<table><caption>Tableau XXV: test biologique en milieu semi-contrôlé</caption><thead><tr><th>Traitement</th><th>CL</th><th>Concentration (mg/l)</th><th>Na</th><th>Nb</th><th>Taux de mortalité (%)</th></tr></thead><tbody><tr><td rowspan="2">Hyptis spicigera</td><td>CL50</td><td>0,67</td><td>287</td><td>195</td><td>67,94</td></tr><tr><td>CL90</td><td>7,81</td><td>385</td><td>351</td><td>91,16</td></tr><tr><td rowspan="2">Lannea kerstingii</td><td>CL50</td><td>3,51</td><td>302</td><td>185</td><td>61,25</td></tr><tr><td>CL90</td><td>10,24</td><td>411</td><td>349</td><td>84,91</td></tr><tr><td rowspan="2">E chlor de L K</td><td>CL50</td><td>2,28</td><td>195</td><td>151</td><td>77,43</td></tr><tr><td>CL90</td><td>8,57</td><td>229</td><td>203</td><td>88,64</td></tr><tr><td rowspan="2">deltaméthrine</td><td>CL50</td><td>48,7</td><td>313</td><td>101</td><td>32,26</td></tr><tr><td>CL90</td><td>531,29</td><td>371</td><td>278</td><td>74,93</td></tr><tr><td rowspan="2">acétamipride</td><td>CL50</td><td>145,5</td><td>218</td><td>53</td><td>24,31</td></tr><tr><td>CL90</td><td>1456,78</td><td>397</td><td>319</td><td>80,35</td></tr><tr><td rowspan="2">chlorpyriphos</td><td>CL50</td><td>15,2</td><td>256</td><td>119</td><td>46,48</td></tr><tr><td>CL90</td><td>237,13</td><td>407</td><td>290</td><td>71,25</td></tr><tr><td>Eau distillée</td><td></td><td>-</td><td>314</td><td>18</td><td>5,73</td></tr></tbody></table>

E chlor de L K : extrait chloroformique de *L. kerstingii* ; CL : concentration létale ; Na : nombre d'insectes vivants ; Nb : nombre d'insectes morts.

## 4. Discussion

Les bio-pesticides sont à la base de produits naturels et ils sont plus acceptables que les pesticides conventionnels, car ils ont la réputation d'être moins dangereux pour l'homme et les autres organismes non ciblés (Ateyyat et al., 2009). Dans cette étude, nous avons fait le screening de 23 extraits de plantes (aromatiques et oléagineuses) sur des adultes de deux biotypes de *B. tabaci* ainsi que la caractérisation et le fractionnement des meilleures huiles. Les individus des deux biotypes sont sensibles aux extraits de plantes, huiles essentielles ou huiles fixes de graines. En effet, nous avons montré que les huiles essentielles extraites de feuilles de 11 plantes aromatiques et les huiles fixes extraites de graines de 12 plantes oléagineuses sont hautement efficaces pour les adultes de *B. tabaci*. Pour tous les extraits testés, cette sensibilité est supérieure à celle des insecticides de synthèse testés. Des études antérieures ont déjà démontré les effets toxiques, irritants et répulsifs de certaines huiles essentielles sur *B. tabaci* (Calmasur et al., 2006; Chae et al., 2014; Deletre et al., 2015a, 2015b; Cloyd et al., 2009; Deletre et al., 2013; Yang et al., 2010).

Il ne fait aucun doute que ces effets insecticides des huiles essentielles sont liés à leur composition chimique. C'est ainsi que Chae et al. (2014) ont montré que les huiles essentielles extraites de *Citrus limon* et de *Satureja hortensis* contiennent des monoterpènes oxygénés tels que le thymol et le carvacrol toxiques contre les biotypes MEAM1 et MED-Q de *B. tabaci*. Edson et al. (2015) ont également montré que l'huile essentielle de *Pelargonium graveolens* et ses monoterpènes oxygénés associés (géraniol et citronellol) étaient toxiques contre les adultes
de l'aleurode *B. tabaci*. La grande toxicité de l'huile essentielle d'Ocimum americanum pourrait être associée à la teneur élevée en eucalyptol (41,4%), en camphre (10,8%) et a-pinène (9,6%) pour MED-Q3. Ces composés ont été identifiés dans l'huile essentielle de Rosmarinus officinalis où l'eucalyptol (1-8-cineole) et le camphre ont montré un effet synergique dans leur action insecticide vis-à-vis de la fausse-arpenteuse du chou (Trichoplusia ni) (Tak et Isman 2015).

La toxicité de l'huile essentielle de *H. spicigera* pourrait être attribuée à ses composés majoritaires, β-caryophyllène (22,15%), l'α-pinène (20,11%) et le sabinène (10,26%), mais aussi ses composés minoritaires pourraient ne pas être en reste. Conti et al. (2011) ont montré la toxicité des composés similaires identifiés dans l'huile essentielle de *H. spicigera* testée contre *Sitophilus granarius* (L.) (Coleoptera: Dryophthoridae). Il est important de noter qu'aux États-Unis, il existe deux insecticides à base d'huiles essentielles commercialisés, utilisés contre les espèces d'aleurodes, y compris *B. tabaci*, produits par deux entreprises : Requiem® fabriqué par Bayer et Ecotrol® plus (huile essentielle extraite de Rosmarinus officinalis, du géraniol et huile essentielle extraite de la menthe poivrée) produit par KeyPlex.

Cependant, à notre connaissance, c'est la première fois que l'activité insecticide des huiles fixes de graines contre *B. tabaci* ait été rapportée. Nos résultats indiquent que la toxicité des huiles fixes de graines est inférieure à celle des huiles essentielles, cela pourrait s'expliquer par la nature et la composition de ces deux types d'huile. Les huiles essentielles sont constituées de composés volatiles agissant par contact et fumigation (Yarahmadi et al., 2013; Chae et al., 2014 ; Deletre et al., 2015b), alors que les huiles de graines ne possèdent qu'une toxicité par contact.

En outre, les huiles essentielles sont un mélange complexe de plusieurs composés qui sont connus pour avoir des activités insecticides (Deletre et al., 2013). Les huiles fixes de graines sont principalement composées d'acides gras qui ne présentent pas de propriétés d'activité insecticides. Les propriétés biologiques des huiles de graines sont associées à des composants mineurs qui, dans la plupart des cas, ne dépassent pas 2% des lipides totaux (Covas et al., 2006). Les huiles fixes de graines de notre étude doivent leur efficacité à la présence de composés phénoliques. Les trois fractions d'huile de graine de *L. kerstingii* ont présenté des niveaux d'efficacité différents. L'extrait hexanique n'a présenté aucune activité insecticide sur les populations testées et cela pourrait s'expliquer par le fait que cet extrait n'est composé que d'acide gras (triglycéride) alors que les extraits chloroformique et acétonique se sont montrés efficaces vis-à-vis des deux biotypes MED-Q1 et MED-Q3 de *B. tabaci*. Cette efficacité pourrait être liée à leur composition chimique, en effet ces extraits sont constitués de composés
polyphénoliques comme notifiée par Ouilly et al. (2017). La différence relative constatée entre l'effet de l'extrait acétonique et celui de l'extrait chloroformique peut trouver son explication dans la composition chimique et plus précisément dans la teneur en polyphénols. Ouilly (2017) a montré que la teneur en polyphénols de l'extrait acétonique était supérieure à celle de l'extrait chloroformique suivit de l'huile entière et de l'extrait hexanique de l'huile de *L. kerstingii*. Ils ont également isolé et identifié trois nouveaux composés polyphénoliques, le lanneakol, le 3-hydroxylanneakone et le 3,4-dihydroxylanneakone. Ces trois composés isolés, dans l'extrait acétonique de l'huile de graine de *L. kerstingii*, responsables de l'activité anti-oxydante de cette huile pourraient également être à l'origine de l'activité insecticide de *L. kerstingii*.

Les résultats des tests biologiques en milieu semi-contrôlé sont intéressants parce qu'ils confirment les résultats obtenus au laboratoire. Les extraits de plantes sont bien meilleurs que les insecticides de synthèse quant à leur toxicité sur les adultes de *B. tabaci*.

## Conclusion partielle

En conclusion, nos résultats indiquent que les huiles essentielles et les huiles fixes de graines sont plus toxiques que les insecticides de synthèse pour les adultes de *B. tabaci*. Les huiles essentielles se sont révélées plus efficaces que les huiles fixes de graines avec des valeurs de CL50 les plus faibles. Leur efficacité est due à leur composition chimique. Des trois fractions de l'huile fixe de graine de *Lannea kerstingii*, les extraits chloroformique et acétonique sont prometteurs. Les tests en milieu semi-contrôlé ont confirmé que les extraits de plantes pourraient être utilisés au champ et être meilleurs que les insecticides de synthèse. En plus, les extraits de plantes ont la réputation d'être moins dangereux pour les humains et autres organismes non ciblés et à l'environnement.
# DISCUSSION GENERALE
# 1. Le biotype MED-Q1, une menace pour les cultures au Burkina Faso ?

Le présent travail a permis de mettre en évidence la résistance phénotypique au sein des populations de l'aleurode des champs *B. tabaci*. Sur les trois biotypes signalés au Burkina Faso, deux ont été identifiés appartenant à l'espèce méditerranéenne. Ce sont les biotypes MED-Q1 et MED-Q3. Cependant, on a noté l'absence du biotype ASL, qui avait été, il y a de cela plus de 10 ans détecté par Gnankine et al. (2013c). Le biotype ASL a été détecté en culture maraîchère et cotonnière en sympatrie avec MED-Q1 (Gnankine et al., 2013b,c). Ce dernier, doté d'une grande capacité invasive serait originaire de la partie Ouest de la méditerranée (De barro 2011). Il aurait atteint l'Afrique de l'Ouest par le biais des échanges commerciaux (le commerce de plantes ornementales) avec le Maghreb (Gnankine et al 2013c). Les pratiques culturales associées aux traitements insecticides pourraient favoriser la supplantation d'un biotype par rapport à un autre. En effet, Houndété et al. (2010a), puis Gnankine et al (2013b) ont montré que le biotype ASL est résistant vis-à-vis des pyréthrinoïdes et des organophosphorés mais sensibles aux néonicotinoïdes alors que le MED-Q1 est résistant aux trois familles insecticides. L'utilisation intensive des néonicotinoïdes en culture maraîchère et cotonnière pourrait expliquer la sélection du MED-Q1 au détriment de l'ASL, d'où sa supplantation par MED-Q1.

Cette étude à travers des tests de sensibilité a permis de montrer que les individus du MED-Q1 sont plus résistants que ceux du MED-Q3 vis-à-vis de la deltaméthrine, l'acétamipride et le chlorpyriphos-ethyl. Cette résistance du MED-Q1 pourrait être due à une forte pression insecticide sur les populations de ce biotype aux champs.

Durant nos investigations sur les trois années (2015-2017), la sensibilité n'a pas évolué pour une molécule donnée d'une année sur une autre. Mais une éventuelle résistance n'est pas à exclure si les mêmes molécules continuent d'être utilisées de manière intensive par les producteurs.

Des études ont montré que les gènes de résistance Ace-1R et *kdr* sont impliqués dans la résistance aux pyréthrinoïdes et aux organophosphorés de l'aleurode *B. tabaci* (Roditakis et al., 2006 ; Tsagkarakou et al., 2009 ; Gnankiné et al., 2013b, 2018 ; Mouton et al., 2015, Drabo et al 2017). Ces phénomènes traduisant le mécanisme de résistance moléculaire ne sont pas les seuls impliqués dans la résistance. Il y a les mécanismes de résistance métabolique qui peuvent y contribuer également.
## 2. L'implication des enzymes de détoxification dans la résistance est-elle avérée ?

La lutte contre les insectes ravageurs à travers l'utilisation des insecticides de synthèse a conduit à l'apparition de la résistance au sein des populations des ravageurs. Dans cette partie de notre travail, nous avons mis en évidence la résistance métabolique à travers des dosages des enzymes de détoxification tels que les estérases, les GST et les oxydases. Selon Magnin et al. (1985) les insecticides tels que les organophosphorés, les carbamates et les pyréthrinoïdes comportent des liaisons esters qui peuvent être hydrolysées par des estérases ou des GST. Nauen et al (2013) ont montré que les oxydases (cyto-P450) sont impliquées dans la résistance aux néonicotinoïdes. Nos résultats ont montré que les activités des estérases et celles des GST pourraient expliquer la résistance au chlorpyriphos-ethyl et à l'acétamipride. En nous fiant aux corrélations obtenues avec la deltaméthrine, cela nous amène à penser que ces enzymes pourraient être impliquées dans la résistance de *B. tabaci* vis-à-vis de cette molécule. L'activité des oxydases ne nous a pas permis d'aboutir à une conclusion quant à son implication dans la résistance à la deltaméthrine parce que l'activité enzymatique était corrélée faiblement avec le niveau de résistance. Ce qui n'a pas été le cas avec Karunker et al. (2008) qui ont montré que la surexpression des oxydases était associée au niveau élevé de la résistance à la deltaméthrine chez *B. tabaci*. En outre, Guo et al. (2014) ont montré que l'activité des oxydases pourrait être impliquée dans la résistance à plusieurs insecticides.

Nos résultats ont mis en évidence la résistance phénotypique et métabolique au sein des populations de *B. tabaci*. La résistance moléculaire a été mise en évidence par Gnankine et al. (2013a), Mouton et al. (2015). Ce qui suggère la présence de mécanismes de résistance multiples chez *B. tabaci* et cela pourrait constituer un obstacle majeur au succès de cette lutte antiparasitaire. Par conséquent, il existe un réel besoin de développer des méthodes alternatives efficaces et plus sûres susceptibles de remplacer les pesticides chimiques en termes de contrôle de *B. tabaci*. Les extraits de plantes pourraient être de bons candidats.

## 3. La solution se trouve-t-elle dans les plantes ?

Les plantes à travers leurs extraits ont été et sont beaucoup prisées dans les industries pharmaceutiques, cométiques et agroalimentaires. Les huiles extraites des plantes aromatiques sont reconnues pour leurs propriétés antimicrobiennes et insecticides (Regnault-Roger et al., 2012). Nos investigations ont confirmé l'efficacité des extraits de plantes sur les adultes de *B. tabaci*. Les huiles extraites de onze plantes aromatiques se sont révélées très efficaces vis-à-vis de *B. tabaci* tout comme l'ont montré (Calmasur et al., 2006; Chae et al., 2014; Deletre et al.,
2015a, 2015b; Cloyd et al., 2009; Deletre et al., 2013; Yang et al., 2010). Cette efficacité des huiles essentielles serait liée à leur composition chimique. La caractérisation de trois des huiles essentielles testées a montré que les composés les plus abondants sont les monoterpènes et les sesquiterpènes. L'action conjuguée des composants pourrait améliorer l'efficacité des huiles essentielles. Ainsi (Tak et Isman 2015) ont montré que l'eucalyptol (1-8-cineole) et le camphre ont un effet synergique dans leur action insecticide vis-à-vis de la fausse-arpenteuse du chou. Regnault-roger et al. (2012) ont également évoqué l'effet synergique des composés présents dans les huiles extraites de plantes aromatiques. Les huiles essentielles à travers leurs composés ont des modes d'action divers. Moretti et al. (2013) ont montré qu'une des propriétés des terpènes est de favoriser la pénétration de molécules à travers la cuticule des insectes augmentant ainsi leur concentration chez l'insecte. La toxicité d'une huile essentielle due à l'effet synergique entre ses composés pourrait être expliquée par cette propriété. Deletre et al (2013) ont suggéré que les canaux cholinergiques et GABA étaient les cibles potentielles des composés des huiles essentielles.

Il est important de noter, qu'à notre connaissance, c'est la première fois de tester les huiles de graines contre l'aleurode B. tabaci. Les huiles extraites de graines se sont aussi montrées efficaces vis-à-vis de l'insecte. Elles doivent leur efficacité à des composants mineurs qui, dans la plupart des cas, ne dépassent pas 2% des lipides totaux selon (Covas et al., 2006), la grande partie composée d'acide gras ne présente pas de propriétés d'activité insecticides. Ces composés mineurs seraient des polyphénols, dont trois nouveaux ont été isolés par Ouilly, (2017). Il s'agit du lanneakol, 3-hydroxylanneakone et du 3,4-dihydroxylanneakone. Ces trois composés pourraient être à l'origine de l'activité insecticide de L. kerstingii.

## 4. Possibilité d'une application au champ ?

Les extraits de plantes ont prouvé leur efficacité en milieu contrôlé et semi-contrôlé. Ainsi, leur application au champ pourrait être prometteur au regard des résultats. Il existe un besoin réel de valoriser ces résultats. On pourrait s'inspirer de l'exemple des Etats-Unis où deux insecticides à base d'huiles essentielles sont commercialisés. Ces insecticides sont l'œuvre de deux firmes que sont Bayer et KeyPlex pour lutter contre les ravageurs de cultures.
CONCLUSION GENERALE
CONCLUSION GENERALE

Cette thèse avait pour objectif général de proposer une stratégie de contrôle des populations de ravageurs de culture à travers l'utilisation de nouvelles substances actives qui soient respectueuses de l'environnement et de la santé humaine au Burkina Faso.

Les individus testés, dans les activités de cette thèse, appartiennent aux biotypes MED-Q1 et MED-Q3 de *B. tabaci*. Nous avons montré que la résistance aux insecticides de synthèse était fonction du biotype et que les individus du MED-Q1 ont été résistants vis-à-vis des insecticides de synthèse alors que ceux du MED-Q3 ne l'ont pas été. En outre, nous avons mis en évidence le mécanisme de résistance d'origine biochimique à travers le dosage des enzymes de détoxification. Nous avons trouvé que l'activité de la GST, de la NA estérase, le cyto-P450 sont impliqués dans la résistance de *B. tabaci* vis-à-vis des insecticides de synthèse. En plus (de) ces mécanismes biochimiques, les données récentes au Burkina ont montré l'implication des gènes moléculaires de résistance Kdr et Ace-1R dans les populations de ces ravageurs confirmant ainsi la présence de plusieurs mécanismes de résistance (phénotypique, biochimique et moléculaire) chez ce ravageur, polyphage par excellence. Ce qui rendrait le contrôle plus difficile.

Le niveau de résistance observé au sein de cette population suggère que de nouvelles molécules ou de combinaison de molécules doivent être mises au point pour une gestion efficiente et durable de ces nuisibles tels que l'espèce MED-Q1, au Burkina Faso mais aussi dans la sous-région. Les individus du MED-Q3 n'ont présenté aucune résistance vis-à-vis des trois formulations insecticides.

En outre, nos investigations ont permis de montrer que les extraits de plantes, quelle que soit leur nature, étaient efficaces sur le biotype résistant de *B. tabaci* en l'occurrence le MED-Q1. Les huiles essentielles se sont révélées très efficaces sur les deux biotypes au regard des faibles valeurs de CL50 et CL90 enregistrées. Ces huiles doivent leur toxicité à leur composition chimique, particulièrement riche en monoterpènes et sesquiterpènes.

Les huiles fixes de graine ont également été efficaces vis-à-vis des deux biotypes et leur efficacité est attribuée aux composés phénoliques. Des deux types d'extraits utilisés, les huiles
essentielles sont plus efficaces, et ce, parce que les huiles essentielles sont volatiles et agissent par contact et fumigation alors que les huiles fixes de graines n'agissent que par contact.

Au regard des résultats obtenus dans cette étude, nous pouvons dire que les extraits de plantes sont prometteurs et les tests en milieu semi-contrôlé nous confortent dans cette assertion.

Ainsi, des mesures pourraient être prises pour la vulgarisation de l'utilisation de ces extraits obtenus de plantes. Cela nécessitera une étude économique qui comporterait plusieurs volets comme la production des plantes, les formations sur les techniques d'extraction et les formulations à utiliser. Mais, pour être en accord avec les principes du développement durable et éviter des problèmes d'ordre écologique, il serait intéressant de mettre l'accent sur la culture et l'exploitation durable de ces plantes d'intérêt pour qu'elles soient économiquement accessibles pour les populations.

Au terme de cette étude, certaines questions relatives aux potentialités des extraits de plantes sur les adultes de *B. tabaci* ont trouvé des réponses mais certaines restent en suspens.
Ainsi, nous ambitionnons à l'avenir de :

* Faire une cartographie des gènes de résistance pour une efficacité des systèmes de contrôle,

* Tester les populations avec des produits comme le PBO dans le but d'inhiber l'activité métabolique de ces nuisibles,

* Faire de tests avec les huiles en plein champ,

* Faire des combinaisons d'huiles essentielles-huiles essentielles ; huiles fixes-huiles fixes ; huiles essentielles-huiles fixes pour mettre en évidence les actions synergiques, antagonistes de ces différents extraits de plantes,

* Isoler et identifier de nouveaux composés des huiles fixes de graines,

* Mettre au point des formulations insecticides à base d'extraits de plantes en collaboration avec les firmes locales.

* Mettre en évidence les mécanismes d'action des composés des huiles essentielles
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DOCUMENTS CONSULTES

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INSD, 2008. Recensement général de la population et de l'habitation 2006. Ouagadougou.
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ANNEXES
# Annexe 1 : Protocole d'extraction d'ADN en plaque 96 puits avec le kit NucleoSpin 96 Tissue de Macherey Nagel

Les ADNs (Acide Désoxyribonucléique) ont été extraits à l'aide du kit NucleoSpin 96 Tissue de Macherey Nagel.

- Mettre les individus individuellement dans des barrettes de tubes eppendorf avec quatre billes d'acier

- Ajouter 68 µl de mix de tampon de lyse

- Faire une brève centrifugation pour que les individus tombent bien au fond du tube

- Broyer à l'aide du TissueLyser (Qiagen) à 20Hz pendant 30 secondes

- Centrifuger à 1000 rcf pendant 2 mn

- Incubation à 56 °C toute la nuit (Thermomixer)

- Faire une brève centrifugation

- Ajouter 70 µl de BQ1 + 70 µl d'éthanol (96%) à chaque échantillon

- Mélanger vigoureusement au vortex

- Faire une brève centrifugation pour collecter tout l'échantillon au fond

## Pour la purification sur colonnes :

- Transférer les lysats issus de l'étape précédente sur les colonnes

- Ouvrir le robinet de la pompe qui permet l'aspiration par pression a -200 mbar pendant 5 mn

- 1er lavage : ajouter 300 µl de tampon BW à chaque puits et appliquer à -200 mbar pendant 5 mn

- 2ème lavage : ajouter 450 µl de tampon B5 à chaque puits et appliquer à -200 mbar pendant 5 mn

- 3ème lavage : ajouter 450 µl de tampon B5 à chaque puits et appliquer à -200 mbar pendant 5 mn

- Pour le séchage, après le dernier lavage passer a -600 mbar pendant 5 min

- Retirer la plaque et la poser à nouveau sur un papier absorbant pour faire le séchage à 70 °C pendant 5 mn

- Mettre 100 µl de BE (70 °C) dans chaque puits pour l'élution

- Centrifuger à 5600g pendant 2 mn
## Annexe 2 : Protocole PCR

Le biotype de chaque échantillon a été déterminé par amplification PCR (Réaction de polymérisation en chaîne), puis par analyse RFLP (Polymorphisme de la longueur des fragments de restriction) de la CO1 (Cytochrome Oxydase 1). Cependant le couple d'amorce C1-J-2195, L2-N-3014 a été utilisé pour l'amplification du fragment du gène de la Cytochrome Oxydase 1 (CO1) (Simon et al., 1994)

Amplification d'un fragment de 819 pb du gène COI selon les conditions suivantes :
Composition du mix pour un volume réactionnel de 25 µl :

<table><thead><tr><td></td><td>Volume en µl</td><td>Concentration finale</td></tr></thead><tbody><tr><td>H2O</td><td>18,9</td><td>--</td></tr><tr><td>Tampon (10X)</td><td>2,5</td><td>1X</td></tr><tr><td>dNTP (10 mM)</td><td>0,5</td><td>200uM</td></tr><tr><td>C1-J-2195 (10 mM)</td><td>0,5</td><td>200nM</td></tr><tr><td>L2-N-3014 (10mM)</td><td>0,5</td><td>200nM</td></tr><tr><td>Dream Taq polymerase (5U/µl)</td><td>0,1</td><td>0,5U</td></tr><tr><td>ADN</td><td>2</td><td>--</td></tr></tbody></table>

## Programme PCR

Les réactions PCR ont été conduites selon la méthode décrite par Henri et al. (2013). Les mix et les programmes PCR ont été conformes aux indications des auteurs ci-dessus.

<table><thead><tr><td>N°</td><td>Nb cycles</td><td>Reactions</td><td>T°</td><td>Temps</td></tr></thead><tbody><tr><td>1</td><td>1</td><td>Dénaturation initiale</td><td>94</td><td>2 mn</td></tr><tr><td>2</td><td></td><td>Dénaturation</td><td>94</td><td>30 s</td></tr><tr><td>3</td><td>34</td><td>Hybridation</td><td>54</td><td>30 s</td></tr><tr><td>4</td><td></td><td>Elongation</td><td>72</td><td>1 mn</td></tr><tr><td>5</td><td>1</td><td>Elongation finale</td><td>72</td><td>10 mn</td></tr><tr><td>6</td><td></td><td>pause</td><td>10</td><td>∞</td></tr></tbody></table>

## Digestion des échantillons par XapI ou Bfm

Volume réactionnel : 20 µl
<table><thead><tr><td></td><td>Volume en µl</td><td>Concentration finale</td></tr></thead><tbody><tr><td>H2O</td><td>7</td><td></td></tr><tr><td>Tampon (10X)</td><td>2</td><td>1X</td></tr><tr><td>XapI (10U/µl) ou Bfm (10U/µl)</td><td>1</td><td>5U</td></tr><tr><td>Produit PCR</td><td>10</td><td></td></tr></tbody></table>

Incubation à 37 °C pendant 3h

## Électrophorèse

Du gel d'agarose à 1,5% a été préparé dans du tampon TBE. Quelques gouttes de GelRed à 100V ont été ajoutées à la solution d'agarose après refroidissement. Le mélange a été coulé sur le support de gel midi pour l'électrophorèse. La cuve d'électrophorèse a été remplie avec le tampon TBE (1%) jusqu'à immersion totale du gel. Les ADNs amplifiés par PCR ont été mélangés avec du tampon de charge. Une quantité de 10 µl du mélange a été prélevée à l'aide d'une micropipette et déposée dans des puits du gel d'agarose à 1,5%. La migration électrophorétique pour le mtCO1 a été faite à 100 volts pendant 1h.
Annexe 3 : Préparation des tampons pour l'extraction et les activités enzymatiques

Concentration et volume des différents réactifs utilisés pour la préparation des solutions tampons et solutions nécessaires à la réalisation des tests enzymatiques.

<table><tbody><tr><td rowspan="3">Tampon NA</td><td>Trisodium phosphate</td><td>38,012g</td></tr><tr><td>Eau</td><td>1L</td></tr><tr><td>Sodium dihydrogène phosphate</td><td>15,601g</td></tr><tr><td rowspan="2">NA stock solution</td><td>Naphthyl acétate</td><td>31mM</td></tr><tr><td>DNSO</td><td>50ml</td></tr><tr><td rowspan="3">NA stop solution</td><td>Fast blue BN</td><td>15mg</td></tr><tr><td>Eau distillée</td><td>1,5ml</td></tr><tr><td>SDS</td><td>3,5ml</td></tr><tr><td>PNPA stock solution</td><td>PNPA</td><td>200mM</td></tr><tr><td>PNPA assay buffer</td><td>Sodium phosphate</td><td>0,2M (pH 7,4)</td></tr><tr><td rowspan="2">CDNB assay buffer</td><td>Glutathione</td><td>15mM</td></tr><tr><td>Sodium phosphate buffer</td><td>0,2M</td></tr><tr><td rowspan="2">CDNB stock solution</td><td>CDNB</td><td>127,6 mg</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>10 ml</td></tr><tr><td rowspan="3">Solution A</td><td>3,3', 5,5' -tétraméthyl benzidine</td><td>13 g</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>6,5 ml</td></tr><tr><td>Tampon sodium acétate</td><td>19,5 ml</td></tr></tbody></table>
# Annexe 4 : Liste des publications et communications scientifiques

## ✓ Liste des publications

**Article 1 : Drabo Samuel Fogné**, Gnankine Olivier, Bassolé Imael H.N., Nébié Charles Roger and Laurence Mouton (2017). Susceptibility of MED-Q1 and MED-Q3 biotypes of *Bemisia tabaci* (Hemiptera: Aleyrodidae) populations to essential and seed oils. J Econ Entomol; 110:3:1-8

**Article 2: Drabo Samuel Fogné**, Coulibaly Y. Ahmed, Romba Rahim, Balboné Mahamoudou and Gnankiné Olivier (2018). Biochemical resistance to insecticides in Bemisia tabaci field population from Burkina Faso, West Africa (accepté)

**Article 3: Romba, R., Gnankine, O., Drabo, F.S., Tiendrebeogo, F., Henri, H., Mouton, L. & Vavre F. 2018.** Abundance of Bemisia tabaci Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae) and its parasitoids on vegetables and cassava plants in Burkina Faso (West Africa). Ecology and Evolution. https://doi.org/10.1002/ece3.4078.

## ✓ Liste des communications orales

**Drabo Samuel Fogné**, Gnankine Olivier et Bassolé Imael H.N (2015) « Sensibilité de *Bemisia tabaci* Gennadus (Hompotera : Aleurodidae) vis-à-vis d'extraits de plantes (huiles essentielles et végétales) au Burkina Faso. » XVI sommet Société Ouest Africaine de Chimie S.O.A.CHIM (2015), du 3-6 Août à Abidjan, Côte d'Ivoire (Communication orale)

**Drabo Samuel Fogné**, Gnankine Olivier et Bassolé Imael H.N (2017) « Potentialité d'huiles extraites de graines de plantes locales comme bio-pesticides contre les ravageurs de cultures au Burkina Faso» XVII sommet Société Ouest Africaine de Chimie S.O.A.CHIM (2017), du 7-11 Août à Dakar, Sénégal (Communication orale)

**Drabo Samuel Fogné**, Gnankine Olivier et Bassolé Imael H.N (2017) Insecticide potentials of local trees seeds oils against *Bemisia tabaci* Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae) in vegetable crops. WP4 – Resource availability. Atelier de clôture du Projet Quali-Tree. (Communication orale)

Romba, R., Gnankine, O., **Drabo, F.S.**, Tiendrebeogo, F., Henri, H., Mouton, L. & Vavre F Abondance de l'aleurode Bemisia tabaci Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae) et de ses parasitoïdes sur cultures maraîchères et sur manioc au Burkina Faso (Afrique de l'Ouest).
2ème édition du Symposium International sur la Science et la Technologie (SIST) du 4 au 8 Décembre 2017. Ouagadougou/Burkina Faso.

**Drabo Samuel Fogné**, Romba Rahim; Gnankine Olivier et Bassolé Imael H.N (2018) Huiles essentielles et huiles fixes de plantes du Burkina Faso comme bio-pesticides contre l'aleurode des champs (*Bemisia tabaci*), FRSIT, 19-25 Octobre (**Communication orale**)