<figure><img src="image_1.png" /></figure>

# PROCESSUS CIRRHOGÉNE PRÉCANCÉREUX ET HÉPATOME EXPÉRIMENTAL OBTENU PAR LE P-DIMÉTHYLAMINE AZOBENZÉNE (JAUNE DE BEURRE)

ANTONIO CANTERO

MONTRÉAL

## INTRODUCTION

Dans leur ensemble, les résultats des recherches consacrées à la cytogènèse du cancer, imposent certaines conclusions que voici :

1) Des anomalies cellulaires du genre que l'on rencontre fréquemment dans le cancer, aparraissent dans les tissus soumis à l'action des principes cancerigènes, avant l'éclosion tumoreale.

2) La cancerogénèse cellulaire n'est pas un phénomène qui apparaît brusquement, elle s'accomplit par stades progressifs; réaction inflammatoire, hyperplasie, tumeur bénigne et enfin, tumeur maligne.

3) Dans un organe que l'on soumet à l'influence d'un agent cancerigène, la cancerisation ne se produit pas en un point unique mais par foyers multiples.

Les trois constatations ci-dessus s'opposent à la conception mutationniste, dans son sens étroit.

Il vaut mieux admettre que l'agent cancerigène perturbe les ergones cellulaires qui règlent la protéosynthèse et la multiplication des molécules protéiques.

Il est vrai que la loi de l'irréversibilité dans la cancerisation s'accorde avec la conception mutationniste mais celle-ci ne suffit pas et ne peut pas se maintenir intégralement parce que l'administration d'ergones parvient à arrêter la transformation néoplasique.

Cette action inhibitrice apporte un gros argument au concept du déséquilibre ergonal intracellulaire.

De même que l'énergétique cellulaire normale dépend, en grande partie, d'ergones d'origine extra-cellulaire qui s'accumulent dans la cellule, se montrent nécessaires à son métabolisme (acide ascorbique) ou agissent sur certains constituants cellulaires (hormones), des matériaux indispensables à l'édification des ergones cellulaires et des substances non ergonales, de même l'énergétique de la cellule cancéreuse est influencable, d'une manière plus ou mois spécifique.

Cette dépendance de la cellule cancéreuse et du milieu extra-cellulaire apparaît aussi lorsqu'on étudie le tissu cancéreux dans son entier et non plus dans des cellules individuelles.

Aussi, les rapports entre le stroma et les cellules épitheliomateuses, entre les cellules des tumeurs conjonctives et les substances environnantes méritent revision.

Il semble bien que le problème de base en cancérogenèse trouvera sa solution non dans la morphologie des cellules mais dans des influences bio et physico-chimiques. Il faut aussi comprendre pourquoi des cellules à caractére neoplasique n'aboutissent pas à la formation de tumeur sans certaines conditions tissulaires.

Des lésions dites précancéreuses contribueront à démontrer si la cancerisation cellulaire est due à la création
d'une nouvelle lignée de cellules par transformation chimique d'un gène hé- réditaire en un gène à pontentiel néo- plasique ou, au contraire, si la trans- formation cancéreuse ne doit pas être considérée comme le résultat d'un pro- cessus à stades progressifs à partir de l'hyperplasie simple.

Nos expériences personnelles ten- dent à démontrer que les deux théories peuvent se concilier, du fait que l'anoxie cellulaire de même que l'asphyxie tissu- laire s'établit brusquement et détermi- ne des changements nucleaires, tels qu'on les observe au début de la cance- risation.

Le cancer expérimental du foie chez le rat est la conséquence ultime d'une suite d'évènements: 1) Apport au pa- renchyme hépatique en quantité suffi- sante d'un composé doué de propriétés cancérigènes; 2) Perturbation du mé- tabolisme cellulaire; 3) Détoxification (déamination) par les cellules hépati- ques; 4) Transformation des ergones naturelles de la cellule en principes car- cinogènes; 5) Réactions défensives dé- terminées par certaines ergones, hor- mones et vitamines et grâce auxquelles, la cellule même cancéreuse ne jouit pas d'une activité prolifératrice illimi- tée; 6) Enfin, apparition et développe- ment d'une tumeur.

Que l'état néoplasique résulte d'une mutation cellulaire brusque ou d'une évolution progressive, il faudra pour aborder le problème, connaitre toutes les propriétés du tissu normal au voisina- ge du cancer et les comparer au por- tions cancerisées de ce même tissu.

Dans mon laboratoire, à l'Universi- té de Montréal, j'ai étudié les lésions précancéreuses dans le foie de rat sou- mis à des régimes d'une part carencés en vitamines du Complexe B (Ribofla- vine) et en protéines, d'autre part con- tenant un composé cycloazoté dérivé de

l'azobenzène et connu comme fortement cancerigène, le paradiméthylamine azo- benzène encore nommé jaune de beurre.

Tels sont les aspects particuliers du processus cirrhogène et de son in- cluence sur la production du cholan- giome et de l'hépatome malin que je veux tenter de démontrer par les faits expérimentaux ci-dessous.

## Protocole Expérimental

Des rats blancs Wistar, pesant 150 grammes, mâles et femelles, dont l'éle- vage se fait dans mon laboratoire, fu- rent soumis, soit à un régime à base de riz cuit décortiqué ou à un régime synthétique (régime 33) reconnus com- me étant défioint en Riboflavine (Vit. B2).

Le p-dimethylaminobenzène (jaun- ne de beurre) se trouve intégré dans tous les régimes à une concentration de 3 % et constituant 0.06 % du total de la ration. La quantité de jaune de beur- re inclus dans le régime de chaque rat atteint au bout de 100 jours 265 mgrs et le total de jaune de beurre à 300 jours par rat, lorsque les expériences sont terminées, s'élève jusqu' à 470 mgrs. Les régimes synthétiques de base (33 modifié) ou les régimes naturels comme le riz cuit et décortiqué se complètent par extrait ethéré de levure 0,25 %, le- vure de bière total 15 %, cystine 0,5 %, méthionine et Riboflavine 15 %.

L'action inhibitrice que les vitami- nes du Complexe B et les proteines, après 300 jours, exercent sur le cancer hépa- tique expérimental est de 46 % pour l'extrait ethéré de levure, de 100 % pour la levure complète à 15 %, de 86 % pour la caséine et Roboflavine combinées, de 26 % pour Riboflavine seule et de 15 % pour caséine seule.

Les expériences se terminent au 300 ième jour. Les animaux sont immé-
diatement sacrifiés et le relevé de la
transformation tumorale est aussitôt
effectué. A interval de tentre jours, la
biopsie du foie permet l'étude histopa-
tologique et des mesures manométri-
ques du métabolisme cellulaire. Le tissu
hépatique broyé et homogénisé, d'après
la technique décrite par Potter et
Eveljhem ainsi que les coupes de tissu
sont étudiée d'après la méthode de
Warburg.

La détermination de l'0² et la gly-
colyse se fait au moyen de l'appareil de
Warburg à cupule unique. Le milieu
est du Ringer avec 0.2 % de glucose ou
du Krebs-Ringer tamponé au phosphate
à un pH 7.4 — La température est
constante à 3805.

Le cytochrome C, fut préparé de
coeurs de boeuf frais d'après la métho-
de de Keilin et Hartree. Lour la déter-
mination polarographique, une quanti-
té de cytochrome C pur provenant du
stock de Thorell de Stockholm, nous
fut gracieusement mis à notre disposi-
tion par C. Carruthers, du Bernard Free
Skin and Cancer Hospital, de St. Louis.

Le cytochrome C dans le foie, fut
déterminé par la méthode manométri-
que de Stotz, ainsi que par la méthode
polarographique de Carruthers. L'ex-
traction initiale du pigment, se faisant
d'après le procédé de Rosenthal et
Drabkin.

Le dosage de la cystine dans le
serum et le sang total après dénatura-
tion, tel qu'indiqué par Bridcka est dé-
terminé par l'étude de l'onde catalyti-
que au moyen de l'électrode de mercure
(polarographe Herovynsky).

Pour le glycogène dans le foie,
nous avons adopté la micro-modifica-
tion de Somogyi de la méthode Shaeffer
et Termann. L'extraction du glycogène
du tissu hépatique se fait d'après le pro-
cédé préconisé par Higgins et Ander-
son. La détermination de l'acide lacti-
que dans le tissu hépatique se fait en

congelant "in situ" avec l'air liquide
ou bien en tranportant le tissu dans un
broyeur spécial refrigéré à la neige
carbonique. L'appareil de micro-dis-
tillation, de fabrication totalement en
verre de Lenhartz et appliquant la mé-
thode de Winniche, fut rigoureusement
suivi.

L'acide ascorbique fut étudié par
méthode spectrophotometrique, tel que
décrite par Bessy, mais subséquemment,
nous avons apporté les modifications,
tel qu'indiquées par Carruthers.

L'activité de la catalase fut étu-
diée par la méthode de Kuicken & Wu.

Le dosage de la Riboflavine dans le
foie fut déterminé por la méthode fluo-
rophotometrique.

L'apparition du cancer hépatique,
par administration buccale de p-dime-
thylaminozobenzène que nous avons
étudié chez le rat, semble dépendre
effectivement du degré de processus
cirrhogène initial. Cette opinion semble
être à l'encontre de l'opinion d'autres
chercheurs. Les rapports ne sont pas
d'accord à savoir que les modifications
et contrôle du degré d'intensité ou là
prévention même du processus cirrho-
gène, puissent retarder ou diminuer
l'incidence de cancer hépatique. Que se
processus peut être influencé soit par
des régimes carencés en vitamine du
complexe B, ou que la cirrhose hépati-
que se trouve modifiée soit par la cyst-
tine, choline ou méthionine, il n'est
pas quand même vrai, que ces modifi-
cations restent avec peu ou pas d'effet
définitif sur l'incidence du processus de
cholangiome ou d'hépatome. Nous ver-
rons aussi plus loin, comment les corps
aminoacides essentiels, dont l'organisme
ne peut pas assurer la synthèse qui
présente dans sa molécule un atome de
souffre qui intervient dans les réactions
de transsulfuration. En plus son grou-
pement methyle lui confère par sa la-
bilité une importance encore plus grande en faisant un des facteurs essentiels des réactions de transmethylation, ces dernières jouant un rôle primordial dans de nombreuses synthèses du métabolisme intercellulaire (choline, creatinine).

Nous avons noté d'une manière assez générale que des foies ne paraissent présenter un processus cirrhogène révèlent par contre des lésions de cirrhose fort avancée si l'on emproi une technique de colaration spéciale (méthode de Laidlow) mettant en évidence un tissu conjunctif intralobulaire abondant, indice du processus cirrhogène. (Fig. 1, 2 et 3).

<figure><img src="image_2.png" /><figcaption>Fig. 1 — Rat x-10-3-Coloration Laidlow pour Reticulum. Diète: Régime 33 & cystine et jaune de beurre.</figcaption></figure>

Malgré la difficulté à déterminer la cirrhose et d'établir son rôle dans l'incidence du cancer hépatique, nos recherches, nous indiquent que les lésions qui paraissent minimes à l'examen histopathologique, sont par contre des lésions précancéreuses précoces.

Il sera donc d'une importance primordial de pouvoir préciser le stage où

<figure><img src="image_3.png" /><figcaption>Fig. 2 — Rat B. 6 — Cirrhose avancée à 110 jours. Reticulum intralobulaire. Encerclement de cellules hepatiques-cirrhose irreversible. Anoxie cellulaire.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_4.png" /></figure>

<figure><img src="image_5.png" /><figcaption>Fig. 3 — Rat F-3 Regime 33 & cystine & jaune de beurre. Reticulum encerclant ilots du parenchyme hépatique - Stage avancée de cirrhose. Début d'anoxie résultant en asphyxie tissulaire à 120 jours</figcaption></figure>
le processus cirrhogène peut être considéré comme néoplasique et quels sont les caractéristiques tant histologiques que biochimiques de ce processus cirrhogène précancéreux.

### Caractères Histopathologiques du Processus Cirrhogène

Le p-dimethylaminoazobenzène (jaune de beurre) produit après 120 jours par administration buccale, au niveau du foie, une cirrhose que se distingue par un processus hyperplasique, adenomateux et dilatation des canaux biliares (Fig. n.º 4, 5 e 6).

<figure><img src="image_6.png" /></figure>

<figure><img src="image_7.png" /><figcaption>Fig. 4 — Rat 10-6
Fibrose avancée
avec prolifération
adenomateuse et hy-
perplasie des canaux
biliares.</figcaption></figure>

La structure normale se trouve substituée par des noyaux de proliférations parenchymateuses et par des tracés de tissu granuleux. Au point histologique il est impossible de reconnaître

<figure><img src="image_8.png" /><figcaption>Fig. 5 — Cirrhose de 90 jours. Dilatation légère des canaux biliaires. Légère hyperplasie.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_9.png" /><figcaption>Fig. 6 — Rat 303 — Hyperplasie et Adenomatose biliaire. Régime à 120 jours.</figcaption></figure>

à ce processus un caractère néoplasique. La dédifférentiation est fort poussée avec absence d'entassement cellulaire. L'atrophie et la fibrose pro-
gressent. Il n'y a pas de métastases et les greffes dans la chambre antérieure du rat, ou du lapin, restent sans résultat. (fig. 7).

<figure><img src="image_10.png" /><figcaption>Fig. 7 — Rat 2-10 — Dilatation plus marquée des canaux biliaires avec entassement des cellules au début. Adenomatose biliaire avancée — 130 Irreversible-métabolisme cellulaire caractéristique de néoplasie.</figcaption></figure>

Cependant, après 120 ou 150 jours en supprimant du régime l'agent cancerigène, l'incidence du cancer hépatique, cholangiome ou hépatomes malins, est de 89,3% à 300 jours de régime, complété ou non, par la Riboflavin (15%), caseine (15%), Cystine (0,5%), extrait de levure (15%) ou de méthionine (0.5%) reste sans effet sur l'apparition du cancer hépatique.

En supprimant antérieurement à 120 jours le composé cycloazoté du régime, soit avant l'apparition du processus hyperplasique, l'incidence tumorale à 300 jours, est de 2% pour 90 jours et de 5.7% pour 100 jours de régime (tableau n.º 1).

L'époque décisive initiale d'une tumeur hépatique est entre 110 et 120 jours. Au point de vue histologique, à 120 jours ce qui paraît comme un processus bénin, a déjà subi des changements néoplasiques. Le comportement d'un métabolisme cellulaire et d'une enzymatologie similaire pour tissu cancreux, ainsi que l'incidence tumorale a 300 jours en sont la preuve.

<table><caption>TABLE I</caption><thead><tr><th>Durée du Regime en Jours</th><th>Lesions Hepatiques</th><th>Incidence Tumorale a 300 jours.</th></tr></thead><tbody><tr><td>30</td><td>Hepatite Toxique</td><td>0</td></tr><tr><td>60</td><td>Cirrhose au début</td><td>0</td></tr><tr><td>90</td><td>Cirrhose avancée</td><td>2%</td></tr><tr><td>100</td><td>Cirrhose — Fibrose plus intense</td><td>5.7%</td></tr><tr><td>120</td><td>Hyperplasie Adenomateuse Adenofibrose</td><td>37.9%</td></tr><tr><td>130</td><td>Hyperplasie et Prolifération des canaux biliaires, Cholangiofibrose.</td><td>81.4%</td></tr><tr><td>Après 150</td><td>Cholangiome ou Hepatome</td><td>89.3%</td></tr></tbody></table>
<figure><img src="image_11.png" /></figure>

La cirrhose hepatique que présen-
tent les rats à 100 et 110 jours et à 120
jours de régimes est la même. Il y a
légère hyperplasie adenomateuse de
tissu conjonftif fibreux et infiltration
lymphathique. Un régime riche en vi-
tamine du complexe B, et les substances
lipotropiques, peuvent modifier et pré-
venir même le processus cirrhogène. Il
est réversible.

Par contre, ce processus même cir-
rhogène après 120 jours, n'est pas modi-
fiable ni contrôlable par un régime ri-
che en vitamine du complexe B (levu-
re, fcie) et à substances lipotropiques.
Il est irréversible et révèle déjà un ca-
ractère de malignité. (Fig. 8 e 9).

<figure><img src="image_12.png" /><figcaption>Fig. 8 — Rat 1-12 — Hépatite toxique Kystes hemorrhagiques. Peu de tissu fibreux à 40 jours. Régime carencé en complexe B.</figcaption></figure>

Cette cirrhose, en greffon, dans la
chambre antérieur du rat, revèle une
prolifération autonome qui remplit ra-
pidement tout l'espace par un proces-

sus hyperplasique que s'est tranforme
en tissu hépatique malin.

<figure><img src="image_13.png" /><figcaption>Fig. 9 — Rat 1-12 à 120 jours. Hyperplasie ade-
nomateuse biliaire. Stage précancereux d'après
métabolisme cellulaire. Comparez avec Fig. 8.</figcaption></figure>

Métabolisme Cellulaire: Organisation
des Complexes Enzymatiques. Dé-
terminations Manométriques. Mar-
che de l'oxygène.

Les mesures manométriques du mé-
tabolisme cellulaire nous permittent de
reconnaitre les deux processus. Pour
toute utilité pratique, la cirrhose hépa-
tique irréversible et la cirrhose hé-
patique précancéreuse se confondent.
Pouvoir préciser le moment ou les alté-
rations du métabolisme cellulaire appa-
raissent au cours de développement de
la tumeur, et en indiquer leur appari-
tion brusque ou progressive, serait d'im-
portance primordiale dans l'étude des
lésions précancéreuses.

Le métabolisme global dans la cir-
rhose hépatique irréversible indique
déjà les modifications d'un tissu hépa-
tique normal, en voie de cancérisation.
Ces modifications, précédent même de plusieurs jours, les constatations historiques.

L'étude de la combustion oxydative et du quotient respiratoire du tissu hépatique en présence des substrats (succinate et p-phenylendiamine), l'augmentation appréciable de la glycolyse anaerobie dans la cirrhose hépatique précancéreuse, la modification progressive des complexes enzymatiques surtout de l'activité du système au cytochrome (cytochrome C et Cytochrome oxidase et catalase) et la détermination de l'acide ascorbique indiquent que les modifications sont profondes et intérieurement liées à l'énergétique cellulaire qui se transforme en énergétique cellulaire viciée.

Nous constatons qu'une glycolyse anaerobie de 1 à 4.9 et que nous jugons comme dans les limites normales du métabolisme glycolytique de tissu

hépatique, même au stade précancéreux, indique en plus qu'il faudra attacher une plus grande valeur à l'état de capacité glycolytique du tissu hépatique obtenu en présence des substrats (succinate et p-phenylendiamine).

Seules les constatations de la glycolyse anaerobie ne suffisent pas pour juger le processus cirrhogène irréversible, comme étant précancéreux (néoplasique).

La combustion oxydative du tissu hépatique de rats après un régime de 200 jours, carencé en Vitamine B complexe avec p-dimethylaminobenzène, est de 4.8 à 14.1 — Q0².

La glycolyse anaerobie est de 3.3 à 7.1 jusqu'à 120 jours. Après cette période, elle atteint 11.5 à 120 jours et ce taux est maintenu durant toute la phase de cancérisation (apparition de hépatome malin). Voir table II et III.

<caption>TABLE II — OXYGEN CONSUMPTION FOR RAT AFTER FEEDING BUTIER YELLOW AND BASIC DIET WITH OR WITHOUT SUPPLEMENTS DURING 200 DAYS</caption>

Note: Average for 6 manometric readings at 30 day periods.

Days

<table><thead><tr><th>Group N.º</th><th>30</th><th>60</th><th>90</th><th>120</th><th>150</th><th>180</th><th>200</th></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>6.5</td><td>41.1</td><td>5</td><td>5.5</td><td>7.5</td><td>11.7</td><td>13</td></tr><tr><td>2</td><td>9.</td><td></td><td>4.6</td><td>9.4</td><td>7.1</td><td>6.</td><td>11</td></tr><tr><td>3</td><td>7.3</td><td>5.3</td><td>4.8</td><td>4.5</td><td>12.2</td><td>18.6</td><td></td></tr><tr><td>4</td><td>4.8</td><td>6.8</td><td>9.2</td><td>6.2</td><td>7.7</td><td>10.1</td><td>10</td></tr><tr><td>5</td><td>10.1</td><td></td><td>6</td><td>12.8</td><td>9.1</td><td>7.3</td><td>5.7</td></tr><tr><td>6</td><td>6.8</td><td>11.4</td><td>6.2</td><td>8.8</td><td>6.4</td><td>10.2</td><td>14.1</td></tr></tbody></table>

Experiments: one hour — results calculated to dry weight
<figure><img src="image_14.png" /><figcaption>TABLE III — ANAEROBIC GLYCOLYSIS
Days</figcaption></figure>

<table><thead><tr><th>Group N.º</th><th>30</th><th>60</th><th>90</th><th>120</th><th>150</th><th>180</th><th>200</th></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>3.8</td><td>2.1</td><td>1.5</td><td>3.8</td><td>5.7</td><td>4.8</td><td>7.9</td></tr><tr><td>2</td><td>3.1</td><td>1.7</td><td>3.</td><td>7.3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3</td><td>5.4</td><td>2.1</td><td>1.8</td><td>4.1</td><td>6.2</td><td>7.7</td><td>7.2</td></tr><tr><td>4</td><td>2.6</td><td>1.8</td><td>2.5</td><td>7.1</td><td>5.9</td><td>11.5</td><td>10.2</td></tr><tr><td>.5</td><td>3.3</td><td></td><td>2.3</td><td>6.1</td><td>10.1</td><td>9.5</td><td>8.2</td></tr></tbody></table>

La glycolyse anaerobie pour foie cirrhotique régénééré après hépatectomie partielle (75%) se rapproche plûtôt de la glycolyse anerobie pour tissu embryonnaire que de tissu hépatique normal régénééré.

<caption>TABLE IV</caption>

OXYGEN CONSUMPTION & ANAEROBIC GLYCOLYSIS IN REGENERATING (NORMAL RAT) AND REGENERATING CIRRHOTIC (IRREVERSIBLE CIRRHOSIS, FEEDING.)

<table><thead><tr><th colspan="3">REGENERATING NORMAL LIVER</th><th colspan="3">REGENERATING CIRRHOTIC LIVER</th></tr><tr><th colspan="3">Q02 Values Days</th><th colspan="3">Q02 Values Days</th></tr></thead><tbody><tr><td>2</td><td>8</td><td>16</td><td>2</td><td>8</td><td>16</td></tr><tr><td>9.7</td><td>4.5</td><td>5.1</td><td>17.1</td><td>12</td><td>11.9. (Grp.1)</td></tr><tr><td>7.1</td><td>5.4</td><td>5.2</td><td>11.1</td><td>7.4</td><td>8.3 (" 3)</td></tr><tr><td colspan="3"></td><td>13.8</td><td>9.5</td><td>6.3 (" 6)</td></tr><tr><th colspan="3">NORMAL LIVER ANAEROBIC GLYCOLYSIS</th><th colspan="3">CIRRHOTIC LIVER ANAEROBIC GLYCOLYSIS</th></tr><tr><th colspan="3">Days</th><th colspan="3">Days</th></tr><tr><td>2</td><td>8</td><td>16</td><td>2</td><td>8</td><td>16</td></tr><tr><td>2.1</td><td>1.8</td><td>2.7</td><td>10.</td><td>8.9</td><td>8.1</td></tr><tr><td>3.2</td><td>2.1</td><td>2.8</td><td>13.1</td><td>11.8</td><td>9.5</td></tr><tr><td>.7</td><td>1.9</td><td>2.2</td><td>12.5</td><td>9.1</td><td>7.6</td></tr></tbody></table>
Ce rapport élevé de la glycolyse anarobie indique déjà une lésion pré-cancéreuse qui se trouve confirmée lorsque la confrontation avec lhépatome malin se fait par l'examen des résultats et la réponse du système succinodesydrase (en totalité).

Nous avons étudié le système d'enzyme global ainssi que les constituants individuels de ce système, tel que la succinodesydrase, le cytochrome oxydase, le cytochrome C et la catalase (tables V et VI. Ceci nous a permis

breux et divers types de ferment oxydants (desydrases, oxidases, peroxidases, catalases, etc.), agents cofermentaires correspondents; on commence à avoir une vue d'ensemble de leur participation à un mécanisme fondamental commun, celui des oxydations et réductions cellulaires. Nous verrons plus loin (riboflavine et catalase comparée) qu'un autre mécanisme oxydique plus lent est celui des transporteurs d'hydrogène, autoxydables de l'air, du type de la flavine.

Cest à la lumière de ces données que nous avons étudié le métabolisme de la cellule hépatique, en voie de cancérisation (rapport soumis au Conseil National des Recherches, Ottawa).

Le comportement oxydatif en présence des subtrats du succinate de soude ou de p-phenylendiamine entre 120 jours, lors que l'éxamen histopathologique révèle l'hyperplasie nodulaire à hyperplasie adenomateuse avancée, mais pas de néoplasie franche (voir fig. n.º 10) signifie d'après les mesures manométriques cellulaires; le début d'une diminution progressive dans l'activité du système au cytochrome jusqu'au stage de cancer hépatique (vois table IVa).

Nos expériences personnelles démontrent que le tissu hépatique cirrhétique à 120 jours indique qu'il n'y a qu'une légère augmentation dans la glycolyse anaerobie, mais que la poussoie d'oxygène est sensiblement diminuée en présence des subtrats du succinate et de la phenylendiamine.

Si nous acceptons les différences quantitatives qui se font sentir dans la capacité oxydative existant entre le tissu normal et le tissu néoplasique et si nous considérons les effets sur la cinétique enzymatique comme indice de néoformation, la cirrhose qui apparaît à 120 jours au niveau du foie, indiquerait bien un processus précancéreux

<table><caption>TABLE V
CYTOCHROME C CONTENT OF NORMAL RAT LIVER</caption><thead><tr><th>RAT GROUP NO.</th><th>MANOMETRIC POLAROGRAPH</th><th>DIETS</th></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>218</td><td>CHECKERS -FOR CHOW</td></tr><tr><td>2</td><td>220</td><td>COOKED-POLISHED RICE</td></tr><tr><td>3</td><td>283</td><td>DIET 33</td></tr><tr><td>4</td><td>258</td><td>DIET 33 + METHIONINE</td></tr><tr><td>5</td><td>210</td><td>DIET 33 + EVSTINE</td></tr></tbody></table>

<table><caption>TABLE VI
CYTOCHROME C* CONTENT OF RAT LIVER
VITAMIN B COMPLEX DEFICIENT DIET AND AZO DYE AT...</caption><thead><tr><th rowspan="2">GROUP<br>N°</th><th colspan="2">120 DAYS</th><th colspan="2">150 DAYS</th><th colspan="2">200 DAYS</th><th colspan="2">300 DAYS</th></tr><tr><th>HYPERPLASIA</th><th>ADENOMATOSIS</th><th>HYPERPLASIA</th><th>ADENOMATOSIS</th><th>HEPATOMA</th><th>HYPERPLASIA</th><th>HEPATOMA</th><th>HYPERPLASIA</th><th>ADENOMATOSIS</th></tr></thead><tbody><tr><td>1 (RICE)</td><td>160</td><td>185</td><td>87</td><td>102</td><td>27</td><td>26</td><td>22</td><td>28</td></tr><tr><td>2 (RICE)</td><td>181</td><td>120</td><td>91</td><td>77</td><td>21</td><td>29</td><td>31</td><td>20</td></tr><tr><td>3 (DIET 33)</td><td>105</td><td>163</td><td>103</td><td>91</td><td>24</td><td>38</td><td>31</td><td>36</td></tr><tr><td>4 (DIET 33)</td><td>132</td><td>117</td><td>101</td><td>98</td><td>22</td><td>23</td><td>18</td><td>29</td></tr><tr><td>5 (DIET 33)</td><td>215</td><td>183</td><td>100</td><td>110</td><td>39</td><td>45</td><td>27</td><td>24</td></tr></tbody></table>

de nous rendre compte du rôle du fer dans les phénomènes diastasiques et en particulier de l'activité de la catalase et de la peroxydase.

Il existent de multiples mécanismes distincts. Le plus important d'entre eux est le système au fer (cytochrome oxydase). Ce système est le plus efficace, le plus répandu dans les organisations vivant en aerobiose obligatoire; il parait bien constituer le mécanisme oxydasique priviligié.

On commence donc à saisir actuellement une coordination entre de nom-

<footnote>* CYTOCHROME C - IN MG. PER GRAM OF DRIED TISSUE
3 DETERMINATIONS FOR EACH GROUP</footnote>

<footnote>* CYTOCHROME C - MG. PER GRAM OF DRIED TISSUE</footnote>
<figure><img src="image_15.png" /><figcaption>Fig. 10 — Rat 1-10 à 130 jours. Dilatation des canaux biliaires. Entassement cellulaire. Neotype formation au début. Cholangiome.</figcaption></figure>

dont la glycolyse anaerobie élevée qui serait en somme liée à l'intensification de la prolifération cellulaire (adenomatose biliaire, fig. 11) et la combustion oxydative ralentie en présence de succinate et à la paraphenylendiamine à l'épuisement progressif du système au cytochrome (Voir table V et VI).

<figure><img src="image_16.png" /><figcaption>Fig. 11 — Rat 8-6 — Après 60 jours de régime 33. Hépatite toxique. Pychnose.</figcaption></figure>

Il y a une forte présumption qu'entre 110 et 120 jours les résultats biochimiques indiquent déjà la néoformation bien que l'examen histologique afirme la présence d'une cirrhose et non d'un cancer hépatique.

<figure><img src="image_17.png" /><figcaption>Fig. 12 — Rat A-8-6 à 120 jours. Fibrose marquée. Hyperplasie des canaux biliaires. Cirrhose irréversible.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_18.png" /><figcaption>Fig. 13 — Rat A-2-1 à 45 jours. Hépatite toxique.</figcaption></figure>
<figure><img src="image_19.png" /><figcaption>Fig. 14 — Rat B-5 à 165 jours. Cellules épi-
théliales tendant à s'entasser dans les canaux.
Dilatation exagérée et kyste. (Cholangiome).</figcaption></figure>

<figure><img src="image_20.png" /><figcaption>Fig. 17 — Rat 7-6 — Régime carencé. Riz décortiqué, jaune de beurre.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_21.png" /><figcaption>Fig. 15 — Rat A-2-1 à 120 jours. Fibrose avan-
cée. Evolution à formation de canaux biliares
rudimentaires</figcaption></figure>

<figure><img src="image_22.png" /></figure>

<figure><img src="image_23.png" /><figcaption>Fig. 16 — Rat A-2-1 à 150 jours. Canaux biliaires dilatés. Entassements cellulaires. Hyperplasie avec néoformation. Cholangiome au début. Comparer avec fig. 15.</figcaption></figure>
<figure><img src="image_24.png" /></figure>

<figure><img src="image_25.png" /><figcaption>Fig. 18 — Rat A-3-5 — Proliferation. Hyperplasie adénomatose. Cholangio-brose (début.)</figcaption></figure>

<figure><img src="image_26.png" /></figure>

<figure><img src="image_27.png" /></figure>

<figure><img src="image_28.png" /><figcaption>Fig. 19 — Rat 1-5. Regimé 33 à 185 jours. Proliferation, dilatation des canaux biliaires. En-tassement des cellules. Cancer des canaux biliaires.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_29.png" /><figcaption>Fig. 20 — Rat H-6-2 à 125 jours. Entassement des cellules. Hyperplasie et neo-fomation au début.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_30.png" /></figure>

<figure><img src="image_31.png" /><figcaption>Fig. 21 — Rat G. F. à 215 jours. Régime carancé en complexe B. Structure hépatique remplacée par travers fibreux. Kystes énormes. Cancer mixte du foie.</figcaption></figure>
*Metabolisme du Tissu Cancéreux et Précancéreux — a) Métabolisme Glucidique.*

Plusieurs chercheurs ont rapporté une augmentation dans la glycolyse anaerobie et anaerobie un peu avant le début de la cancérisation. Il se peut que des changements des complexes enzymatiques caractéristiques tissulaires, peuvent initier des transformations néoplasiques et prénéoplasiques et devancer considerablement l'appariton des lésions néoplasiques, reconnues à l'examen microscopique.

Le métabolisme du tissu cancéreux se distingue par la présence d'une glycolyse anaerobie, c'est-à-dire de la dégradation fermentative, en acide lactique, du glucose, même en présence d'un excès d'oxygène, alors que dans les tissu normaux, le glucose subit, dans les mêmes conditions, une combustion non lactique avec combustion oxydative de l'acide avec déjà formée, l'énérgie libéré permettant une resynthèse de l'acide restant en glycogène (prédominance de la respiration sur la glycolyse).

Pour Warburg, la cellule obtient son énergie à partir du glucose par deux réactions fondamentales: la réspiration et la glycolyse. En général, en présence d'oxygène, la respiration l'emporte de beaucoup sur la glycolyse pour les tissu nouveaux. Pour les tissus embryonnaires ou jeunes, la glycolyse est forte, mais la respiration reste aussi forte. Ce qui, pour Warburg, caractériserait la cellule cancéreuse, c'est que par suite d'un déficit initial en $O_2$, certaines cellules prendraient le type respiratoire embryonnaire, sur le métabolisme des glucides, se ferait surtout par glycolyse, même en présence de $O_2$. Dans le tissu tumoral, la réspiration serait fortement diminuée tandis que la glycolyse est considerablement acrue.

Le taux de glycogène et d'acide lactique de la cirrhose hépatique précancéreuse, doit nous indiquer en quelle manière le métabolisme des glucides se trouve vicié par un tissu en voie de cancérisation.

Cette augmentation de glycolyse anaerobie constatée dans la cirrhose précancéreuse fut étudiée en relation du glycogène et de l'acide actique dans le foie des rats, sous régime carencé en vitamine et contenant le cancérogène.

## Taux du glycogène et d'acide lactique

Le glycogène dans le tissu hépatique est déterminé par une modification apportée par Shaeffer & Hermann, à la métode Somogyi. L'extraction du glycogène se fait suivant le procédé décrit par Higgins et Anderson.

Pour les déterminations de l'acide lactique le foie est congelé in situ en plongeant le rat dans l'air liquide ou le foie est rapidement enlevé et transporté dans un broyeur, refrigéré à la neige carbonique. La microdistillation se fait par l'appareil de Lendartz, où l'on a éliminé toute connection en caoutchouc et la détermination se fait d'après le procédé décrit par Winniche.

Les déterminations d'acide lactique et de glycogène furent faites sur le fois de 50 rats normaux pesant en moyenne 100 grammes. Toutes les déterminations eurent lieu 12 heures après un jeûne rigoureux. Les déterminations de glycogène et d'acide lactique et les mesures de respiration cellulaire suivant la technique de Warburg, se faites simultanément.

Les résurtats obtenus pour des tissus hépatiques normaux se sont révélés suffisamment constants. Ces résultats différent sensiblement pour le tissu hépatique avec cirrhose ou cancer hé-
patique, chez les rats soumis à un régime (Table VII et VIII).

Notons qu'il y augmentation très appréciable de l'acide lactique au stage de cirrhose et d'hépatome. La concentration de glycogène par contre, se trouve sensiblement diminuée.

<caption>TABLE VII</caption>

TAUX DE GLYCOGENE ET ACIDE LACTIQUE DANS LE FOIE NORMAL - CIRRHOSE - CANCER HEPATIQUE

<table><thead><tr><th rowspan="2">NO<br>DR.</th><th colspan="3">NORMAL</th><th colspan="3">CIRRHOSE - ADENOMATUM</th><th colspan="3">HEPATOME - CANCER HEPATIQUE</th></tr><tr><th>Q<sup>2</sup><sub>20</sub><br>ACIDE<br>LACTIQUE</th><th>GLYCOGENE</th><th>Q<sup>2</sup><sub>20</sub><br>ACIDE<br>LACTIQUE</th><th>GLYCOGENE</th><th>Q<sup>2</sup><sub>20</sub><br>ACIDE<br>LACTIQUE</th><th>GLYCOGENE</th><th>Q<sup>2</sup><sub>20</sub><br>ACIDE<br>LACTIQUE</th><th>GLYCOGENE</th><th>Q<sup>2</sup><sub>20</sub><br>ACIDE<br>LACTIQUE</th></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>14</td><td>281</td><td>25,44g</td><td>0,5</td><td>251</td><td>18,17g</td><td>11,5</td><td>470</td><td>2,700</td></tr><tr><td>2</td><td>16</td><td>232</td><td>27,09g</td><td>7,1</td><td>385</td><td>29,30g</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3</td><td>17</td><td>215</td><td>35,10g</td><td>7,4</td><td>311</td><td>11,76g</td><td>13,6</td><td>532</td><td>3,900</td></tr></tbody></table>

NOTE: ACIDE LACTIQUE ET GLYCOGENE - EN JMOLES PAR 100 GMS

<caption>TABLE VIII</caption>

MESURES AU POLAROGRAPHE D'ONDES CATALITIQUES DE CYSTINE DANS SERUM... a) NORMAL b) DE RATS AVEC CIRRHOSE AVANCE c) DE RATS AVEC HEPATOMIE

<table><thead><tr><th colspan="3">DENATURATION ALKALINE<br>TEMP. 25°C - OPTIMUM A 15 MINUTES</th><th colspan="3">DENATURATION A PERSIN<br>CHAUFFEE A 40°C - 30 MINUTES</th></tr><tr><th>SERUM<br>NORMAL</th><th>CIRRHOSE<br>AVANCE</th><th>CANCER<br>HEPATIQUE</th><th>SERUM<br>NORMAL</th><th>CIRRHOSE<br>AVANCE</th><th>CANCER<br>HEPATIQUE</th></tr></thead><tbody><tr><td>21</td><td>27</td><td>20</td><td>37</td><td>39</td><td>30</td></tr><tr><td>37</td><td>21</td><td>31</td><td>31</td><td>27</td><td>37</td></tr><tr><td>28</td><td>25</td><td>26</td><td>31</td><td>24</td><td>31</td></tr><tr><td>35</td><td>30</td><td>31</td><td>36</td><td>32</td><td>31</td></tr><tr><td>27</td><td>22</td><td>31</td><td>33</td><td>30</td><td>38</td></tr></tbody></table>

TEMPS CHUTE DE GOUTTE DE MERCURE - 3 SEC
ONDES COBALT, 12 mm. - SENSIBILITE GALVANOMETRIE, 200

Ni le jeûne prolongé, ni la composition des régimes semblent affecter le taux d'acide lactique du tissu hépatique.

Dans l'hépatome expérimental le taux d'acide lactique est 4 fois plus élevé que dans tissu hépatique normal.

Ces données appuient l'affirmation de Warburg, concernant l'augmentation de la glycolyse dans le métabolisme des tumeurs.

En d'autres mots l'organisation des intermédiaires, rassemble beaucoup à ce que l'on rencontre dans des tissu différenciés, tel le rein, ou le mécanisme de phosphosylation, est opérant.

Notons aussi que la différence marquée dans le taux de glycogène existant entre tumeur spontanée ou de la tumeur greffée (cette dernière contenant qu'une trace négligeable de gly-

ccgène), résulte du fait que la tumeur spontanée n'est pas formée de cellules tumorales pures, mais se compose en plus d'un tissu de granulation.

La glycolyse anaerobie élevée dépend non pas de l'alimentation, mais du métabolisme cellulaire anormal, faisant son appariton à la phase cirrhose avec d'hyperplasie adenomateuse.

L'acide lactique et le taux de glycogène du tissu hépatique, au stage de cirrhose avancée et d'hépatome différent appréciablement des taux pour un tissu hépatique normal (Table VII). Ces résultats indiquent en plus que la glycolyse anaerobie augmente et va de pair avec le processus cirrhogène et l'augmentation de l'acide lactique. Le glycogène, por contre, diminue progressivement avec le même processus, mais avec l'apparition de l'hépatome, le taux glycogène varie de 28 à 9 mlgm. par grammes de poids humide indiquant que le glycogène peut être sensiblement diminué dans de tissu cancéreux, mais il n'influe que très peu ou pas dans le glycolyse anaerobie élevée qui semble caractériser certains tissus tumoraux. Par suit d'un déficit initial en O², les cellules prendraient le type respiratoire embryonnaire, puis le métabolisme des glucides se ferait surtout par glycolyse, même en présence d'02. Dans le tissu tumoral dont la respiration est fortement diminuée, tandis que la glycolyse est considérablement accrue, le tissu cancéreux ne glycolyserait pas le glycogène.

Mécanism e des Réactions d'oxydations: L'acide ascorbique dans foie avec cirrhose avancée et hépatome malin.

Les fonctions biologiques de l'acide ascorbique localisée dans la cellule sont multiples. Avec les dehydrases, il const-
<caption>TABLE VII</caption>

At 120 days — Nodular Hyperplasia — aMrked

<table><caption>At 150 days — Advanced Adenomatosis Early Signs of Malignancy</caption><thead><tr><th></th><th>Without<br>Substrate</th><th>Succinate<br>0.02M</th><th>P-Phenylene-<br>diamine</th></tr></thead><tbody><tr><td>Group 1</td><td>5.5</td><td>8.8</td><td>9.3</td></tr><tr><td>Group 2</td><td>9.4</td><td>11.</td><td>7.6</td></tr><tr><td>Group 3</td><td>4.5</td><td>7.5</td><td>5.1</td></tr><tr><td>Group 4</td><td>6.2</td><td>9.1</td><td>11.2</td></tr><tr><td>Group 5</td><td>12.8</td><td>13.7</td><td>9.5</td></tr><tr><td>Group 6</td><td>8.8</td><td>11.9</td><td>9.1</td></tr></tbody></table>

<table><caption>At 200 days — Large Hepatoma — Cholangioma & Numerous Cysts</caption><thead><tr><th></th><th>Without<br>Substrate</th><th>Succinate<br>0.02M</th><th>P-Phenylene-<br>diamine</th></tr></thead><tbody><tr><td>Group 1</td><td>6.</td><td>6</td><td>4.1</td></tr><tr><td>Group 2</td><td>7.1</td><td>8.1</td><td>6.</td></tr><tr><td>Group 3</td><td>12.2</td><td>12.8</td><td>9.5</td></tr><tr><td>Group 4</td><td>7.7</td><td>6.1</td><td>6.</td></tr><tr><td>Group 5</td><td>9.1</td><td>8.3</td><td>7.9</td></tr><tr><td>Group 6</td><td>6.4</td><td>4.7</td><td>5.</td></tr></tbody></table>

<table><thead><tr><th></th><th>Without<br>Substrate</th><th>Succinate<br>0.02M</th><th>P-Phenylene-<br>diamine</th></tr></thead><tbody><tr><td>Group 1</td><td>13.</td><td>8.5</td><td>1.7</td></tr><tr><td>Group 3</td><td>11.</td><td>14.9</td><td>6.2</td></tr><tr><td>Group 4</td><td>10.</td><td>13.9</td><td>9.1</td></tr><tr><td>Group 5</td><td>5.7</td><td>6.</td><td>4.</td></tr><tr><td>Group 6</td><td>14.1</td><td>12.2</td><td>5.3</td></tr></tbody></table>

titue un système respiratoire cellulair; il active certains ferments. Il intervient dans le métabolisme des glucides et la synthèse de certains hormones. Aussi son rôle dans la cancérisation doit être important, mais jusqu'à date les recherches sont relativement contradictoires.

Il nous a apparu donc comme important que dans cette recherche du

processus cirrhogène, de noter comment les réactions d'oxydation se comportent en tissu hépatique en voie de cancérisation et quel serait le rôle joué par l'acide ascorbique.

La détermination d'acide ascorbique s'est fait d'après la méthode spectrophotométrique, tel que préconisé par Carruthers. Nous constantons que le voie de rat normal donne un taux d'a-
cide ascorbique qui varie de 12 à 24 mlgms. par 100 grms. de poids humide.

Le tissu hépatique normal régénéré (après hépatectomie partielle) donne le taux suivant:

à 4 jours après hépatectomie ... 16.9 mlgms.

10 jours après hépatectomie ... 21.6 ”

16 jours après hépatectomie ... 21.3 ”

Par contre, si l'on compare ces résultats avec le taux ascorbique dans la cirrhose hépatique (dite précancéreuse) régénérée après hepatectomie partielle, l'on constate que le taux d'acide ascorbique, dans la cirrhose précancéreuse régénérée, 4, 10 et 16 jours après hépatectomie est déjà sensiblement abaissé. Il ne semble pas y avoir après la 10ième journée, comme cela se produit chez le tissu hépatique normal régénéré, la tendance à atteindre le niveau d'acide ascorbique d'avant l'hépatectomie. Le taux optimum qu'ateint l'acide ascorbique est entre la 16 et 25ième journée après hépatectomie. Le taux minimum d'acide ascorbique peut être de 6 m1mgs. pour 100 gms. à la 4 ième journée après l'hépatectomie partielle; atteindra 14 m1mgs. pour 100 gms. après la 6 ième journée. Le foie normal, par contre régénéré, peut atteindre après 6 jours, 200 mlgms.

Ces résultats semblent indiquer que chez le rat, le mécanisme de synthèse de l'acide ascorbique dans le foie se trouve déréglé par le processus cirrhogène et que le taux d'acide ascorbique dans le tissu hépatique cancérisé est sensiblement moindre que dans le tissu hépatique normal ou avec cirrhose.

Dans un groupe d'expériences entreprises pour l'étude de l'action de la colchicine sur le taux de l'acide ascorbique,

nous avons pu noter en effect, qu'en plus de l'effet nécrosant de l'hépatome, il y a diminution marquée de l'acide ascorbique dans la cirrhose précancéreuse (non inclus dans ce rapport).

## Métabolisme des Proteides — Les corps Sulphydrylés.

Dans les régimes nous reconnaissons que la caseine est l'un des facteurs de protection contre le cancer azoique. Cette protection semble due aux composés sulfurés. Et l'on connaît depuis longtemps l'action de croissance exercée par les corps sulphydrylés, constituant des systèmes oxydo reducteurs, souvent associés au système acide ascorbique réduit acide ascorbique oxydé. Ces composés, parmi lesquels le glutathion et la cysteine-cystine, sont les plus importants, agissent en tant qu'activateurs inhibiteurs d'autres ergones (diastases, Vitamines, hormones).

Ainsi, les corps sulphydryles interviennent dans le développement embryonnaire et la croissance normale post natale et influencent la croissance des cultures de tissus.

En vue de ce fait, que les composés sulfurés occupent une partis très importante dans la proteinosynthèse intracellulaire et que des expériences indiquent que les substances cancérogènes probablement s'tattaquent de préférence (avec selectivité) au groupe S-H des enzymes cellulaires et enfin puisque nous avons noté que la carence en riboflavine, va de paire avec une diminuiton de l'activité enzymatique du système succino-dehydrogenèse dans le tissu hépatique, nous nous sommes proposés dans une série de recherches de demontrer au moyen de la méthode polarographique, si le point focal d'attaque du carcinogène (jaune de beurre) dans les cellules hépatiques
est bien le groupe sulphydryle des proteines cellulaires.

La réaction du groupe sulphydrylé cysteine-cystine, dans les différentes fractions du serum fut étudiée au moyen de l'électrode de mercure — (polarographe). Nos travaux furent effectués au moyen du polarographe enregistrreur (Hewvysky.)

L'effet polarographique fut décrit en 1930, consistant d'une onde type, au voltage 1.6 sur un courant voltage d'une solution de chlorure d'amonium, contenant des traces de proteine. Cet effet fut démontré comme étant causé par l'évolution electrolytique de l'hydrogène catalysé par la présence de proteines à l'interphase de la cathode.

Plus tard Hyrogysky, par ces recherches démontrera que les proteines contenant du souffre sont la cause dans ces solutions d'une onde nouvelle à un plus faible voltage (4), cet effet, est causé por le groupe sulphydryl et le groupe disulphydrique, de proteine. Cette conclusion est appuyée par le simple fait que les thio-acides simples comme l'acide thio-glycolic, cysteine ou cystine glycine ou leur forme di-sulphydrique produisent un effet polarographique catalytique semblable, mais ceci seulement en présence de sels bivalents de cobalt, tandis que les polypeptides et proteines plus complexes, donnent l'effet même en présence de sels trivalents.

En 1936 Bridcka prenant, connaisance des travaux de Purr et Russel notait que le serum des cancéreux présentait des reactions biologiques moins actives que le sang normal. Enfin, Waldnuditz-Leitz et ses collaborateurs appliquèrent cette méthode au diagnostic du cancer et expriment l'opinon que l'activité diminuée de serum des cancéreux est causée par la diminution d'activité des groupes sulphylyl dans la proteine du serum sanguin.

Nous avons repris en présence de ces données sur les rats, à différentes phases de lésions hépatiques de l'hépatite aigue, jusqu'à l'hépatome malin.

L'étude polarographique fut poursuivie sur des serums de rats soumis à des régimes variés contenant l'agent cancerigène. Nous avions en vue la détermination de la concentration de la cystine et aussi à la recherche d'indices précoces des variantes qui pourraient faire leur apparition brusquement dans le groupe sulphydryl des contenants sanguins, pendant la période de transition d'un tissu hépatique du stage pré-cancéreux au stage néoplasique. (Table VIII-A).

<table><thead><tr><th rowspan="2">EXP NO.</th><th rowspan="2">RAT NO.</th><th rowspan="2">DIET</th><th colspan="5">POLAROGRAPHIC DETERMINATION</th><th rowspan="2">CYTOC</th><th rowspan="2">PATHOLOG. FINDINGS</th></tr><tr><th>HEMOL. CONC°</th><th>N-HEM. CONC°</th><th>SPLIT PROD°</th><th>IN SERUM</th><th>NON-HEMOL. CONC°</th><th>C°</th></tr></thead><tbody><tr><td>6</td><td>B-1</td><td>REG. 93</td><td>1.77g</td><td>1.86g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>16.-</td><td>BILIARY ADENOMATOSIS</td></tr><tr><td>8</td><td>E-1</td><td>-</td><td>2.40g</td><td>2.09g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>22.-</td><td>MODERATE CIRRHOSIS</td></tr><tr><td>15</td><td>F-1</td><td>-</td><td>1.44g</td><td></td><td></td><td>33.3</td><td>33.6</td><td>19.-</td><td>NORMAL LIVER</td></tr><tr><td>20</td><td>L-1</td><td>-</td><td>1.19g</td><td></td><td>35.6</td><td>33.6</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4</td><td>D-2</td><td>asaj.cw</td><td>1.36g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>23.-</td><td>TORIC HEPATITIS</td></tr><tr><td>11</td><td>J-2</td><td>-</td><td>1.53g</td><td></td><td>31.5</td><td></td><td></td><td>8.-</td><td>BILIARY ADENOMATOSIS (ADVANCED)</td></tr><tr><td>7</td><td>J-3</td><td>asaj.hem</td><td>2.21g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>12.-</td><td>ADENOMATOSIS</td></tr><tr><td>17</td><td>J-4</td><td>REG. 93</td><td></td><td>1.59g</td><td></td><td></td><td>33.8</td><td>11.-</td><td>TORIC HEPATITIS</td></tr><tr><td>12</td><td>L-4</td><td>-</td><td>1.61g</td><td>1.48g</td><td></td><td></td><td>31.6</td><td>32.6</td><td>MODERATE CIRRHOSIS</td></tr><tr><td>14</td><td>F-5</td><td>asaj.cw</td><td>1.82g</td><td></td><td>36.6</td><td>34.6</td><td></td><td>30.-</td><td>MODERATE CIRRHOSIS</td></tr><tr><td>5</td><td>G-5</td><td>-</td><td>1.82g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>NORMAL LIVER</td></tr><tr><td>2</td><td>K-5</td><td>-</td><td>2.40g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>25.-</td><td>MODERATE CIRRHOSIS</td></tr><tr><td>13</td><td>L-5</td><td>-</td><td>1.57g</td><td></td><td></td><td></td><td>33.4</td><td>33.1</td><td>BILIARY ADENOMATOSIS</td></tr><tr><td>19</td><td>G-6</td><td>asaj.hem</td><td>2.40g</td><td></td><td>32.3</td><td>32.1</td><td></td><td>27.-</td><td>NORMAL</td></tr><tr><td>16</td><td>I-6</td><td>-</td><td>1.29g</td><td></td><td></td><td>32.6</td><td></td><td>27.-</td><td>NORMAL</td></tr><tr><td>1</td><td>L-6</td><td>-</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>16.-</td><td>BILIARY ADENOMATOSIS</td></tr><tr><td>18</td><td>A-8</td><td>central</td><td>1.44g</td><td></td><td>27.8</td><td>31.3</td><td></td><td>12.-</td><td>BILIARY ADENOMATOSIS</td></tr><tr><td>9</td><td>D-8</td><td>-</td><td>2.83g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>12.-</td><td>ADVANCED CIRRHOSIS</td></tr><tr><td>21</td><td>F-8</td><td>-</td><td></td><td>110.</td><td></td><td></td><td>30.-</td><td>34.3</td><td>NORMAL</td></tr><tr><td>10</td><td>I-8</td><td>-</td><td>1.55g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>31.-</td><td>NORMAL</td></tr><tr><td>3</td><td>J-8</td><td>-</td><td>0.91g</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td>20.-</td><td>NORMAL</td></tr><tr><td>22</td><td>L-8</td><td>-</td><td></td><td>110.</td><td></td><td></td><td>28.3</td><td>24.6</td><td></td></tr></tbody></table>

Nouns avons employé exclusive-ment la méthode de dénaturation à la pepsine acidulée.

La détermination de concentration de la cystine se fait en mesurant la hauteur de l'onde catalytique que produit la cystine.

Notons ici que les éléments cellulaires ainsi que le serum donnent des
ondes catalytique qui sont similaires. La quantité de cystine, varie peu dans les deux éléments.

L'étude des ondes catalytiques de cystine du serum de rats normaux et à 120 jours où il y a déjà une cirrhose avancée qui indique la hauteur d'onde varie peu, mais au stage d'hépatome, les ondes catalytiques de cystine sont diminuées appréciablement indiquant une faible concentration de cystine dans le serum. (Table VIII).

Nous avons aussi étudié la méthode polarographique des proteines dans le serum. Mais cette méthode ne nous parait pas suffisament sûre, puisque elle ne permet pas de distinguer l'état précancéreux et l'état de cancer.

Le filtrat de serum, traité à l'acide sulphosalicylique à 25% fut aussi étudié chez le rat normal avec cirrhose et avec hépatome. Il est à se demander cependant si la faible augmentation du groupe sulphydryl, tel qu'indiqué dans l'hépatome, justifie une conclusion qu'il y a diminution dans certains composés sulphydrylés, dans le sang de cancéreux, causé propablement par une destruction des petits fragments proteiniques qui résultent de la distinction et laissés dans l'acide sulphosalicylique.

Seul, une étude des petits fragments proteiniques qui résultent de la destruction avec l'acide sulphosalicylique pourrait aider à répondre à cette importante question.

Nous notons que le jeûne durant 12 à 72 heures, semblait affecter sensiblement l'onde produite par la cystine et qui augmente en proportion de la période du jeûne. Cependant, les régimes même riches en composé sulphydrylés (methionine, cystine, choline), restent sans effect sur l'onde catalytique de la cystine.

La méthionine en plus, n'affecte le courant voltage de la cystine, seule-

ment si la concentration de méthionine en solution se trouve trop élevée.

Dans notre étude du blockage du système succino-oxidase, nous avions noté qu'une concentration (5x10⁻⁴M) agit comme un léger inhibiteur du tissu hépatique pour le système succino-oxidase, mais à cette concentration le système cytochrome oxydase ne se trouvant pas affecté.

Au moyen de la méthode polarographique, nous avons réétudié l'activité du système cytochrome dans le tissu hépatique normal, tissu cirrhotique régénééré et tissu hépatique cancerisé (cholangiome ou hépatome).

Des multiples mécanismes oxydasiques, le plus import d'entre eux est le système au fer (cytochrome et cytochrome oxidase), ainsi que la catalase.

Le cytochrome C, par méthode polarographique, ainsi que par la méthode manométrique, indique que le contenu de cytochrome C, dans le foie normal, ainsi que foie avec cirrhose et régénééré, sont presque similaires, mais il y a cependant une diminution appréciable dans le taux de cytochrome C longtemps avant l'apparition de l'hépatome (Voir Figures n.º 22, 23 et 24 e table IX).

<figure><img src="image_32.png" /><figcaption>Fig. 22 — I — Onde de cobalt. II — Onde catalytique. Cytochrome-C (pur-Thorell).</figcaption></figure>
<figure><img src="image_33.png" /><figcaption>Fig. 23 — Polarogrammes — II. III. IV. Onde Catalytique abaissée. Faible concentration du Cytochrone C. Rats — au régime — 200 jours (Hepatomes).</figcaption></figure>

<figure><img src="image_34.png" /><figcaption>Fig. 24 — Polarogrammes II et V — Onde catalytique Cytochrome C — abaissée — Rats avec Hepatomes (A-8-6. B-5). III et IV — Onde catalytique révèle. Concentration Cytochrome C plus élevée que polarogramme II et V — Cirrhose avancée.</figcaption></figure>

<caption>TABLE I</caption>

COMPARAISON - RESULTATS MANOMETRIQUES ET POLAROGRAPHIQUES POUR CYTOCHROME C DANS - TISSU HEPATIQUE NORMAL - CIRRHOSE ET CANCER HEPATIQUE

<table><thead><tr><th colspan="2">NORMAL</th><th colspan="2">CIRRHOSE</th><th colspan="2">CHOLANIOME HEPATOME</th></tr><tr><th>MANOMET</th><th>POLAROM</th><th>MANOMET</th><th>POLAROM</th><th>MANOMET</th><th>POLAROM</th></tr></thead><tbody><tr><td>218</td><td>195</td><td>163</td><td>120</td><td>38</td><td>21</td></tr></tbody></table>

NOTE: MOYENNE POUR 3 DETERMINATIONS SUR CHAQUE TISSU HEPATIQUE
CYTOCHROME C - DÉTERMINÉ - RAPPORTÉ A MG. PAR GRAMME DE TISSU SEC.

<figure><img src="image_35.png" /><figcaption>GRAPHIQUE I</figcaption></figure>

## Relation-Riboflavine et Catalase.

La catalase est un ferment heminique activant la mobilisation de l'oxygène des péroxydes. Il serait intéressant de noter quels seraient les changements dans l'activité de la catalase chez rats où l'alimentation, en plus d'être carencée en Complexe B, contient le diméthylaminoazobenzene et produisant au niveau du foie un processus cirrhogène qui peut évoluer au cancer hepatique.

Nous avons déterminé au moyen du procédé fluorophotométrique la concentration de Riboflavine dans le foie de rats soumis à une alimentation normale et nous avons constaté, comme d'autres chercheurs d'ailleurs, qu'il y a en effet une diminution sensible de la concentration de Riboflavine dans le foie avec cirrhose, ainsi qu'avant cancer hépatique.

L'activité de la catalase se trouve aussi diminuée d'une manière très appreciable dans la cirrhose avancée. La catalase diminue progressivement pour n'être que très peu active au stage d'hépatome. Nous n'avons pas pu observer le retour de l'activité de la catalase à la suite de l'excision de la tumeur, car dans nos groupes de rats porteurs d'hépatomes spontanés, il est presqu'impossible de faire l'excision complète de la tumeur.

Par contre, nous avons noté que chez la souris greffée avec sarcome 37 obtenu du National Institute of Cancer of America, la catalase du tissu hépatique, après l'excision de la tumeur greffée, révélait la catalase de retour à un taux d'activité sensiblement normale, pour le tissu hépatique avant la greffe.

Actuellement, nous poursuivons nos recherches qui complèteront nos données actuelles sur l'activité catalase du
tissu hépatique en voie de cancérisation.

## Métabolisme des Lipides — Le cholesterol.

Puisque beaucoup de chercheurs ont maintenu que le métabolisme des lipides dans le tissu cancéreux se trouve vicié, il nous parut bon d'étudier si, dans le rat soumis à régime avec composé carcinogène, il serait possible de noter par l'étude du serum, les changements qui s'effectuent dans le métabolisme des lipides. Nous avons étudié le cholesterol libre et estérifié dans le serum d'après la micro méthode décrite par Sperry et Schonheimer.

Il y a augmentation du cholesterol libre et estérifié dans l'hépatome, ainsi qu'augmentation dans le serum de rats avec cirrhose (hyperplasique, adenosmateuse).

Les rats avec hépatomes présentent

cessus de carcinogénèse de l'épiderme de la souris, nous proposons de réétudier à la luminére de ces données nouvelles, aussi par la méthode polaratographique, les altération des lipides qui apparaissent dans le tissu hépatique avec cirrhose et hépatome.

De nos résultats atuels, nous ne pouvons pas affirmer si le métabolisme des lipides dans l'état précancéreux se distingue sensiblement de celui de l'état néoplasique.

## TABLE X

(A) Taux du Cholesterol Libre et Estérifié

Rats au régime Normal (checkers)
Poids 200 gms.

Cholesterol Libre — varie de 10 a 30 mlgm. %.

Cholesterol Estérifié — varie de 40 a 60 mlgm. %.

(B) TAUX DU CHOLESTEROL — RAT AU REGIME 33 ET 0.02% DE JAUNE DE BEURRE

<table><thead><tr><td>Durée du régime</td><td>Cholesterol Libre</td><td>Cholesterol Estérifié</td></tr></thead><tbody><tr><td>60 jours</td><td>18 à 24 mlgm. %</td><td>40 à 77 mlgm. %</td></tr><tr><td>80 jours</td><td>20 à 29 mlgm. %</td><td>60 à 85 mlgm. %</td></tr><tr><td>120 jours</td><td>60 à 80 mlgm. %</td><td>60 à 110 mlgm. %</td></tr><tr><td>200 jours</td><td>45 à 90 mlgm. %</td><td>54 à 175 mlgm. %</td></tr></tbody></table>

en plus un taux de cholesterol libre et estérifié, variant en rapport à la nature et le volume de la tumeur, ainsi qu'en rapport avec l'état de nutrition des rats.

Depuis les travaux de Carruthers, qui démontrent par la méthode polaratographique, qu'il y a une altération dans la nature d'un lipide probablement associé à une proteine, durant le pro-

## Conclusion

En cancerologie expérimentale, les processus cancéreux apparaissent cons tant précédés de réactions hyperplasiques et tumoraux benignes.

Nous avons démontré que les aspects considérés comme indiquant la malignité histologique peuvent précé der la cancérisation proprement dite.
En pathologie humaine cette loi évolutive est plus difficile à mettre en évidence.

L'évolution des processus cancéreux en pathologie humaine est d'appréciation souvent délicate et la préexistence de phénomènes hyperplasiques ne peut jamais être exclue.

L'on sait en outre que de nombreux cancers humains sont précédés de lésions dites précancéreuses.

Dune manière finale, tous les processus hyperplasiques peuvent subir la cancérisation avec plus ou moins de grande fréquence, suivant l'organe intensifié et la nature du processus en cause.

La malignité très variable proliférative trouverait aussi son explication dans la composition variable des principes stimulateurs et inhibiteurs du complexe en cause et dans les concentrations égalment variables.

En résumé, tous les processus prolifératifs benins ou malins, méritent d'être étudiées côté à côté, et il existe aussi parenté évidente entre la croissance normale et la croissance cancéreuse.

Sans doute l'étude d'un tissu normal, en voie de néoformation (au stade précancéreux) est difficile à juger, surtout à cause des méthodes actuelles et des analyses biochimiques et physicochimiques, qui se sont révélées encore insuffisantes à préciser toutes les phases et évènements dans une évolution précancéreuse et ayant lieu uniformément dans toutes les cellules et les tissus. Puisque seulement quelques cellules d'un tissu normal semblent subir la transformation néoplasique, il sera sûrement difficile de déterminer quelles cellules subiront la néo-transformation.

Il est difficile de ne pas accepter

une impression que la transformation néoplasique se fait d'une manière brusque et soudaine.

La combustion oxydative dans les tumeurs, telle que mise en relief par l'emploi des substrats succinates et paraphenylendiamine indique bien que la perte ou destruction d'un système d'enzyme très spécialisé est une étape essentielle avant que la conversion d'un tissu normal à un tissu malin puisse s'établir.

Dans le mécanisme de carcinogènèse ces données indiquent que la première étape dans la néoformation d'un tissu adulte c'est la perte de l'activité du système au cytochrome.

Il se peut donc que, dans un lot de tissu normal, les cellules subitement perdent une plus grande partie de leur cytochrome, ou qu'à travers une section de tissu destiné à la néoformation, que toutes les cellules subissent une diminution graduelle dans leurs composition oxydatif.

Il s'agit en somme d'une anoxie cellulaire qui se terminera en asphixie tissulaire et la respiration se faisant non par oxygénation mais par fermen-tation et apparition d'un glycolyse anaerobie.

Les examens et les études anatomo-pathologiques semblent plutôt con-firmer cette dernière alternative.

Nous nous rendons compte cepen-dant par nos expériences que la com-bustion oxydative du tissu précancé-reux hépatique, en présence du substrat succinate ou paraphenylendiamine signifie seulement une réponse et non pas une mesure absolue de la concentration du Cytochrome C. Il semble cepen-dant très important pour distinguer entre un foie cirrhotique précancéreux et une cirrhose non néoplasique.