
0.3%이하이고총유연물질의양은1.0%이하이다.
유연물질의양(%)=　(AT/AS)×(CS/CT)×100
CS:표준액중펜톡시필린의농도(mg/mL)
CT:검액중펜톡시필린의농도(mg/mL)
조작조건
정량법의조작조건에따른다.
측정범위:펜톡시필린유지시간의5배이상의범위
시스템적합성
시스템의재현성:표준액10μL를가지고위의조건으로시험을6회
반복할때펜톡시필린피크면적의상대표준편차는5.0%이하이다.-20-정량법이약20정이상을가지고그질량을정밀하게달아가루
로한다.펜톡시필린(C13H18N4O3)약40mg에해당하는양을정밀하게
달아메탄올0.4mL를넣어1분간섞고희석액을30mL넣어60분간
초음파처리하여녹인다.여기에희석액15mL를넣고식힌다음희석
액으로정확하게50mL로하여검액원액으로한다.이액을원심분리하
여위의맑은액3mL를정확하게취하여희석액으로정확하게50mL
로하여검액으로한다.따로펜톡시필린표준품약40mg을정밀하게
달아검액과같은방법으로조작하여표준액으로한다.검액및표준액
10μL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법에 따라시험하
여각액의펜톡시필린의피크면적AT및AS를측정한다.
펜톡시필린의양(mg)=펜톡시필린표준품의양(mg)×(AT/AS)
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장273nm)다만,확인시험시광
다이오드검출기(200∼400nm)로한다.
칼럼:안지름약4.6mm,길이약25cm인스테인레스강관에 5μm
의액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:과염소산용액(1→1000)·아세토니트릴·테트라히드로푸란 ·메
탄올혼합액(80:15:2.5:2)
유량:0.7mL/분-21-시스템적합성
시스템의성능:시스템적합성용액10μL를가지고위의조건으로조
작할때카페인과펜톡시필린피크간의분리도는10.0이상이다.
시스템의재현성:표준액10μL를가지고위의조건으로시험을6회
반복할때펜톡시필린피크면적의상대표준편차는2.0%이하이다.
◦시스템적합성용액:카페인약10mg및펜톡시필린표준품약20
mg을정밀하게달아메탄올0.2mL를넣어녹이고희석액으로정확
하게25mL로한다.이액3mL를정확하게취하여희석액으로정확
하게50mL로하여시스템적합성용액으로한다.
◦희석액:물·알코올혼합액(7:3)
별표3프로자임단백소화력시험중“1.5%유제카제인용액”을“1.5%
우유카제인시액”으로한다.
별표3피리독신염산염정량법을다음과같이한다.
정량법이약을건조하여약40mg을정밀하게달아물을넣어녹
이고정확하게100mL로한다.이액5mL를정확하게취하여물을넣
어정확하게100mL로하여검액으로한다.따로피리독신염산염표준
품을데시케이터(감압,실리카겔)에서4시간건조하여약40mg을정
밀하게달아물을넣어녹여정확하게100mL로한다.이액5mL를
정확하게취하여물을넣어정확하게100mL로하여표준액으로한다.-22-검액및표준액20μL씩을가지고다음조건으로액체크로마토그래프법
에따라시험하여피리독신염산염피크면적AT및ASSS를구한다.
피리독신염산염(C8H11NO3·HCl)의양(mg)
=피리독신염산염표준품의양(mg)×(AT/AS)
조작조건
검출기:자외부흡광광도계 (측정파장280nm)
칼럼:안지름약4mm,길이15cm인스테인레스강관에 5μm의
액체크로마토그래프용 옥타데실실릴실리카겔을충전한다.
이동상:1-헥산설폰산나트륨약1.0g을물750mL에녹이고메탄올
250mL및아세트산(31)10mL를넣는다.
유량:1.0mL/분
시스템적합성
시스템의재현성:표준액20μL씩을가지고위의조건으로시험을6
회반복할때피리독신피크면적의상대표준편차는2.0%이하이다.
별표4미결정셀룰로오스 확인시험 2)를 다음과 같이 한다.
확인시험2)이약및미결정셀룰로오스표준품을가지고적외부스펙
트럼측정법중브롬화칼륨정제법에 따라측정할때같은파수에서같은
강도의흡수를나타낸다.-23-별표6제16호부터제21호까지를각각제17호부터제22호까지로하고,
제22호부터제26호까지를각각제24호부터제28호까지로하고,제27호
(종전의제25호)XII.카바페넴계3.이미페넴류1)중“Streptomycesca
tteya”를“Streptomycescattleya”로하며,제16호및제23호를각각별
지와같이신설한다.-24-[별지]
16. 알킬설폰산에스테르류 분석법
알킬설폰산에스테르류분석법은 기체크로마토그래프 -질량분석법으로의
약품제조공정중의잠재적불순물인(메탄,톨루엔,벤젠)설폰산의알
킬(메틸,에틸,이소프로필)에스테르류또는메탄설포닐염화물의양을
측정하는방법이다.
1.메탄설폰산중알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트류 분
석법
메탄설폰산중알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트류분석
법은0.5ppm∼100ppm범위에서유효성평가를실시하였다.합성초
기단계의높은농도등으로유효성평가범위를벗어난경우는시험용
액의농도를적절하게맞추어적용한다.
장치기체크로마토그래프 -질량분석기
조작법1)표준액의조제메틸메탄설포네이트,에틸메탄설포네이
트,이소프로필메탄설포네이트표준품약50mg을각각정밀하게달아
내부표준액을넣어정확하게50mL로하여표준원액으로한다.표준원
액74μL를내부표준액으로정확하게10mL로하고,다시이액의100
μL를정확하게취하여내부표준액으로정확하게10mL로하여표준액
(1)로한다.표준액(1)3mL를내부표준액으로정확하게10mL로한액-25-을표준액(2)로한다.
◦내부표준액:부틸메탄설포네이트의염화메틸렌용액(7→
100,000,000)
2)검액의조제이약약0.74g을정밀하게달아물10mL와내부표
준액10mL를넣고천천히흔들어섞은다음추출한다.유기층을분리
하여무수황산나트륨이담긴바이알로옮겨흔들어섞고,상등액을취
하여멤브레인필터로여과하여처음여액은버리고다음여액을검액으
로한다.
3)장치조작조건
검출기:질량분석기
칼럼:질량분석기용안지름0.25mm,길이15m의기체크로마토그
래프용100%메틸폴리실록산을1μm의두께로코팅한것또는이와
동등한것
칼럼온도:55℃에서시료를주입하고1분간유지한다음분당10℃
로135℃까지온도를상승시킨다.
유량:1mL/분
운반기체:헬륨
주입모드:pulsedsplitless(250kPa,0.25min)
주입량:2μL
검체도입부온도:240℃
검출기온도:-26-연결관:280℃
이온소스:230℃
분석기:150℃
측정모드:SIM
생성이온:
성분명 생성이온(m/z)
메틸메탄설포네이트 80
에틸메탄설포네이트 79
이소프로필메탄설포네이트123
부틸메탄설포네이트 56
시스템적합성:
검출의확인:표준액(2)에서얻은메틸메탄설포네이트,에틸메탄설포
네이트,이소프로필메탄설포네이트각피크의신호대잡음비는10이
상이다.
시스템의성능:표준액(1)에서얻은에틸메탄설포네이트및이소프로
필메탄설포네이트피크간의분리도는3이상이다.
4)시험방법
위의조작조건에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검액
및표준액(1)중각성분의피크면적비QT및QS를구한다.
각알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트의양(ppm)=(QT/-27-QS)×(MS/MT)×C×0.148
QS:표준액(1)중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면
적비
QT:검액중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면적비
MS:각성분별표준품의양(mg)
MT:검체의양(mg)
C:각성분별표준품의순도(%)
0.148:희석배수
2.메탄설폰산중메탄설포닐염화물 분석법
메탄설폰산중메탄설포닐염화물분석법은0.05ppm∼50ppm범위
에서유효성평가를실시하였다.
장치기체크로마토그래프 -질량분석기
조작법1)표준액의조제메탄설포닐염화물표준품약50mg을정
밀하게달아염화메틸렌을넣어정확하게10mL로하여표준원액으로
한다.표준원액1mL를정확하게취하여염화메틸렌을넣어정확하게1
0mL로하고,다시이액의300μL를정확하게취하여염화메틸렌을넣
어정확하게10mL로한액을표준액(1)로한다.표준액(1)500μL와내
부표준액100μL를정확하게취하여염화메틸렌을넣어정확하게15m
L로한액을표준액(2)로한다.표준액(1)25μL와내부표준액100μL를-28-정확하게취하여염화메틸렌을넣어정확하게15mL로한액을표준액
(3)으로한다.
◦내부표준액:부틸메탄설포네이트의염화메틸렌용액(7→100,000)
2)검액의조제
이약약7.4g을정밀하게달아물5mL를넣고천천히섞는다.식힌
후에염화메틸렌5mL와내부표준액100μL를정확하게취하여넣고
흔들어섞는다.유기층을분리하여무수황산나트륨1g이담긴바이알
로옮겨흔든다.염화메틸렌5mL로두번반복해추출하고,유기층을
모아멤브레인필터로여과하여처음여액은버리고다음여액을사용한
다.
3)장치조작조건
검출기:질량분석기
칼럼:질량분석기용안지름0.25mm,길이15m의기체크로마토그
래프용100%메틸폴리실록산을1μm의두께로코팅한것또는이와
동등한것
칼럼온도:40℃에서시료를주입하고4분간유지한다음분당40
℃로200℃까지온도를상승시킨다.분석이끝난시점에칼럼의온도
를270℃까지상승시키고8분간유지한다.
유량:1mL/분
운반기체:헬륨
주입모드:pulsedsplitless(60kPa,0.1min)-29-주입량:5μL
검체도입부온도:240℃
검출기온도:
연결관:280℃
이온소스:230℃
분석기:150℃
측정모드:SIM
생성이온:
성분명 생성이온(m/z)
메탄설포닐염화물79
부틸메탄설포네이트56
시스템적합성:
검출의확인:표준액(3)에서얻은메탄설포닐염화물피크의신호대
잡음비는10이상이다.
시스템의성능:표준액(2)에서얻은메탄설포닐염화물및부틸메탄
설포네이트피크간의분리도는5이상이다.
4)시험방법
위의조작조건에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검
액및표준액(2)중메탄설포닐염화물의피크면적비QT및QS를구한
다.-30-메탄설포닐염화물의양(ppm)=(QT/QS)×(MS/MT)×C×1.5
QS:표준액(2)중내부표준물질의피크면적에대한메탄설포닐염화
물의피크면적비
QT:검액중내부표준물질의피크면적에대한메탄설포닐염화물의
피크면적비
MS:메탄설포닐염화물표준품의양(mg)
MT:검체의양(mg)
C:메탄설포닐염화물표준품의순도(%)
1.5:희석배수
3.원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트류 분
석법
원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트류분석
법은베타히스틴메실산염을가지고0.2ppm∼5ppm범위에서유효성
평가를실시하였다.다른원료의약품을적용하는경우,특히합성초기
단계의높은농도등으로유효성평가범위를벗어난경우는시험용액
의농도를적절하게맞추어적용하고,적합하게유효성을확인한다.
장치기체크로마토그래프 -질량분석기
조작법1)표준액의조제메틸메탄설포네이트,에틸메탄설포네이
트,이소프로필메탄설포네이트표준품약25mg을각각정밀하게달아-31-톨루엔을넣어정확하게5mL로한다.이액50μL를정확하게취하여
내부표준액으로정확하게25mL로하여표준액(1)로한다.표준액(1)2
0μL를정확하게취하여내부표준액으로정확하게20mL로한다.이
액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취하여헤드스페이스
바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀
전한것을표준액(2)로한다.표준액(1)500μL를정확하게취하여내부
표준액으로정확하게20mL로한다.이액0.5mL와유도체화용액0.5
mL를정확하게취하여헤드스페이스바이알에넣고,즉시PTFE코팅
된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여표준액(3)으로한다.
◦내부표준액:부틸메탄설포네이트의아세토니트릴·물혼합액(4:1)용
액(1→5,000,000)
◦유도체화용액:무수티오황산나트륨30mg과요오드화나트륨60
g을정밀하게달아물에녹이고,정확하게50mL로한다.
※유도체화반응에서침전이관찰될수있으나정량에는영향을주
지않는다.
2)검액의조제
이약약25mg을정밀하게달아헤드스페이스바이알에넣고,내부
표준액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취하여넣고즉시
PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여검액으로한다.
◦공시험액:유도체화용액0.5mL와내부표준액0.5mL를헤드스
페이스바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜-32-껑으로밀전하여공시험액으로한다.
3)장치조작조건
검출기:질량분석기
칼럼:질량분석기용안지름0.25mm,길이30m의기체크로마토그
래프용시아노폴리실록산을1μm의두께로코팅한것또는이와동
등한것
칼럼온도:40℃에서시료를주입하고1분간유지한다음분당10
℃로130℃까지온도를상승시킨다.분석이끝난시점에칼럼의온도
를240℃까지상승시키고7분간유지한다.
운반기체:헬륨
유량:0.5mL/분
분할비:1:20
헤드스페이스용검체도입장치조건
평형온도:60℃
평형시간:30분
연결관온도:120℃
주입량:1mL
검체도입부온도:220℃
검출기온도:
연결관:280℃
이온소스:250℃-33-분석기:200℃
측정모드:SIM
생성이온:
성분명 정량이온(m/z)정성이온(m/z)
메틸요오드화물*142127
에틸요오드화물*156127
이소프로필요오드화물*170127
부틸요오드화물*184127
*유도체화산물
시스템적합성:
검출의확인:표준액(2)에서얻은알킬요오드화물류의 각피크의신
호대잡음비는10이상이다.
시스템의성능:표준액(3)에서얻은에틸요오드화물및이소프로필
요오드화물피크간의분리도는1.5이상이다.
4)시험방법
위의조작조건에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검
액및표준액(3)중각성분의피크면적비QT및QS를구한다.
각알킬(메틸,에틸,이소프로필)메탄설포네이트의양(ppm)=(QT/Q
S)×(MS/MT)×C×0.05
QS:표준액(3)중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면
적비-34-QT:검액중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면적비
MS:각성분별표준품의양(mg)
MT:검체의양(mg)
C:각성분별표준품의순도(%)
0.05:희석배수
4.원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)톨루엔설포네이트류
분석법
원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)톨루엔설포네이트류분
석법은설타미실린토실산수화물을가지고,0.2ppm∼5ppm범위에서
유효성평가를실시하였다.다른원료의약품에서적용하는경우,특히
알킬톨루엔설포네이트류의농도가유효성평가범위를벗어난경우는
검액및표준액의농도를적절하게맞추어적용하고,적합하게유효성
을확인한다.
장치기체크로마토그래프 -질량분석기
조작법1)표준액의조제메틸톨루엔설포네이트,에틸톨루엔설포네
이트,이소프로필톨루엔설포네이트표준품약25mg을각각정밀하게
달아톨루엔을넣어정확하게5mL로한다.이액50μL를정확하게취
하여내부표준액으로정확하게25mL로하여표준액(1)로한다.표준액
(1)40μL를정확하게취하여내부표준액으로정확하게20mL로한다.
이액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취하여헤드스페이-35-스바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로
밀전한것을표준액(2)로한다.표준액(1)500μL를정확하게취하여내
부표준액으로정확하게20mL로한다.이액0.5mL와유도체화용액
0.50mL를정확하게취하여헤드스페이스바이알에넣고,즉시PTFE
코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여표준액(3)으로한다.
◦내부표준액:부틸메탄설포네이트의아세토니트릴·물혼합액(4:1)용
액(1→5,000,000)
◦유도체화용액:무수티오황산나트륨30mg과요오드화나트륨60
g을정밀하게달아물에녹이고,정확하게50mL로한다.
※유도체화반응에서침전이관찰될수있으나정량에는영향을주
지않는다.
2)검액의조제이약약25mg을정밀하게달아헤드스페이스바이
알에넣고,내부표준액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취
하여넣고즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여
검액으로한다.
◦공시험액:유도체화용액0.5mL와내부표준액0.5mL를정확하
게취하여헤드스페이스바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘
막과알루미늄뚜껑으로밀전하여공시험액으로한다.
3)장치조작조건
검출기:질량분석기
칼럼:질량분석기용안지름0.25mm,길이30m의기체크로마토그-36-래프용시아노폴리실록산을1μm의두께로코팅한것또는이와동
등한것
칼럼온도:40℃에서시료를주입하고1분간유지한다음분당10
℃로130℃까지온도를상승시킨다.분석이끝난시점에칼럼의온도
를240℃까지상승시키고7분간유지한다.
운반기체:헬륨
유량:0.5mL/분
분할비:1:20
헤드스페이스용검체도입장치조건
평형온도:60℃
평형시간:30분
연결관온도:120℃
주입량:1mL
검체도입부온도:220℃
검출기온도:
연결관:280℃
이온소스:250℃
분석기:200℃
측정모드:SIM
생성이온:-37-성분명 정량이온(m/z)정성이온(m/z)
메틸요오드화물*142 127
에틸요오드화물*156 127
이소프로필요오드화물*170 127
부틸요오드화물*184 127
*유도체화산물
시스템적합성:
검출의확인:표준액(2)에서얻은알킬요오드화물류의 각피크의
신호대잡음비는10이상이다.
시스템의성능:표준액(3)에서얻은에틸요오드화물및이소프로필
요오드화물피크간의분리도는1.5이상이다.
4)시험방법
위의조작조건에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검
액및표준액(3)중각성분의피크면적비QT및QS를구한다.
각알킬(메틸,에틸,이소프로필)톨루엔설포네이트의양(ppm)=(QT
/QS)×(MS/MT)×C×0.05
QS:표준액(3)중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면
적비
QT:검액중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면적비
MS:각성분별표준품의양(mg)
MT:검체의양(mg)-38-C:각성분별표준품의순도(%)
0.05:희석배수
5.원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)벤젠설포네이트류 분
석법
원료의약품중알킬(메틸,에틸,이소프로필)벤젠설포네이트류분석
법은암로디핀베실산염을가지고,2.5ppm∼40ppm범위에서유효성
평가를실시하였다.다른원료의약품에서적용하는경우,특히알킬벤
젠설포네이트류의농도가유효성평가범위를벗어난경우는검액및
표준액의농도를적절하게맞추어적용하고,적합하게유효성을확인한
다.
※클로피도그렐베실산의경우본시험법적용시기체크로마토그래
프분석중메틸벤젠설포네이트가인공적분해산물로관찰되어적합
하지않다.
장치기체크로마토그래프 -질량분석기
조작법1)표준액의조제메틸벤젠설포네이트,에틸벤젠설포네이
트,이소프로필벤젠설포네이트표준품약25mg을각각정밀하게달아
톨루엔을넣어정확하게5mL로한다.이액50μL를정확하게취하여
내부표준액으로정확하게25mL로하여표준액(1)로한다.표준액(1)4
0μL를정확하게취하여내부표준액으로정확하게20mL로한다.이
액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취하여헤드스페이스-39-바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀
전한것을표준액(2)로한다.표준액(1)500μL를정확하게취하여내부
표준액으로정확하게20mL로한다.이액0.5mL와유도체화용액0.5
mL를정확하게취하여헤드스페이스바이알에넣고,즉시PTFE코팅
된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여표준액(3)으로한다.
◦내부표준액:부틸메탄설포네이트의아세토니트릴·물혼합액(4:1)용
액(1→5,000,000)
◦유도체화용액:무수티오황산나트륨30mg과요오드화나트륨60
g을정밀하게달아물에녹이고,정확하게50mL로한다.
※유도체화반응에서침전이관찰될수있으나정량에는영향을주
지않는다.
2)검액의조제이약약25mg을정밀하게달아헤드스페이스바이
알에넣고,내부표준액0.5mL와유도체화용액0.5mL를정확하게취
하여넣고즉시PTFE코팅된실리콘막과알루미늄뚜껑으로밀전하여
검액으로한다.
◦공시험액:유도체화용액0.5mL와내부표준액0.5mL를정확하
게취하여헤드스페이스바이알에넣고,즉시PTFE코팅된실리콘
막과알루미늄뚜껑으로밀전하여공시험액으로한다.
3)장치조작조건
검출기:질량분석기
칼럼:질량분석기용안지름0.25mm,길이30m의기체크로마토그-40-래프용시아노폴리실록산을1μm의두께로코팅한것또는이와동
등한것
칼럼온도:40℃에서시료를주입하고1분간유지한다음분당10
℃로130℃까지온도를상승시킨다.분석이끝난시점에칼럼의온도
를240℃까지상승시키고7분간유지한다.
운반기체:헬륨
유량:0.5mL/분
분할비:1:20
헤드스페이스용검체도입장치조건
평형온도:60℃
평형시간:30분
연결관온도:120℃
주입량:1mL
검체도입부온도:220℃
검출기온도:
연결관:280℃
이온소스:250℃
분석기:200℃
측정모드:SIM
생성이온:-41-성분명 정량이온(m/z)정성이온(m/z)
메틸요오드화물*142 127
에틸요오드화물*156 127
이소프로필요오드화물*170 127
부틸요오드화물*184 127
*유도체화산물
시스템적합성:
검출의확인:표준액(2)에서얻은알킬요오드화물류의 각피크의신
호대잡음비는10이상이다.
시스템의성능:표준액(3)에서얻은에틸요오드화물및이소프로필
요오드화물피크간의분리도는1.5이상이다.
4)시험방법
위의조작조건에따라시험하여내부표준물질의피크면적에대한검
액및표준액(3)중각성분의피크면적비QT및QS를구한다.
각알킬(메틸,에틸,이소프로필)벤젠설포네이트의양(ppm)=(QT/Q
S)×(MS/MT)×C×0.05
QS:표준액(3)중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면
적비
QT:검액중내부표준물질의피크면적에대한각성분의피크면적비
MS:각성분별표준품의양(mg)
MT:검체의양(mg)-42-C:각성분별표준품의순도(%)
0.05:희석배수-43-23. 재조합 C 인자를 이용한 엔도톡신 시험법
재조합C인자(recombinantfactorC,rFC)를이용한엔도톡신시험
법은그람음성균에서유래되는엔도톡신을정량하는방법으로투구
게(Limuluspolyphemus,Tachypleustridentatus,Tachypleus
gigasorCarcinoscorpiusrotundicauda)의유전자염기서열을바탕
으로제조한rFC를이용하여광학적측정법을수행한다.이시험은
엔도톡신에의한오염을피하여시험한다.
1.기구
시험에쓰는모든유리제및기타내열성기구는유효한방법으로
건열처리하여발열물질을제거한다.보통250℃에서적어도30분간
건열처리한다.마이크로플레이트 ,마이크로피펫용팁등의플라스틱
제품을쓰는경우에는엔도톡신이검출되지않고이시험법에대하
여간섭이없는것이확인된것을쓴다.
2.시약
가)시약
재조합C인자는투구게(Limuluspolyphemus,Tachypleus
tridentatus,Tachypleusgigas,Carcinoscorpiusrotundicauda)의유
전자염기서열을바탕으로제조하며,형광기질및완충액을포함한-44-모든시약은엔도톡신오염이검출되지않은것을사용한다.
나)시액
필요한경우,제조사가규정한사용법에따라시약을조제하여저
장,냉장또는냉동처리한다.
다)엔도톡신시험용물
주사용수또는다른방식으로제조된용수로서시약의검출한계에
서시약에반응을보이지않은것
3.엔도톡신표준원액의조제
국제표준품을기준으로교정한엔도톡신표준품을 이용해엔도톡신
표준원액을만든다.엔도톡신국제단위는IU로표시하고,국제표준품
의IU와동등한단위는WHO가정하는바에따른다.
비고:1엔도톡신국제단위(IU)는1엔도톡신단위(EU)와같다.
엔도톡신표준원액의 조제및보관은포장첨부문서및라벨에규정
된방법에따른다.
4.엔도톡신표준액의조제
엔도톡신표준원액을 충분히흔들어섞은다음엔도톡신시험용 물로-45-희석하여엔도톡신표준액을 만든다.엔도톡신표준액은 엔도톡신이용
기에흡착되는것을피하기위하여될수있는대로빨리사용한다.
5.검액의조제
제제를엔도톡신시험용 물로녹이거나희석하여검액을만든다.제제
에따라엔도톡신시험용 물에필요한시약을추가하여검액을제조
할수있다.필요한경우검액또는희석액의pH를조정하여제조사
가특정한pH범위를벗어나지않도록한다(보통6.0∼8.0범위).
산,염기또는적당한완충액을이용하여pH를조정할수있다.pH
조정에쓰는산및염기는엔도톡신시험용 물을써서만들고엔도톡
신이검출되지않는용기에보존한다.완충액은엔도톡신이검출되지
않으며반응간섭인자가없음을확인한것이어야한다.
6.최대유효희석배수
최대유효희석배수란검액중에반응간섭인자가존재하여이를희
석으로없애고자할때허용되는검액의최대희석배수이다.
최대유효희석배수는다음식으로구한다.
최대유효희석배수=엔도톡신규격값×검액의농도
비고:는검량선의최소엔도톡신농도이다 .-46-가)엔도톡신규격값
제제의엔도톡신규격값은투여량에근거하여규정하며K/M과같다.
다만K는체중1kg당발열을일으키는엔도톡신의양(EU/kg)이
고,M은체중1kg당1회에투여하는제제의최대량이다.
제제를여러번또는지속적으로투여하는경우에M은1시간이내
에투여하는최대총량으로한다.주사제의엔도톡신규격은약전의각
조에규정된IU/mL,IU/mg,IU/Unit등의단위로표시한다.
나)검액의농도
단위는엔도톡신규격값을질량(IU/mg)으로정하는경우에는
mg/mL,생물학적활성단위(IU/Unit)로정하는경우에는Unit/mL,
용량(IU/mL)으로정하는경우에는mL/mL이다.
7.형광측정법
이방법은엔도톡신으로활성화된C인자로인해분해된형광기질
(시약)의형광도(상대형광단위:RFU)를측정한다.종말점형광측정법
은검액의엔도톡신농도와일정반응시간후검출된형광물질의용
량반응관계를기초로하며ΔRFU등의단위로표시한다.
∆-47-=반응시간종말시검액의형광도
=반응시작시검액의형광도
시험은제조사가권고한온도(보통37±1℃)에서실시한다.
8.예비시험  
예비시험은형광측정법의유효성을보증하기위해수행하며,검량
선기준의충족및검액에반응간섭인자가없음을확인한다.이시험
은시험결과에영향을줄가능성이예상되는시험조건의변경이있
을때실시한다.
가)검량선의신뢰성확인시험
이시험은재조합C인자시약의각로트에대해수행한다.장비
민감성은제조사의권고에따라조정한다.엔도톡신표준액을 사용해
제조사가규정한범위내에서최소3개농도의엔도톡신용액을제
조하여검량선을작성한다.검량선의농도범위를2자리수보다크게
할때1자리수를크게할때마다엔도톡신표준액의 농도를1농도
씩추가한다.
제조사의권고(용량비율,반응시간및온도,pH등)에따라각엔
도톡신표준액을 최소3회시험한다.작성된검량선의상관계수r를-48-구하여그절대값|r|이0.980이상일때검량선의신뢰성이확인되었
다고판단한다.검량선의신뢰성이확인되지않을때는시험조건을
정비하여다시시험한다.
나)반응간섭인자시험
시험용키트에는 β-glucan에활성을갖는G인자가없기때문에β
-glucan에의한위양성결과는발생하지않을것으로예상되며,이
러한점은다른엔도톡신측정법과 비교시고려해야할사항이다.엔
도톡신검량선의중간또는이에가까운농도를선정한다.
표1과같이A,B,C및D액을조제하여제조사의권고(검액및시
액의용량․비율,반응시간등)에따라검액을최소2회시험한다.
표1
액 엔도톡신농도 피첨가액 동일시료시험횟수
A1)없음 검액 2이상
B2)검량선의중간농도 검액 2이상
C3)3농도이상
(최소농도는 )엔도톡신시험용물 각농도2이상
D4)0 엔도톡신시험용물 2이상
1)최대유효희석배수를넘지않는검액
2)양성대조,A액과동일배수로희석한검액으로검량선의중간또는이에가까운농도로
표준엔도톡신을첨가한것
3)예비시험가)검량선의신뢰성확인시험에사용한엔도톡신표준액
4)음성대조,엔도톡신시험용물 만함유-49-이시험은다음의두조건에적합할때유효하다.
조건1
C액으로작성한검량선의상관계수절대값은0.980이상이다.
조건2
D액의측정결과는시약에규정하는공시험의한도치를넘지않거나
rFC의엔도톡신검출한계미만이다.B액으로측정된엔도톡신농도
와A액으로측정된엔도톡신농도의차이를기초로하여B액에첨
가한엔도톡신의농도에대한엔도톡신의회수율을계산한다.첨가한
엔도톡신의회수율이50∼200%의범위에있을때검액에반응간
섭인자가존재하지않는다고판정한다.
엔도톡신의회수율이규정하는범위에들지않을때검액은반응간
섭작용을나타낼수도있다.검액에서반응간섭작용이인정되면최대
유효희석배수를넘지않는범위에서검액을다시희석하여시험한다.
또검액의반응간섭작용을없애기위하여검액또는희석한검액에
적절한처리(여과,반응간섭인자의중화,투석및가열처리등)를할
수있다.단,처리에의해엔도톡신이손실되지않는것을확인하기
위하여엔도톡신을첨가한검액에해당처리를하여위의시험에적
합한결과를얻을수있는지확인한다.-50-9.정량
가)조작법
본정보의8.예비시험나)반응간섭인자시험규정에따라조작한다.
나)엔도톡신농도의산출
C액으로작성한검량선에서A액의엔도톡신농도를산출한다.다
음모든조건에적합할때시험은유효하다.
조건1C액의결과가본정보의8.예비시험나)반응간섭인자시험에
규정된검증요건에부합한다.
조건2B액으로측정한엔도톡신농도와A액으로측정한엔도톡신
농도의차이를기초로하여B액에첨가한엔도톡신의농도에대한
엔도톡신의회수율을계산할때회수율은50∼200%의범위에있
다.
조건3D액(음성대조)의결과가시약에설정하는공시험의한도값을
넘지않거나또는rFC의엔도톡신검출한계미만이다.
다)판정-51-A액의엔도톡신평균농도가제제에서규정하는엔도톡신기준을만
족할때시험에적합하다.-52-부칙
제1조(시행일)이고시는고시후3개월이경과한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행후최초로제조업자가제조하거
나수입자가수입한의약품부터적용한다.