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１．飼料一般の成分規格並びに製造、使用及び保存の方法及び表示の基準  
飼料一般の製造の方法の基準  
フィターゼ（その２の（ ６））は、豚、鶏、うずら、 魚類及び甲殻類 を対象と
する飼料（飼料を製造するための原料又は材料を含む。）以外の飼料に用いては
ならない。  
 
 
２．各飼料添加物の成分規格及び製造の方法等の基準  
 
フィターゼ（その２の（ ６）） 
 
ア  製造用原体  
 (ｱ) 成分規格  
酵素力単位  本品は、酵素力試験を行うとき、１ g中に200,000フィチン酸分解力
単位以上を含む。  
物理的・化学的性質    
①  本品は、黄色～褐色の粉末又は粒子で ある。 
②  本品の水溶液又は水懸濁液（ １→100）のpHは、4.0～5.0である。  
③  本品は、 pH2.5～5.0において最大の酵素活性を有する。  
純度試験   
  ① 鉛 本品1.0g（0.95～1.04g）を量り、鉛試験法（原子吸光光度法第１法）
により鉛の試験を行うとき、その量は、 ５μg/g以下でなければならない。  
  ② ヒ素 フィターゼ（その１）製造用原体の純度試験②を準用する。  
  ③ 抗菌活性  フィターゼ（その１）製造用原体の純度試験③を準用する。  
 乾燥減量  12.0％以下（１g, 105℃, ３時間） 
強熱残分  25.0％以下（ 0.5g） 
酵素力試験  フィチン酸分解力試験法第３ 法により試験を行う。  
 試料溶液の 調製 本品2.00g（1.995～2.004g）を100mLの全量フラスコに量
り、その数値を記録し、 0.2mol/L クエン酸・クエン酸ナトリウム緩衝液
（pH5.5）を標線まで加えて 100mLとする。この液を室温で１時間撹拌した
後、3,400×g で10分間遠心分離を 行い、その上澄液を試料原液とする。この
原液適量を全量ピペットを用いて量り、１ mL当たりの濃度が 0.1フィチン酸
分解力単位となるように同緩衝液を加え、試料溶液とする。  
(ｲ) 製造の方法の基準  
  Komagataella pastoris に属する菌株を宿主としたフィターゼ生産組換え体を培
養し、培養を終了した後、培養 物をろ過して菌体を除去し、さらに 、ろ液を噴霧乾
燥することにより製造すること。  
(ｳ) 保存の方法の基準  - 2 - 
 遮光した 密閉容器 に保存すること。  
(ｴ) 表示の基準  
本品の直接の容器又は直接の被包に、最大の酵素活性を示す pH値（小数点以下
第１位まで）を記載すること。  
 
イ  製剤（その１  液状） 
(ｱ) 成分規格  
本品は、フィターゼ （その２の（ ６））製造用原体 にショ糖水溶液を混和 した
水溶性液状物である。  
 酵素力単位  本品は、酵素力試験を行うとき、表示フィチン酸分解力単位の 85～
170%を含む。  
 酵素力試験  フィチン酸分解力試験法第３ 法により試験を行う。  
  試料溶液 の調製 本品５mLを全量ピペットを用いて量り、 50mLの全量フラスコ
に入れ、 0.2mol/L クエン酸・クエン酸ナトリウム緩衝液（ pH5.5）を標線まで
加えて50mLとし、試料原液とする。この原液適量を全量ピペットを用いて量
り、１mL当たりの濃度が 0.1フィチン酸分解力単位となるように同緩衝液を
加え、試料溶液とする。  
(ｲ) 保存の方法の基準  
フィターゼ（その２の（ ６））製造用原体の保存の方法の基準を準用する。  
(ｳ) 表示の基準  
本品の直接の容器又は直接の被包に、最大の酵素活性を示す pH値（小数点以下
第１位まで）を記載すること。  
 
ウ  製剤（その２）  
(ｱ) 成分規格  
本品は、 フィターゼ（その２の（ ６））製造用原体に、 小麦粉を加え、α-デン
プ 
ンの水溶液を混和して造粒した後乾燥し、必要に応じて、 賦形物質 を混和した小
片、粉末又は粒子である 。 
 酵素力単位  本品は、酵素力試験を行うとき、表示フィチン酸分解力単位の 85～
170%を含む。  
 酵素力試験  フィチン酸分解力試 験法第３ 法により試験を行う。  
  試料溶液 の調製 フィターゼ（その２の（ ６））製造用原体の 酵素力試験を準
用する。  
(ｲ) 保存の方法の基準  
フィターゼ（その２の（ ６））製造用原体の保存の方法の基準を準用する。  
(ｳ) 表示の基準  
本品の直接の容器又は直接の被包に、最大の酵素活性を示す pH値（小数点以下
第１位まで）を記載すること。  - 3 - 
  
 
３．飼料添加物一般の試験法  
 酵素力試験法  
フィチン酸分解力試験法  第３法 
基質溶液の調製  
   あらかじめフィチン酸ナトリウムをデシケーター（シリカゲル）中で 24時間
以上乾燥し、その 1.0g（0.95～1.04g）を量り、 0.2mol/L クエン酸・クエン酸
ナトリウム緩衝液（ pH5.5）（クエン酸ナトリウム 58.82g（58.815～58.824g）
に水を加えて 1000mLとし、また、クエン酸 42.02g（42.015～42.024g）に水を
加えて1000mLとし、これら２つの溶液を pH5.5となるように混合して調製）
65mLを加えて溶かし、 0.2mol/L クエン酸試液（クエン酸 4.2g（4.15～4.24g）
に水を加えて溶かし、 100mLにして調製）で pHを5.5に調整した後、 100mLの
全量フラスコに入れ、同緩衝液を標線まで加えて 100mLとする。  
  発色液の調製   
   硫酸60mLを水1,000mL中にかき混ぜながら徐々に加えた後、放冷し、１
mol/L硫酸試液を調製する。モリブデン酸アンモニウム 2.5g（2.49～2.54g）に
水を加えて溶かし、 100mLとし、モリブデン酸アンモニウム試液を調製する。ア
スコルビン酸 10g（9.9～10.4g）に水を加えて溶かし、 100mLとし、アスコルビ
ン酸試液を調製する。１ mol/L硫酸試液３容量にモリブデン酸アンモニウム試液
１容量及びアスコルビン酸試液１容量を加え、混合する。発色液は、用時調製
する。 
  反応停止液の調製  
   トリクロル酢酸 150g（145～154g）に水を加えて溶かし、 1,000mL とする。  
操作法 
   試料溶液は、各条で規定する方法で調製する。試料溶液 0.5mLをマイクロピ
ペットを用いて量り、 12×150mm の試験管に入れ、 37±0.5℃ に加温し、５分間
放置する。この試料溶液に基質溶液 0.5mLをマイクロピペットを用いて加え、
30秒以内に混合し、 37±0.5℃ で正確に 15分間放置する。その後、反応停止液
1.0mLをマイクロピペットを用いて加え、混合し、試料反応液とする。別に試験
溶液0.5mLをマイクロピペットを用いて 12×150mm の試験管に入れ、 37±0.5℃
に加温し、５分間放置する。この試料溶液に反応停止液 1.0mLをマイクロピペ
ットを用いて加えた後 、基質溶液 0.5mLをマイクロピペットを用いて加え、混
合し、試料対照液とする。  
 水1.8mLをマイクロピペットを用いて量り、別の 12×150mm の試験管に入
れ、試料反応液 0.2mLをマイクロピペットを用いて加え混合する。この溶液に
発色液2.0mLをマイクロピペットを用いて加え混合し、 50±0.5℃ で15分間放
置した後、室温まで放冷する。 また、水2.0mLをマイクロピペットを用いて
12×150mm の試験管に入れ、発色液 2.0mLをマイクロピペットを用いて加え、混- 4 - 
 合し、同様に操 作したものを対照液として、波長 820nmにおける吸光度 ODTを測
定する。別に、試料対照液について、試料反応液と同様に操作し、吸光度 ODBを
測定する。  
 
                                                              1      1  
１g又はmL中のフィチン酸分解力単位＝（ ODT-ODB）×F×40×－×Z×－ 
                                                           15   W 
 
F：検量線から求めた吸光度差１に対応するリン酸イオン濃度（ μmol/mL ） 
W：試料採取量（ g又はmL） 
Z：希釈倍率  
 
検量線の作成  
 105℃で２時間乾燥させた後、デシケーターで保存したリン酸二水素カリウム
0.612g（0.6115～0.6124g）を量り、水を加えて溶かし、 500mLの全量フラスコ
に入れ、更に水を標線まで加えて 500mLとする。この溶液２ mLを全量ピペット
を用いて量り、 200mLの全量フラスコに入れ、水を標線まで加えて 200mLとし、
標準液S１とする。標準液 S1を順次水で正確に２倍、４ 倍、８倍及び 16倍に希
釈し、それぞれ標準液 S2、S3、S4及びS5とする。各標準液 2.0mLをマイクロピペ
ットを用いて 12×150mm の試験管に入れ、発色液 2.0mLをマイクロピペットを
用いて加え 30秒以内に混合し、 50±0.5℃ で15分間放置した後、室温まで放冷
する。試料溶液と同様に操作法に従い、 ODS1、ODS2、ODS3、ODS4及びODS5を測定す
る。リン酸イオン濃度を縦軸に、測定した ODBとの吸光度差（ ODS1－ODB）、
（ODS2－ODB）、（ODS3－ODB）、（ODS4－ODB）及び（ ODS5－ODB）を横軸にとり、検
量線を作成する。