La présente invention a pour objet un composé nouveau, le di-(4-chlorothymol)-sulfure-(2? de formule brute C20H2402C12S (poids moléculaire 399,4) et deformule de constitution Le di- (4-chlorothymol)-sulfure- (2) est un interme- diaire de synthèse organique. I1 est aussi un antibiotique nouveau actif particu lièrement contre les staphylocoques et les streptocoques. Un autre objet de l'invention est donc le médicament antibiotique contenant comme substance active ledit composé. Les caractéristiques de ce composé sont les suivantes I) - Caractères organoleptiques Poudre microcristalline blanche, sans odeur. 2) - Solubilités Insoluble dans l'eau. Assez soluble dans le chloroforme, l'acétone et le benzène. Soluble dans l'alcool éthylique, l'éther ordinaire et l'ethylene-glycol. 3) - Point de fusion Au bloc Köfler, le point de fusion est compris entre 1110 et 115 C 4) - Spectre ultra-violet Dissoudre environ 50 mg de substance dans 100 ml d'hexane. Diluer la solution obtenue au 20ème à l'aide d'hexane (soit 25 g/ml). A l'aide d'un spectrophotomètre, en cuve de quartz de 1 cm d'épaisseur, en prenant comme liquide de comparaison de l'hexane, déterminer le spectre de la solution diluée pour les longueurs d'onde comprises entre 250 et 350 millimicrons. La solution diluée présente un plateau caractéristique compris entre 229 + 2 nm et 308 + 2 nm. On prépare ce composé, par exemple, en faisant réagir 2 molécules de 4-chlorothszmol avec théoriquement une molécule de bichlorure de soufre SCl2, dans un solvant organique de préférence chloré, ou en faisant réagir théoriquement 2 molécules de 2,4-dichlorothymol avec une. molécule de sulfure de sodium SNa2 ou de sulfure de potassium SK2. Les essais de contrôle de la pureté du produit donnent les résultats suivants (tous les % sont en poids) Teneur en matières volatiles ...... - 2 % " " cendres sulfuriques .... # 0,2 % " " chlorures .......... # 50 parties par million " " sulfates .......... # 50 " " " n " métaux lourd's " arsenic .......... nulle Acidité - gramme Le dosage du chlore organique et du soufre organique est effectué de la façon suivante a) Chlore- organique Minéraliser à la bombe de Parr une prise d'essai exactement pesée voisine de 50 mg. Continuer selon la technique du Codex 1965 (8ème édition), page 1 566.La teneur en chlore organique rapportée au produit desséché est égale à 17,7 z + 3 %, donc est comprise entre 17,2 et 18,2 %. b) Soufre organique Minéraliser à la bombe de Parr une prise d'essai exactement pesée voisine de 100 mg. Continuer selon la technique du Codex 1965 (8ème édition) page 1 563 ou par gravimétrie de sulfate de baryum. La teneur en soufre organique rapportée au produit desséché est égale à 8,02 % + 5 %, donc comprise entre 7,60 et 8,42 %. ACTIVITE BACTERIOSTATIQUE On rapporte fci-après deux études de l'activité bactériostatique du di-(4-chlorothymol)-sulfure-(2). A.- Première étude I) - METHODE DE DETERMINATION Le di-(4-chlorothymol)-sulfure-(2) étant insoluble dans l'eaux on n'a pas pu utiliser la technique des zones d'inibition. On a employé une technique adaptée dite du "stylo à microbes". Principe : La méthode consiste à effectuér des dilutions croissantes du produit dans le milieu gélosé, ultérieurement coulé en boîtes de Pétri. Après refroidissement, la surface du milieu est ensemencée, en stries parallèles, avec différents germes. Mode opératoire a) Préparation du milieu gélosé. Ce milieu a la formule suivan te : Extrait de viande Liebig ..... 1,5 g Autolysat de levure ..... 3 g Peptone ..... 6 g Chlorure de sodium ..... 5 g Gélose ..... 15 g Phosphate disodique ..... 9,3 g Phosphate monopotassique ..... 0,7 g Glucose ..... 2 g Eau ..... 1 litre. pH 7,4 b) Souches utilisées Staphylococcus Londres Staphylococcus 133 Streptoccus c) Préparation du di-(4-chlorothymol)-sulfure-(2) L'éthylène-glycol est utilisé comme solvant. On prépare une solution à 1 mg/ml, soit à 1%, et les essais sont effectués sur les dilutions suivantes 1 p 1.000 ...... 1.000 g/ml 1 p 2.000 ...... 500 g/ml 1 p 4.000 ...... 250 g/ml 1 p 8.000 ...... 125 g/ml 1 p 16.000 ...... 62,50 g/ml 1 p 32.000 ...... 31,25 g/ml 1 p 64.000 ...... 15,60 g/ml 1 p 28.000 ...... 7,80 g/ml 1 p 256.000 ...... 3,90 g/ml i p 512.000 ...... 1,95 g/ml 1 p 1.000.000 ...... 1 eg/ml 1 p 2.000.000 ..... 0,5 g/ml 1 p 4.000.000 ..... 0.25 g/ml 1 p 8.000.000 ..... 0.125 g/ml d) Ensemencement Le milieu gélosé est porté au bain-marie à une température voisine de 500C pour être liquéfié. I1 est alors mélangé à la dilution de di-(4-chlorothymol)-sulfure- Le milieu est alors coulé en botes de Pétri stériles et laissé a solidifier. On le sèche à l'étuve à 370C pendant une heure. L'ensemencement est pratiqué sur la gélose par stries parallèles réalisées avec les bouillons de culture des différents germes, chaque boite contenant ainsi un réseau de stries dont chacune correspond à--une espèce microbienne. Les boites de Pétri ainsi ensemencées sont mises à l'étuve à 370C pendant 24 heures. e) Lecture Après ce délai, les lectures sont effectuées. - Si le produit est actif à la dilution déterminée sur un germe déterminé, la stie correspondante ne montre aucun développement. Si le produit est inactif, des colonies sont visibles tout le long de la strie. Un milieu: témoin (28,5 ml de milieu + 1,5 ml d'éthylèneglycol) est également ensemencé. Tous les germes doivent pousser à as surface. II) RESULTATS Les résultats obtenus sont consignés dans le tableau ci-dessous dans lequel le signe - signifie que le germe n'a pas poussé le signe + signifie que le germe a poussé, donc que le produit n'a pas d'action a la concentration correspondante. Germes Staph. Londres Staph. 133 Strept. Dilutions 1/1000 1/512000 1/2000000 1/4000000 - - + 1/8000000 + + + Ce tableau prouve l'efficacité sur staphylocoques et streptocoques et, par conséquent, une activité bactériostatique non négligeable. B.- Deuxième étude On a étudié l'activité bactériostatique du di-(4-chloro- thymol) -sulfure- (2) vis- -vis de Streptococcus pyogenes (groupe A de Lancefield) et de Streptococcus agalactiae (groupe B de Lancefield). 1) Souches bactériennes utilisées Pour Streptococcus pyogenes A, deux souches ont été testées, toutes deux isolées de rhinopharynx de malades. Pour Streptococcus agalactiae B, deux souches ont été testées, toutes deux isolées lors d'infections vaginales. Le groupage de ces souches a été réalisé par la méthode de Lancefield. 2) Détermination des activités bactériostatiques en milieu gélosé a) Meffithode utilisee Les souches bactériennes ont été préalablement cultivées à 370C en bouillon glucosé tamponné, pendant 14 - 16 heures. Au bout de ce temps, la culture obtenue a été ensemencée sur un milieu gélosé au sang (base trypticase soja ; sang de mouton), a raison de trois stries parallèles sans recharge de l'anse de platine. Au préalable, au milieu gélosé au sang, a été incorporé le produit selon l'invention à tester, ce, en quantités croissantes. Pour permettre cette incorporation, le produit a été dissous dans l'alcool éthylique à 700 , qui s'est révélé meilleur solvant qu'une solution aqueuse alcaline (sodique), que le diméthylsulfoxyde (DMSO) et que le diméthylformamide. A ce sujet, il a été vérifié que la quantité d'alcool éthylique introduit dans le milieu d'essai n'avait pas d'activité bactériostatique dans les conditions expérimentales précitées. La lecture des résultats a été réalisée 24 heures après incubation à 37 Oc. b) Resultats obtenus La concentration minimale inhibitrice (CMI), en milieu gélosé, est celle par laquelle on note un arret de la croissance bactérienne après passage à l'étuve à 370C pendant 24 heures. Dans les conditions expérimentales décrites ci-dessus, il a été établi, que le composé suivant l'invention inhibait la croissance bactérienne des streptocoques A (2 souches) et des streptocoques B (2 souches) à. la concentration de 20 eg/ml, ce qui représente une activité bactériostatique appréciable. La toxicité aiguxprimée par la DL50 est de 5 g/kg par voie orale chez la souris mâle. Les applications thérapeutiques sont le traitement des maladies provoques notamment par les staphylocoques et les streptocoques, comme les furoncles, l'anthrax, l'impétigo, les phlegmons, la pleurésie, la bronco-pneumonie, l'érysipèle, cette liste n'étant pas limitative. Le médicament peut être présenté sous toutes les formes pharmaceutiques usuelles faisant intervenir les excipients habituels pharmaceutiquement acceptables. Des formes préférées sont les comprimés et les suppositoires. Cependant, le composé selon l'invention n'étant pas agressif, il est'utilisable non seulement par les voies entériques, mais encore par la voie cutanée (en dermatologie) et par la voie vaginale (en gynécolo- gie). La posologie souhaitable pour l'homme est de 2 g/jour, par exemple 2 suppositoires dosés à 1 g ou 4 comprimés dosés à 0,50 g de substance active. Exemple de pr Saration du ohlorothymol sulfure. A) PRINCIPE : lie chlorothymol, dissous dans un solvant organique(chloré le plus souvent) réagit avec le bichlorure de soufre pour donner le chlorothymol sulfure. B) REACTION : C) MODE OPERATOIRE a) Matières mises en oeuvre : Chlorothymol 92,3 g (0s5 mole) SCl2 17,5 cm3 (0,275 mole, soit excès de Trichloréthylène 50 cm 10%) Alcool dénaturé 100 cm3 Acide Acétique 50 cm3 environ b) Détail du mode opératoire : - Dans un ballon de 250 cm , introduire 50 cm de trichlor éthylène et 92,3 g de chlorothymol. - Chauffer à 40 C environ, sous agitation, pour faciliter la dissolution; le chlorothymol reprécipite partiellement par retour à température ambiante. - A température ambiante, ajouter SCl2 (17,5 cm ) en 1 h environ; un fort dégagement de ClH est piégé dans un absorbeur. - Le chlorothymol se dissout totalement après addition d'environ 10% du SCl2 en excès. - le chlorothymol sulfure précipite souvent peu avant la fin de l'addition du SCl2, sinon, dè la mise sous vide, qui sera effectuée ultérieurement. Agiter encore une heure, après la fin de l'addition. - Dégazer sous vide à température ambiante, puis distiller sous vide, au bain-marie à 60 70 C maximum, jusqu'à obten tion d'une suspension épaisse. Filtrer et bien essorer. -Laver avec 2 x 20 cm3 de CH3COOH (qui élimine la coloration jaune). -Sécher 4 h à 800C sous vide. ler jet p = 68,6 g Rendement = 68,6 % PF = 108 C (capillaire) -111 C (Maquenne) (théorie = 110-111 C) Aspect : cristaux blancs Chromatographie (benzène/méthanol/ W) = tache unique. - Les eaux-mares du ler jet sont concentrées jusqu'd obtention d'une huile qui cristallise lentement après amorçage. - Laisser quelques heures au repos, filtrer, essorer et rincer avec 2 x 5 cm' de CH3COOH. 2ème jet : p = 8g Rendement (1 + 2) = 76,7 % PF = 108 C (capillaire) Chromatographie = tache unique Aspect : cristaux blancs à légers reflets jaunes -Les eaux-mères du 2ème jet contiennent du chlorothymol n'ayant pas réagi et du chlorothymol sulfure. R E V E N D I C A T I O N 1.- Medicament antibiotique, caractérise en ce qu'il contient comme substance active le di-(4-chlorothymol)-sulfure-(2) de formule de poids moléculaire 399,4 (C20H2402C12S), sous forme d'une poudre microcristalline blanche, sans odeur, de point de fusion 1110-1150C, insoluble dans l'eau, soluble dans les solvants organiques.