DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
SECRETARIA DE SALUD  
PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY -NOM -127-SSA1 -2017, Agua para uso y consumo humano. 
Límites permisibles de la calidad del agua.  
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos. - Secretaría de Salud.  
JOSÉ ALONSO NOVELO BAEZA, Comisionado Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios y 
Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con 
fundamento en lo dispuesto por los artículos 39 de la Ley Orgánic a de la Administración Pública Federal; 4 de 
la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 3o ., fracción XIII, 13, apartado A, fracción I, 17 bis, fracciones 
II y III, 116, 118, fracción II y 119, fracción II de la Ley General de Salud; 38, fracción II, 40, fracción I, 43 y 47, 
fracción I de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 28 y 33 del Reglamento de la Ley Federal 
sobre Metrología y Normalización; 209 a 213, 214, fracciones I, II, III y V, 215 a 225 y 227 del Reglamento de 
la Ley General d e Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y 
Servicios; así como 3, fracciones I, incisos n), o) y s), y II, 10, fracción IV del Reglamento de la Comisión 
Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios; he ten ido a bien ordenar la publicación en el Di ario 
Oficial de la Federación el 
PROYECTO DE NORMA OFICIAL MEXICANA PROY -NOM -127-SSA1 -2017, AGUA PARA USO Y 
CONSUMO HUMANO. LÍMITES PER MISIBLES DE LA CALIDAD DEL AGUA  
El presente Proyecto se publica a efecto de que  los interesados, dentro de los 60 días naturales siguientes 
a la fecha de su publicación en el Diario Oficial de la Federación, presenten sus comentarios por escrito, en 
idioma español y con el sustento técnico correspondiente, ante el Comité Consultivo N acional de 
Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, sito en Oklahoma número 14, planta baja, colonia Nápoles, 
Alcaldía Benito Juárez, Código Postal 03810, Ciudad de México, teléfono 50805200, extensión 1333, correo 
electrónico rfs@cofepris.gob.mx.  
Durante el plazo mencionado y de conformidad con lo dispuesto por los artículos 45 y 47, fracción I de la 
Ley Federal sobre Metrología y Normalización, los documentos que sirvieron de base para la elaboración del 
Proyecto y su Análisis de Impacto Regulator io estarán a disposición del público en general, para su consulta, 
en el domicilio del mencionado Comité.  
PREFACIO  
En la elaboración de este Proyecto de Norma participaron:  
SECRETARÍA DE SALUD  
Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios  
SECRETARÍA DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES  
Comisión Nacional del Agua  
Instituto Mexicano de Tecnología del Agua  
SECRETARÍA DE ENERGÍA  
Comisión Nacional de Seguridad Nuclear y Salvaguardias  
SISTEMA DE AGUAS DE LA CIUDAD DE MÉXICO  
Subdirección de Contr ol de la Calidad del Agua  
COMISIÓN DEL AGUA DEL ESTADO DE MÉXICO  
Departamento del Laboratorio del Agua  
SERVICIOS DE AGUA Y DRENAJE DE MONTERREY, I.P.D.  
Laboratorio Central de Calidad de Aguas  
ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD  
Organización Panamericana de la  Salud  
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO  
Instituto de Ecología  
Laboratorio Nacional de Ciencias de la Sostenibilidad  
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL  
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUIS POTOSÍ  
Centro de Investigació n Aplicada en Ambiente y Salud  
Confederación de Cámaras Industriales de los Estados Unidos  Mexicanos  
Confederación Patronal de la República Mexicana  
Cámara Nacional de la Industria de Transformación  
Asociación Nacional de Empresas de Agua y Saneamiento de México, A.C.  
Laboratorios ABC Química Investigación y Análisis, S.A. de C.V.  
Laboratorios de Especialidades Inmunológicas, S.A. de C.V.  
ÍNDICE  
0. Introducción  
1. Objetivo y campo de aplicación  
2. Referencias normativas  
3. Términos y definiciones  
4. Símbolo s y términos abreviados  
5. Especificaciones sanitarias  
6. Métodos de prueba  
7. Concordancia con normas internacionales  
8.  Procedimiento de evaluación de la conformidad  
9. Bibliografía  
10. Observancia de la Norma  
11. Vigencia  
 Apéndice A Normativo. Parámet ros que conforman los grupos de compuestos orgánicos sintéticos  
 Apéndice B Normativo. Métodos de prueba  
 Apéndice C Informativo. Procesos propuestos para la potabilización del agua  
0. Introducción  
El abastecimiento  de agua para uso y consumo humano con ca lidad adecuada es fundamental para 
prevenir y evitar la transmisión de enfermedades relacionadas con el agua, para lo cual se requiere establecer 
y mantener actualizados los límites permisibles en cuanto a sus características físicas, químicas, 
microbiológ icas, y radiactivas, con el fin de asegurar y preservar la calidad del agua que se entrega al 
consumidor por los sistemas de abastecimiento de agua públicos y privados.  
Por tales razones la Secretaría de Salud, propone la emisión de la presente Norma Ofici al Mexicana, con 
la finalidad de establecer un eficaz control sanitario del agua que se somete a tratamientos de potabilización a 
efecto de hacerla apta para uso y consumo humano, acorde a las necesidades actuales.  
1. Objetivo y campo de aplicación  
1.1 Esta Norma establece los límites permisibles de calidad que debe cumplir el agua para uso y consumo 
humano.  
1.2 Esta Norma es de observancia obligatoria en el territorio nacional para los organismos responsables 
de los sistemas de abastecimiento de agua públi cos y privados.  
1.3 Esta Norma no es aplicable para aguas residuales tratadas.  
2. Referencias normativas  
Para la correcta aplicación de esta Norma, es necesario consultar las siguientes normas oficiales 
mexicanas o las que las sustituyan:  
2.1 Norma Oficial  Mexicana NOM -008-SCFI -2002, Sistema General de Unidades de Medida.  
2.2 Norma Oficial Mexicana NOM -117-SSA1 -1994, Bienes y servicios. Método de prueba para la 
determinación de cadmio, arsénico, plomo, estaño, cobre, fierro, zinc y mercurio en alimentos, ag ua potable  y 
agua purificada por espectrometría de absorción atómica.  
2.3 Norma Oficial Mexicana NOM -201-SSA1 -2015, Productos y servicios. Agua y hielo para consumo 
humano, envasados y a granel. Especificaciones sanitarias.  
2.4 Norma Oficial Mexicana  NOM -210-SSA1 -2014, Productos y servicios. Métodos de prueba 
microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos 
patógenos.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
3. Términos y definiciones  
Para los propósitos de esta Norma, se aplican los términos y defini ciones siguientes : 
3.1 Agua para uso y consumo humano,  a toda aquella que no causa efectos nocivos a la salud y que no 
presenta propiedades objetables o contaminantes en concentraciones fuera de los límites permisibles y que 
no proviene de aguas residuales  tratadas.  
3.2 Aguas residuales , a las de composición variada provenientes de las descargas de usos público, 
urbano, doméstico, industrial, comercial, de servicios, agrícola, pecuario, de las plantas de tratamiento y en 
general, de cualquier uso, así como la mezcla de ellas.  
3.3 Agua superficial , a la que fluye sobre la superficie del suelo a través de arroyos, canales y ríos, o que 
se almacene en lagos, embalses, ya sean naturales o artificiales.  
3.4 Brote , a la ocurrencia de dos o más casos asociados epid emiológicamente entre sí. La existencia de 
un caso único bajo vigilancia especial en un área donde no existía el padecimiento se considera también 
como brote.  
3.5 Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles fijos, al grupo de parámetros analíticos que 
comprende compuestos orgánicos con halógenos que no son volátiles.  
3.6 Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles purgables,  al grupo de parámetros analíticos que 
comprende compuestos orgánicos con halógenos que son volátiles.  
3.7 Compuestos orgánicos no ha logenados, al grupo de parámetros analíticos que comprende 
compuestos orgánicos semivolátiles sin halógenos.  
3.8 Desinfección, al proceso físico y/o químico utilizado para la eliminación, inactivación o destrucción de 
microorganismos patógenos en el agua.  
3.9 Emergencia,  a cualquier incidente o accidente en los componentes del sistema de abastecimiento de 
agua, que dé lugar a alteraciones en la calidad del agua que represente un riesgo a la salud de la población.  
3.10 Límite permisible,  al valor máximo o in tervalo de valores establecidos para los parámetros físicos, 
químicos, microbiológicos o radiactivos, que no deben excederse en el agua para uso y consumo humano.  
3.11 Método de prueba, al procedimiento analítico utilizado en el laboratorio para comprobar que el agua 
satisface las especificaciones de esta Norma.  
3.12 Organismo responsable , a la instancia encargada de operar, mantener y administrar el sistema de 
abastecimiento de agua con el fin de asegurar y preservar la calidad del agua que se entrega al c onsumidor 
por los sistemas de abastecimiento de agua públicos y privados, estableciendo un eficaz control sanitario del 
agua sometiéndola a tratamientos de potabilización a efecto de hacerla y mantenerla apta para uso y 
consumo humano.  
3.13 Potabilización,  al conjunto de operaciones y procesos, físicos, químicos y biológicos que se aplican 
al agua en los sistemas de abastecimiento de agua, a fin de hacerla apta para uso y consumo humano.  
3.14 Sistema de abastecimiento de agua, al conjunto intercomunicado o interconectado de fuentes, 
obras de captación, plantas potabilizadoras, tanques de almacenamiento y regulación, líneas de conducción y 
distribución, incluyendo vehículo cisterna que abastece de agua para uso y consumo humano, sean de 
propiedad pública o pr ivada.  
4. Símbolos y términos abreviados  
Cuando en esta Norma se haga referencia a los siguientes símbolos y abreviaturas, se entiende por:  
4.1 Bq becquerel  
4.2 Bq/L becquerel por Litro  
4.3 CaCO 3 carbonato de calcio  
4.4  DDT diclorodifeniltricloroetano  
4.5 Di prefijo en nomenclatura química que indica que el sustituyente se encuentra dos veces  
4.6 E. coli  Escherichia coli  
4.7 F- ión fluoruro  
4.8 L litro 
4.9 LR levo-rotativo  
4.10 mg miligramo  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
4.11 mL mililitro  
4.12 µg microgramo  
4.13 NMP  número más probable  
4.14 N-NO 3- nitrógeno de nitratos  
4.15 N-NO 2- nitrógeno de nitritos  
4.16 pH potencial de hidrógeno  
4.17 SO 4= sulfatos  
4.18 UC unidades de color  
4.19 UFC unidades formadoras de colonias  
4.20 UNT unidades nefelométricas de turbiedad  
4.21 2,4-D ácido 2,4 -diclorofenoxiacético  
4.22 2,4-DB ácido 2,4 -diclorofenoxibutírico  
4.23 2,4,5 -T ácido 2,4,5 triclorofenoxiacético  
4.24 2,4,5 -TP ácido 2,4,5 -triclorofenoxi propiónico  
4.25 < menor que  
5. Especificaciones sanitarias  
El agua para uso y consumo humano de los sistema s de abastecimiento debe cumplir con las siguientes 
especificaciones:  
5.1 El agua de los sistemas de abastecimiento no debe tener como fuente de abastecimiento agua 
residual tratada.  
5.2 Físicas:  
Tabla 1 - Especificaciones sanitarias físicas  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Turbiedad a 4.0 UNT 
pH 6.5 a 8.5  Unidades de pH  
Color Verdadero  15 UC 
a El límite permisible para Turbiedad será de 3.0 UNT a partir del año 2019.  
 
5.3 Químicas:  
Tabla 2 - Especificaciones sanitarias químicas  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Cianuros totales  0.07 mg/L  
Dureza total como CaCO 3 500.00  mg/L  
Fluoruros como F- a 1.50 mg/L  
Nitrógeno amoniacal  0.50 mg/L  
Nitrógeno de nitratos (N -NO 3-) 11.00  mg/L  
Nitrógeno de nitritos (N -NO 2-) 0.90 mg/L  
Sólidos disueltos total es 1000.00  mg/L  
Sulfatos (SO 4=) 400.00  mg/L  
Sustancias activas al azul de metileno  0.50 mg/L  
a El límite permisible para fluoruros será de 1.50 mg/L para todas las localidades y se ajustará de 
conformidad con la tabla de cumplimiento gradual Tabla 3 de este punto 5.3   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Tabla 3 - Tabla de cumplimiento gradual para fluoruro  
Localidad  Año Límite permisible  Unidades  
Mayor de 500,000 habitantes  2020  1.0 mg/L  
Entre 50,000 y 499,999 habitantes  2022  1.0 mg/L  
Menor de 50,000 habitantes  2025  1.0 mg/L  
 
5.4 Metal es y metaloides:  
Tabla 4 - Especificaciones sanitarias de metales y metaloides  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Aluminio  0.20 mg/L  
Arsénico a 0.025  mg/L  
Bario  1.3 mg/L  
Cadmio b 0.005  mg/L  
Cobre  2.00 mg/L  
Cromo total  0.05 mg/L  
Hierro  0.30 mg/L  
Manganeso  0.15 mg/L  
Mercurio  0.006  mg/L  
Níquel  0.07 mg/L  
Plomo  0.01 mg/L  
Selenio  0.04 mg/L  
NOTA 1 Los límites permisibles de metales y metaloides se refieren a su concentración total en el agua, la 
cual incluye los suspendidos y los disueltos.  
a El límite permisible para arsénico será de 0.025 mg/L para todas las localidades y se ajustará de 
conformidad con la tabla de cumplimiento gradual Tabla 5, de este punto 5.4.  
b El límite permisible para cadmio será de 0.005 mg/L para todas las localidades y s e ajustará de 
conformidad con la tabla de cumplimiento gradual Tabla 5, de este punto 5.4.  
 
Tabla 5 - Tabla de cumplimiento gradual para arsénico y cadmio  
Localidad  Año Límite 
permisible de 
arsénico  Límite 
permisible de 
cadmio  Unidades para 
arsénico y 
cadmio 
Mayor de 500,000 habitantes  2020  0.01 0.003  mg/L  
Entre 50,000 y 499,999 habitantes  2022  0.01 0.003  mg/L  
Menor de 50,000 habitantes  2025  0.01 0.003  mg/L  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
5.5 Microbiológicas:  
Tabla 6 - Especificaciones sanitarias microbiológicas  
Parámetros  Límite per misible  Unidades  
E. coli o 
Coliformes fecales u  
Organismos termotolerantes  <1.1 NMP/100 mL  
<1 UFC/100 mL  
Ausencia  Ausencia o Presencia/100mL  
Giardia lamblia  Ausencia  Quistes/20L  
NOTA 1 El organismo responsable debe seleccionar uno de los tres paráme tros para su análisis : E. coli o  
coliformes fecales u organismos termotolerantes.  
NOTA 2 Las unidades de medida (NMP/100mL; UFC/100mL; Ausencia o Presencia/100mL) corresponden 
a los tres métodos de prueba aceptados para el cumplimiento de esta Norma.  
NOT A 3 Giardia lamblia  debe determinarse sólo en caso de que el agua provenga de fuente superficial o 
que la fuente tenga influencia de agua superficial.  
 
5.6 Fitotoxinas:  
Tabla 7 - Especificaciones sanitarias de fitotoxinas  
Parámetros  Límite permisible  Unid ades  
Microcistina -LR 1.0 µg/L 
NOTA 1 La microcistina -LR se debe determinar cuando el agua proviene de una fuente superficial.  
 
5.7 Radiactividad:  
Tabla 8 - Especificaciones sanitarias de radiactividad  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Radiactividad  alfa total  0.5 Bq/L 
Radiactividad beta total  1.0 Bq/L 
 
5.8 Residuales de la desinfección:  
5.8.1  Si para la desinfección del agua se utiliza algún compuesto de cloro (hipoclorito de sodio o de calcio, 
gas cloro o dióxido de cloro) debe medirse cloro res idual libre.  
5.8.2  Si para la desinfección del agua se utiliza yodo debe medirse yodo residual libre.  
5.8.3  Si para la desinfección del agua se utiliza cualquier forma de plata debe medirse plata total.  
 
Tabla 9 - Especificaciones sanitarias de residuales de la desinfección  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Cloro residual libre  0.2 a 1.5  mg/L  
Yodo residual libre  0.2 a 1.5  mg/L  
Plata total  0.05 a 0.1  mg/L  
 
5.8.4  La Secretaría de Salud determinará si un agente diferente a los establecidos en la Tabla 9 puede ser 
utilizado para la desinfección de agua para uso y consumo humano.  
5.8.5  En caso de un brote, para garantizar la protección a la población, la Secretaría de Salud determinará 
el agente desinfectante del agua y el intervalo de concentración de lo s residuales de desinfección.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
5.9 Subproductos de la desinfección.  
5.9.1 Si el agua se desinfecta con algún compuesto de cloro se deben medir los subproductos de la 
desinfección: trihalometanos y ácidos haloacéticos, de conformidad con lo establecido en la s Tablas 10 y 11 
de esta Norma.  
Tabla 10 - Especificaciones sanitarias de subproductos de la desinfección - trihalometanos  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Bromodiclorometano  60 µg/L 
Bromoformo  100 µg/L 
Cloroformo  300 µg/L 
Dibromoclorometano  100 µg/L 
 
Tabla 11 - Especificaciones sanitarias de subproductos de la desinfección - ácidos haloacéticos  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Ácido cloroacético  20 µg/L 
Ácido dicloroacético  50 µg/L 
Ácido tricloroacético  200 µg/L 
 
5.9.2  Si el agua se desi nfecta con ozono, se deben medir los subproductos de la desinfección: aniones y 
carbonilos, de conformidad con lo establecido en las Tablas 12 y 13 de esta Norma.  
 
Tabla 12 - Especificaciones sanitarias de subproductos de la desinfección - aniones  
Parámetr os Límite permisible  Unidades  
Bromatos  10 µg/L 
Cloratos  700 µg/L 
Cloritos  700 µg/L 
 
Tabla 13 - Especificaciones sanitarias de subproductos de la desinfección - carbonilos  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Formaldehído  900 µg/L 
 
5.10 Compuestos or gánicos sintéticos:  
Tabla 14 - Especificaciones sanitarias de compuestos orgánicos sintéticos  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
Compuestos orgánicos halogenados adsorbibles fijos  0.01 mg/L  
Compuestos orgánicos no halogenados  0.025  mg/L  
Compuestos or gánicos halogenados adsorbibles purgables  0.005  mg/L  
Compuestos orgánicos 
volátiles no halogenados  Benceno  10 µg/L 
Estireno  20 µg/L 
Etilbenceno  300 µg/L 
Tolueno  700 µg/L 
Xilenos  
(suma de isómeros orto, meta y para)  500 µg/L Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
5.10.1  En caso de sobr epasar alguno de los límites permisibles de los grupos de compuestos orgánicos 
sintéticos de la Tabla 14 de esta Norma, el organismo responsable deberá analizar los compuestos orgánicos 
asociados establecidos en el Apéndice A Normativo de esta Norma corres pondientes al grupo de compuestos 
orgánicos sintéticos que sobrepase el límite permisible.  
5.11 Cuando se excedan los límites permisibles expuestos en este Capítulo, se deben aplicar los procesos 
de tratamiento adecuados para su remoción, entre los cuales puede aplicar el que corresponda, de los 
referidos en el Apéndice C Informativo de esta Norma o cualquier otro que sea efectivo para la remoción  del 
contaminante.  
5.12 En caso de alguna emergencia (ver inciso 3.9 de esta Norma), la Secretaría de Salud defi nirá los 
parámetros y límites aplicables al agua destinada para uso y consumo humano, conforme a lo dispuesto por el 
artículo 116 de la Ley General de Salud.  
6. Métodos de prueba  
6.1 Para la determinación de las especificaciones fisicoquímicas de agua, se deben aplicar los métodos 
que establecen las normas oficiales mexicanas citadas en los puntos 2.2 y 2.3 del Capítulo de Referencias 
normativas o los establecidos en el Apéndice B Normativo, Métodos de prueba de esta Norma.  
6.2 Para la determinación de las especificaciones microbiológicas de agua, se deben aplicar los métodos 
de prueba que establece la norma oficial mexicana citada en el punto 2.4 del Capítulo de Referencias 
normativas o los establecidos en el Apéndice B Normativo Métodos de prueba de esta N orma.  
7. Concordancia con normas internacionales  
Esta Norma no es concordante con ninguna Norma Internacional.  
8. Procedimiento de evaluación de la conformidad  
La evaluación de la conformidad podrá ser solicitada a instancia de parte por el responsable san itario, el 
representante legal o la persona que tenga las facultades para ello, ante la autoridad competente o las 
personas acreditadas y autorizadas para tales efectos.  
9. Bibliografía  
9.1 American Public Health Association (2012). Standard Methods for th e Examination of Water and 
Wastewater, 22nd Edition. Washington D.C. EUA.  
9.2 American Water Works Association (2000). Water Quality and Treatment: A Handbook of Community 
Water Supplies, 5th Edition, McGraw Hill Inc, USA.  
9.3 Betancourt -Lineares, A., Irig oyen -Camacho, ME., Mejía -González, A., Zepeda -Zepeda, M. & Sánchez -
Pérez, L. (2013). Prevalencia de Fluorósis Dental en Localidades Mexicanas Ubicadas en 27 Estados y el DF. 
A Seis Años de la Publicación de la Norma Oficial Mexicana para la Fluoruración de  la Sal. Revista de 
Investigación Clínica. 65, (3) 23, pp 7 -24. 
9.4 Bocanegra -Salazar, M., Landín -Rodríguez, LE. & Ortíz -Pérez, MD. (2006). Tesis: Evaluación de la 
Contaminación por Flúor y Arsénico en el Agua de Pozo para Consumo Humano de las Zonas Centr o, 
Altiplano y media del Estado de San Luis Potosí. Universidad Autónoma de San Luis Potosí.  
9.5 Comisión Nacional del Agua (2015). Manual de Agua Potable, Alcantarillado y Saneamiento (Mapas).  
9.6 Programa de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente. 20 01. Convenio de Estocolmo sobre 
Contaminantes Orgánicos Persistentes. UNEP.  
9.7 Das K, Mondal NK. (2016). Dental fluorosis and urinary fluoride concentration as a reflection of fluoride 
exposure and its impact on IQ level and BMI of children of Laxmisagar,  Simlapal Block of Bankura District, 
W.B., India. Environmental Monitoring & Assessment 188(4):218.  
9.8 Environmental Protection Agency (2010). Guidelines for Design of Small Public Ground Water 
Systems. Fourth Edition. Division of drinking and groundwater . Ohio. p76.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
9.9 Hurtado -Jiménez, R. & Gardea -Torresdey, JL. (2006). Arsenic in Drinking Water in the Los Altos de 
Jalisco Region of Mexico. Rev. Panam. Salud Pública. 20, (4): pp 236 –47. 
9.10 Khan SA, et al. (2015). Relationship between dental fluorosis a nd intelligence quotient of school going 
children in and around Lucknow district: a cross -sectional study. Journal of Clinical & Diagnostic Research 
9(11):ZC10 -15. 
9.11 Ley de Aguas Nacionales.  
9.12 Loyola -Rodríguez, JP., Pozos -Guillén AJ., Hernández -Guerr ero, JC. & Hernández -Sierra JF. (2000). 
Fluorosis en Dentición Temporal en un Área con Hidrofluorosis Endémica. Salud Pública de México. 42,  pp 
194-200. 
9.13 Mondal D, et al. (2016). Inferring the fluoride hydrogeochemistry and effect of consuming fluoride -
contaminated drinking water on human health in some endemic areas of Birbhum district, West Bengal. 
Environmental Geochemistry & Health 38(2):557 -76. 
9.14 Norma Oficial Mexicana NOM -017-SSA2 -2012. Para la Vigilancia Epidemiológica.  
http://dof.gob.mx/nota_ detalle.php?codigo=5288225&fecha=19/02/2013  
9.15 Panduro Rivera, MG. (2015). Evaluación de la Calidad del Agua Ante la Enfermedad Renal Crónica 
en la Zona Oriente de Michoacán. Tesis Maestro de Maestría. Centro de Investigación y Asistencia en 
Tecnología y  Diseño del Estado de Jalisco, AC.  
9.16 Sebastian ST, Sunitha S. 2015. A cross -sectional study to assess the intelligence quotient (IQ) of 
school going children aged 10 -12 years in villages of Mysore district, India with different fluoride levels. Journal 
of the Indian Society of Pedodontics and Preventive Dentistry 33(4):307 -11. 
9.17 Secretaría de Salud (2012). Manual de Procedimientos Estandarizados para la Vigilancia 
Epidemiológica de las Patologías Bucales.  
http://www.cenaprece.salud.gob.mx/programas/in terior/saludbucal/descargas/pdf/20_2012_Manual_PatBu
cales_vFinal.pdf  
9.18 World Health Organization (2017). Guidelines for Drinking -Water Quality. 4a edición incorporando el 
primer addendum.  
9.19 World Health Organization (2010). Diez sustancias químicas q ue constiut yen una preocupación para 
la salud pública.  
http://www.who.int/ipcs/assessment/public_health/chemicals_phc/es/  
10. Observancia de la Norma  
La vigilancia del cumplimiento de esta Norma corresponde a la Secretaría de Salud a través de la 
Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios y a los gobiernos de las entidades federativas, 
en sus respectivos ámbitos de competencia.  
11. Vigencia  
Esta Norma entrará en vigor a los 360 días naturales contados a partir del día siguiente de su publ icación 
en el Diario Oficial de la Federación.  
TRANSITORIO  
ÚNICO. - La entrada en vigor de la presente Norma, deja sin efectos a la Modificación a la Norma Oficial 
Mexicana NOM -127-SSA1 -1994, Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisib les de 
calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización, publicada en el Diario Oficial  de 
la Federación el 22 de noviembre de 2000.  
Ciudad de México , a 10 de octubre de 2019. - El Comisionado Federal para la Protección contra Ries gos 
Sanitarios y Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario , 
José Alonso Novelo Baeza .- Rúbrica.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
APÉNDICE A  
NORMATIVO  
Parámetros que conforman los grupos de compuestos orgánicos sintéticos  
Tabla A.1 Límites  permisibles de compuestos orgánicos halogenados a dsorbibles fijos  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
COMPUESTOS ORGANICOS SEMIVOLATILES CLORADOS  
Hexaclorobutadieno  0.60 µg/L 
Pentaclorofenol  9.0 µg/L 
2,4,6 Triclorofenol  200 µg/L 
Epiclorohidrina  0.40 µg/L 
PLAGUICIDAS CLORADOS  
Alacloro  20 µg/L 
Combinación Aldrin + Dieldrin  0.03 µg/L 
Atrazina  100 µg/L 
Clordano (total de isómeros)  0.20 µg/L 
Cianazina  0.60 µg/L 
DDT y metabolitos  1.0 µg/L 
Endrin  0.60 µg/L 
Lindano  2.0 µg/L 
Metolacloro  10 µg/L 
Metoxicloro  20 µg/L 
Pendimetalina  20 µg/L 
Terbutilazina  7.0 µg/L 
Trifluralina  20 µg/L 
HERBICIDAS CLORADOS  
2,4-D 30 µg/L 
2,4,5 -T  9.0 µg/L 
2,4,5 -TP  9.0 µg/L 
2,4-DB  90 µg/L 
Diclorprop  100 µg/L 
Mecoprop  10 µg/L 
PLAGUICIDAS CLORADOS DERIVADOS DE UREA  
Clorotoluron  30 µg/L  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Tabla A.2 Límites permisibles de compuestos o rgánicos no halogenados  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
CARBAMATOS Y COMPUESTOS ORGÁNICOS SEMIVOLÁTILES  
Aldicarb  10 µg/L 
Carbofurán  7.0 µg/L 
Ácido edético  600 µg/L 
Ácido nitrilotriacético  200 µg/L 
Acrilamida  0.50 µg/L 
HIDROCARBUROS POLIAROMÁTICOS  
Benzo(a)pireno  0.70 µg/L 
PLAGUICIDAS FOSFORADOS  
Clorpirifos  30 µg/L 
Dimetoato  6.0 µg/L 
Molinato  6.0 µg/L 
Simazina  2.0 µg/L 
COMPUESTOS ORGÁNICOS SEMIVOLÁTILES NO CLORADOS  
Di-(2-Etilhexil) ftalato  8.0 µg/L 
PLAGUICIDAS NO CLORADOS DERIVADOS DE UREA  
Isoproturon  9.0 µg/L 
 
Tabla A.3 Límites permisibles de compuestos orgánicos halogenados a dsorbibles purgables  
Parámetros  Límite permisible  Unidades  
COMPUESTOS ORGÁNICOS HALO GENADOS VOLÁTILES  
1,2-Diclorobenceno  1000  µg/L 
1,2-Dicloroeteno (cis + trans)  50 µg/L 
1,2-Dicloropropano  40 µg/L 
1,2-Dicloroetano  30 µg/L 
1,3-Dicloropropeno (cis + trans)  20 µg/L 
1,4-Diclorobenceno  300 µg/L 
Cloruro de Vinilo  0.30 µg/L 
Dicloromet ano 20 µg/L 
Tetracloroeteno  40 µg/L 
Tetracloruro de carbono  4.0 µg/L 
Tricloroeteno  20 µg/L 
1,2-dibromoetano  0.40 µg/L 
1,2-dibromo -3-cloropropano  1.0 µg/L Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
APÉNDICE B NORMATIVO  
Métodos de prueba  
B.1 MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE MICROCISTINA EN AGU A PARA USO Y CONSUMO 
HUMANO  
Para el cumplimiento de esta Norma, se deberá utilizar el método de ELISA cualitativo de respuesta  rápida 
(screening) para la determinación de microcistinas y nodularinas totales, contenido en el punto  B.1.1  de este 
Apéndice).  
En caso de que dicho método resulte en la ausencia de microcistinas o nodularinas totales no será 
necesario llevar a cabo ningún método confirmatorio adicional.  
En caso de que dicho método resulte en la presencia de microcistinas o nodularinas totales deber á de 
llevarse a cabo alguno de los dos métodos cuantitativos confirmatorios siguientes:  
 Método para la determinación de microcistinas y nodularinas en agua de uso y consumo humano por 
extracción e n fase sólida y cromatografía lí quida/espectrometría de masa s en tándem (LC/MS/MS), 
contenido en el punto B.1.2 de este Apéndice.  
 Método para la determinación de microcistina mediante SPE y la cromatografía de líquidos de alto 
rendimiento (HPLC) con detección (UV) ultravioleta, contenido en el punto B.1.3 de este A péndice.  
Sin embargo, para la determinación de microcistina -LR podrá optarse por determinar directamente dicha 
sustancia a través de los métodos confirmatorios cuantitativos descritos en los puntos B.1.2 y B.1.3 de este 
Apéndice, sin llevar a cabo el métod o de screening ELISA (B.1.1, de este Apéndice).  
B.1.1 MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE MICROCISTINAS Y NODULARINAS TOTALES  EN 
AGUA DE USO Y CONSUMO HUMANO MEDIANTE EL ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO ADDA  
B.1.1.1 Definiciones y términos  
Agua grado reactivo , al agua  purificada que no contiene ninguna cantidad cuantificable de microcistinas, 
nodularinas o compuestos que interfieran en o por encima de la media del MRL.  
Blanco de reactivo de laboratorio (LRB) , a la alícuota de agua grado reactivo lisada y filtrada para 
coincidir en el mismo procedimiento analítico utilizado para las muestras de campo. El LRB se utiliza para 
determinar si se introducen microcistinas u otras interferencias por medio de los recipientes de la muestra, los 
equipos de procesamiento de muestras  o los reactivos utilizados en el ensayo.  
Blanco fortificado de laboratorio (LFB) , a la alícuota de agua grado reactivo a la que se añade una 
cantidad conocida de MC -LR. El LFB es lisado y filtrado para coincidir en el mismo procedimiento analítico 
utiliza do para las muestras de campo. El LFB se utiliza durante la IDC para verificar el rendimiento del método 
con precisión y exactitud. El LFB también es un elemento de control de calidad requerido con cada lote de 
análisis. Los resultados del LFB verifican el  rendimiento del método en ausencia de matriz de muestra.  
Concentración más baja del nivel mínimo reportado (LCMRL) , al punto de concentración más baja, tal 
que la probabilidad de recobro se encuentre entre el 50 y 150% con al menos 99% de confianza.  
Curva  de calibración , a los puntos de calibración se modelan utilizando una función logística de cuatro 
parámetros, relacionando la concentración (eje x) con la absorbancia medida en los pozos (eje y). A 
continuación se presenta un ejemplo de curva de calibraci ón generada durante el desarrollo del método. Es 
importante observar la relación inversa entre la concentración y la respuesta (absorbancia).   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.1.1 -1. Curva de calibración de ELISA con cálculo de la EC 50. El eje 
x se encuentra en escala logarítmica.  
El estándar de calibración cero proporciona la absorbancia más alta y el estándar de calibración más alto 
proporciona la absorbancia más baja. De igual manera, es importante observar también que la pendiente, o 
sensibilidad, de la respuesta ELISA es mayor  en el centro de la curva y tiende a una pendiente de cero a 
concentraciones extremadamente bajas y altas. Para una explicación más detallada del modelo de calibración 
de cuatro parámetros pueden revisarse referencias específicas como Maciel (1985) y Sasak i (2016).  
Ecuación logística de cuatro parámetros:  
 
En donde:  
 y absorbancia  
 x concentración  
 a absorbancia en la meseta inferior  
 b pendiente en el punto de inflexión  
 c concentración en el punto de inflexión = EC 50 
 d absorbancia en la meseta superior  
Los coeficientes a, b, c y d, son calculados por el software de reducción de datos usando análisis  de 
regresión.  
Duplicado de la matriz de muestra fortificada en laboratorio (LFSMD) , a la segunda alícuota de la 
muestra de campo utilizada para preparar el L FSM que se fortifica y ensaya en el mismo lote de análisis  que 
el LFSM. El LFSMD se utiliza para verificar la precisión del método en las matrices de agua de uso y consumo 
humano.  
EC50, a la concentración de microcistina que produce una absorbancia media e ntre la meseta inferior de la 
curva de calibración (coeficiente a) y la meseta superior (coeficiente d). La EC 50 es la concentración en el 
punto de inflexión (Fig. B.1.1 -1 de este Apéndice B) y está en el centro del intervalo de medición más 
confiable (es decir, la mayor pendiente) de la ELISA.  
Para cada curva de calibración, la EC 50 es igual al coeficiente c, del ajuste logístico de cuatro parámetros. 
El EC 50 se encuentra en el informe de calibración generado por el lector de placas.  
Debido a que la EC 50 está en el centro del intervalo de medición más confiable, la guía para fortificar 
muestras de control de calidad se basa en este valor. Para este método, las muestras de control de calidad 
que requieren ser fortificadas con MC -LR deben tener concentracione s cerca de la EC 50. Estas muestras de 
control de calidad incluyen blancos fortificados de laboratorio y matriz de muestras fortificadas de laboratorio.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Estándar de calibración,  soluciones de MC -LR suministradas en el kit de la prueba de ELISA o 
preparadas en el laboratorio, que son apropiadas para el rango de medición del kit de ELISA.  
Solución estándar de dilución primaria (PDS) , solución de MC -LR en metanol (o el indicado por el 
fabricante) preparado a partir de la solución estándar MC -LR. Las soluciones de PDS se utilizan para fortificar 
muestras de control de calidad (LFB, LFSM y LFSMD).  
Estándar de verificación de calibración de bajo alcance (LOW -CV), estándar de calibración con una 
concentración igual o inferior al MRL. El propósito de la LOW -CV es con firmar la exactitud de la calibración en 
concentraciones cercanas al MRL.  
Lote de análisis , los estándares, muestras y elementos de control de calidad se ensayan en una sola 
placa de 96 pozos usando lotes idénticos de reactivos y pozos. Cada placa por defi nición es un lote de 
análisis, independientemente del número de pozos incluidos. Las muestras de control de calidad deben 
analizarse en cada lote de análisis a las frecuencias descritas. Cada lote de análisis incluye los siguientes 
elementos:  
• Estándares de calibración  
• Blancos de reactivo de laboratorio  
• Estándar de verificación de calibración de bajo alcance  
• Blancos fortificados de laboratorio  
• Muestras de campo (agua de uso y consumo humano)  
• Matriz de muestras fortificadas en laboratorio y duplic ados de las matrices de muestras fortificadas  en 
laboratorio.  
Matriz de muestra fortificada en laboratorio (LFSM) , alícuota de una muestra de campo a la que se 
añade una cantidad conocida de MC -LR. El propósito de la LFSM es determinar si la matriz de la m uestra 
contribuye a los resultados analíticos.  
Muestra de control de calidad (QCS) , solución que contiene MC -LR en una concentración conocida que 
se obtiene de una fuente diferente de la fuente de los estándares de calibración. El propósito de la QCS es 
verificar la exactitud de los estándares de calibración primaria.  
Nivel mínimo reportado (MRL) , concentración mínima que puede ser reportada por un laboratorio como 
un valor cuantificado para microcistinas y nodularinas totales en una muestra después del aná lisis. Esta 
concentración no debe ser inferior a la concentración del estándar de calibración más bajo y debe cumplir con 
los criterios de control de calidad.  
Pozos replica, dentro del lote de análisis, este método requiere que cada estándar de calibración , 
muestra de campo y muestra de control de calidad se ensayen en dos pozos. Estos dos pozos se denominan 
pozos replica. A cada pozo replica se asocian dos valores: la absorbancia medida por el lector de placas y la 
concentración calculada a partir de esta absorbancia.  
Para cada conjunto de pozos replica, el coeficiente de variación porcentual (% CV) se calcula a partir de 
los dos valores de absorbancia. El %CV de los valores de absorbancia para los estándares de calibración 
debe cumplir con los criterios de  control de calidad especificados. El %CV de los valores de absorbancia para 
todas las muestras de campo y las muestras de control de calidad deben cumplir con los criterios de control 
de calidad.  
Para cada conjunto de pozos replica, se calcula la concentr ación media de los dos valores de 
concentración. La concentración media debe usarse para reportar los resultados de la muestra de campo. La 
media debe utilizarse en todos los cálculos del método y para evaluar los resultados con respecto a los límites 
de control de calidad.  
Solución estándar , estándar concentrado en metanol (o el indicado por el fabricante) que se prepara en 
el laboratorio a partir de MC -LR purificada o que se adquiere de una fuente comercial con un certificado  de 
análisis.  
B.1.1.2 Símbolos  y términos abreviados  
(4E, 6E)  posición espacial de los alquenos en la molécula  
°C grado Celsius  
DPD  N, N-dietil-p-fenilendiamina  
IDC demostración inicial de capacidad   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
LCMRL  concentración más baja del nivel mínimo reportado  
LFB blanco fortificado de labor atorio  
LFSM  matriz de muestra fortificada en laboratorio  
LFSMD  duplicado de la matriz de muestra fortificada en laboratorio  
LOW -CV estándar de verificación de calibración de bajo alcance  
LRB  blanco de reactivo de laboratorio  
MC microcistina  
MC/NOD  relació n microcistina entre nodularina  
MC-LR microcistina -LR 
mm milímetro  
MRL  nivel mínimo reportado  
µg/ml microgramo/mililitro  
µm micrómetro  
µL microlitro  
nm nanómetro  
NOD  nodularina  
NOD -R Nodularina -R 
PDS solución estándar de dilución primaria  
PIR intervalo de predicción de resultados  
PTFE  politetrafluoroetileno  
QCS  muestra de control de calidad  
RPD  diferencia porcentual relativa  
r2 cuadrado del coeficiente de correlación  
% por ciento  
%CV  coeficiente de variación porcentual  
%R porcentaje promedio de recuperación  
%RSD  porcentaje de desviación estándar relativa  
≤ menor o igual a  
> mayor a  
≥ mayor o igual a  
B.1.1.3 Principio  
El método descrito es un procedimiento mediante ensayo inmunoenzimático (ELISA). Este método se 
basa en un sistema de placas de microtitulación de 96 pozos, en estos pozos, las microcistinas y  nodularinas 
presentes en la muestra y proteína análoga de microcistina inmovilizada en los pozos, compiten por los sitios 
de unión de un anticuerpo de detección primaria en solución.  
Después de una etapa de lavado, se añade un conjugado enzimático a los p ozos y se une al anticuerpo 
primario en una relación inversa con la concentración original de microcistinas y nodularinas en la muestra. 
Después de un segundo paso de lavado, se añade substrato de tetrametilbenzidina para desarrollar color a 
través de una reacción enzimática.  
Tras un período establecido, se añade una solución ácida a cada pozo para detener la generación de 
color. Finalmente, la absorbancia de cada pozo se mide utilizando un lector de placas y la concentración  de 
microcistinas y nodularinas se calcula utilizando una curva de calibración logística de cuatro parámetros.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.1.1.4 Alcance y aplicación  
El método descrito es un procedimiento para la determinación de microcistinas (MC) y nodularinas (NOD) 
"totales" en agua de uso y consumo humano (an tes y después del tratamiento). El término "microcistinas y 
nodularinas totales" se define como la suma de todos los congéneres independientes, tanto de microcistinas 
intracelulares y extracelulares, como de nodularinas que es medible en una muestra. Este método determina 
la concentración total basada en la detección de una característica común a los congéneres (variantes 
estructurales) de microcistina y nodularina, específicamente la cadena lateral de aminoácidos Adda: Ácido 
(4E, 6E) -3-amino -9-metoxi -2,6,8 -trimetil -10-fenildeca -4,6-dienoico (Fischer et al., 2001). Con la finalidad de 
asegurar la comparabilidad entre los laboratorios, el ELISA se calibra contra el congénere Microcistina -LR 
(MC-LR) (CASRN 101043 -37-2). 
B.1.1.5 Equipos y materiales  
Las referen cias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificacio nes adecuadas para los artículos.  
Contenedores de muestras . Botellas de vidrio ámbar con tapas con rosca de politetrafluoroetileno 
(PTFE). Se recomienda el uso de contenedores de muestras. Si se reutilizan contenedores de muestra deben 
de llevarse a cabo b uenas prácticas de laboratorio para la limpieza. No deben utilizarse botellas tratadas a alta 
temperatura en un horno de mufla (400 °C y superiores) como procedimiento de limpieza. Los estudios 
existentes indican una tendencia a que las microcistinas y las  nodularinas se adsorben en la superficie de la 
cristalería limpiada repetidamente por calentamiento en un horno de mufla.  
Cubiertas de placas adhesivas . Película adhesiva transparente para sellar los pozos durante las etapas 
de incubación del ensayo (VWR no. 60941 -120).  
Filtros de jeringa para filtrado de muestras después de la lisis . Pueden utilizarse filtros de fibra de 
vidrio de 25mm, con un tamaño de poro de 1.2 µm y carcasa de polipropileno (Environmental Express no. 
SF012G) o filtros de fibra de vidri o de 25 mm, con un tamaño de poro de 0.45 µm y carcasa de polipropileno 
(GE Healthcare Life Sciences/Whatman no. 6894 -2504).  
Jeringas para filtrado de muestras después de la lisis . Pueden utilizarse jeringas de cristal con cerrado 
Luer-lock que no permita e l paso de aire, de 5mL de capacidad (Hamilton Co. no. 1005TLL) o jeringas de 
plástico con cerrado Luer -lock que no permita el paso de aire, con una capacidad de 3 mL y cilindros de 
polietileno y émbolos de polipropileno (Thermo Fisher Scientific, Inc. no. S7515 -3). 
Kit de prueba de ELISA Adda . Ensayo competitivo indirecto basado en la detección del epítopo  Adda 
(Abraxis no. 520011OH o equivalente). Pueden usarse sistemas automatizados para procesar la placa de 96 
pozos.  
Lector de Placas . Lector de placas de  microtitulación y software asociado con la capacidad de  determinar 
la absorbancia a 450 nm y construir una curva de calibración utilizando una función logística  de cuatro 
parámetros.  
Pipeta de repetición . Pipeta electrónica de repetición HandyStep ® con pu ntas desechables de 5 ml 
(Wertheim, Alemania). Se recomienda una pipeta electrónica de repetición para la adición del anticuerpo a los 
pozos, el conjugado enzimático, el sustrato y la solución de paro.  
Pipeta multicana l. Pipeta de ocho canales con 250 µL de  capacidad por canal y puntas de pipeta de 
polipropileno. Se recomienda para la adición a los pozos de la solución de lavado.  
Pipeta para carga de pozos . Pipetas manuales ajustables o de volumen fijo con capacidad de 50 µL y 
puntas de pipeta recomendadas po r el fabricante. Se recomienda para la adición a los pozos de los 
estándares, las muestras de campo y las muestras de control de calidad.  
Recipiente para la solución de lavado . Recipiente de plástico diseñado para pipetas multicanal (VWR 
no. 21007 -970). Se  recomienda que tenga una capacidad de 55 mL.  
Viales de cuatro mililitros . Pueden utilizarse viales de vidrio de borosilicato, con tapas que contengan 
empaques de PTFE. Se recomiendan para colocar y almacenar el filtrado de la muestra después de la lisis.  
Viales de quince a cuarenta mililitros . Los viales utilizados deben de ser de vidrio de borosilicato, 
transparentes o ámbar, con tapas con empaques de PTFE. Se recomiendan viales con capacidad en este 
rango para el procedimiento de lisis. No deben utilizar se botellas tratadas en un horno de mufla a alta 
temperatura como procedimiento de limpieza.  
B.1.1.6 Reactivos y soluciones  
Agente reductor de cloro residual . El tiosulfato de sodio (no. CAS 7772 -98-7) se utiliza para reducir el 
cloro residual en las muest ras de agua potable en el momento de la recolección.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Estándares de calibración . Se recomienda el uso de los estándares de calibración suministrados en los 
kits ELISA. Se permiten los estándares de calibración preparados en el laboratorio. Los laboratorios deben 
utilizar prácticas apropiadas de control de calidad para determinar cuándo deben reemplazarse  los 
estándares.  
Solvente regular y para PDS . El metanol (no. CAS 67 -56-1) o el indicado por el fabricante; se usa para 
reconstituir MC -LR si este material s e adquiere como un sólido, y para diluir el material de MC -LR para 
preparar soluciones PDS.  
Soluciones y PDS de MC -LR. Se recomienda obtener la MC -LR (no. CAS 101043 -37-2) como una 
solución con una concentración de al menos 10 µg/mL o como el material puro . En caso de que sea como 
material puro, este debe de reconstituirse en metanol para obtener una solución con una concentración de al 
menos 10 µg/mL. Esta solución de MC -LR debe diluirse con metanol para preparar soluciones PDS. Las 
concentraciones de MC -LR para soluciones PDS deben de ser seleccionadas de tal manera que al menos se 
utilicen 5 µL para fortificar muestras de control de calidad o para preparar estándares de calibración. Más de 
una concentración de solución PDS puede ser necesaria para cumplir con este requisito.  
B.1.1.7 Procedimiento  
B.1.1.7.1 Recolección, conservación y almacenamiento de muestras  
Antes del salir a colectar las muestras, debe agregarse tiosulfato de sodio a cada botella de muestra. La 
concentración final de tiosulfato sódico en  la muestra debe ser de 100 mg/L. El tiosulfato de sodio no debe de 
diluirse en agua al preparar las botellas para las muestras. El agente reductor debe añadirse a la botella vacía 
en forma sólida. En el campo, abra el grifo y deje que el sistema se descar gue durante aproximadamente 5 
minutos. Llenar cada botella, teniendo cuidado de no eliminar el tiosulfato de sodio, e invertir varias veces 
para mezclar la muestra con el agente reductor.  
Colecte suficiente muestra para cumplir con los requisitos de este m étodo. Para el tamaño de la muestra 
debe de considerarse un volumen suficiente para preparar las muestras de control de calidad y el volumen 
apropiado para el almacenamiento congelado.  
No debe utilizarse ácido ascórbico para reducir el cloro en las muestra s de agua de uso y consumo 
humano. Durante los estudios para evaluar la estabilidad de las microcistinas durante el transporte y el 
almacenamiento, se ha descrito que éstas se degradan en presencia de ácido ascórbico.  
La adición de tiosulfato de sodio no e s necesaria para agua de uso y consumo humano antes del 
tratamiento (muestras colectadas antes de la entrada al sistema de tratamiento), sin embargo, puede añadirse 
si el laboratorio elige preparar un solo tipo de contenedor de muestra.  
Las muestras deben ser refrigeradas durante el envío y no deben exceder los 10 °C durante las primeras 
48 horas después de la recolección.  
Se debe confirmar que las muestras están por debajo o igual a 10 °C cuando se reciben en el laboratorio. 
Una temperatura superior a 10 ° C es aceptable en aquellos casos en los que el tiempo de traslado es corto y 
las muestras no tienen tiempo suficiente para alcanzar la temperatura mencionada. En este caso, deben 
revisarse las bolsas de hielo en las hieleras de transporte. Si estas aún per manecen congeladas, las muestras 
pueden considerarse válidas. Las muestras deben de ser congeladas al llegar al laboratorio.  
Para muestras de agua de uso y consumo humano que ha pasado a  través de un sistema de tratamiento, 
debe analizarse una muestra de c ada hielera de transporte utilizando ensayos comunes para determinar el 
cloro libre residual, por ejemplo, la técnica colorimétrica N, N -dietil-p-fenilendiamina (DPD). La concentración 
total de cloro debe ser menor que el límite de detección del ensayo. Se  puede recoger una muestra duplicada 
para llevar a cabo el ensayo de cloro libre residual.  
Para el almacenamiento en congelación, deben utilizarse botellas de vidrio de borosilicato, claras o ámbar, 
con tapas con empaques de PTFE. Seleccione la capacidad d e la botella y el volumen de la muestra para 
evitar la ruptura de las botellas durante la congelación. Planee con anticipación para contar con suficiente 
volumen para preparar muestras de control de calidad como se requiere en este método.  
Las muestras deb en de ser analizadas lo antes posible. Las muestras que se colectan y almacenan deben 
analizarse dentro de los 14 días posteriores a la recolección. Este periodo de 14 días se estableció como un 
tiempo de retención seguro basado en la evidencia empírica: d urante el desarrollo del método, se observó la 
degradación de microcistinas en dos matrices de agua potable después de tres semanas de almacenamiento 
en congelación.  
Las muestras pueden filtrarse y analizarse en cualquier momento después de lisis, dentro d e los 14 días 
posteriores a la recolección. Si no se analizan inmediatamente, las muestras lisadas pueden almacenarse 
mediante congelación en viales de vidrio con tapas con empaques de PTFE, por ejemplo, 1 ml de muestra 
lisada y filtrada contenida en un vi al de 4 ml.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.1.1.7.2 Procedimiento analítico  
Este apartado describe el procedimiento para preparar las muestras y procesar la placa de microtitulación 
para realizar el ELISA. Fortifique las muestras QC antes de la etapa de lisis (LFB, LFSM y LFSMD). Si la s 
muestras se congelaron, es aceptable fortificar después de este primer ciclo de lisis.  
Mezclar completamente e inmediatamente transferir 5 a 10 mL de cada muestra de campo en un vial de 
40 mL para comenzar tres ciclos de congelación -descongelación. Si la  muestra se congeló previamente, sólo 
se necesitan dos ciclos de congelación -descongelación. Pueden utilizarse viales más pequeños, pero reduzca 
el volumen de la muestra a menos del 25% de la capacidad del vial. Asegúrese de que las muestras estén 
completa mente congeladas y completamente descongeladas durante cada ciclo. Descongelar las muestras a 
aproximadamente 35 °C en un baño de agua y mezclar después de cada ciclo.  
Filtrar 1 a 2 mL de cada muestra lisada en un vial de 4 mL usando un filtro de jeringa d e fibra de vidrio.  
Para realizar el ELISA siga las instrucciones del fabricante para agregar muestras y reactivos a la placa. 
Llene dos pozos con cada estándar de calibración, muestra de campo y muestra de control de calidad. Al 
construir el lote de anális is debe asegurarse de que se incluyen todos los elementos de control de calidad 
requeridos. Las muestras de agua de uso y consumo humano pueden ser procesadas en el mismo lote  de 
análisis.  
Para el desarrollo del color, si se procesan las placas manualmente , utilice una técnica que asegure que 
cada pozo se incube con sustrato exactamente durante el mismo período. Para lograr esto, añadir solución de 
paro en la misma secuencia y al mismo ritmo que la adición de sustrato.  
Medir el color leyendo la absorbancia a 450 nanómetros usando un lector de placas de microtitulación.  
B.1.1.7.3 Análisis de datos y cálculos  
Se debe utilizar un ajuste de curva logística de cuatro parámetros. No se permiten otros modelos de ajuste 
de curvas. Calcular la concentración de la mue stra para cada pozo utilizando la calibración multipunto. Para 
cada campo y muestra QC, debe promediarse los dos valores de concentración de cada pozo. Utilice esta 
promedio para reportar los resultados de las muestras y para evaluar los resultados del con trol de calidad 
frente a los límites de aceptación. Reporte solamente los valores que están entre el MRL y el estándar de 
calibración más alto. Los resultados finales se redondearán a dos cifras significativas.  
Si un resultado excede el rango de la curva d e calibración, diluya la muestra con agua grado reactivo. 
Basándose en la concentración estimada, seleccione un factor de dilución que resulte en una concentración 
de muestra diluida cerca de la EC 50 de la curva de calibración. La concentración en la muest ra diluida debe 
situarse entre el MRL y el estándar de calibración más alto. Analizar la muestra diluida en un lote de análisis 
posterior. Incorporar el factor de dilución en los cálculos de la concentración final. Informe el factor de dilución 
con el resu ltado de la muestra.  
B.1.1.7.4 Informe de prueba  
Reportar microcistinas y nodularinas totales como Ausente o Presente.  
En caso de que el resultado sea ausencia de microcistinas o nodularinas totales no será necesario llevar a 
cabo ningún método confirmator io adicional.  
En caso de que el resultado sea presencia de microcistinas o nodularinas totales deberá de llevarse  a 
cabo alguno de los dos métodos cuantitativos confirmatorios contenidos en los puntos B.1.2 y B.1.3 de  este 
Apéndice.  
B.1.1.8 Control de cali dad, calibración e interferencias  
B.1.1.8.1 Control de calidad (QC)  
Los requisitos de control de calidad incluyen los elementos IDC y QC asociados con cada lote de análisis.  
Este apartado describe cada parámetro QC, su frecuencia requerida y los criterios de desempeño que 
deben cumplirse para satisfacer los objetivos de calidad de datos. Estos requisitos de QC se consideran como 
lo mínimo aceptable en un protocolo de calidad. Sin embargo, los laboratorios pueden establecer prácticas 
adicionales de control d e calidad para satisfacer sus necesidades específicas.  
El IDC debe llevarse a cabo antes de analizar las muestras de campo. El IDC incluye cuatro 
determinaciones: demostración de exactitud y precisión, demostración de la presencia de interferencias en el 
sistema, confirmación de MRL y una verificación de segunda fuente de los estándares de calibración (muestra 
de control de calidad). Los requisitos de IDC se describen en la Tabla B.1.1 -1 de este Apéndice.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Tabla B.1.1 -1. Requisitos de control de calidad de l a demostración inicial de capacidad (IDC)  
Requisito  Especificación  Criterio de aceptación  
Demostración de 
exactitud y precisión  Lisar y analizar 7 réplicas de blancos 
fortificados de laboratorio (LFB) a 
0.50µg/L Porcentaje de desviación estándar 
relativa ≤15%. Porcentaje promedio 
de recuperación ≥70% y ≤130%  
Demostración de la 
presencia de 
interferencias en el 
sistema  Lisar y analizar 5 blancos de reactivo 
de laboratorio (LRB) distribuidos a lo 
largo de la placa.  La concentración de MC debe ser 
menor que la mitad del Nivel mínimo 
reportado (MRL) en cada LRB  
Confirmación de MRL  Fortificar y analizar 7 LFB replicados a 
la concentración de MRL propuesta. 
Confirmar que el límite superior e 
inferior del intervalo de predicción de 
resultados (PIR) cumpla con lo s 
criterios de recuperación.   Límite superior PIR ≤150%  
Límite interior PIR ≥50% 
Verificación de segunda 
fuente de los estándares 
de calibración (muestra de 
control de calidad).  Prepare un QCS cerca de la EC 50 con 
MC-LR de una fuente independiente de 
los estándares de calibración.  Porcentaje de recuperac ión ≥70% y 
≤130% del valor real  
 
Al realizar el IDC, el analista debe cumplir con los requisitos de calibración especificados en el apartado 
correspondiente. El estándar de calibración más bajo utilizado para establecer la calibración inicial debe ser 
igual o inferior a la concentración que representa el MRL. Las cuatro determinaciones necesarias para 
completar el IDC pueden incluirse en un lote de análisis único, es decir, procesarse en una única placa  de 
ELISA.  
Para la demostración de exactitud y precisi ón, deben prepararse siete LFB repetidos fortificando cada uno 
con 0.50 µg/L de MC -LR. Se debe añadir tiosulfato de sodio. Lisar, filtrar y analizar los LFB en un solo lote de 
análisis. Para este lote de análisis, se deben de incluir los LRB para cumplir co n el requisito QC de LRB. 
También se requiere un LOW -CV. El porcentaje de desviación estándar relativa (%RSD) para MC -LR en las 
siete repeticiones de LFB debe ser menor o igual a 15%. La recuperación media de las siete repeticiones 
debe ser mayor o igual q ue 70% e inferior o igual a 130%.  
 
 
Para la demostración de la presencia de interferencias en el sistema, en el mismo lote de análisis llevado a 
cabo para la exactitud y precisión en la IDC, lisar, filtrar y analizar cinco LRB. Los LRB deben contener 
tiosulfato de sodio. Los LRB deben distribuirse a lo largo de toda la placa. El resultado obtenido para cada 
LRB debe ser inferior a la media del MRL.  
Para la confirmación del MRL, se debe establecer una concentración objetivo para el MRL en función del 
uso d estinado del método. Confirme el MRL siguiendo el procedimiento descrito a continuación:  
Preparar y analizar muestras de MRL - Fortifique siete LFB replicados con MC -LR en, o por debajo, la 
concentración de MRL propuesta. Los LFB deben contener tiosulfato de sodio como se especifica. Lisar, 
filtrar, y analizar las muestras en un lote de análisis único. El lote de análisis debe incluir dos LRB y un  LOW -
CV. 
Calcular las estadísticas del MRL - Calcular la media y la desviación estándar de las siete réplicas. 
Determinar el intervalo medio para el intervalo de predicción de resultados (HR PIR) usando la siguiente 
ecuación:  
 
En donde:  
s desviación estándar  
3.963  valor constante para 7 réplicas  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Calcular los límites superiores e inferiores para el intervalo de predi cción de resultados 
(PIR=promedio±HR PIR) como se muestra a continuación:  
 
 
Estas ecuaciones se definen sólo para siete muestras repetidas.  
Para los criterios de aceptación de MRL, se confirma el MRL si el límite superior del PIR es menor o igual 
a 150% y  el límite inferior del PIR es mayor o igual al 50%. Si estos criterios no se cumplen, el MRL puede 
establecerse demasiado bajo y la confirmación debe repetirse, o se debe establecer y confirmar el MRL a una 
concentración más alta.  
Para las QCS, debe anali zarse una QCS de nivel medio, para confirmar la exactitud de los estándares de 
calibración primaria.  
Los elementos QC que deben incluirse en cada lote de análisis. Los requisitos de lotes de análisis de QC 
se resumen en la Tabla B.1.1 -2, de este Apéndice.  
Tabla B.1.1 -2. Requisitos del lote de análisis de QC  
Requisito  Especificación y frecuencia  Criterio de aceptación  
Calibración de ELISA  Use los niveles y concentraciones 
recomendados por el kit. Dos pozos 
réplica por estándar.  %CV de absorbancia ≤10%; ≤15% 
permitido para un par.  
r2 ≥0.98 
Pozos réplica  Muestra de campo y de control de 
calidad en dos pozos.  Muestra no valida si el %CV de 
los valores de absorbancia >15%  
Blanco de reactivos de 
laboratorio (LRB)  Lisar un LRB por lote de análisis. 
Analizar en duplicado en lados opuestos 
de la placa.  La concentración de MC/NOD 
debe ser menor que la mitad del 
MRL en cada LRB.  
Estándar de verificación de 
calibración de bajo alcance 
(LOW -CV) Estándar de calibración en la 
concentración de MRL o por debajo de 
la misma. Se debe de tener uno por 
cada lote de análisis.  Porcentaje de recuperación ≥50% 
y ≤150% del valor verdadero.  
Blanco fortificado de 
laboratorio (LFB)  Agua grado reactivo fortificada cerca de 
la EC 50 Lisar y analizar dos por lote de 
análisis.  Porcentaje de recuperación para 
cada LFM ≥60% y ≤140% del 
valor verdadero.  
Matriz de mue stra 
fortificada en laboratorio 
(LFSM) y duplicado de 
LFSM (LFSMD)  Fortifique cerca de la EC 50 y al doble de 
la concentración nativa. Un conjunto en 
lotes de análisis que contienen agua 
potable de uso y consumo humano y 
dos si son 20 o más muestras de 
camp o. Un conjunto en Lotes de análisis 
que contienen agua colectada antes de 
la entrada al sistema de tratamiento y 
dos si son 20 o más muestras de 
campo.  Porcentaje promedio de 
recuperación del par de LFSM y 
LFSMD ≥60% y ≤140%. 
Diferencia porcentual relativa 
(RPD) ≤40%. Calificar los 
resultados de muestras que no 
cumplen estos límites como 
"matriz sospechosa".   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Muestra de control de 
calidad (QCS)  Analizar 1 QCS para cada nuevo lote de 
estándares de calibración. Prep arar el 
QCS cerca de la EC 50 con MC -LR de 
una fuente independiente de los 
estándares de calibración.  Porcentaje de recuperación ≥70% 
y ≤130% del valor verdadero.  
Todas las muestras de campo y de QC deben añadirse a por lo menos dos pozos (pozos réplica). El %CV 
de los valores de absorbancia determinados para los pozos réplica debe ser menor o igual a 15%. Calcular  el 
% CV como sigue:  
 
Si el %CV excede 15% de la muestra de campo o la muestra de QC (LOW -CV, LRB, LFB, LFSM y 
LFSMD), entonces la muestra no s e considera válida. Note que los pozos réplica de los estándares de 
calibración deben cumplir un conjunto de criterios diferentes para %CV.  
Para cada lote de análisis, preparar, lisar y filtrar un Blanco de reactivo de laboratorio (LRB). El LRB debe 
conten er tiosulfato de sodio si muestras de agua potable se incluyen en el lote de análisis. Analizar el LRB por 
duplicado colocando un par de pozos réplica en lados opuestos de la placa (cuatro pozos totales). La 
concentración total de microcistina y nodularina  en cada LRB debe ser inferior a la mitad del MRL. Si la 
concentración es igual o mayor que este nivel, entonces cualquier muestra con un resultado positivo en el lote 
de análisis no se considera válida. No se permite restar valores del blanco de los resul tados de la muestra.  
Con cada lote de análisis, debe analizarse un estándar de verificación de calibración de bajo alcance 
(LOW -CV). El LOW -CV es un estándar de calibración preparado a una concentración igual o inferior al MRL. 
Puede utilizarse un estándar  de calibración del kit. No debe añadirse tiosulfato de sodio, no lisar y no filtrar el 
LOW -CV. La concentración analizada en el LOW -CV debe ser mayor o igual al 50% y menor o igual al 150% 
del valor real. Si el resultado no cumple este criterio, entonces todo el lote de análisis no es válido.  
Se requieren al menos dos blancos fortificados de laboratorio (LFB), a una concentración idéntica, con 
cada lote de análisis. Añadir tiosulfato de sodio si muestras de agua potable se incluyen en el lote de análisis. 
Fortificar el LFB cerca de la EC 50 de la curva de calibración. Lisar y filtrar cada LFB en un vial por separado.  
Como criterio de aceptación para el LFB, el porcentaje de recuperación para cada LFB debe ser mayor o 
igual a 60% y menor o igual a 140% del va lor real. Si el LFB no cumple este criterio, entonces todo el lote de 
análisis no se considera válido.  
Se requiere un conjunto de matriz de muestra fortificada en laboratorio (LFSM) y duplicado de la matriz de 
muestra fortificada en laboratorio (LFSMD) con  cada lote de análisis en una muestra de agua de uso y 
consumo humano, sin embargo, si más de 20 muestras de agua están presentes en el lote de análisis, 
entonces se requieren dos conjuntos. De la misma manera, se requiere un conjunto LFSM y LFSMD con cada  
lote de análisis en una muestra de agua antes de la entrada al sistema de tratamiento, sin embargo, si hay 
más de 20 muestras de agua en el lote de análisis, entonces se requieren dos conjuntos. La concentración 
nativa en la muestra debe determinarse en u na muestra de campo de manera independiente. En la rutina de 
trabajo, distribuya los LFSM entre las diversas fuentes de agua de uso y consumo humano (antes y después 
del tratamiento).  
Se requieren tres alícuotas separadas de una muestra de campo para deter minar la concentración nativa y 
para preparar el LFSM y el LFSMD. Preparar el LFSM y LFSMD fortificando dos alícuotas de la misma 
muestra de campo con una cantidad apropiada de MC -LR. Si está congelado, descongelar las muestras. 
Mezclar bien para homogenei zar la muestra antes de distribuir en los tres viales. Elija una concentración tal 
que el resultado de la microcistina total y la nodularina se encuentre cerca de la EC 50 de la curva de 
calibración y fortifique al menos el doble de la concentración nativa,  si se conoce. Lisar y filtrar las muestras, o 
si las muestras fueron congeladas, completar dos ciclos más de lisis.  
Si no se conoce la concentración en este tipo de muestras de agua, seleccione aleatoriamente las 
muestras y fortifique con aproximadamente 1.0µg/L de MC -LR. Si la concentración inicial en los LFSM 
seleccionados al azar es alta, el resultado de la muestra fortificada puede caer fuera del intervalo de la 
calibración de ELISA, o fallar en cumplir el requisito de fortificar a una concentración al  menos dos veces del 
valor nativo. En estos casos, los resultados del control de calidad se consideran inutilizables y pueden 
descartarse. Sin embargo, el laboratorio debe intentar recolectar datos válidos de LFSM con el tiempo para 
este tipo de muestras d e agua.  
Cálculo del porcentaje promedio de recuperación - Calcular el porcentaje promedio de recuperación (%R) 
para cada conjunto de LFSM y LFSMD utilizando la siguiente ecuación:  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 
En donde:  
A concentración determinada promedio del LFSM y LFSMD  
B concentr ación determinada en la muestra sin fortificar  
C concentración fortificada  
Para obtener resultados significativos del porcentaje de recuperación, se debe corregir el valor promedio 
del LFSM y LFSMD para la concentración nativa en la muestra no fortificada,  incluso si el valor nativo es 
menor que el MRL.  
El porcentaje promedio de recuperación para cada conjunto LFSM y LFSMD debe ser mayor o igual al 
60% y menor o igual al 140% del valor real. Si el porcentaje de recuperación queda fuera de este intervalo, y 
el rendimiento del laboratorio está en control de los LFB dentro del mismo lote de análisis, la recuperación 
puede tener un sesgo de matriz. Calificar el resultado para la muestra de la cual se preparó el LFSM como 
"matriz sospechosa".  
Calcular la diferenc ia porcentual relativa (RPD) usando la siguiente ecuación:  
 
El RPD para cada conjunto de LFSM y LFSMD debe ser menor o igual al 40%. Si la RPD cae fuera de 
este intervalo y el rendimiento del laboratorio está en control de los LFB dentro del mismo Lote de  Análisis, la 
precisión puede tener un sesgo de matriz. Calificar el resultado para la muestra de la cual se preparó el 
LFSMD como "matriz sospechosa".  
Una QCS debe ser analizada durante el IDC y posteriormente con cada nuevo lote de estándares de 
calibrac ión. La MC -LR utilizado para el QCS debe obtenerse de una fuente independiente de la fuente de los 
estándares de calibración. Preparar el QCS en agua grado reactivo cerca de la EC 50. Se puede utilizar un 
QCS suministrado con el kit ELISA si este criterio e s conocido. El porcentaje de recuperación de MC -LR en el 
QCS debe ser mayor o igual que 70% e inferior o igual a 130%.  
B.1.1.8.2 Calibración  
Se requiere una calibración con cada lote de análisis. Utilice las concentraciones indicadas en las 
instrucciones d el kit. No agregue niveles de calibración adicionales ni elimine ningún nivel. Los laboratorios 
pueden preparar estándares de calibración, sin embargo, el número de niveles y concentraciones debe 
coincidir con los del kit original. Cada estándar de calibra ción debe agregarse en al menos dos pozos. El 
estándar de calibración más bajo debe ser igual o inferior a la concentración del MRL.  
La curva de calibración se valida evaluando el %CV de los valores de absorbancia para los pozos réplica 
que representan cad a nivel de calibración y el coeficiente de correlación de la curva logística de cuatro 
parámetros. Calcular el %CV para cada uno de los valores de absorbancia pareados, incluido el estándar 
"cero". El %CV para cada par debe ser menor o igual al 10%. Sin em bargo, se permite que un par exceda del 
10% siempre que el %CV sea menor o igual al 15%. El cuadrado del coeficiente de correlación (r2) de la curva 
de cuatro parámetros debe ser mayor o igual a 0.98.  
Si la calibración se encuentra fuera de los límites %CV  o el valor r2 es inferior a 0.98, entonces todo el lote 
de análisis no se considera válido. Analizar las muestras en un lote de análisis posterior. Congelar las 
muestras filtradas si este lote de análisis no se puede completar el mismo día que el ensayo o riginal. Cada 
muestra debe estar dentro del tiempo de espera de 14 días para repetir el ensayo.  
B.1.1.8.3 Interferencias  
La exactitud del procedimiento de ELISA depende de la técnica del analista, la precisión de los volúmenes 
pipeteados y períodos de incu bación uniformes a través de los pozos de cada placa.  
La desviación del ensayo se refiere a la imprecisión sistemática en lugar de la imprecisión al azar en las 
concentraciones determinadas del analito de interés, cuya magnitud depende de la posición de la  muestra 
dentro de la placa. Una posible causa de la desviación del ensayo son ligeras diferencias en los tiempos de 
incubación a medida que se añaden los reactivos secuencialmente a través de la placa (Davies, Chris. 
2005.“ Concepts” en “The Immunoassay Ha ndbook”, 3rd ed.; Ed. Wild, David; Elsevier, Ltd. Oxford, UK, p 119  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
(sección titulada “Assay Drift”)). Para detectar la desviación del ensayo es necesario distribuir a través de la 
placa muestras de control idénticas. Este método incluye medidas de control  de calidad para evaluar  la 
desviación del ensayo. Durante la IDC, los laboratorios deben analizar cinco LRB distribuidos a través de la 
placa y cada lote de análisis debe incluir dos LRB colocados en lados opuestos de la placa. Debido a que los 
LRB propor cionan valores de absorbancia cerca de la meseta superior de la curva de calibración, las 
concentraciones LRB calculadas son sensibles a ligeros cambios en la absorbancia determinada. Si los LRB 
distribuidos pasan el límite de control de calidad en una med ia del valor de MRL, entonces la desviación del 
ensayo de la placa es mínima y puede considerarse bajo control.  
Considerando que la microcistina puede ser determinada a la entrada del sistema de tratamiento, en 
donde el agua puede provenir de una fuente na tural, las muestras de agua colectadas en la entrada del 
sistema de tratamiento, para este método, podrían considerarse como muestras ambientales. En ese sentido 
es importante observar que durante el desarrollo del método, se ha observado un sesgo positivo  de 
aproximadamente el 30% en muestras de agua ambientales de una sola fuente. Dos aguas ambientales  de 
otras fuentes no causaron sesgo de matriz.  
Durante el desarrollo del método, se evaluaron seis fuentes de agua potable para los efectos de la matriz. 
De estos, tres mostraron sesgo positivo en un rango de 12 a 15%. Tres fuentes no causaron sesgo de matriz.  
Este método contempla el análisis de muestras colectadas tanto de agua para uso y consumo humano 
que ha pasado a  través de sistema de tratamiento como de muestras de agua colectadas en la entrada del 
sistema de tratamiento que provienen de fuentes naturales (muestras ambientales). Con la finalidad de evitar 
la contaminación cruzada, es importante separar las jeringas de vidrio utilizadas para filtrar el agua de 
muestras ambientales, que puede contener altos niveles de microcistinas, de las usadas para filtrar el agua 
potable de uso y consumo humano que ha pasado a través de sistemas de tratamiento. Alternativamente, 
pueden utilizarse jeringas de plástico desechables. Es importante limpiar adecuadamente los recipientes de 
las muestras que son vidrio en caso de ser reutilizados. No deben de reutilizarse septos de botellas que 
contengan muestras de agua ambientales.  
Los resultados reportados por este método r epresentan el total de las microcistinas y nodularinas basadas 
en el método de ELISA Adda calibrado con MC -LR. 
B.1.1.9 Seguridad, prevención de contaminación y manejo de residuos  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un ries go potencial para la salud y 
la exposición a estos materiales debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de mantener un 
conocimiento de las regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe po nerse a disposición de todo el personal involucrado en el análisis las hojas de datos de 
seguridad de los productos químicos. El riesgo principal cuando se realizan los procedimientos en este 
método es la exposición a cianotoxinas en las muestras y en los estándares concentrados. Debe de utilizarse 
equipo de protección personal apropiado para el manejo de muestras y estándares.  
Para obtener información sobre la prevención de contaminación aplicable a las operaciones de  laboratorio 
descritas en este método, puede consultar referencias especializadas (p.ej. American Chemical Society, 
2002).  
Es necesario que el laboratorio cumpla con las regulaciones vigentes y aplicables en materia de manejo 
de residuos ante la autoridad correspondiente.  
B.1.1.10 Referencias  
 American Chemical Society. 2002. “Less is Better, Guide to Minimizing Waste in Laboratories”.  
 Davies, Chris. 2005. “Concepts ” en “The Immunoassay Handbook”, 3rd ed.; Ed. Wild, David; Elsevier, 
Ltd. Oxford, UK, p 119 (sección titulada “Assay Drift”).  
 Fischer , Werner J. et al. 2001  Congener -Independent Immunoassay for Microcystins and Nodularins. 
Environ. Sci. Technol .35: 4849 –4856  
 Maciel, Robert J. 1985. Standard Curve Fitting in Immunodiagnostics: a Primer . Journal of Clinical 
Immunoassay . Vol. 8, 98 –106. 
 Ohio EPA Division of Environmental Services. 2015. Ohio EPA Total (Extracellular and Intracellular) 
Microcystins – ADDA by ELISA Analytical Methodology; Method 701.0 Version 2.2 (and previous 
versions); Ohio EPA: Reynoldsburg, OH.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 Sasaki, Diane and Mitchell,  Robert A. 2016. How to Obtain Reproducible Quantitative ELISA Results.  
Oxford Biomedical Research website.  
 U.S. EPA. 2004. Statistical Protocol for the Determination of the Single -Laboratory Lowest 
Concentration Minimum Reporting Level (LCMRL) and Validat ion of Laboratory Performance at or 
Below the Minimum Reporting Level (MRL); EPA 815 -R-05-006; Office of Water: Cincinnati, OH.  
 U.S. EPA. 2010. Technical Basis for the Lowest Concentration Minimum Reporting Level (LCMRL) 
Calculator; EPA 815 -R-11-001; Offic e of Water: Cincinnati, OH.  
 U.S. EPA. 2016. Determination of total Microcystints and Nodularins in Drinking Water and Ambient 
Eater by Adda Enzyme -Linkes Immunosorbent Assay. Method 546.  
B.1.2 MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE MICROCISTINAS Y NODULARINAS EN AGUA DE  USO 
Y CONSUMO HUMANO POR EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA Y CROMATOGRAFÍA 
LIQUIDA/ESPECTOMETRÍA DE MASAS EN TÁNDEM (LC/MS/MS)  
B.1.2.1 Definiciones y términos  
Analito surrogado  (SUR) , al producto químico puro que se asemeja químicamente a los analitos de 
interés y es extremadamente improbable que se encuentre en cualquier muestra. Este producto químico se 
añade a una alícuota de muestra en una cantidad o cantidades conocidas antes del procesamiento y se mide 
con los mismos procedimientos usados para medir los otros analitos. El propósito del SUR es monitorear el 
desempeño del método con cada muestra.  
Blanco de reactivo de laboratorio (LRB ), a la alícuota de agua grado reactivo u otra matriz blanco que 
se trata exactamente como una muestra incluyendo la expo sición a toda la cristalería, equipo, disolventes y 
reactivos, conservantes de muestras y surrogado s que se utilizan en el lote de análisis. El LRB se utiliza para 
determinar si los analitos de interés u otras interferencias están presentes en el entorno d el laboratorio, los 
reactivos o los aparatos.  
Blanco fortificado de laboratorio (LFB) , al volumen de agua grado reactivo u otra matriz blanco de la 
que se conocen cantidades del analito y todos los compuestos se añaden en el laboratorio. El LFB se analiza 
exactamente como una muestra y su propósito es determinar tanto si la metodología está en control como si 
el laboratorio es capaz de realizar mediciones precisas y exactas.  
Concentración más baja del nivel mínimo reportado (LCMRL) , a la concentración más b aja verdadera 
para la cual se espera una recuperación futura espera entre 50 y 150% de recuperación, con un 99%  de 
confianza.  
Disociación activada por colisiones (CAD) , al proceso de convertir la energía de traslación del ion 
precursor en energía interna p or colisiones con moléculas de gas neutro para producir la disociación en los 
iones del producto.  
Duplicados de campo (FD1, FD2) , a las dos muestras separadas recolectadas al mismo tiempo y el 
mismo lugar bajo circunstancias idénticas, y tratadas exactamen te igual bajo los mismos procedimientos de 
campo y laboratorio. El análisis de FD1 y FD2 dan una medida de la precisión asociada con la recolección, 
conservación y almacenamiento de las muestras, así como de los procedimientos de laboratorio.  
duplicado de la matriz de muestra fortificada en laboratorio (LFSMD) , al duplicado de la muestra de 
campo utilizada para preparar la LFSM. El LFSMD es fortificado, extraído y analizados de forma idéntica a la 
LFSM. El LFSMD se utiliza en lugar del duplicado de campo pa ra evaluar la precisión del método cuando  la 
ocurrencia de los analitos es infrecuente.  
Estándar de calibración (CAL) , a la solución preparada a partir de la dilución primaria de la solución 
estándar y/o solución estándar y el surrogado . Las soluciones CAL  se utilizan para calibrar la respuesta del 
instrumento con respecto a la concentración del analito  de interés . 
Hoja de datos de seguridad del material (MSDS) , a la información escrita proporcionada por los 
vendedores acerca de la toxicidad del producto qu ímico, los riesgos para la salud, las propiedades físicas, 
riesgo de incendio y reactividad, incluyendo las precauciones de almacenamiento, derrame y manipulación.  
Ion precursor , a la molécula protonada del analito ([M + H]+ o [M + 2H]2+). En MS/MS, el ion  precursor es 
masa seleccionada y fragmentada por CAD para producir iones producto distintivos de menor relación m/z.  
Ion producto , fragmentos de iones producidos en MS/MS por CAD a partir del ion precursor.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Límite de detección (DL) , a la concentración mín ima de un analito de interés que puede ser Identificado, 
medido y reportado con un 99% de confianza de que la concentración del analito es mayor a cero. Esta es 
una determinación estadística de precisión y no se espera una cuantificación exacta a este nive l. 
Lote de análisis , al conjunto de muestras que se analiza en el mismo instrumento durante un período de 
24 horas, incluyendo no más de 20 muestras de campo, que comienza y termina con el análisis de los 
estándares de verificación de calibración continua (CCC) apropiados. Pueden requerirse CCC adicionales 
dependiendo de la longitud del lote de análisis y/o el número de muestras de campo.  
Lote de extracción , al conjunto de hasta 20 muestras de campo (sin incluir las muestras de Control  de 
Calidad, QC) extra ídas juntas por la misma persona durante un día de trabajo usando el mismo lote  de 
dispositivos SPE, disolventes, sustitutivos y soluciones para fortificar. Las muestras de QC requeridas incluyen 
el blanco de reactivo de laboratorio, el blanco fortificado de laboratorio, la matriz de la muestra fortificada de 
laboratorio y un duplicado de campo o duplicado de matriz de la muestra fortificada  de laboratorio.  
Matriz de muestra fortificada en laboratorio (LFSM) , a la muestra de campo preservada a la que se 
añaden en el laboratorio cantidades conocidas de los analitos  de interés . La LFSM es procesado y analizado 
exactamente como una muestra y su propósito es determinar si la matriz de la muestra contribuye a los 
resultados analíticos. Las concentraciones de fond o de los analitos en la matriz de muestra deben ser 
determinadas en una extracción independiente de la muestra y los valores medidos en la LFSM corregidos 
para las concentraciones de fondo.  
Muestra de control de calidad (QCS) , a la solución de analitos de concentraciones conocidas que se 
obtiene de una fuente externa al laboratorio y diferente del estándar de calibración. La segunda fuente para la 
solución estándar se utiliza para fortalecer el QCS a una concentración conocida. El QCS se utiliza para 
compro bar la integridad del estándar de calibración.  
Nivel mínimo reportado (MRL ), a la concentración mínima que puede ser reportada como un valor 
cuantificado para un analito en una muestra después del análisis. Esta concentración definida no puede ser 
inferior  a la concentración del estándar de calibración más bajo para ese analito y sólo puede utilizarse si se 
cumplen los criterios de control de calidad (QC) aceptables para ese estándar.  
Solución estándar (SSS ), a la solución concentrada que contiene uno o más  analitos preparada en el 
laboratorio utilizando materiales de referencia ensayados o adquiridos de una fuente comercial de buena 
reputación.  
Solución estándar de dilución primaria (PDS ), a la solución que contiene los analitos preparados en el 
laboratorio  a partir de soluciones estándar y diluida según sea necesario para preparar soluciones de 
calibración y otras soluciones de analito necesarias.  
Verificación de calibración continua (CCC) , al estándar de calibración que contiene los analitos del 
método y surrogado s. El CCC se analiza periódicamente para verificar la exactitud de la calibración existente 
para esos analitos.  
B.1.2.2 Símbolos y términos abreviados  
CAD  disociación activada por colisiones  
CAL estándar de calibración  
CCC  verificación de calibraci ón continua  
C2D5-MC-LR microcistina LR etilada, d5 
DL límite de detección  
ESI Ionización por electrospray  
FD1, FD2  duplicados de campo  
LCMRL  concentración más baja del nivel mínimo reportado  
LFB  blanco fortificado de laboratorio  
LRB blanco de reactivo de laboratorio  
LFSM  Matriz de muestra fortificada en laboratorio  
LFSMD  duplicado de la matriz de muestra fortificada en laboratorio  
MC-LR microcistina -LR 
mL/min  mililitro/minuto  
[M + H]+ Primer estado de protonación del analito  
[M + 2H]2+ Segundo estado de pr otonación del analito  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
MRL  nivel mínimo reportado  
MSDS  hoja de datos de seguridad del material  
PDS solución estándar de dilución primaria  
QC control de calidad  
QCS  muestra de control de calidad  
RSD  desviación estándar relativa  
SPE extracción en fase sólida  
SSS solución estándar  
SUR  analito surrogado  
± más y menos  
B.1.2.3 Principio  
Una muestra de agua de 500 ml (fortificada con un surrogado) se filtra y se colectan tanto el filtrado como 
el filtro. El filtro se coloca en una solución de metanol que contiene 2 0% de agua grado reactivo y se mantiene 
durante al menos una hora a -20 ºC para liberar las toxinas intracelulares de las célula de cianobacterias 
capturadas en el filtro. El líquido se extrae del filtro y es añadido al filtrado acuoso de 500mL. La muestra  de 
500 ml (más la solución de toxina intracelular) es pasa a través de un cartucho de SPE para extraer los 
analitos de interés y el surrogado. Los analitos se eluyen de la fase sólida con una pequeña cantidad de 
metanol que contiene un 10% de agua grado r eactivo. El extracto es concentrado a sequedad por evaporación 
con nitrógeno en un baño de agua caliente y luego se ajusta a un volumen de 1 ml con metanol que contiene 
un 10% de agua grado reactivo. Se hace una inyección de 10 µL en una LC equipada con un a columna C 8 
interconectada a un MS/MS. Los analitos se separan e identifican comparando los espectros de masas y los 
tiempos de retención con los espectros de referencia y los tiempos de retención de los estándares de 
calibración realizados bajo condicion es idénticas de LC/MS/MS. La concentración de cada analito de interés 
se determina mediante calibración estándar externa.  
B.1.2.4 Alcance y aplicación  
Este es un método de cromatografía liquida/espectrometría de masas en tándem (LC/MS/MS) para la 
determina ción de microcistinas y nodularinas (combinado intracelular y extracelular) en agua de uso y 
consumo humano.  
Los datos de exactitud y precisión han sido generados en agua grado reactivo y finalizados en aguas 
subterráneas y superficiales terminadas para lo s analitos listados en la Tabla B.1.2 -1, de este Apéndice.  
Tabla B.1.2 -1. Analitos que pueden ser determinados por este método  
Analito  Número CAS  
Microcistina -La (MC -LA) 96180 -79-9 
Microcistina -LFA (MC -LF) 154037 -70-4 
Microcistina -LR (MC -LR) 101043 -37-2 
Microcistina -LY (MC -LY) 123304 -10-9 
Microcistina -RR (MC -RR) 111755 -37-4 
Microcistina -YR (MC -YR) 101064 -48-6 
Nodularina -R (NOD -R) 118399 -22-7 
 
Este método debe de ser utilizado por analistas expertos en extracciones en fase sólida, funcionamiento 
de los instrumentos de LC/MS/MS y la interpretación de los datos asociados.  
En reconocimiento de los avances tecnológicos en sistemas y técnicas analíticas, se permite al laboratorio 
modificar las técnicas de evaporación, separación, columna LC, composición de  fase móvil, condiciones LC y 
condiciones MS y MS/MS. Sin embargo, no deben de realizarse cambios a la recolección y conservación de 
muestras, a las etapas de extracción de muestras, ni a los requisitos de control de calidad. Las modificaciones 
deben ser c onsideradas sólo para mejorar el rendimiento del método. Modificaciones que son introducidas con 
el interés de reducir el costo o el tiempo de procesamiento de la muestra, pero dar lugar a un método más 
pobre no deben utilizarse. Los analitos deben estar a decuadamente resueltos cromatográficamente para 
permitir que el espectrómetro de masas proporcione un número mínimo de compuestos eluyendo dentro de  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
una ventana de tiempo de retención. La sensibilidad instrumental (señal de ruido) disminuirá si se permite que 
demasiados compuestos eluyan dentro de una ventana de tiempo de retención. En todos los casos en los que 
se proponen modificaciones de del método, el analista debe realizar los procedimientos descritos en la 
demostración inicial de capacidad (IDC), ver ificar que conoce todos los criterios de aceptación del control de 
calidad (QC) y que el rendimiento del método aceptable puede verificarse en una matriz de muestra real.  
B.1.2.5  Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálo go se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Abrazadera metálica.  Abrazadera de aluminio de 47 mm (Kimble Chase #953753 -0000 o equivalente).  
Balanza analítica.  Balanza analítica capaz de pesar 0. 000 1 g  
Base de filtro O -ring.  Anillo de sellado de PTFE /silicona (Kimble Chase # 410171 -4226 o equivalente).  
Base de soporte.  Base de soporte para filtración de vidrio fritado de 47 mm (Kimble Chase  # 953752 -
5047 o equivalente).  
Boquilla para manguera. Adaptador de tubo para aparatos de filtración (Kimble Chase #736400 -1413  o 
equivalente).  
Cartuchos para dispositivo d e SPE.  Waters Oasis HLB, 150 mg, 6cc copolimero divinilbenceno  N-
vinilpirrolidona (Waters # 186003365).  
Contenedores de muestra . Botellas de vidrio ámbar de 500 mL con tapa con rosca de 
politetrafluoroetileno (PTFE).  
Columna analítica.  Columna LC C 8 (2.1x1 00mm) cargada con partículas de fase sólida C 8 de 2.6 µm 
(Phenomenex Kinetex # 00D -4497 -AN). Cualquier columna equivalente que proporcione una resolución 
adecuada, forma de pico, capacidad, exactitud y precisión puede ser usada.  
Contenedores para colectar f iltrado.  Botellas de vidrio ámbar de 500 ml (Fisher #02 -542-4C o 
equivalente) y tapa de botella GL45 (Fisher #13247GL45 o equivalente; No se muestra en la figura).  
Dispositivo para filtración . En la Fig. B.1.2 -1 de este Apéndice, se indican número de parte s: 
 
Fig. B.1.2 -1 Partes del dispositivo de filtración  
Embudo.  Embudo de vidrio de 300 mL de 47 mm (Kimble Chase # 953751 -0000 o equivalente).  
Espectrómetro de masas en tandem (MS/MS) con sistema de datos . El espectrómetro de masas debe 
ser capaz de ioniza r por ionización por electrospray (ESI) cerca de la tasa de flujo LC sugerida de 0.3 mL/min. 
El sistema debe ser capaz de realizar MS/MS, para producir iones de producto únicos para métodos de 
segmento de analitos de tiempo de retención especificados. Un m ínimo de 10 exploraciones a través del pico 
cromatográfico, es necesario para asegurar una precisión adecuada.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Extractor manual.  Bomba manual de vacío con modelo de gran volumen Visiprep ® (Supelco #57030  y # 
57275 o equivalente) para cartuchos de extracció n. 
Filtro de membrana.  Membrana nucleoporo de filtro de policarbonato de 47 mm con un tamaño de poro 
0.4 µm (Whatman # 111107 o equivalente).  
Microjeringas . Los tamaños sugeridos incluyen jeringas de 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500 y 1 000 µL. 
Sistema de conc entración de extracto.  Los extractos se concentran por evaporación con nitrógeno 
utilizando un baño de agua con una temperatura no mayor a 60 °C (Meyer N -Evap, Modelo 111, 
Organomation Associates, Inc. o equivalente)  
Sistema de datos. Se requiere un sistem a de datos interconectado para adquirir, almacenar, reducir y 
producir datos espectrales de masa. El software de la computadora debe tener  la capacidad de procesar 
datos de LC/MS/MS almacenados, reconociendo un pico de LC  dentro de cualquier ventana de tie mpo de 
retención dada. El software debe permitir la integración de la abundancia de iones de cualquier ion específico 
dentro del tiempo especificado o  dentro del límite del número de escaneo. El software debe ser capaz de 
calcular los factores de respuesta  relativa, construir regresiones lineales o curvas cuadráticas de calibración,  y 
calcular las concentraciones del analito  de interés . 
Sistema de liberación muestras.  Se recomienda el uso de un sistema de tubos de transferencia 
(Supelco "Visiprep", # 57275 o equivalente), para transferir la muestra directamente del contenedor de 
muestra al cartucho de SPE.  
Sistema de vacío de laboratorio o aspirador.  Con una capacidad suficiente para mantener un vacío de 
aproximadamente 10 a 15 pulgadas de mercurio para extr aer cartuchos.  
Sistema para cromatografía líquida (LC).  Instrumento capaz de inyectar de forma reproducible alícuotas 
de hasta 10 µL y realizar gradientes lineales binarios a un flujo constante cerca del flujo utilizado para el 
desarrollo de este método (0 .3mL/min). El uso de un calentador de columna es opcional.  
Tapa de botella con agujero. Tapa GL45 para botella con orificio para la base del soporte del filtro 
(Kimble # 410170 -4534, o equivalente).  
Tubos cónicos de centrí fuga.  Tubos cónicos de centrifugac ión de vidrio de 15 ml (Corning # 8082 -15) u 
otra cristalería adecuada para recolectar el eluyente de la fase sólida después de la extracción.  
Tubos de cultivo de fondo redondo . Tubos de cultivo de fondo redondo de vidrio de 15 ml (Corning # 
9826 -16X o equ ivalente) u otra cristalería adecuada para su uso en la liberación de la toxina del filtro.  
Viales de automuestreo.  Viales de vidrio ámbar de automuestreo de 2 mL (National Scientific #C4000 -2W 
o equivalente) con tapa y septos de PTFE (National Scientific # C4000 -53 o equivalente).  
B.1.2.6 Reactivos y soluciones  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabrica ntes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Ácido ethilendiaminotetraacetico, sal trisódica. (Trisodium EDTA, no. CAS 10378 -22-0). Inhibe la 
hidrólisis de los analitos catalizada por metales. La sa l trisódica se utilizada en lugar de la sal disódica dado 
que el pH de la solución salina trisódica es más próximo al pH deseado de 7 (Sigma #ED3SS o equivalente). 
Reactivo para preservación de la muestra. Dado que es sólido a temperatura ambiente, puede a ñadirse a la 
botella para la muestra antes de salir a colectar la muestra al campo.  
Ácido L -ascórbico.  (no. CAS 50 -81-7). Reduce el cloro libre en el momento de recolección de la muestra. 
(Sigma -Aldrich #255564 o equivalente). Reactivo para preservación de  la muestra. Dado que es sólido  a 
temperatura ambiente, puede añadirse a la botella para la muestra antes de salir a colectar la muestra  al 
campo.  
Agua grado reactivo . Agua purificada que no contiene ninguna cantidad de sustancia medible de 
cualquier anali tos o compuesto interferente mayor de 1/3 del MRL para cada analito de interés.  
Argón . Utilizado como gas de colisión durante experimentos de MS/MS. El argón debe cumplir  o exceder 
las especificaciones del fabricante del instrumento. El gas nitrógeno puede  usarse como gas de colisión 
siempre que se obtenga una sensibilidad suficiente (formación de iones de producto).  
Cristales Trizma preempaquetados . Grado de reactivo. Mezcla premezclada de Tris [Tris 
(hidroximetil)aminometano] y Tris HCL [Tris (hidroximeti l)aminometano clorhidrato]. pH 7.0 (Sigma -Aldrich  #T-
7193 o equivalente) - Alternativamente, puede usarse una mezcla de los dos componentes con un relación de 
peso 153.5/1 Tris HCl/Tris. Ambas mezclas son usadas para producir un pH cercano a 7.0 a 25°C en agua  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
grado reactivo. Trizma funciona como una solución amortiguadora. Reactivo para preservación de la muestra. 
Dado que es sólido a temperatura ambiente, puede añadirse a la botella para la muestra antes de salir  a 
colectar la muestra al campo.  
Estándares  de calibración (CAL). Preparar una serie de al menos cinco concentraciones de soluciones 
de calibración en metanol que contiene 10% de agua, a partir de las diluciones de la PDS del analito. Las 
concentraciones sugeridas son una descripción de las concent raciones usadas durante el desarrollo del 
método y pueden ser modificadas de acuerdo con la sensibilidad del equipo. Los rangos de concentración 
utilizados durante el desarrollo del método fueron 10 -400 µg/L, excepto para MC -RR (4.7 -187.5 µg/L), 
nodularina -R (4.9 - 195.7 µg/L) y MC -LA (25 - 1 000 µg/L). Los rangos de concentración más grandes 
requerirán más puntos de calibración. El SUR se agrega a los estándares CAL en una concentración 
constante. Durante el desarrollo del método, la concentración del SUR fue de 129.8 µg/L en el estándar  
(259.6 ng/L en la muestra acuosa). La concentración más baja del estándar CAL debe estar en o por debajo 
del MRL, lo cual depende de la sensibilidad del sistema. Los estándares CAL pueden usarse también como 
CdC. Durante e l desarrollo del método, los estándares CAL se encontraron estables durante dos semanas si 
se almacena a -4C o menos. Tiempos más largos de almacenamiento son aceptables siempre y cuando  se 
documenten las medidas de control de calidad demostrando la estabilidad del CAL.  
Formiato de amonio . (CH 5O2N, no. CAS 540 -69-2) - Alta pureza, demostrando estar libre de analitos e 
interferencias; grado LC/MS (Fluka# 55674) o equivalente).  
Gases, reactivos y solventes . Deben ser usados los  mejores productos de reactivos químicos, a menos 
que se indique otra cosa, se pretende que todos los reactivos contengan las especificaciones del Comité de 
Reactivos Analíticos de la Sociedad Química Americana. Se pueden utilizar otros grados de reactivo,  
determinando primero que el reactivo sea de pureza suficientemente alta para permitir su uso sin disminuir la 
calidad de la determinación.  
Metanol . (CH 3OH, no. CAS 67 -56-1) - Alta pureza, demostrando estar libre de analitos e interferencias 
(Fisher Optima  grado LC/MS o equivalente).  
Nitrógeno.  Ayuda a la generación de aerosoles y a la desolvatación del aerosol líquido en la Ionización 
por electrospray (ESI) y se utiliza como gas de colisión en algunos equipos MS/MS. El nitrógeno utilizado 
debe cumplir o ex ceder las especificaciones del fabricante del instrumento.  
Solución amortiguadora de formiato 20mM. Para preparar 1 L, añadir 1.26 g de formiato de amonio  a 1 
L de agua grado reactivo. Esta solución es propensa a pérdidas de volatilidad y debe ser sustitui do por  lo 
menos cada 48 horas.  
Soluciones estándar. Cuando la pureza evaluada de un compuesto es igual o mayor al 95%, el peso 
puede utilizarse sin corrección para el cálculo de concentración de las soluciones estándar. Las 
concentraciones sugeridas son un a descripción de las concentraciones que se utilizan durante el desarrollo 
del método y pueden ser modificadas para ajustarse a la sensibilidad del equipo que se utilice. Las soluciones 
estándar para la fortificación de muestras generalmente deben ser prep aradas en pequeños volúmenes, que 
puedan ser medidos con precisión para minimizar la adición de exceso solvente orgánico para las muestras 
acuosas. Los laboratorios deben utilizar prácticas de control de calidad para determinar cuándo es necesario 
reemplaz ar sus soluciones estándar. No deben utilizarse puntas de pipetas de polipropileno para la 
dosificación de soluciones que contiene analitos de este método, ya que se ha reportado la adsorción de 
microcistina por el polipropileno.  
Soluciones estándar del an alito.  Las soluciones estándar del analito pueden comprarse comercialmente 
como soluciones en ampolletas o preparadas a partir de material puro.  
Solución estándar del analito (10 - 500 µg/ml). Las cianotoxinas puras son compradas generalmente en 
cantidades  de 10 -500µg. Debido a la pequeña cantidad y a la toxicidad de estos analitos, el pesado de las 
cianotoxinas no es factible. Si se preparan a partir de material puro, simplemente debe añadirse 1 mL de 
metanol al material puro comprado (10 - 500 µg) para ob tener una concentración final de 10 - 500 µg/mL. 
Repita para analito preparado a partir de material puro. Alternativamente, pueden comprarse  soluciones 
estándar de los analitos preferiblemente en metanol si están disponibles en el mercado.  Las soluciones 
estándar son estables al menos 6 meses si son almacenadas a -15C o menos en frascos color ámbar de 
tapa de vidrio.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Soluciones estándar del analito surrogado (SUR) . El SUR para este método es la C 2D5-MC-LR. Este 
Sur marcado is otópicamente contiene funciones similares al analito. Aunque pueden usarse soluciones 
estándar de SUR alternativos siempre que estén marcados isotópicamente con grupos funcionales similares al 
analito , el analista debe documentar las razones por las cuales  utiliza estándares alternativos de SUR. 
Asimismo, las soluciones estándar de SUR deben de cumplir con los requisitos de control de calidad.  
Solución estándar de dilución primaria (PDS) (0.94 - 5.0 ng/ µl). La PDS del analito contiene todos o 
una parte de l os analitos de interés a diferentes concentraciones en metanol. La respuesta en ESI y MS/MS 
varía según el compuesto, por lo tanto, puede ser necesaria una mezcla de concentraciones en la PDS del 
analito. Durante el desarrollo del método, las soluciones PD S del analito fueron preparadas tal que 
aproximadamente se obtuvo la misma respuesta del equipo para todos los analitos. La PDS del analito se 
preparó en metanol a las concentraciones de 0.94 a 5.0 ng/ µL. La PDS del analito se prepara por dilución de 
la co mbinación de las soluciones de estándar del analito de interés y se utiliza para preparar los estándares 
CAL y fortalecer los LFB, LFSM, LFSMD y FD con los analitos de interés. La PDS del analito ha demostrado 
ser estable para un mes cuando se almacena a -15 C o menos en frascos de vidrio ámbar con tapa de rosca.  
Tabla B.1.2 -2. Determinación de la concentración final del analito en la PDS  
 Concentración de 
analito ( µg/mL)  Vol. de analito 
(µL) Vol. final de la  PDS 
del analito (mL)  Conc. final de la 
PDS (ng/ µL) 
Microcistina -LR 500 40.0 
10ml  2.0 
Microcistina -RR 10.3 910 0.94 
Microcistina -YR 100 200 2.0 
Microcistina -LY 100 200 2.0 
Microcistina -LF 100 200 2.0 
Nodularina -R 10.3 950 0.98 
Microcistina -LA 100 500 5.0 
 
Solución estándar de dilución primaria del surrogado  (PDS SUR; 6.49 ng/ µL). La PDS del SUR es 
preparada por dilución de 64.9 µg de material puro en 10 mL de metano. Esta solución se utiliza para fortificar 
todas las soluciones de control de calidad y las mues tras de campo. Se ha demostrado que el PDS es estable 
durante al menos un mes cuando se almacena a -15 C o menos. Utilice 20 µL de este PDS SUR con  6.49 
ng/µL para fortificar las soluciones acuosas de control de calidad de 5 00 mL y las muestras de campo antes 
de la extracción. Esto producirá una concentración de 259.6 ng/L del SUR en las soluciones acuosas de QC y 
en las muestras de campo. La concentración del SUR puede ajustarse para adaptarse a sensibilidad  del 
equipo.  
2-cloroacetamida.  (no. CAS 79 -07-2) - Inhibe el crecimiento microbiano y la degradación del analito 
(Sigma -Aldrich # C0267 o equivalente). Reactivo para preservación de la muestra. Dado que es sólido a 
temperatura ambiente, puede añadirse a la botella para la muestra antes de salir a colectar la muestra  al 
campo.  
B.1.2.7 Procedimiento  
B.1.2.7.1 Recolección, conservación y almacenamiento de muestras  
Recolectar las muestras en botellas de 500 mL de vidrio color ámbar con tapones de rosca con 
revestimiento de tefl ón. No utilice botellas para muestras mayores a 500 mL (dado que los pasos de enjuague 
no son óptimos para tamaños grandes de botella). Tamaños de muestra más pequeños pueden utilizarse ya 
que el MRL puede ser resuelto, sin embargo, no deben de ser menores  a 100 mL. Todo el volumen completo 
de la muestra en la botella debe ser utilizado (por ejemplo, una alícuota de 100 mL no debe tomarse de una 
botella de 500 mL porque por que la botella de la muestra debe ser enjuagada).  
Los siguientes reactivos para la c onservación de la muestra, listados en la Tabla B.1.2 -3, de este 
Apéndice, son añadidos a cada botella de muestra como un sólido antes de su envío al campo o antes de la 
colecta de la muestra.  
Tabla B.1.2 -3. Reactivos para conservación de la muestra  
Compue sto Cantidad  Propósito   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Trizma  7.75 g/L  Reactivo amortiguador  
2-Cloroacetamida  2 g/L  antimicrobiano  
Ácido ascórbico  100 mg/L  agente para la eliminación de cloro  
Ácido ethilendiaminotetraacetico, 
sal trisódica  0.35 g/L  inhibe la unión de los analitos bl anco a metales  
 
Para la recolección de la muestra debe abrir el grifo de agua fría y dejar fluir el sistema hasta que la 
temperatura del agua se haya estabilizado (aproximadamente 3 a 5 minutos) y entonces debe de tomar  la 
muestra.  
Las botellas deben llen arse, teniendo cuidado de no eliminar los reactivos de preservación de la muestra.  
Las muestras no necesitan ser colectadas sin que quede espacio libre en el vial o botella de la muestra.  
Después de recolectar la muestra, tapar la botella y agitar con la m ano hasta que el reactivo para la 
conservación es disuelto. Tenga en cuenta que el 2 -cloroacetamida es lento en disolverse especialmente en 
agua fría. Mantener la muestra sellada desde el momento de recolección hasta la extracción.  
Las muestras deben ser e nfriadas durante el envío y no deben exceder los 10 °C durante las primeras 48 
horas después de la recolección. Cuando las muestras son recibidas en el laboratorio debe confirmarse que la 
temperatura de la muestra sea igual o menor a 10 °C. Las muestras al macenadas en el laboratorio deben de 
conservarse a o por debajo de 6 °C hasta su extracción, pero no deben ser congeladas.  
Las muestras que son significativamente superiores a 10 °C, en el momento de la recolección de la 
muestra, deben ser puestas en hielo  o refrigeradas por un período de tiempo, con el fin de enfriarlas antes del 
envío. Esto permitirá que se envíen con la temperatura adecuada para cubrir con los requisitos anteriores.  
Las muestras de agua deberían ser extraídas tan pronto como sea posible después de la recolección, sin 
embargo, pueden extraídas dentro de 28 días posteriores a la recolección de la muestra. Los extractos deben 
ser almacenados en ≤-4 C y analizados dentro de los 28 días siguientes a la extracción. Los tiempos  de 
espera para muestra y extracto con el porcentaje de recuperación (% prom REC) y el porcentaje  de 
desviación estándar relativa (%RSD) se pres entan en las Tablas B.1.2 -4 y B.1.2 -5, de este Apéndice.  
Tabla B.1.2 -4. Tiempos de espera de muestras acuosas para muestras de agua de uso y consumo 
humano provenientes de fuentes superficiales a, fortificadas con analitos de interés y preservadas y 
almac enadas de acuerdo con lo establecido en el presente método (n=4).  
 Día 0  Día 7  Día 14  Día 21  Día 28  
Analito  Conc. 
fortificada 
(ng/L)  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  
MC-YR 400.0  101 8.7 92.5 2.2 89.0 6.7 96.4 1.5 95.1 6.1 
Nodularina -R 195.7  91.7 3.9 92.0 3.2 94.4 1.6 96.5 2.3 91.6 3.3 
MC-RR 187.5  91.7 2.1 94.6 3.4 94.9 1.7 94.9 1.7 90.3 0.6 
MC-LR 400.0  89.4 2.3 87.2 2.5 89.4 2.3 90.2 2.1 86.4 1.3 
MC-LA 1 000  91.2 0.9 90.6 2.3 87.2 1.8 90.2 1.7 88.1 1.5 
MC-LY 400.0  88.4 1.8 87.9 2.0 89.3 1.1 89.9 1.1 88.1 1.9 
MC-LF 400.0  89.1 2.3 86.4 1.6 86.6 1.2 86.6 2.2 85.4 2.1 
C2D5-MC-LR (SUR) b 259.6  86.9 5.4 92.8 0.7 89.7 3.3 92.8 3.4 92.0 4.1 
a TOC= 0.9mg/L; dureza=120mg/L como carbonato de calcio  
b No se  añadió surrogado a las muestras hasta el día de la extracción  
 
Tabla B.1.2 -5. Tiempos de espera de extractos para muestras de agua de uso y consumo humano 
provenientes de fuentes superficiales, fortificadas con analitos de interés y preservadas y almacen adas de 
acuerdo con lo establecido en el presente método (n=4).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 Día 0  Día 7  Día 14  Día 21  Día 28  
Analito  Conc. 
fortificada 
(ng/L)  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  % 
prom 
REC  % 
RSD  
MC-YR 400.0  101 8.7 98.4 2.4 90.7 5.3 91.3 2.8 95.0 4.9 
Nodularina -R 195.7  91.7 3.9 93.9 2.4 94.9 1.8 95.8 2.4 95.1 1.3 
MC-RR 187.5  91.7 2.1 98.6 1.7 97.0 2.2 92.6 2.9 92.5 2.1 
MC-LR 400.0  89.4 2.3 91.1 2.4 94.4 3.8 90.4 2.7 90.8 1.1 
MC-LA 1000  91.2 0.9 93.1 2.5 90.0 0.5 91.7 0.7 92.5 1.9 
MC-LY 400.0  88.4 1.8 92.4 2.5 94.4 2.2 91.6 1.8 93.4 1.6 
MC-LF 400.0  89.1 2.3 92.6 0.9 89.0 1.8 90.8 1.9 91.0 2.5 
C2D5-MC-LR (SUR)  259.6  86.9 5.4 90.9 5.2 89.1 1.4 90.5 3.2 93.2 3.6 
B.1.2.7.2 Procedimiento analítico  
Este procedimiento se puede realiza r manualmente o de forma automatizada mediante un robot o 
dispositivo de preparación de muestras automático. Puede utilizarse u n sistema automático/robótico de 
preparación de muestras, diseñado para usarse con cartuchos de SPE siempre y cuando cumpla con t odos 
los requisitos de control de calidad. Si se utiliza un sistema automatizado para preparar muestras, debe seguir 
las instrucciones de fabricante, pero todos los pasos de extracción y la elución deben ser los mismos que en 
el procedimiento manual. Los p asos de extracción o elución no pueden ser cambiados u omitidos para 
adecuar el uso de un sistema automatizado.  Si se utiliza un sistema automatizado, los LRB deben rotarse 
entre los puertos para asegurar que todas las válvulas y la tubería cumplan los req uisitos de LRB.  
Los cartuchos de SPE que se mencionan, están diseñados como elementos de uso individual y deben 
desecharse después del uso. No pueden ser restaurados o reacondicionados para su reutilización en análisis 
posteriores.  
Las muestras son conserv adas, recogidas y almacenadas tal como se mencionó anteriormente. Todas las 
muestras de campo y de QC, incluyendo el LRB y el LFB, debe contener los conservantes listados en la Tabla 
B.1.2 -3, de este Apéndice. Antes de la extracción, se debe verificar que el pH de la muestra es 7±0.5.  Si el pH 
de la muestra no cumple con este requisito, la muestra debe desecharse. Si el pH de la muestra es aceptable, 
se debe proceder con el análisis. Antes de la extracción, marque el nivel de la muestra en el exterior de la  
botella de muestra para posteriormente determinar el volumen de muestra. Si se usa el peso para determinar 
el volumen, debe pesarse la botella con la muestra recolectada antes de la extracción.  
Como se mencionó, se pueden utilizar tamaños de muestra menor es para obtener el MRL. Debe usarse el 
mismo tamaño de muestra para el LFB, FD, LFSM y LFSMD así como para la muestra de campo y todas las 
muestras de QC las cuales deben cumplir el tamaño de muestra más pequeño.  
A cada muestra a ser extraída debe añadirse  alícuota de la PDS SUR, tapar e invertir para mezclar. 
Durante el desarrollo del método, se añade una alícuota de 20 µL de la solución PDS SUR 6.49 ng/ µL a 500 
mL para una concentración final de 259.6 ng/L en la muestra acuosa.  
Además del SUR y los conser vantes, si la muestra es LFB, FD, LFSM o LFSMD, agregar la cantidad 
necesaria de la PDS del analito, tapar e invertir cada muestra para mezclar.  
Para la liberación de la toxina intracelular debe filtrarse la muestra de agua de 500 mL usando un filtro 
Nucle pore con el lado brilloso hacia arriba y  recoger el filtrado en una botella de vidrio color ámbar de  500 
mL2.1) para la extracción.  
Enjuagar la botella de la muestra con 5 mL de metanol que contiene un 10% de agua grado reactivo y 
verter el agua de enjuagu e en el dispositivo de filtrado y combinar el agua de enjuague con la muestra de 
agua filtrada.  
Enjuagar los lados del embudo con otros 2.5 mL de metanol que contiene un 10% de agua grado reactivo 
y combinar con la muestra de agua filtrada.  
Utilizando pinz as de metal, retire el filtro del dispositivo de filtración y doble el filtro por la mitad (parte 
superior del filtro hacia adentro) mientras toca únicamente los bordes del filtro. Continúe p legando el filtro 
hasta que esté  lo suficientemente pequeño como para caber en un tubo de vidrio. Empuje el filtro hacia la 
parte inferior de la probeta de cristal utilizando una pipeta de vidrio.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Añadir 2 mL de metanol que contiene un 20% de agua grado reactivo al tubo de ensayo que contiene  el 
filtro (asegurándose que  el filtro se cubre con el líquido) y manualmente agitar el tubo suavemente  varias 
veces.  
Coloque el tubo de ensayo que contiene los 2 mL de la solución filtrada y el filtro en un congelador a -20°C 
por 1 a 16 horas. No exceder de 16 horas en el congelador . Si el filtro se mantiene congelado por más  de 2 
horas, los 500 mL del filtrado acuoso se deben mantener refrigerados a ≤6°C hasta la finalización del 
procedimiento de liberación de la toxina.  
Remover el tubo de prueba del congelador, agitar suavemente un par de veces y luego extraer los 2 mL 
del líquido con una pipeta de vidrio. Transferir estos 2 mL de líquido a los 500 m L de agua filtrada de la 
muestra colectada.  
Enjuague el filtro y el tubo de ensayo mediante la adición de otros 2 mL de metanol que contiene un 20% 
de agua grado reactivo al tubo de ensayo y gírelo suavemente. Extraer los 2 mL del líquido utilizando una 
pipeta de vidrio y transferir estos 2 mL de líquido a los 500 mL de agua filtrada de la muestra colectada.  
Enjuagar el filtro una segunda vez mediante la adición de otro 1 mL de metanol que contiene un 20% de 
agua grado reactivo al tubo de ensayo y agitar su avemente. Extraer el 1 mL de líquido utilizando una pipeta  de 
vidrio y transferir este 1mL del líquido a los 500 mL de agua filtrada de la muestra colectada. Agitar la muestra 
de 500 mL varias veces para homogeneizar la muestra.  
Para la limpieza y acondici onado del cartucho, no permita que el material de empaque del cartucho est é 
seco en cualquiera de los pasos de condicionamiento. Enjuagar cada cartucho con 15mL de metanol. A 
continuación, enjuagar cada cartucho con 15 mL de agua grado reactivo, sin permit ir que el agua caiga por 
debajo del borde superior del empaque. Si el cartucho queda seco durante la fase de condicionamiento, debe 
comenzar de nuevo. Añadir 4 - 5 mL de agua grado reactivo a cada cartucho, colocar tubos de transferencia 
de muestras, encen der la aspiradora y comenzar la adición de la muestra filtrada (que contienen las toxinas 
intracelulares liberadas) en el cartucho.  
Con el fin de realizar una correcta extracción de la muestra, ajuste el vacío para que el caudal aproximado 
sea de 10 - 15 m L/min.  No permita que el cartucho esté  seco antes de que toda la muestra pase a través  del 
cartucho.  
Para el enjuague de la botella de la muestra y del cartucho, una vez que toda la muestra ha pasado a 
través del cartucho, enjuague las botellas de muestra con 10 mL de agua grado reactivo y extraiga el 
enjuague a través de los tubos de transferencia de la muestra y los cartuchos. Retirar los tubos de 
transferencia de la muestra y lavar los cartuchos con otros 5 mL de agua grado reactivo. Extraer aire o 
nitrógeno a través del cartucho por 10 min al alto vacío (10 - 15 pulgadas de mercurio).  
Para permitir la elución de la botella de la muestra y del cartucho, apague y libere el vacío. Levante la tapa 
del colector de extracción e inserte un bastidor con tubos de  colecta en el tanque de la extracción para 
recolectar los extractos que se eluyen de los cartuchos. Vuelva a encender la aspiradora, pero asegúrese que 
el vacío no exceda de 10 de pulgadas de mercurio durante la elución. Enjuague las botellas de muestra c on  5 
mL de metanol que contiene 10% reactivo agua y eluir los analitos de los cartuchos tirando los 5 mL de 
metanol (usada para enjuagar las botellas) a través de los tubos de transferencia de la muestra y los 
cartuchos. Use un aspirado de baja potencia t al que el solvente salga del cartucho de gota en gota. Repita el 
enjuague de la botella de la muestra y la elución del cartucho con una segunda alícuota de 5 mL de metanol 
que contiene 10% de agua reactivo.  
Los volúmenes de solvente utilizados fueron optim izados para botellas de 500 mL de la muestra. El uso de 
botellas para muestras más grandes para las muestras de control de calidad no se recomienda dado que 
puede afectar negativamente la recuperación de analito.  
Conce ntrar el extracto hasta que esté  seco bajo una corriente suave de nitrógeno en un baño de agua 
caliente (60 C). Añadir 1 ml de metanol que contiene 10% de agua reactivo al vial y agitar en vortex. Transferir 
una alícuota a un vial de automuestreo.  
Para determinar  el volumen de la muestra, si el nivel de la muestra fue marcado en la botella de la 
muestra, utilice una probeta graduada para medir el volumen de agua necesaria para llenar la botella de  la 
muestra original hasta la marca que hizo antes de la extracción.  Determinar a los 10ml más cercanos. Si se 
usa el peso para determinar el volumen, pesar la botella vacía a los 10 g de peso y determinar el peso de la 
muestra por la substracción del peso de la botella vacía del peso de la muestra original. Asumir una den sidad 
de 1 g/mL de muestra. En cualquier caso, el volumen de la muestra se utilizará en el cálculo final de 
concentración de analito.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Para realizar el análisis del extracto, se deben e stablecer las condiciones necesarias resumidas en las 
Tablas B.1.2 -6, B. 1.2-7, B.1.2 -8 y B.1.2 -9, de este Apéndice. Columnas y condiciones del instrumento deben 
optimizarse antes de la iniciación de la IDC.  
Tabla B.1.2 -6. Condiciones del método LC  
Tiempo (min)  Formiato de amonio %20mM  % metanol  
inicial  90 10 
2.0 90 10 
16 20 80 
16.1 10 90 
22 10 90 
22.1 90 10 
26 90 10 
Columna Phenomenex Kinetex C8, 2.6 µm, 2.1 x 100 mm Rango de flujo de 0.3 mL/min inyección  "partial 
loop" de 10 µL en un loop de 20 µL 
Tabla B.1.2 -7. Condiciones del método ESI -MS/MS  
Condiciones ESI  
Polari dad ion positivo  
Voltaje aguja capilar  4 kV 
Flojo de gas en cono  25 L/h  
Desolvatación del gas nitrógeno  1 000 L/h  
Temperatura de la desolvatación del gas  350 °C  
 
Tabla B.1.2 -8. Origen del analito y tiempo de retención (RT) a 
Analito  Origen del analito  RT (min)  
MC-YR Green Water Laboratories  11.07  
Nodularina -R National Research Council Canada  11.08  
MC-RR National Research Council Canada  11.33  
MC-LR Green Water Laboratories  11.49  
MC-LA Green Water Laboratories  12.41  
MC-LY Enzo Life Sciences  12.51  
MC-LF Enzo Life Sciences  14.05  
C2D5-MC-LR (SUR)  Wayne State University. Sintetizado a 
EPA bajo contracto.  14.3 
a Los datos presentados fueron obtenidos utilizando analitos adquiridos 
comercialmente. Materiales de otros distribuidores pueden ser utilizado s 
demostrando los requerimientos de QC  
 
Tabla B.1.2 -9. Condiciones del método MS/MS a 
Segmento b Analito  ion precursor c(m/z)  ion 
producto d 
(m/z)  voltaje 
de cono 
(v) energía de 
colisión e 
(v) 
1 MC-YR 523.4  [M+2H] 2+ 134.9  20 15  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
1 Nodularina -R 825.4  [M+H]+ 134.9  45 55 
1 MC-RR 519.9  [M+2H] 2+ 134.9  35 30 
1 MC-LR 995.5  [M+H]+ 134.9  60 65 
2 MC-LA 910.5  [M+H]+ 776.4  40 20 
2 MC-LY 1002.5  [M+H]+ 134.9  40 60 
3 MC-LF 986.5  [M+H]+ 134.9  40 60 
3 C2D5 -MC-LR (SUR)  1028.6  [M+H]+ 134.9  55 60 
a Un cromatograma e jemplo de los analitos se muestra en la Fig. B.1.1 -1 
b Los segmentos con duraciones de tiempo en los cuales uno o múltiples eventos de escaneo ocurren.  
c Durante la optimización MS y MS/MS, el analista debe determinar las masas del ion precursor  y produc to 
a un lugar decimal localizando el lugar del apéndice de los picos de las masas espectrales  (p.ej. m/z 523.4 
- 134.9 para MC -YR. Estas masas de iones precursores y productos (con un lugar decimal) deben usarse 
en el método MS/MS para todos los análisis.  
d Iones usados con propósito de cuantificación  
e Se utilizó argón como gas de colisión en un flujo de 0.3 mL/min  
 
Fig. B.1.2 -2 Ejemplo de cromatograma (segmentos MS/MS sobrelapados) de un estándar de calibración 
con el método 544 de EPA y con analitos en una concentración de 187.5 -1 000 ng/L  
Se recomienda desviar los primeros 6 a 8 minutos del flujo LC para residuos. Estos extractos contienen 
pequeñas cantidades de algunos de los conservantes que se diluyen de manera temprana en el 
cromatograma. Por lo tanto, desviar la porción temprana del análisis minimizará la suciedad de la fuente MS.  
Establecer una ventana de tiempo de retención adecuada para cada analito. Esto debe basarse en 
mediciones de variación de tiempo de retención real para cada parámetro d el método en las soluciones 
estándar CAL en la LC en el transcurso del tiempo. Un valor de más o menos tres veces la desviación 
estándar del tiempo de retención obtenido para cada analito mientras se establece la calibración inicial y se 
completa el IDC pu ede utilizarse para calcular un tamaño de ventana. Sin embargo, la experiencia del analista 
debe ser considerada de manera importante fuertemente para la determinación del tamaño de la ventana de 
retención adecuada.  
Establecer una calibración inicial válid a o confirmar que la calibración es todavía válida ejecutando un 
CdC. Si se establece una calibración inicial, se debe completar el IDC.  
Comenzar analizando las muestras de campo, incluyendo muestras de control de calidad, en su frecuencia 
apropiada inyect ando el mismo tamaño de alícuotas (en el desarrollo del método se utilizó 10 µL), bajo las 
mismas condiciones usadas para analizar los estándares de CAL.  
B.1.2.7.3 Análisis de datos y cálculos  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
En la conclusión de adquisición de datos, usar el mismo softwar e que se utilizó en el procedimiento de 
calibración para identificar los picos de interés en el tiempo de retención determinado. Utilizar el software  del 
sistema de datos para examinar las concentraciones de iones de los picos en el cromatograma. Identific ar un 
analito por comparación de su tiempo de retención con el del pico del analito de interés correspondiente  en un 
estándar de referencia.  
El analista no debe extrapolar más allá del rango de calibración establecida. Si un área del pico del analito 
de in terés excede el rango de la curva de calibración inicial, el extracto puede ser diluido con metanol que 
contiene 10% de agua. Volver a inyectar el extracto diluido. Incorporar el factor de dilución en los cálculos de 
concentración final. El rendimiento ace ptable del SUR debe determinarse a partir del extracto de la muestra 
sin diluir. Los datos resultantes deben ser documentados como una dilución y el MRL debe ajustarse de 
acuerdo a ello.  
B.1.2.7.4 Informe de prueba  
Reportar la concentración de microcistina -LR en µg/L. 
B.1.2.8 Seguridad  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un riesgo potencial para la salud y 
la exposición a estos materiales debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de mantener un 
conocimiento de la s regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe ponerse a disposición de todo el personal involucrado en el análisis las hojas de datos de 
seguridad de los productos químicos. Algunas directrices de  descontaminación/inactivación de toxinas pueden 
encontrarse en el libro “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories” y en otras referencias 
disponibles adicionales referentes a la seguridad del laboratorio.  
Los materiales estándar puros y la s soluciones estándar de los analitos deben ser manejados con la 
protección adecuada para la piel y los ojos y se debe tener cuidado de no respirar los vapores o ingerir  los 
materiales.  
B.1.2.9 Referencias  
 American Chemical Society Publication. “Safety in Academic Chemistry Laboratories,” Committee on 
Chemical Safety, 7th Edition. Disponible en:  
 https://www.acs.org/content/dam/acsorg/about/governance/committees/chemicalsafety/publications/sa
fety-in-academic -chemistry -laboratories -faculty.pdf (revisado el 17  de marzo de 2017).  
 EPA. 2015.  METHOD 544. DETERMINATION OF MICROCYSTINS AND NODULARIN IN DRINKING 
WATER BY SOLID PHASE EXTRACTION AND LIQUID CHROMATOGRAPHY/TANDEM MASS 
SPECTROMETRY (LC/MS/MS)  
 Occupational Safety and Health Administration OSHA “OS HA Safety  and Health Standards,  General 
Industry”.  
 U.S. Department of Health and Human Services , Public Health Service Centers for Disease Control 
and Prevention, National Institutes of Health. 2009. “Biosafety in Microbiological and Biomedical 
Laboratories”, 5th e dition, Appendix I Guidelines for Work with Toxins of Biological Origin.  
 Disponible en https://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/BMBL.pdf (revisado 17 de marzo  de 
2017).  
 
B.1.3 MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE MICROCISTINA MEDIANTE SPE Y LA 
CROMATO GRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTO RENDIMIENTO (HPLC) CON DETECCIÓN (UV) 
ULTRAVIOLETA  
B.1.3.1 Símbolos y términos abreviados  
cm centímetro  
hPa hectoPascal  
HPLC  cromatografía de líquidos de alta resolución  
kHz kilohertz  
MC microcistina  
MC-LR microcistina -LR 
MC-RR microcistina -RR  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
MC-YR microcistina -YR 
min-1 por minuto  
NaClO  hipoclorito sódico concentrado  
PDA  arreglo de diodo  
psi libra por pulgada cuadrada  
SEC  cromatografía de exclusión por tamaño  
SIM monitoreo selectivo de iones  
SPE extracción en fase sólida  
TFA ácido trifluoroacético  
UV ultravioleta  
B.1.3.2 Principio  
Las muestras de agua que contienen material o biomasa de cianobacterias deben ser filtradas primero. La 
biomasa se extrae por separado con un solvente (metanol/agua). El extracto es filtrado, diluido y  se lleva a 
cabo una SPE para limpiar de muestra. El filtrado se trata como una muestra de agua pura. Las muestras de 
agua pura, así como muestras de agua de sistemas de abastecimiento se enriquecen usando SPE. Las 
microcistinas se eluyen de los cartuchos de SPE con una solución metanol/agua (90/10 volumen/volumen) 
que contiene 0.1% de TFA. La microcistina se cuantifica por cromatografía de líquidos de alta resolución, de 
fase reversa HPLC con detector ultravioleta y/o arreglo de diodos a 238 nm.  
B.1.3.3 Al cance y aplicación  
Este es un método para la determinación y cuantificación de microcistinas en muestras de agua 
colectadas a la entrada del sistema de tratamiento (que contiene biomasa) y de agua después del proceso de 
tratamiento, como es el agua en los sistemas de abastecimiento de agua de uso y consumo humano. El 
método descrito está validado para MC -RR, MC -YR y MC -LR. También es aplicable para la determinación de 
diversas variantes estructurales de las microcistinas, sin embargo, en estos casos, no pue de realizarse una 
identificación inequívoca debido a la falta de estándares disponibles en el mercado y debido a la coelución.  
El valor de umbral de 1 µg/L de MC -LR en agua, puede ser seguido después del enriquecimiento con 
microcistina mediante SPE.  
B.1.3 .4 Equipos y materiales  
En algunos casos se realizan referencias a marcas específicas y números de catálogo, sin embargo, estos 
se incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso 
de otros proveedore s o fabricantes. Las referencias específicas pretenden representar especificaciones 
adecuadas para los artículos. Algunos elementos de cristalería de laboratorio y equipo no se especifican, ya 
que su elección dependerá de las aplicaciones específicas y las  circunstancias.  
Debe evitarse el uso de plásticos siempre que sea posible. Esto es necesario porque el uso de plásticos 
(por ejemplo pipetas de plástico, tubos de plástico o cartuchos de plástico) puede causar pérdidas de 
microcistinas por absorción en la s paredes de la superficie.  
Agitador horizontal ajustable. Necesario sólo para el análisis de muestras que contiene fitoplancton.  
Baño ultrasónico  
Bomba binaria de HPLC.  Adecuada para tasas de flujo de volumen entre 0.3 mL/min y 1 mL/min.  
Bomba de vacío pa ra SPE  
Botellas de muestreo.  Vidrio ámbar, estéril y previamente limpio.  
Cartuchos de SPE para el enriquecimiento de microcistina.  La columna debe tener una capacidad 
mínima (cantidad de analito a ser retenido en la columna) no menor a 100 µg de cada micro cistina y permitirá 
una recuperación no menor del 80% para MC -LR, así como no menor del 70% para el MC -RR y MC -YR 
cuando se aplica como una solución estándar en agua que contiene 0.05 µg de cada microcistina.  
La recuperación depende fuertemente de la marca  y material del cartucho de SPE y de las 
especificaciones de los materiales como la carga de carbono, el tamaño de partícula etcétera. Los datos de 
recuperación se basan en cartuchos C -18 determinados por una sola medición. El cartucho debe tener las 
siguientes especificaciones de materiales: carga de carbón (16.9%), diámetro de la partícula (54 µm), 
cobertura de superficie (333 µg/m² basada en el %C) volumen de cartucho (3 ml), material por cartucho  (500 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
mg). Si los valores de recuperación no pueden ser al canzados, se recomienda cambiar la marca del cartucho 
SPE.  
Cartuchos de SPE de tipo disco pueden también utilizarse para el enriquecimiento de microcistina de 
muestras de agua.  
Centrífuga de laboratorio . ≥4000 min-1, fuerza centrífuga relativa (RCF) ≥10000 g. Es recomendable el 
uso de una centrífuga a prueba de explosiones debido al uso de disolventes de extracción inflamables.  
Columna de HPLC.  (p.ej. columna C 18), empacada con material con un tamaño de par tícula de 3 a 5 µm; 
con un diámetro interior de 2 a 4.6 mm; y una longitud de 250 mm para asegurar la resolución de los 
estándares de referencia de MC -LR, MC -YR y MC –RR. Debe utilizarse un protector de columna adecuado.  El 
rango de presión debe ser de 70 00 0 hPa a 200 000 hPa (1 015 psi a 2 900 psi).  
Depósito de SPE.  Capacidad de 500mL con conector para cartuchos.  
Detector de UV/arreglo de diodo (PDA).  Con una longitud de onda λ=238 nm incluyendo corrección de 
fondo. El rango de longitud de onda de la PDA debe ser de 200 a 300 nm. El límite de detección (LOD) para el 
sistema debe ser ≤ 0.1 ng/ µl (relación señal -ruido=3) y el límite de cuantificación (LOQ) debe ser ≤ 0.2 ng/ µl 
(relación señal -ruido= 6) para cada microcistina (utilizando una solución estándar).  
Dispositivo de calefacción con control de temperatura y unidad de suministro de gas de nitrógeno . 
Con las siguientes características: Bloqueo de temperatura 30 a 50°C; tempe ratura del gas ~20° C; pureza de 
gas ≥ 99.996%.  
Horno de columna HPLC.  Con unidad de control de temperatura (35 °C).  
Papel de filtro de microfibra de vidrio. Tamaño de retención de 1 a 2 µm. El diámetro máximo del filtro 
debe ser de 47mm. La filtración es necesaria sólo para el análisis de la s muestras que contienen fitoplancton.  
Sonda ultrasónica.  Con características de ~60W, ~20 kHz  
Sistema de inyección.  Con rango de volumen de inyección de 5 a 20 µl. 
Unidad de filtro desechable. Tamaño de poro <0.45 µm Antes de usarlo, verifique a  través de una 
prueba de recuperación que no existen pérdidas de microcistina durante la filtración. Existe la posibilidad de 
que diversos materiales puedan retener microcistinas. Opcionalmente puede utilizarse una microcentrífuga 
para evitar pérdidas.  
B.1.3.5 Reacti vos y soluciones  
Use solamente reactivos de grado analítico reconocido y agua con grado 3, a menos que se especifique  lo 
contrario.  
Acetonitrilo.  CH 3CN, grado HPLC  
Ácido de trifluoroacético.  TFA, CF 3COOH.  
Gradiente de fase móvil HPLC . Ejemplo en Tabla B.1. 3-1, de este Apéndice.  
Tabla B.1.3 -1. Gradiente de fase móvil de HPLC  
Tiempo  
(min)  Solución de fase móvil  
HPLC (A)  
Acetonitrilo con 0.05%TFA  
(%) Solución de fase móvil HPLC  
(B) 
Agua con 0.05%TFA  (%) Rango de flujo del volumen 
total, dependiendo de la 
colum na 
(mL/min)  
0 30 70 0.3 a 1.0  
10 35 65 0.3 a 1.0  
40 70 30 0.3 a 1.0  
42 100 0 0.3 a 1.0  
44 100 0 0.3 a 1.0  
46 30 70 0.3 a 1.0  
55 30 70 0.3 a 1.0  
 
Metanol.  CH 3OH, grado HPLC   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Microcistina.  Comercialmente disponible en ampolletas. La calidad de la micr ocistina comercialmente 
disponible es muy variable, por lo que se recomienda realizar las soluciones de microcistina como se 
menciona en este documento.  
Solución de elución SPE.  Metanol/agua (90/10 volumen/volumen) que contiene 0.1% de TFA.  
Solución estánd ar para dilución.  Solvente de enjuague SPE y solvente de re -disolución. Metanol/agua 
(20/80 volumen/volumen).  
Solución de extracción.  Metanol/agua (75/25 volumen/volumen).  
Solución de fase móvil HPLC (A). En un matraz volumétrico a 1 000 mL, añadir 800 mL de acetonitrilo y 
500 µl de TFA y llevar al volumen final con acetonitrilo. Transferir esta solución en una botella de  HPLC -
eluyente. Desgasificar la solución antes de usar. Esta solución es estable a temperatura ambiente durante 3 
semanas.  
Solución de fas e móvil HPLC (B).  En un matraz volumétrico de 1 000 mL, añadir 800 mL de agua  y 500 
µl de TFA y llevar al volumen final con agua. Transferir esta solución en una botella de HPLC -eluyente. 
Desgasificar la solución antes de usar. Esta solución es estable a t emperatura ambiente durante 2 semanas.  
Solución de hidróxido de amonio.  Solución de hidróxido de amonio NH 4OH comercialmente disponible 
~1 mol/L. Se puede realizar la preparación de la solución partiendo de NH 4OH concentrado.  
Solución de microcistina.  Para  determinar la concentración exacta de microcistina, para cada solución 
disolver en metanol puro la microcistina individual suministrada por el proveedor. Registrar la curva de 
absorción entre 220 y 250 nm en celdas de cuarzo de 1 cm en un espectrofotómetr o con metanol en la celda 
de referencia. Calcular la concentración en masa de cada microcistina, ρi, en microgramos por mililitro, µg/mL, 
utilizando la ecuación:  
 
En donde:  
Amax absorbancia  determinada  en el máximo de la curva de absorción  
Mᵢ masa molar de cada microcistina, en gramos por mol; g/mol  
Ɛᵢ absortividad molar de cada microci stina en metan ol, en litros por  (mol x centímetro);  L/ 
(mol x cm)  
d longitud de camino óptico de la celda en centímetros , cm 
1000  factor de cálculo para alcanzar la unidad de microgramos por mililitro, μg/mL  
La Mᵢ y la Ɛᵢ se listan en la Tabla B.1.3 -2, de este Apéndice.  
Tabla B.1.3 -2. Masa Molar y la absortividad molar de 
microcistinas  (en metanol, a 238nm)  
Microcistina  Mᵢ 
g mol -1 Ɛᵢ 
L mol-1 cm-1 
MC-LR 994 39 800  
MC-YD 1 044  39 800  
MC-RR 1 037  39 800  
Datos tomados de Bloom J.F. et al. 2001  
 
Para posteriores anális is HPLC, la proporción de solvente metanol/agua para los estándares de MC -LR, 
MC-YR y MC -RR se pueden ajustar a 20/80 volumen/volumen agregando el agua y permitiendo una 
concentración de 10 µg/ml para cada microcistina . 
Solución de tiosulfato de sodio.  Disolver 1 g de tiosulfato de sodio Na 2S2O3 (anhidro o con 5 H 2O) en 
100 mL de agua. La concentración final es ρ=10/L (63 mmolar 63 en caso de Na 2SO 3 anhidro).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Solución enriquecida para control del método.  Preparar una solución enriquecida pipeteando 200 µl de 
la solución estándar mixta de microcistina en un matraz aforado de 500 mL. Diluir hasta la marca con agua 
(agua del sistema de abastecimiento o blanco de agua de fuente natural) y agitar bien. La concentración de 
esta salteada enriquecida es de 1 µg/L para MC -LR, MC -YR y MC -RR. 
Solución estándar mixta de microcistina . Pipetear los volúmenes de la solución de m icrocistina 
referidos en la Tabla B.1.3 -3, de este Apéndice, en viales de 1 mL. Añadir a cada frasco, el volumen de la 
solución estándar para dilución referido en la Tabla B.1.3 -3, de este Apéndice, para alcanzar un volumen final 
de 1000 µl y agitar bien.  
Tabla B.1.3 -3. Esquema de pipeteo para las soluciones estándar mixta de microcistina  
Solución 
estándar  Volumen de retirada de 
cada solución de 
microcistina  (MC-LR, MC -
YR, MC -RR) 
(µl) Volumen de la solución estándar 
para dilución a añadir para  alcanzar 
un volumen final de 1000 µl 
(µl) Concentración de solución 
estándar  
(µg/mL)  
MC-LR MC-YR MC-RR 
1 20 940 0.2 0.2 0.2 
2 40 880 0.4 0.4 0.4 
3 100 700 1.0 1.0 1.0 
4 200 400 2.0 2.0 2.0 
5 300 100 3.0 3.0 3.0 
Solución mixta de microcistina.  Preparar una solu ción estándar que contenga 2.5 µg/mL de cada 
microcistina (MC -LR, MC -YR, MC -RR) en la solución de dilución estándar. Almacenar por debajo de -16°C. 
Para evitar la incorporación de agua por la condensación, no abrir el frasco hasta que el contenido haya 
alcanzado la temperatura ambiente. Si la solución debe ser almacenada durante un largo periodo, use un 
frasco hermético. En caso de duda, pesar el frasco y registrar cualquier cambio en la masa durante  el 
almacenamiento.  
B.1.3.6 Procedimiento  
B.1.3.6.1 Recole cción, conservación y almacenamiento de muestras  
Recolectar las muestras de agua y almacenarlas no más de 48 horas en un lugar oscuro y fresco  (4 a 
8°C).  
B.1.3.6.2 Procedimiento analítico  
Antes del acondicionamiento, ajustar el cartucho SPE a temperatura a mbiente. Para el acondicionamiento, 
deben de seguirse las especificaciones del fabricante. Sin embargo, si no se indican, pasar 4mL de metanol 
grado HPLC a través del cartucho. Posteriormente pasar 4 mL de agua a través del cartucho. Permitir un flujo 
de los solventes a una tasa <10 mL/min a través de la columna y asegurarse de que una pequeña porción del 
solvente permanezca en la cima de la columna hasta que se aplique la solución de la muestra.  
Para la preparación de la muestra, si esta se trata de agua d el sistema de abastecimiento que ha pasado 
por un sistema de tratamiento, debe concentrarse la microcistina en las muestras de agua mediante la 
extracción en fase sólida. Si se trata de muestras de agua antes de entrar al tratamiento que puede contener 
fitoplancton, primero pasar la muestra (volumen recomendado: 50 a 100 mL) a través de un filtro (papel de 
filtro de microfibra de vidrio) para separar la biomasa de la fracción líquida. Si existen capas de algas flotantes 
un filtro puede ser insuficiente para  la filtración de los 50 mL de agua. En este caso, reemplace 
inmediatamente el filtro tapado con uno nuevo. Concentrar la microcistina en las muestras de agua mediante 
la extracción en fase sólida.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Extraer la biomasa en un filtro por separado seguido de la  limpieza del extracto antes del análisis de 
HPLC. Si se usa un filtro gravimétrico, se puede determinar la masa de la biomasa y el contenido  de 
microcistina puede ser mostrado en microgramos por gramo ( µg/g). 
Para la extracción de microcistinas de las cél ulas en el filtro, deben extraerse las células en el filtro (si se 
usa más de un filtro, combinar los filtros), enjuagando el filtro(s) tres veces con 3 ml de la solución de 
extracción. Sonicar la solución en hielo durante 2 minutos con una sonda ultrasóni ca o en un baño ultrasónico. 
Después de eso, centrifugar la solución a ≥4000 min -1 durante 10  minutos a temperatura ambiente. Después 
de la centrifugación, reunir los sobrenadantes y secar 1mL de esta solución bajo una corriente de nitrógeno 
(40 °C). Antes  de limpiar, disolver nuevamente los extractos en 500 µL de solución estándar de dilución y 
someter a ultrasonidos la muestra en un baño durante 5 minutos.  
Para el enriquecimiento de microcistina mediante la SPE, con el fin de evitar pérdidas, debe asegura rse 
que el pH de la muestra de agua está en el rango de 5.0 a 8.0. Si el pH está fuera de este rango, ajustar con 
ácido trifluoroacético o con solución de hidróxido de amonio, según corresponda. Añadir 500 µL de solución 
de tiosulfato de sodio a 500 mL de filtrado de agua de la muestra. Agitar bien y dejar reposar la mezcla 
durante 5 minutos. Añadir 5 mL de metanol grado HPLC y después de agitar, aplicar al cartucho 
acondicionado a una velocidad de flujo de 10 mL/min o menos (gotas visibles). Una vez que la  muestra de 
agua ha pasado a través del cartucho, lavar el cartucho con 4mL de solución de dilución estándar. Eluir las 
microcistinas enriquecidas ya sea con 2.0 mL de solución de elución de SPE en un vial de vidrio de 4 mL (o 
siga las indicaciones del pro veedor).Evaporar el eluyente hasta la sequedad con una corriente de nitrógeno 
(40 °C). Redisolver en 500 µL de solución estándar de dilución y someter a la muestra durante 5 min en un 
baño de ultrasonidos. Analizar este extracto directamente con HPLC.  
Para  la limpieza de microcistinas mediante la SPE, aplicar las microcistinas extraídas aplican a la parte 
superior cartucho acondicionado y enjuagar el vial del extracto con 500 µL adicionales de solución estándar de 
dilución y aplicarlo también en la parte su perior del cartucho. Después de que el líquido ha pasado a través 
del cartucho, enjuagar con 4 mL de solución de dilución estándar y desechar el eluído. Cuando la solución  de 
enjuague haya pasado a través del cartucho, eluir las microcistinas limpias según  las recomendaciones del 
proveedor, por ejemplo 2.0 mL de solución de elución de SPE en un vial de vidrio de 4 mL. Evaporar  el 
eluyente hasta la sequedad con una corriente de nitrógeno (40°C), volver a disolver en 500 µL de solución 
estándar de dilución) y  someter a ultrasonidos la muestra en un baño durante 5 minutos. Si la dilución de la 
muestra es necesaria, diluir 100 µL del extracto de muestra con 900 µL de solución estándar de dilución.  Si la 
limpieza de cartuchos no reduce la coelución, pueden utiliz arse como técnicas alternativas la cromatografía 
por exclusión de tamaño (SEC), la limpieza con columnas de inmunoafinidad o mediante el uso de materiales 
poliméricos.  
Para garantizar la máxima precisión durante la cromatografía de líquidos de alta resoluc ión (HPLC), 
inyectar las microcistinas purificadas o enriquecidas según las instrucciones del fabricante en el puerto de 
inyección o válvula de inyección. Separar las microcistinas por HPLC a 35 °C con una columna de fase 
reversa utilizando el gradiente. A justar el flujo de volumen y el volumen de inyección según las dimensiones 
de la columna (diámetro interno, tamaño de partícula) para obtener la forma óptima de pico y resolución. Las 
microcistinas eluyen en el orden MC -RR, MC -YR y MC -LR y deben ser resuel tas en línea base.  
Determinar los espectros de absorción entre 200 y 300 nm para confirmar la identificación, en la  Fig. B.1.3 -
1 y Fig. B.1.3 -2, de este Apéndice, se muestra respectivamente un cromatograma típico y los espectros de 
absorción típicos de mic rocistinas con detección de PDA.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 
Fig. B.1.3 -1 Cromatograma típico de MC -RR (9.91 min), MC -YR (11.21 min) y MC -LR (12.461  min) en una 
muestra de agua enriquecida después de SPE (concentración en la muestra de agua 1 000 ng/L)  
Condiciones de operación  
Volumen de inyección: 20 µl 
Columna: Phenomenex, LUNA ®, C18(2), 250 × 4.6 mm, 3 µm 
Tasa de flujo del volumen: 0.7 mL/min  
Fase móvil: Agua conteniendo 0.05%TFA; acetonitrilo conteniendo 0.05%TFA  
Detección: PDA a 238 nm   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.1.3 -2 Espectros de absorción típi ca de MC -RR, MC -YR y MC -LR en un sistema de 
acetonitrilo/agua.  
Condiciones de operación  
Detección: HPLC -PDA 
Celda: Cuarzo  
B.1.3.6.3 Análisis de datos y cálculos  
Para calcular los resultados de las muestras de agua, se debe de calcular la concentración en m asa de 
cada microcistina en microgramos por litro de la muestra según la siguiente ecuación, después de resolver la 
ecuación de la curva de calibración para cada microcistina:  
 
En donde:  
ρ microcistina,diss  concentración en masa de cada microcistina indiv idual en microgramos por litro 
μg/L 
Vd volumen de  re-disolución de la muestra después de SPE en mililitros, mL  
Vsamp  volumen de la muestra de agua aplicada en el cartucho SPE en litros, L  
y,b,m  ver ecuación de curva de calibración  
Para calcular los result ados de biomasa, se debe calcular la concentración en masa de cada microcistina 
en fitoplancton en microgramos por mililitro de la muestra según la siguiente ecuación, después de resolver la 
ecuación de la curva de calibración para cada microcistina:  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 
En donde:  
ρ microcistina,dpart  concentración en masa de cada microcistina individual en materia particulada en 
microgramos por mililitro, μg/mL  
Vex volumen de  extracción en mililitros, mL  
Vsam volumen de la muestra filtrada en mililitro, mL  
f  factor de dilución en el paso de extracción de la célula ; 
y,b,m  ver ecuación de curva de calibración  
Como alternativa, puede utilizarse una cuantificación asistida por sistemas de cómputo.  
Reportar los resultados de las ecuaciones del punto B.1.3.6.3, de este Apéndice,  por sepa rado. Los 
resultados deben de ser sumados para muestras que contienen fitoplancton. Bajo condiciones naturales, la 
mayoría de las microcistinas están incluidas en el material particulado y generalmente menos del 20% está 
disuelta en el agua.  
Distintas micr ocistinas MC -RR, MC -YR y MC -LR pueden ser identificadas/reconocidas por sus espectros 
de absorción ultravioleta. En el caso de microcistinas diferentes a MC -LR, sus concentraciones en masa se 
pueden calcular utilizando la curva de calibración de MC -LR y lo s resultados se reportan como equivalentes 
MC-LR. 
B.1.3.6.4 Informe de prueba  
Reportar la concentración de microcistina -LR en µg/L.  
B.1.3.7 Calibración  
Determinar las señales cromatográficas a 238 nm (alturas de pico o áreas) de cada compuesto en la 
soluci ón estándar mezclada de microcistina.  
Preparar las tres curvas de calibración (MC -RR, MC -YR y MC -LR) mediante la inyección de un volumen 
apropiado (5 a 20 µl) de las mezclas de microcistina descritas en los estándares de soluciones. Estas 
soluciones cubren  el rango de 0.2 µg/ml a 3 µg/ml.  
Establecer la curva de calibración ( método de mínimos cuadrados) para cada microcistina (área en el eje y 
y concentración en el eje  x) utilizando una regresión lineal mostrada en la siguiente ecuación y verificando e l 
trazo de linealidad.  
 
En donde:  
b punto de intercepción con el eje y (área); ordenada al origen  
m pendiente en mL por microgramos, ml/ µg 
x valor del eje x en microgramos por mL, µg/mL  
y valor del eje y (área)  
El rango de trabajo se define como la parte lineal de la curva de calibración. Si el contenido de microcistina 
en las muestras se sitúa fuera del rango de calibración, ajustar el rango de calibración según las muestras. 
Alternativamente, puede diluirse la solución de inyección para el análisis HPLC con solución estándar  de 
dilución a una concentración de microcistina apropiada para la curva de calibración establecida.  Las 
diferencias en la concentración de metanol de la solución de inyección pueden tener un efecto  en la 
cuantificación.  
Para la determ inación de la recuperación, se debe efectuar el registro con la solución enriquecida. El nivel 
de picos debe estar dentro del rango de calibración (preferiblemente valores medios).  
B.1.3.8 Seguridad  
El método requiere el uso de soluciones que contienen mic rocistina. Las microcistinas son altamente 
hepatotóxicas para los seres humanos. Los residuos de microcistinas de laboratorio se recogerán por 
separado y se tratarán como residuos químicos altamente tóxicos. La descontaminación a largo plazo con 
hipoclorit o sódico concentrado (NaClO) también es posible. Las personas que utilicen este método deben 
estar familiarizadas con las prácticas normales de laboratorio. Es responsabilidad del usuario establecer 
prácticas apropiadas de seguridad y salud y de cumplimien to de las condiciones reglamentarias. Es 
absolutamente esencial que los ensayos realizados de acuerdo con esta norma sean llevados por personal 
debidamente capacitado.  
B.1.3.9 Referencias   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 Blom, J.F.; Robinson, J.A.; y Jüttner, F. 2001. High grazer toxicity  of [D -Asp3, (E) -Dhb7] microcystin -
RR of Planktothrix rubescens as compared to different microcystins. Toxicon , 39, pp. 1923 -1932  
 International Organization for Standardization. 2005. Water quality - Determination of microcystins - 
Method using solid phase extraction (SPE) and high performance liquid Chromatography (HPLC) with 
ultraviolet (UV) detection.  
B.2 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE QUISTES DE Giardia lamblia  EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
Giardia lamblia  es un protozoario flagelado que s e encuentra en las heces del hombre y animales más a 
menudo en la etapa de quistes, aunque en casos severos de diarrea acuosa se puede presentar la forma 
reproductiva o trofozoito. Este protozoario es el agente etiológico de la giardiasis y se ha observado  que la 
ingestión de tan solo 10 quistes puede provocar la infección en humanos, sin embargo, es posible que el 
consumo de una cantidad menor de quistes viables en agua para beber sea suficiente para iniciar  una 
infección.  
Los quistes de Giardia lamblia  pueden sobrevivir en agua para uso y consumo humano por más de 2 
meses a 8°C, por lo que la contaminación de las fuentes de abastecimiento de agua con materia fecal podría 
ocasionar brotes de giardiasis en la población expuesta a dicha agua. Los quistes de Giardia lamblia  son más 
resistentes a la desinfección que las bacterias coliformes. La mayoría de los brotes asociados con fuentes de 
abastecimiento de agua y aguas de tipo recreacional han ocurrido como resultado de la ingestión de aguas 
superficiales que únicamente han sido cloradas, sin embargo, pueden ser removidos bajo procesos de 
potabilización adecuados.  
En los sistemas de abastecimiento de agua, la concentración de quistes de Giardia lamblia  es 
relativamente baja, por lo que el análisis de muestras d e agua de uso y consumo humano requiere métodos 
de muestreo que incluyan la concentración de quistes de Giardia lamblia  a partir de grandes volúmenes (L) de 
agua filtrando a través de arena, membranas o filtros microporosos profundos.  
De manera posterior a  la toma de muestra, es necesario llevar a cabo la purificación de los quistes que se 
encuentran en la muestra y que se han sedimentado, esto generalmente a través de técnicas de flotación 
utilizando soluciones de sulfato de zinc, sacarosa, citrato de pota sio o Percoll -sacarosa.  
A partir de los quistes purificados puede realizarse la determinación a través de observación microscópica 
usando cromógenos o técnicas de tinción con anticuerpos fluorescentes y criterios morfológicos.  
Por lo anterior, para fines d el cumplimiento de esta Norma a continuación se describen los  siguientes 
métodos:  
 Método de muestreo para la determinación de quistes de Giardia lamblia  en muestras de agua para 
uso y consumo humano (contenido en el punto B.2.1 , de este Apéndice).  
 Método d e purificación de quistes de Giardia lamblia  en muestras de agua para uso y consumo 
humano (contenido en el punto B.2.2 , de este Apéndice).  
 Método microbiológico para la determinación de quistes de Giardia lamblia  en muestras de agua para 
uso y consumo hum ano (contenido en el punto B.2.3 , de este Apéndice).  
Los avances en la investigación y la atención de sospechas de brotes de enfermedades transmitidas por 
agua han permitido el desarrollo de diversos métodos de prueba para la determinación de quistes de Giardia 
lamblia  en agua para uso y consumo humano. Estos métodos evolucionan rápidamente, por lo que para el 
cumplimiento de esta Norma para la determinación de quistes de Giardia lamblia  en muestras de agua para Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
uso y consumo humano se podrán utilizar de ma nera indistinta, el método microbiológico descrito en el punto 
B.2.3 , de este Apéndice y las técnicas de inmunofluorescencia (contenido en el punto B.2.4 , de este 
Apéndice) o de biología molecular (contenido en el punto B.2.5 , de este Apéndice) descritas e n este método 
de prueba.  
B.2.1 MÉTODO DE MUESTREO PARA LA DETERMINACIÓN DE QUISTES DE Giardia lamblia  EN 
MUESTRAS DE AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.2.1.1 Principio  
El presente método incluye la toma de muestra en campo después del proceso de potabilizaci ón. La toma 
de muestra en sitio incluye la concentración de los quistes a través de un cartucho filtrante partiendo de un 
volumen de agua suficiente para la determinación de quistes de Giardia lamblia , así como la preservación de 
la muestra hasta su entreg a al laboratorio.  
B.2.1.2 Alcance y aplicación  
Este método describe el procedimiento de muestreo -concentración en campo de agua después del 
proceso de potabilización y la preservación de la muestra hasta la entrega al laboratorio del cartucho  filtrante 
para la determinación de quistes de Giardia lamblia  presentes en muestras de agua para uso y consumo 
humano.  
B.2.1.3 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los  productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Bolsas para muestreo  de cierre hermético de 1 600 a 3 000 mL.  
Conexión hembr a para manguera  con rosca.  
Conexión macho para manguera  con rosca o conexiones de ensamble rápido macho y hembra, para el 
módulo de entrada (los diámetros de las conexiones y el tipo de rosca dependerán de las medidas del 
portacartucho que utilice).  
Hieler a de tamaño adecuado para la cantidad de muestras a transportar.  
Llave para limitar el flujo de salida  
Manguera de jardín , transparente (longitud suficiente para realizar las conexiones de entrada  y 
descarga).  
Material filtrante. Puede ser un cartucho filt rante de hilo encordado (de fibras acrílicas, de polipropileno u 
otro material disponible que no libere fibras) de 25 cm de longitud y una porosidad de 1 µm o pueden utilizarse 
membranas de filtración con poro de 1 µm. El uso de un cartucho filtrante de hi lo o de una membrana de 
filtración dependerá del dispositivo de muestreo que se ensamble.  
Medidor de flujo  
Motobomba de gasolina o eléctrica, en caso de que la muestra deba colectarse de tanques, estanques de 
almacenamiento o desde flujos después de la pot abilización que no permitan la toma de muestra mediante 
una conexión o dispositivo de muestreo en la planta de potabilización, o bien, cuando la presión en la línea 
sea menor a 100 kilopascales (kPa). La motobomba debe ser instalada al final del módulo de salida para 
evitar el riesgo de contaminación cruzada de muestras previamente filtradas.  
Porta cartucho  de polietileno, polipropileno, policarbonato u otro material disponible, capaz de contener 
un filtro cartucho de 25 cm de longitud.  
B.2.1.4 Procedimient o 
B.2.1.4.1  Procedimiento de muestreo   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Ensamblar el dispositivo de muestreo como se muestra en la Fig. B.2.1 -1a. En caso de que se cuente  con 
una conexión para muestreo a la salida de la planta de potabilización, conectar a ella el dispositivo  (Fig. B.2.1 -
1a, de este Apéndice). En caso de que no se cuente con una conexión para muestreo a la  salida de la planta 
de potabilización, introducir la manguera en el cuerpo de agua posterior a la potabilización de donde se va a 
tomar la muestra y conectar la motobomba  a la salida del dispositivo después del módulo  de descarga 
(Fig.B.2.1 -1b, de este Apéndice).  
 
Fig. B.2.1 -1 Dispositivo de muestreo. 1a) en caso de existir conexión para muestreo a la salida de la 
planta de potabilización. 1b) en caso de no existir conexi ón para muestreo a la salida de la planta  de 
potabilización.  
Permitir el flujo del agua a  través del dispositivo de muestreo abriendo la llave de la conexión para 
muestreo o en su caso encender la motobomba.  
Regular el flujo a una tasa aproximada de 3.8 L/ min con la llave de la conexión para muestreo de la planta 
de potabilización y regulando la potencia de la motobomba.  
La dirección del flujo del agua debe ser desde la superficie externa del filtro hacia el interior del mismo.  
Registrar el tiempo y la lect ura del medidor de flujo al inicio. Permitir el flujo de un volumen aproximado de 
380 L de agua.  
Detener el flujo del agua en el dispositivo de muestreo cerrando la llave de la conexión para muestreo o en 
su caso apagando la motobomba.  
Registrar el tiempo y la lectura del medidor de flujo al final.  
Desconectar el dispositivo de la conexión para muestreo procurando mantener el extremo abierto de la 
conexión de entrada por encima del nivel del extremo abierto de la conexión de salida para prevenir posibles 
pérdidas de material particulado por retro lavado del filtro.  
Una vez desconectado, drenar el agua que quedo en el dispositivo tanto como sea posible.  
B.2.1.4.2  Preservación y transporte de la muestra  
El cartucho filtrante contenido en el portacartucho puede  ser llevado al laboratorio para su análisis dentro 
del portacartucho o fuera de él.  
Para transportar el cartucho filtrante dentro del portacartucho, obstruir las conexiones de entrada y salida 
del portacartucho con el filtro dentro, etiquetando el portaca rtucho, en este caso no debe drenar el agua 
restante ya que será incorporada en los lavados posteriores durante la extracción del filtro en el laboratorio.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Para transportar el cartucho fuera del portacartuchos, abrir el dispositivo y asépticamente retirar el 
cartucho filtrante y colocarlo en una bolsa de plástico etiquetada, cerrar la bolsa, introducirla en una segunda 
bolsa y cerrar esta última bolsa.  
En ambos casos, tanto el cartucho filtrante dentro del portacartuchos como el cartucho filtrante fuera del  
mismo, deberán ser refrigerados en la hielera con hielo o con geles congelantes tan pronto como sea posible 
después de realizado el muestreo.  
En ningún caso debe congelarse la muestra y debe ser transportada al laboratorio de análisis para su 
procesamient o tan pronto como sea posible sin exceder de las 48 horas después de su colecta. Debe 
procurarse reducir al mínimo los tiempos de transporte y almacenamiento.  
B.2.2 MÉTODO DE PURIFICACIÓN DE QUISTES DE Giardia lamblia  EN MUESTRAS DE AGUA PARA 
USO Y CONSUMO  HUMANO  
B.2.2.1 Símbolos y términos abreviados  
g gramos  
Tween 80  monooleato de polioxietilen -sorbitano  
v/v volumen/volumen  
B.2.2.2 Principio  
Los quistes de Giardia lamblia  concentrados a partir de una muestra de agua de gran volumen, y que se 
encuentran re tenidos en el cartucho filtrante, deben ser extraídos para ser purificados; eliminando sedimento, 
detritus y demás materiales que interfieran con la identificación, determinación y cuantificación.  
La purificación de los quistes se realiza generalmente a  través de técnicas de flotación utilizando 
soluciones de sulfato de zinc (ZnSO 4), sacarosa, citrato de potasio o Percoll -sacarosa.  
B.2.2.3 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado en laboratorio para la extracción y purificación de los quistes de Giardi a lamblia  
retenidos en el material filtrante a partir del flujo de una muestra de gran volumen de agua para uso y 
consumo humano durante el procedimiento de muestreo descrito en el punto B.2.1, de este Apéndice.  
B.2.2.4 Equipos y materiales  
Las referencias  a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Botellas para centrí fuga  
Centrífuga  capaz de alcanzar al menos 660 g y que permita procesar volúmenes de 3 a 4 L  
Charola de Aluminio  o acero inoxidable de 50 x 35 cm aprox. o papel aluminio  
Guantes de nitrilo o látex  
Mango par a bisturí  o una navaja afilada que permita un manejo aséptico  
Micropipeta  de volumen variable de 5 -100 µL  
Navajas para bisturí  del tamaño adecuado  
Puntas para micropipeta  de 5-50 µL, 100 µL. 
Sifón  
Sistema de vacío con trampa  (Matraz Kitasato de 4L; tapón d e silicón; tubo de vidrio de 6mm de 
diámetro u otro adecuado; mangueras de plástico flexible; punta para micropipeta de 500 -100 µL) 
Tubos de centrífuga  de 15 y 50 mL  
Vaso de precipitados  de polipropileno de 4 L  
Vórtex  
B.2.2.5 Reactivos y soluciones  
Agua de stilada grado reactivo  
Formaldehído al 37%  (v/v) 
Disolución de formaldehído al 2%  (v/v) 
Tween 80  al 0.1%  
B.2.2.6 Procedimiento  
B.2.2.6.1 Liberación de quistes  
Los quistes retenidos en el material del cartucho filtrante o en la membrana de filtración deben de ser 
extraídos antes del proceso de purificación para eliminar detritus y otros materiales retenidos en el cartucho 
filtrante que interfieran con la determinación de los quistes de Giardia lamblia .  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
En caso de que se entregue al laboratorio el portacartuc ho con el cartucho filtrante o membrana de 
filtración en su interior, deberá abrir el portacartuchos y retirar el material filtrante (cartucho filtrante o 
membrana de filtración) del portacartuchos vaciando el agua contenida en el portacartuchos dentro de un vaso 
de precipitados de 4 L.  
En caso de que se entregue al laboratorio el cartucho filtrante o la membrana de filtración dentro de bolsas 
de muestreo, deberá abrir la bolsa secundaria y primaria para retirar el cartucho filtrante o la membrana de 
filtración. Las membranas o filtros utilizados deberán ser manipulados en condiciones asépticas utilizando 
guantes de nitrilo o látex.  
En el caso de que se trate de cartuchos filtrantes, colocarlo sobre una charola de aluminio o acero 
inoxidable o sobre una hoja  de papel aluminio.  
Con la ayuda de un bisturí que permita un manejo aséptico, realizar cortes longitudinales a todo lo largo 
del cartucho y separar las fibras del filtro de la estructura central del cartucho.  
Cortar las fibras en dos o más porciones aprox imadamente iguales (incluir tanto la parte externa como la 
parte interna del filtro) y separar las fibras de cada porción tanto como sea posible. Es frecuente que se 
observe una clara diferencia entre la parte interna y externa de los filtros de acuerdo a la profundidad a la cual 
ha penetrado el sedimento en el cartucho del filtro. Alternativamente, localizar el final del hilo en el exterior del 
cartucho, desenrollar las fibras y dividir en porciones aproximadamente iguales.  
Lavar cada porción por separado en vasos de precipitados de polipropileno de 4 L, con 1 L de agua 
destilada grado reactivo o con una disolución de Tween 80 al 0.1%. La muestra se agita y se presiona 
repetidamente durante 10 minutos procurando extraer todas las partículas que pudieran est ar atrapadas entre 
las fibras. Para separar con más eficacia el material particulado, deberá amasar las fibras manualmente o 
agitarlas manual o mecánicamente durante 10 a 15 minutos, en este último caso agregando el volumen 
suficiente para cubrir las fibra s. Exprimir cada porción y recoger todo el fluido combinándolo todo en un solo 
vaso, en su caso, en el mismo vaso de precipitados con el agua que estaba contenida en el portacartuchos. Si 
las fibras aun retienen cantidades significativas de material partic ulado repetir el proceso de extracción hasta 
que las fibras aparezcan limpias.  
En caso de que se trate de membranas de filtración, deberá retirar la membrana del dispositivo de 
filtración y colocarla en 1 L de agua destilada grado reactivo o de una disoluc ión de Tween 80 al 0.1%. La 
muestra se agita vigorosamente durante 10 minutos procurando extraer todas las partículas atrapadas en  la 
superficie de la membrana.  
El extracto obtenido puede ser sometido al procedimiento de concentración de quistes. Sin embar go, en 
caso de no poder continuar con el procedimiento el mismo día este puede preservar adicionando un volumen 
suficiente de formaldehido al 37% (v/v) para tener una concentración final de 2% (v/v). Refrigere este extracto 
preservado en un vaso de precipi tados de 4 L o en botellas para centrifuga hasta continuar con el proceso de 
concentración al día siguiente.  
B.2.2.6.2 Concentración de quistes  
La refrigeración durante una noche, tanto en el vaso de precipitados como en las botellas para centrifuga, 
permi tirá la sedimentación del extracto.  
Si el extracto se refrigeró y sedimentó en el vaso de precipitados de 4 L durante toda la noche, deberá 
decantar o aspirar el sobrenadante con un sifón o un sistema de vacío con trampa.  
Transferir el sedimento a un tubo de centrifuga del volumen apropiado (50 mL preferiblemente) y 
resuspenderlo en un volumen de formaldehido al 2% equivalente al volumen total del sedimento, en caso de 
que el sedimento sea escaso, resuspender en 10 mL de la disolución (utilice la mitad del volumen para 
resuspender y vaciar al tubo de centrífuga, y la mitad restante para lavar las paredes del recipiente donde se 
encontraba el sedimento). Puede ser necesario ocupar un poco más de disolución de formaldehido para los 
lavados. El extracto resulta nte está listo para ser centrifugado y continuar con el proceso de concentración de 
los quistes.  
Si el extracto se refrigeró y sedimentó en botellas de centrifuga, estimar el volumen de los sedimentos y 
concentrar todos los sedimentos en un solo tubo de ce ntrifuga (50 mL preferiblemente). De ser necesario 
utilizar un poco del volumen estimado de formaldehido al 2% para resuspender los sedimentos y vaciarlos y el 
resto para lavar las paredes de las botellas de centrífuga. Puede ser necesario ocupar un poco m ás de 
disolución de formaldehido para los lavados. El extracto resultante está listo para ser centrifugado y continuar 
con el proceso de concentración de los quistes.  
Si el extracto no fue refrigerado ni sedimentado y es sometido al procedimiento de concen tración de los 
quistes, está listo para ser centrifugado y continuar con el proceso de concentración de los quistes.  
Centrifugar el extracto obtenido a 660 g durante 5 minutos. Decantar o aspirar el sobrenadante con ayuda 
de una micropipeta tanto como sea posible sin alterar o resuspender el sedimento.  
Resuspender el sedimento en una disolución de formaldehído al 2%, transferirlo a un tubo para centrífuga 
de 15 mL y agitar con un vórtex. La cantidad de formaldehido adicionado deberá ser igual a la cantidad del 
sedimento obtenido.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Centrifugar a 660g durante 5 minutos. Decantar o aspirar el sobrenadante con ayuda de una micropipeta 
tanto como sea posible sin alterar o resuspender el sedimento. Si el sedimento obtenido es escaso, 
resuspender en 10 mL de la diso lución de formaldehído al 2%, agitar con un vórtex y centrifugar a 600 g 
durante 5 minutos.  
Si el volumen del sedimento es menor o igual a 1 mL, decantar o aspirar el sobrenadante en su totalidad y 
desechar el sobrenadante.  
Si el volumen del sedimento es m ayor a 1 mL resuspender en el sobrenadante y transferir volúmenes 
equivalentes de 1mL en tubos de centrifuga de 15 mL de capacidad, volver a centrifugar por 5 minutos a  660 
g. Decantar y desechar el sobrenadante.  
El volumen de sedimento restante en cada tu po debe ser de aproximadamente 1 a 2 mL.  
B.2.3 MÉTODO MICROBIOLÓGICO PARA LA DETERMINACIÓN DE QUISTES DE Giardia lamblia  EN 
MUESTRAS DE AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.2.3.1 Símbolos y términos abreviados  
ZnSO 4 sulfato de zinc  
B.2.3.2 Principio  
A partir d e los quistes purificados puede realizarse la determinación de estos a  través de observación 
microscópica usando cromógenos o técnicas de tinción con anticuerpos fluorescentes y criterios morfológicos.  
B.2.3.3 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de quistes de Giardia lamblia , purificados a  través del 
método descrito en el punto B.2.2, de este Apéndice, presentes en muestras de agua para uso y consumo 
humano colectadas al final del sistema de potabilización, a  través de un mét odo microbiológico por 
microscopia óptica con tinción con lugol.  
De manera adicional a este método microbiológico por microscopia óptica con tinción con lugol, para la 
determinación de quistes de Giardia lamblia  pueden utilizarse las técnicas de inmunofluo rescencia  (punto 
B.2.4, de este Apéndice) o de biología molecular (punto B.2.5, de este Apéndice) descritas en este método de 
prueba.  
B.2.3.4 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y n o implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Aceite de inmersión  
Asa bacteriológica estéril  
Centrífuga  capaz de alcanzar al menos 660 g y que permita procesar volúmenes de 3 a 4 L  
Cubreobjetos  de 24 x 50 mm, limpios y libres de grasa  
Frascos con gotero  de volumen adecuado  
Micropipeta  de volumen variable de 5 -100 µL  
Microscopio óptico  de campo clar o. 
Palillo o aplicador  de madera estéril  
Portaobjetos de 25 x 75 mm, limpios y libres de grasa  
Puntas para micropipeta  de 5-50 µL, 100 µL. 
Tubos de centrífuga  de 15 y 50 mL  
Vórtex  
B.2.3.5 Reactivos y soluciones  
Disolución de Lugol , la disolución madre cons iste en 20 g de yodo metálico y 40 g de yoduro potásico, 
disueltos en un litro de agua destilada. Para preparar la disolución de trabajo diluya la disolución madre 1:5 
con una disolución de ZnSO 4 sulfato de zinc con una densidad de 1.20 (gramos por mililit ro). 
Disolución de Sulfato de Zinc  con una densidad de 1.20 (gramos por mililitro) preparada a partir de 
ZnSO 4 Sulfato de Zinc hepta hidratado, grado reactivo analítico  
Vaselina sólida  o algún sellador para muestras biológicas en portaobjetos  
B.2.3.6 Proce dimiento  
B.2.3.6.1 Montaje de laminillas   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Tomar el volumen de a 2 mL de sedimento resultante durante la concentración de los quistes realizada en 
el procedimiento de purificación (punto B.2.2, de este Apéndice).  
Adicionar de 1 a 3 gotas de la disolución de trabajo de lugol 1:5 al sedimento y homogenizar manualmente 
con un palillo de madera estéril.  
Agregar 5mL de la disolución de ZnSO 4 de densidad 1.20 (gramos por mililitro), si utilizó un aplicador de 
madera, introducirlo en el tubo con el sedimento y el lu gol al momento de agregar la disolución de sulfato de 
zinc (ZnSO 4) para recuperar posibles pérdidas.  
Mezclar de manera manual o con ayuda de un vortex y dejar reposar por 5 minutos.  
Continuar adicionando la disolución de sulfato de zinc (ZnSO 4) hasta la ca pacidad máxima del tubo, 
teniendo cuidado de evitar derrames.  
Centrifugar por 3 minutos a 650 g. Abrir la tapa de la centrifuga con cuidado y sin tocar ni agitar los tubos 
dejar reposar de 2 a 5 minutos.  
Los quistes de Giardia lamblia  que se encontraban co ntenidos en la muestra de agua se encontrarán 
suspendidos en el sobrenadante formando, en la mayoría de los casos, una película flotante en la superficie 
del mismo.  
Con la ayuda de un asa estéril recoger la película flotante en la superficie y colocarla en  un portaobjetos 
rotulado, esta operación se puede repetir 2 o 3 veces para asegurar una mayor recuperación. Es necesario 
hacer laminillas hasta agotar la película flotante. El quiste está en la superficie no en el sedimento.  
Colocar un cubreobjetos de 24 x 50 mm y selle la muestra con vaselina sólida o con algún otro sellador 
disponible. Los cubreobjetos y portaobjetos deberán manipularse cuidadosamente y por los bordes.  
B.2.3.6.2 Observación microscópica  
Las laminillas montadas en el apartado anterior, de ben observarse bajo el microscopio óptico con el 
objetivo de 100X con aceite de inmersión, realizando un barrido total del cubreobjetos como se muestra en la 
Fig. B.2.3. -1, de este Apéndice.  
 
Fig. B.2.3 -1 Barrido de la muestra  
La determinación de los quis tes de Giardia lamblia deberá ser realizada por personal capacitado en esta 
actividad, teniendo cuidado de no confundir los quistes de Giardia lamblia  con otros microorganismos como 
levaduras, diatomeas, Coccidias  u otros organismos y siguiendo los siguien tes criterios de inclusión:  
 nitidez (pared del quiste bien definida)  
 forma ovalada  
 tamaño de 8 a 18 µm de longitud  
 estructura ovalada  
 pared gruesa llamada pared quística que mide 0.3 a 0.5 µm 
 presencia de por lo menos dos de las siguientes características in ternas: presencia de núcleos 
(generalmente son cuatro y siempre aparecen dispuestos en alguno de los polos), cuerpos basales  y 
axonemas.  
El uso de microfotografías de quistes de Giardia lamblia  obtenidas en referencias bibliográficas pueden ser 
de gran uti lidad para la determinación de estos.  
B.2.3.6.3 Análisis de datos  
Registrar las siguientes características:  
 tamaño y forma del quiste  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 presencia de núcleos  
 presencia de cuerpos parabasales  
 presencia de axonemas  
Registrar el número de quistes de Giardia lamb lia determinados en el total del sedimento, correspondiente 
al volumen de agua pasado a través del material filtrante (380 L) de acuerdo con el procedimiento de 
muestreo descrito (punto B.2.1, de este Apéndice).  
B.2.3.7 Informe de prueba  
Reportar ausencia o presencia de quistes de Giardia lamblia  en el volumen total de la muestra filtrada.  
B.2.3.8 Referencias  
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 9711.B Giardia lamblia. 18a Ed.1992.  
B.2.4 TÉCNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA PARA LA DETER MINACIÓN DE QUISTES DE 
Giardia lamblia  EN MUESTRAS FILTRADAS DE AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
De manera adicional al método microbiológico por microscopia óptica con tinción con lugol, para la 
determinación de quistes de Giardia lamblia  pueden utilizarse las técnicas de inmunofluorescencia.  
Las técnicas de inmunofluorescencia para la determinación de quistes de Giardia lamblia  evolucionan 
rápidamente debido a los avances científicos y tecnológicos, por lo cual no se establece un método específico 
para la d eterminación de quistes de Giardia lamblia  en el presente apartado.  
Sin embargo, el usuario que utilice técnicas de inmunofluorescencia para la determinación de quistes de 
Giardia lamblia  en muestras filtradas de agua y consumo humano posterior a la potabi lización para el 
cumplimiento de esta Norma, deberá consultar la literatura actual y especializada para las técnicas y 
metodologías más recientes. Entre los métodos que pueden ser utilizados son los siguientes:  
 EPA. 1995. ICR Protozoan Method for Detecting  Giardia Cysts and Cryptosporidium Oocysts in Water 
by a Fluorescent Antibody Procedure  
 EPA. 2005. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by filtration/IMS/FA  
La aplicación de técnicas de inmunofluorescencia es a menudo realizada a partir de kit s disponibles 
comercialmente por ejemplo, entre otros, el kit EasyStainTM /BTF - A Biomerieux Company, por lo cual el 
usuario que utilice kits disponibles comercialmente para realizar técnicas de Inmunofluorescencia para  la 
determinación de quistes de Giard ia lamblia  en muestras de agua y consumo humano posterior  a la 
potabilización para el cumplimiento de esta Norma, debe de asegurarse que el kit utilizado incluya  cuando 
menos:  
 Reactivo de inmunofluorescencia altamente específico para detectar la presencia de quistes de 
Giardia lamblia en muestras de agua  
 Anticuerpos monoclonales IgGI altamente purificados para evitar reacciones cruzadas  
 Control positivo en una concentración aproximada de 200 a 400 quistes por µl 
 Aprobación de organismos internacionales como  United States Environmental Protection  Agency 
(Method EPA 1622/1623), United Kingdom Drinking Water Inspectorate o Japanese Water work 
Association  
Las referencias a marcas específicas se incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los 
producto s. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las referencias específicas 
pretenden únicamente representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
 
B.2.5 TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR PARA LA DETERMINACIÓN DE QUISTES DE Giardia 
lamblia  EN MUESTRAS FILTRADAS DE AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
De manera adicional al método microbiológico por microscopia óptica con tinción con lugol, para la 
determinación de quistes de Giardia lamblia  pueden utilizarse las técnicas de biologí a molecular.  
Las técnicas de biología molecular para la determinación de quistes de Giardia lamblia  evolucionan 
rápidamente debido a los avances científicos y tecnológicos, por lo cual no se establece un método específico 
para la determinación de quistes d e Giardia lamblia  en el presente punto.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Sin embargo, el usuario que utilice técnicas de biología molecular para la determinación de quistes de 
Giardia lamblia  en muestras filtradas de agua y consumo humano posterior a la potabilización para el 
cumplimiento  de esta Norma, deberá consultar la literatura actual y especializada para las técnicas y 
metodologías más recientes.  
La aplicación de técnicas de biología molecular es a menudo realizada a partir de kits disponibles 
comercialmente por ejemplo, por lo cual  para la determinación de quistes de Giardia lamblia  en muestras 
filtradas de agua y consumo humano posterior a la potabilización por técnicas de biología molecular para el 
cumplimiento de esta Norma, se podrán utilizar kits de biología molecular como Kit TaqMan de reacción en 
cadena de la polimerasa (PCR) para Giardia lamblia , Kit Verde Fluorescente “SYBR Green” PCR para Giardia 
lamblia o  Kit PCR punto final para Giardia lamblia  o cualquier otro comercialmente disponible. Las referencias 
a marcas específic as se incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los productos. Dicha 
referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes, los cuales se recomienda que incluyan  lo 
siguiente:  
En el caso de kits TaqMan PCR para Giardia lamblia : 
 Deso xinucleótidos trifosfatados (deoxyNTPs), Cloruro de magnesio (MgCl 2), inhibidor de 
ribonucleasas (RNAsas), agua libre de RNAsas, polimerasa, amortiguador, fluoróforo pasivo o mezcla 
maestra (Master mix)  
 control para la detección PCR, para monitorear la inh ibición de la reacción y validar la calidad  del 
proceso  
 cebador de ácido desoxirribonucléido (DNA) (primer) o mezcla de Sondas (Probe mix) para la 
amplificación de una secuencia específica del genoma de Giardia lamblia  
 control positivo y control negativo, para confirmar la integridad de los reactivos del kit  
En el caso de kits SYBR Green qPCR para Giardia lamblia : 
 deoxyNTPs, MgCl 2, inhibidor de RNAsas, agua libre de RNAsas, polimerasa, amortiguador, fluoróforo 
pasivo o mezcla maestra (Master mix)  
 cebadores de DNA (primers) para la amplificación de una secuencia específica del genoma de  Giardia 
lamblia  
 control positivo y control negativo, para confirmar la integridad de los reactivos del kit y un control 
interno para la validación de PCR  
En el caso de kits PC R punto final para  Giardia lamblia : 
 deoxyNTPs, MgCl 2, inhibidor de RNAsas, agua libre de RNAsas, polimerasa, amortiguador o mezcla 
maestra (Master mix)  
 cebadores de DNA (primers) para la amplificación de una secuencia específica del genoma de  Giardia 
lambl ia 
 control positivo y control negativo para confirmar la integridad de los reactivos del kit  
 materiales necesarios para visualizar los segmentos amplificados del genoma de Giardia lamblia  por 
electroforesis (buffer de carga, marcador de peso molecular, etc .) 
Las referencias a marcas específicas se incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los 
productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las referencias específicas 
pretenden únicamente representar especifica ciones adecuadas para los artículos.  
 
B.3 MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE BTEX (BENCENO, TOLUENO, ETILBENCENO Y XILENOS) 
Y ESTIRENO EN AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO POR CROMATOGRAFÍA DE GASES CON 
DETECTOR DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS  
B.3.1 Símbolos y términ os abreviados  
BFB 4-bromofluorobenceno  
BTEX  benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (orto, meta y para)  
CdC curva de calibración  
CG cromatógrafo de gases  
CG/EM  cromatografía de gases con detector de espectrometría de masas  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
DE desviación estándar  
EICP  perfil común de iones extraídos  
EM espectrometría de masas  
EMIE  ionización de impacto electrónico  
FR factor de respuesta  
FRR factores de respuesta  
m/z masa/carga  
PCIE  perfil de corriente de iones extraídos  
PTFE  politetrafluoroetileno  
R coeficiente de correlació n adimensional  
%DER  desviación estándar relativa  
B.3.2 Principio  
Los compuestos orgánicos volátiles son transferidos eficientemente de la fase acuosa a la fase gaseosa 
mediante burbujeo de un gas inerte en la muestra. La fase gaseosa es arrastrada a través  de una trampa en 
la cual se adsorben los analitos de interés. Al finalizar la purga, la trampa se calienta para desorber los 
compuestos y con el mismo gas inerte son introducidos en la columna cromatográfica. El cromatógrafo de 
gases se programa a una tem peratura para separar los analitos de la muestra, los cuales son identificados y a 
su vez cuantificados por el espectrómetro de masas. La cuantificación se realiza comparando la respuesta de 
los iones característicos con una curva de calibración.  
La identi ficación de los analitos de interés se logra comparando sus espectros de masas con los espectros 
de masas de estándares. La cuantificación se logra comparando la respuesta de un ion (cuantificación) con 
respecto a un estándar interno usando una curva de ca libración apropiada para la aplicación deseada.  
B.3.3 Alcance y aplicación  
El método descrito es un procedimiento para la determinación de compuestos orgánicos volátiles, 
específicamente para benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX) así como estireno  en muestras de agua 
de uso y consumo humano através de cromatografía de gases con detector de espectrometría de masas 
(CG/EM). Existen varias técnicas mediante las cuales estos compuestos pueden introducirse en el sistema 
CG/EM, la técnica más común para analitos orgánicos volátiles es el método de purga y trampa.  
B.3.4 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Balanza analítica.  Con sensibilidad de 0.1 mg.  
Cámara de purga.  Diseñada para aceptar muestras de 5 o 25 mL con una columna  de agua de al menos 
3 cm de profundidad. El espacio libre superior (headspace) gaseoso entre la columna de agua y la trampa 
debe tener un volumen total de al menos de 5 mL. El gas de purga debe pasar a través de la columna de agua 
en forma de burbujas fin amente divididas con un diámetro menor de 3 mm. Introducir el gas de purga no más 
de 5 mm de la base de la columna de agua. El dispositivo de purga ilustrado en la Fig. B.3 -1, de este 
Apéndice,  cumple estos criterios. Se pueden utilizar otros tipos de disp ositivos de purga siempre y cuando se 
demuestre que su desempeño es adecuado.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.3 -1 Dispositivo de purga. Se incluye sólo como ejemplo y no implican aprobación de los productos. 
Pretende únicamente representar especificaciones adecuadas para los art ículos.  
Columnas capilares : usar cualquier columna capilar de CG que cumpla con los criterios de desempeño. 
Asegurarse que el flujo del desorbente sea compatible con la columna elegida. Abajo se enlistan cuatro 
ejemplos de columnas aceptables.  
Columna 1 : de 60 m de longitud x 0.25 mm ID VOCOL de amplio calibre, con 1.5 µm de espesor  de 
película.  
Columna 2 : de 30 m de longitud x 0.53 mm, con 3 µm de espesor de película.  
Columna 3 : de 30 m de longitud x 0.32 mm, con 1 µm de espesor de película.  
Columna 4 : de 30 m de longitud x 0.25 mm, con 1.4 µm de espesor de película.  
Cromatógrafo de gases (CG) con detector de espectrometría de masas (EM). Utilizar un CG con 
temperatura programable adecuado para la inyección sin división (splitless), con división (Split) y c on 
controladores de flujo. Utilizar un espectrómetro de masas (EM), capaz de escanear de 35 a 270 uma (unidad 
de masa atómica) cada segundo o menos, utilizando 70 eV de energía en modo de ionización de impacto 
electrónico (EMIE), debe ser capaz de producir  un espectro de masas que cumpla con todos los criterios de la 
Tabla B.3 -1, de este Apéndice, con 4 -bromofluorobenceno (BFB).  
Tabla B.3 -1. Criterios de Abundancia (m/z) del BFB  
Masa  Criterios de abundancia m/z  
50 15 a 40 % de masa 95  
75 30 a 60 % de mas a 95 
95 Pico base, de masa 95  
96 5 a 9 % de masa 95  
173 <2 % de masa 174  
174 >50 % de masa 95  
175 5 a 9 % de masa 174  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
176 95 a 101 % de masa 174  
177 5 a 9 % de masa 176  
 
Espátula  de acero inoxidable  
Envases de 20 mL  con tapón de rosca recubierto co n PTFE  
Interface del CG/EM . Utilizar una interface de acoplamiento directo de la columna dentro del MS, las 
columnas generalmente utilizadas tienen un diámetro interno de 0.25 a 0.32 mm. Para columnas de 0.53 mm, 
utilizar un separador de jet, que incluye u na línea de transferencia de todo el vidrio y dispositivo de vidrio de 
enriquecimiento o interface de división (Split). Esta interface es necesaria cuando se utiliza enfriamiento 
criogénico, la cual condensa los componentes desorbidos, sobre una banda estr echa de la pre -columna de 
sílice fundida no recubierta. Cuando la interface se calienta rápidamente, la muestra es transferida  a la 
columna analítica capilar. Durante la etapa de crioconservación, la temperatura de la sílice fundida en  la 
interface se mant iene a -150 ºC bajo una corriente de nitrógeno líquido. Después del periodo de desorción,  la 
interface debe ser capaz de calentarse rápidamente (en 15 s o menos) a 250° C para completar la 
transferencia de los analitos.  
Jeringas  de 0.5, 1.0, 5,  10 y 25 mL de vidrio hipodérmico con punta Luer.  
Jeringa con válvula de dos vías , con la terminación Luer, aplicable al dispositivo de purga  
Materiales de empaque para la trampa. Se recomienda el empaque de metil silicona pero puede 
utilizarse otro tipo de empaque qu e tenga la capacidad de retener los compuestos de interés  (ver 
recomendaciones del fabricante.  
Matraces volumétricos  de vidrio con tapón esmerilado de 10, 50 y 100 mL verificados previamente.  
Microjeringas  de 10, 25, 100, 250, 500 y 1 000 µL 
Sistema de dat os. Conectar al espectrómetro de masas una computadora que permita la adquisición y 
almacenamiento de todas las masas del espectro obtenido a través del programa cromatográfico. El software 
debe permitir la búsqueda de todos los espectros adquiridos para l as masas (m/z) de los iones específicos y 
graficar las abundancias de tales m/z en función del tiempo o número de barridos. Este tipo de gráfico es 
definido como el PCIE. El software también debe permitir la integración de las abundancias de cualquier PCIE  
sobre un tiempo específico o un límite de scan. Siendo necesaria la versión más reciente de biblioteca  de 
espectros.  
Sistema de purga y trampa o sistema de purga y trampa/headspace. El sistema de purga y trampa 
consiste en un dispositivo de purga, trampa y un desorbedor. Existen diferentes sistemas disponibles 
comercialmente.  
Trampa. De al menos 25 cm de largo y con un diámetro interno de al menos 3 mm, empacado con las 
siguientes longitudes mínimas de adsorbentes: 1.0 cm de empaque de metil silicona, 7.7 cm del polímero  2,6-
difenilo óxido, 7.7 cm de sílica gel y 7.7 cm de carbón de coco, o algún otra propuesta del proveedor que nos 
brinde la concentración de los volátiles esperados y cumplan con todos los criterios de calidad. Existen 
trampas de sorbentes disponibles comercialmente. Las especificaciones del ejemplo para la trampa se ilustran 
en la Fig. B.3 -2.  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.3 -2. Especificaciones del ejemplo de trampa  
Válvulas de jeringa , bilateral, con punta desechable.  
Vaso de precipitados  de 100 mL de vidrio.  
Viales  de 40 mL con tapón de rosca recubierto con PTFE o Teflon  
B.3.5 Reactivos y soluciones  
Ácido clorhídrico, HCl. Grado reactivo que cumpla las especificaciones de la American Chemical Society 
(ACS) o equivalente. Libre de compuestos orgánicos volátiles y bajo condiciones de aseguramiento de los 
volátiles presentes en las muestras.  
Ácido clorhídrico 1:1 v/v.  Adicionar cuidadosamente un volumen medido de HCl a un volumen igual de 
agua libre de compuestos orgánicos.  
Agua Tipo I.  Agua libre de compuestos org ánicos.  
Carbón de coco  Pasado a través de malla 26 (Material del empaque de la trampa).  
Clorobenceno  – d5 (Estándar interno).  
Empaque de metil -silicona -OV-1 (3%)  En chromosorb -W, con malla 60/80 o equivalente (Material del 
empaque de la trampa).  
Estándares  de Control de Calidad  
Gas inerte de alta pureza  
Materiales de referencia . Certificado (trazables) para benceno, tolueno, etilbenceno, Xilenos (orto, meta y 
para) y estireno.  
Metanol CH 3OH. Libre de compuestos orgánicos  
Nitrógeno líquido  (en caso necesario ) 
Polímero 2,6 -difenilo óxido. De malla 60/80, grado cromatográfico (Material del empaque de la trampa).  
Sílica gel . De malla 35/60, grado 15 o equivalente (Material del empaque de la trampa).  
Tolueno  – d8 (Estándar surrogado)  
1,4 difluorobenceno  – d4 (Estándar interno)  
4-bromofluorobenceno  (Estándar surrogado)  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
1,2-dichloroethane -d4 (Estándar surrogado).  
Otros compuestos pueden ser usados como surrogados, mientras se demuestre su desempeño . 
B.3.6 Procedimiento  
B.3.6.1 Preparación de diluciones estándar  
B.3.6.1.1 Para preparar las disoluciones estándar concentradas de benceno, tolueno, etilbenceno, xilenos 
(orto, meta y para) y estireno, se debe preparar a partir de materiales estándar puros o de disoluciones 
certificadas. Preparar las disoluciones estándar e n metanol. Colocar aproximadamente 9.8 mL de metanol en 
un matraz volumétrico de 10 mL que ha sido tarado incluyendo el tapón. Dejar reposar el matraz sin tapar, 
durante unos 10 minutos o hasta que todos las superficies humedecidas con alcohol se hayan sec ado. Pesar 
el matraz con una precisión de 0.1 mg.  
Adicionar los materiales de referencia usando una jeringa de 100 µL o una pipeta de vidrio con punta 
capilar desechable, inmediatamente adicionar dos o más gotas del material de referencia en el matraz. 
Asegurarse de que las gotas caigan directamente en el alcohol sin tocar el cuello del matraz. Después volver 
a pesar el matraz, llevar a volumen, tapar y agitar invirtiéndolo varias veces. Calcular la concentración en µg/L 
de ganancia neta en el pesaje.  
Cuand o la pureza de un compuesto es ≥96%, calcular la concentración de la disolución sin considerar la 
pureza para el cálculo. Preferentemente usar estándares preparados comercialmente certificados por el 
fabricante o una fuente independiente.  
Transferir la dis olución estándar a un envase con tapón de rosca recubierto con PTFE. Almacenar con un 
mínimo espacio de cabeza (headspace) y protegido de la luz a una temperatura ≤ 6 °C.  
B.3.6.1.2 Para preparar las disoluciones estándares de trabajo de benceno, tolueno, e tilbenceno, xilenos 
(orto, meta y para) y estireno, a partir de las disoluciones de estándares concentradas, preparar disoluciones 
multicomponentes en metanol a una concentración adecuada, almacenar con un mínimo de espacio de 
cabeza, y revisada frecuentem ente por signos de degradación o evaporación. Siendo necesario reemplazarlos 
después de 2 a 4 semanas a menos que se tenga documentada el funcionamiento adecuado del mismo. Si se 
trabaja con soluciones de mezclas certificadas, se pueden almacenar de acuerd o a las indicaciones del 
proveedor. Para la preparación de está disolución metanólica no utilizar un volumen menor de 10 µL.  
B.3.6.1.3 Para preparar las disoluciones estándares de trabajo del surrogado/ estándar interno, los 
compuestos surrogados recomenda dos son: tolueno d 8, 4-bromofluorobenceno y 1,2 - dicloroetano -d4, pueden 
utilizarse otros compuestos dependiendo de los requerimientos del análisis y de los analitos que se requieren 
cuantificar. Es necesario preparar una solución madre y de ella la soluci ón apropiada para adicionar. Cada 
muestra que se va analizar debe contener los subrogados.  
Los estándares internos recomendados son el fluorobenceno, clorobenceno -d5 y el 1,4 -diclorobenceno -d4, 
se pueden utilizar otros compuestos siempre y cuando tengan ti empos de retención similares a los analitos 
detectados. Es necesario preparar una solución madre y de ella la solución apropiada para adicionar. Se 
recomienda una solución de 25 mg/L de cada estándar interno, de modo que la adición de 10 µL a una 
muestra d e 5 mL sería equivalente a 50 µg/L. Si se emplea un espectrómetro de masas más sensible se 
puede emplear una solución de estándares internos más diluida. Las áreas de los estándares internos 
deberán están entre 50 y 200% de las áreas de los analitos en los  puntos medios de las curvas de calibración.  
B.3.6.1.4 Para preparar el estándar de BFB, preparar una solución de estándar conteniendo 25 ng/ µL de 
BFB en metanol, si se emplea un espectrómetro de masas más sensible, se puede emplear una solución más 
diluid a. 
B.3.6.1.5 Para las disoluciones acuosas de los estándares de calibración, se debe de construir una curva 
de calibración para cada analito (BTEX y estireno) de cinco a siete concentraciones. La disolución estándar de 
menor concentración deberá ser mayor al límite de detección pero muy cercano.  
Preparar cada una de las mezclas de disoluciones estándar de la curva de calibración inyectando 
rápidamente el volumen requerido de la disolución estándar metanólica (mezcla de estándares de BTEX y 
estireno, en el m atraz volumétrico previamente lleno con agua libre de compuestos orgánicos, sumergiendo la 
aguja dentro del agua, se recomienda inclinar el matraz mientras se inyecta la mezcla de estándares. 
Posteriormente adicionar a cada matraz las soluciones de estánda r interno y estándar surrogado.  
B.3.6.2 Procedimiento analítico   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Para la optimización del CG/EM, las condiciones cromatográficas dependen de los compuestos de interés, 
el instrumento y los proveedores de las columnas.  
Las condiciones cromatográficas recomen dadas para inyección directa (ejemplo) son:  
 Temperatura de inyector: 200 -275 °C  
 Temperatura de la línea de transferencia: 200 -300 °C  
 Columna cromatográfica: DB -624 (6%cianopropilfenil/94%dimetipolisiloxano) de 70 m X 0.53 mm o 
cualquier columna equivalente  que proporcione un desempeño de método que permita cumplir con las 
especificaciones de esta Norma.  
 Flujo de gas acarreador 4 ml/min  
 Programación de condiciones: temperatura inicial 40 °C durante 3 minutos, 8 °C/minuto hasta 260 °C, 
hasta que todos los com puestos esperados hayan eluído.  
 Bake column durante 75 minutos.  
De manera general las condiciones de análisis estarán en función de los equipos e instrumento utilizado 
para la determinación (éstos incluye cromatógrafo, detector, columna cromatográfica, etc .). 
El espectrómetro de masas requiere un ajuste adicional, sintonizando de tal manera que al comienzo de 
cada periodo de 12 horas de análisis y antes del análisis de blancos, estándares y muestras verificar el 
sistema CG/EM inyectando 25 ng de 4 -bromofluo robenceno (BFB) directamente en la columna del 
cromatógrafo. Si se dificulta la inyección directa, adicionar 1 µL de disolución de BFB de 25 µg/mL a 25 mL de 
agua en una jeringa utilizada para transferir muestras para dispositivos de purga y analizar como una muestra. 
Se debe de obtener un espectro de masas de corrección de fondo y confirmar que se cumplen los criterios de 
abundancia m/z descritos en la Tabla B.3 -1. Si no se cumplen todos los criterios, repetir la prueba hasta que 
se cumplan todos.  
En relac ión con el procedimiento de purga y trampa, es necesario llevar a cabo el análisis para la purga y 
concentración de los analitos a temperatura ambiente. Es necesario que los estándares de calibración, 
muestras y muestras control de calidad sean purgadas a la misma temperatura. Purgar la muestra con helio u 
otro gas inerte a un flujo entre 20 y 40 mL/minuto durante 11 minutos.  
Llevar a cabo la desorción utilizando una temperatura de 245 °C con un flujo de 10 mL/min y una duración 
de 1.5 minutos o de acuerdo a las condiciones establecidas durante la optimización del método. Después de 
la desorción de la muestra reacondicionar la trampa reiniciando el ciclo de purga y manteniendo la 
temperatura de la trampa a 245 °C durante 10 minutos.  
Proceder de igual manera con los blancos, curva de calibración y muestras de control de calidad.  
De manera general las condiciones de análisis estarán en función del equipo utilizado para la 
determinación (sistema de purga y trampa y trampa utilizada).  
B.3.6.3 Análisis de la muest ra 
Las muestras deben almacenarse en viales con tapa con un espacio mínimo de cabeza, a 4 °C o menos y 
en un área libre de disolventes orgánicos. El tamaño de alguna burbuja formada durante el enfriamiento de la 
muestra no debe ser mayor de 5 -6 mm, cuando se observe alguna burbuja en el vial se debe revisar que éste 
no presente fuga, de ser así la muestra debe descartarse. Todas las muestras deben analizarse tan pronto 
como sea posible, después de haber sido recolectadas, generalmente en un máximo de 14 día s después de  la 
recolección.  
Poner a temperatura ambiente la muestra y transferir 5mL al dispositivo de purga utilizando el 
automuestreador, o manualmente utilizando una jeringa. Si los volúmenes de muestra son mayores de 5 mL, 
por ejemplo muestras de 25 m L, entonces los volúmenes de los estándares de calibración deben ser  los 
mismos.  
Para tomar la alícuota de la muestra que será inyectada en el sistema de purga en forma manual, utilizar 
una jeringa con válvula de cierre. Retirar el émbolo de la jeringa y c errar la válvula. Abrir el envase de la 
muestra y cuidadosamente colocar la muestra dentro del cuerpo de la jeringa. Colocar nuevamente el émbolo 
de la jeringa y antes de presionar el émbolo, invertir la jeringa y abrir la válvula, posteriormente presionar  el 
émbolo para eliminar el aire y ajustar el volumen de la muestra a 5 ó 25 mL según sea el caso.  
Si hay muestra suficiente disponible, utilizar otra jeringa para tomar una segunda alícuota, para su análisis 
por duplicado (una vez que la tapa de la muestr a se ha removido, la muestra no se puede almacenar, debido 
al espacio de cabeza (headspace).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Adicionar una cantidad apropiada de la mezcla de los estándares surrogados y estándar interno a través 
del orificio de la válvula y cerrarla. Unir con el dispositi vo de purga, abrir las válvulas e inyectar la muestra en 
el recipiente de purga. Cerrar las válvulas y purgar la muestra por 11 minutos a temperatura ambiente a un 
flujo de 40 mL/min (helio o nitrógeno). Si el vapor de agua causa problemas en el espectróme tro de masas, 
utilizar una purga seca de 3 minutos y/o un módulo de control de humedad.  
Absorber los materiales atrapados en la cabeza de la columna cromatográfica a 180 °C mientras pasa el 
gas inerte a un flujo compatible con la columna de elección y come nzar un programa de temperatura  en el 
CG. 
Establecer el sistema de auto -drenaje para la cámara de purga vacío mientras la trampa está siendo 
absorbida dentro del CG, o alternativamente, utilizar una jeringa de muestra para vaciar el recipiente. Lavar la 
cámara con dos enjuagues de 25 mL de agua si las muestras que se están analizando están altamente 
contaminadas. Asegurarse que todas las áreas humedecidas durante la purga están también humedecidas 
durante el enjuague para maximizar el enjuague.  
Reacondicion ar la trampa en el horno a la temperatura de acuerdo a lo que recomienda el fabricante por 5 
a 7 minutos. Dejar que la trampa se enfríe a temperatura ambiente antes de introducir la siguiente muestra en 
el recipiente de purga. Cuando todos los compuestos d e la muestra han sido eluidos de la columna 
cromatográfica, terminar la adquisición de datos y guardar los archivos. Usar un software que muestre el 
intervalo completo de los espectros de masas y un apropiado EICP. Si la abundancia de un ion excede el 
sistema del intervalo de trabajo, diluir la muestra en una segunda jeringa con agua y analizar.  
Tener cuidado con la muestra porque los compuestos pueden ser volátiles y se pueden perder si se reabre 
la muestra. Estimar la dilución necesaria y expulsar el exce so de muestra de la segunda jeringa, inyectar esa 
porción en un recipiente de purga y con una segunda jeringa, adicionar el agua necesaria para tener un total 
de 25 mL en el recipiente de purga.  
B.3.6.4 Análisis de datos y cálculos  
Una vez que los compuest os han sido identificados, la cuantificación de dichos compuestos se basa en la 
abundancia del área integrada del PCIE, el estándar interno utilizado debería tener el tiempo de retención muy 
cercano al analito de interés.  
B.3.6.5 Informe de prueba  
Reportar  cada uno de los compuestos (benceno, tolueno, o -xileno, meta -xileno, para -xileno y estireno)  en 
µg/L.  
B.3.7 Control de calidad, calibración e interferencias  
B.3.7.1 Control de calidad  
Antes del análisis de las muestras leer un blanco para demostrar que to das las partes del equipo en 
contacto con la muestra y los reactivos están libres de interferencias.  
Los blancos de reactivos, blancos de almacenamiento, muestras fortificadas y duplicados deben 
someterse a los mismos procedimientos analíticos que los util izados en las muestras.  
El laboratorio debe demostrar la competencia inicial y mantener los registros de esto.  
Durante el análisis de rutina, se deben analizar blancos de reactivos, blancos de almacenamiento, 
muestras fortificadas y duplicados de muestras.  Se deben agregar surrogados a las muestras y a la muestras 
de control de calidad.  
Siempre que sea posible, el laboratorio debe analizar materiales de referencia certificados y participar en 
estudios de pruebas de aptitud.  
El laboratorio debe tener procedi mientos de control de calidad para asegurarse de que la integridad de la 
muestra no se vea comprometida durante el proceso de recolección y manipulación de las muestras, por 
ejemplo, asegurándose que las tapas y septas de los viales no presenten fugas.  
El espectrómetro de masas se calibra con el estándar de BFB ajustando masas e intensidad de los iones. 
Los tiempos de retención relativos de los analitos en la muestra deben estar dentro de ± 0.06 unidades de 
tiempo de retención de los estándares.  
La intensid ad relativa de los iones característicos de cada uno de los compuestos en la muestra debe 
encontrarse dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de los estándares de  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en  el espectro de referencia, la abundancia en el 
espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% al 80%).  
La curva de calibración inicial para cada compuesto de interés debe verificarse cada 12 horas, analizando 
un estándar de calibración de concentración cercana al punto medio del intervalo de la curva de calibración 
(CdC). Si el %DSR de los factores de respuesta es menor o igual al 20%, la calibración inicial continúa 
vigente, si el valor es mayor que 20% para cualquier CdC, revisar la prepa ración del estándar, las condiciones 
instrumentales, si el problema continúa preparar una nueva curva y recalibrar.  
Analizar un blanco de reactivos después de analizar el estándar de calibración o intermedio en el lote 
analítico, para asegurar que el siste ma está libre de contaminación.  
B.3.7.2 Calibración  
B.3.7.2.1  Preparar una curva de calibración de al menos cinco niveles de concentración conteniendo las 
concentraciones requeridas de estándares (BTEX y estireno) de calibración, incluyendo subrogados y/o 
estándares internos, y transferir 5 ó 25 mL (según se requiera) al dispositivo de purga utilizando el 
automuestreador, o manualmente utilizando una jeringa. Si los volúmenes de muestra son mayores de 5 mL, 
por ejemplo muestras de 25 mL, entonces los volúme nes de los estándares de calibración deben ser los 
mismos.  
El cálculo de regresión debe generar un coeficiente de correlación (r) mayor o igual a 0.99.  
B.3.7.2.2  Procedimiento de calibración con estándar externo  
Emplear este procedimiento solo si el volume n de la inyección puede mantenerse constante.  
Analizar cada concentración de la curva de calibración . Calcular individualmente los factores de respuesta 
(FR) para cada estándar analizado de la siguiente manera:  
 
Calcular la cantidad de compuesto para cada  estándar:  
 
En donde:  
WS cantidad del compuesto, µg  
VS volumen del estándar extraído, L  
CS concentración del estándar preparado en µg/L  
Para cada componente determinar el promedio del factor de respuesta (FR) y la desviación estándar de 
los factores de re spuesta empleando todos los estándares de calibración analizados. Si el porciento de la 
desviación estándar relativa (%DER) es menos del 20%, se puede emplear el FR promedio para calcular la 
concentración de la muestra:  
 
En donde:  
DE desviación estándar  
FR factor de respuesta  
Si él %DER es mayor del 20 %, graficar la curva de calibración de cantidad inyectada contra respuesta, 
emplear la gráfica para determinar la cantidad del componente presente en cada muestra. Después 
determinar la concentración dividie ndo la cantidad, µg, por el volumen en L, de muestra extraída. 
Opcionalmente emplear el sistema de datos para realizar una regresión lineal y emplear la ecuación para 
calcular la cantidad de los componentes a partir de los valores de respuesta.  
Cuando se e mplee el valor promedio del FR, calcular la concentración como sigue:  
 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
En donde:  
CX concentración del compuesto en mg/L  
RX respuesta de la muestra (mm, área, etc.)  
VX volumen de la muestra extraída en L  
B.3.7.2.3 Procedimiento de calibración con estándar interno . 
Emplear este procedimiento cuando el volumen de la inyección no se mantiene constante.  
Los estándares internos deben ser los más cercanos a los analitos a cuantificar de modo que tengan 
tiempos de retención relativos de 0.80 – 1.20. Usar el ion de l pico base de estándar interno específico como 
ion primario para la cuantificación. Si se presentan interferencias utilice el siguiente ion de mayor intensidad 
para la cuantificación.  
Elaborar una lista con las áreas de los iones característicos (Tabla B. 3-1, de este Apéndice), contra la 
concentración de cada compuesto y estándar interno.  
Calcular los FRR para cada compuesto relativo a cada uno de los estándares internos.  
Tabla B.3 -1. Iones característicos de los compuestos  
Compuesto  Ion primario  Ion secu ndario  
Benceno  78 -- 
Etilbenceno  91 106 
Tolueno  92 91 
Xilenos (orto, meta y para)  106 91 
Estireno  104 78 
 
Analizar cada concentración de la curva de calibración. Para todos los análisis hechos en una secuencia 
analítica, determinar el promedio y la d esviación estándar de la respuesta del estándar interno. Calcular el 
porciento de la desviación estándar relativa (%DER), si el %DER es mayor del 20%, tomar acciones 
correctivas para mejorar la precisión del método. Establecer un intervalo de confianza de 99% para la 
respuesta del estándar interno usando el promedio calculado y la desviación estándar del análisis de  la 
muestras. Rechazar los análisis cuando la respuesta del estándar interno está fuera de los límites y volver  a 
analizar. Después del análisis  de los estándares de calibración, calcular los factores de respuesta relativos 
(FRR) individuales de cada analito en cada estándar de la siguiente manera:  
 
En donde:  
Rs, Ri respuestas del estándar de calibración y del estándar interno respectivamente.  
Cs, Ci concentraciones del analito en los estándares de calibración y del estándar interno 
respectivamente.  
Calcular el promedio de los FRR de cada analito, las desviaciones estándar de los FRR y %DER. Si él 
%DER es menor del 20%, utilizar el valor promedio del FRR; si es mayor, graficar la curva de calibración o la 
ecuación de regresión lineal como se describe en el procedimiento de estándar externo.  
Cuando se utilice el promedio de los FRR del estándar interno, calcular la concentración de las muestras 
con la ecuación siguiente:  
 
En donde:  
Cx concentración del analito en la muestra en mg/L  
Rx respuesta de la muestra   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Ci concentración del estándar interno  
Ri respuesta del estándar interno  
B.3.7.3 Interferencias  
Las interferencias introducidas por las muestras  son contaminantes que son co -extraídos de ellas por lo 
que la cantidad de estas varía dependiendo del tipo de muestra y su naturaleza.  
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en el material de vidrio 
o en el siste ma de purga y trampa que puede conducir a obtener picos distorsionados y picos fantasma y/o 
línea base elevada en el cromatograma. El blanco electrónico (inyección de aire) permite verificar el grado de 
contaminación del sistema.  
Tomar en consideración las  impurezas en el gas de purga y compuestos orgánicos de desgasificación. 
También puede ser ocasionada por la contaminación del equipo y de la tubería de la trampa. Demostrar que el 
sistema está libre de contaminación bajo condiciones de operación analizand o los blancos de reactivos 
diariamente.  
Utilizar blancos sólo para monitorear; son inaceptables las correcciones por valores de blancos. En el 
sistema de purga y trampa evitar usar tubería de plástico y selladores de rosca que no sean de PTFE, o 
controlado res de flujo con componentes de caucho. Asegurarse que el área analítica no es fuente de 
contaminación por disolventes de laboratorio.  
Utilizar un blanco de reactivos preparado a partir de agua y llevado a través de la toma de muestras, 
manipulación y proc edimientos de envío como un control de este tipo de contaminación.  
La contaminación por arrastre puede ocurrir siempre que se analiza una muestra con concentraciones 
altas del o los analitos e inmediatamente después se analiza una muestra con concentracion es bajas. Para 
reducir el arrastre enjuagar el dispositivo de purga y la jeringa de inyección de muestra con agua entre 
muestra y muestra. Después del análisis de una muestra de concentración alta, analizar un blanco  de 
reactivos para verificar que esté li bre de contaminación. Para muestras que contienen cantidades de 
materiales solubles en agua, sólidos suspendidos, compuestos con alto punto de ebullición o altos niveles  de 
compuestos volátiles, entre análisis lavar la cámara de purga con una solución dete rgente, enjuagar con agua 
destilada y secar en un horno a 105 °C. La trampa y otras partes del sistema también son objeto de 
contaminación, por lo tanto frecuentemente purgar todo el sistema.  
B.3.8 Seguridad  
La toxicidad o carcinogenicidad de todos los rea ctivos no se han determinado con precisión. Sin embargo, 
todas las sustancias deben ser tratadas como potencial peligroso para la salud, por lo que al manipular las 
disoluciones estándar, los analistas deberán realizarlo en campana y utilizar respiradores con filtros 
especiales para gases tóxicos además del vestuario básico (bata y guantes). Estos materiales estándar puros 
y las disoluciones preparadas deberán almacenarse en condiciones recomendadas por el proveedor . 
B.3.9 Referencias  
EPA Method 8260c Volat ile Organic Compounds by gas Chromatography/mass Spectrometry (GC/MS)  
EPA Method 5030c Purge and Trap for Aqueous Samples.  
 
B.4 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE PLATA TOTAL Y ALUMINIO EN AGUA PARA 
USO Y CONSUMO HUMANO  
Para la determinación de plat a total y aluminio para el cumplimiento de esta Norma, se podrá utilizar 
indistintamente el método de prueba para la determinación de plata total y aluminio en agua para uso y 
consumo humano por espectrometría de absorción atómica con horno de grafito (pun to B.4.1, de este 
Apéndice) o el método de prueba para la determinación de aluminio, antimonio, arsénico, bario, cadmio, 
cobre, cromo, fierro, manganeso, níquel, plata, plomo y selenio por espectrometría de emisión óptica de 
plasma acoplado inductivamente (ICP-OES). (punto B.4.2, de este Apéndice).  
B.4.1 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE PLATA TOTAL Y ALUMINIO EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO POR ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA CON HORNO 
DE GRAFITO  
B.4.1.1 Símbolos y términos abreviados  
Ag plata 
Al aluminio  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
HCl ácido clorhídrico  
LCH  lámpara de cátodo hueco  
LDE lámpara de descarga sin electrodos  
PTFE  politetrafluoroetileno  
B.4.1.2 Principio  
Las muestras de agua se conservan mediante tratamiento con ácido y se digieren si es necesario.  Una 
pequeñ a submuestra se inyecta en el horno de grafito del espectrómetro de absorción atómica. El horno se 
calienta eléctricamente. Al aumentar la temperatura gradualmente, la muestra se seca, se piroliza  y se 
atomiza.  
La espectrometría de absorción atómica se bas a en la capacidad de los átomos para absorber la luz de 
una fuente de luz que emite una luz específica para un cierto elemento. Cuando el haz de luz pasa a través  de 
la nube de átomos en el horno de grafito calentado, la luz es absorbida selectivamente por  los átomos de los 
elementos elegidos. La disminución de la intensidad de la luz se mide con un detector a una longitud  de onda 
específica.  
La concentración de un elemento en una muestra se determina comparando la absorbancia de la muestra 
con la absorbanc ia de disoluciones de calibración.  
B.4.1.3 Alcance y aplicación  
El método descrito es un procedimiento para la determinación de niveles trazas de plata total (Ag) y 
aluminio (Al) en agua de uso y consumo humano proveniente de sistemas de abastecimiento uti lizando la 
espectrometría de absorción atómica con atomización electrótérmica en horno de grafito.  
El límite de detección del método para plata es de 0.2 µg/L. El límite de detección del método para 
aluminio es de 1 µg/L. 
Este método es aplicable también p ara la determinación de bajas concentraciones de Arsénico (As), 
Cadmio (Cd), Cobalto (Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Fierro (Fe), Manganeso (Mn), Molibdeno (Mo), Níquel 
(Ni), Plomo (Pb), Antimonio (Sb), Selenio (Se), Talio (Tl), Vanadio (V) y Zinc, para agua  de uso y consumo 
humano proveniente de sistemas de abastecimiento, así como para agua superficial y subterránea, sin 
embargo, este documento se refiere exclusivamente para la determinación de plata total y aluminio en agua 
de uso y consumo humano provenie nte de sistemas de abastecimiento, por lo que para la determinación de 
otros elementos y en otras matrices deberán de realizarse las adecuaciones necesarias.  
B.4.1.4 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluye n sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
El límite de detección d epende de la matriz de la muestra así como del equipo, el tipo de atomizador y el 
uso de modificadores químicos. Para muestras de agua con una matriz simple (concentración baja de sólidos 
y partículas disueltas), los límites de detección del método estarán  cerca de los límites de detección  del 
equipo.  
Balanza analítica. Con sensibilidad de 0.1mg  
Centrífuga de laboratorio . Capaz de mantener 1600 rpm  
Embudos de filtración . De diferentes capacidades: de polietileno, polipropileno, PTFE ó vidrio.  
Espectrómetro de absorción atómica con horno de grafito.  Equipado con sistema de corrección de 
fondo y automuestreador.  
Filtros.  Con tamaño de poro de 0.45 µm  
Fuente de radiofrecuencia . En caso de usar LDE.  
Horno de microondas.  O sistema de reflujo o sistema de digestió n abierto.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Lámpara . De cátodo hueco (LCH) y/o Lámpara multi -elemento y/o lámpara de descarga sin electrodos 
(LDE) de plata.  
Material común de laboratorio.  
Matraces volumétricos . De diferentes capacidades.  
Papel filtro.  De filtración media # 1, 2, 111, 43, 41, 40 etc.  
Pipetas de pistón (micropipetas) . De diferentes capacidades.  
Puntas de plástico . Para pipetas de pistón.  
Recipientes . De polipropileno o PTFE.  
Sistema de extracción . Para eliminar el humo y los vapores que son peligrosos para la salud del anali sta. 
Tubos de grafito . Cubiertos pirolíticamente  
Viales  
B.4.1.5 Reactivos y soluciones  
Ácido nítrico (HNO 3). Grado reactivo (G.R)  
Ácido nítrico de alta pureza (HNO 3). Al 65% v/v (con contenido de metales en niveles traza).  
Agua tipo I.  
Argón o nitrógeno . De alta pureza grado absorción atómica.  
Disolución de ácido nítrico.  Grado reactivo al 10% (Para la descontaminación del material). Por cada 
litro a preparar, agregar 100 mL de ácido de la siguiente manera: en un recipiente que contenga 
aproximadamente 2/3 partes de agua agregar la cantidad de ácido requ erida y llevar al volumen total  con 
agua.  
Disolución de nitrato de Magnesio hexahidratado [Mg (NO 3)2•6H 2O)]. De alta pureza (con contenido de 
metales a niveles traza).  
Disolución estándar de plata o aluminio.  De 1000 mg/L de preferencia trazable a patrones nacionales o 
internacionales. La disolución puede prepararse a partir de la sal, y debe tener una pureza >99.95%. La sal 
debe ser secada por 1 h a 105 °C.  
Disolución de paladio (Pd).  Con niveles traza de met ales (de alta pureza).  
Fosfato de amonio monobásico (NH4H2PO4).  Con niveles traza de metales (de alta pureza).  
B.4.1.6 Procedimiento  
B.4.1.6.1 Lavado de material  
Todo el material utilizado debe someterse a lavado de acuerdo con las siguientes instrucciones : 
El jabón que se use debe ser neutro de preferencia líquido.  
Enjuagar perfectamente con agua corriente.  
Sumergir el material de vidrio o plástico en un recipiente (de preferencia de plástico) que contenga una 
solución de ácido nítrico al 10%. El HCl es má s efectivo para el lavado de material de polietileno o 
polipropileno, mientras que el HNO 3 es preferible para el material de PTFE o de vidrio.  
Dejarlo tapado y reposando por un lapso mínimo de 2 horas.  
Quitar el exceso de ácido nítrico con varios enjuagues  de agua de red y el último enjuague con agua tipo I.  
Dejar escurrir y secar.  
Tapar con papel parafinado o en bolsas cerradas de plástico.  
Guardar en cuanto esté seco para evitar contaminación por partículas en el aire.  
B.4.1.6.2 Preparación de las muestra s Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Las muestras se pueden analizar directamente por espectrometría de absorción atómica sin realizar la 
digestión si son inodoras, incoloras y transparentes.  
Previo al análisis adicionar a 100 mL de muestra, 1 mL de ácido nítrico de ultra alta pureza. En ca so qu e 
se observe un precipitado, e ste volumen de muestra se digiere adicionando 1 mL más de ácido nítrico de ultra 
alta pureza concentrado, calentar a 85°C hasta reducir el volumen a 20 mL cuidando que no hierva.  
En caso de que el precipitado sea consider able se sugiere la adición de 10 mL de ácido nítrico de ultra alta 
pureza para realizar la digestión de la muestra.  
Calentar a reflujo por 20 min y transferir a un matraz volumétrico de 50 mL.  
Llevar al volumen con agua tipo I  
Centrifugar a 1600 rpm por 30  minutos o dejar reposar toda la noche y analizar el sobrenadante.  
Se puede utilizar el horno de microondas para digerir las muestras si se forma un precipitado al adicionar 
el ácido nítrico. Proceder de acuerdo a las condiciones recomendadas por el fabric ante.  
Preparar un blanco de reactivos fortificado por cada lote, y una muestra fortificada por cada 10 muestras o 
por grupo si son menos.  
B.4.1.6.3 Preparación de diluciones y curvas de calibración  
Para la preparación de las disoluciones madre (más concent radas). Medir un volumen apropiado de 
disolución estándar (aprox. 1 a 10 mL) para el aforo inicial, y hacer las diluciones necesarias utilizando 
material volumétrico verificado para su preparación. Para la preparación de las disoluciones más 
concentradas u tilizar HNO 3 de alta pureza de tal forma que la concentración final del ácido sea del 2 al 5% 
para poder preservar las disoluciones estándar por mayor tiempo, mantener estas, bien tapadas y en 
recipientes de PTFE de preferencia.  
Para la preparación de las disoluciones de trabajo y de la curva de calibración utilizar HNO 3 de alta pureza 
y la concentración final del ácido debe estar entre 0.1 a 0.2%. Preparar éstas el mismo día del análisis.  
Para preparar la solución de trabajo de plata (Ag), disolver la plat a en 80 ml de HNO 3 (1+1) calentando 
para lograr la disolución, enfriar y diluir al volumen con agua en un matraz volumétrico de 1000mL. Reservar 
la solución en una botella cambar sellada completamente con una hoja de aluminio para proteger de la luz.  
Para preparar la solución de trabajo de aluminio (Al), disolver el aluminio en 4 mL de HCl (1+1) y 1 mL de 
HNO 3 concentrado en un cubo. Calentar el cubo lentamente para inducir la solución. Transferir la solución 
cuantitativamente a un matraz volumétrico de 100 0 mL. Añadir 10mL de HCl (1+1) y diluir al volumen deseado 
con agua.  
Preparar 5 niveles de concentración dentro del intervalo de trabajo. El intervalo depende de la sensibilidad 
del instrumento, del tipo de matriz y del uso de modificadores, tomar como guí a la Tabla B.4.1 -1, de este 
Apéndice, para un volumen de muestra de 20 µL.  
Tabla B.4.1 -1. Intervalo de trabajo óptimo para plata y aluminio  
Elemento  Masa característica (m 0) 
(pg) Límite de detección  
(µg/L) Intervalo de trabajo 
(µg/L) 
Ag 1.5 0.2 1 a 10  
Al 10 1 6 a 60  
 
Preparar una disolución de una concentración conocida de plata o aluminio para verificar el equipo.  
B.4.1.6.4 Condiciones de operación del horno de grafito  
Ajustar el espectrofotómetro de acuerdo a las recomendaciones del fabricante, encend er la lámpara y 
dejar calentar al menos 15 minutos las LCH y al menos 45 minutos las LDE.  
Siempre utilizar la corrección de fondo.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
El programa de temperatura del horno de grafito (secado, pirolisis, atomización y limpieza) depende del 
analito, de la matriz  y de la marca del equipo utilizado. Optimizar utilizando como guía las recomendaciones 
del fabricante. En la Tabla B.4.1 -2, de este Apéndice, se muestran los principales parámetros utilizados para 
ajustar el equipo.  
Tabla B.4.1 -2. Parámetros de ajuste en el horno de grafito  
Elemento  Longitud 
de onda  
(nm)  Ancho de 
rejilla (slit)  
(nm)  Temperatura  de pirolisis (°C)  Temperatura de atomización 
(°C) 
Sin 
modificador  Con 
modificador  Sin 
modificador  Con 
modificador  
Ag 328.1  0.7 650 1 000  1600  2 200  
Al 309.3  0.7 1 400  1 700  2500  2 350/2 400  
 
Utilizar modificadores de matriz para eliminar los efectos de matriz ya que su uso permite elevar la 
temperatura de pirolisis y poder eliminar las interferencias sin que se pierda el analito.  
Si se utilizan modificadores de matriz en las muestras, adicionar también al blanco de la curva, a la  curva 
de calibración, a las disoluciones estándar de verificación, a las muestras fortificadas y a las disoluciones 
estándar de control de calidad (muestras de control de calidad (MCC ) o muestras de control de laboratorio 
(MCL).  
En la Tabla B.4.1 -3, de este Apéndice, se muestran los principales modificadores de matriz utilizados en el 
análisis por horno de grafito. Generalmente la cantidad indicada en la tabla debe estar contenida en u n 
volumen de modificador de 10 µL.  
Tabla B.4.1 -3. Principales modificadores de matriz utilizados en el análisis por 
horno de grafito.  
Elemento  Modificador químico  Cantidad (µg)  
Ag Pd + Mg(NO 3)2 o 
NH 4H2PO 4 15 + 10  
200 
Al Pd + Mg(NO 3)2 o 
Mg(NO 3)2 15 + 10  
50 
Los modificadores y las cantidades pueden variar, se pueden utilizar los 
recomendados por el fabricante.  
 
Si el equipo cuenta con automuestreador, colocar los puntos de la curva, el blanco de reactivos, las 
muestras y los modificadores de matriz en lo s viales, los cuales han sido previamente enjuagados con ácido 
nítrico al 3% y posteriormente con la disolución a analizar.  
B.4.1.6.5 Lectura en el equipo  
Leer por triplicado el blanco de calibración para verificar que no haya contaminación y posteriorment e leer 
la disolución de verificación también por triplicado.  
Leer por duplicado en el equipo el blanco y los puntos de la curva.  
Elaborar una curva de calibración dentro del intervalo de trabajo, graficando la absorbancia (área o altura 
de pico) en función  de la concentración. La absorbancia integrada como área de pico es más recomendable.  
Ajustar la curva por medio de mínimos cuadrados (regresión lineal) o calcular la concentración 
directamente en el equipo que se programe.  
Leer cada una de las muestras po r duplicado, registrar la absorbancia y calcular la concentración del 
elemento a partir de la curva de calibración. Cuando se use el equipo programable realizar los cálculos finales.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Asegurarse que las concentraciones de las muestras caen dentro del interv alo de trabajo de la curva de 
calibración, de no ser así realizar la dilución correspondiente.  
B.4.1.6.6 Análisis de datos y cálculos  
Interpolar los valores de absorbancia, área o altura del pico de la muestra analizada en la curva de 
calibración y obtener  los resultados en mg/L del elemento en la muestra empleando la siguiente fórmula:  
 
En donde:  
A concentración del elemento en la muestra leída directamente del equipo o de la curva de 
calibración, en mg/L o µg/L  
V volumen de la disolución de la muestra (a foro), en mL  
F factor para pasar de µg a mg=1 000 (si la curva está en µg/L)  
M volumen de la muestra, en mL  
Si la muestra ha sido diluida, debe aplicarse el factor de dilución.  
Calcular el porcentaje de recuperación para el analito de acuerdo con la siguie nte fórmula:  
 
En donde:  
R % de recobro  
CM Concentración de la muestra fortificada o blanco de reactivos fortificado.  
C Concentración de la muestra o blanco de reactivos.  
CA Concentración equivalente de elemento añadido a la muestra o blanco de reactivos.  
B.4.1.6.7 Informe de prueba  
Reportar el resultado como mg/L de plata total o mg/L de aluminio.  
B.4.1.7 Control de calidad e interferencias  
B.4.1.7.1 Control de calidad  
El coeficiente de correlación (r) de la curva deberá ser > 0.995. Leer en el equipo el b lanco de calibración y 
un punto de la curva de calibración (MCI) antes de iniciar la lectura de las muestras, después de la lectura de 
cada 10 muestras y al final del análisis. El resultado deberá encontrarse dentro del ± 15% del valor esperado. 
Si dicho v alor no se encuentra en el intervalo, interrumpir el análisis y buscar las posibles causas, 
posteriormente volver a leer la curva de calibración y repetir las lecturas del último lote de muestras.  
B.4.1.7.2 Interferencias  
Altas concentraciones de cloruro p ueden causar resultados bajos debido a que la volatilidad de muchos 
elementos se incrementa y el analito se pierde durante el proceso de pirolisis. Los efectos de matriz pueden 
disminuirse parcialmente o completamente con la optimización del programa de te mperatura, del uso de tubos 
recubiertos pirolíticamente y plataformas, con el uso de modificadores químicos como el nitrato de magnesio o 
el fosfato de amonio, la técnica de adición de estándar y con el uso del corrector de fondo.  
B.4.1.8 Referencias  
International Organization for Standardization. 2003. Water quality - Determination of trace elements using 
atomic absorption spectrometry with graphite furnace. ISO15586:2003(E).  
B.4.2 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE ALUMINIO, ANTIMONIO, ARSÉNICO, 
BAR IO, CADMIO, COBRE, CROMO, FIERRO, MANGANESO, NÍQUEL, PLATA, PLOMO Y SELENIO  POR 
ESPECTROMETRÍA DE EMISIÓN ÓPTICA DE PLASMA ACOPLADO INDUCTIVAMENTE (ICP -OES).  
B.4.2.1 Símbolos y términos abreviados   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Al  aluminio  
Ag plata  
As arsénico  
Ba bario  
CCC  verificación  de calibración continua  
Cd cadmio  
Cr cromo  
CVI disolución estándar de verificación de la calibración inicial  
Fe fierro  
FEP fluorocarbono  
HCl ácido clorhídrico  
ICP-OES  Espectrometría de emisión óptica de plasma acoplado inductivamente  
IEC interferencias es pectrales  
LDI límites de detección del instrumental  
Mn manganeso  
Ni níquel  
Pb plomo  
Sb  antimonio  
Se selenio  
Y itrio 
B.4.2.2 Principio  
La muestra en solución es aspirada (nebulizada) continuamente en un plasma de argón inductivamente 
acoplado, donde los an alitos de interés se convierten en átomos de fase gaseosa de estado excitado o iones. 
A medida que los átomos o iones de estado excitado vuelven a su estado fundamental, emiten energía en 
forma de luz a longitudes de onda que son características de cada el emento. La intensidad de la energía 
emitida a la longitud de onda elegida es proporcional a la cantidad del elemento en la muestra analizada.  
Las muestras de agua se conservan mediante tratamiento con ácido y se digieren si es necesario. El 
análisis direct o por ICP -OES debe llevarse a cabo solamente sobre matrices acuosas relativamente limpias.  
B.4.2.3 Alcance y aplicación  
El método de Espectrometría de emisión óptica de plasma acoplado inductivamente (ICP -OES) utilizando 
sistemas ópticos simultáneos o secu enciales y un sistema de plasma de vista axial y radial, es utilizado para 
la determinación de metales, metaloides y algunos elementos no metálicos en disolución acuosa.  
La espectrometría de emisión óptica de plasma acoplado inductivamente (ICP -OES) es una  técnica 
espectrométrica utilizada para determinar oligoelementos en soluciones acuosas. En la ICP -OES, una 
solución de muestra es aspirada (es decir, nebulizada) continuamente en una descarga de argonplasma 
acoplada inductivamente, donde los analitos de i nterés se convierten en átomos o iones en fase gaseosa de 
estado excitado. A medida que los átomos o iones de estado excitado vuelven a su estado fundamental, 
emiten energía en forma de luz a longitudes de onda que son características de cada elemento espe cífico. La 
intensidad de la energía emitida a la longitud de onda elegida es proporcional a la cantidad (concentración) de 
ese elemento en la muestra analizada. Por tanto, determinando las longitudes de onda que son emitidas por 
una muestra y sus intensida des respectivas, se puede cuantificar la composición elemental de la muestra 
dada con respecto a un patrón de referencia. Para obtener resultados precisos, el análisis directo de ICP -OES 
debe llevarse a cabo solamente sobre matrices acuosas relativamente l impias (por ejemplo, muestras de agua 
subterránea pre -filtradas). Otras muestras acuosas y/o sólidas más complejas necesitan digestión ácida antes 
de su análisis; El analista debe asegurar que se elija un método de digestión de la muestra que sea apropiado  
para cada analito y el uso previsto de los datos.  
B.4.2.4 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros  proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Automuestreador.  
Balanza analítica , para la preparación de estándares y reactivos.  
Bomba peristáltica  para introducir los estándare s y las muestras al nebulizador.  
Control automático de los flujos de argón  para control exacto y poder reproducir las condiciones  del 
plasma.  
Embudos  
Espectrómetro de emisión controlado a través de una computadora , con capacidad de realizar 
corrección de f ondo.  
Generador de radiofrecuencia  
Matraces volumétricos  de diferentes capacidades.  
Nebulizador ultrasónico  
Pipetas volumétricas de pistón  de diferentes capacidades.  
Espectrometría de emisión óptica de plasma acoplado inductivamente  (ICP-OES).  
Probetas gra duadas  
Unidad de microondas  que proporcione una energía de 600 a 1600 W, dependiendo del número de 
muestras de capacidad, que pueda programarse dentro de ±10 W de la energía requerida y que cuente con 
sensor de temperatura y presión y un controlador de mic roondas.  
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA de 75 a 100 mL de capacidad capaces de resistir 
presiones de 500 psi como máximo y una temperatura máxima de 210 °C.  
B.4.2.5 Reactivos y soluciones  
A menos que se indique otro grado, los reac tivos que se requieren en el método deben ser tipo ACS 
(American Chemical Society) grado reactivo analítico. Prever que los reactivos sean de la pureza necesaria 
para permitir su uso sin que afecte la exactitud en la determinación.  
Agua tipo I  
Ácido clorhí drico concentrado (HCl) con la pureza necesaria para evitar contaminación de las muestras.  
Ácido nítrico concentrado (HNO 3) con la pureza necesaria para evitar contaminación de las muestras.  
Disolución de ácido clorhídrico HCl (1:1).  Agregar 500 mL de HCl concentrado a 400 mL de agua 
contenidos en un matraz volumétrico de 1 L y llevar al volumen.  
Disoluciones patrón estándar para cada analito.  Estas disoluciones pueden ser compradas o 
preparadas a partir de productos químicos de ultra -alta pureza (99.99 % o  de mayor pureza). Todas las sales 
deben ser secadas por 1 hora a 105°C, con algunas excepciones específicas anotadas. Muchas sales de 
metales son extremadamente tóxicas si son inhalados o ingeridos. Lavarse las manos cuidadosamente 
después de su manejo.  
Para la preparación de las disoluciones estándares concentradas típicas proceder conforme a lo siguiente:  
Calcular las concentraciones en base al peso de metal puro añadido, o mediante el uso de la fracción del 
elemento y el peso de la sal de metal añadido.  
Disolución concentrada de aluminio, 1 mL = 1 000 µg Al. En un vaso disolver 1.0 g of aluminio metálico 
con 4.0 mL de HCl (1:1) y 1.0 mL de HN03 conc. Calentar lentamente para disolver el metal. Una vez que se 
haya disuelto completamente, transferir la dis olución cuantitativamente a un matraz volumétrico de 1 000 mL, 
agregar 10.0 mL de HCl (1:1) y diluir al volumen con agua grado reactivo.  
Disolución concentrada de antimonio, 1 mL = 1 000 µg Sb . En un matraz volumétrico de 1 000 mL, 
disolver 2.667 3 g de K (SbO)C 4H4O6 (fracción del elemento Sb = 0.374 9),  con agua grado reactivo, adicionar 
10 mL de HCl (1:1), y diluir al volumen con agua.  
Disolución concen trada de arsénico, 1 mL = 1000 µg As.  En un matraz volumétrico de 1 000 mL 
disolver 1.320 3 g de As 2O3 (fracción del elemento As = 0.757 4), con 100 mL de agua conteniendo 0.4 g de 
NaOH. Acidificar la disolución con 2 mL de HNO 3 conc. y diluir al volumen con agua.  
Disolución concentrada de Bario, 1 mL = 1 000 µg de Ba . En un matraz volumétrico de 1 000 mL 
disolver 1.516 3 g de BaCl 2 (fracción del elemento Ba = 0.659 5), previamente secado a 250 °C por 2 horas 
con 10 mL de agua y 1 mL de HCl (1:1). Adicionar 10 mL más de HCl (1:1) y diluir al volumen con agua.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Disolución concentrada de Cadmio, 1 mL = 1 000 µg Cd. En un matraz volumétrico de 1 000 mL 
disolver 1.142 3 g de CdO (fracción del elemento Cd = 0.875 4), en una cantidad mínima de HNO 3 (1:1). 
Calentar para incrementar la velocidad de disolución. Adicionar 10 mL de HNO 3 concentrado y diluir al 
volumen con  agua.  
Disolución concentrada de Cobre, 1 mL = 1 000 µg Cu . En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
1.256 4 g de CuO (fracción del elemento Cu = 0.798 9) en una cantidad mínima de HNO 3 (1:1). Adicionar  10 
mL de HNO 3 concentrado y diluir al volumen co n agua.  
Disolución concentrada de Cromo, 1 mL = 1 000 µg Cr. En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
1.923 1 g de CrO 3 (fracción del elemento Cr = 0.520 0), en agua. Cuando se haya disuelto acidificar con  10 
mL de HNO 3 concentrado y diluir al volumen  con agua.  
Disolución concentrada de Fierro (1 000 µg/mL Fe)  - En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
1.429 8 g de Fe 2O3 en una mezcla caliente de 20 mL de HCl al 50 % y 2 mL de HNO 3 concentrado. Diluir al 
volumen con agua.  
Disolución concentrada de  Itrio, 1 mL = 1 000 µg Y. En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
4.308 1 g de Y(NO 3)3.6H 20 (fracción del elemento Y = 0.232 1), en una cantidad mínima de HNO 3 diluido. 
Adicionar 10 mL de HNO 3 concentrado y llevar al volumen con agua.  
Disolución con centrada de Manganeso, 1 mL = 1 000 µg Mn . En un matraz volumétrico de 1 000 mL 
disolver 1.0 g de manganeso metálico, en una mezcla ácida (10 mL de HCl concentrado y 1 mL de HNO 3 
concentrado) y llevar al volumen con agua.  
Disolución concentrada de Níquel, 1 mL = 1 000 µg Ni.  En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
1.0 g de níquel metálico en 10 mL de HNO 3 concentrado caliente, y llevar al volumen con agua.  
Disolución concentrada de Plata, 1 mL = 1 000 µg Ag.  En un matraz volumétrico de 1 000 mL, disol ver 
1.574 8 g AgNO 3 (fracción del elemento Ag = 0.635 0), agua, agregar 10 mL de HNO 3 concentrado y llevar al 
volumen con agua.  
Disolución concentrada de Plomo, 1 mL = 1 000 µg Pb . En un matraz volumétrico de 1 000 mL disolver 
1.598 5 g de Pb(NO 3)2 (fracci ón del elemento Pb = 0.625 6), en una cantidad mínima de HNO 3 (1:1). Adicionar 
10 mL más de HNO 3 (1:1) y diluir al volumen con agua.  
Disolución concentrada de Selenio, 1 mL = 1 000 µg Se.  No secar. En un matraz volumétrico de  1 000 
mL disolver 1.633 2 g de  H2SeO 3 (fracción del elemento Se = 0.612 3) en agua, y llevar al volumen  con agua.  
Soluciones multielemento, con trazabilidad a NIST comercialmente disponibles, pueden utilizarse para 
preparar la curva de calibración.  
B.4.2.6 Procedimiento  
B.4.2.6.1 Prepa ración de las muestras  
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todas las disposiciones aplicables en materia de manejo 
de residuos, particularmente las reglas de identificación, almacenamiento y disposición de residuos peligrosos.  
Asegurarse que todo el material utilizado durante el análisis esté libre de contaminación mediante 
procedimientos de lavado y descontaminación con ácido. Para descontaminar los vasos de digestión se puede 
utilizar un programa de digestión con el horno de microondas sigui endo las instrucciones del manual  del 
fabricante.  
Si la muestra es incolora, transparente y no presenta turbiedad aparente, no se requiere realizar digestión, 
sólo adicionar un volumen apropiado de ácido nítrico para ajustar la concentración del ácido al 1 % (v/v). Las 
muestras de control de calidad (ejemplo blanco de calibración, blanco de reactivo), deben someterse a los 
mismos procedimientos que las muestras incluyendo la adición del estándar interno o igualar la matriz con las 
disoluciones estándar.  
En caso de que la muestra presente turbiedad, llevar a cabo la digestión de la muestra. Medir una alícuota 
de 45 mL de muestra homogénea (AGITAR VIGOROSAMENTE LA MUESTRA), y depositar dentro de los 
vasos de digestión. Tomar 25 mL ó 10 mL de muestra + 20 mL de agua tipo I en caso de que la muestra 
presente materia orgánica o sólidos suspendidos. Adicionar 4 mL de HNO3 y 1 mL de HCl a cada vaso, tapar 
y colocar los vasos en el carrusel del horno de microondas. Proceder con la digestión de las muestras 
utilizando la potencia, rampas de temperatura y tiempo de acuerdo a las recomendaciones del proveedor. 
Preparar un blanco de reactivos utilizando agua tipo I en lugar de muestra y proceder de la misma manera.  
Una vez realizada la digestión permitir que los vasos se e nfríen aproximadamente 5 minutos antes de 
sacar el carrusel del horno, posteriormente sacar el carrusel del horno y permitir que los vasos alcancen la 
temperatura ambiente (de 30 a 40 min) antes de destaparlos.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Destapar cuidadosamente cada vaso dentro de l a campana de extracción. Llevar la muestra a un volumen 
final de 50 mL, si la muestra digerida contiene partículas las cuales puedan obstruir el nebulizador, filtrar 
utilizando papel filtro Número. 2, 40 ó 41, posteriormente transferir a un tubo previament e etiquetado.  
B.4.2.6.2 Análisis de las muestras en el ICP -OES  
Calibrar el instrumento de acuerdo con los procedimientos recomendados por el fabricante, utilizando la 
mezcla de disoluciones estándar de calibración. Enjuagar el sistema con el blanco de cali bración entre cada 
estándar o como recomienda el fabricante.  
Enjuagar el sistema con la disolución blanco de calibración, leer el CVI, el blanco de reactivos y las 
muestras. Enjuagar el sistema con la disolución blanco de calibración antes del análisis de cada muestra. El 
tiempo de lavado debe ser un minuto. Una reducción de este tiempo de enjuague deberá demostrarse 
adecuadamente. Registrar los resultados.  
Cuando la calibración inicial se realiza utilizando un solo nivel alto y el blanco de calibración, ad emás del 
CVI, se debe analizar una disolución estándar de verificación de calibración continua de bajo nivel (low -level 
continuing calibration verification standard, LLCCV) antes del análisis de las muestras. Analizar después de 
cada diez muestras y al fin al del lote de análisis una disolución estándar de verificación de calibración 
continua (CCC) y un blanco de calibración continua (continuing calibration blank, CCB).  
B.4.2.6.3 Análisis de datos y cálculos  
Reportar directamente los datos generados del inst rumento con su factor de dilución en caso de que exista 
considerando lo siguiente:  
Cuando se tenga un %DER mayor del 10 %, pero éste se deba a una lectura errónea de las 3 réplicas 
realizadas por el equipo, verificar si esa lectura se debió a un error del equipo, en cuyo caso considerar las 
otras 2 lecturas y evaluar si los resultados son válidos para ser reportados.  
Cuando se tenga un %DER menor del 10 % y el valor de la concentración reportada sea mayor que el 
límite de detección del método (LDM), verific ar que el pico de respuesta del equipo corresponde al metal en 
cuestión, en cuyo caso se debe reportar la concentración obtenida, de lo contrario reportar como “no 
detectado”, pues se estaría reportando un falso positivo. Para esto compare el pico del meta l en cuestión 
sobreponiendo el pico correspondiente del estándar de calibración de concentración más cercana.  
B.4.2.6.4 Informe de prueba  
Reportar los resultados de las muestras en mg/L  
B.4.2.7 Calibración e interferencias  
B.4.2.7.1 Calibración  
B.4.2.7.1.1  Mezcla de disoluciones estándar de calibración  
Preparar una mezcla de disoluciones estándar de calibración de acuerdo con la Tabla B.4.2. -1., mediante 
la combinación de volúmenes apropiados de las soluciones concentradas. Tener cuidado al preparar la 
mezc la de estándares para asegurar que los elementos son compatibles y estables juntos. Transferir las 
disoluciones estándar a envases de fluorocarbono (FEP) o envases de polietileno o polipropileno que no 
hayan sido utilizados previamente para almacenar. Para  todas las disoluciones estándar intermedios y de 
trabajo, especialmente estándares con una concentración baja (<1 mg/L o ppm), debe demostrarse su 
estabilidad antes de su uso. Preparar la mezcla de estándares con la periodicidad requerida, tomando en 
cuen ta que la concentración puede cambiar con el tiempo. En la Tabla B.4.2 -1 se muestran algunas 
combinaciones típicas de mezclas de disoluciones estándar de calibración.  
Tabla B.4.2. -1. Mezcla de disoluciones 
estándar de calibración  
Disolución  Elementos  
I Cd, Mn, Pb, Se  
II Ba, Cu, Fe  
III As 
IV Al, Cr, Ni,  
V Ag, Sb  
Si al adicionar la plata, se forma inicialmente un precipitado, añadir 15 mL de agua y calentar el matraz 
hasta que la disolución se torne clara, la concentración de plata debe limitarse a 2 m g/L. La plata es estable  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
en estas condiciones en una matriz de agua durante 30 días, si está protegida de la luz. Concentraciones más 
altas de plata requieren HCl adicional.  
Para preparar el blanco de calibración debe de acidificarse el agua a la misma con centración que los 
ácidos utilizados en los estándares de calibración.  
Los blancos de reactivos de laboratorio, deben contener todos los reactivos en los mismos volúmenes que 
se utilizan para las muestras y ser expuesto al proceso completo de preparación d e las muestras incluyendo la 
digestión cuando es requerida.  
En el caso de la disolución estándar de verificación de la calibración inicial (CVI), preparar con las mismas 
mezclas de ácidos que los estándares de calibración. El CVI debe provenir de una fuent e externa y diferente a 
los estándares de calibración y a una concentración cercana al punto medio de la curva de calibración. El CVI 
se requiere para la operación inicial y periódica de la verificación de los estándares de calibración y monitorear 
el dese mpeño del instrumento y el proceso analítico.  
Para la preparación de la disolución de verificación de calibración continua (CCC), preparar 
concentraciones conocidas de elementos que proporcionan interferencia que servirán para obtener los 
factores de corre cción de interferencia, particularmente aquellos con interferencias conocidas en 
concentraciones de 0.5 a 1 mg/L. En ausencia del analito a medir, la sobrecorrección puede dar un valor 
negativo que puede ser reportado como cero. Si el instrumento en partic ular con la sobrecorrección da un 
valor negativo, no será necesaria la fortificación.  
Una forma adicional de preparar la curva de calibración puede ser empleando soluciones multi elemento 
con trazabilidad a NIST comercialmente disponibles, por ejemplo: SM -148-009 “ICP SOLUTION STOCK” 
SOLUCION A (High Purity Standards) que contiene Arsénico, Bario, Berilio, Boro, Bismuto, Fierro, Plomo, 
Litio, Manganeso, Selenio, Estroncio y Talio en una concentración de 1000 µg/mL±0.5% en HNO 3 + Tr. HF 
con una densidad 1.09 8 g/cm3 ó mezcla analítica SM -148-009 (High -Purity Standards) que contiene Plata, 
Cadmio, Cromo, Cobalto, Cubre, Molibdeno, Níquel, Estaño, Silicio, Antimonio, Titanio, Vanadio y Zinc en una 
concentración de 1000 µg/mL±0.5% en HNO 3 con una densidad 1.084 g/ cm3. Las referencias a marcas 
específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los productos. 
Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las referencias específicas pretenden 
represent ar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Es recomendable preparar la curva de calibración de forma gravimétrica considerando las densidades 
correspondientes de la solución concentrada o stock para realizar el cálculo correspondiente de  la 
concentr ación.  
Para determinar la concentración de las soluciones estándar si se preparan de forma gravimétrica debe 
utilizarse la ecuación siguiente:  
 
En donde:  
C2 concentración final mg/L  
C1 concentración inicial mg/L  
P1 masa del patrón de referencia a diluir e n gramos  
d2 densidad del disolvente, HNO 3 al 5% (V/V)  
P2 masa final de la disolución, aforo en gramos  
d1 densidad del soluto, material de referencia  
B.4.2.7.1.2 Optimización del instrumento  
Cargar el instrumento con los parámetros de funcionamiento adecuad os establecidos como se detalla a 
continuación. Permitir que el instrumento se estabilice térmicamente antes de comenzar con la calibración 
(generalmente un mínimo de 30 minutos de funcionamiento). Operar el equipo de acuerdo a las instrucciones 
proporcion adas por el fabricante.  
La sensibilidad y los intervalos de trabajo para cada elemento variarán con la longitud de onda, 
espectrómetro, matriz y condiciones de operación. Consulte las instrucciones del fabricante para las 
longitudes de onda analíticas reco mendadas y los límites de detección del instrumental (LDI).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Antes de utilizar este procedimiento para el análisis de rutina, se deben realizar las pruebas iniciales  de 
desempeño los cuales deben estar documentados y deben incluir los criterios de selección  de los  puntos  de 
corrección de fondo; los intervalos de análisis, las ecuaciones aplicables, así como los límites superiores de 
estos intervalos; los límites de detección del método y del instrumento; y la determinación y verificación de las 
ecuaciones de  corrección interelemento u otras rutinas de corrección de interferencias espectrales. Estos 
datos deben ser generados utilizando el mismo instrumento, condiciones de operación y la rutina de 
calibración que se utilizan para el análisis de muestras.  
Las co ndiciones de operación para soluciones acuosas usualmente varían de acuerdo a lo siguiente:  
 1100 - 1200 watts de potencia,  
 14 - 18 mm de altura,  
 15 - 19 L/min de flujo de argón,  
 0.6 - 1.5 L/min flujo de argón en el nebulizador,  
 1 - 1.8 mL/min de velocidad de bombeo de la muestra con un tiempo de pre -limpieza de 1 minuto y el 
tiempo de medición aproximado de 1 segundo por pico de longitud de onda para instrumentos 
secuenciales y 10 segundos por muestra con instrumentos simultáneos.  
Para un plasma axial, las condiciones usualmente varían de acuerdo a lo siguiente:  
 1100 a 1500 watts de potencia,  
 15 a 19 L/min de flujo de argón refrigerante,  
 0.6 a 1.5 L/min de caudal de flujo de argón nebulizador,  
 1 a 1.8 mL de velocidad de bombeo de la muestra/min con un tiempo  de pre -limpieza de 1 minuto y 
tiempo de medición cerca de 1 segundo por pico de longitud de onda para instrumentos secuenciales 
y 10 segundos por muestra para instrumentos simultáneos.  
Para alcanzar factores de corrección de interferencia repetibles se re comienda ajustar el flujo de argón 
aerosol para reproducir la relación de intensidad de Cu/Mn en 324.754 nm y 257.610 nm, respectivamente.  
B.4.2.7.1.3 Optimización del plasma  
Optimizar las condiciones de funcionamiento del plasma antes del uso del instrume nto. El objetivo de la 
optimización de plasma es proporcionar un máximo de la señal de fondo de algunos de los elementos menos 
sensibles en la matriz de análisis. El uso de un controlador de flujo de masa para regular el flujo de gas 
nebulizador o una fuen te de optimización de software facilita en gran medida el procedimiento. No es 
necesario llevar a cabo esta rutina diariamente, sólo se requiere cuando se ajusta por primera vez un 
instrumento nuevo, o después de un cambio en las condiciones de funcionamie nto. Para la optimización del 
instrumento se recomienda realizar lo siguiente, o seguir las recomendaciones del fabricante.  
Encender el plasma radial y seleccionar una apropiada potencia de RF incidente. Dejar que el instrumento 
se encuentre térmicamente e stable (entre 30 a 60 minutos) antes de comenzar. Mientras se aspira una 
disolución de 1 000 µg/L de itrio, seguir las instrucciones del fabricante del instrumento y ajustar el flujo del 
gas acarreador de aerosol a través del nebulizador hasta que una regi ón de emisión azul definitiva del plasma 
se extienda aproximadamente de 5 a 20 mm por encima de la parte superior de la bobina de carga. Registrar 
el flujo del gas nebulizador y el ajuste de presión para futuras referencias. La solución de itrio también se  
puede utilizar para la alineación óptica gruesa de la antorcha mediante la observación de la superposición de 
la luz azul sobre la rendija (slit) de entrada hacia el sistema óptico.  
Después de establecer el flujo del gas nebulizador, determinar la velocid ad de absorción de solución del 
nebulizador en mL/min mediante la aspiración de un volumen conocido de un blanco de calibración por un 
período de al menos tres minutos. Dividir el volumen aspirado por el tiempo en minutos y registrar la velocidad 
de absorc ión. Colocar la bomba peristáltica para entregar esa velocidad en un flujo constante.  
Calibrar el instrumento para alinearlo ópticamente, como será utilizado durante el análisis. El siguiente 
procedimiento se puede usar tanto para la optimización horizonta l y vertical en el modo radial, pero está 
descrito para el vertical.  
Aspirar una disolución que contenga 10 µg/L de varios elementos seleccionados. As, Se, y Pb son los 
menos sensibles de los elementos y con mayor necesidad de optimización. Sin embargo, ot ros elementos 
pueden ser utilizados (Cr, Cu, Li y Mn también se pueden utilizar con éxito). Recolectar datos de intensidad en 
el pico de longitud de onda para cada analito a intervalos de 1 mm de 14 a 18 mm por encima de la bobina de 
carga. (Esta región de l plasma es referida como la zona analítica). Repetir el procedimiento utilizando el 
blanco de calibración. Determinar la señal neta a la intensidad de blanco para cada analito para cada ajuste 
de altura de observación. Elegir la altura para ver el plasma que ofrece las mejores relaciones de intensidad 
(ratios) neta de los elementos analizados o la relación de intensidad más alta para el elemento de menor 
sensibilidad. Para la optimización en el modo axial, seguir las instrucciones del fabricante del instru mento.  
Las condiciones de operación óptimas del instrumento deben proporcionar los límites de detección del 
instrumental (LDI) más bajos.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Si se cambian las condiciones de operación del instrumento, tales como la energía incidente o flujo de gas 
nebulizador , o si se instala un tubo inyector nuevo de la antorcha con un orificio de diámetro interno diferente, 
el plasma y la altura de visión deben ser re -optimizados.  
Después de completar la optimización inicial de operación de las condiciones de funcionamiento,  y antes 
de analizar las muestras, el laboratorio debe establecer y verificar inicialmente una rutina de corrección de 
interferencias espectrales interelemento para ser utilizado durante el análisis de la muestra. El criterio para 
determinar que una interf erencia espectral interelemento está presente, es una concentración positiva o 
negativa aparente para el analito que está más allá de un ± del límite establecido cercano a cero. Una vez 
establecida, la rutina completa debe ser verificada cada seis meses. S ólo una parte de la rutina de corrección 
se debe verificar con mayor frecuencia o cada vez que se llevan a cabo los análisis. Se deben mantener los 
registros de las verificaciones iniciales y periódicas.  
Antes de la calibración diaria, y después del períod o de calentamiento del instrumento, se tiene que 
optimizar el flujo del gas nebulizador. Si se utiliza un controlador de flujo de masa, se debe ajustar a la 
velocidad de flujo optimizado registrado. A fin de mantener válidas las rutinas de corrección inter elemento 
espectrales, el flujo de gas nebulizador deberá ser el mismo (el cambio debe ser <2 %) día a día.  
Para la operación con disolventes orgánicos, se recomienda el uso de la entrada de argón auxiliar así 
como tubería resistente a los disolventes, el a umento de flujo de argón, la disminución del flujo del 
nebulizador, y el aumento de potencia de RF, para obtener un funcionamiento estable y mediciones precisas.  
B.4.2.7.1.4 Optimización del método  
Establecer el intervalo lineal para cada longitud de onda utilizada mediante la determinación de la señal de 
respuesta a partir de un mínimo de tres, preferentemente cinco, diferentes patrones de concentración en todo 
el intervalo. Cada vez que haya un cambio significativo en la respuesta del instrumento se debe determinar 
nuevamente el intervalo. Como mínimo, el intervalo debe ser revisado cada seis meses.  
Muchos de los metales alcalinos y alcalinotérreos tienen curvas de respuesta no lineales debido a la 
ionización y a los efectos de auto -absorción. Estas curvas  se pueden utilizar si el instrumento lo permite; sin 
embargo, el intervalo efectivo debe ser revisado y el ajuste de la curva de segundo orden debe tener  un 
coeficiente de correlación > 0.995. Estas respuestas de curvas no lineales deben ser revalidadas y  se deben 
calcular cada seis meses. Estas curvas son mucho más sensibles a los cambios en las condiciones de 
operación que las lineales y debe realizarse cada vez que se han producido cambios moderados en el equipo.  
Establecer la sensibilidad, el límite de  detección del instrumental (LDI), la precisión, el intervalo lineal, y los 
efectos de interferencia para cada analito individual de cada instrumento en particular. Todas las mediciones 
deben estar dentro del intervalo lineal del instrumento donde las ecua ciones de corrección son válidas.  
El laboratorio debe establecer el límite de cuantificación en el nivel bajo del intervalo para cada analito, en 
la mayoría de los casos es el punto más bajo de la curva de calibración, la verificación inicial se lleva a ca bo 
utilizando 7 replicados de la muestra fortificadas en el nivel bajo y procesadas a través de todas las etapas de 
preparación y análisis del método. La recuperación media debe ser +/ - 35% del valor real y la DER debe  ser 
<20%.  
La verificación continua de l el límite de cuantificación en el nivel bajo del intervalo, como mínimo se realiza 
trimestralmente para validar la capacidad de cuantificación a bajos niveles de concentración del analito.  
Para poder utilizar este método el laboratorio debe demostrar que  el intervalo de trabajo para cada analito 
contempla la especificación establecida por las normas oficiales mexicanas correspondientes.  
B.4.2.7.1.5 Calibración diaria del instrumento  
Los estándares de calibración deben prepararse utilizando el mismo tipo d e ácido o combinación de ácidos 
y en la misma concentración que las muestras.  
Preparar un blanco de calibración y mínimo 3 niveles de concentración para cada uno de los analitos a 
cuantificar. La concentración más alta no debe ser superior al intervalo lin eal del instrumento según lo 
establecido anteriormente. Calibrar el instrumento diariamente y el coeficiente de correlación debe  ser ≥ 
0.995.  
La calibración inicial puede también realizarse utilizando un blanco de calibración y un solo nivel de 
concentraci ón (nivel alto); si se realiza de esta manera, la curva resultante debe verificarse con dos 
disoluciones estándar (niveles bajo y medio del intervalo). El intervalo de aceptación de ambas disoluciones 
es del 80 a 120%.  
Comprobar la estandarización del inst rumento mediante el análisis apropiado de muestras de control de 
calidad (MCC) de la siguiente manera:  
Preparar los estándares de calibración cada vez que se analiza una serie de muestras. Si la CVI  se 
prepara diariamente y los resultados de los análisis d el CVI están dentro de los criterios de aceptación, se 
puede ampliar la vigencia de las disoluciones mientras la disolución CVI cumpla con los criterios establecidos.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
El valor absoluto de los resultados del blanco de calibración debe ser menor que el límit e de cuantificación 
en el nivel bajo del intervalo de la muestra de verificación para cada analito, o debe ser menor que el nivel de 
contaminación aceptable en el blanco especificado durante la validación del método. Si este no es el caso, 
debe ser identif icada y corregida la razón de la condición fuera de control, y las diez muestras anteriores  se 
deben volver a analizar.  
Preparar una disolución estándar a una concentración cercana al límite superior. El valor calculado debe 
estar dentro ± 10 % del valor r eal. 
Después de la calibración inicial, verificar analizando el CVI, esta disolución debe ser preparada a partir de 
un material independiente (segunda fuente) en o cerca del nivel medio de la curva de calibración. El criterio  de 
aceptación para el CVI es d e ± 10% de su valor real, Si no se cumple este criterio, se debe determinar la 
causa y volver a calibrar el instrumento antes del análisis de las muestras. Mantener registros de los 
resultados obtenidos del CVI junto con las muestras.  
La curva de calibraci ón debe ser verificada al final de cada lote de análisis y después de cada 10 muestras 
mediante el uso de una disolución estándar de verificación de la calibración continua (CCC) y un blanco  de 
calibración continua (CCB). La CCC debe prepararse a partir de l mismo material que el CVI en o cerca del 
nivel medio de la curva de calibración. El criterio de aceptación para el estándar CCC deben ser de ± 10%  de 
su valor real, y el CCB no debe contener analitos de interés mayores a 2 a 3 veces el límite de cuantifi cación 
en el nivel bajo del intervalo. Si los resultados obtenidos no se encuentran dentro de los límites especificados, 
interrumpir el análisis de la muestra, determinar la causa y volver a calibrar el instrumento. Posteriormente, 
volver a analizar todas las muestras que se corrieron después de la última CCB y CCC aceptables. Mantener 
registros de los resultados obtenidos junto con las muestras.  
Si se realiza la curva de calibración inicial con un solo estándar de calibración y un blanco, también se 
debe v erificar antes del análisis de las muestras con una disolución estándar de verificación de la calibración 
de nivel bajo (LLCCV). La disolución estándar LLCCV debe prepararse a partir del mismo material que el CVI 
en el límite de cuantificación obtenido dur ante la validación. El criterio de aceptación para el LLCCV es de  ± 
20% de su valor real. Si el resultado no se encuentra dentro del límite especificado, el análisis de la muestra 
no puede comenzar hasta que se determine la causa y el resultado del LLCCV s ea satisfactorio. El 
instrumento puede necesitar ser recalibrado o el límite de cuantificación ajustado. Mantener registros de los 
resultados obtenidos junto con las muestras.  
Diluir las muestras cuyo valor esté por encima del nivel alto de la curva de cal ibración y volver a analizar.  
B.4.2.7.2 Interferencias  
Las interferencias espectrales son causadas por emisión de fenómenos continuos o de recombinación, la 
luz extraviada de una línea de emisión de un elemento a alta concentración, la sobreposición de lín eas 
espectrales de otro elemento o por sobreposición de espectros de banda moleculares no resueltas.  
La emisión de ruido de fondo de luz extraviada puede compensarse generalmente por la substracción de 
la emisión de fondo medida a los lados adyacentes del pico de la longitud de onda del elemento. Los barridos 
espectrales de las muestras o de soluciones unielementales en las regiones analíticas puede indicar cuándo 
es conveniente utilizar una longitud de onda alterna por alguna interferencia espectral, ademá s, puede mostrar 
las posiciones más apropiadas de corrección de fondo a los lados adyacentes del pico del elemento o a un 
solo lado. La localización de la posición para medir la intensidad de ruido de fondo va a ser determinada por la 
complejidad del espec tro adyacente al pico de la longitud de onda del analito. Estas localizaciones deben 
estar libres de interferencias espectrales (interelemento o moleculares), o adecuadamente corregidas para 
reflejar el mismo cambio en la intensidad de fondo como ocurre en  el pico de la longitud de onda.  
Las sobreposiciones espectrales pueden evitarse utilizando una longitud de onda alterna o pueden 
compensarse por ecuaciones que corrigen contribuciones por interferencias interelemento, los instrumentos 
que utilizan ecuacio nes para la corrección interelemento requieren que sean analizados los elementos 
interferentes al mismo tiempo que los analitos de interés. Cuando estas interferencias no son corregidas, 
generarán determinaciones falsas positivas o parcialmente positivas. El analista puede aplicar factores de 
corrección interelemento calculados en su instrumento con los intervalos de concentración probados para 
compensar los efectos de elementos interferentes.  
En la Tabla B.4.2 -2, de este Apéndice, se muestran algunas inter ferencias espectrales (IEC) potenciales 
observadas para las longitudes de onda recomendadas. Cuando se usan ecuaciones de corrección 
interelemento, la interferencia puede expresarse como equivalentes de concentración del analito (es decir, 
concentraciones de analito falsas positivas) que resultan de 100 mg/L del elemento de interferencia.  
Por ejemplo, si el As se determina a 193.696 nm en una muestra que contiene aproximadamente 10 mg/L 
de Al, de acuerdo con la Tabla B.4.2 -2, de este Apéndice, 100 mg/L de A l producirá una señal falsa positiva 
para un nivel de As equivalente a aproximadamente 1.3 mg/L. Por lo tanto, la presencia de 10 mg/L de Al 
resultará en una señal falsa positiva para As equivalente a aproximadamente 0.13 mg/L. Se advierte al 
usuario que o tros instrumentos pueden presentar niveles de interferencia algo diferentes a los mostrados en  la 
Tabla B.4.2 -2, de este Apéndice. Los efectos de interferencia deben evaluarse para cada instrumento 
individual, ya que las intensidades variarán.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Tabla B.4.2 -2. Interferencias espectrales potenciales y equivalente de concentración del analito (mg/L) 
resultantes de la interferencia a un nivel de 100 mg/L en ICP -OES  
Analito  Longitud 
de onda c 
(nm)  Interferencias a, b 
Al Ca Cr Cu Fe Mg Mn Ni Tl V 
Aluminio  308.215 - - - - - - 0.21 - - 1.4 
Antimonio  206.833  0.47 - 2.9 - 0.08 - - - 0.25 0.45 
Arsénico  193.696  1.3 - 0.44 - - - - - - 1.1 
Bario  455.403  - - - - - - - - - - 
Cadmio  226.502  - - - - 0.03 - - 0.02 - - 
Cobre  324.754  - - - - 0.003  - - - 0.05 0.02 
Cromo  267.716  - - - - 0.003  - 0.04 - - 0.04 
Fierro  259.94  - - - - - - 0.12 - - - 
Manganeso  257.61  0.005  - 0.01 - 0.002  0.002  - - - - 
Níquel  231.604  - - - - - - - - - - 
Plomo  220.353  0.17 - - - - - - - - - 
Selenio  196.026  0.23 - - - 0.09 - - - - - 
a Los gu iones indican que no se observó interferencia incluso cuando se introdujeron interferencias en los 
siguientes niveles:  
 Al a 1 000 mg/L  Cu a 200 mg/L  Mn a 200 mg/L  
 Ca a 1 000 mg/L  Fe a 1 000 mg/L  Tl a 200 mg/L  
 Cr a 200 mg/L  Mg a 1 000 mg/L  V a 200 mg/L  
b Las cifras mostradas anteriormente como equivalentes de concentración de analito no son las 
concentraciones reales observadas. Para obtener esta cifra añada la concentración indicada a la figura  de 
interferencia.  
c Las interferencias se verán afectadas  por la elección de fondo y otras interferencias que pueden estar 
presentes.  
Las interferencias físicas están asociadas con la nebulización de la muestra y el proceso de transporte de 
la misma. Cambios en viscosidad y tensión superficial pueden causar mal os resultados, especialmente en 
muestras conteniendo altas concentraciones de sólidos disueltos o altas concentraciones de ácido. Si existen 
interferencias físicas, estas deben ser reducidas: utilizando nebulizadores para un contenido alto de sólidos, 
diluyendo la muestra, utilizando una bomba peristáltica o utilizando un elemento apropiado como estándar 
interno. Otro problema que puede ocurrir con un alto contenido de sólidos disueltos es la acumulación de 
sales en el tubo inyector de la antorcha, lo cual afecta el flujo de transporte del aerosol ocasionando variación 
instrumental. Este problema puede controlarse utilizando: un nebulizador para un contenido alto de sólidos, 
humidificando el argón antes de la nebulización, lavando suficientemente entre muest ra y muestra o diluyendo 
la muestra.  
Las interferencias químicas incluyen la formación de compuestos moleculares, efectos de ionización y 
efectos de vaporización del soluto. Normalmente, estos efectos no son significativos en la técnica de  ICP-
OES, pero si  se observan pueden ser minimizadas mediante una cuidadosa selección de las condiciones de 
operación.  
Las interferencias de efecto de memoria son generadas cuando los analitos de una muestra anterior 
contribuyen en la medición de una nueva muestra. Los efe ctos de memoria pueden ocasionarse por la 
acumulación de la muestra en el tubo del nebulizador, en la antorcha del plasma y en la cámara de 
nebulización. Si se sospecha de interferencias por efectos de memoria, la muestra debe volver a analizarse 
después d e un periodo prolongado de lavado.  
B.4.2.8 Seguridad  
Muchas sales de metales utilizadas para la preparación de las diluciones patrón estándar son 
extremadamente tóxicas si son inhalados o ingeridos. Lavarse las manos cuidadosamente después de  su 
manejo.  
B.4.2.9 Referencias  
EPA. 2014.  Method 6010D. Inductively coupled plasma —optical emission spectrometry. Rev. 4  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.5 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE ÁCIDOS HALOACÉTICOS (ÁCIDO 
CLOROACÉTICO (MCAA); ÁCIDO DICLOROACÉTICO (DCAA); ÁCIDO TRICLOROACÉTICO (TC AA)) EN 
AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.5.1 Definiciones y Términos  
Blanco de calibración , al volumen de agua grado reactivo que se utiliza para calibrar el instrumento. El 
blanco de calibración es un estándar cero.  
Blanco de campo , a la alícuota de agua grado reactivo que es colocada en un envase para muestra en el 
laboratorio, empacada para el muestreo y tratada como una muestra en todos los aspectos, incluyendo el 
contacto con los equipos de campo y expuesta a las condiciones del sitio de muestreo, alma cenaje, 
preservación y todos los procedimientos analíticos, los cuales pueden incluir filtración. El propósito del blanco 
de campo es determinar si algún procedimiento de campo o transporte de la muestra ha contaminado  la 
muestra.  
Blanco de reactivos , es u na matriz libre de analitos a la cual se le agregan todos los reactivos en los 
mismos volúmenes o proporciones usadas en el procesamiento de la muestra. El blanco de reactivos debe 
llevarse a través de la preparación de la muestra y el procedimiento analít ico. El blanco de reactivos se usa 
para documentar la contaminación resultante del proceso analítico.  
Desviación estándar , a la desviación estándar de la muestra (s), calculada a partir de n -1. No se refiere a 
la desviación estándar poblacional ( ), calcul ada a partir de n.  
Estándar de calibración , a la solución preparada de un estándar diluido y/o una solución patrón y 
utilizada para calibrar la respuesta del instrumento con respecto a la concentración del analito.  
Estándar de verificación de la calibració n, al punto medio del estándar de calibración que es utilizado 
para verificar la calibración inicial en el tiempo.  
Límite de detección del método (LDM) , a la concentración mínima de un analito que puede identificarse, 
medirse y reportarse con una confianza  del 99% cuando la concentración del analito es mayor a cero.  
Límite práctico de cuantificación (LPC) , a la concentración mínima del analito que puede determinarse 
con un nivel de confianza predeterminado en condiciones rutinarias de operación. Este límite  puede 
establecerse entre 5 a 10 veces el LDM.  
Matriz adicionada (MA) y Matriz adicionada duplicada (MAD) , a la alícuota de una muestra ambiental 
para la cual cantidades conocidas de los avalitos del método son añadidas en el laboratorio. Las MA y MAD 
son analizados exactamente como una muestra. Su propósito es la cuantificación del sesgo y la precisión 
causada por la matriz de la muestra. Las concentraciones bases de los analitos en la matriz de la muestra 
debe determinarse en una alícuota separada y los v alores medidos en las MA y MAD corregidas con las 
concentraciones base.  
Muestra de control de calidad (MCC) , a la muestra sintética que contiene todos o un subgrupo de los 
analitos de interés del método a una concentración conocida. La MCC se obtiene de un a fuente externa al 
laboratorio o es preparada de una fuente diferente de los estándares de la fuente de los estándares de 
calibración. Se usa para revisar el desempeño del laboratorio con materiales de prueba preparado 
externamente a los procesos normales  de preparación.  
Rango de trabajo , al rango de la concentración sobre el cual la respuesta del instrumento para el analito 
es proporcional.  
B.5.2 Símbolos y términos abreviados  
CG/DCE  cromatografía de gases con captura de electrones  
DCAA  ácido dicloroacét ico 
DPR  diferencia porcentual relativa  
%D diferencia porcentual  
LDM  límite de detección del método  
LPC límite práctico de cuantificación  
MA matriz adicionada  
MAD  matriz adicionada duplicada  
MCAA  ácido cloroacético  
MTBE  metil terbutil éter  
TCAA  ácido tri cloroacético   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.5.3 Principio  
Se ajusta el pH a menos de 0.5 unidades de pH a un volumen medido de 40 mL de muestra de agua de 
uso y consumo humano y se extrae con 4mL de Metil Terbutil Éter (MTBE). Posteriormente se lleva a cabo la 
metilación con una soluc ión ácida con metanol y calentamiento, el extracto ácido es neutralizado con una 
solución de bicarbonato de sodio y los analitos de interés son analizados y cuantificados con columna capilar 
y CG/CDE  
B.5.4 Alcance y aplicación  
El método descrito es un proc edimiento para la determinación de ácidos haloacéticos (ácido cloroacético 
(MCAA); ácido dicloroacético (DCAA); ácido tricloroacético (TCAA) en agua de uso y consumo humano 
proveniente de sistemas de abastecimiento por cromatografía de gases con captura de  electrones (CG/DCE).  
Este método debe ser utilizado sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de cromatografía 
de gases con captura de electrones CG/DCE y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe 
demostrar la habilidad par a generar resultados aceptables con este método.  
Los métodos analíticos determinados experimentalmente para los ácidos haloacéticos se muestran en la 
Tabla B.5 -1, de este Apéndice.  
Tabla B.5 -1. Datos de precisión y exactitud de los analitos y límites de de tección del método en agua 
grado reactivo a 
Analito  Concentración 
fortificada  Concentración 
medida media  Desviación 
estándar  Desviación 
estándar 
relativa  Límite de 
detección del 
método b Límite de 
detección 
estimado c 
 (µg/L) (µg/L) (µg/L) (%) (µg/L) (µg/L) 
MCAA  0.600  0.516  0.087  17 0.273  0.60 
DCAA  0.600  0.494  0.077  16 0.242  0.24 
TCAA  0.200  0.219  0.025  11 0.079  0.20 
a Producidas a partir del análisis de siete alícuotas de agua grado reactivo fortificadas.  
b El MDL es un estimado estadístico del límit e de detección. Para determinar el MDL para cada analito, la 
desviación estándar de la concentración media de los siete replicados es calculada. La desviación 
estándar es multiplicada por el valor t -student a un 99% de confianza y n -1 grados de libertad (3 .143 para 
siete replicas) el resultado es el MDL.  
c El EDL de la misma manera que el MDL o como el nivel de compuesto en una muestra que origina un 
pico en el extracto final con una relación señal -ruido (S/N) de aproximadamente cinco, o mayor.  
B.5.5 Equi pos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretend en representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Balanza analítica. Con precisión de 0.0001 g  
Columna capilar cuantitativa DB 35 MS . De sílica fundida a 30 m de longitud por 0.25 mm con una fase 
estacionaria de 35% fenil metil silicón de 0.25 µm de grosor de película o equivalente.  
Columna capilar de confirmación DB -XLB. Capilar de sílica fundida de 30 m de longitud por 0.25 mm de 
diámetro interno con fase estacionaria de poliloxano y un grosor de película de 0.25 µm o equivalente.  
Cromatógrafo  de gases (CG) . Con inyector capilar y detector de captura de electrones (DCE) con 
sistema computarizado de registro y procesamiento de datos  
Matraz volumétrico tipo “A” . De 4, 5 y 10 mL para la preparación de estándares.  
Microjeringa.  De 10, 25, 50, 100 y  500 µL. 
Pipeta volumétrica tipo “A” de 4 mL.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.5.6 Reactivos y soluciones  
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa se 
indique. Se deben preparar 5 niveles como mínimo de diferentes concentraciones de los  analitos de interés 
para servir como disoluciones de calibración. Preparar los estándares de calibración de forma gravimétrica si 
no se cuenta con material calibrado. El almacenaje de las soluciones estándar (patrón, de calibración, interna 
y estándares s urrogados) debe ser a una temperatura menor a 4°C en viales de 2 mL. Todas las soluciones 
estándares patrón deben reemplazarse después de un año o antes si la rutina de control de calidad indica 
degradación o evaporación del solvente.  
Acetona. Grado reacti vo, nanogrado o equivalente.  
Bicarbonato de sodio.  Grado reactivo.  
Cloruro de amonio.  Grado reactivo.  
Disolución de 100 mg/L de metil cloroacetato, dimetilcloroacetato y 33.3 mg/L de metil 
tricloroacetato.  La solución estándar puede prepararse de materiale s estándares puros o puede ser una 
solución certificada. Partir de una solución estándar de Metil cloroacetato de 3 000 mg/L, metil dicloroacetato 
de 3 000 mg/L y metil tricloroacetato de 1 000 mg/L (en mezcla). En un matraz aforado de 1 mL poner  33.3 µL 
de la mezcla de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y metil tricloroacetato, aforar con MTBE.  
Disolución de 1 y 0.33 mg/L de metil acetatos.  La solución estándar puede prepararse de  materiales 
estándares puros o puede ser una solución certificada. En u n matraz aforado de 5 mL poner 50 µL de la 
mezcla de 100 mg/L de metil cloroacetato, 100 mg/L de metil dicloroacetato y 33.3 mg/L de  metil 
tricloroacetato y aforar con MTBE. Esta disolución puede servir como estándar de calibración de 1  y 0.33 
mg/L.  
Estánd ar de calibración de 0.01 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.003 3 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1mL ponga 10 µL de la solución de 1 mg/L y aforar con 
MTBE. Los estándares de calibración, se pueden preparar gravim étricamente.  
Estándar de calibración de 0.02 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.006 6 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1mL poner 20 µL de la solución de 1mg/L y aforar con MTBE. 
Los estándares de calibración, se pued en preparar gravimétricamente.  
Estándar de calibración de 0.05 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.0166 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1mL poner 50 µL de la solución de 1 mg/L y aforar con MTBE. 
Los estándares de ca libración, se pueden preparar gravimétricamente.  
Estándar de calibración de 0.1 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.033 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1 mL poner 100 µL de la solución de 1 mg/L y aforar con 
MTBE. Lo s estándares de calibración, se pueden preparar gravimétricamente.  
Estándar de calibración de 0.2 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.066 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1 mL poner 200 µL de la solución de 1mg/L y af orar con 
MTBE. Los estándares de calibración, se pueden preparar gravimétricamente.  
Estándar de calibración de 0.5 mg/L de metil cloroacetato, metil dicloroacetato y 0.166 mg/L de 
metil tricloroacetato.  En un matraz aforado de 1 mL poner 500 µL de la soluc ión de 1mg/L y aforar con 
MTBE. Los estándares de calibración, se pueden preparar gravimétricamente.  
Estándares internos.  1,2,3 -tricloropropano. Solución concentrada de 25 mg.  
Estándares surrogados.  2,3 ácido dibromopropiónico. Solución concentrada de 1 00 0 mg/L.  
Metanol. Grado HPLC o equivalente.  
Metil terbutil éter.  Grado HPLC o equivalente.  
Solución de ácido sulfúrico en Metanol al 10%.  En un matraz aforado de 50 mL adicione de 20 a 30 mL 
posteriormente adicione lentamente 5 mL de ácido sulfúrico concent rado y afore a 50 mL con metanol.  
Solución de bicarbonato de sodio saturada.  Adicionar el bicarbonato de sodio a un volumen de agua 
hasta saturación.  
Sulfato de cobre pentahidratado.  Grado reactivo.  
Sulfato de sodio. Granular anhidro purificado a 600 °C du rante 4 horas. Grado reactivo.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.5.7 Procedimiento  
B.5.7.1 Recolección, conservación y almacenamiento de muestras  
Es necesario contar con muestras de agua de uso y consumo humano a analizar con un volumen de  250 
mL en envase de vidrio ámbar. No se requier e de ningún tratamiento especial en campo. Las muestras y los 
blancos de campo deberán preservarse con cloruro de amonio y refrigerarse a 4 °C hasta su análisis. Todas 
las muestras deben extraerse dentro de los 14 días después de la recolección, una vez ex traídas se tiene un 
tiempo de 7 días si se preserva a 4 °C y 14 días si se preserva a -10 °C.  
B.5.7.2 Procedimiento analítico  
Extracción de la muestra. Tomar 40 mL de muestra y transferirlo a un vial de 60 mL, adicionar estándar 
surrogado y compuestos targ et (muestras fortificadas), adicionar por lo menos 2 mL de ácido sulfúrico 
concentrado para ajustar su pH menor a 0.5. Verificar con potenciómetro o con papel indicador de pH, 
rápidamente adicionar 2 g aproximadamente de sulfato cúprico pentahidratado, agi tar hasta disolución, 
posteriormente adicionar rápidamente 16 g de sulfato de sodio y agitar de 3 a 5 minutos hasta que casi todo 
este disuelto, extraer con 4 mL de disolvente (MTBE), agitando vigorosamente durante 2 minutos. Dejar que 
se separen las fases  durante 5 minutos.  
Metilación. Transferir aproximadamente 3 mL de la parte superior (MTBE) a un tubo de rosca de 15 cm 
con tapa y adicionar 1mL de ácido sulfúrico al 10% en metanol. Colocar el tubo en un Termoblock a 50 °C 
durante 2 horas. Pasado este tie mpo dejar enfriar y adicionar 4mL de la solución saturada de bicarbonato de 
sodio; agitar por 2 minutos con cuidado de ventear el dióxido de carbono (CO 2) generado por la reacción y 
transferir 1 mL del MTBE a un vial para su análisis cromatográfico.  
Las co ndiciones utilizadas para el análisis de extractos de muestras son las siguientes:  
Gas acarreador – hidrógeno  
Presión en columna – 9.4 psi  
Temperatura del inyector – 200 °C  
Temperatura del detector – 310 °C  
Temperatura inicial – 40 °C  
Tiempo inicial 1 - 2.0 minutos  
Rampa 1 – 10 °C/minutos  
Temperatura final 1 – 80 °C  
Tiempo final 1 – 0 minutos  
Rampa 2 – 35 °C/minutos  
Temperatura final 2 - 300 °C  
Tiempo final 2 – 0 minutos  
Inyección Split – relación 10:1  
En el procedimiento de análisis con el método de estánda r interno, agregar el estándar al extracto de la 
muestra antes de aforar (opcional).  
Inyectar un volumen adecuado (1 a 3 µL) del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de 
gases. Registro el volumen final del extracto y el área del pico result ante.  
Identificar los ácidos haloacéticos en la muestra comparando los tiempos de retención de los picos en el 
cromatograma de muestra con los tiempos de retención de los picos en los cromatogramas de los estándares.  
Si la respuesta del pico sobrepasa el i ntervalo de concentración de la curva patrón, diluir el extracto y 
analizar nuevamente.  
La identificación de los ácidos haloacéticos utilizando en este método un detector de captura de electrones 
se basa en la concordancia entre los tiempos de retención de  los picos en el cromatograma de la muestra con 
los intervalos de los tiempos de retención establecidos a través del análisis de los estándares.  
La identificación tentativa de un analito ocurre cuando un pico del extracto de una muestra cae dentro del 
intervalo de tiempo de retención establecido para un analito problema específico. Cada identificación tentativa 
debe confirmarse.  
La cuantificación de los ácidos haloacéticos, puede realizarse usando la técnica de estándar interno o 
estándar externo calculando  la concentración.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Puede usarse la confirmación por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas  (Gas 
chromatography –mass spectrometry, GC/MS) en conjunción con el análisis siempre y cuando la 
concentración sea suficiente para su detección po r CG/EM o bien por medio de una columna confirmatoria.  
El CG/EM debe calibrarse para los analitos problema. Cuando se usa una técnica SIM, los iones y los 
tiempos de retención deben ser característicos de los ácidos haloacéticos a ser confirmados.  
La confi rmación de CD/EM debe completarse analizando los mismos extractos utilizados para el análisis 
CG/DCE y los extractos del blanco asociado.  
B.5.7.3 Análisis de datos y cálculos  
Para determinar la concentración de los ácidos haloacéticos, calcular la concentr ación en muestras 
líquidas mediante la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
A área del parámetro a medir  
b ordenada al origen de la regresión lineal (de la curva de calibración)  
m pendiente de la regresión lineal (de la curva de calibración)  
Va volumen final de l extracto en mL  
f factor de dilución  
Vm volumen de muestra extraída en mL  
B.5.7.4 Informe de prueba  
Reportar el resultado como µg/L de ácido cloroacético, ácido dicloroacético y ácido tricloroacético  
B.5.8 Control de calidad, calibración e interferencias  
B.5.8.1 Control de calidad  
B.5.8.1.1 Debe de llevarse a cabo una verificación del equipo. La verificación del detector de DCE debe 
realizarse de acuerdo con el manual de operación del equipo.  
Verificar que los flujos de gases y condiciones cromatográficas sean las adecuadas.  
Verificación de blanco electrónico. Realizar una corrida con las condiciones cromatográficas del método, 
pero sin inyectar nada, si el cromatograma presenta picos a cualquier tiempo de retención, se purga el 
sistema poniendo el horno a 300°C durante 15 minutos y se repite el análisis del blanco electrónico.  
B.5.8.1.2 Verificación de la calibración inicial. Deberá realizarse inyectando los estándares de calibración 
preparados y se considerará lineal si el % de la desviación estándar relat iva (%RSD) de los factores de 
calibración (CF) es menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:  
 
 
En donde:  
SDCF  desviación estándar de los factores de calibración  
CF promedio de los factores de calibración  
La verificación  de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos 
cuadrados en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación “r” sea mayor o igual a 0.99.  
Si los criterios para el %RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la 
preparación de las disoluciones de calibración.  
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no 
presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera:   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
En donde:  
CC concentración calculada  
CT concentración teórica  
o si se utiliza el factor de calibración  
 
En donde:  
CFv factor de calibración de cada compuesto en el estándar de verificación  
CT factor de calibrac ión del compuesto de la calibración inicial  
Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se procederá a la revisión del 
sistema cromatográfico y a la preparación de la solución estándar utilizada.  
B.5.8.1.3 Verificación de con taminación de los reactivos. Los blancos de reactivos no deben presentar 
ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los ácidos haloacéticos medidos, por lo que es 
importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionad as. 
Si los resultados de los blancos indican contaminación con picos a T.R. de los ácidos haloacéticos, ésta 
contaminación debe ser menor a los límites de regulación asociada a los ácidos haloacéticos o menor al 5% 
de los resultados de los mismos en las mu estras.  
Si los resultados de los blancos no cumplen con los criterios mencionados debe localizar la fuente de 
contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras asociadas al blanco contaminado.  
Use también los blancos de reactivos para verificar la  contaminación por arrastre de muestras con altas 
concentraciones en análisis secuenciales.  
B.5.8.1.4 Verificación del lote analítico.  Por cada lote analítico se analice una muestra de control de 
calidad y se calcula el % de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los cuales 
deberán estar dentro del rango de 70 a 130%. De no ser así se revisará la preparación de la muestra control y 
el sistema cromatográfico. Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control.  
B.5.8.1. 5 Verificación de interferencias de matriz. La verificación de interferencias por parte de la muestra 
se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas. El laboratorio debe realizar el análisis de muestras 
fortificadas y muestras duplicadas, fortificar un a muestra por cada lote. Las muestras fortificadas y muestras 
duplicadas sólo se analizarán cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de 
matriz o donde sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto.  
Para determinar el efecto de la matriz en el recobro del analito. Debe analizar una muestra fortificada por 
cada lote de muestras. Calcular el % de recobro, el cual debe encontrarse dentro del 70 al 130%. Si los 
valores no cumplen con lo especificado, el sistem a analítico está fuera de control, determine las causas y 
corrija el problema. Documente las incidencias y acciones correctivas.  
Para determinar el efecto de la matriz en la precisión del analito - precisión de la matriz duplicada. Analizar 
una muestra dup licada. Calcular la diferencia porcentual relativa, también llamada DPR, entre la muestra y se 
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
C1 concentración de la primera muestra  
C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplic ada) 
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser <20%. Si los valores no 
cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el 
problema, documente las incidencias y acciones correctivas. Repita el análisis sólo del lote asociado con la 
muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.5.8.1.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración. En cada lote analizado, si más de 25 
muestras van a ser ana lizadas durante el día, verificar la curva de calibración analizando un estándar de 
concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 25 muestras ó 12 horas  de 
análisis continuo.  
Calcule el factor de calibración o la conc entración para cada ácido haloacético del estándar de 
concentración media y la diferencia porcentual (%D) con la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
FC1 factor de calibración promedio para cada ácido haloacético en la curva de calibración, o la 
concentración n ominal del estándar de verificación.  
FC2 factor de calibración promedio para cada ácido haloacético en el estándar de concentración 
media, o la concentración calculada en el estándar de verificación.  
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser  menor al 15% de no ser así verificar la vigencia, 
revisar también el sistema cromatográfico y determinar la causa de la falla y corregir, de no lograr corregir la 
falla, recalibrar nuevamente y en el caso de que la falla del estándar de verificación sea e n un lote mayor de 
25 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al estándar de verificación que fallo.  
B.5.8.1.7  Verificación de estándares surrogados. Evaluar los datos de recobro de los surrogados  de las 
muestras. Calcular el %  de recuperación de los  estándares surrogados en blancos, muestras control, 
muestras fortificadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la 
siguiente ecuación:  
 
En donde:  
C1 concentración calculada de surrogados en la muestra  
C2 concen tración nominal del surrogado adicionado a la muestra  
Si los valores no cumplen con los especificados, determinar las causas y corregir el problema, documentar 
las incidencias y acciones correctivas e incluirlas en el expediente del desarrollo inicial del desempeño del 
método.  
El %R deberá estar entre el 70% y el 130% de recuperación de no ser así verificar la preparación de la 
muestra que falló y el sistema cromatográfico, determinar la causa de la falla y corregir, de no encontrarla, 
repetir la extracción  de la muestra y volver a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación, llenar hoja 
de incidencia y reportar como interferencia de matriz y los resultados obtenidos.  
B.5.8.1.8  Verificación de estándares internos (sólo para calibración de estándares  internos). Compare el 
área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de los estándares internos 
obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no 
deben ser menores a 50% n i mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva de calibración para 
cada estándar interno.  
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determinar las 
causas y corregir el problema, documentar las inci dencias y acciones correctivas e incluirlas en el expediente 
del desarrollo inicial del desempeño del método.  
B.5.8.1.9  Composición del lote analítico (para cada 20 muestras):  
1 blanco electrónico  
2 muestra de verificación de la calibración continua  
3 blan co de reactivos  
4 muestra de control de calidad  
5 muestras real no. 1  
6 a 14 muestra real no. 2 a 10  
15 muestra de verificación de la calibración continua   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
16 a 25 muestra real no.11 a 20  
26 muestra duplicada (si se realizó)  
27 muestra adicionada (si se rea lizó) 
28 muestra de verificación de la calibración continua  
Las muestras de verificación de la calibración continua se correrán cada 10 muestras reales y al final de 
cada lote.  
B.5.8.1.10 Dependiendo de los requerimientos del programa específico de control  de calidad, puede 
requerirse los duplicados de campo, para evaluar la precisión y la exactitud del muestreo y técnicas de 
transportación de la muestra.  
B.5.8.1.11 Especificaciones de aceptación y rechazo  
VERIFICACIÓN DEL EQUIPO  
Punto de Verificación  Criterio 
Equipo libre de interferencias (blanco electrónico)  El blanco electrónico no debe presentar ningún pico 
o perfil de picos en ningún tiempo de retención  
VERIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN INICIAL  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación de la mezcla d e verificación (punto 
intermedio de la curva)  Diferencia de concentración ≤15% 
VERIFICACIÓN DE LA CONTAMINACIÓN DE REACTIVOS  
Punto de Verificación  Criterio  
Blanco de reactivos  No debe presentar picos al tiempo de retención de 
los analitos > al LDM  
VERI FICACIÓN DEL PROCESO ANALÍTICO  
Punto de Verificación  Criterio  
Muestra control de calidad  % de recuperación de 70 a 130%  
VERIFICACIÓN DE INTERFERENCIAS DE MATRIZ  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación de muestras adicionadas  % de recuperación de 70 a 130%  
Evaluación de muestras duplicadas  La DPR entre la muestra y la muestra duplicada 
deberá cumplir con el criterio de aceptación ≤20% 
ESTABILIDAD DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación del estándar de verificación (cada 12h 
continuas de análisis)  Diferencia de concentración ≤15% 
 
B.5.8.2 Calibración  
Las condiciones de operación del cromatógrafo de g ases están definidas por el tipo de columna elegida.  
Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (1 a 3 µL) de cada 
estándar de calibración. Otros volúmenes pueden ser utilizados si así lo requiere la sensibilidad de los 
compuestos de interés.  
Para llevar a cabo el procedimiento de calibración, analizar cada estándar de calibración a partir de las 
disoluciones. Si la técnica de cuantificación elegida es por estándar externo construir una curva de área o 
altura de pico contr a concentración y verificar la linealidad de la curva.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Si la DSR de cada ácido haloacético es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal 
y el factor de calibración promedio FC o FR puede utilizarse para la cuantificación de los resul tados de las 
muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad.  
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r” para cada 
analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.99 si “r” es  menor a este valor, la curva de calibración no es lineal 
y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir  la 
calibración.  
Si el valor del FR sobre el rango de trabajo es constante, es decir, menor que el 20% de la desviación 
estándar relativa, el FR puede tomarse como invariable y el promedio del FR puede utilizarse para los 
cálculos, Alternativamente, los resultados pueden utilizarse para graficar una curva de calibración de  los 
promedios de la res puesta contra FR.  
La curva de calibración o FR deben verificarse en cada lote de análisis, por medio de la medición de uno 
más estándares de calibración. Si la respuesta para cualquier parámetro varía de la respuesta predicha por 
más de ±15%, la prueba deb e repetirse utilizando un estándar de calibración nuevo. Alternativamente, deberá 
prepararse una nueva curva de calibración para cada parámetro.  
Debe verificarse la estabilidad de la curva de calibración. En cada lote analizado durante el día, la curva de 
calibración debe verificarse con un estándar de concentración media del rango de trabajo al principio del lote, 
después de cada 10 muestras y al final de cada lote de análisis. El valor DR de la muestra debe estar dentro 
del 15% del valor de la calibración  inicial, de no ser así entonces debe identificar el problema, corregir y 
repetirse la verificación de la calibración.  
B.5.8.3 Interferencias  
Las interferencias co -extraídas con la muestra variarán considerablemente de matriz a matriz. Mientras las 
técnica s de limpieza generales se proporcionan como parte de este método, algunas muestras deben requerir 
de una limpieza adicional para obtener la ejecución de un grado de discriminación y cuantificación. Las 
fuentes de interferencias en este método pueden ser d ebidas, entre otras, las siguientes:  
Las interferencias de matriz, son los compuestos extraídos de las muestras y con las que el detector tiene 
alguna respuesta, para eliminar este tipo de interferencias se utilizan los procedimientos de limpieza de los 
extractos adecuados.  
Las interferencias instrumentales, son aquellas ocasionadas por las impurezas del gas de acarreo o por 
fallas del instrumento, para la cual se verifican blancos electrónicos y procedimientos de limpieza térmica.  
Las interferencias por ft alatos introducidos durante la preparación de las muestras pueden dar un 
problema mayor en la determinación de los haloacéticos.  
Los contenedores comunes de plástico varían en la cantidad de ftalatos los cuales son extraídos 
fácilmente o lixiviados de los mismos materiales durante las operaciones del laboratorio. Las interferencias de 
ftalatos pueden disminuirse de mejor forma, impidiendo el contacto con cualquier material plástico y revisando 
todos los solventes y reactivos por contaminación de ftalatos.  
Para eliminar una contaminación de ftalatos, se requiere de una limpieza exhaustiva de los solventes 
reactivos y material de vidrio.  
Estos materiales pueden removerse a través del uso del método de limpieza con ácido 
sulfúrico/permanganato.  
Los límites de d etección en las muestras reales dependerán de las interferencias presentes en las mismas 
por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1000 veces 
(factores de concentración de las muestras).  
B.5.9 Seguridad, pre vención de contaminación y manejo de residuos  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un riesgo potencial para la salud y 
la exposición a estos materiales debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de mantener un 
conocimiento de las regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe ponerse a disposición de todo el personal involucrado en el análisis las hojas de datos de 
seguridad de los productos químicos. Debe de  utilizarse equipo de protección personal apropiado para  el 
manejo de muestras y estándares. Los estándares primarios de los ácidos haloacéticos deberán prepararse 
en una campana. Cuando el analista maneje altas concentraciones de compuestos tóxicos deberá  utilizarse 
un respirador de gases tóxicos.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Es responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales, estatales y locales 
referentes al manejo de residuos, particularmente las reglas de identificación, almacenamiento y disposición 
de residuos peligrosos.  
B.5.10 Referencias  
EPA. 1995. Method 552.2 Determination of Haloacetics Acids and Dalapon in Drinking Water by  Liquid -
Liquid Extraction, Derivatization and Gas Chromatography with Electron Capture Detector. Rev. 1.0  
B.6 MÉTODO DE PRUEB A PARA LA DETERMINACIÓN DE BROMATO, CLORATO Y CLORITO  EN 
AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.6.1 Definiciones y términos  
Blanco de campo, a la alícuota de agua grado reactivo que es colocada en un envase para muestra en  el 
laboratorio, empacada para el muest reo y tratada como una muestra en todos los aspectos, incluyendo el 
contacto con los equipos de campo y expuesta a las condiciones del sitio de muestreo, almacenaje, 
preservación y todos los procedimientos analíticos, los cuales pueden incluir filtración. El propósito del blanco 
de campo es determinar cuál procedimiento de campo o transporte de muestra y ambiente ha contaminado  la 
muestra.  
Desviación estándar , a la desviación estándar de la muestra (s), calculada a partir de n -1. 
Disolución madre , correspon de a la disolución de máxima concentración en un análisis. Es a partir de 
esta disolución que se preparan las disoluciones de trabajo.  
Disolución patrón , a la disolución de concentración conocida preparada a partir de un patrón primario.  
Estándar de calibr ación , a la solución preparada de un estándar diluido y/o una solución patrón y 
utilizada para calibrar la respuesta del instrumento con respecto a la concentración del analito.  
Estándar de verificación de la calibración , punto medio del estándar de calibr ación que es utilizado para 
verificar la calibración inicial en el tiempo.  
Intervalo de trabajo, intervalo de la concentración sobre la cual la respuesta del instrumento para el 
analito es proporcional.  
Matriz adicionada (MA) y Matriz adicionada duplicada (MAD) , a la alícuota de una muestra ambiental 
para la cual cantidades conocidas de los analitos del método son añadidas en el laboratorio. Las MA y MAD 
son analizados exactamente como una muestra. Su propósito es la cuantificación del sesgo y la precisión 
causada por la matriz de la muestra. Las concentraciones bases de los analitos en la matriz de la muestra 
debe determinarse en una alícuota separada y los valores medidos en las MA y MAD corregidas con las 
concentraciones base.  
Muestra de control de calida d (MCC) , a la muestra sintética que contiene todos o un subgrupo de los 
analitos de interés del método a una concentración conocida. La MCC se obtiene de una fuente externa al 
laboratorio o es preparada de una fuente diferente de los estándares de la fuent e de los estándares de 
calibración. Se usa para revisar el desempeño del laboratorio con materiales de prueba preparado 
externamente a los procesos normales de preparación.  
Patrón primario , al patrón que es designado o reconocido ampliamente como un patrón  que tiene las más 
altas cualidades metrológicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrones de la misma magnitud.  
B.6.2 Símbolos y términos abreviados  
DSR  desviación estándar relativa  
EDA etilendiamina  
µS microsiemens  
M  matriz  
MA matriz adic ionada  
MAD  matriz adicionada duplicada  
MCC  muestra de control de calidad  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
MDL  límite de detección del método  
MDUP  matriz duplicada  
B.6.3 Principio  
La muestra es filtrada a  través de un filtro de 0.45 µm en caso de presentar sedimentos o turbidez, 
posteriorm ente se le adicionan 50 µL de una disolución de EDA junto con el estándar surrogado y se analiza 
por la técnica de cromatografía de intercambio iónico con supresión.  
B.6.4 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de aniones comun es e inorgánicos subproductos de la 
desinfección de agua por cromatografía de intercambio iónico y detector conductimétrico con supresor en 
muestras de agua para uso y consumo humano.  
Los aniones que pueden ser determinados a través de este método comprend en aniones inorgánicos 
subproductos de la desinfección (clorito, clorato, bromuro y bromato).  
El método descrito es un procedimiento para la determinación de bromato, bromuro, clorato y clorito por 
cromatografía iónica en agua para uso y consumo humano.  
B.6.5 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas  pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el 
material volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Balanza analítica. Con precisión de 0.0001 g  
Columna de intercambio aniónico , que cumpla con el desempeño requerido de éste método, por 
ejemplo con tamaño de partícula de 5 µm, 25 cm de longitud y 4.0 mm de diámetro interno o equivalente y 
guardacolumna 7 .2 X 4.6 mm  
Cromatógrafo de intercambio iónico  
Detector conductimétrico, con un intervalo de trabajo de 0.01 a 5000 µS en 12 pasos, capaz de trabajar 
con polaridad positiva o negativa o equivalente.  
Filtros para jeringa de celulosa  regenerada de 0.45 µm de poro y 13mm de diámetro. De ser necesario 
use filtros de limpieza SPE -IC para eliminar interferencias de otros iones.  
Jeringa de vidrio o de plástico de 3 mL  
Matraz volumétrico de 1 L  
Microjeringas de 10, 50, 100 y 500 µL 
Pipeta volumétrica de 10 mL  
Supres or 
Termostato de columna (intervalo de temperatura ambiente a 60°C)  
B.6.6 Reactivos y soluciones  
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa  se 
indique.  
Agua grado HPLC. A menos que otra cosa se indique, el agua utilizada debe cumplir con las siguientes 
características: ser grado reactivo de acuerdo al estándar de la Sociedad Americana para Pruebas y 
Materiales tipo I (ASTM, American Society for Testing and Materials), libre de compuestos orgánicos y que no 
presente interferencia. El agua utilizada en la fase móvil debe ser filtrada a través de una membrana de 0.45 a 
0.20 µm. 
Bromato 1000 mg/L  material de referencia en solución  
Bicarbonato de sodio  sal 100% o solución concentrada 0.5 M   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Clorato 1000 mg/L  materi al de referencia en solución  
Clorito 1000 mg/L  material de referencia en solución  
Dicloroacetato de Potasio sal  (surrogado)  
Dilución 1000 mg/L de etilendiamina, diluir 6 µL de EDA en 2 mL de agua, mezclar y aforar a 5 mL  con 
agua.  
Disolución 100 mg/mL de e tilendiamina (preservador), diluir 2.5 mL de EDA en 10mL de agua y aforar 
a 25 mL con agua.  
Disolución de 50 mg/L EDA,  esta solución se usa para diluir las muestras aforar todas las soluciones 
estándar y mezcla de verificación de aniones. Tomar 0.5 mL de l a solución 1000 mg/L de EDA y aforar a  10 
mL con agua.  
Etilendiamina (EDA) ensayo 99.9% o equivalente.  
B.6.7 Procedimiento  
B.6.7.1 Muestreo, preservación y manejo de muestra  
Tomar una muestra de mínimo 50 mL en un recipiente de plástico o vidrio ámbar. Sól o en caso de que la 
muestra contenga dióxido de cloro burbujear con helio o nitrógeno.  
Para preservar la muestra, adicionar 0.1 mL de EDA de 100 mg/mL, la concentración final es de 50 mg/L 
de EDA en la muestra. Las muestras deben mantenerse a una temperatu ra de 2 a 4°C desde el momento de 
su obtención hasta una hora antes del análisis.  
El tiempo límite para el análisis es de 14 días a partir de su recolección.  
B.6.7.2 Procedimiento analítico  
Para preparar la muestra, dejar que la muestra mantenida a baja te mperatura se encuentra a temperatura 
ambiente antes del análisis.  
De ser necesario pasar la muestra por un filtro de 0.45 µm para eliminar partículas o pase la muestra por 
un cartucho de SPE -IC para eliminar la interferencia de aniones como fluoruros y clo ruros. Si la muestra es 
agua embotellada, adicionar de solución de EDA y surrogado a 1 mL de muestra previo al análisis 
cromatográfico.  
Para realizar al análisis, debe operar el equipo como se indica en el instructivo de operación 
correspondiente y permiti r que se estabilice por lo menos 60 minutos antes de iniciar el análisis con las 
condiciones instrumentales establecidas. Elaborar la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en  la 
composición del lote analítico. Iniciar el análisis. Verificar que se  cumpla con el control de calidad y criterios de 
aceptación y rechazo.  
La identificación cualitativa de cada compuesto determinado por éste método está basada en la 
comparación del tiempo de retención. Los compuestos son identificados como presentes cuando  el tiempo de 
retención del compuesto detectado es ±5% del tiempo estándar de referencia. Si se tiene duda en la 
identificación por interferencias en la muestra realizar una adición de los analitos de interés a la muestra para 
evaluar si se mantiene la con centración y la recuperación de la adición.  
B.6.7.3 Análisis de datos y cálculos  
Una vez que se han identificado los compuestos por su tiempo de retención, efectuar la cuantificación 
integrando cada pico para obtener el área correspondiente. El software de l instrumento genera un reporte de 
cuantificación (raw data) con respecto a la curva de calibración, dicho reporte contiene las áreas, los tiempos 
de retención y la concentración obtenida. Calcular la concentración final del compuesto detectado con la 
siguiente ecuación:  
 
En donde:  
D dilución del extracto, volumen aforo ( µL)/volumen tomado de la muestra ( µL) 
B.6.7.4 Informe de prueba.  
Reportar el resultado como mg/L de bromato, mg/L de clorato o mg/L de clorito  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.6.8 Control de calidad, calibración e inter ferencias  
B.6.8.1 Control de calidad.  
B.6.8.1.1  Verificación del equipo. Verificar que el equipo opere adecuadamente de acuerdo con el 
instructivo de operación correspondiente. Verificar las condiciones del detector: intervalo: 1 µs; temperatura de 
celda 3 5°C; temperatura de columna: 45°C; polaridad: positiva; control: local.  
B.6.8.1.2  Verificación de la calibración inicial. Analizar un punto medio de la curva y verificar que los 
valores obtenidos de la concentración para cada compuesto tengan ±25% de varia ción con respecto  a los 
obtenidos en la curva de calibración inicial, de no ser así, debe preparar y analizar una nueva curva  de 
calibración.  
B.6.8.1.3  Verificación de contaminación de reactivos. El blanco electrónico no debe presentar ningún tipo 
de conta minante que interfiera con los analitos medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados 
cumplan con las especificaciones mencionadas.  
Los resultados de los blancos de reactivos deben ser menores al límite de detección del método y no 
present ar compuestos que pudieran interferir con la identificación y/o cuantificación de los analitos medidos.  
Si los resultados de los blancos no cumplen con los criterios mencionados se debe localizar la fuente de 
contaminación y/o problema instrumental para ev aluar si es necesario analizar nuevamente las muestras.  
Utilizar también blancos para verificar la contaminación por arrastre de muestras con altas 
concentraciones en la secuencia analítica.  
B.6.8.1.4  Verificación del proceso analítico. La muestra de contr ol de calidad (MCC) preparada por el área 
de control de calidad se procesa de igual manera que las muestras. Los resultados obtenidos de la muestra 
control se evalúan contra los criterios de aceptación.  
B.6.8.1.5  Verificación de interferencias de matriz  
La verificación de interferencias de matriz se lleva a cabo mediante las muestras adicionadas (MA) y si lo 
considera necesario muestras adicionadas duplicadas MAD.  
Para determinar el efecto de la matriz en la recuperación del analito, calcular el porcentaje de 
recuperación. El % de recuperación debe estar dentro de los criterios de aceptación del 75 a 125%  de 
exactitud y 10% DSR de precisión. Si los valores no cumplen con lo especificado, evaluar las causas, 
documentar las incidencias y realizar las acciones correctivas que se requieran.  
Para determinar el efecto de la matriz en la precisión del analito a través de la matriz adicionada duplicada 
(MAD), calcular la desviación estándar relativa (DSR) entre la MA y la MAD. La DPR entre la MA y la MAD 
debe estar d entro de los criterios de aceptación del 75 a 125% de exactitud y 10% DSR de precisión. Si los 
valores no cumplen con lo especificado, evaluar las causas, documentar las incidencias y realizar las acciones 
correctivas que se requieran.  
Para determinar el e fecto de la matriz en la precisión del analito a través de la precisión de la matriz (M) y 
su matriz duplicada (MDUP), calcular la desviación estándar relativa (DSR) entre la M y la MDUP. La DPR 
entre la M y la MDUP debe estar dentro de los criterios de ac eptación del 75 a 125% de exactitud y 10%  DSR 
de precisión. Si los valores no cumplen con lo especificado, evaluar las causas, documentar las incidencias y 
realizar las acciones correctivas que se requieran.  
B.6.8.1.6  Verificación de la estabilidad de la c urva de calibración. Verificar que la curva de calibración sea 
estable durante el lote analítico analizando una mezcla de verificación cada 10 corridas y observando que 
cumpla con los criterios establecidos.  
B.6.8.1.7 Composición del lote analítico  
El lote  analítico debe estar compuesto por las siguientes muestras:  
B.6.8.1.7.1  blanco electrónico  
B.6.8.1.7.2  blanco de agua  
B.6.8.1.7.3  muestra de verificación de la calibración  
B.6.8.1.7.4  muestra de control de calidad  
B.6.8.1.7.5  muestra real no. 1  
B.6.8.1.7. 6 muestra real adicionada   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.6.8.1.7.7  muestra real no. 2  
B.6.8.1.7.8  muestra real duplicada  
B.6.8.1.7.9  muestra real no. 2 a 10  
Dependiendo de los requerimientos del programa específico de control de calidad, pueden ser requeridas 
muestras duplicadas de ca mpo para evaluar la precisión y exactitud del muestreo, así como las técnicas de 
transportación y almacenamiento de la muestra.  
B.6.8.1.8  La Tabla B.6 -1, de este Apéndice, muestra las especificaciones de aceptación y rechazo de las 
verificaciones de contro l de calidad del método.  
Tabla B.6 -1. Especificaciones de aceptación y rechazo de las verificaciones  de control de calidad  del 
método.  
VERIFICACIÓN DEL EQUIPO  
Punto de Verificación  Criterio  
Equipo libre de interferencias (blanco electrónico)  No presenta r interferencias al t r de los analitos  
VERIFICACIÓN DE LA CALIBRACIÓN INICIAL  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación del % diferencia de la concentración de 
la mezcla de verificación  (punto intermedio de la 
curva de calibración)  %RSD ≤25% 
VERIFICACI ÓN DE LA CONTAMINACIÓN DE REACTIVOS  
Punto de Verificación  Criterio  
Blanco de agua  No presentar interferencias al t r de los analitos  
VERIFICACIÓN DEL PROCESO ANALÍTICO  
Punto de Verificación  Criterio  
Muestra control de calidad  % de recuperación de 75 a 125%  
VERIFICACIÓN DE INTERFERENCIAS DE MATRIZ  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación de muestras adicionadas  % de recuperación de 75 a 125%  
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas  % de recuperación de 75 a 125%  
%DPR de 20%  
Evaluación de muest ras duplicadas  %DPR de 20%  
ESTABILIDAD DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN  
Punto de Verificación  Criterio  
Evaluación de la mezcla de verificación continua  %RSD ≤25% 
 
B.6.8.2 Calibración  
Debe llevar a cabo la estabilización del equipo a las condiciones instrumen tales del método. Colocar el 
frasco lleno con el amortiguador de bicarbonato de sodio 4 miliMolar en la posición A. Desgasificar con helio  la 
fase móvil por 10 minutos. Verificar que esté instalada la columna. Operar el equipo como se indica en el 
instruct ivo de operación correspondiente.  
Preparar la curva de calibración a partir de las disoluciones concentradas preparadas por control de 
calidad, se recomienda preparar dos soluciones de trabajo de acuerdo al intervalo de trabajo deseado:  
A partir de las dis oluciones concentradas de aniones calcular la masa que será utilizada para preparar los 
niveles de la curva de calibración en una masa de aforo de 1 g, de acuerdo a la siguiente ecuación:  
 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
En donde:  
P1 peso de la disolución de referencia (g)  
C2 concentrac ión del nivel de concentración requerido (mg/L)  
C1 concentración de la solución de referencia (mg/L)  
P2 peso de aforo del nivel de concentración requerido (g); será igual a 1 a menos que el 
volumen de aforo sea diferente a 1 g  
D1 densidad de la disolución de referencia (g/mL)  
D2 densidad del disolvente de aforo (g/mL)  
Calcular la concentración real de cada uno de los niveles de concentración utilizando la ecuación 
siguiente:  
 
En donde:  
C3 concentración real de cada nivel (mg/L)  
C1 concentración de la mezcl a de referencia utilizada (mg/L)  
P1 peso de la mezcla de referencia utilizada (g)  
P3 peso de aforo del nivel de concentración requerido (g); será igual a 1 a menos que el 
volumen de aforo sea diferente a 1 g  
D1 densidad de la mezcla de referencia (g/mL)  
D3 densidad del disolvente de aforo (g/mL)  
La Tabla B.6 -2, de este Apéndice muestra la preparación de la curva de calibración  
Tabla B.6 -2. Preparación de la curva de calibración  
Punto  Peso del 
estándar  Peso de 
agua (g)  Concentración del 
estándar (mg/L)  Volu men de 
aforo (g)  Concentración obtenida 
en muestra (mg/L)  
1 0.010  1.19 0.5 1.2 0.004  
2 0.017  0.99 0.5 1 0.008  
3 0.026  0.975  0.5 1 0.013  
4 0.050  0.95 0.5 1 0.025  
5 0.220  0.78 0.5 1 0.110  
6 0.070  0.93 5.0 1 0.350  
 
Analizar los estándares de calibració n de acuerdo a las condiciones instrumentales establecidas durante la 
validación del método.  
Con los datos de concentración en mg/L y la señal obtenida en cada nivel (área), realizar una curva de 
concentración. Calcular las relaciones de concentración y ár ea para cada compuesto y cada nivel, por medio 
de una curva de calibración calculada por mínimos cuadrados de acuerdo a la ecuación:  
 
En donde:  
x concentración  
m factor de calibración (pendiente)  
y área del compuesto  
b ordenada al origen (expresado como r espuesta)  
Evaluar la linealidad de la curva de calibración por medio del coeficiente de correlación, el cual debe ser 
mayor a 0.995. Evaluar también el coeficiente de variación del factor de calibración, el cual debe ser menor o 
igual al 15%.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Si el coefici ente de correlación es menor a 0.995 o el coeficiente de variación del factor de calibración es 
mayor de 15% verificar las condiciones de operación, áreas y concentraciones para evaluar si hay algún  error 
y corregir. Si fuera necesario, analizar nuevamente  el compuesto en el o los niveles de calibración que fueran 
necesarios.  
Si detecta que el problema es la disolución estándar a partir de la cual fue preparado, reemplácelo y 
analice nuevamente.  
Una vez que ha cumplido con lo descrito anteriormente, revisar  que la calibración inicial siga vigente; esto 
lo debe evaluar con la verificación de la estabilidad de la curva de calibración a través de la disolución 
estándar de un punto de la curva. De la misma manera la verificación de la estabilidad de la curva deb e 
llevarse al inicio de cada lote analítico (posterior a la verificación del equipo y verificación de los reactivos de la 
fase móvil) y después de 10 horas de análisis (aproximadamente cada 10 muestras).  
B.6.8.3 Interferencias  
La necesidad de cuantificar n iveles bajos de productos para la desinfección y sus precursores en 
presencia de niveles mucho más altos de los aniones comunes representa un problema analítico. Cualquier 
material iónico que coeluye con un analito de interés interferirá con la determinaci ón de este analito. Se ha 
demostrado que el bromato es sujeto a interferencias positivas en algunas matrices. La interferencia es 
usualmente detectable como un pico aplanado. Esto puede ser a menudo eliminado al pasar la muestra  a 
través de un cartucho de Hidrógeno (Dionex PN 039596). Este problema puede ser abordado mediante la 
selección de diferentes combinaciones de columna/eluyente o por la dilución del eluyente, lo cual 
incrementará los tiempos de retención y dispersará el cromatograma.  
Adicionalmente,  el cloruro o cualquier otro analito no blanco presente en una concentración inusualmente 
alta puede sobrelaparse con el analito de interés lo suficiente para causar problemas en la cuantificación o 
puede ocasionar desviaciones en los tiempos de retención.  La dilución de una muestra puede resolver este 
problema. Debe de tenerse el suficiente cuidado para evitar la acumulación de una muestra de alta 
concentración a la muestra subsecuente. Las interferencias del método también pueden causar la 
contaminación d e reactivos, agua grado reactivo, cristalería de laboratorio, jeringas y otros equipos utilizados 
en el procesamiento de la muestra.   
En el análisis de muestras con alta concentración de otros aniones (fluoruros, cloruros, nitratos, etc.) o con 
alta fuerza  iónica, algunos analitos pueden coeluir con las interferencias de la matriz, eluir sobre los picos 
interferentes o sufrir desplazamiento del tiempo de retención debido a la sobrecarga de los sitios activos de la 
columna, por lo que dependiendo de las inte rferencias pueden ser necesarias la confirmación por el uso de un 
detector alterno, columna y/o fase móvil alternas, dilución o pretratamiento de la muestras.  
Pueden presentarse interferencias de matriz, entre las cuales se encuentran la coelución directa de las 
interferencias con los analitos, la coelución con los analitos debido a altas concentraciones de las 
interferencias y el desplazamiento de los tiempos de retención de los analitos debida a la fuerza iónica de  la 
muestra.  
Por otra parte, pueden tambi én presentarse interferencias instrumentales. Los solventes, reactivos, 
material de vidrio y cualquier otro material utilizado durante el procesamiento de la muestra, pueden producir 
una elevación de la línea base y causar errores en la interpretación de l os cromatogramas. Debe demostrarse 
que todos estos materiales están libres de interferencias, llevando a cabo el análisis de blancos electrónicos y 
de reactivos bajo las condiciones del análisis.  
El solvente utilizado en el equipo para el análisis (bicarbo nato de sodio 4 mM) debe ser desgasificado para 
eliminar el aire de éste y evitar que interfiera incrementando el ruido de la línea base y disminuyendo  la 
sensibilidad.  
El método utiliza el detector conductimétrico con supresor, sin embargo, algunas muestr as presentan 
compuestos que tienen tiempos de retención tardíos por lo que pueden coeluir con los analitos determinados 
en la siguiente muestra y puede ser necesario realizar la confirmación de la presencia de los analitos 
reanalizando la muestra después d e un blanco electrónico.  
B.6.9 Seguridad y manejo de residuos  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un riesgo potencial para la salud y 
la exposición a estos materiales debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de  mantener un 
conocimiento de las regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe ponerse a disposición de todo el personal involucrado en el análisis las hojas de datos de Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
seguridad de los productos q uímicos. Debe de utilizarse equipo de protección personal apropiado para el 
manejo de muestras y estándares. Los estándares primarios deberán prepararse en una campana. Cuando  el 
analista maneje altas concentraciones de compuestos tóxicos deberá utilizarse  un respirador de gases 
tóxicos. Algunos de los analitos y sustancias manejados en este método pueden ser clasificados como 
conocidos o sospechosos carcinógenos para humanos o mamíferos por lo que cual deberán de tomarse las 
precauciones necesarias.  
B.6.10  Referencias  
EPA. 1997. Method 300.1  determination of inorganic anions in drinking water by ion chromatography  Rev. 
1.0 
Standard methods for examination of water and wastewater. 4110 D. Ion Chromatographic Determination 
of Oxyhalides and Bromide.  
B.7 MÉTOD OS DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO AMONIACAL  EN AGUA PARA 
USO Y CONSUMO HUMANO  
Para la determinación de nitrógeno amoniacal (NH 3-N) para el cumplimiento de esta Norma, se podrá 
utilizar indistintamente el:  
 método de prueba por titulación para la determinación de nitrógeno amoniacal en agua para uso y 
consumo humano (contenido en el punto B.7.1 , de este Apéndice),  
 método de prueba para la determinación de nitrógeno amoniacal en agua para uso y consumo 
humano por electrodo selectivo de amoníaco ( contenido en el punto B.7.2 , de este Apéndice),  
 método de prueba para la determinación de nitrógeno amoniacal en agua para uso y consumo 
humano con fenato (contenido en el punto B.7.3 , de este Apéndice), o  
 método de prueba para la determinación de nitrógen o amoniacal en agua para uso y consumo 
humano por colorimetría automatizada (contenido en el punto B.7.4 , de este Apéndice).  
Los dos principales factores que determinan la selección del método para determinar amoníaco son la 
concentración y la presencia de  interferencias. De manera general, una determinación manual directa de 
bajas concentraciones de amoníaco está restringida a aguas de uso y consumo humano, aguas superficiales 
y subterráneas de buena calidad. Por otras fuentes, y donde existen interferenci as presentes o se requiere 
una mayor precisión, puede requerirse una destilación preliminar (contenido en el punto B.7.5 , de este 
Apéndice).  
El método para la determinación de amoníaco en agua de uso y consumo humano, ya sea por titulación 
(punto B.7.1, de  este Apéndice), por electrodo selectivo de amoníaco (punto B.7.2, de este Apéndice), con 
fenato (punto B.7.3, de este Apéndice) o por colorimetría automatizada (punto B.7.4, de este Apéndice), debe 
seleccionarse considerando la concentración de amoníaco p resente en la muestra:  
 El procedimiento de destilación y de determinación por titulación es utilizado especialmente para 
concentraciones de NH 3-N mayores a 5mg/L, utilizando ácido bórico como absorbente después de la 
destilación si el destilado será titula do. 
 El método por electrodo selectivo de amoníaco es aplicable en un intervalo de 0.03 a 1,400 mg  de 
NH 3-N/L. 
 El método manual con fenato es aplicable tanto para agua dulce como salada y es lineal a 0.6 mg 
NH3-N/L. Destilar en ácido sulfúrico (H 2SO 4) como absorbente para el método con fenato cuando se 
encuentran interferencias presentes.  
 El método automatizado es aplicable para un intervalo de 0.02 a 2 mg NH 3-N/L. 
Asimismo, en el caso de la presencia de interferencias puede llevarse a cabo una destilación p reliminar 
(punto B.7.5, de este Apéndice). La destilación preliminar puede llevarse a cabo cuando el método por 
titulación o el método con fenato son utilizados. El amoníaco destilado puede entonces ser determinado tanto 
colorimétricamente por el método co n fenato o por titulación con una mezcla de indicadores o un medidor  de 
pH. La selección entre el método colorimétrico y los métodos de acidimetría depende de la concentración  de 
amoníaco.  
B.7.1 MÉTODO DE PRUEBA POR TITULACIÓN PARA LA DETERMINACIÓN DE NITR ÓGENO 
AMONIACAL EN AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.7.1.1 Principio   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
La muestra es amortiguada en un pH de 9.5 con una disolución amortiguadora de borato para disminuir la 
hidrólisis de cianatos y compuestos orgánicos nitrogenados. Esta es tratada a  través de una destilación 
preliminar (punto B.7.5, de este Apéndice) dentro de una disolución de ácido bórico. El amoníaco destilado es 
determinado por titulación con un estándar de H 2SO 4 y un indicador mixto o un medidor de pH.  
B.7.1.2 Alcance y aplicación  
El mé todo por titulación es utilizado para la determinación de nitrógeno amoniacal en muestras de agua 
para uso y consumo humano que han sido previamente sometidas a un proceso de destilación preliminar 
(punto B.7.5, de este Apéndice).  
El procedimiento de desti lación y de determinación por titulación es utilizado especialmente  para 
concentraciones de NH 3-N mayores a 5 mg/L, utilizando ácido bórico como absorbente después de  la 
destilación.  
B.7.1.3 Equipos y materiales  
Cristalería . Básica de laboratorio  
Dispositi vo para destilación (punto B.7.5, de este Apéndice)  
B.7.1.4 Reactivos y soluciones  
Agua grado reactivo. Debe utilizarse agua libre de amoníaco en la preparación de todos los reactivos  y 
soluciones.  
Mezcla de indicadores . Disolver 200 mg de indicador rojo m etil en 100 mL de alcohol etílico o isopropílico 
al 95%. Disolver 100 mg de azul de metileno en 50 mL de alcohol etílico o isopropílico al 95%. Combinar las 
soluciones. Esta disolución debe de ser preparada mensualmente.  
Disolución indicadora de ácido bóri co (H 3BO 3). Disolver 20 g de H 3BO 3 en agua, añadir 10 mL de la 
mezcla de indicadores y diluir a 1 L. Esta disolución debe de ser preparada mensualmente.  
Titulante de ácido sulfúrico estandarizado 0.02N . Preparar y estandarizar la disolución. Para mayor 
precisión, estandarizar el titulante contra una cantidad de carbonato de sodio (Na 2CO 3) que ha sido 
incorporada a la disolución indicadora de ácido bórico para producir las condiciones reales de titulación de la 
muestra; 1 mL=14 X normalidad X 1 000 µg N (Par a 0.02 N, 1 mL= 280 µg N).  
B.7.1.5 Procedimiento  
B.7.1.5.1 Preparación de las muestras  
Para seleccionar el volumen de la muestra para el método de destilación – titulación puede utilizar la  Tabla 
B.7.1 -1, de este Apéndice:  
Tabla B.7.1 -1. Volumen de la mues tra para el 
método de destilación -titulación  
Nitrógeno amoniacal 
en la muestra  
(mg/L)  Volumen de la 
muestra  
(mL)  
5 a 10  250 
10 a 20  100 
20 a 50  50.0 
50 a 100  25.0 
 
B.7.1.5.2 Procedimiento analítico  
Llevar a cabo la destilación (punto B.7.5, de este A péndice) utilizando una disolución indicadora de ácido 
bórico como absorbente para el destilado.  
Titular el amoniaco en el destilado con un titulante estándar 0.02N H 2SO 4 hasta que el indicador vire a un 
lavanda pálido.  
Llevar un blanco a través de todos l os pasos del procedimiento y aplicar la corrección necesaria  a los 
resultados.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.7.1.5.3 Análisis de datos y cálculos  
Calcular el nitrógeno amoniacal presente en las muestras utilizando la siguiente fórmula:  
 
En donde:  
A volumen de H 2SO4 titulado en la mu estra (mL)  
B volumen de H 2SO4 titulado en el blanco (mL)  
B.7.1.5.4 Informe de prueba.  
Reportar el resultado como nitrógeno amoniacal en mg/L  
B.7.1.6 Control de calidad, calibración e interferencias  
Tres muestras sintéticas que contenían amoniaco y otros co nstituyentes disueltos en agua reactivo fueron 
destiladas y analizadas por titulación, obteniendo la desviación estándar relativa y los errores relativos 
mostrados en la Tabla B.7.1 -2 
Tabla B.7.1 -2. Desviaciones estándar y errores relativos en la determina ción de nitrógeno amoniacal en 
tres muestras sintéticas  
Muestra  Concentración de 
NH3-N/L ( µg/L) Otros constituyentes en 
la muestra sintética  Número de laboratorios 
participantes  Desviación 
estándar relativa  Error 
relativo  
1 200 10 mg Cl-/L 
1.0 mg NO 3—N/L 
1.5 N orgánico/L  
10.0 mg PO 43-/L 
5.0 mg sílica/L  21 69.8%  20% 
2 800 200 mg Cl-/L 
1.0 mg NO 3—N/L 
0.8 mg orgánico/L  
5.0 mg PO 43-/L 
15.0 mg sílica/L  20 28.6%  5% 
3 1500  400 mg Cl -/L 
1.0 mg NO 3—N/L 
0.2 mg orgánico/L  
0.5 mg PO 43-/L 
30.0 mg sílica/L  21 21.6%  2.6% 
 
B.7.1.7 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 4500 -NH3 C. Titrimetric Method  
B.7.2 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO AMONIACAL EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO POR ELECTRODO SELECTIVO DE AMONÍACO  
B.7.2.1 Principio  
El método para la determinación de nitrógeno amoniacal en agua para uso y consumo humano por 
electrodo selectivo de amoníaco utiliza una membrana permeable a gas hidrofóbico para separar la muestra 
de la disolución interna del electrodo de c loruro de amonio.  
El amoníaco disuelto (NH 3(aq) y NH4+) es convertido a NH 3(aq) aumentando el pH a cerca de 11 con una 
base fuerte. El NH 3(aq) es difundido a través de la membrana y cambia el pH de la disolución interna que es 
determinado por un electrodo de pH. El nivel fijo de cloruro en la disolución interna es determinado por un  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
electrodo de ion selectivo a cloruro que sirve como un electrodo de referencia. La determinación 
potenciométrica es realizada con un medidor de pH que cuenta con una escala expa ndida de milivolts o con 
un medidor de ion específico.  
B.7.2.2 Alcance y aplicación  
Este método es aplicable para la determinación de NH 3-N/L en un intervalo de 0.03 a 1 400 mg/L en  agua 
potable.  
La medición puede ser afectada por concentraciones altas de iones disueltos, pero no por el color o la 
turbiedad. Por lo cual, no es necesario llevar a cabo la destilación de la muestra. Las soluciones estándar  y las 
muestras deben tener la misma temperatura y contener cerca de los mismos niveles totales  y especies  
disueltas.  
El método por electrodo selectivo de amoníaco responde lentamente debajo de 1 mg NH 3-N/L, por lo que 
deben utilizarse tiempos largos de inmersión del electrodo (2 o 3 minutos) para obtener lecturas estables.  
B.7.2.3 Equipos y materiales  
Agitado r magnético.  Aislado térmicamente con barra de agitación cubierta de tetrafluoroetileno (TFE)  
Electrodo selectivo de amoníaco  
Potenciómetro . Medidor de pH con una escala expandida en milivoltios (mV) con una resolución de  0.1 
mV entre -700 mV y +700 mV o un medidor de ion específico.  
B.7.2.4 Reactivos y soluciones  
Agua reactivo libre de amoníaco  
Hidróxido de sodio 10N  
Soluciones estándar de cloruro de amonio.  
Disolución NaOH/EDTA, 10N.  Disolver 400 g de NaOH en 800 mL de agua. Añadir 45.2 g de la sal 
tetrasódica del ácido etilendiaminotetracético, tetrahidratada (Na 4EDTA 4H 2O) y agitar hasta disolver. Enfriar y 
diluir a 1 000 mL  
Disolución concentrada de cloruro de amonio (NH 4Cl). Disolver 3.819 g de cloruro de amonio (NH 4Cl) 
anhidro (secado a 100°C) en agu a y diluir a 1 000 mL; 1 mL=1 mg N=1.22 mg de amoniaco.  
B.7.2.5 Procedimiento  
B.7.2.5.1 Preparación de estándares  
Preparar una serie de disoluciones estándar por diluciones decimales a partir de una disolución patrón 
concentrada de NH 4Cl que cubran las con centraciones de 1000, 100, 10, 1 y 0.1 mg NH 3-N/L. 
B.7.2.5.2 Calibración de potenciómetro  
Poner 100 mL de cada disolución estándar en un vaso de precipitados de 150 mL. Sumergir el electrodo 
en el estándar de concentración más baja y mezclar con un agitado r magnético.  
Limitar la velocidad del agitador para minimizar la posible pérdida de amoníaco de la disolución. Mantener 
ella misma velocidad de agitación y una temperatura de 25 °C durante la calibración y determinación.  
Añadir un volumen suficiente de dis olución NaOH 10N (usualmente 1 mL es suficiente) para aumentar el 
pH a cerca de 11.  
Si la presencia de plata o mercurio es posible, usar una disolución de NaOH/EDTA en lugar de  disolución 
NaOH.  
Si es necesario añadir más de 1 mL de disolución NaOH o NaOH/E DTA registrar el volumen utilizado, 
debido a que es requerido en los cálculos.  
Mantener el electrodo en la disolución hasta obtener una lectura estable en milivolts. No añadir disolución 
NaOH antes de sumergir el electrodo, debido a que el amoniaco puede p erderse a partir de la disolución 
básica. Repetir el procedimiento con el resto de los estándares, procediendo de la concentración más baja a 
la más alta.  
Esperar hasta que la lectura se estabilice (al menos 2 o 3 minutos) antes de registrar los milivolts para los 
estándares y las muestras que contienen una concentración ≤1 mg NH 3-N/L. 
B.7.2.5.3 Preparación de la curva estándar  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Obtener la gráfica de la ecuación de concentración con el log de la concentración del de NH 3-N/L en mg en 
el eje x y el potencial en milivolts en el eje y. Si el electrodo funciona apropiadamente un  cambio de 10 veces 
la concentración de NH 3-N produce un cambio en el potencial de cerca de 59 mV.  
B.7.2.5.4 Procedimiento analítico  
Diluir si es necesario para llevar la concentración de NH 3-N dentro del intervalo de la curva de calibración.  
Colocar 100 m L de muestra en un vaso de precipitados de 150 mL y seguir el mismo procedimiento 
descrito para la calibración del electrómetro. Registrar el volumen de disolución NaOH 10 N añadido. Leer la 
concentración de NH 3-N a partir de la curva estándar.  
B.7.2.5.5 A nálisis de datos y cálculos  
Calcular el nitrógeno amoniacal presente en las muestras utilizando la siguiente fórmula:  
 
En donde:  
A factor de dilución  
B concentración de NH 3-N/L, mg/L, a partir de la curva de calibración  
C volumen de disolución NaOH 10N añ adida a los estándares de calibración, mL  
D volumen de disolución NaOH 10N añadida a la muestra, mL  
B.7.2.5.6 Informe de prueba.  
Reportar el resultado como nitrógeno amoniacal en mg/L  
B.7.2.6 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastew ater. 4500 -NH3 D. Ammonia -selective  electrode 
method.  
 
B.7.3 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO AMONIACAL  EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO CON FENATO  
B.7.3.1 Principio  
Un compuesto de color azul intenso es formado por la reacción de amon iaco, hipoclorito y fenol, catalizada 
por una sal de manganeso. El ion amonio reacciona con el hipoclorito y fenol en medio alcalino en presencia 
de nitroferricianuro para producir un compuesto colorido azul de indofenol.  
B.7.3.2 Alcance y aplicación  
El mé todo con fenato es utilizado para la determinación de nitrógeno amoniacal en muestras de agua para 
uso y consumo humano que han sido previamente sometidas a un proceso de destilación preliminar 
(contenido en el punto B.7.5 de este Apéndice) para eliminar i nterferencias. Destilar en ácido sulfúrico (H 2SO 4) 
como absorbente para el método con fenato cuando se encuentran interferencias presentes.  
El método manual con fenato es aplicable tanto para agua dulce como salada y es lineal a 0.6mg NH 3-N/L. 
B.7.3.3 Equi pos y materiales  
Agitador magnético  
Espectrofotómetro , para usar a 630 nm con un paso de luz de 1 cm o mayor.  
B.7.3.4 Reactivos y soluciones  
Agua libre de amoníaco. Utilizar para la preparación de todos los reactivos.  
Reactivo de ácido hipocloroso. A 40 mL  de agua reactivo añadir 10 mL de una disolución al 5 -6% de 
hipoclorito de sodio (NaOCl)  preparada o adquirida comercialmente. Ajustar el pH a 6.5 -7.0 con HCl. Preparar 
este reactivo inestable semanalmente.  
Reactivo de fenato.  Disolver 2.5 g de NaOH y 10g de fenol C 6H5OH en 100 mL de agua reactivo. Debido 
a que este reactivo se oscurece preparar semanalmente. Debe tenerse precaución al utilizar el fenol.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Disolución patrón concentrada de amonio.  Disolver 381.9 mg de NH 4CL anhidro secado a 100 °C, en 
agua rea ctivo y diluir a 1 000 mL; 1 mL=100 µg N=122 µg NH 3 
Solución patrón de trabajo de amonio . Diluir 5 mL de la solución concentrada de amonio en 1 000 mL 
de agua reactivo; 1 mL= 0.500 µg N=0.610 µg NH 3 
Disolución de sulfato manganoso ( MnSO 4·H2O) 0.003 M . Diso lver 50 mg de sulfato manganoso 
(MnSO 4·H2O) en 100 mL de agua  
B.7.3.5 Procedimiento  
B.7.3.5.1 Procedimiento analítico  
A una muestra de 10 mL contenida en un vaso de precipitados de 50 mL añadir una gota (0.05mL) de 
disolución MnSO 4. Colocar sobre un agitad or magnético y añadir 0.5 mL de disolución de ácido hipocloroso. 
Inmediatamente añadir por goteo 0.6 mL de reactivo de fenato.  
Añadir el reactivo sin tardarse utilizando una pipeta beral para una conveniente adición del reactivo. 
Marcar la pipeta para ácid o hipocloroso al nivel de 0.5 mL y liberar el reactivo de fenato de la pipeta que ha 
sido calibrada contando el número de gotas previamente contadas que son equivalentes a un total de 0.6 mL.  
Agitar vigorosamente durante la adición de los reactivos. Debido  a que la intensidad del color es afectado 
por el tiempo que llevan preparados los reactivos, llevar un blanco y un estándar a través del procedimiento 
con cada lote de muestras. Medir la absorbancia utilizando un blanco de reactivos para establecer la lec tura 
cero en el espectrofotómetro. La formación de color se completa en 10 minutos y es estable por al menos  24 
horas. A pesar de que el color azul tiene un máximo de absorbancia a 630 nm, pueden realizarse 
determinaciones satisfactorias en la región de 6 00 a 660 nm.  
Preparar una curva de calibración en el intervalo de 0.1 a 5 µg de NH 3-N, tratado los estándares de la 
misma manera que las muestras.  
B.7.3.5.2 Análisis de datos y cálculos  
Graficar las lecturas de absorbancia contra concentración, obtener la ecuación de la recta, y comparar las 
lecturas de las muestras con esta.  
La concentración de amoníaco puede ser calculada utilizando la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
A absorbancia de la muestra  
B NH 3-N en el estándar, µg 
C absorbancia del estándar  
S volum en de la muestra utilizado, mL  
D volumen del destilado total colectado, mL, incluyendo el ácido absorbente, el agente 
neutralizante y al agua libre de amoniaco añadida  
E volumen del destilado utilizado para el desarrollo de color, mL  
El radio D/E aplica só lo para muestras destiladas  
B.7.3.5.3 Informe de prueba  
Reportar el resultado como nitrógeno amoniacal en mg/L  
B.7.3.6 Interferencias  
Una alcalinidad mayor a 500 mg como carbonato de calcio (CaCO 3)/L, una acidez encima de 100 mg 
como CaCO 3/L y la turbidez interfieren con el método, Por lo cual es necesario remover estas interferencias 
con una destilación preliminar (ver punto B.7.5, de este Apéndice).  
B.7.3.7 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 1975. 4500 -NH3 D. Phenate Met hod. 14 ed.  
 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.7.4 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO AMONIACAL  EN AGUA PARA 
USO Y CONSUMO HUMANO POR COLORIMETRÍA AUTOMATIZADA  
B.7.4.1 Definiciones y términos  
Análisis de blanco analítico , someter una alícuota de agua reactivo a todo el p roceso de análisis por el 
cual pasa una muestra real. Los laboratorios deben realizar los análisis de blancos para corregir la señal de 
fondo del sistema de medición. El análisis de blancos se realizará en forma periódica o con cada lote de 
muestras según lo requiera el método.  
Blanco,  al agua reactivo o matriz equivalente a la que no se le aplica ninguna parte del procedimiento 
analítico y sirve para evaluar la señal de fondo.  
Blanco analítico o de reactivos , al agua reactivo o matriz equivalente que no co ntiene, por adición 
deliberada, la presencia de ningún analito o sustancia por determinar, pero que contiene los mismos 
disolventes, reactivos y se somete al mismo procedimiento analítico que la muestra problema.  
Blanco fortificado,  al estándar preparado a  partir de una muestra blanco (agua o agua reactivo) a la cual 
se agrega el analito en una concentración conocida y no necesariamente de una fuente diferente a la que se 
usa para la calibración. Se prepara al menos uno por cada lote de muestras.  
Calibració n, al conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones específicas, la relación entre 
los valores de una magnitud indicados por un instrumento o sistema de medición, o los valores representados 
por una medida materializada y los valores correspondi entes de la magnitud, realizados por los patrones, 
efectuando una corrección del instrumento de medición para llevarlo a las condiciones iniciales de 
funcionamiento.  
Desviación estándar experimental , para una serie de mediciones del mismo mensurando, es la  
magnitud que caracteriza la dispersión de los resultados.  
Disolución estándar , a la disolución de concentración conocida preparada a partir de un patrón primario.  
Disolución madre , corresponde a la disolución de máxima concentración en un análisis. Es a p artir de 
esta disolución que se preparan las disoluciones de trabajo.  
Disolución patrón , a la disolución de concentración conocida preparada a partir de un patrón primario.  
Exactitud , proximidad de concordancia entre el resultado de una medición y un valor  verdadero  del 
mesurado.  
Límite de detección del método (LDM ), a la concentración mínima del analito que puede detectarse pero 
no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones de operación establecidas. Este límite de detección 
generalmente se logra po r analistas experimentados con equipo bien calibrado y bajo condiciones no 
rutinarias.  
Límite práctico de cuantificación (LPC) , a la concentración mínima del analito que puede determinarse 
con un nivel de confianza predeterminado en condiciones rutinarias de operación. Este límite puede 
establecerse entre 5 a 10 veces el LDM.  
Material de referencia,  al material o sustancia en el cual uno o más valores de sus propiedades son 
suficientemente homogéneos y bien definidos, para ser utilizadas para la calibración  de aparatos, la 
evaluación de un método de medición o para asignar valores a los materiales.  
Material de referencia certificado , al material de referencia, acompañado de un certificado, en el cual 
uno o más valores de las propiedades están certificados po r un procedimiento que establece la trazabilidad a 
una realización exacta de la unidad en la cual se expresa los valores de la propiedad, y en el que cada valor 
certificado se acompaña de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza.  
Medición , al conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor de la magnitud.  
Mensurando , a la magnitud particular sujeta a medición.  
Muestra de control de calidad (MCC),  a la muestra que contiene todos o un subgrupo de los analitos del 
método a concent raciones conocidas. Las MCC se obtienen de una fuente externa al laboratorio o bien se 
pueden preparar por el analista de una fuente de estándares diferentes de la fuente de los estándares de 
calibración.  
Parámetro , a la variable que se utiliza como refere ncia para determinar la calidad del agua.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Patrón de medición,  al material de referencia, instrumento de medición, medida materializada o sistema 
de medición destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o más valores de una 
magnitu d para utilizarse como referencia.  
Patrón de referencia , al patrón en general de la más alta calidad metrológica disponible en un lugar dado, 
o en una organización determinada de la cual se derivan las mediciones realizadas en dicho lugar.  
Patrón de trabaj o, al patrón que es usado rutinariamente para calibrar o controlar las medidas 
materializadas, instrumentos de medición o los materiales de referencia.  
Patrón nacional de medición , al patrón reconocido por una decisión nacional en un país, que sirve de 
base para asignar valores a otros patrones de la magnitud concerniente.  
Patrón primario , al patrón que es designado o reconocido ampliamente como un patrón que tiene las más 
altas cualidades metrológicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrone s de la misma magnitud.  
Patrón secundario , al patrón cuyo valor es establecido por comparación con un patrón primario de la 
misma magnitud.  
Precisión , al grado de concordancia entre resultados analíticos individuales cuando el procedimiento 
analítico se ap lica repetidamente a diferentes alícuotas o porciones de una muestra homogénea. Usualmente 
se expresa en términos del intervalo de confianza o incertidumbre.  
B.7.4.2 Símbolos y términos abreviados  
CCC  verificación de calibración continúa  
ICV  verificación inicial de la calibración  
MCC  muestra de control de calidad  
LDM  límite de detección del método  
LPC límite práctico de cuantificación  
µuA micro unidad de absorbancia  
► botón de inicio de línea base  
►► botón de inicio de análisis  
B.7.4.3 Principio  
El amonio reacciona con el hipoclorito para generar cloramina. Ésta reacciona con el fenol en medio 
alcalino y en presencia de nitroferricianuro para producir azul de indofenol, cuya concentración es proporcional 
a la concentración de amonio en la muestra (Fig. B.7. 4-1, de este Apéndice). La concentración del azul de 
indofenol se cuantifica leyendo a una longitud de onda de 660 nm.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 
Fig. B.7.4 -1. Formación del indofenol de color azul producto de la reacción del ión amonio con 
hipoclorito y fenol en medio básico en p resencia de nitroferricianuro.  
B.7.4.4 Alcance y aplicación  
Este método se usa para determinar la concentración de nitrógeno amoniacal (N -NH 3) en un intervalo de 
0.01 a 2.0 mg/L en agua potable, natural, subterránea y superficial. El intervalo de trabajo s e puede extender 
hacia concentraciones más altas mediante la dilución de las muestras.  
B.7.4.5 Equipos y materiales  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.  
Analizador automático , que incluya bomba per istáltica de canales múltiples, automuestreador, detector 
fotométrico con celda de flujo, sistema de recopilación de datos y cartucho configurado para el análisis de 
nitrógeno amoniacal (Fig. B.7.4 -2, de este Apéndice). Si se usa el equipo en la modalidad de FIA, el equipo 
debe contar con la válvula apropiada. El siguiente diagrama considera el uso del equipo automatizado en su 
modalidad de flujo segmentado (SFA).   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.7.4 -2. Configuración del cartucho para el análisis de N -NH 3 
Agitador rotatorio  
Balanz a 
Embudos de filtración  
Material de vidrio  lavado de acuerdo al instructivo de control de calidad.  
Potenciómetro o tiras reactivas indicadoras de pH  
Papel filtro,  de tamaño de poro de 2.5 µm o menor.  
B.7.4.6 Reactivos y soluciones  
B.7.4.6.1 Los reactivos e mpleados en este método se indican en la Tabla B.7.4 -1, de este Apéndice.  
Tabla B.7.4 -1. Reactivos empleados en el método de análisis.  
Nombre  Fórmula  Peso molecular 
(g/mol)  No. CAS  
Sulfato de amonio  (NH 4)2SO 4 132.14  7783 -20-2 
Hidróxido de sodio  NaOH  40 1310 -73-2 
Fenol  C6H5OH 94.11  108-95-2 
Sal disódica del ácido 
etilendiaminotetraacético dihidratada  C10H16N2Na2O8 • 2 H 2O 372.24  6381 -92-6 
Hipoclorito de sodio (5% de cloro disponible)  NaClO  74.44  7681 -52-9 
Nitroferricianuro de sodio dihidratado  Na2[Fe(CN) 5NO] • 2H 2O 297.95  13755 -38-9 
Ácido sulfúrico concentrado  H2SO 4 98.08  7664 -93-9 
Cloruro de Potasio  KCl 74.55  7447 -40-7 
Brij®-35 (disolución al 21 ó 30% w/v)  --- --- A21-0110 -33a 
Agua desionizada  H2O 18 7732 -18-5 
Tiosulfato de sodio pentahidratado  Na2S2O3 * 5 H 2O 248.19  10102 -17-7 
a Número de parte del distribuidor (Ezkem). Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se 
incluyen sólo como ejemplos y no implican aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso 
de otros p roveedores o fabricantes. Las referencias específicas pretenden representar especificaciones 
adecuadas para los artículos.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.7.4.6.2 Preparación de reactivos  
Para mejores resultados, filtrar con membrana de 0.45 µm todas las disoluciones de los reactivos 
preparados antes de usarlos. Se puede hacer uso de agua tipo I y desgasificada, para la obtención de 
mejores resultados.  
B.7.4.6.2.1 Agua reactivo.   
Debe ser agua libre de amonio, pH de 5.0 a 8.0 y conductividad máxima de 5 µS/cm a 25ºC. 
Adicionalmente se p uede hacer un tratamiento de desgasificación del agua a utilizar si el analista lo considera 
prudente con base en el ruido instrumental obtenido en el equipo. (Se sugiere realizar con ruido instrumental  
> 1000 µuA). La desgasificación puede realizarse a  través de someter el agua desionizada a un vacío fuerte 
durante 15 a 20 minutos; agitar magnéticamente o someter a un ultrasonido por 20 minutos; purgar el agua 
con nitrógeno gaseoso (u otro gas inerte) con ayuda de un material poroso por 5 minutos o hervir  el agua 
desionizada en un matraz Erlenmeyer por 15 minutos y dejar enfriar a temperatura ambiente cubriendo la 
boca del matraz con un vaso de precipitados invertido. Una vez desgasificada el agua, guardar en un 
contenedor cerrado para evitar que absorba g ases atmosféricos.  
B.7.4.6.2.2 Disolución de arranque / disolución de lavado. Esta disolución se usa para ambos propósitos. 
Añadir 0.5 mL de Brij -35 a 500 mL de agua desionizada. Mezcle suavemente.  
B.7.4.6.2.3 Reactivo concentrado complejante, Sal disódica  del ácido etilendiaminotetraacético dihidratada 
al 5% p/v (1 L). Disolver 50 g de la Sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético dihidratada y 
aproximadamente 1 g de hidróxido de sodio (aproximadamente 6 perlas) en aproximadamente 800 mL de 
agua desi onizada. Llevar a un volumen final de 1 L con agua desionizada.  
B.7.4.6.2.4 Reactivo complejante de trabajo (250 mL). Tomar 250 mL del reactivo complejante de EDTA, 
añadir 250 µL de detergente Brij -35 y mezclar suavemente. Este volumen es suficiente para u n análisis de 8 
horas. Preparar esta disolución cada vez que se analice un lote.  
B.7.4.6.2.5 Disolución concentrada de hidróxido de sodio 10 N (1 L). Mientras agita, añadir 
cuidadosamente 400 g de hidróxido de sodio sólido a aproximadamente 500 mL de agua.  Dejar enfriar a 
temperatura ambiente y diluir a 1 000 mL con agua. Mezclar bien. Guardar en un recipiente de polietileno. Es 
importante considerar que al disolver el hidróxido de sodio en agua se libera una gran cantidad de calor por lo 
que deben tomarse las precauciones necesarias.  
B.7.4.6.2.6 Fenol alcalino (1 L). Mientras agita, añada cuidadosamente 80 mL de la disolución de NaOH 
10 N a aproximadamente 700 mL de agua. Enfríe la disolución en un baño de hielo si es necesario. Mientras 
agita, añada cuidad osamente 83 g de fenol en pequeñas porciones, enfriando la disolución después de cada 
adición. Lleve a un volumen final de 1 000 mL con agua desionizada y mezcle bien. Guarde en un frasco 
ámbar a 4 °C. Esta disolución es estable hasta por 6 semanas si se g uarda en estas condiciones. Al disolver 
hidróxido de sodio o fenol en agua se libera una gran cantidad de calor. Tome las precauciones necesarias. 
La disolución de fenol alcalino debe presentar un color paja tenue. Deséchela si se torna de color  ámbar 
oscu ro. 
B.7.4.6.2.7 Disolución de hipoclorito de sodio de trabajo (100 mL). Tome 50 mL de la disolución de 
hipoclorito de sodio comercial (5% de cloro disponible) y mézclelos con 30 mL de agua desionizada. Llevar a 
un volumen final de 100 mL con agua y mezclar  bien. Debido a la volatilidad del hipoclorito de sodio, no es 
posible almacenar esta disolución. Prepare este reactivo cada vez que realice un análisis.  
B.7.4.6.2.8 Nitroferricianuro de sodio (1 L). Pesar y disolver 0.5 g de nitroferricianuro de sodio dih idratado 
en aproximadamente 800 mL de agua. Llevar a un volumen final de 1 000 mL y mezcle bien. Guardar en un 
frasco ámbar. Esta disolución es estable hasta por 6 semanas si se mantiene a 4 °C.  
B.7.4.6.2.9 Hidróxido de sodio, disolución 10N (1L). Mientras  se agita, adicionar cuidadosamente 400 g de 
hidróxido de sodio a aproximadamente 500 ml de agua desionizada, en un vaso de precipitados inmerso  en 
baño refrigerante. Diluir con agua desionizada hasta alcanzar un volumen final de 1 000 ml, envasar en 
recip iente de plástico.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.7.4.6.2.10 Disolución madre de 1 000 mg/L de nitrógeno amoniacal (N -NH3). Preparación volumétrica. 
Pesar con precisión 0.471 7 g de sulfato de amonio, (NH 4)2SO 4, secado previamente a 105 ± 3 °C que cuente 
con la pureza necesaria para s er considerado como material de referencia y el certificado que lo demuestre. 
Disolver en aproximadamente 80 mL de agua desionizada dentro de un matraz aforado y verificado. Diluya 
hasta 100 mL con agua desionizada. Guarde en un frasco y preserve con 3 got as de cloroformo. Esta 
disolución es estable por tres meses si se conserva en refrigeración. La preparación de esta solución madre 
es recomendable hacerla gravimétricamente, la estabilidad de la solución puede ser hasta de 6 meses en 
condiciones de almacen amiento adecuadas.  
B.7.4.6.2.11 Disolución madre de 1 000 mg/L de nitrógeno amoniacal (N -NH3). Preparación gravimétrica. 
Realizar la preparación de la disolución en un contenedor de plástico y de volumen adecuado para este fin. 
Agregar agua desionizada cui dadosamente hasta alcanzar un peso de 100 g.  
B.7.4.7 Procedimiento  
B.7.4.7.1 Recolección, conservación y almacenamiento de muestras  
Las muestras se colectan en envases de vidrio o plástico limpios.  
El volumen de muestra debe ser suficiente para garantizar que se tenga una muestra representativa, que 
permita el análisis de duplicados si es necesario y que minimice la cantidad de desechos generados. Se 
sugiere tomar un volumen de muestra entre 50 y 100 mL.  
Es posible determinar la concentración de nitrógeno a moniacal en las muestras sin preservar si se 
analizan inmediatamente después de su recolección.  
Si no es posible analizar las muestras inmediatamente preservarlas añadiendo ácido sulfúrico (H 2SO 4) 
hasta obtener un pH < 2 y mantenerlas a 4 °C hasta su análi sis. 
Las muestras preservadas deben analizarse tan pronto como sea posible después de su recolección. 
Pueden almacenarse hasta por 28 días si se mantienen a 4 °C.  
Ajuste el pH de las muestras entre 5 y 8 antes de analizarlas con NaOH.  
B.7.4.7.2 Preparación  de muestras  
Tome un volumen suficiente de muestra para filtrarlo y recuperar un volumen de filtrado de al menos 9 mL. 
Generalmente un volumen de 50 mL de muestra es suficiente. Si se sospecha o se sabe de la presencia de 
cloro residual se trata la muestra  en la filtración agregando una pizca de tiosulfato de sodio, sulfito de sodio o 
algún otro agente equivalente.  
Filtrar las muestras con papel filtro de poro mediano. Un tamaño de poro de 2.5 µm es suficiente, aunque 
se puede usar un tamaño de poro más peq ueño. Las muestras aparentemente limpias y que sean además de 
origen potable pueden no ser filtradas antes de neutralizarlas.  
Si las muestras filtradas aún presentan coloración, adicione una pizca de carbón activado, agite y fíltrelas 
nuevamente.  
Verifique  el pH de las muestras con tiras reactivas indicadoras de pH o con un potenciómetro. Ajuste el pH 
de las muestras entre 5 y 8 con NaOH 10 N.  
Transfiera el líquido filtrado a viales de vidrio de 10mL para su análisis.  
En caso de que se tengan muestras de hi elo, se toma un fragmento de éste buscando que la alícuota sea 
representativa y se coloca en un envase adecuado para contenerlo, después de unos minutos que la muestra 
ya sea líquida se envasa en tubos de 10 mL para su análisis.  
En caso de tener una muestr a de agua envasada, se toma alícuota directamente en el recipiente original y 
envasando en tubos de 10 mL para su análisis posterior.  
B.7.4.7.3 Preparación del autoanalizador  
Configure el equipo como lo indica el Manual del Usuario respectivo y asegúrese d e que todos los 
módulos estén encendidos.  
Verifique que las conexiones de las mangueras estén configuradas en el cartucho como muestra el 
diagrama de la Figura B.7.4 -2. Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Asegúrese de tener instalado el filtro de 660 nm en el detector.  
Active el calentador d el cartucho y verifique que la temperatura sea de 50 °C.  
Llene el depósito de enjuague del automuestreador con agua.  
B.7.4.7.4 Estabilización del equipo  
Abrir el programa del equipo y asegurarse que la cánula del automuestreador se introduzca en la cavidad  
de enjuague.  
Conecte la manguera del reactivo complejante de trabajo (EDTA) a un recipiente con disolución de 
arranque/lavado y las mangueras del resto de los reactivos a un recipiente con agua. Asegure las grapas  de 
todas las mangueras en la bomba presio nándolas hacia abajo hasta que escuche un “clic” y levante todas las 
palancas correspondientes para presionar las mangueras contra los rodillos de la bomba peristáltica. Accione 
la bomba a una velocidad de 40% permitiendo que el agua y la disolución de arr anque fluyan por todo el 
sistema.  
Asegúrese de que no existan fugas en las conexiones, que no haya mangueras presionadas y que los 
flujos en las mangueras sean constantes.  
B.7.4.7.5 Verificación de la línea base  
Crear o cargar un método apropiado para el a nálisis de N -NH3 en el programa del equipo. Consultar el 
Manual del Usuario respectivo del programa para mayor referencia.  
Crear una secuencia que incluya las muestras que conforman el lote analítico y los controles de calidad. 
Consultar el Manual del Usua rio respectivo del programa para mayor referencia.  
Seleccionar la opción del menú de la ventana principal del programa del equipo. Introducir el nombre y 
clave del analista, seleccionar el método y la secuencia a usarse en el análisis e indique un nombre y  una ruta 
para guardar los resultados del análisis.  
Comenzar el monitoreo de la línea base presionando el botón respectivo que generalmente tiene el 
símbolo ( ►) ubicado en el margen izquierdo de la pantalla de obtención de datos. Monitorear la línea base por 
unos minutos. Su magnitud no debe sobrepasar las 1000 µuA y su deriva (desplazamiento hacia arriba o 
hacia abajo) no debe ser mayor a las 500 µuA en 300 se gundos.  
Si observa fluctuaciones grandes en la línea base o una deriva continua probablemente se deba a la 
presencia de burbujas en la celda de flujo. Extraer estas burbujas tomando la manguera a la salida del flujo de 
la celda y forme un bucle con ella. P resionar con los dedos el punto donde se sobreponen las dos secciones 
de la manguera y tire ligeramente mientras presiona, sosteniendo con la otra mano la porción de la manguera 
más próxima a la celda de flujo. Observar si se estabiliza la línea base. Repi ta esta operación hasta que la 
línea base sea estable.  
Conectar todas las mangueras a los recipientes de los reactivos correspondientes y verifique nuevamente 
las condiciones de la línea base.  
B.7.4.7.6 Análisis  
Coloque la(s) gradilla(s) con los estándares  y las muestras en el automuestreador. Verifique que  las 
posiciones de los tubos coincidan con las especificadas en la secuencia de análisis. La matriz de los 
calibrantes, blancos y muestras sintéticas deben tener la misma matriz que las muestras analizada s. 
Inicie el análisis presionando el botón respectivo que generalmente tiene el símbolo ( ►►) ubicado  en el 
margen izquierdo de la pantalla de obtención de datos. Esto inicia el análisis de acuerdo a la  secuencia 
cargada.  
De ser necesario, realice las diluc iones de las muestras que se encuentren fuera del intervalo de trabajo e 
inclúyalas al final de la secuencia. Anexe también al final de la secuencia las muestras para las que se hayan 
obtenido resultados poco confiables debido a anomalías durante su anális is, tal como el arrastre de la muestra 
anterior o el paso de alguna burbuja por el detector. Para anexar muestras a la secuencia abra la tabla 
durante el análisis del lote presionando el botón correspondiente ubicado en el margen izquierdo de la pantalla 
de obtención de datos e introduzca la información en las posiciones disponibles al final de la secuencia.  
Una vez terminado el análisis, cambie la manguera del reactivo complejante de trabajo (EDTA) a un 
recipiente con disolución de arranque/lavado y las ma ngueras del resto de los reactivos a un recipiente con 
agua desionizada.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Deje fluir por todo el sistema el agua desionizada y la disolución de lavado por 15 minutos para limpiarlo.  
Detenga la bomba, libere las grapas de las mangueras en la bomba peristálti ca, apague el equipo y vacíe 
el recipiente de desechos.  
Si observa precipitación al conectar la línea del fenol alcalino, puede deberse a una baja calidad de los 
reactivos, en particular del EDTA, o demasiado Brij -35. 
La precipitación al conectar el fenol alcalino también puede presentarse si la muestra contiene calcio o 
magnesio en tal cantidad que sobrepase la capacidad complejante del EDTA. Si eso ocurre, aumente la 
concentración de EDTA en el reactivo complejante. Se sugiere aumentar la cantidad en un 5 0%, ya que 
demasiado EDTA ocasiona un aumento considerable en el ruido.  
El pH del medio cuando sale de la celda de flujo debe ser aproximadamente de 12. Verifíquelo con tiras 
reactivas indicadoras de pH.  
Para mejorar el desempeño del método a bajas concent raciones se recomienda:  
 Preparar una dilución 1:10 de la disolución complejante de trabajo.  
 Disminuir el intervalo de trabajo de manera que se acerque a la concentración de las muestras.  
 Aumentar el tiempo de duración del ciclo en las condiciones del métod o para mejorar el desempeño 
del método a concentraciones altas.  
B.7.4.7.7 Análisis de datos y cálculos  
La curva de calibración permite al equipo calcular automáticamente la concentración de las muestras.  Las 
unidades de los valores arrojados son las mismas  que se usaron para los estándares, que son mg/L  de N -
NH 3. 
B.7.4.7.8 Informe de prueba.  
Reportar el resultado como mg/L de nitrógeno amoniacal (N -NH 3). 
B.7.4.8 Control de calidad, calibración e interferencias  
B.7.4.8.1 Control de Calidad  
B.7.4.8.1.1 Verifi cación del equipo. Asegure el buen funcionamiento del equipo verificando los Indicadores 
de Calidad de la técnica.  
B.7.4.8.1.2 Verificación de la calibración.  
Si para cuantificar la concentración de analito en las muestras y los controles de calidad se emp lea una 
curva de calibración cargada en el programa obtenida anteriormente (en la validación parcial del método), se 
emplea la respuesta que arroja el pico de sincronía para evaluar la veracidad de la curva. Se compara la 
respuesta obtenida para este pico con el promedio de las respuestas obtenidas en la validación del método 
para un estándar de la misma concentración. La diferencia entre estas dos respuestas no debe ser mayor  al 
15%.  
Si se hace uso de una curva de calibración nueva para cuantificar la conc entración de analito en las 
muestras y los controles de calidad en un lote, se debe preparar un estándar de verificación inicial de la 
calibración (ICV), el cual contiene al analito en una concentración conocida y que se encuentra dentro del 
intervalo de t rabajo. Se sugiere que esta concentración sea menor o igual al punto medio de la curva  de 
calibración. Este estándar debe ser preparado a partir de una fuente alterna a la que se empleó para construir 
la curva de calibración.  
B.7.4.8.1.3  Verificación de co ntaminación de reactivos.  
Se prepara un blanco de reactivos tomando una alícuota de agua desionizada y sometiéndola al mismo 
procedimiento de preparación y de análisis que el resto de las muestras. La lectura para este blanco de 
reactivos debe arrojar un v alor menor al límite de detección del método. Se debe incluir una muestra blanco 
por cada 20 muestras reales.  
B.7.4.8.1.4  Verificación del proceso analítico.  
Se emplean diferentes muestras para verificar el proceso analítico:  
 Verificación inicial de la cal ibración (ICV).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
 Verificación de calibración continua (CCC). Con el propósito de comprobar que la calibración 
verificada al inicio se mantenga vigente durante todo el análisis del lote, se debe analizar a intervalos 
regulares una disolución estándar de conc entración conocida. Se sugiere que ésta sea de 
concentración menor o igual al punto intermedio de la curva. El recobro entre el valor nominal de esta 
disolución y el valor obtenido en cada medición no debe ser mayor al 10%.  
 Verificación de la linealidad de  la curva de calibración. El programa del equipo ajusta una ecuación a 
los pares de datos obtenidos para las muestras con las que se construyó la curva de calibración.  
 Este ajuste suele ser de primer orden, aunque puede ser de segundo orden si el intervalo  de trabajo 
es demasiado amplio. Además de la función ajustada, el programa arroja un coeficiente de correlación 
lineal, el cual debe ser igual o mayor a 0.995.  
 Muestra control de calidad. Se analiza una muestra sintética de concentración conocida (muestra  
QC), siendo lo más recomendable prepararla a partir de una fuente diferente a la curva de calibración 
por cada 20 muestras reales. El recobro entre el resultado obtenido y el valor nominal de esta muestra 
no debe ser mayor al 10%.  
 Verificación de repetibi lidad de los análisis. Se selecciona al menos una muestra por cada matriz del 
lote analizado para prepararla y analizarla por duplicado o bien el 10% del total de muestras. Con ello 
se verifica la repetibilidad del proceso al cual se someten las muestras. La diferencia porcentual 
relativa entre los dos valores obtenidos no debe superar el 20%.  
 Verificación de interferencias de matriz. Se deben adicionar al menos dos muestras por cada matriz 
del lote analizado. Las muestras seleccionadas se adicionan con una  concentración conocida de 
analito, la cual se recomienda que sea igual a la establecida como máximo permisible por alguna 
entidad reguladora o, en su caso, que sea entre una y cinco veces la concentración del analito 
presente originalmente en la muestra o  si este dato se desconoce se recomienda adicionar una 
concentración del punto medio hacia abajo de la curva de calibración. Comparando las 
concentraciones de analito en la muestra sin adicionar y en la adicionada se obtiene un recobro de  la 
adición, el cu al debe de estar entre el 80 y el 120 %. Se recomienda que las muestras que se 
dupliquen sean las mismas que se adicionan. Y si se prepara un blanco fortificado, que éste tenga la 
misma concentración de las muestras adicionadas.  
 Composición del lote. El lo te analítico debe conformarse como se indica en la Tabla B.7.4 -2, de  este 
Apéndice.  
Tabla B.7.4 -2. Composición del lote analítico por colorimetría automatizada.  
Orden en 
secuencia  Tipo de 
muestra  Función  
1 Pico de 
sincronía  Primer pico que detecta el equ ipo. A partir de este el programa comienza a 
contar la duración de los ciclos de toma de muestra.  
2 Arrastre 
(carryover ) Con éste el equipo calcula qué porcentaje del pico de sincronía está siendo 
cuantificado en la siguiente toma de muestra.  
3 Enjuague 
(wash ) Limpia las líneas de los restos de las inyecciones anteriores.  
4 Línea base  Establece un punto de anclaje para la línea base.  
5 Estándares 
de calibración  Serie de estándares de diferente concentración que el equipo usa para 
construir la curva de c alibración. Se omiten si se emplea una curva cargada 
en el equipo.  
6 Enjuague  Limpia las líneas de los restos de las inyecciones anteriores.  
7 Línea base  Establece un punto de anclaje para la línea base.  
8 Estándar de 
verificación 
inicial de la 
calibrac ión Si se hace uso de una curva de calibración nueva para cuantificar la 
concentración de analito en las muestras y los controles de calidad en un 
lote, se debe preparar un estándar de verificación inicial de la calibración 
(ICV), el cual contiene al anali to en una concentración conocida y que se 
encuentra dentro del intervalo de trabajo.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
9 Estándar de 
verificación 
continúa de la 
calibración  Con el propósito de comprobar que la calibración verificada al inicio se 
mantenga vigente durante todo el análisis d el lote, se debe analizar a 
intervalos regulares una disolución estándar de concentración conocida. Se 
analiza una vez cada diez muestras reales y con al menos el 10% de las 
muestras.  
10 Enjuague  Limpia las líneas de los restos de las inyecciones anterior es. 
11 Línea base  Establece un punto de anclaje para la línea base.  
12 Blanco de 
reactivos  La lectura para este blanco de reactivos debe arrojar un valor menor al límite 
de detección del método.  
13 Muestra QC  Se recomienda inyectar un blanco después de esta muestra ya que si su 
concentración es demasiado alta se puede presentar un arrastre en la 
siguiente muestra.  
14 Muestras 
desconocidas 
o problema  Muestras problema. Se incluyen muestras duplicadas y adicionadas.  
 
Dependiendo de los requerimientos del  programa específico de control de calidad, pueden ser requeridas 
muestras duplicadas de campo para evaluar la precisión y exactitud del muestreo, así como las técnicas de 
transportación y almacenamiento de la muestra.  
La Tabla B.7.4 -3, de este Apéndice re sume los controles de calidad mencionados en esta sección, así 
como sus criterios de aceptación.  
Tabla B.7.4 -3. Puntos a verificar en el análisis de un lote, así como sus criterios de aceptación.  
Tipo de verificación  Criterio de aceptación  
Verificación i nicial de la calibración(pico de sincronía)  Diferencia menor al 15%  
Verificación inicial de la calibración (ICV)  Diferencia menor al 10%  
Verificación de la linealidad de la curva de calibración  Coeficiente de correlación mayor a 0.995  
Blanco de reactivo s Concentración menor al LDM.  
Muestra de control de calidad (QC) y blancos fortificados  Recobro entre el 90 y 110%  
Muestra(s) duplicada(s)  DPR < 20%  
Muestra(s) adicionada(s)  Recobro entre el 80 y 120%  
Verificación de calibración continua (CCC)  Recobro  menor al 10%  
 
B.7.4.8.2 Calibración  
Si para cuantificar la concentración de N -NH 3 se emplea una curva obtenida anteriormente en la validación 
parcial del método, solamente verifique la calibración del instrumento. Esto es preparando una disolución 
conoci da como pico de sincronía que es equivalente a una concentración del último punto de la curva de 
calibración y un estándar de verificación continua de la calibración los cuales se recomienda sean de una 
fuente diferente con la que se validó el método.  
Si se requiere de una curva de calibración nueva para cuantificar la concentración de analito en las 
muestras y en los controles de calidad de un lote, o para realizar u na nueva validación parcial del  método, 
prepárela usando material volumétrico verificado, o  bien, gravimétricamente empleando una  balanza 
calibrada.  
Disolución intermedia de N -NH 3. Tome 1 mL de la disolución madre de 1 000 mg/L de N -NH 3 y lleve a un 
volumen final de 100 mL con agua desionizada. Con ello se obtiene una concentración de 10 mg/L de  N-NH 3. 
En la Tabla B.7.4 -4, de este Apéndice, se muestran las cantidades sugeridas para obtener una curva de 
N-NH 3 en el intervalo de 0.01 a 5 mg/L a partir de la disolución intermedia de N -NH 3. Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Tabla B.7.4 -4. Cantidades sugeridas para construir una curva  de 
calibración en el intervalo de trabajo.  
Concentración 
del estándar 
(mg/L) N -NH 3 Volumen de 
estándar 
(mL)  Volumen 
final con 
agua (mL)  Concentración 
obtenida 
(mg/L) N -NH 3 
10.0 25 50 5.0 
10.0 10 50 2.0 
10.0 5 50 1.0 
10.0 2.5 50 0.5 
10.0 1.0 50 0.2 
10.0 0.5 50 0.1 
Si la preparación de la curva se hace de manera gravimétrica, se 
considera la densidad de las disoluciones como de 1.0 g/mL.  
Prepare el equipo para el análisis e incluya en la secuencia los puntos de calibración preparados, 
introduciendo las concentraciones calculadas para cada punto.  
El equipo registra la respuesta obtenida para cada punto y la asocia a la concentración especificada por el 
usuario, con lo que construye y almacena de manera automática una curva de calibración. Esta curva e s 
usada después para obtener la concentración de las muestras desconocidas.  
La verificación de la calibración durante el análisis del lote se realiza mediante la CCC.  
B.7.4.8.3 Interferencias  
Al tratarse de una técnica fotométrica, la turbidez en las muest ras interfiere con la capacidad del detector 
para registrar la absorción real de la muestra. Filtre las muestras turbias antes de analizarlas.  
La precipitación de hidróxidos o carbonatos de calcio y magnesio debido al pH del medio de reacción 
interfiere co n las lecturas fotométricas. Evite la formación de estos sólidos mediante el uso de ácido 
etilendiamintetraacético (EDTA).  
Las muestras que presenten por su naturaleza una absorbancia a 660 nm presentarán una  interferencia 
positiva.  
La intensidad del color  generado en las reacciones que se muestran en la figura 1 es sensible al pH. 
Ajuste el pH de todas las muestras entre 5 y 7 antes de analizarlas.  
Los cianatos pueden ser encontrados en ciertos efluentes industriales, estos pueden hidrolizarse en cierta 
medida incluso a pH 9.5 por lo que se puede realizar una destilación para eliminar esta interferencia.  
El cloro residual debe ser removido mediante un pretratamiento de la muestra con tiosulfato de sodio, 
sulfito de sodio o bien otro reactivo decloronizador.  
B.7.4.9 Seguridad y manejo de residuos  
B.7.4.9.1 Seguridad  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un riesgo potencial para la salud y 
la exposición a estos materiales debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de m antener un 
conocimiento de las regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe ponerse a disposición de todo el personal involucrado en el análisis las hojas de datos de 
seguridad de los productos quí micos. Debe de utilizarse equipo de protección personal apropiado  para el 
manejo de muestras y estándares. Los estándares primarios deberán prepararse en una campana. Cuando el 
analista maneje altas concentraciones de compuestos tóxicos deberá utilizarse u n respirador de gases 
tóxicos.  
Las muestras desconocidas pueden ser peligrosas. Manéjelas siempre con precaución extrema. Cuando 
trabaje con muestras desconocidas o con los reactivos empleados en este método use siempre el equipo de 
seguridad adecuado como  bata de trabajo, lentes de seguridad y guantes apropiados.  
B.7.4.9.2 Manejo de residuos  
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales, estatales, locales y 
demás disposiciones aplicables referentes al manejo de residuos , particularmente las reglas de identificación, 
almacenamiento y disposición de residuos peligrosos.  
B.7.4.10 Referencias  
EPA Method 350.1 Determination of ammonia nitrogen by semi -automated colorimetry. U.S. Environmental 
Protection Agency, Environmental Monitoring Systems Laboratory, 1993.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.7.5 MÉTODO PARA LA DESTILACIÓN PRELIMINAR DE MUESTRAS DE AGUA PARA USO Y 
CONSUMO HUMANO EN LAS QUE SE DETERMINARÁ NITRÓGENO AMONIACAL POR EL MÉTODO DE 
PRUEBA POR TITULACIÓN ( PUNTO B.7.1 , DE ESTE APÉNDICE), POR EL MÉT ODO POR ELECTRODO 
SELECTIVO DE AMONÍACO (PUNTO B.7.2, DE ESTE APÉNDICE) O POR EL MÉTODO CON FENATO  
(PUNTO B.7.3, DE ESTE APÉNDICE)  
B.7.5.1 Principio  
La muestra es amortiguada en un pH de 9.5 unidades de pH con una disolución amortiguadora de borato 
para di sminuir la hidrolisis de cianatos y compuestos orgánicos nitrogenados. Esta es destilada dentro de una 
disolución de ácido bórico cuando se usa el método por titulación es utilizado o en H 2SO 4 cuando se usa el 
método de fenato.  
El amoníaco destilado puede ser determinado tanto colorimétricamente por el método de fenato o por 
titulación con H 2SO 4 estandarizado y una mezcla de indicadores o un medidor de pH.  
La selección entre el método colorimétrico y los métodos de acidimetría depende de la concentración  de 
amoníaco.  
El amoníaco en el destilado también puede ser determinado por el método de electrodo selectivo de 
amoníaco usando H 2SO 4 0.04 N para atrapar el amoníaco.  
B.7.5.2 Equipos y materiales  
Aparato de destilación. Constituido por un matraz de vidrio de borosilicato de 800 a 2 000 mL de 
capacidad unido a un condensador vertical de tal manera que la punta de salida esté sumergida debajo de la 
superficie de la disolución ácida que recibe el destilado. Utilizar un dispositivo completamente de vidrio de 
boros ilicato o uno con unidades de condensación construidas de estaño o tubos de aluminio.  
B.7.5.3 Reactivos y soluciones  
Ácido sulfúrico 0.04N . Diluir 1 mL de H 2SO 4 en 1L.  
Agua libre de amoníaco. Puede ser preparada por intercambio iónico o por métodos de dest ilación.  
Para prepararla por intercambio iónico, se debe de pasar agua destilada a  través de una columna de 
intercambio iónico que contiene una resina de intercambio catiónico acídico fuerte mezclada con una resina 
de intercambio aniónico básica fuerte. Se leccionar las resinar que removerán los compuestos orgánicos que 
interfieren con la determinación de amoniaco. Algunas resinas de intercambio aniónico tienden a liberar 
amoniaco. Si esto ocurre, preparar agua libre de amoniaco con una resina de intercambio  catiónico acídico 
fuerte. Regenerar la columna de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Verificar el agua esté libre de 
amoniaco por la posibilidad de obtener un valor alto en el blanco.  
Para prepar arla por destilación, eliminar las trazas de amon iaco en el agua destilada añadiendo 0.1 mL de 
H2SO 4 a 1 L de agua destilada y redestilar. Alternativamente tratar el agua destilada con suficiente agua  de 
bromo o cloro para producir un halógeno residual libre de 2 a 5 mg/L y redestilar después de dejar re posar al 
menos 1 h. Descartar los primeros 100 mL del destilado. Verificar el agua esté libre de amoniaco por la 
posibilidad de obtener un valor alto en el blanco.  
Es muy difícil almacenar agua libre de amoniaco en el laboratorio sin contaminación por amon iaco 
gaseoso. Sin embargo, si el almacenaje es necesario, guardar en un contenedor de vidrio fuertemente tapado 
al cual se ha añadido cerca de 10 g de resina de intercambio iónico (preferiblemente una resina de 
intercambio catiónico acídico fuerte) por lit ro de agua libre de amoniaco. Para su uso, deje que la resina se 
asiente y decante el agua libre de amoniaco. Si se produce un blanco alto, reemplace la resina o prepare 
nueva agua libre de amoniaco.  
Utilizar agua destilada libre de amoniaco para preparar todos los reactivos y diluciones de las muestras.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Agente para neutralización. Hidróxido de sodio NaOH 1N ó ácido sulfúrico H 2SO 4 1N. 
Reactivo de descloración . Disolver 3.5 g de tiosulfato de sodio (Na 2S2O3 5 H 2O) en agua y diluir a 1 L. 
Preparar una disolu ción fresca cada semana. Utilizar 1 mL de este reactivo para remover 1mg/L de cloro 
residual en 500 mL de muestra.  
Disolución amortiguadora de borato . Añadir 88 mL de una disolución de NaOH 0.1 N a 500 mL 
aproximadamente de una disolución 0.025 M de tetrab orato de sodio (Na 2B4O7) (9.5 g Na 2B4O7·10 H 2O/L) y 
diluir a 1 L.  
Disolución indicadora de ácido bórico . Disolver 20 g de H 3BO 3 en agua y diluir a 1 L  
B.7.5.4 Procedimiento  
Preparar el equipo añadiendo 500mL de agua a 20 mL del amortiguador de borato, ajus tar el pH a 9.5 
unidades de pH con una disolución de NaOH 6N y añadir a un matraz para destilación. Añadir unas cuantas 
perlas de vidrio y utilizar esta mezcla para purgar con vapor el aparato de destilación hasta que el destilado no 
muestre trazas de amon iaco.  
Preparar la muestra usando 500 mL de muestra desclorinada o una porción conocida diluida a 500 mL con 
agua reactivo. Cuando la concentración de NH 3-N es menor a 100 µg/L utilizar un volumen de muestra de 
1000 mL. Remover el cloro residual añadiendo a l momento del muestreo, reactivo de descloración equivalente 
al cloro residual presente en la muestra. Si es necesario neutralizar a un pH aproximado de 7 con ácido o 
base diluido utilizando un medidor de pH. Añadir 25 mL de disolución amortiguadora de bor ato y ajustar a un 
pH de 9.5 con NaOH 6 N utilizando un medidor de pH.  
Para minimizar la contaminación dejar el aparato de destilación ensamblado después de la purga con 
vapor y justa hasta antes de comenzar la destilación de la muestra. Desconectar el mat raz de destilación e 
inmediatamente transferir la muestra del matraz al aparato de destilación. Destilar a una velocidad de 6 a 10 
mL/min con la punta del tubo de salida debajo de la superficie de la disolución acida que recibe el destilado.  
Recibir el des tilado en un matraz Erlenmeyer de 500 mL de capacidad que contiene 50 mL de disolución 
indicadora de ácido bórico para el método por titulación (punto B.7.1, de este Apéndice). Destilar el amoniaco 
en 50 mL de H 2SO 4 0.04 N para el método por electrodo sele ctivo de amoníaco (punto B.7.2, de  este 
Apéndice) y para el método con fenato (punto B.7.3, de este Apéndice). Recibir al menos 200 mL  del 
destilado.  
Bajar el receptor de destilación de tal manera que el tubo de salida esté fuera del líquido y  continuar la  
destilación durante dos minutos para limpiar el condensador y el tubo de salida. Diluir a 500 mL con agua 
reactivo.  
Cuando el método con fenato es utilizado para determinar el NH 3-N de debe neutralizar el destilado con 
una disolución de NaOH 1N.  
Posterior  a la destilación, determinar el contenido de amoniaco por el método por titulación (punto B.7.1, 
de este Apéndice), el método por electrodo selectivo de amoníaco (punto B.7.2, de este Apéndice) o por el 
método con fenato (punto B.7.3, de este Apéndice).  
B.7.5.5 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 4500 -NH3 B. Preliminary distillation step.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.8 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE YODO RESIDUAL LIBRE EN AGUA PARA 
USO Y CONSUMO HUMANO  
El yodo elemental no es un component e natural de las aguas naturales. El yodo se puede agregar al agua 
para uso y consumo humano para su desinfección. El uso de yodo generalmente está restringido a pequeños 
o remotos sistemas de abastecimiento de agua para uso y consumo donde la facilidad de  aplicación, la 
estabilidad de almacenamiento y la inactividad hacia la materia orgánica son consideraciones importantes. Sin 
embargo, algunos de los metabolitos derivados de la hidrolisis del yodo elemental, como el ácido hipoyodoso 
(HOI) o el hipoyodito (OI-), pueden actuar como agente yodinantes, reaccionando con compuestos orgánicos 
para formar compuestos orgánicos yodados.  
El yodo se aplica en forma elemental o se produce in situ mediante la adición simultánea de una sal de 
yoduro y un oxidante adecuad o. En este último caso, un exceso de yoduro puede ser mantenido para servir 
como un reservorio para la producción de yodo, por lo que la determinación del yoduro es necesaria para el 
control de su uso como desinfectante de agua para uso y consumo humano y con el fin de que la población no 
este expuesta a concentración innecesariamente altas de yodo.  
Sin embargo, no existe un método generalmente aceptado para la determinación de cada una de las 
especies individuales o metabolitos derivados de la hidrolisis d e yodo y la mayoría de los métodos analíticos y 
de campo utilizan el poder oxidante de todas las formas de yodo activo para su determinación y los resultados 
suelen expresarse como una concentración equivalente de yodo elemental o yodo residual libre.  
Con la finalidad de proteger la salud de la población es importante que la determinación de los residuales 
de la desinfección como el yodo se realice en campo directamente in situ en la toma domiciliaria o en la red de 
distribución, por lo que el uso de método s de campo (punto B.8.1, de este Apéndice) es necesario.  
Sin embargo, de ser necesaria la determinación en laboratorio de yodo residual libre en agua para uso y 
consumo humano tratada con yodo elemental puede realizarse a  través de los métodos de titulació n 
amperométrica o colorimétrico de cristal violeta -leuco referidos en el punto B.8.2, de este Apéndice.  
B.8.1 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE YODO RESIDUAL LIBRE EN AGUA PARA 
USO Y CONSUMO HUMANO EN TOMA DOMICILIARIA O EN RED DE DISTRIBUCIÓN IN S ITU POR 
MEDIO DE KITS COLORIMETRICOS O FOTOMETRICOS  
B.8.1.1 Principio  
Existen diversos kits comercialmente disponibles para la determinación de la concentración de yodo 
residual libre a  través de la cuantificación del poder oxidante de todas las formas de yodo activo por medio de 
métodos colorimétricos o fotométricos.  
B.8.1.2 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de yodo residual libre a través del uso de kits 
colorimétricos o fotométricos en muestras de agua para uso y consumo  humano colectadas en la toma 
domiciliaria o en la red de distribución.  
B.8.1.3 Equipos y materiales  
Kits colorimétricos o fotométricos para la determinación de yodo residual libre con un intervalo de lectura 
de incluya 0.2 a 1.5 mg/L.  
B.8.1.4 Procedimient o 
B.8.1.4.1  Selección de sitios de muestreo.  Para cada sistema formal de abastecimiento, identificar las 
localidades donde se utilice yodo como desinfectante del agua para uso y consumo humano.  
B.8.1.4.2 Revisión del equipo de muestreo.  Previo al muestreo revisar que el equipo para la 
determinación de yodo residual libre se encuentre en buen estado y calibrarse de ser necesario.  
B.8.1.4.3 Monitoreo de Yodo residual libre.  Realizar un recorrido en las localidades donde existe 
yodador para la administración d e yodo al sistema de abastecimiento y llevar a cabo la determinación de yodo 
residual libre directamente en la toma domiciliaria o en una toma de la red de distribución y en el punto de la 
localidad más alejado del yodador.  
B.8.1.4.4 Eliminación de interfe rencias . Para evitar la presencia de interferencia debe retirar cualquier 
aditamento conectado al grifo (mangueras, etc.).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.8.1.4.5 Eliminación de agua estancada en toma.  El agua que se encuentra en la tubería normalmente 
está estática por lo cual no es r epresentativa de la calidad del agua de la red, por lo que es necesario dejar 
correr el agua a flujo máximo en el grifo con el fin de purgar la toma y asegurarse que el líquido contenido en 
la tubería se haya descargado.  
B.8.1.4.6 Análisis.  
Determinar el y odo residual libre empleando el kit colorimétrico o fotométrico siguiendo las instrucciones 
del fabricante. En el formato correspondiente anotar la identificación del punto de muestreo, fecha y hora de 
muestreo y el resultado de la determinación.  
B.8.1.4.7  Informe de prueba.  
La expresión de resultados debe ser mg de yodo residual libre por L con una cifra decimal.  
B.8.2 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE YODO RESIDUAL LIBRE EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO EN LABORATORIO  
De ser necesaria la determin ación en laboratorio de yodo residual libre en agua para uso y consumo 
humano tratada con yodo elemental puede realizarse utilizando los métodos por titulación amperométrica o 
colorimétrico de leuco cristal violeta, como los desarrollados en el Standard me thods for examination of water 
and wastewater. 4500 -I IODINE , u otras referencias equivalentes.  
B.9 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE pH EN AGUA PARA USO Y CONSUMO 
HUMANO  
B.9.1 Definiciones y términos  
Potencial de hidró geno (pH), al logaritmo negat ivo de la concentración del ion hidrógeno en una 
disolución acuosa o el logaritmo del recíproco de la concentración de iones hidrógeno.  
B.9.2 Símbolos y términos abreviados  
pH potencial hidrógeno.  
B.9.3 Principio  
Se basa en la determinación de la actividad  de iones hidrógeno (H+) medidos en un potenciómetro usando 
un electrodo de vidrio y otro de referencia o un electrodo combinado. La fuerza electromotriz producida por el 
sistema de electrodo(s) es proporcional al pH de la disolución problema (se usa el té rmino de iones H+ para 
mayor claridad reconociendo que en realidad existe en su forma hidratada, el ion hidronio H 3O+). 
B.9.4 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de pH en muestras de agua para uso y consumo humano a 
través d e un potenciómetro en laboratorio.  
B.9.5 Equipos y materiales  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el 
material volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Agitado r de vidrio  
Agitador magnético  y barra magnética recubierta con plástico inerte o sonda de agitación o agitador  de 
vidrio.  
Baño María  de temperatura constante o celda para ajustar temperatura.  
Electrodo  combinado para pH.  
Frascos con tapón  para contener lo s patrones de pH y las muestras.  
Matraces Erlenmeyer  de 125 mL.  
Papel para secar el electrodo.  
Piceta   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Potenciómetro  para medir pH.  
Termómetro de líquido en vidrio.  
Tubos de ensayo  con rosca para tapones, para contener las muestras.  
B.9.6 Reactivos y soluci ones  
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa  se 
indique.  
Agua grado reactivo  
Soluciones amortiguadoras de pH 4 ,7 y 10,  con certificado de análisis trazable a patrones nacionales o 
internacionales.  
B.9.7  Procedimiento  
B.9.7.1 Procedimiento analítico  
Colocar los patrones y las muestras en recipientes tapados y sumergirlos, en baño María a temperatura 
constante, para alcanzar la temperatura de 25 °C, puede utilizarse un compensador automático de 
temperatura . 
Calibrar el potenciómetro siguiendo las instrucciones del fabricante y después de cada medición, lavar el 
electrodo con agua reactivo tipo I, quitar el exceso con papel secante que no deje residuos, evitar colocar  el 
bulbo sensor y/o friccionar la superf icie de electrodo.  
Verificar que las lecturas de los patrones den valores dentro del intervalo de ± 0.1 unidades de pH a 25 °C 
de acuerdo a las especificaciones de su certificado.  
Verificar que la eficiencia electromotriz sea ≥ a 95%.  
Previamente a las med iciones homogenizar y expulsar lo más posible el CO2 de las muestras, agitar 
cuidadosamente con un agitador de vidrio o con agitación automática durante 10 segundos.  
Para la medición en muestras amortiguadas de potencia iónica fuerte, para acondicionar ele ctrodos, 
después de la limpieza, sumergir en la muestra por un minuto, secar y medir pH en otras dos porciones  de 
muestras.  
Para muestras diluidas, soluciones pobremente amortiguadas, se recomienda remojar y enjuagar el 
electrodo previamente en tres o cuat ro porciones de muestra y tomar lecturas de pH en otras dos o tres 
porciones de muestra.  
B.9.7.2 Análisis de datos y cálculos  
Obtener la lectura directa de las muestras y reportar el promedio a 25 °C.  
B.9.7.3 Informe de prueba.  
La expresión de resultados d ebe ser en unidades de pH y con una cifra decimal.  
B.9.8 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 4500 -H+ B. Electrometric Method.  
 
B.10 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE DUREZA TOTAL EN AGUA PARA USO Y 
CONSUMO HUMANO  
B.10.1 Símbolos y términos abreviados  
CaCO 3  carbonato de Calcio  
EDTA  Ácido etilendiaminotetraacético  
NaCl  cloruro de sodio  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.10.2 Principio  
Este método emplea como indicador el compuesto químico denominado negro de eriocromo T, el cual al 
ser agregado a un a disolución que contenga iones calcio y magnesio, reacciona formando complejos de un 
color vino. Después se adiciona la disolución de EDTA que remueve los iones calcio y magnesio de los 
complejos coloridos formando complejos solubles. Cuando ha sido agreg ada suficiente disolución EDTA, para 
liberar todos los iones calcio y magnesio, el indicador regresa a su color azul original.  
El término original para la dureza en agua, se refiere a la medida de la capacidad del agua para precipitar 
jabón. Este fenómeno se produce principalmente por los iones de calcio y magnesio, aunque pueden 
intervenir otros metales polivalentes, tales como fierro, zinc, aluminio, manganeso y estroncio, además de los 
iones hidrógeno. La presencia misma de estos iones en aguas naturales  origina que la definición de dureza 
represente la concentración total de magnesio y calcio únicamente, indicando su cálculo final en 
concentración de carbonato de calcio.  
B.10.3 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de la dur eza total en muestras de agua para uso y 
consumo humano a través del método por titulación con EDTA.  
B.10.4 Equipos y materiales  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el 
material volumétrico ut ilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Balanza analítica  con sensibilidad de ± 0.1 mg  
Buretas graduadas  calibradas de 25 y 50 mL  
Matraz Erlenmeyer  de 500 mL, 250 mL y 125 mL  
Pinza para bureta  
Pipetas graduadas  de 10 mL o dosificador  
Pipetas volumétricas  de 50 mL o dosificador  
Potenciómetro para medir pH  
Soporte universal  
Vaso de precipitados  de 100 mL  
B.10.5 Reactivos y soluciones  
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa  se 
indique.  
Agua grado reactivo  
Disolución amortiguadora, disolver 1.179 g de la sal disódica dihidratada de EDTA y 780 mg de sulfato 
de magnesio (MgSO 4 • 7H 2O) o 644 mg de cloruro de magnesio (MgCl 2• 6H 2O) en 50 mL de agua. También 
puede prepararse disolviendo 16.9 g d e Cloruro de Amonio (NH 4Cl) en 143 mL de hidróxido de amonio 
(NH 4OH), adicionar 1.25 g de EDTA y disolver en 250 mL de agua. Guardar la disolución en un recipiente de 
vidrio resistente, o de plástico perfectamente tapado. Desechar en cuanto en la porción d e muestra utilizada 
no produzca un pH de 10±0.1.  
Indicador , mezclar 0.5 g de eriocromo negro T, sal sódica del ácido 1 -hidroxi -2-naftilazo -5-nitro-2-naftol -4- 
sulfónico y 100g de NaCl, evitar contacto con el aire. En caso de que el punto final de la titula ción no se 
distinga, es necesario obtener nueva mezcla indicadora.  
Disolución patrón titulante de EDTA 0,01 M , pesar 3.723 g de la sal disódica del ácido etilen diamino 
tetraacético, Na 2H2C10H12O8N2·2H 2O, disolver en agua reactivo y diluir a 1 litro. Verif icar su concentración 
titulando contra disolución de carbonato de calcio patrón. Almacenar en recipiente de polietileno o vidrio pyrex.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Disolución patrón de CaCO 3, Pesar 1.0 g de carbonato de calcio anhidro, colocarlo en un matraz de 
500mL, agregar HCl 1+1 , hasta que todo el carbonato sea disuelto, agregar 200mL de agua destilada y hervir 
durante algunos minutos para desalojar el CO 2, enfriar y agregar unas gotas de disolución indicadora de rojo 
de metilo, ajustar al color anaranjado, agregando unas gotas d e disolución de NH 4OH 3N. La disolución patrón 
es equivalente a 1.000 mg de CaCO 3 por cada mL.  
B.10.6 Procedimiento  
B.10.6.1 Valoración de la disolución de EDTA  
Medir 10 mL de la disolución estándar de carbonato de calcio, por triplicado en un matraz Erlen meyer de 
250 mL.  
Agregar de 1 a 2mL de la disolución amortiguadora (se deberá tener pH de 10.0±0.1)  
Agregar la cantidad adecuada del indicador en polvo de negro de eriocromo T.  
Titular con la disolución de EDTA, hasta el vire de violeta a azul.  
Calcular el  factor F, de titulación, con la fórmula siguiente:  
 
B.10.6.2 Procedimiento analítico  
Medir una alícuota de 50 mL de muestra, transferir a un matraz de 200 mL.  
Adicionar 1 a 2 mL de disolución amortiguadora y agitar. La titulación debe efectuarse a un pH específico 
de 10.0±0.1. Verificar y registrar la lectura de pH.  
Adicionar una adecuada cantidad de indicador, de tal manera que se perciba el vire característico de color 
violeta a color azul. Si la muestra da inmediatamente un color azul, significa que no  tiene dureza.  
Titular la muestra agregando gota a gota la disolución titulante de EDTA, agitando continuamente hasta el 
punto final en que se produce el cambio de color rojo vino a azul.  
Los mL gastados de disolución de EDTA deben ser menores a 15 mL en c aso contrario diluir la muestra.  
En caso de que no se aprecie el vire, será necesario usar indicador recién hecho y/o agregar inhibidor y/o 
aplicar digestión, de acuerdo a la supuesta interferencia presente. Puede ser necesario seguir procesos de 
eliminaci ón de interferencias de acuerdo a lo indicado anteriormente.  
B.10.6.3 Análisis de datos y cálculos  
Calcular la dureza total utilizando la siguiente fórmula:  
 
En donde:  
A mL de disolución de EDTA empleados en la titulación de la muestra  
B mL de disolución de EDTA empleados en la titulación del blanco, cuando se utiliza alícuota  de 
muestra llevada a 50 mL con agua reactivo  
F equivalente a mg de CaCO 3 por mL de disolución de EDTA, obtenido en la valoración  
B.10.6.4 Informe de prueba  
La expresión de resultado s debe ser en 
  y con dos cifras decimales.  
B.10.7 Interferencias  
Algunos iones metálicos interfieren causando un vire difícil de percibir o por consumo estequiométrico de 
EDTA. La sal de magnesio del ácido 1, 2 -ciclohexanodiamina tetraacético (MgCDTA), es  selectivamente 
compleja a los metales pesados, liberando Mg en la muestra, y puede ser usado en lugar de los inhibidores. 
Usar cuando el Mg sustituido por los metales no contribuya significativamente a la dureza total. Agregar  250 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
mg del MgCDTA por cada 100 mL de muestra y disolver completamente antes de adicionar la disolución 
amortiguadora.  
Las interferencias también se reducen con el uso de inhibidores, que funcionan como agentes 
complejantes (Tabla B.10 -1, de este Apéndice).  
Tabla B.10 -1. Concentracio nes máximas de interferencias permisibles con varios inhibidores.  
 Max. Concentración de Sustancia Interferencia mg/L  
Sustancia interferencia  Inhibidor I  Inhibidor II  
Aluminio  20 20 
Bario  † † 
Cadmio  † 20 
Cobalto  Sobre 20  0.3 
Cobre  Sobre 30  20 
Hierr o Sobre 30  5 
Plomo  † 20 
Manganeso(Mn +2)  † 1 
Níquel  Sobre 20  0.3 
Estroncio  † † 
Zinc † 200 
Polifosfato  † 10 
Esta tabla se basa en el uso de una alícuota de muestra de 25 mL diluida a 50 mL  
† Titula como dureza.  
 
Para la mayoría de las aguas no son necesarios estos agentes complejantes. Si es necesario usarlos de 
acuerdo a tabla anterior.  
1) Inhibidor I: Ajustar las muestras acidas a pH 6 o más alto con disolución amortiguadora o con  NaOH 
0.01 N. Agregar 250 mg de cianuro de sodio en polvo. Adicionar  suficiente disolución amortiguadora para 
alcanzar pH de 10±0.1 (tomar precaución en su uso, puesto que el cianuro es extremadamente venenoso). 
Tomar especial precaución para prevenir su contacto con ácidos, lo cual puede liberar al volátil y venenoso 
cianuro de hidrógeno.  
2) Inhibidor II: Disolver 5.0 g de sulfuro de sodio nonahidratado, NaS·9H 2O, o 3.7 g de NaS·5H 2O en  100 
mL de agua reactivo. Excluir el aire con un tapón de hule. Este inhibidor se deteriora por oxidación con aire. 
Se produce una precipit ación de sulfuro que oscurece el punto final cuando una apreciable cantidad de 
metales está presente.  
La materia orgánica o suspendida puede interferir con el punto final. Eliminar esta interferencia 
evaporando la muestra a sequedad sobre baño de vapor y c alentar en una mufla a 500°C hasta que la materia 
orgánica este oxidada. Disolver el residuo en 20 mL de HCl 1 N, neutralizar a pH 7 con NaOH 1N y llevar  a 50 
mL con agua reactivo, enfriar a temperatura ambiente y continuar con el procedimiento general.  
Llevar a cabo las titulaciones a temperatura ambiente. Cuándo la muestra está cerca de la congelación el 
vire es muy lento. En agua caliente el indicador se descompone.  
Para evitar la precipitación de CaCO 3, la cual produce bajos resultados se recomienda:  
1) Titular dentro de un tiempo de 5 minutos.  
2) Usar la dilución mencionada en tabla anterior. Si la precipitación es apreciable, todavía, usar las 
recomendaciones 3 y 4, citadas en este punto. Usar pequeñas muestras contribuye a un error 
sistemático debido al error de lectura de la bureta.  
3) Si la dureza aproximada es conocida o se determinó por una titulación previa, agregar el 90% o más 
del titulante antes de ajustar el pH con la disolución amortiguadora.  
4) Acidificar la muestra con H 2SO 4 0.02 N, y agita r por 2 minutos para expulsar el CO 2 antes del ajuste 
de pH. Determine alcalinidad para que indique la cantidad de ácido agregado.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
B.10.8 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 2340 C EDTA Titrimetric Method.  
B.11 MÉTODO DE P RUEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE SULFATO EN AGUA PARA USO Y 
CONSUMO HUMANO  
Para la determinación de sulfato en agua para uso y consumo humano para el cumplimiento de esta 
Norma, se podrá utilizar indistintamente el:  
 método de prueba turbidimétrico para la de terminación de sulfato en agua para uso y consumo 
humano (punto B.11.1, de este Apéndice).  
 método de prueba por colorimetría automatizada para la determinación de sulfato en agua para uso y 
consumo humano (punto B.11.2, de este Apéndice).  
B.11.1 MÉTODO DE PRUEBA TURBIDIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE SULFATO EN AGUA 
PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.11.1.1 Principio  
El ión sulfato es precipitado en medio ácido con cloruro de bario, BaCl 2, de tal manera que se forman 
cristales de sulfato de bario de tamaño unifor me, produciéndose una turbidez medible y proporcional a la 
concentración de sulfato. La absorbancia producida por la suspensión de sulfato de bario se mide en el 
espectrofotómetro a 420 nm.  
Las aguas naturales normalmente contienen concentraciones de sulfa to que se pueden presentar en 
intervalos variables. Pero son posibles las contaminaciones causadas por los drenajes de minas que 
contienen piritas.  
Por otro lado se sabe que el sulfato de calcio y magnesio en concentraciones mayores de 250 ppm 
ejercen una acción catártica, por eso es importante saber el contenido de sulfato.  
B.11.1.2 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de sulfato en muestras de agua para uso y consumo 
humano a través del método turbidimétrico, que es aplicabl e en un intervalo de 1 a 40 
  
B.11.1.3 Equipos y materiales  
Agitador y barras magnéticas.  
Balanza analítica  con sensibilidad de ± 0.1 mg.  
Bureta de 100 mL.  
Celdas de vidrio  o cuarzo de 2.5 a 10 cm de paso de luz.  
Cuchara con capacidad de 0.2 a 0.3 mL , para  medir el cloruro de bario.  
Cronómetro  
Espectrofotómetro para leer a 420 nm.  
Pipetas volumétricas de 5 y 20 mL.  
Pipeta volumétrica  de 100 mL.  
Vaso de precipitados  o matraz Erlenmeyer de 250 mL.  
B.11.1.4 Reactivos y soluciones  
Agua reactivo tipo I  
Cloruro d e bario  (BaCl 2), en cristales.  
Reactivo acondicionante , obtener una disolución que contenga 30 mL de HCl concentrado, 30 0mL de 
agua reactivo tipo I, 100 mL de alcohol etílico o isopropílico al 95% y 75g d e NaCl, disolver y agregar 50mL  de 
glicerina.  
Disol ución patrón de sulfato, que contenga 0.10
 , disolver 0.1479 g de Na 2SO 4 anhidro, en agua 
tipo I y aforar a un 1L. Se puede utilizar una disolución comercial de sulfato con certificado de análisis trazable 
a patrones nacionales o internacionales.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
B.11.1.5 Procedimiento  
B.11.1.5.1 Corrección por turbidez o color de un blanco de reactivos para patrones y muestras  
Realizar una curva de comparación.  
Medir 100 mL de muestra, o una alícuota adecuada diluida a 100mL en un recipiente de 250mL y colocar 
la barra de agitación.  
Agregar 5 mL de reactivo acondicionante, mezclar con agitación durante 1 minuto a velocidad constante. 
Tomar la lectura de turbidez a 420nm.  
B.11.1.5.2 Medición de la turbiedad del sulfato de bario  
Agregar a patrones y muestras una cucharilla ll ena de cristales de cloruro de bario y agitar durante 60 
segundos. Tomar la lectura de sulfato a la absorbancia de 420 nm.  
B.11.1.5.3 Análisis de datos y cálculos  
Obtener la diferencia de las absorbancias obtenidas anteriormente, y sustituirla en la ecuaci ón de la curva 
de calibración ajustada por mínimos cuadrados considerando lo siguiente:  
 
m y b son las constantes obtenidas con el ajuste de mínimos cuadrados para la curva de calibración.  
y es la diferencia de absorbancias por 
sulfato y por turbiedad  
 
B.11.1.5.4 Informe de prueba  
La expresión de resultados debe ser en  
  y con dos cifras decimales.  
B.11.1.6 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 427 C. Turbidimetric Method.  
 
B.11.2 MÉTODO DE PRUEBA POR COLORIMETRÍA AUTOMATI ZADA PARA LA DETERMINACIÓN DE 
SULFATO EN AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.11.2.1 Definiciones y términos  
Las definiciones presentadas en esta sección son específicas para este método, pero han sido 
conformadas para que sean lo más posible de uso común.  
Bitácora , al cuaderno de laboratorio debidamente foliado e identificado, en el cual los analistas anotan 
todos los datos de los procedimientos que siguen durante el análisis de una o varias muestras, así como toda 
la información pertinente y relevante a su tr abajo en el laboratorio.  
Blanco , al agua reactivo o matriz equivalente a la que no se le aplica ninguna parte del procedimiento 
analítico y sirve para evaluar la señal de fondo.  
Blanco analítico o de reactivos , al agua reactivo o matriz equivalente que no contiene, por adición 
deliberada, la presencia de ningún analito o sustancia por determinar, pero que contiene los mismos 
disolventes, reactivos y se somete al mismo procedimiento analítico que la muestra problema.  
Calibración , al conjunto de operaciones q ue establecen, bajo condiciones específicas, la relación entre 
los valores de una magnitud indicados por un instrumento o sistema de medición, o los valores representados 
por una medida materializada y los valores correspondientes de la magnitud, realizado s por los patrones, 
efectuando una corrección del instrumento de medición para llevarlo a las condiciones iniciales de 
funcionamiento.  
Desviación estándar experimental , para una serie de mediciones del mismo mensurando, es la 
magnitud que caracteriza la di spersión de los resultados.  
Disolución patrón , a la disolución de concentración conocida preparada a partir de un patrón primario.  
Disolución estándar , a la disolución de concentración conocida preparada a partir de un patrón primario.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Disolución madre , corresponde a la disolución de máxima concentración en un análisis. Es a partir de 
esta disolución que se preparan las disoluciones de trabajo.  
Exactitud , a la proximidad de concordancia entre el resultado de una medición y un valor verdadero  del 
mesurado.  
Límite de detección del método (LDM) , a la concentración mínima del analito que puede detectarse con 
un nivel de confianza predeterminado. Para efectos de esta Norma, el nivel de confianza es del 99%. Este 
límite de detección generalmente se logra por anali stas experimentados con equipo bien calibrado y bajo 
condiciones no rutinarias.  
Límite práctico de cuantificación (LPC) , a la concentración mínima del analito que puede determinarse 
con un nivel de confianza predeterminado en condiciones rutinarias de oper ación. Este límite puede 
establecerse entre 5 a 10 veces el LDM.  
Medición , al conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor de la magnitud.  
Mensurando , a la magnitud particular sujeta a medición.  
Material de referencia , al material o sus tancia en el cual uno o más valores de sus propiedades son 
suficientemente homogéneos y bien definidos, para ser utilizadas para la calibración de aparatos, la 
evaluación de un método de medición o para asignar valores a los materiales.  
Material de referen cia certificado , material de referencia, acompañado de un certificado, en el cual uno o 
más valores de las propiedades están certificados por un procedimiento que establece la trazabilidad a una 
realización exacta de la unidad en la cual se expresa los val ores de la propiedad, y en el que cada valor 
certificado se acompaña de una incertidumbre con un nivel declarado de confianza.  
Muestra de control de calidad (MCC) , a la muestra que contiene todos o un subgrupo de los analitos del 
método a concentraciones c onocidas. Las MCC se obtienen de una fuente externa al laboratorio o se 
preparan de una fuente de estándares diferentes de la fuente de los estándares de calibración.  
Parámetro , a la variable que se utiliza como referencia para determinar la calidad del ag ua. 
Patrón de medición , al material de referencia, instrumento de medición, medida materializada o sistema 
de medición destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o más valores de una 
magnitud para utilizarse como referencia.  
Patrón nacional de medición , al patrón reconocido por una decisión nacional en un país, que sirve de 
base para asignar valores a otros patrones de la magnitud concerniente.  
Patrón primario , al patrón que es designado o reconocido ampliamente como un patrón qu e tiene las más 
altas cualidades metrológicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrones de la misma magnitud.  
Patrón secundario , al patrón cuyo valor es establecido por comparación con un patrón primario de la 
misma magnitud.  
Patrón de refer encia , al patrón, en general de la más alta calidad metrológica disponible en un lugar 
dado, o en una organización determinada de la cual se derivan las mediciones realizadas en dicho lugar.  
Patrón de trabajo , al patrón que es usado rutinariamente para cal ibrar o controlar las medidas 
materializadas, instrumentos de medición o los materiales de referencia.  
Precisión , al grado de concordancia entre resultados analíticos individuales cuando el procedimiento 
analítico se aplica repetidamente a diferentes alícu otas o porciones de una muestra homogénea. Usualmente 
se expresa en términos del intervalo de confianza o incertidumbre.  
B.11.2.2 Símbolos y términos abreviados  
AMT  azul de metiltimol  
LDM  límite de detección del método  
LPC límite práctico de cuantificación  
 botón de inicio de análisis  
B.11.2.3 Principio  
La muestra se hace pasar por una columna de intercambio catiónico para eliminar iones multivalentes. 
Después, el sulfato en la muestra reacciona con un complejo de bario - azul de metiltimol (Ba -AMT) a un pH 
entre 2.5 y 3.0 para obtener sulfato de bario (BaSO 4) y azul de metiltimol libre (AMT) (Fig. B.11.2 -1, de este 
Apéndice). Posteriormente se eleva el pH de la disolución a un valor entre 12.5 y 13.0. A este pH, el complejo 
[Bario (AMT)] es azul (  máx=610 nm), mientras que el AMT libre es gris ( máx =460 nm). Dado que las Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
concentraciones molares de bario y de AMT son aproximadamente iguales, la concentración de sulfato en la 
muestra es directamente proporcional a la concentra ción de AMT libre (siempre y cuando la concentración de 
sulfato no exceda la concentración del complejo Bario -AMT) el cual se mide a 460 nm. La curva de calibración 
de sulfato no se ajusta a un modelo de primer orden, sino a uno de tercero. Se ha sugerido que esto se debe 
a la formación de complejos binucleares de Bario -AMT y a las impurezas que contiene el AMT comercial.  
 
Fig. B.11.2 -1. Reacción entre el Ion sulfato y el complejo bario – azul de metiltimol (Ba -AMT).  
B.11.2.4 Alcance y aplicación  
Este méto do es utilizado para la determinación de sulfato en un intervalo de 5 a 200 mg/L en agua para 
uso y consumo humano. El intervalo de trabajo se puede extender hacia concentraciones más altas mediante 
la dilución de las muestras.  
B.11.2.5 Equipos y materiale s 
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos. Sólo se 
mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el material 
volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Analizador automático , que incluye: bomba peristáltica de canales múltiples; automuestreador; detector 
fotométrico con celda de flujo; sistema de recopilación de datos: Computadora con el programa requerido 
instalado; y cartucho configurado para el análisis de sulfato (Fig. B.1 1.2-2, de este Apéndice). Si se usa el 
equipo en la modalidad de FIA, el equipo debe contar con la válvula apropiada.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
 
Fig. B.11.2 -2. Configuración del cartucho para el análisis de sulfato en el intervalo de 5.0 -200 mg/L  
Balanza  
Columna de intercambio cat iónico  
Embudos de filtración  
Material de vidrio  lavado de acuerdo al instructivo de control de calidad.  
Papel filtro  de tamaño de poro de 2 µm o menor (Whatman 2 o equivalente).  
Potenciómetro  o tiras reactivas indicadoras de pH.  
B.11.2.6 Reactivos y soluci ones  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden represent ar especificaciones adecuadas para los artículos. Sólo se 
mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el material 
volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Los reactivos que r equiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa  se 
indique.  
Los reactivos empleados en este método se indican en la Tabla B.11.2 -1, de este Apéndice.  
Tabla B.11.2 -1. Reactivos empleados en el método de análisis.  
Nombre  Fórmula  Peso molecular 
(g/mol)  No. CAS  
Ácido clorhídrico concentrado  HCl 36.46  7647 -01-1 
Agua desionizada (tipo I ó II)  H2O 18.00  7732 -18-5 
Brij®-35 (disolución al 21 ó 35% v/v)  --- --- A21-0110 -33a 
Cloroformo  CHCl 3 119.38  67-66-3 
Cloruro de amonio  NH 4Cl 53.50  121215 -02-9 
Cloruro de bario dihidratado  BaCl 2·• 2 H 2O 244.28  10326 -27-9 
Cloruro de litio, anhídro  LiCl 42.39  7447 -41-8 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Etanol / alcohol etílico  CH 3CH 2OH 46.07  64-17-5 
Fosfato monobásico de potasio  KH2PO 4 136.09  7778 -77-0 
Hidróxido de amonio  NH 4OH 35.05 1336 -21-6 
Hidróxido de sodio  NaOH  40.0 1310 -73-2 
Resina catiónica Bio -Rex® 70 (forma sódica).  --- --- --- 
Sal sódica de azul de metiltimol  C37H40N2O13Na5S 866.73  4310 -80-9 
Sal sódica dihidratada de ácido 
etilendiamintetraacético (EDTA).  C10H16N2Na2O8 • 2 H 2O 372.24  6381 -92-6 
Sulfato de sodio  Na2SO 4 142.04  7757 -82-6 
a Número de parte del distribuidor  
B.11.2.7 Procedimiento  
B.11.2.7.1 Preparación de soluciones  
Para mejores resultados, filtre con membrana de 0.45 µm todas las disoluciones de los reac tivos 
preparados antes de usarlos.  
B.11.2.7.1.1 Ácido clorhídrico 1N (1L) . Mientras agita, añadir cuidadosamente 83.3 mL de ácido 
clorhídrico concentrado a aproximadamente 800 mL de agua desionizada. Al mezclar ácido clorhídrico 
concentrado con agua se lib era una gran cantidad de calor. Tome las precauciones necesarias. Enfriar la 
disolución a temperatura ambiente, diluir a 1 000 mL con agua desionizada y mezclar bien.  
B.11.2.7.1.2 Agua  
Debe cumplir con las especificaciones de agua ASTM tipo II. Es recomend able utilizar agua desionizada 
que además cumpla las características ASTM tipo II para el uso del equipo FIA.  
Adicionalmente se puede hacer un tratamiento de desgasificación del agua a utilizar si el analista lo 
considera prudente con base en el ruido inst rumental obtenido en el equipo. (Se sugiere realizar con ruido 
instrumental > 2000 µuA). 
Para ello escoger alguna técnica: Someter el agua a un vacío fuerte durante 15 a 20 minutos; agitar 
magnéticamente o someta a un ultrasonido el agua por 20 minutos; pu rgar el agua con nitrógeno gaseoso  (u 
otro gas inerte) con ayuda de un material poroso por 5 minutos; o hervir el agua en un matraz Erlenmeyer por 
15 minutos y dejar enfriar a temperatura ambiente cubriendo la boca del matraz con un vaso de precipitados 
invertido.  
Una vez desgasificada el agua, guárdela en un contenedor cerrado para evitar que absorba gases 
atmosféricos.  
B.11.2.7.1.3 Disolución de arranque / disolución de lavado. Esta disolución se usa para ambos 
propósitos. Añadir 0.5mL de Brij -35 a 500 mL  de agua desionizada. Mezclar suavemente.  
B.11.2.7.1.4 Disolución de azul de metiltimol de trabajo (500mL). 7.2.8.1.  Tomar 500 mL de la 
disolución concentrada de azul de metiltimol y añadir 2.5 mL de Brij -35. Mezclar suavemente. Ajustar el pH de 
esta disol ución a 2.6 –2.7 con NaOH 0.18 N o HCL 1 N. Preparar esta disolución fresca cada día que se 
analice un lote de muestras.  
B.11.2.7.1.5 Disolución de trabajo de hidróxido de sodio 0.18 N (500 mL). Añadir 9 mL de la disolución 
de hidróxido de sodio 10 N a apro ximadamente 400 mL de agua desionizada. Llevar a un volumen final de 
500mL con agua desionizada y mezclar bien. Guardar esta disolución en frasco de polietileno.  
B.11.2.7.1.6 Disolución madre de 10 000 mg/L sulfato (SO 42-). Materiales de referencia. Pesar con 
precisión 1.4787g de sulfato de sodio anhidro (Na 2SO 4) secado previamente a 105 ± 3 °C y que cuente con la 
pureza necesaria para ser considerado como material de referencia y el certificado que lo demuestre. Disolver 
en aproximadamente 80mL de agua des ionizada dentro de un matraz aforado. Diluir hasta 100 mL con agua 
desionizada. Guardar en frasco de polietileno y preservar con 3 gotas de cloroformo. Esta disolución es 
estable por seis meses si se almacena en refrigeración a 4 °C.  
B.11.2.7.1.7 Disolució n concentrada de azul de metiltimol (AMT) (1L). Para obtener mejores resultados 
este reactivo se prepara al menos 24 horas antes de usarlo. Disolver 0.236 g de sal sódica de azul de 
metiltimol en 50 mL de la disolución de cloruro de bario dentro de un matr az volumétrico de 1L. Añadir 142 mL  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
de agua desionizada y 8 mL de ácido clorhídrico 1 N. Llevar a un volumen de 1L con etanol. Agitar 
magnéticamente la disolución por una hora para desgasificarla. Añadir más etanol para llevar nuevamente a 
un volumen de 1 L. Filtrar con membrana de 0.45 µm. Guardar en frasco de vidrio ámbar. Esta disolución es 
estable hasta por 2 semanas si se guarda en frasco ámbar y a 4 °C.  
B.11.2.7.1.8 Disolución concentrada de cloruro de bario (1L).  Disolver 1.526 g de cloruro de bario 
dihidratado en aproximadamente 800mL de agua desionizada. Llevar a un volumen final de 1 000 mL con 
agua desionizada y mezcle bien.  
B.11.2.7.1.9 Disolución concentrada de hidróxido de sodio 10N (100mL). Mientras agita, añadir 
cuidadosamente 40 g de hidróxi do de sodio a aproximadamente 70mL de agua desionizada. Mezclar 
hidróxido de sodio con agua libera una gran cantidad de calor. Tome las precauciones necesarias. Agitar 
hasta disolver el sólido. Dejar enfriar a temperatura ambiente, diluir hasta 100 mL con agua desionizada y 
mezclar bien. Guardar esta disolución en frasco de polietileno. Prepare esta disolución mensualmente.  
B.11.2.7.1.10 Disolución Diluyente (1L). Diluir 0.375 mL de la disolución estándar de 1 000 mg/L de 
SO42- en aproximadamente 800 mL de agua desionizada. Añadir 4 gotas de Brij -35 y llevar a 1 000 mL con 
agua desionizada. Mezclar suavemente. Preparar esta disolución fresca cada día que se analice un lote  de 
muestras.  
B.11.2.7.2 Recolección, preservación y almacenamiento de muestras  
Las mue stras se colectan en envases de vidrio o plástico limpios.  
La cantidad de muestra debe ser suficiente para garantizar que se tenga una muestra representativa, que 
permita el análisis de replicados si es necesario y que minimice la cantidad de desechos gene rados. Se 
sugiere tomar un volumen de muestra entre 50 y 100 mL.  
Las muestras deben mantenerse a 4 °C y analizarse lo más pronto posible a partir de su recolección.  
El tiempo máximo previo al análisis es de 28 días.  
B.11.2.7.3 Preparación de muestras de ag ua 
Tomar un volumen suficiente de muestra para filtrarlo y recuperar un volumen de filtrado de al menos  9 
mL. Generalmente un volumen de 20 mL de muestra es suficiente. Para muestras considerablemente turbias 
este volumen puede ser mayor.  
Comenzar revisan do la lista de analistas y ordene iniciando con las muestras potables y al final las 
residuales para evitar una posible contaminación de las muestras. En el caso que la lista de analistas presente 
muestras también para el análisis de Fluoruros ordene prime ro las potables de fluoruro, seguido por potables 
de sulfato, residuales de fluoruro y finalmente residuales de sulfato, esto porque es posible analizar en el 
equipo simultáneamente estas químicas.  
Filtrar las muestras con papel filtro de poro mediano. Un tamaño de poro de 2.5 µm es suficiente, aunque 
pude usar un tamaño de poro más pequeño (Equivalente a Alhstom N° 2).  
Si las muestras filtradas aún presentan coloración, adicionar una pizca de carbón activado, agite y fíltrelas 
nuevamente.  
Verificar el pH d e las muestras con tiras reactivas indicadoras de pH o con un potenciómetro. Neutralice 
las muestras que tengan un pH menor a 2 utilizando una disolución concentrada de NaOH. Asegúrese que el 
pH ácido no se debe a una preservación errónea para este parámet ro con ácido sulfúrico.  
Transferir el líquido resultante a viales de vidrio de 9mL de capacidad para su análisis.  
B.11.2.7.4 Pruebas semicuantitativas para sulfato  
Para saber anticipadamente si la concentración de sulfato en las muestras se encuentra por a rriba del 
límite superior del intervalo de trabajo se realiza el siguiente ensayo semicuantitativo. Esta prueba puede 
hacerse para las muestras que se presuma se cuantifiquen en la zona alta del IT o bien salgan de éste. Esto 
queda a criterio del analista y del técnico de laboratorio.  
Tomar aproximadamente 20 mL de cada muestra y adicione a cada una pizca de cloruro de bario sólido y 
agite suavemente. Haga lo mismo con una alícuota del mismo volumen del estándar de 200 mg/L.  
Si la muestra contiene sulfato, se genera una turbiedad blanca debido a la formación de sulfato de bario 
(BaSO 4). A mayor concentración del Ion sulfato, la turbiedad es mayor. Comparando las muestras con el 
estándar de 200 mg/L, se obtiene una buena aproximación para saber si la concentr ación de sulfato  en la Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
muestra es mayor a 200 mg/L y por lo tanto requiere ser diluida. Realice las diluciones necesarias con agua 
desionizada.  
B.11.2.7.5 Preparación del autoanalizador Flow Solution IV  
Configurar el equipo como lo indica el Manual del Fab ricante y asegurarse de que todos los módulos estén 
encendidos.  
Verificar que las conexiones de las mangueras estén configuradas en el cartucho de análisis como 
muestra el diagrama de la Fig B.11.2 -2, de este Apéndice.  
No instale la columna de intercambio catiónico en esta parte del procedimiento. Se debe instalar con la 
bomba en funcionamiento para evitar la entrada de aire en ella.  
Asegurarse que se tiene instalado el filtro de 460 nm en el detector.  
Llenar el depósito de enjuague del automuestreador con agua desionizada.  
B.11.2.7.6 Estabilización del equipo  
Abrir el programa del equipo, cuyo icono de acceso se encuentra en el escritorio de la computadora. 
Asegúrese que al hacer esto la cánula del automuestreador se introduzca en la cavidad de enjuague.  
Conectar las mangueras del NaOH 0.18 N y del diluyente a un recipiente con agua destilada y la 
manguera del reactivo de azul de metiltimol a un recipiente con disolución de arranque/lavado. Asegure las 
grapas de todas las mangueras en la bomba presionándolas  hacia abajo hasta que escuche un “clic” y levante 
todas las palancas correspondientes para presionar las mangueras contra los rodillos de la bomba peristáltica. 
Accione la bomba a una velocidad de 40% permitiendo que el agua y la disolución de arranque fl uyan por todo 
el sistema.  
Asegurarse de que no existan fugas en las conexiones, que no haya mangueras presionadas y que los 
flujos en las mangueras sean constantes.  
B.11.2.7.7 Verificación de la línea base  
Crear o cargar un método apropiado para el análisi s de SO 42- en el programa del equipo. Consultar el 
Manual del Fabricante del programa del equipo para mayor referencia.  
Crear una secuencia que incluya las muestras que conforman el lote y los controles de calidad. Consultar 
el Manual del Fabricante del pr ograma del equipo para mayor referencia.  
Seleccionar la opción Collect Data (o su equivalente) del menú de la ventana principal del programa del 
equipo. Introduzca el nombre y clave del analista, seleccione el método y la secuencia a usarse en el análisis 
e indique un nombre y una ruta para guardar los resultados del análisis.  
Comenzar el monitoreo de la línea base presionando el botón ► (o su equivalente) ubicado en el margen 
izquierdo de la pantalla de obtención de datos. Monitorear la línea base por unos  minutos. Su magnitud no 
debe sobrepasar las 2000 µuA y su deriva (desplazamiento hacia arriba o hacia abajo) no debe ser mayor a 
las 500 µuA en 300 segundos.  
Si observa fluctuaciones grandes en la línea base o una deriva continua probablemente se deba a l a 
presencia de burbujas en la celda de flujo. Extraer estas burbujas tomando la manguera a la salida del flujo de 
la celda y forme un bucle con ella. Presionar con los dedos el punto donde se sobreponen las dos secciones 
de la manguera y tire ligeramente m ientras presiona, sosteniendo con la otra mano la porción de la manguera 
más próxima a la celda de flujo. Observar si se estabiliza la línea base. Repetir esta operación hasta que la 
línea base sea estable.  
Conectar todas las mangueras a los recipientes de  los reactivos correspondientes y verifique nuevamente 
las condiciones de la línea base.  
B.11.2.7.8 Preparación de la columna de intercambio catiónico  
La columna de intercambio catiónico debe prepararse cada vez que se realice un lote. No instale la 
column a de intercambio catiónico en esta parte del procedimiento. Se debe instalar con la bomba en 
funcionamiento para evitar la entrada de aire en ella.  
Tomar aproximadamente 0.5 g de resina de intercambio catiónico Bio -Rex 70 (forma sódica) y lavarla 
varias ve ces en un vaso de precipitados de 100 mL con agua desionizada. Decantar cada vez las partículas 
finas junto con el sobrenadante.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Añadir 100 mL de agua desionizada y someter a un ultrasonido por 20 minutos.  
Desconectar una de las tuercas en los extremos de la columna de polipropileno de la junta de ¼ -28  (Fig. 
B.11.2 -3, de este Apéndice). Con cuidado retire el tapón poroso o frit (No. de parte A000947). El otro extremo 
de la columna debe estar cerrado con el tapón poroso, la tuerca y la junta correspondiente s. 
 
Figura B.11.2 -3. Part es de la columna de intercambio catiónico.  
Las referencias a partes específicas de marcas o números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y 
no implican aprobación de los productos.  
Tomar con una jeringa de plástico de 20 mL o  de mayor capacidad la resina de intercambio en suspensión 
y una vez llena, conectar la jeringa a la columna con ayuda del conector hembra “Luer -Lok”.  
Colocar la jeringa en posición horizontal para que la resina no quede en la salida de ésta. Con cuidado 
presionar el émbolo de manera que la columna se llene de agua.  
Una vez que haya desplazado el aire del interior de la columna colocar la jeringa en posición vertical con lo 
que la resina comenzará a introducirse en la jeringa por gravedad. Si la resina deja  de entrar en la columna 
agitar suavemente la jeringa o dar pequeños golpes en la base de la jeringa. Continuar hasta que la resina 
llene completamente la columna.  
Antes de retirar la jeringa, asegurarse de mantener el extremo opuesto de la manguera conect ada a la 
columna en una posición más alta que el extremo de la columna por donde introdujo la resina. Esto con el fin 
de que cuando retire la jeringa, el agua fluya desde el interior de la columna y evite la entrada de aire.  
En caso de que quede aire atrap ado en el interior de la columna, vaciarla y comenzar el procedimiento 
nuevamente.  
Retirar la jeringa junto con el conector hembra “Luer -Lok”. Limpie los restos de resina que hayan quedado 
fuera de la columna de polipropileno.  
Con cuidado colocar el tapón poroso frit dentro de la contera y reestablezca las conexiones de la tuerca 
con la junta.  
Instalar de la columna de intercambio catiónico. Para evitar la entrada de aire en la columna de 
intercambio catiónico, instálela con la bomba en funcionamiento.  
Una vez que haya obtenido una línea base estable con todos los reactivos fluyendo por el sistema y con la 
bomba en funcionamiento, desconectar la tuerca que se encuentra entre los desburbujeadores conectados a 
los puertos 2 y 10 del cartucho dejando la junta c onectada a la tuerca que viene del puerto 2 (o sus 
equivalentes).  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Retirar la junta de la entrada de la columna de intercambio ya preparada (el extremo que permaneció 
cerrado con el tapón poroso al momento de empacarla). Introducir y asegurar esta tuerca de  la columna a la 
junta que viene del puerto 2.  
Retirar la tuerca en el otro extremo de la columna de intercambio dejando la junta conectada a ésta. 
Conectar aquí la tuerca en la manguera que va al puerto 10.  
Dejar que se estabilice el sistema (lo cual requ iere de aproximadamente 20 minutos) y verifique que no 
entre aire en la columna de intercambio catiónico.  
Verifique nuevamente las condiciones de la línea base.  
Las referencias a partes específicas de marcas o números de catálogo se incluyen sólo como ejem plos y 
no implican aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o 
fabricantes. Las referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
B.11.2.7.9 Procedimiento analítico  
Coloc ar la(s) gradilla(s) con los estándares y las muestras en el automuestreador. Verificar que las 
posiciones de los tubos coincidan con las especificadas en la secuencia de análisis. Los calibrantes, blancos y 
muestras sintéticas deben tener la misma matriz que las muestras analizadas.  
Iniciar el análisis presionando el botón que generalmente tiene el símbolo  (o su equivalente) ubicado  en 
el margen izquierdo de la pantalla de obtención de datos. Esto inicia el análisis de acu erdo a la  secuencia 
cargada.  
De ser necesario, realizar las diluciones de las muestras que se encuentren fuera del intervalo de trabajo e 
inclúyalas al final de la secuencia, puede apoyarse de la prueba presuntiva de sulfato para determinar la 
posible dilu ción previa. Anexar también al final de la secuencia las muestras para las que se hayan obtenido 
resultados poco confiables debido a anomalías durante su análisis, tal como el arrastre de la muestra anterior 
o el paso de alguna burbuja por el detector.  
Para anexar muestras a la secuencia abra la tabla durante el análisis del lote presionando el botón 
correspondiente ubicado en el margen izquierdo de la pantalla de obtención de datos e introduzca la 
información en las posiciones disponibles al final de la se cuencia. Para realizar las diluciones utilice material 
verificado y/o calibrado, en caso que se presuma una concentración elevada de analito no debe hacer una 
dilución directa mayor a 20, ya que puede estar tomando una concentración de analito poco represe ntativa y 
cometer un error en la dilución. En caso de hacer diluciones mayores a 20, se hace una serie de diluciones 
tomando como base la inicial dilución 20 que ya se realizó. No haga diluciones volumétricamente con material 
sin verificar.  
Una vez termina do el análisis, desmontar la columna de intercambio catiónico y reestablecer las 
conexiones de las tuercas con las juntas entre los puertos 2 y 10.  
Hacer pasar durante 15 minutos agua desionizada por la línea de NaOH y del diluyente, y disolución de 
lavado  por la línea del reactivo de AMT de la misma manera que se hizo al arrancar el equipo.  
Detener la bomba, libere las grapas de las mangueras en la bomba peristáltica, apagar el equipo y vaciar 
el recipiente de desechos.  
B.11.2.7.10 Consideraciones operativ as al procedimiento analítico  
La determinación de sulfato con el método de azul de metiltimol es inherentemente ruidosa. Para reducir el 
ruido en la línea base se recomienda:  
 Usar agua desionizada y/o desgasificada para la preparación de reactivos y para e l enjuague del 
automuestreador.  
 Usar una sal de azul de metiltimol de calidad. De ser posible, solicitar al proveedor un certificado de 
este reactivo. Usar sólo azul de metiltimol con un contenido de agua menor al 10%.  
La cantidad de cationes interferentes  varía con la matriz de cada muestra. Las muestras con una 
concentración alta de cationes multivalentes pueden requerir un reemplazo más frecuente de la resina de 
intercambio catiónico o una columna de intercambio catiónico más larga.  
La columna de interca mbio catiónico se prepara cada vez que se realiza un lote, en caso que se reutilice 
se debe verificar la capacidad de intercambio de la columna analizando una disolución estándar de una 
concentración de calcio (Ca2+) similar a la de las muestras analizadas . Un recobro bajo indica que se ha 
sobrepasado la capacidad de la columna de intercambio catiónico y debe re -prepararse.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
La columna tiene una capacidad de intercambio de aproximadamente 35 mg de calcio, lo que representa 
alrededor de 900 muestras con una c oncentración de calcio de 200mg/L. La resina de la columna debe ser 
reemplazada tan frecuentemente como sea necesario, como para asegurar que no se use más del 50% de  su 
capacidad.  
Después de haber analizado un gran número de muestras con concentraciones e levadas de sulfato, se 
puede observar un aumento en la deriva de la línea base. En ese caso es necesario limpiar la celda de flujo 
con disolución limpiadora y después enjuagarla con agua desionizada en abundancia. Si la línea base no 
mejora, limpiar todo e l cartucho con disolución limpiadora.  
El reactivo de azul de metiltimol debe prepararse al menos 24 horas antes de usarse y permanecer 
almacenado en un frasco de vidrio ámbar a 4 °C.  
El pH del reactivo de azul de metiltimol de trabajo se debe ajustar entre  2.6 y 2.7 unidades de pH antes de 
usarse. El pH del medio al abandonar la celda de flujo debe ser de 12.5 unidades de pH.  
Cuando se instale la columna de intercambio catiónico, mantener en todo momento la bomba funcionando. 
Esto evita la entrada de aire e n la columna.  
Si observa una línea base inestable, reemplazar la manguera de silicón del reactivo de azul de metiltimol.  
B.11.2.7.11 Análisis de datos y cálculos  
La curva de calibración permite al equipo calcular automáticamente la concentración de las mue stras. Las 
unidades de los valores arrojados son las mismas que se usaron para los estándares, que son mg/L de SO 42- 
B.11.2.7.12 Informe de prueba  
La expresión de resultados debe ser en 
  con dos cifras decimales.  
B.11.2.8 Control de calidad, criterios de aceptación y rechazo, calibración e interferencias  
B.11.2.8.1 Control de calidad  
B.11.2.8.1.1 Verificación del equipo . Para asegurar el buen funcionamiento del equipo revise los puntos 
indicados en el formato de Verificación de Indicadores de Calidad de la  técnica.  
B.11.2.8.1.2 Verificación inicial de la calibración. Si para cuantificar la concentración de analito en las 
muestras y los controles de calidad se emplea una curva de calibración cargada en el programa del equipo 
obtenida previamente (durante la validación parcial del método), se emplea la respuesta que arroja el pico de 
sincronía para evaluar la veracidad de la curva. Se compara la respuesta obtenida para este pico con el 
promedio de las respuestas obtenidas en la validación del método para un es tándar de la misma 
concentración. La diferencia entre estas dos repuestas no debe ser mayor al 15%.  
Si se hace uso de una curva de calibración nueva para cuantificar la concentración de analito en las 
muestras y los controles de calidad en un lote, se debe  preparar un estándar de verificación inicial de la 
calibración (ICV), el cual contiene al analito en una concentración conocida y que se encuentra dentro del 
intervalo de trabajo. Ya que la curva de calibración para sulfato se ajusta a una ecuación de ter cer orden, se 
recomienda que se empleen dos disoluciones ICV. La concentración de una de ellas preparada en la porción 
de concentraciones bajas (entre 10 -100 y mg/L), y la segunda por arriba de 100 mg/L. Estos estándares 
deben ser preparados a partir de un a fuente alterna a la que se empleó para construir la curva de calibración.  
B.11.2.8.1.3 Verificación de contaminación de reactivos. Muestras de agua: Se prepara un blanco de 
reactivos tomando una alícuota de agua desionizada y sometiéndola al mismo proced imiento de preparación y 
de análisis que el resto de las muestras. La lectura para este blanco de reactivos debe arrojar un valor menor 
al límite de detección del método y se analiza una muestra blanco por cada 20 muestras reales.  
B.11.2.8.1.4 Verificación  del proceso analítico. Se emplean difere ntes muestras para verificar el  proceso 
analítico:  
 Verificación inicial de la calibración.  
 Verificación de calibración continua (CCC): Con el propósito de comprobar que la calibración 
verificada al inicio se manteng a vigente durante todo el análisis del lote, se debe analizar a intervalos Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
regulares una disolución estándar de concentración conocida. Se sugiere que ésta sea de la misma 
concentración del punto intermedio de la curva. La diferencia entre el valor nominal  de esta disolución 
y el valor obtenido en cada medición no debe ser mayor al 10%.  
 Verificación de la linealidad de la curva de calibración. El programa del equipo ajusta una ecuación a 
los pares de datos obtenidos para las muestras con las que se construy ó la curva de calibración. Este 
ajuste es de tercer orden en el caso de sulfato. Además de la función ajustada, el programa arroja un 
coeficiente de correlación lineal, el cual debe ser igual o mayor a 0.995.  
 Se analiza una muestra sintética de concentraci ón conocida, preparada por el analista 
preferentemente de una fuente diferente a la de la curva de calibración. La diferencia entre el 
resultado obtenido y el valor nominal de esta muestra no debe ser mayor al 20%. Se prepara una 
muestra sintética de conce ntración conocida por cada 20 muestras reales, estos estándares internos 
o muestras sintéticas de concentración conocida corresponden a muestras QC o blancos fortificados.  
 Verificación de repetibilidad de los análisis. Se selecciona al menos una muestra po r cada matriz  del 
lote analizado para prepararla y analizarla por duplicado. Con ello se verifica la repetibilidad del 
proceso al cual se someten las muestras. La diferencia porcentual relativa entre los dos valores 
obtenidos no debe superar el 20%.  
 Verifi cación de interferencias de matriz. Se debe adicionar al menos una muestra por cada matriz del 
lote analizado. Las muestras seleccionadas se adicionan con una concentración conocida de analito, 
la cual se recomienda que sea igual a la establecida como máxi mo permisible por alguna entidad 
reguladora o, en su caso, que sea entre una y cinco veces la concentración del analito presente 
originalmente en la muestra o bien una concentración aproximada del punto intermedio del intervalo 
de trabajo o menor. Comparan do las concentraciones de analito en la muestra sin adicionar y en la 
adicionada se obtiene un recobro de la adición, el cual debe de estar entre el 80 y el 120 %.  
 Composición del lote. El lote analítico debe conformarse como se indica en la Tabla B.11.2 -2, de este 
Apéndice.  
Tabla B.11.2 -2. Composición del lote en el análisis de SO 42- por colorimetría automatizada.  
Orden en 
secuencia  Tipo de muestra  Clave en 
WinFlow  Función  
1 Pico de sincronía  SYNC  Primer pico que detecta el equipo. A partir de este el 
programa comienza a contar la duración de los ciclos 
de toma de muestra.  
2 Arrastre ( carryover ) CO Con éste el equipo calcula qué porcentaje del pico de 
sincronía está siendo cuantificado en la siguiente toma 
de muestra.  
3 Enjuague  BLNK  Limpia las líneas d e los restos de las inyecciones 
anteriores.  
4 Línea base  RB Establece un punto de anclaje para la línea base.  
5 Estándares de 
calibración  C Serie de estándares de diferente concentración que el 
equipo usa para construir la curva de calibración. Se 
omiten  si se emplea una curva cargada en el equipo.  
6 Enjuague  BLNK  Limpia las líneas de los restos de las inyecciones 
anteriores.  
7 Línea base  RB Establece un punto de anclaje para la línea base.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
8 Estándares de 
verificación inicial de 
la calibración  ICV Cuantificar la concentración de analito en las muestras 
y los controles de calidad en un lote, se debe preparar 
un estándar de verificación inicial de la calibración 
(ICV), el cual contiene al analito en una concentración 
conocida y que se encuentra dentro de l intervalo de 
trabajo.  
9 Estándar de 
verificación de 
calibración continua.  CCC  Comprobar que la calibración verificada al inicio se 
mantenga vigente durante todo el análisis del lote.  
10 Enjuague  BLNK  Limpia las líneas de los restos de las inyecciones 
anteriores.  
11 Línea base  RB Establece un punto de anclaje para la línea base.  
12 Blanco de reactivos  U La lectura para este blanco de reactivos debe arrojar 
un valor menor al límite de detección del método.  
13 Muestra QC o BF  U Análisis una muestra sint ética de concentración 
conocida. Se recomienda inyectar un blanco después 
de esta muestra ya que si su concentración es 
demasiado alta se puede presentar un arrastre en la 
siguiente muestra.  
14 Muestras 
desconocidas o 
problema  U Muestras problema. Se incl uyen muestras duplicadas 
y adicionadas.  
 
B.11.2.8.1.5 A partir de que comienza el análisis de las muestras desconocidas, se debe incluir cada  10 
muestras el siguiente grupo de inyecciones a lo largo de toda la secuencia para la verificación continua de la  
calibración:  
 Enjuague (BLNK)  
 Estándar de verificación de calibración continua (CCC)  
 Enjuague (BLNK)  
 Línea base (RB)  
  
Este grupo también se debe anexar al final de la secuencia inmediatamente después de la última  muestra 
problema.  
Dependiendo de los requer imientos del programa específico de control de calidad, pueden ser requeridas 
muestras duplicadas de campo para evaluar la precisión y exactitud del muestreo, así como las técnicas de 
transportación y almacenamiento de la muestra.  
B.11.2.8.2 Criterios de a ceptación y rechazo.  
La Tabla B.11.2 -3, de este Apéndice resume los controles de calidad mencionados en esta sección, así 
como sus criterios de aceptación.  
Tabla B.11.2 -3. Puntos a verificar en el análisis de un lote, así como sus criterios de aceptación.  
Tipo de verificación  Criterio de aceptación  
Verificación de la respuesta inicial del equipo  
(pico de sincronía)  Diferencia menor al 15%  
Verificación inicial de la calibración (ICV)  Diferencia menor al 10%  
Verificación de la linealidad de la curva de ca libración  Coeficiente de correlación mayor a 0.995  
Blanco de reactivos  Concentración menor al LDM.  
Muestra de control de calidad (QC)  Recobro entre el 80 y 120%  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Muestra(s) duplicada(s)  DPR < 20%  
Muestra(s) adicionada(s)  Recobro entre el 80 y 120%  
Verificación de calibración continua (CCC)  Diferencia o recobro menor al 10%  
 
B.11.2.8.3 Calibración  
Si para cuantificar la concentración de SO 42- se emplea una curva obtenida anteriormente en la validación 
parcial del método, solamente verifique la calibraci ón del instrumento.  
Si se requiere de una curva de calibración nueva para cuantificar la concentración de analito en las 
muestras y en los controles de calidad de un lote, o para realizar una nueva validación parcial del método, 
prepárela a partir de la di solución madre usando material volumétrico verificado, o bien, gravimétricamente 
empleando una balanza calibrada.  
En la Tabla B.11.2 -4, de este Apéndice se muestran las cantidades sugeridas para obtener una curva de 
calibración de SO 42- en el intervalo de 5 a 200 mg/L a partir de la disolución madre de Na 2SO 4. 
Preparar una disolución intermedia de 1 000 mg/L de sulfato, partiendo de la disolución madre de  10 000 
mg/L. Se toman 10mL de disolución madre y se aforan a 100 mL con agua desionizada. Este procedim iento 
puede hacerse volumétrica o gravimétricamente únicamente garantizando la verificación y/o calibración de los 
instrumentos y equipo utilizados.  
Tabla B.11.2 -4. Cantidades sugeridas para construir una curva de calibración de sulfato en el intervalo de 
trabajo del método.  
Concentración de SO 42- en 
el estándar  (mg/L)  Volumen de 
estándar (mL)  Volumen final con agua 
desionizada (mL)  Concentración de SO42-- 
obtenida  (mg/L)  
1000  12.0 60.0 200.0  
200 20.0 40.0 100.0  
200 10.0 40.0 50.0 
200 4.0 40.0 20.0 
200 2.0 40.0 10.0 
200 1.0 40.0 5.0 
Si la preparación de la curva se hace de manera gravimétrica, se considera la densidad de las disoluciones 
como de 1 g/mL.  
Preparar el equipo para el análisis de muestras e incluir en la secuencia los puntos de calibraci ón 
preparados, introduciendo las concentraciones calculadas para cada punto en la ventana referente a las 
condiciones del método.  
Si va a utilizar una curva de calibración cargada en el equipo para la cuantificación debe preparar una 
disolución de concentr ación igual al del último punto de la curva para comparar la respuesta obtenida contra la 
que se está cuantificando (Preferentemente la de la confirmación del método). En este caso también se debe 
preparar una disolución para la verificación de la calibrac ión continua, la cual puede ser de una concentración 
de magnitud igual o menor al punto medio de la curva, idealmente se deben preparar dos estándares de 
diferente concentración (uno en la alta y uno en la baja del IT) para asegurar que la calibración sigu e vigente 
en todo el IT a lo largo de la corrida. En estos casos no se requiere de la determinación del ICV.  
El equipo registra la respuesta obtenida para cada punto y la asocia a la concentración especificada por el 
usuario, con lo que construye y almacen a de manera automática una curva de calibración. Esta curva es 
usada después para obtener la concentración de las muestras desconocidas.  
El ajuste para la curva de calibración de sulfato no es lineal, sino de tercer orden.  
La verificación de la calibración  durante el análisis del lote se realiza mediante la CCC.  
B.11.2.8.4 Interferencias  
Al tratarse de una técnica fotométrica, la turbidez en las muestras interfiere con la capacidad del detector 
para registrar la absorción real de la muestra, por lo cual las  muestras turbias deben filtrarse antes de 
analizarlas.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Los cationes multivalentes en general, y particularmente los que se asemejan al bario (Ba 2+) tales como el 
calcio (Ca2+) y el magnesio (Mg2+) generan una interferencia, por lo que pueden ser eliminado s de la muestra 
al pasarla por la columna de intercambio catiónico.  
Si el pH de la muestra es muy bajo, la concentración tan alta de iones H + puede ocasionar la liberación de 
los cationes retenidos en la columna de intercambio, por lo que es necesario neut ralizar las muestras cuyo pH 
sea menor a 2 unidades de pH.  
B.11.2.9 Seguridad y manejo de residuos  
B.11.2.9.1 Seguridad  
Cada reactivo utilizado en estos procedimientos debe ser tratado como un riesgo potencial para la salud y 
la exposición a estos material es debe ser minimizada. Cada laboratorio es responsable de mantener un 
conocimiento de las regulaciones respecto a la manipulación segura de cualquier producto químico usado en 
este método. Debe ponerse a disposición de todo el personal involucrado en el a nálisis las hojas de datos  de 
seguridad de los productos químicos. Debe de utilizarse equipo de protección personal apropiado  para el 
manejo de muestras y estándares. Los estándares primarios deberán prepararse en una campana. Cuando el 
analista maneje alt as concentraciones de compuestos tóxicos deberá utilizarse un respirador de gases 
tóxicos.  
La carcinogenicidad de todos los reactivos no ha sido determinada con precisión, por lo que cada 
sustancia debe tratarse como potencialmente peligrosa para la salud.  La exposición a estas sustancias debe 
reducirse al menor nivel posible. Las muestras desconocidas pueden ser peligrosas. Manéjelas siempre con 
precaución extrema.  
Cuando se trabaje con muestras desconocidas o con los reactivos empleados en este método use  siempre 
el equipo de seguridad adecuado como bata de trabajo, lentes de seguridad y guantes apropiados.  
B.11.2.9.2 Manejo de residuos  
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales, estatales y locales 
referentes al mane jo de residuos, particularmente las reglas de identificación, almacenamiento y disposición 
de residuos peligrosos.  
B.11.2.10 Referencias  
Dirección General de Normas. NMX -AA-074-1981. Análisis de agua – Determinación del Ion Sulfato.  
Dirección General de No rmas. NMX -B-021-1982. Determinación de las formas de azufre en el carbón.  
O.I. Analytical. 2008. Sulfate by Segmented Flow Analysis (SFA).  
U.S. Environmental Protection Agency. 1986. EPA Method 9036. Sulfate (Colorimetric, Automated, 
Methyltimol Blue, AA I I). 
B.12 MÉTODO DE PR UEBA PARA LA DETERMINACIÓN DE SÓ LIDOS DISUELTOS TOTALES (SDT)  EN 
AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.12.1 Principio  
Una muestra bien mezclada se pasa a través de un filtro de fibra de vidrio estándar y el filtrado se coloca 
en un recipien te llevado a peso constante mediante secado a 180 °C. El incremento en el peso del plato 
representa el total de sólidos disueltos (SDT). Este procedimiento puede utilizarse para el secado a otras 
temperaturas (103 a 105 °C).  
B.12.2 Alcance y aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de sólidos disueltos totales secados a 180°C en agua para 
uso y consumo humano.  
B.12.3 Equipos y materiales  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico. Todo el 
material volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Agitador magnético  con barra de agitación TFE.  
Balanza analítica  
Baño de vapor  
Desecador , provisto de un desecante que contiene un indicador de color para la concentración de  
humedad o un indicador instrumental.  
Discos filtrantes  de fibra de vidrio sin aglutinante orgánico.  
Dispositivo de filtración , adecuado para el disco de filtro seleccionado, pudiendo ser embudo de filtro de 
membrana; crisol Gooch de 25 a 40ml de capacidad , con el adaptador de crisol Gooch; o aparato de filtración 
con depósito y disco fritado grueso (40 -60 mm) como filtro de apoyo.  
Recipiente receptor del filtrado aplicando vacío , de capacidad adecuada para el volumen total de 
muestra seleccionado y enjuage s. 
Horno de secado , para funcionamiento a 180±2°C (o 103 a 105 °C).  
Pipetas volumétricas  
Platos de evaporación , platos o cápsulas de 100mL de capacidad de porcelana, de níquel, de platino o 
de vidrio alto en sílice, de 90 mm de diámetro.  
B.12.4 Procedimien to 
B.12.4.1 Preparación del disco de filtro de fibra de vidrio  
Insertar el disco en el aparato de filtración.  
Aplicar vacío y lavar con tres volúmenes sucesivos de agua reactivo de 20mL, permitir el drenaje completo 
entre lavados y continuar la succión dur ante 3 minutos más.  
B.12.4.2 Preparación del plato o cápsula de evaporación  
Secar el plato o cápsula a 180±2°C (a 103 a 105 °C) durante 1 hora en una estufa. Enfriar en el desecador 
el tiempo necesario. Pesar inmediatamente antes de usar.  
B.12.4.3 Selecció n de los tamaños del filtro y de la muestra  
Elegir el volumen de la muestra para obtener entre 2.5 y 200 mg de residuo seco, generalmente se cumple 
con 100 mL de muestra. Si se requieren más de 10 minutos para completar la filtración, aumentar el tamaño 
del filtro o disminuir el volumen de la muestra.  
B.12.4.4 Procedimiento analítico  
Agitar la muestra con un agitador magnético y pipetear un volumen medido sobre un filtro de fibra de vidrio 
previamente lavado, con vacío aplicado hacia un recipiente limpio de  tamaño adecuado al volumen de las 
muestras y los lavados.  
Lavar con tres volúmenes sucesivos de 10ml de agua de grado reactivo, lo que permite el drenaje 
completo entre lavados, y continuar la succión durante unos 3 minutos después de que la filtración se  ha 
completado.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Transferir el filtrado total con lavados a un plato o cápsula de evaporación previamente pesado y 
preparado como se indicó anteriormente, evaporar a sequedad en un baño de vapor o en una estufa  de 
secado.  
Cuando el tamaño de la porción de l a muestra es mayor que la capacidad de la l plato o cápsula  de 
evaporación, agregara s las porciones de muestra sucesivas al mismo plato después de secar el  filtrado 
anterior.  
Secar la muestra evaporada durante al menos 1 hora en una estufa a 180±2 °C (o 10 3 a 105 °C), enfriar 
en un desecador y pesar.  
Repetir el ciclo de secado, enfriamiento, desecación y pesaje hasta que se obtenga un peso constante con 
una diferencia de ≤2 mg.  
Analizar muestras por duplicado.  
Las determinaciones duplicadas deben coincidir en un ±5% de su peso promedio.  
B.12.4.5 Análisis de datos y cálculos  
Calcular la concentración de só lidos disueltos totales utilizando la siguiente fórmula:  
 
En donde:  
A peso del residuo seco + peso de plato o cápsula vacía, mg  
B peso de plato o cápsula v acía, mg  
B.12.5 Informe de prueba  
La expresión de resultados debe ser en  
  con dos cifras decimales.  
B.12.6 Referencias  
Standard methods for examination of water and wastewater. 2540 C Total Dissolved Solids Dried at 180°C.  
B.13 MÉTODO DE PRUEBA PARA LA DE TERMINACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS NO 
HALOGENADOS EN AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO  
B.13.1 Símbolos y términos abreviados  
CG/FIC  cromatografía de gases con detector de ionización de flama  
CONH  compuestos orgánicos no halogenados  
FC factor de calibración  
H2SO 4 ácido sulfúrico  
NaOH  hidróxido de sodio  
B.13.2 Principio  
Este método contiene los procedimientos de extracción, condiciones cromatográficas, ventanas de tiempo, 
requerimientos de control de calidad y cálculos para la identificación y cuantificación de  compuestos orgánicos 
no halogenados.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Los compuestos orgánicos no halogenados en matriz agua, son extraídos con cloruro de metileno por 
extracción líquido -líquido, el extracto es analizado por cromatografía de gases inyectando de 1 a 3 µL. 
B.13.3 Alcance y  aplicación  
Este método es utilizado para la determinación de compuestos orgánicos no halogenados, que comprende 
el intervalo de punto de ebullición de compuestos orgánicos con est urcturas de 10 carbonos (C 10)  a 28 
carbonos (C 28), extraíbles por cromatogr afía de gases con detector de ionización de flama (CG/FID) en 
muestras de agua para uso y consumo humano.  
B.13.4 Equipos y materiales  
Las referencias a marcas específicas y números de catálogo se incluyen sólo como ejemplos y no implican 
aprobación de los productos. Dicha referencia no excluye el uso de otros proveedores o fabricantes. Las 
referencias específicas pretenden representar especificaciones adecuadas para los artículos.  
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el labo ratorio analítico. Todo el 
material volumétrico utilizado debe ser clase A o estar verificada su calibración.  
Baño María  con control de temperatura.  
Caja de papel filtro Whatman no. 41  
Cromatógrafo de gases con detector de ionización de flama (CG/FID),  equipado con puerto de 
inyección capilar y automuestreador, así como columna capilar de 30 m, 25 mm de diámetro y película  de 
metil silicón de 1.0 µm de espesor.  
Embudos de filtración  de tallo corto o largo.  
Equipos concentradores kuderna -danish  (tubo concent rador, matraz de 500 mL y columna snyder de 
tres bolas).  
Gradilla para viales  de 2 mL.  
Matraz Erlenmeyer  de 250 mL.  
Matraz de separación con llave de teflón de 2 litros.  
Matraz volumétrico  de 1, 5 y 10 mL.  
Microjeringas  de 10, 25, 50, 100, 500 y 1 000 µL 
Parrilla de agitación magnética  
Parrilla de calentamiento  
Perlas de ebullición  
Pipetas Pasteur  de 230 mm.  
Probetas graduadas  de 10 y 100 mL y de 1 L.  
Termoblock  
Vasos de precipitados  de 100, 250 mL y 500 mL.  
Viales de 2 mL  aforados a 1 mL, transparentes.  
Vortex.  
B.13.5 Reactivos y soluciones  
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo a menos que otra cosa  se 
indique.  
Cloruro de metileno grado plaguicida.  
B.13.6 Procedimiento  
B.13.6.1 Preparación de disoluciones de calibración  
La preparación de las disoluciones de calibración puede realizarse de forma gravimétrica.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Estándar de Compuestos Orgánicos No Halogenados (CONH) de 20 000 mg/L. Mezcla de hidrocarburos 
lineales que contenga los siguientes hidrocarburos con estructuras de 10, 1 2, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26  y 28 
carbones respectivamente (C 10, C12, C14, C16, C18, C20, C22, C24, C26 y C 28) con una concentración de  2 000 
mg/L de cada compuesto (20 000 mg/L de concentración total).  
Estándar de CONH de 1 000 mg/L. Tomar 250 µL de la s olución de CONH de 20 000 mg/L en un matraz 
volumétrico de 5 mL y aforar con cloruro de metileno.  
Estándar de CONH de 100 mg/L. Tomar 100 µL de la solución estándar de CONH de 1 000 mg/L en un 
matraz volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno.  
Estándar de CONH de 10 mg/L. Tomar 100 µL de la solución estándar de CONH de 100 mg/L en un 
matraz volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno.  
Estándar de CONH de 1 mg/L. Tomar 100 µL de la solución estándar de CONH de 10 mg/L en un matraz 
volumétr ico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno.  
Estándar de CONH de 0.1 mg/L. Tomar 100 µL de la solución estándar de CONH de 1 mg/L en un matraz 
volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno (QUINTO PUNTO DE CURVA).  
Estándar de CONH de 0.05 mg/L. Tom ar 50 µL de la solución Estándar de CONH de 0.1 mg/L en un 
matraz volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno (CUARTO PUNTO DE CURVA).  
Estándar de CONH de 0.02 mg/L. Tomar 200 µL de la solución estándar de CONH de 0.1 mg/L en un 
matraz volumétrico  de 1 mL y aforar con cloruro de metileno (TERCER PUNTO DE CURVA).  
Estándar de CONH de 0.01 mg/L. Tomar 100 µL de la solución estándar de CONH de 0.1 mg/L en un 
matraz volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno (SEGUNDO PUNTO DE CURVA).  
Estándar de CONH de 0.005 mg/L. Tomar 500 µL de la solución estándar de CONH de 0.01 mg/L en un 
matraz volumétrico de 1 mL y aforar con cloruro de metileno (PRIMER PUNTO DE CURVA).  
B.13.6.2 Preservación y extracción de las muestras  
Enjuagar el material de vidrio co n cloruro de Metileno, Sonicar los magnetos con cloruro de metileno 
durante dos minutos, repetir el proceso tres veces.  
Tomar 1L de cada muestra en matraz de separación de 2 L, incluyendo blanco de reactivos, muestras 
control, muestra adicionada y muestras  reales.  
Medir el pH de cada muestra y ajustar si es necesario con ácido sulfúrico (H 2SO 4) 1:1 o con hidróxido de 
sodio (NaOH) 10 N de modo que el pH quede en el intervalo de 5 a 9.  
Agregar 50 mL de cloruro de metileno, agitar durante tres minutos, después  de la agitación dejar reposar 
para permitir la separación de las fases, recuperar el cloruro metileno en un matraz Erlenmeyer de 250 mL, 
pasándolo previamente por un embudo de filtración con fibra de vidrio o papel filtro No. 41 y sulfato de sodio 
anhidro  purificado. Si la muestra presentara problemas de emulsión durante la extracción se deberán utilizar 
procedimientos mecánicos de separación, como centrifugación, filtración, etc.  
Extraer dos veces más con 25 mL de cloruro de metileno como en el inciso ant erior y los extractos se 
recuperan en el mismo matraz Erlenmeyer.  
Concentrar los extractos en Kuderna -danish en baño María a una temperatura entre 60 y 65°C y hasta que 
el volumen aparente del extracto sea menor de 1 mL (no dejar secar el extracto ya que s e pierden los 
compuestos orgánicos semivolátiles ligeros), posteriormente retirar la columna Snyder y con una pipeta 
pasteur recuperar el extracto en vial aforado de 2 mL, aforar a la marca de 1  mL con evaporación con 
nitrógeno a temperatura ambiente y pro ceder al análisis cromatográfico.  
B.13.6.3 Análisis cromatográfico  
Las condiciones para el análisis cromatográfico se muestran en la Tabla B.13 -1, de este Apéndice, para 
alcanzar la rampa de temperatura de 75 °C/minutos se cuenta con un GC Racer, sin embar go, las condiciones 
cromatográficas dependen de la columna y el equipo utilizado, por lo que pueden variar para optimizar la 
resolución y tiempo de análisis.  
Tabla B.13 -1. Condiciones para el análisis cromatográfico.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Flujos de gases para detector de FID   Temperaturas y rampas de análisis  
Aire 400 mL/min   Temperatura del detector  310 °C  
Hidrógeno  40 mL/min   Temperatura de inyector  280 ° C  
Nitrógeno  40 mL/min   Temperatura inicial del horno  60 °C  
Flujos de gases en el cromatógrafo   Tiempo inicial  1 min  
Split 10 mL/min   Primera rampa  75 °C/min  
Septum purge  3 – 4 mL/min   Temperatura final de la rampa  310 °C  
Presión en columna  20 psi (H 2)  Tiempo final  5 min  
Flujo de gas acarreador (H 2) 1 – 3 mL/min     
 
B.13.6.4 Análisis de datos y cálculos  
La concentrac ión de la muestra (C) se obtiene de extrapolar el área total de los picos en la ventana 
cuantitativa utilizando la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
C concentración en mg/L  
AT área total en la ventana cuantitativa  
b ordenada al origen de la regresión lineal de la curva de calibración  
m pendiente de la regresión lineal de la curva de calibración  
Una vez calculada la ecuación anterior, la concentración para muestras de aguas se determinará en mg/L 
con la siguiente ecuación:  
 
En donde:  
C concentración de la mue stra en mg/L  
A volumen de aforo o volumen de concentración final del extracto en L  
D factor de dilución del extracto  
M volumen de la muestra extraída en L  
B.13.6.5 Informe de prueba  
Reportar los compuestos orgánicos no halogenados (CONH) en mg/L con tres c ifras decimales, el cual es 
la suma de los compuestos hidrocarburos C 10, C12, C14, C16, C18, C20, C22, C24, C26 y C 28. 
B.13.7 Control de calidad, especificaciones de aceptación y rechazo, calibración e interferencias  
B.13.7.1 Control de calidad  
B.13.7.1.1 Verificación del equipo.  
Antes del análisis de cada lote analítico verificar que el instrumento esté libre de interferencias 
ocasionadas por inyecciones previas de muestras muy concentradas y sangrado de columna, contaminación 
por gases o por jeringa sucia , para tal efecto se realiza un blanco electrónico que consiste en hacer una 
corrida del método a utilizar, pero sin inyectar nada.  
El blanco electrónico no deberá presentar ningún pico ni elevación o bajas de línea base y en caso 
contrario se procederá a purgar el sistema con temperatura del horno a 300 °C durante 15min.  
B.13.7.1.2 Verificación de la calibración inicial.   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
La curva de calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares de calibración preparados y se 
considera lineal, si el por ci ento de la desviación estándar relativa (%DER) de los factores de calibración (FC) 
es menor o igual al 15%, el cálculo de FC se realiza con la siguiente ecuación:  
 
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión de  mínimos 
cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el coeficiente de correlación (r) sea mayor o igual a 0.99. 
Si los criterios para % de RSD y r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico o a la 
preparación de las disol uciones de calibración. Posteriormente la curva de calibración inicial, será aceptada si 
el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor del 15% y 
que será calculada de la siguiente manera:  
 
En donde:  
CC concentración calculada  
CT concentración teórica  
 
En donde:  
FCv factor de calibración respuesta (cualquiera que aplique) de los compuestos del estándar  de 
verificación.  
FC media del factor de calibración o la media del factor de respuesta de la calibració n Inicial.  
Si el criterio de aceptación para la diferencia de la concentración es mayor a 15% proceder a la revisión 
del sistema cromatográfico o a la preparación de la solución estándar utilizada (concentración media de la 
curva de calibración).  
B.13.7.1. 3 Verificación de contaminación de reactivos.  
Para cada lote de análisis preparar un blanco de reactivos, procesando agua tipo I de la misma forma en 
que se procesan las muestras reales, utilizando los mismos solventes y reactivos.  
El blanco de reactivos n o deberá presentar ningún pico a excepción del pico del solvente, en caso de que 
se presenten picos en el cromatograma proceder a la localización de la fuente de contaminación (solventes, 
reactivos o material).  
B.13.7.1.4 Verificación del proceso analítico . 
Verificar que la recuperación promedio de la muestra de control de calidad esté entre el 70% y el 130%, en 
caso de no cumplir con el criterio, proceder a la revisión del sistema cromatográfico, a la preparación de la 
muestra control, etc. Determinar el e rror, corregir y continuar con el análisis.  
B.13.7.1.5 Verificación de interferencia de matriz.  
Analizar muestras adicionadas. Verificar que la recuperación promedio de las muestras adicionadas esté 
entre 70 y 130 %, de no ser así, revisar el sistema croma tográfico, etc. Determinar la variación, corregir y 
continuar con el análisis.  
B.13.7.1.6 Verificación de la precisión del proceso analítico.  
La precisión del lote analítico se realiza mediante el análisis de una muestra por duplicado. Calcular la 
diferenc ia porcentual relativa entre la muestra y la muestra duplicada, el valor deberá ser menor al 20%:  
 
En donde:  
X1 valor de concentración del compuesto en la muestra.  
X2 valor de concentración del compuesto en la muestra duplicada.  
A.2.13.7.1.7 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración.  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Analizar un estándar de concentración media de la curva y un blanco de reactivos, cada 20 muestras  o 12 
horas de análisis, y verificar el porcentaje de la variación de la concentración y proceder como en la 
verificación de la calibración inicial.  
B.13.7.2 Criterios de aceptación y rechazo  
B.13.7.2.1 Verificación del equipo.  
Equipo libre de interferencias (blanco electrónico). No debe presentar ningún pico o perfil de picos en 
ningún tiempo de retención.  
B.13.7.2 .2 Verificación de la calibración inicial.  
Evaluación del estándar de verificación (punto intermedio de la curva de calibración; % de diferencia de la 
concentración. Menor al 15%.  
B.13.7.2.3 Verificación del proceso analítico.  
Blanco de Reactivos. No debe presentar ningún pico o perfil de picos al tiempo de retención del analito  a 
identificar. Evaluación de muestra de control de calidad (MCC). La recuperación de la concentración de la 
muestra control se deberá encontrar dentro del criterio de aceptación de 70-130 %.  
B.13.7.2.4 Verificación de interferencia de matriz.  
Evaluación de muestras adicionadas. % de recuperación del 70 – 130%.  
B.13.7.2.5 Verificación de la precisión del método.  
Evaluación de muestras duplicadas. La recuperación de la muestra duplicad a deberá cumplir con el criterio 
de aceptación ≤ 20%.  
B.13.7.3 Calibración.  
B.13.7.3.1 Estabilidad de la curva de calibración.  
Evaluación del estándar de verificación (punto intermedio de la curva de calibración; % de diferencia de la 
concentración, menor al 15%.  
B.13.7.3.2 Calibración Inicial.  
El procedimiento utilizado para la calibración de este método es el de estándar externo y se inyectarán de 
1 a 3 µL por triplicado de cada uno de los niveles requeridos, al final realizar el promedio de las tres curv as y 
agregarlo de forma manual a la tabla de calibración del método.  
B.13.7.3.3 Preparación de la curva de calibración.  
El volumen a usar de las disoluciones a partir de la cual se preparan los puntos de la curva puede ser 
calculado con la siguiente ecuaci ón: 
 
En donde:  
V1 volumen en mL a partir de la disolución patrón.  
C1 concentración total requerida para cada punto de la curva de calibración en mg/L.  
C2 concentración de la disolución de referencia que es la suma de las concentraciones de todos 
los compu estos de la disolución (C 10 a C 28) en mg/L.  
V2 volumen final (aforo) en mL de cada punto de la curva de calibración.  
A partir de la disolución patrón, calcular la masa que será utilizada para preparar los diferentes niveles de 
la curva de calibración en un a masa total de 1 g, de acuerdo a la siguiente ecuación.  
 
En donde:  
P1 peso de la disolución de referencia (g).  
C1 concentración de la solución de referencia que es la suma de las concentraciones de todos 
los compuestos de la disolución (C 10 a C 28) en mg/ L.  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
C2 concentración total del nivel requerido, que es la suma de las concentraciones de todos los 
compuestos de la disolución (C 10 a C 28) en mg/L.  
P2 peso de aforo del nivel requerido (g), es la suma de la masa de la disolución patrón y la masa 
del disolve nte (g).  
D1 densidad de la disolución de patrón (g/mL).  
D2 densidad del disolvente de aforo (g/mL).  
A continuación calcular la concentración real de cada uno de los niveles de concentración utilizando la 
siguiente ecuación:  
 
En donde:  
C3 concentración rea l de cada nivel (mg/L).  
C1 concentración de la solución de referencia que es la suma de las concentraciones de todos 
los compuestos de la disolución (C 10 a C 28) en mg/L.  
P1 peso de la mezcla de referencia utilizada (g).  
P3 peso de aforo (estándares + disol vente) en g.  
D1 densidad de la mezcla de referencia (g/mL).  
D3 densidad del disolvente de aforo (g/mL).  
B.13.7.3.4 Linealidad de la calibración.  
La calibración será lineal, si el porcentaje de la desviación estándar (%DER) de los factores de calibración 
es menor que el 20% sobre el rango de trabajo, la linealidad a través del origen puede asumirse y el promedio 
del factor de calibración puede usarse en lugar de una curva de calibración.  
Calcular el factor de correlación (r), si se utilizó una regresión de m ínimos cuadrados, el cual deberá de 
tener un valor > 0.99.  
Si el valor de %DER es mayor al 20 % o el valor de r es menor a 0.99, la linealidad no puede asumirse y 
se procederá a encontrar las causas, corregirlas y reanalizar para cada nivel de calibración.  
B.13.7.4 Interferencias  
Cuando se tienen muestras con hidrocarbu ros pesados es muy posible que é stos se arrastren y 
contaminen inyeccio nes subsecuentes, provocando la aparición de picos o elevaciones de la línea base que 
no corresponden a las muestras que se analizan posteriormente. Para evitar este tipo de interferencias se 
recomienda purgar el equipo a 300 °C durante 15 minutos, después  del análisis de una muestra muy 
concentrada, o hacer corridas de cloruro de metileno antes de inyectar otras muestras.  
B.13.8 Referencias  
EPA. 2007. Method 8015C (SW -846): Nonhalogenated Organics Using GC/FID. Rev. 3.  
APÉNDICE C  
INFORMATIVO  
Procesos propu estos para la potabilización del agua.  
Parámetros  Procesos propuestos para la potabilización del agua  
pH Neutralización  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Turbiedad  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
Filtración directa aplicando un coagulante  
Ultrafiltración  
Microfiltración  
Filtración lenta en arena  
Filtración en múltiples etapas  
Cianuros totales  Oxidación química  
Osmosis Inversa  
Electrodiálisis  
Dureza total como CaCO 3 Ablandamiento químico (1) 
Nanofiltración  
Intercambio catiónico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Fluoruros  Adsorción en alúmina activada  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Adsorción en carbón de hueso  
Nanofiltración (en función de la concentración de fluoruros)  
Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
 
Nitrógeno amoniacal  Intercambio catiónico(resinas o zeolitas)  
Filtración biológica  
Nitrógeno de nitratos (N -NO 3-) Intercambio aniónico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Nitrógeno de nitritos (N -NO 2-) Intercambio aniónico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Oxidación química  
Cloración  
Sólidos disueltos totales  Electrodiálisis  
Ósmosis inversa  
Nanofiltración  
Sulfatos (SO 4=) Electrodiálisis  
Ósmosis inversa  
Nanofiltración  
Sustancias activas al azul de 
metileno  Adsorción en carbón activado  
Aluminio  En el caso de ser efluente de plantas de potabilización de agua q ue 
usan coagulantes con base en aluminio debe optimizarse la 
operación de la planta para evitar concentraciones altas de este 
metal en el agua potabilizada.  
Intercambio catiónico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Filtración en arena (en caso de aluminio part iculado)  
  DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Arsénico  Coagulación -floculación -sedimentación - filtración  
Filtración directa con sales férricas  
Ablandamiento químico (1) 
Ósmosis inversa  
Intercambio iónico - en caso de arsénico trivalente será necesaria 
una etapa de oxidación previa al tratam iento  
Electrodiálisis - en caso de arsénico trivalente será necesaria una 
etapa de oxidación previa al tratamiento  
Adsorción en alúmina activada - en caso de arsénico trivalente será 
necesaria una etapa de oxidación previa al tratamiento  
Adsorción sobre óx idos de hierro granular o arenas cubiertas con 
óxido de hierro (remueve arsénico trivalente y pentavalente)  
Nanofiltración  
Bario  Intercambio catiónico  
Ablandamiento químico  
Electrodiálisis  
ósmosis inversa  
Cadmio  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
Ablandamiento químico  
Ósmosis inversa  
Intercambio catiónico  
Electrodiálisis  
Cobre  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
Ablandamiento químico (1)Intercambio catiónico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Cromo total  Nanofiltración  
Coagulaci ón-floculación -sedimentación –filtración (Cr +3). Para Cr +6 
aplicar coagulante previa reducción del cromo  
Ablandamiento químico (Cr +3) 
Ósmosis inversa  
Intercambio aniónico para Cr +6 
Electrodiálisis  
Hierro  Coagulación -floculación -sedimentación –filtraci ón – para remover 
hierro divalente será necesaria una etapa de oxidación previa al 
tratamiento  
Filtración en medios granulares – para remover hierro divalente será 
necesaria una etapa de oxidación previa al tratamiento  
 Ablandamiento químico (1) 
Microfiltr ación (Fe +3) 
Ultrafiltración (Fe +3) 
Manganeso  Adsorción -oxidación sobre medios granulares recubiertos con óxido 
de manganeso  
Ablandamiento químico (1) 
Mercurio  Mercurio inorgánico  
Ósmosis inversa  
Electrodiálisis  
Intercambio catiónico  
Coagulación -flocul ación -sedimentación -filtración  
Ablandamiento químico (1) 
 Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Níquel  Ósmosis inversa  
Intercambio catiónico  
Electrodiálisis  
Ablandamiento químico (1) 
Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
Plomo  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración  
Ósm osis inversa  
Ablandamiento químico (1)Electrodiálisis  
Intercambio catiónico  
Selenio  Para selenio tetravalente y hexavalente  
Ósmosis inversa  
Intercambio aniónico  
Electrodiálisis  
Adsorción en alúmina activada  
Sólo para selenio tetravalente  
Coagulación -flocu lación -sedimentación -filtración  
Bacterias  
(E.coli , coliformes fecales y 
organismos termotolerantes)  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración -
desinfecciónOxidación química  
Filtración lenta en arena  
Ultrafiltración  
Desinfección con luz ultravioleta  (sin turbiedad)  
Ozonación  
Cloración  
Adición de compuestos de cloro, yodo o plata iónica o coloidal  
Giardia lamblia  (Quistes)  Coagulación -floculación -sedimentación -filtración -desinfección  
Microfiltración  
Ultrafiltración  
Filtración lenta en arena  
Ozonación  
 
Microcistina -LR La filtración es una opción para la remoción de cianobacterias 
intactas. Si las microcistinas u otras cianotoxinas se encuentran libres 
en el agua, se ha recomendado la oxidación con ozono o cloro, en 
concentraciones y tiempos de contact o adecuados, así como 
adsorción sobre carbón activado granular o carbón activado en polvo.  
Bromodiclorometano  En general no hay métodos prácticos para su remoción, por lo que 
debe minimizarse su formación removiendo los precursores de los 
subproductos de la desinfección, o en el caso de los ácidos 
haloacéticos controlando el pH durante la aplicación de cloro. Debe 
evitarse la formación de cloratos durante la producción de dióxido de 
cloro.  
Si se utiliza dióxido de cloro como preoxidante reducir la 
concentr ación de clorito resultante utilizando hierro ferroso o carbón 
activado.  
Carbón activado (para ácidos haloacéticos y trihalometanos)  Bromoformo  
Cloroformo  
Dibromoclorometano  
Ácido cloroacético  
Ácido dicloroacético  
Ácido tricloroacético  
Bromato  
Cloratos  
Cloritos  
Formaldehído  
Benceno  Carbón activado granular  
Aireación  Estireno   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Etilbenceno  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas.  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralizació n Tolueno  
Xilenos  
(suma de isómeros orto, meta y 
para)  
 
Hexaclorobutadieno  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas.  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  Pentaclorofenol  
2,4,6 Triclorofenol  
Alacloro  
Combinación Aldrin + Dieldrin  
Atrazina  Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas.  
En el caso de la oxidación asegurar l a completa mineralización  
Clordano (total de isómeros)  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
Cianazina  Oxidación quími ca 
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  DDT y metabolitos  
Endrin  
Lindano  
Metolacloro  
Metoxicloro  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avan zados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
 
Pendimetalina  Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
Terbutilazina  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Triflura lina Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
2,4-D Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
 
2,4,5 -T  Nanofiltración  
Ósmosis inversa  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
En el caso de la oxidación aseg urar la completa mineralización  2,4,5 -TP  
2,4-DB  
Diclorprop  
Mecoprop  
Clorotoluron  Nanofiltración  
Ósmosis inversa  
Ozonación  
Aldicarb  Nanofiltración  
Ósmosis inversa  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón  activado  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  Carbofurán  
Ácido edético  Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa minera lización  Ácido nitrilotriacético  
Acrilamida  
Benzo(a)pireno  
Clorpirifos  
Dimetoato  Cloración  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la compl eta mineralización  
Molinato  Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
Simazina  Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxi dación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización   DIARIO OFICIAL  Viernes 6 de diciembre de 2019  
Di -(2-etilhexil) ftalato  Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el c aso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
 
Isoproturon  Cloración  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
1,2-Diclorobenceno  Aireación  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  1,2-Dicloroeteno (cis + trans)  
1,2-Dicloropropano  Aireación  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  1,2-Dicloroetano  
1,3-Dicloropropeno (cis + trans)  
1,4-Diclorobenceno  Aireación  
Ozonación  
Proce sos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  
 
Cloruro de vinilo  Aireación (excepto Epiclorohidrina)  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorció n en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  Diclorometano  
Epiclorohidrina  
Tetracloroetileno  
Tetracloruro de carbono  Aireación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  Viernes 6 de diciembre de 2019  DIARIO OFICIAL    
Tricloroeteno  Aireación  
Ozonación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la  oxidación asegurar la completa mineralización  
1,2-dibromoetano  Aireación  
Oxidación química  
Procesos avanzados de oxidación  
Adsorción en carbón activado  
Procesos de membranas  
En el caso de la oxidación asegurar la completa mineralización  1,2-dibromo -3-cloropropano  
(1) Sólo en caso que el agua también presente alta dureza carbonatada.  
______________________________