# Les dépôts : lésions élémentaires et dépôts fréquents

Eric Frouin

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Eric Frouin. Les dépôts : lésions élémentaires et dépôts fréquents. Annales de Pathologie, 2024, 44 (6), pp.396-406. 10.1016/j.annpat.2024.09.016. hal-05075117

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MISE AU POINT

# Les dépôts : lésions élémentaires et dépôts fréquents

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Deposits: Basic lesions and frequent deposits

Eric Frouin<sup>a,*,b</sup>

Accepted for publication on 23 September 2024

Available online 16 octobre 2024

## MOTS CLÉS

Physiopathologie;
Dépôts;
Colorations spéciales;
Immunohistochimie;
Immunofluorescence;
Microscopie électronique;
Protéomique

**Résumé** Les maladies de dépôts sont un groupe de maladies hétérogènes caractérisées par l'accumulation pathologique de dépôts dans des cellules et/ou dans le milieu extracellulaire. La physiopathologie de ces dépôts est polymorphe et de nombreuses substances peuvent s'accumuler : substances endogènes, substances exogènes. Leurs conséquences seront variables, dépendant du tissu dans lequel l'accumulation a lieu. Le rôle du pathologiste est essentiel pour le diagnostic d'une maladie de dépôts et il dispose de nombreux outils pour le diagnostic et le typage de ces dépôts. Il s'agit le plus souvent de colorations spéciales, mais aussi de l'immunohistochimie, de l'immunofluorescence, de la microscopie électronique et de techniques plus innovantes comme la protéomique.

© 2024 L'Auteur. Published by Elsevier Masson SAS. Cet article est publié en Open Access sous licence CC BY (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

## KEYWORDS

Pathophysiology;
Deposits;
Special stains;
Immunohistochemistry;
Immunofluorescence;
Electron microscopy;
Proteomics

**Summary** Deposit diseases are a group of heterogenous diseases characterized by the pathological accumulation of deposits in cells and/or in the extracellular environment. The pathophysiology of these deposits is polymorphic and numerous substances can accumulate: endogenous substances, exogenous substances. Their consequences will vary, depending on the tissue in which the accumulation takes place. The role of the pathologist is essential for the diagnosis of a deposit disease and (s)he has numerous tools at her/his disposal for the diagnosis and typing of these deposits. Special stains can be used, but also immunohistochemistry, immunofluorescence, electron microscopy and more innovative techniques such as proteomics. © 2024 The Author. Published by Elsevier Masson SAS. This is an open access article under the CC BY license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

<footnote><sup>a</sup> Service d'anatomie et de cytologie pathologiques, CHU de Nîmes, place du Pr-Debré, 30029 Nîmes, France</footnote>

<footnote><sup>b</sup> Institut de recherche en cancérologie de Montpellier, U1194, Montpellier, France</footnote>

<footnote>* Correspondance.
E-mail address: eric.frouin@chu-nimes.fr</footnote>
Les maladies de dépôts sont secondaires à une accumulation pathologique dans les cellules et les tissus de substances normales ou anormales et de nature chimique variable [1]. Ces substances peuvent s'accumuler dans les cytoplasmes des cellules (stéatose, hémochromatose, thésaurismoses ou corps étrangers, etc.), dans la matrice conjonctive (calcifications, amylose) ou à la fois en intra- et en extracellulaire (cholestase, silicose, etc.). Les surcharges mixtes répandent aux mêmes phénomènes physiopathologiques que les surcharges intracellulaires pures, l'accumulation se faisant d'abord dans le cytoplasme des cellules avant que la substance ne se retrouve dans le milieu extracellulaire.

## Dépôts intracellulaires

### Mécanismes physiopathologiques

Plusieurs mécanismes sont en cause dans l'accumulation de dépôts dans le cytoplasme des cellules. Il peut s'agir d'une substance endogène normale produite en excès ou avec un métabolisme inadapté. C'est par exemple le cas de la stéatose hépatique. Il peut aussi s'agir d'une substance endogène normale qui s'accumule du fait d'un défaut enzymatique ou d'un déficit en protéines de transport. Ces processus seront en cause dans les thésaurismoses ou maladies de surcharge en lipides, en glucides (glycogénoses) et les maladies lysosomales. Enfin, une substance exogène (considérée comme anormale) peut s'accumuler à cause de l'absence de machinerie enzymatique pour sa dégradation. C'est le mécanisme en cause dans la survenue des tatouages, des réactions aux produits de comblement, des réactions aux prothèses (mammaires, orthopédiques), des pneumocnioses (silicose, anthracose, asbestose).

### Conséquences des dépôts

Les dépôts intracellulaires ont des conséquences variables, soit transitoires (la surcharge est réversible) si les mécanismes d'élimination de la substance parviennent à une élimination totale spontanément ou sous l'effet de thérapeutiques. À l'inverse, lorsque les dépôts deviennent permanents, ils occasionnent le plus souvent la mort de la cellule à l'intérieur de laquelle ils se sont accumulés. Si les dépôts sont diffus ou situés dans un organe vital, la surcharge peut provoquer la mort du patient.

### Localisation des dépôts intracellulaires

Les dépôts intracellulaires peuvent être observés sur le lieu de leur production, ou s'accumuler à distance du lieu de production, cette fois sur leur site de métabolisme et d'élimination. C'est le cas de la plupart des dépôts hépatiques qui surviennent lorsque le métabolisme est déficient.

### Substances accumulées

Les substances qui s'accumulent dans les cytoplasmes des cellules sont variées. Il peut s'agir de constituants cellulaires normaux, de pigments, ou de substances anormales exogènes ou endogènes mal métabolisées.

### Accumulation de lipides

L'organisme humain peut accumuler des triglycérides (stéatose hépatique), du cholestérol et des esters de cholestérol (athérosclérose, xanthomes, cholestérolose),

des phospholipides ou des lipides complexes (thésaurismoses). L'aspect histopathologique sera le plus souvent celui de vacuoles optiquement vides dans les cytoplasmes des cellules concernées (hépatocytes, macrophages, etc.).

### Accumulation d'hydrates de carbone

Il peut s'agir soit d'une accumulation diffuse du glycogène, comme dans le diabète, ou d'un défaut de stockage du glycogène (défaut de synthèse ou de dégradation) comme dans les glycogénoses (thésaurismoses).

### Accumulation de protéines

Les accumulations intracellulaires de protéines sont plus rares. On les observe par exemple dans les corps de Russels (accumulation d'immunoglobulines dans les plasmocytes) (Fig. 1).

### Accumulation de pigments

De nombreux pigments peuvent s'accumuler dans l'organisme. Le plus souvent ce sont des pigments endogènes, produits par les cellules : mélanine, hémosidérine et ses produits dégradés (bilirubine, porphyrines), lipofuschine, ou des pigments exogènes (Fig. 2).

Les pigments exogènes peuvent avoir de nombreuses portes d'entrée : inhalation (pneumoconioses, anthracose, asbestose), ingestion (mélanose colique due aux laxatifs, argyrie, etc.), injections (tatouages) (Fig. 3).

## Dépôts extracellulaires

Le milieu extracellulaire peut être le siège d'une accumulation de substances normalement présentes dans le tissu interstitiel, mais qui vont s'accumuler suite à une agression. C'est par exemple le cas de la fibrose ou de l'œdème. Ces accumulations ne sont pas des vraies maladies de dépôts.

D'autres substances peuvent s'accumuler dans les tissus extracellulaires, c'est notamment le cas de l'amylose et des calcifications. Ces substances ne sont normalement pas présentes dans le tissu extracellulaire où elles s'accumulent et leurs dépôts sont alors pathologiques. Leurs mécanismes physiopathologiques sont spécifiques à chaque type de dépôt et seront explicités dans les articles des Pr Buob et Dr Heyman [2,3].

Enfin, certaines substances comme la bile, la silice, etc. vont s'accumuler d'abord dans le cytoplasme des cellules puis dans le milieu extracellulaire (Fig. 2 et 3).

## Quelle place pour le pathologiste ?

Les maladies de dépôts exogènes ou endogènes sont des maladies souvent graves et de présentation clinique très pléomorphe. Le diagnostic est souvent réalisé par les pathologistes qui doivent connaître l'aspect des dépôts et les moyens d'en poser le diagnostic.

L'amylose est la maladie de dépôt la plus fréquente de l'organisme et la source de nombreux prélèvements : biopsies des glandes salivaires accessoires (BGSA) notamment. Pour ces prélèvements, le diagnostic d'amylose est posé dans moins de 5 % des cas et dans de nombreux laboratoires, la coloration par le rouge Congo est systématique afin de ne pas rater ce diagnostic [4]. En effet, en cas de suspicion forte d'amylose systémique, la rentabilité de la
<figure><img src="image_5.png" /><figcaption>**Figure 1.** Accumulation intracellulaire d'immunoglobulines dans le cytoplasme de plasmocytes (corps de Russel). *Intracellular accumulation of immunoglobulins in the cytoplasm of plasma cells (Russel's bodies).*</figcaption></figure>

<figure><img src="image_6.png" /><figcaption>**Figure 2.** Dépôts de pigments endogènes. A. Dépôts d'hémosidérine localisés dans une balanite plasmocytaire ou balanite de Zoon (HES, × 44). B. Dépôts mélaniques bruns dans une incontinence pigmentaire (HES, × 43). C. Dépôts hépatiques de lipofuschine de couleur brun clair (HES, × 87). D. Dépôts de bile de couleur jaunâtre dans les canalicules biliaires (HES, × 69). *Endogenous pigment deposits. A. Hemosiderin deposits in plasma cell balanitis or Zoon balanitis (HES, ×44). B. Brown melanin deposits in pigmentary incontinence (HES, × 43). C. Hepatic lipofuscin deposits of light brown color (HES, × 87). D. Yellowish-colored bile deposits in bile canaliculi (HES, × 69).*</figcaption></figure>

BGSA est excellente avec une sensibilité de 80 % [4]. Le pathologiste disposera aussi de tissu pour typer l'amylose. Dans ce faire, il faut demander un prélèvement congelé car les techniques d'immunohistochimie (IHC) sont moins efficaces que l'immunofluorescence directe (IFD), même si de nouveaux panels développés récemment pour IHC sur tissus FFPE seraient très sensibles (ils ne sont pas employés en routine diagnostique) [5].

La présence d'amylose ne doit pas toujours conduire à la réalisation d'un typage. En effet, dans de nombreux cas, il s'agit d'une amylose localisée, en lien avec un processus tumoral, représentant même parfois un argument diagnostique (Fig. 4). Mentionner ces dépôts dans le compte-rendu d'examen, sans explication associée peut exposer le pathologiste à de nombreux appels et le patient à des explorations et à des prélèvements inutiles. De plus, le pathologiste peut être sollicité pour typer des dépôts d'amylose dans le cadre d'une amylose de localisation inhabituelle. L'amylose conjonctivale est par exemple une maladie dégénérative, secondaire à une inflammation plasmocytaire chronique localisée (Fig. 5). Cette amylose est

de sous-type immunoglobulinémique (AL), dans 88 % des cas isolée et dans seulement 6 % des cas en lien avec une atteinte systémique [6]. Ainsi, le typage de cette amylose localisée aura peu d'intérêt en l'absence de pic monoclonal ou de protéinurie de Bence-Jones.

## Techniques pour typer les dépôts

Le premier examen pour voir des dépôts demeure la coloration standard ou Hématoxylline-Eosine ± Safran (HE ± S). Les dépôts peuvent avoir toutes les couleurs en coloration standard, du rouge de l'amylose, au rose du glycogène, apparaître sous forme de vacuoles optiquement vides s'il s'agit de lipides, d'un pigment ocre pour les dépôts de fer, d'un pigment brun-foncé pour la mélanine, d'un pigment brun-vert pour la bile, d'une coloration bleu clair pour la mucine, etc. On peut noter un aspect fibrillaire pour les dépôts de cristaux d'acide urique, ou une réfringence en lumière polarisée pour certains corps étrangers, produits de comblement, etc. (Fig. 6).
<figure><img src="image_7.png" /></figure>

**Figure 3.** Dépôt de pigments exogènes. A. Dépôts de couleur noire dans le cadre d'un tatouage cutané (HES, × 40). B. Dépôts métalliques de couleur noire dans le cadre d'une métallose sur prothèse métallique orthopédique (HES, × 40). C. Dépôts d'anthracose de couleur noire dans un parenchyme pulmonaire (HES, × 43).
*Deposition of exogenous pigments. A. Black deposits in a skin tattoo (HES, ×40). B. Black metallic deposits in metallosis from an orthopedic metal prosthesis (HES, × 40). C. Black anthracose deposits in lung parenchyma (HES, × 43).*

## Principales colorations spéciales pour typer les dépôts

Le plus souvent, le pathologiste s'aidera de colorations spéciales qui sont nombreuses dans cette indication. Le pathologiste doit connaître les principales colorations spéciales utilisées, ainsi que les colorations alternatives, souvent considérées comme archaïques, mais qui peuvent aider à typer un dépôt (Tableau 1).

### Colorations de l'amylose

La coloration la plus connue pour typer des dépôts est le rouge Congo. Elle est réalisée sur coupes histologiques fixées au formol et incluses en paraffine, et sur prélèvements congelés. Elle nécessite des coupes plus épaisses que pour les autres colorations histologiques habituelles (épaisseur supérieure à 5 micromètres). Elle est analysée en lumière polarisée pour voir le dicroïsme jaune-vert caractéristique. Sa sensibilité est de 90 % et sa spécificité de 100 %, ce qui en fait la méthode de référence [7].

D'autres colorations ont été décrites pour affirmer le diagnostic d'amylose : la thioflavine T est un colorant jaune

<figure><img src="image_8.png" /></figure>

**Figure 4.** Dépôts d'amylose dans le stroma d'un trichoblastome. Ces dépôts sont d'origine tumorale, représentent une aide au diagnostic, mais ne signifient pas qu'il existe une amylose systémique. Le typage de ces dépôts et la coloration par le rouge Congo n'ont pas d'intérêt (A = HES, × 4 ; B = HES, × 40).
*Amylose deposits in the stroma of a trichoblastoma. These deposits are of tumor origin, represent an aid to the diagnosis, but do not mean that there is systemic amyloidosis. The typing of these deposits and Congo red staining are of no interest (A = HES, × 4; B = HES, × 40).*

à base de benzothiazole qui se fixe sur les dépôts amyloïdes et dont la fluorescence augmente en présence d'amylose. Cette coloration serait plus sensible que le rouge Congo mais nettement moins spécifique et n'est plus utilisée [8]. Le violet de Paris (cristal violet ou *crystal violet*) aussi appelé méthyle violet est un colorant dérivé de l'aniline qui colore l'amylose en rouge sur un fond bleu. Cette coloration est cependant peu sensible et doit être abandonnée [9]. Enfin, le rouge sirius amylose (à ne pas confondre avec le rouge sirius utilisé pour colorer le collagène de la fibrose) colore les dépôts d'amylose en rose ou rouge, avec une biréfringence jaune-vert. Cette coloration améliorée par Puchtler et par Llewellyn (et portant parfois leurs noms) est moins spécifique que le rouge Congo [10].

### Colorations des dépôts de mucine ou des dépôts similaires

Les mucines sont nombreuses et variées dans l'organisme, à la fois épithéliales et mésenchymateuses. On distingue des mucines neutres et des mucines acides, ces dernières étant subdivisées en mucines acides simples non sulfatées, mucines acides simples sulfatées, mucines acides complexes et mucines acides complexes des tissus conjonctifs (présentes notamment dans le cartilage). Ce sont les mucines acides simples non sulfatées qui vont se déposer dans les tissus, notamment dans la peau, et que le pathologiste souhaitera mettre en évidence [11].
<figure><img src="image_9.png" /><figcaption>**Figure 5.** Amylose conjonctivale se présentant cliniquement sous forme de lésions d'allure tumorale. A. Dépôts éosinophiles dans le chorion superficiel, sous l'épithélium conjonctival (HES, ×4). B. Ces dépôts sont amorphes, situés entre les glandes, et sont associés à un infiltrat inflammatoire comportant des plasmocytes (HES, ×40). C. Les dépôts sont colorés par le rouge Congo (× 20). D. Dichroïsme jaune-vert en lumière polarisée (examen du rouge Congo en lumière polarisée, × 20).

**Conjunctival amyloidosis presenting as tumor-like lesions.** A. Eosinophilic deposits in the superficial chorion, under the conjunctival epithelium (HES, × 4). B. These deposits are amorphous, located between the glands, and are associated with an inflammatory infiltrate comprising plasma cells (HES, × 40). C. The deposits are stained by Congo red (× 20). D. Yellow-green dichroism in polarized light (examination of Congo red staining in polarized light, × 20).</figcaption></figure>

En coloration standard, les dépôts de mucine apparaîtront comme un œdème ou une substance bleu clair (Fig. 7).

Le bleu alcian à pH=2,5 (ou acide) contient des molécules chargées positivement qui vont se lier aux mucines chargées négativement (mucines acides). La coloration bleue obtenue est secondaire à la présence d'atomes de cuivre dans le bleu alcian. Attention les dépôts de mucine dans les maladies de dépôts notamment cutanés, ne sont pas colorés par le bleu alcian à pH = 1 (ou à pH inférieur) !

Le fer colloïdal (ou coloration de Hale) utilise le fer ionisé (cation ferrique) et l'acide acétique pour colorer les mucines acides à la fois sulfatées et non sulfatées. Le fer colloïdal est plus sensible pour mettre en évidence la mucine dermique, mais moins utilisé en pratique car la coloration est plus complexe.

Le bleu de toluidine à pH=4 (et pas à pH=1,5) colore la mucine des dépôts en rose (c'est une coloration métachromatique car les dépôts changent de couleur).

Enfin, les dépôts de mucine ne seront pas colorés par l'acide périodique de Schiff (PAS).

Les dépôts de mucine sont digérés par la hyaluronidase car il s'agit le plus souvent de dépôts d'acide hyaluronique. Cette enzyme peut être ajoutée à la coloration par le bleu alcian pour affirmer qu'il s'agit bien d'acide hyaluronique (rarement fait en pratique).

Le bleu alcian à pH2,5 colore aussi l'acide hyaluronique et certains produits de comblement que peuvent se faire injecter les patients [12].

Pour les dépôts des thésaurismoses, les colorations des mucines décrites ci-dessus peuvent être utilisées : les glycosaminoglycanes (GAG) des mucopolysaccharidoses (maladies de surcharge lysosomales) sont colorés par le bleu alcian à pH 2,5 tandis que le fer colloïdal colore les mucopolysaccharides, les mucolipides et l'acide sialique.

Enfin, la mucicarmine n'est pas utilisée pour caractériser des dépôts de mucine.

## L'acide périodique Schiff (PAS)

C'est probablement la coloration la plus utilisée en pathologie humaine diagnostique. L'acide périodique, agent oxydant, rompt les liaisons entre 2 carbones des hydrates de carbone pour former des aldéhydes qui seront ensuite visualisés à l'aide du réactif de Schiff formant une coloration rose.

Tous les hydrates de carbone (glucides) ne seront colorés par le PAS, seuls ceux possédant un groupement 1-2 glycol ou une structure chimique équivalente. Cette coloration permet donc de détecter les polysaccharides, comme le glycogène, l'amidon, etc., les glycoprotéines, les glycolipides, les mucopolysaccharides acides (mucines des épithéliums notamment, mais pas les mucines des dépôts décrits ci-dessus).

En outre, une digestion enzymatique, soit par l'amylase salivaire (PAS amylase), soit de manière automatisée par la diastase (PAS diastase) permet de digérer le glycogène mais laisse persister une coloration rosée permettant d'affirmer que le dépôt est de nature glycogénique ou équivalente (perte de la coloration rosée).
<figure><img src="image_10.png" /><figcaption>**Figure 6.** A. Dépôts rosés, acellulaires dans une synoviale et d'aspect peigné correspondant à un tophus goûteux. Les cristaux ont été dissous par les techniques histologiques. Les zones (« stries ») optiquement vides correspondent aux empreintes des cristaux d'urate de sodium (HES, × 69). B et C. Dépôts optiquement vides, légèrement brillants, entourés d'histiocytes avec biréfringence en lumière polarisée correspondant à un corps étranger. Il s'agit d'un fil de suture dans une cicatrice cutanée (B = HES, × 14 ; C = HES, × 10 en lumière polarisée). A. Pinkish, acellular deposits in a synovium with a combed appearance corresponding to a gouty tophus. The crystals were dissolved by histological techniques. The optically empty areas ('streaks') correspond to the imprints of sodium urate crystals (HES, × 69). B and C. Optically empty, slightly shiny deposits surrounded by histiocytes with birefringence in polarized light corresponding to a foreign body (suture thread in a skin scar) (B = HES, × 14; C = HES, × 10 in polarized light).</figcaption></figure>

<figure><img src="image_11.png" /><figcaption>**Figure 7.** Dépôts de mucine dans les tissus. A, B. Dépôts de mucine interstitiels, entre les fibres de collagène, dans une dermatomyosite (A = HES, × 69 ; B = bleu alcian, × 69). C, D. Dépôts de mucine dans un pseudokyste mucoïde digital (C = bleu alcian, × 5 ; D = bleu alcian, × 40).
Mucin deposits in tissues. A, B. Interstitial mucin deposits in dermatomyositis (A = HES, × 69; B = Alcian blue, × 69). C, D. Mucin deposits in a digital mucoid pseudocyst (C = alcian blue, × 5; D = Alcian blue, × 40).</figcaption></figure>

Les indications principales du PAS en maladie de dépôts sont les thésaurismoses. Dans les maladies de surcharge lyso-somales dont le substrat accumulé est riche en hydrates de carbone (mucopolysaccharides, glycoprotéines, glycolipi-

des, mucolipides), les dépôts seront PAS positifs, diastase positifs (résistants à la digestion enzymatique), tandis que dans les glycogénoses, les dépôts seront PAS positifs mais diastase négatifs (disparition après digestion enzyma-
<table><caption>**Tableau 1** Principales colorations spéciales pour typer des dépôts.
Main special stains for typing deposits.</caption><thead><tr><th>Type de dépôts</th><th>Coloration spéciale recommandée</th><th>Autres colorations spéciales</th></tr></thead><tbody><tr><td>Amylose</td><td>Rouge Congo avec examen en lumière polarisée</td><td>Rouge sirius amylose<br>Thioflavine (sensible mais moins spécifique)<br>Violet de Paris ou cristal/crystal violet (coloration difficile à mettre au point)</td></tr><tr><td>Mucine</td><td>Bleu alcian pH 2,5</td><td>Fer colloïdal (coloration de Hale)<br>Bleu de toluidine pH 4</td></tr><tr><td>Glycosaminoglycanes (GAG)<br>Mucopolysaccharides, mucolipides, acide sialique<br>Glycogénoses<br>Protéïnose alvéolaire<br>Lipides (thésaïrismoses, pneumopathie lipidique)</td><td>Bleu alcian pH 2,5<br>Fer colloïdal<br>PAS diastase résistant<br>PAS diastase sensible<br>PAS diastase résistant<br>Huile rouge (oil-red-O)<br>nécessite un prélèvement frais ou congelé</td><td>Noir soudan</td></tr><tr><td>Immunoglobulines monoclonales non amyloïdes<br>Fer ferrique (hémosidérine)</td><td>PAS diastase résistant<br>Perls</td><td>Thirman et Schmelzer (bleu de Turnbull)</td></tr><tr><td>Fer ferreux (rarement isolé)</td><td>Thirman et Schmelzer (bleu de Turnbull)</td><td></td></tr><tr><td>Cuivre</td><td>Rhodanine</td><td>Acide rubéanique</td></tr><tr><td>Calcium</td><td>Von Kossa</td><td>Rouge d'alizarine</td></tr><tr><td>Mélanine</td><td>Fontana-Masson</td><td>Coloration de Schmorl</td></tr><tr><td>Bilirubine</td><td>Coloration de Hall (ou Fouchet modifiée)</td><td></td></tr><tr><td>Lipofuschines<br>Céroïde lipofuschinose</td><td>Nombreuses colorations, aucune spécifique</td><td>Fontana-Masson<br>PAS<br>Huile rouge<br>Noir Soudan<br>Coloration de Schmorl<br>Coloration de Ziehl-Neelsen</td></tr></tbody></table>

tique). Le polyglucosan, polysaccharide correspondant à du glycogène mal conformé, est PAS + diastase + (résistant à la digestion enzymatique).

Le PAS peut aussi colorer les dépôts d'immunoglobulines monoclonales non amyloïdes comme dans les histiocytoses cristallines, la macroglobulinémie de Waldenström, etc. Ces dépôts seront diastase résistant s(+).

Certains produits de comblement pourront être colorés par le PAS.

Les dépôts de la protéïnose alvéolaire pulmonaire sont colorés par le PAS, avec résistance à la diastase (+).

## Coloration du fer et des métaux

On distingue 2 types de fer, le fer ferreux (Fe²⁺) ou ions ferreux et le fer ferrique (Fe³⁺). La coloration de référence des dépôts de fer, est la coloration de Perls. Elle colore en bleu le fer lié à l'hémosidérine (fer ferrique) grâce au ferrocyanure de potassium. Dans les maladies de dépôts, elle est utilisée devant des dépôts brunâtres suspects d'être de l'hémosidérine, notamment dans le foie (hémochromatose), dans les liquides bronchoalvéolaires pour rechercher une hémorragie alvéolaire infraclinique, en cas d'hématome, dans les maladies s'accompagnant de dépôts de fer (exemple des vulvites et balanites plasmocytaires ou Zoon), etc.

Dans de très rares cas, la coloration de Perls ne colore pas des dépôts fortement suspects de correspondre à du

fer (corps étranger par exemple) et le pathologiste pourra s'aider de la coloration de Thirman et Schmelzer (que les anglo-saxons dénomment bleu de Turnbull) qui colore le fer ferreux et le fer ferrique. Attention cette coloration dégage une odeur très nauséabonde et n'est pas aussi sensible que la coloration de Perls pour être utilisée en routine diagnostique.

Le cuivre sera mis en évidence par la coloration de la rhodanine, utilisée presque exclusivement en pathologie hépatique (Fig. 8). C'est un agent chélateur à forte affinité pour les dépôts de cuivre liés aux protéines, qui sont particulièrement abondants dans la maladie de Wilson. Les dépôts seront visualisés en rouge-marron sur un fond bleu. La coloration par l'acide rubéanique est une alternative et colore le cuivre en vert-noir. Les 2 techniques semblent équivalentes.

Les autres métaux ne sont pas colorables.

## Colorations des graisses

Les lipides seront dissous par les solvants lors des techniques de préparation des tissus et apparaîtront comme des zones optiquement vides (le plus souvent des vacuoles) en coloration standard. Pour mettre en évidence la plupart des surcharges en lipides, il faut impérativement disposer de tissu congelé. Deux colorations des graisses sont utilisées : le noir Soudan qui colore les lipides en bleu-noir et surtout
<figure><img src="image_12.png" /><figcaption>**Figure 8.** Coloration des dépôts de cuivre par la rhodanine dans une cholestase. Les dépôts apparaissent sous forme de grains rouges dans le cytoplasme des hépatocytes. Les dépôts de bile sont de couleur jaune (rhodanine, × 60), collection Dr B. Riviere CHU de Montpellier. Coloration of copper deposits by rhodanine in cholestasis. The deposits appear as red grains in the cytoplasm of hepatocytes. Bile deposits are yellow (rhodanine, × 60), Collection Dr B. Riviere Montpellier University Hospital.</figcaption></figure>

la coloration de l'huile rouge ou Oil-Red-O qui colore les lipides en rouge. Cette dernière coloration est désormais utilisée car les lipides sont plus facilement identifiables.

Les indications des colorations des graisses sont désormais réduites aux maladies de surcharge des graisses (thésaurismoses), à des surcharges en lipides comme la pneumopathie lipidique, etc.

## Colorations du calcium

Les dépôts de calcium apparaissent violacés ou bleu-noir en coloration standard. La coloration de Von Kossa transforme les sels de calcium, liés aux phosphates, en sels d'argent grâce à une solution de nitrate d'argent, puis les phosphates d'argent vont subir une dégradation photochimique conduisant à la formation de dépôts d'argent métallique qui sera de couleur noire. Si la contre-coloration est variable, elle est le plus souvent un rouge nucléaire (noyaux en rouge, cytoplasmes en violet). Attention la mélanine est aussi colorée par le Von Kossa car la mélanine a la capacité de réduire les solutions de nitrate d'argent !

Le rouge d'alizarine est un colorant qui se fixe au calcium par un processus de chélation, mais qui n'est pas totallement spécifique car d'autres métaux peuvent réagir et être colorés. Ces métaux ne sont cependant pas présents dans les tissus humains qui sont en général analysés. Les dépôts calciques apparaîtront rouges. Le rouge d'alizarine est peu utilisé en diagnostic de routine.

## Autres colorations spéciales pour typer les pigments

La mélanine sera colorée par la coloration de Fontana-Masson. Comme mentionné ci-dessus, la première étape consiste à mettre en contact la mélanine avec une solution de nitrate d'argent ce qui va permettre la formation d'argent métallique. Les dépôts de mélanine apparaîtront en noir sur fond rose. Une alternative moins utilisée est la coloration de Schmorl. Pour cette coloration, la mélanine réduit le ferricyanure (ferricyanide en anglais) en ferrocyanure avec production de bleu de Prusse en présence de sels de fer. La mélanine apparaîtra alors en bleu foncé sur fond rose. La principale indication des colorations de la mélanine

est la caractérisation de pigments dermiques et leur différenciation par rapport à l'hémosidérine et aux tatouages.

La coloration de Hall aussi dénommée coloration de Fouchet modifiée permet de colorer la bile. Le réactif de Fouchet va convertir par oxydation les pigments biliaires (s'ils ont été au préalable conjugués) en biliverdine verte qui apparaîtra de couleur verte avec une intensité du vert olive au vert émeraude, sur un fond jaune, le tissu conjonctif (collagène notamment) étant coloré en rose à rouge.

Les lipofuscines, sont des pigments intracellulaires jaune-brun, finement granuleux, composés de débris de molécules, notamment de lipides, mais aussi d'hydrates de carbone, de métaux (fer, cuivre, calcium, etc.) [13]. Elles proviennent du vieillissement des lysosomes dans les cellules. Les lipofuscines peuvent être colorées par de nombreuses colorations : noir Soudan, huile rouge, PAS, coloration de Fontana-Masson, coloration de Schmorl, coloration de Ziehl-Neelssen, etc. [14]. Si on peut observer des dépôts de lipofuscine dans de nombreux organes, sans qu'ils soient pathologiques (foie, muscle, etc.), ils peuvent s'accumuler dans la cadre de thésaurismoses dénommées alors céroïdes lipofuscinoses. La mélanose colique secondaire à la prise de laxatifs, correspondant aussi à des lipofuscines de type céroïde, sera colorée par les colorations des lipofuscines (Fig. 9).

## Autres techniques

### Immunohistochimie et immunofluorescence

Ces 2 techniques sont utiles essentiellement dans le cadre de l'amylose et des maladies de dépôts d'immunoglobulines. Quatre anticorps principaux sont utilisés : chaîne légère kappa, chaîne légère lambda, transthyrétine, et *serum amyloid A* (ou SAA).

D'autres anticorps sont spécifiques d'une pathologie et le plus souvent réservés à des centres experts : l'anticorps anti-bêta-amyloïde (ou APP (*amyloid precursor protein*) ou βA4) sera par exemple utile dans le cadre de l'angiopathie amyloïde. À l'inverse, certains types d'amyloses « localisées » comme les amyloses cutanées primitives (*amylose maculeuse* et *lichen amyloïde*) étant constituées en majorité d'une accumulation de filaments
<figure><img src="image_13.png" /><figcaption>**Figure 9.** A. Lipofuscinose dans des macrophages du chorion d'une biopsie colique dans le cadre d'une pseudomélanose colique (HES, × 44). B. Les dépôts sont colorés en noir par la coloration de Fontana-Masson (× 44). C. Les dépôts ne sont pas colorés par la coloration de Perls (× 44). D. Les dépôts sont colorés en rose par le PAS (× 44).
A. Lipofuscinosis in macrophages in the chorion of a colon biopsy in pseudomelanosis coli (HES, ×44). B. The deposits are colored black by the Fontana-Masson staining (Fontana-Masson, × 44). C. The deposits are not stained by Perls staining (× 44). D. The deposits are colored pink by PAS (× 44).</figcaption></figure>

<figure><img src="image_14.png" /><figcaption>**Figure 10.** Marquage des dépôts de chaîne kappa dans une amylose conjonctivale (cas de la Fig. 5). Ces dépôts ne sont pas marqués en immunohistochimie (A= chaîne légère kappa ; B= chaîne légère lambda) mais sont fluorescents en immunofluorescence pour la chaîne légère lambda (C= chaîne légère kappa ; D= chaîne légère lambda). Il s'agissait d'une amylose localisée AL lambda.
Staining of kappa light chain deposits in conjunctival amyloidosis (case in Fig. 5). These deposits are not stained by immunohistochemistry (A=kappa light chain; B= lambda light chain) but are fluorescent by immunofluorescence for lambda light chain (C=kappa light chain; D= lambda light chain). This was localized AL lambda amyloidosis.</figcaption></figure>

de kératine, ces dépôts seront marqués par les anticorps anti-cytokératines (AE1/AE3, CK5/6).

L'immunofluorescence est utilisée principalement pour le typage de l'amylose immunoglobulinique (AL), ou pour les maladies de dépôts non amyloïdes d'immunoglobulines monoclonales rénales (maladie de Randall) ou extra-rénales (maladie des dépôts de chaînes légères pulmonaire ou LCDD pour light chain deposition disease). En effet, dans cette indication, la sensibilité de l'immunofluorescence est meilleure que celle de l'IHC et peut aider lorsque les dépôts

sont positifs au rouge Congo sans positivité en IHC avec les 4 anticorps utilisés (Fig. 10). Lorsque le pathologiste ne dispose pas de tissu congelé, il est possible de réaliser une étude en immunofluorescence après digestion des coupes paraffinées à l'aide de la pronase [15].

## Histoenzymologie

Cette technique n'est plus que rarement utilisée en pathologie, principalement pour le diagnostic de la mal-
adie de Hirschprung et pour le diagnostic des myopathies. Pour les surcharges, les rares indications concernent les dépôts intra-musculaires d'origine génétique (thésaurismoses). L'histoenzymologie nécessite du tissu congelé et ne peut être réalisée sur tissu fixé au formol et inclus en paraffine. L'histoenzymologie pour le diagnostic des thésaurismoses n'est plus pratiquée que dans des centres experts.

## Microscopie électronique

Comme la technique précédente, la microscopie électronique (ME ou analyse ultrastructurale) a conservé peu d'indications pour le diagnostic d'une maladie de dépôts et pour le typage de ceux-ci. Elle n'est plus réalisée que dans quelques centres experts, souvent au sein de réseaux de maladies rares et chaque centre de microscopie électronique tend à se spécialiser dans un ou quelques domaine(s) de la pathologie (ex : néphropathologie, neuropathologie, pathologie cutanée, etc.). Cette analyse nécessite aussi une fixation particulière, en glutaraldéhyde. En pathologie de dépôts, les principales indications correspondent au typage des amyloses et des dépôts d'immunoglobulines monoclononales non amyloïdes non caractérisables par les autres techniques (coloration standard, coloration par le rouge Congo, immunohistochimie et immunofluorescence), les maladies de surcharge d'origine génétique (maladies de surcharge lysosomales, les glycogénoses, etc.). L'immunomicroscopie électronique (IME), utilisant un marquage des dépôts par des anticorps spécifiques de protéines d'amylose (par exemple les chaînes légères lambda ou kappa, la transthyrétine) couplés à des billes d'or, augmenterait la sensibilité de la ME à transmission [16].

## La protéomique

La protéomique, ou analyse protéomique basée sur la spectrométrie de masse en tandem (LCMSMS), est une technique récente utilisée pour le typage de l'amylose depuis la fin des années 2010. Depuis 10 ans, elle tend à s'imposer comme une technique clé pour le typage des dépôts amyloïdes ou de nature immunogloblinique non amyloïde [17]. En France, très peu de centres disposent de cette technique pour le diagnostic de routine [18]. Son avantage est qu'elle peut être réalisée sur des prélèvements fixés au formol et inclus en paraffine, ces fragments étant d'abord microdisséqués par laser avant l'analyse. Elle n'est pas utilisée hors de l'amylose.

## En conclusion

Les maladies des dépôts endogènes et exogènes sont des maladies nombreuses aux processus physiopathologiques variés dont le diagnostic repose en premier lieu sur les colorations standard (HE ± S) et les colorations spéciales. Avec l'automatisation de l'anatomie pathologique (automates de colorations spéciales), la connaissance de ces colorations tend à se perdre, surtout lorsque les colorations spéciales sont réalisées manuellement. De plus, le traitement analytique est essentiel, notamment l'épaisseur des coupes pour le rouge Congo (épaisseur > 5 microns), et les experts continuant de recevoir des cas faussement positifs ou faussement négatifs d'amylose. Les techniques plus « modernes » (IHC, protéomique) ou « anciennes » (ME, histoenzymologie) ne doivent être réalisées qu'en seconde intention, et sont réservées à des centres experts, car leur mise en place peut être difficile et/ou coûteuse et leur interprétation source de pièges.

## Remerciement

Je remercie le Pr Marie-Christine Copin (CHU d'Angers) pour son soutien lors de l'organisation de cette journée, les Prs Prévot et Rousseau, et le Dr Lacroix-Triki qui ont cru au projet d'un numéro commun AIP-SFP dans les *Annales de Pathologie*, et surtout le Dr Agnès Neuville (cabinet IPATH Amiens) pour son important travail dans la réalisation de ce numéro, et ses nombreux conseils dans la rédaction de cet article Je remercie aussi le Dr Riviere (CHU de Montpellier) pour m'avoir prêté un cas pour la figure 8.

## Déclaration de liens d'intérêts

L'auteur déclare ne pas avoir de liens d'intérêts.

## References

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