La présente invention concerne une nouvelle substance antibiotique utile notamment comme médicament et un pro- cédé de sa préparation utilisant-une nouvelle souche de micro- organisme. Plus particulièrement, l'invention concerne une nouvelle substance antibiotique appelée EM 4940 qui est active contre une gamme de bactéries gram positif et gram négatif, de levures, de champignons, d'acholéplasmes et contre le protozoaire Trichomonas vaginalis. On produit cette nouvelle substance antibiotique EM 4940 par culture d'une souche du micro-organisme Nocardia sp. 11 340 qui a été déposée à l'American Type Culture Collection sous la référence ATCC n 31531. La structure chimique de l'EM 4940, qui est l'an- tibiotique de l'invention, a été déterminée par radio-cristallogra- phie et elle est la suivante: OH H2N-C. N 2, CH3 OH ce composé est donc le dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2. L'EM 4940 est un mélange de deux antibiotiques, l'isomère trans-2,4 et l'isomère cis-2,4, que l'on a respectivement appelés EM 4940A et EM 4940B. D'autres caractéristiques et avantages de l'in- vention seront mieux compris à la lecture de la description qui va suivre de plusieurs exemples de réalisation et en se référant aux dessins annexés sur lesquels: - la figure 1 illustre le spectre d'absorption ultraviolette de l'EM 4940A et de 'EM 4940B dans le méthanol, l'absorbance étant représentée en ordonnées et la longueur d'onde (nm) en abscisses; la figure 2 illustre le spectre infrarouge de l'EM 4940A et de l'EM 4940B dans le bromure de potassium, l'absorbance étant représentée en ordonnées et le nombre d'onde (cm-, étant représenté sur l'échelle inférieure des abscisses et la longueur d'onde (pm) sur l'échelle supérieure; - la figure 3 illustre le spectre de résonance magnétique nucléaire de 'EM 4940A dans du deutérochloroforme conte- nant deux gouttes de deutérométhanol, la fréquence (Hz) étant représentée sur l'échelle supérieure des abscisses et le paramètre S (pm) étant représenté sur l'échelle inférieure des abscisses; - la figure 4 illustre le spectre de résonance magnétique nucléaire de 'EM 4940B dans du deutérochloroforme conte- nant deux gouttes de deutérométhanol, avec les mêmes échelles que la figure 3. Le micro-organisme Le micro-organisme que l'on utilise pour produire EM 4940 est une souche de Nocardia sp. SC 11 340. On peut obtenir une culture secondaire de ce micro-organisme en s'adressant à la collection permanente de l'American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. Son numéro d'immatriculation dans cette souchothèque est ATCC n 31531. En plus du micro-organisme particulier décrit et caractérisé ici, il est évident que l'on peut également cultiver des mutants de ce micro- organisme (par exemple des mutants produits par emploi des rayons X, des rayons ultraviolets ou de-moutardes à l'azote) pour produire i'EM 4940. On peut isoler Nocardia sp. 11 340 ATCC n 31531, d'un échantillon de sol humide le contenant en appliquant tout d'abord l'échantillon de sol à un milieu ayant la composition suivante KNO3 1 g K2HP 4 0,5 g MgS0437H20 0,5 g NaCl 0,5 g FeSO4,7H20 0,01 g Glucose 5 g Gélose 20 g Eau distillée 1 litre. On stérilise au préalable le milieu dans un auto- clave à 121 C pendant 20 minutes. Après 14 jours d'incubation à 28 C, on isole les colonies de Nocardia sp. SC 11 340 de la culture. On cultive ces colonies isolées sur un milieu ayant la composition suivante extrait de levure 1 g extrait de boeuf 1 g NZ Amine A 2 g (hydrolysat de caséine) glucose 10 g gélose 15 g eau distillée 1 litre On ajuste le pH du milieu à 7,3 et on autoclave à 121 C pendant 30 minutes. Nocardia sp. SC 11 340 produit un mycélium végé- tatif qui se fragmente en forme en bâtonnets et en cocci en 5 jours. Les cellules ne sont pas acido-résistantes et sont gram positif. Les colonies qui se développent sur un milieu solide ont une consistance lisse à pateuse et une couleur blanc grisâtre. Sur gélose à l'asparagine et au glycérol, elles ne pré- sentent pas de caractéristiques distinctives; sur gélose à la farine d'avoine et à la purée de tomate, il se forme un pigment pourpre solide qui pénètre dans le milieu solide. Il ne se forme pas de mycélium aérien. Les hydrolysats acides de parois cellulaires entières analysés selon la méthode de Becker et coll., Applied Micro- biology, 12: 421 (1964), indiquent la présence d'acide mésodiamino- pimélique, de galactose et d'arabinose comme composants glucidiques principaux. Une certaine quantité de ribose est présente mais pas de madurose. Cette analyse des parois cellulaires correspond au Type IV A (Lechevalier et coll. dans The Actinomycetales, H. Pransen (Ed.), VEB Guster Fisher Verlag pp 398-400, 402 (1970)) et établit le diagnostic du genre Nocardia. Pour déterminer s'il s e forme des produits acides à partir de divers hydrates de carbone en présence de Nocardia sp. SC 11 340, on cultive ce micro-organisme pendant 10 jours sur le milieu de base de Ayers, Rupp et Johnson, Bull. U.S. Dept. Agri., n 782 (1919), en présence des hydrates de carbone suivants et on obtient les résultats indiqués: Milieu de base Adonitol - Arabinose + Cellobiose - Erythritol - Glucose + Mélézitose - Mélibose - Raffinose - Rhamnose - Tréhalose - (témoin) - Glycérol + Inositol + Lactose - Maltose + Mannitol + Mannose - Xylose - Fructose + Sa ccharose Sorbitol - Légende: +: formation d'acide -: pas de formation d'acide Nocardia sp. SC 11 340 décompose la caséine et l'hypoxanthine mais non la tyrosine, la xanthine et la guanine. On observe une hydrolyse de la gélatine mais non de l'amidon. L'antibiotique L'antibiotique EM 4940 qui est l'antibiotique de l'invention peut être obtenu par culture de Nocardia sp. SC 11 340 ATCC n0 31531 à une température d'environ 280C en conditions aérobies submergées dans un milieu de culture aqueux contenant un hydrate de carbone assimilable et une source d'azote. On effectue la fermenta- tion jusqu'à ce. que le milieu ait une activité antibiotique importante ce qui correspond généralement à une durée de 120 à 144 heures et de préférence d'environ 144 heures. On peut séparer l'EM 4940 du milieu de fermen- tation et le purifier selon des techniques connues dans l'art. Par exemple on peut centrifuger le bouillon pour séparer le mycélium puis concentrer sous pression réduite. Sinon on peut filtrer pour éliminer le mycélium du bouillon. On peut précipiter la matière non active du concentré par emploi par exemple de méthanol puis la rejeter. L'extraction du concentré par l'acétate d'éthyle enlève la majeure partie de l'activité. On peut concentrer l'extrait, l'appliquer à une colonne de chromatographie, par exemple une colonne constituée d'acide silicique et de cellulose, et éluer l'antibiotique EM 4940 par le chloroforme. On peut cristalliser V'EM 4940 dans l'acétoni- trile. Les cristaux sont sous deux formes (A) des petites tables et (B) des aiguilles. L'activité biologique de la forme A est supérieure à celle de la forme B. Les deux formes sont des diastéréoisomères et on ne peut généralement pas les différencier par le spectre ultra- violet, le spectre infrarouge et le spectre de masse ni par l'analyse élémentaire. La résonance magnétique nucléaire protonique permet de différencier les deux isomères, la forme A ayant un pic C-CH3 à 1,75 ppm tandis que la forme B a un pic C-CH3 à 1,65 ppm. Un mélange des formes A et B présente deux pics et l'intégration de ces pics permet d'évaluer le pourcentage de chacune des formes dans l'échantil- lon. On peut pour séparer les deux formes, effectuer une cristallisa- tion fractionnée dans l'acétonitrile. L'EM 4940 (dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2Hpyrrolecarboxamide-2) a deux atomes de carbone asymétriques, l'atome portant la fonction carboxamide et l'atome portant les radicaux méthyle et hydroxy. Par conséquent, le dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H11-pyrrole- carboxamide-2 existe sous deux formes diastéroisomères ou sous forme de leur mélange racémique. Toutes ces formes rentrent dans le cadre de l'invention. La détection de 1'EM 4940 repose sur un essai biologique de diffusion qui utilise le milieu suivant. Seed Agar BBL 30,5 g NaCl 5 g eau distillée 1 litre On stérilise le milieu à 121 C pendant 20 minutes. On ensemence des boites de gélose contenant des concentrations non inhibitrices de diumycine avec E. coli SC 10 888. Dans ces conditions EM 4940 inhibe E. coli SC 10 888. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs suivants. Exemple 1 On prépare un lot de fermentation de 250 1 de Nocardia sp. SC 11 340 ATCC n 31531 dans un récipient en acier inoxydable de 400 1 par emploi des milieux et des conditions opéra- toires décrits ci-après. Stade 1 On entretien Nocardia sp. SC 11 340 sur le milieu gélosé (A) stérilisé suivant: farine d'avoine 20 g purée de tomate 20 g gélose 15 g eau du robinet qsp 1 litre On ajuste le pH du milieu à 7,0 et on stérilise à 121 C pendant 15 minutes. On met en suspension une anse de culture en surface sur gélose inclinée (milieu (A)) de Nocardia sp. SC 11 340 ATCC n 31531 dans 11 ml de solution à 0,01 % de dupanol et on l'uti- lise comme source d'inoculum pour ensemencer le milieu (B) stérilisé suivant. extrait de levure 4 g extrait de malt 10 g glucose 4 g dau distillée qsp 1 litre On ajuste le pHli du milieu à 7,3 et on stérilise à 121 C pendant 15 minutes. On incube pendant 72 heures 1 500 ml de ce milieu dans un ballon de 4 litres sur un agitateur rotatif à 28 C (300 tr/min, course 5 cm). Stade 2 Inoculum: 1,5 litre du stade 1. On ajuste à 7,3 le pH de 28,5 litres du milieu B précédemment décrit et on stérilise à 121 C pendant 15 minutes. On ajoute au milieu stérilisé, 1, 5 litre d'inoculum obtenu dans le stade 1 et on incube les 30 litres pendant 72 heures. Pendant l'incu- bation on aère le bouillon à raison de 65 1/min en agitant à 220 tr/min. Stade 3 Inoculum: 12,5 litres du stade 2. Comme décrit dans le stade 2, on prépare 237,5 1 du milieu B précédemment décrit et on les combine à 12,5 litres d'inoculum du stade 2. On incube les 250 litres de matière pendant 144 heures. Pendant l'incubation, on agite le bouillon à 155 tr/min et on l'aère à raison de 283 1/min. Apres élimination du mycélium par centrifugation, on obtient 185 litres de bouillon. On concentre le bouillon limpide sous pression réduite à une température égale ou inférieure à 45 C pour obtenir environ 3,25 litres. On verse lentement le concentré dans 25 litres de méthanol en agitant pendant 30 minutes, on centri- fuge le mélange et on rejette le précipité inactif. On concentre le surnageant sous pression réduite à une température égale ou infé- rieure à 450C pour obtenir environ 1,8 litre, la majeure partie du méthanol étant alors éliminée. On extrait ensuite le concentré 4 fois avec 0,5 volume d'acétate d'éthyle. On combine les extraits dans l'acétate d'éthyle et on concentre sous pression réduite à une température égale ou inférieure à 450C pour obtenir environ 100 ml contenant plus de 90 % de l'activité. On charge le concentré d'acé- tate d'éthyle sur une colonne (43 x 70 cm) garnie d'un mélange acide silicique/cellulose (2/1 en poids), le garnissage ayant été effectué avec du chloroforme. On élue la colonne avec du chloroforme. On recueille environ 3 litres de matière active que l'on concentre à sec pour obtenir Il à 12 g de matière. On cristallise cette matière dans l'acétonitrile pour obtenir 4,1 g d'EM 4940 cristallin. Les cristaux d'EM 4940 sont sous deux formes (A) des petites tables et (B) des aiguilles. L'activité biologique de la forme A est supérieure à celle de la forme B. Les deux formes sont des diastéroisomères et on ne peut pas les différencier par le spectre ultraviolet, le spectre infrarouge, le spectre de masse ou l'analyse élémentaire. La résonance magnétique protonique permet de différen- cier les deux isomères, la forme A ayant un pic C-CH3 à 1,75 ppm tandis que la forme B a un pic C-CH3 à 1,65 ppm. Un mélange des e Lormes A et B présente deux pics et l'intégration.des pics permet d'évaluer le pourcentage de chaque constituant de l'échantillon. Les 4,1 g d'EM 4940 obtenus ci-dessus contiennent 80 % de forme A et 20 % de forme B. Pour séparer les deux formes on dissout l'échan- tillon dans l'acétonitrile. La forme B est plus soluble et la forme A précipite donc en premier; on isole de l'échantillon 1,8 g de forme A pure à 97 %. On a déterminé que la forme A de l'EM 4940 (petites tables) était un isomère de type trans-2,4 dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2 qui a les caractéristiques suivantes: 1) point de fusion: 165-168 C 2) soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, l'acétone et le chloroforme. Insoluble dans l'hexane et 1 'eau. gure 1) 3) spectre ultraviolet (comme illustré par la fi- Xmax - 206 nm (E1 -480) 1 cm Xmax - 315 nm (E1 cm 220) 4) spectre infrarouge (comme illustré par la figure 2) 5) spectre de résonance magnétique nucléaire (comme illustré par la figure 3) 6) spectrométrie de masse: ion moléculaire =-235 formule brute = Cll H13N303 7) analyse élémentaire Eléments Trouvée Théorique pour Cll H13N303 C 56,14 % 56,22 % H 5,44 % 5,58 % N 17,66 % 17,88 % cendres O0 8)pouvoir rotatoire aD = + 20 dans le méthanol. On a déterminé que la forme B de I'EM 4940 (aiguilles) était un isomère de type cis-2,4 dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2 ayant les caractéris- tiques suivantes: 1) point de fusion: 200-201 C 2) spectre infrarouge (comme illustré par la figure 2) 3) spectre de résonance magnétique nucléaire (comme illustré par la figure 4) 4) spectrométrie de masse: ion moléculaire = 235 formule brute CllH 13N303 ) analyse élémentaire Eléments Trouvée Théorique pour CllH 3N303 Il 13 3 3 C 56,38 % 56,22 % H 5,60 % 5,58 % N 17,78 % 17,88 % cendres O Exemple 2 On entretient Nocardia sp. SC 11 340 ATCC n0 31531 sur le milieu gélose (A) stérilisé suivant farine d'avoine 20 g purée de tomate 20 g géloseg eau du robinet qsp 1 litre On ajuste le pH du milieu à 7,0 et on autoclave à 1210C pendant 15 minutes. On utilise une anse de culture superficielle sur gélose inclinée (milieu A) de Nocardia sp. SC 11 340 ATCC n0 31531 pour ensemencer chacun de six erlenmeyers de 500 ml contenant 100 ml du milieu (B) stérilisé suivant extrait de levure 4 g extrait de malt 10 g glucose 4 g eau distillé qsp 1 1 On ajuste le pH du milieu à 7,3 avant de stériliser à 121'C pendant 15 minutes. On incube ensuite les erlenmeyers à 280C sur un agitateur rotatif (300 tr/min; course 5 cm) pendant environ 72 heures. Après cette incubation, on ensemence avec la culture à raison de 5 % en volume 100 erlenmeyers de 500 ml contenant chacun ml de milieu (B) stérilisé comme précédemment décrit. Après ensemencement, on incube les erlenmeyers à 280C sur un agitateur rotatif (300 tr/min course 5 cm) pendant environ -144 heures. On regroupe alors le contenu des erlenmeyers et on centrifuge le bouillon pour obtenir environ 9 litres de surnageant. On extrait l'antibiotique selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1. En plus des milieux de fermentation utilisés dans les exemples ci-dessus, on peut citer les milieux suivants comme exemples d'autres milieux utiles pour la production de lEM 4940 et qui peuvent remplacer le milieu B dans les exemples ci-dessus. Milieu C Grammes extrait de levure 4 extrait de malt 10 glucose 25 eau distillée qsp 1 litre On ajuste le pH à 7,3 avant de stériliser à 121 C pendant 15 minutes. Milieu D Grammes glycérol 30 Pharmamedia 20 extrait de levure 20 glucose 20 eau distillée qsp 1 litre On ajuste le pH à 7,3 avant de stériliser à 121 C pendant 15 minutes. Milieu E Grammess extrait de levure 4 extrait de malt 10 glucose 10 glycérol 2 eau distillée 1 litre On ajuste le pH à 7,3 avant de stériliser à 121 C pendant 15 minutes. Milieu F Grammes glycérol 10 L-asparagine 5 KH2P04 1 Na2HP04 2 glucose 50 Mg S04, 7H20 0,2 eau du robinet qsp 1 litre On ajuste le pH à 7,3 avant de stériliser à 121 C pendant 15 minutes. Milieu G Grammes (NH4)2 SO4 2 42 4 L-asparagine 5 glucose 50 glycérol 10 KH2PO4 7 K2HPO4 7 Mg S04, 7H20 0,2 eau distillée qsp 1 litre On ajuste le pH à 7,3 avant de stériliser à 121 C pendant 15 minutes. Essais biologiques A) Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) de V'EM 4940A et de 1'EM 4940B vis-à-vis de microorganismes selon un essai en aérobiose. 1. Emploi de la gélose BA-2 On prépare l'antibiotique dans du tampon phosphate 0,1 M a pH 7,0 à la concentration de 1 000 pg/ml. On prépare des dilutions de raison 2 dans du bouillon de Mueller Hinton pour obtenir une gamme allant de 1 000 "g/ml à 0,5 yg/ml. On introduit 1 ml de chaque dilution dans des boites de Pétri de 100 x 15 mm auxquelles on ajoute 9,0 ml de gélose BA-2. La concentration finale de l'anti- biotique dans la gélose est comprise entre 100 pg/ml et 0,05 ug/ml. On cultive tous les micro-organismes dans environ à 20 ml de bouillon pour essai des antibiotiques (AA) (Bacto antibiotic medium n 3 de Difco) en ensemençant chaque bouillon avec une anse de micro-organisme cultivé sur gélose inclinée BHI. On incube les tubes ensemencés à 37 C pendant 18heures. On vérifie la pousse de chaque bouillon ensemencé par essai turbidimétrique vi- suel avec un standard McFarland n 5 et on ajuste en fonction du résultat avec du bouillon AA (un standard McFarland n0 5 équivaut à environ 1 x 109 UFC/ml; UFC = unité formant une colone). On effectue le contrôle visuel immédiatement avant l'emploi. On étudie ensuite le bouillon ajusté correspondant à chaque micro-organisme avec la quantité d'inoculum appropriée. Pour cette série d'essai, la quantité d'inoculum est de 104 UFC. On dilue le bouillon de culture au 1/100 avec du bouillon AA pour obtenir une concentration de 107 UFC/ml. On applique ensuite les microorganismes aux bottes de gélose avec un inoculateur Denley Multi Point Inoculator appli- quant 0,001 ml de culture pour obtenir des inoculums de 104 UFC. La CP est la concentration minimale de l'antibiotique qui inhibe le développement d'au moins trois colonies. ci-dessous. Les résultats de cet essai figurent dans le tableau I TABLEAU I Micro-organisme Numéro dans la de E. R. Squibb collection é Sons, Inc. Concentration minimale inhibitrice (gg /ml) EM4940 Acinetobacter calcoaceticus Enterobacter cloacae Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Klebsiella aerogenes Klebsiella pneumoniae Proteus morganii -25 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhimurium Serratia marcescens Serratia marcescens Shigella sonnei Staphylococcus aureus 9 545 9 201 9 782 1 111 ,0 ,0 ,0 , 0 8 449 ,0 >100, 0 8 333 459 ,0 > 100,0 404 857 ,0 896 ,0 436 ,0 ,0 11 066 9 774 ,0 ,0 8 754 9 330 > 100,0 ,0 2 400 TABLEAU I (suite) Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale de E. R. Squibb & Sons, Inc. inhibitrice (/ug/ml) EM4940A Staphylococcus aureus 10 165 50,0 Staphylococcus aureus 11 239 >100,0 Streptococcus faecalis 9 011 >100,0 On effectue d'autres essais selon le mode opératoire ci-dessus; les résultats de ces essais figurent dans le tableau Il ci-dessous. TABLEAU II Numéro dans la collection Concentration minimale Micro organisme de E. R. Squibb 5 Sons, Inc. inhibitrice (ug/ml) EM4940A EM4940B Staphylococcus aureus 2 400 >200 >200 Staphylococcus aureus 10 165 100 100 Staphylococcus aureus 11 239 50 100 Staphylococcus aureus 2 661 > 200 >200 Streptococcus faecalis 9 011 >200 >200 Escherichia coli 10 404 50 50 Escherichia coli 10 857 50 50 Salmonella typhimurium 9 201 50 50 Klebsiella aerogenes 10 436 50 50 TABLEAU II (suite) Micro-organisme Numéro dans la collection de E. R. Squibb ( Sons, Inc. Concentration minimale inhibitrice (pg/ml) EM4940A EM4940B K. pneumoniae 11 066 50 50 Proteus rettgeri 8 217 50 50 P. morganii 9 774 100 100 Serratia marcescens 9 782 50 50 Serratia marcescens 11 111 100 100 Pseudomonas aeruginosa 9 545 12,5 12,5 Pseudomonas aeruginosa 8 754 100 100 Pseudomonas aeruginosa 9 330 > 200 >200 Acinetobacter calcoaceticus 8 333 100 100 Enterobacter cloacae 10 459 50 100 Shigella sonnei 8 449 50 50 2. Emploi de la gélose synthétique H-59 On reprend le mode opératoire précédemment décrit, si ce n'est qu'on remplace la gélose BA-2 par la gélose H-59. Les résul- tats obtenus figurent dans le tableau III ci-dessous. TABLEAU III Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale Microorganisme de-E. R. Squibb & Sons, Inc. inhibitrice (pug/ml) EM 4940A Acinetobacter calcoaceticus Enterobacter cloacae Escherichia coli 8 333 459 ,0 ,0 404 a ,0 ' TABLEAU III (suite) Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale de E. R. Squibb.9 Sons, Inc. inhibitrice (p g/ml) EM 494QA Escherichia coli - 10 857 25,0 Klebsiella aerogenes 10 436 50,0 Klebsiella pneumoniae 11 066 50,0 Pseudomonas aeruginosa 8 754 >100,0 Pseudomonas aeruginosa 9 330 50,0 Pseudomonas aeruginosa 9 545 25,0 Salmonella typhimurium 9 201 50,0 Serratia marcescens 9 782 100,0 Serratia marcescens 11 111 100,0 Shigella sonnei 8 449 50,0 Streptococcus faecalis 9 011 >100,0 B) Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) de EM4940A vis-à-vis des micro-organismes selon un essai en anaéro- biose. On prépare l'antibiotique comme précédemment décrit pour l'essai en aérobiose. On entretient tous les micro-organismes dans des tubes de bouillon glucosé à la viande hachée fourni par Scott Laboratories de Rhode Island. Deux jours avant l'essai, on transfère 0,1 ml de la culture entretenue dans un nouveau tube de bouillon à. la viande hachée et on incube a 37 C pendant 48 h. Après 48 h d'incubation, on considère que chaque culture s'est développée a 1 x 108 UFC/ml. On applique les micro-organismes sur des boîtes de gélose contenant l'antibiotique (gélose de Mueller Hinton BBL + 5 % de sang total de mouton + 0,2 % de sang hémolysé de mouton) avec une valeur de l'inoculum de 105 UFC. Après ensemencement, on place les bottes dans une enceinte de culture anaérobie munie d'un sachet générateur de gaz (BBL) et on incube à 37 C pendant 18 h. La CMI est la concentration minimale d'antibiotique inhibant le développement d'au moins trois colonies. Les résultats de cet essai figurent dans le tableau IV ci-dessous. TABLEAU IV Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale de E. R. Squibb a Sons, Inc. inhibitrice (pg/ml) EM4940A Bacteroides fragilis 9 005 50,00 Bacteroides fragilis 9 844 12,50 Bacteroides fragilis 10 277 50,00 Bacteroides fragilis 10 278 50,00 Bacteroides - fragilis 10 279 50,00 Bacteroides fragilis 10 281 50,00 Bacteroides fragilis 11 085 100,00 Bacteroides fragilis 1il 086 50,00 Bifidobacterium dentium 11 260 >100,00 Clostridium histolyticum 8 572 12,50 Clostridium perfringens 11 256 50,00 Clostridium septicum 1 780 12,50 TABLEAU IV (suite) Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale de E. R. Squibb b Sons, Inc. inhibitrice (Pg/ml) EM4940A Clostridium sporogenes 2 372 12,50 Eubacterium lentum 11 261 12,50 Fusobacterium necrophorum 11 338 12,50 Hemophilus vaginalis 8 568 100,00 Hemophilus vaginalis 9 640 100,00 Peptococcus variabilis 11 264 50,00 Peptostreptococcus anaerobius 11 263 50,00 Propionibacterium acnes 4 020 50,00 C) Détermination de la concentration minimale inhibitrice de EM4940A vis-à-vis de Candida albicans La veille de l'essai, on prépare des bouillons de culture d'une nuit de Candida albicans dans du bouillon F4 et du bouillon levure-azote (YNB). Le bouillon de culture d'une nuit contient environ 1,0 x 107 UFC/ml. On dilue les deux cultures à '3 avec le bouillon correspondant; on prépare l'antibiotique à la concentration de 2 mg/ml dans du tampon phosphate 0,1 M à pH 7,0. On dilue la solution-stock au 1/8 pour obtenir la solution A et on dilue la solution A au 1/8 pour obtenir une solution B (dilution au 1/64). On répartit les solutions d'antibiotique dans des tubes à essai stériles de 13 x 100 mm avec des pipettes de Khan (0,2 ml) selon le tableau suivant. Tube Addition 1 0,2 ml de solution-stock 2 0,1 ml de solution-stock 3 0, 05 ml de solution-stock 4 0,2 ml de solution A (1/8 de la solution-stock) 0,1 ml de solution A (1/8 de la solution-stock) - 6 0,05 ml de solution A (1/8 de la solution-stock) 7 0,2 ml de solution B (1/64 de la solution-stock) 8 0,1 ml de solution B (1/64 de la solutionstock) 9 0,05 ml de solution B (1/64 de la solution-stock) Témoin de culture positive (pas de composé) Concentration (p g/ml) - 12,5 6,3 3,1 1, 6 0,8 0,4 On introduit dans chacun des tubes 4,0 ml des bouillons de culture dilués au 10-3 pour obtenir un inoculum final de 104 UFC/ml. On incube les tubes à 37 C pendant 18 h. On note ensuite les résultats de la façon suivante: + culture comparable à celle du tube témoin, + culture inférieure à celle du tube témoin, - pas de culture visible. La CMI est la concentration minimale en anti- biotique pour laquelle on obtient un tube négatif. Les résultats de cet essai figurent dans le tableau V ci-dessous. TABLEAU V Micro-organisme Numéro dans la collection Micro-organisme de E. R. Squibb e Sons, INC. Concentration minimale inhibitrice (/ug/ml) Milieu Milieu: base FMl levure-azote 4 + glucose 400 >100>O Candida albicans e 246 ',265 D) Détermination de la concentration minimale inhibitrice de EM4940A visa-vis de dermatophytes On prépare une solution à 1 mg/ml de l'antibio- * tique dans du tampon phosphate 0,1 M à pH 7,0. On prépare des dilu- tions de raison 2, dans le bouillon pour obtenir une gamme des concentrations d'antibiotique comprise entre 1000 Pg/ml et 0,5 pg/ml. On cultive toutes les souches de micro-organismes sur gélose F4 inclinée. On lave chaque gélose inclinée avec 10 ml de tampon phosphate 0,1 M à pH 7,0. On transfère les suspensions de spores dans des tubes bouchés de Morton stériles (1 x 4) et on homo- généise les suspensions. On ensemence en surface les bottes de gélose pré- parées avec 0,2 ml de la suspension de spores appropriée. On étale sur la surface de la gélose avec un écouvillon stérile. On incube les boîtes ensemencées à 26 C pendant 48 h. La CMI est la dilution maximale dans chaque série pour laquelle on n'observe pas de culture. Les résultats des essais figurent dans le tableau VI ci-dessous. TABLEAU VI 20. Concentration minimale Micro-organisme Numéro dans la collection inhibitrice (g/ml) ognis de E. R. Squibb &Sons, Inc. EM4940A T.mentagrophytes 2 637 >100 E. floccosum 9 185 lO00 T. rubrum 9 199 50 M. canis 9 237 100 E) Détermination de la concentration minimale inhibitrice de EM4940A vis-a-vis de Trichomonas vaginalis On prépare des dilutions de l'antibiotique comme décrit en C). A chaque série de dilutions, on ajoute 4 ml d'une dilu- tion au 1/100 d'une culture de 40 h de T. vaginalis (cultivé sur du milieu de Diamond modifié à pH 6,0 + 10 % de sérum de lapin). On incube les tubes en anaérobiose à 37 C pendant h et on détermine la CMI. Les résultats de cet essai figurent dans le tableau VII ci-après. TABLEAU VII Concentration minimale Micro-organisme Numéro dans la collection Concentration minimale de E. R. Squibb & Sons, Inc. EM4940A Trichomonas _ vaginalis 8 560 12,5 F) Détermination de la concentration minimale inhibitrice de EM4940A vis-à-vis de mycoplasmes On dissout 1 mg de l'antibiotique dans 200 /1Ul de diméthylsulfoxyde. On réalise douze dilutions de raison 2 avec du DMSO pour obtenir des concentrations comprises entre 5 000 et 2,49 P g/ml. Dans deux ensembles de plaques de microtitration, on introduit en triple des portions de 5 /il de chaque concentration. On ensemence chacun des godets avec 250, de dilution à 10 % de culture de M. mycoides ou de A. laidlawii dans du bouillon de Channocks. On ferme les plaques de façon étanche et on les examine après 48 h à 37 C pour rechercher le virage du rouge au jaune du rouge de phénol et la CMI est la concentration la plus faible pour laquelle on n'observe pas de virage. Les résultats de l'essai figurent dans le tableau VIII ci-dessous. TABLEAU VIII Micro-organisme CMI (p g/ml) de EM4940A Mycoplasma mycoides 100 Acholeplasma laidlawii 100 Comme le montrent les expériences ci-dessus, les antibiotiques de l'invention sont actifs vis-à-vis d'une grande di- versité de bactéries gram positif et gram négatif, de levures, de champignons, d'acholéplasmes et du protozoaire Trichomonas vaginalis. On peut donc utiliser ces antibiotiques 1) comme désinfectants de l'environnement (par exemple sous forme d'une pulvérisation ou d'une poudre en association avec un véhicule approprié) et 2) comme médi- caments pour lutter contre des infections dues aux bactéries, levures, champignons, acholéplasmes et Trichomonas vaginalis précités chez diverses espèces de mammifères (par exemple par voie locale, orale 246 i 265 ou parentérale, en association avec des véhicules, excipients, etc., convenant en pharmacie. Bien entendu, diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. 246 4265 R E V E N D I C A T I 0 N S 1. Nouveau composé utile notamment comme antibiotique, caracté- risé en ce qu'il consiste en le dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5-méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2 ou un de ses stéréo- isomères. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en le trans-2,4 dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2. 3. Composé selnn la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en le cis-2,4 dihydro-3,4 hydroxy-4 (hydroxy-3 pyridyl-2)-5 méthyl-4 2H-pyrrolecarboxamide-2. 4. Procédé pour préparer un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver Nocardia sp. 11 340 ATCC n 31 531 dans un milieu nutritif aqueux contenant un hydrate de carbone assimilable et une source d'azote assi- milable, en conditions aérobies submergées jusqu'à ce que le milieu ait une activité antibiotique notable. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'on cultive le micro-organisme à environ 28 C. 6. Culture biologiquement pure du micro-organisme Nocardia sp. 11 340, ayant les caractéristiques d'identification de V'ATCC n 31531, cette culture pouvant produire un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, en une quantité récupérable par fermenta- tion dans un milieu nutritif aqueux contenant un hydrate de carbone assimilable et une source d'azote assimilable. 7. Nouveaux médicaments utiles notamment comme antibiotiques, caractérisés en ce qu'ils consistent en un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 8. Compositions thérapeutiques, caractérisées en ce qu'elles contiennent comme ingrédient actif l'un au moins des médicaments selon la revendication 7. 9. Formes pharmaceutiques d'administration par voie locale, orale ou parentérale des compositions thérapeutiques selon la re- vendication 8. U