# Composición química y actividad Butirilcolinesterasa selectiva del aceite esencial de Piper arboreum Aubl. de Ecuador

Lisseth Carolina Espinosa Espinoza, Melissa Salinas Rivera, Nicole Bec, Jorge Ramirez Robles, Christian Larroque, Chabaco Armijos

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Lisseth Carolina Espinosa Espinoza, Melissa Salinas Rivera, Nicole Bec, Jorge Ramirez Robles, Christian Larroque, et al.. Composición química y actividad Butirilcolinesterasa selectiva del aceite esencial de Piper arboreum Aubl. de Ecuador. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas, 2023, 22 (5), pp.628-635. 10.37360/blacpma.23.22.5.45. hal-04598152

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Articulo Original / Original Article

# Composición química y actividad Butirilcolinesterasa selectiva del aceite esencial de *Piper arboreum* Aubl. de Ecuador

[Chemical composition and selective BuChE activity of the essential oil of *Piper arboreum* Aubl. from Ecuador]

Lisseth Carolina Espinosa Espinoza<fnref n="1" />, Melissa Salinas Rivera<fnref n="1" />, Nicole Bec<fnref n="2" />, Jorge Ramírez Robles<fnref n="1" />,
Christian Larroque<fnref n="2" /> y Chabaco Armijos<fnref n="1" />

Reviewed by:

Ana María Vazquez
Universidad Catolica de Cordoba
Argentina

Alejandro Madrid
Universidad de Playa Ancha
Chile

Correspondence:

Chabaco ARMIJOS
cparmijos@utpl.edu.ec

Section Biological Activity

Received: 24 April 2022

Accepted: 7 May 2022

Accepted corrected: 4 September 2022

Published: 30 September 2023

Citation:

Espinosa Espinoza LC, Salinas Rivera M, Bec N, Ramírez Robles J, Larroque C, Armijos C
Composición química y actividad
Butirilcolinesterasa selectiva del aceite esencial de *Piper arboreum* Aubl. de Ecuador
**Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat** 22 (5): 628 - 635 (2023).

https://doi.org/10.37360/blacpma.23.22.5.45

**Abstract:** The aim of this study was to identify the chemical composition of the *Piper arboreum* Aubl. essential oil (EO), and to evaluate its inhibitory activity *in vitro* against the enzymes butyrylcholinesterase (BuChE) and acetylcholinesterase (AChE). The EO was obtained by steam distillation of the leaves, which were collected in Pindal canton of the Loja province in southern Ecuador. The chemical composition was analyzed using the gas chromatography technique coupled to a mass spectrometry detector (GC-MS) and gas chromatography coupled to a flame ionization detector (GC-FID). A total of 41 compounds were identified, the major components found in the oil were limonene (31,46%), β-selinene (12,01%), (E)-caryophyllene (7,53%), bicyclogermacrene (6,72%), germacrene D (3,83%) and β-elemene (3,63%). In *in vitro* analyzes, the EO showed high selective inhibition for BuChE with an IC₅₀ inhibition value of 29,3 ± 3,3 µg/mL. By contrast, the EO was not active against the AChE enzyme (IC₅₀ was 100,1 ± 15,2 µg/mL).

**Keywords:** *Piper arboreum*; Essential oil; GC-MS; GC-FID; BuChE-AChE activity.

**Resumen:** El objetivo del presente estudio consistió en identificar la composición química del aceite esencial de la especie *Piper arboreum* Aubl. y evaluar su actividad inhibitoria *in vitro* frente a las enzimas butirilcolinesterasa (BuChE) y acetilcolinesterasa (AChE). El aceite esencial (AE) se obtuvo mediante destilación por arrastre de vapor de las hojas de la planta, que se colectaron en el cantón Pindal de la provincia de Loja al sur de Ecuador. La composición química se analizó mediante la técnica de cromatografía de gases acoplado a un detector de espectrometría de masas (GC-MS) y cromatografía de gases acoplado a un detector de ionización de llama (GC-FID). Se identificaron en total 41 compuestos, siendo los mayoritarios, el limoneno (31,46%), β-selineno (12,01%), (E)-cariofileno (7,53%), biciclogermacreno (6,72%), germacreno D (3,83%) y β-elemeno (3,63%). En los análisis *in vitro*, el AE mostró una alta inhibición selectiva para BuChE con un valor de inhibición CI₅₀ de 29,3 ± 3,3 µg/mL. Por el contrario, el AE no resultó activo frente a la enzima AChE con un valor de inhibición CI₅₀ = 100,1 ± 15,2 µg/mL.

**Palabras clave:** *Piper arboreum*; Aceite esencial; GC-MS; GC-FID; Actividad BuChE-AChE.

<footnote n="1">¹Departamento de Química, Universidad Técnica Particular de Loja, San Cayetano alto, Loja-Ecuador</footnote>

<footnote n="2">²Institute for Regenerative Medicine and Biotherapy (IRMB), Université de Montpellier, INSERM, Montpellier, France.</footnote>
## INTRODUCCIÓN.

La familia botánica Piperaceae comprende alrededor de 14 géneros y 1950 especies (Mabberley, 1987), *Piper* y *Peperomia* constituyen los géneros más abundantes, con alrededor de 700 y 600 especies, respectivamente (Joly, 1985). En Ecuador el género *Piper* incluye 157 especies nativas, de las cuales 75 son endémicas (León *et al.*, 2011).

Una gran variedad de plantas del género *Piper*, son ampliamente utilizadas en la medicina tradicional para el tratamiento de vaginitis, desordenes intestinales, dolores y espasmos, por sus efectos antimicrobacterianos, antifúngicos, desinfectantes, contra parásitos, fiebre, gastritis, gripe, reumatismo y problemas de prostata entre otros (Ngane *et al.*, 2003; De Campos *et al.*, 2005; Mesa, 2007; Ramírez *et al.*, 2013; Perez, 2014).

Entre los principales metabolitos secundarios que se han aislado de especies del género *Piper* se encuentran alcaloides, lignanos, ácidos benzoicos, terpenos entre otros (Parmar, 1998; Terreaux *et al.*, 1998; Lee *et al.*, 2001), muchos de los cuales muestran actividad antifúngica, insecticida, antimalárica, estimulante, bactericida y citotóxica (Wadt, 2004; Mesa, 2007).

En Ecuador la especie *Piper arboreum* es una especie nativa de la región andino-amazónica, que se la puede encontrar hasta los 1500 msnm. (Jorgesen y León-Yánez, 1999) y es conocida popularmente como cordoncillo, cordoncillo verde, bazo panka, vivora o arabila, la mezcla de la planta junto a otras especies se utiliza para la preparación de remedios antiofídicos, de igual forma las hojas se emplean en medicina tradicional para inducir el vómito y en baños para eliminar piojos (De la Torre *et al.*, 2008).

La enzima acetilcolinesterasa (AChE) predomina en el cerebro sano de una persona, y se considera que la butirilcolinesterasa (BuChE) desempeña un papel menor en la regulación de los niveles de acetilcolina (ACh) en el cerebro. Evidencia reciente sugiere que tanto la AChE como la BuChE pueden tener un papel en la etiología y progresión de la enfermedad de Alzheimer (EA) más allá de la regulación de los niveles de ACh sináptica. Se ha encontrado que la actividad de BuChE aumenta progresivamente en pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA), mientras que la actividad de AChE permanece sin cambios o disminuye. Por tanto, ambas enzimas representan dianas terapéuticas legítimas para mejorar el déficit colinérgico que se

considera responsable de la disminución del funcionamiento cognitivo y conductual característico de la EA (Greig *et al.*, 2002). De hecho, los estudios clínicos han demostrado que, con una mayor inhibición de las colinesterasas ChEs, hay una mejora en las funciones cognitivas, así como en las pruebas de memoria verbal, espacial y los tiempos de reacción.

Hasta la fecha no existen investigaciones sobre la composición química del AE de *P. arboreum* de Ecuador y tampoco estudios precedentes sobre la actividad BuChE-AChE del AE de esta especie colectada y estudiada en otros países como el Chepo-Panamá (Mundina *et al.*, 1998), Reserva Biológica Bom, Recife-Brasil (Nascimento *et al.*, 2015), Reserva de Ripasa, Ibaté-Brasil (Navickiene *et al.*, 2006), Parque ecológico Serra de Itabaiana-Brasil (Lima *et al.*, 2019), Bahia-Brasil (Silva *et al.*, 2014) y de especies de *P. arboreum* cultivadas en invernadero en la Universidad Estatal Paulista en Araquara-Brasil (Regasini *et al.*, 2009a; Regasini *et al.*, 2009b).

El presente artículo aporta información sobre la composición química del AE de la especie silvestre *Piper arboreum* Aubl. colectada en el al sur de Ecuador, así mismo se reporta por primera vez la actividad de inhibición *in vitro* de las enzimas colinesterasas BuChE y AChE.

## MATERIALES Y MÉTODOS

### Recolección del material vegetal

La colecta de la parte aérea (ramas y hojas) de la especie vegetal *Piper arboreum* Aubl., se la realizó durante el mes de noviembre del año 2020 en el cantón Pindal de la provincia de Loja a una altitud 800 msnm, en las coordenadas 601417,5 E y 95475,2 N. Las muestras fueron recolectadas con el permiso de investigación número MAE-DBN-2016-0655 otorgado por el Ministerio del Ambiente del Ecuador. La especie vegetal fue identificada por el botánico Nixon Cumbicus en la Universidad Técnica Particular de Loja (UTPL) utilizando muestras de referencia de herbario, el nombre científico de la especie se sigue la nomenclatura propuesta por Jørgesen y León (1999).

Antes de obtener el AE se procedió a separar las hojas de las ramas.

### Destilación y obtención del aceite esencial

El AE se obtuvo de las hojas de la especie mediante arrastre de vapor en un equipo tipo Clevenger. Este
proceso fue realizado por triplicado a partir de tres muestras diferentes de la planta, el tiempo de cada destilación fue de 4 horas, el AE obtenido se secó con sulfato de sodio anhidro y se almaceno a 4°C en frascos ámbar de vidrio hasta su análisis posterior.

## Análisis químico cualitativo

El análisis químico cualitativo del AE de *Piper arboreum* se lo realizó de acuerdo con (Eduarte *et al*., 2022) en un cromatógrafo de gases marca Agilent Technologies serie 6890 N, acoplado a un espectrómetro de masas 5973 (Santa Clara, CA 95051, USA), operado en modo SCAN y ionización de electrones a 70 eV, con un rango de masas de 45-350 m/z. El equipo dispone de un autoinyector Agilent 7683 (Little Falls, DE, USA) y un software MSD-Chemstation D.01.00 SP1.

El análisis GC-MS del AE se realizó en una columna de fase estacionaria apolar, DB-5MS marca Agilent (5%-phenyl-methylpolysiloxane, 30 m, 0.25 mm de diámetro interno y 0.25 µm de diámetro interno; J & W Scientific, Folson, CA, USA), La inyección se realizó en modo Split (relación 40:1) a una velocidad de 1 mL/min, a una temperatura de 220 °C y un con un volumen de inyección de 1 µL, el gas de arrastre empleado fue helio. Para la elución de los compuestos se utilizó el siguiente programa de temperatura: 50°C por 5 minutos, de 50°C a 180°C a 3°C/min; y finalmente de 180°C a 250°C a 15°C/min.

En las mismas condiciones se realizaron corridas con una mezcla de alcanos (C9 de BDH y C10-C25 con una pureza del 99%), para la identificación de los componentes el aceite esencial se calcularon los índices de retención lineal según Van Den Dool y Kratz, los cuales se compararon con los índices reportados en la literatura (Adams, 2017). Para el análisis se inyectó una muestra (1 µL) del AE disuelto en diclorometano (1:100 v/v). El análisis se realizó por triplicado.

## Análisis cuantitativo

El análisis cuantitativo del AE se realizó en un cromatógrafo de gases Agilent Technologies (modelo 6890N), acoplado a un detector de ionización de llama (FID). La cantidad porcentual para cada compuesto se la determino correlacionando el área del compuesto con el área total de los compuestos

identificados, los valores del análisis cuantitativo se expresaron como los valores medios de tres inyecciones.

## Actividad inhibidora de las colinesteras

Las actividades anti-ACHE (ACHE de *Electrophorus electricus*, Sigma-Aldrich, SRE020, St Louis MO.) y anti-BuCHE (BuCHE, de suero equino, Sigma Aldrich, SRE020, St. Louis MO.), se efectuaron de acuerdo al procedimiento colorimétrico desarrollado por Ellman *et al*. (1961). El principio se basa en la hidrólisis del sustrato acetiltiocolina (ASCHE), produciendo acetato y tiocolina. La tiocolina, en presencia del ión ditiobisnitrobenzoato altamente reactivo (DTNB), genera un color amarillo, que se puede analizar cuantitativamente mediante absorción espectrofotométrica a 412 nm (Bosak *et al*., 2018). El volumen usado para el análisis de inhibición contenía, 200 µL de solución salina tamponada con fosfato (pH=7.4), 1.5 mM de DTNB o reactivo de Ellman, y la muestra del AE disuelta en DMSO (1% v/v). Las dos enzimas AChE y BuChE fueron disueltas en la solución salina tamponada con fosfato (pH=7.4) y se tomaron 24 mU/mL para cada ensayo realizado, luego de 10 minutos de preincubación se añadió el sustrato de yoduro de acetilcoline (1.5 mM) para iniciar la reacción. Transcurridos 30 minutos a 30°C, las microplacas de 96 pocillos fueron leídas en un equipo de detección Varioskan Flash (Thermofisher). El AE fue analizado por triplicado.

## RESULTADOS

El AE de la especie *Piper arboreum*, se obtuvo mediante destilación con vapor de agua durante 4 h, el rendimiento promedio de tres destilaciones fue de 0.06 ± 0.01%.

## Composición química

En el AE de la especie *Piper arboreum*, se pudieron identificar 41 compuestos (95.08%), entre monoterpenos (38,10%), sesquiterpenos (55,49%) y diterpenos (1,50%). Entre los compuestos mayoritarios del AE (Tabla N° 1) se encuentra el limoneno (31,46%), β-selineno (12,01%), (E)-cariofileno (7,53%), biciclogermacreno (6,72%), germacreno D (3,83%) y β-elemeno (3,63%).
<table><caption>Tabla N° 1
Composición química del AE de *Piper arboreum* del cantón Pindal de la provincia de Loja - Ecuador</caption><thead><tr><td>N°</td><td>TR</td><td>Compuesto</td><td>IR<sup>a</sup></td><td>IR<sup>b</sup></td><td>Área Relativa %<sup>c</sup></td><td>σ<sup>d</sup></td></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>8.05</td><td>α-Pineno</td><td>932</td><td>939</td><td>2.16</td><td>0.08</td></tr><tr><td>2</td><td>9.69</td><td>Sabineno</td><td>971</td><td>975</td><td>0.72</td><td>0.10</td></tr><tr><td>3</td><td>9.90</td><td>β-Pineno</td><td>976</td><td>979</td><td>2.21</td><td>0.06</td></tr><tr><td>4</td><td>10.4</td><td>Myrceno</td><td>988</td><td>990</td><td>0.52</td><td>0.09</td></tr><tr><td>5</td><td>12.25</td><td>Limoneno</td><td>1029</td><td>1029</td><td>31.46</td><td>2.56</td></tr><tr><td>6</td><td>13.05</td><td>(E)-β-Ocimeno</td><td>1046</td><td>1050</td><td>1.02</td><td>0.12</td></tr><tr><td>7</td><td>27.71</td><td>Silphiperfol-5,7(14)-dieno</td><td>1363</td><td>1360</td><td>1.76</td><td>0.25</td></tr><tr><td>8</td><td>28.16</td><td>α-Copaeno</td><td>1374</td><td>1376</td><td>0.46</td><td>0.07</td></tr><tr><td>9</td><td>28.77</td><td>β-Elemeno</td><td>1388</td><td>1390</td><td>3.63</td><td>0.57</td></tr><tr><td>10</td><td>30.00</td><td>(E)-Cariofileno</td><td>1417</td><td>1419</td><td>7.53</td><td>0.79</td></tr><tr><td>11</td><td>30.92</td><td>6,9-Guaiadieno</td><td>1440</td><td>1444</td><td>0.79</td><td>0.06</td></tr><tr><td>12</td><td>31.46</td><td>(Z)-β-Farneseno</td><td>1453</td><td>1442</td><td>0.61</td><td>0.08</td></tr><tr><td>13</td><td>31.65</td><td>Allo-Aromadendreno</td><td>1457</td><td>1460</td><td>0.76</td><td>0.12</td></tr><tr><td>14</td><td>32.07</td><td>4,5-di-epi-Aristolocheno</td><td>1468</td><td>1473</td><td>0.71</td><td>0.27</td></tr><tr><td>15</td><td>32.30</td><td>γ-Muuroleno</td><td>1473</td><td>1479</td><td>1.25</td><td>0.18</td></tr><tr><td>16</td><td>32.54</td><td>Germacreno D</td><td>1479</td><td>1481</td><td>3.83</td><td>0.23</td></tr><tr><td>17</td><td>32.84</td><td>β-Selineno</td><td>1486</td><td>1490</td><td>12.01</td><td>0.88</td></tr><tr><td>18</td><td>32.94</td><td>Viridifloreno</td><td>1489</td><td>1496</td><td>0.46</td><td>0.13</td></tr><tr><td>19</td><td>33.15</td><td>Biciclogermacreno</td><td>1494</td><td>1500</td><td>6.72</td><td>0.96</td></tr><tr><td>20</td><td>33.26</td><td>α-Muuroleno</td><td>1497</td><td>1500</td><td>0.48</td><td>0.13</td></tr><tr><td>21</td><td>33.58</td><td>α-Bulneseno</td><td>1505</td><td>1509</td><td>1.28</td><td>0.18</td></tr><tr><td>22</td><td>33.65</td><td>β-Bisaboleno</td><td>1506</td><td>1505</td><td>0.39</td><td>0.13</td></tr><tr><td>23</td><td>33.93</td><td>γ-Cadineno</td><td>1514</td><td>1513</td><td>0.49</td><td>0.21</td></tr><tr><td>24</td><td>34.04</td><td>δ-Cadineno</td><td>1516</td><td>1523</td><td>1.98</td><td>0.67</td></tr><tr><td>25</td><td>34.50</td><td>Ni</td><td>1528</td><td>-</td><td>0.63</td><td>0.20</td></tr><tr><td>26</td><td>35.77</td><td>(E)-Nerolidol</td><td>1561</td><td>1563</td><td>0.33</td><td>0.12</td></tr><tr><td>27</td><td>36.02</td><td>Maaliol</td><td>1567</td><td>1567</td><td>0.23</td><td>0.02</td></tr><tr><td>28</td><td>36.30</td><td>Ni</td><td>1575</td><td>-</td><td>1.37</td><td>0.20</td></tr><tr><td>29</td><td>36.65</td><td>Viridiflorol</td><td>1583</td><td>1592</td><td>2.02</td><td>0.51</td></tr><tr><td>30</td><td>36.97</td><td>Guaiol</td><td>1592</td><td>1600</td><td>1.88</td><td>0.47</td></tr><tr><td>31</td><td>37.06</td><td>Cubeban-11-ol</td><td>1594</td><td>1595</td><td>1.28</td><td>0.17</td></tr><tr><td>32</td><td>37.46</td><td>Rosifoliol</td><td>1605</td><td>1600</td><td>0.49</td><td>0.07</td></tr><tr><td>33</td><td>37.63</td><td>Ni</td><td>1609</td><td>-</td><td>0.57</td><td>0.05</td></tr><tr><td>34</td><td>37.99</td><td>Eremiligenol</td><td>1619</td><td>1631</td><td>0.46</td><td>0.11</td></tr><tr><td>35</td><td>38.11</td><td>Ni</td><td>1622</td><td>-</td><td>0.51</td><td>0.24</td></tr></tbody></table>
<table><tr><td>36</td><td>38.23</td><td>β-Himachaleno oxide</td><td>1625</td><td>1616</td><td>1.98</td><td>0.58</td></tr><tr><td>37</td><td>38.94</td><td>α-Muurolol (=torreyol)</td><td>1645</td><td>1646</td><td>0.63</td><td>0.23</td></tr><tr><td>38</td><td>39.26</td><td>α-Cadinol</td><td>1653</td><td>1654</td><td>0.48</td><td>0.19</td></tr><tr><td>39</td><td>39.35</td><td>Pogostol</td><td>1656</td><td>1653</td><td>0.55</td><td>0.16</td></tr><tr><td>40</td><td>43.41</td><td>Ni</td><td>1769</td><td>-</td><td>1.84</td><td>0.09</td></tr><tr><td>41</td><td>48.11</td><td>Sclareno</td><td>1978</td><td>1974</td><td>1.50</td><td>0.19</td></tr><tr><td colspan="4">Monoterpenos Hidrocarbonados (%)</td><td colspan="3">38.10</td></tr><tr><td colspan="4">Sesquiterpenos Oxigenados (%)</td><td colspan="3">10.34</td></tr><tr><td colspan="4">Sesquiterpenos Hidrocarbonados (%)</td><td colspan="3">45.14</td></tr><tr><td colspan="4">Diterpenos (%)</td><td colspan="3">1.50</td></tr><tr><td colspan="4">Total identificado (%)</td><td colspan="3">95.08</td></tr></table>

Nota: TR, Tiempo de retención; a, Índices de retención lineal experimental de la columna DB-5MS; b, Índices de retención lineal de literatura (Adams, 2017); c, Porcentaje relativo promedio de tres destilaciones; d, Desviación estándar; Ni: Compuestos no identificados

## Inhibición de las colinesteras

<table><caption>Tabla N° 2
Inhibición AChE y BuChE del aceite esencial de *Piper arboreum*.</caption><thead><tr><td>Muestra</td><td>AChE (CI<sub>50</sub> g/mL±SD)</td><td>BuChE (CI<sub>50</sub> g/mL±SD)</td></tr></thead><tbody><tr><td>Aceite esencial de <i>P. arboreum</i></td><td>101,1 ± 15,2</td><td>29,3 ± 3,3</td></tr><tr><td>Donepezil</td><td>0.04 ± 0,01</td><td>3,60 ± 0,02</td></tr></tbody></table>

Nota: CI<sub>50</sub> es Concentración inhibitoria media máxima expresada en µg/mL

El aceite esencial de *P. arboreum* mostró una actividad inhibidora débil (IC<sub>50</sub> = 101,1 ± 15,2 µg/mL) frente a la enzima AChE; sin embargo, presentó una alta actividad inhibidora frente a BuChE con un valor IC<sub>50</sub> de 29,3 ± 3,3 µg/mL. El donepezil utilizado como sustancia de referencia para la inhibición de las dos enzimas ChEs evaluadas mostró un valor de inhibición CI<sub>50</sub> de 0.04 µg/mL frente a AChE y un valor CI<sub>50</sub> de 3.6 µg/mL frente a BuChE.

## DISCUSIÓN

En el análisis del AE de *Piper arboreum*, se identificaron un total de 41 compuestos que representa el 95,08% del total del aceite, el tipo de compuestos químicos presentes en mayor abundancia fueron los sesquiterpenos (55.49%), mientras que en menor cantidad se encuentran los monoterpenos (38.10%). Los compuestos mayoritarios del AE son el limoneno (31,46%), β-selineno (12,01%), (E)-cariofileno (7,53%), biciclogermacreno (6,72%), germacreno D (3,83%), β-elemeno (3,63%).

En estudios precedentes realizados, el AE de las hojas de *Piper arboreum* colectadas en Pernambuco-Brasil, se caracteriza por presentar compuestos sesquiterpenoides como componentes principales del aceite, siendo los mayoritarios el δ-cadineno, β-cariofileno, germacreno D y biciclogermacreno (Nascimento et al., 2015). El predominio de sesquiterpenos como compuestos mayoritarios también ha sido determinado para el AE de *P. arboreum* colectada en el Instituto de Química (UNESP) en Araraquara-Brasil, entre ellos el β-cariofileno, germacreno D y biciclogermacreno son los principales (Andréia de A. Morandim, 2006). Así mismo, para el AE de *P. arboreum* de Panamá se ha reportado como mayoritarios los compuestos, δ-cadinene, α-copaeno y germacreno D (Mundina, 1988). Al igual que los aceites esenciales (AEs) de *Piper arboreum* estudiados en diferentes países, en el AE de *P. arboreum* de Ecuador también se confirma el predominio de compuestos sesquiterpenos frente a los monoterpenos, sin embargo, en la especie ecuatoriana el compuesto que se encuentra en mayor
quantity (%) is the Limoneno, lo que permitiría diferenciarlo de los aceites de otras localidades.

En el ensayo *in vitro* de inhibición de las enzimas colinesterasas (BuChE y AChE), el AE de *P. arboreum* exhibió una actividad selectiva inhibitoria contra BuChE. Lo cual podría estar vinculado con su composición química y el efecto sinérgico o antagónico que ejercen entre sí dichos componentes para lograr o no un mecanismo específico de inhibición (Espinosa *et al.*, 2019; Salinas *et al.*, 2020). La inhibición de BuChE y AChE es de gran interés para el estudio del tratamiento o relentizacion de la enfermedad del Alzheimer (Dhivya *et al.*, 2014) y otras enfermedades neurodegenerativas. La actividad inhibitoria del AE de *Piper arboreum* para las dos enzimas no ha sido descrita previamente en la literatura existente y nuevos estudios para establecer su potencial uso farmacológico son necesarios (Armijos *et al.*, 2020). En un cerebro normal, la AChE representa el 80% de la actividad, mientras que la BuChE representa el 20% restante (Greig *et al.*, 2001). En los cerebros de pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA), la actividad de BuChE aumenta, mientras que la actividad de AChE permanece sin cambios o disminuye. Se ha demostrado que la inhibición selectiva de BuChE no solo aumenta significativamente el nivel de acetilcolina sino que también mejora la memoria en ratas de edad avanzada (Ayaz *et al.*, 2015). Por lo tanto, los inhibidores selectivos de BuChE derivados de plantas (compuestos químicos, extractos o AEs),

se buscan activamente en diferentes laboratorios para probar su efecto farmacológico.

## CONCLUSIONES

La composición química y actividad biológica del aceite esencial de las hojas de *P. arboreum* de Ecuador ha sido reportada por primera vez, 41 compuestos que representan el 95.08% total del aceite han sido identificados, en el AE han predominando los compuestos sesquiterpenos. Los compuestos mayoritarios fueron el limoneno (31,46%), β-selineno (12,01%), (E)-cariofileno (7,53%), biciclogermacreno (6,72%), germacreno D (3,83%), β-elemeno (3,63%). En el estudio para determinar la actividad inhibitoria de las enzimas colinesterasas (BuChE y AChE), el AE presentó una marcada inhibición contra BuChE con un valor $CI_{50}$ de 29,3 ± 3,3 µg/mL, por el contrario, no presento actividad de inhibición fente a AChE. Por la interesante actividad de inhibición selectiva frente a BuChE el AE de *P. arboreum* se puede considerar como un candidato idóneo en estudios relacionados con el descubrimiento de sustancias naturales que permitan mejorar la calidad de vida de personas con Alzheimer.

## AGRADECIMIENTOS

Estamos agradecidos con el programa de maestría en Química Aplicada de la Universidad Particular de Loja, Ecuador, por su apoyo para realizar la presente investigación.

## REFERENCIAS

- Adams RP. 2017. *Identification of essential oil components by gas chromatography/mass spectroscopy*. Allured Pub. Corp., Illinois, USA.

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