# Acide linoléique conjugué et cancer du sein

Philippe BOUGNOUX<fnref n="1" />
Aurélia BARASCU<fnref n="1" />
Flore LAVILLONNIÈRE<fnref n="1" />
Marie-Lise JOURDAN<fnref n="1" />
Virginie MAILLARD<fnref n="1" />
Véronique CHAJES<fnref n="1" />
Jean-Louis SÉBÉDIO<fnref n="2" />

## Introduction

Les dérivés diène-conjugués de l'acide linoléique correspondent à une famille d'isomères géométriques et positionnels de l'acide linoléique (isomères diène-conjugués) collectivement dénommés CLA (pour conjugated linoleic acid). Ce groupe d'acides gras, présent dans les aliments d'origine animale comme la viande de ruminants ou dans certains produits laitiers [1], est également généré au cours de la cuisson [2], ainsi que sous l'action de la flore bactérienne intestinale [3]. L'isomère principal est le 9-cis,11-trans CLA. Cet isomère résulte aussi de la conversion endogène de l'acide vaccénique trans-11 18:1, également présent dans le lait.

Les dérivés conjugués de l'acide linoléique (CLA) semblent avoir des propriétés inhibitrices de la cancérogenèse, notamment mammaire. L'utilisation de différentes espèces animales (souris, rates, hamsters), de diverses lignées cellulaires cancéreuses, et de plusieurs modèles de cancérogenèse (cancers chimio-induits avec des cancérigènes directs ou indirects, tumeurs transplantées) ont permis de confirmer le rôle protecteur des CLA en cancérogenèse pour différents sites : peau [2], estomac [4], pancreas [5], foie [6], poumon [7], glandes mamaires [8-11] et colique [11-15]. Il a été rapporté un effet inhibiteur des CLA aux différentes phases : initiation [9, 16, 17], promotion et croissance tumorales [8, 16], formation de métastases [18, 19].

Dans le modèle de tumeurs mammaires chimio-induites, des rates prépubères dont le régime était supplémenté en CLA avant l'initiation par un agent cancérigène (diméthylbenz(a)anthracène ou N-nitroso-N-méthylurée), ont développé significativement moins de tumeurs que les rates témoins (47 %) [9, 20], suggérant que la présence de CLA dans les tissus mammaires les rendraient moins sensibles à l'initiation ultérieure par un agent cancérigène.

De même, si la supplémentation en CLA était réalisée après l'initiation par un agent cancérigène pendant 20 semaines, les rates développent significativement moins de tumeurs que les rates du lot témoin (32 à 60 % de tumeurs en moins) [8, 9]. Ces effets inhibiteurs de la promotion tumorale sont indépendants de la nature de l'agent cancérigène utilisé ou des lipides (nature et quantité) administrés dans le régime [21, 22]. L'apport de CLA dans la diète sous la forme d'acides gras libres semble avoir un effet similaire à celui des

<figure><img src="image_1.png" /><figcaption>Figure 1. Masse tumorale mammaire chez le rat, estimée en fonction du régime. Trois groupes de rats Sprague-Dawley ont reçu au décours d'une initiation par NMU une diète comportant 5 % d'huile de tournesol et une supplémentation de 1% sous forme d'acides gras libres provenant soit de l'huile de tournesol (témoins), soit d'un mélange de CLA ou de l'isomère purifié 9c, 11t.</figcaption></figure>

<footnote n="1">¹ INSERM E 0211, Université François Rabelais, CHU de Tours, Hôpital Bretonneau, 37044 Tours Cedex</footnote>

<footnote n="2">² Laboratoire de nutrition lipidique, INRA, Dijon</footnote>
CLA sous forme de triglycérides [9], bien que l'accumulation de CLA dans la glande mammaire soit inférieure [23].

## Les CLA inhibent la cancérogenèse mammaire chez le rat

Comme la majorité des données expérimentales provient d'une seule équipe [8, 9, 20-24], il a semblé utile de déterminer si des résultats similaires pouvaient être retrouvés de façon indépendante. De plus, comme chacun des isomères constitutifs des CLA est porteur d'une activité distincte de celle du mélange naturel, il était nécessaire d'examiner l'activité de l'isomère principal 9-cis, 11-trans des CLA. Dans ce but, nous avons réalisé une série d'études d'intervention nutritionnelle chez le rat. Ces études ont été conçues pour comparer les effets de cet isomère à ceux d'un mélange d'isomères de CLA sur l'incidence, la multipli-cité et la croissance de tumeurs mammaires autochtones induites chez le rat femelle par le N-nitroso-N-méthylurée. Après l'étape d'initia-tion, les rats ont été séparés en trois groupes expérimentaux recevant un régime de base (5 % de lipides) supplémenté avec soit l'iso-mère 9-cis, 11-trans synthétisé, soit un mélange d'isomères de CLA, soit des acides gras libres préparés à partir d'huile de tournesol pour le groupe témoin. On a observé, à 20 semaines d'évolution, une diminution de 30 et 35 % du nombre de tumeurs/rat et une diminution de 44 et 45 % de la masse tumorale/rat dans les groupes ayant reçu respectivement le mélange de CLA et l'isomère 9-cis, 11-trans de synthèse (figure 1). L'incorporation tissulaire des CLA a été mesurée lors du sacrifice. La mesure des taux d'isomères de CLA a montré que ces iso-mères avaient bien été incorporés dans le tissu adipeux mammaire et dans les tissus tumoraux (tableau 1). Ainsi, le principal isomère de CLA présent dans l'alimentation est inhibiteur en carcinogenèse mammaire, comme l'est le mélange de CLA [25].

## CLA et risque de cancer du sein

Il n'existe que peu de données concernant la relation entre les apports alimentaires de CLA et le risque de cancer du sein, principalement en raison de l'absence de disponibilité de ques-tionnaires permettant une estimation des apports alimentaires. Pour déterminer si les CLA protègent contre le risque de cancer du sein, nous avons réalisé une étude cas-témoins à partir d'une population de 213 patientes présentant une tumeur du sein maligne, inva-sive mais non métastatique (cas), et de 84

<table><caption>Tableau 1. Incorporation tissulaire en CLA après 16 semaines d'intervention nutritionnelle chez le rat.</caption><thead><tr><th rowspan="2">Site</th><th colspan="3">Groupes nutritionnels</th></tr><tr><th>Témoin</th><th>Mélange de CLA</th><th>9c,11t-CLA</th></tr></thead><tbody><tr><td>Tissu adipeux mammaire</td><td>0,18<sup>a</sup></td><td>5,64<sup>b</sup></td><td>6,53<sup>c</sup></td></tr><tr><td>Phospholipides de tumeur*</td><td>0,03</td><td>0,40</td><td>0,26</td></tr></tbody></table>

% des acides gras totaux, moyenne de 5 animaux/groupes ; a,b,c = p < 0,05.

patientes avec une tumeur du sein bénigne (témoins). Nous avons utilisé le taux de CLA du tissu adipeux comme biomarqueur des apports alimentaires passés de CLA. Le taux de CLA a été mesuré dans un fragment biopsique de tissu adipeux conservé lors de la chirurgie. Le taux moyen de CLA représentait 0,44 % de l'ensemble des acides gras du tissu adipeux, allant de 0,14 % à 0,75 % (figure 2). Les caractéristiques des deux populations étudiées sont présentées dans le tableau 2. La population de cas était plus âgée, une proportion plus élevée de femmes ménopausées et l'indice de masse corporelle était plus élevé que dans la population témoin. Un modèle de régression logistique non conditionnelle a été utilisé pour obtenir l'estimation des Odds ratio, après ajustement sur l'âge, le statut ménopausique et l'indice de masse corporelle [26]. Nous n'avons pas trouvé d'association significative entre les CLA du tissu adipeux et le risque de cancer du sein (tableau 3).

## CLA et récidives des cancers du sein

Comme les CLA inhibent la croissance tumo-rale chez le rat, il a semblé intéressant d'examiner ce point chez l'Homme. Le cancer du sein est une situation appropriée, puisque la tumeur réapparaît au décours du traitement, dans un site distant (métastase), dans environ un tiers des cas. Pour cette raison, la relation entre le taux de CLA présent dans le tissu adipeux au moment du diagnostic initial, et la survenue ultérieure de métastases a été examinée dans la population des patientes porteuses d'un cancer du sein. Aucun lien n'a été observé entre le taux de CLA et les facteurs pronostiques du cancer du sein, i.e. : taille de la tumeur, atteinte des ganglions axillaires, grade histopronostique, réceptivité hormonale (figure 3) ni avec l'index mitotique ou la présence d'emboles vasculaires. Il n'est pas non plus apparu de relation significative avec le risque de récidive ou de

<figure><img src="image_2.png" /><figcaption>Figure 2. Distribution des patientes en fonction du taux de CLA dans le tissu adipeux mammaire. Un fragment de tissu adipeux prélevé lors de l'acte chirurgical diagnostique chez 297 patientes opérées pour une tumeur mammaire bénigne ou maligne a été analysé. Les lipides ont été extraits, purifiés, et les CLA quantifiés (Lavillonnière et al., 2003).</figcaption></figure>
<table><caption>Tableau 2. Caractéristiques de la population.</caption><thead><tr><th></th><th>Témoin (n = 84)</th><th>Cas (n = 213)</th><th>P<sup>a</sup></th></tr></thead><tbody><tr><td>Âge (années)</td><td>42.7 (1.5)</td><td>55.4 (0.9)</td><td>0.0001</td></tr><tr><td>Moyenne (SE)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>IMC (kg/cm<sup>2</sup>)</td><td>22.4 (0.4)</td><td>24.5 (0.3)</td><td>0.0009</td></tr><tr><td>Moyenne (SE)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Statut ménopausique (%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pré-ménopause</td><td>77.4</td><td>41.8</td><td>0.001</td></tr><tr><td>Post-ménopause</td><td>22.6</td><td>58.2</td><td></td></tr></tbody></table>

IMC : Indice de masse corporelle ; a test chi² ou Student-t.

<table><caption>Tableau 3. Risque relatif estimé de cancer du sein (Ors, brut et ajusté*), et intervalle de confiance 95% en fonction du taux de CLA dans le tissu adipeux de la population dans son ensemble (n = 297).</caption><thead><tr><th rowspan="2">Acide gras</th><th colspan="3">ORs<sup>a</sup> (95% ICs)</th><th rowspan="2">P de tendance</th></tr><tr><th>Tertile 1 (bas)</th><th>Tertile 2</th><th>Tertile 3 (élevé)</th></tr></thead><tbody><tr><td>CLA</td><td>1,00</td><td>1,29 (0,68-2,45)<br/>1,65 (0,80-3,37)*</td><td>1,42 (0,77-2,65)<br/>1,83 (0,90-3,71)*</td><td>0,27<br/>0,10</td></tr></tbody></table>

*Ajusté sur l'âge au diagnostic, l'indice de masse corporelle et le statut ménopausique.

métastases (figure 4). Ainsi, dans une cohorte de patientes traitées pour un cancer du sein, il n'a pas été observé de relation entre le CLA dans les tissus de réserve et la recroissance tumorale au cours du suivi [27].

## Discussion et perspectives

Si les données disponibles n'indiquent pas que les CLA alimentaires influencent le risque de cancer du sein ou son évolution métastatique, elles n'éliminent pas la possibilité que les CLA puissent être protecteurs en cancérogenèse mammaire humaine. La raison pourrait être le faible taux de CLA disponibles dans l'alimentation humaine, au moins dans la région Centre de la France, où cette étude a été réalisée. En effet, le taux moyen dans le tissu adipeux chez l'homme est à peine plus élevé que celui observé chez le rat non supplémenté, et beaucoup plus bas (plus de 10 fois) que le taux présent chez le rat recevant une supplémentation de 1 % en CLA. Or si les effets inhibiteurs de la promotion tumorale s'observent dès 0,1 % de CLA dans le régime alimentaire, ils dépendent linéairement de la dose apportée jusqu'à 1 % (en poids) de la diète [8, 10].

Ainsi nos deux études, cas-témoins et pronostique, qui ont comparé entre elles des populations de patientes ayant des apports de CLA trop faibles pour qu'un effet bénéfique puisse être apparent, ne permettent pas de conclure. Ces molécules, présentes dans de nombreux produits alimentaires pourraient être actives, mais à des concentrations bien supérieures à celles apportées dans notre alimentation, contrairement à ce qui avait été précédemment évoqué [20, 24]. On ne sait pas actuellement si une supplémentation en CLA dans des conditions permettant d'augmenter les taux de

CLA dans les tissus aurait un effet bénéfique chez l'homme, ni si une telle supplémentation serait réalisable dans des conditions de sécurité nécessaires. Pour autant, les enjeux restent élevés, puisque ces molécules restent candidates à une prévention nutritionnelle du cancer du sein. Une modélisation de cancérogenèse mammaire dans une espèce animale de taille

intermédiaire entre le rat et l'Homme pourrait permettre de déterminer s'il serait légitime de prendre un tel risque chez l'Homme. Dans cette perspective, l'utilisation d'animaux domestiques, espèces connues pour développer spontanément des tumeurs mammaires durant la deuxième partie de leur vie, pourrait être considérée pour une telle intervention nutritionnelle ciblée sur les CLA à doses élevées.

**Remerciements.** Les travaux cliniques ont été possibles grâce à O. Le Floch, J. Lansac, G. Body, et le personnel du bloc opératoire du service de gynécologie du CHU de Tours, et à C. Couet qui a apporté les compétences de nutrition humaine. F. Fetissof, T. Lefrancq et MC Grangeponte ont réalisé les études anatomopathologiques, et M. Pinault, pour son aide logistique. Les supports financiers ont été apportés par la Région Centre et le CERIN (FL, bourse cofinancée), le CHU de Tours (VC) et les comités départementaux de la Ligue Nationale Contre le Cancer (Comités du Cher, de la Charente, du Loir-et-Cher et de l'Indre-et-Loire). Nous souhaitons associer à l'ensemble de ces travaux notre collègue Claude Lhuillery, INRA, Jouy-en-Josas.

<figure><img src="image_3.png" /><figcaption>Figure 3. Facteurs pronostiques du cancer du sein et réserves en CLA du tissu adipeux mammaire. A) Taux de CLA du tissu adipeux mammaire selon la taille de la tumeur lors du diagnostic de cancer du sein ; B) selon le degré d'envahissement ganglionnaire axillaire ; C) selon le grade histopronostique de la tumeur ; D) selon la richesse en récepteurs d'oestradiol du tissu tumoral. Les cercles sont pleins ou vides selon le statut hormonal (non ménopausé ou ménopausé) des patientes lors du diagnostic.</figcaption></figure>
<figure><img src="image_4.png" /><figcaption>Figure 4. Récidives et métastases au cours du suivi chez des patientes traitées pour un cancer du sein, en fonction des réserves tissulaires en CLA. La population a été séparée en deux groupes selon que le taux de CLA du tissu adipeux mammaire prélevé au moment du diagnostic de cancer du sein était supérieur (gris clair) ou inférieur (noir) à la valeur médiane et le taux d'évènements cumulés a été calculé au cours du temps après traitement (figure du bas). Distribution des patientes selon le taux de CLA du tissu adipeux mammaire (figure du haut).</figcaption></figure>

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