식품의약품안전처 공고제2019-317호
- 1 -식품의약품안전처 공고제2019-317호
건강기능식품의기준및규격
(식품의약품안전처고시 제2019-10호,2019.2.
25.)을일부개정함에있어국민에게미리알려의견을수렴하고자그취
지,개정이유및주요내용을
행정절차법
제46조에따라다음과같이공
고합니다.
 2019년6월26일
 식품의약품안전처장
「건강기능식품의 기준및규격」일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
엽산의제조원료로메틸테트라히드로엽산글루코사민 추가및관련시
험법을신설하고,개별인정형원료로인정받은인삼,히알루론산및빌베
리추출물의기능성내용및일일섭취량을해당고시형원료의기준·규격
에추가등재하여인정내역을확대하고자함
녹차추출물의일일섭취제한량으로 설정된에피갈로카테킨갈레이트
((-)-epigallocathrchin gallate,EGCG)를카테킨시험시함량을확인할수
있도록해당규격에설정하고,건강기능식품시험법개정및신설을통해
건강기능식품의 기준및규격적용을명확히하는등운영상미비점을보
완·개선하고자함- 1 -
2.주요내용
가.엽산의원료추가(안제3.1.1-11)
1)「식품첨가물의기준및규격」에등재된메틸테트라히드로엽산글루코
사민을엽산의원료로사용할수있도록개정요구
2)영양성분중엽산의원료로메틸테트라히드로엽산글루코사민을 추가
하고자함
3)엽산제조시사용할수있는원료확대
나.개별인정형원료의고시형원료로의기준·규격추가등재(안제3.
2.2-1,2-57,2-59)
1)고시형원료에기능성내용또는원재료를추가로개별인정받은경
우에는인정받은지1년이경과후고시형원료의기준·규격으로추
가등재(다만,인정받은자가등재를요청하는경우는제외)
2)개별인정형원료로인정받은인삼,히알루론산및빌베리추출물의
인정내역을해당고시형원료에반영하기위해기준·규격을개정하고
자함
3)고시형원료에개별인정형원료의인정내역추가에따른기능성내용
및일일섭취량범위확대
다.녹차추출물의규격정비(안제3.2.2-6)- 2 -1)에피갈로카테킨갈레이트 ((-)-epigallocathrchin gallate,EGCG)가일일
섭취량으로명시되어있어시험성적확인등규격관리가어려움
2)녹차추출물의일일섭취제한량으로 설정된에피갈로카테킨갈레이트를
카테킨규격시험시해당량을확인할수있도록규격내용으로신
설하고,일일섭취량에서는 관련내용을삭제하고자함
3)녹차추출물의규격정비에따른효율적인제품관리수행
라.일반시험법개정(안제4.3.3-1,3-4,3-6,3-11,3-28,3-41,3-48,
3-49,3-70,3-83)
1)시료채취량,전처리방법및분석조건개선등시험법개정필요
2)비타민A,비타민E,비타민B1,콘드로이친황산,바틸알콜,안트라퀴
논계화합물,총플라보노이드 및포스파티딜세린등 8종에대한시험법
개선과비타민A와비타민E의동시분석법및메틸테트라히드라엽산
글루코사민등2종에대한시험법을신설하고자함
3)시험법개정으로효율적이고정확한분석가능
3.의견제출
「건강기능식품의 기준및규격」일부개정고시(안)에대하여의견이
있는단체또는개인은2019년8월26일까지다음사항을기재한의견서를식
품의약품안전처장(우편번호:28159,주소:충청북도청주시흥덕구오송읍오
송생명2로187오송보건의료행정타운 식품의약품안전처 ,참조:식품기준과,- 3 -(전화)043-719-2443,(팩스)043-719-2400)에게제출하여주시기바랍니다.
가.예고사항에대한항목별의견(찬․반여부와그이유)
나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 4 -식품의약품안전처 고시제2019-호
건강기능식품에관한법률
제14조및제15조에따른
건강기능식품의
기준및규격
(식품의약품안전처 고시제2019-10호,2019.2.25.)을다음과같이
개정고시합니다.
2019년월일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준및규격일부개정고시(안)
건강기능식품의기준및규격일부를다음과같이개정한다.
제3,1,1-11,1),(1)중(나)를(다)로하고(나)를다음과같이신설한다.
(나)메틸테트라히드로엽산글루코사민
제3,2,2-1,3)중(1)을다음과같이한다.
(1)기능성내용:면역력증진·피로개선·뼈건강에도움을줄수있음
제3,2,2-6,2)중(3)부터(5)까지를각각(4)부터(6)까지로하고,(3)를다
음과같이신설한다.
(3)에피갈로카테킨갈레이트 ((-)-epigallocathrchin gallate,EGCG)(mg):- 5 -일일섭취량중300이하
제3,2,2-6,3)중(2)를다음과같이한다.
(2)일일섭취량
카테킨으로서0.3～1g
제3,2,2-57,3)중(1)과(2)를다음과같이한다.
(1)기능성내용:피부보습·자외선에의한피부손상으로부터피부건강유
지에도움을줄수있음
(2)일일섭취량
(가)피부보습에도움을줄수있음:히알루론산으로서 120∼240mg
(나)자외선에의한피부손상으로부터피부건강유지에도움을줄수있음:
히알루론산으로서 240mg
제3,2,2-59,3)중(2)를다음과같이한다.
(2)일일섭취량
빌베리추출물로서160〜240mg(안토시아노사이드로서50∼108mg)
제4.3.3-1,3-1-1,2.1.1중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-1,3-1-1,4.2.2중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로- 6 -한다.
제4.3.3-1,3-1-1,4.2.5중“비등수욕상에서플라스크를”를“환류냉각
기를부착하고95℃수욕중에서갈색둥근바닥플라스크를2/3잠기게하
여”로한다.
제4.3.3-1,3-1-1,4.2.14중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-1,3-1-1,4.2.16중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-1,3-1-2,2.1.4중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-1,3-1-2,중2.3을삭제한다.
제4.3.3-1,3-1-2,4.3.1중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-1,3-1-2,4.3.2중“수욕중에”를“환류냉각기를부착한후9
5℃수욕중에플라스크를2/3잠기게하여”로한다.- 7 -제4.3.3-1,3-1-2,4.3.4중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-1,3-1-2,4.3.5중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-1,3-1-2,4.3.8중“무수황산나트륨으로탈수하여증류플라스
크”를“무수황산나트륨을통과하며탈수시켜갈색둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-1,3-1-2,4.3.9중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,2.1.1중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-4,3-4-1,2.1.2중“분액깔때기(Speratefunnel)”를“갈색분액깔
때기(Seperatefunnel)”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.2.2중“부피플라스크”를“갈색부피플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.1중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.- 8 -제4.3.3-4,3-4-1,4.3.2중“수욕중에”를“환류냉각기를부착한후9
5℃수욕에플라스크를2/3잠기게하여”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.3중“분액깔때기”를“갈색분액깔때기”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.4중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.5중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.8중“무수황산나트륨으로탈수하여증류플라스
크”를“무수황산나트륨에통과시켜탈수한후갈색둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.9중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-1,4.3.11중“부피플라스크”를“갈색부피플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,2.1.4중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-4,3-4-2,2.1.5중“분액깔때기”를“갈색분액깔때기”로한다.- 9 -제4.3.3-4,3-4-2중2.3을삭제한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.1중“증류플라스크”를“갈색둥근바닥플라스크”로
한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.2중“수용중에”를“환류냉각기를부착한후9
5℃수욕중에플라스크를2/3잠기게하여”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.3중“분액깔때기”를“갈색분액깔때기”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.4중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.5중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.8중“분액깔때기”를“갈색분액깔때기”로하고,
“무수황산나트륨으로탈수하여증류플라스크”를“무수황산나트륨에통과시
켜탈수한후갈색둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.3.9중“증류플라스크”를“둥근바닥플라스크”로한다.
제4.3.3-4,3-4-2,4.4.1중“부피플라스크”를“갈색부피플라스크”로한다.- 10 -제4.3.3-4,3-4-3중2.3을삭제한다.
제4.3.3-4,3-4-3,4.4.1중“부피플라스크”를“갈색부피플라스크”로한다.
제4.3.3-6,3-6-2,2.1을다음과같이한다.
2.1실험실장비및소모품
2.1.1원심분리기
2.1.2부피플라스크
2.1.3원심분리관(50mL,15mL)
2.1.4시험관(15mL)
제4.3.3-6,3-6-2,2.2.3을다음과같이한다.
옥타데실실릴화한칼럼(안지름4.6mm,길이250mm,충전제
Octadecylsilica)또는이와동등한것
제4.3.3-6,3-6-2,2.3을다음과같이한다.
2.3분석장비의준비
이동상을분당0.7mL씩흘려줌으로써기기와칼럼을안정화시키고분석
시분리된비타민B1이페리시안·수산화나트륨용액과반응할수있도록
장치하여0.7mL로흘려준다.- 11 -제4.3.3-6,3-6-2,3.2을다음과같이한다.
3.2일반시약
3.2.1초산나트륨(Sodiumacetate)
3.2.2다카디아스타제(Takadiastase)
3.3.3삼염화초산(Trichloroaceticacid)
3.2.4제1인산나트륨(Sodiumphosphate,monobasic)
3.2.5페리시안화칼륨(Potassiumferricyanide)
3.2.6수산화나트륨(Sodiumhydroxide)
제4.3.3-6,3-6-2,4.1을다음과같이한다.
4.1시약조제
4.1.14M초산나트륨
16.4g의초산나트륨을물에녹여50mL로한다.
4.1.2효소용액
다카디아스타제를물에녹여2%로하고원심분리한후상층액을사
용한다.
4.1.310%삼염화초산용액
4.1.40.1M제1인산나트륨수용액11.9g의제1인산나트륨을물에녹여
1L로한다.
4.1.50.01%페리시안화칼륨·15%(w/v)수산화나트륨용액- 12 -수산화나트륨150g을물에녹여1L로하고이에페리시안화칼륨
(Potassiumferricyanide,K3[Fe(CN)6])100mg을녹인다.사용시조
제한다.
제4.3.3-6,3-6-2,4.2를다음과같이한다.
4.2표준용액조제
4.2.1Thiaminehydrochloride를비타민B1으로서100μg/mL가되도록
10%삼염화초산용액에녹여표준원액을만든다.표준원액을0.1∼
1.0μg/mL가되도록희석한다.
4.2.24.2.1용액,4M초산나트륨용액,2%다카디아스타제용액을20:3:
1의비율로혼합한용액을표준용액으로한다.
제4.3.3-6,3-6-2,4.3을다음과같이한다.
4.3시험용액조제(일반시료)
4.3.1시료1g(액상의경우5g)을정밀히취하여15mL원심분리관에
넣는다.
4.3.210%삼염화초산용액5mL를넣고2분간균질화시킨후다시
10%삼염화초산용액을넣어10mL로한다.
4.3.32,000⨯g이상에서30분간원심분리한다.
4.3.4이상층액1mL에10%삼염화초산용액을넣어100mL로정용한
후적정농도로희석한다.- 13 -4..3.54.3.4용액,4M초산나트륨용액,2%다카디아스타제용액을각각
20:3:1의비율로혼합한다.
4.3.61시간초음파추출한후상등액을취하여0.45μm의멤브레인필터
로여과하여시험용액으로사용한다.
제4.3.3-6,3-6-2,4.4“시험용액의제조”를“시험용액조제”로한다.
제4.3.3-6,3-6-2,5.1,표1을다음과같이한다.
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 40℃
이동상 0.1M제1인산나트륨수용액
검출기파장여기파장:375nm
측정파장:450nm
유속 0.7mL/min
반응액0.01%페리시안화칼륨·15%(w/v)수산화나트륨용액
(유속:0.7mL/min)
제4.3.3-11,3-11-3엽산(메틸테트라히드로엽산글루코사민 )(제3법)을다
음과같이신설한다.
3-11-3엽산(메틸테트라히드로엽산글루코사민 )(제3법)
1.시험방법의요약
본시험법은시료중메틸테트라히드로엽산을 아황산나트륨용액으로추
출하고역상컬럼을이용하여액체크로마토그래프에서분리하고PDA검- 14 -출기로280nm에서정량분석한다.
2.장비와재료
2.1.실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(50mL)
2.1.2여과용멤브레인필터
2.1.3원심분리기
2.1.4원심분리관(50mL)
2.2.분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2포토다이오드어레이(PhotodiodeArray,PDA)검출기
2.2.3옥타데실실릴화한칼럼(안지름4.6mm,길이250mm,충전제
Octadecylsilica)또는이와동등한것
2.3분석장비의준비
이동상A(인산이수소칼륨)용액을이용하여분당1.0mL로충분한
시간동안흘려안정화시킨다.
3.표준물질및일반시약
3.1.표준물질
3.1.1메틸테트라히드로엽산 칼슘(L-5-Methyltetrahydrofolatecalcium)
분자식:C20H23CaN7O6,분자량:497.5g/mol,CASNo.:- 15 -151533-22-1
3.2.일반시약
3.2.1아황산나트륨(Sodiumsulfite)
3.2.2인산이수소칼륨(Potassiumdihydrogenphosphate)
3.2.3아세토니트릴(Acetonitrile)
3.2.4수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
4.시험과정
4.1시약조제
4.1.1이동상A
6.8g의인산이수소칼륨을증류수에녹여1L로한후20%수
산화칼륨용액을가하여pH6.5로조절한다.
4.1.2이동상B
4.08g의인산이수소칼륨을증류수650mL에녹이고아세토니트
릴350mL를혼합한후20%수산화칼륨용액을이용하여pH
8.0로조절한다.- 16 -4.2표준용액조제
4.2.1메틸테트라히드로엽산 칼슘을메틸테트라히드로엽산으로서 5mg
취하고1.5%아황산나트륨용액50mL에녹여표준원액으로한다.
4.2.2표준원액을1.5%아황산나트륨용액으로적당히희석하여표준용
액으로한다.
4.3시험용액조제
4.3.1엽산으로서약0.5mg을함유하는시료를정밀히취하고1.5%
아황산나트륨용액50mL로정용한다.
4.3.220분동안초음파추출한다.
4.3.32,000×g로10분간원심분리를하고상등액을취해0.2μm멤브
레인필터로여과한것을시험용액으로한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 32℃
이동상A:인산이수소칼륨(pH6.5)
B:인산이수소칼륨:아세토니트릴(pH8.0)=65:35
검출기파장 280nm
유속 1.0mL/min- 17 -시간(분)A용액(%)B용액(%)
0100 0
15 80 20
30 100 0
40 100 0표2.이동상조건(예)
5.2계산
엽산의함량(mg/100g)=(C×(a×b)/S)×0.96×100
C:시험용액중메틸테트라히드로엽산의 농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:시험용액의희석배수
S:시료채취량(mg)
0.96:메틸테트라히드로엽산의 엽산으로의전환계수
제4.3.3-28,3-28-1,2.1.1“정량분석용여지(예,AdvantecNo.5C)”를
“여과용멤브레인필터”로한다.
제4.3.3-28,3-28-1,4.2.2“그중0.3g을정밀히취하여100mL부피
플라스크에넣는다.”를“그중0.1g을정밀히취하여100mL부피플라
스크에넣는다.”로한다.
제4.3.3-28,3-28-1,4.2.5“증류수를표선까지채우고,정량분석용여지
로여과한다.”를“증류수를표선까지채우고,0.45μm멤브레인필터로여- 18 -과한다.”로한다.
제4.3.3-28,3-28-1중4.2.10을삭제한다.
제4.3.3-28,3-28-1의4.2.11부터4.2.13까지를각각4.2.10부터4.2.12까
지로한다.
제4.3.3-28중3-28-2를삭제한다.
제4.3.3-28,3-28-3,3.1.1을다음과같이한다.
3.1.1콘드로이친황산나트륨염(Chondroitinsulfatesodiumsalt)
분자식(C14H19NNa2O14S)n
CASNo.:9082-07-9
제4.3.3-28,3-28-3중3.2.2를삭제하고,3.2.3부터3.2.5까지를각각
3.2.2부터3.2.4까지로한다.
- 19 -제4.3.3-28,3-28-3,4.1.3중“1시간30분간”을“30분간”으로한다.
제4.3.3-28,3-28-3,4.2.1중“콘드로이친황산 50mg에해당하는시료
를정밀히취한다.”를“시료0.1g을정밀히취한다.”로하고,4.2.2중60℃
에서1시간동안”을“10분동안”으로하며,4.2.3은삭제하고,4.2.4및4.2.5를
각각4.2.3및4.2.4로한다.
제4.3.3-41.1을다음과같이한다.
1.본시험법은시료를검화시켜불검화물을추출한후박층크로마토그래
프(TLC)에전개시켜표준품과의반점위치를비교하여정성분석하거나
가스크로마토그래프/질량검출기로분석하여정성하는방법이다.
제4.3.3-41.2.1.4를신설한다.
2.1.4환저플라스크
제4.3.3-41.2.2와2.3을신설한다.
2.2분석장비
2.2.1가스크로마토그래프/질량검출기
2.2.2칼럼오븐
2.2.3HP-5MS컬럼(길이30m,안지름0.25mm,필름두께0.25μm)또
는이와동등한것- 20 -2.3분석장비의준비
분석시작전에주입부온도,유량및칼럼온도를분석조건에맞게조
작하고,가스크로마토그래프/질량검출기를충분히안정화시킨다.
제4.3.3-41,4.1.1“시료약5g을정밀히취하여환저플라스크에넣는
다.”를“알콕시글리세롤로서1g에해당하는시료를정밀히취하여환
저플라스크에넣는다.”로한다.
제4.3.3-41.4.2와4.3을각각다음과같이한다.
4.2표준용액의조제
4.2.1박층크로마토그래프
DL-바틸알콜표준물질50mg을취하여에틸에테르에녹여10mL
로한다.
4.2.2가스크로마토그래프/질량검출기
DL-바틸알콜표준물질50mg을취하여헥산에녹여10mL로한
후헥산으로적절히희석하여표준용액으로한다.
4.3시험용액의조제
4.3.1박층크로마토그래프
비비누화물을에틸에테르10mL에녹여시험용액으로한다.
4.3.2가스크로마토그래프/질량검출기
비비누화물을헥산10mL에녹여시험용액으로한다.- 21 -제4.3.3-41,5.2와표2를신설한다.
5.2기기분석
표2.가스크로마토그래프/질량검출기분석(예)
항목 조건
주입부온도 260℃
컬럼온도160℃(2분)-5℃/분-240℃(8분)-30℃/분-320℃(10분)
검출기온도 250℃
캐리어가스및유량 헬륨,1.5mL/분
주입량 1μL
Splitratio 20:1
이온 m/z113,253,283
제4.3.3-48,4.1.1부터4.1.4.를다음과같이한다.
4.1.1안트라퀴논계화합물로서 6mg에해당하는시료를정밀히취하여메
탄올10mL를첨가한후증류수10mL를가하여혼합한다.
4.1.2이후증류수75mL를가하여30분간진탕한다.
4.1.3증류수로200mL정용하여원심분리(2000×g,3분)한다.
4.1.4여액10mL를취하여60%염화제2철용액1mL와진한염산 6mL
가들어있는용기에가한후환류냉각기를설치하여끓는수욕조에
서1시간동안환류시킨다.
제4.3.3-49중3.3.4를삭제한다.- 22 -제4.3.3-49,4.1.1.1과4.1.1.2를각각다음과같이한다.
4.1.1.1총플라보노이드로서 2～5mg에해당하는시료를정밀히취하고
80%에탄올20mL를가하여용해한다.과립상,정제상의제품은
시료를충분히파쇄하여사용한다.또한젤라틴등을포함한제품
은내용물을꺼내어사용한다.
4.1.1.2원심분리(1,600×g,10분)를하여상층액을취한다.
제4.3.3-49,4.1.2.1∼4.1.2.3을각각다음과같이한다.
4.1.2.1총플라보노이드로서 2～5mg에해당하는시료를정밀히취한다.
4.1.2.280%에탄올20mL를가하여용해한다
4.1.2.3원심분리(1,600×g,10분)하여상층액을취한다.단,당을함유한
시료인경우시료를취하여증류수10mL에용해하고에탄올10
mL을가하여원심분리(1,600×g,10분)한다.”로한다.
제4.3.3-49,5.2.1을다음과같이한다.
5.2.1총플라보노이드함량(mg/g)=C×(a×b)/S
C:시험용액중의총플라보노이드함량(mg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g또는mL)- 23 -제4.3.3-70,4.2.1“시료25mg을25mL부피플라스크에정밀히칭량하
고클로로포름:메탄올(92:1,v/v)을넣어용해한후초음파추출하여표선
까지채운다.”를“포스파티딜세린으로서 3mg에해당하는시료를정밀히
취하여50mL부피플라스크에넣고클로로포름:메탄올(92:1,v/v)혼합용
액을넣어용해한후초음파추출하여표선까지채운다.“로한다.
제4.3.3-70,5.1중표2를다음과같이한다.
표2.이동상조건(예)
시간(분)A용액(%)B용액(%)
0955
5955
157030
182080
19955
30955
제4.3.중3-83비타민A및비타민E동시분석법을다음과같이신설
한다.
3-83비타민A및비타민E동시분석법
1.시험방법의요약
1.1일반건강기능식품
본시험법은시료중에존재하는비타민A와비타민E를비누화시- 24 -킨후석유에테르로추출하고액체크로마토그래프/자외부흡광광도검출
기를이용하여분석하는방법으로비타민A는325nm,비타민E는
298nm에서검출하여정량한다.
1.2전분·덱스트린함유건강기능식품
본시험법은시료중비타민A와비타민E를산가수분해및비누화
과정을거쳐석유에테르로추출하고액체크로마토그래프/자외부흡광광
도검출기로분석하는방법으로비타민A는325nm,비타민E는298
nm에서검출하여정량한다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1수욕조
2.1.2환류냉각장치
2.1.3감압농축기
2.1.4갈색둥근바닥플라스크
2.1.5갈색분액깔때기
2.1.6마개있는갈색시험관
2.1.7액체크로마토그래프용유리병
2.1.8여과용멤브레인필터및디스크형멤브레인필터
2.1.9용매용일회용실린지- 25 -2.2분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기
2.2.3칼럼오븐
2.2.4C30실릴화한칼럼(안지름4.6mm,길이250mm,충진재C30
silica)또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1Retinol(Retinol,VitaminA)
분자식:C20H30O,분자량286.45,CASNo.:68-26-8
3.1.2 α-Tocopherol((±)-α-Tocopherol;DL-all-rac-α-Tocopherol;
VitaminE)
분자식:C29H50O2,분자량430.71,CASNo.:10191-41-0
- 26 -3.2일반시약
3.2.1에탄올(Ethanol)
3.2.2염산(Hydrochloricacid)
3.2.3수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
3.2.4석유에테르(Petroleumether)
3.2.5무수황산나트륨(Sodiumsulfateanhydride)
3.2.6피로갈롤(Pyrogallol)
3.2.7페놀프탈레인(Phenolphthalein)
3.2.8증류수(Distilledwater)
4.시험과정
4.1시약제조
4.1.1무수황산나트륨
무수황산나트륨은데시케이터에보관한다.
4.1.210%피로갈롤에탄올용액
피로갈롤10g을에탄올에녹여100mL가되게한다.사용시제
조한다.
4.1.390%수산화칼륨용액
수산화칼륨90g을증류수에녹여100mL가되게한다.
4.1.4페놀프탈레인시액
페놀프탈레인1g을에탄올에녹여100mL가되게한다.- 27 -4.2표준용액제조
4.2.1비타민A(레티놀)를에탄올로희석하여2.5,5,10,25,50mg/L의
농도가되도록제조하고차광하여사용한다.
4.2.2비타민E동족체(α-,β-,γ-,δ-토코페롤)를각각에탄올로희석하
여2.5,5,10,25,50mg/L의농도가되도록제조하고차광하여사
용한다.
4.3시험용액제조
4.3.1일반건강기능식품
4.3.1.1비타민A약20∼30IU(6∼9μg),비타민E약0.2mg에해당
하는시료를정밀히취하여갈색둥근바닥플라스크에넣는다.
4.3.1.2에탄올30mL,10%피로갈롤에탄올용액1mL를가하고이에
90%수산화칼륨용액3mL를가해충분히혼합한다.
4.3.1.3환류냉각기를부착하고95℃수욕에플라스크를2/3잠기게하
여30분동안비누화한다.
4.3.1.4비누화후즉시냉각하여실온으로하고물30mL를가해갈색
분액깔때기에옮긴다.
4.3.1.5플라스크를물10mL로씻고이어서석유에테르30mL로씻은
후갈색분액깔때기에합한다.
4.3.1.6위의분액깔때기를잘흔들어혼합하여방치한후물층을다른
갈색분액깔때기에옮긴다.
4.3.1.7물층은석유에테르30mL를가하여추출하는과정을2회반복- 28 -한후석유에테르층을[4.3.1.6]의석유에테르층에합하여물10
mL로1회,이어물50mL로반복하여씻는다(수세액이페놀프
탈레인시액으로분홍색이되지않을때까지행한다).
4.3.1.8물층과충분히분리한석유에테르층을취하여무수황산나트륨에
통과시킨것을갈색둥근바닥플라스크에받는다.
4.3.1.9무수황산나트륨에석유에테르10mL를가하여씻는과정을2회
반복하고,씻은액을[4.3.1.8]의플라스크에모두합한다.
4.3.1.10석유에테르층이담긴플라스크를40∼45℃에서감압증발건조한다.
4.3.1.11잔류물에에탄올일정량을가하여녹인액을0.45μm멤브레인
필터로여과한것을시험용액으로한다.
4.3.2전분·덱스트린함유건강기능식품
4.3.2.1비타민A약20∼30IU(6∼9μg),비타민E약0.2mg에해당
하는시료를정밀히취하여마개있는갈색시험관에넣는다.
4.3.2.2증류수30mL,10%피로갈롤에탄올용액1mL,2N염산1mL
를가해섞은후뚜껑을닫아70℃항온수조에서30분동안가
수분해하면서때때로흔들어준다.
4.3.2.3가수분해후즉시냉각하여실온으로하여갈색둥근바닥플라스
크로옮기고시험관을에탄올30mL로씻어갈색둥근바닥플라
스크에합한다.
4.3.2.490%수산화칼륨용액3mL를벽면을통해서천천히가해충분
히혼합한다.- 29 -4.3.2.5환류냉각기를부착하고95℃수욕에수기를2/3잠기게하여30
분동안비누화한다.
4.3.2.6비누화후즉시냉각하여실온으로하고물30mL를가해갈색
분액깔때기에옮긴다.
4.3.2.7플라스크를물10mL로씻고이어서석유에테르30mL로씻은
후갈색분액깔때기에합한다.
4.3.2.8위의분액깔때기를잘흔들어혼합하여방치한후물층을다른
갈색분액깔때기에옮긴다.
4.3.2.9물층은석유에테르30mL를가하여추출하는과정을2회반복
한후석유에테르층을[4.3.2.8]의석유에테르층에합하여물10
mL로1회,이어물50mL로반복하여씻는다(수세액이페놀프
탈레인시액으로분홍색이되지않을때까지행한다).
4.3.2.10물층과충분히분리한석유에테르층을취하여무수황산나트륨
에통과시킨것을갈색둥근바닥플라스크에받는다.
4.3.2.11무수황산나트륨에석유에테르10mL를가하여씻는과정을2
회반복하고,씻은액을[4.3.2.10]의플라스크에모두합한다.
4.3.2.12석유에테르층이담긴플라스크를40∼45℃에서감압증발건조한다.
4.3.2.13잔류물에에탄올일정량을가하여녹인액을0.45μm멤브레인
필터로여과한것을시험용액으로한다.
5.분석및계산- 30 -5.1기기분석조건
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
항목 조건
주입량 20μL
칼럼온도 30℃
이동상 메탄올:물(95:5,v/v)
검출기
파장비타민A(레티놀)-325nm,
비타민E(α-,β-,γ-,δ-토코페롤)-298nm
유량 1.2mL/분
5.2계산
5.2.1비타민함량(mg/100g)=C×××
C:시험용액중비타민의농도(mg/L)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료의채취량(g)
D:희석배수
:단위환산
부칙<제2019-호,2019...>
제1조(시행일)이고시는고시한날부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행이후최초로제조·가공또는수입- 31 -(선적일을기준으로한다.이하같다)한건강기능식품(원료를포함한다)
부터적용한다.다만,이고시시행전에이미제조·가공또는수입된건강
기능식품이이고시를적용받고자하는경우이고시를적용할수있다.
제3조(경과조치)①이고시시행당시검사가접수되어진행중인사항
에대하여는종전의규정에따른다.
②이고시시행당시종전의규정에따라제조․가공․수입한건강기능식
품은그유통기한까지판매할수있다.- 32 -신․구조문대비표
현행 개정안
제1.2.(생략) 제1.2.(현행과같음)
제3.개별기준및규격
1.(생략)
1-1∼1-10(생략)제3.개별기준및규격
1.(현행과같음)
1-1∼1-10(현행과같음)
1-11엽산
1)(생략)
(1)원료
(가)엽산(Folicacid)
<신설>
(나)식품원료를사용하여엽산
을보충할수있도록제조·
가공한것
3),4)(생략)1-11엽산
1)(현행과같음)
(1)(현행과같음)
(가)(현행과같음)
(나)메틸테트라히드로엽산글루코사민
(다)(현행(나)와같음)
3),4)(현행과같음)
1-12〜1-28(생략)1-12〜1-28(현행과같음)
2.기능성원료 2.기능성원료
2-1인삼
1),2)(생략)
3)최종제품의요건
(1)기능성내용:면역력증진·
피로개선에도움을줄수있음2-1인삼
1),2)(현행과같음)
3)(현행과같음)
(1)-----------:---------·
피로개선·뼈건강에-------- 33 -(2),(3)(생략)
4)(생략)(2),(3)(현행과같음)
4)(현행과같음)
2-2∼2-5(생략)2-2∼2-5(현행과같음)
2-6녹차추출물
1)(생략)
2)규격
(1),(2)(생략)
<신설>
(3)∼(5)(생략)
3)최종제품의요건
(1)(생략)
(2)일일섭취량
카테킨으로서0.3～1g(에피
갈로카테킨갈레이트 ((-)-epig
allocatechingallate,EGCG))
300mg이하)
(3)(생략)
4)(생략)2-6녹차추출물
1)(현행과같음)
2)----
(1),(2)(현행과같음)
(3)에피갈로카테킨갈레이트 ((-)-e
pigallocathrchin gallate,EGC
G)(mg):일일섭취량중300
이하
(4)∼(6)(현행(3)∼(5)와같음)
3)---------------
(1)(현행과같음)
(2)일일섭취량
카테킨으로서0.3～1g
(3)(현행과같음)
4)(현행과같음)
2-7∼2-56(생략)2-7∼2-56(현행과같음)- 34 -2-57히알루론산
1),2)(생략)
3)최종제품의요건
(1)기능성내용:피부보습에도
움을줄수있음
(2)일일섭취량
히알루론산으로서 120∼240mg
4)(생략)2-57히알루론산
1),2)(현행과같음)
3)(현행과같음)
(1)---------:피부보습·자외선
에의한피부손상으로부터피
부건강유지에----------
(2)----------
(가)피부보습에도움을줄수있
음:히알루론산으로서 120
∼240mg
(나)자외선에의한피부손상으로
부터피부건강유지에도움
을줄수있음:히알루론산
으로서240mg
4)(현행과같음)
2-58(생략) 2-58(현행과같음)
2-59빌베리추출물
1),2)(생략)
3)최종제품의요건
(1)(생략)
(2)일일섭취량
빌베리추출물로서240mg2-59빌베리추출물
1),2)(현행과같음)
3)------------
(1)(현행과같음)
(2)---------
빌베리추출물로서160〜240- 35 -(안토시아노사이드로서72∼
108mg)
4)(생략)mg(안토시아노사이드로서50
∼108mg)
4)(현행과같음)
2-60〜2-68(생략)2-60〜2-68(현행과같음)
제4.건강기능식품시험법제4.건강기능식품시험법
1.2.(생략) 1.2.(현행과같음)
3.(생략) 3.(현행과같음)
3-1비타민A
3-1-1비타민A(제1법)
1.(생략)
2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1증류플라스크
2.1.2∼2.1.4(생략)
2.2,2.3(생략)
3.(생략)
4.(생략)
4.1(생략)
4.2표준용액제조3-1비타민A
3-1-1비타민A(제1법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
2.1(현행과같음)
2.1.1갈색둥근바닥플라스크
2.1.2∼2.1.4(현행과같음)
2.2,2.3(현행과같음)
3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.2----------- 36 -4.2.1(생략)
4.2.2측정한표준비타민A를증
류플라스크에취한다.
4.2.3,4.2.4(생략)
4.2.5비등수욕상에서플라스
크를흔들어주면서30분간
비누화한다.
4.2.6∼4.2.13(생략)
4.2.14위의용액의벤젠층50
mL을100mL증류플라
스크에정확히취한다.
4.2.15(생략)
4.2.16불활성가스로증류플라
스크내부를건조시킨다.
4.2.17(생략)
4.3,4.4(생략)
5.(생략)4.2.1(현행과같음)
4.2.2---------------- 갈색
둥근바닥플라스크-----.
4.2.3,4.2.4(현행과같음)
4.2.5환류냉각기를부착하고9
5℃수욕중에서갈색둥근
바닥플라스크를2/3잠기
게하여-----------.
4.2.6∼4.2.13(현행과같음)
4.2.14-----------------
-------갈색둥근바닥플라
스크-------------.
4.2.15(현행과같음)
4.2.16----------둥근바닥플라
스크--------------.
4.2.17(현행과같음)
4.3,4.4(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-1-2비타민A(제2법)
1.(생략)3-1-2비타민A(제2법)
1.(현행과같음)- 37 -2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1∼2.1.3(생략)
2.1.4증류플라스크(100mL)
2.1.5,2.1.6(생략)
2.2(생략)
2.3분석장비의준비
이동상은에탄올과물을95:5의
비율로혼합하여분당1mL씩
흘려기기와칼럼을안정화시킨다.
3.(생략)
4.(생략)
4.1∼4.3(생략)
4.3.1비타민A약20～30IU
(6～9μg)에상당하는시
료를정밀히취하여증류
플라스크에넣는다.
4.3.2에탄올30mL,피로갈롤에
탄올용액(1→10)1mL,92.(현행과같음)
2.1(현행과같음)
2.1.1∼2.1.3(현행과같음)
2.1.4갈색둥근바닥플라스크---
2.1.5,2.1.6(현행과같음)
2.2(현행과같음)
<삭제>
3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1∼4.3(현행과같음)
4.3.1----------------
--------------------
------------- 갈색둥근
바닥플라스크-------.
4.3.2---------------------
---------------------- 38 -0%수산화칼륨용액3mL
을넣고수욕중에30분간
비누화시킨다.
4.3.3(생략)
4.3.4증류플라스크를물10
mL로씻어갈색분액깔
때기에합친다.
4.3.5증류플라스크를석유에테
르30mL로씻은후갈
색분액깔때기에합한다.
4.3.6,4.3.7(생략)
4.3.8갈색분액깔때기에서물층
을충분히분리한석유에
테르층을취하여무수황산
나트륨으로탈수하여증류
플라스크에옮긴다.
4.3.9황산나트륨을석유에테르
10mL씩으로2회씻은---------------------
-------환류냉각기를부
착한후95℃수욕중에플
라스크를2/3잠기게하여
------------------.
4.3.3(현행과같음)
4.3.4둥근바닥플라스크--
---------------
------------.
4.3.5둥근바닥플라스크------
---------------------
-----------------.
4.3.6,4.3.7(현행과같음)
4.3.8---------------------
---------------------
-------------- 무수황
산나트륨을통과하며탈수
시켜갈색둥근바닥플라스
크에------.
4.3.9-------------------
--------------------- 39 -후[4.3.8]의증류플라스크
에가한다.
4.3.10,4.3.11(생략)
5.(생략)------둥근바닥플라스크
에-----.
4.3.10,4.3.11(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-2,3-3(생략) 3-2,3-3(현행과같음)
3-4비타민E
3-4-1비타민E(제1법)
1.(생략)
2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1증류플라스크(100mL)
2.1.2분액깔때기(Speratefunnel)
2.1.3(생략)
2.2,2.3(생략)
3.(생략)
4.(생략)
4.1(생략)
4.2(생략)
4.2.1(생략)3-4비타민E
3-4-1비타민E(제1법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
2.1(생략)
2.1.1갈색둥근바닥플라스크----
2.1.2갈색분액깔때기(Sperate
funnel)
2.1.3(현행과같음)
2.2,2.3(현행과같음)
3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.2(현행과같음)
4.2.1(현행과같음)- 40 -4.2.2100mL부피플라스크에
취하고에탄올을가하여
표선까지맞춘다.
4.3(생략)
4.3.1토코페롤약0.5～1mg에
상당하는시료를정밀히
취하여증류플라스크에
넣는다.
4.3.2에탄올30mL,피로갈롤에
탄올용액(1→10)1mL,9
0%수산화칼륨용액3mL
을넣고수욕중에30분간
비누화시킨다.
4.3.3신속히냉각하여물30m
L을가하여200mL분액
깔때기에옮긴다.
4.3.4증류플라스크를물10mL
로씻어분액깔때기에합
친다.
4.3.5증류플라스크를석유에테4.2.2-------갈색부피플라스크
---------------------
-------------.
4.3(현행과같음)
4.3.1---------------------
--------------- -----
-------갈색둥근바닥플라
스크-------.
4.3.2---------------------
---------------------
---------------------
-----환류냉각기를부착
한후95℃수욕에플라스
크를2/3잠기게하여--.
4.3.3---------------------
------------- 갈색분액
깔때기--------.
4.3.4둥근바닥플라스크-------
---------------------
---.
4.3.5둥근바닥플라스크-------- 41 -르30mL로씻은후분액
깔때기에합한다.
4.3.6,4.3.7(생략)
4.3.8분액깔때기에서물층을충
분히분리한석유에테르층
을취하여무수황산나트륨
으로탈수하여증류플라스
크에옮긴다.
4.3.9황산나트륨을석유에테르
10mL씩으로2회씻은
후[4.3.8]의증류플라스
크에가한다.
4.3.10(생략)
4.3.11위의잔류물을에탄올5
mL녹여25mL부피플
라스크에옮긴다.(2회반복)
4.3.12(생략)
4.4(생략)
5.(생략)---------------------
-----------.
4.3.6,4.3.7(현행과같음)
4.3.8---------------------
---------------------
--------무수황산나트륨
에통과시켜탈수한후갈
색둥근바닥플라스크----.
4.3.9---------------------
---------------------
--------둥근바닥플라스
크--------.
4.3.10(현행과같음)
4.3.11--------------------
----------갈색부피플
라스크--------------.
4.3.12(현행과같음)
4.4(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-4-2비타민E(제2법)3-4-2비타민E(제2법)- 42 -1.(생략)
2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1∼2.1.3(생략)
2.1.4증류플라스크(100mL)
2.1.5분액깔때기(Seperatefunnel)
2.1.6(생략)
2.2(생략)
2.3분석장비의준비
이동상으로서핵산과이소프로판
올을98:2로혼합하여분당0.5
mL씩흘려줌으로서칼럼과기기
를안정화시킨다.
3.(생략)
4.(생략)
4.1,4.2(생략)
4.3.(생략)
4.3.1토코페롤로서약0.2mg1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
2.1(현행과같음)
2.1.1∼2.1.3(현행과같음)
2.1.4갈색둥근바닥플라스크---
2.1.5갈색분액깔때기--------
2.1.6(현행과같음)
2.2(현행과같음)
<삭제>
3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1,4.2(현행과같음)
4.3.(현행과같음)
4.3.1---------------------- 43 -에상당하는시료를정밀
히취하여증류플라스크
에넣는다.
4.3.2에탄올30mL,피로갈롤에
탄올용액(1→10)1mL,9
0%수산화칼륨용액3mL
을넣고수욕중에30분간
비누화시킨다.
4.3.3신속히냉각하여물30
mL을가하여200mL
분액깔때기에옮긴다.
4.3.4증류플라스크를물10mL
로씻어분액깔때기에합
친다.
4.3.5증류플라스크를석유에테
르30mL로씻은후분액
깔때기에합한다.
4.3.6,4.3.7(생략)
4.3.8분액깔때기에서물층을충---------------------
----갈색둥근바닥플라스크
---------.
4.3.2---------------------
---------------------
---------------------
-----환류냉각기를부착
한후95℃수욕중에플라
스크를2/3잠기게하여-
------------.
4.3.3----------------
----------------------
갈색분액깔때기-------.
4.3.4둥근바닥플라스크-------
---------------------
---.
4.3.5둥근바닥플라스크-------
---------------------
--------------.
4.3.6,4.3.7(현행과같음)
4.3.8갈색분액깔때기---------- 44 -분히분리한석유에테르층
을취하여무수황산나트륨
으로탈수하여증류플라스
크에옮긴다.
4.3.9황산나트륨을석유에테르
10mL씩으로2회씻은
후[4.3.8]의증류플라스
크에가한다.
4.3.10,4.3.11(생략)
4.4(생략)
4.4.1유지약1g을정밀히취
해50mL부피플라스크
에넣는다.
4.4.2,4.4.3(생략)
5.(생략)---------------------
--------무수황산나트륨
에통과시켜탈수한후갈
색둥근바닥플라스크----.
4.3.9---------------------
---------------------
--------둥근바닥플라스
크--------.
4.3.10,4.3.11(현행과같음)
4.4(현행과같음)
4.4.1---------------------
------갈색부피플라스크
-------.
4.4.2,4.4.3(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-4-3비타민E(제3법)
1.(생략)
2.(생략)
2.1,2.2(생략)
2.3분석장비의준비
이동상으로서헥산과초산에틸3-4-3비타민E(제3법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
2.1,2.2(현행과같음)
<삭제>- 45 -을80:20으로혼합하여분당
1.0mL씩흘려줌으로서칼럼
과기기를안정화시킨다.
3.(생략)
4.(생략)
4.1∼4.3(생략)
4.4(생략)
4.4.1유지약1g을정밀히취
해50mL부피플라스크
에넣는다.
4.4.2,4.4.3(생략)
5.(생략)3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1∼4.3(현행과같음)
4.4(현행과같음)
4.4.1----------------- ---
-------갈색부피플라스크
--------.
4.4.2,4.4.3(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-5(생략) 3-5(현행과같음)
3-6비타민B1
3-6-1(생략)3-6비타민B1
3-6-1(현행과같음)
3-6-2비타민B1(제2법)
1.(생략)
2.(생략)3-6-2비타민B1(제2법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)- 46 -2.1실험실장비및소모품
2.1.1칼럼관
2.1.2원심분리기
2.1.3부피플라스크(200mL,100mL)
2.1.4원심분리관(50mL,15mL)
2.1.5시험관(15mL)
2.2(생략)
2.2.1,2.2.2(생략)
2.2.3비타민B1분리용칼럼(안
지름4.6mm,길이250
mm,충전제(옥타데실실릴
화)또는이와동등한것
2.3분석장비의준비
이동상을분당0.8mL씩
흘려줌으로써기기와칼럼을
안정화시키고분석시분리된
비타민B1이페리시안·
수산화나트륨용액과반응할
수있도록장치하여0.4mL로
흘려준다.2.1---------------
2.1.1원심분리기
2.1.2부피플라스크
2.1.3원심분리관(50mL,15mL)
2.1.4시험관(15mL)
<삭제>
2.2(현행과같음)
2.2.1,2.2.2(현행과같음)
2.2.3옥타데실실릴화한칼럼(안
지름4.6mm,길이250
mm,충전제Octadecylsilica)
또는이와동등한것
2.3----------
이동상을분당0.7mL씩
흘려줌으로써기기와칼럼을
안정화시키고분석시분리된
비타민B1이페리시안·
수산화나트륨용액과반응할
수있도록장치하여0.7mL로
흘려준다.- 47 -3.(생략)
3.1(생략)
3.2일반시약
3.2.1초산나트륨(Sodiumacetate)
3.2.2다카디아스타제
(Taka-Diastase)
3.2.3활성비타첸지(Vitachange,
activated)
3.2.4페리시안화칼륨
(Potassiumferricynate)
3.2.5수산화나트륨(Sodium
hydroxide)
3.2.6무수황산나트륨(Sodium
sulfateanhydride)
3.2.7이소부탄올(Iso-butanol)
4.(생략)
4.1시약제조
4.1.14M초산나트륨
5.44g의초산나트륨을물
에녹여10mL로한다.3.(현행과같음)
3.1(현행과같음)
3.2-------
3.2.1----------------
3.2.2 다카디아스타제
(Takadiastase)
3.3.3삼염화초산(Trichloroacetic
acid)
3.2.4제1인산나트륨(Sodium
phosphate,monobasic)
3.2.5페리시안화칼륨(Potassium
ferricyanide)
3.2.6수산화나트륨(Sodium
hydroxide)
<삭제>
4.(현행과같음)
4.1시약조제
4.1.1------------
16.4g의초산나트륨을물에
녹여50mL로한다.- 48 -4.1.2효소용액
다카디아스타제를물에
녹여2%로하여녹인후
그 상등액을
퍼무티트(Purmutit)칼럼※
에넣고다카디아스타제
중에존재하는비타민
B1을제거한후사용한다.
※활성비타첸지(Wako
227-00611)혹은이와
동등한것1.5g을
유리솜이채워진
유리칼럼에물과함께
채운후기포를제거하여
사용한다.이때효소
용액의유속은1
mL/분으로한다.
4.1.30.01%페리시안화칼
륨·15%(w/v)수산화나트륨
용액
수산화나트륨30g을물에4.1.2--------
다카디아스타제를물에
녹여2%로하고
원심분리한후상층액을
사용한다.
4.1.310%삼염화초산용액- 49 -녹여200mL로하여15%
수산화나트륨용액을조제
하고여기에페리시안화칼
륨20mg을녹인다.사용
시제조한다.
4.1.410mM제1인산나트륨수
용액·0.15M과염소산나
트륨수용액(pH2.2):제
1인산수소나트륨2.4g,
과염소산나트륨36.7g을
2L증류수에녹인후과
염소산용액을이용하여
pH를2.2로조정하여조
제한다.
<신설>4.1.40.1M제1인산나트륨수용
액11.9g의제1인산나트
륨을물에녹여1L로한다.
4.1.50.01%페리시안화칼륨·
15%(w/v)수산화나트륨용액
수산화나트륨150g을물
에녹여1L로하고이에
페리시안화칼륨(Potassium
ferricyanide,K3[Fe(CN)666])
100mg을녹인다.사용시- 50 -4.2표준용액제조
4.2.1Thiaminehydrochloride를
10%삼염화초산용액에녹
여0.01∼1.0mg/mL로한다.
4.2.24.2.1용액,4M초산나트
륨용액,2%다카디아스타
제용액을20:3:1의비율로
혼합한용액을표준용액
으로한다.
4.3시험용액제조(일반적시료)
4.3.1시료1을정밀히취하여
15mL원심분리관에넣는다.
4.3.210%삼염화초산용액5
mL을넣고균질화시킨
후다시10%삼염화초산조제한다.
4.2표준용액조제
4.2.1Thiaminehydrochloride를
비타민B1으로서100 μ
g/mL가되도록10%삼염
화초산용액에녹여표준원
액을만든다.표준원액을
0.1∼1.0μg/mL가되도록
희석한다.
4.2.24.2.1용액,4M초산나트륨
용액,2%다카디아스타제
용액을20:3:1의비율로
혼합한용액을표준용액으로
한다.
4..3시험용액조제(일반시료)
4.3.1시료1g(액상의경우5g)
을정밀히취하여15mL
원심분리관에넣는다.
4.3.210%삼염화초산용액5mL
를넣고2분간균질화시
킨후다시10%삼염화초- 51 -용액을넣어10mL로한다.
4.3.39,000rpm에서30분간원
심분리를한다.
4.3.4상징액200μL를시험관에
취하여4M초산나트륨
30μL를가한다.(pH4.5
∼4.7)
4.3.5이에2%다카디아스타제
용액10μL를넣고교반
하면서37℃에서8∼10시
간방치한것을시험용액
으로한다.
<신설>
4.4시험용액의조제
5.(생략)
5.1기기분석산용액을넣어10mL로한다.
4.3.32,000⨯g이상에서30분간
원심분리한다.
4.3.4이상층액1mL에10%삼
염화초산용액을넣어100
mL로정용한후적정농도
로희석한다.
4..3.54.3.4용액,4M초산나트
륨용액,2%다카디아스타
제용액을각각20:3:1의
비율로혼합한다.
4.3.61시간초음파추출한후상
등액을취하여0.45μm의
멤브레인필터로여과하여
시험용액으로사용한다.
4.4시험용액조제
5.(현행과같음)
5.1--------- 52 -표1.고속크로마토그래프조건(예)
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 40℃
이동상10mM제1인산나트륨
수용액·0.15M과염소산나트륨
수용액:메탄올(9:1)
검출기파장여기파장:375nm
측정파장:450nm
유량 0.8mL/분
반응액0.01%페리시안화칼륨·15%(w/v)
수산화나트륨용액
(유속:0.4mL/분)
5.2(생략)표1.--------------
항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 40℃
이동상0.1M제1인산나트륨수용액
검출기파장여기파장:375nm
측정파장:450nm
유속 0.7mL/min
반응액0.01%페리시안화칼륨·15%(w/v)
수산화나트륨용액
(유속:0.7mL/min)
5.2(현행과같음)
3-7∼3-10(생략)3-7∼3-10(현행과같음)
3-11엽산
3-11-1(생략)
3-11-2(생략)3-11엽산
3-11-1(현행과같음)
3-11-2(현행과같음)
<신설> 3-11-3엽산(메틸테트라히드로 엽산
글루코사민)(제3법)
1.시험방법의요약
본시험법은시료중메틸테트라히드로
엽산을아황산나트륨용액으로추출하고
역상컬럼을이용하여액체크로마토
그래프에서분리하고PDA검출기로
280nm에서정량분석한다.- 53 -2.장비와재료
2.1.실험실장비및소모품
2.1.1부피플라스크(50mL)
2.1.2여과용멤브레인필터
2.1.3원심분리기
2.1.4원심분리관(50mL)
2.2.분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2포토다이오드어레이
(PhotodiodeArray,PDA)
검출기
2.2.3옥타데실실릴화한컬럼
(안지름4.6mm,길이250mm,
충전제Octadecylsilica)
또는이와동등한것
2.3.분석장비의준비
이동상A(인산이수소칼륨)
용액을이용하여분당1.0
mL로충분한시간동안흘려
안정화시킨다.- 54 -3.표준물질및일반시약
3.1.표준물질
3.1.1메틸테트라히드로엽산 칼슘
(L-5-Methyltetrahydrofolate
calcium)
분자식:C20H23CaN7O6,
분자량:497.5g/mol,
CASNo.:151533-22-1
3.2.일반시약
3.2.1아황산나트륨(Sodiumsulfite)
3.2.2인산이수소칼륨(Potassium
dihydrogenphosphate)
3.2.3아세토니트릴(Acetonitrile)
3.2.4수산화칼륨(Potassiumhyd
roxide)
4.시험과정- 55 -4.1시약조제
4.1.1이동상A
6.8g의인산이수소칼륨을
증류수에녹여1L로한후2
0%수산화칼륨용액을
가하여pH6.5로조절한다.
4.1.2이동상B
4.08g의인산이수소칼륨을
증류수650mL에녹이고
아세토니트릴350mL를
혼합한후20%수산화칼륨
용액을이용하여pH8.0로
조절한다.
4.2표준용액조제
4.2.1메틸테트라히드로엽산칼슘을
메틸테트라히드로엽산으로
서5mg취하고1.5%
아황산나트륨용액50mL
에녹여표준원액으로
한다.
4.2.2표준원액을1.5%- 56 -아황산나트륨용액으로
적당히 희석하여
표준용액으로한다.
4.3시험용액조제
4.3.1엽산으로서약0.5mg을
함유하는시료를정밀히
취하고 1.5%
아황산나트륨용액50mL
로정용한다.
4.3.220분동안초음파추출한다.
4.3.32,000×g로10분간
원심분리하고상등액을
취해0.2 μm멤브레인
필터로여과한것을
시험용액으로한다.
5.분석및계산
5.1기기분석- 57 -항목 조건
주입량 10μL
칼럼온도 32℃
이동상A:인산이수소칼륨(pH6.5)
B:인산이수소칼륨:아세토니트릴
(pH8.0)=65:35
검출기파장 280nm
유속 1.0mL/min표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
시간(분)A용액(%)B용액(%)
0100 0
1580 20
30100 0
40100 0표 2. 이동상 조건(예)
5.2계산
엽산의함량(mg/100g)=
(C×(a×b)/S)×0.96×100
C:시험용액중메틸테트라히
드로엽산의농도(μg/mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:시험용액의희석배수
S:시료채취량(mg)
0.96:메틸테트라히드로엽산의- 58 -엽산으로의전환계수
3-12〜3-27(생략)3-12〜3-27(현행과같음)
3-28콘드로이친황산
3-28-1콘드로이친황산(제1법)
1.(생략)
2.(생략)
2.1실험실장비및소모품
2.1.1정량분석용여지(예,
AdvantecNo.5C)
2.1.2〜2.1.4(생략)
2.2,2.3(생략)
3.(생략)
4.(생략)
4.1(생략)
4.2시험용액의조제
4.2.1(생략)
4.2.2그중0.3g을정밀히
취하여100mL부피3-28콘드로이친황산
3-28-1콘드로이친황산(제1법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
2.1---------------
2.1.1여과용멤브레인필터
2.1.2〜2.1.4(현행과같음)
2.2,2.3(현행과같음)
3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.2------------
4.2.1(현행과같음)
4.2.2그중0.1g을정밀히
취하여100mL부피- 59 -플라스크에넣는다.
4.2.3,4.2.4(생략)
4.2.5증류수를표선까지
채우고,정량분석용
여지로여과한다.
4.2.6〜4.2.9(생략)
4.2.10약100℃의수욕상에서
10분간가열후즉시
얼음물로냉각한다.
4.2.11〜4.2.13(생략)
5.(생략)플라스크에넣는다.
4.2.3,4.2.4(현행과같음)
4.2.5증류수를표선까지채우고,
0.45μm멤브레인필터로
여과한다.
4.2.6〜4.2.9(현행과같음)
<삭제>
4.2.10〜4.2.12(현행
4.2.11∼4.2.13과같음)
5.(현행과같음)
3-28-2콘드로이친황산(제2법)
(이하생략)<삭제>
3-28-3콘드로이친황산(제3법)
1.(생략)
2.(생략)
3.(생략)
3.1(생략)3-28-3콘드로이친황산(제3법)
1.(현행과같음)
2.(현행과같음)
3.(현행과같음)
3.1(현행과같음)- 60 -3.1.1콘드로이친황산나트륨염
(Chondroitinsulfatesodiumsalt)
분자식(C14H21NO14S)n
CASNo.:24967-93-9
3.2(생략)
3.2.1(생략)
3.2.2메탄올(Methanol)
3.2.3〜3.2.5(생략)
3.3(생략)
4.(생략)
4.1(생략)
4.1.1,4.1.2(생략)
4.1.3위의용액을37℃에서
1시간30분간반응시킨다.
4.1.4,4.1.5(생략)
4.2시험용액의조제3.1.1-----------------
---------------------
분자식(C14H19NNa2O14S)n
CASNo.:9082-07-9
3.2(현행과같음)
3.2.1(현행과같음)
<삭제>
3.2.2〜3.2.4(현행
3.2.3∼3.2.5와같음)
3.3(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.1.1,4.1.2(현행과같음)
4.1.3------------------ 
30분간------------.
4.1.4,4.1.5(현행과같음)
4.2--------------- 61 -4.2.1콘드로이친황산 50mg에
해당하는시료를정밀히
취한다.
4.2.2증류수50mL을가하여
60℃에서1시간동안
초음파추출한다.
4.2.3위의용액을100℃에서
1시간환류냉각한다.
4.2.4,4.2.5(생략)
5.(생략)4.2.1시료0.1g을정밀히
취한다.
4.2.2-------------------- 
10분동안-------------
-----------------.
<삭제>
4.2.3,4.2.4(현행4.2.4,4.2.5와
같음)
5.(현행과같음)
3-29〜3-40(생략)3-29〜3-40(현행과같음)
3-41바틸알콜
1.본시험법은시료를검화시켜
불검화물을추출한후
박층크로마토그래프(TLC)에
전개시켜표준품과의
반점위치를비교하여
정성하는방법이다.3-41바틸알콜
1.본시험법은시료를검화시켜
불검화물을추출한후
박층크로마토그래프(TLC)에
전개시켜표준품과의
반점위치를비교하여
정 성 분 석 하 거나
가 스크로마 토그래 프/- 62 -2.(생략)
2.1(생략)
2.1.1∼2.1.3(생략)
<신설>
<신설>
<신설>질량검출기로분석하여
정성하는방법이다.
2.(현행과같음)
2.1(현행과같음)
2.1.1∼2.1.3(현행과같음)
2.1.4환저플라스크
2.2분석장비
2.2.1가스크로마토그래프/질량검출기
2.2.2칼럼오븐
2.2.3HP-5MS컬럼(길이30m,
안지름0.25mm,필름두께
0.25 μm)또는이와
동등한것
2.3분석장비의준비
분석시작전에주입부온도,
유량및칼럼온도를분석조
건에맞게조작하고,가스크로
마토그래프/질량검출기를충
분히안정화시킨다.- 63 -3.(생략)
4.(생략)
4.1비비누화물추출
4.1.1시료약5g을정밀히
취하여환저플라스크에
넣는다.
4.1.2∼4.1.8(생략)
4.2표준용액
4.2.1DL-바틸알콜표준물질
50mg을취하여
에틸에테르에녹여10
mL로한다.
<신설>
4.3시험용액
4.3.1.비비누화물을에틸에테르3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1----------
4.1.1알콕시글리세롤로서1g에
해당하는시료를정밀히
취하여환저플라스크에넣는다.
4.1.2∼4.1.8(현행과같음)
4.2표준용액의조제
4.2.1박층크로마토그래프
DL-바틸알콜표준물질50
mg을취하여에틸에테르에
녹여10mL로한다.
4.2.2가스크로마토그래프/질량검출기
DL-바틸알콜표준물질50
mg을취하여헥산에녹여
10mL로한후헥산으로
적절히 희석하여
표준용액으로한다.
4.3시험용액의조제
4.3.1박층크로마토그래프- 64 -10mL에녹여시험
용액으로한다.
<신설>
5.(생략)
5.1(생략)
표1.(생략)
<신설>비비누화물을에틸에테르
10mL에녹여시험
용액으로한다.
4.3.2가스크로마토그래프/질량검출기
비비누화물을헥산10
mL에녹여시험용액으로
한다.
5.(현행과같음)
5.1(현행과같음)
표1.(현행과같음)
5.2기기분석
표2.가스크로마토그래프/질량검출기분석(예)
항목 조건
주입부온도 260℃
컬럼온도160℃(2분)-5℃/분-240℃(8분)-
30℃/분-320℃(10분)
검출기온도 250℃
캐리어가스
및유량헬륨,1.5mL/분
주입량 1μL
Splitratio 20:1
이온 m/z113,253,283
3-42∼3-47(생략)3-42∼3-47(현행과같음)
3-48안트라퀴논계화합물 (무수바바3-48안트라퀴논계화합물 (무수바바- 65 -로인으로서)
1.∼3.(생략)
4.(생략)
4.1시험용액의조제
4.1.1알로에건조분말1g을
취하여메탄올10mL를
첨가한후60℃의
증류수10mL를가하여
혼합한다.
4.1.2이후60℃증류수75
mL를가하여30분간
진탕한다.
4.1.3냉각,여과한후여액을
200mL가되도록
증류수로채운다.
4.1.4여액10mL를취하여
60%염화제2철용액1
mL와진한염산 6
mL가들어있는용기에
가한후환류냉각기를로인으로서)
1.∼3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1-----------
4.1.1안트라퀴논계화합물로서 6
mg에해당하는시료를정
밀히취하여메탄올10
mL를첨가한후증류수
10mL를가하여혼합한다.
4.1.2이후증류수75mL를가
하여30분간진탕한다.
4.1.3증류수로200mL정용하
여원심분리(2000×g,3
분)한다.
4.1.4여액10mL를취하여
60%염화제2철용액1mL
와진한염산 6mL가들
어있는용기에가한후
환류냉각기를설치하여끓- 66 -설치하여끓는
수욕조에서4시간동안
환류시킨다.
4.1.5∼4.1.8(생략)
4.2(생략)
5.(생략)는수욕조에서1시간동
안환류시킨다.
4.1.5∼4.1.8(현행과같음)
4.2(현행과같음)
5.(현행과같음)
3-49총플라보노이드
1.∼2.(생략)
3.(생략)
3.1,3.2.(생략)
3.3일반시액
3.3.1∼3.3.3(생략)
3.3.490%에탄올
4.(생략)
4.1(생략)
4.1.1프로폴리스추출물
4.1.1.1시료60∼100mg을
칭량하고90%에탄올3-49총플라보노이드
1.∼2.(현행과같음)
3.(생략)
3.1,3.2.(현행과같음)
3.3-------
3.3.1∼3.3.3(현행과같음)
<삭제>
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.1.1-----------
4.1.1.1총플라보노이드로서 2
～5mg에해당하는- 67 -20mL를가하여
용해한다.과립상,
정제상의제품은
시료를충분히
파쇄하여사용한다.
또한젤라틴등을
포함한제품은
내용물을꺼내어
사용한다.
4.1.1.2원심분리(3,000rpm,
10분)를하여
상층액을취한다.
4.1.1.3,4.1.1.4(생략)
4.1.2프로폴리스추출물이
기능성원료인최종제품
4.1.2.1시료를프로폴리스
추출물로60∼100
mg이되도록
취한다.
4.1.2.290%에탄올20mL를시료를정밀히취하고
80%에탄올20mL를
가하여용해한다.
과립상,정제상의
제품은시료를충분히
파쇄하여사용한다.
또한젤라틴등을
포함한 제품은
내용물을 꺼내어
사용한다.
4.1.1.2원심분리(1,600×g,
10분)를하여상층액을
취한다.
4.1.1.3,4.1.1.4(현행과같음)
4.1.2---------------------
------------------
4.1.2.1총플라보노이드로서 2
～5mg에해당하는
시료를정밀히취한다.
4.1.2.280%에탄올20mL를- 68 -가하여용해한다.
4.1.2.3원심분리(3,000rpm,
10분)행하여상등액
을취한다.단,당을
함유한시료인경우
시료를정평하고증
류수10mL에용해
하고에탄올10mL
을가하여원심분리
(3,000rpm,10분)를
행한다.
4.1.2.4,4.1.2.5(생략)
4.2,4.3(생략)
5.(생략)
5.1(생략)
5.2계산
5.2.1총플라보노이드함량
(mg/g)=C×(a×b)/S
C:시험용액중의총플
라보노이드함량(mg/mL)가하여용해한다.
4.1.2.3원심분리(1,600×g,10
분)하여상층액을취한
다.단,당을함유한시
료인경우시료를취하
여증류수10mL에용
해하고에탄올10mL
을가하여원심분리
(1,600×g,10분)한다.
4.1.2.4,4.1.2.5(현행과같음)
4.2,4.3(현행과같음)
5.(현행과같음)
5.1(현행과같음)
5.2----
5.2.1--------------------
-------=----------
--:-------------------
------------------- 69 -S:시료채취량(g또는mL)
a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수a:시험용액의전량(mL)
b:희석배수
S:시료채취량(g또는mL)
3-50〜3-69(생략)3-50〜3-69(현행과같음)
3-70포스파티딜세린
1.∼3.(생략)
4.(생략)
4.1(생략)
4.1.1∼4.1.3(생략)
4.2시험용액의조제
4.2.1 시료25mg을25mL부
피플라스크에정밀히칭
량하고클로로포름:메탄올
(92:1,v/v)을넣어용해
한후초음파추출하여
표선까지채운다.
4.2.2(생략)
5.(생략)3-70포스파티딜세린
1.∼3.(현행과같음)
4.(현행과같음)
4.1(현행과같음)
4.1.1∼4.1.3(현행과같음)
4.2시험용액의조제
4.2.1 포스파티딜세린으로서 3
mg에해당하는시료를정
밀히취하여50mL부피
플라스크에넣고클로로포
름:메탄올(92:1,v/v)혼합
용액을넣어용해한후초
음파추출하여표선까지
채운다.
4.2.2(현행과같음)
5.(현행과같음)- 70 -5.1(생략)
표1.(생략)
표2.이동상조건(예)
시간(분)A용액(%)B용액(%)
initial 595
5595
153070
168020
208020
20.1 595
35595
5.2(생략)5.1(현행과같음)
표1.(현행과같음)
    표2.----------
시간(분)A용액(%)B용액(%)
0955
5955
157030
182080
19955
30955
5.2(현행과같음)
3-71∼3-82(생략)3-71∼3-82(현행과같음)
<신설> 3-83비타민A및비타민E동시분석법
1.시험방법의요약
1.1일반건강기능식품
       본시험법은시료중에존재하
는비타민A와비타민E를비
누화시킨후석유에테르로추
출하고액체크로마토그래프/자
외부흡광광도검출기를이용하
여분석하는방법으로비타민
A는325nm,비타민E는298
nm에서검출하여정량한다.
1.2전분·덱스트린함유건강기능- 71 -식품
       본시험법은시료중비타민A
와비타민E를산가수분해및
비누화과정을거쳐석유에테
르로추출하고액체크로마토그
래프/자외부흡광광도검출기로
분석하는방법으로비타민A는
325nm,비타민E는298nm에
서검출하여정량한다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1수욕조
2.1.2환류냉각장치
2.1.3감압농축기
2.1.4갈색둥근바닥플라스크
2.1.5갈색분액깔때기
2.1.6마개있는갈색시험관
2.1.7액체크로마토그래프용유리병
2.1.8여과용멤브레인필터및
디스크형멤브레인필터- 72 -2.1.9용매용일회용실린지
2.2분석장비
2.2.1고속액체크로마토그래프
2.2.2자외부흡광광도검출기
2.2.3칼럼오븐
2.2.4C30실릴화한칼럼(안지름
4.6mm,길이250mm,충
진재C30silica)또는이와
동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1Retinol(Retinol,VitaminA)
분자식:C20H30O,분자량
286.45,CASNo.:
68-26-8
3.1.2 α-Tocopherol((±)-α- 73 --Tocopherol;DL-all-rac-α
-Tocopherol;VitaminE)
분자식:C29H50O2,분자량
430.71,CASNo.:
10191-41-0
3.2일반시약
3.2.1에탄올(Ethanol)
3.2.2염산(Hydrochloricacid)
3.2.3수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
3.2.4석유에테르(Petroleumether)
3.2.5무수황산나트륨(Sodium
sulfateanhydride)
3.2.6피로갈롤(Pyrogallol)
3.2.7페놀프탈레인(Phenolphthalein)
3.2.8증류수(Distilledwater)
4.시험과정- 74 -4.1시약제조
4.1.1무수황산나트륨
무수황산나트륨은데시케
이터에보관한다.
4.1.210%피로갈롤에탄올용액
피로갈롤10g을에탄올에
녹여100mL가되게한다.
사용시제조한다.
4.1.390%수산화칼륨용액
수산화칼륨90g을증류수
에녹여100mL가되게
한다.
4.1.4페놀프탈레인시액
페놀프탈레인1g을에탄
올에녹여100mL가되게
한다.
4.2표준용액제조
4.2.1비타민A(레티놀)를에탄
올로희석하여2.5,5,10,
25,50mg/L의농도가되
도록제조하고차광하여- 75 -사용한다.
4.2.2비타민E동족체(α-,β-,
γ-,δ-토코페롤)를각각
에탄올로희석하여2.5,5,
10,25,50mg/L의농도가
되도록제조하고차광하여
사용한다.
4.3시험용액제조
4.3.1일반건강기능식품
4.3.1.1비타민A약20∼30
IU(6∼9μg),비타민E
약0.2mg에해당하는
시료를정밀히취하여
갈색둥근바닥플라스크
에넣는다.
4.3.1.2에탄올30mL,10%피
로갈롤에탄올용액1
mL를가하고이에90%
수산화칼륨용액3mL
를가해충분히혼합한
다.- 76 -4.3.1.3환류냉각기를부착하고
95℃수욕에플라스크
를2/3잠기게하여30
분동안비누화한다.
4.3.1.4비누화후즉시냉각하
여실온으로하고물
30mL를가해갈색분
액깔때기에옮긴다.
4.3.1.5플라스크를물10mL로
씻고이어서석유에테르
30mL로씻은후갈색
분액깔때기에합한다.
4.3.1.6위의분액깔때기를잘
흔들어혼합하여방치
한후물층을다른갈
색분액깔때기에옮긴다.
4.3.1.7물층은석유에테르30
mL를가하여추출하는
과정을2회반복한후
석유에테르층을[4.3.1.6]
의석유에테르층에합- 77 -하여물10mL로1회,
이어물50mL로반복
하여씻는다(수세액이
페놀프탈레인시액으로
분홍색이되지않을때
까지행한다).
4.3.1.8물층과충분히분리한
석유에테르층을취하여
무수황산나트륨에통과
시킨것을갈색둥근바
닥플라스크에받는다.
4.3.1.9무수황산나트륨에석유
에테르10mL를가하
여씻는과정을2회반
복하고,씻은액을
[4.3.1.8]의플라스크에
모두합한다.
4.3.1.10석유에테르층이담긴
플라스크를40∼45℃
에서감압증발건조한다.
4.3.1.11잔류물에에탄올일정량- 78 -을가하여녹인액을
0.45μm멤브레인필터
로여과한것을시험용
액으로한다.
4.3.2전분·덱스트린함유건강
기능식품
4.3.2.1비타민A약20∼30
IU(6∼9μg),비타민E
약0.2mg에해당하는
시료를정밀히취하여
마개있는갈색시험관에
넣는다.
4.3.2.2증류수30mL,10%피
로갈롤에탄올용액1
mL,2N염산1mL를
가해섞은후뚜껑을닫
아70℃항온수조에서
30분동안가수분해하면
서때때로흔들어준다.
4.3.2.3가수분해후즉시냉각
하여실온으로하여갈- 79 -색둥근바닥플라스크로
옮기고시험관을에탄
올30mL로씻어갈색
둥근바닥플라스크에합
한다.
4.3.2.490%수산화칼륨용액
3mL를벽면을통해
서천천히가해충분
히혼합한다.
4.3.2.5환류냉각기를부착하고
95℃수욕에수기를
2/3잠기게하여30분
동안비누화한다.
4.3.2.6비누화후즉시냉각하
여실온으로하고물
30mL를가해갈색분
액깔때기에옮긴다.
4.3.2.7플라스크를물10mL로
씻고이어서석유에테르
30mL로씻은후갈색
분액깔때기에합한다.- 80 -4.3.2.8위의분액깔때기를잘
흔들어혼합하여방치
한후물층을다른갈
색분액깔때기에옮긴다.
4.3.2.9물층은석유에테르30
mL를가하여추출하는
과정을2회반복한후
석유에테르층을[4.3.2.8]
의석유에테르층에합
하여물10mL로1회,
이어물50mL로반복
하여씻는다(수세액이
페놀프탈레인시액으
로분홍색이되지않을
때까지행한다).
4.3.2.10물층과충분히분리한
석유에테르층을취하
여무수황산나트륨에
통과시킨것을갈색둥
근바닥플라스크에받는다.
4.3.2.11무수황산나트륨에석- 81 -유에테르10mL를
가하여씻는과정을
2회반복하고,씻은
액을[4.3.2.10]의플
라스크에모두합한다.
4.3.2.12석유에테르층이담긴
플라스크를40∼45℃
에서감압증발건조한다.
4.3.2.13잔류물에에탄올일정량
을가하여녹인액을
0.45μm멤브레인필터
로여과한것을시험용
액으로한다.
5.분석및계산
5.1기기분석조건
표1.고속액체크로마토그래프조건(예)
항목 조건
주입량 20μL
칼럼온도 30℃
이동상메탄올:물(95:5,v/v)
검출기
파장비타민A(레티놀)-325nm,
비타민E(α-,β-,γ-,δ-토코페롤)-
298nm
유량 1.2mL/분- 82 -5.2계산
5.2.1비타민함량(mg/100g)=
C×××
C:시험용액중비타민
의농도(mg/L)
V:시험용액의최종부피(mL)
S:시료의채취량(g)
D:희석배수
:단위환산