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# L'histopathologie dans la maladie du greffon contre l'hôte (GVH) recto-colique : critères diagnostiques et pronostiques sur une cohorte de patients du CHU d'Amiens

Benjamin Ducloux-Lebon

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To cite this version:

Benjamin Ducloux-Lebon. L'histopathologie dans la maladie du greffon contre l'hôte (GVH) recto-colique : critères diagnostiques et pronostiques sur une cohorte de patients du CHU d'Amiens. Médecine humaine et pathologie. 2022. dumas-04060345

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Submitted on 6 Apr 2023

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UNIVERSITE DE PICARDIE JULES VERNE

Faculté de Médecine d'Amiens

Année 2022

N°2022-149

L'HISTOPATHOLOGIE DANS LA MALADIE DU
GREFFON CONTRE L'HOTE (GVH) RECTO-
COLIQUE.

CRITERES DIAGNOSTIQUES ET
PRONOSTIQUES SUR UNE COHORTE DE
PATIENTS DU CHU D'AMIENS.

THESE DE DOCTORAT EN MEDECINE
ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES
DIPLOME D'ETAT

PRESENTEE ET SOUTENUE PUBLIQUEMENT

LE 14 OCTOBRE 2022

PAR

BENJAMIN DUCLOUX-LEBON

Né le 29 août 1994

PRESIDENT DU JURY : Monsieur le Professeur Henri SEVESTRE

MEMBRES DU JURY : Monsieur le Professeur Jean-Pierre MAROLLEAU
Monsieur le Professeur Mathurin FUMERY
Monsieur le Docteur Jean-René TESSON

DIRECTEUR DE THESE : Monsieur le Professeur Denis CHATELAIN
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Monsieur le Professeur Henri SEVESTRE

Professeur d'Anatomie et de Cytologie Pathologiques à l'UFR de Médecine d'Amiens

Ancien chef du service d'Anatomie et Cytologie Pathologiques du CHU d'Amiens

Médecin de l'Institut de Pathologie des Hauts de France

Vous me faites l'honneur de présider ce jury,

Je vous remercie pour ces années de bienveillance, d'avoir toujours été disponible et à l'écoute,
même pour les causes perdues comme ma voiture.

Je vous témoigne ma profonde et respectueuse reconnaissance.
Monsieur le Professeur Jean-Pierre MAROLLEAU

Professeur des Universités-Praticien Hospitalier
(Hématologie, transfusion)

Chef du service d'hématologie clinique et de thérapie cellulaire

Chef du Pôle « Oncopôle »

Vous me faîtes l'honneur de juger ce travail. Merci pour votre disponibilité. Recevez ici
l'expression de ma sincère reconnaissance et de mon respect.
Monsieur le Professeur Denis CHATELAIN

Professeur des Universités-Praticien Hospitalier

(Anatomie et cytologie pathologique)

Chef du Service d>Anatomie et Cytologie Pathologiques du CHU d'Amiens Picardie

Merci à toi pour ton aide tout au long de ce travail, pour ta rigueur et ta disponibilité. Je te remercie également pour toutes ces années de pédagogie, de crêpes et de tournois de ping-pong qui participent à la bonne humeur et à la cohésion dans l'équipe.

Merci de m'avoir appris qu'un bon anapath est celui qui connait ses limites.
Monsieur le Professeur Mathurin FUMERY

Professeur des Universités – Praticien Hospitalier

(Gastro-entérologie)

Vous me faîtes l'honneur de juger ce travail. Merci pour votre disponibilité. Recevez ici
l'expression de ma sincère reconnaissance et de mon respect.
Monsieur le Docteur Jean-René TESSON

Assistant spécialiste

(Anatomie et Cytologie Pathologiques)

Merci à toi d'avoir accepté d'inaugurer tes premiers pas comme membre de jury pour ma thèse.

Que dire, si ce n'est que l'anapath serait bien morne sans notre JR, roi des caprins et star
instagram. Je te remercie pour ces années d'amitié et les autres à venir, pour ta disponibilité,
ta pédagogie, malgré des sollicitations trop fréquentes pour être raisonnable pour ma
participation au foot.

J'ai énormément appris grâce à toi et je t'en remercie.
## Remerciements

A ma Juju, merci d'être toujours là avec moi dans les bons et les mauvais moments. Merci de me suivre dans mes bizarreries. Merci pour tout ce temps parcouru ensemble et d'être la femme qui est tous les jours à mes côtés. Je t'aime.

Au docteur Lebon et au docteur Dujardin que je remercie pour l'aide apportée au recueil de données.

A Carole, merci d'avoir partagé vos connaissances pendant toutes ces années et de m'avoir appris à faire des niveaux.

A Jean Fortuné, merci pour votre bonne humeur et vos éclats de rire.

A « Monsieur Attencourt ! », merci pour toutes ces années d'apprentissage, ta fibre écolo et nos quelques heures communes au potager.

A Nelly, toujours là pour m'écouter me plaindre, merci pour ta gentillesse, les galettes de riz et pour ces années d'amitié.

A Estelle, avec qui j'ai réalisé mes premiers pas en anapath, c'est toujours un plaisir de pouvoir discuter avec toi.

A Amine, maître de l'hémato et de la répartie, merci pour les bons moments et tu peux m'inviter à nouveau au restaurant quand tu veux.

A Pierre, je pense que tu garderas le record de l'aîné des internes d'anapath. J'espère pouvoir rebosser bientôt avec toi !

A Robin, les petites discussions jeux vidéo sont toujours un plaisir et je te souhaite plein de bonheur dans ta nouvelle aventure familiale.

A Arnaud, je sais qu'on peut toujours compter sur toi. Merci pour ton rire communicatif et de rigoler à tous mes memes ! Compagnon de galère jusqu'au bout même dans les statistiques.
A Amel, qui m'a vu débuter mes premiers remplacements, j'espère que tu garderas contact avec la famille Amiénoise.

A Maman Clémence, la gentillesse incarnée.

A Quentin, c'est un plaisir d'être ton co-interne, continue les Dad joke, ce sont les meilleures.

A Clémence, avec qui j'aime bien papoter et qui restera toujours la petite Clémence.

A Marion, ce fut un plaisir de faire ce semestre à Beauvais avec toi même si ta conduite a failli nous tuer plusieurs fois.

A Axel, qui présente de belles compétences en anapath et encore meilleures en moto cross (oui j'ai revu tes vidéos youtube en écrivant ceci).

A Marine et Olivier, que je n'ai pas beaucoup vu pour leur première année et que j'espère voir un peu plus l'année prochaine.

A Dom, merci pour ta gentillesse, toujours présent pour nous et pour dire au revoir.

A Isabelle, mon premier bonjour du matin, toujours gentille et attentionnée.

A toute l'équipe de techniciens (Chloé, Louis-Victor, Richard, Mahé, Elodie, Christine, Marie-Pierre, Valentine, Ahmed, Cathy, Christine, Elise, Florine, Mathieu, Léa, Morgan) et aux secrétaires (Mathilde, Dorothée, Sophie et Catherine) : merci pour votre bonne humeur et pour tous les bons moments, vous êtes une super équipe.

A Alexandra, Thomas, Philippe, Agnès, Céline et l'équipe d'Ipath, merci pour votre confiance, votre gentillesse et pour ce stage passé chez vous.

A mes parents, merci d'avoir été là et cru en moi tout au long de ces études.

A mes grand-mères qui m'ont toujours soutenues.
A Valentin et Pauline, mes lyonnais préférés, je suis heureux de vous avoir près de moi pour cet évènement.

A Claude et André que j'aurai aimé avoir à mes côtés pour ce moment.

A Nicole, merci pour ton soutien et ta présence.

A Michel, Marguerite et Sylvie qui m'ont toujours soutenu.

A Nico et Marina, une amitié qui dure depuis si longtemps que vous êtes comme ma famille.

A la troupe de PF (Guigui, Geo, Adeline, Valentin, Maud, Camille, Anaïs, Sonny, Lucille et Romain), pour toujours les copains de galère, je vous aime.

A Seb, coéquipier d'avion en papier, en lancer de balle et en jeux vidéo, ce stage n'aurait pas été pareil sans toi !

A Marc et Anne, je pense que je peux dire que j'ai les meilleurs beaux-parents, merci pour tout.

A Sophie et Rémi, mes « presque voisins » préférés, que je prendrais plaisir à voir plus souvent.

A l'équipe de biologie moléculaire que je remercie pour son accueil.

A Alexis et Louis avec qui j'ai passé de bons moments en stage.

A tous ceux que j'ai malheureusement oublié de mentionner.

A Maple et Zelda, mes bêtes préférées.

Pour finir :

*Victoriae mundis et mundis lacrima. Bon, ça ne veut absolument rien dire, mais je trouve que c'est assez dans le ton.* << Loth >>
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# LISTE DES ABREVIATIONS UTILISEES

GVH : Graft-versus-Host disease

LAM : Leucémie aiguë myéloïde

LAL : Leucémie aiguë lymphoïde

LLC : Leucémie lymphoïde chronique

HE : Hématéine-Eosine

HES : Hématéine-Eosine-Safran

CMV : Cytomégalovirus

RIC : Reduced intensity conditioning

MAC : Myeloablative conditioning

RTC : Reduced toxicity conditioning

PNN : Polynucléaire neutrophile

PNE : Polynucléaire éosinophile

CA : Corps apoptotique

GVL : Graft-versus-leukemia

LPS : Lipopolysaccharide

PAMPS : Pathogen Associated Molecular Patterns
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Table des matières

<table><tr><td>I- INTRODUCTION</td><td>17</td></tr><tr><td>II- MATERIEL ET METHODE</td><td>18</td></tr><tr><td>1. Sélection des cas et recueil de données</td><td>18</td></tr><tr><td>2. Considérations éthiques :</td><td>19</td></tr><tr><td>3. Méthodologie statistique</td><td>20</td></tr><tr><td>III- RESULTATS</td><td>21</td></tr><tr><td>1. Analyse descriptive</td><td>21</td></tr><tr><td>2. Analyse comparative</td><td>25</td></tr><tr><td>3. Analyse de la survie en fonction des différents critères histologiques</td><td>35</td></tr><tr><td>IV- DISCUSSION</td><td>37</td></tr><tr><td>1. Généralités sur l'allogreffe</td><td>37</td></tr><tr><td>a) Historique</td><td>37</td></tr><tr><td>b) Principes et généralités</td><td>38</td></tr><tr><td>c) Epidémiologie</td><td>39</td></tr><tr><td>2. Complications de la greffe</td><td>40</td></tr><tr><td>a) La maladie du greffon contre l'hôte (ou Graft-versus-Host Disease)</td><td>40</td></tr><tr><td>b) Complications infectieuses et autres :</td><td>41</td></tr><tr><td>c) Physiopathologie de la GVH</td><td>41</td></tr><tr><td>3. Histologie dans la GVH recto-colique :</td><td>42</td></tr><tr><td>V- CONCLUSION</td><td>50</td></tr><tr><td>VI- REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES</td><td>51</td></tr><tr><td>VII- ANNEXES</td><td>56</td></tr></table>
# I- INTRODUCTION

La maladie du greffon contre l'hôte (GVH, pour Graft-Versus-Host disease) est une des complications de la greffe de moelle hématopoïétique [1,2]. Elle est caractérisée par une agression des cellules immunocompétentes du donneur vis à vis des tissus de l'hôte, générant principalement des manifestations cliniques digestives, hépatiques et cutanées [3-5]. Il s'agit d'une complication fréquente et grave de la greffe de moelle, avec une morbi-mortalité élevée [6-8].

Le diagnostic de GVH est difficile et repose sur une confrontation clinique, biologique, microbiologique et anatomo-pathologique [8]. La lésion anatomo-pathologique majeure, évocatrice d'une localisation digestive d'une GVH, consiste en la mise en évidence à l'examen microscopique de corps apoptotiques (CA) sur les biopsies des muqueuses œsophagienne, gastrique, grêle, mais surtout colique [8-10]. Toutefois, la présence de corps apoptotiques sur une biopsie digestive n'est pas spécifique de la GVH, ces derniers pouvant être observés dans certains pathologies infectieuses digestives comme l'infection à Cytomégalovirus ou entrer dans le cadre d'une entéropathie médicamenteuse. Les critères diagnostiques anatomo-pathologiques de GVH sont encore flous, plus ou moins reproductibles, et variables en fonction des études, sur le nombre de corps apoptotiques à évaluer sur l'ensemble des biopsies, par fragment tissulaire, ou pour 10 cryptes contiguës [8-12].

L'objectif de notre étude, était, à partir d'une série rétrospective de malades greffés médullaires ayant eu des biopsies digestives, avec un diagnostic de certitude de GVH ou de non GVH, d'évaluer divers critères histologiques pouvant aider au diagnostic anatomo-pathologique de la GVH recto-colique, et de préciser leur intérêt pronostique.
## II- MATERIEL ET METHODE

### 1. Sélection des cas et recueil de données

Tous les malades ayant reçu une greffe de moelle hématopoïétique du 1er janvier 2012 au 31 décembre 2017 ont été recensés. Tous les patients ayant eu des biopsies colo-rectales, avec un diagnostic final clinico-biologique de GVH ou de non GVH ont été inclus dans l'étude.

Les lames histologiques et immunohistochimiques correspondant aux patients inclus dans l'étude sont issues des archives du Service d'Anatomie et Cytologie Pathologiques du CHU d'Amiens.

Collecte des données :

Les données cliniques suivantes ont été recueillies à partir des logiciels Diamic et Dxcare :

- Le sexe

- L'âge du patient

- La pathologie hématologique

- L'état de la pathologie hématologique avant l'allogreffe

- Le type de donneur

- Le type de conditionnement

- La date d'allogreffe

- La date de décès

- La confirmation ou non du diagnostic de GVH après résultat anatomopathologique et confrontation clinico-biologique

- Le type de GVH diagnostiquée

Une relecture histologique des lames a été réalisée par deux pathologistes pour évaluer les critères suivants :

- La localisation de la biopsie

- Le nombre de biopsies analysées

- Le nombre de niveaux analysés

- La présence ou non d'un marquage nucléaire de cellules par l'anticorps anti-CMV en immunohistochimie

- La présence ou non d'un chorion inflammatoire lympho-plasmocytaire

- Le nombre de polynucléaires neutrophiles sur un champ au grossissement x400 au sein du chorion
- La présence ou non de cryptite à polynucléaires neutrophiles

- Le nombre de polynucléaires éosinophiles sur un champ au grossissement x400 au sein du chorion

- La présence de glandes régénératives

- La présence ou non de cryptes festonnées

- Le nombre de glandes bordées de cellules éosinophiles

- Le pourcentage d'ulcération

- La présence ou non de bourgeon charnu

- La présence ou non d'une désorganisation architecturale

- Le pourcentage d'atrophie (diminution du volume glandulaire)

- Le nombre de cellules de Paneth sur un champ au grossissement x200

- Le nombre de biopsies comportant des CA

- Le nombre de CA sur coloration Hématéine-Eosine pour 10 cryptes contiguës

- Le nombre de CA après étude immunohistochimique par l'anticorps anti-Caspase 3 pour 10 cryptes contiguës

- Le nombre d'abcès cryptolytiques à CA (glande détruite bordée de cellules apoptotiques avec des corps apoptotiques dans sa lumière).

Les cas n'ayant eu qu'une coloration standard (Hématéine-Eosine (HE) ou Hématéine-Eosine-Safran (HES)) ont été complétés par des techniques complémentaires, à l'aide d'un automate BenchMark Ultra™ (Ventana), avec les anticorps CMV (clone CCH2-DD09 ; Dako (Agilent), prédilué) et Caspase-3 (polyclonal, Diagomics, dilution : 1/50).

## 2. Considérations éthiques :

Toutes les données de ce projet de recherche étaient archivées dans une base de données pseudonymisée (type Excel), au sein d'un espace collaboratif en ligne sécurisé, avec contrôle des accès et traçabilité des opérations liées aux données (conformément au Règlement Général sur la Protection des Données (RGPD) et la Méthodologie de Référence n°4 de la CNIL). Cet espace a été fourni par la Direction des Services Numériques (DSN) du Centre hospitalo-universitaire Amiens-Picardie, conformément aux règles de la commission d'évaluation des projets hors Loi Jardé de la DRCI. Ce travail a été enregistré au registre interne de la DRCI, sous le numéro d'enregistrement PI2022_843_0123.
### 3. Méthodologie statistique

L'analyse statistique a été réalisée à l'aide du logiciel R version 3.3.1 et R studio version 1.0.143.

Nous avons d'abord réalisé une analyse descriptive afin de caractériser l'échantillon de patients à l'aide des variables suivantes :

- Age au moment de la greffe

- Sexe

- Biopsies recto-coliques post-greffe

- Pathologie ayant motivée l'allogreffe

- Etat de la maladie avant l'allogreffe

- Type de donneur

- Type de conditionnement

- Type de GVH diagnostiquée

Lors des analyses croisées, le test utilisé dépendait du type de variable :

- Lorsque nous avons croisé deux variables qualitatives, nous avons utilisé un test du Chi2 sur les effectifs théoriques supérieurs à 5 et un test de Fischer dans le cas contraire. Les résultats, lorsque nous avons utilisé ce test, sont sous la forme d'effectifs (pourcentage par colonne).

- Lorsque nous avons croisé une variable quantitative selon deux groupes de taille supérieure à 30, nous avons utilisé un test de Student pour échantillons indépendants et un test de Mann Whitney dans le cas contraire. Les résultats sont sous la forme de moyenne ± écart type.

- Une analyse par courbes ROC a été réalisée pour le nombre de corps apoptotiques et le diagnostic de GVH.

Pour étudier les variables histologiques liées à la survie, nous avons utilisé un modèle de Cox univarié. Une analyse par courbe ROC a été réalisée pour le nombre de corps apoptotiques et la survie.
III- RESULTATS

1. Analyse descriptive

214 patients ont été allogreffés entre 2012 et 2017.

119 patients ont bénéficié d'une biopsie recto-colique post-greffe sur les 214 patients allogreffés soit 55,6% d'entre eux, sur lesquels a porté l'étude statistique (tableau 1).

67 patients ont été répartis dans le groupe « GVH » ayant eu une biopsie recto-colique avec au final un diagnostic clinico-biologique de GVH et 52 patients ont été répartis dans le groupe « non GVH », ayant eu une biopsie recto-colique sans qu'au final ne soit retenu un diagnostic clinico-biologique de GVH (tableau1) (pour 10 patients un diagnostic histologique éventuellement compatible avec une GVH avait pourtant été évoqué du point de vue anatomo-pathologique, mais non retenu cliniquement au final).

La population totale était composée de 32 femmes (26,89%) et 87 hommes (73,11%). L'âge moyen au moment de la greffe était de 51,85 ans avec un écart-type de 10,6 ans. L'âge minimum était de 22 ans et l'âge maximum de 72 ans. L'âge médian était de 52 ans (tableau 1).

La majeure partie des patients avait été greffés pour une LAM (leucémie aiguë myéloblastique) (28,57%), une LAL (leucémie aiguë lymphoblastique) (15,13%), une myélofibrose (12,6%) ou une myélodysplasie (10,08%) (tableau 1).

La pathologie avant la greffe était en rémission complète pour 48,74% des patients ou en rémission partielle (27,73%).

Les principaux types de donneur étaient phéno-identiques 10/10 (52,10%) et géno-identiques (28,57%).

Le conditionnement à l'allogreffe était essentiellement de type RIC (reduced intensity chemotherapy) (52,94%), correspondant à un conditionnement d'intensité réduite, et de type séquentiel (26,9%) avec une chimiothérapie au préalable pour contrôler la maladie.

Une analyse avec l'anticorps anti-CMV sur l'ensemble des biopsies n'a pas retrouvé de marquage nucléaire de l'anticorps témoignant d'une infection au CMV.

Au sein des groupes GVH et non GVH, la population était composée principalement d'hommes (77,61% et 67,31%) (tableau 1). L'âge moyen était similaire (51,77 ans et 52,18 ans en moyenne). La LAM était la pathologie la plus représentée (22,39% et 36,53%). Les pathologies étaient le plus souvent en rémission complète dans les 2 groupes (38,81 % et 61,53%). On observait principalement des donneurs phéno-identiques 10/10 (61,19%) au sein du groupe GVH alors que dans le groupe non GVH, on observait en quantité similaire des donneurs phéno-identiques 10/10 (40,38%) et géno-identiques (38,47%).
Au sein du groupe GVH (tableau 1 et figure 2), 58% des malades présentaient une GVH aiguë (n=39), 9% une GVH aiguë persistante (n=9), 31% une GVH chronique (n=21) et 2% (n=1) un overlap syndrome (signes aigues et chroniques de GVH).

<table><thead><tr><th>Caractéristiques des patients</th><th>Population totale</th><th>Groupe GVH</th><th>Groupe non GVH</th></tr></thead><tbody><tr><td>Nombre total (n, %)</td><td>119 (100)</td><td>67 (56,30)</td><td>52 (43,70)</td></tr><tr><td>Sexe (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Femme :</td><td>32 (26,89)</td><td>15 (22,39)</td><td>17 (32,69)</td></tr><tr><td>- Homme :</td><td>87 (73,11)</td><td>52 (77,61)</td><td>35 (67,31)</td></tr><tr><td>Age (moyenne en année, écart-type, intervalle minimum-maximum, médiane)</td><td>51,85 (10,86) [22-72] 52</td><td>51,77 (11,61) [25-72] 50,5</td><td>52,18 (8,75) [22-66] 53</td></tr><tr><td>Pathologie (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- LAM</td><td>34 (28,57)</td><td>15 (22,39)</td><td>19 (36,53)</td></tr><tr><td>- LAL</td><td>18 (15,13)</td><td>8 (11,94)</td><td>10 (19,23)</td></tr><tr><td>- Myélofibrose</td><td>15 (12,61)</td><td>10 (14,93)</td><td>5 (9,62)</td></tr><tr><td>- Myélodysplasie</td><td>12 (10,08)</td><td>10 (14,93)</td><td>2 (3,84)</td></tr><tr><td>- Lymphome B</td><td>11 (9,24)</td><td>6 (8,95)</td><td>5 (9,62)</td></tr><tr><td>- Syndrome myéloprolifératif</td><td>9 (7,56)</td><td>7 (10,45)</td><td>2 (3,84)</td></tr><tr><td>- LA biphénotypique</td><td>6 (5,04)</td><td>3 (4,48)</td><td>3 (5,77)</td></tr><tr><td>- Myélome</td><td>6 (5,04)</td><td>5 (7,46)</td><td>1 (1,93)</td></tr><tr><td>- Lymphome T</td><td>4 (3,36)</td><td>1 (1,49)</td><td>3 (5,77)</td></tr><tr><td>- LLC</td><td>2 (1,68)</td><td>2 (2,98)</td><td>0 (0)</td></tr><tr><td>- Lymphome de Hodgkin</td><td>2 (1,68)</td><td>0 (0)</td><td>2 (3,85)</td></tr><tr><td>Etat de la maladie avant allogreffe (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Non traitée</td><td>13 (10,92)</td><td>12 (17,91)</td><td>1 (1,93)</td></tr><tr><td>- Rémission partielle</td><td>33 (27,73)</td><td>20 (29,85)</td><td>13 (25)</td></tr></tbody></table>
<table><caption>**Tableau 1 : Analyse descriptive des caractéristiques de la population**</caption><tbody><tr><td>- Rémission complète</td><td>58 (48,74)</td><td>26 (38,81)</td><td>32 (61,53)</td></tr><tr><td>- Réfractaire primaire</td><td>6 (5,04)</td><td>3 (4,48)</td><td>3 (5,77)</td></tr><tr><td>- Rechute</td><td>9 (7,56)</td><td>6 (8,95)</td><td>3 (5,77)</td></tr><tr><td>Type de donneur (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Génoidentique</td><td>34 (28,57)</td><td>14 (20,90)</td><td>20 (38,47)</td></tr><tr><td>- Phénoidentique 10/10</td><td>62 (52,10)</td><td>41 (61,19)</td><td>21 (40,38)</td></tr><tr><td>- Phénoidentique mismatch 9/10</td><td>23 (19,33)</td><td>12 (17,91)</td><td>11 (21,15)</td></tr><tr><td>Type de conditionnement (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- RIC</td><td>63 (52,94)</td><td>41 (61,19)</td><td>22 (42,37)</td></tr><tr><td>- Séquentiel</td><td>32 (26,90)</td><td>17 (25,38)</td><td>15 (28,85)</td></tr><tr><td>- Standard (MAC)</td><td>12 (10,08)</td><td>3 (4,48)</td><td>9 (7,56)</td></tr><tr><td>- Toxicité réduite (RTC)</td><td>12 (10,08)</td><td>6 (8,95)</td><td>6 (5,04)</td></tr><tr><td>Type de GVH diagnostiquée (n, %) :</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Aigüe</td><td></td><td>39 (58)</td><td></td></tr><tr><td>- Aigüe tardive</td><td></td><td>6 (9)</td><td></td></tr><tr><td>- Chronique</td><td></td><td>21 (31)</td><td></td></tr><tr><td>- Overlap syndrome</td><td></td><td>1 (2)</td><td></td></tr></tbody></table>
<figure><img src="image_8.png" /><figcaption>**Figure 1 :** Détail des pathologies indiquant la greffe sur la population totale</figcaption></figure>

<figure><img src="image_9.png" /><figcaption>**Figure 2 :** Répartition des types de GVH diagnostiqués</figcaption></figure>
## 2. Analyse comparative

Concernant les biopsies recto-coliques, nous avons réalisé une étude comparative entre les groupes GVH et non GVH (tableau 2).

Il n'existait pas de différence significative sur la localisation du site biopsique entre les 2 groupes (p=0,779). Dans les 2 groupes, le site colique était majoritairement non précisé (57,7% pour le groupe non GVH et 61,2% pour le groupe GVH). Lorsque le site était précisé, les biopsies intéressaient principalement le rectum (30,9% pour le groupe non GVH et 25,4% dans le groupe GVH).

Il n'était pas observé de différence significative sur le nombre de prélèvements biopsiques entre les 2 groupes (p=0,407).

Pour le nombre de niveaux de coupes, les biopsies du groupe non GVH avaient significativement été analysées sur plus de niveaux de coupes (4,02 ± 2,67 avec **p=0,045**) que les biopsies du groupe GVH (3,09 ± 2,17), soulignant le fait que des signes histologiques de GVH en rapport avec un diagnostic anatomo-pathologique de localisation digestive d'une GVH avaient été recherchés avec encore plus d'attention par le pathologiste sur ces cas avec un diagnostic clinique retenu au final « sans GVH ».

Pour l'inflammation, il n'existait pas de différence significative entre les 2 groupes concernant la présence d'un chorion inflammatoire lympho-plasmocytaire (p=0,434) (figure 3), le nombre de polynucléaires neutrophiles (PNN) (p=0,263) et de polynucléaires éosinophiles (p=0,681) (PNE) sur un champ au grossissement x400 au sein du chorion (figure 4) et la présence de lésions de cryptite à PNN (p=0,112).

<figure><img src="image_10.png" /><figcaption>**Figure 3** : Augmentation du nombre de lymphocytes et plasmocytes au sein du chorion (flèche noire) (HEx100).</figcaption></figure>
<figure><img src="image_11.png" /><figcaption>**Figure 4 :** Polynucléaires éosinophiles (flèches noires) et polynucléaire neutrophile (flèche blanche au sein du chorion (HEx400).</figcaption></figure>

Il existait des glandes régénératives (figure 5) sur 40,0% des biopsies du groupe GVH contre 9,6% des biopsies du groupe non GVH, la différence étant statistiquement significative (p<0,001).

<figure><img src="image_12.png" /><figcaption>**Figure 5 :** Glandes régénératives caractérisées par des cellules au cytoplasme basophile, une diminution de la mucisécrétion, des atypies nucléaires modérées (flèche blanche) et des figures de mitoses (flèches noires) (HEx200)</figcaption></figure>
Il n'était pas mis en évidence de différence significative sur la présence de glandes festonnées entre les 2 groupes (p=0,064).

Concernant les glandes bordées de cellules éosinophiles (figure 6), elles n'étaient pas observées sur les biopsies du groupe non GVH, contrairement aux biopsies du groupe GVH qui en présentaient en moyenne 1,33 avec un écart type de 2,82. La différence étant statistiquement significative (p<0,001).

<figure><img src="image_13.png" /><figcaption>**Figure 6 :** Glandes bordées de cellules éosinophiles (flèches noires) (HEx200)</figcaption></figure>

Il n'y avait pas de différence entre les 2 groupes concernant la présence d'ulcérations de la muqueuse (p=0,152) ni sur la présence de bourgeons charnus (p=0,064) (figure 7).

<figure><img src="image_14.png" /><figcaption>**Figure 7 :** Ulcération avec exsudats fibrino-leucocytaires (flèche noire) et bourgeon charnu (flèche blanche) (HEx100).</figcaption></figure>
Une désorganisation architecturale des glandes (figure 8) était présente chez 59,7% des biopsies du groupe GVH contre 21,2% des biopsies du groupe non GVH, la différence étant statistiquement significative (p<0,001).

Le pourcentage d'atrophie de la muqueuse avec diminution du volume glandulaire (figure 8) sur les biopsies du groupe GVH (17,99 ± 21,48) était en moyenne plus élevé que sur les biopsies du groupe non GVH (2,60 ± 6,53). La différence étant significative (p<0,001).

<figure><img src="image_15.png" /></figure>

**Figure 8 :** A gauche, la désorganisation architecturale est mise en évidence par une bifurcation glandulaire (flèche noire) (HEx100). A droite, l'atrophie se caractérise par une diminution du volume glandulaire (flèche blanche) (HEx100).

Il n'a pas été mis en évidence de différence significative sur le nombre de cellules de Paneth bordant les cryptes (figure 9) entre les 2 groupes (p=0,074).

<figure><img src="image_16.png" /></figure>

**Figure 9 :** Cellules de Paneth (flèches noires) (HEx200)
<table><caption>**Tableau 2** : Comparaison de critères histologiques entre le groupe GVH et non GVH</caption><thead><tr><th></th><th>Non GVH (N=51)</th><th>GVH (N=67)</th><th>p</th></tr></thead><tbody><tr><td colspan="4"><strong>Localisation</strong></td></tr><tr><td>Caecale</td><td>0 (0,0%)</td><td>1 (1,5%)</td><td></td></tr><tr><td>Colique (non précisé)</td><td>30 (57,7%)</td><td>41 (61,2)</td><td></td></tr><tr><td>Rectale</td><td>16 (30,9)</td><td>17 (25,4)</td><td></td></tr><tr><td>Colique droite</td><td>0 (0,0)</td><td>1 (1,5)</td><td>0,779</td></tr><tr><td>Colique gauche</td><td>3 (5,8)</td><td>4 (6,0)</td><td></td></tr><tr><td>Colique transverse</td><td>0 (0,0)</td><td>2 (3,0)</td><td></td></tr><tr><td>Sigmoïde</td><td>2 (3,8)</td><td>1 (1,5)</td><td></td></tr><tr><td>Recto-sigmoïdien</td><td>1 (1,9)</td><td>0 (0,0)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de biopsies</strong></td></tr><tr><td></td><td>3,08 ± 1,80</td><td>3,36 ± 1,85</td><td>0,407</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de niveaux de coupes</strong></td></tr><tr><td></td><td>4,02 ± 2,67</td><td>3,09 ± 2,17</td><td>0,045</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Présence d'un chorion inflammatoire lympho-plasmocytaire</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>37 (71,2%)</td><td>42 (62,7%)</td><td>0,434</td></tr><tr><td>Oui</td><td>15 (28,8%)</td><td>25 (37,3%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de PNN sur un champ x400 au sein du chorion</strong></td></tr><tr><td></td><td>0,46 ± 1,38</td><td>0,79 ± 1,73</td><td>0,263</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Cryptite à PNN</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>49 (94,2%)</td><td>57 (85,1%)</td><td>0,112</td></tr><tr><td>Oui</td><td>3 (5,8%)</td><td>10 (14,9%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de PNE sur un champ x400 au sein du chorion</strong></td></tr><tr><td></td><td>5,37 ± 10,49</td><td>4,70 ± 7,02</td><td>0,681</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Présence de glandes régénératives</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>47 (90,4%)</td><td>40 (59,7%)</td><td>&lt;0,001</td></tr><tr><td>Oui</td><td>5 (9,6%)</td><td>27 (40,3%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Présence de glandes festonnées</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>49 (94,2%)</td><td>56 (83,6%)</td><td>0,064</td></tr><tr><td>Oui</td><td>3 (5,8%)</td><td>11 (16,4%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de glandes bordées de cellules éosinophiles</strong></td></tr><tr><td></td><td>0,0 ± 0,0</td><td>1,33 ± 2,82</td><td>&lt;0,001</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Ulcération (%)</strong></td></tr><tr><td></td><td>0,38 ± 2,77</td><td>2,09 ± 9,13</td><td>0,152</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Présence de bourgeons charnus</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>49 (94,2%)</td><td>56 (83,6%)</td><td>0,064</td></tr><tr><td>Oui</td><td>3 (5,8%)</td><td>11 (16,4%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Présence d'une désorganisation architecturale</strong></td></tr><tr><td>Non</td><td>41 (78,8%)</td><td>27 (40,3%)</td><td>&lt;0,001</td></tr><tr><td>Oui</td><td>11 (21,2%)</td><td>40 (59,7%)</td><td></td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Pourcentage d'atrophie</strong></td></tr><tr><td></td><td>2,60 ± 6,53</td><td>17,99 ± 21,48</td><td>&lt;0,001</td></tr><tr><td colspan="4"><strong>Nombre de cellules de Paneth sur un champ x200</strong></td></tr><tr><td></td><td>4,77 ± 4,23</td><td>6,34 ± 5,09</td><td>0,074</td></tr></tbody></table>
Nous nous sommes intéressés aux corps apoptotiques (CA) dans le diagnostic de la GVH (tableau 3) :

Sur la coloration standard HES, le nombre de biopsies comportant des CA était significativement plus élevé au sein du groupe GVH (p<0,001). Il était de 0,83 ± 0,73 au sein du groupe non GVH contre 2,79 ± 1,73 biopsies du groupe GVH.

Le nombre de CA sur 10 cryptes sur coloration HE (figure 9) était significativement plus élevé au sein du groupe GVH (p<0,001). 65,4% des biopsies non GVH ne comportaient pas de CA, contre aucune biopsie du groupe GVH. 21,2% des biopsies du groupe non GVH comportaient un CA contre 14,9% des biopsies du groupe GVH. 13,5% des biopsies du groupe non GVH avaient de 2 à 6 CA contre 19,4% des biopsies du groupe GVH. Aucune biopsie du groupe non GVH ne comportait plus de 7 CA alors que 19,4% des biopsies du groupe GVH en comportaient entre 7 et 10 CA, et 46,3% des biopsies avec plus de 10 CA sur 10 cryptes contiguës.

<figure><img src="image_17.png" /><figcaption>**Figure 9** : Corps apoptotiques (flèches noires) (HE x400)</figcaption></figure>

Avec les techniques immunohistochimiques, le nombre de CA sur 10 cryptes contiguës avec l'anticorps anti-Caspase 3 (figure 10), celui-ci permettant de mieux visualiser les cellules apoptotiques, était significativement supérieur dans le groupe GVH (p<0,001). Nous avons choisi de subdiviser par intervalles le nombre de CA de façon similaire à l'étude de Lin et al.[11] 32,7% des biopsies du groupe non GVH ne comportaient aucun CA, alors que toutes les biopsies du groupes GVH comportaient au minimum 1 CA (la présence de CA étant un élément du diagnostic de localisation colique d'une GVH).
26,9% des biopsies du groupe non GVH comportaient un CA contre 4,5% des biopsies du groupe GVH. 40,4% des biopsies du groupe non GVH avaient de 2 à 6 CA contre 13,4% des biopsies du groupe GVH. Aucune biopsie du groupe non GVH ne comportait plus de 7 CA alors que 23,9% du groupe GVH présentaient entre 7 et 10 CA et 58,2% plus de 10 CA.

<figure><img src="image_18.png" /><figcaption>**Figure 10 :** Marquage de corps apoptotiques en immunohistochimie (flèche noire) (anticorps anti-Caspase3 x400)</figcaption></figure>

La présence d'abcès cryptolytiques à CA était significativement supérieur au sein du groupe GVH (p<0,001). Au sein du groupe non GVH, l'absence d'abcès cryptolytique à CA était beaucoup plus fréquente (96.2% des biopsies contre 65,7% dans le groupe GVH (65.7%)). 3,8% des biopsies du groupe non GVH présentaient un abcès cryptolytique contre 19,4% dans le groupe GVH et aucune des biopsies ne comportait plus de 2 abcès cryptolytiques dans le groupe non GVH contre 15,0% des biopsies du groupe GVH.

<figure><img src="image_19.png" /><figcaption>**Figure 11 :** Abcès cryptolytique à CA (flèche noire) (HE x200)</figcaption></figure>
<table><caption>**Tableau 3 :** Comparaison des corps apoptotiques entre le groupe GVH et non GVH</caption><thead><tr><th></th><th>Non GVH (N=51)</th><th>GVH (N=67)</th><th>p</th></tr></thead><tbody><tr><td colspan="4">Nombre de biopsies comportant des CA</td></tr><tr><td></td><td>0,83 ± 0,73</td><td>2,79 ± 1,73</td><td>&lt;0,001</td></tr><tr><td colspan="4">Nombre de CA sur 10 cryptes sur coloration HE</td></tr><tr><td>0</td><td>34 (65,4%)</td><td>0 (0,0%)</td><td rowspan="5">&lt;0,001</td></tr><tr><td>1</td><td>11 (21,2%)</td><td>10 (14,9%)</td></tr><tr><td>2 à 6</td><td>7 (13,5%)</td><td>13 (19,4%)</td></tr><tr><td>7 à 10</td><td>0 (0,0%)</td><td>13 (19,4%)</td></tr><tr><td>&gt;10</td><td>0 (0,0%)</td><td>31 (46,3%)</td></tr><tr><td colspan="4">Nombre de CA sur 10 cryptes avec l'anticorps anti-Caspase 3</td></tr><tr><td>0</td><td>17 (32,7)</td><td>0 (0,0%)</td><td rowspan="5">&lt;0,001</td></tr><tr><td>1</td><td>14 (26,9)</td><td>3 (4,5)</td></tr><tr><td>2 à 6</td><td>21 (40,4)</td><td>9 (13,4)</td></tr><tr><td>7 à 10</td><td>0 (0,0%)</td><td>16 (23,9)</td></tr><tr><td>&gt;10</td><td>0 (0,0%)</td><td>39 (58,2)</td></tr><tr><td colspan="4">Présence d'abcès cryptolytiques à CA</td></tr><tr><td>0</td><td>50 (96,2%)</td><td>44 (65,7%)</td><td rowspan="3">&lt;0,001</td></tr><tr><td>1</td><td>2 (3,8%)</td><td>13 (19,4%)</td></tr><tr><td>2 ou plusieurs</td><td>0 (0%)</td><td>10 (15,0%)</td></tr></tbody></table>

Nous avons réalisé une comparaison du nombre moyen de corps apoptotiques (CA) sur 10 cryptes contiguës découverts sur la coloration standard et sur l'étude immunohistochimique avec l'anticorps anti-caspase 3 sur les groupes GVH et non GVH.

Le nombre de CA sur 10 cryptes avec anticorps anti-caspase 3 était en moyenne de 9,13 [7,34 ; 10,99] et le nombre de CA pour 10 cryptes sur coloration standard était en moyenne de 5,80 [4,46 ; 7,14]. La différence de moyenne du nombre de CA sur 10 cryptes entre la coloration standard et l'analyse avec l'anticorps anti-caspase 3 était significativement différente avec un p<0.005, les intervalles de confiance ne se chevauchant pas.

<table><caption>**Tableau 4 :** Comparaison du nombre de CA sur 10 cryptes entre la coloration HE et l'anticorps anti-Caspase 3</caption><thead><tr><th>Nombre moyen de CA<br>pour 10 cryptes sur<br>coloration standard</th><th>Nombre moyen de CA<br>pour 10 cryptes avec l'anti-<br>Caspase 3</th><th>p</th></tr></thead><tbody><tr><td>5,80 [4,46 ; 7,14]</td><td>9.13[7,34 ; 10,99]</td><td>p&lt;0.005</td></tr></tbody></table>
Le graphique suivant représente la répartition par intervalle du nombre de CA sur 10 cryptes contiguës détectés sur la coloration standard et l'étude immunohistochimique avec l'anticorps anti-Caspase 3 (figure 12).

<figure><img src="image_20.png" /><figcaption>**Figure 12** : Répartition du nombre de CA sur 10 cryptes sur coloration HE et avec l'anticorps anti-Caspase 3.</figcaption></figure>

Nous avons également réalisé une courbe ROC pour le nombre de CA détectés sur la coloration HES et avec l'anticorps anti-Caspase 3 (figure 13) afin de déterminer un nombre seuil de CA permettant d'affirmer le diagnostic de GVH, sur la coloration standard et l'étude immunohistochimique avec l'anticorps anti-Caspase 3.

Pour les 2 techniques, nous avons pu évaluer un nombre seuil similaire de CA à 3,5 permettant de distinguer le groupe GVH du groupe non GVH.

Néanmoins, il existait une meilleure spécificité (98%) pour le nombre de CA détectés sur la coloration HES (contre 92% avec l'anticorps anti-Caspase 3). La sensibilité était plus importante (95%) avec l'anticorps anti-Caspase 3 qu'avec la coloration HES (74%).
<figure><img src="image_21.png" /></figure>

<table><thead><tr><th colspan="3">Coloration HE</th></tr><tr><th>Threshold</th><th>Sensibilité</th><th>Spécificité</th></tr></thead><tbody><tr><td>3,5</td><td>0.7462687</td><td>0.9807692</td></tr></tbody></table>

<figure><img src="image_22.png" /></figure>

<table><thead><tr><th colspan="3">Anticorps anti-Caspase3</th></tr><tr><th>Threshold</th><th>Sensibilité</th><th>Spécificité</th></tr></thead><tbody><tr><td>3,5</td><td>0.9552239</td><td>0.9230769</td></tr></tbody></table>

**Figure 13** : Courbes ROC du nombre de CA en fonction du diagnostic de GVH. A gauche, sur coloration standard HE. A droite, avec l'anticorps anti-Caspase 3.
### 3. Analyse de la survie en fonction des différents critères histologiques

Nous avons réalisé une analyse de survie au sein du groupe GVH (tableau 5). La survie a été analysée entre la date de la biopsie (diagnostic de GVH) et la date de décès.

<table><thead><tr><td>Critères histologiques</td><td>HR IC 95%</td><td>p</td></tr></thead><tbody><tr><td>Présence d'un chorion inflammatoire lympho-plasmocytaire</td><td>0,84 [0,42 ; 1,66]</td><td>0,617</td></tr><tr><td>Nombre de PNN sur un champ x400 au sein du chorion</td><td>0,95 [0,75 ; 1,20]</td><td>0,644</td></tr><tr><td>Cryptite à PNN</td><td>0,41 [0,14 ; 1,17]</td><td>0,097</td></tr><tr><td>Nombre de PNE sur un champ x400 au sein du chorion</td><td>1,00 [0,95 ; 1,04]</td><td>0,825</td></tr><tr><td>Présence de glandes régénératives</td><td>1,36 [0,69 ; 2,67]</td><td>0,368</td></tr><tr><td>Présence de glandes festonnées</td><td>0,91 [0,38 ; 2,21]</td><td>0,841</td></tr><tr><td>Nombre de glandes bordées de cellules éosinophiles</td><td>1,10 [0,93 ; 1,31]</td><td>0,279</td></tr><tr><td>Ulcération (%)</td><td>0,97 [0,91 ; 1,03]</td><td>0,324</td></tr><tr><td>Présence de bourgeon charnu</td><td>1,55 [0,70 ; 3,46]</td><td>0,283</td></tr><tr><td>Présence d'une désorganisation architecturale</td><td>1,58 [0,77 ; 3,25]</td><td>0,211</td></tr><tr><td>Atrophie (%)</td><td>1,01 [1,00 ; 1,02]</td><td>0,080</td></tr><tr><td>Nombre de cellules de Paneth sur un champ x200</td><td>0,98 [0,90 ; 1,06]</td><td>0,552</td></tr><tr><td>Nombre de biopsies comportant des CA</td><td>1,08[0,91 ; 1,28]</td><td>0,401</td></tr><tr><td>Nombre de CA pour 10 cryptes sur coloration HE</td><td>1,08 [1,04 ; 1,14]</td><td><strong>&lt;0,001</strong></td></tr><tr><td>Nombre de CA sur 10 cryptes avec l'anticorps antiCaspase3</td><td>1,06 [1,03 ; 1,10]</td><td><strong>&lt;0,001</strong></td></tr><tr><td>Présence d'abcès cryptolytique à CA</td><td>1,08 [1,00 ; 1,16]</td><td>0,053</td></tr></tbody></table>

**Tableau 5 :** Modèle de Cox univarié entre les variables histologiques et la survie

Seul le nombre de CA pour 10 cryptes contiguës sur la coloration HE et avec l'anticorps anti-Caspase 3 était associé à un impact significatif péjoratif sur la survie avec respectivement un Hazard ratio de 1,08 [1,04 ; 1,14] et 1,06 [1,03 ; 1,10] avec un **p**<strong>&lt;0,001</strong>.

Pour les 2 techniques (coloration standard HE et anticorps anti-Caspase 3), nous avons réalisé deux courbes ROC (figures 14 et 15) à partir desquelles nous avons obtenu une valeur seuil de 7,5 CA à partir de laquelle les patients présentent un risque plus important de décès (pour une sensibilité et une spécificité maximum avec un AUC respectif de 0,730 (0,573-0,886) et 0,714 (0,547-0,880)).
<figure><img src="image_23.png" /><figcaption>**Figure 14 :** Courbe ROC évaluant le rapport entre la survie et le nombre de CA sur coloration HE.</figcaption></figure>

<figure><img src="image_24.png" /><figcaption>**Figure 15 :** Courbe ROC évaluant le rapport entre la survie et le nombre de CA avec l'anticorps anti-Caspase 3.</figcaption></figure>
IV- DISCUSSION

1. Généralités sur l’allogreffe

a) Historique

Les prémices de la recherche sur les cellules souches hématopoïétiques ont commencé à la fin
des années 1940 et au début des années 1950 avec l'exploration des effets des radiations sur le
corps humain. Les explosions nucléaires japonaises pendant la seconde guerre mondiale suivies
de la découverte des effets de l'injection de moelle osseuse sur des modèles murins après
irradiation ont permis d'améliorer nos connaissances. En effet, il a été découvert une
restauration de la moelle osseuse des souris après ce traitement. [13]

En 1958, Mathé *et al.* ont décrit les premières reconstitutions transitoires de la réserve hématopoïétique après une infusion de moelle chez des chercheurs ayant subi une aplasie médullaire après un accident nucléaire en Yougoslavie. [14]

L'équipe de Thomas et al. décrit à la même période le succès d'une greffe d'un patient ayant une leucémie avec son jumeau homozygote.[15] Les premières descriptions de rémission de leucémie après greffe de moelle osseuse sont décrites dans les années 1960 notamment avec l'équipe de Mathé et al., qui propose le terme « Graft-versus-Leukemia effect ». Néanmoins, ces greffes de moelle osseuses se sont soldées jusqu'à la fin des années 1960 par des échecs liés à la méconnaissance des effets secondaires et des mécanismes de la transplantation sur l'homme.[16]

La compréhension du système HLA en 1968 [17] et du rejet de greffe aiguë (Graft-versus-Host
disease ou GVH) ont permis une reprise des essais cliniques jusqu'alors limités à la recherche
expérimental sur sujet animal.

En 1978, une complication à long terme chez les patients allogreffés est décrite pour la première fois par l'équipe de Shulman *et al.*[18] comme étant la GVH chronique.

La survie des patients s'est ensuite améliorée grâce à l'amélioration du conditionnement à la greffe et son suivi [19].
b) **Principes et généralités**

La greffe de cellules souches hématopoïétiques est un traitement dont le principe est d'injecter des cellules souches hématopoïétiques chez un patient malade afin de restaurer une moelle absente ou de corriger son dysfonctionnement après mise en aplasie.

Les cellules tumorales résiduelles sont éliminées par les cellules immunitaires du donneur. Ce phénomène est appelé « Graft-versus-Leukemia » (GVL).

Elle est principalement utilisée dans le cadre de pathologies hématologiques comme les hémopathies malignes (myélome multiple, lymphomes hodgkiniens et non-hodgkiniens, leucémie myéloïde aigue/chronique, leucémie lymphocytique aiguë/chronique, syndromes myélodysplasiques, myélofibroses...), ou certaines pathologies hématologiques non tumorales comme les déficits immunitaires primitifs, l'aplasie médullaire... Elle peut parfois être utilisée pour traiter certaines tumeurs germinales non séminomateuses réfractaires au traitement après la 3ème ligne de chimiothérapie [20]. Son utilisation a également été étudiée dans les cancers du sein métastatiques [21] et les médulloblastomes.

Plusieurs types de greffes peuvent être distingués selon l'apparenté du donneur : la transplantation syngénique, allogénique et autologue.

Les cellules souches sont issues de la moelle osseuse, du sang périphérique ou du sang placentaire.

Lors de l'allogreffe, la moelle greffée est issue de membres de la famille, HLA (Human Leukocyte Antigens)-compatibles ou non (haplo-identiques), et de donneurs non apparentés avec une compatibilité HLA.

L'allogreffe est fréquemment compliquée par la maladie du Greffon contre l'hôte (GVH). La compréhension du complexe majeur d'histocompatibilité et du système HLA ont permis d'améliorer la compatibilité entre un donneur et le receveur.

Trois types d'allogreffes peuvent être réalisées après étude de dix antigènes HLA du receveur et du donneur :

- Génoidentique : le receveur est un membre de la fratrie (HLA 10/10)

- Phénoidentique : le donneur ne fait pas parti de la famille du patient (HLA 10/10 de préférence mais avec un « mismatch » possible avec un HLA 8 ou 9/10)

- Haploidentique : le donneur est intrafamilial en partie compatible (HLA 5/10)
D'autres critères sont également pris en compte comme l'âge, le sexe, le groupe sanguin, les différentes comorbidités et le statut sérologique du donneur pour le Cytomégalovirus.

La préparation du patient est réalisée par chimiothérapie, radiothérapie ou association des deux.
Ces dernières permettent la mise en aplasie du patient en supprimant la moelle pathologique et
en créant une immunosuppression suffisante pour empêcher une réaction des cellules
immunitaires de l'hôte contre les cellules souches injectées.

Après conditionnement du receveur, l'« infusion » de cellules souches est injectée en
intraveineux par un cathéter central en association à des traitements prophylactiques contre les
éventuelles complications infectieuses ou non [22].

Les cellules souches greffées investissent le compartiment médullaire puis participent à l'hématopoïèse et à la reconstitution du pool de cellules circulantes.

c) Epidémiologie

En France, selon les données de l'Agence de la biomédecine, 1857 patients ont reçu une ou
plusieurs allogreffes en 2020. L'âge moyen des patients greffés est de 47 ans et tend à
augmenter.

<figure><img src="image_25.png" /><figcaption>**Figure 16 :** Répartition des allogreffes de CSH selon le type de donneur d'après l'Agence de la biomédecine [23]</figcaption></figure>
Le sang périphérique est essentiellement utilisé pour l'allogreffe, soit 77% des cas contre 18,7% pour la moelle osseuse et 4,3% pour le sang placentaire en 2020.

<figure><img src="image_26.png" /></figure>

**Figure 17 :** Répartition des indications d'allogreffe de CSH en 2020 selon l'Agence de biomédecine.

## 2. Complications de la greffe

a) La maladie du greffon contre l'hôte (ou Graft-versus-Host Disease)

La GVH est fréquente avec une incidence de 40 à 60% et une mortalité d'environ 15% [24].

Elle correspond à une reconnaissance et une élimination des cellules de l'hôte par les cellules immunitaires greffées.

Selon la NIH, cette complication de l'allogreffe peut être classée en quatre catégories selon le délai d'apparition et les données cliniques [25] :

- La GVH aiguë : survient dans les 100 premiers jours post-greffe avec des signes aigus cliniques.

- La GVH aiguë persistante ou récurrente : survient après plus de 100 jours post-greffe avec des signes cliniques aigus.

- La GVH chronique : survient après plus de 100 jours post-greffe avec des signes cliniques chroniques.

- L'overlap syndrome : peut survenir à tout moment après la greffe en associant à la fois des signes aigus et chroniques de GVH.
Lors de la GVH aiguë, les patients présentent essentiellement des signes cliniques cutanés (81%), digestifs (54%) et hépatiques (50%) selon Martin *et al*. [26]

En fonction du tableau clinico-biologique, la sévérité de la pathologie est gradée selon la classification de Glucksberg modifiée [27] (annexe1) ou les critères MAGIC [28] (annexe 2) en fonction des centres.

### b) Complications infectieuses et autres :

Les complications aiguës, survenant avant 90 jours, comprennent la neutropénie, la thrombopénie, l'anémie, la maladie veino-occlusive, des infections (bactérie gram + ou -, Herpes Simplex Virus, Cytomégalovirus (CMV), Candida, Aspergillose).

Les complications chroniques comprennent les infections à bactéries encapsulées, le virus Varicelle-Zona, les défaillances d'organes.

A long terme, la cause principale de décès chez les patients allogreffés est une récidive de la pathologie pour laquelle ils ont été traités, dans 30% des cas [29].

Les patients présentent un risque de cancer secondaire dans les 2 à 5 ans suivant l'allogreffe jusque 41% sur certaines séries [30].

### c) Physiopathologie de la GVH

Les mécanismes d'actions de la GVH aiguë peuvent être résumés en trois phases (figure 18) :
[31]

- **Phase 1 : Activation des cellules présentatrices d'antigène**

La production de cytokines pro-inflammatoires (TNF-alpha, IL-1) liée au conditionnement et infections, puis le relargage d'autres éléments pro-inflammatoires par le microbiote intestinal (PAMPS et LPS), permettent l'activation des cellules présentatrices d'antigènes.

- **Phase 2 : Activation des lymphocytes du donneur**

Les lymphocytes T CD4+ et CD8+ du donneur sont activés et prolifèrent au bout de 2 à 3 jours (phénotype th1/tc1 et th17). Ils produisent de l'Interleukine-2 qui amplifie la réponse allo-immune et l'interféron-gamma qui favorise la présentation des antigènes.

- **Phase 3 : Phase effectrice de l'inflammation**

Entre 3 et 7 jours, le nombre de lymphocytes T du donneur augmente dans les organes cibles de la GVH, induisant l'apoptose et la nécrose par effet cytotoxique (Fas-ligand, perforine et
granzyme), associé à l'activation de monocytes, macrophages et polynucléaires neutrophiles
qui entretiennent la réaction inflammatoire et la destruction des tissus.

La physiopathologie de la GVH chronique est moins bien comprise car différente, n'étant pas
nécessairement une continuité de la GVH aiguë. Un modèle en trois phases a été proposé par
l'équipe de Cooke et al. en 2017 induisant une stimulation des macrophages qui favorise la
prolifération des fibroblastes, les dépôts de collagène et la fibrose [32,33].

<figure><img src="image_27.png" /><figcaption>**Figure 18:** Physiopathologie de la GVH selon Ferrera et al.</figcaption></figure>

**3. Histologie dans la GVH recto-colique :**

L'analyse histologique possède un rôle majeur dans le diagnostic de la GVH, dont la fréquence
et la présentation ont changé au fur et à mesure des avancées thérapeutiques dans le
conditionnement et la prise en charge post-allogreffe des patients.

Toutefois, la réalisation de biopsies pour le diagnostic de GVH n'est pas systématique, pouvant
induire un traitement incorrect des patients dans 7% des cas [34].

Historiquement, la classification de Lerner dans le diagnostic de la GVH sur biopsie gastro-intestinale était utilisée, séparant les lésions en 4 grades [35] :

- Grade 1 : Présence de corps apoptotiques

- Grade 2 : Perte de cryptes isolée

- Grade 3 : perte d'au moins 2 cryptes adjacentes associée à des ulcérations de muqueuse

- Grade 4 : perte de la muqueuse
Des mises au point sur le diagnostic histologique de la GVH sont régulièrement réalisées, notamment en 2004 et en 2015, par le National Institute of Health (NIH), avec une simplification du rendu des résultats, passant de 4 à 3 catégories de réponses possible : pas de GVH, possible GVH et GVH probable [8].

Les biopsies réalisées pour diagnostiquer une GVH sont d'interprétation parfois difficile, notamment à cause d'un nombre limité de niveaux de coupe analysés, des biopsies de petite taille, avec parfois des lésions histologiques minimes et focales.

Au niveau gastro-intestinal, l'histologie n'apporte pas d'aide pour différencier une GVH aiguë d'une GVH chronique [36,37].

L'intensité de la GVH peut également varier en fonction de l'immunosuppression et des traitements du patient.

Ainsi le diagnostic histologique de la GVH au niveau gastro-intestinal et plus particulièrement recto-colique, se limite souvent à la simple détection de corps apoptotiques, rendue difficile par leur faible nombre.

Toutefois, leur présence n'est pas spécifique et peut être observée dans d'autres pathologies telles qu'une toxicité médicamenteuse, une infection ou de l'inflammation non spécifique.

Par exemple, l'infection à Cytomégalovirus (CMV) reproduit les signes histologiques de la GVH, nécessitant une recherche d'inclusion virale à l'étude microscopique.

## Concernant notre étude et les données de la littérature :

Selon la NIH, afin d'éviter un trop grand nombre de faux négatifs, liés à l'hétérogénéité des lésions, il est recommandé de réaliser au moins 8 niveaux de coupes par biopsie pour ne pas méconnaître le diagnostic de GVH [8]. Notre étude montre que le nombre de niveaux moyen réalisé était de 3 au sein du groupe GVH, suffisant pour porter le diagnostic histologique de certitude de GVH, contre 4 dans le groupe non GVH. Cette différence est significative. Les lésions histologiques pour exclure un diagnostic de GVH ont été recherchées avec plus de soin, sur plus de niveaux de coupes que dans le groupe GVH, mais sans atteindre la valeur recommandée de 8 niveaux de coupes.

Lors de la GVH digestive, l'inflammation est souvent peu marquée. Au cours de la GVH aiguë, il peut être observé des lésions de cryptite à PNN associées à des abcès cryptiques avec, au sein la lumière des glandes, des PNN, des monocytes et des débris cellulaires, mais cela ne remet
pas en cause le diagnostic de la GVH. On peut parfois observer des surinfections associées à la
GVH avec une augmentation de l'infiltrat inflammatoire. Lors de la GVH chronique ou de la
GVH aiguë non traitée, l'infiltrat inflammatoire est polymorphe mais essentiellement lympho-
plasmocytaire au sein du chorion [6,36,38].

Les polynucléaires éosinophiles (PNE) participent à la défense immunitaire contre les parasites pathogènes. L'équipe de Daneshpouy et al. s'est intéressée aux PNE au sein du chorion de la muqueuse colique. Ils ont montré une association entre la présence de polynucléaires éosinophiles et le diagnostic de GVH ainsi qu'une corrélation entre la densité de PNE et la survie. En effet, la présence de plus de 5 PNE au sein du chorion (sur un champ au grossissement x400) était associée à un grade histologique plus sévère et à un pronostic plus sévère [39].

Notre étude n'a pas montré d'association significative entre la GVH et la densité en polynucléaires éosinophiles au sein du chorion, ni d'impact pronostique. De même, l'étude de Shidam et al. n'a pas montré d'association significative des PNE avec la GVH en comparaison avec un groupe contrôle indemne de GVH [40].

L'équipe de Socié et al. a également étudié la présence des polynucléaires neutrophiles au sein du chorion et a montré en analyse multivariée une augmentation de la mortalité lorsque le nombre de polynucléaires neutrophiles était supérieur à 20 pour un champ à fort grossissement (x400) [41].

Nous n'avons pas montré au cours de notre étude d'association entre la GVH et le nombre de polynucléaires neutrophiles au sein du chorion, ni d'impact significatif sur la survie. De même, la présence ou non de lésions de cryptite à polynucléaires neutrophiles n'est pas corrélée au diagnostic de GVH ou au pronostic.

La présence d'autres lésions aiguës comme les ulcérations de la muqueuse colique avec
exsudats fibrino-leucocytaires, et la présence de bourgeons charnus n'avaient pas de valeur
diagnostique et pronostique dans notre étude malgré la description d'ulcération et de perte de
substance dans les grades 3 et 4 de la classification de Lerner.

De rares cas d'infiltrat inflammatoires macrophagiques ont été décrits au cours de la GVH [42],
mais ils n'étaient pas retrouvés dans notre étude.
Parmi les critères histologiques pouvant être observés dans la GVH, on retrouve la présence de glandes régénératives, le plus souvent associées aux corps apoptotiques. Nous montrons également dans notre étude la présence de glandes régénératives de façon significative au sein du groupe GVH [43]. Nous n'avons pas observé d'effet sur le pronostic des patients.

Nous avons étudié la présence de glandes festonnées, qui étaient présentes sur quelques biopsies, mais ce critère n'a jamais été décrit dans la littérature et nous n'avons pas montré de différence significative entre les groupes GVH et non GVH.

Au cours de notre étude, nous avons remarqué de façon significative la présence de glandes bordées de cellules au cytoplasme éosinophile au sein du groupe GVH. Néanmoins, la présence de ces glandes n'est pas mentionnée dans la littérature comme étant un critère diagnostique dans la GVH. Ces glandes sont bordées de cellules cubiques ou cubo-cylindrinques dont le cytoplasme est éosinophile et le noyau parfois hyperchromatique. Selon nous, ces dernières pourraient être des glandes digestives dont les cellules sont en souffrance, en voie de nécrose, et ayant débuté un processus d'apoptose. Leur présence n'était observée que lors de la GVH mais n'était pas associée au pronostic.

Lorsque la GVH aiguë commence à se chroniciser, on observe des modifications non spécifiques de la muqueuse colique. Parmi ces modifications, on observe une désorganisation architecturale caractérisée par des bifurcations glandulaires et une atrophie glandulaire. Il s'y associe également une métaplasie à cellules de Paneth [36].

Nous retrouvons également de manière significative une désorganisation architecturale par bifurcations glandulaires et une atrophie glandulaire au sein de notre groupe GVH.

La métaplasie à cellule de Paneth n'est pas un critère significatif au sein de notre étude, néanmoins, on observe une tendance à avoir plus de cellules de Paneth au sein du groupe GVH avec un p à 0.074 en comparaison avec le groupe non GVH.

Il a été montré sur des biopsies duodénales une relation entre la sévérité de la GVH et la perte des cellules de Paneth [44]. Ces cellules sécrètent des peptides antimicrobiens qui régulent le microbiote intestinal. Un nombre de cellules de Paneth inférieur à 4 pour un champ à fort grossissement (x400) est corrélé à une GVH plus sévère et à une moins bonne réponse au traitement.

Les cellules de Paneth au niveau colique se situent normalement au niveau du colon proximal. Dans le cadre de certaines maladies inflammatoires intestinales chroniques, telle que la recto-
colite ulcéro-hémorragique, on retrouve une augmentation du nombre de cellules de Paneth par métaplasie notamment au niveau colique distal. Cette métaplasie aurait un effet protecteur contre les infections en réaction à une inflammation chronique [45].

L'équipe de Joshua *et al*. a montré que la présence d'une atrophie glandulaire serait un facteur péjoratif dans la survie au cours de la GVH aiguë. Celle-ci étant associée à une augmentation du volume de selles liquidiennes et à une résistance à la corticothérapie [46]. Néanmoins, notre étude n'a pas mis en évidence d'association significative péjorative entre la survie et l'atrophie de la muqueuse recto-colique. On observe une discrète tendance à une diminution de la survie (Hazard ratio à 1,01 avec un p à 0,08).

Le corps apoptotique est une cellule épithéliale ayant débutée un processus d'apoptose dont le cytoplasme se vacuolise et contient des débris basophiles issus de la caryorrhexie du noyau.

Ils sont parfois rares et posent le problème diagnostique d'une GVH débutante ou à minima.

Les difficultés à établir le diagnostic se posent essentiellement pour le grade 1 de la classification de Lerner qui correspond à la seule présence de corps apoptotiques dans les cryptes sans atrophie ou ulcération.

Au sein de notre cohorte, nous montrons que le groupe non GVH peut comporter un ou plusieurs corps apoptotiques : 21.2% pour 1 CA et 13,5% avec 2 à 6 CA sur coloration standard HES mais aucun cas ne comportait plus de 6 CA. La majorité des cas sans GVH n'en présentait aucun (65,4%). Dans notre groupe GVH, une majorité des biopsies comportait plus de 6 corps apoptotiques (65.7%). Un nombre de corps apoptotiques supérieur à 6 pour 10 cryptes contiguës permettrait un diagnostic histologique de GVH avec plus d'assurance, comme il a été montré dans l'étude de Lin *et al*. [11].

Cette équipe a étudié le nombre de corps apoptotiques sur des biopsies coliques de patients greffés médullaires et a montré que leur nombre était corrélé au grade histologique de la GVH selon la classification de Lerner : plus le grade était élevé, plus les corps apoptotiques étaient nombreux. Ils ont aussi montré que le diagnostic de GVH ne pouvait être retenu avec un nombre inférieur ou égal à 6 CA en corrélation avec le diagnostic clinique sur leur cohorte.

L'étude de Lin montre également la présence de corps apoptotiques dans 20% des biopsies coliques non pathologiques de patients non transplantés.

Notre étude montre aussi la présence de corps apoptotiques au sein des biopsies pour lesquelles le diagnostic de GVH n'a pas été retenu chez des patients allogreffés.
Ceci confirme que la présence de corps apoptotique n'est pas spécifique du diagnostic de la
GVH. Par exemple, les préparations à la coloscopie comme celles à base de phosphate de
sodium peuvent induire l'apparition de corps apoptotiques au sein de la muqueuse colique [47].

D'autres études retrouvent un nombre moins important de CA nécessaire pour réaliser un
diagnostic de GVH.

L'étude de Nguyen *et al*. montre que la présence d'un seul corps apoptotique n'était pas rare
dans les diagnostics de GVH de bas grade [10].

Kreft *et al*. considèrent qu'il est nécessaire de trouver au minimum deux corps apoptotiques
pour 2 mm2 pour être reproductible dans le diagnostic de GVH [9].

Une partie de nos cas biopsiés (34.3%) comportait de 1 à 6 CA pour 10 cryptes dans le groupe
GVH.

La NIH préconise également la présence d'au moins 1 CA pour réaliser le diagnostic de GVH
augmentant ainsi la sensibilité diagnostique [37].

La présence de moins de 6 CA pour 10 cryptes ne devrait pas exclure le diagnostic de GVH,
néanmoins, celui-ci devrait être réalisé avec plus de prudence avec une confrontation au
contexte clinique afin de ne pas méconnaître un diagnostic différentiel ou une variante de la
normale.

Ainsi, nous avons montré un seuil de 3,5 CA pour 10 cryptes contiguës (soit en pratique 4 pour
10 cryptes contiguës) permettant de faire un diagnostic de GVH sur coloration standard HE et
avec l'anticorps anti-Caspase 3. Nous n'avons pas connaissance dans la littérature de courbe
ROC ayant permis de déterminer un nombre de CA minimum pour le diagnostic de la GVH.

Un nombre important de CA induit une destruction des glandes et des cryptes augmentant la
sévérité de la GVH avec un pronostic péjoratif et une résistance aux corticoïdes [46]. Nous
avons montré également au cours de notre étude que le nombre de CA est associé à un pronostic
péjoratif sur coloration HE standard et avec l'anticorps anti-Caspase3. Nous avons trouvé une
valeur seuil de 7,5 CA (donc 8 corps apoptotiques pour 10 cryptes contiguës) à partir de laquelle
le risque de décès est plus important. Nous n'avons pas connaissance dans la littérature de
courbe ROC ayant permis de déterminer un nombre de CA à partir duquel le pronostic devient
plus péjoratif.

Actuellement, l'utilisation d'un anticorps anti-Caspase 3 permettant de mettre en évidence les
corps apoptotiques sur les biopsies digestives, pour le diagnostic de GVH, n'est pas
recommandé. L'équipe de Washington *et al*. a montré que le compte de corps apoptotiques
visibles sur la coloration standard HES serait suffisamment reproductible entre observateurs, et
ne nécessiterait donc pas d'étude immunohistochimique [2].

L'équipe de Tzankov *et al*. montre au contraire l'apport de l'immunohistochimie avec l'anticorps anti-Caspase 3, permettant de mettre en évidence un plus grand nombre de corps apoptotiques par rapport à la coloration standard par l'hématéine-éosine (soit 3 à 4 fois plus de corps apoptotiques repérés) [48]. Notre étude montre également une différence significative avec un nombre plus important de corps apoptotiques retrouvés et comptés avec l'aide de l'immunohistochimie.

Cela peut être une aide au diagnostic de la GVH, notamment lorsque le nombre de corps
apoptotiques est faible, lorsque le nombre de biopsies est peu important ou lorsque les biopsies
sont altérées. L'immunohistochimie apporte un confort de lecture pour la détection des corps
apoptotiques, et elle permet probablement une meilleure reproductibilité entre pathologistes
pour la mise en évidence et le compte des corps apoptotiques, mais cela n'a pas été abordé dans
notre étude. Le surdiagnostic de la GVH lié à la mise en évidence de plus nombreux corps
apoptotiques n'a pas été étudié dans la littérature, mais peut être possible, cette lésion n'étant
pas spécifique de la GVH. Ainsi, le diagnostic de la GVH doit être réalisé sous réserve de la
négativité des examens microbiologiques et de l'absence de diagnostic différentiel comme une
iatrogénie.

D'autres études ont été réalisées pour rechercher des critères histologiques et biologiques aidant
au diagnostic ou ayant un impact pronostique au cours de la GVH. La vascularisation et la
fonction endothéliale lors des phases de GVH ont fait l'objet de plusieurs études. L'équipe de
Dietrich et al. a montré que les lésions endothéliales présentaient un rôle important dans les
réponses réfractaires à la corticothérapie, sans toutefois augmenter le risque de développer une
GVH, en étudiant des marqueurs de vulnérabilité endothéliale tels que l'Angiopoietin2 dans la
période pré-implantatoire [49].

De même, Bierdermann *et al.*, a étudié le facteur de von Willebrand dans le sang et la densité de capillaires sur prélèvements biopsiques, et montré une diminution de la vascularisation du chorion par atteinte des capillaires par des lymphocytes T CD8+, associé à une augmentation du facteur de von Willebrand [50]. Ces critères histologiques de densité vasculaire n'ont pas été évalués dans notre étude.

La présence d'amas de cellules neuro-endocrines isolés au sein du chorion a été plusieurs fois décrite lors de la GVH. Ces cellules semblant être plus résistantes que les autres cellules épithéliales, elles persisteraient lors de la GVH, et sont souvent associées à des lésions de colite chronique, désorganisation architecturale et diminution du volume glandulaire [51–53].
Ces amas de cellules neuro-endocrines isolées sont décrites comme une aide au diagnostic différentiel entre la GVH et la colite induite par le Mycofénolate mofétil (caractérisée par leur absence ou faible nombre). Un nombre important serait associé à une GVH plus sévère.[54]
Une étude plus récente confirmait l'association entre les amas de cellules neuro-endocrines et le diagnostic de GVH mais ne retrouvait pas de différence significative entre la GVH et la colite à Mycofénolate mofétil [52]. La présence et la densité des cellules endocrines évaluées par immunohistochimie avec l'anticorps anti-Chromogranine n'a pas été évaluée dans notre étude.

Notre étude comporte quelques limites. Il s'agit d'une étude rétrospective et le recueil de données est parfois rendu difficile par la gestion d'un même patient par plusieurs équipes médicales différentes. En effet, la recherche d'une concordance anatomo-clinique se faisait le plus souvent entre le diagnostic clinique hématologique et le diagnostic histologique. Or le diagnostic clinique de GVH n'était pas toujours conclu chez certains patients décédés en réanimation, avec une biopsie colique compatible avec une GVH. Ces patients n'ont donc pas pu être inclus dans l'étude.

De plus, nous avons décidé d'étudier la survie au sein du groupe GVH réduisant à 67 patients la population étudiée. Ceci explique probablement que le seul facteur associé à un pronostic péjoratif soit la présence des corps apoptotiques sur coloration HE standard et avec l'anticorps anti-Caspase 3. En effet, l'atrophie et la présence d'abcès cryptolytiques à CA semblaient être associées un pronostic défavorable mais sans être statistiquement significatifs. Un recueil plus important de patients en étendant la période d'inclusion pourrait peut-être permettre de mettre en évidence d'autres critères histopronostiques.

De même, la présence de glandes bordées de cellules éosinophiles est un critère significatif de diagnostic de GVH au sein de notre étude. Une étude comparative avec des cas histologiques présentant un diagnostic différentiel de la GVH tel qu'une colite à CMV ou iatrogène permettrait de préciser si ce critère est spécifique de la GVH ou non.
# V- CONCLUSION

Pour conclure, notre étude confirme que la présence de corps apoptotiques reste le principal critère histologique permettant le diagnostic de la GVH. Il n'est néanmoins pas spécifique du diagnostic et nous proposons le nombre de 4 CA comme nombre de CA minimal permettant le diagnostic de la GVH. D'autres critères également décrits dans la littérature sont associés au diagnostic de la GVH et sont observés dans notre étude comme la présence de glandes régénératives, une atrophie ou une désorganisation architecturale.

Seuls les corps apoptotiques présentaient un intérêt pronostique au sein de notre étude. Nous proposons un nombre de 8 CA à partir duquel les patients présentent un risque plus important de décès.

L'existence de lésions aiguës (comme les ulcérations de la muqueuse) ou chroniques (comme la désorganisation architecturale, l'atrophie, la métaplasie à cellules de Paneth) n'apparaissaient pas comme des facteurs pronostiques dans notre étude.

L'étude immunohistochimique avec l'anticorps anti-Caspase 3 est une technique qui est utile dans le diagnostic de routine de la GVH pour la détection et le compte plus facile des corps apoptotiques. Nous montrons que cette technique permet de mettre en évidence plus de corps apoptotiques que la coloration HE standard. Elle permet un confort diagnostique et probablement une meilleure reproductibilité dans le compte des corps apoptotiques évalués par les pathologistes, mais cela reste à démontrer dans une future étude, et à corréler avec l'aide potentielle de l'intelligence artificielle sur ce sujet.

La présence de glandes bordées de cellules éosinophiles est un critère histologique qui n'a pas encore été décrit dans la littérature ; dans notre étude, leur présence était associée au diagnostic de GVH. Il pourrait être intéressant d'évaluer si la présence de glandes bordées de cellules éosinophiles est spécifique de la GVH ou si elles sont retrouvées dans d'autres pathologies digestives.

De même, il pourrait être intéressant d'évaluer leur valeur pronostique sur une cohorte de plus grande taille.
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# VII- ANNEXES

## Annexe 1 : Classification de Glucksberg modifiée selon Przepiorka et al.

<table><thead><tr><th></th><th>Peau</th><th>Foie</th><th>Tractus gastro-intestinal</th></tr></thead><tbody><tr><th>Stade</th><td></td><td></td><td></td></tr><tr><th>1</th><td>rash sur &lt;25% de la peau</td><td>bilirubine 2-3 mg/dL</td><td>diarrhée &gt;500 ml/jour ou nausée persistante</td></tr><tr><th>2</th><td>rash sur 25-50% de la peau</td><td>bilirubine 3-6 mg/dL</td><td>diarrhée &gt;1000 mL/jour</td></tr><tr><th>3</th><td>rash sur &gt;50% de la peau</td><td>bilirubine 6-15 mg/dL</td><td>diarrhée &gt;1500 mL/jour</td></tr><tr><th>4</th><td>érythrodermie avec formations bulleuses</td><td>bilirubine &gt;15 mg/dL</td><td>douleur abdominale sévère avec ou sans iléus</td></tr><tr><th>Grade</th><td></td><td></td><td></td></tr><tr><th>0</th><td>aucun</td><td>aucun</td><td>aucun</td></tr><tr><th>I</th><td>stade 1-2</td><td>aucun</td><td>aucun</td></tr><tr><th>II</th><td>stade 3</td><td>ou stade 1</td><td>ou stade 1</td></tr><tr><th>III</th><td>-</td><td>stade 2-3</td><td>ou stade 2-4</td></tr><tr><th>IV</th><td>stade 4</td><td>ou stade 4</td><td>-</td></tr></tbody></table>

## Annexe 2 : Critères MAGIC selon Harris et al.

<table><thead><tr><th rowspan="2">Stade</th><th colspan="4">Extension aux organes</th></tr><tr><th>Peau</th><th>Foie (bilirubine)</th><th>Haut appareil GI</th><th>Bas appareil GI</th></tr></thead><tbody><tr><th>0</th><td>Aucun signe de GVHD cutanée</td><td>&lt;2 mg/dL</td><td>Aucun ou nausée, vomissement ou anorexie intermittente</td><td>&lt;500 mL/jour ou &lt;3 épisodes/ jour</td></tr><tr><th>I</th><td>Rash maculopapuleux &lt; 25% SCT</td><td>2-3 mg/dL</td><td>Nausée, vomissement ou anorexie persistante</td><td>500-999 mL/jour ou 3-4 épisodes/jour</td></tr><tr><th>II</th><td>Rash maculopapuleux 25%-50% BSA</td><td>3,1-6 mg/dL</td><td></td><td>1000-1500 mL/ jour ou 5-7 épisodes/ jour</td></tr><tr><th>III</th><td>Rash maculopapuleux &gt;50</td><td>6,1-15 mg/dL</td><td></td><td>&gt;1500 mL/ jour ou &gt;7 épisodes/ jour</td></tr><tr><th>IV</th><td>Erythrodermie généralisée (&lt;50% SCT) avec formations bulleuses ou desquamation &gt;5% SCT</td><td>&gt;15 mg/dL</td><td></td><td>Douleur abdominale sévère avec ou sans iléus, ou diarrhée glairo-sanglante (quel que soit le volume)</td></tr></tbody></table>
**L'histopathologie dans la maladie du greffon contre l'hôte (GVH) recto-colique.**
**Critères diagnostiques et pronostiques sur une cohorte de patients du CHU d'Amiens.**

**Introduction** : La maladie du greffon contre l'hôte (GVH) recto-colique est une complication fréquente et grave de l'allogreffe de cellules souches hématopoïétiques de diagnostic parfois difficile. L'objectif était de mettre en évidence des critères histologiques diagnostiques et pronostiques de la GVH recto-colique.

**Matériel et méthode** : Les patients allogreffés au CHU d'Amiens de 2012 à 2017 ont été recensés. Ceux ayant eu une biopsie recto-colique ont été inclus et divisés en deux groupes (GVH et non GVH), puis les biopsies ont été relues par 2 pathologistes.

**Résultats** : 119 patients ont été inclus. 67 ont été répartis dans le groupe GVH et 52 dans le groupe non GVH. Au sein du groupe GVH, nous avons observé de manière significative un nombre plus important de corps apoptotiques (CA) sur coloration standard HE et avec l'anticorps anti-caspase 3, d'abcès cryptolytiques à CA, d'atrophie, de glandes régénératives et de glandes bordées de cellules éosinophiles (p <0,001).

Le nombre de CA sur coloration HE (HR 1,08 [1,04 ; 1,14]) et avec l'anticorps anti-Caspase 3 (HR 1,06 [1,03 ; 1,10]) présentent un pronostic péjoratif (p<0,001) avec une valeur seuil de 7,5 CA.

L'anticorps anti-Caspase 3 met en évidence plus de CA que la coloration standard HE (p<0,005). Nous avons obtenu une valeur seuil de 3,5 CA pour 10 cryptes contiguës sur coloration standard HE et avec l'anticorps anti-Caspase 3.

**Conclusion** : Nous confirmons l'intérêt du CA dans le diagnostic de la GVH avec un seuil diagnostique de 4 CA et une valeur seuil pronostique de 8 CA. Les glandes bordées de cellules éosinophiles pourraient être un critère diagnostique en faveur de la GVH devant être confirmé par d'autres études.

**Mots-clés** : Maladie du greffon contre l'hôte + Colon + Histologie + Diagnostic + Corps apoptotique.

**Histopathology in recto-colic graft-versus-host disease (GVHd).**
**Diagnostic and prognostic criteria in a cohort of patients from Amiens University Hospital.**

**Introduction:** Recto-colic graft-versus-host disease (GVHD) is a frequent and serious complication of haematopoietic stem cell allograft transplantation and is sometimes difficult to diagnose. The aim was to identify histological diagnostic and prognostic criteria for rectocolonic GVH.

**Material and method:** Allograft patients treated at Amiens University Hospital from 2012 to 2017 were identified. Those who had a recto-colic biopsy were included and divided into two groups (GVH and non-GVH), then the biopsies were reviewed by 2 pathologists.

**Results:** 119 patients were included. 67 were allocated to the GVH group and 52 to the non-GVH group. In the GVH group, we observed significantly more apoptotic bodies (ABs) on standard HE staining and with anti-caspase 3 antibody, cryptolytic AB abscesses, atrophy, regenerative glands and glands lined with eosinophilic cells (p <0.001).

The number of ABs on HE staining (HR 1.08 [1.04; 1.14]) and with anti-Caspase 3 antibody (HR 1.06 [1.03; 1.10]) showed a poor prognosis (p<0.001) with a cut-off value of 7.5 ABs. The anti-Caspase 3 antibody showed more ABs than the standard HE stain (p<0.005). We obtained a cut-off value of 3.5 ABs per 10 contiguous crypts on standard HE staining and with the anti-Caspase 3 antibody.

**Conclusion:** We confirm the value of AB in the diagnosis of GVH with a diagnostic threshold of 4 ABs and a prognostic threshold of 8 ABs. Eosinophilic cell lined glands could be a diagnostic criterion in favour of GVH to be confirmed by other studies.

**Keywords:** Graft versus host disease + Colon + Histology + Diagnosis + Apoptotic body.