# Détermination de l'état de viabilité de listeria monocytogènes par microspectroscopie Raman-Dip

Darius L. Abedini, Jonathan Dikec, Sylvain Trigueros, Sabine Debuiche, Olivier Ducloux, Mélanie Gay, Graziella Midelet, Pierre R. Marcoux, Thomas Brauge

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Darius L. Abedini, Jonathan Dikec, Sylvain Trigueros, Sabine Debuiche, Olivier Ducloux, et al. Détermination de l'état de viabilité de listeria monocytogènes par microspectroscopie Raman-Dip. Microbes, Société Française de Microbiologie, Oct 2025, Lille, France. hal-05422893

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Submitted on 18 Dec 2025

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REPUBLIQUE
FRANÇAISE
Liberté
Égalité
Fraternité

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cea

ulco
Université
Littoral Côte d'Opale

UNIVERSITÉ
de Picardie

Julers Verne

# DÉTERMINATION DE L'ÉTAT DE VIABILITÉ DE LISTERIA MONOCYTOGENES PAR MICROSPECTROSCOPIE RAMAN-DIP

Darius Abedini a, b, Jonathan Dikec a, Sylvain Trigueros a, Sabine Debuiche a, Olivier Ducloux c, Mélanie Gay a, Graziella Midelet a, Pierre R. Marcoux b, Thomas Brauge a.

a Anses, Laboratoire de sécurité alimentaire, Unité SANAQUA, F-62200 Boulogne-sur-Mer

b Université Grenoble Alpes, CEA, LETI, F-38000 Grenoble

c CEA Tech en Hauts de France, F-59000 Lille
# Listeria monocytogenes : Responsable de Toxi-Infections alimentaires collectives (TIAC) bactérien

* Pathogène alimentaire majeur

* Bactérie à Gram positive

* Psychrotrophe

* pathogène du genre Listeria provoquant la Listériose (20% de Létalité)

<figure><img src="image_2.png" /></figure>

Observation en microscopie électronique à balayage de cellules de Listeria monocytogenes, Source : https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=2287
# L'état Viable Non Cultivable (VNC)

Viable Cultivable (VC)

<figure><img src="image_3.png" /></figure>

Active
métaboliquement

<figure><img src="image_4.png" /></figure>

<figure><img src="image_5.png" /></figure>

Traitement des surfaces par
des biocides

<figure><img src="image_6.png" /></figure>

Stress

Baisse de l'activité
métabolique

VNC

<figure><img src="image_7.png" /></figure>

Pas d'activité
métabolique

Mort

<figure><img src="image_8.png" /></figure>
## Méthodes de détection

<table><thead><tr><td>Technique</td><td>Sensibilité de la méthode</td><td>Temps d'analyse</td><td>Détection des différents états de viabilité (VNC, mort)</td></tr></thead></table>

*Unité Formant Colonie

**Unité génome
Principe physique du Raman

<figure><img src="image_9.png" /></figure>

Lumière incidente

$\lambda_{\text{laser}}$

<figure><img src="image_10.png" /></figure>

Diffusion Raman

$\lambda_{\text{laser}} \gtrsim \lambda_{\text{diffusée}}$

Diffusion Rayleigh

$\lambda_{\text{laser}} = \lambda_{\text{diffusée}}$

➤ Information de l'empreinte vibratoire caractéristique de l'échantillon au niveau de la **cellule unique**

➤ Pics caractéristiques d'un type de liaison chimique

<figure><img src="image_11.png" /></figure>
# La microspectroscopie Raman-DIP

<figure><img src="image_12.png" /></figure>

Echantillon alimentaire
ou de surface

<figure><img src="image_13.png" /></figure>

Acquisition Raman

<figure><img src="image_14.png" /></figure>

<figure><img src="image_15.png" /></figure>

Spectroscopie

Etat de
viabilité
# Objectif de l'étude : Mise au point de la microspectroscopie Raman-DIP pour la détermination de l'état de viabilité des *Listeria monocytogenes* stressées par un biocide
# Préparation de l'analyse des échantillons

<figure><img src="image_16.png" /></figure>
# Quantification par les méthodes microbiologiques et de biologie moléculaire

<figure><img src="image_17.png" /><figcaption>Quantification des populations de L. monocytogenes Lm1</figcaption></figure>
# Vérification de la mort des bactéries par microscopie à épifluorescence

Microscopie à épifluorescence par coloration Live/DEAD des cellules de L. monocytogenes Lm1

<figure><img src="image_18.png" /><figcaption>Condition contrôle (sans biocide)</figcaption></figure>

<figure><img src="image_19.png" /><figcaption>0,25 % de biocide</figcaption></figure>

<figure><img src="image_20.png" /><figcaption>50% de biocide</figcaption></figure>
# Spectroscopie Raman des cellules marquées

<figure><img src="image_21.png" /><figcaption>Profil de distribution des ratios calculées pour le pic C-D pour les conditions contrôle et en présence de 0,25% de biocide</figcaption></figure>

<figure><img src="image_22.png" /></figure>
# Objectif : Détermination de l'état de viabilité des L. monocytogenes par Microspectroscopie Raman-DIP

<table><thead><tr><th>Concentration en<br>biocide</th><th colspan="2">0% (Contrôle)</th><th colspan="2">0.25%</th><th colspan="2">50%</th></tr></thead><tbody><tr><th>Méthode</th><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td></tr><tr><th>L. monocytogenes<br>Lm1</th><td>~VC</td><td>Vivantes et<br>métaboliqueme<br>nt active</td><td>VNC</td><td>Vivantes et<br>métaboliqueme<br>nt inactive</td><td>Mort</td><td>Pas d'acquisition<br>possible</td></tr></tbody></table>

Résultats similaires pour la souche de référence EGD-e

**Perspective** : Détection de l'état VNC de bactéries pathogènes : Présentation d'une méthode innovante de microspectroscopie Raman couplée à un marquage au deutérium (Raman DIP) → **Poster par Jonathan Dikec**
<figure><img src="image_23.png" /></figure>

<figure><img src="image_24.png" /></figure>

Société Française
de Microbiologie

19E CONGRÈS
NATIONAL DE LA SFM

MICROBES
2024
7-9 octobre
Bienvenue chez les Microbes

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Lille
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anses

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