X 2015272 La présente invention a pour objet un procédé d'extraction de principes actifs d'écorces et plus particulièrement de iTaubier de diverses espèces de tilleul (tilia cordata Mil! ; T. parvifolia Ehrh = T. Sylvestris Desf„; T. Platyphylios Scop. T. argentea D.C. T. intermedia D.C.). La présente invention a également pour objet l'extrait thérapeutiquement actif ainsi obtenu. Le procédé d'extraction selon l'invention comporte un certain nombre d'étapes essentielles. 10 a) - Un épuisement préalable des écorces et plus parti culièrement de l'aubier de tilleul par un solvant non polaire tel que l'éther éthylique ou isopropylique, l'éther de pétrole pour enlever les lipides et les terpènes; b) - Une extraction à froid par un alcool tel que le 15 méthanol absolu ou l'éthanol à 96% l'extrait alcoolique recueilli étant concentré sous pression réduite jusqu'à consistance sirupeuse ; a) - Une extraction à l'éther éthylique ou isopropylique de l'extrait alcoolique concentré, repris par l'eau et acidifié 20 à pH 4-5 par un acide faible tel que l'acide acétiquej l'extrait éthéré est alors lavé à l'eau, la phase aqueuse obtenue-est neutralisée à pH 6-7 par un carbonate alcalin ou alcalino-terreux, filtré et évaporée à basse température ou nébulisée pour donner l'extrait thérapeutiquement actif. 25 EXEMPLE 1.500g d'écorces d'aubier de tilleul pulvérisées sont au préalable épuisées à l'éther éthylique pour enlever leé lipides et les terpènes. Elles sont ensuite soumises à une percolation à froid par 10 à 15 fois son poids de méthanol'absolu. L'extrait' 30 alcoolique recueilli est concentré sous pression réduite jusqu'à consistance sirupeuse. Il est ensuite repris par 1.500g d'eau avec chauffage léger. Il se forme un insoluble qui est séparé par centrifugation. Le liquide clair est acidifié à pH 4-5 par de l'acide acétique, et soumis à un épuisement continu prolongé par 35 l'éther éthylique dans un extracteur liquide-liquide. L'extrait éthéré recueilli est lavé à plusieurs reprises par de l'eau, le volume total de celle-ci étant de 1.500 ml. La solution aqueuse 69 26620 o 2015272 ainsi obtenue, amenée à pH 6-7 par carbonate de sodium et filtrée constitue la fraction active désirée. On récupère les constituants dissous dans cette fraction par évaporation à basse température. ....... c. L'étude chimique de la composition de la fraction active met en évidence la présence de substances phénoliques (coloration vert foncé avec le perchlorure de fer), de leucoan-thocyanes (coloration rouge par chauffage dans le propanol chlorhydrique) et surtout de coumarines qui lui confèrent une 10 forte fluorescence bleu-vert. Cette fluorescence* caractéristique également du nébulisat et de l'extrait méthanolique, n'est pas retrouvée avec la solution éthérée provenant de l'épuisement préliminaire des écorces. L'analyse des extraits par chromâtographie sur couche i5 mince de cellulose (cellulose microcristalline Merck; solvant : butanol - acide- acétique - eau, 4-1-5) ou.de polyamide (polyamide Woelm - solvant - eau - éthanol -méthyléthylcétone - acétyla,cétone 65-15-15-5) avec examen en lumière U.V., montre que la fraction active contient plusieurs substances fluorescentes, réparties en 20 deux groupes, l'un de Rf environ 0,5 et l'autre de Rf environ 0,8. Le premier groupe correspond à 3 taches, dont l'une majoritaire, bleu-vert, a : e même Rf que le fraxoside déjà signalé dans les écorces des tilleuls (R. PARIS, J.P. THEALLET, Ann. Pharm. Fr. 1961, !£, 580 s J. SUSPLUGAS, M. LALAURIE, G. PRIVAT, J. TARB0URIECH, 25 Trav. Soc. Pharm. Montpellier, i960, 20, 104 et 107) et une autre, bleu-violet, de même Rf que l'esculoside. Le second groupe est représenté par plusieurs produits en faible proportion. L'extrait éthéré des écorces montre seulement une tache diffuse jaune (flavonolde). 30 Quant à l'extrait méthanolique total et au nébulisai,, ils donnent dans les conditions indiquées un chromatogramme voisin de celui de la fraction active séparée, mais avec davantage de produits du groupe de Rf environ 0,8. Le produit actif ainsi obtenu par le procédé décrit -je ci-dessus que l'on appellera extrait LL-658 contient essentiellement du fraxetine-8 glucoside (ou 7,8-dihydroxy-6-raéthoxycou-marine 8-B-D-glucoside), de l'esculoside (ou 6,7-dihydrocoumarine-6-glucoside), des acides organiques et des traces de produits encore non identifiés. 69 2662G 3 2015272 10 L'extrait LL-658 s'est avéré très actif sur l'animal comme antispasmodique. Il est dépourvu de toxicité; il faut dépasser une dose équivalente à 50g d'écorces d'aubier de tilleul pour provoquer la mort de la souris après administration per os. La dose d'extrait LL-658 équivalente à 2. à 5g d'écorces par kg provoque une activité antispasmodique nette sur l'iléon de cobaye in situ (par voie intraveineuse et par voie intraduodénale). Chez le chien, l'extrait LL-658 administré à la dose équivalente à 2g d'aubier par kg a diminué l'amplitude et la fréquence du péristaltisme intestinal immédiatement après l'administration et pendant 20 mn environ. On observe en même temps un relâchement du sphincter d'Oddi, qui se manifeste par une diminution de 50$ de la pression de forçage de ce sphincter, et une absence de modification de la pression artérielle, de la fréquence cardiaque et de la respiration. On a retrouvé une action antispasmodique chez le chien in vivo anesthésié au pentobarbital (30mg/kg I»V„)ayant reçu de la morphine (0,5 mg/kg I.V.) et de la néostymine (20 mg/kg/h) afin d'augmenter le péristaltisme intestinal et de contracter le sphincter d'Oddi. Enfin l'extrait LL-658 a été étudié chez l'homme soit sous forme de cachet, ayant la formule suivante: Extrait LL-658 50 mg Lactose 150 mg pour un cachet, soit sous forme de comprimés ayant la formule suivante: Extrait LL-658 0,100g Carbonate monosodique 0,ll4g 50 Glucose 0,007g Stéarate de magnésium 0,002g Talc 0,002g Acide alginique Ç,00j5g Chez dix malades soumis au test cholérétique-morphine 35 20 25 69 26620 4 2015272 REVENDICATIONS 1 - Procédé d'extraction de principes actifs d'écorces et plus particulièrement de l'aubier de diverses espèces de c. tilleul (tilia cordata Mill : T. parvifolia Ehrh = T. Sylvestris Desf.; T. Platyphylios Seop, T„ argentea D,C= j Tôntermedia D.C.), caractérisé en ce qu'il comporte un certain nombre d'étapes essentielles : a) Un épuisement préalable des écorces et plus particu- 10 lièrement de l'aubier de tilleul par un solvant non polaire tel que l'éther éthylique, l'éther isopropylique, l'éther de pétrole, pour éliminer les lipides et les terpènesj b) Une extraction à froid par un alcanol inférieur tel que le méthanol absolu ou l'éthanol à S6%s l'extrait alcoolique 15 recueilli étant concentré sous pression réduite jusqu'à consistance sirupeuéej c) Une extraction à l'éther éthylique ou isopropylique de l'extrait alcoolique concentré, préalablement repris par l'eau et acidifié à pH 4-5 par un acide faible tel que l'acide acétique, 20 l'extrait éthéré obtenu étant alors lavé à l'eau, la phase aqueuse décantée étant neutralisée à pH 6 - 7 Par un carbonate alcalin ou alcalinc-terreux, puis filtrée et évaporée à basse température ou nébulisée pour donner l'extrait thérapeutiquement actif. 25 2 - Extrait thérapeutiquement actif d'écorces ou d'aubier de tilleul obtenu par le procédé selon 1„ 3 - Composition thérapeutique, utile notamment comme antispasmodique, contenant l'extrait d'écorces ou d'aubier de tilleul selon la revendication 2, associé à un excipient non 30 toxique, pharmaceutiquement acceptable, une telle composition étant présentée de préférence sous forme de cachets ou de comprimés dosés à 50-100mg par cachet ou comprimé.