CONGRÈS CONJOINT APPQ-RSR DU FRSQ
ASSOCIATION DES PNEUMOLOGUES DE LA PROVINCE DE QUÉBEC
RÉSEAU EN SANTÉ RESPIRATOIRE DU FRSQ
LES 18, 19 ET 20 NOVEMBRE 2010
Le Nouvel Hôtel & Spa, Montréal, Québec

# 1 RÉGULATION DE L'EXPRESSION DE LA NADPH OXYDASE DUOX2 PAR DES FACTEURS SOLUBLES SECRÉTÉES PAR LES CELLULES ÉPITHÉLIALES LORS D'UNE INFECTION PAR DES VIRUS RESPIRATOIRES

Karin Fink, Stéfany Chartier, Fabrice Yoboua, Esperance Mukawera et Nathalie Grandvaux.

Centre de Recherche du CHUM (CRCHUM) et Département de Biochimie, Faculté de Médecine, Université de Montréal, Montréal, QC

La NADPH oxydase DUOX2, exprimée dans les cellules épithéliales des voies aériennes (AEC), est impliquée dans la défense antimicrobienne au niveau de muqueuses pulmonaires. DUOX2 produit du peroxyde d'hydrogène extracellulaire, qui est essentiel à la formation de l'agent microbicide hypothiocyanate par le système lactoperoxydase/thiocyanite/ peroxyde d'hydrogène. Ce système est bactéricide, mais cible également certains virus. Nos études visent à étudier le rôle des NADPH oxydases dans le contexte de l'infection virale par le virus Sendai (SeV) et le Virus Respiratoire Syncytial (RSV). Nous avons découvert que l'expression de DUOX2 au niveau ARNm est induite suite à l'infection par SeV et dans une moindre mesure suite à l'infection par RSV. La protéine DUOX2 n'est détectée qu'en réponse à l'infection par SeV, ce qui suggère un mécanisme d'inhibition par RSV. Des expériences avec des milieux de culture conditionnés par une infection virale démontrent que l'induction de DUOX2 est médiée par des facteurs solubles secrétés par la cellule infectée. Notamment, les interferons font partie de ces protéines secrétées. La stimulation des AEC par l'IFNα2b, l'IL-28 et l'Il-29 ou l'IFNγ n'induit pas l'expression de DUOX2, tandis que l'IFNβ ne l'induit que faiblement. Comme les niveaux d'induction de DUOX2 obtenus suite à la stimulation par l'IFNβ sont inférieurs à ceux obtenus avec l'infection et STAT1 n'est pas impliqué dans l'induction de l'expression de DUOX2 par les virus, nous évaluons la contribution d'autres cytokines. Ces études sont importantes afin de caractériser un mécanisme de défense antiviral des muqueuses pulmonaires impliquant la protéine DUOX2.

# 2 ÉTUDE DE L'EFFET DE LA COMBINAISON D'UN IMMUNOSUPPRESSEUR ET D'UN ANTAGONISTE DU RÉCEPTEUR NK1 SUR LA RÉPONSE DES LYMPHOCYTES T.

K Jizi, M Welman et K Maghni

Centre de Recherche de l'Hôpital du Sacré-Coeur, Laboratoire de Neuroimmunologie, Université de Montréal, Montréal, QC

La cyclosporine (CsA) et le FK506 inhibent l'activation des lymphocytes T (LT) responsables du rejet de greffes alors que la rapamycine (Rapa) diminue leur prolifération. Malgré leur efficacité thérapeutique, ces molécules présentent plusieurs effets secondaires qui réduisent leur usage à long terme. Une option thérapeutique potentielle serait de combiner l'immunosupresseur à une molécule qui maintiendrait son efficacité tout en diminuant sa dose. Le récepteur neurokinine 1 (NK1R) activé par son ligand la substance P (SP) régule la prolifération des LT. En outre, ces cellules expriment la SP et le NK1R, suggérant l'existence d'un mécanisme autocrine de régulation.

**OBJECTIF** : Déterminer l'effet de la combinaison des antagonistes du NK1R (e.g. L-733,060) avec la CsA, le FK506 ou la Rapa sur les fonctions des LT.

**MÉTHODOLOGIE** : Les cellules Jurkat sont des LT humains utilisés comme modèle cellulaire pour étudier les mécanismes d'action des immunosupresseurs. Les cellules furent incubées avec la Rapa (1; 0,5 et 0,1 nM) en présence du L-733,060 (1, 5 et 10 µM), et le niveau de phosphorylation de la protéine S6 ribosomale (S6R) fut mesuré par cytométrie en flux. Elles

furent aussi incubées avec la CsA (1, 5 et 10 ng/ml) ou le FK506 (0.01, 0.05 et 0.1 ng/ml) en présence du L-733,060. Les niveaux d'interleukine-2 (IL-2) furent mesurés par ELISA.

**RÉSULTATS** : La combinaison du L-733,060 avec la Rapa est sans effet sur l'inhibition de la phosphorylation de la S6R. Par contre, la combinaison de la CsA ou du FK506 avec le L-733,060 réduit significativement la production d'IL-2 par les LT.

**CONCLUSION** : Le système SP/NK1R est impliqué dans la synthèse d'IL-2 chez les LT selon un mécanisme fort probablement autocrine. La combinaison de la CsA ou du FK506 avec un antagoniste du NK1R pourrait être une option pour réduire la dose thérapeutique de ces immunosupresseurs.

*Supporté par VINCI-Programme de soutien à la maturation de projets technologiques, Université de Montréal.*

# 3 PRESSURIZED WHEY PROTEIN ENHANCES BACTERICIDAL ACTIVITY OF NEUTROPHILS IN LUNG INFECTION WITH PSEUDOMONAS AERUGINOSA

O Kishta, G Fruchter and LC Lands

Montreal Children's Hospital, McGill University Health Centre, McGill University, Montreal, QC

**BACKGROUND** : *P. aeruginosa* is a ubiquitous gram-negative pathogen commonly responsible for chronic respiratory infections. Whey protein is a natural by-product of cheese production known to contain biologically active peptides. These peptides can enhance the respiratory burst in neutrophils. Hyperbaric pressure treatment of whey enhances its digestibility and alters the spectrum of peptides available for intestinal absorption by the host. We have demonstrated a significant decrease in the lung bacterial burden at 3 days post-infection in mice fed with pressurized whey compared to their counterparts fed native whey (abstract, ATS 2009). Yet the mechanisms by which pressurization of whey enhances its antimicrobial effect are still speculative.

**HYPOTHESIS** : We hypothesize that pressurization of whey enhances antibacterial effect by increasing bactericidal activity of neutrophils.

**OBJECTIVE** : To study the mechanisms of the antibacterial effect of pressurized whey protein. Methods: Two groups of female C57BL/6 mice were randomized to semi-purified diets containing either native or pressurized whey as a protein source for 4 weeks, followed by pulmonary infection with *P. aeruginosa* (8×10⁵ CFUs/mouse). 24 hours post-infection mice were euthanized and lung inflammatory cells (80-90% neutrophils) were collected by lung lavage. Bactericidal activity of these neutrophils was studied. 5×10⁵ cells were incubated with opsinized *P. aeruginosa*. Aliquots were taken at 10, 20, and 30 minutes intervals, diluted and plated on agar plates. Colonies were counted the following day to estimate the surviving bacteria. Production of super oxide anion by lavage neutrophils was measured ex vivo. Results: The surviving bacteria was significantly lower at 30 min vs. 10 min in the pressurized whey group (113.8±19%, 51.1±16.2%, 10, 30 min, respectively, p<0.05, n=7) and not in the native whey group (141.9±29%, 72.3±22%, 10, 30 min, respectively, n=7). Production of superoxide anion, as an index of the neutrophils respiratory burst, tended to be higher in the pressurized whey group compared to its level in the native whey group (medians: 0, 0.65 nmoles/50000 cells, native and pressurized whey groups, respectively; p=0.07, n=6-7). Further super oxide anion showed a strong negative correlation with the lung bacterial burden in the pressurized whey group (R= -0.8, p=0.08, N=5) unlike the native whey group (R= -0.25, p=0.7, n=4).

**CONCLUSION** : Supplementation with pressurized whey protein enhances bactericidal activity of neutrophils and helps the host control bacterial infection.

*Supported by Sick kid foundation, Toronto*
4

# MARQUEURS DE L'INFLAMMATION ET DU REMODELAGE EN POST-GREFFE PULMONAIRE

B Parisien, S Ptaszynski, C Poirier, C Bergeron
CRCHUM et Programme de transplantation pulmonaire du
Québec, HND-CHUM, Montréal, QC

La transplantation pulmonaire est la meilleure solution pour les maladies pulmonaires terminales. Or, la bronchiolite obliterans (BO) est une complication qui affecte plus de la moitié des patients transplantés après 5 ans. L'étiologie de la BO demeure toujours inconnus. Nous proposons que certains médiateurs inflammatoires et fibrotiques initiés par l'apoptose sont impliqués dans le processus fibroprolifératif de la BO. Afin de tester notre hypothèse, nous avons mesuré les taux de TGF-beta, de Connective tissue growth factor (CTGF), d'IL-17, d'IL-8 et du résidu télopeptide carboxyterminal croisé-lié du collagène type I (ICTP) à l'aide de la technique ELISA dans le lavage bronchoalvéolaire (LBA) de receveurs de greffe pulmonaire. 55 LBAs ont été prélevés chez 38 patients différents à des temps post-greffes allant de 1 à 275 semaines, dont 9 ont évolués vers la BO et 45 stables au moment de l'analyse. Les marqueurs solubles sont détectés en quantité moindre en présence d'un processus de BO de façon non significative pour : TGF-beta (p=0.9149), IL-17 (p=0.2225), CTGF (p=0.25), IL-8 (p=0.3729) et ICTP (p=0.26). IL-8 et TGF-beta corrèlent positivement avec la neutrophilie du LBA (respectivement : p= 0.001 et p=0.0002). IL-17 corrèle négativement avec IL-8 (R2=-0.62) et la neutrophilie (p=0.004). ICTP est significativement et positivement associé à la neutrophilie (p=0.00001) ainsi qu'aux épisodes de rejet aigu (p<0.05). L'analyse à travers le temps post-greffe démontre une réduction des marqueurs: TGF-beta (p=0.082), CTGF (p=0.359), IL-17 (p=0.653) et ICTP (p=0.047), suggérant que la composante inflammatoire et de remodelage prédominent dans les premières semaines suivant la greffe. Nos résultats démontrent la présence de marqueurs inflammatoires et fibrotiques dans les LBA de greffés pulmonaires. TGF-beta et ICTP corrèlent avec l'intensité de la neutrophilie élevée du LBA qui est caractéristique de la BO.

5

# IMPLICATION DU RÉCEPTEUR DU FACTEUR DE CROISSANCE ÉPIDERMIQUE (EGFR) DANS LA RÉPONSE IMMUNITAIRE DES CELLULES PULMONAIRES ÉPITHÉLIALES LORS DE L'INFECTION PAR PSEUDOMONAS AERUGINOSA.

G Martel, L Roussel, J Berubé, S Rousseau
Les laboratoires Meakins-Christie, Institut de recheche du Centre
universitaire de santé McGill, Montréal, QC

**INTRODUCTION:** La fibrose kystique (FK) est la maladie génétique mortelle la plus répandue dont 1 personne sur 20 est porteuse du gène défectueux au Québec. Ces mutations se retrouvent au niveau du gène du régulateur transmembranaire de la fibrose kystique (CFTR) et amène une hypersécrétion de mucus ainsi qu'une infection chronique à Pseudomonas aeruginosa (PA). Notre groupe a récemment démontré que la perte de CFTR amplifiait la réponse immunitaire lors de stimulation de cellules pulmonaires épithéliales de patients FK, versus non-FK, par un filtrat de PA (PAF). Cette réponse accrue s'observe par une hyperactivation de la voie des protéines kinases activées par les mitogènes (MAPK) (p38, ERK1/2) résultant en une augmentation de la sécrétion d'interleukine 6 (IL-6). L'activation des MAPK et la relâche d'IL-6 lors de la stimulation par PAF se produit en partie via le toll-like receptor 5 (TLR5).

**OBJECTIF:** Étudier le rôle du récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) dans la réponse immunitaire lors de stimulation par PAF.

**MÉTHODES:** Des coupes histologiques de poumons de patients FK et non-FK ont été utilisés afin d'étudier EGFR. La production d'IL-6 a été mesurée dans des cellules de patients FK et non-FK après stimulation par PAF en présence ou non d'un inhibiteur de EGFR.

**RÉSULTATS:** Nous avons découvert que, en comparaison aux patients non-FK, l'épithélium pulmonaire des patients FK contient une forme phosphorylée de EGFR. Dans nos modèles cellulaires, la stimulation par PAF induit une hausse de l'expression d'IL-6, jusqu'à 7 fois plus dans les cellules FK que non-FK, tandis que l'inhibition de EGFR provoque une baisse de 50% de la production cette cytokine dans les deux types cellulaires.

**CONCLUSION:** Nos résultats suggèrent une participation de EGFR dans la réponse immunitaire lors de l'infection par PA. Cette voie est fonctionnelle autant chez les patients FK que non-FK mais l'amplitude de la réponse demeure plus importante chez les patients atteint de FK.

6

# NOUVEAUX GÈNES DE VIRULENCE CHEZ UN PATHOGÈNE OPPORTUNISTE INFECTANT LES PERSONNES ATTEINTES DE FIBROSE KYSTIQUE.

SJ Charette¹,², G Filion¹,², SGE Tan¹, I Kukavica-Ibrulj¹, AA Lemieux¹, RC Levesque¹

¹Institut de biologie intégrative et des systèmes; ²Centre de recherche de l'Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste qui provoque des infections respiratoires chroniques qui environ 80% des personnes atteintes de fibrose kystique (FK). Les souches de P. aeruginosa telle LESB58 causant ces infections sont hypervirulentes et possèdent des caractéristiques bien distinctes incluant la production d'un biofilm plus abondant qui accroît leur résistance aux antibiotiques et au système immunitaire. Pour mieux traiter ces infections, on doit, dans un premier temps, mieux comprendre le comportement de ces bactéries aux niveaux physiologiques et moléculaires pour éventuellement identifier de nouvelles cibles thérapeutiques. Nous avons fait le criblage d'une collection de mutants de la souche LESB58 pour identifier ceux ayant perdu leur virulence face à l'amibe Dictyostelium discoideum, un hôte alternatif reconnu pour son utilité dans l'identification de facteurs universels de la virulence bactérienne. Cette collection de mutants provenait elle-même d'un criblage fait chez le rat et comportait 162 mutants démontrant une potentielle perte de virulence face à l'animal, mais qui demandait confirmation. Le criblage de cette collection de ces 162 mutants en utilisant le test de virulence chez l'amibe a permis d'identifier 52 mutants ayant aussi perdu leur virulence face à ce modèle. Parmi ces 52 mutants, un groupe d'une dizaine de mutants a présenté une virulence particulièrement très affaiblie. La fonction possible de ces nouveaux gènes de virulence sera discutée ainsi que les avancées qui pourront être réalisées pour le traitement de ces infections grâce à la caractérisation fonctionnelle de ces gènes qui sera fait dans le futur.

7

# IMPACT DU 2-ARACHIDONOYL-GLYCÉROL SUR LES FONCTIONS DU NEUTROPHILE HUMAIN ASSOCIÉES À LA DÉFENSE DE L'HÔTE

F Chouinard, L Bouchard, S Poirier, S Jean, L Flamand, M Laviolette, N Flamand

Centre de recherche de l'IUCPQ, Faculté de médecine, Université Laval, Sainte-Foy, QC

**CONTEXTE:** L'élimination des microbes pathogènes par le neutrophile permet de maintenir l'homéostasie pulmonaire. Ce phagocyte y contribue directement par l'ingestion et la destruction des pathogènes ainsi que par la libération de peptides microbicides comme les défensines-alpha et la cathélicidine LL-37. Le neutrophile activé participe aussi à la défense de l'hôte en produisant des lipides bioactifs dérivés de l'acide arachidonique. Ces médiateurs, notamment le leucotriène (LT) B4, recruteront et activeront les leucocytes aux sites infectieux. Quant à eux, les endocannabinoïdes sont des médiateurs lipidiques agissant principalement au cerveau (SNC). Cependant, ils ont aussi des propriétés immunomodulatrices. D'ailleurs, ils sont de très bons activateurs des neutrophiles (Chouinard et al, J Immunol).

**OBJECTIFS:** Déterminer si les endocannabinoïdes promeuent la défense de l'hôte par les neutrophiles.

**RÉSULTATS:** L'endocannabinoïde 2-arachidonoyl-glycérol (2-AG) active plusieurs fonctions reliées à la défense de l'hôte chez le neutrophile humain telles que la biosynthèse de LTB4 et la libération de peptides microbicides. La libération de peptides microbicides observée était d'ailleurs suffisante pour bloquer la croissance bactérienne et l'activité virucide du HSV-1. Les récepteurs des cannabinoïdes, qui sont activés par le 2-AG, ne sont pas impliqués dans l'activation du neutrophile. Nos résultats indiquent
plutôt que les effets du 2-AG sur l'activation du neutrophile sont la con-
séquence de l'activation du récepteur 1 du LTB4.

CONCLUSION : Le 2-AG est un excellent activateur du neutrophile humain. Cette activation se produit suite à la biosynthèse de novo de LTB4 et à l'activation du récepteur 1 du LTB4 par stimulation autocrine. Nous testons présentement si le 2-AG (et le LTB4) a un potentiel virucide sur le RSV.

Supporté par les IRSC, le RCA et le FRSQ.

8
RÉSULTATS D'UNE ÉTUDE PRÉCLINIQUE DE LA
PROCÉDURE DE SEVRAGE DE LA VENTILATION
LIQUIDIENNE TOTALE

Marie-Eve Rochon¹, Olivier Avoine¹, Raymond Robert², Roula Albadine³, Jean-Paul Praud¹, Philippe Micheau², Hervé Walti¹

¹Département de Pédiatrie; ²Département de Bio-ingénierie;

³Département de Médecine, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC

OBJECTIF: Étudier la procédure de sevrage de la ventilation liquidienne totale (VLT) au cours de laquelle deux types de perfluorocarbones (PFC), soit le Perfluorodecalin (PFDEC) et le Perflubron (PFOB) on été utilisés, à l'aide d'un modèle néonatal ovin à poumons sains.

MATÉRIEL ET MÉTHODES: Dix agneaux nouveau-nés, pesant 3,4±0,3 kg et ayant ≤4 jours de vie ont été anesthésiés, intubés, ventilés et paralysés. Une instrumentation chirurgicale a permis un monitoring des gaz du sang et de l'état hémodynamique. Les sujets ont été randomisés en 2 groupes selon le type de PFC utilisé lors de la VLT, soit le PFDEC, soit le PFOB. Une période de VLT d'une heure a été effectuée selon les paramètres suivants: Vt=25 mL/kg, FR=6,5/min, PEEP=1 cmH₂O. Puis, le passage en VLP a été effectué en fin d'expiration à l'aide de notre prototype. Pendant le sevrage, une procédure de succion du PFC résiduel ou du mucus a été employée au besoin. Les paramètres de ventilation gazeuse (Vt, PEEP, FiO₂) ont été ajustés à toutes les 30 min pour une période de sevrage totale de 12h.

RÉSULTATS: Lors de la VLT, les gaz artériels des agneaux ventilés avec le PFOB et avec le PFDEC étaient comparables. Par contre, une baisse de la pression artérielle systémique moyenne (APm) et une augmentation de la pression artérielle pulmonaire moyenne (PAPm) ont été notées dans le groupe PFDEC. Au cours de la période de sevrage de la VLT, une ventilation alvéolaire normale a été maintenue dans les deux groupes, mais l'oxygénation s'est graduellement et considérablement détériorée. Également, tout au long de l'expérimentation, des pressions de ventilations plus faibles étaient requises dans le groupe PFOB.

CONCLUSION: Le sevrage de la VLT chez des sujets sains a été effectué en préservant une bonne ventilation alvéolaire, mais avec un niveau d'oxygénation se dégradant graduellement dans les 2 groupes. Par ailleurs, la phase de VLT a été plus efficace lorsque le PFOB était utilisé.

9
CORRÉLATION ENTRE L'EFFORT DU PATIENT ET LE
SUPPORT VENTILATOIRE : UNE NOUVELLE MÉTHODE
D'ANALYSE DE LA SYNCHRONIE PATIENT-VENTILATEUR
INDÉPENDANTE DE L'OBSERVATEUR

G Emeriaud, A Bordessoule, P Jouvet

CHU Sainte-Justine, Université de Montréal, Montréal, QC

INTRODUCTION : L'asynchronie patient-ventilateur est associée à une ventilation prolongée. L'évaluation de l'asynchronie est habituellement basée sur le calcul des efforts perdus, cycles autodéclenchés, et délais de déclenchement, nécessitant l'identification manuelle des inspirations/expirations sur les tracés respiratoires. Cette méthode longue et subjective a une reproductibilité peu validée et est inapplicable sur des tracés très variables. Nous proposons une nouvelle méthode d'analyse pour éviter ces problèmes.

MÉTHODES : Le principe de la synchronie est l'adéquation entre assistance ventilatoire et effort du patient. Un graphique de corrélation entre la pression ventilatoire Pvent (reflet du support) et l'activité électrique du diaphragme AEdi (reflet des efforts du patient) est construit à partir de la

totalité des signaux enregistrés. Le coefficient de détermination R2 estime globalement l'importance de la corrélation. Ensuite, 2 zones d'asynchronie sont identifiées: l'une inclut les points avec AEdi basse-Pvent haute (reflet des autodéclenchements et délais d'inactivation); la 2nde inclut les points avec AEdi haute-Pvent basse (efforts perdus, délais du déclenchement). Cette méthode a été testée chez 10 nourrissons ventilés en NAVA, pression contrôlée (PCV) puis aide inspiratoire (AI).

RÉSULTATS : La méthode d'analyse était facile, rapide, avec une excellente reproductibilité inter-observateur (coefficients de corrélation intracLASSE>0.95). Le R2 (médiane,IQR) était de 0.7(0.4-0.8) en NAVA, 0.3(0.2-0.4) en PCV et 0.3(0.2-0.4) en AI (p<0.05 NAVA vs PCV et AI). Le %temps passé avec "AEdi basse-Pvent haute" était de 7%(3-17), 23%(12-28) et 14%(5-23) dans le même ordre, et le temps passé avec "AEdi haute-Pvent basse" était de 5%(1-10), 4%(1-10) et 12%(1-18).

CONCLUSION : Cette nouvelle méthode d'analyse de la synchronisation est rapide et indépendante de l'observateur. Elle confirme l'amélioration de la synchronisation en mode NAVA chez l'enfant.

10
THE SITE OF AIRWAY NARROWING DURING THE EARLY
ALLERGIC RESPONSE AND THE INFLUENCE OF
EXOGENOUS SURFACTANT ADMINISTRATION

S Siddiqui, K Tsuchiya, SR Bullimore, A Benedetti, JG Martin Meakins-Christie Laboratories, McGill University, Montreal, QC

The constant phase model of respiratory system mechanics provides information concerning the site of airway (aw) narrowing. However the relationship between the alterations in mechanical characteristics and the site of aw narrowing has not been examined directly. Aw narrowing after allergen challenge may be caused by smooth muscle contraction and by microvascular leak from bronchial vessels. Protein within the aw may disrupt endogenous surfactant activity and increase surface tension (ST) that may also contribute to aw narrowing, particularly in small aws. We have analyzed the mechanics and aw luminal changes occurring during the allergen-induced early responses using an ovalbumin (Ova)-sensitized rat model. The first aim of the study was to compare the site of aw narrowing as determined by the parameters of the constant phase model and by morphometry. The second aim was to test the effects of a naturally-occurring, commercially-available surfactant, Infasurf®, on both the latter assessments.

METHODS: Two weeks after Ova sensitization, mechanically ventilated, anesthetized BN rats underwent a 1 min aerosol 5% Ova/vehicle challenge. Other animals underwent a surfactant nebulization for 5 min prior to challenge. After a 20 min recording, the chest was opened and the lungs snap-frozen. Tissues were fixed with a 1 min solution, paraffin-embedded and stained with H&E. Aw lumen carbox was assessed morphometrically at this time point and in another set of animals at the early allergic response (EAR) peak.

RESULTS/DISCUSSION: Both the constant phase model and morphometric assessments indicate that Ova challenge leads to transient central and more sustained peripheral aw narrowing, supporting the interpretation that while RN parameter samples larger aws, G covers a larger range. Surfactant inhibits the peak EAR while centrally inhibiting bronchoconstriction as assessed by morphometry. This latter finding suggests a role for ST in aw narrowing associated with allergen exposure.

11
L'EFFET DE LA PROGESTÉRONE SUR LA RÉPONSE
VENTILATOIRE À L'HYPOXIE CHEZ LE RAT EN
DÉVELOPPEMENT.

JC Laurin, O Hichri, C Julien, V Joseph, A Bairam

Département de Périnatalogie, Centre de recherche de l'Hôpital St François d'Assise, Québec, QC

INTRODUCTION: Il a été récemment proposé que la progestérone pourrait être utilisée dans le traitement de l'apnée chez l'enfant prématuré surtout lorsque l'apnée persiste au traitement standard par méthyxanthines. La progestérone est un stimulant respiratoire qui augmente la réponse ventilatoire à l'hypoxie chez le rat adulte et le raton à l'âge de 10 jours. Cette étude se propose de déterminer l'effet de la progestérone chez des rats en développement.
**METHODE:** La fréquence respiratoire (fR), le volume courant (VT) et la ventilation minute (Ve=fRxVT) sont mesurés par pléthysmographie en condition de base (normoxie, 21% O₂) et en réponse à l'hypoxie (12% O₂, 20 min) chez des ratons âgés de 4, 7 et 12 jours. Pour chaque âge, ils sont répartis en 2 groupes : contrôle (salin, ip 2ul/g, 30 min avant expérience) et progestérone (4 mg/kg, ip).

**RESULTS:** En comparaison du groupe contrôle, aucun effet de la progestérone n'a été observé en normoxie quelque soit l'âge étudié. Cependant, la réponse ventilatoire à l'hypoxie est augmentée par la progestérone aussi bien lors du pic (4 min) qu'à l'état stable (20 min) chez tous les âges étudiés. Par exemple, chez les ratons de 4 jours, en comparaison du groupe contrôle, la Ve (% de normoxie) est de 169±7% vs. 142±8% lors du pic et de 123±9% vs. 91±3% lors de l'état stable (p inférieur à 0.05).

**CONCLUSION:** Ces résultats préliminaires suggèrent que la progestérone augmente la réponse ventilatoire à l'hypoxie chez le rat pendant le développement. Cet effet est similaire quelque soit l'âge étudié.
(Fondation des Etoiles, IRSC)

# 12 ABSENCE DE FERMETURE LARYNGÉE ACTIVE DURANT LE NEURO-ASSERVISSEMENT DE LA VENTILATION ASSISTÉE (NAVA) CHEZ L'AGNEAU NOUVEAU-NÉ

Mohamed Amine Hadj-Ahmed¹, Jennifer Beck², Nathalie Samson¹, Jean-Philippe Gagné¹, Jean-Paul Praud¹
Unité de recherche respiratoire néonatale, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC; ²Centre de recherche Keenan, St Michael's Hospital, Toronto, ON

Les niveaux élevés d'aide inspiratoire nasale (nAI) peuvent induire une fermeture active du larynx qui limite la ventilation alvéolaire (Moreau-Bussière F, 2007). Contrairement à l'AI, le Neuro-Asservissement de la Ventilation Assistée (NAVA) est synchronisé à la commande inspiratoire centrale via un contrôle continu des insufflations mécaniques par l'activité électrique du diaphragme. L'objectif de cette étude est de valider l'hypothèse que la NAVA par voie nasale n'induit pas de fermeture active du larynx chez l'agneau nouveau-né, en raison d'insufflations plus physiologiques qu'en nAI. Méthodes: Neuf agneaux ont été instrumentés chirurgicalement à 2 jours de vie afin de recueillir les stades de conscience, l'activité électrique du diaphragme et des muscles dilatateur et constricteur du larynx, la pression trachéale et les gaz sanguins artériels. Deux jours après la chirurgie, la NAVA et la nAI ont été administrées par masque nasal chez les agneaux non sédationnés, le niveau de ventilation étant progressivement augmenté. Résultats: L'augmentation du niveau de nAI a entraîné une fermeture active du larynx en inspiration chez 5/9 agneaux en sommeil calme, quand la pression inspiratoire maximale dépassait 15 cmH₂O. À l'inverse, la NAVA nasale n'a entraîné une fermeture laryngée chez aucun des 9 agneaux au niveau maximum de NAVA atteignable. Conclusion: La ventilation nasale par NAVA n'entraîne pas de fermeture active du larynx chez l'agneau nouveau-né, contrairement à l'aide inspiratoire. Cette caractéristique apparaît comme un atout supplémentaire de la NAVA comme mode de ventilation nasale en période néonatale.

# 13 MITOCHONDRIAL DYSFUNCTION AND LIPID ACCUMULATION IN THE HUMAN DIAPHRAGM DURING MECHANICAL VENTILATION

*Martin Picard¹, *Feng Liang², Sabah Hussain²,³, Peter Goldberg²,³, Gawiyou Danialou²,³, Rakesh Chaturvedi³, Stefan Matecki⁴, Samir Jaber⁵, Christine Des Rosiers⁶, George Karpati⁷, Richard Godin⁸, Tanja Taivassalo¹,⁷, Basil J Petrof²,³

*These authors contributed equally to this work. ¹Department of Kinesiology and Physical Education, and Respiratory Epidemiology and Clinical Research Unit; ²Meakins-Christie Laboratories, McGill University; ³Critical Care and Respiratory Divisions, McGill University Health Centre and Research Institute, Montreal, QC;

⁴Clinical Physiology Centre, Arnaud de Villeneuve Teaching Hospital, Equipe soutenue par la Région et l'Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale 25, Université Montpellier 1, Centre Hospitalier Universitaire Montpellier, Montpellier, France; ⁵Intensive Care Unit, Anesthesia and Critical Care Department B, Saint Eloi Teaching Hospital, Equipe soutenue par la Région et l'Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale 25, Université Montpellier 1, Centre Hospitalier Universitaire Montpellier, France; ⁶Montreal Heart Institute, Université de Montréal; ⁷Montreal Neurological Institute, McGill University;

⁸Department of Kinesiology, Université de Montréal, Montreal, QC
**INTRODUCTION:** Mechanical ventilation (MV) can cause atrophy, injury, and reduced force-generating capacity of the diaphragm. The mechanisms responsible for ventilator-induced diaphragmatic dysfunction (VIDD), remain largely unknown. We hypothesized that mitochondrial dysfunction could play a key role in VIDD.

**METHODS:** Diaphragm and biceps muscle biopsies were obtained from brain-dead organ donors (n=11) who had undergone MV for 29-176 hrs (mean = 61 hrs). Controls consisted of diaphragm samples obtained from age-matched patients during thoracic surgery for Stage 1A lung cancers (n=11), and biceps biopsies from individuals with muscle complaints who were subsequently declared to be normal (n=7).

**RESULTS:** Both mRNA and phosphorylated protein levels for AMPK, a metabolic "sensor" which is activated under conditions of energetic depletion in muscle, were significantly downregulated in MV group diaphragms. Mitochondrial oxidative enzymes were lower in MV diaphragms (but not biceps) in comparison to controls, with mean reductions of 35%, 66%, and 65% for citrate synthase, succinate dehydrogenase and cytochrome c oxidase, respectively. Muscles from MV subjects also had lower mRNA levels of multiple genes involved in mitochondrial biogenesis and antioxidant defenses. MV diaphragms exhibited increased mRNA levels for adipokines (leptin, adiponectin), and also showed dramatically higher levels of intracellular lipid content compared to controls, whereas these changes occurred to a much lower extent in the biceps. Finally, indices of mitochondrial-derived oxidative stress were greater in MV tissues than controls, and associated with greater lipid droplet accumulation.

**CONCLUSION:** MV in humans is associated with a general downregulation of genes involved in skeletal muscle energy metabolism, and particularly with impaired mitochondrial function in the diaphragm. We speculate that MV-induced diaphragmatic inactivity produces a state of metabolic imbalance in the diaphragm.

# 14 IDENTIFICATION DE BIOMARQUEURS LIÉS À LA SÉVÉRITÉ DE L'ASTHME ET À L'ASTHME PROFESSIONNEL

A-M Madore¹, EY Bissonnette², J Chakir², M Laviolette², L-P Boulet², Q Hamid³, C Bergeron⁴, K Maghni⁵, C Laprise¹

¹Université du Québec à Chicoutimi; ²Centre de recherche de l'Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec; ³Meakins-Christie Laboratories; ⁴Centre de recherche du CHUM; ⁵Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal, Montréal, QC

**CONTEXTE:** Considérant sa diversité phénomotypique, l'asthme pourrait en fait être une collection de différents syndromes apparentés plutôt qu'une maladie unique (Wenzel 2006). Une meilleure définition des profils
moléculaires et cellulaires impliqués dans ces différents phénotypes devrait
donc permettre d'optimiser les méthodes de prévention et de traitement.

OBJECTIF : Caractériser le profil moléculaire propre à différentes sévéri-
tés d'asthme, ainsi qu'à l'asthme professionnel, à partir d'une méthode
non-invasive qui est l'expectoration induite.

MÉTHODE : Les expectorats utilisés proviennent de la banque de tissus du Réseau en Santé Respiratoire. Ils ont été obtenus de témoins et de sujets avec asthme léger à modéré, léger à modéré avec corticothérapie, sévère et professionnel (haut poids moléculaire) avec ou sans corticothérapie (critères de l'ATS, Reddel 2009). Treize surnageants d'expectorats par catégorie ont été utilisés en moyenne (de 6 à 22) pour mesurer par ELISA ou par la technologie Luminex 14 médiateurs (CTGF, FGF-2, ICAM-1, MMP-1, -2, -3, -7, -8, -9, -12, -13, procollagène type 1, TIMP-1 et VCAM-1). Des ANOVA suivis d'une analyse de Tukey ont été réalisées pour ces médiateurs ainsi que pour la différentielle cellulaire avec le logiciel R (RGui 2.9.1).

RÉSULTATS : Les résultats de cette étude indiquent que les niveaux des protéines MMP-1 (p=0.022) et FGF-2 (p=0.008) augmentent avec la sévérité de l'asthme et que le niveau des protéines MMP-1 (p<0.001) et MMP-12 (p<0.002) est plus élevé spécifiquement chez les sujets avec asthme professionnel. Les études de corrélation entre les profils cellulaires et les médiateurs liés à la sévérité de l'asthme ou à l'asthme professionnel se sont révélées négatives.

CONCLUSION : Cette étude a permis de cibler des biomarqueurs poten-
tiels de la sévérité de l'asthme (MMP-1 et FGF-2) et de l'asthme profes-
sionnel (MMP-1 et MMP-12) et ce, par l'utilisation d'une méthode
d'échantillonnage non-invasive.

15

SURVEILLANCE DES MALADIES CHRONIQUES AU QUÉBEC :
ASTHME - MALADIE PULMONAIRE OBSTRUCTIVE
CHRONIQUE (MPOC).

M Doucet, V Émond

Institut national de santé publique du Québec (INSPQ), QC

Les maladies chroniques dont les maladies respiratoires sont maintenant
reconnues comme un problème de santé publique important et grave. Le
vieillissement de la population associé à de mauvaises habitudes de vie
favorisera l'accroissement de leur développement au cours des prochaines
années. Dans ce contexte, en plus des maladies respiratoires, la surveillance
d'autres maladies chroniques ayant les prévalences les plus élevées telles
que le diabète, les maladies cardiovasculaires, les maladies ostéoarticulaires,
l'ostéoporose, les troubles mentaux et les démences ont été retenus au plan
ministériel de surveillance. Afin d'effectuer ce mandat de surveillance, une
méthodologie novatrice basée sur le jumelage de données extraites de
fichiers médico-administratifs a été développée par l'INSPQ. La première
transmission de données par la RAMQ couvrira la période du 1er janvier
1996 au 31 mars 2009 et une mise à jour annuelle sera par la suite effectuée.
Les résultats du jumelage permettront de mesurer l'ampleur de chaque
maladie (incidence, prévalence, complications, mortalité), d'estimer
l'utilisation des services de santé et de consommation de médicaments et
d'identifier les groupes à risque. En plus d'une approche par maladie, ce
projet a un grand potentiel par sa possibilité d'évaluer l'ampleur de
l'ensemble des maladies chroniques dans la population québécoise. Cette
approche intégrée permettra de décrire le phénomène du cumul de différ-
entes maladies (comorbidités, multimorbidité et polymédication) et de
caractériser les personnes qui en sont atteintes. Finalement, cette surveil-
lance dressera un meilleur portrait des maladies respiratoires chroniques au
Québec. De plus, elle sera utile à la prise de décision, aux interventions
reliées à la prévention et à leurs prises en charge et ainsi pourrait avoir un
impact sur l'organisation des services de santé.

16

LA RÉACTIVITÉ NON-SPÉCIFIQUE, L'INFLAMMATION BRONCHIQUE ET LA RÉACTIVITÉ IMMUNOLOGIQUE COMME CONDITIONNANTS DE LA RÉACTIVITÉ BRONCHIQUE SPÉCIFIQUE À UN AGENT PROFESSIONNEL

JL Malo, S Cardinal, H Ghezzo, J L'Archevêque, L Castellanos,
K Maghni

Axe de recherche en santé respiratoire, Hôpital du Sacré-Coeur de
Montréal, Montréal, QC

PERTINENCE ET BUT : La réactivité bronchique non-spécifique (RBNS) ainsi que la réactivité immunologique de type IgE sont des modulateurs de la réactivité bronchique spécifique à des allergènes. Nous avons voulu savoir si l'inflammation bronchique jouait aussi un rôle.

MÉTHODES : Il s'agit d'un examen rétrospectif de tous les sujets ayant eu des tests de provocation bronchique spécifique à un agent professionnel depuis l'an 2000. Tous ces sujets ont une évaluation de la RBNS et de l'expectoration induite lors d'une journée témoin précédant l'exposition à des agents professionnels sensibilisants. Dans un échantillon de sujets exposés à la farine de blé, nous avons aussi évalué le rôle de la réactivité immunologique de type IgE.

RÉSULTATS : De 669 sujets, 519 (77.6%) ont eu une expectoration induite interprétable lors de la journée témoin. Chez 129, un diagnostic d'asthme professionnel (AP) a été posé, 187 souffrant d'asthme non-professionnel et 203 ayant un autre diagnostic. Un degré de RBNS normal et une éosinophilie bronchique anormale étaient plus souvent retrouvés chez les sujets atteints d'AP mais la valeur prédictive positive de l'un ou l'autre de ces tests était faible (35%). La combinaison des informations sur le niveau d'éosinophiles et le degré de RBNS améliore la valeur prédictive positive à 58-67%. Chez les 34 sujets exposés à la farine, la RBNS, l'éosinophilie bronchique et le niveau d'IgE spécifiques ont tous été significativement associés à l'AP.

CONCLUSION : Le niveau d'éosinophilie bronchique est un élément associé significativement à la réactivité spécifique au même titre que la RBNS et la réactivité immunologique.

17

ROLE DU CD103 DANS LE CONTROLE DE
L'INFLAMMATION PULMONAIRE

M-R Blanchet

Centre de Recherche, Institut Universitaire de Cardiologie et de
Pneumologie de Québec, QC

INTRODUCTION ET OBJECTIFS: Le CD103 (ou Alpha-E intégrine) est une molécule exprimée chez un sous-groupe de cellules dendritiques myéloïdes et T régulatrices. Cette intégrine se lie à l'E-Cadhérine, exprimée à la surface de l'épithélium pulmonaire et joue un rôle dans la prolifération, la régulation de la migration cellulaire et la différenciation des cellules T naïves en cellules T régulatrices. Comme ces cellules participent activement au contrôle de l'inflammation pulmonaire, nous avons tenté d'identifier le rôle exact du CD103 dans le contrôle du développement de l'inflammation pulmonaire, en utilisant un modèle d'asthme développé chez les souris Cd103-/-.

MÉTHODES ET RÉSULTATS : Un modèle d'asthme à l'ovalbumine (OVA) a été développé chez des souris wild type (C57Bl/6) et chez des souris Cd103-/- . L'évaluation de l'inflammation pulmonaire a été faite via l'analyse de coupes histologiques, du contenu du lavage broncho-alvéolaire ainsi que du contenu en cellules inflammatoires du poumon digéré à la col- lagénase. Le pourcentage et le nombre de lymphocytes, macrophages, neutrophiles, éosinophiles, cellules dendritiques myéloïdes, lymphoïdes et plasmacytoïdes et cellules T régulatrices ont été déterminés par comptes différentiels et par cytométrie. L'analyse de la réactivité bronchique a été effectuée à l'aide du FlexiVent. Nous avons observé que la perte du CD103 entraîne une exacerbation de la réponse inflammatoire à l'OVA, ainsi que le développement d'une plus grande réactivité bronchique. Aussi, les souris Cd103-/- démontrent une expansion de la population de cellules dendri- tiques myéloïdes chez les souris naïves comparativement aux souris C57Bl/6. Cette différence dans la distribution des sous- populations de cel- lules dendritiques pourrait expliquer en partie la réponse exacerbée chez les
Cd103-/- . En conclusion, l'expression du CD103 semble importante dans le contrôle de la réponse inflammatoire pulmonaire dans l'asthme chez la souris.

18
COMPARAISON DE L'HYPERRÉACTIVITÉ BRONCHIQUE MESURÉE PAR LES TESTS À LA MÉTHACHOLINE OU AU MANNITOL CHEZ LES SUJETS PRÉSENTANT UN ASTHME PROFESSIONNEL

Véronique Jacob, David Miedinger, Simone Chaboillez, Caroline Tremblay, Catherine Lemiere

Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal, Université de Montréal,
Montréal, QC

OBJECTIFS : 1. Comparer l'hyperréactivité bronchique (HRB) mesurée par MAN et METH et évaluer leurs corrélations avec la maîtrise de l'asthme et l'inflammation bronchique chez les sujets présentant un asthme professionnel (AP). 2. Comparer les comptes cellulaires des expectorations obtenus après inhalation de solution saline hypertonique et de mannitol.

MÉTHODE : Des sujets présentant un AP ont complété un MAN et un
METH lors de 2 visites séparées de 2 à 7 jours. Un échantillon
d'expectoration a été recueilli par inhalation de solution saline après le
METH ou pendant le MAN. Le contrôle de l'asthme a été évalué à chaque
visite par un questionnaire de maîtrise de l'asthme (ACQ). Une dose
cumulée de mannitol provoquant une chute de 15% du VEMS (PD15) de
≤ 635mg était considérée positive alors qu'une CP20 ≤ 16mg/ml était con-
sidérée positive. La pente dose réponse à la méthacholine (PDRMETH) ou
au mannitol (PDRMAN) a été calculée.

RÉSULTATS : 22 sujets avec AP ont été recrutés. Le METH a identifié davantage de sujets avec HRB (68.2%) que le MAN (40.9%; p=0.01). Les PDRMETH et PDRMAN étaient significativement corrélés (r=0.7 ; p<0.001). Le score d'ACQ n'était pas significativement corrélé avec PDRMAN (r=0.3 ; p=0.1) ou PDRMETH (r=0.2 ; p= 0.4). La qualité des échantillons d'expectoration obtenus avec les 2 méthodes était similaire. Les éosinophiles de l'expectoration étaient corrélés avec la PDRMAN (rho=0.5 ; p=0.009) mais pas avec la PDRMETH (rho=0.2 ; p=0.5). La reproductibilité des comptes cellulaires différentiels entre les deux méthodes était modérée à élevée pour les macrophages les lymphocytes et les neutrophiles, mais était plus basse pour les éosinophiles (ICC : 0.3 ; p=0.08).

CONCLUSION : Le MAN pourrait représenter une alternative intéres-
sante au METH pour mesurer HRB et induire l'expectoration au cours de
la même procédure.

19
LES ARCHAEA DANS LES BIOAÉROSOLS : UN AGENT PRO-INFLAMMATOIRE NON SOUPÇONNÉ

Pascale Blais Lecours¹, David Marsolais¹, Marc Veillette¹,
Yvon Cormier¹, Marie-Josée Beaulieu¹, Robert Forster²,
Caroline Duchaine¹

¹Centre de recherche de l'Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, Université Laval, QC; ²Rumen Microbial Ecology/Genomics, Agriculture et Agri-Food Canada

Les bâtiments agricoles sont hautement contaminés en bioaérosols qui peuvent causer différentes maladies pulmonaires. La composition exacte des bioaérosols responsables de ces maladies respiratoires doit être clairement définie. Nous avons récemment documenté une quantité élevée d'Archaea dans l'air des porcheries. Il n'existe aucune information sur l'impact de ces Archaea sur la santé respiratoire des travailleurs. Les objectifs sont : 1) caractériser le contenu en Archaea dans les bioaérosols de divers établissements de travail, 2) déterminer si les Archaea peuvent induire une réponse immune. Le PCR a été utilisée pour déterminer la quantité d'Archaea présentes dans l'air de fermes laitières et d'usines d'épuration d'eaux usées. Pour déterminer si les Archaea produisent un effet proinflammatoire, des souris C57BL/6 ont été instillées par voie intranasale de 3 jours consécutifs durant 3 semaines avec cinq concentrations de deux espèces d'Archaea, M. stadtmanae et M. smithii. Un test d'hyperréactivité bronchique a été effectué sur des souris instillées à M. stadtmanae. Jusqu'à

106 Archaea par m³ d'air ont été retrouvées dans les fermes laitières. Dans
le modèle murin, une exposition d'une semaine à M. stadtmanae a induit
de l'hyperréactivité bronchique ainsi que l'accumulation de neutrophiles
(1,7×10⁵) et d'éosinophiles (9×10⁴) dans le lavage bronchoalvéolaire
(aucun neutrophile/éosinophile pour groupe contrôle). Les souris instillées
3 semaines avec 100 µg de M. stadtmanae ont démontré une lymphocytose
pulmonaire tandis que des doses plus faibles (6,25 à 25µg/souris) ont induit
une lymphocytose et une éosinophilie. À dose égale, M. smithii n'a induit
qu'une faible inflammation pulmonaire. Les Archaea sont présentes dans
l'air des porcheries, des fermes laitières et des usines d'épuration d'eaux.
Ces microorganismes peuvent induire une inflammation pulmonaire qui
est dépendante de la dose de l'espèce d'Archaea.

20
IMPACT OF PANIC DISORDER AND PANIC-LIKE ANXIETY ON ASTHMA CONTROL AT 4 YEARS FOLLOW-UP

Helene Favreau,, Manon Labrecque, Simon L Bacon, Kim L Lavoie
Montreal Behavioural Medicine Centre; Hopital du Sacré-Cœur de
Montréal; University of Québec at Montréal (UQAM); University
of Montreal; Concordia University, Montreal, QC

BACKGROUND: Panic disorder (PD) has been identified as one of the anxiety disorders most strongly associated with adult asthma, affecting between 7 to 17 %. PD is often characterized by respiratory dysregulation that may trigger asthma-like symptoms that can maintain a vicious cycle of panic attacks among asthma patients. As a result, asthma patients with PD are more likely to have poor quality of life and overuse health services. PD may potentially have long term impacts on asthma control, but this has yet to be explored. The present study assessed the impact of PD on asthma control after 4 years in 452 consecutive adult asthma patients.

METHODS: Patients presenting to an asthma tertiary care clinic under-
went a sociodemographic, medical and psychiatric (PRIME-MD) interview.
In order to validate PD diagnoses, they completed the Anxiety Sensitivity
Index (ASI). They also underwent standard spirometry. At 4 years, patients
completed the Asthma Control Questionnaire (ACQ).

RESULTS: Prevalence rates of PD were 12% at baseline. After controlling
for age, sex, smoking history, major depression, asthma severity, and base-
line ACQ scores, GLM analyses indicated that PD diagnoses (F= 4.09,
p=.0275) and ASI total score (F=7.71, p=.0058) predicted worse ACQ
scores after 4 years.

METHODS: Patients presenting to an asthma tertiary care clinic under-
went a sociodemographic, medical and psychiatric (PRIME-MD) interview.
In order to validate PD diagnoses, they completed the Anxiety Sensitivity
Index (ASI). They also underwent standard spirometry. At 4 years, patients
completed the Asthma Control Questionnaire (ACQ).

RESULTS: Prevalence rates of PD were 12% at baseline. After controlling for age, sex, smoking history, major depression, asthma severity, and baseline ACQ scores, GLM analyses indicated that PD diagnoses (F= 4.09, p=.0275) and ASI total score (F=7.71, p=.0058) predicted worse ACQ scores after 4 years.

CONCLUSIONS: Panic anxiety has a significant, long term and negative impact on asthma control in adult asthma patients, independently of asthma severity and major depression. Findings suggest that asthma patients with worse asthma control should be investigated for PD and be referred for appropriate treatment.

21
MORBIDITÉ PSYCHIATRIQUE CHEZ LES PATIENTS
SOUFFRANT D'ASTHME ET DE MPOC SE PRÉSENTANT AU
DÉPARTEMENT DES URGENCES POUR UNE
EXACERBATION AIGUË DE LA MALADIE

A Bouchard¹,², K Ouellet¹,², SL Bacon¹,³,⁴, M Labrecque¹,⁴,
J-M Chauny¹,⁵, KL Lavoie¹,²,³

¹Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal; ²Université du Québec à Montréal (UQAM); ³Montreal Heart Institute; ⁴Concordia University; ⁵Université de Montréal, Montréal, QC

INTRODUCTION : Plus de 50 % des patients souffrant d'asthme et de la MPOC contrôleraient mal leur maladie ce qui serait lié à des éparitions d'exacerbations aiguës de la maladie (EEAM) et à un recours plus fréquent à des soins d'urgence. Le mauvais contrôle de la maladie serait plus important chez les patients souffrant d'asthme et de la MPOC présentant une comorbidité psychiatrique (p.ex., dépression majeure, trouble d'anxiété généralisé). Parallèlement, les études menées en clinique externe montrent une prévalence élevée de troubles psychiatriques chez les patients souffrant d'asthme (34 % à 49 %) et de la MPOC (13 % à 49 %) et ce taux pourrait être plus élevé chez les patients se présentant au département des urgences (DU).

OBJECTIF : Évaluer la morbidité psychiatrique chez les patients souffrant d'asthme et de la MPOC se présentant au DU pour un EEAM et tracer le
portrait des ressources psychologiques offertes. Méthode : 62 patients souffrant d'asthme (n=23; 35% femmes; M= âge = 58 ans) et de la MPOC (n=29; femmes = 41 % ; âge = 71 ans) ont été rencontrés lors de leur visite au DU de l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal et ont complété une revue psychiatrique (PRIME-MD et ADIS) ainsi que des questionnaires (BDI, BAI).

**RÉSULTATS** : Les résultats montrent une prévalence élevée de troubles psychiatriques tant chez les patients souffrant d'asthme (troubles anxieux= 57% troubles de l'humeur= 70%) que de la MPOC (troubles anxieux= 29 % trouble de l'humeur= 50 %). 48 % et 59 % des patients souffrants respectivement d'asthme et de la MPOC prenaient des psychotropes (benzodiazépines = 48%; antidépresseur = 59%) et seulement, un patient bénéficiait d'un suivi psychologique au moment de l'évaluation.

**CONCLUSION** : Les résultats montrent une prévalence élevée de troubles psychiatriques (62%) chez les patients souffrant d'asthme et de la MPOC se présentant au DU pour un EEAM. La majorité des patients avaient une prescription de psychotropes au moment de l'évaluation, mais le suivi psychologique était presque absent indiquant que ces patients ne reçoivent pas les traitements optimaux pour leur condition.

*There are no conflicts of interest.*

## 22
**ECCENTRIC CYCLE TRAINING: FIT FOR CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE?**

Baril¹,², Vieira¹,⁴, Richard³, Perrault¹,², Taivassalo¹,², Bourbeau¹
¹RECRU, Montreal Chest Institute, MUHC; ²Kinesiology, McGill University; ³Medecine du Sport Explorations Fonctionnelles, Montreal, QC; ⁴Physical Therapy, Universidade Federal Minas Gerais, Brazil

The ventilatory constraints in patients with advanced Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) may limit their participation in traditional rehabilitation. Eccentric cycling presents an interesting alternative although there has been reluctance in using this training modality due to enhanced muscle damage and soreness. The aim of this study was to design and track progression of an eccentric exercise protocol based on progressive increases in workloads in six severe COPD patients with the view to minimize potential side effects and maximize compliance. The proposed FIT (frequency/intensity/time) components of the eccentric training protocol were 15 sessions, 3 times/week; targeted intensity of 60% concentric peak oxygen consumption being progressively increased from a minimal initial workload; 20 minutes/session. Baseline assessments included pulmonary function and concentric peak and submaximal cycling. Creatine kinase and muscle soreness were measured throughout the training period as well as oxygen consumption and ventilation. All patients complied with the eccentric training protocol. Muscle soreness was minimal in most patients and did not compromise training progression and increases in workload. Creatine kinase remained within normal range or was only slightly elevated. Most patients showed breathing reserve higher than 15 L.min⁻¹ throughout training with minimal breathlessness. Moreover, ventilation and breathing frequency were similar between concentric and eccentric cycling at 60% of peak oxygen consumption while the workrate was about five times higher in concentric (p=0.02). The results showed that an eccentric training protocol based on progressive increases in workload can be performed by patients with severe COPD with no side effects and high compliance.

## 23
**DIURNAL VARIATIONS IN THE ACUTE RESPONSE TO EXERCISE IN CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE (COPD)**

E Chan-Thim¹,², M Dumont³,⁴, G Moullec¹,⁴, A Rizk¹,²,⁵,
R Wardini¹,², B Trutschnigg¹, M de Lorimier¹, J Paquet³,⁶,
S Parenteau¹, V Pepin¹,²

¹Axe de recherche respiratoire, Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal (HSCM); ²Dept Exercise Science, Concordia University;

³Chronobiology Lab, HSCM; ⁴Faculty of Medicine, U de Montréal;

⁵Special Individualized Program, Concordia University; ⁶Sleep Disorder Center, HSCM, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Indices of lung function and symptom perception have been shown to vary throughout the day. In chronic obstructive pulmonary disease (COPD), these diurnal variations may have important clinical repercussions.

**OBJECTIVE:** To determine the impact of time of day on the acute response to exercise in individuals with COPD.

**METHODS:** After baseline evaluations, subjects follow a counterbalanced randomized design, performing three symptom-limited incremental cycling tests each preceded by a pulmonary function test, at three times of the day (08:00, 12:00, and 16:00). COPD medications were withdrawn 6-24 hours prior to each exercise test. Peak exercise capacity was the highest work rate maintained for a minimum of 30 seconds. Cardiorespiratory parameters were measured at rest and during exercise with a metabolic cart. A general linear model was conducted to evaluate the effect of testing times on the measured outcomes.

**RESULTS:** To date, a total of six participants (3 men, 3 women) aged 70±8 years with a forced expiratory volume in 1 sec (FEV1) of 56%±9% predicted completed all evaluations. No significant time effect was found for peak exercise capacity (p=0.42); however, the overall time effect approached statistical significance when comparing resting pulmonary function (p=0.08), where FEV1 was lowest in the morning and peaked in the late afternoon. Further trends were identified in the cardiorespiratory response: resting carbon dioxide excretion (VCO2) appeared to be higher in the morning and decreased in the late afternoon (overall time effect; p=0.07); resting minute ventilation (VE) was highest in the morning and dipped around noon (overall time effect; p = 0.12); finally, peak heart rate was lowest in the morning and peaked in the late afternoon (overall time effect; p=0.10).

**CONCLUSION:** Preliminary results suggest that time of day affects pulmonary function as well as resting and exercising cardiorespiratory response in COPD patients.

## 24
**FACTEURS PRÉDICTIFS DE LA RÉPONSE À LA RÉADAPTATION PULMONAIRE CHEZ LES PATIENTS ATTEINTS DE MALADIE PULMONAIRE OBSTRUCTIVE CHRONIQUE**

S Goulet-Dion, S Parenteau, F Beaucage, M Labrecque, J L'Archevêque, H Guezzo, G Moullec
Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal, Montréal, QC

**INTRODUCTION** : La réadaptation pulmonaire (RP) est recommandée dans le traitement des patients atteints de MPOC avec des limitations fonctionnelles malgré un traitement médical optimal. La RP peut améliorer les symptômes, la tolérance à l'effort et la qualité de vie, mais jusqu'à 30% des patients y participant ne s'améliorent pas.

**OBJECTIF** : Déterminer si des caractéristiques cliniques ou fonctionnelles prédisent la réponse à la RP.

**MÉTHODE** : Étude rétrospective incluant les patients ayant participé à notre programme de RP entre janvier 2000 et juin 2010. Les critères d'inclusion étaient: 1) diagnostic de MPOC; 2) VEMS/CVF < 0,7; 3) tabagisme ≥10 paquets-années; et 4) avoir complété le programme. La réponse était définie comme: 1) amélioration du test de marche de 6 minutes (TM6M) de ≥54m OU 2) amélioration de la dyspnée à l'effort de ≥1 point sur une échelle visuelle analogue OU 3) amélioration du score sommaire physique du SF-36 de ≥5 points OU 4) amélioration du score
sommaire mental du SF-36 de ≥5 points. Le programme de RP avait une
durée de 10 semaines comprenant une journée d'exercices et d'enseignement
en groupe et 2 séances d'exercices à domicile par semaine.

**RÉSULTATS:** 187 patients (98 hommes, âge 66±16 ans, VEMS 46±16%) ont été inclus. Le TM6M s'est amélioré en moyenne de 37±45m et 35% ont eu une amélioration de ≥54m. La dyspnée sur l'échelle visuelle analogue s'est améliorée en moyenne de 0,1±2 points et 31% ont eu une amélioration de ≥1 point. Au SF-36, le score sommaire physique s'est amélioré en moyenne de 8±16 points (59% ont eu une amélioration de ≥5 points) et le score sommaire mental de 10±17 points (60% ont eu une amélioration de ≥5 points). Une analyse de régression logistique multivariée a montré que seule une mauvaise valeur initiale de chacun des critères de réponse est associée à son amélioration.

**CONCLUSION:** Les facteurs qui prédisent l'amélioration suite à la RP sont un TM6M faible, une dyspnée élevée et une moins bonne qualité de vie.

## 25
EFFECTS OF CARDIOSELECTIVE BETA-BLOCKERS ON DYNAMIC HYPERINFLATION AND ON EXERCISE TOLERANCE IN MODERATE-TO-SEVERE COPD

V Mainguy, D Girard, D Saey, J Milot, F Maltais and S Provencher
Centre de recherche de l'Institut Universitaire de Cardiologie et de
Pneumologie de Québec, Québec, QC

**BACKGROUND:** Beta-blockers have no effect on resting lung function in patients with moderate-to-severe chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Whether beta-blockers influence dynamic hyperinflation and exercise tolerance in these patients is unknown.

**OBJECTIVE:** The aim of this prospective, randomized, double blind and crossover study was to assess the effects of short-term cardioselective beta-blocker therapy on dynamic hyperinflation and on exercise symptoms and tolerance in patients with moderate-to-severe COPD.

**METHODS:** Twenty-seven patients (mean age: 65(8) years old; predicted forced expiratory volume in one second (FEV1): 52(13) %) without cardiovascular disease completed pulmonary function tests (PFT), a maximal incremental exercise test and a cycle endurance test (CET) set at 75% of their individual peak work rate. PFT and CET were repeated following 14 days of bisoprolol (2.5 mg/d up to 10mg/d) and 14 days of placebo in a randomized order. Dynamic hyperinflation at isotime and CET duration were compared by a crossover statistical analysis.

**RESULTS:** On bisoprolol, resting lung function remained unchanged. At isotime, beta-blockers had no significant effect on dynamic hyperinflation as compared to placebo (Inspiratory capacity: 2.02 (0.61) vs 2.09 (0.66) L, p=0.07; End expiratory lung volume: 4.64 (1.24) vs 4.63 (1.14) L, p=0.88) or on exercise symptoms (Borg – Dyspnea: 5 (3) vs 4(3), p=0.46; Borg – Leg fatigue: 6 (3) vs 5 (3), p=0.77), but had a significant effect on heart function (Heart rate: 92 (18) vs 121 (20) beats/min, p< 0.01; O2pulse 12.1 (3.3) vs 9.7 (2.8) ml/min, p< 0.01). Finally, CET duration tended to be lower under bisoprolol (305(125) vs 353(172) seconds, p=0.11).

**CONCLUSION:** Cardioselective beta-blockers did not significantly influence dynamic hyperinflation, exercise symptoms or exercise tolerance in moderate-to-severe COPD.

## 26
THE ROLE OF CIGARETTE SMOKE EXPOSURE ON TOLL-LIKE RECEPTOR EXPRESSION ON CD8+ T CELLS IN COPD

J Nadigel, C Baglole, D Eidelman, Q Hamid

Meakins Christie Laboratories, McGill University, Montreal, QC

**RATIONALE:** Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is an inflammatory disorder that is mainly caused by cigarette smoking. COPD is associated with an increase in the number of CD8+ T cells within the lungs of the patients and these cells are generally found just below the epithelium and sometimes within the epithelium. Our previous results revealed that 90% of the CD8+ T cells in the lungs of COPD patients expressed toll-like receptors (TLRs). TLRs can be induced by a number of inflammatory and non inflammatory stimuli and in epithelial cells, cigarette smoke was shown to induce TLRs. We hypothesize that CD8+ T cells

may come into direct contact with the smoke within the airways of COPD patients and this smoke exposure can induce TLR expression on these cells.

**METHODS:** Peripheral blood was collected from COPD patients (n=6) with various severities and Ficoll-Paque Plus was used to isolate the mononuclear cells. The CD8+ T Cell Isolation Kit was used to further isolate the CD8+ T cells. The CD8+ T cells were incubated in RPMI medium that was treated with or without cigarette smoke condensate (10µg/ml and 50µg/ml) for 24 hours. After 24 hours, total RNA was collected from the CD8+ T cells and real-time PCR was performed for TL4, TLR9, and the TLR-associated adaptor molecules CD14 and MD2. In addition, to confirm the activation of the cells, the production of TNFα was examined.

**RESULTS:** After 24 hours of treatment with cigarette smoke condensate (CSC), there is no change in the gene expression of TLR4 compared to the control cells. TLR9 was increased at the CSC concentration of 50µg/ml. Although the expression of CD14 and MD2 increased with increasing CSC concentration, this did not reach significance. The gene expression of TNFα at CSC 50µg/ml was significantly increased (p<0.0001).

**CONCLUSION:** Our study demonstrates the potential role of smoking in the activation of CD8+ T cells and suggests a role for cigarette smoke modulation of TLR expression in COPD.

## 27
COMPLIANCE TO DIFFERENT EXERCISE-TRAINING PROTOCOLS IN INDIVIDUALS WITH CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE: A PROTOCOLE

R Wardini¹,², A Rizk¹,², E Chan-Thim¹,², G Moullec¹,
M De Lorimier¹, V Pepin¹,²

¹Research Centre, Division of Chest Medicine, Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal – a University of Montréal affiliated hospital;

²Department of Exercise Science, Concordia University, Montréal, QC

**BACKGROUND:** Pulmonary rehabilitation (PR) is considered the best available intervention to tackle the systemic consequences of COPD. Exercise training is key to a successful PR. Current PR guidelines suggest high-intensity exercise training to elicit greater physiological adaptations. However, the compliance to this type of training has been shown to be problematic for COPD patients. Therefore, alternative approaches, such as training at the ventilatory threshold and interval training, have been proposed as easier to comply with for this clientele.

**PURPOSE:** To compare, in individuals with COPD, the 12-week exercise compliance to the following exercise-training protocols: continuous training at 80% of peak work rate (CT80), continuous training at the ventilatory threshold (CTVT), and interval training (IT).

**METHODS:** This project is a sub-study to a larger randomized clinical trial comparing the short-and long-term effects of different exercise training protocols on PR program outcomes in COPD. As part of the larger RCT, eligible volunteers will be assessed at baseline and at program completion. Subjects will be randomized to one of 3 different exercise protocols: CT80, CTVT, or IT. The exercise program will consist of cycling on a calibrated cycle ergometer at the prescribed intensity and duration, at a frequency of 3 sessions per week for 12 weeks. Exercise duration will be adjusted such that the total amount of work performed per session will be comparable across the three different protocols. Compliance to the 3 protocols will be assessed by measuring i) the attendance rate and ii) the average compliance rate to the prescribed intensity. In addition, metabolic equivalent of physical effort and exercise workload attained during each exercise session will be compared between groups. The physiological parameters will be measured through new technology from Technogym, which allows second by second tracking of each individual exercise session on a computer.
## 28
SYNDROME DE DÉTRESSE RESPIRATOIRE AIGUË (SDRA) : LES GLUCOCORTICOÏDES SONT-ILS CURATIFS OU PRÉJUDICIBLES?

C Chupin, J Lavoie, A Privé, E Brochiero, Y Berthiaume
CRCHUM, Département de Médecine, Université de Montréal,
Montréal, QC

Le SDRA lié à une perméabilité alvéolaire et à une inflammation pulmo-
naire excessives, présente une insuffisance respiratoire grave. Malgré divers
essais thérapeutiques le taux de mortalité reste élevé : 43%. L'usage des
glucocorticoïdes, anti-inflammatoires, demeure controversé. L'objectif de
cette étude est d'évaluer leur impact - dexaméthasone (dex ; 0,5mg/kg/j)
notemment - dans un modèle murin de lésions pulmonaires aiguës induites
par la bléomycine (bleo ; 4U/kg). La bleo instillée intra-trachéalement,
mène à une augmentation de la mortalité, de la perte de poids, de l'œdème
(wet/dry, histologie), de la sévérité des lésions (histologie) et de l'infiltration
neutrophilique (BAL). Le co-traitement avec le dex n'a aucun effet sur
l'évolution des lésions induites par la bleo. Les glucocorticoïdes ayant des
effets adverse lors de la réparation épithéliale cutanée, la réparation a été
explorée à la aide de plaies mécaniques sur des cellules épithéliales alvéo-
laires en culture primaire. La bleo (50mU/ml) inhibe la réparation et le dex
(100nM) amplifie cette inhibition, qui n'est pas expliquée par un effet
négatif sur la prolifération ou une augmentation de l'apoptose. L'ensemble
de ces résultats indique que le dex ne diminue pas la sévérité des lésions
pulmonaires dans notre modèle SDRA. Cela pourrait en partie être lié à
l'effet inhibiteur du dex sur le mécanisme de réparation épithéliale.
Participant majoritairement à la réparation, une modification de la capac-
ité migratoire des cellules épithéliales, engendrée par un remodelage
cytosquelettique pourrait avoir lieu.

Travaux soutenus par : RSR-FRSQ, IRSC.

## 29
UN INHIBITEUR SPÉCIFIQUE DE PHOSPHODIESTÉRASE 4, LE NCS 613, RÉDUIT L'INFLAMMATION ET L'HYPERRÉACTIVITÉ BRONCHIQUE DÉCLENCHÉES IN VITRO SUR LES TISSUS HUMAINS

I Yougbare, C Morin, C Lugnier, E Rousseau
FMSS, Université de Sherbrooke et Faculte de Pharmacie,
Université de Strasbourg

Les maladies inflammatoires récurrentes comme l'asthme sont caractérisées par une hyperréactivité bronchique qui peut provoquer un remodelage tisulaire et la constriction des voies respiratoires. De plus, l'inflammation est fortement corrélée à un bas taux d'AMPc intracellulaire (Houslay et al.; 2005). Les phosphodiestérase 4 (PDE4) qui hydrolysent spécifiquement l'AMPc sont donc des cibles thérapeutiques potentielles. Objectifs spécifiques : 1) mesurer l'expression et l'activité des PDE4 dans le parenchyme pulmonaire humain ; 2) évaluer les effets anti-inflammatoires du NCS 613 sur ces tissus ; et 3) d'étudier les effets du NCS 613 sur l'hyperréactivité contractile des bronches humaines traitées au TNFα. Le parenchyme humain a été fractionné par ultracentrifugations différentielles. Des bronches humaines ont été cultivées dans du DMEM-F12 en présence de TNFα et traités en présence, ou non avec 10 microM de NCS 613. Des mesures de tensions mécaniques induites par 1 microM de Méthacholine, 1 microM d'Histamine, 30 nM de U-46619 ont été réalisées. L'activité AMPc-PDE et l'expression des PDE4 sont détectées dans les 3 fractions subcellulaires. Un traitement de 48 h du parenchyme avec le NCS 613 diminue l'activité et l'expression des PDE4. Par ailleurs NCS 613 augmente la détection d'IK-Bα dans le parenchyme, qui peut être corrélée à une baisse de l'inflammation (Morin C. 2009). Le TNFα augmente significativement les tensions pharmaco-mécaniques induites par les agonistes en rendant les bronchioles en culture hyperréactives. Le NCS 613 diminue l'hyperréactivité dans les bronches traitées au TNFα. Cet effet bénéfique du NCS 613 passe par l'inhibition de l'expression de la PDE4B et de la phosphorylation de la CPI-17, une protéine qui est directement impliquée dans le contrôle de la sensibilité des cellules au calcium. Le NCS 613, un inhibiteur spécifique PDE4 a donc des effets anti-inflammatoires dans le parenchyme pulmonaire et prévient l'hyperréactivité bronchique.

## 30
ROLE OF NUCLEAR AND MEMBRANE PROGESTERONE RECEPTORS IN RESPIRATORY CONTROL IN ADULT MICE

Karim Habbal, Arnaud Dallongeville, Van Diep Doan,
Vincent Joseph
Département de Périnatalogie, Centre de recherche de l'Hôpital St
François d'Assise (CHUQ), Québec, QC

Progesterone is a potent respiratory stimulant, but the underlying mechanisms are poorly known. Progesterone exerts biological functions through nuclear and membrane receptors. To discriminate between these pathways, we first used adult, male and female knock out mice for the nuclear progesterone receptors (PRKO) and whole body plethysmography to assess respiratory frequency (fR), tidal volume (Vt), and minute ventilation (Ve=fRxVt) under normoxia and in response to acute hypoxia (10% O₂ – 30 minutes). In normoxia, wild type females have higher Vt and Ve than males. PRKO mice have lower fR and Ve than wild type mice, and a tendency towards lower Vt. After 30 minutes of hypoxia, a similar pattern of difference is observed. Surprisingly, in PRKO these effects are more important in males than in females, and the effect of sex on respiratory variables are still present in PRKO mice, suggesting the implication of membrane progesterone receptors. Accordingly, we performed immunohistochemical staining on carotid body (the main sensor of arterial oxygen pressure that triggers the hypoxic ventilatory response) and brainstem (projection site of carotid body terminals, and localization of central respiratory areas) serial sections to localize membrane progesterone receptors α and β (mPRα/mPRβ). Immunohistochemical staining indicates the presence of mPRα and mPRβ in the carotid bodies and in brainstem regions corresponding to the nucleus tractus solitarius and raphe obscurus nucleus involved in respiratory control. We conclude that nuclear PR plays an important modulatory role on ventilatory control in normoxia and hypoxia in male and female adult mice. The presence of mPRα and mPRβ in carotid bodies and brainstem respiratory areas suggest that progesterone might also modulate ventilation through these receptors. This may explain that the effects of the deletion of the progesterone receptors are less important in PRKO females compared to males.

## 31
BEHAVIORAL COMFORT SCALE IN VENTILATED PICU PATIENTS: ARE WE IN THE ZONE?

M Bourdages, MA Dugas, C Litalien, F Gauvin, P Jouvet
Centre Mère-Enfant du CHU de Québec, Université Laval, Québec,
Canada, CHU Sainte-Justine, Université de Montréal, Montréal, QC

Behavioral Comfort Scale (B-CS) is a proposed distress score in PICU.
However, reliability and validity of this score remains to be demonstrated.

**OBJECTIVES:** We tested the interrater reliability and validity of the B-CS in PICU patients.

**METHODS:** Patients 0 to 18 years old undergoing invasive mechanical ventilation were included in a prospective observational two centre study. Patients with neurologic deficits were excluded. Comfort and sedation levels were evaluated by 2 nurses and 1 physician using visual analog scales (comfort-VAS and sedation-VAS) and B-CS. Patients were assessed hourly for 6 hours and stratified in three groups (0-2, 2-12 and >12 years of age).

**RESULTS:** A total of 387 paired observations (B-CS and both VAS) in 67 patients (median age: 3.1 years, range: 0.05 -17.5) were obtained. The interrater reliability was 0.74 (intraclass coefficient) for the B-CS (no age effect observed). Pearson correlation between B-CS and the comfort-VAS was 0.71 and 0.64 between B-CS and sedation-VAS. Muscle tone and respiratory response were items with the lowest reliability and correlation. However, Cronbach's alpha coefficient was 0.86 (for all items of 788 B-CS measures), and was not modified by removing muscle tone (0.84) and respiratory response (0.86) items.

**CONCLUSION:** B-CS has good reliability except for muscle tone and respiratory response. However, these items do not affect the internal consistency of B-CS. This score is well correlated with patient's comfort status, and less with sedation level. This should be taken into account if using B-CS in sedation protocols.
# L'IMPACT DES DÉLAIS À INITIER UN TRAITEMENT SUR LA SURVIE DES PATIENTS AVEC CANCER PULMONAIRE NON À PETITES CELLULES

R Diaconescu, C Lafond, R Whittom

Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal, Université de Montréal, Montréal, QC

**INTRODUCTION** : L'impact des délais à initier un traitement sur la survie des patients avec cancer pulmonaire non à petites cellules (CPNPC) est mal connu.

**MÉTHODE** : Nous avons analysé les dossiers de tous les patients qui ont reçu un nouveau diagnostic de CPNPC dans notre milieu de janvier 2005 à mai 2007. Le délai à initier un traitement a été calculé à partir de la première suspicion de néoplasie corroborée par une imagerie pulmonaire. Des courbes de Kaplan-Meier ont été obtenues pour comparer les survies de différents groupes de patients et une analyse de régression de Cox a été réalisée pour tenter de dégager des facteurs prédictifs.

**RÉSULTATS** : Pour la période étudiée, 495 patients ont reçu un nouveau diagnostic de CPNPC et 319 ont reçu un traitement standard approprié au stade de leur maladie, soit 40 % avec maladie localisée, 21 % avec maladie régionale, et 39 % avec maladie avancée. Le délai moyen à initier un traitement se chiffrait à 73 jours. Selon que la maladie était localisée, régionale ou avancée, les délais moyens étaient respectivement de 85, 94 et 50 jours. Ces délais n'ont pas eu de répercussion sur la survie des patients avec maladie limitée ou régionale. Chez les patients avec maladie avancée, pour chaque semaine supplémentaire de délai, le risque relatif de mortalité était de 0,93 (p=0,009). La médiane de survie des patients avec maladie avancée était respectivement de 6,8 et 11,6 mois (p=0,027) selon que leur traitement était initié précocement ou tardivement.

**CONCLUSIONS** : Les délais à initier un traitement pour un CPNPC ne sont pas associés à des modifications de survie pour les patients avec maladie localisée ou régionale. Pour les patients avec maladie avancée, les plus courts délais à initier une chimiothérapie sont associés à une moins bonne survie. Ceci est possiblement le reflet d'une maladie plus agressive au moment du diagnostic.

# EFFECTS OF MUSCLE-SPECIFIC INHIBITION OF THE NF-KB PATHWAY ON DIAPHRAGMATIC FUNCTION IN MURINE SEPSIS

Tatsuma Okazaki¹, Feng Liang¹, Tong Li¹, Christian Lemaire¹, Johanne Bourdon¹, Gawiyou Danialou¹, Steven E Shoelson², Basil J Petrof¹

¹Meakins-Christie Laboratories and Respiratory Division, McGill University, Montreal, QC; ²Joslin Diabetes Center and Harvard Medical School, Boston, USA

**BACKGROUND** : Acute respiratory failure is common in severe infections (sepsis) and often accompanied by diaphragmatic weakness. Several proinflammatory mediators and proteases have been implicated in this process, such as cytokines and calpains, respectively. The transcription factor NF-kB plays a central role in the inflammatory responses. However, the specific role and influence of NF-kB activation in the muscle fibres themselves during sepsis are not known.

**OBJECTIVE** : To determine whether muscle-specific inhibition of NF-kB activation protects against diaphragmatic dysfunction during sepsis.

**METHODS AND RESULTS** : Transgenic mice (Tg) with skeletal muscle-specific inhibition of NF-kB, achieved by muscle creatine kinase promoter-driven expression of the IkBa superrepressor, were compared to their wild-type littermates (WT). Sepsis was induced by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS, 25 mg/kg), and mice were evaluated 24 hours later. After LPS injection, Tg diaphragms showed significantly greater tetanic force production than WT (mean maximal force ± SE = 24.1 ± 0.9 in Tg versus 16.2 ± 0.5 N/cm2 in WT; p < 0.01). In primary cultured myotubes from Tg exposed to LPS, phosphorylation and degradation of IkBa; and phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB were inhibited. LPS-induced increases in proinflammatory mediators (IL-1, IL-6, and MCP-1) were blunted in the diaphragms as well as the serum of Tg mice by

quantitative RT-PCR (Q-RT-PCR) and MSD cytokine assays, respectively. LPS-induced mRNA upregulation of E3 ubiquitin ligases involved in muscle atrophy, were also blunted in Tg mice. Finally, the levels of calpain-specific degradation products of alpha-fodrin were lower in Tg than WT mice after LPS administration.

**CONCLUSIONS** : Activation of NF-kB within muscle fibers plays a major role in the loss of diaphragmatic force as well as the upregulation of proinflammatory and proteolytic pathways within the diaphragm during sepsis.

# LA PROSTAGLANDINE E2 GLYCÉRYLESTER INHIBE LES FONCTIONS DES NEUTROPHILES HUMAINS PARTIE I : IMPACT SUR LA BIOSYNTHÈSE DES LEUCOTRIÈNES.

JEAN, STÉPHANIE; LH Boudreau, F Chouinard, V Provost,

L Bouchard, M Laviolette, N Flamand

Centre de recherche de l'IUCPQ, Département de médecine,

Faculté de médecine, Université Laval, Sainte-Foy, QC

Les endocannabinoides sont des lipides bioactifs impliqués dans l'obésité et la nociception. Leur impact immunomodulateur demeure cependant obscur. La structure des deux endocannabinoides principaux est très simple : on y retrouve une molécule d'acide arachidonique couplée à une molécule d'éthanolamine (anandamide) ou de glycérol (2-arachidonoyl-glycérol). Ces deux endocannabinoides que sont l'anandamide et le 2-arachidonoyl-glycérol peuvent être métabolisés par la plupart des enzymes catalysant l'acide arachidonique. Ils sont donc respectivement transformés en prostaglandine (PG) E2-éthanolamide et en PGE2-glycérylester (PGE2-GE) par la cyclooxygénase de type II. Nous savons que la PGE2, en augmentant les taux d'AMP cyclique (AMPc), inhibe les fonctions du neutrophile humain. Par contre, l'impact des PGE2-éthanolamide et PGE2-GE sur les fonctions du neutrophile est inconnu.

**OBJECTIF** : Déterminer l'impact des PGE2-GE et PGE2-éthanolamide sur les fonctions du neutrophile et les mécanismes sous-jacents.

**RÉSULTATS** : Contrairement à la PGE2-éthanolamide, la PGE2 et la PGE2-GE ont inhibé la biosynthèse des leucotriènes par les neutrophiles activés. Une approche pharmacologique a révélé que comme pour la PGE2, l'effet inhibiteur de la PGE2-GE dépend d'une hausse des taux intracellulaires d'AMPc. L'utilisation de composés pouvant bloquer la transformation de la PGE2-GE en PGE2 indique que l'effet de la PGE2-GE ne nécessite pas cette étape.

**CONCLUSION** : La PGE2-GE inhibe la biosynthèse des leucotriènes comme la PGE2. Les mécanismes impliqués dans cette inhibition impliquent la protéine kinase dépendante de l'AMPc. Nous tentons maintenant de déterminer par quel(s) récepteur(s) la PGE2-GE exerce ses effets. Financé par Les IRSC, le CRSNG, le RCA et le FRSQ.

# ACUTE AFFECTIVE AND PHYSIOLOGICAL RESPONSE TO DIFFERENT EXERCISE-TRAINING PROTOCOLS IN COPD

Amanda Rizk¹,²,³, Simon L Bacon²,³,⁴, Rima Wardini²,³, Emilie Chan-Thim²,³, Kim L Lavoie³,⁵, Myriam de Lorimier³, Véronique Pepin²,³

¹Special Individualized Program (SIP), ; ²Department of Exercise Science, Concordia University; ³Centre de recherche de l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal; ⁴Montreal Behavioural Medicine Centre; ⁵Department of Psychology, University of Quebec at Montreal, Montreal, QC

**BACKGROUND** : Current pulmonary rehabilitation (PR) guidelines advocate high-intensity exercise training for patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD). However, this approach has been shown to be unachievable in a large proportion of PR patients. Alternative approaches, such as training at the ventilatory threshold and interval training, have been proposed as more tolerable, less unpleasant and thus possibly easier to comply with. Objectives: To compare the acute affective (i.e. pleasant vs. unpleasant feelings) and physiological responses to one bout of high-intensity training (CT80), training at the ventilatory threshold (CTVT), and interval training (IT) in COPD patients. Methods: After completing baseline assessments, subjects were randomly assigned to
CT80, CTVT, or IT. Acute affective and physiological responses were measured throughout a single training bout. Affective response was measured with the Positive and Negative Affect Schedule (PANAS) and the Global Vigor and Affect Instrument (GVA). Physiological response was measured with a portable metabolic system. Changes in outcomes were analyzed with repeated-measures general linear models and repeated-measures mixed models. Results: Eighteen subjects completed all assessments. A significant increase in positive affect (F=11.16, p=0.0013) on the PANAS and in global affect (F=5.84, p=0.0005) and vigor (F=3.57, p=0.0112) on the GVA was obtained from rest to post-exercise, but no group effect or time by group interaction was found. VO₂ expressed in ml/kg/min was significantly higher in IT compared to CT80 (F=4.48, p=0.0344). Trends were observed for VO₂ between IT and CTVT (F=2.87, p=0.0904) and for heart rate between CT80 and CTVT (F=3.17, p=0.0754), where IT and CT80 respectively induced greater responses. Conclusions: Affect improves after a single exercise-training bout in COPD patients regardless of the protocol, although CT80 and IT seem to be more physiologically demanding than CTVT.

## 36
COMPARATIVE EVALUATION OF THE CLINICAL EVOLUTION OF LUNG TRANSPLANT RECIPIENTS WITH OR WITHOUT ALPHA-1-ANTITRYPSIN DEFICIENCY

Y Tawil, C Poirier, C Bergeron

CRCHUM, Programme de transplantation pulmonaire du Québec, HND-CHUM, Montréal, QC

**BACKGROUND:** Alpha1-antitrypsin deficiency (AAT) is the only known genetic factor recognized to predispose smokers to COPD. The lack of AAT not only leads to excessive lung parenchyma destruction but also to accrued lung neutrophil inflammation through mutated AAT polymerization. However, little is known on the effect of AAT deficiency or replacement therapy on lung function and survival in lung transplant recipients (LTRs).

**HYPOTHESIS:** We propose that AAT deficient LTRs are more prone to adverse clinical events such as chronic and/or acute rejections, bronchial stenosis, infections and decreased survival due to the loss of function of the AAT protective effect. In addition, a potentially reduced bacterial infection rate due to the inflammatory state.

**METHODS:** In a multivariate retrospective analytical study, we searched the CHUM Transplant 6 data base for COPD LTRs. On the 187 patients obtained, AAT deficient status was confirmed for 29 recipients using Transplant 6, logibec database, or patients' charts. We compiled data for FEV1 on a yearly basis post transplant, and incidences of infections, acute or chronic rejections, bronchial stenosis, and overall survival post transplant.

**RESULTS:** Data was available for 29 AAT deficient and 115 COPD LTRs. Although our results demonstrate no statistical significant decrease in short or long term survival in the AAT deficient group, the half-life of the AAT group is 1.6 year compared to 2.9 year in the COPD group. The AAT deficient and COPD groups had a first year post transplant infection rate of (0.38; 0.62; p=0.32), an overall infection rate of (0.43; 0.69; p=0.15), an acute rejection rate of (0.20; 0.35, p=0.34), a chronic rejection rate of (0.07; 0.04; p=0.46), a bronchial stenosis rate of (0.24; 0.08, p=0.76), a rate of decrease of FEV1(L) in the first year post transplant of (0.20;0.27; p=0.29), and a long term decrease of FEV1(L/year) of (0.15; 0.22; p=0.25).

**CONCLUSION:** Our results indicate a decreased short term survival for the AAT deficient LTRs compared to non AAT deficient COPD LTRs, with a trend in decreased infection rate and increased bronchial stenosis and chronic rejection rate. Currently, AAT replacement therapy for deficient transplant recipients in not indicated.

## 37
LA CYCLOHEXIMIDE ABAISSE LE NIVEAU D'ARNM DE ALPHA-ENAC DANS LES CELLULES ÉPITHÉLIALES ALVÉOLAIRES VIA LES VOIES DE ERK ET P38.

F Mignault, A Dagenais, Y Berthiaume

CRCHUM, Département de Médecine, Université de Montréal, Montréal, QC

L'expression et l'activité du canal épithélial sodique (ENAc) sont finement régulées dans les cellules épithéliales alvéolaires. La cycloheximide (Chx) à concentration élevée diminue l'ARNm de α-ENAc suggérant l'implication de protéines de faible demi-vie dans la régulation de sa stabilité. Afin de valider cette hypothèse, des cellules épithéliales alvéolaires de rat en culture primaire ont été traitées avec de la Chx (0.1, 1.0, 8.8µM) pendant 6h et l'expression des ARNm α-ENAc quantifiée par PCR en temps réel. La Chx affecte le niveau d'ARNm de α-ENAc de façon dose-dépendante démontrant une diminution progressive de l'ARNm qui débute une heure après l'initiation du traitement. La Chx à une concentration trop faible pour inhiber la synthèse protéique (0.1, 1.0µM) induit une baisse de 50% du niveau d'ARNm de α-ENAc. Cette baisse est inhibée par les inhibiteurs de ERK (PD98059 20µM) et P38 (SB203580 10µM). L'immunobuvardage de type Western confirme une activation de la phosphorylation de ERK par la Chx après 15min qui demeure élevée à 6h. Afin d'évaluer le rôle de la transcription dans ce processus, les effets de l'actinomycine D (5µg/mL) et de l'α-amanitine (100µg/mL) ont également été étudiés. Ces inhibiteurs de la transcription augmentent le niveau d'ARNm de α-ENAc de 50%, mais inhibent aussi l'effet de la Chx sur celui-ci. Ces résultats suggèrent que l'activation des MAPK par la Chx pourrait moduler le niveau d'ARNm de α-ENAc et que la transcription est importante dans ce phénomène.
*Travaux soutenus par la FCFK et les IRSC.*

## 38
IMPACT OF CFTR SILENCING AND CORRECTION IN AIRWAY EPITHELIAL REPAIR

NTN Trinh, É Maillé, A Privé, E Brochiero

Department of Medicine, Université de Montréal and CRCHUM
Hôtel-Dieu, Montreal, QC

Airway epithelial injury and remodelling is responsible of the deterioration of lung function in CF patients. Thus, a better comprehension of epithelial repair mechanisms is crucial to develop new therapies to stabilize CF patients. Our previous work (Trinh et al. AJP 295(5):L866-80, 2008) showed that K+ channel function was crucial for bronchial repair mechanisms. We also demonstrated that bronchial CF cells (CuFi-1) exhibited a delay in repair after mechanical injury when compared to normal bronchial cells (NuLi-1). This delay was associated with an altered K+ channel function. We then hypothesized that the CF bronchial epithelia could exhibit a defect in repair mechanisms and further explored the contribution of CFTR channels in that default. Our results revealed that human bronchial cells from CF patients during lung transplantation repaired slower (55%) than cells from healthy donors (non-CF). To define the role of CFTR channel, we tested the impact of CFTR down-regulation in non-CF human primary nasal polyp cells. We then showed that CFTR silencing (siRNA) partially inhibited wound healing. Conversely, we noticed that wound repair in CF bronchial cells corrected with wt-CFTR was enhanced when compared to non-corrected CF cells. Interestingly, we noted that CFTR correction was accompanied with a restoration of K+ currents (3-7 fold higher) in wt-CFBE cells. Furthermore, we showed that wound healing of AF508-CFBE cells was increased after pre-treatment with VRT-325, a CFTR corrector. Altogether our results suggested that functional CFTR and K+ channels are critical for epithelial repair capacity, which is crucial for effective airway regeneration in CF patients.
## ACTININ-A4, A REGULATOR OF CFTR IN RESPIRATORY EPITHELIA?

A. Wohlhuter-Haddad, A Evagélidis, P LeSimple, H Balghi, R Robert, J Goepp, JW Hanrahan

Physiology Department, McGill University, Montréal, QC,

**BACKGROUND:** Many proteins regulate the proper functioning of epithelial membranes. One of them is the Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR) protein, whose encoding gene is mutated in Cystic Fibrosis. Studies in our laboratory and others have shown that CFTR is part of a large protein complex, that controls its anion channel activity and expression at the cell membrane. However, little is known about the dynamics of this complex. The purpose of my study is to identify important constituent proteins and investigate how they impact the regulation of CFTR and epithelial ion and fluid homeostasis. To identify new CFTR interacting partners, freshly isolated epithelial cells from bovine trachea were lysed and subjected to GST pull-down assays, using a fusion protein comprising glutathione S-transferase and the carboxy terminal 50 amino acids of CFTR (GST-CFTR-Cter) as bait. Lysate proteins that bound specifically to GST-CFTR-Cter and not to GST alone were eluted and analyzed by mass spectrometry. More than 150 well-known and novel CFTR-interacting proteins were identified. The strongest hit was the novel interactor actinin alpha 4 (ACTN4).

**PURPOSE:** The goal is now to investigate the role of ACTN4 in CFTR regulation. Based on preliminary results, I hypothesize that ACTN4 promotes CFTR endocytosis and/or inhibits its channel activity in polarized airway epithelia.

**METHODS:** To test this hypothesis, I am performing Western blots and immunofluorescence microscopy to evaluate the levels and co-localization of ACTN4 and CFTR in polarized airway epithelial cells that express either wild-type or ΔF508 CFTR. Knock-down of ACTN4 gene expression by RNA interference is being used to establish the role of ACTN4 on CFTR cell surface expression, localization and channel activity. These studies should clarify our understanding of CFTR trafficking and channel regulation and may suggest therapeutic targets for the treatment of cystic fibrosis.

*Support: MUHC, CCFF.*

## MODULATION OF NORMAL AND CF BRONCHIAL EPITHELIAL REPAIR PROCESSES BY INFLAMMATION

É Maillé¹,², NTN Trinh¹,², A Privé², C Bilodeau¹, É Bissonnette³,

E Brochiero¹,²

¹Université de Montréal; ²CRCHUM Hôtel-Dieu, Montréal;

³Université Laval, Sainte-Foy, QC

CF patients are subject to chronic inflammation which promotes epithelial injury leading to respiratory lung failure. Even if it is known that inflammatory products cause epithelial damage, their effect on wound repair is complex and still not completely understood. Our objective was then to study the impact of TNF, a major component of CF inflammation, on normal and CF bronchial epithelial repair. We first observed that TNF stimulated normal (NuLi) and CF (CuFi) epithelial wound repair and that this stimulation was higher after chronic exposure to TNF. Moreover, TNF stimulated cell migration, measured by time lapse experiments, whereas it reduced cell proliferation during repair. The components implicated in the TNF-induced stimulation of wound-healing had then been studied. Since MMP are implicated in cell migration, we evaluated the impact of their inhibition on NuLi and CuFi wound repair and we noted that it reversed TNF-induced stimulation. Because EGFR signalling plays a crucial role in repair, we tested the hypothesis that EGF/EGFR pathway is implicated in the TNF-induced stimulation. We saw that the TNF-induced stimulation was blocked in presence of an EGF-Ab or EGFR inhibitors. In another hand, an augmentation of EGFR phosphorylation was observed when NuLi and CuFi cells were treated with TNF. Since we previously showed that K+ channel activity was involved in wound repair, the role of these channels on TNF-induced stimulation has been evaluated. K+ channels inhibition reversed the stimulatory effect of TNF, while we observed an augmentation of K+ channel activity when NuLi and CuFi cells were treated with TNF. In summary, TNF seems to play a complex role in CF

pathology by participating to epithelial damage as well as by modulating epithelial wound repair processes, by up- and down-regulating cell migration and proliferation. It is thus crucial to further study the impact of inflammation in CF pathology.

## POINTS QUANTIQUES ET NANOTOXICITÉ À LONG TERME : ÉTUDE IN VITRO CHEZ LES CELLULES ÉPITHÉLIALES ALVÉOLAIRES HUMAINES

M Bergeron-Prévost¹, M Welman¹, S Hallé², K Maghn¹

¹Centre de Recherche de l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal,

Laboratoire de neuroimmunologie; ²École de technologie supérieure, Département de génie mécanique, Montréal, QC

Les points quantiques (PQs) sont une classe hétérogène de nanoparticules fluorescentes possédant de nombreuses applications biomédicales potentielles (nanovecteurs et nanosondes). Cependant, leur utilisation pourrait être limitée par leur nanotoxicité. Les PQs de 2e génération ont été développé pour réduire cette nanotoxicité. Toutefois, le risque d'une toxicité à long terme des nouveaux types de PQs est peu connu.

**HYPOTHÈSE:** La structure des PQs de 2e génération réduirait le risque de nanotoxicité à long terme.

**OBJECTIF:** Déterminer la nanotoxicité potentielle à long terme des PQs de type tellurure de cadmium/sulfure de cadmium (CdTe/CdS).

**MÉTHODOLOGIE:** Les PQs de 2e génération de type CdTe/CdS ont été utilisés. La lignée de cellules épithéliales alvéolaires A549 a été utilisée pour les essais de cytotoxicité: libération de la lactate déhydrogénase (essai LDH) et l'altération de l'activité mitochondriale (essai MTS). La possibilité d'interférences directes entre ces PQs et les essais de cytotoxicité a été examinée. Les cellules A549 ont été incubées avec les PQs CdTe/CdS (1 à 2000 µg/ml) durant de 16, 24, 48 et 72 h.

**RÉSULTATS:** Les PQs CdTe/CdS n'interférent pas avec les essais de cytotoxicité, les valیدant ainsi pour la mesure de la nanotoxicité de ces PQs. Les essais LDH et MTS ont montré que la concentration 2000 µg/ml de PQs présente une cytotoxicité importante dès 16 h, alors que la concentration 100 µg/ml est sans effet. Cependant, une exposition prolongée (72 h) des cellules A549 aux PQs 100 µg/ml résulte en une diminution marquée de la viabilité cellulaire.

**CONCLUSION:** Les PQs CdTe/CdS présentent une cytotoxicité à long terme à des concentrations sans effet à court terme. La connaissance du risque de nanotoxicité à long terme des PQs et les mécanismes associés devraient donc être déterminés considérant leurs applications biomédicales.

*Supporté par le Réseau de recherche en santé et sécurité du travail du Québec (FRSQ) et le Centre asthme et travail*

## HYPERGLYCEMIA REGULATES CHLORIDE SECRETION THROUGH HUMAN BRONCHIAL EPITHELIAL CELL CFBE MONOLAYERS

O Bardou, A Privé, Y Berthiaume, E Brochiero

CRCHUM and Department of Medicine, Université de Montréal, Montréal, QC

Cystic fibrosis related diabetes (CFRD) is a CF complication, associated with both decreased lung function as well as increased mortality. We hypothesized that hyperglycemia contributes to epithelial cell dysfunction, in particular by deregulating ion transport. Then we investigated the impact of hyperglycemia on Cl- and K+ transport through human differentiated bronchial epithelial cell monolayer CFBE, expressing wild-type CFTR. Cells were cultured at air-liquid interface and mounted in Ussing chamber for short-circuit current (Isc) measurements. Forskolin (Fk) and IBMX application induced a rapid increase in Isc, which was inhibited by CFTRInh172. The IFk was then compared through monolayer treated for 24 h before Ussing experiments with 20mM mannitol or glucose. Interestingly, we observed that treatment with glucose reduced by 30% the IFk. To determine if this decrease could be due to a direct down-regulation of CFTR channel activity, the basolateral membrane was permeabilized and a Cl- gradient was established. In these conditions, high glucose failed
to inhibit the IFk. Furthermore, CFTR protein expression was not affected by glucose treatment. We then postulated that the decrease in IFk previously observed in intact monolayers could be due to an indirect effect through basolateral K+ channels, which are known to participate in the control of Cl- secretion. The apical membrane was then permeabilized and a K+ gradient was established. Interestingly, we observed that the currents sensitive to clofilium and glibenclamide (KvLQT1 and KATP inhibitors respectively), were lower in hyperglycemia. Moreover KvLQT1 protein level was lower in glucose condition.

In summary, hyperglycemia could indirectly affect Cl- secretion through the modulation of K+ currents in bronchial monolayers. The effect of glucose fluctuations on ion and fluid transport through airway epithelia should be further studied to better understand the lung function deterioration associated with CFRD.

## 43

### SPHINGOSINE-1-PHOSPHATE RECEPTOR 1 INHIBITS CCL2 RELEASE FROM EPITHELIAL CELLS IN A MODEL OF ASTHMA

Michel Taillefer, Anick Langlois, Jean-François Lauzon Joset, Élyse Bissonnette, David Marsolais

Centre de recherche de l'Institut de cardiologie et de pneumologie de Québec; Université Laval, Sainte-Foy, QC

**BACKGROUND:** Allergic asthma involves chronic airway inflammation and bronchial epithelial cells are major producers of mediators that promote chronic inflammation of the airways. Tumor necrosis factor (TNF) is highly expressed in airways of asthmatic subjects and leads to the release of monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1;CCL2), which contributes to the recruitment and/or activation of inflammatory cells. Recently, we showed that selective activation of sphingosine-1-phosphate receptor 1 (S1PR1) inhibits experimental allergic airway inflammation by suppressing the release of chemokines in the lungs. However, pulmonary distribution of S1PR1 and mechanisms of S1PR1-induced alleviation of inflammation remain elusive.

**OBJECTIVE:** In view that epithelial cells are central to airway inflammation, our objective was to study the involvement of S1PR1 in the regulation of chemokine release in primary bronchial cells in vitro. We hypothesized that pharmacological activation of S1PR1 inhibits TNF induced-CCL2 secretion.

**METHODS:** Bronchial epithelial cells were isolated from normal (NBEC) and asthmatic (ABEC) rats, and used between passages 4 to 8. In a first series of experiments we determined, by Western blotting, that S1PR1 protein was present in both cell types. Then, modulation of CCL2 release by various S1PR1 chemical probes was evaluated using ELISA. The S1PR1 agonist CYM-5442 inhibited TNF-induced CCL2 release in a dose dependent manner in ABEC. Moreover, the effect was reversed with the S1PR1 antagonist W146, but not with its control enantiomer W140.

**CONCLUSION:** This is the first time that presence of S1PR1 protein was confirmed in primary bronchial epithelial cells. Our results unravel the involvement of S1PR1 in the regulation chemokine release by epithelial cells, with potential for pharmacological inhibition of allergic airway inflammation.

## 44

### ANALYSE COMPARATIVE DU TRANSCRIPTOME DES VOIES AÉRIENNES DANS DEUX SOUCHES DE RAT

Paul-André Risse, Taisuke Jo, Anouk Lavoie-Lamoureux, Kimitake

Tsuchiya, Sana Siddiqui, James G Martin

Laboratoires Meakins-Christie Université McGill, Montréal, QC

**INTRODUCTION:** L'hyperréactivité bronchique (HRB) est une caractéristique clinique de l'asthme qui peut être également partiellement innée. La réactivité bronchique innée varie chez le rat en fonction des différentes souches. L'HRB est particulièrement bien représenté chez les rats de souche Fisher (F344) en comparaison avec ceux de souche Lewis.

**OBJECTIF:** Comparer les transcriptomes des voies aériennes de rats de souche F344 avec ceux de souche Lewis afin d'identifier une potentielle voie de régulation de la réactivité bronchique.

**MÉTHODES:** La réactivité bronchique en réponse à la métacholine a été mesurée dans les deux souches de rats. L'expression génique a été analysée par Illumina RatRef-12-array à partir des ARN totaux extraits de l'arbre bronchique proximal.

**RÉSULTATS:** l'existence d'une HRB chez les rats de souche F344 en comparaison avec ceux de souche Lewis a été confirmée. La comparaison des transcriptome de rat F344 et Lewis a permis de mettre en évidence 64 gènes dont l'expression était significativement plus importante chez les rats F344 et 59 dont l'expression était significativement diminuée (5% de faux positif). Parmi les gènes dont l'expression était augmentée chez les Fisher l'arginase1 est également un gène dont l'expression est plus élevée chez les patients asthmatiques. Cependant l'activité des cette enzyme ne semble pas différente entre les deux souches de rats et la concentration de monoxylde d'azote est similaire dans les liquides de lavages broncholaveolaires. De plus cette différence d'expression n'a pas été retrouvée dans l'épithélium de trachée ni dans les cultures de cellules musculaires lisses.

**CONCLUSION:** Les rats de souches F344 présentent une HRB innée accompagné par une augmentation d'expression de plusieurs gènes associés à l'asthme tel que l'arginase 1. La signification fonctionnelle de cette différence reste incertaine et sa relation avec l'HRB innée devra être établie.

## 45

### ASTHME PROFESSIONNEL DÛ SIMULTANÉMENT À DEUX AGENTS PROFESSIONNELS

JL Malo, J L'Archevêque

Service de pneumologie et axe de recherche en santé respiratoire,

Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal, Montréal, QC

**PERTINENCE** : Jusqu'à 50% des travailleurs peuvent être exposés à des agents sensibilisants à un moment ou à un autre de leur vie professionnelle (Demir et coll., 2008). Des travailleurs peuvent même être exposés à plusieurs agents sensibilisants à la fois.

**BUT ET MÉTHODES** : À la suite de la démonstration récente d'asthme professionnel (AP) à deux agents (lactosérum et farine) chez le même travailleur, nous avons examiné notre banque de données pour savoir s'il y avait d'autres exemples de double sensibilisation.

**RÉSULTATS** : Depuis l'an 2000, nous avons documenté de l'AP à deux agents chez quatre autres travailleurs. Tous les travailleurs incluant le premier œuvraient dans le domaine de l'alimentation. Tous étaient atopiques et présentaient des symptômes de rhinoconjonctivite associés présents depuis un à sept ans selon les sujets. Au moment du début des tests de provocation bronchique spécifique, tous présentaient de l'hyperexcitabilité bronchique non-spécifique. Les agents responsables étaient lactosérum et caséine (no.1), lactosérum et farine de blé (no.2), camomille et gingembre (no.3), gomme de guar et farine de blé (no.4), lactosérum et farine de blé (no.5). Presque tous les sujets démontraient une réaction cutanée immédiate à l'agent responsable. Tous les sujets (sauf un sujet qui a eu une réaction retardée) ont présenté des réactions asthmatiques immédiates, maximales après 10 à 20 min de la fin de l'exposition à l'agent causal.

**DISCUSSION** : Les mécanismes potentiels de cette sensibilisation double peuvent inclure : 1) un risque accru de devenir allergique quand la quantité de protéines de l'air augmente; 2) des réactions croisées à des protéines semblables.

## 46

### BRONCHIOLITIS OBLITERANS FORMATION BY EPITHELIAL-MESENCHYMAL TRANSITION IN LUNG TRANSPLANT RECIPIENTS

Areej Al Rabea, Sawsan Al-Mot, Annie Levesque, Charles Poirier, Celine Bergeron

Centre de recherche du CHUM, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Chronic lung transplant rejection, also known as bronchiolitis obliterans (BO), a disease that has been puzzling researchers for several years due to its implication in long term mortality in lung transplant recipients (LTRs). Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is proposed to participate in BO pathogenesis. In the EMT process, epithelial cells go through phenotypic transition to become mesenchymal cells and participate in airway remodeling. Twist, a transcription factor, is a possible initiator of EMT.
**AIM:** To study in situ the presence of EMT in the small airways of LTRs. Methods: Immunohistochemistry (IHC) analysis was done on transbronchial biopsies (TBB) obtained retrospectively from LTRs who developed or not BO. Antibodies specific for E-cadherin, Vimentin, and Twist have been used in the analysis, where E-cadherin is an epithelial marker, vimentin a mesenchymal marker, and Twist a transcription factor that is responsible in the induction of EMT.

**RESULTS:** IHC staining done on transbronchial biopsies taken one year following lung transplant have showed a decrease or no expression of E-cadherin, an increase in both vimentin and Twist expression in LTRs who later developed BO.

**CONCLUSION:** We demonstrate for the first time the occurrence of EMT in small airway of LTRs that might be triggered by Twist expression. Our results suggest that EMT might play an important role in bronchiolitis obliterans formation.

## 47
OCCUPATIONAL ASTHMA: NEW LOW MOLECULAR WEIGHT AGENTS, 2000-2010

JA Pralong¹, A Cartier¹, O Vandenplas² and M Labrecque¹

¹Department of Chest Medicine, Sacré-Cœur Hospital, University of Montreal, Montreal, QC; ²Department of Chest Medicine, Mont-Godinne Hospital, Université Catholique de Louvain, Yvoir, Belgium

**BACKGROUND:** Occupational Asthma (OA) is one of the most prevalent occupational lung diseases and there are more than 400 distinct agents causing OA. These agents are usually classified according to their molecular weight in two categories. The high molecular weight (HMW) agents include essentially proteins from animal and vegetal origin and low molecular weight (LMW) agents are represented by chemicals, wood dust, drugs and metals. The list of LMW agents is constantly increasing emphasizing the need to continuously review the literature.

**OBJECTIVE:** the objective of this study was to identify all new LMW sensitizing agents reported between 2000-2010.

**METHODS:** We searched Medline for the keywords occupational asthma, new allergens, new causes, and low molecular weight agents between 2000 and 2010.

**RESULTS:** For the period between 2000-2010, we found 35 manuscripts describing 37 new LMW agents, which belonged to various categories: wood dust (12), drugs (9), chemicals (5), metals (5), biocides (3) and others (3). For wood dust agents, most of the wood species identified in the past 10 years come from Africa, South America or Asia.

**CONCLUSION:** This article highlights the importance of being alert to the occurrence of new LMW sensitizers, which can elicit OA and emphasizes the importance of exotic woods as sensitizing agents.

## 48
RECHERCHE CLINIQUE ET ÉPIDÉMIOLOGIQUE EN ASTHME : CRÉATION D'UNE BANQUE DE DONNÉES POUR LES SUJETS ASTHMATIQUES : BD-ASTHMA.

Lucie Blais, Marie-France Beauchesne, Kim Lavoie, Simon Bacon, Catherine Lemière, Pierre Larrivée

Centre de recherche de l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal et
Centre de recherche clinique Étienne-Le Bel du CHUS, Montréal,
QC

**INTRODUCTION/PROBLÉMATIQUE :** La recherche épidémiologique est souvent critiquée par l'absence de données cliniques.

**OBJECTIF PRINCIPAL :** Ce projet vise à construire une banque de données cliniques sécurisée et confidentielle, qui pourra être appariée aux données provenant des banques de données administratives (ex : RAMQ, Med-ECHO), afin de conduire des études cliniques et épidémiologiques dans le domaine de l'asthme.

**MÉTHODES :** Un assistant de recherche recrute les personnes éligibles aux cliniques externes de l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal (HSCM). Les personnes astmatiques doivent remplir avec l'assistant de recherche un questionnaire de collecte de données cliniques. Les informations cliniques sont ensuite complétées à partir du dossier médical. Si la personne

astmatique possède une assurance médicament privée, elle peut s'inscrire à la base de données sur les médicaments prescrits reMed. Les données cliniques seront appariées aux banques de données de la RAMQ, de MED-ECHO, de l'ISQ et de reMed afin d'obtenir des données sur l'utilisation des services médicaux, des visites à l'urgence, des hospitalisations et des médicaments prescrits, ainsi que la date et la cause de décès, lorsqu'applicable.

**RÉSULTATS :** Le projet de construction de la banque de donnée BD-asthma a été implanté à l'Hôpital du Sacré-Cœur de Montréal au mois de février 2010. Jusqu'à présent, le taux de recrutement est de 74% et 263 patients étaient inscrits dans BD-asthma en date du 16 octobre 2010. L'inclusion de personnes adultes astmatiques suivies à la clinique externe de pneumologie du Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke débutera en janvier 2011. Des démarches sont en cours afin d'inclure la clientèle pédiatrique.

**CONCLUSION :** La création de cette banque de données nous permettra de conduire des études cliniques et épidémiologiques plus valides scientifiquement. Nous souhaitons poursuivre l'implantation de ce projet au sein de cliniques d'asthme des autres CH du Québec.

## 49
VALIDATION OF THE DIAGNOSIS OF BRONCHOPULMONARY DYSPLASIA IN THE PROVINCE OF QUEBEC

J Landry, T Chan, D Menzies

Respiratory Epidemiology and Clinical Research Unit, McGill

University, Respiratory Division, McGill University Health Centre,
Montreal, QC

**INTRODUCTION:** Preterm births have increased by 35% over the past 25 years in Canada and the United States of America. One of its most important sequelae, bronchopulmonary dysplasia (BPD), has evolved over the past three decades, both from a pathophysiologic and a semantic point of view. In 2000, a consensus definition of BPD and its severity was published by the National Institutes of Health (NIH). The objective of this study is to validate the use of BPD as a diagnosis in the province of Quebec, based on the NIH consensus criteria.

**METHODS:** Retrospective analysis of 1192 medical charts of preterm infants admitted at the Montreal Children's Hospital and who were born in the province of Quebec between the years 1980 and 1992. These subjects were matched to the Régie de l'Assurance-Maladie du Québec (RAMQ) provincial databases.

**RESULTS:** Among 1192 subjects admitted following a preterm birth at the Montreal Children's Hospital, 277 were labeled as having BPD at the time of hospital discharge. Upon review of the medical charts, 326 were found to meet the NIH criteria for BPD, which represents a specificity of 97.0% and a sensitivity of 85.1% for the use of the diagnosis of BPD (positive predictive value: 91.3%, negative predictive value: 94.6%). The misclassified cases differed from the subjects identified as suffering from BPD (based on the NIH criteria) by their gestational age, birth weight, gender distribution and year of birth.

A diagnosis of BPD in the provincial databases (RAMQ, Med-ECHO) is associated with a specificity of 98.1% and a specificity of 42.6% for BPD (as defined by the NIH consensus definition) (positive predictive value: 90.2%, negative predictive value: 80.7%).

**CONCLUSION:** The use of the diagnosis BPD is associated with very high specificity for BPD as defined by the NIH consensus definition, even if made prior to 2000, the year which the consensus definition was accepted and put to use.

## 50
THE IMPACT OF BODY MASS INDEX ON CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE EXACERBATIONS

A Jacob, C Laurin, M Boudreau, K.L Lavoie, S.L Bacon

MBMC/Psychology/Exercise Science, Hopital du Sacre-Coeur de
Montreal/UQAM/Concordia, Montreal, QC

**PURPOSE:** For most chronic diseases increased body weight is associated with worse prognosis. However, for COPD the relationship seems to be less clear with obese, as well as, underweight patients seeming to have higher
morbidity than those with normal weight. The purpose of this study was to assess the impact of Body Mass Index (BMI) on COPD exacerbations using a prospective design.

**METHODS:** Height and weight were measured to calculate BMI in 116 patients with stable COPD (53% women, mean (SD) age = 67 (8) years) Patients were followed for an average (SD) of 1.8 (0.8) years to assess both inpatient-treated (i.e., treated in the emergency department or hospital) and outpatient-treated (i.e., treated with medication in the patient's own environment) exacerbations, all of which were verified by chart review.

**RESULTS:** Cox regression models revealed that, compared to normal weight individuals, underweight patients were at greater risk for inpatient-exacerbations (RR [95% CI] 2.9 [1.3-6.7]). Overweight (RR [95% CI] 0.6 [0.3-1.1]) and obese (RR [95% CI] 1.0 [0.5-1.8]) patients were not at an increased risk for inpatient-exacerbations. There were no differences in outpatient-exacerbation risk across any of the weight groups.

**CONCLUSIONS:** In contrast to most other chronic diseases, patients who were underweight were at greater risk of COPD exacerbations than normal weight individuals. In contrast, being obese had no effect on exacerbation risk. The mechanisms underlying this relationship and potential interventions to reduce the impact of body weight on COPD exacerbations need to be investigated.

## 51

# ÉTUDE D'ASSOCIATION ENTRE L'ASTHME ET LES GÈNES ASSOCIÉS À CE PHÉNOTYPE DANS UN ENVIRONNEMENT PARTICULIER, DANS UN ÉCHANTILLON D'ASTHME PROVENANT D'UN ENVIRONNEMENT RURAL.

A Morin, C Duchaîne, C Laprise

Université du Québec à Chicoutimi, Centre de recherche de l'institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

**CONTEXTÉE SCIENTIFIQUE:** Les gènes candidats ont été sélectionnés dans la littérature en fonction de leur interaction avec l'environnement et l'asthme dans un milieu urbain ou rural. Ces gènes ont été analysés dans une collection familiale provenant d'un milieu rural où les niveaux d'ozone et de dioxyde de soufre sont beaucoup plus faibles que ceux observés en milieu urbain.

**MÉTHODES:** Quarante-deux gènes candidats ont été sélectionnés dans la littérature pour cette étude. Cinq d'entre eux étaient associés à l'asthme dans un environnement rural et 37 étaient associés au phénotype dans un environnement urbain caractérisé par un niveau élevé de polluants de l'air. Les polymorphismes situés dans ces gènes ainsi que dans leur région 5' et 3' UTR ont été extraits des résultats de l'étude d'association pangénomique (GWAS) effectuée sur la collection familiale originaire du Saguenay Lac-Saint-Jean. Un test de déséquilibre de transmission (FBAT) a été effectué pour 255 familles nucléaires (n=1220).

**RÉSULTATS:** Dix gènes ont été associés avant correction (gènes associés au milieu urbain dans la littérature : ALD3A1, CAT, EGFR, IL-13, IL-6, IL-10, MUC5AC, NQO1 et UGT1A6, et au milieu rural: NOD1). Trois de ces gènes demeurent associé après correction pour analyses multiples (Nyholt): CAT, IL-10 et NQO1. CAT et NQO1 sont des molécules impliquées dans la protection contre le stress oxydatif et IL-10 est une molécule de signalisation immune qui agit spécifiquement dans la réponse Th2.

**CONCLUSION:** Les trois gènes associés à l'asthme dans cette étude jouent donc un rôle dans le phénotype d'asthme, et ce, indépendamment de l'environnement. Toutefois, il n'est pas exclu qu'un environnement dit urbain contribue à accentuer l'impact de ces facteurs génétiques dans la manifestation clinique du trait. D'autres études fonctionnelles devront être réalisées pour mieux comprendre l'interaction entre ces gènes et l'environnement dans l'asthme.

## 52

# INTEGRATED APPROACH TO DIAGNOSIS OF ASSOCIATED OCCUPATIONAL ASTHMA AND RHINITIS

S Nguyen, R Castano, M Labrecque

Research Centre, Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal, Montreal, QC

**BACKGROUND:** There is strong immunopathologic evidence concerning the link between upper and lower respiratory inflammation in allergic

disease. The Sacré-Coeur Hospital is seeking to implement an integrated approach to evaluate patients complaining of work-related rhinitis and asthma symptoms.

**OBJECTIVES:** We present a case of associated Occupational Rhinitis (OR) and Occupational Asthma (OA) to illustrate the parallel assessment of bronchial and nasal physiological responses to specific inhalation challenge (SIC) in laboratory.

**CASE:** A 38-year-old woman, animal lab technician since 2004, first noticed in 2007, the appearance of rhinitis and conjunctivitis symptoms when she was exposed to rats. Symptoms improved on weekends and holidays. Chest examination was normal and nose examination was suggestive of allergic rhinitis. Skin-prick test with rat extract was strongly positive (wheel of 10 × 5 mm). Her FEV1 (2.69 L) was normal and PC20 was 3.7 mg/mL. SIC with parallel assessment of nasal and bronchial responses was conducted following the usual protocol. After a control day of exposure with lactose, the patient underwent SIC by the realistic method within an exposure chamber. Working conditions were simulated by manipulating rat litters used at the workplace. After 10 minutes of exposition, she developed rhinitis and conjunctivitis, her FEV1 dropped by 27.5% and her nasal volume measured by acoustic rhinometry by 80% from baseline values. Induced sputum and nasal lavage examination 30 minutes after exposure demonstrated eosinophilia (respectively 11% and 20%). A diagnosis of associated OA and OR was confirmed and she was advised to stop working with rats.

**CONCLUSION:** This case illustrates well the integrated diagnostic approach for patients who complain about work related respiratory symptoms and the importance of assessing nasal as well as bronchial responses during SIC.

## 53

# MEASURING EXERCISE CARDIAC OUTPUT IN COPD: COMPARISON OF THREE NON-INVASIVE TECHNIQUES

Kapchinsky S, Baril J, Laurin J, Perrault H, Bourbeau J, Taivassalo T
Department of Kinesiology and Physical Education, McGill
University, Montreal, QC

Measurement of exercise cardiac output in COPD is limited by the availability of accurate and reliable non-invasive techniques which are not influenced by ventilation-perfusion abnormalities at rest and during exercise.

This study reports on the application of CO2 rebreathing (CO2rb), inert gas rebreathing (IGrb), and thoracic impedance using (Imp) techniques for exercise cardiac output measurement in COPD.

Stable COPD patients (N=13; 66±1 yrs; FEV1= 58±3% pred.) were assessed twice separated by at least 2 days. Cardiac output was measured using the 3 techniques at rest and during steady-state cycling at 20, 35, 50% peak power (Wpeak) bouts. Concurrent comparison of the techniques was used to determine their ability to measure cardiac output. All techniques provided measurements in a physiologically acceptable range for the power output. CO2rb resulted in similar values at rest and during exercise as compared to Physioflow® (mean Δ L/min: 0.0±1.5 rest; 0.0±2.3, 0.4±1.8, 0.1±1.4 at 20, 35, 50% Wpeak). In contrast, Innocor® resulted in systematically lower resting and exercise values as compared to CO2rb (mean Δ L/min: 0.9±1.8 rest; 0.9±1.9, 0.8±1.7, 1.4±2.5 at 20, 35, 50% Wpeak). In subsequent analysis of CO2rb using estimated rather than directly measured arterial CO2 content to derive cardiac output, significant differences between IGrb and CO2rb disappeared (mean Δ L/min: 1.2±0.9 rest; 0.6±2.1, 0.6±1.3, 0.2±2.1 at 20, 35, 50% Wpeak). Results showed the coefficient of reproducibility for test-retest to be highest in Imp (R=-2 = 0.88) compared with IGrb and CO2rb (R2 = 0.78 and 0.78). In conclusion, the difference between cardiac output values measured with direct and estimated arterial CO2 content reflects ventilation-perfusion mismatching and the similarity in values measured by Imp and CO2rb confirms that these techniques are not limited by diffusion abnormalities, thus enabling their use in monitoring cardiac output in COPD patients during exercise.
# LES PATIENTS MPOC DE STADE GOLD I ASYMPTOMATIQUES SONT-ILS VRAIMENT MALADES ?

P Gagnon, D Saey, S Provencher, J Milot, F Maltais

Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC
La MPOC de stade GOLD I est définie par des critères spirométriques. La présence de symptômes respiratoires n'est pas considérée à l'intérieur de l'approche diagnostique, alors que ceux-ci peuvent avoir un impact important chez ces patients.

**OBJECTIFS ET MÉTHODOLOGIE** : Nous avons mesuré i) la fonction pulmonaire ii) le niveau d'activité physique de la vie quotidienne (APVQ) sur 7 jours via un accéléromètre portable et iii) la capacité à l'effort via un test de marche navette progressif maximal chez 16 patients MPOC de stade GOLD I asymptomatiques (ASx), 22 patients symptomatiques (Sx) et 15 sujets témoins pairés pour l'âge (CTRL). Les patients MPOC étaient considérés symptomatiques avec un score ≥ 2/5 sur l'échelle de dyspnée du MRC.

**RÉSULTATS** : En comparant les 3 groupes, la fonction pulmonaire était progressivement réduite entre les CTRL, les patients ASx et Sx respectivement, et ce, pour le VEMS (121 ± 16, 109 ± 9 et 96 ± 10 %préd.), le ratio VEMS/CVF (0,80 ± 0,04, 0,65 ± 0,05 et 0,59 ± 0,06) et la capacité de diffusion (99 ± 18, 90 ± 18 et 76 ± 16 %préd.) La capacité à l'effort était similaire entre les CTRL et les patients ASx, mais était significativement réduite chez les patients Sx versus les CTRL (VO₂ max: 29,6 ± 4,2 ml/kg/min vs. 24,8 ± 4,0 ml/kg/min). Le temps moyen accordé aux APVQ d'intensité modérée ( > 3 METS) était similaire chez les sujets CTRL et les patients ASx, mais était fortement réduit chez les patients Sx lorsque comparé aux deux autres groupes (112 ± 51 min, 119 ± 60 min et 61 ± 43 min) (Tous les résultats: moy. ± SD: p < 0,01).

**CONCLUSION** : Les patients MPOC de stade GOLD I Sx démontraient une réduction de la capacité à l'effort, de la fonction pulmonaire et des niveaux d'activité physique d'intensité modérée. En contrepartie, les patients ASx ne pouvaient être différents des sujets CTRL sur le plan de la tolérance à l'effort et de l'activité physique.

# ARE ANXIETY AND MOOD DISORDERS ASSOCIATED WITH CIGARETTE SMOKING IN ADULT ASTHMATICS?

K Ouellet, M Boudreau, A Jacob, S L Bacon, K L Lavoie

Hôpital du Sacré-Coeur de Montréal/UQAM/Concordia, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Research has linked cigarette smoking in asthma to increased asthma symptomatology, reduced responses to corticosteroids, and worse asthma control. Even so, up to 25% of adult asthmatics smoke. Anxiety and depression are associated with higher rates of smoking. However, little is known about the impact of anxiety and depression on smoking in asthma patients. This study assessed the impact of anxiety and depression on smoking in a large sample of asthmatics.

**METHODS:** 682 adult asthma patients underwent a sociodemographic and medical history interview, including questions about current and past smoking, on the day of their clinic visit. Anxiety and depressive disorders were evaluated using the PRIME-MD.

**RESULTS:** After adjusting for age, sex and asthma severity, general linear model analyses indicated a significant association between anxiety disorders and current smoking (F= 5.53, p= .02), such that patients with (15.6%) versus without (8.7%) anxiety disorders were more likely to be current smokers. Although not significant, the analyses also revealed a trend for asthma patients with anxiety disorders (M=11.05; SD= 1.28) to have higher lifetime smoking pack-years (F= 2.77, p= .10) relative to patients without (M=8.43, SD= 0.94). Mood disorders were not associated with smoking pack-years (F= 0.22, p= .64) or with current smoking (F= 1.01, p= .32), and there were no mood x anxiety disorder interactions on smoking behavior.

**DISCUSSION:** Findings suggest that anxiety disorders may be risk factors for smoking in asthma patients, perhaps as a means of coping with anxiety-related morbidity. Asthmatics with anxiety disorders should be targeted for smoking cessation interventions that include anxiety management components.

# ASSOCIATION ENTRE LES GÈNES DE LA VOIE BIOLOGIQUE D'IL1R2 ET LES PHÉNOTYPES RELIÉS À L'ASTHME DANS DEUX ÉTUDES FAMILIALES D'ASTHME INDÉPENDANTES

V T Vaillancourt¹, E Bouzigon⁵,⁶, A-M Madore¹, M-H Dizier⁵,⁶, F Monier⁵,⁶, T J Hudson³, A Sandford⁴, F Demenais⁵,⁶,⁷, C Laprise¹,²

¹UQAC; ²CSSS Chicoutimi, QC; ³The Ontario institute for cancer research, Toronto, ON; ⁴UBC, Vancouver, BC; ⁵Inserm; ⁶Fondation Jean Dausset-CEPH; ⁷Université Paris Diderot, Institut Universitaire d'Hématologie, France

**CONTEXTE:** Le gène interleukin-1 receptor type-2 (IL1R2) est différent exprimé dans les biopsies bronchiques des patients asthmatiques allergiques comparativement aux sujets témoins et a également été associé avec l'atopie dans une étude combinée de quatre échantillons canadiens.

**OBJECTIF:** Réaliser une étude d'association entre des polymorphismes (SNP) des gènes de la voie biologique d'IL1R2 et les phénotypes associés à l'asthme.

**MÉTHODE:** Un criblage pangenomique (GWAS) a été réalisé sur l'échantillon familial du Saguenay–Lac-Saint-Jean (1 131 sujets, pucés Illumina) et les SNP des gènes de la voie biologique d'IL1R2 en ont été extraits. Une étude d'association de type Family-based association test (FBAT) a été réalisée ainsi qu'une étude de réplication dans 388 familles de l'étude française EGEA (Etude des facteurs Génétiques et Environnementaux de l'Asthme).

**RÉSULTATS:** Quatre gènes étaient associés aux phénotypes étudiés : Beta-site APP-cleaving enzyme-1 (BACE1) avec l'asthme (rs522843 p=0,004; rs473210 p=0,002) et l'asthme atopique (rs522843 p=0,003; rs473210 p=0,0003), Spleen focus forming virus proviral integration oncostéogene (SPI1) avec l'atopie et l'asthme atopique (rs3740698 p=0,002), Endoplasmic reticulum aminopeptidase (ARTS1) avec l'asthme atopique (rs13154629 et rs12173167 p=0,0006; rs10050860 p=0,001), et le gène Interleukin 1 receptor type 1 (IL1R1) avec l'asthme et l'atopie (rs3732131, p=0,001 et p=0,0009 respectivement).

**PERSPECTIVES:** Ces résultats renforcent l'idée du rôle d'IL1R2 dans l'asthme et suggèrent qu'il est pertinent de mieux caractériser sa voie biologique afin d'avoir une meilleure connaissance de la biologie moléculaire du trait. Cette meilleure compréhension de la physiopathologie pourra servir à élaborer une médication plus ciblée.

# LA SIGNALISATION DES MAPK DANS LE QUADRICEPS DES PATIENTS MPOC

Bruno B. Lemire, Richard Debigaré, Marie-Ève Thériault, Annie Dubé, Marc-André Caron, François Maltais

Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

La dysfonction des muscles périphériques chez la MPOC est caractérisée en autre par de l'atrophie musculaire. Les mécanismes moléculaires impliqués dans dans le processus d'atrophie musculaire chez la MPOC demeurent à ce jour inconnu. L'inflammation et le stress oxydant sont reconnus pour activer les Mitogen-Activated Protein Kinases (MAPKs), dont p38MAPK, ERK 1/2 et JNK. Lors de leur phosphorylation, ils activent MAFbx/Atrogin et MuRF1, tous deux impliquées dans la dégradation protéique, contribuant donc à l'atrophie musculaire. 18 patients MPOC ayant une atrophie musculaire et 9 sujets contrôles ont reçu une biopsie du quadriceps. Nous avons évalué par immunobuvardage les niveaux de phosphorylation de p38MAPK, ERK 1/2 et JNK. De plus, l'expression de l'ARN fut mesurée par PCR en temps réel. De façon similaire, les niveaux de protéines totales et l'expression d'ARNm de MAFbx/Atrogin et MuRF1 furent évalués dans ces biopsies musculaires. Nos résultats démontrent des niveaux de phosphorylation de p38 MAPK (p=0.03), ERK 1/2 (p=0.04) et JNK (p<0.01) sont significativement plus élevés chez les patients MPOC en comparaison avec les sujets contrôles, tout en démontrant des niveaux de protéines totales similaires. MAFbx/Atrogin démontre une tendance à être augmenté chez les patients MPOC (p = 0.08). L'expression d'ARNm de p38MAPK (p =0.03), ERK 1/2 (p=0.02) et MAFbx/Atrogin (p=0.04) démontre une augmentation significative chez les patients MPOC. De
plus, les niveaux de phosphorylation de p38MAPK corrèlent significativement avec la MTSCA des participants à l'étude (p-p38 MAPK: r=-0.31, p=0.05). La signalisation des MAPKs est accentuée dans le quadriceps des patients MPOC, ce qui indique que cette voie de signalisation pourrait contribuer au développement de l'atrophie musculaire chez la MP

## 58

### MISE AU POINT D'UN MODÈLE D'AÉROSOL VIRAL POUR L'ÉTUDE DE LA TRANSMISSION AÉROPORTÉE AU COURS DE LA VENTILATION NON INVASIVE

N Turgeon, P-A Bouchard, F Lellouche et C Duchaine
Université Laval, centre de recherche de l'institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

Il est bien documenté que les patients atteints de maladies virales respiratoires présentent un risque de contamination pour le personnel soignant. Les aérosols sont de plus en plus reconnus comme une voie importante de transmission de virus comme l'Influenza et le SRAS. Ainsi, lorsqu'un patient atteint d'une maladie sévère comme le SRAS nécessite une assistance respiratoire, il est primordial de choisir la méthode appropriée pour répondre aux besoins du patient et limiter les risques de contamination du personnel soignant. Or les risques associés à la propagation des aérosols lors de la ventilation non invasive (VNI) sont mal documentés. Un essai standardisé d'aérosols viraux permettant d'en évaluer les risques constituerait un outil précieux. Le présent projet visait à vérifier si les aérosols générés lors de la VNI sont suffisamment importants pour permettre le développement d'un tel modèle. Pour ce faire, nous avons nébulisé un bactériophage dans la gorge d'un mannequin pouvant mimer les fonctions respiratoires humaines. Nous avons récoltés les aérosols exhalés par le mannequin avec et sans VNI à l'aide d'un échantillonneur à haut débit (100L/min) et d'un à plus faible débit (10L/min). Les bactériophages présents dans les aérosols récoltés ont été quantifiés par qPCR. Nos résultats démontrent que les aérosols générés par notre modèle lors de la VNI sont aisément quantifiables par qPCR pour les 2 types d'échantillonneurs. Il sera ainsi possible de comparer les aérosols émis avec différents types de masques et de raffiner notre modèle afin de s'approcher d'avantage des conditions réelles.

## 59

### LE REGROUPEMENT STRATÉGIQUE « BIOAÉROSOLS ET VIRUS RESPIRATOIRES » : MIEUX COMPRENDRE LA TRANSMISSION DES INFECTIONS PAR LA VOIE DES AIRS

A Mériaux, M Veillette, N Turgeon, M-È Hamelin, G Boivin, C Duchaine

Centre de recherche de l'institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, Centre de recherche en infectiologie (CHUL), QC

Il s'agit d'un des 6 regroupements qui forment le réseau en santé respiratoire (RSR) du FRSQ. Créé en 1995, le Réseau en santé respiratoire (RSR) financé par le FRSQ vise à doter le Québec d'une structure de recherche en santé respiratoire fondée sur la participation des chercheurs de ce domaine, à promouvoir l'intégration des différents volets de recherche (clinique, évaluative, épidémiologique et fondamentale) dans des projets assez larges pour susciter la participation des chercheurs de différentes formations et à rendre les chercheurs québécois plus compétitifs. Dans cette perspective, six regroupements ont été formés au sein du RSR dont le regroupement « Bioaérosols et virus respiratoires » fait partie. Grâce à la collaboration de l'équipe de Dre Caroline Duchaine (spécialisée en aérobiologie ou étude du comportement et de la détection des microorganismes dans l'air) et de celle du Dr Guy Boivin (spécialisée en virologie) la connaissance de l'aérovirologie de différents milieux peut progresser. Ce regroupement a déjà permis la collaboration entre différentes universités (Laval et Montréal par exemple) ou différents milieux (Institut de recherche et de développement en agroenvironnement -IRDA) ou même différentes équipes comme celle du Dr William Lindsley (NIOSH). Par ailleurs, les fonds fournis pour ce regroupement ont servi de levier pour promouvoir la proposition de demandes conjointes de subventions auprès de différents organismes subventionnaires (CRSNG-IRSC action concertée, CRSNG stratégique ou IRSST par exemple). Toutes ces collaborations et le recrutement de

nouveaux chercheurs cliniciens ou autres dans le domaine permettront de poser les bases pour mieux connaître le domaine encore méconnu de l'aérovirologie.

## 60

### IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF ESSENTIAL GENES FROM PSEUDOMONAS AERUGINOSA LESB58 INVOLVED IN CHRONIC PULMONARY INFECTION

AA Lemieux¹, I Kukavica-Ibrulj¹, JL Fothergill², C Winstanley², SJ Charette¹,²,³, G Fillion¹⁻³, RC Levesque¹

¹Institut de biologie intégrative et des systèmes, université Laval, Saite-Foy, QC; ²University of Liverpool, Liverpool, UK; ³Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

Pseudomonas aeruginosa is the most common cause of persistent pulmonary infection in cystic fibrosis (CF) patients. A newly hypervirulent strain, the Liverpool Epidemic Strain (LES), is associated with high transmissibility to CF and non-CF patients, increased morbidity and mortality and antibiotic multi-resistance. Supplementary genes in the hypervirulent LESB58 strain could be directly implicated in initiation and establishment of the pulmonary infection. The goal of our search is to find the genetics targets in those regions and develop novel antibiotics. From a signature-tagged mutagenesis (STM) library of P. aeruginosa LESB58 mutants screened in a rat lung model of chronic infection, 162 were defective for in vivo maintenance. We confirmed that 12 STM mutants had a mutation in mobile genetic elements. Attenuation of virulence was measured in vivo using competitive index (CI) analysis in the chronic lung infection rat model and in Dictyostelium discoideum amoeba. Additional studies of defects in bacterial virulence were focused on 2 STM mutants, one defective in a DNA replication of protein DnaC and the other in a putative portal phage protein. Transcriptional studies by qPCR revealed decreased levels of expression for DnaC and a constant variation in expression for putative portal protein. Whole genome transcriptome analyses will identify all gene products affected by these mutations and their impact on in vivo virulence. Comparison of phage production between the LES wild type strain and the 2 mutants showed a reduced amount of phage production in both mutant strains. Construction of gene knockout strains will also confirm these results.

## 61

### CACHE-CACHE ENTRE UN AGENT INFECTIEUX ET SON HÔTE: PROTÉOMIQUE DE L'ENROBAGE DE BACTÉRIES PATHOGÈNES DES VOIES RESPIRATOIRES PAR

DICTYOSTELIUM DISCOIDEUM

VE Paquet, A Sedighi et SJ Charette
Institut de biologie intégrative et des systèmes et Centre de recherche de l'Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

Les protozoaires sont des eucaryotes unicellulaires omniprésents dans l'environnement. Ils ingèrent des bactéries par phagocytose afin de se nourrir. Certaines bactéries pathogènes telles *Legionella pneumophila* et les mycobactéries sont capables de résister à la dégradation enzymatique de la voie phagocytique. De plus, lors de leur séjour dans l'hôte, ces bactéries acquièrent un enrobage multi-membranaire provenant de la cellule résevoir. Cela leur permet d'augmenter leur résistance face à divers stress physiques et chimiques. Lors de l'exocytose par les protozoaires, les bactéries enrobées sont expulsées dans divers environnements et potentiellement aérosolisées, devenant ainsi une source de particules inhalables pouvant causer des maladies respiratoires. Le mécanisme d'emballage reste toujours nébuleux. Dans ce projet, nous avons reproduit le processus d'enrobage chez l'amibe hôte *Dictyostelium discoideum*. Par microscopie électronique et par immunofluorescence, il a été possible d'observer que le matériel d'enrobage est en fait un déchet métabolique de l'amibe. Une fois produit et rejeté dans l'environnement, le matériel d'enrobage est recueilli, concentré et séparé par diverses méthodes afin d'analyser le contenu protéique impliquées dans ce processus d'enrobage. En séparant et en déterminant l'identité de ces protéines, il sera envisageable de créer des marqueurs pouvant détecter ces bactéries enrobées dans divers environnements ainsi que
leur impact sur la santé respiratoire humaine. Finalement, le mécanisme d'enrobage bactérien par les protozoaires pourra être plus amplement étudié.

## 62

### CARACTÉRISATION MICROBIOLOGIQUE DE L'ENVIRONNEMENT DE TRAVAIL DES STATIONS D'ÉPURATIONS DES EAUX USÉES : UN MILIEU MAL CONNU POTENTIELLEMENT À RISQU

Rémi Charlebois¹, Marc Veillette¹, Pascale Blais Lecours¹, Caroline Duchaine¹,²

¹Centre de recherche de l'insitut universitaire de cardiologie et de pneumologie, Hôpital; ²Département de biochimie, de microbiologie et de bioinformatique, Faculté de Sciences et Génie Université Laval, Québec, QC

Les stations de traitement des eaux usées sont des sites où la génération de bioaérosols est importante. Les bioaérosols sont connus comme étant des agents potentiellement infectieux et immunogènes. Ainsi, l'exposition à de grandes quantités de bioaérosols présente un risque pour la santé. Les travailleurs des stations d'épuration présentent fréquemment des problèmes de santé divers : fièvre, gastroentérite, fatigue, troubles respiratoires, etc. Dans l'optique d'observer l'exposition aux bioaérosols des travailleurs dans ce milieu, nous avons caractérisé l'abondance ainsi que la composition de différents bioaérosols. Nous avons effectué une étude approfondie dans deux stations de traitement des eaux usées de la ville de Québec, dans chaque station quatre sites étaient à l'étude. La flore fongique mésophile cultivable a été comptabilisée et globalement identifiée. Au point de vue bactériologique le nombre UFC (unités formatrices de colonie) par m³ d'air a été comptabilisé. De plus, l'ADN bactérien total a été quantifié à l'aide de la PCR quantitative et une évaluation de la biodiversité à été faite à l'aide d'une PCR DGGE (Électrophorèse sur gel en gradient dénaturant). L'identification des principales espèces bactériennes a été effectuée grâce à l'étude détaillée des bandes observées sur le gel. Ainsi, la composition des bioaérosols présents dans l'air des stations de traitement des eaux usées a pu être déterminée. Du coté bactérien, une station présente des charges de plus de 103 UFC par m³ dans différents sites, ce qui dépasse les recommandations en terme d'exposition. Deux types de DGGE ont été effectués, ainsi nous avons pu identifier environ 60 espèces bactériennes différentes. Des agents allergènes, inflammatoires et potentiellement infectieux ont été retrouvés tel que C. botulinum, P. aeruginosa et un nombre important de bactérie à Gram- possédant des endotoxines membranaires. Nous sommes donc en mesure de documenter les risques potentiels pour les travailleurs dans ce milieu.

## 63

### IDENTIFICATION D'UNE PROTÉINE PRÉSENTE DANS L'ENROBAGE DES BACTÉRIES PAR LES PROTOZOAIRES, UN PROCESSUS POTENTIELLEMENT IMPLIQUÉ DANS LA SURVIE DE PATHOGÈNES RESPIRATOIRES DANS L'ENVIRONNEMENT

A Sedighi, VE Paquet, G Filion, SJ Charette
Institut de biologie intégrative et des systèmes, Université Laval,
Québec et Centre de recherche de l'Institut universitaire de
cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

Plusieurs protozoaires, dont les amibes, ont été identifiés comme un rése-
voir naturel pour les bactéries pathogènes des voies respiratoires telles que
Legionella pneumophila et les mycobactéries. Les protozoaires ingurgitent
ces bactéries et les enrobent dans des multicouches de produits protéo-lip-
idiques avant de les exocytées dans le milieu. L'enrobage, aussi appelé
vésicule extracellulaire, offre une protection à ces bactéries contre les trait-
ements par biocides. Le mécanisme de formation de l'enrobage est inconnu.
Dans le présent projet, nous utilisons l'amibe Dictyostelium discoideum
comme modèle pour étudier l'enrobage bactérien par les protozoaires. Par
une analyse en immunofluorescence, nous avons découvert que l'antigène
reconnu par l'anticorps H36, qui est normalement associé aux membranes
de l'amibe, est aussi présent sur les vésicules extracellulaires. Pour identifier
l'antigène reconnu par l'anticorps H36, une immunoprécipitation a été

effectuée sur un lysat de cellules d'amibes et a été séparée par SDS-PAGE.
La bande correspondant à la protéine spécifiquement reconnue par
l'anticorps a été excisée et identifiée par spectrométrie de masse. L'analyse
des résultats de spectrométrie de masse montre que la protéine identifiée
par l'anticorps H36 est la Cysteine Proteinase 7 aussi nommée cprG. Il
s'agit d'une glycoprotéine de 47 kDa, entre autres, associée aux lysosomes
de la voie phagocytique. Cette protéine possède aussi un peptide signal et
sa structure quaternaire implique des ponts disulfures. La poursuite de cette
'étude permettra de produire un marqueur utile pour l'observation et la
caractérisation du processus enrobage bactérien et pour évaluer son impor-
tance dans la virulence et la propagation des bactéries pathogènes des voies
respiratoires.

## 64

### LES INFECTIONS VIRALES ET L'APOPTOSE POST-GREFFE PULMONAIRE: RÔLE DANS LE DÉVELOPPEMENT DE LA BRONCHIOLITE OBLITÉRANTE

E O'Carroll, S Ptaszynski, S Al Mot, C Poirier, C Bergeron CRCHUM et Programme de transplantation pulmonaire du Québec, HND-CHUM, QC

Le syndrome de bronchiolite oblitrante (SBO) est la première cause de mortalité chez les receveurs de greffe pulmonaire et est caractérisée par une inflammation neutrophilique et un remodelage prédominant au niveau des bronchioles. Les infections à cytomégalovirus (CMV) sont des facteurs de risque probables pour la SBO. Les infections virales peuvent induire l'apoptose des cellules structurales bronchiolaires. Nous proposons que l'apoptose bronchiolaire déclenche la protéolyse de la matrice extracellulaire et la libération de médiateurs, favorisant le développement du SBO par la stimulation de la prolifération, du remodelage et de l'inflammation. L'objectif de ce projet est de quantifier la présence de médiateurs solubles d'apoptose, soit GZB, Fas, FasL, perforine et TNF-α dans les surnageants des lavages bronchoalvéolaires (LBA) de receveurs de greffe pulmonaire et de les corrèler avec les infections virales. 68 LBA provenant de 45 sujets de 1 à 308 semaines post-transplantation ont été analysés par la technique ELISA. Les niveaux de perforine et de GZB(rp:0.73), ainsi que ceux de FasL et Fas(rp:0.43), corrèlent positivement. De plus, le TNF-α corrèle positivement avec tous les autres marqueurs d'apoptose. L'intensité des marqueurs d'apoptose est fonction du niveau de neutrophile présent dans le LBA. Les concentrations de Fas (p=0,000017), FasL(p=0,015), et perforine (p=0,012) sont significativement plus élevés chez les patients infectés par le CMV que les patients sains. Nous n'avons pas observé de différence entre les receveurs ayant évolués vers la SBO et les receveurs sans SBO, toutefois, certains receveurs avec SBO présentent simultanément des niveaux élevés des médiateurs suivants: FasL, GZB et perforine. Les résultats sont compatibles avec le rôle des infections virales comme éléments déclencheurs de l'apoptose, celle-ci contribuant à une inflammation neutrophilique connue comme étant potentiellement importante dans le remodelage excessif associé à la SBO.

## 65

### MECHANISMS INVOLVED IN CD154 SHEDDING
N BENS Limane, H Alturaahi, D Diallo, G Hassan, W Mourad CRCHUM, Montreal, QC

CD154, is a type II transmembrane protein that belongs to the tumor necrosis factor superfamily. Multiple studies highlighted the importance of CD154 interaction with its classical receptor CD40 in the pathology of several inflammatory diseases where levels of both membrane-bound and soluble CD154 were found to be upregulated. The shedding of CD154 resulting in the release of the soluble form of CD154 plays a key role in the production of pro-inflammatory cytokines which in turn amplifies the inflammatory responses. Therefore, elucidating the mechanisms responsible for the release of sCD154 is of primordial importance. The aim of the present study is to investigate the process by which CD154 is shed following its interaction with CD40 and whether, this process is maintained following the interaction of CD154 with other receptors such as αIIbβ3, α5β1 and Mac-1. To address this issue, we generated cells stably transfected with CD154wt, CD154 truncated (depleted of its cytoplasmic domain),
CD40wt, or CD40 truncated. By co-culturing these cells, our results show that CD154 shedding is dependent on signals initiated by CD40 as well as by CD154 itself. To investigate the signal triggered via CD154 that is involved in its shedding, CD154-transfected cells were treated with dimeric (sdCD40) or monomeric (smCD40) forms of CD40. Our results show that engagement of CD154 with sdCD40 leads to CD154 shedding whereas smCD40 failed to induce CD154 shedding. However, stimulation of cells expressing CD154 with both forms of CD40 induces MAP kinase activation. We have also evidence to indicate that ectodomain shedding of CD154 is not lipid raft-associated event. We conclude from these experiments that optimal CD154 shedding requires an aberrant signal that is independent of lipid rafts integrity and MAP kinase activation. Studies are currently in progress and aim at further determining whether the newly identified receptors have the same capacity in triggering CD154 shedding.

# 66 CD40 HOMODIMER FORMATION: MECHANISMS INVOLVED AND BIOLOGICAL OUTCOMES.

M Jundi, A Nadiri, L Al-Zoobi, W Mourad
Department of Microbiology and Immunology, Centre hospitalier de l'Université Montréal, Montréal, QC

**BACKGROUND:** CD40, a member of the tumour necrosis factor receptor family, plays a major role in the immune response. It is well established that CD40, and its major ligand CD154 are implicated in autoimmune and inflammatory diseases. Blockade of CD40/CD154 interactions inhibited many autoimmune processes. The formation of CD40 homodimers was shown to be essential for specific signaling pathways such as the PI3-kinase pathway. However, the mechanisms upstream of the CD40 dimerization and their impact on the autoimmune and inflammatory pathogenesis are still under investigation.

**PURPOSE:** In this study, we tried to elucidate the mechanisms involved in the formation of CD40 homodimers and the consequence of such dimerization on the biological responses.

**METHODS:** In our approach, we used different cell lines ectopically expressing wild type CD40 or different CD40 mutants, where the binding of CD40 to the adaptor proteins was abolished. We also used gene microarray assay in order to screen for different signalling pathways that require the formation of CD40 homodimers. Our results show that CD40 homodimer formation is reduced when we used the hCD40-P207A mutant which abolished the CD40-Jak3 association. The microarray result suggest that the TRAF6/MyD88 are up-regulated following CD40 homodimerization.

**SUMMARY:** Our results demonstrate that the CD40 homodimer formation requires Jak3 recruitment. In addition, disulfide bond-CD40 homodimers affect the TRAF6/MyD88 pathway which is linked to inflammatory response. Our future aim is to further investigate the mechanisms implicated in the formation of the CD40 homodimer and its role in the inflammatory response.

# 67 L'ÉOTAXINE-3 MODULE LA MIGRATION DES ÉOSINOPHILES HUMAINS DIFFÉREMENT DES ÉOTAXINES

## 1 ET 2

Véronique Provost¹, A Langlois¹, M Rola-Pleszczynski², N Flamand¹, M Laviolette¹

¹Centre de recherche de l'IUCPQ et Faculté de médecine, Université Laval, Sainte-Foy; ²Unité d'immunologie, Département de pédiatrie et Faculté de Médecine, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, QC

**INTRODUCTION** : Une importante infiltration d'éosinophiles est observée dans la muqueuse bronchique des sujets asthmatiques. Les chimiques éotaxine-1, -2 et -3 sont de puissants facteurs chimiotactiques pour l'éosinophile et activent le même récepteur, le CCR3. L'objectif de ce projet est de comparer simultanément l'impact des éotaxines sur l'activation des éosinophiles. Méthodes : Les éosinophiles ont été isolés du sang de volontaires sains et asthmatiques. Les migrations ont été induites par l'éotaxine-1, -2 et -3. Résultats : Les éotaxines induisent la migration des éosinophiles avec une efficacité et une puissance différente. Les

expériences de cinétique suggèrent que les migrations induites par l'éotaxine-1 et -2 sont similaires et qu'elles atteignent une réponse maximale après 9h d'incubation. Par ailleurs, on note la présence d'un plateau entre 9h et 12h lorsque les migrations sont induites par l'éotaxine-3 et cette réponse devient maximale après 18h. De plus, la neutralisation du récepteur CCR3 montre que les migrations induites par les éotaxines 1 et 2 sont exclusivement médiées par ce récepteur, alors que celles induites par l'éotaxine-3 sont partiellement dépendantes. Une analyse plus approfondie de la migration induite par l'éotaxine-3 montre que la première phase (entre 0 et 9h) est complètement dépendante du CCR3 alors que la seconde phase (entre 9h et 18h) est indépendante du CCR3. Finalement, les éosinophiles de sujets asthmatiques répondent davantage à l'éotaxine-3 que les éosinophiles des sujets sains. Conclusion: Nos résultats montrent que les éotaxines induisent différemment la migration des éosinophiles. En effet, la migration induite par l'éotaxine-3 est biphasique et partiellement dépendant du CCR3, suggérant ainsi l'activation d'un récepteur autre que le CCR3. L'implication de ce récepteur dans la migration induite à l'éotaxine-3 pourrait expliquer l'efficacité supérieure de cette chimiochine.

# 68 EFFETS IN VITRO ET IN VIVO SUR L'APPAREIL RESPIRATOIRE DES NANOTUBES DE CARBONE ENROBÉS PAR DIFFÉRENTS POLYMÈRES

L Tabet¹,², C Bussy², A Setyan³, H Desqueyroux⁴, M J Rossi³, J Boczkowski², S Lanone²

¹Centre de recherche HSCM, Université de Montréal, Montréal, QC; ²INSERM U955, Créteil; ³IST, Lausanne, Swaziland; ⁴ADEME, Angers, France

Les nanotubes de carbone (NTC), sont des nanoparticules (diamètre inférieur à 100 nm) dont les propriétés physicochimiques impliquent leur utilisation dans plusieurs domaines. Ainsi, des recherches approfondies sont nécessaires pour définir leur risque potentiel sur la santé respiratoire humaine. L'objectif de cette étude est d'évaluer le rôle de la réactivité de surface dans la toxicité pulmonaire des NTC, après exposition de macrophages murins ou de souris. Nous avons utilisé des NTC (ARKEMA) : non enrobés (NTC1) et enrobés avec 2 polymères différents: le polyacide carboxylique (NTC2) ou à base de polystyrène (NTC3). L'incubation des cellules avec les NTC1 et NTC2 induit une diminution similaire de l'activité métabolique alors que les NTC3 n'ont aucun effet. L'expression de l'ARNm de l'HO-1 et de MIP-2, gène antioxydant et pro-inflamatoire respectivement, est augmentée seulement dans les cellules exposées aux NTC1 ou NTC2 versus les cellules témoins. Cependant, la microscopie électronique à transmission montre une internalisation de tous les NTC. Chez la souris exposée, l'analyse de la cellularité du LBA montre que le NTC2 entraîne une augmentation importante de neutrophiles et de macrophages, cette réponse est moindre pour le NTC1 et absente pour le NTC3. L'étude histopathologique montre la présence d'agglomérats micro-métriques au niveau des bronches distales et des parois alvéolaires, la taille de ces agglomérats étant NTC1=NTC2>NTC3. Aucune lésion de fibrose n'a pu être observée. L'expression de l'ARNm de gènes impliqués dans le stress oxydant (SOD-2 et HO-1), l'inflammation (TNF-α et MIP-2) et la fibrose (α-collagène-1 et -3) est augmentée uniquement en réponse aux NTC2. En conclusion, les NTC2 ont des effets oxydatifs et inflammatoires similaires à ceux des NTC1. En revanche, les NTC enrobés avec le polystyrène n'induisent aucun effet. Ce type de revêtement permettrait de diminuer le risque de toxicité des NTC lors d'une exposition à ces nanoparticules.

# 69 THE ROLE OF CD44/MMP-9 AND EGFR IN T CELL MEDIATED AIRWAY SMOOTH MUSCLE PROLIFERATION

S Al Heialy, P-A Risse, K Tsuchiya, S Siddiqui, D Ramos-Barbon, JG Martin

Meakins-Christie Laboratories, McGill University, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Airway smooth muscle (ASM) growth is a major feature of airway remodeling in asthma and has been associated with lymphocyte infiltration. Our previous studies have shown that CD4+ T cells
induce ASM cell (ASMC) proliferation. CD44 and integrins mediate this interaction. Moreover, asthmatic ASMC show an up-regulation of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and MMP-9. In vitro, CD4+ T cells may express amphiregulin (Areg), an EGFR ligand. Taken together, we hypothesized that CD4+ T cells induce ASMC proliferation via EGFR and CD44 which co-localizes with MMP-9 to release soluble EGFR ligands.

**METHODS:** Ovalbumine (OVA)-stimulated CD4+ T cells were isolated by immunomagnetic negative selection from lymph nodes of OVA-sensitized rats and were co-cultured in direct contact with ASMC for 48h. Various inhibitors were added to the co-culture medium: AG1478 (EGFR inhibitor), MMP-9 inhibitor, CD44 and HB-EGF neutralizing antibodies. ASMC proliferation was assessed by bromodeoxyuridine incorporation. EGFR phosphorylation was assessed by immunocytochemistry. Real-time polymerase chain reaction was used to evaluate mRNA expression of EGFR ligands. MMP-9 activity was confirmed by zymography. Confocal microscopy was used to study the co-localization of CD44 and MMP-9.

**RESULTS:** OVA-stimulated CD4+ T cells induce ASMC proliferation (56.43±6.31%) and EGFR phosphorylation. AG1478 inhibits ASMC proliferation (32.71±3.62%) and EGFR phosphorylation. Heparin-binding epidermal growth factor and transforming growth factor-α expression (EGFR ligands) is up-regulated in OVA-stimulated CD4+ T cells upon co-culture. Zymography revealed MMP-9 activity. The various inhibitors used inhibited CD4+ T cell mediated ASMC proliferation. MMP-9 and CD44 co-localized on CD4+ T cells upon co-culture.

**CONCLUSION:** This novel mechanism provides insight into the T cell mediated mechanism of ASMC proliferation.

## 70 MOLECULAR, CELLULAR, AND MUSCLE STRIP MECHANICS OF THE MDX MOUSE DIAPHRAGM

G Bates, S Sigurdadottir, L Kachmar, N Zitouni, B Petrof, D Rassier, A-M Lauzon

Meakins-Christie Laboratories; Department of Kinesiology, McGill University, Montreal, QC

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an inherited disorder caused by defects in the dystrophin gene which lead to respiratory or cardiac muscle failure. This lack of dystrophin predisposes muscle cell membranes to mechanical damage. However, the role of myosin in this muscle weakness has been poorly addressed. Coirault (2002) reported a lower velocity of actin propulsion (umax) by myosin from 9 month old mdx mice (model of DMD) in the in vitro motility assay. In our study, we measured umax and force production of myosin molecules purified from 3 month old control and mdx mouse (C57BL/10) diaphragms. At this age, muscle strip level force is known to be impaired (Petrof 1993). We also assessed the mechanics of single control and mdx diaphragm muscle fibers. Muscle strip level stress was measured using the Aurora Dual Mode Lever System (‡300B-LR). Single muscle fiber stress was assessed with a force-redevelopment protocol using a force transducer (‡403A) and a length controller (‡312B). Actin was purified from chicken pectoralis and fluorescently labelled with TRITC phalloidin. Myosin heavy chain (MHC) isoform expression was assessed using SDS-PAGE. umax was measured in the in vitro motility assay and myosin molecule force generation was assessed using a mixture assay. Muscle strip level stress was statistically smaller for mdx (0.23kg/cm²±0.11; mean±SE) than control (0.69kg/cm²±0.01) whereas the MHC isoform composition was not statistically different (type I: p=0.423, type Ila/IIx: p=0.804, type IIb: p=0.401). Single fiber stress was not statistically different between control (25.89mN/mm²±2.0) and mdx (21.08mN/mm²±1.59, p=0.828). umax of mdx myosin (1.24µm/s±0.07) was not statistically different from control myosin (1.37µm/s±0.12; p=0.353). Relative myosin force was not statistically different between control and mdx myosin (p=0.932). These results suggest that myosin dysfunction does not underlie the weakness of the mdx mouse diaphragm.

## 71 IL-17A AND F INDUCE CXCL-1 AND 2 CHEMOKINES PRODUCTION FROM HUMAN AIRWAY SMOOTH MUSCLE CELLS

L Al-Alwan, Y Chang, P-A Risse, C. Baglole, JG Martin, DH

Eidelman, Q Hamid

Meakins-Christie Laboratories, McGill University, Montreal, QC

**RATIONALE:** Airway smooth muscle cells (ASMCs) were shown to play an important role in modulating the inflammatory response in asthma. These cells can produce a variety of chemokines as well as express receptors for cytokines including the newly described IL-17A and F cytokines. IL-17 was shown to be up-regulated in severe asthma and suggested to contribute to the disease pathogenesis. In this study we examined IL-17A and F effect on ASM activation by exploring chemokine production.

**METHODS:** Isolated primary human ASMCs from non-asthmatic subjects were seeded in 6-well plates and then treated with different concentrations (0.2 to 200ng/ml) of IL-17A, IL-17F or IL-17A/F. Supernatants were collected after 24h incubation period. Then, ASMCs were washed with PBS and further incubated with a starvation medium for another 24h before collecting a second set of supernatants. Supernatants from both time points (24h and 48h/wash) were used to investigate the chemokine production profile using a membrane-based chemokine array. Chemokines with greater than 2-fold production, compared to non-stimulated control supernatants, were further quantified by ELISA.

**RESULTS:** Our results showed that GRO-alpha (CXCL1) and GRO-beta (CXCL2) were among the highest produced chemokines. These chemokines were induced in a dose dependent manner in response to IL-17A, F and IL-17A/F. It was interesting to demonstrate that the effect of IL-17A was continuous at 48h following a complete wash of the cytokine at 24h time point. However, IL-17F effect was significantly abolished at 48h following the washing step.

**CONCLUSION:** Our results showed that IL-17A, IL-17F and IL-17A/F could activate ASMCs and consequently induce CXCL1 and 2 chemokine syntheses in a dose dependent manner. These results suggest that IL-17 interaction with ASMCs could derive the production of a specific profile of chemokines and that this interaction may play a role in the pathogenesis of asthma.

## 72 INTERACTION ENTRE LE RÉCEPTEUR NEUROKININE-1 (NK1R) ET LE FCERI: RÔLE DE LA KINASE SYK

M Welman, K. Jizi, et K Maghni

Centre de Recherche de l'Hôpital du Sacré-Coeur, Laboratoire de Neuroimmunologie, Université de Montréal, Montréal, QC

Une thérapie plus ciblée pour le contrôle des symptômes de l'allergie nécessaire une meilleure compréhension de ses mécanismes moléculaires. Les cellules basophiliques RBL-2H3 (RBL) sont le modèle de référence pour l'étude du récepteur de haute affinité des IgEs, FceRI. Nous avons récemment montré que (1) les RBL exprimant la substance P (SP) et son récepteur, le NK1R, que (2) l'expression du NK1R augmente suite à la liaison de l'IgE au FceRI et que (3) l'agrégation du complexe IgE-FceRI induit l'activation autocrine du NK1R qui en retour amplifie la réponse du FceRI (e.g. la dégranulation). Toutefois, les mécanismes moléculaires régulant l'interaction entre le système tachykinergique SP/NK1R et le FceRI ne sont pas connus.

**HYPOTHÈSE:** Syk, un élément proximal de la voie de signalisation du FceRI, est impliquée dans la régulation des processus moléculaires (2) et (3) décrits ci-dessus.

**OBJECTIF:** Démontrer l'importance de Syk dans ces processus moléculaires.

**MÉTHODE:** Une lignée stable de RBL exprimant le NK1R conjugué à la protéine fluorescente eGFP (NK1R-eGFP) a été établie. Le niveau d'expression du NK1R-eGFP suite à l'incubation des IgEs, en présence ou non de l'inhibiteur spécifique de Syk (BAY61-3606; 250 nM), a été mesuré par cytométrie en flux. Le niveau d'internalisation du NK1R-eGFP suite à l'agrégation du complexe IgE-FceRI a été déterminé par microscopie confocale.
**RÉSULTATS:** L'analyse cytométrique a indiqué que l'augmentation de l'expression du NK1R par la liaison de l'IgE au FceRI est réduite lors de l'inhibition de Syk. De plus, l'analyse par microscopie confocale a montré que l'internalisation du NK1R-eGFP, suite à l'agrégation du complexe IgE-FceRI, est dépendante de Syk.

**CONCLUSION:** Notre étude démontre un nouveau rôle de Syk comme régulateur de l'interaction entre le système SP/NK1R et le FceRI afin de contrôler à la fois l'expression du NK1R, et son activation autocrine responsable de l'amplification de la réponse allergique.

*Supporté par: IRSC*

## 73
### IL-33 AS AN INFLAMMATORY MEDIATOR IN CYSTIC FIBROSIS LUNG DISEASE

R Farías, L Roussel, S Rousseau

Meakins Christie Laboratories, Université McGill, Montréal, QC

During the course of cystic fibrosis (CF) lung disease, chronic infections lead to an imbalance favoring pro-inflammatory signals that result in excessive neutrophil recruitment to the airways. During exacerbations, tissue injury and destruction may significantly worsen inflammation based upon the way a cell dies. Death by apoptosis is normally linked with tolerance, whereas death by necrosis will release factors driving inflammation. IL-33, a recently identified member of the IL-1 family, is among these pro-inflammatory mediators. It is a potent inducer of pro-inflammatory cytokines by mast cells, it stimulates eosinophils to produce CXCL8 and superoxide and it promotes chemotaxis and survival of neutrophils. Contrary to most other cytokines, IL-33 is not actively secreted but it is released after cellular necrosis. Upon apoptosis, IL-33 is cleaved by caspase 7, rendering it inactive. Therefore only during necrosis but not apoptosis is IL-33 released in an active fashion. Studies done in our group show a marked increase in nuclear staining of IL-33 in airway epithelial cells of explanted CF lungs compared to non-CF lungs. This was further supported by data showing that CFTRΔF508 airway epithelial cells but not their wild type counterpart responded to the presence of *Pseudomonas aeruginosa* (a bacteria present in 70% of CF patients) through up-regulation of IL-33 mRNA.

Our results have also shown that exposure of airway epithelial cells expressing CFTRΔF508 mutation to *Pseudomonas aeruginosa* filtrates leads to IL-33 gene upregulation and cytokine release. Preliminary data also show that CFTRΔF508 airway epithelial cells are more prone to die by necrosis as compared to airway epithelial cells without the mutation. These findings suggest that IL-33 could play an important role in the inflammatory response during CF exacerbations.

## 74
### RELATION ENTRE L'IMC ET LA PRÉSENCE D'HYPEREXCITABILITÉ BRONCHIQUE

M-P Hogan, H Guezzo, J L'Archevêque, G Moullec, M Labrecque
Hôpital du Sacré-Coeur, Montréal, QC

L'obésité et l'asthme présentent une augmentation concomitante de leur prévalence suggérant une association entre ces deux conditions. Il a été démontré que les obèses ont une augmentation de la sévérité de l'asthme, un pauvre contrôle de l'asthme et une diminution de la qualité de vie. La présence de l'obésité en elle-même est associée à une augmentation des symptômes respiratoires et peut confondre avec la clinique d'un asthme. Nous avons donc étudié la relation existant entre une symptomatologie suggestive d'asthme et la présence d'hyperexcitabilité bronchique chez l'obèse, tout en proposant qu'il existe une relation inversement proportionnelle entre l'IMC et la présence d'hyperexcitabilité bronchique. Méthodologie Nous avons procédé à une étude rétrospective à partir des données accumulées au laboratoire de physiologie respiratoire de l'hôpital du Sacré-Coeur. Les patients inclus étaient référés pour provocation bronchique non-spécifique à la méthacholine, présentaient des symptômes compatibles avec un asthme et étaient âgés de > 18 ans. Résultats Un total de 17 195 patients a été inclus, 5 623 (32.7 %) présentaient une CP20 inférieur à 8 mg/ml. Une association significative a été démontrée entre la réactivité bronchique et les différentes classes d'obésité. En effet, le «odds

ratio» augmente de 1,15 [IC de 95 % : 1,04-1,26] pour un IMC de 30-35 mg/kg² à 1,46 [IC de 95 % : 1,20-1,77] pour un IMC de 40-45 mg/kg². Le risque est d'autant plus important avec l'augmentation du poids. Lorsque l'on compare le risque en fonction du sexe, on remarque que le risque est plus précoce chez la femme soit à partir d'un IMC de 30 mg/kg² et chez l'homme à partir d'un IMC de 35 mg/kg². Conclusion Il existe donc une relation entre l'IMC et la réactivité bronchique chez les patients présentant une symptomatologie suggestive d'asthme et cette relation paraît plus précoce chez la femme.

## 75
### APNÉE DU SOMMIEL ET SYNDROME MÉTABOLIQUE

C Drapeau, V Bosshard, L Chaieb, F Sériès

Institut universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

**RATIONNEL** : L'apnée obstructive du sommeil est possiblement associée au syndrome métabolique.

L'objectif de cette étude est d'évaluer l'impact d'un trouble respiratoire relié au sommeil sur les caractéristiques du syndrome métabolique chez les hommes avec obésité abdominale, considérés à haut risque cardio-vasculaire.

**MÉTHODE** : Basé sur les résultats d'un monitoring cardiorespiratoire nocturne à domicile, l'index de désaturation en oxygène (IDO) a été utilisé pour déterminer le statut apnéique en utilisant comme seuil d'IDO 10 évènements/h. Le pourcentage du temps d'enregistrement à une saturation sous 90% (TTE≤SaO₂90%), corrélant avec la sévérité des désaturations, a également été étudié comme variable dépendante. Les mesures indépendantes sont les variables anthropométriques, les marqueurs inflammatoires et marqueurs métaboliques. Tous les résultats ont été ajustés pour les variables confondantes (âge, tabagisme, obésité).

**RÉSULTATS** : Cent douze hommes blancs ont participés à l'étude (âge : 49.8±8.1 ans, IMC: 30.9±3.2 kg/m², circonférence de taille : 108.0±8.6 cm, moyenne±DS). Quarante-cinq de ces 112 sujets (40.2%) ont rencontré le critère d'apnée du sommeil d'IDO avec 9.2±16.2% du TTE≤SaO₂90%. Différentes méthodes statistiques ont été utilisées afin d'évaluer une association entre le statut apnéique et les caractéristiques du syndrome métabolique, sans qu'une corrélation claire et consistante ne puisse être tirée, après correction pour les variables confondantes.

**CONCLUSION** : 1) 40,2% des hommes obèses dyslipidémiques, sans apnée du sommeil diagnostiquée, ont des désaturations nocturnes récurrentes. 2) Les troubles respiratoires reliés au sommeil et la profondeur des désaturations ne semblent pas reliés à la sévérité du syndrome métabolique chez les hommes à haut risque cardio-vasculaire.

## 76
### STATIN-INDUCED INTERSTITIAL LUNG DISEASE (SI-ILD)

N Saad, P Camus, S Suissa, P Ernst

Jewish General Hospital, McGill University, Montreal, QC

**PURPOSE:** In Canada, 12 million statin prescriptions are filled a year. While some side effects are well known (myopathy, liver dysfunctions), statin-induced interstitial lung disease (SI-ILD), is not. In 2008, a review of statin related adverse events reported to the FDA showed that 1 to 40 of every 10 000 reported adverse events were ILD (Fernández et al., Chest 2008;134:824-830).

**OBJECTIVE:** To examine risk of SI-ILD in the Quebec cohort and to estimate the strength of the association.

**METHODS:** Retrospective cohort study (1990-2005) of patients covered by the Quebec government Drug Plan and who filled at least one prescription for a pulmonary medication. The diagnosis of SI-ILD was made using ICD-9 and ICD-10 codes from hospitalisations and physician visits (respirologist or rheumatologist). Two types of cases were identified: probable cases had SI-ILD diagnosis confirmed at a subsequent visit, possible cases had an ILD diagnosis, but no confirmation. Controls were selected from the cohort (matched on age, gender and calendar time). A nested case-control analysis was done to estimate crude odds ratios for exposure to statins (with 95% CI).

**RESULTS:** 665 cases were found and matched to 26 660 controls. The crude rate ratio (RR) for statin use at any point in the 2 years prior to the ILD diagnosis was 1.04 (95%CI: 0.97-1.11). When considering only
probable cases (n=2856), there was also no association (RR 1.01, 95%CI 0.91-1.13).

**CONCLUSION:** Statins were not associated with an increase in risk of ILD in this large Quebec cohort.

## 77
### WHICH LUNG CANCER HISTOLOGIES ARE ASSOCIATED WITH EMPHYSEMA ON COMPUTED TOMOGRAPHY?

B Smith, B Kovacina, J Taylor, G Kasymjanova, K Schwartzman, J Agulnik

McGill University Health Centre & Jewish General Hospital, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Emphysema is associated with increased risk of lung cancer independent of smoking history and airflow obstruction. The specific lung cancer histologies associated with emphysema remain unknown.

**METHODS:** Cross-sectional analysis of consecutive lung cancer cases referred to the pulmonary oncology centre of the Jewish General Hospital was performed (2001-2009). All lung cancer cases with age, sex, smoking history (pack-years), histology and chest CT were included. Emphysema was graded qualitatively on chest CT by three readers (kappa 0.76). Odds of each lung cancer type was determined among patients with and without emphysema and adjusted for age, sex and smoking history by multiple logistic regression.

**RESULTS:** Age, sex, histology, smoking history and CT chest were available in 498 lung cancer patients (mean age 68yrs; 221 [44%] female; 78 [16%] never smokers; 263 [53%] no emphysema on chest CT). The most common histologies were adenocarcinoma (242 [49%]), squamous carcinoma (71 [14%]), undifferentiated carcinoma (48 [10%]) and small cell carcinoma (42 [8%]). Presence of emphysema was associated with increased risk of squamous (OR 3.1 95% CI 1.8-5.3) and small cell (OR 2.1 95% CI 1.1-4.1) histology. However, after adjustment for age, sex and smoking history, emphysema was significantly associated with squamous (OR 2.7 95% CI 1.5-4.9) but not small cell (OR 1.5 (0.77-3.1) histology. A significantly greater proportion of patients with squamous carcinoma had quit smoking ≥10 years prior to diagnosis compared to small cell histology (20% vs 10%, p=0.03).

**CONCLUSIONS:** The odds of squamous carcinoma was significantly increased among lung cancer patients with emphysema after adjusting for smoking history. These findings suggest that squamous carcinoma may be related to the pathologic process of emphysema in addition to the direct carcinogenic effect of smoking. In contrast, any association between small cell and emphysema is likely due to confounding by smoking.

## 78
### SURGICAL LUNG BIOPSY: WHO DOES IT BENEFIT AND WHO DOES IT HARM?

D Umapathy, K Chagnon, G Rakovich

Departments of Respirology and Thoracic surgery, Maisonneuve-Rosemont Hospital, Montreal, QC

**BACKGROUND:** Surgical lung biopsy is the gold standard in the diagnosis of interstitial lung disease. Guidelines state that decisions must be individualized and benefits weighed against the risks of surgery, especially when biopsy can lead to a change in management.

**PURPOSE:** To identify patients who would benefit the most from a surgical biopsy, and those for whom it would be more harmful than beneficial.

**METHODS:** Retrospective study of 87 of the 119 consecutive patients who underwent surgical lung biopsy between November 1993 and January 2009 at Maisonneuve-Rosemont Hospital, either by video-assisted thoracoscopy (VATS) or open lung biopsy (OLB). Exclusion criteria: insufficient data in the first month postoperatively (18), infants (1), both procedures done in the same patient (9). Variables collected for regression analysis: baseline clinical data and the following outcomes post-biopsy: change in treatment, change towards specific diagnosis, perioperative morbidity and hospital mortality.

**RESULTS:** Biopsy led to change in treatment in 59 patients (68%) and change towards a specific diagnosis in 66 patients (76%). Perioperative morbidity and hospital mortality rates were 64 and 18%. Patients

hospitalised on ward or in ICU were more likely to change treatment, with odds ratios of 4.40 95%CI (1.20-16.16) and 5.56 (0.56-55.50). Outpatients were less likely to have perioperative complications OR 0.05 95%CI (0.02-0.15), while ICU admission, mechanical ventilation, and immunosuppression were significant predictors of hospital mortality with OR of 8.21 95%CI (2.47-27.29), 5.46 95%CI (1.69-17.61), and 4.10 95%CI (1.20-13.97) respectively.

**CONCLUSION:** ICU admission, mechanical ventilation, and immunosuppression constitute higher surgical risk factors. Although biopsy is just as likely to lead to a change in management in these patients, it should be considered with caution.

## 79
### SENSIBILITÉ DE LA MARCHE NAVETTE ET DU « STEP TEST » À DÉTECTER UNE AMÉLIORATION DE LA DYSPNÉE SUITE À LA BRONCHODILATATION

F Sava, H Perrault, C Brouillard, C Darauay, J Bourbeau,

A Hamilton, F Maltais

centre de recherche de l'IUCPQ, MUHC Research Centre, Montreal, QC

**INTRODUCTION:** La dyspnée d'effort est difficile à mesurer objectivement. Nous avons développé récemment deux épreuves d'effort à cadence imposée qui permettent de mesurer la dyspnée d'effort en clinique de première ligne (Perrault H, COPD 2009).

**OBJECTIFS:** Cette étude vise à déterminer la capacité de ces deux tests à détecter une amélioration de la dyspnée d'effort suite à une bronchodilatation aiguë chez des patients MPOC.

**MÉTHODES:** Il s'agit d'un devis chassé-croisé à répartition aléatoire, contrôlée par placebo. 40 patients MOPC de stade GOLD II-III on réalisé, lors de jours différents, un test de marche navette de 3 minutes et un « step test » de 3 minutes à cadence imposée pendant lesquels la dyspnée d'effort a été évalué selon l'échelle de Borg. Chaque test était précédé d'une nébulisation d'un placebo ou de 500ug de bromure d'ipratropium (IB). L'ordre des tests et de l'administration du médicament était aléatoire. Les scores de dyspnée ont été recueillis à 0, 1, 2, 2,5 et 3 minutes.

**RÉSULTATS:** 40 patients ont complété l'étude. Le VEMS moyen était de 1,43 ± 0,46 L. L'âge moyen était 64 ± 5 ans. L'IB a induit une bronchodilatation significative (ΔVEMS = 0,19 ± 0,13 L, p < 0,01). Lors du test de marche, mais pas du « step test », il y a eu une diminution significative du score de dyspnée à 2 min (Δ dyspnée = 0,47 ± 1,3, p < 0,05), 2,5 min (Δ dyspnée = 0,84 ± 1,4, p < 0,05) et 3 min (Δ dyspnée = 1,1 ± 0,21, p < 0,05) sous IB par rapport au placebo.

**CONCLUSION:** Le test de marche navette de 3 minutes a permis de détecter l'amélioration de la dyspnée à l'effort suite à une bronchodilatation aiguë chez les patients MPOC. Sous les conditions d'étude actuelles et avec la méthodologie utilisée, des changements de dyspnée d'effort avec la bronchodilatation n'ont pu être observés avec le « step test ». Supporté par une subvention sans restriction de Boehringer Ingelheim et Pfizer.

## 80
### QUANTIFERON IN PRACTICE – EXPERIENCE FROM A CANADIAN CENTRE

M Pozitz, D Fisher

McGill University, Montreal, QC, and University of Calgary, Calgary, Alberta

**INTRODUCTION:** Calgary is a Canadian city of approximately 1 million people. Since 2005, Calgary Tuberculosis Services has adopted the Quantiferon Gold (QFT) test as a means of screening patients at risk of latent tuberculosis infection (LTBI). The QFT was used as a confirmatory test for patients with positive tuberculin skin testing (TST).

**METHODS:** 434 patients underwent QFT testing following a positive TST result for the diagnosis of LTBI from 2005 until 2009. A retrospective chart review documented patient characteristics, reason for referral, subsequent follow up and outcomes of QFT testing.

**RESULTS:** The most common indications for screening were case contact tracing, detection of LTBI prior to initiation of TNF alpha inhibitors, and detection of LTBI prior to transplantation in those with kidney and liver
failure. A tuberculin skin test cut-off of 5 mm was used for positivity in these three groups. The rates of QFT positivity with TST positive were 0.35 for contacts tracing (n=190), 0.32 for TNF alpha inhibitor therapy (n=96), and 0.40 for pretransplant patients (n=43). Results for patients previously vaccinated with BCG were 0.37 (n=146), 0.33 (n=64), and, 0.30 (n=33) respectively. Patients negative for QFT were not offered LTBI prophylaxis. To date, only one patient in either of the immunosuppressed groups has returned after having been QFT negative with active tuberculosis.

**CONCLUSIONS:** This represents a substantial reduction in the number of patients being offered LTBI treatment compared to the practice prior to 2005. Results of QFT testing in BCG vaccinated patients showed little difference in rates of QFT positivity compared to the population at large. The absence of returning patients with active TB is supportive of the safety of this new approach given that all cases of active tuberculosis are assessed and managed by Calgary Tuberculosis Services clinic if patients still resided in Calgary. However, long term studies with more rigorous follow up are required to validate this.

## 81

### L'UTILISATION DU TIOTROPIUM AMÉLIORE L'ENDURANCE À LA MARCHE DES PATIENTS ATTEINTS DE MALADIE PULMONAIRE OBSTRUCTIVE CHRONIQUE.

ME Bédard, C Brouillard, V Pépin, J Milot, Y Lacasse, P Leblanc, F Maltais

Centre de recherche, Institut Universitaire de cardiologie et de pneumologie de Québec, QC

**OBJECTIF:** Évaluer l'effet de 3 semaines de traitement de tiotropium sur la performance à la marche de patients atteints de MPOC.

**MÉTHODE:** Une étude randomisée, contrôlée, à double-aveugle a été réalisée auprès de 34 patients atteints de MPOC (VEMS: 54 ± 11% prédite). Ils ont initialement effectué des tests de fonctions respiratoires (TFR) et une marche navette progressive jusqu'à capacité maximale. Une marche navette d'endurance à une vitesse correspondant à 80% de leur VO2 maximale a été effectuée au cours de 2 à 3 visites subséquentes afin d'établir un temps d'endurance de base reproductible. La visite suivante (V4), les patients étaient randomisés 1:1 au groupe tiotropium 18 µg die ou à un placebo. Des TFR ont été réalisés avant et 2 heures après la dose du médicament d'étude puis une marche navette d'endurance a été effectuée. La même procédure a été appliquée après 3 semaines de traitement lors de V5. Au cours de chaque test à la marche, les paramètres cardiaques et ventilatoires étaient mesurés via un système télémétrique portatif et le niveau de dyspnée était évalué par une échelle de Borg modifiée.

**RÉSULTATS:** Après 3 semaines de traitement, le tiotropium était associé à une amélioration significative du temps d'endurance à la marche (Δ temps d'endurance V5-base; tiotropium: 132 ± 166 s, placebo: 4 ± 111 s, p < 0.01). À V5, les VEMS pré et post-dose étaient plus élevés dans le groupe tiotropium que dans le groupe placebo. La ventilation et le volume courant à la fin de la marche navette d'endurance étaient améliorés de façon significative dans le groupe tiotropium. Le niveau de dyspnée ne s'est pas modifié de façon significative dans les 2 groupes.

**CONCLUSION:** L'utilisation quotidienne de tiotropium pendant 3 semaines a amélioré de façon significative l'endurance à la marche de patients

atteints de MPOC. L'amélioration du VEMS, du volume courant et de la ventilation maximale peuvent contribuer à cette capacité d'effort accrue.

## 82

### LE RÔLE DU REMPLISSAGE AU SALIN DANS L'ÉVALUATION DE L'HYPERTENSION PULMONAIRE CHEZ LES PATIENTS SCLÉRODERMIQUES

A Serban, K Boutet, A Hirsch, M Hudson, M Baron, D Langleben Hôpital Général Juif, Hôpital du Sacré-Cœur, Montreal, QC

**INTRODUCTION :** L'hypertension pulmonaire (HP) est découverte jusqu'au 16% des patients atteints de sclérodermie et elle est la principale cause de décès dans cette population. L'HP chez les sclérodermiques peut être reliée à une cardiopathie gauche, une fibrose pulmonaire, une maladie veino-occlusive ou il s'agit de l'hypertension artérielle pulmonaire (HAP). Le traitement diffère selon l'étiologie. Au cathétérisme cardiaque, la fonction diastolique ventriculaire gauche (DDVG) peut passer inaperçue en fonction des conditions de remplissage du ventricule. Ainsi, les patients peuvent être diagnostiqués à tort comme des HAP, plutôt que des DDVG. Nous émettons l'hypothèse que la prévalence de l'atteinte du cœur gauche, comme étiologie de l'HP chez les patients atteints de sclérodermie, est élevé et que le remplissage au salin (RS) pendant un cathétérisme révéle-rait la DDVG.

**MÉTHODE :** Dix-sept patients consécutifs atteints de sclérodermie, référés pour une pression systolique du ventricule droit (PSVD) > 35 mmHg avec une fraction d'éjection ventriculaire gauche (FEVG) normale sur une échocardiographie et sans fibrose pulmonaire ont été évalués par cathétérisme cardiaque et droite (CCG + CCD). Les valeurs hémodynamiques ont été mesurés au départ et après 500 ml de NaCl 0,9% administrés par voie intraveineuse en 20 minutes (RS). L'HP a été définie comme une PAPmoyenne > 25 mmHg, l'HAP liée à la sclérodermie ayant une PCPB ≤ 15 mmHg à la fois au départ et après RS et l'HP postcapillaire présentant une PCPB > 15 mmHg au départ ou après RS.

**RÉSULTATS :** Quatre-vingt-huit pourcent des patients étaient des femmes et l'âge moyen était de 59 ans. Tous les patients étaient symptomatiques et la plupart étaient en NYHA CF III (15/17 patients). Au départ, le cathétérisme a confirmé l'HP dans 8/17 patients (47%). Cinq de ces 8 patients avaient une PCPB ≤ 15 mmHg au départ mais celle-ci augmentait à > 15 mmHg après RS dans 3 de ces 5 patients. Deux de ces cinq patients avaient une pression de fin diastole du VG (PFDVG) > 15 mmHg, suggérant la DDVG comme cause de l'HP. Chez un autre patient la PFDVG montait à > 15 mmHg après RS. Ainsi, 75% des cas confirmés avaient de l'HP postcapillaire, et auraient été mal diagnostiqués sans RS ou CCG. Dans l'ensemble, 16/17 patients ont eu un cathétérisme anormal, et ont été diagnostiqués avec HAP (2), DDVG (11) et HP postcapillaire avec PCPB anormale et PFDVG normale (3).

**CONCLUSION :** L'HP postcapillaire due à une fonction diastolique du VG est très fréquente chez les patients avec sclérodermie et largement sous-estimée par l'échocardiographie ou CCD sans RS. Cela peut conduire à un traitement inapproprié. Le cathétérisme cardiaque droit et gauche ainsi que RS devraient faire partie de l'évaluation de l'HP dans la population sclérodermique.
AUTHOR INDEX

A

<table><tr><td>Aguulnik, J</td><td>77</td></tr><tr><td>Al Heialy, S</td><td>69</td></tr><tr><td>Al Mot, S</td><td>64</td></tr><tr><td>Al Rabea, A</td><td>46</td></tr><tr><td>Al-Alwan, L</td><td>71</td></tr><tr><td>Albadine, R</td><td>8</td></tr><tr><td>Al-Mot, S</td><td>46</td></tr><tr><td>Alturaihi, H</td><td>65</td></tr><tr><td>Al-Zoobi, L</td><td>66</td></tr><tr><td>Avoine, O</td><td>8</td></tr></table>

B

<table><tr><td>Bacon, S</td><td>48</td></tr><tr><td>Bacon, SL</td><td>20, 21, 35, 50, 55</td></tr><tr><td>Baglole, C</td><td>26, 71</td></tr><tr><td>Bairam, A</td><td>11</td></tr><tr><td>Balghi, H</td><td>39</td></tr><tr><td>Bardou, O</td><td>42</td></tr><tr><td>Baril</td><td>22</td></tr><tr><td>Baril, J</td><td>53</td></tr><tr><td>Baron, M</td><td>82</td></tr><tr><td>Bates, G</td><td>70</td></tr><tr><td>Beaucage, F</td><td>24</td></tr><tr><td>Beauchesne, M-F</td><td>48</td></tr><tr><td>Beaulieu, M-J</td><td>19</td></tr><tr><td>Beck, J</td><td>12</td></tr><tr><td>Bédard, ME</td><td>81</td></tr><tr><td>Benedetti, A</td><td>10</td></tr><tr><td>Benslimane, N</td><td>65</td></tr><tr><td>Bergeron, C</td><td>4, 14, 36, 46, 64</td></tr><tr><td>Bergeron-Prévost, M</td><td>41</td></tr><tr><td>Berthiaume, Y</td><td>28, 37, 42</td></tr><tr><td>Berubé, J</td><td>5</td></tr><tr><td>Bilodeau, C</td><td>40</td></tr><tr><td>Bissonnette, É</td><td>40, 43</td></tr><tr><td>Bissonnette, EY</td><td>14</td></tr><tr><td>Blais, L</td><td>48</td></tr><tr><td>Blanchet, M-R</td><td>17</td></tr><tr><td>Boczkowski, J</td><td>68</td></tr><tr><td>Boivin, G</td><td>59</td></tr><tr><td>Bordessoule, A</td><td>9</td></tr><tr><td>Bosshard, V</td><td>75</td></tr><tr><td>Bouchard, A</td><td>21</td></tr><tr><td>Bouchard, L</td><td>7, 34</td></tr><tr><td>Bouchard, P-A</td><td>58</td></tr><tr><td>Boudreau, LH</td><td>34</td></tr><tr><td>Boudreau, M</td><td>50, 55</td></tr><tr><td>Boulet, L-P</td><td>14</td></tr><tr><td>Bourbeau, J</td><td>53, 79</td></tr><tr><td>Bourbeau</td><td>22</td></tr><tr><td>Bourdages, M</td><td>31</td></tr><tr><td>Bourdon, J</td><td>33</td></tr><tr><td>Boutet, K</td><td>82</td></tr><tr><td>Bouzigon, E</td><td>56</td></tr><tr><td>Brochiero, E</td><td>28, 38, 40, 42</td></tr><tr><td>Brouillard, C</td><td>79, 81</td></tr><tr><td>Bullimore, SR</td><td>10</td></tr><tr><td>Bussy, C</td><td>68</td></tr></table>

C

<table><tr><td>Camus, P</td><td>76</td></tr><tr><td>Cardinal, S</td><td>16</td></tr><tr><td>Caron, M-A</td><td>57</td></tr><tr><td>Cartier, A</td><td>47</td></tr><tr><td>Castano, R</td><td>52</td></tr><tr><td>Castellanos, L</td><td>16</td></tr><tr><td>Chaboillez, S</td><td>18</td></tr><tr><td>Chagnon, K</td><td>78</td></tr><tr><td>Chaieb, L</td><td>75</td></tr><tr><td>Chakir, J</td><td>14</td></tr><tr><td>Chan, T</td><td>49</td></tr><tr><td>Chang, Y</td><td>71</td></tr><tr><td>Chan-Thim, E</td><td>23, 27, 35</td></tr></table>

<table><tr><td>Charette, SJ</td><td>6, 60, 61, 63</td></tr><tr><td>Charlebois, R</td><td>62</td></tr><tr><td>Chartier, S</td><td>1</td></tr><tr><td>Chaturvedi, R</td><td>13</td></tr><tr><td>Chauny, J-M</td><td>21</td></tr><tr><td>Chouinard, F</td><td>7, 34</td></tr><tr><td>Chupin, C</td><td>28</td></tr><tr><td>Cormier, Y</td><td>19</td></tr></table>

D

<table><tr><td>Dagenais, A</td><td>37</td></tr><tr><td>Dallongeville, A</td><td>30</td></tr><tr><td>Danialou, G</td><td>13, 33</td></tr><tr><td>Darauay, C</td><td>79</td></tr><tr><td>De Lorimier, M</td><td>23, 27, 35</td></tr><tr><td>Debigaré, R</td><td>57</td></tr><tr><td>Demenais, F</td><td>56</td></tr><tr><td>Des Rosiers, C</td><td>13</td></tr><tr><td>Desqueyroux, H</td><td>68</td></tr><tr><td>Diaconescu, R</td><td>32</td></tr><tr><td>Diallo, D</td><td>65</td></tr><tr><td>Diep Doan, V</td><td>30</td></tr><tr><td>Dizier, M-H</td><td>56</td></tr><tr><td>Doucet, M</td><td>15</td></tr><tr><td>Drapeau, C</td><td>75</td></tr><tr><td>Dubé, A</td><td>57</td></tr><tr><td>Duchaîne, C</td><td>19, 51, 58, 59, 62</td></tr><tr><td>Dugas, MA</td><td>31</td></tr><tr><td>Dumont, M</td><td>23</td></tr></table>

E

<table><tr><td>Eidelman, D</td><td>26</td></tr><tr><td>Eidelman, DH</td><td>71</td></tr><tr><td>Emeriaud, G</td><td>9</td></tr><tr><td>Émond, V</td><td>15</td></tr><tr><td>Ernst, P</td><td>76</td></tr><tr><td>Evagelidis, A</td><td>39</td></tr></table>

F

<table><tr><td>Farías, R</td><td>73</td></tr><tr><td>Favreau, H</td><td>20</td></tr><tr><td>Filion, G</td><td>6, 63</td></tr><tr><td>Filion, G</td><td>60</td></tr><tr><td>Fink, K</td><td>1</td></tr><tr><td>Fisher, D</td><td>80</td></tr><tr><td>Flamand, L</td><td>7</td></tr><tr><td>Flamand, N</td><td>7, 34, 67</td></tr><tr><td>Forster, R</td><td>19</td></tr><tr><td>Fothergill, JL</td><td>60</td></tr><tr><td>Fruchter, G</td><td>3</td></tr></table>

G

<table><tr><td>Gagné, J-P</td><td>12</td></tr><tr><td>Gagnon, P</td><td>54</td></tr><tr><td>Gauvin, F</td><td>31</td></tr><tr><td>Ghezzo, H</td><td>16</td></tr><tr><td>Girard, D</td><td>25</td></tr><tr><td>Godin, R</td><td>13</td></tr><tr><td>Goepp, J</td><td>39</td></tr><tr><td>Goldberg, P</td><td>13</td></tr><tr><td>Goulet-Dion, S</td><td>24</td></tr><tr><td>Grandvaux, N</td><td>1</td></tr><tr><td>Guezzo, H</td><td>24, 74</td></tr></table>

H

<table><tr><td>Habbal, K</td><td>30</td></tr><tr><td>Hadj-Ahmed, MA</td><td>12</td></tr><tr><td>Hallé, S</td><td>41</td></tr><tr><td>Hamelin, M-È</td><td>59</td></tr><tr><td>Hamid, Q</td><td>14, 26, 71</td></tr><tr><td>Hamilton, A</td><td>79</td></tr><tr><td>Hanrahan, JW</td><td>39</td></tr><tr><td>Hassan, G</td><td>65</td></tr><tr><td>Hichri, O</td><td>11</td></tr></table>

<table><tr><td>Hirsch, A</td><td>82</td></tr><tr><td>Hogan, M-P</td><td>74</td></tr><tr><td>Hudson, M</td><td>82</td></tr><tr><td>Hudson, TJ</td><td>56</td></tr><tr><td>Hussain, S</td><td>13</td></tr></table>

J

<table><tr><td>Jaber, S</td><td>13</td></tr><tr><td>Jacob, A</td><td>50, 55</td></tr><tr><td>Jacob, V</td><td>18</td></tr><tr><td>Jean, S</td><td>7, 34</td></tr><tr><td>Jizi, K</td><td>2, 72</td></tr><tr><td>Jo, T</td><td>44</td></tr><tr><td>Joseph, V</td><td>11, 30</td></tr><tr><td>Joset, J-F L</td><td>43</td></tr><tr><td>Jouvet, P</td><td>9, 31</td></tr><tr><td>Julien, C</td><td>11</td></tr><tr><td>Jundi, M</td><td>66</td></tr></table>

K

<table><tr><td>Kachmar, L</td><td>70</td></tr><tr><td>Kapchinsky, S</td><td>53</td></tr><tr><td>Karpati, G</td><td>13</td></tr><tr><td>Kasymjanova, G</td><td>77</td></tr><tr><td>Kishta, O</td><td>3</td></tr><tr><td>Kovacina, B</td><td>77</td></tr><tr><td>Kukavica-Ibrulj, I</td><td>6, 60</td></tr></table>

L

<table><tr><td>L'Archevêque, J</td><td>24</td></tr><tr><td>Labrecque, M</td><td>20, 21, 24, 47, 52, 74</td></tr><tr><td>Lacasse, Y</td><td>81</td></tr><tr><td>Lafond, C</td><td>32</td></tr><tr><td>Landry, J</td><td>49</td></tr><tr><td>Lands, LC</td><td>3</td></tr><tr><td>Langleben, D</td><td>82</td></tr><tr><td>Langlois, A</td><td>43, 67</td></tr><tr><td>Lanone, S</td><td>68</td></tr><tr><td>Laprise, C</td><td>14, 51, 56</td></tr><tr><td>L'Archevêque, J</td><td>16, 45, 74</td></tr><tr><td>Larrivée, P</td><td>48</td></tr><tr><td>Laurin, C</td><td>50</td></tr><tr><td>Laurin, JC</td><td>11</td></tr><tr><td>Laurin, J</td><td>53</td></tr><tr><td>Lauzon, A-M</td><td>70</td></tr><tr><td>Laviolette, M</td><td>7, 14, 34, 67</td></tr><tr><td>Lavoie, J</td><td>28</td></tr><tr><td>Lavoie, K</td><td>48</td></tr><tr><td>Lavoie, KL</td><td>20, 21, 35, 50, 55</td></tr><tr><td>Lavoie-Lamoureux, A</td><td>44</td></tr><tr><td>Leblanc, P</td><td>81</td></tr><tr><td>Lecours, PB</td><td>19, 62</td></tr><tr><td>Lellouche, F</td><td>58</td></tr><tr><td>Lemaire, C</td><td>33</td></tr><tr><td>Lemière, C</td><td>18, 48</td></tr><tr><td>Lemieux, AA</td><td>6, 60</td></tr><tr><td>Lemire, BB</td><td>57</td></tr><tr><td>LeSimple, P</td><td>39</td></tr><tr><td>Levesque, A</td><td>46</td></tr><tr><td>Levesque, RC</td><td>6, 60</td></tr><tr><td>Li, T</td><td>33</td></tr><tr><td>Liang, F</td><td>13, 33</td></tr><tr><td>Litalien, C</td><td>31</td></tr><tr><td>Lugnier, C</td><td>29</td></tr></table>

M

<table><tr><td>Madore, A-M</td><td>14, 56</td></tr><tr><td>Maghni, K</td><td>2, 14, 16, 41, 72</td></tr><tr><td>Maillé, É</td><td>38, 40</td></tr><tr><td>Mainguy, V</td><td>25</td></tr><tr><td>Malo, JL</td><td>16, 45</td></tr><tr><td>Maltais, F</td><td>25, 54, 57, 79, 81</td></tr><tr><td>Marsolais, D</td><td>19, 43</td></tr><tr><td>Martel, G</td><td>5</td></tr></table>
<table><tr><td>Martin, JG</td><td>10, 44, 69, 71</td></tr><tr><td>Matecki, S</td><td>13</td></tr><tr><td>Menzies, D</td><td>49</td></tr><tr><td>Mériaux, A</td><td>59</td></tr><tr><td>Micheau, P</td><td>8</td></tr><tr><td>Miedinger, D</td><td>18</td></tr><tr><td>Migneault, F</td><td>37</td></tr><tr><td>Milot, J</td><td>25, 54, 81</td></tr><tr><td>Monier, F</td><td>56</td></tr><tr><td>Morin, A</td><td>51</td></tr><tr><td>Morin, C</td><td>29</td></tr><tr><td>Moullec, G</td><td>23, 24, 27, 74</td></tr><tr><td>Mourad, W</td><td>65, 66</td></tr><tr><td>Mukawera, E</td><td>1</td></tr></table>

N

<table><tr><td>Nadigel, J</td><td>26</td></tr><tr><td>Nadiri, A</td><td>66</td></tr><tr><td>Nguyen, S</td><td>52</td></tr></table>

O

<table><tr><td>O'Carroll, E</td><td>64</td></tr><tr><td>Okazaki, T</td><td>33</td></tr><tr><td>Ouellet, K</td><td>21, 55</td></tr></table>

P

<table><tr><td>Paquet, J</td><td>23</td></tr><tr><td>Paquet, VE</td><td>61, 63</td></tr><tr><td>Parenteau, S</td><td>23, 24</td></tr><tr><td>Parisien, B</td><td>4</td></tr><tr><td>Pépin, V</td><td>23, 27, 35, 81</td></tr><tr><td>Perrault, H</td><td>53, 79</td></tr><tr><td>Perrault.</td><td>22</td></tr><tr><td>Petrof, B</td><td>70</td></tr><tr><td>Petrof, BJ</td><td>13, 33</td></tr><tr><td>Picard, M</td><td>13</td></tr><tr><td>Poirier, C</td><td>4, 36, 46, 64</td></tr><tr><td>Poirier, S</td><td>7</td></tr><tr><td>Povitz, M</td><td>80</td></tr></table>

<table><tr><td>Pralong, J</td><td>A 47</td></tr><tr><td>Praud, J-P</td><td>8, 12</td></tr><tr><td>Privé, A</td><td>28, 38, 40, 42</td></tr><tr><td>Provencher, S</td><td>25, 54</td></tr><tr><td>Provost, V</td><td>34, 67</td></tr><tr><td>Ptaszynski, S</td><td>4, 64</td></tr></table>

R

<table><tr><td>Rakovich, G</td><td>78</td></tr><tr><td>Ramos-Barbon, D</td><td>69</td></tr><tr><td>Rassier, D</td><td>70</td></tr><tr><td>Richard.</td><td>22</td></tr><tr><td>Risse, P-A.</td><td>44, 69, 71</td></tr><tr><td>Rizk, A</td><td>23, 27, 35</td></tr><tr><td>Robert, R</td><td>8, 39</td></tr><tr><td>Rochon, M-E</td><td>8</td></tr><tr><td>Rola-Pleszczynski, M</td><td>67</td></tr><tr><td>Rossi, MJ</td><td>68</td></tr><tr><td>Rousseau, E</td><td>29</td></tr><tr><td>Rousseau, S</td><td>5, 73</td></tr><tr><td>Roussel, L</td><td>5, 73</td></tr></table>

S

<table><tr><td>Saad, N.</td><td>76</td></tr><tr><td>Saey, D</td><td>25, 54</td></tr><tr><td>Samson, N</td><td>12</td></tr><tr><td>Sandford, A</td><td>56</td></tr><tr><td>Sava, F</td><td>79</td></tr><tr><td>Schwartzman, K</td><td>77</td></tr><tr><td>Sedighi, A</td><td>61, 63</td></tr><tr><td>Serban, A</td><td>82</td></tr><tr><td>Sériès, F</td><td>75</td></tr><tr><td>Setyan, A</td><td>68</td></tr><tr><td>Shoelson, SE.</td><td>33</td></tr><tr><td>Siddiqui, S</td><td>10, 44, 69</td></tr><tr><td>Sigurdadottir, S</td><td>70</td></tr><tr><td>Smith, B</td><td>77</td></tr><tr><td>Suissa, S</td><td>76</td></tr></table>

T

<table><tr><td>Tabet, L</td><td>68</td></tr><tr><td>Taillefer, M.</td><td>43</td></tr><tr><td>Taivassalo, T</td><td>13, 53</td></tr><tr><td>Taivassalo.</td><td>22</td></tr><tr><td>Tan, SGE</td><td>6</td></tr><tr><td>Tawil, Y</td><td>36</td></tr><tr><td>Taylor, J</td><td>77</td></tr><tr><td>Thériault, M-È.</td><td>57</td></tr><tr><td>Tremblay, C</td><td>18</td></tr><tr><td>Trinh, NTN</td><td>38, 40</td></tr><tr><td>Trutschnigg, B</td><td>23</td></tr><tr><td>Tsuchiya, K.</td><td>10, 44, 69</td></tr><tr><td>Turgeon, N</td><td>58, 59</td></tr></table>

U

<table><tr><td>Umapathy, D</td><td>78</td></tr></table>

V

<table><tr><td>Vaillancourt, VT</td><td>56</td></tr><tr><td>Vandenplas, O</td><td>47</td></tr><tr><td>Veillette, M</td><td>19, 59, 62</td></tr><tr><td>Vieira</td><td>22</td></tr></table>

W

<table><tr><td>Walti, H</td><td>8</td></tr><tr><td>Wardini, R</td><td>23, 27, 35</td></tr><tr><td>Welman, M</td><td>2, 41, 72</td></tr><tr><td>Whittom, R.</td><td>32</td></tr><tr><td>Winstanley, C</td><td>60</td></tr><tr><td>Wohlhuter-Haddad, A.</td><td>39</td></tr></table>

Y

<table><tr><td>Yoboua, F</td><td>1</td></tr><tr><td>Yougbare, I</td><td>29</td></tr></table>

Z

<table><tr><td>Zitouni, N</td><td>70</td></tr></table>
<figure><img src="image_1.png" /></figure>

<figure><img src="image_2.png" /></figure>

<figure><img src="image_3.png" /></figure>

<figure><img src="image_4.png" /></figure>

<figure><img src="image_5.png" /></figure>

<figure><img src="image_6.png" /></figure>

<figure><img src="image_7.png" /></figure>

<figure><img src="image_8.png" /></figure>

<figure><img src="image_9.png" /></figure>

<figure><img src="image_10.png" /></figure>

<figure><img src="image_11.png" /></figure>

<figure><img src="image_12.png" /></figure>

Hindawi

Submit your manuscripts at
http://www.hindawi.com

<figure><img src="image_13.png" /></figure>

<figure><img src="image_14.png" /></figure>

<figure><img src="image_15.png" /></figure>

<figure><img src="image_16.png" /></figure>

<figure><img src="image_17.png" /></figure>

<figure><img src="image_18.png" /></figure>