# L'apporto delle colture in vitro per il miglioramento genetico

Sergio Ochatt

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Sergio Ochatt. L'apporto delle colture in vitro per il miglioramento genetico. Colture in vitro e micropropagazione in ortoflorofrutticoltura, Agro Bio Frut. FRA., Jun 1989, Cesena, Italy. 321 p. hal-01600609

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Submitted on 4 Jun 2020

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CONVEGNO SU

COLTURE IN VITRO E
MICROPROPAGAZIONE

in
ORTOFLOROFRUTTICOLTURA

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Finito di stampare nel mese di aprile 1992
presso GRAFICHE NDM Litografia s.r.l.
Via Meucci, 27 - Forlì - Tel. 0543/720666
# L'apporto delle colture *in vitro* per il miglioramento genetico

Sintesi delle sessioni 1-2-3 del Simposio Internazionale "In Vitro Culture and Horticultural Breeding"

SERGIO J. OCHATT

I.N.R.A., Station d'Amélioration des Espèces
Fruitières et Ornamentales,
49000 Beaucouzé, Angers, France.

## INTRODUZIONE

Pochi compiti comportano una maggiore difficoltà del dover illustrare, discutere e sottolineare le nuove scoperte nel lavoro di altri ricercatori, facendo nel contempo giustizia in uno spazio ridotto, alla qualità dei risultati ottenuti.

Tale compito diventa ancor più difficile se si deve trattare una grande varietà di materiale e di obiettivi perseguiti in ciascuno di tali lavori.

Questo articolo, quindi, ha come fine quello di riassumere, nel modo più succinto e chiaro possibile, le 65 relazioni scientifiche presentate nelle prime tre sessioni del Simposio Internazionale su *"In vitro" culture and Horticultural Breeding*, promosso dall'Università di Bologna e tenutosi a Cesena sotto gli auspici della International Society for Horticultural Science.

A tale proposito, i diversi lavori saranno riassunti per gruppi, corrispondenti alle sessioni nelle quali i lavori stessi sono stati presentati.

Come detto sopra, non potendo mai alcun riassunto essere completo, il lettore dovrà riferirsi agli Atti del Simposio, che saranno pubblicati in volume di Acta Horticulturae, per ulteriori dettagli.

## PRIMA SESSIONE: COLTURE DI CELLULE E PROTOPLASTI

Questa sessione ha compreso 5 relazioni e 8 posters. La scarsezza dei lavori in essa dimostra che si è in un'area delle biotecnologie in cui si richiedono ulteriori apporti. È tuttavia degno di nota che, forse per la prima volta, la metà dei risultati riportati in tale campo (6 lavori in tutto) riguardavano specie legnose (arboree e arbustive), come pure è chiaro che ora, dopo circa 30 ani di ricerca di base sui protoplasti, il potenziale di risultati economici raggiungibili attraverso la manipolazione di cellule e protoplasti sta divenendo una realtà per cui queste tecnologie saranno progressivamente accettate dai ricercatori e dall'industria sementiera.

### a. Colture cellulari

Solo due gruppi hanno presentato risultati di esperimenti condotti su colture di cellule e calli come tali.

Forti et al. hanno riferito sui risultati preliminari relativi alla induzione e alla crescita
di calli e colture di cellule in sospensione di barbabietola. Lavorando su 4 linee maschiosterili (CMS) e le loro rispettive linee di mantenimento (ML), gli autori hanno trovato una chiara influenza del genoma citoplasmatico sui fabbisogni colturali per un'efficiente induzione e crescita di calli e colture di sospensioni cellulari, come pure sulla loro successiva capacità di rigenerazione. A conferma di ciò si è rilevato che quando una linea CMS era paragonata con la corrispettiva linea ML non esistevano differenze sostanziali nelle esigenze colturali. Viceversa le diversità di verificavano quando i confronti venivano svolti fra diverse coppie CMS-ML.

In un'altra relazione, Wetten e Cumbus hanno esaminato l'influenza dell'intensità luminosa sulla crescita del callo della cv. di pomodoro *Sonatine* nel tentativo di determinare l'optimum di intensità sia per la crescita del callo che per la rigenerazione di piantine in questa cultivar.

## b. Colture di protoplasti

Sei delle dieci relazioni su tale tema hanno riguardato le varie applicazioni della coltura di protoplasti per il miglioramento genetico delle specie legnose.

Ochatt ha riassunto i progressi e i nuovi risultati conseguiti fino ad oggi attraverso l'applicazione delle strategie basate sull'impiego dei protoplasti per gli alberi da frutto (Rosaceae).

Per tale famiglia di piante negli ultimi anni si sono registrati stimolanti risultati. È ora infatti possibile rigenerare intere piante da colture di protoplasti di portainnesti di piante da frutto come il pero selvatico (*Pyrus communis* ar. *pyraster* L.), il portainnesto Colt del ciliegio (*Prunus avium* x *P. pseudocerasus*), i cloni CAB 4D e CAB 5H di ciliegio acido e il portinnesto M9 del melo (*Malus x domestica* Borkh.), oltre due delle varietà di pero (*Pyrus communis* L.). "Conference" e "Williams" e di *Actinidia chinensis* var. *chinensis* Planch.

Significativo, in questo contesto, è stato lo sviluppo di una nuova strategia per la rigenerazione di piante da callo, per diversi genotipi in cui si è utilizzata la rizogenesi come tappa intermedia. È stato anche riportato che con la elettroporazione di protoplasti isolati da breve tempo (del portainnesto Colt di ciliegio, della pera Conference e di numerose altre specie arboree ed erbacee) si migliora marcatamente la sintesi di DNA, l'inizio della divisione delle cellule derivate da protoplasti, la successiva crescita di calli, la capacità di rigenerare gemme vegetative da tali calli e la capacità rizogena dei germogli derivati da protoplasti. Altamente significanti, in termini di diretta applicazione per il miglioramento genetico, sono la variabilità somaclonale e la ibridazione somatica.

A tale riguardo è stato segnalato l'ottenimento, attraverso una strategia di selezione ricorrente, di piante del portainnesto Colt di ciliegio - derivate da protoplasti - stabili e tolleranti nei confronti della salinità e di scarsi apporti idrici.

Inoltre, sono stati presentati in modo sommario i risultati sull'ottenimento di ibridi somatici intergenerici (intersubfamigliari) di portainnesti di alberi da frutto, pero selvatico (+) portainnesto Colt di ciliegio (*Pyrus communis* var. *pyraster* L., *Pomoideae* (+) *Prunus avium* x *P. pseudocerasus*, *Prunoideae*).

Poichè questi nuovi portainnesti ibridi somatici hanno dimostrato buona affinità di innesto con le specie di entrambe le sottofamiglie parentali, si ritiene che essi potranno fornire una base per ulteriori studi sui meccanismi cellulari che sovraintendono alla affinità d'innesto nelle più importanti rosacee da frutto.
Patat-Ochatt e Power hanno riferito sulla rigenerazione di calli parzialmente differenti da protoplasti ottenuti da callo della varietà di melo "Bramley's Seedling" e di piante intere ottenute da protoplasti prelevati dal mesofillo fogliare del portainnesto di melo MM 106. Col secondo genotipo, la capacità di rigenerare germogli fu mantenuta per lungo tempo (più di 12 mesi), mentre la qualità complessiva e capacità di radicazione dei germogli derivati da protoplasti venne significativamente migliorata trasferendo i calli differenti, con i germogli ancora attaccati, dal mezzo usato per la rigenerazione ad un altro utilizzato per la micropropagazione dei germogli parentali con una più elevata concentrazione di vitamine.

Marino ha riferito sulla proliferazione di colonie cellulari ottenute da colture di protoplasti a partire da mesofillo di vite ritenute generalmente di difficile manipolazione.

Per quello che riguarda le specie arboree forestali, Lineberger e colleghi hanno riferito sugli interessanti risultati ottenuti con piante di olmo (Ulmus x Pioneer) derivate da protoplasti, dove la variabilità protoclonale per una migliore resistenza alla grafiosi (Ceratocistis ulmi) è stata fissata nei cloni propagati aganicamente. Peraltro ciò dimostra anche che la fusione di protoplasti e l'ibridazione somatica non rappresentano sempre una conditio sine qua non per fissare validi caratteri agronomici acquisiti e/o selezionati.

In una relazione di estrema chiarezza, Zelcer ha puntualizzato le differenze fra le strategie per la produzione di ibridi simmetrici (cioè quelli che interessano l'intero genoma) e di ibridi asimmetrici o *cibridi* (ottenuti mediante il parziale trasferimento di caratteri nucleari da una specie donatrice, seguendo il cosiddetto schema donatore-ricevente). Le possibilità di sfruttamento e applicazione di tali strategie sono state messe in pratica con l'ottenimento di *cibridi* di *Lycopersicon peruvianum* (+) *L. esculentum* ed ibridi simmetrici di *Solanum muricatum* (+) *L. esculentum*.

Un altro rapporto di un valido lavoro sui *cibridi* è stato fornito da Vardi e collaboratori, che hanno ottenuto piante cibride fra specie di *Microcitrus* e *Citrus* (ad esempio, arancio amaro e limone rugoso), ora allevate in serra per una ulteriore valutazione.

Nelle specie erbacee, Al-Atabee e Power, lavorando su specie ornamentali della famiglia delle Compositae, notoriamente recalcitranti, hanno riferito sulla produzione di calo da un protoplasti di *Agaratum*, *Calendula* e *Tithonia*, insieme alla rigenerazione di piante da protoplasti di *Rudbeckia purpurea* e *R. Laciniata*, la seconda contemplando la rizogenesi come tappa intermedia.

In più, De Donato e collaboratori rigenerarono piante resistenti all'atrazina da protoplasti di biotipi resistenti di *Solanum nigrum* L. dimostrando la permanenza di caratteri utili anche dopo la rigenerazione di piante da coltura di protoplasti.

Fra gli esperimenti di base impiegando protoplasti, Bagni e Pistocchi hanno trattato dell'assorbimento di poliammine da parte di cellule protoplasti e organelli cellulari di catarota e *Helianthus tuberosus*, mentre Lucretti et al. hanno adottato una nuova tecnica, la classificazione di cellule attivate mediante fluorescenza, per stabilire il livello di ploidia (cioè di contenuto di DNA nucleare), l'eterogeneità e la vitalità riferita alla capacità di rigenerare la parete cellulare da parte di protoplasti di diverse cultivars di pomodoro e varie linee di *Citrus*.

Infine, sempre nella prima sessione, vi è stato un discorso problematico tenuto da Herman. Basandosi su pochi esempi, per la maggior parte non pubblicati, che suggeriscono un effetto positivo, per molte specie, di una leggera contaminazione *in vitro*, sulla crescita *in vitro* e il successivo ambientamento *ex vitro*, egli ha posto la domanda "Dobbiamo preoccuparci realmente delle contaminazioni batteriche?". Tale quesito è rimasto ancora senza risposta.
## SECONDA SESSIONE: ORGANOGENESI E EMBRIOGENESI

Durante tale sessione furono presentate 13 relazioni orali e 28 posters, di cui 29 trattarono di organogenesi e 20 di embriogenesi.

La relazione d'apertura di questa sessione fu rivolta agli aspetti genetici e fisiologici necessari per ottenere successo nella organogenesi e nell'embriogenesi (Nuti Ronchi), seguita da una ampia e completa rassegna sull'impiego delle colture *in vitro* per il miglioramento genetico della vite (Mullins) nella quale sono stati messi in luce i risultati più recenti ed i problemi ancora irrisolti.

### a. Organogenesi

Negli ultimi tempi la tecnica dell'induzione di gemme vegetative da dischi fogliari ha acquisito notevole consenso. Molti ricercatori nel mondo stanno sviluppando tale strategia vedendo le sue possibili applicazioni per un'ampia gamma di obiettivi, incluse la propagazione su vasta scala, l'induzione e lo sfruttamento della variabilità somaclonale e la rigenerazione delle piante transgeniche.

Sulla base di questo, 10 dei lavori sulla organogenesi presentati in tale sessione riguardarono la rigenerazione di germogli da dischi fogliari, in 6 di questi il materiale specificale era costituito da foglie di melo (Ancherani et al.; Druart; Dufour; Fasolo e Predieri; Perfanova; Therer-Hedtrich e Theiler-Hedtrich). In tali relazioni, le condizioni colturali, la composizione ormonale del mezzo, l'atmosfera in cui avviene la coltura, il tipo di vaso, l'influenza del fotoperiodo durante la coltura, l'uso di diverse citochinine e di idrolizzato di caseina, la dimensione degli espianti e la loro posizione sia sul mezzo di coltura che sulla pianta madre furono i fattori considerati per i loro effetti sull'efficienza di rigenerazione dei dischi di foglie di melo.

Inoltre, un pre-trattamento consistente in una immersione delle foglie già incise in una soluzione ormonale (Druart) o l'irraggiamento dei dischi con raggi gamma (fino a 500 rad) prima della coltura hanno provocato un marcato incremento nella capacità rigenerativa di gemme vegetative avventizie dai dischi di foglie di melo.

É stata anche trattata la rigenerazione da dischi fogliari di *Prunus canescens* (Druart), il portainnesto nanizzante del ciliegio *P. incisa x serrula* (Druart), *Lisianthus russellianus* (Ruffoni et al.) e *Passiflora coerulea*, in cui si sono riscontrati effetti positivi dell'acido ascorbico sulla differenziazione di gemme aventizie (Bennici et al.).

Le foglie sono state usate anche per ottenere calli, da cui, in seguito, la rigenerazione di gemme vegetative. Due relazioni, entrambe su actinidia, sono state presentate al Simposio su tale argomento.

Così, Marino e Battistini hanno esaminato l'effetto del pH del mezzo (5.7-8.5) sulla crescita del callo e le capacità dei germogli di rigenerare, constatando con prove comparate a diversi valori di pH che al valore di pH ottimale per la crescita (5.7) la rigenerazione di germogli e la sopravvivenza erano ridotti.

Inoltre, Muleo e Morini hanno esaminato gli effetti della coltura al buio o sotto luce di tre differenti qualità (blu, rossa e fluorescente) sulla organogenesi di callo fogliare di actinidia.

Dalle colture si ebbe rigenerazione più precoce di radici quando il callo era stato mantenuto sotto luce rossa, a parità delle altre condizioni esaminate, mentre la rigenerazione di gemme vegetative avvenne solo sotto luce rossa.
Sono inoltre stati presentati molti altri resoconti riguardanti la crescita e la rigenerazione da callo di espianti di diversa origine, inclusi, come fonte di callo, sia espianti di embrioni semenzali che di non-semenzali.

Fra le relazioni sulle colture di calli derivate da embrioni semenzali, Rota e collaboratori hanno riferito su un protocollo per un'elevata rigenerazione di germogli da cotiledoni immaturi di fagiolo, *Phaseolus coccineus*. Inoltre, applicando a una coltura di ipocotili di *Citrus aurantifolia* un trattamento di breve durata (6 h) di un antimetabolita (cicloeximide, actinomicina-D), Dua e Garg hanno aumentato in modo impressionante la rizogenesi degli espianti di ipocotile. Fari e Thury hanno studiato in modo comparato la capacità di rigenerare germogli da parte di espianti di semenzali (cotiledoni, apici vegetativi, sezioni distali e basali di ipocotili), trovando che le migliori risposte si ottengono sui cotiledoni, mentre per gli altri espianti esaminati vi è una riduzione basipeta dell'organogenesi.

La rigenerazione di piante è stata osservata anche in colture di calli derivate da embrioni maturi di *Alstroemeria* (Gonzalez-Benito e Alderson), mentre Leva e Falcone hanno presentato risultati preliminari di prove di propagazione *in vitro* e di induzione di organogenesi da cotiledoni e foglie prelevati da semenzali molto giovani di *Anacardium occidentale*.

Risultati molto incoraggianti nell'elusivo campo dell'ottenimento della triploidia sono stati presentati da Kagan-Zur et al., i quali hanno riferito sulla proliferazione di callo da endosperma di pomodoro. Inoltre, essi sono riusciti a differenziare da tali calli radici ed anche germogli e, sebbene i germogli così prodotti non siano sopravvissuti, tali risultati rappresentano un significativo passo avanti verso la produzione di piante triploidi da espianti di endosperma.

Le relazioni riguardanti l'induzione di calli e la successiva differenziazione di germogli da essi, usando espianti non prelevati da semenzali e da organi diversi dalle foglie hanno compreso rigenerazione di germogli da acheni immaturi (12 gg. dopo la fioritura) di fragola (Lis), la differenziazione di noduli verde scuri da calli derivati da sospensioni cellulari e di gemme avventizie da calli derivati da segmenti di germogli di garofano (Radojevic et al.), mentre Ruffoni et al., che pure lavorano su garofano, hanno riferito sulla rigenerazione di gemme vegetative da callo di derivazione meristematica. Infine, Mensuali-Sodi e colleghi hanno riferito sulla rigenerazione di bulbetti da scaglie prese da bulbilli allevati in vitro di *Lilium speciosum* e *L. longiflorum*. Essi hanno esaminato anche il ruolo dell'etilene nella rigenerazione, osservando che i livelli di tale molecola erano inversamente correlati alla capacità rizogena per *L. speciosum*, mentre non si potè notare alcuna relazione per *L. longiflorum*.

Altri lavori presentati hanno riguardato la creazione di una collezione di germoplasma di *Ribes in vitro*, affiancato ai risultati preliminari sul mantenimento a bassa temperatura per un lungo periodo di tale collezione (Brennan et al.), la valutazione in campo (in termini di produttività) di linee androgenetiche di melanzana (Sanguineti et al.), e diverse interessanti osservazioni sulla implicazione dell'uso di ritardanti della crescita (daminozide, ancimidolo, paclobutrazolo, uniconazolo) in colture liquide di *Gladiolus* in bioreattore (Ziv). Tutti i prodotti ritardanti esaminati aumentavano il numero di gemme prodotte per espianto, riducevano l'allungamento fogliare e miglioravano la produzione di cormi tutti fattori che contribuirono al miglioramento delle colture ai fini della micropropagazione.

Va comunque prestata molta cura, in quanto alcuni ritardanti (paclobutrazolo, uniconazolo) possono avere un perdurante effetto inibitorio sullo sviluppo dei germogli dopo il trapianto all'esterno. Furono inoltre presentati dei risultati sulla regolazione dell'organogenesi (radicazione e ramificazione germogli) mediante l'uso di acido
jasmonico su porzioni di stelo e meristemi di patata, vite e piante di fagiolo allevate *in vitro* (Ravnikar et al.). Gli autori hanno riscontrato che concentrazioni da 10⁻³ a 1 µM di acido jasmonico hanno incrementato significativamente la lunghezza e il peso fresco delle piante, e stimolato la formazione di radici laterali, mentre più alte concentrazioni (fino a 100 µM) dell'acido inducevano una riduzione della lunghezza delle radici principali, insieme ad un incremento del diametro delle stesse.

La radicazione *in vitro* di microtalee è ancora difficile per molte importanti specie di notevole interesse agronomico. Sono stati riportati i risultati sull'evoluzione e sui rapporti fra perossidasi basiche e radicazione in germogli di melo (De Klerk et al.), mentre Lankes e Zimmerman hanno esaminato l'impatto del potenziale osmotico sulla proliferazione e la successiva radicazione di microtalee di melo.

Infine, fornendo una chiara indicazione dell'attuale importanza delle tecniche di colture *in vitro*, sono stati presentati anche risultati sulla crescita di piante e colture di tessuti su un terreno lunare simulato (Venketeswaran et al.).

## b. Embriogenesi

Janick e Kim hanno esaminato in modo esauriente lo "stato dell'arte" sull'induzione dell'embriogenesi e sulla produzione di "semi sintetici". I vari stadi colturali e i loro fabbisogni sono stati esemplificati impiegando carota e sedano come sistemi modello. La strategia per produrre semi sintetici consiste, fondamentalmente, nell'essiccare gli embrioni prodotti e nel rivestirli con ossido di polietilene. Attenzione è stata posta alle dimensioni e allo stadio di sviluppo degli embrioidi, dato che ciò influenza la loro successiva sopravvivenza. In tale contesto, l'impiego di gradienti di saccarosio può aiutare a separare embrioni germinanti da una sospensione embriogenica e quindi migliorare la percentuale di embrioni sopravvissuti.

Wetztein e colleghi hanno esaminato in modo critico i fattori che influenzano l'embriogenesi somatica e la rigenerazione di piantine in Pecan (Carya illinoensis), riportando che il massimo di embriogenesi si è ottenuta negli embrioni zigotici, posti in coltura 15 settimane dopo l'impollinazione.

La germinabilità degli embrioidi era limitata, ma il loro condizionamento (a bassa temperatura +4°C - e con disseccamento) precedente ad una coltura alla luce in un mezzo di Murashige-Skoog ridotto a metà la migliorò.

Un metodo per migliorare l'embriogenesi somatica nel sedano è stato sviluppato da Nadel et al. Essi hanno riferito che l'aggiunta di mannitolo al mezzo ha aumentato il numero di embrioni prodotti, ha promosso la loro crescita e ha fatto produrre più embrioni singoli. Inoltre, aggiungendo acido abscissico al mezzo per la rigenerazione, si è ottenuta una sincronizzazione delle sospensioni embriogeniche; a ciò seguiva la separazione degli embrioni somatici di diversa grandezza tramite un vaglio differenziale, e tutto ciò risultava in un netto miglioramento della conversione degli embrioidi in plantule. Similmente, l'acido abscissico è stato indicato quale induttore di alte frequenze di embriogenesi somatica dalle foglie di un albero tropicale, il *Sapindus trifoliatus*, in cui con alte concentrazioni di saccarosio si è migliorata sensibilmente la frequenza di embrioidi normali prodotti (Krishnan et al.).

Antonelli ha indotto embriogenesi somatica sulla superficie di cotiledoni immaturi di mandorlo, ottenendo embrioidi allungati. La loro conversione in piantine, comunque, è avvenuta solo occasionalmente. Similmente, Curir e collaboratori sono riusciti a indurre
embriogenesi somatica in embrioni zigotici immaturi di *Genista monosperma* Lam., ma tutti i tentativi di farli germinare sono falliti; anche Piagnani e Eccher hanno ottenuto embrioni somatici in cotiledoni di castagno riferendo però solo sugli stadi iniziali di germinazione di tali embriodi.

D'altra parte, il felice ambientamento di piante da embrioni somatici è stato riportato per *Prunus incisa x serrula* (Druart), pesco (Scorza et al.), arancio (Starrantino e Caponetto), Winged Bean *Psophocarpus tetragonolobus*, (Venketeswaran et al.), *Alstroemeria* (Gonzalez-Benito e Alderson) e banana (Ma et al.).

Particolare significato è stato attribuito, fra queste relazioni, ai risultati ottenuti su pesco, dove gli embrioni somatici derivati da embrioni zigotici immaturi hanno continuamente proliferato *in vitro* per più di 3 anni (Scorza et al.). Altrettanto significativi sono stati altri due lavori, gli unici a non usare un espianto da semenzale come fonte di sospensioni embriogeniche; vale a dire i risultati su banana, dove le sospensioni furono realizzate partendo da callo indotto in sezioni di apici di infiorescenze (Ma et al.), e quelli riferiti da Druart per il portainnesto nanizzante di ciliegio, *Prunus incisa x serrula*, nel quale gli embrioni somatici ed i calli embriogenetici furono indotti sulle radici delle piante propagate *in vitro*.

## TERZA SESSIONE: ANDRO- E GINOGENESI

In questa sessione sono stati presentati solo 10 lavori, anche se questi contenevano alcuni fra i più stimolanti risultati esposti durante il Simposio, in termini del loro immediato valore agronomico.

Zhang e collaboratori hanno esposto i risultati sulla produzione di alberi di melo aploidi ottenuti da partenogenesi *in situ*, indotta da polline irraggiato, seguita dalla coltura *in vitro* degli embrioni immaturi. Gli alberi di melo così ottenuti sono stati trapiantati con successo all'esterno e sono utilizzabili direttamente per il miglioramento genetico (come parentali omozigoti, per lo studio dell'ereditarietà di caratteri agronomici e per la mutagenesi). Tali piante possono anche costituire una base per studi citologici e citogenetici oltre che per manipolazioni genetiche, come ibridazione somatica e trasformazione genetica.

Hoefer e Hanke riferirono sulla produzione di callo da antere di ciliegio dolce, insieme alla formazione di embrioni, senza alcuna fase di callo, da antere di melo.

Per la vite (*Vitis*), Cersosimo et al. hanno ottenuto piante organogeniche e embriogeniche da colture di antere. Tuttavia, tutte le piante derivate da antere erano diploidi. Similmente, solo piante diploidi sono state ottenute occasionalmente da colture di antere di diverse specie di *Citrus* (Geraci e Starrantino).

Nelle specie erbacee, sono stati presentati 5 lavori sull'androgenesi. Chiang et al. hanno esaminato la progenie di piante 2x di cavolo derivate da coltura di antere in termini di fertilità e meiosi, e identificato piante maschio-sterili fra quelle della prima generazione di tali individui derivati da colture di antere.

Vischi e colleghi hanno studiato le fasi fenologiche della microsporogenesi e le dimensioni dei capolini in *Gerbera*, e hanno ottenuto la produzione di callo da colture di antere con microspore uninucleate, mentre Fuller et al. hanno riferito sulla rigenerazione di piante, tramite embriogenesi, da colture di antere in cavolfiore.

L'aploidia delle piante rigenerate non fu confermata. Similmente, in fragola è stato riportato l'ottenimento di piante da callo di antere, sebbene senza confermare - anche in
questo caso - l'aploidia di tali piante (Svensson).

Nell'ambito della ginogenesi, sono stati presentati solo 2 lavori, entrambi molto inter-
ressanti. A tal merito, Zhang et al. hanno ottenuto embrioni da ovuli di melo, mentre Tosca
e colleghi hanno prodotto con successo piante aploidi da colture di ovuli di 5 genotipi di
*Gerbera jamesonii*.

CONSIDERAZIONI FINALI

Una rapida panoramica sui risultati sperimentali riportati durante la Prima, Seconda
e Terza Sessione, e in verità in tutto il Simposio mostra chiaramente l'importanza che ri-
vestono le biotecnologie già affermate e quelle emergenti, basate sulle colture *in vitro*, per
il miglioramento delle specie ortoflorofrutticole, è risultato anche evidente che esistono
settori delle biotecnologie che richiedono ulteriori apporti. Ciò accadrà sicuramente nel
prossimo futuro, dato che un sempre maggiore numero di studiosi e imprese commerciali
in tutto il mondo stanno esplorando gli usi e le possibili applicazioni delle colture *in vitro*
nel contesto del miglioramento genetico delle specie di interesse economico.