rapport après soutenance

Doctorat de Microbiologie

Monsieur JACQUIER HERVÉ

né le 27 mai 1980 à MONTFERMEIL (093)

Titre des travaux : Impact des mutations aléatoires sur les bêta-lactamases : le paysage adaptatif de la résistance aux bêta-lactamines

Date de soutenance : 28 septembre 2012

Etablissement soutenance : UNIVERSITE PARIS 7

Jury : Mme EMMANUELLE CAMBAU Président du jury, PROFESSEUR DES UNIV - PRATICIEN HOSP. UNIVERSITE PARIS 7

M. RICHARD BONNET Rapporteur du jury, PROFESSEUR DES UNIV - PRATICIEN HOSP. UNIVERSITE CLERMONT FERRAND 1 AUVERGNE

M. EDUARDO ROCHA Rapporteur du jury, DIRECTEUR DE RECHERCHE C.N.R.S.

M. GUILLAUME ARLET Membre du jury, PROFESSEUR DES UNIV - PRATICIEN HOSP. UNIVERSITE PARIS 6 PIERRE ET MARIE CURIE

M. PIERRE TUFFÉRY Membre du jury, DIRECTEUR DE RECHERCHE INSERM

M. OLIVIER TENAILLON Directeur de thèse, CHARGE DE RECHERCHE INSERM

Ecole doctorale : BIOCHIMIE, BIOTHERAPIES, BIOLOGIE MOLECULAIRE ET INFECTIOLOGIE- B3MI

Spécialité : MICROBIOLOGIE

Mr Hervé JACQUIER nous a présenté le 28 septembre ses travaux de Thèse qui ont pour titre : Impact des mutations aléatoires sur les beta-lactamases : le paysage adaptatif de la résistance aux beta-lactamines.

Son exposé, qui a duré 45 minutes, était clair et précis comprenant de nombreuses illustrations et explications concernant la stratégie et les méthodes qui avaient été suivies pour la réalisation de ses travaux. Le jury, en particulier ses rapporteurs, a reconnu la grande pédagogie de cet exposé et a apprécié qu'il complète parfaitement le manuscrit, qui lui était très synthétique et moins explicatif sur les méthodes.

Mr Richard BONNET, rapporteur, est intervenu le premier en faisant remarquer la qualité du sujet étudié. Conformément à son rapport écrit, il a félicité le candidat pour la présentation du manuscrit en soulignant la très bonne compréhension des concepts relatifs au sujet étudié, pourtant complexe. Les questions ont porté sur l'analyse bibliographique des méthodes de sélection des mutations et de l'utilisation des matrices, la localisation des mutations au sein de l'enzyme TEM-1 pour le travail n°1 et sur la mutagénèse de la séquence codant le peptide signal.

Mr Eduardo ROCHA, rapporteur, a d'abord félicité le candidat pour son exposé oral dont il a souligné la très bonne complémentarité avec le manuscrit. Ses remarques et questions ont porté sur les biais éventuels de la méthode de mutagénèse aléatoire utilisée, sur les mutants qui avaient été obtenus mais dont l'étude n'avait pas été poursuivie (mutations

N° étudiant : 20608155

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silencieuses, mutations stop...), et sur les étude d'épistasie à entreprendre pour les mutants à
plûsieurs mutations.

Les examinateurs Pierre TUFFERY et Guillaume ARLET sont ensuite intervenus.
Ils ont aussi souligné que l'exposé oral était très bon et complétait parfaitement le travail écrit.
Il n'y a pas eu de commentaire négatif sur certaines parties du texte ni de l'exposé.
Les questions ont porté sur l'effet général d'une mutation sur la structure protéique, et les
analyses enzymologique et mesures calorimétriques que le candidat pourra faire dans les
perspectives sur chacun des mutants. L'intérêt et l'originalité du travail sur le peptide signal a
été soulignée. D'autres questions ont porté sur la transposition des résultats obtenus *in vitro*
avec les observations de mutations dans les isolats cliniques et les hypothèses d'évolution de
la protéine TEM. Les deux examinateurs ont félicité le candidat.

Le Président du jury a conclu en remarquant l'excellente qualité du manuscrit, très
explicatif bien que concis. Il a questionné Hervé sur la possibilité d'étudier les mutants de
TEM dans un autre contexte parental en faisant remarquer que la souche bactérienne d'étude
était assez différente d'une souche clinique, mais que l'étude pourrait être poursuivie dans une
souche n'ayant aucun autre mécanisme de résistance aux beta-lactamines (délétion du gène de
cephalosporinase, perméabilité et efflux faibles).

Le Directeur de Thèse a rapporté au jury le sérieux et la quantité de travail effectuée par
Hervé Jacquier au cours de ses années de Thèse. Hervé a en plus de sa thèse participer
activement à l'encadrement de deux étudiants en master 2. Il a aussi du être ingénieux pour
construire les nouveaux outils dont il avait eu besoin pour l'étude des 10 000 mutants.

L'ensemble des membres du jury a remarqué la très grande maitrise du sujet, l'excellente conduite de Hervé Jacquier pour répondre aux questions posées, ainsi que l'énorme travail qui a été effectué au cours de cette thèse. Ils ont attribué après délibération de 15 minutes la mention Très Honorable avec Félicitations du jury, à l'unanimité à bulletin secret.

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Mme EMMANUELLE CAMBAU

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M. RICHARD BONNET

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M. EDUARDO ROCHA

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M. GUILLAUME ARLET

M. PIERRE TUFFÉRY

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M. OLIVIER TENAILLON

PARIS
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