中华人民共和国国家标准  
 
GB xxxx—xxxx  
xxxx -xx-xx发布  xxxx -xx-xx实施  食品安全国家标准  
食品营养强化剂 5′-单磷酸尿苷  
（征求意见稿）  
 
 
 GB ××××—×××× 
1  
食品安全国家标准 
食品营养强化剂 5′-单磷酸尿苷 
1 范围  
本标准适用于以酵母核糖核酸为原料经酶 解法，或以核苷为原料经 酶促法制得的食品营养强化剂  
5′-单磷酸尿苷。  
2 化学名称、 分子式、结构式和相对分子质量  
2.1 化学名称 
5′-单磷酸尿苷  
2.2 分子式 
C9H13N2O9P。 
2.3 结构式 
 
2.3 相对分子质量 
    324.18（按 2018年国际相对原子质量） 
3 技术要求  
3.1感官要求 
感官要求应符合表 1 的规定。 
                                    表1 感官要求  
项   目  要   求  检验方法 
色泽 白色或类白色 取适量试样置于清洁、 干燥的白瓷盘中， 在自然光线下，
观察其色泽和状态 状态 结晶状颗粒或粉末  
3.2理化指标 
理化指标应符合表 2的规定。  
 GB ××××—×××× 
2  
 
表2 理化指标  
项   目  指   标  检验方法 
5′-单磷酸尿苷含量（以干基计），w/ %                ≥ 95.0 附录 A中A.4 
吸光度比 A250nm/A260nm 0.70~0.78 
附录 A中A.5 
A280nm/A260nm 0.34~0.42 
水分， w/%                                         ≤  10.0 GB 5009.3  
卡尔·费休法 
有关物质， %                                       ≤ 2 附录 A中A.6 
pH(0.25%水溶液)  1.8~2.5 GB/T 9724  
乙醇/ (mg/kg)                                       ≤  1000  附录 A中 A.7 
铅(Pb) /(mg/kg)                                    ≤ 1.0 附录 A中 A.8 
总砷(以 As计) /(mg/kg)                             ≤  2.0 附录 A中 A.9 
3.3 微生物限量  
微生物限量应符合表 3的规定。 
表3 微生物限量 
项  目  采样方案a及限量 
检验方法 
n c m M 
菌落总数/ (CFU/g) 5 2 1000  10000  GB 4789.2  
大肠菌群/ (CFU /g) 5 2 10 100 GB 4789.3  
沙门氏菌 5 0 0/25g --- GB 4789.4  
霉菌和酵母菌总数/ (CFU /g)   ≤ 100 GB 4789.15  
a样品的采样及处理按 GB 4789.1 执行。  GB ××××—×××× 
1 附 录 A 
检验方法  
A.1 警告  
 本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，使用时需小心谨慎并按照相关规定操作。若溅
到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。  
A.2 一般规定  
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯试剂和 GB/T 6682 中规定的一级水。试验方法中所用标
准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有 注明其他要求时，均按 GB/T 601、 GB/T 602 和
GB/T 60 3之规定制备。 所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。  
A.3 鉴别试验  
A.3.1 试剂和材料  
A.3.1.1 盐酸（ HCl）：36%~38% 。 
A.3.1.2 磷酸二氢钾 （KH 2PO 4）。  
A.3.1.3 三水合磷酸氢二钾 （K 2HPO 4·3H 2O）。  
A.3.1.4 5′-单磷酸尿苷 标准品（ C9H13N2O9P，CAS号： 68-97-9）：纯度≥ 98%，或经国家认证并授
予标准物质证书的标准品。 
A.3.1.5 盐酸溶液：移取 1 mL盐酸，溶于 水并定容至 1000 mL。 
A.3.1.6 磷酸二氢钾 溶液（0.1 mol/L ）：称取13.6 g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000 mL 。 
A.3.1.7 磷酸氢二钾 溶液（0.1 mol/L ）：称取2.28 g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至 100 mL。 
A.3.1.8 流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢钾溶液 （A.3.1.6) ，用0.1 mol/L 的磷酸氢二钾溶液 （A.3.1.7)调pH至5.6，
过滤膜，备用。  
A.3.1.9 微孔滤膜： 0.45 µm，水系。 
A.3.2 仪器和设备  
A.3.2.1 电子天平： 感量为0.001 g 。 
A.3.2.2 紫外-可见光分光光度计 。 
A.3.2.3 高效液相色谱仪 ：配有紫外检测 器或二极管阵列检测器。  
A.3.2.4 pH计：精度为 0.01。 
A.3.2.5 石英比色皿：1 cm 。 
A.3.3 紫外最大吸收峰鉴别  
A.3.3.1 分析步骤  
A.3.3.1.1  试样溶液的制备  
称取试样0.02 g （精确到0.001 g），用盐酸溶液 （A.3.1.5） 溶解并定容至 1000 mL，混匀，作为试样溶
液。 
A.3.3.1.2  测定 
将试样溶液 （A.3.3.1.1）注入1 cm石英比色皿，以盐酸溶液 （A.3.1.5）为空白 ,用紫外-可见光分光光
度计测定其 吸光度，最大吸收值应在 (262±2)  nm波长处。  GB ××××—×××× 
2 A.3.4 液相色谱保留时间鉴 别 
A.3.4.1 分析步骤  
A.3.4.1.1  试样溶液的制备  
称取试样 0.02 g（精确到0. 001 g）， 用流动相(A.3.1.8) 溶解并定容至10 mL 。移取该溶液 1.00 mL，用流
动相稀释并定容至100 mL ，混匀，过滤膜，作为试样溶液。  
A.3.4.1.2  对照溶液的制备  
称取5′ -单磷酸尿苷标准品0.02 g （精确到0.001 g ），用流动相(A.3.1.8) 溶解并定容至 10 mL。移取该溶
液1.00 mL ，用流动相 稀释并定容 至100 mL ，混匀，作为对照 溶液。 
A.3.4.1.3  色谱参考条件 
a) 色谱柱： C18色谱柱（柱长 250 mm，内径4.6 mm ，粒径5 μm ），或等效色谱柱 。 
b) 检测波长：254 nm。 
c) 流动相：同 A.3.1.8。 
d) 流速： 1.0 mL/min。  
e) 柱温：30  ℃。 
f) 进样体积： 20 μL。 
A.3.4.1.4  系统适应性试验  
将对照溶液(A. 3.4.1.2)注入液相色谱仪中， 记录色谱图。  
5′-单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质 峰之间的 分离度 R应不小于2.0 。 
连续进样6 次，5′ -单磷酸尿苷峰面积响应值的相对标准偏差 (RSD )应不大于 2.0%。 
A.3.4.1.5  测定 
将试样溶液（A.3.4.1.1）及对照溶液（A.3.4.1.2）分别注入液相色谱仪中，记录色谱图 。两者的主峰
保留时间应一致 ，相对偏差 ±2.5%。 
A.4 5′-单磷酸尿苷含量（以干基计）  
A.4.1 紫外分光光度法  
A.4.1.1 方法原理  
采用紫外- 可见光分光光度计，测定260 nm 处试样溶液的吸光度值，以 摩尔吸光系数 计算试
样中5′ -单磷酸尿苷的含量。  
A.4.1.2 试剂与材料  
A.4.1.2.1  盐酸（ HCl）：36%~38% 。 
A.4.1.2.2  盐酸溶液：移取 1 mL盐酸，溶于 水并定容至 1000 mL。 
A.4.1.3 仪器与设备  
A.4.1.3.1  电子天平： 感量为0.001 g 。 
A.4.1.3.2  紫外-可见光分光光度计 。 
A.4.1.3.3  石英比色皿：1 cm 。 
A.4.1.4 分析步骤  
称取0.5  g（精确到 0.001 g）样品，用盐酸溶液 （A.4.1.2.2）溶解并定容至1000 mL 。移取该溶液
10.0 mL，用盐酸溶液 稀释并定容 至250 mL，该溶液即 为试样溶液。将试样溶液注入 1 cm的石英比
色皿中，以盐酸溶液作空白， 用紫外 -可见光分光光度计测定其在 260 nm处的吸光度。  
A.4.1.5 结果计算  
试样中 5′-单磷酸尿苷的质量分数（以干基计）w 1，数值以百分比（% ）表示，按 式（A.1）
计算。 GB ××××—×××× 
3 100100100
m25
990018.324
1 ×−××××=w bV Aw ……………………… …（A. 1） 
 
式中： 
A——试样溶液在波长 260 nm下的吸光度；  
    324.18 ——5′-单磷酸尿苷的摩尔质量，单位为克每摩尔（ g/moL）；  
9900 ——5′ -单磷酸尿苷 在波长 260 nm下的摩尔吸光系数, 单位为 升每摩尔 每厘米
[L/(moL ·cm）]； 
V——试样定容体积，单位为升（L ）；  
b ——比色皿厚度，单位为厘米（cm ）； 
25 ——试样溶液的稀释倍数；  
m ——试样的质量，单位为克 （g）； 
w ——试样的水分含量 ，单位为百分比（ %）； 
100 ——换算系数。 
 计算结果以 重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留小数点后一位。 两次
独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的 2%。 
A.4.2 高效液相色谱法  
A.4.2.1 方法原理  
采用液相色谱仪，测定试样溶液，以保留时间定性，峰面积外标法定量。 
A.4.2.2 试剂与材料  
A.4.2.2.1  磷酸二氢钾 （KH 2PO 4）。  
A.4.2.2.2  三水合磷酸氢二钾 （K 2HPO 4·3H 2O）。  
A.4.2.2.3  5′-单磷酸尿苷 标准品（ C9H13N2O9P，CAS号：68 -97-9）：纯度≥98% ，或经国家认证并
授予标准物质证书的标准品。 
A.4.2.2.4  磷酸二氢钾 溶液（0.1  mol/L）：称取13.6 g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000  mL。 
A.4.2.2.5  磷酸氢二钾 溶液（0.1 mol/L ）：称取2.28 g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至 100 mL。 
A.4.2.2.6  流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢钾溶液 （A.4.2.2.4 )，用 0.1 mol/L 的磷酸氢二钾 溶液（A. 4.2.2.5 )调
pH至5.6，过滤膜 ，备用。 
A.4.2.2.7  5′-单磷酸尿苷标准储备液 （2000 mg/L ）：准确称取5′-单磷酸尿苷标准品0.02 g （精确到 0.0001 
g）于 10 mL容量瓶中，用流动相（ A.4.2.2.6）溶解并定容至刻度，配制成浓度2000 mg/L 标准储备液。于4 ℃
保存。  
A.4.2.2.8  5′-单磷酸尿苷标准 工作溶液（ 20 mg/L）：移取2000 mg/L 的标准储备液（ A.4.2.2.7)1 .00  mL于
100 mL量瓶中，用流动相 （A. 4.2.2.6）稀释至刻度。 现用现配。 
A.4.2.2.9  微孔滤膜： 0.45 µm，水系。 
A.4.2.3 仪器与设备  
A.4.2.3.1  电子天平： 感量为0.0001 g 。 
A.4.2.3.2  高效液相色谱仪 ：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。  
A.4.2.3.3  pH计：精度为 0.01。 
A.4.2.4 分析步骤  
A.4.2.4.1  试样溶液的制备  
称取试样 0.02 g（精确到 0.0001 g），用流动相溶解并定容至10 mL 。移取该溶液1.00 mL ，用流动相
（A. 4.2.2.6）稀释并定容至100 mL ，混匀，过滤膜，作为试样溶液。  GB ××××—×××× 
4 A.4.2.4.2  色谱参考条件  
a) 色谱柱： C18色谱柱（柱长 250 mm，内径4.6 mm ，粒径5μm ），或等效色谱柱 。 
b) 检测波长：254 nm。 
c) 流动相：同 A.4.2.2.6.。  
d) 流速： 1.0 mL/min。  
e) 柱温：30  ℃。 
f) 进样体积： 20 μL。 
A.4.2.4.3  系统适应性试验  
取5′-单磷酸尿苷标准 工作溶液(A. 4.2.2. 8)注入液相色谱仪中， 记录色谱图。  
5′-单磷酸尿苷主峰与它最近的杂质 峰之间的 分离度 R应不小于2.0 。 
连续进样6 次，5′ -单磷酸尿苷峰面积响应值的相对标准偏差 (RSD）应不大于 2.0%。 
A.4.2.4.4  测定 
系统适用性试验合格后，将 5′-单酸尿苷标准工作溶液（A. 4.2.2.8)及试样溶液（A. 4.2.4.1 )分别注入液
相色谱仪中，记录色谱图，参考色谱图见图 B.1，按外标法进行计算。 
A.4.2.5 结果计算  
试样中 5′-单磷酸尿苷 的质量分数（以干 基计） w2，数值以百分比（% ）表示，按公式 （A.2）
计算。 
                   100100100
CC
is
21
2 ×−××=w AAw
    ………………………… （A.2） 
式中： 
A1 ——试样溶液中5′-单磷酸尿苷的峰面积响应值；  
A2 ——标准溶液中 5′-单磷酸尿苷的峰面积响应值；  
CS ——标准溶液中 5′-单磷酸尿苷的浓度, 单位为毫克每升 (mg/L)； 
Ci ——试样 溶液中样品的浓度 ，单位为毫克每升 (mg/L)； 
w ——试样的水分含量 ，单位为百分比（ %）； 
100 ——换算系数。 
计算结果 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留小数点后一位。 两次独
立测定结果的绝对差值不得超过 其算术平均值的 2%。 
A.5 吸光度比  
A.5.1 方法原理  
通过测定试样溶液在特定波长处的吸光度比值来表示试样的纯度。  
A.5.2 试剂与材料  
A.5.2.1 盐酸（ HCl）：36%~38% 。 
A.5.2.2 盐酸溶液：移取 1 mL盐酸，溶于水并定容至 1000 m L。 
A.5.3 仪器与设备  
A.5.3.1 电子天平： 感量为0.001 g 。 
A.5.3.2 紫外-可见光分光光度计 。 
A.5.3.3 石英比色皿：1 cm 。 
A.5.4 分析步骤  GB ××××—×××× 
5 A.5.4.1 试样溶液的制备  
称取试样0.02 g （精确到 0.001 g），用盐酸溶液 （A.5.2.2）溶解并定容至 1000 mL，混匀，作为试样溶
液。 
A.5.4.2 测定 
将试样溶液（ A.5.4.1）注入 1cm石英比色皿，以盐酸溶液（A.5.2.2） 为空白,用紫外-可见光分光光度
计测定 250 nm、260 nm 及280 nm波长处的吸光度。  
A.5.5 结果计算  
紫外吸光度比值 X1和X2分别按式（A.3 ）和（A.4 ）计算 
260502
1AAX=
            ………………………… （A.3） 
260802
2AAX=
            ………………………… （A.4） 
式中： 
A250 ——试样溶液在波长 250nm处测得的吸光度；  
A260 ——试样溶液在波长 260nm处测得的吸光度；  
A280 ——试样溶液在波长 280nm处测得的吸光度。  
计算结果 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留两位有效数字。 两次独
立测定结果的绝对差值不得超过 其算术平均值的 1%。 
A.6 有关物质  
A.6.1 方法原理 
试样用流动相溶解后，采用液相色谱仪检测，峰面积比较法定量。  
A.6.2 试剂与材料  
A.6.2.1 磷酸二氢钾 （KH 2PO 4）。  
A.6.2.2 三水合磷酸氢二钾 （K 2HPO 4·3H 2O）。  
A.6.2.3 5′-单磷酸尿苷 标准品（ C9H13N2O9P，CAS号： 68-97-9）：纯度≥ 98%，或经国家认证并授
予标准物质证书的标准品 。 
A.6.2.4 尿苷（ C9H12N2O6）：纯度 ≥98%。 
A.6.2.5 尿嘧啶（ C4H4N2O2）：纯度≥ 98%。 
A.6.2.6 磷酸二氢钾 溶液（0.1 mol/L ）：称取13.6 g磷酸二氢钾，溶于水并定容至1000 mL 。 
A.6.2.7 磷酸氢二钾 溶液（0.1 mol/L ）：称取2.28 g三水合磷酸氢二钾，溶于水并定容至 100 mL。 
A.6.2.8 流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢钾（ A.6.2.6)，用0.1 mol/L 的磷酸氢二钾 （A. 6.2.7)调pH至5.6，过滤
膜，备用 。 
A.6.2.9 微孔滤膜： 0.45 µm，水系。 
A.6.3 仪器与设备  
A.6.3.1 电子天平： 感量为0.001 g 。 
A.6.3.2 高效液相色谱仪 ：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。  
A.6.3.3 pH计：精度为 0.01。 
A.6.4 分析步骤  
A.6.4.1 系统适应性溶液的制备  GB ××××—×××× 
6 分别称取 5′-单磷酸尿苷标准 品（ A.6.2.3）、尿苷 (A.6. 2.4)和尿嘧啶 (A.6.2. 5)0.02 g（精确到 0.001 g），
用流动相溶解并定容至10 mL 。分别移取上述溶液1.00 mL, 用流动相稀释并定容至100 mL ，混匀。  
A.6.4.2 试样溶液的制备 
称取试样0.01 g（精确到 0.001 g），用流动相溶解并定容至 10 mL。移取该溶液 1.00 mL,用流动相稀释
并定容至 100 mL，混匀，过滤膜 。 
A.6.4.3 对照溶液的制备 
移取试样溶液（ A.6.4.2) 2.00 mL,用流动相稀释并定容至100 mL ，混匀。  
A.6.4.4 灵敏度溶液 的制备 
移取对照溶液（ A.6.4.3)1.00 mL, 用流动相 稀释并定容 至10 mL，混匀。  
A.6.4.5 色谱参考条件 
同 A.3.4.1.3。 
运行时间不小于 5′-单磷酸尿苷保留时间的4 倍。 
A.6.4.6 系统适应性试验  
取系统适应性 溶液 (A.6.4.1)注入液相色谱仪中， 记录色谱图。  
5′-单磷酸尿苷主 峰与它最近的杂质 峰之间的 分离度 R应不小于2.0 。 
灵敏度溶液中5′ -单磷酸尿苷主 峰的信噪比应大于 3。 
A.6.4.7 测定 
系统适用性试验合格后，将试样 溶液 (A.6.4.2)及对照溶液 （(A.6.4.3))分别注入液相色谱仪中，记录色
谱图。参考色谱图见图 B.2。根据试样溶液各杂质峰面积之和与 对照溶液 中5′-单磷酸尿苷峰 面积进行比
较计算有关物质的含量 。 
A.6.5 结果计算  
试样中有关物质的含量 w3，数值以百分比（% ）表示，按公式 （A.5）计算。 
1001002
43
3 ×××=AAw
          …………………………（ A.5） 
式中： 
A3 ——试样溶液除主峰以外的所有杂质峰面积之和； 
A4 ——对照溶液主峰峰面积 。 
计算结果以 重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留两位有效数字。 两次
独立测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的 10%。 
A.7 乙醇  
A.7.1 方法原理  
试样置于密闭的顶空瓶中 ,在特定温度下平衡一定时间，使试样中的乙醇 挥发出来并在顶空瓶内达到
动态平衡，通过气相色谱仪进行分离检测，外标法定量。  
A.7.2 试剂与材料  
A.7.2.1 乙醇( C2H6O）：色谱纯，纯度≥ 99.5%。 
A.7.2.2 氢氧化钠（ NaOH）。 
A.7.2.3 氢氧化钠溶液（ 1 mol/L）：称取40 g氢氧化钠 (A.7.2.2)，加水稀释并定容至 1000 mL。 
A.7.2.4 顶空进样瓶：体积20  mL。 
A.7.3 仪器与设备  
A.7.3.1 电子天平： 感量为0.001 g 、0.0001g 。 GB ××××—×××× 
7 A.7.3.2 气相色谱仪，配顶空进样器和氢火焰离子化检测器。 
A.7.4 分析步骤  
A.7.4.1 试样溶液的制备 
称取试样 10 g（精确到 0.001 g） ，用氢氧化钠溶液（ A.7.2.3）溶解并定容至 100 mL。取10 mL该溶液
于顶空进样瓶，旋紧盖子，备用。  
A.7.4.2 对照溶液的制备  
称取10 mg 乙醇（精确到 0.0001 g），用氢氧化钠溶液溶解并定容至 100 mL。移取10mL 该溶液于顶空
进样瓶，旋紧盖子，备用。 
A.7.4.3 色谱参考条件  
a) 色谱柱：毛细管柱 （30 m×0.53 mm ，固定液为6% 氰丙基苯基 -94%二甲基聚硅氧烷 ，薄膜厚度为
3.00 μm）或等效柱 。 
b) 柱温：初始温度40 °C ，保持20 min ，以每分钟10°C 速率升温至240  °C，保持10 min 。 
c) 检测器温度：250  ℃。 
d) 进样口温度：140  ℃。 
e) 载气：N2；柱流量： 2.5 mL/min 。 
f) 顶空进样器条件：平衡温度80 ℃，平衡时间60 min ；定量环温度85 ℃；传输线温度90 ℃。 
g) 进样时间：1 min 。 
h) 进样量：1.0 mL 。 
A.7.4.4 系统适应性 试验 
取对照溶液(A. 7.4.2）注入气相色谱仪中，观察色谱图。  
连续进样6 次，乙醇峰面积响应值的相对标准偏差 (RSD）应不大于5 .0%。 
A.7.4.5 测定 
系统适用性试验合格后， 将试样溶液 （A. 7.4.1）和对照溶液（ A.7.4.2）分别注入气相色谱仪中，记录
色谱图，参考色谱图见图C.1 。比较乙醇峰面积响应值，计算乙醇含量。  
A.7.5 结果计算  
试样中乙醇的含量 w4，数值以 毫克每千克 （mg/kg）表示，按公式 （A.6）计算。。  
10001000
1 61 5
4×××××=mAVCAw
         …………………………（ A.6） 
式中： 
A5 ——试样溶液乙醇峰面积 ； 
A6 ——对照溶液 乙醇峰面积； 
C1 ——对照溶液中乙醇的浓度 ,单位为毫克每千克（ mg/kg） ； 
V ——试样溶液的定容体积，单位为毫升（ mL）； 
m1 ——试样质量，单位为克（g ）；  
     1000 ——换算系数。  
计算结果以 重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 两次独立测定结果的绝对差
值不超过其算术平均值的 10%。 
A.8 铅（Pb） 
称取试样1 g（精确到 0.001 g）， 用1%硝酸溶解并定容 至50  mL，摇匀，作为试样溶液。以下操作 按
GB 5009.12 或GB 5009.75 石墨炉原子吸收光谱法的规定 。 GB ××××—×××× 
8 A.9 总砷(以As)计 
称取试样1 g（精确到 0.001 g），加10 mL 水溶解后，加  4 m L 100 g/L抗坏血酸和硫脲混合溶液 ，用水
定容至 50 mL，摇匀，作为试样溶液。以下操作按GB 5009.11或 GB 5009.76 氢化物原子荧光光度法的规定。  GB ××××—×××× 
9  
附录 B 
5′-单磷酸尿苷 液相色谱 图 
5′-单磷酸尿苷 标准品液相色谱图如图 B.1所示。 
 
图B.1 5′-单磷酸尿苷标准品液相色谱图 
 
5′-单磷酸尿苷 有关物质液相色谱图如图B.2所示。 
 
图B.2 5′-单磷酸尿苷试样有关物质液相色谱图 
 
 
   
 
  GB ××××—×××× 
10 附录 C 
乙醇气相色谱图  
    乙醇气相色谱图如图C.1 所示。 
 
图C.1 乙醇气相色谱图