# ANNEXE 2 : Extraction d'ADN : Dneasy Blood & Tissue, Qiagen

(Source : Laurence Marjolet - Vetagro Sup)

1- Vortexer pendant 30 secondes (s'assurer que le filtre est bien au contact du tampon GITC - Ne pas hésiter à déplier le filtre)

2- Ajouter 300 µL de tampon AL

3- Vortexer pendant 30 secondes

4- Ajouter 500 µL d'éthanol absolu

5- Vortexer pendant 30 secondes

6- Transférer 700 µL de lysat sur une colonne de centrifugation (Dneasy mini spin column)

7- Centrifuger 1 min à 13 000 rpm. Jeter le filtrat

8- Répéter les étapes 6 et 7 jusqu'à ce que tout le lysat soit passé sur la colonne

9- Placer la colonne sur un nouveau tube de collection

10- Ajouter 500 µL de tampon AW1

11- Laisser agir 5 min

12- Centrifuger 1 min à 13 000 rpm. Jeter le filtrat

13- Placer la colonne sur un nouveau tube de collection

14- Ajouter 700 µL de tampon AW2

15- Centrifuger 1 min à 13 000 rpm. Jeter le filtrat

16- Centrifuger 2 min à 13 000 rpm pour éliminer toute trace d'éthanol

17- Placer les colonnes dans un tube de 1.5 mL

18- Ouvrir les capuchons des colonnes et laisser 5 min à l'air pour permettre l'évaporation de l'éthanol résiduel

17- Ajouter 25 µL de tampon AE directement sur la silice et attendre 1 min

18- Centrifuger 1 min à 13 000 rpm pour éluer l'ADN

19- Répéter l'étape 17 et 18 (augmente le rendement)

20- Fermer les tubes et les conserver à -20°C