# Congrès Québécois en Santé respiratoire
14 et 15 novembre 2013 • Montréal, Québec

## 1
OSELTAMIVIR-ZANAMIVIR COMBINATION DOES NOT IMPROVE EFFICACY OVER MONOTHERAPY IN MICE INFECTED WITH INFLUENZA A(H1N1)PDM09 VIRUSES

A Pizzorno, Y Abed, C Rhéaume, G Boivin
Research Center in Infectious Diseases of the CHUL and Laval
University, Québec, QC

**BACKGROUND:** Neuraminidase inhibitors (NAIs) such as oseltamivir (O) and zanamivir (Z) play a central role in the control of influenza infections. However, the emergence and dissemination of antiviral resistance threaten the efficacy of this intervention and advocate for innovative therapeutic strategies. The objective of this study was to evaluate in mice the efficacy of O-Z combination compared to that of monotherapy, for the treatment of experimental infections with influenza A(H1N1)pdm09 viruses.

**METHODS:** Recombinant A(H1N1)pdm09 wild-type (WT) and O-resistant H275Y NA mutant viruses were generated by reverse genetics. Groups of twelve C57BL/6 mice were inoculated intranasally with saline, the WT or H275Y viruses. To mimic the clinical condition, infected mice were treated 48h p.i. with either saline, O by gavage, Z intranasally, or an O-Z combination, twice daily for 5 days. Weight loss and mortality were monitored for 14 days. On day 4 p.i., four mice were sacrificed to determine lung viral titers (LVT) by plaque assay in ST6Gall-MDCK cells.

**RESULTS:** In mice infected with the WT virus, treatment with Z or O-Z resulted in 100% survival, vs 50% for the O group and 12.5% for the untreated group. Z monotherapy also led to a significant reduction in weight loss compared to O as well as lower LVT (5.7E^6 vs 1.7E^7 PFU mL, respectively). Intermediate values were observed for the O-Z combination. In the H275Y group, the efficacy of O-Z was comparable to that of Z and significantly higher than that of O in terms of survival (85.7% and 100% vs 12.5%, respectively), weight loss and LVT (5.4E^6 and 3.5E^6 vs 2.8E^8 PFU/mL, respectively). The evaluation of these treatments in mice infected with influenza A(H3N2) is in progress.

**CONCLUSIONS:** Z monotherapy had greater efficacy than O in mice infected with A(H1N1)pdm09. O-Z bitherapy conferred no significant advantage over Z monotherapy. Development of new molecules and synergistic combined therapies are a necessity.

## 2
IMPLICATION DES MICROARNS DANS LE DÉVELOPPEMENT PULMONAIRE ET L'INFLUENCE DES ANDROGÈNES SUR LE PROFIL D'EXPRESSION: LE MODÈLE DU SYNDROME DE LA DÉTRESSE RESPIRATOIRE (SDR)

W Bouhaddioui, P Provost, Y Tremblay
Centre de recherche du CHUQ-CRCHUL de Québec, Département d'obstétrique et gynécologie, Québec, QC

**OBJECTIF:** Les bébés nés prématurés ont 60% de risque de développer le SDR. La cause majeure de cette pathologie est un retard dans la synthèse et libération du surfactant par les cellules épithéliales de Type 2. Les androgènes jouent un rôle important dans la maturation de ces cellules, il a été démontré que les androgènes présents dans le poumon retardent la maturation pulmonaire et la production du surfactant. Également les microARNs jouent un rôle important dans le développement pulmonaire. Le but de ce projet est d'analyser sous l'effet des androgènes l'implication des microARNs pulmonaires dans la production du surfactant. Il a été démontré que le profil d'expression des microARNs change dans un tissus androgéno-dépendant tel la prostate, en présence et en absence d'androgènes. Actuellement, il existe peu de données à propos de l'implication des microARNs dans le SDR.

**MÉTHODES:** Nous avons étudié le profil d'expression des microARNs sur des poumons foetaux mâles aux âges gestationnels GD17 et GD18. Nous

avons deux groupes d'animaux traités avec le flutamide ou le véhicule. Les profils d'expression des microARNs ont été analysés par micro-puces à ADN. L'expression de certains micro-ARNs a été confirmée par qPCR.

**RÉSULTATS:** L'analyse des résultats a montré une différence dans le profil d'expression de certains micro-ARNs, cette différence est flutamide dépendante et âge gestationnel dépendant. Des gènes impliqués dans la différenciation des PTII ainsi que les micro-ARNs correspondants montrent un profil d'expression différent en présence de flutamide.

**CONCLUSION:** Les résultats obtenus supportent le rôle important des androgènes dans la régulation des micro-ARNs ainsi que leurs gènes cibles impliqués dans le développement du syndrome de détresse respiratoire chez les bébés nés prématurés

## 3
L'IMPLICATION DES SÉQUENCES 3' NON TRADUITES (3'UTR) DE L'ARNM ALPHA-ENAC DANS LA MODULATION DE SON EXPRESSION DANS LES CELLULES ÉPITHÉLIALES ALVÉOLAIRES

F Mignault, M Pascariu, J Laperle, A Dagenais, Y Berthiaume
Institut de recherches cliniques de Montréal (IRCM), Montréal, QC

Le canal épithélial sodique (ENaC) est responsable du transport actif de sodium permettant le mouvement des fluides à travers l'éphélium alvéolaire dans les poumons. Ce mécanisme est essentiel pour la résolution de l'oedème pulmonaire tel que dans le syndrome de détresse respiratoire aigu (SDRA). Les conditions pro-inflammatoires comme le TNF-α participent au développement du SDRA en diminuant l'expression et l'activité du canal épithélial sodique (ENaC). Récemment, nous avons montré qu'un stress cellulaire diminuit l'expression des ARNm aENaC dans les cellules alvéolaires par un mécanisme indépendant de l'activité transcriptionnelle du promoteur. Pour étudier l'implication des séquences 3' non traduites (3'UTR) de l'ARNm aENaC dans la modulation du messager, nous avons développé un modèle Tet-Off pour inhiber l'expression du transcrit à l'aide de la doxycycline. La demi-vie (T1/2) de l'ARNm aENaC était de 1 h, un temps beaucoup plus court que celui rapportée dans la littérature avec l'actinomycine D (Act D) (~15 h). Différents mutants de délétion ont présenté des T1/2 variant entre 0,5 à 6 h mettant en évidence trois domaines conservés dans le 3'UTR de l'ARNm aENaC possiblement impliqués dans la modulation de sa stabilité. Ces domaines présentent des structures secondaires (hairpin) favorisant le recrutement de protéines. Ces protéines liant l'ARN sont connues pour moduler la stabilité des ARNm en se fixant sur leur 3'UTR. Celles-ci ont été enrichies par chromatographie d'affinité et plusieurs de ces protéines ont été identifiées par spectrométrie de masse afin d'évaluer leur implication dans la modulation de l'expression de l'ARNm aENaC. Le 3'UTR du messager pourrait donc jouer un rôle important dans la modulation de la stabilité du messager via l'interaction avec des facteurs trans. Ces résultats présentent un nouveau mécanisme de modulation du canal ENaC qui pourrait permettre le développement de nouvelles stratégies dans la résolution de l'oedème pulmonaire.

## 4
RÔLE DE LA CCL26 (ÉOTAXINE-3) DANS LE RECRUTEMENT DES ÉOSINOPHILES DANS LA SÉVÉRITÉ DE L'ASTHME

MC Larose, V Prévost, J Chakir, N Flamand, M Laviolette
Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec,
Québec, QC

**OBJECTIF:** Dans l'asthme, on observe un recrutement d'éosinophiles qui corrèle avec la sévérité de la maladie. Ce recrutement dépend de facteurs chimiotactiques dont les éotaxines, notamment secrétées par les cellules épithéliales bronchiques (CEB). Sachant que la CCL26 induit plus fortement
la migration des éosinophiles d'asthmatiques que CCL11 et CCL24, nous postulons que CCL26 est fortement exprimée par les CEB d'asthmatiques et que cette expression corrèle avec la sévérité de la maladie.

**MÉTHODES** : Des CEB et des coupes histologiques ont été obtenues de biopsies bronchiques de sujets avec différentes sévérités d'asthme. L'ARNm des chimiokines humaines a été quantifié par qPCR chez des CEB stimulées ou non avec de l'IL-13, une cytokine importante dans l'asthme. Dans le surnageant des CEB, l'expression protéique de la CCL26 et de la périositine ont été mesurées par ELISA. Sur les coupes histologiques, l'expression protéique de CCL26 a été évaluée par immuno-histochimie.

**RÉSULTATS** : Parmi toutes les chimiokines, seul l'ARNm de la CCL26 est fortement augmenté chez les CEB stimulées avec l'IL-13. L'expression génique et protéique de CCL26 augmente avec le temps et elle est plus importante chez les CEB d'asthmatiques sévères éosinophiliques. L'expression protéique de CCL26 corrèle significativement avec celle de la périostine. De plus, l'analyse immunohistochimique démontre une plus forte expression de CCL26 dans la muqueuse bronchique d'asthmatiques sévères éosinophiliques.

**CONCLUSION** : Les CEB activées expriment fortement et sélective-ment CCL26 in vitro. Cette expression est amplifiée chez les CEB et dans la muqueuse bronchique des sujets avec un asthme sévère éosinophilique. Ces résultats dévoilent le rôle important du CCL26 dans le recrutement et l'activation des éosinophiles, et dans la sévérité de l'asthme (MCL sup-portée par une bourse du PFSRQ; NF et ML ont contribué de façon équiva-lente; financé par les IRSC et la Chaire de pneumologie de la Fondation J-D.Bégin).

# 5
## LA KINASE TPL2 ET LE RÉCEPTEUR DE L'EGF

### CONTRIBUENT À L'HYPERACTIVATION DE LA VOIE MAPK ERK1/ERK2 DES CELLULES ÉPITHÉLIALES PULMONAIRES DE PATIENTS FIBROSE KYSTIQUE EXPOSÉES À PSEUDOMONAS AERUGINOSA

G Martel, L Roussel, S Rousseau

Institut de recherche du Centre universitaire de santé McGill, Montréal, QC

**INTRODUCTION** : La fibrose kystique (FK) est un défaut génétique récessif qui affecte le gène du régulateur transmembranaire de la fibrose kystique (CFTR). La perte de l'activité de CFTR amène une hypersécrétion de mucus, une inflammation excessive du tissu pulmonaire, une diminution de la capacité pulmonaire ainsi qu'une infection chronique à Pseudomonas aeruginosa (Psa). Notre groupe a montré que l'incubation de cellules pulmonaires épithéliales en présence de lysat de Psa (PsaL) induit l'activation de ER1/2 et la sécrétion d'IL-6/8. La perte de CFTR amplifie l'activation de ERK1/2 et la réponse immunitaire lors de l'incubation avec PsaL. La phosphorylation de ERK1/2 est sous le contrôle de deux kinases en amont, soit les MEK1/2. Ces dernières sont activées par les kinases Raf-1 et/ou Tpl-2 qui tirent respectivement leurs signaux des facteurs de croissance ou des récepteurs de reconnaissance des pathogènes.

**HYPOTHÈSE** : Notre hypothèse de recherche est que l'inflammation provoquée par Psa peut être amoindie par la neutralisation des voies de signalisation en amont de ERK1/2.

**MÉTHODES** : La phosphorylation de EGFR a été mesurée dans les coupes histologiques de poumon FK et non-FK. La phosphorylation de ERK1/2 et la production d'IL-8 ont été mesurés dans des cellules FK et non-FK après stimulation par PsaL en présence ou non d'un inhibiteur de Tpl2 ou de EGFR.

**RÉSULTATS** : Nous avons découvert que le EGFR est fortement phosphorylé dans le poumon FK. L'activation de ERK1/2 est dépendante de TPL2 et amplifiée par le EGFR dans les cellules FK. L'expression d'IL-8 est exclusivement contrôlée par le EGFR dans les cellules FK.

**CONCLUSION** : Nos résultats indiquent que TPL2 et EGFR sont des enzymes clés dans la voie de signalisation responsable de la réponse immunitaire lors de l'infection par Psa. Nos résultats suggerent aussi que la kinase TPL2 agit en amont de EGFR et que son inhibition pourrait être un moyen efficace de diminuer l'inflammation chez les patients FK.

# 6
## BEDSIDE MONITORING OF WORK OF BREATHING AND TRANSPULMONARY PRESSURE IN VENTILATED CHILDREN: FEASIBILITY, SAFETY AND EFFICACY

S Essouri¹, G Emeriaud¹, K Newth², P Jouvet¹

¹Centre de recherche CHU Ste Justine, Université de Montréal, Montréal, QC; ²Children Hospital of Los Angeles, California, USA

Mechanical ventilation is essential for critically ill children but it can induce lung injury known as VILI. Lung volumes are currently managed by ventilator settings, but several clinical trials failed to show that ventilation prescribed with well designed protocols improves mortality in patients with severe lung diseases. The monitoring of additional parameters may be necessary to decrease ventilation related complications. VILI is proportional to alveolar strain, which can be estimated by transpulmonary pressure and may be decreased with ventilatory support continuously adapted to patients WOB. Currently, neither TPP nor WOB are monitored by the ventilator used in pediatric. We will study the feasibility, efficacy and safety of the monitoring at bedside of those two physiological parameters with commercially available ventilators. The main objective is to evaluate the reliability of EAdi to detect changes in WOB. We designed a naso-gastric tube with an esophageal pressure port allowing calculation of esophageal pressure time product (PTPes), a valid surrogate of WOB, and the usual microelectrodes for EAdi monitoring. Twenty patients will be studied in CHU Sainte-Justine PICU. Edi and PTPes will be simultaneously recorded during the weaning stage of ventilation. The primary endpoint is to confirm the correlation between Edi and PTP. Secondary endpoints will define some physiological predictive risks of weaning failure. Thus, we want to determine the size and scale of TPP at Pplat and PEEP in children with normal or reduced chest wall compliance, during usual ventilatory care. Data will be collected from mechanically ventilated pediatric patients from inclusion to extubation. The primary endpoint of this study will be the percentage of time with TPP monitoring available by the AVEA ventilator. This clinical research will provide crucial information for clinical practice, on the feasibility and reliability of the monitoring of WOB and TPP at the bedside in children

# 7
## LES RÉSOLVINES ET LE MAG-DPA RÉDUISENT L'HYPERRÉACTIVITÉ INDUITE SUR LES ARTÈRES PULMONAIRES HUMAINES PAR L'ENDOTHÉLINE-1 EN DIMINUANT L'EXPRESSION DE TMEM 16 ET LA PHOSPHORYLATION DE LA CPI-17

R Hiram¹, E Rizcallah¹, M Sirois¹, C Sirois¹, C Morin², E Rousseau¹

¹Faculté de Médecine et Science Santé de l'Université de Sherbrooke, Sherbrooke; ²UQAR Rimouski, Québec, QC

L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie rare, caractérisée par une inflammation et un remodelage des vaisseaux qui conduisent à une augmentation nette de leur résistance. Des traitements transitoires ont été proposés mais l'HTAP reste associée à une forte morbidité. Des études ont démontré le rôle potentiel des dérivés d'oméga-3 tels que les monoacylglycérides de DHA (MAG-DHA) dans l'HTAP (Morin et al., 2008). Le But du travail est de préciser le mode d'action de la Résolvine D1 (RvD1) sur les artères pulmonaires humaines (APH). Objectifs spécifiques : 1) Démontrer les effets du MAG-DPA et de la RvD1 sur les mécanismes qui contrôlent la tension des APH traitées ou non avec 5 nM d'endothéline-1 (ET-1) ; 2) Quantifier les effets du KCl, de la 5-HT, du U-46619 et du PDBu sur les APH prétraitées ou non à l'ET-1, à l'ET-1 + RvD1 ou à l'ET-1 + MAG-DPA pendant 24 h. 3) Mesurer les changements de sensibilité au Ca2+ après perméabilisation des APH avec la bêta-escine. 4) Analyser par Immunobuvardage, les niveaux de CPI-17, P-CPI-17, TMEM 16 A et GPCR32. Nos résultats démontrent que rapport au contrôle, les APH traitées avec 5 nM d'ET-1 développent une hyperréactivité confirmée par des tests pharmacologiques avec 30 nM du U-46619 (agoniste des récepteurs TP), 1 µM 5-HT et 1 µM de PDBu. Bien que la RvD1 n'ait pas d'effet relaxant en condition aiguë (Morin et al., 2010), 24 h de prétraitement avec 300 nM de RvD1 réduit d'environ 30 % l'hyperconstriction induite par l'ET-1 et les réponses aux différents stimuli.
De la même façon, 1 µM de MAG-DPA réduit de 40 % les tensions mécaniques induites (ET-1 + les Agonistes). L'analyse par Western Blot démontrée une diminution nette du TMEM 16 A (un canal Cl⁻ Ca2+ dépendant) et de la phosphorylation de la CPI-17 en présence de RvD1 et de MAG-DPA. Dans un contexte d'HTAP induite, ces substances à effets antiinflammatoires pourraient aussi avoir des effets antihypertenseurs potentiels.

# 8 RÔLE POTENTIEL DES CANAUX POTASSIQUES KVLQT1 ET KATP DANS LA RÉSOLUTION DES PARAMÈTRES DU SYNDROME DE DÉTRESSE RESPIRATOIRE

A Girault, A Privé, E Maillé, E Brochiero
Centre de Recherche du CHUM, Montréal, QC

Le syndrome de détresse respiratoire aigu (SDRA) présente comme caractéristiques fondamentales des lésions endothélio-alvéolaires graves et un remodelage de l'épithélium. Or, il a été montré que la régénération de l'épithélium et la résolution secondaire de l'oedème étaient fondamentaux pour la guérison des patients souffrant de SDRA. Nous avons précédemment montré que les canaux KvLQT1 et KATP contrôlaient la réabsorption de Na+, participaient à la clairance alvéolaire et régulaient également la réparation alvéolaire in vitro. Nous avons donc posé l'hypothèse que ceux-ci pouvaient moduler la résolution des paramètres de SDRA in vivo. A l'aide d'un modèle de souris « knock-out » pour le canal KvLQT1 (KO), nous avons observé que les cellules alvéolaires isolées de ces souris présentaient une vitesse de réparation réduite, dans un modèle de plaies mécaniques, comparativement aux cellules des souris WT. De plus, l'absence de KvLQT1 dans les cellules isolées des souris KO entraîne une réduction du transport de Na+ comparativement aux WT. Les capacités de résolution d'un oedème induit par l'injection de thiourée chez la souris ont alors été évaluées. Nous avons ainsi observé que le ratio « wet/dry », indicateur de l'oedème, n'était pas significativement différent dans des souris KO et des souris WT, suggérant un mécanisme compensatoire, éventuellement par un autre canal K+. Toutefois, l'injection d'activateurs des canaux KvLQT1 et KATP favorise la résolution de l'oedème chez les souris WT alors que l'effet bénéfique de la activation du KvLQT1 disparaît chez les souris KO. Ces résultats sont en accord avec nos récentes données in vitro, montrant une stimulation de la clairance et de la réparation alvéolaire suite à l'activation des canaux KvLQT1 et KATP.

Ces résultats suggèrent une utilisation thérapeutique potentielle de l'activation des canaux potassiques dans la résolution des paramètres du SDRA.
Financé par les IRSC, le FRQS et le RSR du FRQS.

# 9 LA BRONCHODILATATION À COURTE DURÉE D'ACTION N'AFFECTE PAS LA MORPHOLOGIE DES BIOPIES ENDOBRONCHIQUES DANS UN MODÈLE ÉQUIN D'ASTHME

M Bullone, M Chevigny, M Allano, G Beauchamp, JP Lavoie
Département de Sciences Cliniques, Faculté de Médecine
Vétérinaire, Université de Montréal, Montréal, QC

L'augmentation de masse du muscle lisse bronchique est un trait distinctif du remodelage asthmatique. Cependant, le défi antigénique aigue semble réduire plutôt qu'augmenter la masse de muscle lisse dans les biopsies endobronchiques chez l'homme et chez le cheval, ce qui a été attribué à une dédifférentiation des myocytes bronchiques en myofibroblastes. L'hypothèse de cette étude est que la bronchoconstriction ainsi qu'autres facteurs techniques contribuent à cette diminution apparente de la masse de muscle lisse. Des chevaux asthmatiques (n=6) en exacerbation ou en rémission clinique de la maladie (n=6) et 6 chevaux contrôles ont été étudiés. La fonction respiratoire était évaluée par oscillométrie forcée et les biopsies endobronchiques obtenues avec 2 pinces différentes, sur des carinae de tailles variables, en présence ou en absence d'un bronchodilatateur court-action. La qualité et l'analyse histomorphométrique (stéréologie) des biopsies ont été évaluées avec un modèle statistique multivarié.

La bronchodilatation n'a eu aucun effet sur l'histomorphométrie des biopsies. Celles-ci étaient significativement plus grosses chez les chevaux en exacerbation que ceux en rémission ou que chez les contrôles (p<0,05).
La qualité histologique était affectée par la taille de la carina (p=0,02), avec

les carinae les plus petites produisant des biopsies de meilleure qualité. Le volume du muscle lisse par unité de surface de membrane basale était plus grand lors de rémission clinique, comparé aux 2 autres groupes (p<0,05). En conclusion, la taille et la qualité des biopsies sont affectées par l'état de la maladie et par la taille des carinae, respectivement. L'administration d'un bronchodilatateur n'a pas d'effet sur les paramètres évalués, ce qui suggère que l'augmentation de la masse du muscle lisse observée chez les asthmatiques en rémission clinique n'est pas due à un artéfact technique, mais plutôt à un changement structural du tissu bronchique.

# 10 IDENTIFICATION DES GÈNES DE SUSCEPTIBILITÉ À L'ASTHME DE FEMMES ADULTES CANADIENNES-FRANÇAISES

JC Bérubé, É Lavoie-Charland, N Gaudreault, L Sbarra, C Henry, LP Boulet, Y Bossé

Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC

L'asthme est une maladie hétérogène à laquelle plusieurs gènes de susceptibilité ont été associés. Plusieurs autres facteurs génétiques pourraient être identifiés en étudiant des groupes de sujets asthmatiques plus homogènes. Cette présente étude vise à identifier les polymorphismes nucléotidiques simples (SNPs) associés à l'asthme de femmes adultes d'ascendance canadienne-française.

Uncriblage génomique par association a été effectué en utilisant des pools d'ADN de 240 femmes asthmatiques allergiques et 120 femmes non-asthmatiques allergiques. Le génotypage a été réalisé à l'aide de la puce Illumina OmniExpress en six réplicats pour chaque pool. Les 730 525 SNPs interrogés ont été ordonnés par leur probabilité d'être associés à l'asthme selon leur score de "silhouette" calculé par le logiciel GenePool. Un total de 38 SNPs ont été sélectionnés pour le génotypage individuel dans une cohorte constituée de 349 femmes asthmatiques et de 261 femmes non-asthmatiques.

Les SNPs rs17655581 (P=8.2×10⁻⁵) et rs7980829 (P=2.4×10⁻⁴) se sont avérés les plus significatifs. Ceux-ci se situent dans des régions intergéniques non-caractérisées pour l'asthme. Le troisième signal en importance provient du SNP rs803010 (P=4.4×10⁻⁴) situé dans le promoteur du gène PTGDR, qui a déjà été associé à l'asthme chez les individus d'ascendance européenne.

Cecriblage génomique chez des femmes adultes canadiennes-françaises a permis d'identifier de nouvelles régions chromosomiques de susceptibilité pour l'asthme. Cette étude supporte également le rôle de PTGDR dans un sous-groupe plus homogène de patientes asthmatiques. Une validation complémentaire est requise dans des cohortes indépendantes de femmes adultes asthmatiques d'ascendance européenne.

# 11 LES ANALOGUES DE LA SPHINGOSINE INHIBENT L'ASTHME EXPÉRIMENTAL INDUIT PAR DERMATOPHAGOIDES PTERONYSSINUS

L Lai, D Gendron, AM Lemay, D Marsolais
Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC

**INTRODUCTION** : L'asthme est une maladie chronique qui touchent près de 10% de la population canadienne et pour laquelle il n'y a aucun traitement curatif. Les analogues de la sphingosine donnés en prophylaxie peuvent interférer avec l'asthme expérimental induit avec de l'ovalbumine. On ignore toutefois si ces drogues peuvent interférer avec de l'asthme expérimental établi et induit par un allergène naturel. Notre but était de déterminer si l'analogue de la sphingosine AAL-R peut interférer l'asthme expérimental induit par des Dermatophagoides pteronyssinus (D.p.). Nos objectifs étaient de caractériser l'initiation de la réponse inflammatoire allergique et de déterminer si l'administration de AAL-R une fois la réponse inflammatoire initiée pouvait inhiber le développement de l'asthme expérimental.

**MÉTHODES** : Les souris ont subis des instillations intra nasale de D.p. ou de saline pendant 10 jours et on était traitées pendant les 4 derniers jours avec AAL-R (0,1 mg/kg), son énantiomère non phosphorylable AAL-S, ou avec leur véhicule. Au jour 11, elles ont été soumises à un test
d'hyperréactivité bronchique à la méthacholine. Les éosinophiles ont été quantifiés dans les lavages broncho-alvéolaire (LBA) ; les poumons ont été prélevés pour analyses histologiques et quantification des lymphocytes en cytométrie de flux.

**RÉSULTATS** : AAL-R interfère avec l'hyperréactivité des voies respiratoires induite par D.p. Le nombre d'éosinophiles dans les LBA est augmenté dans les souris HDM par rapport aux souris salines. AAL-R a réduit de 63% ce nombre, tandis que son énantiomère non phosphorylable AAL-S, a eu un effet partiel sur l'accumulation des éosinophiles dans les lavages.

**CONCLUSION** : Les analogues de la sphingosine inhibent l'hyperréactivité bronchique, et l'inflammation éosinophilique induit par D.p. L'effet observé sur l'éosinophilie semble être partiellement indépendante de la phosphorylation des analogues de la sphingosine.

## 12

### UN TONUS ÉLEVÉ AUGMENTE LA RÉACTIVITÉ BRONCHIQUE DANS LES SOURIS EN AUGMENTANT LA CAPACITÉ CONTRACTILE DU MUSCLE LISSE DES VOIES RESPIRATOIRES

A Lee-Gosselin, D Gendron, M-R Blanchet, D Marsolais, Y Bossé Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC

L'hyperréactivité bronchique et un tonus élevé du muscle lisse sont des caractéristiques de l'asthme. Il est encore inconnu s'il existe un lien de causalité entre ces signes cliniques. Nous avons toutefois démontré dans des trachées ovines excisées, qu'un tonus élevé (i.e. activation maintenue du muscle lisse en présence constante d'un spasmogène) augmentait la capacité contractile du muscle lisse au fil du temps.

**OBJECTIFS** : 1) Mesurer l'effet d'un tonus élevé sur la réactivité bronchique chez la souris in vivo. 2) Déterminer si la réponse obtenue est liée à un changement de la contractilité du muscle lisse.

**MÉTHODES** : La réactivité bronchique in vivo a été évaluée avec l'appareil flexiVent en mesurant les changements dans la résistance du système respiratoire chez des souris vivantes, anesthésiées, trachéotomisées et ventilées mécaniquement. Les souris étaient exposées à une procédure contrôle (groupe 1) ou à des doses répétitives de méthacholine (MCh) nébulisée (groupe 2) de manière à induire un tonus élevé durant 20 minutes. La résistance en réponse à une dose finale élevée de MCh était comparée entre les deux groupes expérimentaux. Afin de confirmer que des changements au niveau du muscle lisse étaient responsables de cette réponse altérée, la capacité contractile d'anneaux trachéaux isolés de souris a été mesurée en réponse à une concentration élevée de MCh (10-4 M) et ce, avec et sans pré-exposition à un tonus élevé induit par la présence continue d'un spasmogène.

**RÉSULTATS** : La réactivité bronchique in vivo était augmentée dans les animaux pré-exposés à un tonus élevé. Pareillement, les anneaux trachéaux préalablement soumis à un agent augmentant le tonus généraient plus de force en réponse à un même stimulus.

**CONCLUSION** : Nos résultats suggèrent qu'un tonus élevé, tel que retrouvé dans les voies respiratoires astmatiques, pourrait jouer un rôle dans l'hyperréactivité bronchique en augmentant la capacité contractile du muscle lisse des voies respiratoires.

## 13

### HYPERMÉTHYLATION DU PROMOTEUR DU GÈNE DU RÉCEPTEUR DE TYPE II DE L'INTERLEUKINE 1 (IL1R2) DANS L'ASTHME ALLERGIQUE

V Gagné-Ouellet¹, S-P Guay², VT Vaillancourt¹, L Bouchard², C Laprise¹

¹UQAC, Chicoutimi; ²Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC

**CONTEXTE** : IL1R2, l'un des deux principaux récepteurs de l'IL1, a été associé à l'asthme dans plusieurs études, incluant la collection familiale du Saguenay-Lac-Saint-Jean (étude SLSJ). L'intérêt d'étudier l'épigénétique dans l'asthme est élevé puisque cette discipline pourrait permettre de documenter la composante environnementale de la maladie en plus d'expliquer une partie de sa variabilité phénomérique.

**OBJECTIF** : L'objectif du présent projet était de faire l'étude comparative du profil de méthylation et d'expression du gène IL1R2 entre des individus

atteints d'asthme allergique appariés à des témoins, sans asthme et sans atopie.

**MÉTHODOLOGIE** : Le niveau de méthylation de l'ADN a été mesuré dans le promoteur du gène IL1R2 à partir de leucocytes de 87 individus de l'étude SLSJ à l'aide de la méthode de bis-pyroséquençage. L'expression a été mesurée par qRT-PCR dans un sous-échantillon de 37 individus. Les analyses ont été effectuées à l'aide du logiciel SPSS.

**RÉSULTATS** : L'étude a permis de déterminer qu'il existe une différence de méthylation de 3% pour le gène IL1R2 entre les individus astmatiques allergiques et témoins (34,9±10,6 vs 31,3±7,6; p=0,037). De plus, un plus haut niveau de méthylation de l'ADN est associé à une plus faible expression de l'ARNm (r=-0,449; p=0,007).

**DISCUSSION** : L'hyperméthylation d'IL1R2 pourrait entraîner une diminution de la production de cette protéine et donc de la formation de complexes IL1/IL1R2. Ceci pourrait expliquer, en partie, la persistance de l'inflammation dans l'asthme allergique.

**CONCLUSION** : Cette étude a permis de démontrer qu'il existe une signature épigénétique pour IL1R2, laquelle est corrélée à une différence d'expression de l'ARNm, ce qui témoigne du rôle de cette voie biologique et de l'épigénétique dans l'asthme.

### Références

1. Gut, 2011;60:1739-53; 2. Human Reproduction, 2009;24:2193-204;

3. Science, 1993;261:472-5; 4. Journal of Biological Chemistry, 1994;269: 12403-6; 5. Omics, 2013; 6. Pneumologia, 2009;58:89-94

## 14

### IMPACT DU 17(18)-EPETE, UN DÉRIVÉ ÉPOXYDÉ DE L'EPA, SUR L'HYPERRÉACTIVITÉ IN VITRO DES MUSCLES LISSES DES VOIES RESPIRATOIRES

R Khaddaj-Mallat, R Hiram, Y Tabet, É Rousseau Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC

L'asthme est une maladie caractérisée par une inflammation et une hyperréactivité des muscles lisses des voies respiratoires (MLVR). Des études antérieures ont démontré le rôle potentiel des dérivés d'oméga-3 sur l'hyperréactivité et l'inflammation des MLVR (Morin et al. 2010). Le but du projet est d'analyser les effets des époxy-éicosanoïdes sur les réponses contractiles des trachées de cobayes rendues hyperréactives après 3 jours en culture. Les objectifs spécifiques sont : 1) Quantifier les effets du Méthacholine, de l'histamine, de l'U-46619 (un agoniste du récepteur TP) et du KCl sur des trachées des cobayes cultivées durant 3 jours et prétraitées, ou non par 300 nM 17(18)-EpETE. 2) Démontrer le rôle du prétraitement par 300 nM 17(18)-EpETE sur la sensibilité au Ca2+ des trachées mis en culture pendant 3 jours en activant ou pas la voie PKC/CPI-17. 3) Évaluer par Western-blot les niveaux de détection d'IKB, P-NFKB, CPI-17, P-CPI-17 et de la beta-actin. Nos résultats démontrent qu'un prétraitement avec 300 nM 17(18)-EpETE induit une diminution de 30% de tension mécanique des tissus devenues hyperréactifs après 3 jours en culture. De plus, la perméabilisation à la bêta-escine montre une diminution de la sensibilité au Ca2+des tissus hyperréactifs prétraités au 17(18)-EpETE qui impliquerait la voie PKC/CPI-17 tel que suggère les mesures réalisées en présence de 1pM PDBu. Par ailleurs, le traitement des MLVR par le Rosiglitazone, un activateur du PPAR gamma réduit le niveau de détection des P-NFKB et P-CPI-17 tandis que le traitement par son inhibiteur, le GW-9662 entraine une augmentation de niveau de détection de ces protéines. Ce modèle d'hyperréactivité in vitro nous a permis de démontrer que le 17(18)-EpETE est un modulateur biochimique et pharmacologique de l'hyperréactivité et de l'hypersensibilité des tissus mis en culture et que la voix PPAR gamma participe à promouvoir un contexte inflammatoire in vitro, similaire à celui observé dans l'Asthme.
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# MODULATION OF FCEPSILONRI CLUSTERING-INDUCED BASOPHILS ACTIVATION BY 15-LIPOXYGENASE METABOLITES

K Maghn¹, M Welman¹, N Flamand², C Laprise³

¹Centre de recherche de l'hôpital du Sacré-Coeur de Montréal, Université de Montréal, Montréal; ²Département de médecine, Université Laval, Québec; ³Université du Québec à Chicoutimi, Département de Sciences Fondamentales, Chicoutimi, QC

**INTRODUCTION:** The ALOX15 gene encoding for 15-lipoxygenase (15-LO) has been identified as a candidate gene for protection from allergic asthma and airway hyperresponsiveness. Metabolites from the 15-LO pathway either enhance (e.g. exoxins) or decrease (e.g, lipoxins) inflammation. Therefore, the biological role of 15-LO and its lipodome in asthma pathogenesis is still unclear. Our hypothesis is that basophil function is regulated differently according to the biochemical nature of 15-LO metabolites.

**OBJECTIVE:** To examine the role of 15-LO metabolites in the modulation of basophils function.

**METHODOLOGY:** Rat RBL-2H3 basophilic cells (RBL) were used as a model of FceRI-bearing cells. RBL were pulsed with IgE prior to antigen clustering of FceRI. 15-LO metabolites were incubated with cells for 15 min prior to IgE-FceRI complex aggregation. Levels of b-hexosaminidase were measured as an indicator of the levels of cell degranulation. C50 and C100 corresponded to antigen concentrations inducing 50% or 100% degranulation of IgE-pulsed RBL, respectively.

**RESULTS:** Our preliminary data indicated that all the 15-LO metabolites examined to date have no effect on the constitutive degranulation of RBL or IgE-pulsed RBL. Interestingly, 5(S),6(R)-Lipoxin A4, 5(S),15(S)-DihETE, 8(S),15(S)-Di-HETE and 15(S)-HETE inhibited C50-induced (nearly 50% inhibition), and to a lesser extent, C100-induced (10% to 40% inhibition) RBL degranulation; 15(R)-HETE showing the lesser inhibitory effect. In contrast, the 15-LO-derived endocannabinoids exoin C4-glycerol and C4-ethanolamide showed no significant effect on FceRI clustering-induced cell degranulation.

**CONCLUSION:** Our study identifies a role for some 15-LO metabolites as anti-inflammatory lipids in the modulation of basophils function. This finding further supports a role for the ALOX15 gene for protection from allergic asthma.

Supported by a grant from the Fonds Québécois de la Recherche en Santé.

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# DIFFÉRENCES SEXUELLES DANS LES PROFILS D'EXPRESSION DES GÈNES DU POUMON FOETAL EN DÉVELOPPEMENT : ÉTUDE DES CULTURES PULMONAIRES ENRICHIES EN CELLULES FIBROBLASTIQUES ET ÉPITHÉLIALES

M Kaczmarczyk, C Gilbert, S Tremblay, P Provost, Y Tremblay
CRCHUQ, Université Laval, Québec, QC

**INTRODUCTION** : Le syndrome de détresse respiratoire (SDR) est plus fréquent chez les nouveau-nés de sexe masculin que féminin, alors que les androgènes et les glucocorticoïdes sont reconnus pour ralentir et accélérer, respectivement, la maturation pulmonaire. La montée de production du surfactant est asynchrone entre filles et garçons en défaveur des garçons en raison du manque de maturation des pneumocytes de type II causé par la présence des androgènes dans le poumon. Or, la maturation de l'épithélium pulmonaire préparant le poumon aux échanges gazeux est régulée par des communications cellules-cellules impliquant les fibroblastes et les cellules épithéliales.

**OBJECTIF** : Nous proposons de déterminer l'expression génique spécifique aux cellules fibroblastiques et épithéliales du poumon murin mâle et femelle en GD17.50, GD18.00 et GD18.50.

**MÉTHODES** : Notre technique repose sur l'enrichissement des fibroblastes et des cellules épithéliales. Nous utilisons une digestion et une adhésion différencielle des cellules pour les temps de gestation chevauchant la production du surfactant. Les ARNm sont préparées et le profilage effectué sur micropuce d'ADN. Les profils d'expression génique des échantillons sont comparés entre eux afin d'identifier les différences liées au sexe pour chaque sous-population de cellule à chaque temps de gestation étudié.

**RÉSULTATS ET DISCUSSION** : Nos analyses démontrent qu'il existe une différence sexuelle dans les gènes exprimés dans le poumon foetal au cours du développement. Nos résultats indiquent que le nombre de différence sexuelle évolue selon la période gestationnelle et les comparaisons géniques mâle-femelle montrent un décalage temporel.

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# IMPACT DE LA CORRECTION DU CANAL CFTR SUR LA RÉPARATION ÉPITHÉLIALE DES VOIES AÉRIENNES EN CONDITION INFECTIEUSE

C Bilodeau, NTN Trinh, É Maillé, E Brochiero

Centre de recherche du Centre hospitalier de l'Université de Montréal (CRCHUM), Montréal, QC

La Fibrose kystique (FK), causée par la mutation du canal CFTR, est caractérisée par la présence d'infection et d'inflammation chroniques menant à la destruction progressive de l'épithélium des voies aériennes. Notre but était donc de mieux comprendre les facteurs qui affectent la réparation du tissu épithélial suite aux lésions et d'identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques favorisant la restauration des voies aériennes chez les patients FK. Tout d'abord, nous avons confirmé que les monocouches FK présentent un retard de réparation comparativement aux monocouches non-FK. Ce délai, observé en absence d'infection, serait en partie due au défaut de base du CFTR. On observe aussi que les exo-produits de P.aeruginosa (PAF) affectent la réparation des monocouches. Plus précisément, l'exposition au PAF réduit la réparation des monocouches des cellules aériennes FK et non-FK en lignées (CFBE-DF508, CFBE-wt) et primaires. Cette exposition au PAF diminue aussi l'expression protéique et le courant Cl- CFTR des CFBE-wt. De plus, nos essais de plaies montrent que les correcteurs du CFTR (VRT325 et VX809), développés initialement pour augmenter l'adressage à la membrane de ce canal, sont aussi capables d'accélérer la réparation des monocouches FK en condition aseptique. Tandis que l'effet bénéfique des correcteurs du CFTR est aboli par le PAF dans les CFBE-DF508, on note toutefois une amélioration de la réparation des monocouches primaire FK après traitement aux correcteurs malgré la présence de PAF.

En résumé, nos études montrent que les exo-produits de P.A altèrent l'expression/fonction du CFTR ainsi que la capacité de réparation des cellules épithéliales des voies aériennes non-FK et FK. La correction du CFTR dans les cellules épithéliales primaires FK humaines renverse en partie cet effet délétère du PAF, ce qui est une avenue prometteuse pour le développement de nouvelles thérapies pour les patients FK.

Financé par CFC, CRCHUM, CTS, CORAMH et fondation Go.

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# LE CANAL ÉPITHÉLIAL SODIQUE (ENAC), UN MARQUEUR DU PHÉNOTYPE DES CELLULES ÉPITHÉLIALES ALVÉOLAIRES?

M Pascariu, F Migneault, A Dagenais, Y Berthiaume

Institut de recherches cliniques de Montréal (IRCM), Montréal, QC

Les cellules épithéliales alvéolaires permettent la ré-absorption de l'oedème pulmonaire dans la phase exsudative du syndrome de détresse respiratoire aigüe (ARDS) via le canal épithélial sodique (ENaC). Nos travaux ont montré que les facteurs pro-inflammatoires retrouvés dans l'ARDS (LPS, TNF, TGF-beta) diminuent l'expression et l'activité d'ENaC. Chez les cellules épithéliales alvéolaires de rat en culture primaire, j'ai étudié comment les LPS affectent l'activité du promoteur alpha-ENaC murin, en utilisant différents mutants de délétion d'un fragment de 3kb du promoteur en amont du gène Luciférase (Luc). L'activité transcriptionnelle a été testée en dosant l'activité de Luc dans des cellules traitées 24h avec des LPS (15 µg/mL). Mes résultats montrent que les LPS diminuent de 65% l'activité du promoteur et que cette répression touche un fragment de 612 pb situé immédiatement en amont des séquences codantes. Plusieurs séquences consensus pour des facteurs de transcription (E-Box) sont présentes dans ce fragment et semblent jouer un rôle dans la répression de l'expression d'ENaC. Il semble paradoxal qu'un stimulus menant à l'oedème pulmonaire module à la baisse l'expression d'un gène nécessaire à la clairance liquidienne. Les cellules épithéliales alvéolaires de type II sont des cellules progénitrices permettant la réparation de l'épithélium
alvéolaire. Mis en culture, elles se différencient en cellules épithéliales de type I. Est-ce que la diminution d'expression d'ENaC pourrait être liée à un changement phénomotypique Type II/type I, la perte de la polarisation cellulaire ou encore une transition de type mésenchymo-épithéliale? C'est ce que nous voulons tester en étudiant comment les LPS affectent des marqueurs de transition phénomotypique. Nos résultats préliminaires montrent que les LPS modulent à la hausse l'expression de plusieurs gènes (FN1, Cdh1-2, MMP9), mais la baisse d'ENaC semble le marqueur le plus précoce associé à une réponse aux LPS dans ces cellules.

## 19
AIRWAY EPITHELIAL CELL DISCRIMINATION OF BACTERIAL DERIVED COMPONENTS VIA P38 MITOGEN ACTIVATED PROTEIN KINASE

T Beaudoin, S Rousseau

Meakins-Christie, McGill University, Montréal, QC

**INTRODUCTION/BACKGROUND:** Excessive inflammation leading to destruction of the airway tissue (airway epithelium) and ultimately respiratory failure is the main cause of morbidity in patients afflicted with cystic fibrosis (CF). The ability for airway epithelial cells (AEC) to detect various bacterial components and mount a non-specific (innate) immune response that drives inflammatory markers (including IL-8 and neutrophil cells) is also well known. Most bacteria undergo a switch from a non-mucoid existence (phenotype) during short term (acute) infection to a mucoid (over producing different secreted products) phenotype during chronic infection. This switch correlates to a sharp decline in lung function, but how the pathways activated in AEC by mucoid bacteria are not known.

**HYPOTHESIS:** We hypothesize that the level of p38 activation by *P aeruginosa* correlates with the capacity of AECs to mount a host defense response and the level of p38 activation in AEC will be affected by the state of bacterial growth as mucoid or non-mucoid bacteria.

**METHODS/RESULTS:** Using cell-based in vitro (cells grown artificially in a dish) models of normal airway epithelium and CF airways; I have looked at the ability for mucoid and non-mucoid *P aeruginosa* to activate toll-like receptors to activate p38. To date I have shown in airway epithelial cells a threshold of p38 activation is required to trigger neutrophil recruitment. The involvement of TLR2 is linked to mutations in the mucA gene, associated with mucoid strains of *P aeruginosa*. I am currently working on split Venus constructs that will fluoresce upon the addition of ligand. This will allow me to identify the partner with TLR2 (i.e. TLR1/2, TLR2/2 or TLR2/6) that is responsible for signaling.

**CONCLUSIONS/RELEVANCE:** The switch to a mucoid phenotype induces TLR2 activation. My future work will be to eludicate this pathway

## 20
MODULATION OF THE INFLAMMATORY PHENOTYPE IN CF: A POTENTIAL ROLE FOR RGS2

Y Cyr, C Massé, G Bouvet, Y Berthiaume

Institut de recherches cliniques de Montréal (IRCM), Montréal, QC

There is a growing body of evidence that the inflammatory phenotype observed in cystic fibrosis (CF) patients could involve intrinsic mechanisms that enhance the release of pro-inflammatory cytokines. We demonstrated that the promoter of the Regulatory G-Signalling protein 2 (RGS2) is hypermethylated and that RGS2 expression is downregulated in a CF cell line (CFBE41o-). RGS2 is a negative regulator of metabolic pathways inducible by oxidative stress. To reproduce the data observed in CF cells and determine the impact of a RGS2 downregulation on proinflammatory transcripts, we performed a shRNA-RGS2 knockdown followed by DMNQ treatment in non-CF cells (corrCFBE41o-) and demonstrated an upregulation of the proinflammatory molecules S100A12 and TNFalpha. We hypothesize that the decrease in RGS2 expression downregulates the expression of a transcription factor thus inducing the upregulation of S100A12 and TNFalpha in a CF cell line model. First, we use bioinformatics tools to study the S100A12 and TNFalpha promoter regions and found a PPARg transcription factor binding motif in both gene promoters. PPARg (peroxisome proliferator-activated receptor isotype gamma) has been identified as an anti-inflammatory transcription factor and Rgs2(-/-)

pre-adipocytes have a reduction of PPARg protein level. Second, we quantified the modulation of PPARg expression and protein level in the CF cell line. Third, to reproduce the data observed in CF cells, we knockdowned RGS2 in corrCFBE41o- cell line by shRNA-RGS2, treated the cells with DMNQ and measured PPARg, S100A12 and TNFalpha transcripts by qPCR. To verify the influence of PPARg on pro-inflammatory transcripts, we overexpressed PPARg in the CF cell line CFBE41o- and monitored the expression of S100A12 and TNFalpha by qPCR. We demonstrated that the RGS2 downregulation observed in the CF cell line alters the expression of PPARg and, in turn, induces a pro-inflammatory response.

## 21
P. AERUGINOSA AUGMENTE L'EXPRESSION D'IL-33 DANS LES CELLULES ÉPITHÉLIALES FIBROSE KYSTIQUE PAR L'ACTIVATION DE LA VOIE TAK1-IKKBETA-TPL2-MKK1/2

R Farias, S Rousseau

Meakins-Christie, McGill University, Montréal, QC

La fibrose kystique (FK) est une maladie systémique ou les infections pulmonaires chroniques mènent à un déséquilibre de cytokines proinflamatoires qui favorise un recrutement excessif de neutrophils dans le poumon. Le dommage tissulaire peut encore augmenter cette réponse inflammatoire à travers les alarmines, une famille de molécules endogènes qui, durant des conditions physiologiques, se retrouvent à l'intérieur des cellules ou elles jouent des rôles comme régulatrices de différents processus cellulaires. Cependant, suite a une mort cellulaire par décrose, ces médiateurs sont relargués dans le milieu extracellulaire ou ils agissent sur des différents récepteurs exprimés à la surface des cellules immunitaires. IL-33 est parmi ces médiateurs. Elle est un puissant inducteur de cytokines chez les mastocytes et les eosinophils et elle favorise le chimiotactisme et la survie des neutrophils. Notre objectif sera de caractériser IL-33 comme médiateur de l'inflammation dans la fibrose kystique et de déterminer les voies de signalisation qui modulent l'expression de cette alarme.

Des études réalisées par notre équipe montrent une augmentation d'IL-33 nucléaire dans les colorations des cellules épithéliales des explants de poumons atteints de FK. Nos résultats montrent également que les cellules FK répondent à la présence de la bactérie *Pseudomonas aeruginosa* (Psa) avec une régulation à la hausse d'IL-33, mesurée par RT-qPCR. La signalisation à travers les récepteurs TLR régule cette augmentation d'IL-33 car l'exposition des cellules épithéliales CFTRdel508 et des monocytes à l'agoniste TLR5 flagelline augmente l'expression d'IL-33 d'une façon significative. D'ailleurs, lorsqu'on incube les cellules en présence de différents inhibiteurs de kinases en aval TLR, on observe que TAK1, Tpl2, MEK1/2 et IKKbeta modulent l'expression d'IL-33. Ces résultats suggèrent qu'IL-33 pourrait constituer une partie importante de la réponse inflammatoire durant les exacerbations de FK.

## 22
EQLT MAPPING OF GENES DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN THE LUNG OF COPD PATIENTS REVEALS NEW GENES ASSOCIATED WITH DISEASE SUSCEPTIBILITY

M Lamontagne¹, C Couture¹, DS Postma², W Timens², K Hao³, D Nickle³, DD Sin⁴, PD Pare⁴, M Laviolette¹, Y Bossé¹

¹Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QC; ²University of Groningen, University Medical Center Groningen, GRIAC research institute, Netherlands; ³Merck & Co Inc, Rahway, New Jersey, USA; ⁴UBC James Hogg Research Center, Centre for Heart and Lung Health, St Paul's Hospital, Vancouver BC

**INTRODUCTION:** COPD is a complex disease characterized by a progressive airflow obstruction that is not fully reversible. Cigarette smoking isresponsible for 85 to 90% of COPD cases, but only 15 to 20% of the smokersdevelop the disease. A genetic component to develop COPD is thus persuasive.

**METHODS:** Genome-wide gene expression profiles of 1111 non-tumor lung specimens were obtained from patients undergoing lung surgery. Blood-DNA from the same patients were genotyped for 1,2 million SNPs. Following quality control filters, 858 samples were analyzed in three steps. First, analyses were performed to identify transcripts differentially expressed
between patients with and without COPD. Second, expression quantita-
tive trait loci (eQTL) mapping was performed on these transcripts. Finally,
eQTL SNPs were tested for association with COPD.

**RESULTS:** Thirty-three probesets mapping 28 unique genes were differently expressed between cases and controls ($P<1\times10^{-4}$). 137 eQTLs (122 SNPs) were associated with 21 of the 33 transcripts ($P<1\times10^{-6}$). 55 of the 122 eQTL SNPswere nominally associated with COPD ($P<0.05$). The 55 disease-associated variants were correlated with seven differently expressed genes(BCHE, BRAP, DAAM1, SEPT3, SLITRK2, SOST, SPINK5). Disease-associatedeQTL SNPs for BCHE, BRAP, SEPT3, SLITRK2, SOST, SPINK5 were trans-acting variants.

**CONCLUSION:** By combining genome-wide gene expression in the lung, eQTL mapping and genetic association in a case-control series of patients with COPD, we identified seven new genes that are likely to play a role in the pathogenesis of COPD. This study confirms the importance of well-powered eQTL mapping design to find disease-related trans variants that cannot be identified by GWAS alone.

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RÔLE DU CD34 DANS LA RÉGÉNÉRATION MUSCULAIRE
SQUELETTIQUE DES PATIENTS MPOC

M Pagé, A Langlois, A Porlier, M-E Thériault, A Dubé, R Debigaré,
M-R Blanchet

Institut Universitairede Cardiologie et de Pneumologie de Québec,
Université Laval, QC

**INTRODUCTION** : La maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) est une maladie associée au tabagisme caractérisée par une inflammation pulmonaire, une obstruction bronchique irréversible, et une atrophie musculaire fréquente. Les cellules satellites sont la première source de noyaux myogéniques contribuant à la régénération musculaire squelettique. Il a été démontré que le CD34, un marqueur utilisé pour l'identification des cellules satellites, jouerait un rôle dans le mouvement de ces cellules, nécessaire à la réparation. Cependant, le lien entre le CD34 et la réparation musculaire dans la MPOC et indirectement l'atrophie musculaire retrouvée dans cette maladie n'a jamais été étudié.

HYPOTHÈSE : Les conditions retrouvées dans la MPOC, soit l'inflammation et l'hypoxie, influencent l'expression du CD34 par les cellules satellites influençant la régénération musculaire et participant à l'atrophie dans la MPOC.

MÉTHODES : L'expression de l'ARNm du CD34 a été détecté en qPCR chez 1) des cultures de cellules satellites humaines appartenant à trois types de patients (normaux, MPOC et exacerbés) et 2) des cultures de cellules musculaires C2C12 exposées à des conditions hypoxiques (1% O₂) ou inflammatoires (TNF).

RÉSULTATS : Les résultats démontrent que l'expression de l'ARNm du CD34 diminue avec la sévérité de la maladie. Étonnamment, les cellules exposées à des conditions hypoxiques ou au TNF démontrent une augmentation de l'expression de l'ARNm du CD34 et une diminution de l'ARNm de la myosine, suggérant une perte de différenciation des cellules en réponse à l'hypoxie et aux conditions inflammatoires.

**CONCLUSION** : Les résultats suggèrent que l'expression du CD34 est altérée dans la MPOC et que cette altération est plus sévère chez les patients exacerbés. De plus, on démontre que l'hypoxie et l'inflammation altèrent l'expression du CD34 chez les C2C12. Ces résultats suggèrent un rôle intéressant pour le CD34 dans l'atrophie chez les patients MPOC.

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MIR-204 IN QUADRICEPS OF PATIENTS WITH CHRONIC
OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE

A Porlier, A Dubé, R Debigaré, F Maltais
Institut Universitairede Cardiologie et de Pneumologie de Québec,
Université Laval, Québec, QC

RATIONALE: Limb muscle morphology and function are affected in Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD). The number of capillar- ies decreases in quadriceps of patients with COPD. Angiogenesis is a highly regulated process in which proteins are involved such as HIF-1a and pVHL. MicroRNAs (miRs) are small non-coding RNA sequences that

regulate expression of genes involved in various biological processes. Based on the literature, pVHL promotes expression of miR-204 (Mikhaylova 2012), a miRNA that possibly downregulate angiogenesis in lower limb muscle by influencing the negative regulation of HIF-1a pathway. In accor- dance, we hypothesized that miR-204 miRNA level would be increased in the context of COPD.

**OBJECTIVE:** In this study, we wished to i) assess the miRNA expression of miR-204 in quadriceps of patients with COPD in comparison to healthy age-matched controls and ii) evaluate the correlation between capillarity and miRNA level of miR-204.

**METHODS:** A needle biopsy specimen of quadriceps was obtained from 9 healthy subjects and 20 patients with mild to severe COPD. Muscle speci- mens were analyzed for miR-204 content by qPCR and the number of capillaries was obtained by immunochemistry.

**RESULTS:** Muscle capillarization was reduced in patients with COPD. Level of miR-204 in quadriceps tended to be increased in moderate to severe COPD from 8.6 fold (P=0.2) compared to healthy controls. In mild COPD, we observed that miRNA level of miR-204 was negatively corre- lated with the number of capillaries per fiber (r=-0.54, P<0.01).

**CONCLUSION:** MiR-204 miRNA level tended to be increased in COPD and this was more evident in moderate to severe disease. In mild COPD, this was associated with a decreasing number of capillaries in quad- riceps. This correlational relationship suggests that miR-204 may play a crucial role in the regulation of angiogenic process and offer a new array of research to better understand the complex development of limb muscle dysfunction in COPD.

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MEASURING EXACERBATIONS IN SUBJECTS WITH MILD
TO MODERATE COPD FROM A POPULATION-BASED
COHORT: THE CANCOLD STUDY

L Labonté, P Mancino, W Tan, R Cowie, KR Chapman, PZ Li,
S Aaron, A Benedetti, M Fitzgerald, F Maltais, D Marciniuk,
D O'Donnell, D Sin, J Bourbeau

McGill University, CanCOLD Study Group, Montréal, QC

RATIONALE : There is no information on COPD exacerbations in sub- jects with mild to moderate COPD sampled from the general population.

**OBJECTIVE:** To assess in a population-based sample the frequency and characteristics of COPD exacerbations.

**METHODS** : Canadian Cohort Obstructive Lung Disease (CanCOLD) is a longitudinal, multi-center study, 1600 subjects >= 40 years old, identified by random digit dialling from the general population. Subjects are sex- and age-matched, and grouped as: 1) COPD moderate + (GOLD>= 2); 2) COPD mild (GOLD 1); 3) subjects at risk (ever smoker); 4) healthy sub- jects (never smoker, no obstruction). An exacerbation questionnaire is administered at baseline and every 3 months to capture changes in respira- tory symptoms, medication, work and health service use.

**RESULTS** : From a preliminary analysis of 182 subjects, 35 were normal, 30 at risk, 62 GOLD 1 and 55 GOLD >=2. Exacerbations at baseline were reported by 2 at risk, 2 GOLD 1 and 9 GOLD >=2 subjects, suggesting a prevalence of 9% in this cohort. GOLD 1 and at-risk subjects experienced similar worsened respiratory symptoms, but no change in medication, work or health service use. GOLD >=2 subjects experienced more symptoms, and changes in medication, work and health service use.

**CONCLUSIONS** : Based on these preliminary data, COPD exacerbations are reported in a minority of COPD subjects sampled from the population. Exacerbations occur, and are similar in at-risk and GOLD 1 subjects, however in GOLD >=2 subjects they are more common and have a greater impact. Longitudinal evaluation will be of great value.

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L'EXPRESSION ET LA DISTRIBUTION DU CD103 DANS LA
RÉPONSE INFLAMMATOIRE ASTHMATIQUE

E Bernatchez, A Langlois, AM Lemay, D Marsolais, MR Blanchet
Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec,
Université Laval, Québec, QC

Les mécanismes de régulation de l'inflammation pulmonaire sont peu con- nus. Dans le poumon, les cellules dendritiques (DCs) sont responsables de
la présentation de l'antigène. Or, une sous-population de DCs exprimant l'intégrine CD103 et retrouvée dans les muqueuses (incluant le poumon) semble participer à l'induction de la tolérance aux antigènes, du moins dans l'intestin. Le CD103 est aussi exprimée par les lymphocytes T régulateurs (Tregs). Cependant, le rôle de l'expression de cette molécule dans la réponse inflammatoire pulmonaire est toujours inconnu. Ainsi, nous sommes penchés sur l'étude de l'expression du CD103 dans la régulation de la réponse inflammatoire allergique au poumon.

**MÉTHODES** : L'inflammation de type asthmatique allergique a été induite chez des souris Cd103+/+ (wt) et Cd103-/- par instillation intranasale de house dust mite (HDM) 1 fois par jour × 10 jours. 24 h après la dernière instillation, les souris ont été euthanasiées et les lavages broncho alvéolaires (LBA) et les poumons ont été récoltés. La sévérité de l'inflammation a été analysée via les comptes totaux et différentiels des LBA et la distribution du CD103 a été analysée par cytométrie de flux.

**RÉSULTATS** : L'exposition des souris au HDM a causé une augmentation significative du nombre de DCs CD103+ par rapport aux naïves. Aussi, une population importante de cellules CD4/CD103+ et CD8/CD103+ sont retrouvées dans les poumons de souris exposées au HDM. De façon intéressante, le nombre de cellules totales et éosinophiles dans les LBA est augmenté chez les souris Cd103-/- par rapport aux wt. Ceci pourrait être expliqué par le fait que le nombre de DCs et de Tregs totaux semblent être diminué dans les poumons des souris Cd103-/- exposées au HDM par rapport aux wt.

**CONCLUSION** : Ces résultats suggèrent que l'expression du CD103 dans la réponse asthmatique au HDM est hautement régulée dans le poumon, et joue un rôle important dans la régulation de l'inflammation pulmonaire de type asthmatique.

## 27

### LA PROSTAGLANDINE E2-GLYCÉROL INHIBE LES FONCTIONS DES NEUTROPHILES HUMAINS

C Turcotte¹, S Zarini², S Jean¹, C Martin¹, V Provost¹, A Uzieblo³, RC Murphy², N Flamand¹

¹Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC; ²Department of Pharmacology, University of Colorado Denver, Aurora, Colorado;

³Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA

**CONTEXTÉ** : Les endocannabinoïdes sont des lipides impliqués dans l'inflammation. Ils induisent des effets pro- et anti-inflammatoires qui sont reliés, en partie, à leur métabolisme. Nous avons démontré que le 2-arachidonoyl-glycérol (2-AG) active les neutrophiles via son métabolisme en leucotriène B4. Les endocannabinoïdes peuvent aussi être métabolisés en prostaglandine E2-glycérol (PGE2-G) et en prostaglandine E2-éthanolamide (PGE2-EA). Bien que le rôle de la PGE2 comme supposée des fonctions du neutrophile soit bien décrit, l'impact des métabolites des endocannabinoïdes produits par la cyclooxygénase-2 n'était pas connu.

**OBJECTIF** : Définir les effets de la PGE2-G et de la PGE2-EA sur les neutrophiles et étudier les mécanismes cellulaires impliqués.

**RÉSULTATS** : La PGE2 et la PGE2-G, contrairement à la PGE2-EA, inhibent les fonctions des neutrophiles telles que la biosynthèse des leucotriènes, la production de ROS et la libération de peptides antimicrobiens. L'effet de la PGE2-G sur les neutrophiles nécessite son hydrolyse en PGE2. Les neutrophiles humains expriment les récepteurs EP2 et EP4 et les effets de la PGE2 et de la PGE2-G sont reproduits par des agonistes de ces récepteurs. De plus, des antagonistes EP2 et EP4 bloquent les effets de la PGE2 et de la PGE2-G sur les neutrophiles, ce qui indique que la PGE2-G module les neutrophiles via ces récepteurs. En sachant que l'activation des récepteurs EP2 et EP4 augmente les taux intracellulaires d'AMPc, nous avons vérifié si l'AMPc était impliquée et nous avons observé qu'un inhibiteur de la PKA bloque la majorité des effets de la PGE2-G.

**CONCLUSIONS** : La PGE2-G inhibe les fonctions des neutrophiles humains. Cet effet est médié par les récepteurs EP2 et EP4 et est dépendant de l'AMPc. L'effet inhibiteur de la PGE2-G sur les fonctions des neutrophiles humains explique partiellement le rôle immunosuppresseur potentiel des endocannabinoïdes in vivo. (Financé par les IRSC et le CRSNG).

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### RÔLES DES SPHINGOLIPIDES DANS LA BIOLOGIE DES TISSUS LYMPHOÏDES TERTIAIRES PULMONAIRES

K Thouin, D Marsolais, AM Lemay, D Gendron, C Duchaine, P Blais Lecours

Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC

**INTRODUCTION** : Les tissues lymphoïdes tertiaires (TLT) induits dans le poumon ont été associés tant à des effets bénéfiques que délétères. Par exemple ces derniers accélèrent la neutralisation des virus, mais sont aussi une source d'agents inflammatoires dans les réactions d'hypersensibilité. Ainsi, l'identification de stratégies pour stimuler ou inhiber leur accumulation dans le poumon pourrait permettre de contrôler diverses conditions pathologiques. Les récepteurs de la sphingosine-1-phosphate (S1P) modulent des mécanismes sous-jacents à la formation des TLT dont l'expression de molécules d'adhésion et la rétention des lymphocytes dans le tissu lymphoïde. Le but de ce projet était donc d'explorer l'implication de la voie de la S1P dans l'accumulation de TLT pulmonaire.

**OBJECTIFS** : Valider un modèle d'induction de TLT en réponse à un agent nouvellement retrouvé dans les bioaérosols. 2- Déterminer si des modulateurs pharmacologiques de la voie de la S1P influencent l'accumulation de TLT.

**MÉTHODE ET RÉSULTATS** : La formation de TLT a été induite dans les poumons de souris C57Bl/6 femelles via l'installation i.n. de Methanosphaera stadtmanae (MSS). Les souris ont ensuite été traitées avec un véhicule, un antagoniste du récepteur S1P1 (W146), un inhibiteur de sphingosine kinases (SKI-II) ou avec un agoniste des récepteurs S1P1 et S1P3-5 (AAL-R). Les TLT ont été quantifiés sur des coupes histologiques colorées à l'hématoxyline-éosine. Comparativement au véhicule, le W146 et SKI-II ont provoqué une résorption du TLT alors que la quantité de TLT était augmentée avec la drogue AAL-R.

**CONCLUSION ET PERSPECTIVE** : Nos résultats supportent une implication pour la voie de la S1P dans la biologie du TLT et nous avons identifié des moyens d'en augmenter ou diminuer la quantité dans le poumon. Nous étudions actuellement les mécanismes impliqués dans ces effets divergents.

## 29

### LE CD34 ET LA RÉACTIVITÉ DU MUSCLE LISSE TRACHÉAL DANS UN CONTEXTE D'INFLAMMATION PULMONAIRE

K Lortie, A Langlois, M-J Beaulieu, D Patoine, Y Bossé, M-R Blanchet Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC

Plusieurs mécanismes menant au développement de l'asthme sont encore méconnus. Récemment, une étude a révélé que les souris Cd34-/- exposées à l'allergène démontrent une perte totale de réactivité musculaire lisse pulmonaire en réponse à la métacholine (MCh). Or, on sait que le CD34 est exprimé chez plusieurs cellules inflammatoires et chez les fibrocytes. Cependant, l'expression du CD34 sur le muscle lisse pulmonaire (ML) et son rôle dans le développement de l'hyperréactivité (AHR) bronchique n'ont jamais été étudiés. Nous avons donc vérifié si le ML de la trachée de souris exprimait le CD34 et s'il jouait un rôle direct dans la contractilité de trachées ex vivo.

**HYPOTHÈSE** : Le CD34 est exprimé sur le ML et la perte d'expression du CD34 entraîne une perte de contraction en réponse à la MCh.

**MÉTHODES** : Des cultures primaires de cellules musculaires lisses (CML) ont été développées à partir de trachées de souris wild type (WT) et Cd34-/. L'expression des marqueurs du muscle lisse et du CD34 ont été vérifiés par PCR quantitatif et western blot. Pour l'étude de la contraction chez les CML, des tests de mobilisation de Ca²⁺ en plaques (Fluo-forte 4) ont été réalisés. Afin de vérifier le rôle du CD34 dans la contraction, des études isométriques de contraction à la MCh ont été effectuées sur des trachées des souris WT et Cd34-/-.

**RÉSULTATS** : L'expression du CD34 chez les CML a été confirmée par la présence d'ARNm du CD34 chez ces cellules. Aucun différence de contraction entre les trachées de souris WT et Cd34-/- n'a été observée, ce qui suggère que le CD34 ne joue pas un rôle direct dans la contractilité du muscle lisse trachéal en réponse à la MCh. Par contre, les CML Cd34-/- semblent mobiliser plus de calcium pour certains stimuli.
CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES : Le CD34 semble jouer un rôle dans le métabolisme du calcium chez les CML. Les raisons de la perte totale d'AHR chez les souris Cd34-/- dans l'asthme expérimental sont toujours inconnues.

## 30
### LES MÉCANISMES D'ACTION DE SMPD1 DANS LES INFECTIONS PULMONAIRES BACTÉRIENNES ASSOCIÉE AVEC LES MALADIES DE NIEMANN-PICK TYPE A ET B

E MacFadden-Murphy, J Bérubé, S Rousseau
McGill University, Montreal, QC

Les maladies héréditaires Niemann-Pick de type A et type B sont causées par une perte de la fonction de l'enzyme sphingomyélinase acide (SMPD1). Ce sont de maladies rares mais graves;des infections pulmonaires contribuent grandement à la morbidité et mortalité des personnes atteintes de ces maladies. SMPD1 est une enzyme impliquée dans la conversion de la sphingomyéline en céramide dans les membranes cellulaires. La défense des voies aériennes contre l'infection bactérienne implique souvent l'activation de la protéine kinase p38 (MAPK) qui est une enzyme essentielle au système de défense immunitaire inné en réponse aux infections. Ce projet de recherche vise à comprendre le rôle de SMPD1 dans la réponse immunitaire innée des voies respiratoires aux infections bactériennes, stimulée par Pseudomonas aeruginosa (PsaDM). L'hypothèse de ce projet est que l'absence ou la diminution de l'activité de SMPD1 prévient l'activation suffisante de la MAPK p38. Pour répondre à cette hypothèse, nous examinons la réponse des cellules épithéliales aériennes en présence des inhibiteurs de SMPD1 en mesurant l'activation de la MAPK p38. Les trois inhibiteurs de SMPD1 utilisés sont les antidépresseurs amitriptyline, désipramine et perhexiline. Nos résultats préliminaires montrent que l'inhibition de SMPD1 diminue l'activation de la MAPK p38a lors de la stimulation bactérienne par PsaDM. En plus, la voie p38 MAPK est impliquée dans la régulation de la synthèse des cytokines pro-inflammatoires, donc en mesurant l'effet de SMPD1 sur la production de cytokines pro-inflammatoires cela nous aidera à mieux comprendre son rôle face aux infections. Nous allons mesurer la production des cytokines pro-inflammatoires en présence d'inhibiteurs de SMPD1 afin de mesurer leur taux synthèse et tenter de mieux comprendre le rôle de SMPD1 dans la susceptibilité des personnes atteintes de la maladie Niemann-Pick de Type A ou B aux infections respiratoires.

## 31
### MÉTABOLISME DES ENDOCANNABINOÏDES PAR LES LEUCOCYTES : IMPORTANCE DURANT L'INFLAMMATION PULMONAIRE

C Turcotte, C Martin, V Provost, MR Blanchet, N Flamand
Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec,
Université Laval, Québec, QC

**CONTEXTE** : Les endocannabinoides comme le 2-AG sont des ligands endogènes des récepteurs cannabinoides et induisent un profil d'effets pro- et anti-inflammatoires, attribuable en partie à leurs métabolites. À cet égard, le 2-AG et ses métabolites stimulent les fonctions des éosinophiles. De plus, le 2-AG stimule les fonctions du neutrophile humain qui sont associées à la défense de l'hôte, interférant ainsi avec la survie de pathogènes tels que le virus respiratoire syncytial et S. aureus. Le 2-AG peut aussi être oxydé en prostaglandine E2-glycérol (PGE2-G) qui, contrairement au 2-AG, inhibe les fonctions du neutrophile.

**OBJECTIF** : Caractériser le métabolisme des endocannabinoides par les leucocytes et pendant l'inflammation pulmonaire.

**MÉTHODE** : Les leucocytes humains sont isolés du sang ou du lavage broncho-alvéolaire. Nous avons peaufiné un modèle murin d'ARDS comportant une phase aiguë neutrophilique et une résolution dépendante des macrophages.

**RÉSULTATS** : Contrairement aux neutrophiles, les macrophages et les éosinophiles expriment la MAG lipase et les FAAH-1 et -2, des enzymes hydrolysant le 2-AG. Notre méthode permettant de marquer, avec une sonde fluorescente, les enzymes potentiellement impliquées dans l'hydrolyse du 2-AG a dévoilé que chaque type leucocytaire exprime un profil unique d'enzymes hydrolysant le 2-AG. Nous travaillons

présentement à l'identification de ces enzymes par spectrométrie de masse. Finalement, nos résultats chez la souris suggèrent un rôle de la PGE2-G dans la résolution de l'inflammation.

**CONCLUSION** : Les leucocytes ont la capacité de synthétiser et métaboliser les endocannabinoides. À cet égard, la PGE2-G jouerait d'ailleurs un rôle important pendant l'inflammation pulmonaire (financé par le Consortium canadien pour l'investigation des cannabinoides, les IRSC et le CRSNG).

## 32
### 2-ARACHIDONOYL-GLYCEROL ACTIVATES HUMAN EOSINOPHILS: INVOLVEMENT OF INTERLEUKIN-5, THE CB2 RECEPTOR, AND 15-LIPOXYGENASE

M Laviolette, M-C Larose, C Turcotte, C Martin, V Provost, N Flamand
Université Laval, Québec, QC

**BACKGROUND** : In asthma, eosinophil recruitment in the bronchial tissue involves chemokines and bioactive lipids. In this regard, 2-arachidonoyl-glycerol (2-AG) was shown to induce eosinophil migration, although minimal. Eosinophils express the monoacyl-glycerol lipase, which hydrolyzes 2-AG into arachidonic acid, the precursor of eicosanoids. Interestingly, interleukin (IL)-5 potentiates both, eosinophil migration and eicosanoid synthesis. We thus postulated that IL-5 would modulate the effects of 2-AG.

**OBJECTIVE** : To investigate the mechanisms by which 2-AG activates eosinophils.

**METHODS** : Human blood eosinophils were treated with cytokines then their activation was assessed using migration assays and bioactive lipid biosynthesis.

**RESULTS** : IL-5 increased eosinophil migrations induced by 2-AG from ~5% to ~40%. This was mimicked by IL-3 and GM-CSF but not by IL-13 or IFN-gamma. The effect of IL-5 was blocked by the Lyn inhibitor PP2, but not by the MEK-1 inhibitor PD 98540. IL-5 did not modulate eosinophil migration induced by prostaglandin D2 and 5-oxo-eicosatetraenoate (5-KETE). The effect of 2-AG on migration was prevented by the CB2 antagonists utilized, but was not mimicked by other CB2 agonists. 2-AG also induced the biosynthesis of leukotrienes and eoxins, which was totally blocked by the 2-AG hydrolysis inhibitors MAFP and JZL-184. Using inhibitors, we determined that the 2-AG-induced migration of eosinophils involved 2-AG hydrolysis and 15-lipoxygenase, in contrast to that mediated by 5-KETE. However, lipoxin A4, EXC4, 15-HETE, or 15-HETE-glycerol did not recapitulate the effect of 2-AG.

**CONCLUSIONS** : The 2-AG-induced migration of human eosinophils requires IL-5. The effects of 2-AG involve monoacyl-glycerol lipase, unidentified 15-lipoxygenase metabolites, and the CB2 receptor (MCL and CT equally contributed to this work; supported by the CIHR, NSERC, and the Canadian Consortium for the Investigation of Cannabinoids).

## 33
### À LA RECHERCHE D'UN MODÈLE BACTÉRIEN POUR L'ÉTUDE DE L'AÉROSOLISATION DES BACTÉRIES ENROBÉES PAR LES AMIBES

VE Paquet¹,², M Dybwad³, JM Blatny³, C Duchaine²,⁴, SJ Charette¹,²

¹IBIS, Université Laval, Québec; ²Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Université Laval, Québec, QC; ³FFI, Norwegian Defence Research Establishment, Norway; ⁴Département BCMCB, Université Laval, Québec, QC

**INTRODUCTION** : Dans l'environnement, les amibes jouent un rôle écologique important à titre de prédateurs bactériens. Cependant, certaines bactéries pathogènes telles Legionella pneumophila et les mycobactéries peuvent résister à la prédation amibienne. Ces bactéries sont nommées « amoeba-resisting bacteria » (ARB). Une fois à l'intérieur de l'hôte, les ARB peuvent être enrobées par une couche lipidique multilamellaire puis expulsées dans l'environnement. Puisque les amibes sont ubiquitaires et abondantes, elles sont présentes dans des infrastructures humaines. Cela représente un risque pour la santé humaine puisqu'elles peuvent produire des ARB enrobées transmissibles par aérosolisation. Jusqu'à maintenant, faute d'un modèle d'étude adéquat, aucune information n'est disponible quant au comportement des bactéries enrobées lors de l'aérosolisation.
**HYPOTHÈSE** : La découverte d'une bactérie enrobée modèle chez l'amibe Dictyostelium discoideum permettra d'étudier l'impact en santé respiratoire des bactéries enrobées aérosolisées.

**MÉTHODE** : La résistance à la prédation amibienne de 250 souches bactériennes de diverses provenances environnementales sera testée. Les meilleures candidates seront soumises à des tests de lyse discriminatoire puis les ARB potentielles seront confirmées par microscopie électronique.

**RÉSULTAT** : Actuellement, une quarantaine d'isolats environnementaux ont été confrontés à *D. discoideum* dans un test de prédation. Lorsqu'une concentration d'amibes de 100 cellules/µL ne réussis pas à percer le tapis bactérien, la bactérie testée est considérée comme une candidate potentielle. Présentement 15 bactéries seraient des ARB potentielles telles *Kocuria kristinae*, *Micrococcus luteus* et *Staphylococcus aureus*.

**PERSPECTIVE** : Une fois le bon modèle choisi, l'aérosolisation en chambre d'une bactérie enrobée nous permettra d'analyser la viabilité et la résistance des bactéries enrobées dans l'environnement.

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INTERNATIONAL CONSENSUS CONFERENCE ON PEDIATRIC ACUTE RESPIRATORY DISTRESS SYNDROME (PALICC)

P Jouvet¹, N Thomas², D Willson³

¹Sainte-Justine Hospital, University of Montreal, Montréal, QC;

²Pennsylvania State University, State College; ³Children's Hospital of Richmond-VCU Medical Center, Richmond, Virginia, USA

Severe acute respiratory dysfunction, known as Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), are commonly seen in patients hospitalized in intensive care units. When a patient suffers from ARDS, their risk of mortality and short and long-term morbidity is high (20 to 40%). To date, the definitions and interventions related to ARDS have been geared towards adult patients. ARDS present themselves differently in children and as a consequence, their treatment needs to be adapted. It is important for the pediatric intensivists to have definitions and interventions that are specific to children. In order for this to happen, we have conducted an international expert recommendations process that specifically address the identification and treatment of ARDS in children

The methodology included several phases associated to three meeting and 27 international experts across the world. Our international group has already met in Chicago (October 2, 2012) where the groundwork was laid for the work to be completed and in Montreal (April 18-19, 2013). During the meeting in Montreal, the recommendations were reviewed and commented on draft recommendations previously written by 9 subgroup of experts. The 3rd meeting goal (Paris October 9, 2013) will be done just before CQRS congress to comment on final recommendations previously written and votes upon. After the final meeting, the complete recommendations will be submitted to publication in a peer-reviewed journal for dissemination.

It is expected that this activity, supported by scientific societies all other the world including the respiratory research network of FRQS, will lead to a better care of the affected children. We also expect that future collaborations and high-quality research projects, impacting future children with pediatric ARDS. The presentation at the CQSR will include a summary of the methodology, the presentation of the main recommendations for the management of pediatric ARDS and the resulting research perspectives.

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TONIC DIAPHRAGMATIC ACTIVITY IN CRITICALLY ILL CHILDREN WITH AND WITHOUT VENTILATORY SUPPORT

A Larouche¹, AA Pellerin-Leblanc¹, O Flechelle¹,

L Ducharme-Crevier¹, P Jouvet¹, J Beck², G Emeriaud¹

¹Pediatric Intensive Care Unit, Sainte-Justine Hospital, Université de Montréal, Montreal, QC; ²Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute of St Michael's Hospital, Toronto, ON

**INTRODUCTION:** In contrast with adults, infants actively maintain their end expiratory lung volume (EELV) because of their rib cage's high compliance. In mechanically ventilated infants, we showed that the diaphragm stays activated until the end of expiration (tonic activity). We hypothesized that tonic activity was compensating for the lack of laryngeal braking due to tracheal intubation. This study aims to determine if tonic

diaphragm activity remains after extubation in infants, and if it can be observed in older children.

**METHODS:** This is a prospective observational study of patients 1 week to 18 year old mechanically ventilated for >24 h. After parental consent, diaphragm electrical activity (Edi) was recorded using a specific nasogastric catheter at four periods: in acute phase, pre and post extubation and at PICU discharge. Edi was analyzed semi-automatically by two investigators. Tonic Edi was defined as the Edi in the last quartile of expiration.

**RESULTS:** 55 patients, median age 10 months (Interquartile range: one to 48) were studied. In infants (<1 year old, n=28), tonic Edi expressed as a percentage of inspiratory activity for each phase was 48% (30% to 56%), 38% (25% to 44%), 28% (17% to 42%) and 33% (22% to 43%) (P<0.05, with significant difference between recordings 1 and 3-4). No significant change was observed between before and after extubation. As expected, tonic Edi in older patients was negligible during normal breathing. However, significant tonic Edi (> 1mcv and >10% of inspiratory Edi) was observed at one point during the stay in 10 patients (out of 27 patients > 1 year old).

**CONCLUSIONS:** In infants, tonic Edi remains important after extubation despite restoration of laryngeal braking. It can also be re-activated in pathological conditions in older patients. Tonic Edi seems to be an indicator of efforts to maintain EELV. Further studies should evaluate if this monitoring could facilitate the detection of situations of inappropriate ventilation.

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IMPORTANCE OF PATIENT-VENTILATOR ASYNCHRONY DURING PEDIATRIC MECHANICAL VENTILATION

A Larouche¹, L Ducharme-Crevier¹, AA Pellerin-Leblanc¹, O Flechelles¹, J Beck², C Sinderby², G Emeriaud¹

¹Pediatric Intensive Care Unit, Sainte-Justine Hospital, Université de Montréal, Montreal, QC; ²Keenan Research Centre, Li Ka Shing Knowledge Institute of St Michael's Hospital, Toronto, ON

**INTRODUCTION:** Maintaining spontaneous ventilation during mechanical ventilation (MV) seems beneficial regarding oxygenation, ventilatory pressure, and diaphragm function. This necessitates synchronizing MV with the child breathing efforts. In adults, patient-ventilator asynchrony is independently associated with longer MV duration. We studied patient-ventilator asynchrony in critically ill children and its impact on MV duration.

**METHODS:** Prospective observational study conducted in patients 1-week to 18-years old, with conventional MV for acute respiratory failure. After parental consent, recordings were obtained when spontaneous breathing was steadily observed. Diaphragm electrical activity (Edi) was recorded using a specific nasogastric catheter to assess patient ventilatory drive. Ventilatory pressure (Pvent) was obtained to reflect ventilator action. Edi and Pvent plots were analyzed by two independent investigators to identify the timings of patient efforts and ventilator support. Inspiratory trigger and cycling-off delays, non-assisted breaths, and auto-triggered assist were calculated. Results are reported as median (interquartile).

**RESULTS:** Fifty-two patients 9 (1 to 35) months old were evaluated 3 (1-7) days after intubation. Trigger and cycling off delays were 143 (80-240) ms and 150 (-120-360) ms, corresponding to 20 (16-36)% of time. In addition, 15(4-35)% breaths were non-assisted, and 7(2-19)% assists were autotriggered. 29% patients had very little drive (Edi <2 mcV). Asynchrony and MV duration were not correlated.

**CONCLUSIONS:** The children and the ventilator were poorly synchronized. This asynchrony may be due to inefficient ventilator trigger, or inappropriate settings. Excessive sedation or overassistance may also play a role, as suggested by the frequency of low Edi. Asynchrony was not associated with MV duration, but the rarity of good synchrony makes this finding difficult to interpret. Further studies should evaluate strategies to improve synchrony.
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SAFETY OF PEDIATRIC TRACHEAL INTUBATION AFTER
NON-INVASIVE VENTILATION FAILURE

B Crulli¹, G Loron¹, A Nishisaki², G Emeriaud¹

¹CHU Sainte-Justine, Université de Montréal, Montréal, QC;

²Children's Hospital of Philadelphia, Philadelphia, Pennsylvania,
USA

**INTRODUCTION:** Non-invasive ventilation (NIV) is increasingly used in pediatric intensive care unit (PICU) to limit the side effects of mechanical ventilation. However, NIV may fail, and the delay in initiation of invasive ventilation may be associated with a complicated evolution. We hypothesized that NIV failure is associated with a high incidence of tracheal intubation associated events (TIAEs) and a long pediatric intensive care unit (PICU) stay.

**METHODS:** One hundred tracheal intubations were prospectively studied in our PICU as part of the National Emergency Airway Registry for Children (NEAR4KIDS) collaborative. Severe TIAEs (cardiac arrest, esophageal intubation with delayed recognition, aspiration, significant hypotension, laryngospasm, malignant hyperthermia, pneumothorax and pneumomediastinum) were prospectively recorded. Additional chart review was done to assess the use of NIV in the 24 h prior to intubation. Outcome data were compared with Fisher's exact test and Mann-Whitney U test.

**RESULTS:** One hundred intubations were analyzed, among which 46 followed NIV failure. Compared to patients intubated primarily, patients intubated after NIV failure tended to be younger (median IQR) 6 [1-20] months vs 14 [2-34] months, p=0.1). Their admission PIM2 score was lower (1.2 [0.7- 4.2] vs 2.3 [1.0-5.8], p<0.05), but their severity reached a similar level prior to intubation (PELOD score 1 [0-11] vs 1 [1-11], p=0.35). Incidence of severe TIAEs was 20% after NIV failure (including 2 cardiac arrests), and 11% in primarily intubated patients (p=0.19). Desaturation <80% occurred in 59% after NIV failure, vs 41% in primary intubation patients (p=0.06). PICU stay was longer after NIV failure (6 [3-9] days vs 3 [1-5] days, p<0.001).

**CONCLUSIONS:** Children who failed a NIV trial are at high risk of complications related to tracheal intubation. Further research is warranted to evaluate strategies to prevent these complications and identify conditions in which intubation should not be delayed.

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MESURE NON INVASIVE DE L'ESPACE MORT CHEZ
L'ENFANT VENTILÉ AUX SOINS INTENSIFS:
MÉTHODOLOGIE

P Bourgoin, S Essouri, G Emeriaud, M Wisocky, P Jouvet

CHU Sainte Justine, Montréal, QC

La mesure de l'espace mort (VD), non réalisée au quotidien chez le patient ventilé a un intérêt pronostique et peut guider le réglage de la ventilation. La capnographie volumétrique (CV) permet de mesurer le VD de façon non invasive au chevet du patient. Méthodes. Dans cette étude préliminaire de faisabilité nous décrivons les différentes mesures de VD accessibles par CV (Moniteur NM3 model 7900, Philips Respironics, CT, USA): 1) VD anatomique selon Fowler, 2) VD vrai selon Bohr après estimation de la PCO₂ alvéolaire, défini comme le point situé au milieu du plateau du capnogramme, 3) VD apparent selon Bohr-Enghoff utilisant la PCO₂ artérielle ou PCO₂ téléexpiratoire. Ces deux dernières méthodes de calcul du VD utilisent la PCO₂ expirée mixée, également fournie par CV. Nous avons analysé la reproductibilité des mesures cycle à cycle une minute avant et après réalisation d'un gaz du sang artériel et avons comparé les différents résultats de mesure de VD et l'aspect du capnogramme (pente S2 et S3 des phases 2 et 3). Les patients incluis sont ventilés, sédatés, hémodynamiquement stables et ne présentant pas de cardiopathie cyanogène (absence de shunt intra-cardiaque).

**RÉSULTATS:** 20 mesures ont été effectuées chez 20 enfants (âge moyen 6,5 ans [0-15 ans] poids moyen 23 kg [3-77]). Les différentestechniques de mesures de VD sont reproductibles avec une variabilité intercycle négligeable inférieure à 5%. L'ensemble des autres valeurs mesurées (PCO₂ alvéolaire, les pentes S2 et S3) ont également une variabilité intercycle négligeable inférieure à 5%. Les mesures de VD étaient significativement différentes selon que

l'on utilise la formule de Bohr ou l'approximation de Bohr-Enghoff.
**Conclusion:** Ce travail préliminaire montre que la technique de CV est reproductible chez l'enfant. L'étude de ces courbes nous permettre de mieux comprendre les déterminants du gradient existant entre la PCO₂ artérielle et la PCO₂ téléinspiratoire, utilisés en routine.

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ÉTAPES CONCEPTUELLES D'UNE AIDE TECHNIQUE DE
MOBILISATION EN POSITION DEBOUT POUR LES
PATIENTS VENTILÉS MÉCANIQUEMENT SÉJOURNANT AUX
SOINS INTENSIFS

G Marois¹, J Beaudoin², A Couture², Sarah Dupuis²,

E Morissette-Labbé², É Tremblay², D Spooner², R Brosseau¹, JO Dyer¹,

Y Skrobik³

¹École de réadaptation, Université de Montréal; ²École

Polytechnique, Université de Montréal; ³Chaire Lise et Jean Saine

en soins intensifs, Université de Montréal, Montréal, QC

**INTRODUCTION** : À notre connaissance, aucune publication ne décrit le processus de développement d'une aide technique à la mobilisation debout pour patients ventilés mécaniquement.

**OBJECTIF** : Décrire le processus de conception d'une aidotechnique à la mobilisation debout aux soins intensifs.

**MÉTHODES** : Description des étapes de conception d'un nouvel outil avec les parties prenantes du projet.

**RÉSULTATS** : Le projet de conception a impliqué des partenaires de l'École polytechnique et de l'Hôpital Maisonneuve-Rosemont. La conception s'est déroulée selon les étapes suivantes :1) Synthèse des besoins; 2) Revue systématique de la littérature; 3) Étude de terrain; 4) Remue-méninge; 5) Développement des sous-systèmes mécaniques des 3 modèles envisagés; 6) Évaluation des dimensions requises de chaque modèle; 7) Évaluation des restrictions de chaque modèle; 8) Validation du modèle à retenir avec l'équipe multidisciplinaire et les patients; 9) Validation des mesures et calculs par des experts (Polytechnique et génie biomédical du milieu); 10) Modélisation virtuelle du modèle choisi; 11) Choix des composantes et estimation des coûts de fabrication; 12) Création des dessins techniques du modèle retenu; 13) Choix du manufacturier, livraison puis inspection du prototype 14) Tests préliminaires.

**CONCLUSION** : Cette description des étapes de conception contribue à pallier le manque de lignes directrices pour le développement d'outil de mobilisation des patients ventilés. Toutes les étapes décrites ont contribué à la conception d'un outil adapté aux besoins et aux contraintes du milieu. L'évaluation des besoins de l'équipe de soins et des patients, la proposition de plusieurs options de solution ainsi que la sélection d'une option avec l'équipe sont des étapes clés du processus. Les étapes ultérieures à prévoir pour valider l'implantation de l'outil seront : l'analyse des tests préliminaires et la mesure des impacts. Elles permettront d'évaluer le rapport coûts/bénéfices.

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INCIDENCE DE LA VENTILATION ASSISTÉE PROLONGÉE
CHEZ LE NOUVEAU-NÉ

M Saubier, G Lodygensky, G Emeriaud, S Essouri, P Jouvet

Département de Pédiatrie du CHU Sainte-Justine, Montréal, QC

La ventilation assistée (VA), invasive ou non, en période néonatale est fréquemment utilisée et corrélée à la prématurité; 77% des prématurés de moins de 25 semaines nécessitent une VA jusqu'à 36 semaines d'âge corrigé (AC), comparativement à 7 % des prématurés de plus de 30 semaines (1). Les autres facteurs associés à une VA prolongée (VAP) sont mal connus. L'objectif était d'estimer le nombre de nouveau-nés (NN) entre 1 et 28 jours d'AC dépendants d'une VAP, dans le but de réaliser une étude des facteurs de risque de VAP dans cette population.

**MÉTHODOLOGIE** : Tous les NN admis au CHU Ste-Justine de mars 2004 à mars 2013 et ayant eu une VA ont été inclus dans cette étude rétrospective. La durée d'un épisode de VA était définie à l'aide du croisement de 2 bases de données de l'hôpital. Une VAP était définie par un épisode de 21 jours ou plus, avec un maximum de 48h de sevrage pour être considéré ininterrompu. Le calcul des durées de VA a été réalisé par un programme informatique en langage PHP/SQLite créé pour ce projet.
**RÉSULTATS** : Parmi 23388 épisodes (7870 patients) dans la période étudiée, 4533 NN étaient sous VA dont 825 (18%) avaient une VAP. Parmi les NN avec VAP, 172 (3.8% des NN avec VA) étaient encore ventilés de 1 à 28 jours d'AC. Parmi ces 172 NN en VAP, la durée de VA médiane cumulative était de 92 jours (de 21 à 691 jours), avec une décroissance linéaire (R²=0.996) pour les 3 premiers quartiles. La répartition selon les années calendaires était similaire.

**CONCLUSION** : Près de 4 % des NN qui ont une VA sont ventilés de façon prolongée entre 1 et 28 jours d'AC. Ces enfants nécessitent des ressources importantes comme en témoigne la durée médiane de VA de 3 mois. Une identification des facteurs de risque de VAP devrait permettre d'identifier précocement ces NN et de fournir des hypothèses thérapeutiques afin de diminuer leur durée de ventilation (2).

Références

1. Allen A. Rapport annuel 2011, Réseau Néonatal Canadien. 2. Payen V, Ped Crit Care Med 2012;13:152-7.

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DÉVELOPPENT DES VACCINS CONTRE LE
MÉTAPNEUMOVIRUS HUMAIN, À PARTIR DE LA PROTÉINE
DE FUSION

L Aerts¹, M-E Hamelin¹, C Rhéaume¹, C Lévy², F-L Cosset², G Boivin¹

¹CHU de Québec (CRI du CRCHUQ), Québec, QC; ²INSERM,
Université Lyon, France

CONTEXTE : Le métapneumovirus humain (hMPV) est un paramyxovirus responsable des infections respiratoires aiguës pour lequel aucun vaccin n'est disponible.

OBJECTIF : Evaluer la protéine F comme un vaccin sous-unitaire (F), ou exprimée à la surface de pseudoparticules (VLPF) dans le modèle de souris BALB/c.

METHODE : L'ectodomaine de la protéine F a été exprimé dans des cellules mammifères (293F) et purifié par chromatographie d'affinité et des cellules 239T ont été transfectées avec le vecteur d'expression pTG5349 contenant le gène F entier afin d'exprimer les VLPF. Des souris BALB/c ont, par la suite, été immunisées par injection péritonéale 2 fois avec la protéine ou les VLPF à un intervalle de 21 jours. Vingt-et-un jours après la dernière immunisation, les souris ont été infectées avec 1.4 106 TCID50 de hMPV souche c-85473. À 5 jours post-infection (pi), les poumons ont été prélevés pour les titres viraux et des analyses histopathologiques.

RESULTATS : Suite aux immunisations, les souris ayant reçu soit 2 injec-
tions de la protéine F, 2 injections de VLPF ou la protéine F à la 1ère
immunisation suivie par les VLPF à la 2ième avaient toutes produits des
anticorps neutralisants contre le virus (taux d'anticorps = 1/60; 1/80; 1/60,
respectivement). De plus, au jour 5 pi, les titres viraux pulmonaires de ces
3 groupes de souris immunisées étaient sous le seuil de détection en culture
cellulaire. Les analyses histopathologiques sont en cours.

CONCLUSION : L'immunisation de souris BALB/c avec un vaccin sous-unitaire composé de la protéine F, des VLPF, ou d'une combinaison des 2 préparations, induit des anticorps neutralisants et réduit les titres viraux pulmonaires de façon significative, suite à une infection virale. De plus, des expériences supplémentaires composées de vaccin à l'ADN codant pourles VLPF sont présentement en cours. Des résultats préliminaires de cette expérience seront obtenus dans les prochaines semaines et seront également présentées à la conférence.

42
RÔLES COMPLÉMENTAIRES DU CANAL POTASSIQUE
KCA3.1 ET DE L'INTÉGRINE BÊTA-1 DANS LA RÉGULATION
DES PROCESSUS DE RÉPARATION DES CELLULES
ÉPITHÉLIALES ALVÉOLAIRES

A Girault, NTN Trinh, A Privé, E Maillé, E Brochiero
Centre de Recherche du CHUM, Montréal, QC

Le syndrome de détresse respiratoire aigu (SDRA) présente comme caractéristiques fondamentales des lésions endothélio-alvéolaires graves et un remodelage de l'épithélium. Il a été montré que la régénération de l'épithélium et la résolution secondaire de l'oedème étaient fondamentaux pour la guérison des patients souffrant de SDRA. Précédemment, nous

avons montré que les canaux potassiques KvLQT1 et KATP régulaient les
processus de réparation de l'épithélium alvéolaire, mais la participation
d'un autre candidat, le canal KCa3.1, n'avait encore jamais été évaluée.
Nous avons d'abord montré que la vitesse de réparation des monocouches de
cellules alvéolaires de rat (ATII) était plus rapide en présence d'une matrice
de fibronectine (FN) que celle de cellules cultivées en absence de matrice.
L'inhibition du KCa3.1 diminue la vitesse de réparation uniquement en
présence de FN, tandis que son activation accélère la réparation. De manière
similaire, la vitesse de migration de cellules isolées ainsi que la prolifération
sont, au moins en partie, dépendantes de la matrice de FN et de l'activité du
KCa3.1. Nous avons alors voulu évaluer l'existence d'une interrelation entre
le canal KCa3.1 et l'intégrine Bêta-1 (B1), qui présente une forte affinité
pour la FN. Par co-immunoprécipitation, nous avons ainsi révélé une inter-
action physique entre ces 2 protéines. De plus, nous avons observé une aug-
mentation de la quantité de canaux KCa3.1 présents dans les fractions
membranaires de cellules cultivées sur FN, comparées aux cellules cultivées
en absence de matrice. Finalement, nous avons montré que la FN augmen-
tait l'expression de canaux calciques non-dépendants du voltage et que leur
inhibition affectait également la réparation des cellules ATII.

Ces données montrent ainsi le rôle complémentaire du canal KCa3.1, de la
matrice extracellulaire et de l'intégrine B1 dans la régulation des processus
de réparation de l'épithélium alvéolaire.

Financé par les IRSC, le FRQS et le RSR du FRQS.

43
IMPACT OF THE NON-STRUCTURAL PROTEINS OF THE
RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS ON THE TNFALPHA/
IFNBETA INDUCED ANTIVIRAL SIGNALING PATHWAY

L Martin¹, K Fink¹, E Mukawera¹, S Chartier¹, X De Deken²,
E Brochiero³, F Miot², N Grandvaux¹

¹CRCHUM Hôpital St-Luc, Université de Montréal, Montréal, QC;

²IRIBHM, Campus Erasme, Université libre de Bruxelles, Bruxelles,
Belgium; ³CRCHUM Hôpital Hôtel-Dieu de Montréal, Montréal,
QC

During viral infection, airway epithelial cells (AEC) are not only the first
physical barrier against invasion by microorganisms, but they are also the
first to mount an innate immune response. This innate immune response is
mainly based on the secretion of antiviral cytokines, IFNbeta and
IFNlambda, and proinflammatory cytokines, such as TNFalpha, that trig-
ger an antiviral state in infected and neighbouring epithelial cells and
mediate the recruitment of the immune cells, such as neutrophils, to the
site of infection. The classical antiviral pathway is triggered by IFNbeta
leading to the stimulation of antiviral IFN stimulated genes (ISGs).
Recently, our laboratory unveiled a new antiviral signaling pathway initi-
ated by the synergism of TNFalpha and IFNbeta, which mediate an antivivi-
ral response at least through the induction of the DUOX2 NADPH
oxydase. Respiratory Syncytial Virus (RSV) is an ubiquitous virus around
the world and is responsible for most of the respiratory infections in
infants. Nonetheless, no effective treatment or vaccine is available. It is
well documented that RSV can subvert the innate immune response
through its non-structural protein NS1 and NS2 to promote its infection,
and likely its pathogenesis. We showed that induction of DUOX2 during
RSV infection is dampened by viral proteins. To date we have studied the
impact of NS2 on DUOX2 expression. Surprisingly, we observed that in
the presence of NS2, DUOX2 expression induced by Sendai virus infection
is enhanced. Future experiments will be conducted to identify the molecu-
lar mechanisms underlying DUOX2 expression modulation by NS2. We
will also study the impact of NS1 on this response. Identification of these
mechanisms could be useful to identify new therapeutic targets.
44

EFFETS COMPARATIFS DE L'HYPOXIE POSTNATALE CHEZ 2 ESPECES DE RONGEURS : LES RATS ET LES SOURIS

A Jochmans-Lemoine¹, G Villalpando², M Gonzalez², I Valverde², R Soria², V Joseph¹

¹CRCHUQ - Hôpital Saint-François d'Assise, département de pédiatrie, université Laval, Québec, QC; ²Institut Bolivien de la biologie d'altitude - La Paz, Bolivie

Bien que les souris se trouvent communément dans les régions de haute altitude, les données écologiques démontrent que les rats ne colonisent pas ces milieux. Les facteurs physiologiques expliquant ces différences ne sont pas connus. Notre hypothèse est que les effets de l'hypoxie sur le dével-oppement cardiorespiratoire et pulmonaire différent chez ces 2 espèces.

La ventilation, la saturation artérielle en oxygène, le rythme cardiaque, les taux d'hématocrite et d'hémoglobine, l'hypertrophie ventriculaire droite (index d'hypertension artérielle pulmonaire – HTAP) et l'architecture pulmonaire (reflet de la surface d'échange alvéolaire) sont mesurés chez des rats et des souris adultes vivant en haute altitude sur La Paz (Bolivie - 3600m). Puis, les effets de l'hypoxie postnatale sur ces paramètres sont évalués au niveau de la mer à Québec (74m) en exposant des rats et des souris à un mélange hypoxique (13.5% O₂ – entre le 4E et le 14E jour postnatal) recréant la pression partielle d'oxygène de La Paz.

Chez les adultes de haute altitude, les rats présentent une érythrocytose excessive et une HTAP qui ne sont pas retrouvées chez les souris. Au 14ème jour postnatal, les rats du niveau de la mer élevés en hypoxie chro- nique présentent une HTAP et une réduction de la surface d'échange pul- monaire. Ces effets sont largement atténués chez les rats. De plus les souris du niveau de la mer élevées en hypoxie chronique maintiennent une saturation artérielle en oxygène plus élevée que les rats en cas de nouvelle exposition en hypoxie.

Les souris semblent donc protégées des effets délétères de l'hypoxie postna- tale sur le développement cardiorespiratoire et pulmonaire. Des réponses physiologiques à l'hypoxie postnatale différentes pourraient expliquer que certaines espèces de mammifères ne colonisent pas les régions d'altitude.

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L'INHIBITION PHARMACOLOGIQUE DE LA SPHINGOSINE KINASE 1 AUGMENTE LE PROCESSUS FIBROTIQUE DANS UN MODÈLE MURIN DE FIBROSE PULMONAIRE

D Gendron, AM Lemay, D Marsolais

Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QC

OBJECTIFS : La fibrose pulmonaire (FP) idiopathique est une maladie dégénérative avec une espérance de vie après diagnostic de moins de 5 ans. Les mécanismes sous-jacents à la FP sont ainsi mal compris. Récemment la voie de la sphingosine-1-phosphate (S1P) s'est révélée importante pour la régulation du remodelage de la matrice extracellulaire. De plus, chez les patients atteints de FP, il y a un niveau élevé de S1P dans le lavage bron- choalvéolaire. L'objectif de ce projet est donc de déterminer le rôle du S1P endogène dans un modèle murin de fibrose pulmonaire.

MÉTHODES : Au jour 0, des souris mâle C57Bl6 ont reçu 1 ou 1.5U/kg de bléomycine ou son véhicule de manière intratrachéale. Au jour 14, temps où l'inflammation est résolue et où la fibrose commence, nous avons initié l'administration intrapéritonéale et bi-journalière de SKI-II (de 0, 5 et 10 mg/kg). Au jour 21, les souris ont été euthanasiées pour analy- ses histologique de la FP suivant une coloration différentielle au trichrome de Masson.

RÉSULTATS : La bléomycine a induit un remodelage du tissu pulmonaire, en fonction de la dose, marqué par une déposition de collagène dense, com- parativement aux contrôles. L'administration de l'inhibiteur SKI-II n'a eu aucun effet, histologique ou toxique, sur les souris n'ayant pas reçu de bléo- mycine. Les souris ayant reçues de la bléomycine et SKI-II montre une augmentation des zones fibrotiques, comparativement au véhicule seul.

CONCLUSION : L'inhibition de la sphingosine kinase 1 a un effet délé- tère sur le développement de la fibrose pulmonaire dans un modèle murin. Cela suggère donc un rôle protecteur de l'activité de la sphingosine kinase 1 et de la voie de la sphingosine-1-phosphate.

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LE RÉENTRAINEMENT À L'EFFORT AMÉLIORE LA CAPACITÉ AÉROBIE CHEZ DES PATIENTS PORTEURS D'OBÉSITÉ ET DU SYNDROME D'APNÉE OBSTRUCTIVE DU SOMMEIL

M Croteau¹, I Vivodtzev², F Series¹, S Provencher¹, P LeBlanc¹, C Minville¹, A Grangier², R Tamisier², JL Pépin², F Maltais¹

¹Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QC; ²Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble, France

INTRODUCTION : Les sujets obèses et porteurs du syndrome d'apnée obstructive du sommeil (SAOS) se plaient régulièrement d'une faible tolérance à l'effort.

MÉTHODOLOGIE : Trente-cinq patients SAOS observant au traitement par pression continue ont été recrutés au Centre Hospitalier Universitaire de Grenoble et à l'Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec pour y faire un entraînement de 12 semaines à raison de 3x/semaine. L'entraînement sur ergicycle débutait à la puissance correspondant à 60% du VO2pic et était augmenté selon la tolérance de chacun des participants. La durée des séances augmentait progressivement de 30 à 45 minutes. Le test à l'effort consistait en un test incrémental sur ergicycle avec un incrément de 25W/2min et avec mesure des échanges gazeux.

RÉSULTATS : Le VO2pic des 35 participants s'est amélioré en moyenne de 0,47 ± 0,55 METs passant de 6,26 à 6,74 METs (p< 0,001). Sept partici- pants (20%) ont eu une amélioration d'au moins 1 MET (1,31 ± 0,36 METs) tandis que 6 d'entre eux (17%) n'ont vu aucune amélioration. Ceci correspondait également à une augmentation du nombre de patients accé- dant au 2d quintile de la capacité aérobie par catégorie d'âge (23% vs. 9%) considérée comme moins à risque cardiovasculaire[1].

DISCUSSION : Nos résultats suggèrent une amélioration de la capacité aérobie maximale chez les patients obèses apnéiques après un réentraine- ment de 3 mois. Le VO2pic a précédemment été associé à la survie dans la population générale. Une augmentation de la capacité aérobie d'un MET correspondrait à une diminution des décès cardiovasculaires de 19% et ce, indépendamment du changement d'IMC[2]. Les patients porteurs d'un SAOS devraient être encouragés à faire plus d'activité physique et l'impact cardiovasculaire de ce type de prise en charge mériterait d'être investigué sur le long terme.

Références:

1. Blair S.N. JAMA, 1995.

2. Lee D.C. Circulation, 2011.

47

USE OF CLINICAL COMPUTED TOMOGRAPHY IMAGES FOR BODY COMPOSITION ANALYSIS FOR PATIENTS WITH LUNG CANCER

V Coats, M Samson, P Grégoire, L Sanfilippo, F Ribeiro, Y Lacasse, L Tremblay, F Maltais, D Saey

Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec (IUCPQ), Québec, QC

BACKGROUND: Despite the importance of muscle wasting in lung cancer, body composition in this disease has been mostly assessed using methods that do not allow differentiation between muscle and other tissues.

AIM: To compare body composition and sarcopenia prevalence of patients with lung cancer (1-year survivors versus 1-year non-survivors) using computed tomography (CT scan) image analysis at diagnosis and at the end of follow-up (at 1 year or at death).

METHOD: 150 patients newly diagnosed with advanced lung cancer who had a thoraco-abdominal CT-scan were recruited and separated in two groups according to whether they were alive at one year or not. Following the collection of clinical data, we quantified muscle, visceral fat and subcu- taneous fat areas from a single abdominal cross-sectional image at the level of the third lumbar vertebra. Sarcopenia was assessed using CT-based criteria and defined as having a muscle area ≤55 cm²/m² for men and ≤39 cm²/m² for women.

RESULTS: CT scans from 92 males/58 females with stage lung cancer and a mean age of 64±9 years and a body mass index of 25.5±5 kg/m² were analysed. The one-year survival rate was 63%. At diagnosis, average
muscle, visceral fat and subcutaneous fat areas were 138±33 cm², 155±117 cm² and 150±86 cm² respectively. Overall, 37% of patients were sarcopenic at diagnosis but the prevalence tended to be higher in the non-survivors compared to survivors, 44% vs 33%, respectively. During the one-year follow-up, the rate of sarcopenia rised in both groups but stayed higher in the non-survivors, 70% vs 55%, respectively.

**CONCLUSION:** Sarcopenia was prevalent in patients with lung cancer and tended to be higher in those who did not survive at one year.

## 48

### FACTEURS DE RISQUE ET PRISE EN CHARGE DE RÉCIDIVE POSTOPÉRATOIRE DE PNEUMOTHORAX SPONTANÉ PRIMAIRE

J Hercun, K Chagnon, G Rakovich

Hôpital Maisonneuve-Rosemont, Université de Montréal, Montréal, QC

**OBJECTIF:** Évaluation des facteurs de risque et de la prise en charge des récidives postopératoires de pneumothorax spontané primaire chez des patients ayant eu un traitement chirurgical standard.

**MÉTHODES:** Revue de dossiers rétrospective de patients admis pour traitement chirurgical de pneumothorax spontané primaire entre 1995 et 2012. Les patients âgés de 40 ans et plus et/ou connus MPOC ont été exclus.

**RÉSULTATS:** 90 remplissaient les critères d'inclusion. 54% des patients consommaient le tabac et 32,7% rapportaient un usage de cannabis. 10 patients (11,1%) ont présenté une récidive postopératoire de pneumothorax. Les patients ayant présenté une récidive étaient plus souvent des consommateurs de cannabis – OR 4,23% (0,88–20,3), mais moins souvent des consommateurs de tabac – OR 0,136 (0,03–0,67) et avaient moins souvent des bulles documentées dans le spécimen opératoire OR 0,203 (0,038–1,08).

Une récidive postopératoire initiale comportait un risque élevé de seconde récidive (54,5 %). Les patients présentant des récidives postopératoires multiples ont récidivé beaucoup plus tôt (3,7 vs 23 mois p=0,198) et avaient beaucoup plus souvent un pneumothorax de petite taille lors de la récidive initiale – OR 5,0 (0,866-28,861) que ceux qui n'ont eu qu'une seule récidive. Le traitement chirurgical (« re-do » bullectomie +/- pleurectomie) de la récidive postopératoire initiale avait tendance à diminuer le risque de récidive subséquente – OR 0,667 (0,060-7,352).

**CONCLUSION:** La consommation de cannabis augmente le risque de récidive postopératoire du pneumothorax spontané. Une récidive postopératoire précoce est associée à un risque particulièrement élevé de récidive subséquente, qui n'est pas diminué par une petite taille de pneumothorax. La chirurgie est moins efficace dans ce contexte et l'ajout itératif d'un agent sclérosant devrait être considéré.

## 49

### LA PRESSION POSITIVE CONTINUE NASALE (PPCN) DIMINUE LES REFLUX GASTRO-OESOPHAGIENS CHEZ L'AGNEAU NOUVEAU-NÉ

D Cantin¹, D Djeddi², N Samson¹, JP Fraud¹

¹Unité de Recherche Respiratoire Néonatale, Département de pédiatrie, Université de Sherbrooke; Sherbrooke, QC;

²Département de pédiatrie, Université Picardie Jules Vernes, Amiens, France

La PPC nasale diminue les reflux gastro-oesophagiens (RGO) acides chez l'homme adulte. Quoique les RGO et la PPCn soient très fréquents chez le nouveau-né, l'effet de la PPCn sur les RGO est inconnu. De plus, la PPCn peut entraîner une distension gastrique chez le nouveau-né, source de relaxations inappropriées du sphincter inférieur de l'oesophage (SIO) et de RGO. Nous avons montré que l'agneau nouveau-né est un modèle unique pour étudier les RGO ayant de nombreuses similarités avec les RGO du nouveau-né humain (Djeddi D, J Pediatr Gastroenterol Nutr 2012). L'objectif de cette étude était de montrer que l'effet de la PPCn sur les RGO est aussi présent en période néonatale, et d'évaluer si cet effet persiste après l'arrêt de la PPCn.

**MÉTHODES:** Sept agneaux âgés de 2 à 3 jours ont été étudiés. Une pH-impédancemétrie avec polysomnographie a été effectuée pendant 6 h, 2 jours de suite, en respiration spontanée ou avec PPCn (6 cmH₂O). De

plus, une manométrie oesophagienne standardisée a été réalisée à la fin des enregistrements.

**RÉSULTATS:** 1- La PPCn a aboli les RGO peu acides [nombre moyen (ET) de RGO pour 6 h = 0.6 (1) avec PPCn vs. 9.1 (8.6) sans PPCn, p < 0.05]; 2- La réduction des RGO a persisté durant les 6 h suivant la PPCn [7 (8.1) avec PPCn vs. 18 (15.8) sans PPCn, p < 0.05]; 3- Aucune différence n'a été observée pour la pression intragastrique, la pression basale du corps oesophagien et la pression du SIO. Cependant, la PPCn a diminué le pourcentage (-64%, p < 0.046) et la durée (-0.7 s, p < 0.06) de la relaxation du SIO lors des déglutitions.

**CONCLUSION:** Notre étude apporte les résultats originaux suivants : 1- La PPCn inhibe très efficacement les RGO peu acides chez l'agneau nouveau-né; 2- Il existe un effet mémoire de cette inhibition après l'arrêt de la PPCn; 3- L'inhibition est reliée à un effet direct sur la relaxation du SIO. Ces observations suggèrent que la PPCn pourrait être efficace pour traiter les RGO sévères du nouveau-né.

## 50

### MEDICAL MANAGEMENT OF ACUTE NECROTIZING LUNG INFECTIONS: A REVIEW OF CASES

E Roy Richard, K Chagnon, G Rakovich

Université de Montréal, Hôpital Maisonneuve Rosemont, Montréal, QC

**BACKGROUND:** Necrotizing pneumonia, lung abscess and gangrene are rare complications of bacterial lung infection which are historically associated with high mortality. In an attempt to improve the prognosis, some groups proposed a surgical approach which is still controversial and debated. Few convincing data exists on the outcome of patients with necrotizing pneumonia treated with prolonged medical management and non-invasive procedures.

**OBJECTIVE:** To review the outcome of thirteen cases of pulmonary necrosis medically managed.

**METHODS:** A retrospective review of patients from a tertiary care center between 2006 and 2013 was performed. Patients were classified as having necrotizing pneumonia, abscess or gangrene according to the extent of lung necrosis. The response to antibiotic treatment was defined as expected (1 week or less), delayed (1 to 4 weeks) or a non response (more than 4 weeks). Outcome was further evaluated.

**RESULTS:** Eight men and seven women with mean age of 52 years old presented with pulmonary necrosis. Six necrotizing pneumonias, seven abscesses and two gangrenes were identified. The pathogen most frequently encountered was Streptococcus pneumoniae. Eight patients were admitted with respiratory failure and six required mechanical ventilation. Five patients showed an expected response to antibiotics and ten others a delayed response. One fistulising lung abscess was percutaneously drained and among the four patients who presented with empyema, two were drained with a chest tube and two others underwent pleural decortication. None underwent lung resection surgery and 100% survived without any long term sequelae and a mean hospital stay of 42 days.

**CONCLUSION:** Despite the fact that patients with serious necrotizing lung infection did not demonstrate initial antibiotic response, they eventually healed, avoiding morbid surgical intervention and potentially fatal complications.

## 51

### CARACTÉRISATION DU SEUIL VENTILATOIRE CHEZ LES PATIENTS SOUFFRANT DE MALADIE PULMONAIRE OBSTRUCTIVE CHRONIQUE

M Mesbahi¹, A Rizk²,³, B Trutschnigg², S Parenteau², F Beaucage², V Pepin²,³

¹Département de Médecine, Université de Montréal; ²Centre de recherche de l'Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal; ³ Université Concordia, Montréal, QC

**INTRODUCTION:** Le seuil ventilatoire (SV) est un paramètre physiologique représentant le point de cassure, lors d'un exercice progressif, où la ventilation augmente plus vite que la consommation d'oxygène. Chez l'adulte en santé et non-athlète, il se produit typiquement à 50-60% de la
consommation d'oxygène maximale (VO₂peak). Chez les patients souffrant de maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) subissant une épreuve d'effort maximale progressive (CPET), certains atteignent un SV, et d'autres pas. Peu d'études se sont penchées sur la différentiation des patients atteignant ou pas leur SV, ou encore sur la caractérisation du SV dans la MPOC.

**OBJECTIFS** : i) identifier certaines caractéristiques démographiques, anthropométriques, cliniques et physiologiques permettant de distinguer les sujets MPOC atteignant, de ceux n'atteignant pas un SV lors d'un CPET; ii) caractériser le SV chez les sujets MPOC l'ayant atteint à l'aide de variables mesurées lors du CPET; iii) examiner la relation entre le SV et le temps d'endurance sur ergocycle, la performance aux tests de marche navette progressif (ISWT) et d'endurance (ESWT), et la qualité de vie.

**MÉTHODES** : Les données de 51 sujets MPOC modérés à très sévères recrutés dans le cadre d'un essai clinique de réadaptation pulmonaire à qui l'on a fait subir un CPET pré-entrainement sur ergocycle ont été étudiées. Pour chacun, le SV a été déterminé par deux évaluateurs indépendants à l'aide de la méthode du « V-slope ». Les patients avec un SV identifié ont ensuite complété un test d'endurance sur ergocycle, un ISWT, un ESWT, et répondu à un questionnaire de qualité de vie (CRQ).

**RÉSULTATS** : Les analyses préliminaires indiquent qu'un SV reproductible a été identifié chez 40 des 51 sujets étudiés (78%), alors que 11 sujets (22%) ont terminé leur CPET avant l'atteinte d'un SV.

**CONCLUSION** : Nos résultats préliminaires indiquent qu'un SV reproductible est identifiable chez une majorité de patients MPOC. D'autres analyses suivront.

## 52
### FONCTION RESPIRATOIRE AU QUÉBEC : HÉTÉROGÉNÉITÉ DES VALEURS DE RÉFÉRENCE ET IMPACT CLINIQUE

G Chalifoux, C Poirier

CHUM, Université de Montréal, Montréal, QC

**INTRODUCTION** : Le bilan respiratoire permet d'identifier diverses pathologies. Les mesures servent à qualifier et quantifier la sévérité de l'atteinte pulmonaire et servent au suivi des patients. La majorité des laboratoires ne choisissent pas les valeurs de références mais utilisent celles proposées par le manufacturier. Nous avons voulu identifier les références pour la spirométrie, les volumes et la diffusion utilisées au Québec et l'impact clinique qui en découle.

**MÉTHODOLOGIE** : Nous avons contacté les centres hospitaliers du Québec et procédé à un sondage téléphonique afin de recenser les références utilisés pour la spirométrie, les volumes, et la DLCO. Nous avons ensuite tiré un échantillon de patients ayant subi un bilan respiratoire et confronté leurs résultats à ceux obtenus par diverses références.

**RÉSULTATS** : Nous avons sondé 50 hôpitaux dans 15 régions administratives et obtenu des réponses de 39 d'entre eux. Les prédites pour la spirométrie sont: Knudson(49%); ECCS(23%); NHANES III(13%); Crapo(5%); Morris(3%); Polgar(3%); autres(5%). Celles pour les volumes sont: Knudson(31%); ECCS(31%); Crapo(14%); Goldman(14%); autres(10%). Pour quantifier la DLCO sont utilisées: Knudson(31%); ECCS(17%); Burrows(17%); Miller(17%); Gaensler(3%); autres(15%). Des écarts significatifs existent entre les prédites. Par exemple, chez un caucasien de 80 ans et 178cm, les prédites du VEMS varient de 620ml entre les références, la CPT attendue varie de 780ml et la DLCO oscille entre 17,7 et 29,9 ml/min/ml Hg.

**CONCLUSION** : Compte tenu de l'hétérogénéité des prédites dont certaines furent publiées il y a plus de 30 ans, il existe à travers le Québec un risque important de quantification erronée des pathologies respiratoires. Les recommandations de l'ATS ne s'appliquent à l'heure actuelle uniquement qu'au volet spirométrie. Ceci entraîne une réflexion sur la nécessité d'uniformiser les références à travers le Québec afin d'offrir à nos patients une pratique plus homogène.

## 53
### EFFECTS OF MECHANICAL VENTILATION AND ANTI-OXIDANT TREATMENT ON AUTOPHAGY IN THE MOUSE DIAPHRAGM

I Azuelos¹, M Picard², B Jung³, T Li¹, C Lemaire¹, F Liang¹, S Hussain⁴, Y Burelle⁵, B Petrof¹

¹Meakins-Christie Laboratories, McGill University Health Center, Montreal, QC; ²Center for Mitochondrial and Epigenomic Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, Pennsylvania, USA; ³Anesthesia and Critical Care Department, INSERM U1046, Montpellier, France; ⁴Critical Care and Respiratory Division, McGill University Health Center; ⁵Department of Pharmacy, Université de Montreal, Montreal, QC

**INTRODUCTION** : Mechanical ventilation (MV) has been associated with atrophy, injury and weakness in the diaphragm, a condition termed Ventilator-Induced Diaphragmatic Dysfunction (VIDD). A key feature of VIDD is increased oxidative stress in the diaphragm associated with an upregulation of proteolysis. Autophagy is a proteolytic pathway which delivers cytoplasmic materials to lysosomes via organelles called autophagosomes. The aims of this study were to assess: 1) whether MV induces autophagy in the diaphragm, and 2) if autophagy in the diaphragm during MV is influenced by treatment with the anti-oxidant N-acetylcysteine (NAC).

**METHODS** : Comparisons were made between control (CTRL) and MV mice (ventilated in controlled mode for 6 hours). Autophagy was monitored by: 1) visualizing autophagosomes by transmission electron microscopy (TEM), 2) measuring mRNA levels of autophagy-related genes, and 3) quantification of the autophagy marker protein LC3II, in the presence and absence of colchicine to determine autophagic flux. CTRL, MV and MV+NAC mice were also compared with respect to force-generating capacity of diaphragm strips measured during electrical stimulation ex-vivo.

**RESULTS** : TEM revealed a 3.5-fold increase in the number of autophagosomes in MV compared to CTRL diaphragms. mRNA levels for autophagy genes were similar in both groups except for GABARAP which was increased by MV. LC3II levels were increased with MV and further increased after administration of colchicine, consistent with increased autophagic flux during MV. Treatment with NAC prevented MV-induced diaphragm force loss despite an apparent further increase in autophagic flux.

**CONCLUSIONS** : In a mouse model of VIDD, 6 hours of MV induces increased autophagy in the diaphragm. The anti-oxidant NAC prevents the loss of diaphragm force production associated with MV but seems to further increase autophagic flux, suggesting that autophagy may be a beneficial adaptive mechanism under these conditions.

## 54
### UTILISATION DU PROTOCOLE DE DÉTRESSE CHEZ LES PATIENTS AVEC MPOC ET NÉOPLASIE PULMONAIRE

K Godbout, L Tremblay, Y Lacasse

Institut Universitaire de Cardiologie et de Pneumologie de Québec, Québec, QC

**INTRODUCTION** : Les urgences existent en soins palliatifs. Au Québec, le protocole de détresse respiratoire (PDR), une combinaison d'opioïde, de midazolam et de scopolamine est fréquemment utilisé dans ces situations pour induire une sédation temporaire. Le protocole de détresse qui semble être une pratique locale n'a jamais été décrit dans la littérature.

**OBJECTIFS** : Décrire la prescription et l'administration du protocole de détresse respiratoire chez les patients en fin de vie souffrant de néoplasie pulmonaire ou de MPOC.

**MÉTHODES** : 100 patients avec MPOCet 100 patients avec néoplasie pulmonaire décédés à l'IUCPQ ont été étudiés de manière rétrospective. Les prescriptions de PDR ainsi que leur administration, efficacité et effet sur la mortalité ont été recueillis dans le dossier médical.

**RÉSULTATS** : 96 patients avec néoplasie pulmonaire et 85 patients avec MPOC ont eu une prescription de PDR durant leur dernière hospitalisation (p=0.014). Les prescriptions chez les MPOC étaient moins conformes aux recommandations que ceux dans le groupe néoplasie (30,2% et 62% respectivement, p<0.001). 30 patients avec néoplasie pulmonaire et 29 avec MPOC ont reçu au moins un PDR (p=0.877). Les
indications pour l'administration d'un PDR étaient considérées comme appropriées dans 45,8% des cas en néoplasie et 31,3% en MPOC (p=0.098). Tous les patients ayant reçu un PDR approprié étaient confortables et sédationnés en moins de 30 minutes. Au niveau de la survie, aucune différence n'a été détectée entre les patients ayant reçu un PDR et ceux n'en ayant pas reçu et ce, dans les 2 groupes.

**CONCLUSION** : La prescription d'un PDR est une pratique courante chez les patients en soins palliatifs dans notre institution. Pour la plupart des patients, sa prescription n'est qu'une simple précaution mais chez ceux dont l'administration est nécessaire, son efficacité pour contrôler les symptômes et provoquer la sédation est excellente et cela n'accélère pas le décès.

## AUTHOR INDEX

### A

<table><tr><td>Aaron S</td><td>25</td></tr><tr><td>Abed Y</td><td>1</td></tr><tr><td>Aerts L</td><td>41</td></tr><tr><td>Allano M</td><td>9</td></tr><tr><td>Azuelos I</td><td>53</td></tr></table>

### B

<table><tr><td>Beaucage F</td><td>51</td></tr><tr><td>Beauchamp G</td><td>9</td></tr><tr><td>Beaudoin J</td><td>39</td></tr><tr><td>Beaudoin T</td><td>19</td></tr><tr><td>Beaulieu MJ</td><td>29</td></tr><tr><td>Beck J</td><td>35,36</td></tr><tr><td>Benedetti A</td><td>25</td></tr><tr><td>Bernatchez E</td><td>26</td></tr><tr><td>Berthiaume Y</td><td>3,18,20</td></tr><tr><td>Bérubé J</td><td>30</td></tr><tr><td>Bérubé JC</td><td>10</td></tr><tr><td>Bilodeau C</td><td>17</td></tr><tr><td>Blanchet MR</td><td>12,23,26,29,31</td></tr><tr><td>Blatny JM</td><td>33</td></tr><tr><td>Boivin G</td><td>1,41</td></tr><tr><td>Bossé Y</td><td>10,12,22,29</td></tr><tr><td>Bouchard L</td><td>13</td></tr><tr><td>Bouhaddioui W</td><td>2</td></tr><tr><td>Boulet LP</td><td>10</td></tr><tr><td>Bourbeau J</td><td>25</td></tr><tr><td>Bourgoin P</td><td>38</td></tr><tr><td>Bouvet G</td><td>20</td></tr><tr><td>Brochiero E</td><td>8,17,42,43</td></tr><tr><td>Brosseau R</td><td>39</td></tr><tr><td>Bullone M</td><td>9</td></tr><tr><td>Burelle Y</td><td>53</td></tr></table>

### C

<table><tr><td>Cantin D</td><td>49</td></tr><tr><td>Chagnon K</td><td>48,50</td></tr><tr><td>Chakir J</td><td>4</td></tr><tr><td>Chalifoux G</td><td>52</td></tr><tr><td>Chapman KR</td><td>25</td></tr><tr><td>Charette SJ</td><td>33</td></tr><tr><td>Chartier S</td><td>43</td></tr><tr><td>Chevigny M</td><td>9</td></tr><tr><td>Coats V</td><td>47</td></tr><tr><td>Cosset FL</td><td>41</td></tr><tr><td>Couture A</td><td>39</td></tr><tr><td>Couture C</td><td>22</td></tr><tr><td>Cowie R</td><td>25</td></tr><tr><td>Croteau M</td><td>46</td></tr><tr><td>Crulli B</td><td>37</td></tr><tr><td>Cyr Y</td><td>20</td></tr></table>

### D

<table><tr><td>Dagenais A</td><td>3,18</td></tr><tr><td>De Deken X</td><td>43</td></tr><tr><td>Debigaré R</td><td>23,24</td></tr></table>

<table><tr><td>Djeddi D</td><td>49</td></tr><tr><td>Dubé A</td><td>23,24</td></tr><tr><td>Duchaine C</td><td>28,33</td></tr><tr><td>Ducharme-Crevier L</td><td>35,36</td></tr><tr><td>Dupuis S</td><td>39</td></tr><tr><td>Dybwad M</td><td>33</td></tr><tr><td>Dyer JO</td><td>39</td></tr></table>

### E

<table><tr><td>Emeriaud G</td><td>6,35,36,37,38,40</td></tr><tr><td>Essouri S</td><td>6,38,40</td></tr></table>

### F

<table><tr><td>Farias R</td><td>21</td></tr><tr><td>Fink K</td><td>43</td></tr><tr><td>Fitzgerald M</td><td>25</td></tr><tr><td>Flamand N</td><td>4,15,27,31,32</td></tr><tr><td>Flechelle O</td><td>35,36</td></tr></table>

### G

<table><tr><td>Gagné-Ouellet V</td><td>13</td></tr><tr><td>Gaudreault N</td><td>10</td></tr><tr><td>Gendron D</td><td>11,12,28,45</td></tr><tr><td>Gilbert C</td><td>16</td></tr><tr><td>Girault A</td><td>8,42</td></tr><tr><td>Godbout K</td><td>54</td></tr><tr><td>Gonzalez M</td><td>44</td></tr><tr><td>Grandvaux N</td><td>43</td></tr><tr><td>Grangier A</td><td>46</td></tr><tr><td>Grégoire P</td><td>47</td></tr><tr><td>Guay SP</td><td>13</td></tr></table>

### H

<table><tr><td>Hamelin ME</td><td>41</td></tr><tr><td>Hao K</td><td>22</td></tr><tr><td>Henry C</td><td>10</td></tr><tr><td>Hercun J</td><td>48</td></tr><tr><td>Hiram R</td><td>7,14</td></tr><tr><td>Hussain S</td><td>53</td></tr></table>

### J

<table><tr><td>Jean S</td><td>27</td></tr><tr><td>Jochmans-Lemoine A</td><td>44</td></tr><tr><td>Joseph V</td><td>44</td></tr><tr><td>Jouvet P</td><td>6,34,35,38,40</td></tr><tr><td>Jung B</td><td>53</td></tr></table>

### K

<table><tr><td>Kaczmarczyk M</td><td>16</td></tr><tr><td>Khaddaj-Mallat R</td><td>14</td></tr></table>

### L

<table><tr><td>Labonté L</td><td>25</td></tr><tr><td>Lacasse Y</td><td>47,54</td></tr><tr><td>Lai L</td><td>11</td></tr><tr><td>Lamontagne M</td><td>22</td></tr><tr><td>Langlois A</td><td>23,26,29</td></tr></table>

<table><tr><td>Laperle J</td><td>3</td></tr><tr><td>Laprise C</td><td>13,15</td></tr><tr><td>Larose MC</td><td>4,32</td></tr><tr><td>Larouche A</td><td>35,36</td></tr><tr><td>Laviolette M</td><td>4,22,32</td></tr><tr><td>Lavoie JP</td><td>9</td></tr><tr><td>Lavoie-Charland É</td><td>10</td></tr><tr><td>LeBlanc P</td><td>46</td></tr><tr><td>Lecours P B</td><td>28</td></tr><tr><td>Lee Gosselin A</td><td>12</td></tr><tr><td>Lemaire C</td><td>53</td></tr><tr><td>Lemay AM</td><td>11,26,28,45</td></tr><tr><td>Lévy C</td><td>41</td></tr><tr><td>Li PZ</td><td>25</td></tr><tr><td>Li T</td><td>53</td></tr><tr><td>Liang F</td><td>53</td></tr><tr><td>Lodygensky G</td><td>40</td></tr><tr><td>Loron G</td><td>37</td></tr><tr><td>Lortie K</td><td>29</td></tr></table>

### M

<table><tr><td>MacFadden-Murphy E</td><td>30</td></tr><tr><td>Maghni K</td><td>15</td></tr><tr><td>Maillé E</td><td>8,42</td></tr><tr><td>Maillé É</td><td>17</td></tr><tr><td>Maltais F</td><td>24,25,46,47</td></tr><tr><td>Mancino P</td><td>25</td></tr><tr><td>Marciniuk D</td><td>25</td></tr><tr><td>Marois G</td><td>39</td></tr><tr><td>Marsolais D</td><td>11,12,26,28,45</td></tr><tr><td>Martel G</td><td>5</td></tr><tr><td>Martin C</td><td>27,31,32</td></tr><tr><td>Martin L</td><td>43</td></tr><tr><td>Massé C</td><td>20</td></tr><tr><td>Mesbahi M</td><td>51</td></tr><tr><td>Migneault F</td><td>3,18</td></tr><tr><td>Minville C</td><td>46</td></tr><tr><td>Miot F</td><td>43</td></tr><tr><td>Morin C</td><td>7</td></tr><tr><td>Morissette-Labbé E</td><td>39</td></tr><tr><td>Mukawera E</td><td>43</td></tr><tr><td>Murphy RC</td><td>27</td></tr></table>

### N

<table><tr><td>Newth K</td><td>6</td></tr><tr><td>Nickle D</td><td>22</td></tr><tr><td>Nishisaki A</td><td>37</td></tr></table>

### O

<table><tr><td>O'Donnell D</td><td>25</td></tr></table>

### P

<table><tr><td>Pagé M</td><td>23</td></tr><tr><td>Paquet VE</td><td>33</td></tr><tr><td>Pare PD</td><td>22</td></tr><tr><td>Parenteau S</td><td>51</td></tr><tr><td>Pascariu M</td><td>3,18</td></tr></table>
AUTHOR INDEX

<table><tr><td>Patoine D</td><td>29</td></tr><tr><td>Pellerin-Leblanc AA</td><td>35,36</td></tr><tr><td>Pepin V</td><td>51</td></tr><tr><td>Pépin JL</td><td>46</td></tr><tr><td>Petrof B</td><td>53</td></tr><tr><td>Picard M</td><td>53</td></tr><tr><td>Pizzorno A</td><td>1</td></tr><tr><td>Poirier C</td><td>52</td></tr><tr><td>Porlier A</td><td>23,24</td></tr><tr><td>Postma DS</td><td>22</td></tr><tr><td>Praud JP</td><td>49</td></tr><tr><td>Prévost V</td><td>4</td></tr><tr><td>Privé A</td><td>8,42</td></tr><tr><td>Provencher S</td><td>46</td></tr><tr><td>Provost P</td><td>2,16</td></tr><tr><td>Provost V</td><td>27,31,32</td></tr></table>

R

<table><tr><td>Rakovich G</td><td>48,50</td></tr><tr><td>Rhéaume C</td><td>1,41</td></tr><tr><td>Ribeiro F</td><td>47</td></tr><tr><td>Richard ER</td><td>50</td></tr><tr><td>Rizcallah E</td><td>7</td></tr><tr><td>Rizk A</td><td>51</td></tr><tr><td>Rousseau E</td><td>7</td></tr><tr><td>Rousseau É</td><td>14</td></tr></table>

<table><tr><td>Rousseau S</td><td>5,19,21,30</td></tr><tr><td>Roussel L</td><td>5</td></tr></table>

S

<table><tr><td>Saey D</td><td>47</td></tr><tr><td>Samson M</td><td>47</td></tr><tr><td>Samson N</td><td>49</td></tr><tr><td>Sanfilippo L</td><td>47</td></tr><tr><td>Sauthier M</td><td>40</td></tr><tr><td>Sbarra L</td><td>10</td></tr><tr><td>Series F</td><td>46</td></tr><tr><td>Sin D</td><td>25</td></tr><tr><td>Sin DD</td><td>22</td></tr><tr><td>Sinderby C</td><td>36</td></tr><tr><td>Sirois C</td><td>7</td></tr><tr><td>Sirois M</td><td>7</td></tr><tr><td>Skrobik Y</td><td>39</td></tr><tr><td>Soria R</td><td>44</td></tr><tr><td>Spooner D</td><td>39</td></tr></table>

T

<table><tr><td>Tabet Y</td><td>14</td></tr><tr><td>Tamisier R</td><td>46</td></tr><tr><td>Tan W</td><td>25</td></tr><tr><td>Thériault ME</td><td>23</td></tr><tr><td>Thomas N</td><td>34</td></tr></table>

<table><tr><td>Thouin K</td><td>28</td></tr><tr><td>Timens W</td><td>22</td></tr><tr><td>Tremblay É</td><td>39</td></tr><tr><td>Tremblay L</td><td>47,54</td></tr><tr><td>Tremblay S</td><td>16</td></tr><tr><td>Tremblay Y</td><td>2,16</td></tr><tr><td>Trinh NTN</td><td>17,42</td></tr><tr><td>Trutschnigg B</td><td>51</td></tr><tr><td>Turcotte C</td><td>27,31,32</td></tr></table>

U

<table><tr><td>Uzieblo A</td><td>27</td></tr></table>

V

<table><tr><td>Vaillancourt VT</td><td>13</td></tr><tr><td>Valverde I</td><td>44</td></tr><tr><td>Villalpando G</td><td>44</td></tr><tr><td>Vivodtzev I</td><td>46</td></tr></table>

W

<table><tr><td>Welman M</td><td>15</td></tr><tr><td>Willson D</td><td>34</td></tr><tr><td>Wisocky M</td><td>38</td></tr></table>

Z

<table><tr><td>Zarini S</td><td>27</td></tr></table>
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