204231^ la présente invention concerne un nouveau dérivé d'adé-nine répondant à la formule : SH. "> 5 1 CQr CH, - CH- GE- CÛOH 2 t I OH- OH . 10 et ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique. L'invention a également trait au procédé de préparation de ce dérivé. La Demanderesse a réussi à isoler sous la forme de cristaux purs une nouvelle substance hypocholestérolémique (appelée 15 ci-après "lentinacine") d'un champignon comestible (Lentinus edodes Sing.), et elle a utilisé la spectrométrie, une étude de dégradation et, en outre, une synthèse totale pour èn confirmer la structure chimique qui correspond à l'acide 4-(9-adényl)-2(R),3(R)-dihydroxybutyrique (configuration D-érythro). 20 On a trouvé que la lentinacine se compose de carbone, d'hydrogène, d'oxygène et d'azote. La spectroscopie de masse a montré que le poids moléculaire de la lentinacine est égal à 253 (pic principal à 253 équivalents de masse, et pics partiels à 236, 218, 208, 178, 174* 148 et 135 équivalents de masse). 25 L'analyse élémentaire de la lentinacine donne les résul tats suivants : 42,78 fo de carbone, 4»34 ^d'hydrogène et 27*51 d1azote. Par conséquent, la formule brute de' la lentinacine correspond à CgH^O^N^ qui requiert 42,69 % de carbone, 4»39 % d'hydro-30 gène et 27*67 d'azote. La lentinacine est négative vis-à-vis de toutes les réactions colorées de recherche du sucre, des stéroïdes et des alcaloïdes. La lentinacine porte au moins un groupe carboxylique, du fait qu'elle forme un ester et qu'elle est adsorbée sur une ré-35 sine d'échange anionique faiblement basique. Le spectre d'absorption des rayons ultra-violets de la lentinacine correspond au type de spectre des composés de l'adénine substitués en position 70 12766 -2- 2042314 9 ( voir" J.A. C. S." 8£, 2148 (1962)). Spectre U.V. max. de la lentinacine (acide libre) 261,5 nifi (dans l'eau) 259»5 mji (dans l'acide chlorhydrique N) 5 262 mu (dans l'hydroxyde de sodium N) La spectrométrie de masse de l'ester méthylique de la lentinacine montre un pic au nombre de masse 135 qui correspond à l'adénine. Le spectre de résonance- magnétique nucléaire du sel de sodium de la lentinacine présente les caractéristiques sui-10 vantes : (100 MH2 dans D20) Par conséquent, il a été confirmé que la structure chimique de la lentinacine correspond à l'acide 4-(9-adényl)-2(R),3(R)-25 déhydroxy-butyrique. La lentinacine recristallisée dans l'eau chaude fond à 261-263°C en se décomposant. L'hémihydrate du sel de sodium se présente sous la forme 20 de paillettes incolores se décomposant à 266-268°C ([#3p =* +45,5° (C = 1, dans l'eau)). 30 La synthèse totale confirme en outre que la configuration stérique de la lentinacine est du type D-érythro. Les propriétés physico-chimiques de la lentinacine de synthèse coïncident avec celles de la lentinacine naturelle. En outre, la lentinacine synthétique montre un effet hypocholestérolémique remarquable, tout 35 comme la lentinacine naturelle. La lentinacine est isolée par extraction d'une ppudre de Lentinus edodes Sing. avec une solution aqueuse contenant environ 70 12766 -3- 2042314 70 fo d'un alcanol inférieur classique, tel que le méthanol, 11éthanolr élimination des substances insolubles de 11extrait, adsorption, si nécessaire, de la portion hypocholestérolémique sur une résine d'échange cationique, telle que "Dowex" 50¥, 5 "Amberlite" IR-1'20 (forme H+)v pour- éliminer•les substances non catioiiiques qui- ne-sont pas adsorbées sur cette résine, l'adsorption étant suivie de l'élutioû à1 l'ammoniaque de' la portion hypocholestérolémique adsorbée, puis on procède à 1'adsorption des ingrédients acides de l'éluat sur une résine d'échange anionique 10 faiblement basique, telle que "Amberlite" IR-45» sous la forme Cl", à- l'élùtion de.- la partie-intéressante avec un acide volatil, tel que l'acide acétique, au fractionnement de l'éluat par chroma-tographie sur une résine d'échange cationique, telle que "Amberlite" CG-120, pour recueillir la -fraction hypocholestérolémique qui mon-15 tre un maximum d'absorption à environ 262 m[i, et .à l'isolement des cristaux de lentinacine de la fraction, après- relargage sur une résine d'échange ionique. ' Une conduite -préférée de l'extraction est illustrée dans 1 'exemple 1 -décrit - ci-après» 20 Selon une for nie préférée de mise en oeuvre de l'invention, le composé (I) peut être préparé par voie de synthèse en faisant réagir un acétal ou un cétal de 2,3-dihydroxy-érythronolactone répondant à la formule : BL fi* 25 "• - - • - CK' " ■ 0• 0 . . (II) '0- (dans laquelle 0^ est le fragment résiduel de cet acétal ou de 30 c'é-ejétal) avec-un sél métallique,d'adénine, en. position 9» pour - =■ -obtenir•• le dérivé correspondant d'acide 4-(9-adényl)-2,3-dihydro-xy-butyrique répondant à la formule : 70 12766 -4- 2042314 10 (m) CEyCH- GH-G00H 0 0 \ / C ' N . a s* (dans laquelle -a'T^O^ répond à la définition donnée ci-dessus) R puis le composé (lll) est hydrolyse en donnant le composé (I). Comme sel métallique d'adénine, on préfère utiliser un sel 15 de métal alcalin, tel que le sel de sodium, .de lithium, de potassium, qui peut être préparé au moyen d'un procédé classique, par exemple en faisant réagir l'adénine avec l'hydrure de sodium, le sodium métallique, 1'hydroxyde de sodium, l'amidure de sodium, l'amidure de lithium, le carbonate de potassium, l'hydroxyde de 20 potassium, dans un solvant convenable, à la température ambiante ou en chauffant modérément. Des exemples préférés de fragment résiduel de 1'acétal ou du cétal mentionné ci-dessus comprennent lee radicaux éthylidène, isopropylidène et benzylidène. La réaction de condensation du sel métallique d'adénine 25 avec la lactone (il) est, de préférence, conduite à chaud, ce qui donne le sel métallique correspondant du composé (III). Le sel métallique du composé (III) est facilement transformé en acide libre correspondant de formule (III) au moyen d'un procédé classique qui consiste en une neutralisation ou en un traitement avec 30 une résine d'échange ionique. On préfère utiliser, comme solvant réactionnel pour la formation du sel métallique d'adénine mentionné ci-dessus et pour la réaction subséquente de condensation avec le composé (II), le diméthylformamide, le diméthylsulfoxyde, le diméthylacétamide, leurs mélanges avec la pyridine ou avec une 35 substance analogue. Le composé intermédiaire (lll) ou son sel métallique est s" ensuite hydrolysé pour éliminer le groupe protecteur des 3ÂÛ ORIGfNAt? 70 12766 -5- 2042314 groupes 2,3-dihydroxy, après séparation du produit réactionnel ou sans séparation. Cette hydrolyse peut être conduite au moyen d'un procédé classique, tel qu'une hydrolyse acide, par exemple en ajoutant un acide minéral dilué, tel que l'acide chlorhydrique, 5 l'acide sulfurique, à la température ambiante ou à une température élevée. L'acide 4-(9-adényl)-2,3-dihydroxy-butyrique résultant peut être isolé du mélange réactionnel au moyen d'un procédé classique, par exemple par adsorption sur une résine d'échange ionique 10 du sel minéral et de l'adénine restante, n'ayant pas réagi. Selon une autre forme de mise en oeuvre de la présente invention, le composé (I) peut être préparé en faisant réagir une 4-halogéno-5-nitro-6-aminopyrimidine répondant à la formule : 15 (dans laquelle X désigne un atome d'halogène, tel que le chlore, 20 le brome ou le fluor), avec l'acide 4-amino-2,3-dihydroxy-butyri- que (V) pour donner l'acide 4-[(6-amino-5-nitro-4-pyrimidyl)-amino]-2,3-dihydroxy-butyrique (VI), en réduisant le produit (VI) pour transformer son groupe nitro en groupe amino et en soumettant 1'acide 4-[(5 > 6-diamino-4-pyrimidyl)-amino]-2,3-dihydroxy-buty-25 rique ("VTl) résultant à une réaction de cyclisation. La réaction décrite ci-dessus peut être illustrée par les équations- suivantes : 70 12766 -6' 2042314 NEL NO, 'A (IV) m2 - ch2. (V) CH-CH-COOH I I 05 GH mZ H ^VN02 10 ^N-"^ NH-CH--CH -CH-COOH 2 I I OH OH NH, 15 2 (VI) CH_-CH-CH-COOH HD I I OH OH (VIT) NH. h^VV.sh UL,/ 20 I CH«-CH-CH-COOH 1 1 OH OH (VIII) 25 (dans lesquelles X répond aux définitions données ci-dessus). la première réaction de condensation des composés (IV) et (V) est conduite, de préférence, dans un solvant correct, tel que l'eau, le tétrahydrofuranne, l'acétone, le dioxarme ou un mélange de ces solvants, en présence d'une base, telle que le bicarbonate 30 de sodium, le carbonate de sodium et le carbonate de potassium. On préfère conduire la réaction à la température ambiante ou à une température légèrement élevée. Le composé (Yl) ainsi préparé est ensuite réduit pour donner le composé (VII) d'une manière classique, afin de transformer le 35 groupe nitro en groupe amino. Le procédé qui convient le mieux à cette fin est une réduction c atalytique utilisant le palladium fixé sur du carbone, le nickel de Raney ou un catalyseur analogue, dans 70 12766 -7- 2042314 un solvant tel que l'eau, le méthanol ou l'éthanol. Les procédés sont applicables au composé (VI) tant sous la forme acide libre que sous la forme du sel, par exemple de sodium ou de potassium. La réaction peut être conduite à la température ambiante, soit 5 à la pression atmosphérique, soit sous pression élevée. A titre / de variante, la réduction du composé (VI) peut être conduite par voie chimique, par exemple en utilisant un agent réducteur contenant du soufre, tel;qu'un thiosulfate. L'acide 4-[C5,6-diamino-4-pyrimidyl)-amino]-2,3-déhydroxy-10 butyrique (VTI) ainsi obtenu peut être utilisé comme matière de départ pour la réaction finale de cyclisation, en l'isolant ou non du mélange réactionnel. La réaction de cyclisation peut être conduite de deux façons, à savoir : i) par réaction avec un dérivé du type thiocarbonate, tel que 15 le sulfure de carbone, la thiourée ou un dithiocarbonate, pour obtenir l'acide 4-(8-mercapto-9-adényl)-2,3-dihydroxy-butyrique (VIII), suivie d'une réaction classique de désul-furation, ou ii) par réaction avec un dérivé d'acide formique, tel que 20 l'acide formique proprement dit, le formamide, un dérivé de ce dernier, la formamidine, un orthoformiate ou le thioformamide. La cyclisation du premier type (i) est conduite, de préférence, dans un solvant convenable, tel que le diméthylformamide, 25 la pyridine, le diméthylacétamide, en chauffant. La réaction subséquente de désuifuration est conduite, par exemple, en chauffant le composé intermédiaire (VIII) avec du nickel de Raney dans un solvant tel que l'eau, pendant plusieurs heures. La cyclisation du second type (ii) peut être conduite sim-30 plement par chauffage avec de l'acide formique ou ses dérivés mentionnés ci-dessus, en utilisant .ou non un solvant approprié. A titre facultatif, une petite quantité d'isomère d'amino-purine substituée en position 6 peut être formée comme sous-produit, mais l'isomère peut être facilement séparé du composé (i) 35 que l'on désire obtenir, au,moyen d'un procédé chromatographique ou en utilisant leur différence de solubilité dans un solvant classique. ORSGlflÂfc*- 70 12766 2042314 La réaction ci-dessus peut s'appliquer tout aussi bien à l'isomère optique correspondant des composés (II) et (V), sans racémisation. Par conséquent, si l'on utilise la D-éry-throno-lactone protégée en position 2,3-0 et l'acide 4-amxno-5 D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique comme composés de départ de formules respectives (il) et (V), on peut préparer par.voie de synthèse une substance exactement identique à la lentinacine naturelle. En outre, si l'on utilise la DL-érythronolactone protégée en position 2,3-0 et l'acide 4-amino-DL-érythro-2,3-10 dihydroxy-butyrique comme composés de départ, de formules respectives (II) et (V), on peut obtenir le mélange racémique contenant 50 io d'une substance identique à la lentinacine naturelle. Le composé (I) ainsi préparé peut encore être transformé en ses sels stables et acceptables du point de vue pharmaceuti-15 que, tels que les sels de sodium, potassium, calcium, magnésium et aluminium, qui montrent tous la même activité hypocholestérolémique que l'acide libre du composé (i). Sel de potassium : CgH^o0^NçK.1/2H20, lamelles incolores, fondant à 261-265°0 (décomposition), très solu-20 blesdans l'eau, pratiquement insolubles dans l'éthanol ou dans d'autres solvants organiques . Sel de calcium : (C^^ QO^M^^Ca^ELpO, prismes incolores fondant au-dessus de 288°C, faiblement solubles dans 25 l'eau, pratiquement insolubles dans des sol vants organiques. Sel de magnésium : (C^H^ QO^N^gMg.H^O, poudre cristalline fondant au-dessus de 300°C, faiblement soluble dans l'eau, pratiquement insoluble dans des sol-30 vants organiques. L'activité hypocholestérolémique de la lentinacine a été estimée, dans des expériences pharmacologiques effectuées parallèlement à la présente invention, comme étant environ 20 fois plus forte que celle de la substance appelée "Clofibrate" 35 (2-parachlorophénoxy-2-méthylpropionate d'éthyle), qui a été reconnue comme étant, à l'heure actuelle, l'un des agents hypo-cholestérolémiquesles plus efficaces. On donne ci-après un exem- BÂD original 70 12766 -9- 2042314 pie comparatif de leurs activités hypocholestérolémique et hypo- triglycéridémique. Expérience 5 dium à un produit de régime du commerce (vendu par la firme Japan CLEA Company) qui est imposé à des rats mâles de la race Sprague-Dawley, pesant 140-160 g, pendant 7 jours (chaque groupe d'essai comprend 8 rats). Après la période expérimentale, on dose le cholestérol total et le triglycéride total dans le sérum 10 des rats, au moyen de la méthode de Zak et de la méthode de Van-Handel et Zilversmit, respectivement. Les pourcentages de réduction du cholestérol total et du triglycéride total dans le sérum sont calculés au moyen de la formule suivante : De la lentinacine est ajoutée sous la forme du sel de so- Réduction $ = Taux moyen de cholestérol total ou de triglycéride total dans le groupe traité Taux moyen de cholestérol total ou de triglycéride total dans le groupe témoin x 100 20 Les résultats sont reproduits sur le tableau suivant. 70 12766 -10- 2042314 TABLE A D Suppléments Pourcentage de réduction du cholestérol total dans le sérum ($) Pourcentage de réduction du triglycéride total dans le sérum ($) Composés contenus dans le produit de régime {%) Lentinacine (Sel de îfa semihydraté 0,01 26 49 If 0,005 20 30 II 0,002 15 21 H 0,001 8 19 "Clorofibrate" 0,2 28 62 If 0,1 21 34 tl 0,05 15 31 En outre, la toxicité aiguë et la toxicité chronique de la lentinacine sont extrêmement faibles. Par exemple, cinq souris 20 auxquelles on administre par voie orale ou par voie intraveineuse 1000 mg/kg de lentinacine survivent toutes au-delà de 14 jours. Dix rats auxquels on administre par voie orale 500 fflg/kg par jour de lentinacine survivent tous au-delà d'un mois et 7 rats sur 10 auxquels on a administré par voie orale 1000 mg/kg par jour de 25 lentinacine survivent au-delà d'un mois. La lentinacine et ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique sont particulièrement avantageux pour le traitement ou la prophylaxie de l'hypercholestérolémie qui est accompagnée d'artériosclérose, d'hypertension, d'infarctus cardiaque, 30 d'angine de poitrine, de cérébromalacie ou d'un accident vascu-laire cérébral. On peut les utiliser sous les formes destinées aussi bien à l'administration par voie orale qu'à'l'administration par voie parentérale, en association avec un véhicule acceptable du point de vue pharmacologique. Les doses journalières préféra-35 bles sont d'environ 100 à 300 mg (sur la base de l'acide libre) pour un adulte. De telles doses ne s'accompagnent d'aucun effet secondaire défavorable. 70 12766 -11- 2042314 EXEMPLE 1 (I) Un kilogramme de chapeaux séchés du champignon Lentinus edodes Sing. est transformé en poudre, à laquelle on ajoute 5 litres d'une solution aqueuse d'éthanol à 80 Le mélange est 5 agité énergiquement à la température ambiante pendant 4 heures. Ensuite, le mélange est filtré et on fait passer le filtrat à travers une colonne garnie de 0,4 litre de "Amberlite" IR-120 (forme H+). Après lavage de la colonne jusqu'à ce que la solution qui la traverse soit neutre, la colonne est éluée avec de 10 l'ammoniaque à 4 i° et l'éluat est concentré. Le résidu est dissous dans l'eau et on fait passer la solution à travers une colonne garnie de 0,4 litre de "Amberlite" IR-45 (forme Cl"). Après lavage de la colonne avec 2 litres d'eau, la colonne est éluée avec 2 litres d'acide acétique 1 ÎT et l'éluat est concen-15 tré à 50 ml. Le concentré est chromatographié sur une colonne de 3,6 x 150 cm de "Amberlite" CG--120 à 50°C (solvant : solutions tampons de citra-te de sodium à un pH de 3,25 et de 4,25, débit de 480 ml/h) et les fractions comprises entre 6300 et 7280 ml sont recueillies. La fraction est adsorbée de nouveau sur de 20 l'Amberlite" IR-120 et éluée avec de l'ammoniaque. On ajoute de l'éthanol à 70 $ à l'éluat concentré pour séparer par cristallisation 0,495 g de semihydrate du sel de sodium de la lentinacine,, à savoir le semihydrate de 4-(9-adényl)-D-érythro-2y3-dihydroxy-butyrate de sodium, sous la forme de lamelles transparentes inco-25 lores se décomposant à 266-268°C après recristallisation répétée dans de l'éthanol aqueux à 70 puis déshydratation sur du pen-toxyde de phosphore sous pression réduite, à environ 45°C. [a]^° = +45,5° (C = 1, dans l'eau) 30 Le sel de sodium est soluble dans l'eau, mais faiblement soluble dans l'éthanol, insoluble dans le chloroforme, l'éther de pétrole ou d'autres solvants organiques classiques. (II) A partir du sel de sodium mentionné ci-dessus, on prépare les cristaux suivants au moyen d'un procédé classique : 35 Acide libre de la lentinacine : point de fusion 261-263°C (après recristallisation dans l'eau chaude, cristaux faiblement solubles dans l'eau). 3A0 ORIQUWÉ* 70 12766 -12- 2042314 Ester méthylique de la lentinacine ; point de fusion 218-221°C, aiguilles incolores (après recris-tallisation dans le méthanol). Chlorhydrate de l'ester méthylique de la lentinacine : point de 5 fusion 193-196°C, aiguilles incolores (après recristallisation dans un mélange d'éthanol et d'acétone). EXEMPLE 2 On dissout 540 mg d'adénine dans 60 ml de diméthylformamide, 10 on ajoute 21 0 mg d'hydrure de sodium huileux (62,5 ¥°) à la solution et on agite le mélange pendant 2 heures à 70°C. On ajoute 700 mg de 2,3-0-isopropylidène-D-érythronolactone au mélange par portions, et on agite le mélange à 140 - 5°C pendant 15 heures. Ensuite, on chasse le diméthylformamide du mélange par évaporation sous près-15 sion réduite, on ajoute 10 ml d'acide chlorhydrique à 10 $ au résidu et on chauffe le mélange à 60-80°C pendant 30 minutes. Après concentration du mélange sous pression réduite, on ajoute 20 ml d'eau au résidu et on neutralise avec une solution aqueuse d'hy-droxyde d'ammonium à 5 On fait ensuite passer la solution à 20 travers une colonne de 50 ml de "Amberlite" IR~120 (forme H+) et on élue la colonne avec une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium à On chasse le solvant de l'éluat par évaporation sous pression réduite, on ajoute une faible quantité d'eau au résidu et on isole par filtration l'adénine insoluble restante. On ajoute 25 une faible quantité de bicarbonate de sodium au filtrat, puis on ajoute une quantité suffisante d'éthanol au filtrat pour séparer par cristallisation le 4-(9-adényl)-D-érythro-2j3-dihydroxy-buty-rate de sodium brut. Après séchage à la chaleur sous pression réduite, on obtient 470 mg de cristaux d'un brun légèrement jaunâtre 30 se décomposant à 225-229°C. Les cristaux donnent par purification des écailles incolores se décomposant à 266-268°C après recristallisation répétée dans de l'éthanol aqueux à 80 i». EXEMPLE 5 On chauffe à 80-85°C pendant 1S5 heure 'an mélange de.8,1 g 35 d'adénine, 2S54 g d'hydrure de -sodiu® huileux (à 62,5 %) et 250 ml de diméthylformamide,. On ajoute au mélange 7,9 g de 2,3-O-isopropylidène-D^-érythronolactone et on chauffe le mélange sous 840 ORlGiu^J 70 12766 -13- 2042314 x + agitation a -140 - 3°C pendant 12 heures. Après évaporation du solvant, on dissout le résidu dans 40 ml d'eau et on isole par filtration la substance insoluble restante. On traite le filtrat avec de l'Amberlite"IR-120 (forme H+) comme décrit dans 5 l'exemple 2, et on concentre l'éluat pour séparer par cristallisation l'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-isopropylidène-dioxy-butyrique, se décomposant à 170-175°C. Les cristaux sont dissous dans une solution aqueuse diluée de bicarbonate de sodium et la solution est décolorée, puis 10 neutralisée avec de l'acide formique à 3 en sorte qu'on obtient 2,0 g de prismes incolores purifiés de l'acide, se décomposant à 222-224°C. Spectre I.R. ^ol : 3400, 3320, 3180, 1680, 1620, 1230, LllclX « * 1210, 1170, 1070 cm"1 15 Spectre U.Y. max. : 263 mp. (dans l'eau) Spectre R.M.U. : (D20, ÏTaOD) T= 1,89 (s, 1H), 1,95(s, 1H), 5,70(4, 2H), 5,15(m, 2H), 8,40(s, 2H), 5,15(m, 2H), 8,40(s, 3H), 8,65(s, 3H). On chauffe 100 mg des cristaux avec 1 ml d'acide chlorhy-20 drique à 10 à 60-70°C pendant 30 minutes. On ajuste le pH du mélange à 3,5 avec de l'hydroxyde de sodium à 10 et on recueille par filtration les cristaux formés. On dissout les cristaux dans une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et on ajoute une quantité suffisante d'éthanol à la solution pour sé-25 parer par cristallisation le semihydrate de 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrate de sodium. Point de fusion (décomposition) . 263-265°C. Rendement : 89 mg. "FiTFTMPTÏR 4 30 On met en suspension 2,2 g d'adénine dans 65 ml de dimé- thylformamide et on ajoute à la suspension 375 mg d'hydrure de sodium. Après agitation de la suspension à 60°C pendant 45 minutes, on ajoute à la suspension 2,16 g de 2,3-0-éthylidène-D-érythronolactone. On chauffe le mélange au reflux pendant 8 heu-35 res dans une atmosphère d'azote. On filtre-ensuite le mélange réactionnel et on chasse le diméthylformamide par évaporation du filtrat sous pression réduite. On ajoute une petite quantité 70 12766 -14- 2042314 â'eau au résidu et on laisse le mélange au repos pendant une nuit dans une glacière. Ensuite,'on filtre le mélange et on fait passer le filtrat à travers une colonne de "Dowex" 50W. La colonne est éluée avec une solution aqueuse d1hydroxyde 5 d'ammonium et le solvant est chassé par évaporation de l'éluat sous pression réduite, en donnant l'acide 4-(9-adényl)-D-éry-thro-2,3-éthylidène-dioxy-butyrique "brut. Le produit est dissous dans 15 ml d'eau et un tiers du volume de la solution est purifié par chromatographie préparative en couche mince sur gel de silice 10 (solvant, acide acétique : butanol s eau = 1:4:5) en donnant dee prismes incolores se décomposant à 241-243°C ; rendement î 200 wg. Les cristaux sont chauffés avec 5 ml d'acide sulfurique à 20 au bain-marie, neutralisés avec une solution aqueuse d'hydro-xyde d'ammonium et concentrés sous pression réduite. On laissa 1® 15 concentré au repos au bain de glace, en sorte qu'on obtient die cristaux d'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyriqua. Point de fusion : 252-254°C (décomposition). Une autre cristallisation dans l'eau donne l'échantillon purifié qui se décompose à 261-263°C. 20 La fraction restante de la solution aqueuse d'acide 4- (9-adényl)-D-érythro-2,3-éthylidène-dioxy-butyrique brut est ajoutée à 20 ml d'acide sulfurique à 20 $ et on fait bouillir la mélange pendant 2 heures. Le mélange est neutralisé avec une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium et on le fait paaser à tra-25 vers une colonne de "Dowex" 50W. La colonne est éluée avec une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium et l'éluat est concentré sous pression réduite. On ajoute au résidu une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, jusqu'à ce que l'effervescence ait cessé. Ensuite, on décolore le mélange, on le filtre et on concentre l'a 30 filtrat. On ajoute la quantité correcte d'éthanol au concentré • encore chaud. Après refroidissement, on sèche à l'air les cristaux obtenus et on obtient 650 mg de 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrate de sodium à 2,5 molécules d'eau, sous la foraa de lamelles incolores. Après déshydratation sous pression réduite 35 à_environ 45°C, les cristaux sont identifiés au semihydrate du sel de sodium de la lentinacine. 70 12766 -15- 2042314 •ETBTVrPT.-R 5 393 mg d'hydrure de sodium huileux (64 $) et 1,48 g d'adénine .sont mis en suspension dans 45 ml de diméthylformamide et la suspension est agitée à 45-60°C 5 pendant 1 heure. On ajoute au mélange 2,06 g de 2,3-O-benzyli-dène-D-érythronolactone dans une atmosphère d'azote à 140-150°C pendant 12 heures. On chasse le diméthylformamide du mélange par évaporation et on dissout le résidu dans 10 ml d'eau. On laisse la solution reposer pendant une nuit dans un réfrigérateur, et 10 on la filtre. On concentre le filtrat à sec sous pression réduite et on ajuste le pH du résidu à 4, avec de l'acide formique 0,5 N. On isole le précipité par filtration et on lyophilise le filtrat, en sorte qu'on obtient 3,0 g d'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-benzylidène-dioxy-butyrique brut. Le produit brut est purifié, 15 jusqu'à la température de décomposition des cristaux de 191-193°C, par chromatographie sur poudre de cellulose;, suivie d'une recristallisation dans de l'éthanol aqueux. On chauffe 2 g du produit brut mentionné ci-dessus avec 1.0 ml d'acide chlorhydrique à 5 à 50°C pendant 1 heure, et on extrait le mélange avec de l'acétate 20 d'éthyle pour éliminer le benzaldéhyde. Ensuite, on fait passer le mélange sur une colonne d|,,Amberlite"lB.-120 et on élue la colonne avec une solution aqueuse d'hydroxyde d'ammonium. On concentre l'éluat sous pression réduite et on ajuste à 4 le pH du résidu avec de l'acide formique. On laisse le mélange reposer pendant 25 une nuit et'on obtient ainsi 0,8 g d'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique sous la forme de cristaux bruts. Les cristaux sont purifiés comme décrit dans l'exemple 4, en donnant 480 mg de 'cristaux, du sel de sodium semihydraté se décomposant à 244-246°C. Après une autre purification, comme décrit dans 30 l'exemple 1, on obtient des cristaux se décomposant à 266-268°C. ' EXEMPLE 6 (i) On agite par secousses, pendant 11 heures à la température ambiante, un mélange de 2,88 g de 4-ohloro-5-n.itro-6-amino-pyri-midine, 1,49 g d'acide 4-amino-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique, 35 3,6 g de bicarbonate de sodium, 80 ml d'eau et 40 ml de tétrahydro-furanne. Ensuite, on ajoute 100 ml d'eau au mélange et on extrait 70 12766 -16- 2042314 ce dernier avec du chloroforme pour éliminer la 4-chloro-5-nitro-6-amino-pyrimidine restante. On ajuste à 3,5-4,0 le pH de la phase aqueuse avec de l'acide chlorhydrique à 10 $ et on recueille par filtration^les cristaux précipités. On sèche 5 ces cristaux et on obtient 2,58 g d'acide 4-[(6-amino-5-nitro-4-pyrimidyl)-amino]-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique , sous la forme d'une poudre légèrement jaunâtre, se décomposant à 215-218°C. Une autre cristallisation dans l'eau donne' des prismes légèrement jaunâtres, se.décomposant à 220-223°C. 10 Spectre I.R. ^ol : 3420, 3250, 3130, 2300, 1680 (4?.), ulaX • j 1600, 1520, 1235, 1146, 1080 cm Spectre U.Y. max., état neutre et état alcalin : 346 mu état acide : 342, 296, 242 mjj, Pouvoir rotatoire relatif : 15 [a]jp = +67° (C = 1, HC1 1N) [ct]^3 = +32° (C = 1, NaOH 1ff) Analyse : C, fo H, % N, $ 20 Calculé pour CgH^OglT^ ; 35,17 4,06 25,64 Trouvé : 34,84 4,18 26,02 (Iï-i) On agite par secousses pendant 45 minutes sous pression d'hydrogène (pression initiale de 2,1' bars) un mélange de 500 mg d'acide 4-[(6-amino-5-nitro-4-pyridyl)~amino]-D-érythro-2,3-di-25 hydroxy-butyrique, 200 ml d'eau et 200 mg de palladium à 10 % fixé sur du charbon. Ensuite, on isole le catalyseur par filtration et on concentre les filtrats à sec sous pression réduite, au bain-marie, dont la température est maintenue à 60°C ou à u&e température légèrement inférieure à 60°C. On obtient ainsi quart-30 titativement l'acide 4-[(5,6-diamino~4-pyrimidyl)-amino]-D-éry» thro-2,3-dihydroxy-butyrique, sous la forme d'aiguilles légèrement brunâtres. Après recristallisation dans l'eau, les cristaux se décomposent à 230~235°C Spectre I.R. ^ol : 3300, 2320, 2000-1800, 1675, 1600, max, 35 1560, 1500, 1130, 1040, 940 cm"1 BAD ORIGINAL 70 12766 -17- 2042314 Spectre XI.V. max. : 281,5 mp. (pH 6,42), 280 m(j. (pH 12,25), 289 mti (pH 1,31) Analyse : C, £ H, $ F, # Calculé pour CgH^N^ : 39,50 5,39 28,80 5 Trouvé : 39,17 5,56 28,53 les aiguilles légèrement brunâtres obtenues comme ci-dessus sont dissoutes dans un mélange de 30 ml de diméthylformamide et 7 ml de sulfure de carbone, et 1© mélange est chauffé à 80°C pendant 5 heures. Ensuite, le mélange réactionnel est 10 concentré sous pression réduite et le résidu est transformé en poudre dans l'éther, en sorte qu'on obtient 4.10 mg d'acide 4-(8-mercapto-9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique, sous la forme d'une poudre brune. La poudre est dissoute dans 25 ml d'eau et décolorée. Le pH de la solution est ajusté à 7,0 avec 15 une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium et on ajoute 2 ml de nickel de Raney W-7. Le mélange est chauffé au reflux pendant 2 heures, refroidi, filtré, puis le filtrat est concentré sous pression réduite pour donner 135 mg de cristaux d'un blanc légèrement jaunâtre. Les cristaux sont recristallisés dans l'eau et 20 les cristaux obtenus sont déshydratés sous pression réduite à environ 45°C, en donnant des lamelles incolores de semihydrate de 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrate de sodium, se décomposant à 255-258°C. Une autre cristallisation dans de l'éthanol aqueux à 70 $ donne l'échantillon purifié se décomposant 25 à 266-268°C. Les spectres infra-rouge et ultra-violet des cristaux sont identiques à ceux du produit de l'exemple 1. (Il-ii) On dissout 273 mg d'acide 4-[(6-amino-5-nitro-4-pyri-dyl)-amino]-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique dans un mélange de 20 ml d'acide chlorhydrique à 1 $ et 20 ml de méthanol. On ajoute 30 à la solution 270 mg de palladium à 10 $ fixé sur du carbone et on agite le mélange par secousses pendant 2 heures sous pression d'hydrogène (pression initiale de 2,45 bars). Ensuite, on isole le catalyseur par filtration et on concentre le filtrat sous pression réduite, en chauffant à une température n'excédant pas 35 60°C. On ajoute 4 ml d'acide formique à l'acide 4-[(5,6-diamino-4-pyrimidyl)-amino]-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique obtenu, et on chauffe le mélange à environ 60°C, jusqu'à ce qu'une solution 70 12766 -18- 2042314 s© soit formée. On concentre la solution sous pression réduite et on ajoute au résidu 4 ml de formamide. On chauffe le mélange à 120°C pendant 1 heure et à 160°C pendant 30 minutes, successivement. Après refroidissement, on verse le mélange dans 30 ml 5 d'eau et on le filtre. On fait passer le filtrat à travers une colonne d'"Amberlite" IH.-120 (forme H+) et on élue la colonne avec une solution.aqueuse à 5 % d'hydroxyde d'ammonium. La solution ammoniacale est concentrée et le résidu est recristallisé dans l'eau, en donnant 70 mg d'une substance solide légèrement jau~ 10 nôtre, se décomposant à 270-280°C. La substance est recristallisée dans l'eau, en donnant 31 mg d'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique purifié, se décomposant à 261-263°C, qui est identique à la lentinacine naturelle. On dissout 15 mg du produit dans un millilitre de solution 15 aqueuse contenant 7,5 mg de bicarbonate de sodium et on concentre la solution à sec sous pression réduite. On recristalliae le résidu dans de l'éthanol aqueux à 80 # et on sèche lea cristaux obtenus sous pression réduite, à environ 45°C, en sorte qu'on obtient quantitativement de fines lamelles incolores dc BMi» 20 hydrate de 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-dihydroxy-butyrate de sodium, se décomposant à 241-243°C. Une autre cristallisation dans de, l'éthanol à 70 % donne un échantillon purifié se décomposant entre 266 et 268°C, qui est identique au produit de l'exemple 1, comme le montre une comparaison des spectres infra-rouge et ultra» 25 violet et une chromatographie en couche mince. EXEMPLE 7 (I) On dissout 2,0 g de 6-amino-5-nitro-4-chloro-pyrimidine dans 50 ml d'acétone et on ajoute goutte à goutte à la solution 15 ml.d'une solution aqueuse contenant 1,6 g d'acide 4-amino- ' 30 DL-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique, 0,66 g d'hydroxyde de potassium et 1,0 g de carbonate de potassium. On agite le mélange à 40-45°C pendant 3 heures. Ensuite, on chasse l'acétone du mélange par évaporation et on filtre le mélange. On acidifie le filtrat avec de l'acide formique et on recueille par filtration 35 les cristaux formés, en sorte qu'on obtient 1,86 g d'acide 4-[(6-amino-5-nitro-4-pyrimidyl)-amino]-DL-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique, se décomposant à 195-197°C. 70 12766 -19- 2042314 Spectre I .R. : 3400, 3280, 3100, 1650, 1610, 1520, max • j 1460, 1380, 1230 cm Spectre U.7. max. : 346 mp dans l'eau 342 mp en milieu ïï+ 5- 346 mp en milieu 0H~ (II) On dissout 1,8 g d'acide 4-[(6-amino-5-n.itro-4-pyrimidyl)-amino]-DL-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique dans 20 ml d'une solution aqueuse contenant 0,37 g d'hydroxyde de potassium. On ajoute 1 ml de nickel Raney à la solution et on agite cette dernière 10 par secousses sous pression d'hydrogène (pression initiale de 4,2 bars). Ensuite, on isole le catalyseur au nickel par filtration et on neutralise le filtrat avec de l'acide formique. On concentre le filtrat à sec sous pression réduite et on dissout la substance visqueuse restante dans l'eau. On fait passer la so-15 lut ion à travers une colonne de "Dowex" 50W (forme H4") et on élue la colonne avec une solution aqueuse d'hydroxyde d8ammonium. On concentre l'éluat à sec sous pression réduite et on obtient 700 mg d'acide 4-[( 5, 6-diamino-4-pyrimidyl)-amino]-DL-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique, sous la forme d'une poudre amorphe. On 20 ajoute 15 ml de formamide à la poudre et on chauffe le mélange au reflux modéré dans une atmosphère d'azote pendant 30 minutes. Ensuite, on chasse le formamide du mélange par évaporation sous pression réduite et on ajoute une quantité suffisante d'éthanol au résidu pour provoquer la cristallisation. On purifie les cris-25 taux par chromatographie préparative en couche mince sur gel de silice (solvant, acide acétique:n-butanol:eau = 1 suivie d'une chromatographie sur "Dowex" 50W (forme H+) et on obtient 200 mg d'acide 4-(9-adényl)-DL-érythro-2,3-dihydroxy-butyrique sous la forme de cristaux. Les cristaux sont encore purifiés par 30 recristallisation dans de l'éthanol aqueux, en donnant des cristaux purifiés se décomposant à 252-254°C. Spectre I.R. ^0l : 3250, 3180, 3100, 1680, 1610, II13X • j 1510,'1460, 1415, 1380, 1220 cm . 70 12766 -20- 2042314 - ÉEVMIOATIOUS - 1 - L'acide 4-(9~adényi)-2,3-dihydroxy-butyrique et ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique. 2 - L'acide 4-(9-adényl)-D-érythro-2,3-âihydroxy-butyri-5 que et ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique. 3 - Procédé de préparation d'acide 4-(9-adényl)-2,3-dihydroxy-butyrique et de ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique, caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir un acétal ou un cétal de 2,3-dihydroxy-érythronolactone, 10 répondant à la formule ; o o 15 20 25 R (dans laquelle ^T^C^^est le fragment résiduel de l'acétal ou du cétal), avec un sel métallique d'adénine en position 9 pour produire l'acétal ou le cétal correspondant d'acide 4-(9-adényl)» 2,3-dihydroxy-butyrique répondant à la formule : HH2 frs CH.- CH - CH -COOH 2 i î R R' ■p (dans laquelle ^T^Ct^a la même définition que ci-dessus), puis à hydrolyser ce composé. 30 4 - Procédé de préparation d!acide 4-(9-adényl)-2,3-di hydroxy-butyrique et de ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique, caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir une 4-hal0gén0"5~nitr0-6~amin0™pyrivri1cWavee l'acide 4-amino-2,3-dihydroxy-butyrique pour former l'aeide 4"[(6-amino-35 5-nitro-4™'Pyriffiidyl)-amino]-2,3~"di.hydroxy-butyrique, à réduire le composé en acide 4-[(5,6-diamino-4- pyrimidyl)-amino]-2,3-dihydroxy-butyrique et à soumettre cet acide à la réaction ' ., ' 3AD QRIQHMÂL 70 12766 -21- 2042314 avec un dérivé de thiocarbonate pour former 18acide 4-(8— mercapto-9-adényl)-2,3-dihydroxy-butyrique, cette réaction étant suivie d'une désuifuration classique ets au besoin, de la transformation ultérieure du produit en son sel. 5 5 - Procédé de préparation dsacide 4-(9~adényl)-2,3- dihydroxy-butyrique et de ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique, caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir une 4-halogéno-5-nitro-6-amino-pyrlmifline avec l'acide 4-ami.no-2,3-dihydroxy-butyrique pour produire l'acide 4-[(6-10 amino-5-nitro-4-pyrimidyl)amino]-2,3-dihydroxy-butyrique, à réduire le composé en acide 4-[(5,6-diamino-4-pyrimidyl)-amino j-2,3-dihydroxy-butyrique, et à soumettre cet acide à la réaction avec l'acide formique ou un dérivé de cet acide, puis au besoin, à transformer le produit en son sel.