ICS65.020.30
CCSB43
GB4143—20××
代替GB4143—2008
牛冷冻精液
Frozenbovinesemen
（征求意见稿）
20××-××-××发布 20××-××-××实施
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会中华人民共和国国家标准
发布GB××××—××××
I目
目次
前言...................................................................................................................................................................II
1范围...................................................................................................................................................................1
2规范性引用文件...............................................................................................................................................1
3术语和定义.......................................................................................................................................................1
4要求...................................................................................................................................................................2
4.1冻精外观.................................................................................................................................................2
4.2技术指标.................................................................................................................................................2
5取样...................................................................................................................................................................3
5.1基本要求.................................................................................................................................................3
5.2取样量.....................................................................................................................................................3
5.3取样方法.................................................................................................................................................3
5.4样品贮存.................................................................................................................................................3
6试验方法...........................................................................................................................................................3
6.1冻精外观.................................................................................................................................................3
6.2剂量.........................................................................................................................................................3
6.3精子活力.................................................................................................................................................3
6.4前向运动精子数.....................................................................................................................................3
6.5精子畸形率.............................................................................................................................................3
6.6菌落总数.................................................................................................................................................3
7检验规则...........................................................................................................................................................4
7.1组批.........................................................................................................................................................4
7.2检验分类.................................................................................................................................................4
8判定规则...........................................................................................................................................................4
9标志、标签和随行文件...................................................................................................................................4
9.1标志.........................................................................................................................................................4
9.2标签.........................................................................................................................................................5
9.3随行文件.................................................................................................................................................5
10包装、贮存和运输.........................................................................................................................................5
附录A(规范性)牛冷冻精液质量检验方法....................................................................................................6
A.1通则.......................................................................................................................................................6
A.2剂量.......................................................................................................................................................6
A.3精子活力...............................................................................................................................................6
A.4前向运动精子数...................................................................................................................................7
A.5精子畸形率...........................................................................................................................................9
A.6菌落总数.............................................................................................................................................10
附录B(资料性)种公牛品种代码..................................................................................................................12GB××××—××××
II前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件代替GB4143-2008《牛冷冻精液》,与GB4143-2008相比，除编辑性改动外，主要技术变
化如下：
——更改了“范围”中的适用类型（见第1章，2008年版的第1章）；
——删除了“种公牛”和“新鲜精液”的要求（见2008年版的4.1、4.2）；
——更改了“细菌数”的定义（见3.5，2008年版的3.4）；
——更改了“剂量”、“精子活力”、“前向运动精子数”和“精子畸形率”的技术要求（见4.2，
2008年版的4.4、4.5）；
——删除了“抽样”、“抽样检验程序”（见2008年版的第5章，附录A和附录B.1）；
——增加了“取样”(见第5章）；
——增加了“冻精外观”检验方法（见6.1）；
——更改了公牛品种代码（见9.1中b)，2008版的8.1.1）；
——增加了“贮存”和“运输”条款（见第10章）；
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口。
本文件历次版本发布情况为：
——1984年首次发布为GB4143-84，2008年第一次修订；
——本次为第二次修订。GB××××—××××
1牛冷冻精液
1范围
本文件规定了牛冷冻精液的技术要求、取样、试验方法、检验规则、判定规则、标志、标签和随
行文件、包装、贮存和运输。
本文件适用于牛冷冻精液产品。
注：在不引起混淆的情况下，本文件中的“冷冻精液”简称为“冻精”。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可缺少的条款。其中，注日期的引用
文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）
适用于本文件。
GB/T4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定
GB/T5458液氮生物容器
GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB/T14174大口径液氮容器
GB/T30396牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输
NY/T1181输精细管
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
冷冻精液frozensemen
经特殊方法处理、超低温冷冻后在液氮中（-196℃）保存的精液。
[来源:GB20557-2006，3.5,有修改]
3.2
前向运动精子数numberofprogressivelymotilesperm
每剂量精液中呈前向运动的精子总数。
[来源:GB20557-2006，3.1，有修改]
3.3
精子活力spermmotilityGB××××—××××
2在37℃环境下前向运动精子数占精子总数的百分率。
[来源:GB20557-2006，3.2]
3.4
精子畸形率abnormalspermpercentage
异常精子数占精子总数的百分率。
[来源:GB20557-2006，3.3]
3.5
菌落总数aerobicplatecount
每剂量精液在一定条件下培养后观察到的微生物菌落总数。
4要求
4.1冻精外观
细管应无裂痕，两端封口严密，标志清晰。
4.2技术指标
牛冻精产品应符合表1中的规定。
表1技术指标
项目 单位 指标
剂量 mL/剂微型0.25ml≥0.19
中型0.5ml≥0.42
精子活力 %普通牛、瘤牛≥40
水牛、牦牛及大额牛≥35
前向运动精子数 104个/剂普通牛、瘤牛≥600
牦牛≥800
水牛及大额牛≥1000
精子畸形率 %普通牛、瘤牛≤20
水牛、牦牛及大额牛≤22
菌落总数 CFU/剂 ≤500
注1：微型0.25ml、中型0.5ml是指细管的规格。
注2：普通牛涵盖各品种奶牛、肉牛、兼用牛和黄牛。GB××××—××××
35取样
警示:取样人员应意识到取样过程可能涉及到液氮（-196℃）冻伤的危害和危险,应采取适当的安
全和防护措施。
5.1基本要求
5.1.1取样应由受过适当培训并有冻精取样经验的人员执行。
5.1.2取样原则应遵循随机性、代表性的原则；按牛号顺序排列，由取样人员现场按样本头数随机
确定各样品公牛；每头已投产公牛的冻精样品被取样的机会均等。
5.1.3取样和样品保存使用的液氮容器应符合GB/T5458、GB/T14174的规定。
5.2取样量
5.2.1出厂检验
每批次抽取6支(含复检备样)。
5.2.2型式检验
每批次抽取不少于20支(含复检备样)。
5.3取样方法
5.3.1每头公牛冻精样品应是同一个批次的产品。
5.3.2随机从液氮生物容器中抽取样品，样品离开液氮不得超过5s。
5.3.3取样完成后应立即填写样品登记单(包括取样日期、取样地点、公牛品种、公牛号、样品生产
日期或批号及取样人签字等信息)并与样品随行。
5.4样品贮存
样品的贮存应符合GB/T30396的规定。
6试验方法
6.1冻精外观
取三支冻精样品置于37℃水浴解冻。目测评定，细管应完整无损、封口严密和标志清晰。
6.2剂量
按照附录A.2给出的方法检测。
6.3精子活力
按照附录A.3给出的方法检测。
6.4前向运动精子数
按照附录A.4给出的方法检测。
6.5精子畸形率
按照附录A.5给出的方法检测。
6.6菌落总数GB××××—××××
4按照附录A.6给出的方法检测。
7检验规则
7.1组批
同一头公牛、相同生产工艺、同一日期采精生产的产品为一个生产批次。
7.2检验分类
7.2.1出厂检验
出厂检验项目为本文件4规定的外观和精子活力，主要是在生产批入库前和销售出厂时检验。
7.2.2型式检验
型式检验项目为本文件4规定的全部检测项目，产品正常生产时，每2个月至少进行一次型式检
验。有下列情况之一时，应及时进行型式检验：
a）生产工艺及设备有重大变更时；
b）所用生产原料有重大变化时；
c）种公牛发生疾病或统一注射疫苗时；
d）停产3个月以上恢复生产时；
e）出厂检测结果与上次型式检测结果有较大差异时；
f）监督管理部门提出要求时。
8判定规则
8.1样品所检项目全部合格，则判定该批次产品为合格。
8.2样品中任何一项目检验不符合本文件中的规定,备样复检后仍不符合文件中的规定，判定该批次
产品为不合格。
9标志、标签和随行文件
9.1标志
应在细管冻精管壁上或包装袋上印制以下标识内容，标识应清晰：
a)生产企业代码：应是业务行政主管部门核发《种畜禽生产经营许可证》时所给的牛冻精生产企
业代码。
b)公牛品种代码：以汉语拼音字母编组表示，按如下方法编码，常见的公牛品种代码见附录B。
1）品种名称来源于外来语的，以其汉语名称第一和第二字的汉语拼音第一字母组合。
示例：荷斯坦牛的品种代号以“荷”和“斯”两字汉语拼音第一字母组合为HS。
2）品种名称为二字的，以这二字汉语拼音的第一字母组合；二字以上的，以第一字、第二字GB××××—××××
5和第三字的汉语拼音第一字母组合。
示例：秦川牛的品种代号以“秦”和“川”两字汉语拼音第一字母组合为QC。
示例：阿什旦牦牛的品种代号以“阿”、“什”、“旦”三字汉语拼音第一字母组合为“ASD”。
3）品种名称涉及到国家、地域的，以该国、地域的第一字、第二字和品种第一字的汉语拼音
第一字母组合；
示例：“比利时兰牛”以国家“比利时”第一字、第二字和品种第一字的汉语“兰”的拼音第一字组合为“BLL”。
4)按以上要求编制出现品种代码重复时，则应在其中一个代码后增加牛种汉语拼音的第一字
母（如普通牛为P、牦牛为M、水牛为S、瘤牛为L）。
示例：晋南牛的品种代码为“JN”，冀南牛的品种代码为“JNP”。
c)公牛号：生产企业自行管理编制牛号的后3位数。
d)生产日期：以实际生产时间按年月日次序排列，共6位数，年月日各占2位。
9.2标签
应符合GB/T30396要求。
9.3随行文件
随行文件主要是冻精来源公牛的系谱及种用性能资料。
10包装、贮存和运输
应符合GB/T30396要求。GB××××—××××
6附录A
(规范性)
牛冷冻精液质量检验方法
A.1通则
试验中除非另有规定，仅使用分析纯试剂，试验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。试验所用的
测量仪器应经过计量检定机构的检定合格,并在有效期内。
A.2剂量
A.2.1器材
A.2.1.1分度吸量管：精度0.01mL。
A.2.1.2细管专用剪刀。
A.2.1.3细管专用推针。
A.2.1.4小试管：5.0mL。
A.2.2样品与试样制备
取室温自然解冻后样品，剪去封口端，用细管推针将3支样品全部推至同一个小试管内。
A.2.3试验步骤
用分度吸量管吸取全部试样，并测定其试样总量。
A.2.4试验数据处理
剂量为3支冻精试样总量的算术平均值，按式（1）计算，保留2位小数点。
V1
V＝——……………………………………………………（1）
3
式中：
V——剂量值，单位为毫升（mL）；
V1——3支试样总剂量值，单位为毫升（mL）。
A.3精子活力
A.3.1主要仪器和器材
A.3.1.1显微镜：配有相差物镜，20X、40X、100X。
A.3.1.2显微摄像系统：显微镜、摄像头、电脑及显示屏。GB××××—××××
7A.3.1.3显微镜恒温载物台：37℃±1℃。
A.3.1.4恒温水浴箱：37℃±1℃。
A.3.1.5试管：5.0mL。
A.3.1.6移液器：量程≤20μL。
A.3.1.7载玻片。
A.3.1.8盖玻片。
A.3.2样品与试样制备
样品按6.1的规定解冻，将解冻后样品全部置于一个小试管内混合后，置于37℃水浴中恒温待用。
A.3.3试验步骤
取10μL试样置于载玻片上加盖玻片,做成2个样片。在37℃载物台的显微镜下观察活力。分别
观察2个样片，每样片至少观察3个视野，综合判定精子活力。
A.3.4试验数据处理
精子活力按式（2）计算：
n1+n2
M=———————…………………………（2）
2
式中：
M——精子活力；
n1——第一样片精子活力，单位为百分比（%）；
n2——第二样片精子活力，单位为百分比（%）；
平行测定结果用算术平均值表示，结果取整数。
A.3.5精密度
重复性条件下，两个样片平行测试结果的绝对差值不大于3，否则应重检。
A.4前向运动精子数
A.4.1试剂
A.4.1.1氯化钠。
A.4.1.23.0%氯化钠溶液：称取氯化钠3.0g，加蒸馏水溶解并定容至100mL。
A.4.2设备和器材
A.4.2.1显微镜：配有相差物镜，20X、40X、100X。
A.4.2.2显微摄像系统：显微镜、摄像头、电脑及显示屏。
A.4.2.3血球计数板：25×16型（汤麦式），盖玻片。
A.4.2.4计数器。GB××××—××××
8A.4.2.5移液器：量程≤20μL。
A.4.2.6试管：5.0mL。
A.4.3样品与试样制备
按照A.2.2的规定。
量取20ul样品注入盛有0.98mL的3.0%氯化钠溶液的试管内，混匀，使之成为50倍稀释的试样。
A.4.4试验步骤
应按如下步骤进行操作:
a）将备好的血球计数板用盖玻片将计数室盖好，用吸管吸取一滴试样置于计数室边缘，使试样
自行流入计数室，均匀充满，避免产生气泡或厚度过大，然后在显微镜下先用低倍镜找计数室，
再切换至400倍条件下或电视显示屏上观察计数，每试样观察2个计数室。
b）计数规则：计数室共25个中方格，按对角线方位，选择左上、左下、右上、右下4个及中央
1个共5中方格进行分别计数，对于方格压线精子（以头部为准）采取数上不数下，数左不数右的原
则。记录计数室中5个中方格精子数,按照血球计数板的计算公式推导。
A.4.5试验数据处理
每剂量中总精子数按式（3）计算：
S=st×5×10×1000×50×V…………………………………………………（3）
式中：
S——每剂量中总精子数，单位为个；
st——两个计数室中5个中方格总精子数的平均值，单位为个；
5——5个中方格精子数推及25个中方格的倍数；
10——推及1mm3中精子数；
1000——推及1mL中精子数；
50——试样稀释倍数；
V——样品剂量值，单位为毫升（mL）。
每剂量中前向运动精子数按式（4）计算：
P＝S×m…………………………………………………………（4）
式中：
P————每剂量中前向运动精子数，单位为个；
S————每剂量中总精子数，单位为个；
m————精子活力，单位为百分比（%）。
平行测定结果用算术平均值表示，结果保留至小数点后一位数。
A.4.6精密度
重复性条件下，两个计数室平行测试结果的绝对差值不大于2。否则应重检。GB××××—××××
9A.5精子畸形率
A.5.1试剂
A.51.1姬姆萨染料
A.5.1.2磷酸二氢钠（NaH2PO4.2H2O）。
A.5.1.3磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)。
A.5.1.4甲醇（CH3OH)
A.5.1.5甲醛（HCHO）
A.5.1.6甘油[C3H5(OH)3]。
A.5.1.7磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钠0.55g、磷酸氢二钠2.25g，加水溶解并稀释至100mL。
A.5.1.8中性福尔马林固定液：称取磷酸二氢钠0.55g、磷酸氢二钠2.25g，用0.9%氯化钠约50.0mL
溶解后，加入8.0mL40%甲醛（使用前经碳酸镁中和过滤），再加0.9%氯化钠溶液稀释至100mL。
A.5.1.9姬姆萨原液：称取姬姆萨染料1.0g、量取甘油66.0ml、甲醇（CH3OH）66.0ml。姬姆萨染料
放入研钵中加少量甘油充分研磨至无颗粒为止，然后将甘油全部倒入并放入恒温箱中保温继续溶解4h，
再加甲醇充分溶解混匀，过滤后贮于棕色瓶中待用，贮存时间越久染色效果越好。
A.5.1.10姬姆萨染液：量取姬姆萨原液2.0mL、加磷酸盐缓冲液3.0mL、蒸馏水5.0mL，现配现用。
A.5.1.11商品姬姆萨染液：使用时，按产品使用说明书。
A.5.2设备和器材
A.5.2.1显微镜：配有相差物镜，20X、40X、100X。
A.5.2.2显微摄像系统：显微镜、摄像头、电脑及显示屏。
A.5.2.3电子天平:精度0.001g。
A.5.2.4血球分类计数器。
A.5.2.5载玻片。
A.5.2.6移液器（10μL）
A.5.3样品与试样制备
按照A.3.2的规定。
A.5.4试验步骤
按如下步骤进行操作:
a）取试样一滴滴于载玻片一端，用另一边缘光滑的载玻片与有试样的载玻片呈35°夹角，将试
样均匀地拖布于载玻片上，自然风干，每试样制作两个抹片。
b）将已风干的抹片置于染色板上，用中性福尔马林固定液固定15min后，用清水缓缓冲去固定
液，自然风干。
c）将固定好后的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把姬姆萨染液滴于槽和抹片之间，让其
充满平槽并使抹片接触染液，1.5h后用清水缓缓冲去染液，凉干待检。
d）将制备好的抹片在显微镜（400～600倍）下观察精子的形态与评估。观察范围为抹片的左、GB××××—××××
10中、右三个区域，用血球分类计数器分别记录正常精子数和异常精子数，每个抹片累计观察
精子200个以上。
A.5.5试验数据处理
精子畸形率按式（5）计算：
A1
A=——×100………………………………………………（5）
S
式中：
A——精子畸形率，单位为百分比（%）；
A1——异常精子数，单位为个；
S——精子总数，单位为个。
平行测定结果用算术平均值表示，结果保留至小数点后一位数。
A.5.6精密度
在重复性条件下，两个样片平行测试结果的绝对差值不大于2。否则应重检。
A.6菌落总数
A.6.1试剂
A.6.1.1牛肉浸膏。
A.6.1.2蛋白胨。
A.6.1.3磷酸氢二钾(K2HPO4.3H2O)。
A.6.1.4氯化钠(NaCl)。
A.6.1.5琼脂粉。
A.6.1.6蒸馏水。
A.6.1.7营养琼脂培养基的制作：取牛肉浸膏5.0g、蛋白胨10.0g、磷酸氢二钾1.0g、氯化钠5.0g，
用蒸馏水1000mL溶解后加琼脂粉20g加温融解。矫正PH至7.4-7.6并用脱脂棉过滤，分装于三角烧
瓶中经高压灭菌（0.1ＭPa、20min）。
A.6.1.8商品营养琼脂培养基:使用按产品说明书。
A.6.2设备和器材
A.6.2.1恒温培养箱:37℃±1℃。
A.6.2.2恒温水浴锅:46℃±1℃。
A.6.2.3天平:精度0.001g。
A.6.2.4无菌操作台
A.6.3样品与试样制备
按照6.1的规定解冻。
A.6.4试验步骤
灭菌培养皿事先标注样品号，取样品2支,用酒精棉球将细管消毒后，将试样分别加入2个灭菌培GB××××—××××
11养皿内，在无菌操作台内，及时将15mL～20mL冷却至46℃的培养基倒入培养皿内，水平晃动培养皿
使精液混合均匀，同时做空白对照培养皿。待琼脂凝固后翻转培养皿，置37℃±1℃恒温培养箱箱内
培养48h取出。观察、统计每个培养皿内菌落数，菌落计数按照GB/T4789.2中6.3的规定。
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
A.6.5试验数据处理
菌落总数按式（6）计算:
n1＋n2
N＝————…………………………………………（6）
2
式中：
N——样品中细菌数，单位为CFU；
n1——第一平皿菌落数，单位为CFU；
n2——第二平皿菌落数，单位为CFU；
平行测定结果用算术平均值表示，结果取整数。GB××××—××××
12附录B
(资料性)
种公牛品种代码
种公牛品种代码见表B.1、表B.2、表B.3、表B.4、表B.5。
表B.1普通牛品种代码
表B.2瘤牛品种代码品种 代码 品种 代码 品种 代码 品种 代码
秦川牛 QC 南阳牛 NY 鲁西牛 LXP 晋南牛 JN
延边牛 YB 冀南牛 JNP 太行牛 TH平陆山地牛PLS
蒙古牛 MG 复州牛 FZ 徐州牛 XZ温岭高峰牛WLG
舟山牛 ZS 大别山牛 DBS 皖南牛 WN 闽南牛 MN
广丰牛 GF 吉安牛 JA 锦江牛 JJ 渤海黑牛 BHH
蒙山牛 MS 郏县红牛 XXH 枣北牛 ZB 巫陵牛 WL
雷琼牛 LQ 隆林牛 LL 南丹牛 NDP 涠洲牛 WZP
巴山牛 BS川南山地牛CNS 峨边花牛 EBH甘孜藏牛 GZZ
凉山牛 LS 平武牛 PW 三江牛 SJ 关岭牛 GL
黎平牛 LP 威宁牛 WNP 务川黑牛 WCH 邓川牛 DC
迪庆牛 DQ 滇中牛 DZ 文山牛 WS云南高峰牛YNG
邵通牛 ST阿沛甲砸牛APJ日喀则驼峰牛 RKT 西藏牛 XZP
樟木牛 ZM 柴达木牛 CDM 哈萨克牛 HSK 台湾牛 TW
阿勒泰白头牛 ALT 皖东牛 WD 夷陵牛 YLN 三河牛 SH
新疆褐牛 XJH 夏南牛 XN 延黄牛 YH 辽育白牛 LYB
蜀宣花牛 SXH 云岭牛 YL 荷斯坦牛 HS西门塔尔牛 XM
夏洛来牛 XL 利木赞牛 LM 安格斯牛 AG 娟珊牛 JS
德国黄牛 DGH南德文牛 ND 皮埃蒙特牛 PA 短角牛 DJ
海福特牛 HF 和牛 HN 比利时蓝牛 BLL瑞士褐牛 RSH
挪威红牛 NWH草原红牛 CYH —— —— —— ——
品种 代码 品种 代码 品种 代码 品种 代码GB××××—××××
13表B.3水牛品种代码
表B.4牦牛品种代码
表B.5大额牛品种代码婆罗门牛 PLM —— —— —— —— —— ——
品种 代码 品种 代码 品种 代码 品种 代码
海子水牛 HZ盱眙山区水牛XYS 温州水牛 WZ 东流水牛 DLS
江淮水牛 JHS 福安水牛 FAS 鄱阳湖水牛 PY 峡江水牛 XJ
信丰山地水牛XFS 信阳水牛 XY恩施山地水牛 ESS 江汉水牛 JH
滨湖水牛 BH 富钟水牛 FZS 地中海水牛 DZS 兴隆水牛 XLS
德昌水牛 DCS 涪陵水牛 FLS 宜宾水牛 YBS 贵州白水牛 GZB
贵州水牛 GZ槟榔江水牛 BLJ 德宏水牛 DH 滇东南水牛 DDN
盐津水牛 YJ 陕南水牛 SN 上海水牛 SHS 摩拉水牛 ML
尼里-拉菲水牛NL —— —— —— —— —— ——
品种 代码 品种 代码 品种 代码 品种 代码
九龙牦牛 JL 麦洼牦牛 MW 木里牦牛 MLM 中甸牦牛 ZD
娘亚牦牛NYM 帕里牦牛 PL 斯布牦牛 SB 西藏高山牦牛 XZG
甘南牦牛 GN天祝白牦牛 TZB青海高原牦牛 QHG 巴州牦牛 BZ
金川牦牛 JC 昌台牦牛 CT 类乌齐牦牛 LWQ 环湖牦牛 HH
雪多牦牛 XD 玉树牦牛 YS 大通牦牛 DT 阿什旦牦牛 ASD
品种 代码 品种 代码 品种 代码 品种 代码
独龙牛 DL —— —— —— —— —— ——