# Détermination de l'état de viabilité de listeria monocytogènes par microspectroscopie Raman-Dip

Abedini Darius Lucas, Jonathan Dikec, Sylvain Trigueros, Sabine Debuiche, Olivier Jean Ducloux, Mélanie Gay, Graziella Midelet, Pierre R Marcoux, Thomas Brauge

► To cite this version:

Abedini Darius Lucas, Jonathan Dikec, Sylvain Trigueros, Sabine Debuiche, Olivier Jean Ducloux, et al.. Détermination de l'état de viabilité de listeria monocytogènes par microspectroscopie Raman-Dip. Journée Doctorale 2024, SFR Campus de la Mer, Oct 2024, Boulogne-sur-Mer, France. hal-05422984

HAL Id: hal-05422984

https://hal.science/hal-05422984v1

Submitted on 18 Dec 2025

HAL is a multi-disciplinary open access
archive for the deposit and dissemination of sci-
entific research documents, whether they are pub-
lished or not. The documents may come from
teaching and research institutions in France or
abroad, or from public or private research centers.

L'archive ouverte pluridisciplinaire HAL, est
destinée au dépôt et à la diffusion de documents
scientifiques de niveau recherche, publiés ou non,
émanant des établissements d'enseignement et de
recherche français ou étrangers, des laboratoires
publics ou privés.

Public Domain
REPUBLIQUE
FRANÇAISE

Liberté
Égalité
Fraternité

<figure><img src="image_1.png" /></figure>

<figure><img src="image_2.png" /></figure>

<figure><img src="image_3.png" /></figure>

<figure><img src="image_4.png" /></figure>

<figure><img src="image_5.png" /></figure>

# DÉTERMINATION DE L'ÉTAT DE VIABILITÉ DE LISTERIA MONOCYTOGENES PAR MICROSPECTROSCOPIE RAMAN-DIP

Darius Abedini a, b, Jonathan Dikec a, Sylvain Trigueros a, Sabine Debuiche a, Olivier Ducloux c, Mélanie Gay a, Graziella Midelet a,
Pierre R. Marcoux b, Thomas Brauge a.

a Anses, Laboratoire de sécurité alimentaire, Unité SANAQUA, F-62200 Boulogne-sur-Mer

b Université Grenoble Alpes, CEA, LETI, F-38000 Grenoble

c CEA Tech en Hauts de France, F-59000 Lille

Journée Doctorale 2024 SFR Campus de la Mer
# Listeria monocytogenes : Responsable de Toxi-Infections alimentaires collectives (TIAC) bactérien

* Pathogène alimentaire majeur

* Bactérie à Gram positive

* Psychrotrophe

* pathogène du genre Listeria provoquant la Listériose (20% de Létalité)

<figure><img src="image_6.png" /></figure>

Observation en microscopie électronique à balayage de cellules de Listeria monocytogenes, Source : https://phil.cdc.gov/Details.aspx?pid=2287
# L'état Viable Non Cultivable (VNC)

Viable Cultivable (VC)

<figure><img src="image_7.png" /></figure>

Active
métaboliquement

<figure><img src="image_8.png" /></figure>

<figure><img src="image_9.png" /></figure>

Stress

<figure><img src="image_10.png" /></figure>

Traitement des surfaces par
des biocides

Baisse de l'activité
métabolique

<figure><img src="image_11.png" /></figure>

Pas d'activité
métabolique

<figure><img src="image_12.png" /></figure>
## Méthodes de détection

<table><thead><tr><td>Technique</td><td>Sensibilité de la méthode</td><td>Temps d'analyse</td><td>Détection des différents états de viabilité (VNC, mort)</td></tr></thead><tbody><tr><td>Méthode culturale (ISO 11920-1:2017)</td><td>10 UFC*.mL<sup>-1</sup></td><td>3 jours</td><td>X</td></tr><tr><td>qPCR</td><td>1000 UG**.mL<sup>-1</sup></td><td>6 heures</td><td>X</td></tr><tr><td>PMA-qPCR</td><td>1000 UG.mL<sup>-1</sup></td><td>6 heures</td><td>✓</td></tr><tr><td>Spectroscopie Raman couplée au marquage au deutérium (Deutérium Isotope Probing, DIP)</td><td>Cellule unique</td><td>3 heures</td><td>✓</td></tr></tbody></table>

*Unité Formant Colonie

**Unité génome
Principe physique du Raman

<figure><img src="image_13.png" /></figure>

► Information de l'empreinte vibratoire caractéristique de l'échantillon au niveau de la **cellule unique**

► Photos caractéristiques d'un type de liaison chimique

<figure><img src="image_14.png" /></figure>
# La microspectroscopie Raman-DIP

<figure><img src="image_15.png" /></figure>

Echantillon alimentaire
ou de surface

<figure><img src="image_16.png" /></figure>

Acquisition Raman

<figure><img src="image_17.png" /></figure>

<figure><img src="image_18.png" /></figure>

Spectroscopie

Etat de
viabilité
<figure><img src="image_19.png" /></figure>

# Objectif de l'étude : Mise au point de la microspectroscopie Raman-DIP pour la détermination de l'état de viabilité des *Listeria monocytogenes* stressées par un biocide
# Préparation de l'analyse des échantillons

<figure><img src="image_20.png" /></figure>
# Quantification par les méthodes microbiologiques et de biologie moléculaire

<figure><img src="image_21.png" /><figcaption>Quantification des populations de L. monocytogenes Lm1</figcaption></figure>
# Vérification de la mort des bactéries par microscopie à épifluorescence

Microscopie à épifluorescence par coloration Live/DEAD des cellules de L. monocytogenes Lm1

<figure><img src="image_22.png" /><figcaption>Condition contrôle (sans biocide)</figcaption></figure>

<figure><img src="image_23.png" /><figcaption>0,25 % de biocide</figcaption></figure>

<figure><img src="image_24.png" /><figcaption>50% de biocide</figcaption></figure>
# Spectroscopie Raman des cellules marquées

<figure><img src="image_25.png" /><figcaption>Profil de distribution des ratios calculées pour le pic C-D pour les conditions contrôlées et en présence de 0,25% de biocide</figcaption></figure>

<figure><img src="image_26.png" /></figure>
# Objectif : Détermination de l'état de viabilité des L. monocytogenes par Microspectroscopie Raman-DIP

<table><thead><tr><th>Concentration en<br>biocide</th><th colspan="2">0% (Contrôle)</th><th colspan="2">0.25%</th><th colspan="2">50%</th></tr></thead><tbody><tr><th>Méthode</th><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td><td>qPCR, PMA-qPCR<br>& dénombrement sur<br>gélose</td><td>Raman</td></tr><tr><th>L. monocytogenes<br>Lm1</th><td>~VC</td><td>Vivantes et<br>métaboliqueme<br>nt active</td><td>VNC</td><td>Vivantes et<br>métaboliqueme<br>nt inactive</td><td>Mort</td><td>Pas d'acquisition<br>possible</td></tr></tbody></table>

Résultats similaires pour la souche de référence EGD-e

**Perspective** : Détection de l'état VNC de bactéries pathogènes : Présentation d'une méthode innovante de microspectroscopie Raman couplée à un marquage au deutérium (Raman DIP) → **Poster par Jonathan Dikec**
<figure><img src="image_27.png" /></figure>

RÉPUBLIQUE
FRANÇAISE

Liberté
Égalité
Fraternité

<figure><img src="image_28.png" /></figure>

Campus
de la mer

<figure><img src="image_29.png" /></figure>

<figure><img src="image_30.png" /></figure>

UNIVERSITÉ
de Picardie
Julier Verny

anses

Merci pour votre attention

Darius Abedini

Contact :

- E-mail : darius.abedini@anses.fr – darius.abedini@cea.fr -

- Tél : +33.6.20.37.80.76 -