La présente invention concerne un procédé de production de l'ampicilline, qui présente la formule ^ — PTT 5 R — CH CO NH CH CH C — HH2 | | | ^ch3 (I) 0= C N CH COOH dans laquelle R représente un groupe phényle. 10 Jusqu'à présent, on a préparé l'ampicilline à partir de l'acide 6-amino-pénicillanique comme matière première (voir les brevets japonais n° Sho 36-16277, Sho 39-5642, Sho 40-1386, Sho 40-1592, Sho 40-3911, Sho 40-4064, Sho 40-11066, Sho 40-17392, Sho 40-24780, Sho 41-10697, Sho 42-11073, Sho 42-15 15 947, Sho 43-17193 et Sho 44-12152). Conformément à ces procédés cependant, on doit isoler et purifier un composé instable amphotère et hydrosoluble de l'acide 6-amino-pénicillanique, à partir d'une liqueur de fermentation dans laquelle on désacétyle par micro-organismes, par voie enzymatique la pénicilline G ou 20 la pénicilline V, ou bien à partir du mélange réactionnel dans lequel on réduit puis on acidifie 11ortho-nitro-pénicilline (voir le brevet japonais n° Sho 42-16313), ou bien à partir d'un mélange réactionnel aqueux dans lequel on hydrolyse l'imino-éther (voir le brevet japonais n° Sho 44-27391), et en raison du 25 tourment que donne l'étape d'isolement ou de purification, un rendement faible et un prix relativement élevé ont été inévitables. La présente invention est caractérisée par le fait que l'on prépare l'ampicilline par voie chimique, sans utiliser 30 l'acide 6-amino-pénicillanique, mais en utilisant comme matière première la pénicilline G, peu coûteuse qu'on peut obtenir par fermentation. La présente invention concerne plus particulièrement un procédé de production de pénicilline représenté par la for-35 mule ^ 0H R—CH C0 NH —CH—CH C """ NH 2 1 i 0= C -— N CH —C00H >CH3 (I) 71 06968 2081060 I 35 dans laquelle R représente un groupe tel que défini ci-dessus, caractérisé pair le fait qu'on traite- un ester diacylique de pénicilline présentant la formule 9 ,CB, îf— CH—CH R—CH—C' | I I « 00—G N CH—COOA B (II) 10 dans laquelle A représente un groupe protecteur pour le groupe carboxylique, B représente un groupe amino protégé et R est tel que défini ci-dessus, en passant par des étapes de dé-phényl-acétylation, de destérification et d•amination. L'un des buts de la présente invention est de four-15 nir un nouveau procédé chimique pour la préparation d'ampicilline précieuse comme antibiotique, qui est totalement différent du procédé classique de préparation des pénicillines semi-synthétiques, par acylation de l'acide 6-amino-pénicillanique. L'ester diacylique de pénicilline, représenté par 20 la formule (II) ^£que l'on désignera dans ce qui va suivre par commodité comme ester DAPc (II}/, utilisé selon la présente invention est obtenu par un procédé qui comporte la réaction d'un ester de pénicilline G, préparé par l'introduction d'un groupe protecteur dans le groupe carboxylique de la pénicilline G peu 25 coûteuse, obtenue par fermentation, avec un agent de chlorura-tion en .présence d'une base organique tertiaire pour obtenir le chlorure d'imide d'un composé qui présente la formule -S .CH. 30 O-CH,— C=N— OH—CH 0_„„' 2 I , , | 3 P1 0 ^=C H CH— COOA dans laquelle-A est tel que défini ci-dessus, puis on fait réagir ce composé avec un carboxylate de .formule R—CH-COOM - » B dans laquelle M représente un atome métallique, R et B étant tel que défini précédemment. 71 06968 3 2081060 i On protège le groupe carboxylique de la pénicilline G de sorte qu'il ne se produise pas de réaction secondaire lors de la réaction suivante, c'est-à-dire la réaction avec un agent de chloruration. 5 l'introduction signalée ci-dessus d'un groupe pro tecteur s'effectue en introduisant dans un sel de potassium ou de sodium de la pénicilline G obtenue par fermentation d'un groupe protecteur du genre de ceux que lbn utilise habituellement lors de la synthèse des peptides. Généralement toutefois, 10 on doit éliminer au stade final le groupe protecteur introduit et il est ensuite désirable de choisir un groupe capable de facilement s'éliminer sans aucun effet défavorable sur la structure de la pénicilline. On obtient des résultats favorables en utilisant des groupes protecteurs tels par exemple que des groupes benzyle ou p-nitrobenzyle que l'on peut facilement éliminer 'par réduction catalytique, ou des groupes phénacyle et p-bromo-phénacyle que l'on peut éliminer avec un thionophénolate. l'introduction d'un groupe protecteur signalé précé-2Q demment pour le groupe amino du carboxylate s'effectue en introduisant un groupe protecteur comme ceux que l'on utilise habituellement pour la synthèse des peptides. Des exemples de groupes protecteurs que l'on peut introduire sont les groupes : carbobenzoxy, p-nitrocarbobenzoxy, carboaryloxy, p-toluène-25 sulfonyle, trityle, benzyle, dibenzyle, benzylsulfonyle, o- nitro-phénylsulfényle, trifluoro-acétyle, chloro-acétyle, formy-le et o-nitro-phénoxyacétyle. En général toutefois, le groupe protecteur introduit doit être éliminé lors de l'étape finale et il est donc désirable de choisir un groupe susceptible d'être éliminé facilement sans avoir aucun effet défavorable sur la 30 structure de la pénicilline. Selon la présente invention, on élimine le groupe phénylacétyle de l'ester !DAPc (II) pour obtenir un ester de pénicilline représenté par la formule S / \ ^-CH, 35 R—CH-CO-NH-CH— CH C (IV) ^ III ^UM3 0=C N CH-COOA k 71 06968 4 2081060 i dans laquelle R, A et B sont tels que prédécemment défini» L'élimination de ce groupe peut s'effectuer conformément à un procédé quelconque tel que l'aminolyse, la scission par un thiophénolate et procédés analogues. 5 La réaction d'aminolyse ci-dessus est telle que le groupe phényl-acétyle^ se trouve scindé totalement et sélectivement par l'action d'une aminé organique primaire, d'une aminé secondaire ou de l'ammoniaque, ou par une amino-alcoylamine N,N substituée, pour l'ester DAPc (II). Cette réaction entraîne par-10 fois, en fonction du genre de l'agent d'aminolyse, l'épimérisa-tion de l'atome d'hydrogène en position 6 du noyau pénicillani-que ou bien la scission de la liaison bêta-lactame du noyau pénicillanique, simultanément avec l'aminolyseo Toutefois, les conditions préférables pour l'aminolyse peuvent être assurées 15 par le choix d'un agent approprié d'aminolyse, du solvant réactionnel, etc... Dans la réaction précédente, on choisit le solvant, de façon désirable de sorte qu'il n'ait aucun effet défavorable comme 11épimérisation ou la décomposition du cycle bêta-lactame 20 lors de la réaction, qu'il soit capable de solubiliser l'ester DAPc (II) et qu'il soit un solvant organique non miscible à l'eau parce qu'après la réaction on élimine par lavage l'agent d'aminolyse qui n'a pas réagi, par exemple une aminé primaire organique. On peut utiliser avec avantage par exemple le benzène, le toluène, 25 le chloroforme, le dichlorométhane, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, l'éther éthylique ou l'éther isopropylique. Il est particulièrement avantageux d'utiliser comme agent d'aminolyse un composé représenté par la formule 3° R. ; N-R-z—NHQ / 3 2 *2 dans laquelle et R2 représentent un groupe alcoyle en C^ à 35 Cj, et R^ représente une chaîne alcoylène droite ou ramifiée en à Cg Z~Q.ue Par commodité on désignera ci-après par "diamine (III)"_7, pa£ exemple, la 2-diméthylamino-éthylamine, la 2-diéthylamino-réthyamine, la 3-diméthylamino-propylamine, la 71 06968 5 2081060 3-diéthylamino-propylamine, etc... Théoriquement, la proportion quantitative de la diamine (III) peut être équimolaire relativement à l'ester DAPc (II). Cependant, on élimine plus facilement la diamine (III) que l'ester DAPc (II) qui n'a pas réagi et on 5 en utilise donc une quantité de une à deux fois plus que de moles de l'ester DAPc (II). La réaction signalée ci-dessus progresse régulièrement à basses températures et aucun chauffage n'est donc nécessaire à moins que la réaction de l'ester DAPc (II) avec une diamine (III) soit particulièrement lente. 10 Comme autres agents d'aminolyse, il est avantageux d'utiliser une aminé organique primaire, par exemple une aminé aliphatique comme 1'éthylamine, la n-butylamine, la n-propylami-ne, la n-pentylamine, la n-hexylamine, la n-heptylamine, la n-octylamine, la caprylamine, la laurylamine, la myristylamine, 15 la palmitylamine, la stéarylamine, ou corps analogues, ou bien une aminé alicyclique comme la cyclohexylamine, la cyclopentyla-mine, la benzylamine, ou la bêta-phényl-éthylamine, ou corps analogues. Dans le cas d'une aminé aliphatique le danger d'épi-mérisation est d'autant moins grand que le nombre des atomes de 20 carbone est plus élevé et la décomposition de l'ester de pénicilline de formule (IV) sera d'autant moindre /désigné ci-après par commodité comme "ester BPc (IV)^. En conséquence, on utilise avec avantage une aminé qui présente une chaîne droite aliphatique. Dans le cas des aminés à chaîne aliphatique rami-25 fiée il vaut mieux ne pas avoir de chaîne latérale sur la position alpha de la chaîne carbonée. Parmi ces aminés, on utilise avec un avantage particulier des aminés supérieures aliphati-ques à chaîne droite présentant plus de 12 atomes de carbone, comme la laurylamine, la myristylamine, la palmitylamine, la 30 stéarylamine et analogues. Théoriquement, la proportion quantitative de l'agent d'aminolyse peut être équimolaire relativement à l'ester DAPc (II). Cependant, on élimine plus facilement l'agent d'aminolyse que l'ester DAPc (II) qui n'a pas réagi et on en utilise donc habituellement une quantité de une à deux fois 35 plus que de moles d'ester DAPc (II). La réaction signalée précédemment progresse régulièrement à basses températures et aucun chauffage n'est donc nécessaire à moins que la réaction de l'ester DAPc (II) avec l'a 71 06968 6 2081060 » mine organique primaire.soit particulièrement lente. Dans le cas de l'utilisation d'une aminé organique secondaire cependant, la réaction est lente et il est donc parfois nécessaire de chauffer le mélange réactionnel. 5 On peut effectuer la réaction de déphényl- acétylation par un thiophénolate, en faisant réagir l'ester DAPc (II), avec le thiophénolate pour scinder le groupe phényl-acétyle. Lors de -la réaction décrite ci-dessus, dans le cas 10 où le groupe protecteur du groupe carboxyle de l'ester DAPc (II) est un groupe que l'on peut facilement éliminer par action d'un thiophénolate, par exemple un-groupe phénacyle ou p-bromophéna-cyle, la dé-phényl-acétylation et la désestérification s'effectuent simultanément en fonction de la quantité de thiophénolate« 15 Donc, dans le cas de la déphényl-acétylation, on appliquera avantageusement un excès molaire 1-1,1 de thiophénolate pour l'ester DAPc (II). Mieux encore, lorsqu'on utilise un excès molaire du double de thiophénolate, la dé-phényl-acétylation et la déses-térification se produisent simultanément. 20 Le thiophénolate utilisé dans la réaction décrite ci-dessus est un composé qui présente la formule 1 a- 25 dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un atome d'halogène et Y un atome métallique, le composé étant le thiophénolate de sodium, le thiophénolate de potassium, le p-chloro-thiophénolate de sodium, le p-chloro-thiophénolate de potassium ou analogues. 30 On choisit de façon désirable le solvant pour la réaction ci-dessus décrite de sorte qu'il n'ait aucun effet défavorable tel que 1'épimérisation ou la décomposition du cycle bêta-lactame lors de la réaction ; qu'il soit capable de solubiliser l'ester DAPc (II) et le thiophénolate. On peut par exem-35 pie utiliser avantageusement le diméthylformamide, le tétra- hydrofurane, l'acétone, l'acétate d'éthyle, la méthyl-isobutyl-cétone, le benzène, l'acéto-acétate d'éthyle, le chloroforme ou le dichlorométhanei La réaction ci-dessus décrite progresse régulière 71 06968 7 2081060 ment même à basses températures et aucun chauffage n'est donc nécessaire à moins que la réaction de l'ester DAPc (II) avec le thiophénolate ne soit particulièrement lente. Conformément à la réaction signalée précédemment, 5 il se forme dans le mélange réactionnel l'ester BPc (IV) ou la pénicilline, de formule /h3 R-CH-CO-NH-CH—CH C (V) B | | PCH3 10 0-C—N CH-COOH dans laquelle R et B ont les mêmes significations que celles données ci-dessus, et il y aura en outre simultanément présent dans le mélange réactionnel, comme produit secondaire un ester 15 phénylique ou phénacylique d'acétate de phényle thio-halogéno-substitué, ou un thio-éther de p-bromophénacyle et le thiophénolate qui n'a pas réagi. Lorsqu'on en élimine l'ester BPc (IV) si on utilise l'agent d'aminolyse et dans le cas de la formation avec l'aminé 20 aliphatique d'un sel hydrosoluble d'addition avec un acide, on doit laver le mélange réactionnel avec un acide dilué pour éliminer 1'aminé qui n'a pas réagi» Si on utilise du thiophénolate comme agent de dé-phénylacétylation, après avoir ajouté au mélange réactionnel un solvant non miscible à l'eau comme l'acé-25 tate d'éthyle, l'acétate de butyle, le chloroforme, le dichloro-méthane, la méthyl-isobutyl-cétone ou le benzène, on doit laver le mélange réactionnel avec de l'acide chlorhydrique, de l'acide sulfurique ou de l'acide phosphorique, pour éliminer le thiophénolate qui n'a pas réagi et le solvant organique miscible à 30 l'eau. En outre, on concentre la couche du solvant organique décrite ci-dessus et on la lave avec le solvant organique qui solubilise l'ester phénylique d'acide phényl-acétique thio-halogéno-substitué, et qui ne solubilise pas l'ester BPc (IV), comme l'éther de pétrole ou le n-hexane pour éliminer l'ester 35 phénylique de l'acide phényl-acétique thio-halogéno-substitué. On peut faire réagir la couche de solvant organique obtenue par le traitement de lavage ci-dessus au cours de l'étape suivante, c'est-à-dire la désestérification et l'amination, comme telle, ou bien en variante on peut y ajouter un solvant organiL 71 06968 8 2081060 que approprié. S'il est nécessaire d.'isoler l'ester BPc (IV), on concentre la couche de solvant organique ci-dessus, et on charge ce concentré dans une colonne de gel de silice ou d'alumine, puis on effectue l'élution avec un solvant approprié comme le 5 mélange benzène-chloroforme ou benzène-acétate d'éthyle, pour en séparer facilement 1 Rester BPc (IV). En outre, dans le cas de la déphénylacétylation et de la désestérification simultanément de l'ester DAPc (II) en .appliquant un excès de thiophénolate, on peut isoler l'ester BPc (IV) par le même processus que le pro-10 cessus de séparation et de purification de l'ester BPc (IV). Lors de.l'étape suivante, on élimine le groupe protecteur pour le groupe amino dans l'ester BPc (IV) ou l'ester BPc (V), pour obtenir la pénicilline représentée par la formule (I) /désignée par commodité ci-après comme "Pc (1)^7". On réalise 15 efficacement cette élimination par le procédé habituel utilisé lors de la synthèse des peptides. On peut éliminer par réduction catalytique un groupe protecteur pour le groupe carboxyle tel que le groupe benzyle ou p-nitro-benzyle dans l'ester BPc (IV) et on élimine un groupe 20 phénacyle ou p-bromo-phénacyle en utilisant un thiophénolate. On effectue la réduction catalytique en utilisant de l'hydrogène gazeux et un catalyseur, dans un solvant organique indifférent à la température et sous la pression ambiantes. On utilise le mélange réactionnel obtenu, après l'élimination 25 du catalyseur, directement pour la réaction d'amination ou après le remplacement par une aminé organique appropriée. Dans le cas de l'élimination par réaction avec un thiophénolate, on la conduit avantageusement en présence d'un solvant organique approprié comme le diméthylformamide, le tétrahydrofurane, l!acé-30 tone, l'acétate d'éthyle, le chloroforme, la méthyl-isobutyl- cétone, le benzène ou 1'acéto-acétate d'éthyle. On peut purifier le mélange réactionnel qui en résulte par le même processus d'isolement que pour l'ester BPc (IV)^. On conduit efficacement l'élimination d'un groupe 35 protecteur pour le groupe amino par le procédé habituel lors de la synthèse des peptides décrit précédemment. On doit choisir une condition de réaction d'élimination de telle .sorte qu'il n'y ait pas de danger d'épimérisation 71 06968 9 2081060 en position 6 du noyau pénicillanique ou destruction de la structure de la pénicilline, de plus, qu'on n'ait pas de difficulté à isoler et à purifier le Pc (1) du mélange réactionnel après élimination. Quoiqu'il en soit, l'objet de l'élimination 5 d'un groupe protecteur du groupe carboxy bu amino consiste à produire une Pc (1) purifiée par application du procédé de synthèse des peptides, sans aucun effet défavorable quelconque sur la structure de la pénicilline» Conformément au procédé décrit ci-dessus, on obtient 10 finalement la Pc (1), puis on isole et on purifie la Pc (1) à partir du mélange réactionnel contenant la Pc (1) en appliquant un procédé quelconque connu pour la purification de l'ampicilline» les exemples suivants illustrent la présente inven-15 tion sans pour autant être considérés comme étant limitatifs. 71 06968 10 2081060 EXEMPLE 1o- Préparation d'ester phénacylique de N-(N'-trityl-D-phényl-glycyl)-benzyl-pénicilline. On dissout dans 120 ml de benzène anhydre 24,0 g (0,053 mole) d'ester phénacylique de benzyl-pénicilline. On 5 ajoute à cette solution 18,8. ml (0,23 mole) de pyridine anhydre en refroidissant entre -2 et 0°C, et en agitant. Ensuite, on ajoute goutte à goutte une solution de 13,4 g (0,064 mole) de PCl^ dans 120 ml de benzène anhydre, en un laps de 30 minutes. Ensuite, on fait réagir le liquide en conservant sa température 10 entre -2 et 0°C. Après la réaction, on élimine par filtration le chlorhydrate de pyridine qui s'est déposé en on lave rapidement la liqueur-mère avec une solution saturée de chlorure de sodium, une solution aqueuse 1 N de bicarbonate de sodium et de l'eau, 15 dans cet ordre, pour éliminer le PClj- qui n'a pas réagi et le / 2 produit secondaire POCl^. On deshydrate la solution benzénique ci-dessus pendant 20 minutes sur du sulfate de sodium anhydre puis on y ajoute 25,3 g (0,06 mole) du sel de potassium de N-trityl-D-phénylglycine, et on gglte à 50°C. On élimine par filtra-20 tion une matière insoluble du mélange réactionnel et l'on concen-treensuite la liqueur-mère réactionnelle sous dépression. Ensuite, on effectue l'adsorption du concentré en colonne constituée par 80 g de gel de silice (0^250 - 0,210 mm) tassé avec du benzène, et on effectue l'élution avec le mélange benzène-acétate 25 d'éthyle anhydre (20:1) et la première fraction d'élution contient l'ester phénacylique désiré de lî-(lT'-trityl-D-phénylglycyl) -benzyl-pénicilline» On recueille cette fraction et la déshydrate par lyophilisation pour obtenir 31,9 g d'un produit lyophilisé. Rendement 72,5 30 Analyse élémentaire pour C^H^OgN^S : C H F Calculé 73,98 % 5,48 % 5,07 $ Trouvé 75,05 5,62 - 5,49 Sommets d'absorption dans 1'infra-rouge (entre 1000 et 1800 cm~^) 35 1600 - 1708, 1762 et 1793. Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDCl^) 1,65 (s, 6H), 3,77 (q, 2H), 4,53 (s, 1H), 4,92 (d, 1H, 0,42 cps) et 5,45 (q, 2H). 71 06968 n 2081060 EXEMPLE 2 »- Préparation de l'ester phénacylique de N-(N'-o-nitrophényl-sulfényl-phénylglycyl)-benzyl-pénicilline 0 On dissout 45,2 g (0,1 mole) d'ester phénacylique de PcG- dans 150 ml de "benzène anhydre. On-ajoute à cette solution 5 32,4 ml (0,4 mole) de pyridine anhydre en refroidissant à 0°C et en agitant. On ajoute ensuite, goutte à goutte une solution de 21,9g (0,105 mole) de PCl^ dans 150 ml de benzène anhydre, en un laps de 30 minutes. On laisse ensuite le liquide réagir pendant 1 heure tout en conservant la température à 0°C„ 10 Après la réaction, on élimine le chlorhydrate de pyri dine qui a précipité par filtration et on lave rapidement la liqueur-mère avec une solution saturée de chlorure de sodium, une solution saturée de bicarbonate de sodium et une solution saturée de chlorure de sodium dans cet ordre, et on déshydrate 15 la solution lavée sur gel de silice, puis on ajoute 34,2 g (0,1 mole) du sel de potassium de K-o-nitrophényl-sulfényl-phénylglycyne et on l'agite pendant 5 h 30 à 55-60°Co Après achèvement de la réaction, on lave le liquide réactionnel avec de l'acide chlorhydrique 0W,5 N, une solution 1 20 N de bicarbonate de sodium et une solution saturée de chlorure de sodium, dans cet ordre, et on concentre sous vide la liqueur-mère après l'avoir déshydratée sur gel de silice. Ensuite, on effectue l'adsorption du concentré en colonne comportant 500 g de gel de silice (0,250 - 0,210 mm) tassée avec du benzène et 25 on effectue l'élution avec le mélange de benzène et d'acétate d'éthyle anhydres (3:1) et la première fraction d'élution contient l'ester phénacylique désiré de N-(N'-o-nitrophényl-sulfényl-phénylglycyl)-benzyl-péniciLline. On recueille cette fraction et on la déshydrate par lyophilisation pour obtenir 30,1 g de produit 30 lyophilisé. Rendement 40,8 Analyse élémentaire pour C38H34°8IÎ4S2 : C JÊ H io M io Trouvé 61,40 4,66 7,10 35 Calculé 61,78 4,64 7,58 Sommets du spectre IR (gamme de 1600 - 1800 cm"1) 1690, 1705 1760 et 1790„ k 71 06968 12 2081060 Spectre de RM (CDOlj) : 1,49 (s, 3H), 1,62 (s, 3ïï), 4,03 (d, 211), 4,45 (s, 1H), 5,3 - 5,7 (m, 5H), 6,10 (s, 1H), 7,0 - 8,3 (m, 19 H) o 5 EXEMPLE 3.- Préparation de l'ester phénacylique de E-(N'-carbo-benzoxy-phénylglycyl)-benzyl-pénicilline. On utilise à la place du sel de potassium de N-o-■ nitrop'hényl-sulfényl-phénylglycine de l'exemple 2, 32,3 g (0,1 mole) du sel de potassium de N-carbobenzyxo-phénylglycyne et on 10 effectue la réaction à 30°C pendant 16 heures au lieu de 55-60°C pendant 5 h 30„ On effectue une chromatographie en colonne de gel de silice par élution en utilisant un mélange de benzène-acétate ' d ' éthyle (10:1) au lieu du même mélange solvant (3:1 )„ On obtient ainsi 42,5 g d'ester phénacylique de N-(N*-carboben-15 zoxy-phénylglycyl)-benzyl-pénicilline (rendement 59,0 $>) à la place du produit de l'exemple 2. Analyse élémentaire pour Ç^QH^^Ogl^S : C io H io N i> 20 Trouvé 66,70 5,04 5,86 Calculé 66,75 5,18 5,84 EXEMPLE 4.- Préparation de l'ester phénacylique de l'alpha-N-trityl-aminobenzyl-pénicilline 0 25 ' On dissout dans 40 ml de chloroforme 16,5 g (0,02 mole) d'ester phénacylique de K-(lî'-trityl-phénylglycyl)benzyl-pénicilline. On ajoute goutte à goutte à cette solution 2,00 ml (0,02 mole) de butyl-amine en agitant à la température ambiante (20°C). On lave le liquide réactionnel avec de l'acide chlorhy-30 drique 0,5 N et une solution saturée de chlorure de sodium, dans cet ordre, pour éliminer la n-butyl-amine qui n'a pas réagi, comme chlorhydrate soluble dans l'eau. On déshydrate la liqueur-mère sur gel de silice anhydre et on la concentre sous dépression, On dissout le concentré dans une petite quantité de benzène et 35 on effectue une adsorption en colonne comportant 350 g de gel de silice (0,250 - 0,210 mm) tassé avec du benzène, et on soumet à la chromatographie en colonne en utilisant le mélange 71 06968 13 2081060 benzène-acétate d'éthyle (20:1) comme solvant de développement» On trace un chromatogramme en couche mince sur les fractions éluées par le procédé à l'acide oxamique sur gel de silice, et on ne recueille que les fractions contenant l'ester phénacylique 5 d'alpha-N-tritylaminobenzyl-pénicilline et on le déshydrate par lyophilisation. Le produit lyophilisé ainsi obtenu est recristallisé dans le mélange acétate d'éthyle-éther de pétrole pour obtenir 2,2 g d'ester phénacylique d'alpha-N-tritylamino-benzyl-pénicilline cristallin. Rendement 15,5 %. Point de fusion 202-10 204°C» Analyse élémentaire pour C^E^O^N^S : C H i> N i Trouvé 72,88 5,68 5,99 15 Calculé 72,76 5,54 5,92 Bandes d'absorption dans le spectre IR : 3350, 1785, 1720, 1685, 1590 et 1525 cm"1 j Spectre de RMN : 1,66 (s, 2H), 1,15 (s, 3H) ; 3,3 (b, 1H), 4,83 (b,1H), 4,56 (s, 1H), 5,12 (d, 1H, 4,5 cps), 20 5,28, 5,35, 5,42 (t, 3H), 7,3 - 8 (m)» EXEMPLE 5»- Préparation de l'ampicilline» On dissout dans 7 ml de diméthylformamide distillé 2,13 g (0,003 mole) d'ester phénacylique de 1'alpha-N-trityla-2 5 mino-benzyl-pénicilline. On ajoute à cette solution 0,79 g (0,006 mole) de thio-phénolate de sodium dans 3 ml de diméthylformamide à la température ambiante (20°C), en agitant. Après 70 minutes, on y ajoute 20 ml d'acétate d'éthyle et on lave avec une solution à 10 io d'acide acéthique et une solution 1 N de 30 bicarbonate de sodium pour éliminer le thiophénolate qui n'a pas réagi et le diméthylformamide. Après avoir déshydraté le mélange réactionnel sur gel de silice, on y ajoute 0,43 g de 2-hexanoate d'éthyle dans 2 ml d'acétate d'éthyle, on concentre sous dépression et on y ajoute de l'éther de pétrole. On recueille par 35 filtration la matière précipitée, on lave et déshydrate pour fournir 2,13 g du sel de sodium d'alpha-ïï-tritylamino-benzyl-pénieilline. 71 06968 14 2081060 Le produit brut ainsi obtenu est dissout dans 10 ml d'acétate d'éthyle. On ajoute à cette solution 0,8 ml d'acide trifluoro-acétique en agitant à la température ambiante (20°C)„ Après 10 minutes de réa.ction, on agite une grande quantité 5 d'éther de pétrole pour obtenir une substance huileuse» On ajoute ensuite à cette substance huileuse de l'acétate d'éthyle pour la dissoudre, on neutralise avec de la tri-éthylamine et * on ajoute un excès d'éther de pétrole. On dissout dans l'eau la substance huileuse séparée puis on lave avec de l'acétate d'é-10 thyle. On déshydrate cette solution par lyophilisation pour obtenir 450 mg d'ampicilline » Le produit est identique à un étalon d'ampicilline d'après un chromatogramme en couche mince et une bio-autographie (Rf 0,72) et qui présente un sommet d'absorption dans le spec- — 1 15 tre IR pour le cycle lactame en 1760 cm . La puissance est de 340 mcg/mgo EXEMPLE 6.- Préparation de l'ester phénacylique d'alpha-ïï-tritylamino-ben'zyl-pénicilline « 20 On dissout dans 50 ml de benzène anhydre 20 g (24,1 millimoles ) de l'ester phénacylique de N-(N,-trityl-D-phényl-glycyl) benzyl-pénicilline. On ajoute goutte à goutte à cette solution 3,0 ml (24,1 millimoles) de 3-diméthylamino-propylamine dans 12 ml de benzène anhydre à 5°C, en agitant pendant 20 minu-25 tes. On continue la réaction à 5°C pendant 2 heures. On lave le mélange réactionnel avec une solution saturée de chlorure de sodium dans de l'acide phosphorique à 10 $ et avec une solution de bicarbonate de sodium 1 N, dans cet ordre, pour éliminer la 3-diméthylamino-propylâmine. qui n'a pas réagi, sous forme de 30 sel de l'acide phosphorique hydrosoluble. Après déshydratation sur sulfate de sodium anhydre, on concentre la liqueur-mère sous dépression. On ajoute 100 ml de méthanol et on -laisse reposer en réfrigérateur, pour obtenir 11,g d'ester phénacylique d'alpha-N-tritylamino-benzyl-pénicilline cristallin,, Rendement 35 64,3 Point de fusion 202-203°C„ Analyse élémentaire pour C^H^gU^O^S : C io H io N i° Trouvé. 72,57 5,59 5,92 Calculé 72,76 5,54 5,92 71 06968 2081060 Spectre IR (gamme de 1600 - 1800 cm""', Nujol) 1692, 1710, 1727 et 1795 cm"1. 5 EXEMPLE 7o- Préparation d'alpha-aminobenzyl-pénicilline0 On dissout dans 50 ml de diméthylformamide distillé 20 g (28,2 millimoles) d'ester phénacylique d'alpha-N-tritylami-no-benzyl-pénicilline„ On ajoute à cette solution 16 g (121 millimoles) de thio-phénolate de sodium dans 30 ml de diméthyl-10 formamide distillé à la température ambiante en agitant. Après réaction pendant 60 minutes, on y ajoute 200 ml d'acétate d'éthyle et on lave avec de l'acide acétique en solution à 10 % et une solution saturée de chlorure de sodium pour éliminer le thiophénolate qui n'a pas réagi et le diméthylformamide, et on déshydra-15 te ensuite sur gel de silice. On ajoute à cette solution déshydratée 24 ml d'acide dichloro-acétique à la température ambiante en fgltant. Après 15 minutes, on ajoute 7 g de bêta-naphtalêne sulfonate de sodium dans 300 ml d'une solution aqueuse et on ajoute ensuite 200 ml d'acétate d'éthyle. Après 2 heures de réaction, 2 0 on laisse reposer pendant 16 heures le mélange réactionnel en réfrigérateur et on recueille le précipité par filtration. On lave le précipité avec de l'eau froide et de l'acétate d'éthyle puis on déshydrate pour obtenir 11 g de bêta-naphtalène sulfonate d'alpha-amino-benzyl-pénicilline«Rendement : 75,2 La puissance 25 est de 610 mcg/mg par titrage microbiologique. Les sommets du spectre IR pour cette substance dans la gamme de 1600 - 1800 cm-1 sent par Nujol en 1665, 1700 et 1780 cm"1. ~~ On ajoute à 10 g (18 millimoles) de bêta-naphtalène 30 sulfonate d'alpha-aminobenzyl pénicilline obtenu ci-dessus, 50 ml d'eau et 2,51 ml (18 millimoles) de triéthylamine à la température ambiante en agitant pendant 1 heure. On règle le pH de la solution à pH 4,5 avec HC1 1 I en refroidissant par de la glace et en agitant, puis on laisse reposer en réfrigérateurl 35 On recueille par filtration le produit ainsi précipité, on le lave avec de l'eau refroidie par de la glace et déshydrate pour obtenir 4,42 g d'alpha-aminobenzyl,-pénicilline trihydratée» Rendement 61,0 Point de fusion 195-215°C (avec décomposition). 71 06968 16 2081060 Cxj 2^>8 = + 216 ( c = 1,0, HC1 1N) Spectre IR (gamme de 1600-1800 cm"'', Nujol) : 1605, 1622, 1690 et 1780 cm"16 La puissance par titrage microbiologique : 970 mcg/mg0 EXEMPLE 8o- On utilise 'la 2-diméthylamino-éthylamine à la place de 3-diméthylamino-propylamine de l'exemple 6, pour obtenir 9,8 g d'ester phénacylique 'de 11 alpha-tritylamino-benzyl-pénicilline. Rendement 57,8 Point de fusion 203°C„ On traite cette substance par le même processus qu'à l'exemple .7 et l'on obtient 2,19 g d'alpha-aminobenzyl-péncilli-ne trihydratée „ Rendement 60 foa 71 06968 17 2081060 f REVENDIGATI OIS 1Procédé de production de pénicilline de formule E-CH-CO-MH-CjH—OH |^CH^ (i) 2 0=0 1 CH-COOH dans laquelle R représente un groupe phényle, et de ses sels non toxiques caractérisé en ce qu'on traite un ester diacylique de pénicilline de formule ■ /v>j , , w ÇH CH 0 (II) 10 p-rm-rfL . I 0H3 -CH-C OOA *0 0=G- È dans laquelle R est tel que défini ci-dessus, A représente un groupe protecteur pour le groupe carboxylique et B est un groupe amino protégé, en passant par des étapes de déphényl-acétyla- 15 tion, de désestérification et d'amination. - 2,- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise l'ester diacylique de pénicilline de formule II sous la forme d'un mélange de 1 mole avec 1 à 2 moles d'un agent d'aminolyse, et que l'on conduit la réaction à température 20 de 0 à 30°C. 3,- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'agent d'aminolyse est une amino-alcoylamine ïf, E-disub-stituée de formule R 25 1\U-R,-HH0 (III) ^ 3 2 dans laquelle R^ et R2 représentent des groupes alcoyle en C1 à C^ et Rj représente une chaine alcoylène droite ou ramifiée en C1 à Cg ou bien une aminé primaire organique. 30 4.- Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'amino-alcoylamine N, ÎT-disubstituée de formule III est un composé choisi parmi la 2-diméthylamino-éthylamine, la 2-dié-thylamino-éthylamine, la 3-diméthylamino-propylamine et la 3-diéthylamino-propylamine. 71 06968 18 2081060 5.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ester diacylique de pénicilline de formule II est utilisé sous la forme d'un mélange de 1 mole avec 1 à 4 moles de thiophénolate et que l'on conduit la réaction à température de 5 0 à 30°C. . 6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le' composé déphénylacétylé de formule II est utilisé sous la forme d'un mélange de 1 mole avec 2 à 4 moles de thiophénolate et qu'on conduit la réaction à la température ambiante. 10 7.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on conduit la désestérification par réduction catalytique. 8.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on conduit l'élimination du groupe protecteur pour le groupe amino de formule II, dans le composé déphénylacétylé de 15 formule I ou dans le composé déphénylacétylé et désestérifié de formule I, par traitement avec l'acide dichloroacétique ou tri-fluoro-acétique ou par réduction catalytique à la température comprise entre le refroidissement à la glace et la température . ambiante. 20 9•— X»*alpha-aminobenzyl-pénicilline obtenue conformé ment au procédé selon l'une des revendications 1 à 8, ainsi que ses sels non toxiques.