La démarche métrologique suivie pour développer une méthode d’analyse dans un laboratoire de recherche doit permettre de démontrer l’adéquation de ses performances au besoin analytique. L’objectif de ce travail a consisté à valider dans notre laboratoire une méthode d’analyse ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) de la progestérone plasmatique bovine, en qualité de méthode de référence. Les valeurs mesurées avec cette méthode d’analyse serviront de référence dans notre laboratoire pour étalonner un biocapteur électrochimique embarqué, développé dans le cadre du projet SmartRepro pour détecter les ovulations chez les vaches et permettre aux éleveurs de savoir à quel moment pratiquer l’insémination artificielle. Cette détection sera basée sur le prélèvement de fluides interstitiels et le monitoring des hormones impliquées dans la régulation du cycle ovarien et le déclenchement de l’ovulation, dont la progestérone. La démarche de validation de la méthode d’analyse pour ce projet a consisté à suivre deux étapes métrologiques : 1/ Vérifier sa conformité au regard de performances préconisées par la Food and Drug Administration (FDA) qui propose des limites d’acceptabilité de ± 30 % pour son exactitude, et 2/ Valider les performances de la méthode d’analyse au regard de l’objectif scientifique du projet SmartRepro. Cette démarche a permis d’obtenir le modèle de l’incertitude de mesure (IM) élargie suivant : U(Y) = 0,2004Y0.9684. Il a été démontré, en utilisant l’IM et le seuil de discrimination (SD) de la méthode, qu’elle était capable de décrire fidèlement l’évolution du taux de progestérone plasmatique. C’est cette capacité qui sera évaluée dans un 2e temps pour le biocapteur électronique embarqué, en prenant comme référence les valeurs obtenues par la méthode de dosage de la progestérone présentée dans cet article. De plus, les informations métrologiques obtenues permettront d’évaluer la capacité de cette méthode de référence à être utilisée dans de futurs projets de recherche.