식품의약품안전처 공고제2023-181호
- 2 -식품의약품안전처 공고제2023-181호
건강기능식품의 기준및규격
(식품의약품안전처고시 제2023-14호,
2023.2.17.)을일부개정함에있어국민에게미리알려의견을수렴하고자
그취지,개정이유및주요내용을
행정절차법
제46조에따라다음과
같이공고합니다.
 2023년4월13일
 식품의약품안전처장
「건강기능식품의 기준및규격」일부개정고시(안)행정예고
1.개정이유
다양한단백질제품의제조가가능하도록단백질의제조방법을삭제하고,
상황버섯추출물의 원재료학명재정립에따라학명을개정하는한편,쏘팔
메토열매추출물의규격과관련된시험법을추가하고자함
2.주요내용
가.단백질의제조방법삭제(안제3.1.1-271))
1)단백질제조에사용되는원재료는확대되었으나,제조방법이한정되어
있어다양한제품제조에한계가있음.
2)단백질의제조기준중제조방법을삭제하여제조방법을확대함.- 3 -3)단백질제조방법의확대로다양한제품이출시될것으로기대됨.
나.기능성원료원재료학명현행화(안제3.2.2-651))
1)상황버섯추출물의 원재료인상황버섯의학명이재정립되었음
2)상황버섯추출물의 원재료학명을재정립된학명으로개정함
3)영업자및소비자에게기능성원료의원재료에대한정확한정보를
제공함.
다.개별성분별시험법개정및신설(안제3.2.2-284),제4.3.3-32
및3-38)
1)신설된규격의시험을위한시험법개정및신설필요
2)쏘팔메토열매추출물규격관련지방산시험법개정및식물스테롤
시험법신설
3)시험법개정및신설로효율적이고정확한분석가능
3.의견제출
「건강기능식품의기준및규격」일부개정고시(안)에대하여의견이있는
단체또는개인은2023년월일까지다음사항을기재한의견서를식품의약품
안전처장(우편번호:28159,주소:충청북도청주시흥덕구오송읍오송생명2로
187오송보건의료행정타운 식품의약품안전처 ,참조:식품기준과,(전화)
043-719-2443,(팩스)043-719-2400)에게제출하여주시기바랍니다.- 4 -가.예고사항에대한항목별의견(찬․반여부와그이유)
나.성명(단체의경우단체명과그대표자의성명),주소및전화번호
다.기타참고사항- 5 -식품의약품안전처 고시제2023-호
건강기능식품에관한법률
제14조및제15조에따른
건강기능식품의
기준및규격
(식품의약품안전처 고시제2022-69호,2022.9.15.)을다음과같이
개정고시합니다.
2023년월일
식품의약품안전처장
건강기능식품의 기준및규격일부개정고시(안)
건강기능식품의기준및규격일부를다음과같이개정한다.
제3.1.1-271)(2)를삭제한다.
제3.2.2-284)(5)를다음과같이신설한다.
(5)지방산:제4.3-32-2지방산(제2법)
제3.2.2-284)(6)를다음과같이신설한다.
(6)식물스테롤:제4.3-38-2식물스테롤(제2법)
제3.2.2-351)(1)중“Avenasterilisand”를“Avenasterilis”로한다.- 6 -제3.2.2-431)(1)중“Chicorium”을“Cichorium”로한다.
제3.2.2-651)(1)과(4)중“Phellinuslinteus”를“Sanghuangporus
sanghuang”으로한다.
제4.3.3-32-24.2.1에※을다음과같이신설한다.
※쏘팔메토열매추출물의경우내부표준물질첨가한시험용액(A)및
내부표준물질을첨가하지않은시험용액(B)을각각실험하여비교한다.
제4.3.3-32-25.2.1.1에※을다음과같이신설한다.
※내부표준물질을 첨가하지않은시험용액(B)에서내부표준물질
(C11:0)의피크가나타나는경우,PtC11:0은시험용액(A)의피크면적에서
시험용액(B)의피크면적값을감하여보정한다.
시험용액(A)의PtC11:0–[시험용액(B)의(PtC11:0/시험용액(B)의
Wspl)×시험용액(A)의Wspl]
제4.3.3-38-1을다음과같이신설한다.
3-38-1식물스테롤(제1법)
제4.3.3-38-2를다음과같이신설한다.
3-38-2식물스테롤(제2법)
1.시험방법의요약
본시험법은시료를검화시킨후톨루엔으로식물스테롤성분을추출하고- 7 -트리메틸실릴(TMS)에테르화하여유도체화한다음가스크로마토그래프
/불꽃이온화검출기를 이용하여정량하는방법이다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1감압농축기
2.1.2자석교반-가열기
2.1.3교반기(Vortexmixer)
2.1.4분석저울:0.0001g까지측정이가능한것
2.1.5초자기구:삼각플라스크(250mL),환저플라스크(250mL),메스
실린더,분액여두(500mL)
2.2분석장비
2.2.1가스크로마토그래프
2.2.2불꽃이온화검출기 (FlameIonizationDetector)
2.2.3칼럼오븐
2.2.45%-phenyl-methylpolysiloxane(길이25m,안지름0.32mm,필
름두께0.17μm)또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1베타-시토스테롤(β-sitosterol)
분자식:C29H50O,분자량:414.71,CASNo.:83-46-5- 8 -
3.1.2캄페스테롤(campesterol)
분자식:C28H48O,분자량:400.68,CASNo.:474-62-4
3.1.3브라시카스테롤(brassicasterol)
분자식:C28H46O,분자량:398.66,CASNo.:474-67-9
3.1.4스티그마스테롤(stigmasterol)
분자식:C29H48O,분자량:412.69,CASNo.:83-48-7
3.1.5스티그마스타놀(stigmastanol)
분자식:C29H52O,분자량:416.72,CASNo.:19466-47-8- 9 -
3.2일반시약
3.2.1톨루엔(Toluene)
3.2.2수산화칼륨(Potassiumhydroxide)
3.2.3에탄올(Ethanol)
3.2.4헵탄(Heptane,GCgrade)
3.2.5디메틸포름아미드(Dimethylformamide,DMF)
3.2.6헥사메틸디실라잔(Hexamethyldisilazane,HMDS)
3.2.7트리메틸클로로실란(Chlorotrimethylsilane,TMCS)
3.2.8무수황산나트륨(Sodiumsulfateanhydrous)
3.2.9유리솜
3.3내부표준물질
3.3.15α-콜레스탄(5α-Cholestane)
분자식:C27H48,분자량:372.67,CASNo.:481-21-0
3.4시액의제조
3.4.1내부표준용액
5α-콜레스탄20mg을톨루엔에녹여20mL로한다.(1mg/mL)- 10 -3.4.2수산화칼륨용액
3.4.2.150%(w/w):수산화칼륨500g을증류수에녹여1L로한다.
3.4.2.21M:수산화칼륨56g을증류수에녹여1L로한다.
3.4.2.30.5M:1M수산화칼륨용액을증류수로희석한다.
4.시험과정
4.1표준용액의조제
4.1.15종의표준물질을각각10mg을정밀하게달아톨루엔10mL
에녹여만든다.(1mg/mL)
4.1.2위의용액을톨루엔으로적절히희석하여표준용액으로한다.(0.5
∼500㎍/mL)
4.1.3표준용액1.0mL와내부표준물질용액 0.1mL를원심분리관에
넣고질소건조후잔류물을1mLDMF로녹여유도체화를위한
표준용액으로한다.
4.1.4위의용액에HMDS0.2mL를가한후TMCS0.1mL를가하여
마개를닫고이를강렬하게30초간교반하거나손으로흔들어혼
합하고15분간정치한다.
4.1.5각각의원심분리관에헵탄1.0mL와증류수10mL를넣은후
마개를닫고30초간강력하게교반하고이를1,600×g에서2분간
원심분리한다.
4.1.6상층의헵탄층을취하여기체크로마토그래프 측정용표준용액
으로한다.이때유도체화된표준용액과시험용액은24시간내에
분석한다.
4.2시험용액의조제- 11 -4.2.1비누화과정
4.2.1.1시료0.5～2g을정밀하게칭량하여환저플라스크에취한
다.
4.2.1.2자석막대를삼각플라스크에넣고내부표준물질용액1.2mL,
95%에탄올40mL과50%수산화칼륨용액8mL을가한다
(95%에탄올40mL중일정량을50%수산화칼륨용액첨가후
잔류물세척에사용하여플라스크와콘덴서가같이붙어서떨
어지지않는것을방지할수있다.)
4.2.1.3콘덴서를설치하고자석교반-가열기를이용하여교반하면서
가열하여70±10분간환류시킨다.비누화를위해시료를지속적
으로관찰하면서덩어리가생길경우유리봉으로분산시키거나
교반하면서50%수산화칼륨용액을추가하여시험용액을교반
한다.
4.2.1.4환류가완료되면가열기를끄고교반중에콘덴서의상부를
통해95%에탄올60mL을첨가하고15분간방치한다.
4.2.1.5콘덴서를플라스크에서제거하고플라스크에마개를막아실
온으로냉각시킨후시험용액을안정화한다.
4.2.2추출
4.2.2.1비누화가끝난시험용액을교반하면서톨루엔100mL을첨
가하고마개를하여30초이상교반한다.
4.2.2.2이를세척과정없이500mL분액여두로옮기고1M수산화
칼륨용액110mL을넣고10초간강렬하게진탕하여정치후
분리된아래층을버린다.
4.2.2.30.5M수산화칼륨용액40mL을분액여두에넣고분액여두- 12 -를천천히내용물이소용돌이가생기도록10초간섞어준후정
치하여분리된아래층을버린다.
4.2.2.4톨루엔층을증류수40mL로천천히분액여두를돌려주며
수세한후정치하여분리된아래층을버리고수세과정을3회
이상반복한다.이때수세과정이반복될수록더욱강렬하게진
탕하며,만약에멀젼이발생하면소량의95%에탄올을첨가하
여분액여두의내용물이회오리가생기도록섞어준후정치하
여층을분리한다.톨루엔층이맑게보일때까지수세과정을
계속한다.
4.2.2.5유리솜과약20g의무수황산나트륨이채워진유리깔대기를
통해수세한톨루엔층을약2g무수황산나트륨이채워진삼
각플라스크로흘려주어탈수한다.
4.2.2.6삼각플라스크에마개를막고15분이상정치한다.이때마
개의막음상태가완벽하더라도24시간이상방치하여서는안된다.
4.2.2.7추출한톨루엔층25mL을환저플라스크에취하고이를
50±3℃에서감압농축하여건고한다.잔류물에아세톤약3mL
을가한후다시감압농축하여완전건고한다.
4.2.2.8잔류물을3mLDMF에녹여시험용액으로한다.이때시험
용액의농도는식물스테롤표준용액의농도범위안에있어야
한다.
4.2.3유도체화
4.2.3.1시험용액1.0mL를원심분리관에취한다.
4.2.3.2위의용액에HMDS0.2mL를가한후TMCS0.1mL를가
하여마개를닫고이를강렬하게30초간교반하거나손으로흔- 13 -들어혼합하고15분간정치한다.
4.2.3.3각각의원심분리관에헵탄1.0mL와증류수10mL를넣은
후마개를닫고30초간강력하게교반하고이를1,600×g에서
2분간원심분리한다.
4.2.3.4상층의헵탄층을취하여기체크로마토그래프 측정용시험용
액으로한다.이때유도체화된표준용액과시험용액은24시간
내에분석한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입부온도 250℃
칼럼온도190℃(2분)-20℃/분-230℃(3분)-40℃/분-270℃(25분)
검출기온도 300℃
캐리어가스및유량 헬륨,0.7mL/분
Splitratio 10:1
5.2결과분석
5.2.1검량선의작성
유도체화한5개의식물스테롤표준용액을1μL각각주입하여
얻어진크로마토그램상의식물스테롤피크면적을5α-콜레스탄피
크면적으로나눈값(Y축)과식물스테롤농도(mg/mL,X축)로검량
선을작성한다.
5.2.2정성시험
위의조건에서얻어진크로마토그램상의피크는어느측정조건- 14 -에서도표준용액피크의머무름시간과일치하여야한다.
5.2.3정량시험
정성시험과똑같은조건에서얻어진시험결과에의해피크면적법
에따라정량한다.
5.3계산
5.3.1개별식물스테롤함량(mg/g)=C×(V1/S)×(V3/V2)
C:검량선에서구한개별식물스테롤시험용액의농도(mg/mL)
S:검체량(g)
V1:추출에사용한톨루엔의양(100mL)
V2:농축에사용된톨루엔추출액의양(25mL)
V3:유도체화전잔사를녹이는데사용한DMF의양(3mL)
5.3.2식물스테롤함량(mg/g)=베타-시토스테롤+캄페스테롤+브
라시카스테롤+스티그마스테롤+스티그마스타놀- 15 -부칙
제1조(시행일)이고시는2024년1월1일부터시행한다.
제2조(적용례)이고시는이고시시행이후최초로제조·가공또는수입
(선적일을기준으로한다.이하같다)한건강기능식품(원료를포함한다.
이하같다)부터적용한다.다만,제3.2.2-284),제4.3.3-32및3-38을
제외하고이고시시행전에이미제조·가공또는수입된건강기능식품이
이고시를적용받고자하는경우이고시를적용할수있다.
제3조(경과조치)①이고시시행당시검사가접수되어진행중인사항에
대하여는종전의규정에따른다.
②이고시시행당시종전의규정에따라제조․가공․수입한건강기능식
품은그소비기한까지판매할수있다.- 16 -신․구조문대비표
현행 개정안
제1.∼제2.(생략)제1.∼제2.(현행과같음)
제3.개별기준및규격제3.개별기준및규격
1.영양성분 1.영양성분
1-1〜1-26(생략)1-1〜1-26(현행과같음)
1-27단백질
1)제조기준
(1)(생략)
(2)제조방법:상기원재료에서
단백질을분리하여정제하거나,
단백분해효소나자가분해효소로
분해하여제조하여야함
(3)(생략)
2)∼4)(생략)1-27단백질
1)제조기준
(1)(현행과같음)
(2)<삭제>
(3)(현행과같음)
2)∼4)(현행과같음)
1-28(생략) 1-28(현행과같음)
2.기능성원료 2.기능성원료
2-1〜2-27(생략)2-1〜2-27(현행과같음)
2-28쏘팔메토열매추출물
1)∼3)(생략)
4)시험법
(1)∼(4)(생략)2-28쏘팔메토열매추출물
1)∼3)(현행과같음)
4)시험법
(1)∼(4)(현행과같음)- 17 -현행 개정안
(5)<신설>
(6)<신설>(5)지방산:제4.3-32-2지방
산(제2법)
(6)식물스테롤:제4.3-38-2
식물스테롤(제2법)
2-29〜2-34(생략)2-29〜2-34(현행과같음)
2-35귀리식이섬유
1)제조기준
(1)-----------------------
-----Avenasterilisand,-
-------------
(2)∼(3)(생략)
2)∼4)(생략)2-35귀리식이섬유
1)제조기준
(1)-----------------------
-----Avenasterilis,----
----------
(2)∼(3)(현행과같음)
2)∼4)(현행과같음)
2-36〜2-42(생략)2-36〜2-42(현행과같음)
2-43이눌린/치커리추출물
1)제조기준
(1)---------Chicoriumintybus
------------
(2)∼(3)(생략)
2)∼4)(생략)2-43이눌린/치커리추출물
1)제조기준
(1)---------Cichoriumintybus
------------
(2)∼(3)(생략)
2)∼4)(생략)
2-44〜2-64(생략)2-44〜2-64(현행과같음)- 18 -현행 개정안
2-65상황버섯추출물
1)제조기준
(1)원재료:상황버섯(Phellinus
linteus,3～4년생건조물)
(2)～(3)(생략)
(4)제조시유의사항:원재료인
상황버섯(Phellinuslinteus,
3～4년생건조물)은ITS-
5.8SrDNAsequence분석
에의하여Phellinuslinteus
종으로확인된종균을사용
하고,외부로부터미생물오
염을차단할수있는용기에
영양분을갖춘고형배지를
넣고살균한후버섯종균을
접종하고3～4년간재배하
여,포자형성이확인된흑
갈색의자실체형태로성장한
상황버섯을채취하여야함2-65상황버섯추출물
1)제조기준
(1)---------(Sanghuangporus
sanghuang,-----------
(2)～(3)(현행과같음)
(4)-----------------------
--(Sanghuangporussanghu
ang,-----------)------
-----------------------
---Sanghuangporussangh
uang------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
-----------------------
----- 19 -현행 개정안
2)～4)(생략) 2)～4)(현행과같음)
2-66〜2-68(생략)2-66〜2-68(현행과같음)
제4.건강기능식품시험법제4.건강기능식품시험법
1.∼2.(생략) 1.∼2.(현행과같음)
3.개별성분별시험법
3-1∼3-31(생략)3.개별성분별시험법
3-1∼3-31(현행과같음)
3-32지방산
3-32-1(생략)
3-32-2지방산(제2법)
1.〜3.(생략)
4.시험과정
4.1표준용액조제
4.1.1(생략)
4.2시험용액의조제
4.2.1시료25mg을유리튜브에
정밀히취하고,3.4.3용액을1
mL첨가한다.
※<신설>3-32지방산
3-32-1(현행과같음)
3-32-2지방산(제2법)
1.〜3.(현행과같음)
4.시험과정
4.1표준용액조제
4.1.1(현행과같음)
4.2시험용액의조제
4.2.1시료25mg을유리튜브에
정밀히취하고,3.4.3용액을1
mL첨가한다.
※쏘팔메토열매추출물의경
우내부표준물질첨가한시험
용액(A)및내부표준물질을
첨가하지않은시험용액(B)을- 20 -현행 개정안
각각실험하여비교한다.
5.분석및계산
5.1(생략)
5.2계산
5.2.1(생략)
5.2.1.1개별지방산메틸
에스테르의함량계산
WFAMEi =Pti×Wt C11:0 × 1.0067
PtC11:0 × Ri
WFAMEi:지방산i의메틸에스
테르로서의양(mg)
Pti:시험용액중지방산i의피크
면적
WtC11:0:시험용액중내부표준
물질(C11:0triundecanoin)첨가량(mg)
1.0067:내부표준물질(C11:0
triundecanoin)의트리글리세라
이드로부터지방산메틸에스
테르로의전환계수5.분석및계산
5.1(현행과같음)
5.2계산
5.2.1(현행과같음)
5.2.1.1개별지방산메틸
에스테르의함량계산
WFAMEi =Pti×Wt C11:0 × 1.0067
PtC11:0 × Ri
WFAMEi:지방산i의메틸에스
테르로서의양(mg)
Pti:시험용액중지방산i의피크
면적
Wt C11:0:시험용액중내부표준
물질(C11:0triundecanoin)첨가량(mg)
1.0067:내부표준물질(C 1 1 : 0
triundecanoin)의트리글리세라
이드로부터지방산메틸에스
테르로의전환계수- 21 -현행 개정안
PtC11:0:시험용액중내부표준물질
(undecanoicacidmethylester)의
피크면적
※<신설>
5.2.1.2〜5.2.1.3(생략)PtC11:0:시험용액중내부표준물질
(undecanoicacidmethylester)의
피크면적
※내부표준물질을첨가하지
않은시험용액(B)에서
내부표준물질(C11:0)의
피크가나타나는경우,
PtC11:0은시험용액(A)의
피크면적에서시험용액
(B)의피크면적값을감
하여보정한다.
시험용액(A)의PtC11:0–
[시험용액(B)의(PtC11:0/
시험용액(B)의Wspl)×
시험용액(A)의Wspl]
5.2.1.2〜5.2.1.3(현행과같음)
3-33∼3-37(생략)3-33∼3-37(현행과같음)
3-38식물스테롤
<신설>
1.〜5.(생략)3-38식물스테롤
3-38-1식물스테롤(제1법)
1.〜5.(현행과같음)- 22 -현행 개정안
<신설> 3-38-2식물스테롤(제2법)
1.시험방법의요약
1.시험방법의요약
본시험법은시료를검화시킨후
톨루엔으로식물스테롤성분을추출하고
트리메틸실릴(TMS)에테르화하여
유도체화한다음가스크로마토그래프
/불꽃이온화검출기를이용하여
정량하는방법이다.
2.장비와재료
2.1실험실장비및소모품
2.1.1감압농축기
2.1.2자석교반-가열기
2.1.3교반기(Vortexmixer)
2.1.4분석저울:0.0001g까지
측정이가능한것
2.1.5초자기구:삼각플라스크
(250mL),환저플라스크
(250mL),메스실린더,분액- 23 -현행 개정안
여두(500mL)
2.2분석장비
2.2.1가스크로마토그래프
2.2.2불꽃이온화검출기 (Flame
IonizationDetector)
2.2.3칼럼오븐
2.2.45%-phenyl-methyl
polysiloxane(길이25m,안
지름0.32mm,필름두께
0.17μm)또는이와동등한것
3.표준물질및일반시약
3.1표준물질
3.1.1베타-시토스테롤(β-sitosterol)
분자식:C29H50O,분자량:
414.71,CASNo.:83-46-5
- 24 -현행 개정안
3.1.2캄페스테롤(campesterol)
분자식:C28H48O,분자량:
400.68,CASNo.:474-62-4
3.1.3브라시카스테롤(brassicasterol)
분자식:C28H46O,분자량:
398.66,CASNo.:474-67-9
3.1.4스티그마스테롤(stigmasterol)
분자식:C29H48O,분자량:
412.69,CASNo.:83-48-7
3.1.5스티그마스타놀(stigmastanol)
분자식:C29H52O,분자량:- 25 -현행 개정안
416.72,CASNo.:19466-47-8
3.2일반시약
3.2.1톨루엔(Toluene)
3.2.2수산화칼륨(Potassium
hydroxide)
3.2.3에탄올(Ethanol)
3.2.4헵탄(Heptane,GCgrade)
3.2.5디메틸포름아미드(Dimethyl
formamide,DMF)
3.2.6헥사메틸디실라잔(Hexamethyl
disilazane,HMDS)
3.2.7트리메틸클로로실란
(Chlorotrimethylsilane,TMCS)
3.2.8무수황산나트륨(Sodium
sulfateanhydrous)
3.2.9유리솜- 26 -현행 개정안
3.3내부표준물질
3.3.15α-콜레스탄(5α-Cholestane)
분자식:C27H48,분자량:
372.67,CASNo.:481-21-0
3.4시액의제조
3.4.1내부표준용액
5α-콜레스탄20mg을톨
루엔에녹여20mL로한다.(1
mg/mL)
3.4.2수산화칼륨용액
3.4.2.150%(w/w):수산화
칼륨500g을증류수에
녹여1L로한다.
3.4.2.21M:수산화칼륨
56g을증류수에녹여1
L로한다.
3.4.2.30.5M:1M수산화- 27 -현행 개정안
칼륨용액을증류수로희석
한다.
4.시험과정
4.1표준용액의조제
4.1.15종의표준물질을각각
10mg을정밀하게달아톨루엔
10mL에녹여만든다.(1
mg/mL)
4.1.2위의용액을톨루엔으로
적절히희석하여표준용액으
로한다.(0.5∼500㎍/mL)
4.1.3표준용액1.0mL와내부
표준물질용액0.1mL를원심
분리관에넣고질소건조후
잔류물을1mLDMF로녹
여유도체화를위한표준용
액으로한다.
4.1.4위의용액에HMDS0.2
mL를가한후TMCS0.1- 28 -현행 개정안
mL를가하여마개를닫고
이를강렬하게30초간교반
하거나손으로흔들어혼합
하고15분간정치한다.
4.1.5각각의원심분리관에헵탄
1.0mL와증류수10mL를
넣은후마개를닫고30초간
강력하게교반하고이를
1,600×g에서2분간원심분
리한다.
4.1.6상층의헵탄층을취하여
기체크로마토그래프 측정용
표준용액으로한다.이때유
도체화된표준용액과시험
용액은24시간내에분석한다.
4.2시험용액의조제
4.2.1비누화과정
4.2.1.1시료0.5～2g을
정밀하게칭량하여환저
플라스크에취한다.- 29 -현행 개정안
4.2.1.2자석막대를삼각플라
스크에넣고내부표준물질
용액1.2mL,95%에탄올
40mL과50%수산화칼륨
용액8mL을가한다
(95%에탄올40mL중
일정량을50%수산화칼륨
용액첨가후잔류물세척에
사용하여플라스크와콘
덴서가같이붙어서떨어
지지않는것을방지할
수있다.)
4.2.1.3콘덴서를설치하고
자석교반-가열기를이용
하여교반하면서가열하여
70±10분간환류시킨다.
비누화를위해시료를지
속적으로관찰하면서덩
어리가생길경우유리봉
으로분산시키거나교반- 30 -현행 개정안
하면서50%수산화칼륨
용액을추가하여시험용액을
교반한다.
4.2.1.4환류가완료되면가
열기를끄고교반중에
콘덴서의상부를통해
95%에탄올60mL을첨
가하고15분간방치한다.
4.2.1.5콘덴서를플라스크에서
제거하고플라스크에마개를
막아실온으로냉각시킨후
시험용액을안정화한다.
4.2.2추출
4.2.2.1비누화가끝난시험
용액을교반하면서톨루엔
100mL을첨가하고마개를
하여30초이상교반한다.
4.2.2.2이를세척과정없이
500mL분액여두로옮기고
1M수산화칼륨용액110- 31 -현행 개정안
mL을넣고10초간강렬
하게진탕하여정치후
분리된아래층을버린다.
4.2.2.30.5M수산화칼륨용액
40mL을분액여두에넣고
분액여두를천천히내용물이
소용돌이가생기도록10
초간섞어준후정치하여
분리된아래층을버린다.
4.2.2.4톨루엔층을증류수
40mL로천천히분액여두를
돌려주며수세한후정치
하여분리된아래층을버리고
수세과정을3회이상반복
한다.이때수세과정이
반복될수록더욱강렬하게
진탕하며,만약에멀젼이
발생하면소량의95%에
탄올을첨가하여분액여두의
내용물이회오리가생기- 32 -현행 개정안
도록섞어준후정치하여
층을분리한다.톨루엔층이
맑게보일때까지수세과정을
계속한다.
4.2.2.5유리솜과약20g의
무수황산나트륨이채워진
유리깔대기를통해수세한
톨루엔층을약2g무수
황산나트륨이채워진삼각
플라스크로흘려주어탈수
한다.
4.2.2.6삼각플라스크에마개를
막고15분이상정치한다.
이때마개의막음상태가
완벽하더라도24시간이상
방치하여서는안된다.
4.2.2.7추출한톨루엔층25
mL을환저플라스크에
취하고이를50±3℃에서
감압농축하여건고한다.- 33 -현행 개정안
잔류물에아세톤약3
mL을가한후다시감압
농축하여완전건고한다.
4.2.2.8잔류물을3mL
DMF에녹여시험용액으로
한다.이때시험용액의
농도는식물스테롤표준
용액의농도범위안에있어야
한다.
4.2.3유도체화
4.2.3.1시험용액1.0mL를
원심분리관에취한다.
4.2.3.2위의용액에HMDS
0.2mL를가한후TMCS
0.1mL를가하여마개를
닫고이를강렬하게30초간
교반하거나손으로흔들어
혼합하고15분간정치한다.
4.2.3.3각각의원심분리관에
헵탄1.0mL와증류수10- 34 -현행 개정안
mL를넣은후마개를닫고
30초간강력하게교반하고
이를1,600×g에서2분간
원심분리한다.
4.2.3.4상층의헵탄층을취
하여기체크로마토그래프
측정용시험용액으로한다.
이때유도체화된표준
용액과시험용액은24시간
내에분석한다.
5.분석및계산
5.1기기분석
표1.가스크로마토그래프 조건(예)
항목 조건
주입부온도 250℃
칼럼온도190℃(2분)-20℃/분-230℃
(3분)-40℃/분-270℃(25분)
검출기온도 300℃
캐리어가스및
유량헬륨,0.7mL/분
Splitratio 10:1- 35 -현행 개정안
5.2결과분석
5.2.1검량선의작성
유도체화한5개의식물스테롤
표준용액을1μL각각주입
하여얻어진크로마토그램상의
식물스테롤피크면적을5α-
콜레스탄피크면적으로나눈
값(Y축)과식물스테롤농도
(mg/mL,X축)로검량선을
작성한다.
5.2.2정성시험
위의조건에서얻어진크
로마토그램상의피크는어느
측정조건에서도표준용액피
크의머무름시간과일치하
여야한다.
5.2.3정량시험
정성시험과똑같은조건에서
얻어진시험결과에의해피
크면적법에따라정량한다.- 36 -현행 개정안
5.3계산
5.3.1개별식물스테롤함량
(mg/g)=C×(V1/S)×
(V3/V2)
C:검량선에서구한개별
식물스테롤시험용액의
농도(mg/mL)
S:검체량(g)
V1:추출에사용한톨루엔의
양(100mL)
V2:농축에사용된톨루엔
추출액의양(25mL)
V3:유도체화전잔사를녹
이는데사용한DMF의
양(3mL)
5.3.2식물스테롤함량(mg/g)
=베타-시토스테롤+캄페스테롤
+브라시카스테롤+스티그
마스테롤+스티그마스타놀- 37 -현행 개정안
3-39∼3-79(생략)3-39∼3-79(현행과같음)
제4.∼제5.(생략)제4.∼제5.(현행과같음)
[별표1]∼[별표5](생략)[별표1]∼[별표5](현행과같음)