La présente invention concerne-de nouveaux peptides exerçant un effet hypocalcémiant et répondant à la formule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys- X - Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly 29 30 31 32 Val-Gly-Ala-Pro-NH2, (I) dans laquelle X représente le reste de la b-méthionine, de la L-valine, de la N-norvaline, de la L-leucine, de la L-norleucine ou de l'acide L-&alpha;;-aminobutyrique et dans laquelle au moins l'un des anino-acides dans les positions 11, 12, 16, 17, 19, 20, 22 et 24 est échangé contre un autre acide aminé, et notamment la L-thréonine11 contre la L-lysine, la L-tyrosinel2 contre 16 la 1-leucine, la L-phénylalaninel6 contre la 1-leucine, l'acide L-aspartique17 contre la 1-histidine, la L-phénylalaninel9 contre la 1-leucine, la L'-histidine20 contre la L-glutamine, la L-phénylalanine22 contre la l-tyrosine et la L-glutamine24 contre la 1-arginine, ainsi que leurs dérivés et sels d'addition avec des acides et les complexes de ces composés, ainsi qu'un procédé pour leur préparation. Comme dérivés, il y a lieu de citer surtout les dérivés N&alpha;-acylés, ainsi que les désamino1-peptides correspondants. Les groupes acyle pour l'acylation du groupe N&alpha;-amino- gène sont des restes d'acides carboxyliques tels que des acides carboxyliques aliphatiques, aromatiques, araliphatiques, hétérocycliques et hétérocyclyl-aliphatiques, en particulier d'alca nolques ou d'alcénolques inférieurs monovalents ou divalents, comme l'acide formique, l'acide acétique, l'acide propionique, les acides butyriques l'acide acrylique, l'acide succinique, d'acides carboxyliques alicycliques comme les acides cycloalcoyl-carboxyliques, d'acides carboxyliques aromatiques monocycliques monovalents ou divalents tels que l'acide benzolque ou l'acide phtalique non-substitué ou substitué, d'acides aryl-alcoyl(inférieur)- ou -alcényl(inférieur)-carboxyliques non-substitués et substitués par des groupes aryle, comme l'acide phénylacétique, d'acides hétérocycliques non-substitués ou substitués monovalents ou divalents comportant de 5 à 6 termes et renfermant de l'azote du soufre et/ou de liazote en tant qu'hétéro-atomes, comme les acides pyridine-carboxyliques, les acides thiofène-carboxyliques, ou d'hétérocyclyl-alcanolques inférieurs, comme l'acide pyridyl-acétique, l'acide imidazolyl- acétique, où les substituants des anneaux 'sont, par exemple, des atomes d'halogène, des groupes NO2, des groupes alcoyle inférieur ou alcoxy inférieur, ou des groupes carbalcoxy inférieur, Comme restes acyle, il y a lieu en outre de citer surtout des restes acyle d'acides aminés, en particulier &alpha;-amino-acides, comme le reste glycyl-1-leucyle, le reste L-pyroglutamyle, par exemple, ainsi que des restes acyle dérivant de l'acide carbonique ou de l'acide thio-carbonique, ou de leurs esters ou amides, par exemple des groupes alcoyloxy(inférieur)-carbonyle comme les - groupes éthoxy-carbonyle, tertio-butyloxy-carbonyle, ainsi qu'un groupe benzyloxy-carbonyle, carbamoyle et thiocarbamoyle non-substitué et substitué comme indiqué ci-dessus, ainsi qu'un groupe carbamoyle ou thiocarbamoyle N-substitué, par exemple un groupe N-alcoyl(inférieur)-carbamoyle, N-phényl-carba moyle, N-phényl-thiocarbamoyle. Comme sels d'addition avec des acides, il y a lieu de citer, en particulier, des sels d'acides thérapeutiquement utilisables, comme l'acide chlorhydrique, l'acide acétique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et des-acides sulfoniques, tels que des acides alcane(inférieur)-sulfoniques, l'acide benzènesulfonique ou l'acide toluène-sulÎonique. Par complexes il y a lieu d'entendre les composés dont la structure n'est pas encore éclaircie et qui prennent naissance lorsqu'on ajoute certaines substances minérales ou organiques à des peptides à longue channe et confèrent à ces derniers un effet prolongé. De telles substances sont, par exemple, décrites pour l'ACTH et pour d'autres peptides à effet adrénocorticotrope. Il y a lieu de citer, par exemple, des composés minéraux dérivant de métaux comme le calcium, le magné sium, l'aluminium, le cobalt et en particulier le zine, surtout des sels difficilement solubles comme les phosphates, les pyrophosphates et les polyphosphates, ainsi que les hydroxydes de ces métaux, de même que des polyphosphates de métaux alcalins comme par exemple les produits dénommés "Calgon N", l'ballon 322", "Calgon 188" ou "Polyron B 12". Les substances organiques qui provoquent une prolongation de effet sont, par exemple, de-s gélatines non-antigènes, par exemple des polyoxygélatines, la polyvinyl-pyrrolidone et la carboxyméthyl-cellulose, de même que des esters sulfoniques ou phosphoriques de l'acide alginique, du dextrane, de polyphénols et de polyalcools, surtout- le phosphate de polyphlorétine et l'acide phytique, ainsi que des produits de polymérisation et des produits de copolymérisation d'acides aminés basiques ou surtout acides, par exemple la protamine ou l'acide polyglutamique. Les nouveaux composés présentent un effet hypocalcé- miant. Ils diminuent la concentration du calcium et des phosphates dans le plasma ciu sang des mammifères, ainsi que cela a pu être démontré par des essais effectués sur des rats. Ils peuvent être utilisés dans les hypercalcémies, l'ostéoporose ou l'estéite déformante. Le procédé conforme à l'invention pour la préparation des nouveaux amides peptidiques, de leurs dérivés, de leurs sels d'addition avec des acides et de leurs complexes est caractérisé par le fait que 1. Dans des composés de formule 2 2 3 4 5 6 7# 89 10 11 12 13 14 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys - X - Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Glu 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 sp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly 29 30 31 32 Val-Gly-ala-Pro-NH2, (I), dans laquelle X a la signification indiquée et l'un au moins des acides aminés est remplacé dans les positions 11, 12, 16, 17, 19 20, 22 et 24 par les amino-acides indiqués ci-dessus, ou dans leurs dérivés, composés dans lesquels au moins un groupe aminogène ou un groupe carboxyle est protégé par un groupe de protection éliminable, on élimine le(s) groupe(s) de protection, ou que 2.On oxyde en bisulfure des composés de formule I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys- X - Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Gln-Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile 28 29 30 31 32 Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (II), dans laquelle X a la signification indiquée et l'un au moins des acides aminés dans les positions 11, 12, 16, 17, 19, 20, 22 et 24 est remplacé par les amino-acides indiqués ci-dessus, ou leurs dérivés, dans lesquels les groupes mercapto sont libres ou sont protégés par le groupe trityle et, si on le désire, qu'on transforme les amides peptidiques obtenus en leurs sels d'addition avec des acides ou en leurs complexes. Lors de la préparation des substances de départ pour la première variante du procédé conforme à l'invention, de meme que de toua les produits intermédiaires nécessaires dans la seconde variante du procédé, on envisage, comme groupes de protection, en particulier les groupas de protection connus par la synthèse des peptides à longue chaîne, qui peuvent être facilement scindés, par exemple par hydrolyse, reduction, aminolyse ou hydrazinolyse. C'est ainsi par exemple qu'on utilise, comme groupes de protection pour les groupes aminogènes, des groupes acyle ou des groupes aralcoyle, tels que des groupcs formyle, trifluora celle, phtaloyle, benzane-sulfonyle, p-to1une-sulfonyle, o-nitro-phényl-sulfényle, 2,4-dinitrophényl-sulfényle (ces groupes sulfényle peuvent aussi être éliminés en faisant agir des réactifs nucléophiles, par exemple des sulfites, des thiosulfates, cf. le brevet britannique 1.104.271), des groupes benzyle éventellement substitués, par exemple par des groupes alcoxy inférieur, en particulier par des groupes o-méthoxy ou p-méthoxyx ou des groupes diphényléthyle ou triphénylméthyle, ou des groupes dérivant de l'acide carbonique, tels que des groupes arylméthyloxycarbonyle éventuellement substitués dans les anneaux aromatiques, par exemple par des atomes d'halogène comme le chlore ou le brome, par des groupes NO2, par des groupes alcoyle inférieur ou par des groupes alcoxy inférieur, ou par des groupes colorants, par exemple par des groupes azoïques et dans lesquels le groupe méthylène peut être substitué par un autre reste aryle et/ou par un ou, le cas échéant par deux restes alcoyle inférieur, par exemple des groupes benzyl- benzhydrylou 2-phényl-isopropyloxy-carbonyle, par exemple des groupes carbobenzoxy, p-bromo- ou p-chloro-carbobenzoxy, p-nitrocarbobenzoxy ou p-méthoxy-carbobenzoxy, p-phénylazo-benzyloxycarbonyle et p-(p'-méthoxy-phénylazo)-bezyloxy-carbonyle, 2-tolyl-isopropyloxycarbonyle et, en particulier, 2-(p-biphénylyl)isopropyloxycarbonyle, ainsi que des groupes oxycarbonyle ali phatiques, tels que des groupes adamantyloxycarbonyle, cyclopentyloxycarbonyle, 2,2,2-trichloréthyloxycarbonyle, 2-iodo éthyloxy-carbonyle, tertio-amyloxycarbonyle ou surtout tertio butyloxyc arbonyle0 Les groupes andnogènas peuvent aussi être protégés par formation d'énamines obtenues en faisant réagir le groupe aminogène sur des 1,3-dicétones, par exemple su la benzoylacétone, sur l'acétylacétone ou sur la dimédone. ijes groupes carboxyle sont protégés, par exemple, par formation d'amides ou d'hydrazides, ou par estérification0 Les groupes amide et les groupes hydrazide peuvent éventuellement être substitués, le groupe amide, par exemple, par le groupe 3,4-diméthoxybenzyle ou le groupe bis-(p-méthoxyphényl)-méthyle, le groupe hydrazide, par exemple, par le groupe carbobenzoxy, par le groupe trichloréthyloxycarbonyle, par le groupe trifluoracétyle, par le groupe trityle, par le groupe tertio-butyloxycarbonyle ou par le groupe 2-(p-biphénylyl)-isopropyloxycarbonyle.Sont par exemple appropriés pour l'estérification des alcanols inférieurs éventuellement substitués, comme le méthanol, l'éthanol, l'alcool cyanométhylique, le 2,2,2-trichloro-éthanol, le 2-iodo-éthanol, l'alcool benzoylméthylique ou, en particulier, le tertio-butanol, ainsi que des aralcanols tels que des arylalcanols inférieurs, par exemple des alcools benzyliques ou benzhydryliques éventuellement substitués par des groupes alcoyle inférieur ou par des groupes alcoxy inférieur, ou par des atomes d'halogène, comme l'alcool p-nitro-benzylique, l'alcool p-méthoxybonzylique ou l'alcool 2,4,6-triméthylbenzylique, des phénols et des thio-phénols éventuellement substitués par des substituants attirant les électrons, comme le thiophénol proprement dit, le thiocrésol, le p-nitro-thiophénol, le 2,4,5- trichloro-phénol et le 2,4,6-trichloro-phénol, le pentachloro- phénol, le p-nitrophénol, le 2,4-dinitrophénol, le ,-cyano- phénol, ou le p-métilane-sulfonyl-phénol de même que, par exem ple > le N-hydroxy-succinimide, le N-hydroxy-phtalimide, la N hydroxy-pîpéridine, la -8-hydroxy-quinoléine. Les groupes hydroxy des restes de la sérine, de la thréonine et de la -tyrosine peuvent être protégés, par exemple par estérification ou par éthérification0 Comme restes acyle lors de l'estérification, sont appropriés, par exemple, des restes alcanoyliques inférieurs, comme le reste acétyle, des restes aroyle comme le reste benzoyle, et surtout des restes dérivant de l'acide carbonique, comme le groupe benzyloxycarbonyle ou le groupe éthyloxy-carbonyle. Des groupes appropriés à l'éthérification sont, par exemple, des restes benzyle, tétrahydropyranyle ou tertio-butyle.Conviennent en outre, pour la protection des groupes hydroxyle, les groupes 2,2,2trifluoro-1-tertio-butyloxycarbonylamino- ou -1-benzyloxycarbonylamino-éthyle (Weygand) qui sont décrits dans la publication intitulée "Ber. " 1.CO (1967), pages 3.838 à 3.849o Les groupes hydroxyle n'ont cependant pas absolument besoin d'autre protégés. Les groupes mercapto des restes de la cystéine sont protégés par exemple par acylation ou par alcoylation0 Pour l'acylation, sont appropriés, par exemple, le reste acétyle ou le reste benzoyle, le reste éthylcarbamoyle, ou le reste carbobenzoxy éventuellement substituée Pour l'alcoylation sont appropriés, par exemple, le reste tartie-butyl- ou benzylthiométhyle, ou des groupes arylméthyle éventuellement substitués, comme le reste benzyle, le reste p-nitrobanzyle, le reste diphény]méthyle, le reste diméthoxybenzhydryle ou le reste trityle, ainsi que le reste phénylcyclohexyle, le reste thié nyl-(2)-cyclohexyle et autres, cf, "Ber." 101 (1968), pages 681, mai que par exemple le rste acétyl-aminométhyle, cf. "Tetrahedron Letters" N 26 (1968), page 3.057. Le groupe iminogène de l'histidine n'a pas absolument besoin d'être protégé, bien- qu'il puisse être avantageux de le protéger, par exemple par un reste benzoyle, trityla, carbebenzoxy, adamantyloxycarbo- nyle, ou par les groupes de Weygand indiqués ci-dessusO On utilise de préférence, dans la première variante du procédé conforme à l'invention, pour protéger le groupe carboxyle de la chaise latérale et la cas échéant le groupe @@@@oxyl@ @@@@@@al, le groupe ester tertio-butylique, pour pre- téger un groupe aminogène de la chaîne latérale, le groupe tertio-butyloxycarbonyle, pour les groues hydroxyle des restes de la sérine, de la thréonine et de la tyrosine, pour autant que ceux-ci sciant essentiellement pot-gs, le groupe éther tertio-butylique et, si on le désira, pour protéger le groupe iminogène de l'histidine, le groupe 2,2,2-trifluoro-1-tertiobutyloxycarbonylamino-éthyle. Tous ces groupes de protection peuvent, si on le désire, être éliminés an un stade par une hydrolyse acide, par exemple à l'aide d'acide trifluoracétique, d'acide chlorhydrique ou d'acide fluorhydrique.Lors de l'édification des dotriacontapeptides protégés qui sont utilisés comme matière de départ dans la première variante du procédé, avec utilisation de groupes de protection pouvant être élimines avec l'acide trifluoracétique, l'acide chlorhydrique ou l'acide fluorhydrique, les groupes mercapto sont, de préférence protégés par le reste benzoyle ou le reste trityle Les groupes S-trityle peuvent être éliminés du peptide protégé en solution organique, de façon sélective (avec conservation des groupes pouvant etre éliminés avec l'acide trifluoracétique), avec de l'acétate mercurique et de l'hydrogène sulfuré. Les groupes S-benzyle peuvent etre éliminés sélectivement du peptide protégé, avec du sodium dans de l'ammoniac liquide.Dans les deux cas, on obtient le peptide protégé comportant des groupes mercapte libres Ce peptide peut etre oxydé en bisulfure protégé, par exemple avec de l'iode dans de l'acide acétique glacials avec du diiodo-éthane dans des solvants organiques ou avec l'oxygène de l'air dans del'ammoniac liquide. 11 est particulièrement avantageux de protéger les groupes marc apte par des groupes trityle et d'éliminer cet ci du peptide protégé, an donnant simultané- ont lieu à la formation du pomt bisulfure avec de l'iode dans le méthanol ou l'acide acétique glacial.La formation de l'anneau bisulfure peut etre effectuée au stade d'une séquence partielle renfermant les deux restes de la cystéine, par exemple du décapeptide 1-10 ou au stade de l'amide du dotriacontapeptide. Dans la seconde variante opératoire du procédé conforme à l'invention, le peptide à chaîne ouverte, qui est utilisé comme matière de départ, peut, de préférence, être également réparé avec les groupes de protection indiquée pour la variante . Les groupes 3-Trityle peuvent être éliminés avec de l'acide trifluoracétique et le peptide libre à chaîne ouverte peut, d'une manière connue, etre oxydé par le ferricyanure de potassium en solution aqueuse, ou par l'iode ou avec d l'air dans de 1'anno- niac liquide. On peut cependant aussi, suivant le procédé mentionne ci-dessus, éliminer les groupes trityle avec de l'iode et du méthanol, en donnant lieu simultanément à la formation du bisulfure. Lors de la préparation des dérivés N-acylés, le grou pa acyle peut être utilisé comle groupe de protection du groupe aminogène. Les peptides obvenus peuvent, d'une manière connue en soi, être transformés ultérieurement en leurs sels (l'addition avec des acides et/ou en leurs complexes. La formation des sels d'addition avec des acides est effectuée d'une manière connue. La formation des complexes a lieu aussi suivant les méthodes connues ou suivant des mtnodes équivalentes, les complexes avec des substances minérales telles que des composés métalliques difficilement solubles, par exemple des composés de l'aluminium ou du zinc, sont de préférence prépares d'une maniera analogue à celle connue pour l'ACTH, par exemple par réaction sur un sel soluble du métal correspondant, par exemple le chlorure de zinc ou le sulfate de zinc, et par précipitation avec un phosphate et/ou un hydroxyde de métal alcalin.Les complexes avec des composés organiques, comme les poly-oxy-gélatines, la carboxyméthyl-cellulose, la polyvinylpyrrolidone, le phosphate de polyphlorétine, l'acide polyglutanique, etc0.02 sont obtenus en mélangeant ces substances avec le peptide en solution aqueuse.De la même manière, on peut préparer aussi des composés insolubles avec des polyphosphates de métaux alcalins, L'invention concerne également les formes d'exécution du procédé, dans lesquelles on part d'un produit intermédiaire obtenu à un stade quelconque du procédé et effectue les phases encore manquantes dudit procédé, ou interrompt ce dernier à l'un quelconque de ses stades et/ou dans lesquelles on forme une substance de départ in sîtu et/ou l'utilise sous la forme d'un selO Les peptides qui sont utilisés comme substances de départ sont obtenus an liant les acides aminés, si c'est nécessaire ou si on le désire, avec utilisation de groupes de protection facilement éliminables, dans l'ordre indiqué, individuellement ou après formation préalable d'unités peptidiques assez petites tandis que, le cas échéant, le pont bisulfure est formé à un stade quelconque de la synthèse. On travaille avantageusement suivant les méthodes de liaison qui conviennent pour la préparation de peptides à longue chaîne, an tenant compte du pont bisulfure, méthodes qui sont connues dans la littérature. La liaison des unités d'acide aminé et/ou de peptide a lieu par suite, par exemple, en faisant réagir un acide aminé ou un peptide, comportant un groupe &alpha;-aminogène protégé et un groupe carboxyle terminal activé, sur un amino-acide ou sur un peptide comportant un groupe &alpha;-aminogène libre et un groupe carboxyle terminal libre ou protégé, par exemple estérifié ou amidifié, ou bien en faisant réagir un acide aminé ou mi peptide comportant un groupe &alpha;-aminogène activé et un groupe carboxyle terminal protégé sur un amino-acide ou sur un peptide coeaportant un groupe carboxyle terminal libre et un groupe &alpha;-aminogène protégé. Le groupe carboxyle peut, par exemple, être activé par transformation en un azide, anhyaridej imidazolide ou en un ester activé, conme l'ester cyanométhylique, l'ester thiophé- nylique, l'ester p-nitro-thiophénylique, l'ester thiocrésylique, l'ester p-méthane-sulfonyl-phénylique, l'ester p-nitrophé- nylique, l'ester 2,4-dinitrophénylique, l'ester 2,4,5- ou 2,4,6-trichlorophénylique, l'ester pentachlorophénylique, l'ester du N-hydroxy-succinimide, l'ester du H-hydroxy-phtalimide, l'ester de la 8-hydroxy-quinoléine, l'ester de la D-nydroxy- pipéridine, ou par réaction à l'aide d'un carbodiimide (le cas échéant en ajoutant du N-hydroxy-succinimide ou un l-hydroxybenzotriazole non substitué ou substitué par exemple par un halogène, par un groupe méthyle ou par un groupe méthoxy) ou d'un N,N'-carbonyl-di-imidazole, ou d'un sel d'isoxazolium, par exemple le réactif de Woodward, tandis que le groupe aminogène est, par exemple, activé par réaction sur un phosphite. Comme méthodes les plus usuelles, il y a lieu de citer la méthode au carbodiimide, la méthode indiquée par Weygand-Wüsch (carbodiimide en présence de N-hydroxy-succinimide), la méthode à l'azide, la méthode des esters activés et la méthode à l'anhy dride, ainsi que la méthode de Merrifield et la méthode des N-c arboxy-annydri des ou des N-thio-c arb oxy- anhydride s. ors de la préparation des substances de départ, il est avantageux de partir d'une séquence comprenant les dix premiers amino-acides N-terminaux et de condenser avec ce N-terminus toute la séquence restante, de préférence suivant la méthode de Weygand-Wünsch. On peut cependant aussi relier, par exemple, la sé séquence N-terminale indiquée avec le fragment allant jusqu'au vingthuitième; acide aminé (glycine) comportant un groupe carboxyle C-terminal -libre, et condenser l'octacosapeptide avec le tétrapeptide des acides aminés 29 et 32, par exemple suivant la méthode de Weygand-Wünsch. Dans ce qui suivra on expliquera, conne exemple pour une forme d'exécution préférée, la préparation du peptide de la formule (I), dans lequel le 17ème amino-acide est remplacé par de la L-hystidine, le 19ème par de la L-leucine et le 20ème par de la L-glutamine. Les schémas indiquent des modes opératoires spéciaux et naturellement peuvent être remplacés par des modes opératoires équivalents. Dans les schémas qui suivant et dans les exemples, les notations ont la signification suivante 1) la méthode à l'azide 2) la méthode des anhydrides mixtes 3) la méthode des esters activés, notamment de l'ester p-nitre- phénylique (ONP) ou de l'ester de l'hydroxy-succinimide (OSU) 4) la méthode au carbodiimide 5) la méthode suivant Weygand-Wüsch BOC = tertio-butyloxycarbonyle DPC = 2-(p-biphénylyl)-isopropyloxycarbonyle Z = carbobenzosy TRI = carbobenzosy Bsl = Benzyle OtBu = ester tertio-uutylique OBzl = ester beuzylique ONB = ester p-nitrobenzylique ONP = ester p-nitrophénylique OMe = ester méthylique CEt = ester éthylique OCP = ester 2,4,5-trichlorophénylique tBu = éther tertio-butnvrlique Ac = acétyle Bmp = ss-mereaptopropionyle TFA = acide trifluoracétique Le décapeptide N-terminal (1 à 10) peut, par exemple, être édifié à partir des séquences 1 à 4 et 5 à 10, ou 1 à 5 et 6 à 10, ou 1 à 6 et 7 à 10, ou 1 à 7 et 8 à 10, comme cela ressort des schémas 1 à 8 ; on peut, toutefois, utiliser aussi d'autres fragments pour édifier la séquence 1 à lOo Comme groupe de protection pour le groupe &alpha;-aminogène sur la cystéine1, on utilise, de préférence, le groupe tertio-butyloxy-carbonyle ou un groupe équivalent pouvant être éliminé par une hydrolyse acide, ou bien lorsque l'on doit préparer un dotriacontapeptide N&alpha;-acylé, on utilise le groupa acyle correspondant, par exemple le groupe acétyle.On utilise en outre avantageusement, comme groupas de protection du groupe mercapto, ceux qui peuvent être éliminés sélectivement par rapport au groupe de protection (éliminable par hydrolyse acide) du groupe N&alpha;-aminogène (par exemple le groupe tertio-butyloxycerbonyle), par exemple le groupe banzyle ou le groupe trityle. Le groupe carboxyle terrninal du décapeptide n'a pas absolument besoin d'être protégé et il n'a pas besoin de l'être, par exemple, lorsqu'on effectue des condensations suivant la méthode à l'azide ou la méthode à l'anhydride.On peut cependant protéger également ce groupe par estérification, comme indiqué ci-dessus, par exemple par estérification avec du méthanol ou de méthanol (élimination du groupe ester avec une solution diluée d'hydroxyde de sodium) ou avec de l'alcool benzylique ou des composés analogues (éli mination du groupe ester, par exemple avec du sodium dans de l'ammoniac liquide). La protection des groupes aminogènes des produits intermédiaires a lieu à l'aide des groupes de protection usuels, par exemple les groupes carbobenzoxy, trityle, tertio-butyloxy-carbonyle ou 2-para-diphényl-isopropyloxycarbony le, Les groupes carboxyle des produits intermédiaires sont, si c'est nécessaire, estérifiés de maniera usuelle.Les groupes hydroxy du reste de la sérine et de la thréonine peuvent etre protégés par éthérification, par exemple avec du tertio-butanol ou des alcools équivalents. Les groupes ester p-nitrobenzylique et ester benzylique peuvent être éliminés avec du sodium dans de l'ammoniac liquida ou par hydrogénolyse an présence de charbon au palladium, le groupe carbobenzoxy également par hydrogénolyse, le groupe N-trityle avec de l'acide acétique aqueux, le groupe tertiobutyloxycarbonyle avec le l'acide trifluoracétique, le groupe 2-(p-biphénylyl)-isopropyloxy-carbonyle avec de l'acide acétique aqueux ou, par exemple, avec un mélange (7 ç 1 : 2) d'acide acétique glacial, d'acide formique à 82,8 : et d'eau.L'ester p-nitrobenzylique ou l'ester méthylique peut être transformé en hydrazide avec de l'hydrate d'hydrazine. avec une solution diluée d'hydroxyde de sodium, le groupe ester méthylique ou ester éthylique est hydrolysé. Le groupe ester tertie-butylique est éliminé avec de l'acide trifluoracétique, de meme que l'é- ther tertio-butylique. Les groupes 8-trityle sont éliminés avec de l'acétate mercurique et de l'hydrogène sulfuré, le groupe S-benzyle avec du sodium dans de l'ammoniac liquide, auquel cas les groupes ester benzylique ou p-nitro-benzylique éventuellement présents sont éliminés simultanément. La cyclisation an bisulfure a lieu, par exemple, par oxydation avec du 1,2-di-iodo-éthane, et celle des composés protégés par un groupe S-trityle avec de l'ioda dans du méthanol, La séquence C-terminale qui est à relier avec la séquence W-terminale et qui comprend les acides aminés 11 à 32 ou ll à 28, est par exemple composée des séquences 11 à 16, 17 à 20, 21 à 28 et 29 à 32, comme le mon-tre le schéma 9. Dans ce schéma, les groupes hydroxyle des restes de la thréonine et du reste de la tyresine sont protégés, mais cela n't'st pas absolument nécessaire On peut aussi réunir entre elles d'autres séquences partielles et utiliser d'autres groupas de protection. Le schéma 10 montre l'édification de l'hexapeptide (sous la forme de l'hydrazide) des amino-acides 11 à 16. Il peut être relié, suivant la méthode à l'azide, avec la séquence 17 - 28 ou 17 - 32. La séquence 17 - 28 peut etre édifiée, suivant la méthode à l'azide, à partir des fragments 17 - 20 et 21 - 28. Le schéma 11 montre la synthèse de l'hydrazide tétrapeptidique des amino-acides 17 à 20, et le schéma 12 illustre l'édification de l'octapeptide 21 - 28. après la liaison des deux séquences, on élimine le groupe de protection du groune &alpha;;-aminogène (le groupe carbobenzoxy par hydrogénolyse en présence de charbon au palladium) et condense le dodécapeptide ainsi obtenu, qui comporte des chalnes latérales protégées, suivant la méthode à l'acides avec l'hydrazide hexapeptidique 11 - 16 (schéma lO)o La séquence 1l - 28 ainsi obtenue peut être reliée avec l'amide tétrapeptidique des amino-acides 29 - 32, dont la préparation est illustrée sur le schéma 13, par exemple suivant la méthode de Weygand-Wüsch.On obtient alors l'amide docosapeptidique protégé 11 - 32, A partir demie dernier, on peut éliminer le groupe de protection du groupe &alpha;-aminogène / le groupe carbobenzoxy, par exemple par hydrogénolyse, et le groupe DrC avec de l'acide acétique à 90 % ou avec un mélange (7 : 1 : 2) d'acide acétique glacial, d'acide formique à 82,8 ; et d'eau] et relier le composé ainsi obtenu, qui comporte un groupe &alpha;-aminogène libre, après élimination de l'acide acétique, avec le décapeptide I-terminal (schémas 1 à 8) par exemple suivant la méthode des anhydrides mixtes, des esters activés (OSU) ou suivant Weygand-Wünsch. On peut cependant relier étalement la séquence 11 28 qui comporte un groupe carboxyle C-terminal libre, après élimination de la manière indiquée du groupe de protection du groupe &alpha;-aminogène, avec le décapeptide N-terminal, suivant la méthode des. anhydrides mixtes, et condenser le produit ainsi obtenu avec l'amide tétrapeptidique 29 - 32, par exemple suivant Weygand-Wüsch On élimine les groupes de protection de l'amide dotriacontapeptidique protégé, par exemple avec de l'acide trifluoracétique, ou bien avec de l'acide chlorhydrique concentré, Le dotriacontapeptide, qui est à utiliser pour la variante 2) du procédé et qui comporte des groupes SE libres ou protégés par le reste trityle, peut être préparé d'une manière analogue au dotriacontapeptide protégé qui est décrit ci-dessus, avec cette différence que les groupes SII protégés sont conservés jusqu'à la fin de la synthèse.Ce n'est que lorsque tous les autres groupes de protection ont été éliminés du dotriacontapeptide protégé que l'on élimine les groupes de protection des groupes SH ou qu'on oxyde directement, comme mentionné ci.-dessus, le composé protégé par le reste trityle. Suivant le mode opératoire choisi, on obtient les nouveaux composés sous la forme des bases ou sous la forme de leurs sels0 A partir des sels, on peut, d'une manière connue en soi, -obtenir les bases. A partir de ces dernières, on peut à nouveau, par réaction sur des acides convenant à la formation de sels thérapeutiquement utilisables, obtenir des sels, par exemple-ceux avec des acides minéraux, comte les hydracides halogénés, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide bromhydrique, avec les acide perchlorique, azotique ou thiocyanique, les acides sulfuriques ou phosphoriques, ou avec des acides organiques, comme les acides formique, acétique, propionique, glycolique, lactique, pyruvique, oxalique, malonique, succinique, maléique, fumarique, malique, tartrique, citrique, ascorbique, hydroxy-maléique, (lihydroxy-maléique, bauzoique, phénylacêtiqua, 4-amino-benzoique, 4-hydroxy-benzoique, anthranilique, cinnamique, mandélique, salicylique, 4-amino-salicylique, 2-phénoxybenzoïque, 2-acétoxy-benzoïque, méthane-sulfonique, éthanesulfonique, hydroxy-éthane-sulfonique, benzène-sulfonique, ptoluène-sulfonique, naphtalène-sulfonique ou sulfanilique. Les peptides obtenus conformément au procédé peuvent être utilisés sous la forme de préparations pharmaceutiques. Celles-ci renferment les peptides en mélange avec une matière de support pharmaceutique, organique ou minérale, qui est appropriée pour l'application entérale ou parentérale. Pour cette matière de support, on envisage des substances ne réagissant pas sur les polypeptides, par exemple la gélatine, le lactose, le glucose, le chlorura de sodium, l'amidon, le stéarate de ma gnésium, le talc, des huilas végétales, des alcools benzyliques, des gommes, des polyalcoylène-glycols, la vaseline, la choles- térine ou d'autres excipients connus.Les préparations pharma ceutiques peuvent se présenter par exemple, à l'état de lyo philisat, ou sous forme liquide, à l'état de solutions, de suspensions ou d'émulsions Elles sont éventuellement stérilisées et/ou renferment des substances auxiliaires telles que des désinfectants, des stabilisants, des agents mouillants ou émulsionnants. Elles peuvent aussi renferner encore d'autres substances thérapeutiquement précieuses. L'invention es-t décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés Celsius. Dans la chromatographie en couche mince, on utilise les systèmes suivants Système 37 : mélange (46 : 31 : 23) de n-outanol, d pyridine et d'eau Système 45 C : mélange (51 : 21 : 28) d'alcool anylique tertiaire, d'isopropanol et d'eau Système 43 E : mélange (32 : 32 : 36) d'alcool amylique tertiaire, d'isopropanol et d'eau Système 45 : mélange (70 : 30) de butanol secondaire et d'une solution aqueuse à 3 % d'ammoniac Système 52 : mélange (75 : 7,5 : 21) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau Système 52 A : mélange (67 : 10 : 23) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau Système 70 : mélange (40 : 20 : 40) d'acétate d'éthyle, de pyridine et d'eau Système 79 : mélange (77 : 4 : 19) de n-butanol, de pyridine et d'eau Système 96 : mélange (67 : 10 23) de butanol secondaire, acide acétique glacial et d'eau Système 100 : mélange (62 : 21 : 6 : 11) d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau Système 101 A ç mélange (42 : 24 : 4 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau Système 107 : mélange (49 : 24 : 27) d'acétate d'éthyle, de pyridine et d'eau Système 110 : mélange (42 : 21 : 21 : 6 : 10) d'acétate d'éthyle, de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau Système 115 : mélange (63 : 21 : 10 . 6) d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide formique et d'eau Dans la répartition de Craig, et sauf indication contraire, on utilise le tampon suivant : 29 ml d'acide acétique glacial, 19 g d'acétate d'ammonium, le tout complété à un litre avec de l'eau. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys G@y Asn Lou Ser Thr Cys Met Leu Giy Bzl Bzl | | A BOC-OH BOC-OH BOC-OH H-N2H2-Z BOC-OH H-ONB BOC-OH BOC-OH BOC-OH H-OBzl 3) 1)-5) 1)-5) B BOC # N2H2-Z BOC # ONB BOC # OBzl C H # N2H2-Z H # ONB H # Obzl 1)-5) 1)-5) D BOC # N2H2-Z BOC # OBzl E BOC # N2H3 H # OBzl Bzl 1) | 1)-5) F BOC # ONB BOC # OBzl Bzl | 1)-5) G H # ONB H # OBzl Bzl | 1)-5) H BOC # ONB Schéma 1 Bzl | I BOC # N2H3 Bzl Bzl | 1) | J BOC # OBzl SH SH | | K BOC # OH L BOC # OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 9 10 Oys Ciy Asn Leu Sér Thr Cys Leu Gly Bzl Bzl | | A BOC-OH Z-OH BOC-OH BOC-OH BOC-OH H-OBzl BOC-OH BOC-OH H-OBzl 1)-5) 1)5) B BOC # OBzl BOC # OBzl C H # OBzl H # OBzl 1)-5) 1)-5) D BOC # OBzl BOC # OBzl E H # OBzl H # OBzl Bzl | 1)-5) F BOC 3) OBzl BOC # OBzl G H # OBzl H # OBzl H Z # OBzl I H # OH Schéma 2 Bzl | 3)-5) J BOC # OH Bzl Bzl | | K BOC # # OBzl SH SH | | L BOC # # OH # M BOC # OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sér Thr Cys Sér Leu Gly TRI tBu tBu TRI | | | | A BOC-OH Z-OH Z-ONP H-OMe DPC-OH H-OMe TRI-OH BOC-OH Z-OH H-OMe tBu tBu 3) | | 1)-5) B Z # OMe DPC # OMe Z # OMe tBu tBu | | C H # OMe DPC # N2H3 H # OMe 1)-5) 1)-5) D Z # OMe Z # OMe H # OMe H # OMe TRI | 4) F Schéma 3 TRI # OMe TRI | G H # OMe TRI tBu tBu TRI | 4) | | 1) | H BOC # OME DPC # OMe TRI tBu tBu TRI | | | | I BOC # N2H3 H # OMe tBu tBu TRI | | | # OMe J H OH TRI tBu TBu TRI | 1) | | | K BOC # # OH SH tBu tBu SH | | | | L BOC # # OH # tBu tBu | | M BOC # OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sèr Thr Cys Mét Leu Gly TRI tBu tBu TRI | | | | A BOC-OH Z-OH Z-ONP H-OMe DPC-OH DPC-OH TRI-OH BOC-OH Z-OH H-OMe 3) 1)-5) B Z # OMe Z # OMe C H # OMe H # OMe 1)-5) 1)-5) D Z # OMe BOC # OMe E H # OMe H # OMe TRI TRI | 4) | 5) F BOC # OMe TRI # OMe TRI TRI | | G BOC # N2H3 H # OMe tBu TRI | | 1)-5) H DPC # OMe tBu TRI | | I H # OMe tBu tBu TRI | | 1)-5) J Schéma 4 DPC # OMe tBu tBu TRI | | K H # OMe tBu tBu TRI | | L H # OH TRI tBu tBu TRI | 1) | | OH M BOC # # tBu tBu N BOC # OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sér Thr Cys Mét Leu Gly TRI tBu tBu TRI | | | | A TRI-OH Z-OH Z-ONP H-OMe DPC H-OMe TRI-OH BOC-OH Z-H H-OMe 3) B Z # OMe C H # OMe D Z # OMe E H # OMe Schéma 5 TRI | 4) F TRI # OMe TRI | G H # OMe TRI | H AC # OMe TRI tBu tBu TRI | | | | comme schema 3 I ou 4 L I AC # N2H3 H # OMa TRI tBu tBu TRI | | | | J AC # OH # tBu tBu | | K AC # OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sér Thr Cys Mét Leu Gly TRI tBu tBu TRI | | | | A BOC-OH Z-OH Z-ONP H-OMe DPC-OH H-OMe TRI-OMe BOC-OH BOC-OH H-OMe tBu tBu TRI | 1)-5) | | 1)-5) B DPC # OMe H-OMe BOC # OMe tBu tBu | | C DPC # N2H3 H # OMe tBu tBu TRI BOC 1)-5) OMe | | | D DPC # OMe BOC # OH tBu tBu TRI | | E DPC # OH H # OH TRI tBu tBu TRI | comme schéma 4 G | | | F BOC # N2H3 H OH TRI tBu tBu TRI | 1) | | | G BOC OH # tBu tBu | | H BOC # OH # tBu tBu | | I BOC # 3) Schéma 6 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sér Thr Cys Mét Leu Gly Bzl Bzl # A BOC-OSU BOC-ONP BOC-OH BOC-ONP BOC-OH H-OBzl H-OBzl BOC-N2H3 Z # OEt 2)4)5) B BOC # OBzl H # OEt 1) C H # OBzl BOC # OEt 3) D BOC # OBzl BOC # OH E H OBzl H # OH 2)4)5) F GOC # OBzl G H # OBzl 3) H BOC # OBzl I BOC # OH Schéma 7 Bzl 2) 5) | J BOC # OBzl Bzl | K H # OBzl Bzl Bzl | | L BOC 3) OBzl M BOC # OH # N BOC # OH # O BOC # 2) OH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Cys Gly Asn Leu Sér Thr Cys Mét Leu Gly Bzl Bzl | | A BOC-OSU BOC-CNP BOC-OH BOC-ONP BOC-OH H-OBzl H-N2H2Z BOC-N2H3 Z # OEt 2)4)5) B BOC # OBzl H OEt C H # OBzl BOC # OEt 3) D BOC # OBzl BOC # OH E H # OBzl H OH 2)4)5) F BOC # OBzl G H # OBzl 3) H BOC # OBzl Schéma 8 I BOC # OH Bzl 2)5) | J BOC # N2H2-Z Bzl | K H # N2H2-Z Bal Bzl | | L BOC # N2H2-Z M BOC # N2H3 # N BOC # N2H3 # 1) O BOC # OH 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Thr Tyr Thr Gin Asp Fhé Eis Lys Leu Gin Thr Phé Pro Gin Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro tBu tBu | | OH Z # OH H # OMe tBu tBu | | Z # OH 2) BOC tBu tBu | | | Z # N2H3 H # OH | 3) Z # OH Z) tBu tBu tBu tBu BOC tBu tBu ( | | | | | | | OH DPC # N2H3 H # ) tBu tBu tBu tBu BOC tBu tBu Z) | | | | 1) | | | OH H # NH2. DPC( # ) tBu tBu tBu tBu BOC tBu tBu Z) | | | | | | | 4) 5) # NH2 DPC( # tBu tBu ) tBu tBu tBu tBu BOC | | | | | | | H # NH2 Schéma 9 11 12 13 14 15 16 Thr Tyr Thr Gin Asp Phé tBu tBu tBu OtBu Z ( | | | | A DPC# # OH Z # OH Z # OH Z-ONP Z # ONP H # OMe OtBu | 3) B Z # OMe OtBu | C H # OMe OtBu #) | D Z # OMe OtBu # E H OMe tBu OtBu | 3) # F Z # OMe tBu OtBu # # OMe G E # tBu tBu OtBu # # # OMe E Z # tBu tBu OtBu # # # I H # OMe tBu tBu tBu OtBu H # # # # # J DPC # OMe tBu tBu tBu OtBu H # # # # # K DPC # N@H@ Schéma 10 17 18 19 20 His Lys Leu Gln BOC # A Z # N2H3 Z # OH Z # OMe H # OMe BOC # 2) B Z # OMe BOC # C Z # N2H3 BOC # 1) D Z # OMe BOC # E H # OMe BOC # 1) F Z # OMe BOC # G Z # N2H3 Schéma 11 21 22 23 24 26 27 28 Thr Phé Pro Gln Ala Ile Cly tBu # A Z # OH Z # OH Z # ONP Z # OH Z # OH H # OMe 1)-5) B H # OH Z # OMe tBu # 2) C Z # OH H # OMe 3) D Z # OMe E H # OMe tBu # 2) OMe F Z # tBu OMe # G H # tBu # H H # OH tBu # 3) I Z # OH tBu # J H # OH tBu tBu # 2) # K Z # OH tBu tBu # # L H # OH Schéma 12 29 30 31 32 Val Gly Ala Pro A Z # ONP Z # OH Z # ONP H # NH2 3) B Z NH2 C B # NH2 1)-5) D Z # NH2 E H NH2 3) F Z # NH2 G H # NH2 Schéma 13 EXEMPLE 1 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly Val-Gly-Ala-Pro-NH2, Tyr22-calcitonine M Dans 1,2 ml d'acide chlorhydrique concentré, on dis sout, à 0 , 50 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-C Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asn(OtBu)-Phé-Asn Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly Va-Gly-Ala-Pro-NH2 et laisse reposer pendant 10 minutes à 0 . On refroidit ensuite avec de la glace carbonique, établit un vide poussé et concentre la solution jusqu consistance sirupeuse en portant lentement la température jusqu'à 00. Après avoir ajouté 2 ni d'eau, on lyophilise, dissout le résidu dans un millilitre d'eau et, pour transformer en acétate, -filtre lentement à travers une colonne d'un échangeur d'ions faiblement basique (Merck N0 II) qui présente un diamètre de 7,5 mm et une longueur de 100 mm et est équilibrée avec une solution 0,02-normale d'acide acétique. On rince ensuite avec une solution OS02-normale d'acide acétique jusqu'à avoir une réaction négative à la foline, concentre l'éluat jusqu 2 ml environ et lyophilise.On équilibre le produit ainsi obtenu.(acétate de Tyr22-calcitonine M) en laissant reposer à l'air libre, à l'humidité ae l'air. C'est une-pouire blanche amorphe. Dans une chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium ("Aloe D-O" de la Firme Camag à Muttenz, avec addition de 12 % de plâtre), elle présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,48 dans le système 52 Rf = 0,60 dans le système 79. Dans une électrophorèse en couche mince sur de la cellulose (plaques préparées "Avicel" n 1440 de la Firme Schleicher & Schuell), le composé migre, à un pH de 1,9 (tampon constitué par 95,2 mi d'acide acétique glacial, par 26,5 ml d'acide formique et par 1.000 ml d'eau), sous 16 volts/cm, de 3,7 cm vers la cathode au cours d'une heure et demie. L'amide dotriacontapeptidique protégé est préparé, par exemple, de la façon suivante On fait réagir le composé de formule Z-Tyr(tBu)-OH, on solution dans du tétrahydrofuranne, sur du chlorccarbonate d'isobutyle pour obtenir l'anhydride mixte que l'on condense en peptide avec le sel de triéthyl-ammonium de la proline /en solution dans un mélange (4 : l) de diméthylformamide et d'eau].On hydrogène le dipeptide dans du méthanol avec du charbon au palladium, fait réagir en solution dans du diméthyl formamide sur le composé de formule Z-Thr(tBu)-OSU pour obtenir le tripeptlde de formule Z-Thr(tRu)-Tyr(tRu)-Pro-OH et, en passant à nouveau par l'anhydride mixte avec du chlorocarbonate d'isobutyle, condense ce dernier en le composé de formule Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH avec du chorhydrate de H-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH [préparé en condensant H-Ile-Gly-OMe avec Z-Ala-ONP dans du diméthylformamide, en hydrogénant l'ester méthylique tripeptidique protégé obten, dans du méthanol, avec du charbon au palladium, en condensant le composé de formule H-Ala-Ile-Gly-OMe ainsi obtenu, dans du diméthylformamide, avec le composé de formule Z-Thr(tBu)-OSU, en hydrogénant le carbobenzoxy-composé, dans du méthanol, avec au charbon au palladium pour obtenir le composé de formule H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe, on saponifiont l'ester dans du mé méthanol avec une solution normale d'hydroxyde de sodium, en condensant dans du dinéthylformamide, avec Z-Gln-ONF, le composé de formule H-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH ainsi obtenu et en hydro séant le composé de formule Z-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH dans une solution chlorhydrique aqueuse à 80 9 de méthanol, en présence de charbon au palladium7. Par hydrogénation catalytique dans de l'acide acétique à 80 %, on élimine le groupe carbobenzoxy et convertit en le dodécapeptide de formule Z-Asnjy5(3OC)?bÉHI5TbT(tbu)ïr(tRu)Pro-G1fl-flhr(tnu)A1aI1e Gly-OH lloctapeptide partiellement protégé ainsi obtenu, dans diméthylformamide à 90 %, avec une solution fraîchement Aparée de Z-Asn-Lys(BOO)-Mié-His-N3 dans du diméthylformamide /préparé en condensant Z-Lys(BOC)-ONP avec N-Phé-OMe dans le diméthylformamide, en faisant réagir Z-Lys(BOC)-Phé-OMe sur de l'hydrate d'hydrazine pour obtenir l'hydrazide, en transforme ment ce dernier en azide avec du nitrite de tertio-butyle et en condensant avec H-His-OMe, en hydrogénant dans du méthanol, avec du charbon au palladium, le composé de formule Z-Lys(BOC)- Phé-His-OMe obtenu, en condensant avec Z-Asn-ONP, dans du dimé-thylrormamide, le composé de formule H-Lys(BOC)-Phé-His- oea obtenu, en transformant en hydrazide, avec de l'hydrate d'hydrazine dans du méthanol, le composé de formule Z-Asn Lys (ROC )-Phé-His-O;a et en faisant réagir lthydrazide dans du diméthylformamide sur du nitrite de sodium et de l'acide chlorhydrique pour obtenir l'azide/.Après hydrogénation catalytique dans de l'acide acétique à 80 %, le dodécapeptide précité est condensé, dans une solution de diméthylformamide, avec Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-N3 (préparé en condensant Z-Asp(OtBu)-ONP avec H-Phé-OMe dans du diméthylformamide, en hydrogénant Z-Asp(OtBu)-Phé-Ome dans du méthanol avec addition d'acide chlorhydrique dans du dioxanne, et en présence de charbon au palladium, en condensant le chlorhydrate obtenu de H-Asp(OtBu)-Phé-OMe avec Z-Gln-ONP dans du diméthylformamide et de la triéthylamine, en hydrogénant Z-Gln-Asp(OtBu)- Phé-OMe dans du méthanol avec addition d'acide chlorhydrique dans du dioxanne et en présence de charbon au palladium; en condensant le composé de formule H-Gln-Asp(OtRu)-?hé-oe-e obtenu dans du chlorure de méthylène avec Z-Thr(tRu)-CH en présence de dicyclohexyl-carbodiimide, en hydrogénant Z-Thr(tRu)-Gln- Asp(OtBu)-Phé-OMe dans du méthanol avec du charbon au palladium, en condensant H-Thr(TBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe avec Z-Tyr(tBu) OH dans de l'acétonitrile en présence de dicyclohexyl-carbodii- mide, en hydrogénant le composé de formule Z-Tyr(TBu)-Thr(tBu)- Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe dans du diméthylformamide en présence de charbon au palladium, en condensant H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln- Asp(OtBu)-Phé-OMe dans l'acétonitrile avec Z-Thr(tBu)-OH en présence de dicyclohexyl-carbodiimide, en transformant en hydrazide, avec de l'hydrate d'hydrazine dans du méthanol, le composé de formule Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu) Phé-OMe obtenu et en faisant réagir l'hydrazide, dans du dimé- thylformamide, sur du nitrite de sodium et de acide chlorhydrique trinormal pour obtenir l'azide) et en faisant réagir le composé de formule Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu) Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala Ile-Gly-OH qui s'est formé, à l'aide de dicyclohexyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide dans du diméthylformamide sur le composé de formule H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (préparé en condensant H-Pro-NH2 avec Z-Ala-ONP dans du diméthylformamide, en hydrogénant le composé de formule Z-Ala-Pro-NH2 obtenu, dans une solution chlorhydrique aqucuse d'éthanol en présence de charbon au palladium, en condensant Z-Gly-CNP dans du diméthylformamide, en hydrogénant dans du diméthylformamide, en pré sence de charbon au palladium, le composé de formule Z-Gly Ala-Pro-NH2 obtenu, en-condensant le composé de formule H Gly-Ala-Pro-NH2 avec Z-Val-ONP dans du diméthylformamide et en hydrogénant le composé de formule Z-Val-Gly-Ala-Pro-HN2 dans du méthanol à 80 %' en présence de charbon au palladIum) afin d'obtenir l'amide docosapeptidique totalement protégé.Ce composé est purifié à l'acide d'une répartition de Craig dans un système solvant constitué par un mélange (10 : 3 : 5 : 6) de méthanol d'un tampon de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, et ensuite hydrogéné dans de l'acide acétique à 80 %.En dissolvant dans du méthanol et versant goutte-à-goutte dans une solution laqueuse décinormale de carbonate de sodium, on obtient la forme exempte d'acétate qui, à l'aide de dicyclohexyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide, est condensée avec BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-OH pour donner l'amide dotriacontapeptidique t-otalement protégé. Ce composé est purifié par ure répartition de Craig dans un système constitué par mi mélange (11 : 3 : 6 : 7) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone0 On prépare avantageusement comme suit l'amide docosapeptidique protégé l. Z-Try(tBu)-Pro-OH Dans 130 ml de tétrahydrofuranne absolu, on dissout 12,95 g de Z-Tyr(tBu)-OH, -ajoute 3,ö ml de N-méthyl-morpholine, refroidit la solution à - 22 et ajoute goutte-à-goutte, au cours de quatre minutes, 4,79 ml de chloroformiate d'isobutyle.On agite pendant 30 minutes à -10 la solution louche obtenue, la refroidit ensuite à -30 , y ajoute une solution de 6,03 g de proline dans 110 ml de diméthylformamide à 80 % et laisse la solution limpide obtenue reposer pendant 30 minutes à - 10 , pendant deux heures à 0 , puis pendant 13 heures à la température ambiante On concentre la solution jaune limpide, dissout l'huile jaune foncée dans de l'acétate d'éthyle et lave à quatre reprises avec une solution aqueuse diluée d'acide citrique, ainsi qu'avec de l'eau, jusqu'à ce que l'eau de lavage présente une réaction neutre. On sèche sur du sulfate de so- dium la phase obtenue à l'acétate d'éthyle.Dans un chromatogramme an coucha mince sur du gel de silice, l'écume blanche qui s'est formée présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,78 dans le système 115 Rf = 0,40 dans le système 45 Rf = 0,37-dans le système 43 C 2. H-Tyr(tBu)-Pro-OH Dans 118 ml de méthanol, on dissout 11,75 g de Z-Tyr(tBu)-Pro-OH e-t hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène, an ajoutant 2,35 g d'un charbon à 10 % de palladium. Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentre et poursuit aussitôt le traitement de l'huile obtenue 3.Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-OH On dissout dans 39 ml de diméthylformamide l'huile obtenue sous 2, refroidit la solution limpide dans un bain de glace et ajoute 2,81 ml de N-méthyl-morpholine, ainsi que 12,2 g de Z-Thr(tBu)-OUS solide. On laisse la solution obtenue reposer pendant 23 heures à la température ambiante, concentre, dissout l'huile jaune-brun obtenue dans de l'acétate éthyle et lave à trois reprises avec une solution diluée d'acide citrique, puis avec de l'eau jusqù'à ce que l'eau de lavage présente une réaction neutre. après avoir séché à l'aide de sulfate de sodium la phase obtenue à l'acétate d'éthyle on la concentre. On obtient une écume blanche qui est soumise à une répartition à contre-courant uivant Craig on répartit 16,5 g au produit sur les cinq premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : 20 ml chaque fois), en utilisant comme système solvant un mélange (4 : 1 : 1 : 3) de méthanol, d'eau, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone. On procède à une répartition multiplicative en 836 stades (rmax = 128, K = 0,18).On concentre sous le vide de la trompe à eau, à une température de bain de 400, les fractions pures obtenues (élé- ments de répartition n 120 à 135) et sèche à 400 sous un vide poussé. Le point de fusion est de 90 - 940 et le pouvoir rotatoire spécifique est [&alpha;]20D = - 230 (c = 1 dans le méthanol). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice Rf = 0,79 dans le système 115 Rf = 0,84 dans le système 100 Rf = 0,87 dans le système 52. 4. H-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe Dans 107 ml de tertio-butanol à 80 %, on met en suspension 4,97 g de Z-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe (cfo le brevet belge 737.890) et hydrogène avec de l'hydrogène en ajoutant 1,0 g d'un charbon à 10 % de palladium, d'abord pendant deux heures à la température ambiante, puis à 40 jusqu'à ce que l'absorption d'hydrogène soit terminée. On filtre alors, concentre, dissout l'huile d'un jaune rougefâtre dans du tertiobutanol et lyophilise. La poudre blanche obtenue présente un point de fusion de 243 - 2Li40; dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice. Rf = 0,30 dans le système 100 Rf = 0,44 dans le système 1150 5. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Tyr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe Dans 40 ml de diméthylformamide, on dissout 4,94 g de Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-OH, ajoute au tout 3,95 g de Xi-Gln- Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe, anisi que 1,07 g de N-hydroxy-succinimide, refroidit la solution obtenue à 0 dans un bain de glace et ajoute au tout 2,07 g de dicyclohexyl-carbodiimide solide. On laisse la solution reposer pendant 15 heures à la température ambiante, sépare par filtration la dicyclohexylurée qui a précipité, ajoute de l'eau au filtrat et sépare par filtration le précipité qui s'est formé.On lave ce dernier avec de l'éther et le reprécipite ensuite dans un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. On obtient une poudre qui s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince et qui présente un point de fusion de 187 188a ; dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice Rf = Q,90 dans le système 100 Rf = 0,78 dans le système 45 Rf = 0,70 dans le système 115. 6. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH x H2O Dans 110 ml de méthanol à 90 , on dissout 6,43 g de 11 ester méthylique protégé de l'octapeptide obtenu sous 5), ajoute rapidement au tout, goutte-à-goutte tout an agitant fortement, à la température ambiante, 16,53 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium et agite ensuite pendant 10 minutes encore à la température ambiante. On ajoute à la solu Giton 92 ml d'eau, filtre, et ajoute le filtrat à 390 ml d'une solution 0,05-normale d'acide chlorhydrique refroidi à la glace que l'on a préparée.On agite la suspension pendant trois heures à 00, filtre et lave le résidu de filtration avec de l'eau jusqu'à ce qu'il soit exempt de chlorure0 On obtient une poudre blanche, qui s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince0 Cette poudre fond à-224 2250 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]20D = - 54 (c = 1 dans le méthanol)0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice Rf = 0,67 dans le système- 100 Rf @ 0,38 dans le système 45 Rf = 0,67 dans le système 1150 7.H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH x CH3COOH Dans 40 ml d'acide acétique à 80 %', on dissout 1,30 g clu produit décrit sous 6, et hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène, tout en ajoutant 75 mg d'un charbon à 10 ,; de palladium.On filtre, concentre le filtrat jusqu'à la moitié, ajoute au tout de l'acide acétique glacial et lyophilise0 On dissout le lyophilisat dans du tertio-butanol à 80 %, lyo utilise à nouveau et sèche ensuite à 400 sous un vide poussé, La poudre blanche obtenue présente dans un chromatogramme en couche mince les valeurs de Rf suivantes : Rf = 0,37 dans le système 70 Rf = 0,21 dans le système 100 Rf = 0,36 dans un système constitué par un mélange (9 : 1) d'isopropanol et d'ammonique concentrée. 8. Z-Asn-Lys(BCC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-OH Dans G, 2 ni de diméthylformamide, on dissout 1,34 g de Z-Asn-Lys(BOC)Phé-His-NHNH2 (cf. brevet belge 757.890), refroidit la solution à - 200 et ajoute 1,40 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, ainsi que 0,252 ml de nitrite de tertio-butyle. On laisse la solution reposer pendant 15 minutes à - 15 , ajoute 0,724 ml de Néthyl-di-isopropylamine, refroidit ensuite à - 20 et ajoute une solution de 1,12 g de H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)- Ala-Ile-Gly-OH dans 24 ml de diméthylformamide.On laisse la solution reposer pendant 16 heures à +5 , concentre ensuite largement et ajoute de l'éther. On malaxe bien à deux reprises avec de 1'éther le précipité qui s'est formé. On sépare par filtration la poudre obtenue, la lave avec de l'eau jusqu a ce qu'elle soit exempte de chlorure, la dissout dans de l'acéto- nitrite à 70 % et la fait u nouveau précipiter en ajoutant de l'acétonitrile à 100 @. Pour la purifier davantage, on la soumet à une répartition à contre-courant suivant Craig. A cet effet, on répartit 1,72 ml du produit dans les trois premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 10 ml),- en utilisant comme solvant un mélange (10 : 7 : 5 o 4) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant constitué par une solution de 28,6 ml d'acide acétique glacial et de 10,25 g d'acétate d'ammonium dans 960 ml d'eau. On procède à une répartition multiplicative en 200 stades (rmax = 1,902 K = 19). A partir des fractions pures obtenues (éléments de répartition lia 174 à 200), , on sépare l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé0 On obtient le docosapeptide protégé. .Dans un chromatogramma eu couche mince sur du gel de silice0 Rf = 0,46 dans le système 70 Rf = 0,29 dans le système 100 Rf = 0,32 dans un système constitué par un mélange (9 : 1) d'isopropanol et d'ammoniaque concentrée. 9. H-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-OH Dans 110 ml d'acide acétique à 80 %, on dissout 930 mg du produit obtenu sous 8), et, tout en agitant 100 mg d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène. On filtre, concentre largement le filtrat, y ajoute de 1' acide acétique glacial, puis lyophi- lise. On dissout le produit obtenu dams du tertio-butanol à 70 %, lyophilise à nouveau et sèche ensuite à 400 sous mi vide poussé. 10. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC) Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH Dans 3,2 ml de diméthylformamide, on dissout 770 mg de Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-NHNH2 (cf. brevet belge 737 890), refroidit à - 20 la solution légèrement trouble et ajoute 588 l d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, ainsi que 98 l de nitrite de tertio-butyle. On laisse la sqlutio-n reposer pendant 15 minutes à - 15 , ajoute ensuite une solution de 778 mg du produit décrit sous 9) dans 14 ml de diméthylformamide, ainsi que 0,303 ml de N-éthyl-di-isopropylamine et agite la solution obtenue pendant 5 heures et demies tout en refroidissant a la glace ; pendait ce temps, on ajoute en six portions 0,076 ml de N-éthyl-di-isopropylamine.On laisse la solution reposer pendant 15 heures à + 5 , la verse ensuite goutteà-goutte dans de l'éther, dissout dans du diméthylformamide le précipité blanc obtenu et ajoute le tout goutte-à-goutte à une solution 0,02-normale d'acide chlorhydrique qui est refroidie à 0 (acide auquel on ajoute > pour 100 ml en volume, 10 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium). On dissout dans de l'acétonitrile à 80 % le produit alors obtenu et précipite à 500 avec de l'eau. Pour purifier davantage, on reprécipite le produit dans un mélange de diméthylformamide et d'éther ainsi que dans un mélange d'acétonitrile et d'eau. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice Rf = 0,50 dans le système 100 Rf = 0,63 dans le système 70. 11. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC) Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 8 ml de diméthylformamide, on dissout 755 mg du produit décrit sous 10), ajoute à la température ambiante à la solution 139 mg de H-Val-Gly-Ala-?ro-NH2 (cf. brevet belge 737 890), 47 mg de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 84 mg de dicyclohexyl-carbodiimide, puis agite pendant 18 heures à 450o On verse ensuite la solution goutte-à-goutte dans de l'éther et soumet à une répartition à contre-courant suivant Craig, la poutre blanche qui a précipité : on répartit 844 mg de l'amide docosapeptidique sur les cinq premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : 3 ml chaque fois), en utilisant comme système solvant un mélange (10 : 3 : 5 : 6) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8)o On effectue une répartition multiplicative en 400 stades (rmax = 133, K = 0,5). A partir des fractions pures obtenues, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 4G sous un vide poussé dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, l'amide docosapeptidique pur protégé présente une valeur de Rf de 0,46 dans le système 100o 12.H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lyn(BOC) Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 24 ml d'acide acétique à 80 %, on dissout 233 mg du produit décrit sous 11), et tout en agitant 40 mg d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène pendant 18 heures à la température ambiante avec de l'hydrogène. On filtre alors, concentre presque à sec, dissout dans de l'acide acétique glacial et lyophilise. On dissout le lyophilisat obtenu dans peu de mé thanol, ajuste le pH à une valeur comprise entre 7 et 8 à l'aide d'une solution saturée d'hydrogène-carbonate de sodium et verse ensuite goutte-à-goutte dans une solution décinormale de carbonate de sodium.On obtient une poudre blanche qui, dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,34 dans le système 100 Rf = 8,67 dans le système 70 Rf = 0,57 dans le système 43 E, 13. BOC-Cys-Cly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC) Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 1,16 ml de diméthylformamide, on dissout à chaud 171 mg de l'amide docosapeptidique décrit sous 12), ainsi que 83,5 mg du décapeptide protégé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu- Séc(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-OH, ajoute ensuite à la température ambiante 15,9 mg de N-hydroxy-succinimide solide et 21,4 mg de dicyclohexyl-carbodiimide puis agite pendant trois heures et demie à 45 .On verse ensuite la solution goutteà-goutte dans 23 ml d'éther exempt de peroxyde et soumet à une répartition à contre-courant, suivant Craig, en vue de.le purifier, le précipité obtenu sous la forme d'une poudre blanche : on répartit 234 mg du produit sur les quatre premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : 3 ml chaque fois), en utilisant comme solvant un système constitué par un méiange (11 : 3 : 6 : 7) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme est de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8). On effectue une répartition mul tiplicative en 260 stades au total (rmax = 60, K = 0,3).A partir des fractions pures obtenues, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé ; l'amide dotriacontapeptidique protégé présente, dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf suivantes Rf = 0232 dans le système 70 Rf = 0,48 dans le système 100 Le composé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)- Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-OH peut être préparé comme suit (cf. brevet belge 737.890). 1. Z-Asn-Leu-OMe Dans 100 ml de diméthylformamide fraîchement distillé, on dissout 16,7 g de H-Leu-OMe et 46,0 g de Z-Asn-ONP. On laisse la solution reposer pendaut 19 heure à 250. On ajoute ensuite au tout 1,2 litre d'eau et sépare par essorage le précipité cristallin. On sèche le dérivé dipeptidique à 400 sous vide et le recristallise ensuite à deux reprises dans un mélange de méthanol et d'eau. Il fond à 180 - 1810 et présente un pouvoir rotatoire spécifique 20 2.H-Asn-Leu-OMe Dans 400 ml d'un mélange (9 : 1) de butanol tertiaire et d'eau, on disseut 15,0 g de Z-Asn-Leu-OMe et hydrogène en présence de 2 E; d'un charbon à 10 % de palladium. Lorsque l'hydrogénation est terminée, on sépare le catalyseur par essorage et concentre à 40 . On utilise ensuite directement le résidu. 5. Z-Gly-Asn-Leu-OMe Dans 15 ml de diméthylformamide, on dissout 4,4 n. moles de H-Asn-Leu-OMe et ajoute ensuite 5,5 mOmoles d'éther p-nitrophénlyique de Z-grycine. On abandonne la solution jaune lipide pendant 18 heures à 270. On concentre ensuite à 400 sous un vide poussé, et ajoute au résidu de l'acétate d'éthyle, ce qui fait qu'il cristallise0 Au bout d'une heure à 00, on essore et sèche0 On met alors à nouveau le produit en suspension dans 25 ml d'acétate d'éthyle, malaxe, essore et sèche i le composé fond à 1590. 4. H-Gly-Asn-Leu-OMe out en chauffant, on dissout 2,0 g de Z-Gly-Asn-Lou- OMe dans 20 ml de méthanol et hydrogène avec 200 mg d'un charbon à 10 % de palladium jusqu'à cessation de l'absorption d'hydrogène. On sépare le catalyser par filtration et concentre le filtrat à sec à une température de bain de 40 , ce qui fait que 1'ester méthylique du tripeptide est directement obtenu sous forme cristalline pure (1,34 g fondant à 138 - 139 ). 5. BOC-Gys-(TRI)-Gly-Asn-Leu-OMe Dans 200 ml de diméthylformamide, on dissout 5,7 g de H-Gly-Asn-Leu-OMe, 9,2 g de BOC-Cys(TRI)-OH et 4,7 g de N-hydroxy-succinimide, refroidit a 0 et, tout en agitant, ajoute sous forme solide 5,57 g de dicyclchexyl-carbodiimide. On agite pendant une heure encore à Ca, laisse ensuite reposer pendant une nuit à 200 environ, concentre sous un vide poussé jusqu un volume de 100 ml environ et sépare par filtration la dicy clohaxylurée qui s'est formée.On poursuit ensuite la concentration du filtrat sous un vide poussé jusqu formation d'une masse collante, dissout cette dernière dans 200 ml de n-butanol et lave successivement avec de 11 eau, avec une solution à 5 % d'acide tartrique, avec une solution normale de bicarbonate de sodium et à nouveau avec de l'eau. On concentre alors la solution jusqu'à un volume de 50 ml environ et fait précipiter à partir de cette dernière le dérivé tétrapeptidique, en ajou-tant 300 ml d'éther de pétrole.On purifie par reprecipitation dans un mélange de diméthylformamide et d'eau et dans un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole et obtient ainsi le dérivé tétrapeptidique sous la forme d'une poudre amorphe fondant à 145 - 148 . Le composé obtenu présente, dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,68 dans le système 115 Rf = 0,59 dans l'acétone Rf = 0,60 dans un mélange (8 : 2) de chloroforme et de méthanol. 6. BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-NHNH2 Dans 22 ml de méthanol, on dissout 2,7 g de BOC Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-OMe, refroidit à 0 et ajoute 2,2 ml d'hydrate d'hydrazine. Au bout de 30 minutes environ à 00, on laisse la solution reposer pendant une nuit à 200 environ, refroidit à nouveau à 0 et ajoute alors 102 ml d'une solution glacée à 3 % d'acide acétique.On homogéiiéise bien le précipité, le sépare par filtration et le lave sur I' entonnoir filtrant avec une solution glacée à 3 % d'acide acétique jusqu avoir une réaction négative à la foline du liquide de lavage, puis seiche ensuite, On obtient 2,2 g de l'hydrazide tétrapeptidique chromatographiquement pur qui présente un point de décomposition de 1950 environ0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, ce composé présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,30 dans un mélange (8 : 2) de chloroforme et de méthanol Rf = 0,53 dans un melange (9 : 1) d'acétone et de méthanol. 7. BOC-Mét-Leu-Gly-OMe Dans 50 ml de méthanol, on hydrogène avec 5CO mg d'un charbon à 10 % de palladium, jusqu a cessation de 11 absorption d'hydrogène, 6,72 g de Z-Leu-Gly-OMe. On débarrasse la solution du catalyseur par filtration et concentre sous vide jusqu 10 ni environ, dilue avec 30 ml de diméthylformamide, et concentre à nouveau sous un vide poussé jusqu'à 2Q ml environ. Tout en refroidissant à la glace, on ajoute au tout, 7,7 g de BOC-Mét- OCP, laisse la solution limpide reposer pendant 6 heures à 20' et évapore le solvant sous un vide poussé. On dissout le résidu huileux dans de l'acétate d'éthyle et lave successivement à 00 avec une solution à 5 % de carbonate de potassium, avec une solution 0,2-normale d'acide chlorhydrique et finalement avec de l'eau, sèche la phase organique sur du sulfate de sodium et concentre à sec, On cristallise le- résidu huileux dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole ; il fond à 126 - 1270 sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,66 dans le systeme 430et elle est de 0,58 dans un système constitué par un mélange (1 1) de toluène et d'acétone. 8. Chlorhydrate de H-Mét-Leu-Gly-OMe Dans 13 mi d'une solution 3,8-normale d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, on dissout 3,24 g de BOC-Mét-Leu-Gly-OMe et laisse reposer pendant 30 minutes à 200. En ajoutant 100 ml d'éther de pétrole, on fait précipiter le chlorhydrate de l'ester tripeptidique sous la forme d'une masse collante, puis sépare par décantation la solution qui surnagez En malaxant avec 100 ml d'éther exempt de peroxyde à 0 , on obtient un produit linement pulvérulent que l'on sépare par filtration et sèche à la température ambiante dans un exciccateur, sur de l'hydroxyde de potassium, jusqu'à constance de poids.Le composé est chromatographiquement pur, mais amorphe, et fortement hygroscopique, Sur du gel de silice, il présente les valeurs de Rf suivantes Rf = O, 48 dans le système 43 C Rf = 0,35 dans un système constitué par un mélange (1 : 1) de toluène et d'acétone. 9. TRI-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OMe Dans 32 ni d'acétonitrile, on dissout 3,22 g de TRI Cys(TRI)-OH, 1,97 g de chlorhydrate de H-Mét-Leu-Gly-OMe et 0,74 ml de triéthylamine, puis ajoute sous forme solide 1,54 g de dicyclohexyl-carbodiimide. On laisse reposer pendant 16 heures à 200 la solution d'abord limpide de laquelle il se sépare de la dicyclohexylurée. On refroidit alors à 0 , ajoute au tout 100 ni d'eau, homogénéise et sépare par filtration le précipité blanc. On le lave avec de l'eau, le sèche et le malaxe ensuite finement pendant 5 minutes à 40 avec 50 ml d'acétate d'éthyle On sépare par filtration à la température ambiante la dicyclohexylurée insoluble et le lave avec 20 ml d'acétate d'éthyle0 A partir du filtrait, on fait précipiter le dérivé tétrapepti- dique sous la forme d'un précipité gélatineux en ajoutant 900 ni d'éther de pétrole, sépare par filtration et sèche. En reprécipitamnt ce produit brut dans un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, on obtient un produit chromatographiquement unitaire qui fond à 215 environ.Sur du gel de silice, il préseoete les valeurs de Rf suivantes : Rf = 0,57 dans un système constitué par un mélange de chloroforme et de méthanol (97 : 3) Rf = 0,51 dans l'acétate de n-butyle. 10. Acétate de H-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OMe A une solution de 1,862 g de TRI-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly- OMe dans 16 ml d'acide acétique glacial, on aboute goutte-àgoutte 4 ml d'eau, de manière que le précipité formé se dissolve à nouveau chaque fois. On agite la solution limpide pendant une heure à la température ambiante et y ajoute ensuite, à 0 , 12 ml d'eau, filtre et lave le précipité avec de l'acide acétique à 50 % froid. On concentre le filtrat à 300 sous un vide poussé jusqu a obtention d'une huile qu'on malaxe avec de l'eau, puis lyophilise. On sèche la poudre blanche obtenue pendant 15 heures sous un vide poussé sur de l'hydroxyde de potassium. .Dans un chromstogramme en couche mince sur du gel de silice, le produit s'avère unitaire. Dans un système consti- tué par ?n. mélange (7 : 3) de toluène et d'acétone, la valeur de Rf est de 0,28 et elle est de 0,48 dans un système constitué par un mélange (95 : 5) de chloroforme et de méthanol. 11. N-Thr(tBu)-OMe Dans 200 ml d'acide acétique glacial, et avec 3 g d'un charbon à 10 C% de palladium, on hydrogène à la température ambiante 12,92 g (40 m.moles) de Z-Thr(tBu)-OMe. L'absorption d'hydrogène est terminée au bout d'une heure. On débarrasse la solution du catalyseur par filtration et la concentre à 350 sous le vide de la trompe à cau. Aprés séchage à 35 sous un vide poussé on obtient 7,3 g d'une huile qui est unitaire d'après un chromatogramme en couche mince et que l'on utilise directement pour la suite du traitement. 12. DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-OMe Dans 500 ml de chloroforme, on reprend 19,) g (38,6 m.moles) du sel de cyclohexylamino de DPC-Sér(tBu)-OH, puis secoue à 00 à trois reprises avec 25 ml d'une solution normale d'acide citrique et à cinq reprises avec 40 ml d'une solution semi-saturée de chlorure de sodium. Après avoir séché la solution sur du sulfate de sodium, on la concentre et reprend l'écume obtenue dans 250 ml d'acétate d'éthyle. On ajoute au tout 5,36 ml (38,6 m.moles) de triéthylamine, refroidit la solution à - 10 et, tout en agitant, ajoute 5,16 ml (38,6 m. moles) de chlorocarbonata d'isobutyle. On agite pendant 10 minutes à " 100 et ajoute ensuite goutte-à-goutte une solution (refroidie à - 120) de 7,3 g (38,6 mOmoles) de H-Thr(tBu)-OMe dans 100 ni d'acétate d'éthyle, de manière que la température réactionnelle ne dépasse jamais - 10 . Lorsque l'introduction est terminée, on agite pendant une heure encore à - 100 et laisse ensuite reposer pendant une nuit à la-température ambiante. On débarrasse la solution par filtration du chlorhydrate de triéthylamine qui s'est formé et la lave à 00 à trois reprises avec chaque fois 20 ml d'acide citrique normal et à cinq reprises avec une solution saturée de chlorure de sodium, sèche et concentre. On obtient 22,07 g de produit brut sous la forme d'une huile. Pour purifier cette dernière, on en chromatographie un graLn- sur une colonne de gel de silice (2,5 cm, 30 cm). Après une fraction de tête de 110 ml, on élue 787 mg de produit pur avec un mélange (1 : 1) d'éther de pétrole et d'acétate d'éthyle Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,51 dans un système constitué par un mélange (7 : 3) de toluène et d'acétone. 13. DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2 A 4,253 g (7,4 m.moles) de DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu) OMe dans 18 ml de méthanol, on ajoute 5,55 ml (environ 110 m. moles) d'hydrate d'hydrazine et laisse reposer pendant 10 heures à la température ambiante et pendant deux heures à 40 . On reprend la solution réactionnelle dans 450 ml d'acétate d'éthyle et lave à quatre reprises avec une solution semi-saturée de chlorure de sodium, Après avoir séché la solution sur du sulfate de sodium, on la concentre jusqu'à 15 ml environ et y ajoute 5 ml envinon d'éther de pétrole. Au cours de la nuit, il cristallise 3,17 g de 11 hydraaide fondant à 132 - 1340o DAns un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,40 dans un système constitué par un mélange ( 7 : 3) de toluène et d'acétone. 14. DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OMe A 2,284 g de DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2 dans 15 ml de diméthylformamide, on ajoute, à - 200, 6,5 ml d'une solution 1,53-normale d'acide chrorhydrique dans l'acétate d'éthyle et 0,51 ni de nitrite de tertio-butyle, puis agite pendant 15 mimutes à - 10 . Après avoir ajouté 1,4 ml de triéthylamine, on ajoute goutte-à-goutte une solution (refroidie à - 10 ) de 1,406 g d' acétate de H-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OMe dans 10 ml de diméthylformamide. Le pH de la solution réactionnelle est alors de 5 environ.En ajoutant deux gouttes de triéthylamine dans du diméthylformamide [2,8 ni de triéthylamine complétés à 10 ml avec au diméthylformamide], on ajuste le pH à une valeur de 7 à 8. Au bout de 5, 10 et 20 minutes, on porte à nouveau chaque fois le pH à une valeur de 7 à 8 avec deux gouttes chaque fois de la solution de triéthylamine. Ensuite, cette valeur reste constante. On maintient la solution réactionnelle pendant une heure à - 10 et pendant 15 heures à 00. On sépare ensuite par filtration le chlorhydrate de triéthylamine qui s'est formé et concentre le filtrat à 300 sous un vide poussé, jusqu'à obtention d'une huile.Par malaxage avec de l'eau, on obtient une poudre que l'on lave à l'eau et malaxe ensuite avec de l1eau et lyophilise. En malaxant à deux reprises avec 10 ml d'un mélange (1 ; 2) de benzène et d'éther de pétrole, on obtient à 1'état pur le dérivé hexapeptidique. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,42 dans un système constitué par un mélange (7 : 3) de toluène et d'acétone. 15. H-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OMe Dans 40 ml d'acide acétique glacial à 80 %, on discut, à 45 , 2 g de DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)Mét-Leu Gly-Ome et laisse ensuite reposer pendant une heure à 45 . On concentre ensuite sous vide jusqu'à un volume de 10 ml environ et lyophilise. On dissout le résidu, pour éliminer complètement l'acide acétique, dans 15 ml de tertio-butanol et 1,5 ml d'eau, puis lyophilise a nouveau. On obtient un résidu pulvérulent que l'on dissout dans 5 ml de méthanol et 20 ml d'acétate d'éthyle, puis fait à nouveau précipiter par addition de 150 ml d'éther de pétrole. Après avoir brièvement laissé reposer à 00, on filtre, lave avec de l'éther de pétrole et sèche. On ootient une poudre amorphe fondant à 1800 et ne renfermant plus, comme unique impureté, que des traces de 2-(p-biphénylyl)-propanol-(2). On utilise l'hexapeptide sous cette- forme pour la suite du traitement.Il présente dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice les valeurs de Rf suivantes Rf : 0,48 dans un système constitué par un mélange Rf : 0,54 dans un système constitué par un mélange (9 : 1) de chloroforme et d'acétone, Rf f 0,49 dans mi système constitué par un mélange (1 : 1) de toluène et d'acétone. 16. H-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Mét-Leu-Gly-OH Dans 16 ml de méthanol à 90 %, on dissout, à 450, 1,4 g d'ester méthlique de l'hexapeptide, refroidi à 20 (ce qui fait que le peptide précipite à nouveau partiellement ) et ajoute 4,32 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium0 On agite la suspension pendant 25 minutes à 220 (au bout de 15 minutes environ, tout s'est dissous en donnant une solution limpide) e-t on précipite ensuite l'hexapeptide sous la forme d'un précipité en fins flocons an ajoutant 4,32 ml d'acide chlorhydrique normal et 30 ml d'eau. On laisse encore reposer pendant 15 minutes à 00, filtre et lave à l'eau jusqu a ce que le filtrat soit exempt d'ions chlorure.Après séchage sur de l'hydroxyde de potassium et du pentoxyde de phosphore, on obtient 1,3 g de produit brut qu'en vue de purifier on homogénéise pendant 5 minutes à 80 avec un mélange de 25 ml de diméthylformamide et de 60 ml de benzène et fait précipiter en ajoutant 120 n1 d'éther de pétrole. Après avoir laissé reposer pendant 10 minutes à 00 on filtre, lave avec du benzène et de l'éther de pétrole, puis sèche.Le dérivé hexapeptîdique chromatographiquement pur que l'on obtient ainsi présente un point de décomposition de 2100 environ et est très difficilement soluble dans de nombreux solvants, Lors d'une chromatogra phie en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,)9 dans le système 45 Rf = 0,77 dans le système 52 Rf = 0,47 dans le système 100. 17. BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Mét-Leu Gly-OH Dans 8 al de diméthylformamide absolu, on dissout 1,04 g de BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-NH-NH2, refroidit à - 250 et ajoute lentement au tout, goutte-à-goutte, 0,92 ni d'une solution 3,6"normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, puis 0,179 ml de nitrite de tertio-butyle.On agite ce mélange pendant 1) minutes à - 100, refroidit à - 150 et verse le tout à la pipette dans une solution (refroidie à - 150) de 878 mg de H-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-(TRI)-Mét-Leu-Gly-OH et de 0,588 ml de triéthylamine dans 12 ni de diméthylformamide absolu. On agite à - 100 pendant 10 minutes environ et pendant trois heures à 0 . Pour maintenir une réaction faiblement basique (pH = 8 environ), on ajoute au début encore à deux reprises chaque fois 0,065 ml de triéthylamine. On laisse le mélange reposer pendant' 1.5 heures à. On et concentre ensuite sous un vide poussé jusqu'à consistance d'une bouillie. En ajoutant 50 ml de méthanol, on fait précipiter le dérivé décapeptidique. On chauffe la suspension pendant 5 minutes à 400, laisse reposer pendant 10 minutes à 0 , filtre et lave le précipité avec 20 ni de méthanol, En séchant sous un vide poussé sur de l'hydroxyde de potassium et du pentoxyde de phosphore, on obtient le dérivé -décapepti- dique pur qui présente un point de décomposition peu net à 220 - 230 environ. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, ce composé présente les valeurs de Rf sui vantes Rf = 0,28 dans un système constitué tar un mélange (8 : 2) de chloroforme et de méthanol. Rf = 0S55 dans le système 70 Rf = 0,75 dans le système 104 Rf = 0,59 dans le système 121A. 180 BOC-C!ys"Gly-Asn-eu-Sér(tBu) hrntBu)-Cys-Iét-Leu-Gly-OH Dans 170 ml de diméthylformamide chaud, on dissout 1,7 g de BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)- Mét-Leu-Gly-OH, et après refroidissement à la température ambiante, ajoute le tout goutte-à-goutte au cours d'une heure à une solution vigoureusement agitée de 2,5 g d'iode dans 500 ml de méthanol. On agite ensuite pendant une heure encore et décolore alors la solution refroidie à 0 , de façon presque com- plète, avec une solution normale de thiosulfate de sodium.Après avoir concentré la solution sous vide, finalement sous un vide toussé à 40 , jusqu'à 100 ml environ, on précipite conplètement avec de l t éther ce qui fait que l'huile qui se forme se solidifie rapidement. Après décantation de la solution éthéréc, on seche brièvement sous vide le résidu et le malaxe ensuite avec de l'eau. On sépare par essorage le dérivé décapeptidique qui a précipité, le lave à l'eau et le sèche O Pour le purifier, on le dissout dans 25 ml de chloroforme, sépare par filtration un peu de matière insoluble, concentre le filtrat jusqu'à la moitié environ et précipite avec de l'hexane. On obtient à 11 état pur le dérivé décapeptidique, qui dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, présente dans le système 100 une valeur de Rf de 0,48 et dans le système 45 une valeur de R f de 0,30. EXEMPLE 2 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp Leu-Asn-Lys-Lou-His-Thr-Pné-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2, Leu12,16,19 -calcitonine M On dissout à 0 , dans 1,2 mî d'acide chlorhydrique concentré, 50 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC) Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2, rince à 1'azote et laisse reposer pendant 10 minutes a 0 . Le traitement de la solution a lieu de la même manière que celle décrite dans l'exemple 1.On équilibre le produit ainsi obtenu (acétate de Leu12,16,19-calcitonine M) avec l'humidité atmosphérique an le laissant reposer à l'air libre et ctest une poudre blanche amorphe. Dans une chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium ',Alox D-O", il présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,39 dans le système 52 Rf = 0,48 dans le système 79. Dans une électrophorèse sur des plaques de cellulose en couche mince ("Avicel", plaques terminées 1.440), le composé migre pourn Uil pH de 1,9 et pour 16 volts/cm de 3,7 cm vers la cathode au cours d'mie heure et demie. Le dotriacontapeptide protégé est, par exemple, préparé de la façon suivante a) En partant de H-Leu-OMe, on préparée par synthèse, par édification en plusieurs stades, le dérivé hexapeptidique de formule Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe, en utilisant l'ordre ci-après d'esters activés Z-Asp(OtBu)-ONP Z-Gln-ONP Z-hrtBu) -OSU Z-Leu-ONP Z-Thr(tBu)-OUS Les condensations sont effectuees dans une solution de diméthylformamide et les hydrogénations catalytiques, à l'exception de Z-Asp(OtBu)-Leu-Ome, cas auquel on ajoute un équivalent d'acide chlorhydrique, sont sffectuées en solution méthanolique neutre.Finalement, le groupe ester méthylique C-terminal est transformé en hydrazide à l'aida d'hydrate d'hydrazine en solution méthanolique. b) En condensant Z-Lys(BOC)-Leu-NH3 avec H-His-OMe dans du tétrahydrofuranne, on obtient Z-Lys(ROC)-Leu-His-OMe qui est hydrogéné en solution méthanolique et est ensuite converti dans du diméthylformamide avec Z-Asn-ONP pour donner le tétrapeptide de formule Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-OMe.On transforme ce dernier en hydrazide de manière usuelle, le dit hydrazine étant condensé à son tour en le dodécapeptide, suivant la méthode à l'azide, avec H-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-OH-CH3COOH (préparé en condensant Z-Thr(tBu)-Phé Pro-OH que l'on obtiaiit à partir de Z-Thr(tBu)-OUS et de H-Phé Pro-OH dans du iméthylformamide, avec du chlorhydrate de H-Gln- Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OMe dans du diméthylformamide en présence de dicyclohe-xyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide, en saponifiant l'ester dans du méthanol à 90 % avec une solution normale d'hydroxyde de sodium et en hydrogénant le comp.osé de formule Z-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH dans de l'acide acétique à 80 ,0 en présence de charbon au palladium) dans du diméthylformamide à 90 %. On hydrogène dans l'acide acétique à 80 % le composé de formule Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His Thr(tBu)-Phé-Pro-Cln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH ainsi obtenu et condense ensuite avec une solution fraichement préparée de Z- Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-N3 dans du diméthyl formamide. On condense l'octadécapeptide qui s'est formé à l'aide de dicyclohexyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide dans du diméthylformamide avec H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, purifie l'amide docosapeptidique brut par une répartition de Craig dans un système solvant constitué par un mélange (10 : 4 : 5 6) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone et hydrogène ensuite dans de 11 acide acétique à 80 %.Par dissolution dans du méthanol et versage goutte-àgoutte dans une solution aqueuse décinormale de carbonate de sodium, on obtient la forme exempte d'acétate que l'on condense à l'aide de dicyclohexyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide avec BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu Gly-OH rour obtenir l'anide dotriacontapaptidique totalement protégée. Ce dernier est à nouveau purifié par une répartition de Craig dans un système constitué par un mélange (11 : 4 : 6 7) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone0 Dans le détail, la synthèse de la matière de départ se déroule par les stades suivants 1.Z-Asp(OtBu)-Leu-OMe Dans 20 ml de diméthylformamide absolu, on dissout 4,97 g de Z-Asp(OtBu)-ONP conjointement avec 2,54 g de chlorhydra- te de l'ester méthylique de la leucine et, tout en agitant à la température ambiante, ajoute goutte-à-goutte au cours d'une heure 1,60 ml de N-méthyl-merpholine.On laisse ia surtension de teinte jaune citron reposer pendant 16 heures à la température ambiante, sépare par filtration le chlorhydrate de N-méthylmorpholine qui a précipité et concentre le filtrat0 On dissout l'huile obtenue dans de l'acétate d'éthyle, lave ensuite à 00 à deux reprises avec une solution aqueuse diluée d'acide citrique, à une reprise avec une solution aqueuse diluée d'hydroxyde de sodium, siir reprises avec une solution acyeuse diluée de carbonate de sodium et finalement avec de l'eau jusqu ce que le liquide de lavage reste neutre. Après séchage sur du sulfate de sodium, on concentre et recristallise l'huile obtenue dans un mélange d d'éther et d'éther de pétrole; le composé fond à 72 - 740 et présente un pouvoir rotatoire spécifique 20 D = - 27 (c = 1,9 dans le méthanol). Sur du gel de silice et dans un chromatogramme en couche mince les valeurs de Rf sont de 0,68 dans le système 43 A et de 0,75 dans le système 89. 2. Chlorhydrate de H-Asp-(OtBu)-Leu-OMe Dans 30 ml de méthanol, on dissout 4,23 g de Z-Asp(OtBu) Leu-OMe et, tout en agitant 4,64 ml diacide chlorhydrique dans le méthanol (2,03-normal, 9,4 m.moles) et 420 mg d'un catalyseur à 10 % de palladium sur du charbon, on décarbobenzoxyle à la température ambiante avec de l'hydrogène. Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentre, dissout l'huie jaune obtenue dans 18 ml de N,N-diméthylformamide, concentre- à nouveau et dissout dans 19 ml de diméthylformamide. On utilise directement cette solution sans autre purification pour le stade suivant. 3. Z-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe A une solution de 3,31' g de chlorhydrate de H-Asp(OtBu) Leu-OMe dans 19 ml de dinéthylformamide, on ajoute à la température ambiante 4,90 g de Z-Gln-ONP solide, ainsi que 1,07 ml de N-méthyl-morpholine, puis laisse la solution reposer pendant 15 heures à la température ambiante.On concentre ensuite la solution, dissout le produit cristallin obtenu dans un mélange (1 : -5) de n-butanol et d'acétate d'éthyle, puis secoue comme décrit sous 1), sèche et concentre On recristallise le produit solide obtenu dans un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole il fond à 186 - 1870 et présente un pouvoir rotatoire spécifiqué [&alpha;]20D = - 430 (c = 1,9 dans le méthanol). Sur du gel de silice, dans un chromatogramme en couche mince, les valeurs de R f sont de 0,46 dans le système 89 et de 0,61 dans le système 43 A. 4, H-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe Dans 30 ml de méthanol, on met en suspension 4,12 g de Z-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe et, tout en agitant 410 mg dlun catalyseur à 10 % de palladium sur du charbon, on décarboben zoxyle à la température ambiante avec de l'l@drogène. Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentre et dissout 1'huile presque incolore obtenue dans 13 ml de diméthyl formamide, concentre à nouveau et dissout dons 13 ni de diméthylformamide. On utilise la solution sans autre purification pour le stade suivant 5.Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe A une solution de 3,L6 g de H-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Ome dans 13 ml de diméthylformamide, on ajoute 3,47 g de Z-Thr(tBu)- OSU solide et laisse la solution limpide obtenue reposer pendant 18 heures à la température ambiante. On concentre ensuite la solution presque à sec, ajoute de l'éther et sépare par filtra- tion le précipité blanc qui s'est formé. La poudre qui s' ' avère unitaire dans une chromatographie en couche mince fond à 1801820. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,53 dans le système 89 Rf = 0,77 dans le système 121 6.H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe Dans 40 ml de méthanol, on dissout 4,28 g de Z-Thr(tBu)- Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe et, tout en ajoutant 420 mg d'un charbon à 10 % de palladium, on décarbobenzoxyle à la température ambiante avec de l'hydrogène. Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre et concentre, ce qui fait que le produit se forme à l'état d'une écume collante qui s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes R f = 0,84 dans le système 121 = = 0,16 dans un système constitué par un mélange (9 : 1) ae chloroforma et de méthanol. 7. Z-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe Dans 15 nl de diméthylformamide, on dissout 3,52 g de H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe, concentre, dissout à nouveau dans 20 ml de diméthylformamide et aboute 2,ò g de Z-Leu-ONP solide. On laisse la solution limpide d'un jaune intense reposer pendant 15 heures à la température smbiante, ce qui fait que le dérivé pentapeptidique ci-dessus précipite sous forme cristalinde. On ajoute à ceste suspension 20 ml d'eau, ainsi que 50 ni d'un mélange (1 : : 3) de diméthylformamide et d'eau, sépare par filtration le produit qui a précipité et le recristallise dans un mélange de chloroforme, de méthanol et d'éther de pétrole.Il fond à 222 - 2230 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]20D = - 19 (c = 0,9 dans le chloroforme). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,57 dans le système 89o 8. Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-NHNH2 Dans 75 ml de méthanol, on dissout 1,5 g de Z-Leu Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe, ét tout en refroidissant à la glace, ajoute 7,5 m d'hydrate d'hydrazine. On laisse la solution limpide reposer pendant 15 heures à la tetnpérature ambiante, y ajoute ensuite un mélange glacé de 250 ml d'eau et de 8,8 ml d'acide acétique glacial, ce qui fait que le produit précipite sous la forme d'un précipité en fins flocons. On le purifie par une répartition à contre-courant suivant Craig.On répartit 1,06 g du dérivé hexapeptidique sur les cinq premiers tubes d'-un appareillage de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml). On utilise dans ce cas un système solvant constitué par un mélange (10 : 3 : 5 : 4) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant constitué par une solution de 28,6 g d'acide acétique glacial et de 1923 g d'acétate d'ammosium dans 960 ml d'eau.On effectue une répartition multiplicative en 240 s stades (rmax = 52, = = 0,28). A partir des fractions pures obtenues (éléments de répartition n 47 à 66), on élimine l'acétate d!ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé et recristallise l'hydrazide de l'hexapeptide dans un mélange de méthanol et d'eau. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,47 dans le système 89 Rf = 0,44 dans un système constitué par un mélange (85 : 15) de chloroforme et de méthanol. 9. Z-Lys(BOC)-Leu-His-OMe A 3,02 g de Z-Lys(BOC)-Leu-NH-NH2 dans 30 ml de diméthylformamide, on ajoute, à - 20 , 5,25 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne. et 0,9 ni de nitrite de tertio-butyle. Au bout dc 10 minutes à une tempé- rature de - 13 à - 10 , on refroidit à - 30 et ajoute 2,38 ml de N-éthyl-di-isopropylamine. On ajoute ensuite à - 30 une solution (préalablement refroidie à 0 ) ) de 1,83 g de dichlorhydrate de l1 ester méthylique de l'histidine dans 30 ml de diméthylformamide. On laisse la solution ainsi obtenue reposer pendant une heure à - 10 et pendant 18 heures à 0 .Après concentra -tion, on reprend l'huila obtenue dans de l'acétate d'éthyle lave à trois reprises avec une solution aqueuse diluée d'hydro- géno-carbonate de sodium et ensuite avec de l'eau jusqu à ce que le liquide de lavage reste neutre. Après évaporation de l'acétate d'éthyle, on reprécipite le produit solide obtenu dans un mélange de méthanol, de chloroforme et -d'éther, ce qui fait qu'on obtient une poudre faiblement colorée en jaune qui s1a- vère unitaire d.ans un chromatogramme en couche mince. Elle fond à 144 - 145 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]D20 = + 15 (c = 2,0 dans le chloroforme). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes = 0,60 dans le système 52 Rf = 0,35 dans le système 89. 10. H-Lys(BOC)-Leu-His-OMe Dans 30 ml de méthanol, on dissout 2,65 g de Z Lys(BOC)-Leu-His-OMe et, tout en ajoutant 270 mg d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène. Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre et concentre, ce qui fait qu'en obtient une huile jaune que l'on soumet aussitôt à la suite du traitement, Il. Z-Asn-Lys(BOC)-Lou-His-OMe Dans 15 ml de diméthylformamide, on dissout 2,10 g de l'ester méthylique du tripeptide qui est obtenu sous 10) et ajoute à la température ambiante 2,07 g de Z-Asn-ONP solide.Au bout de 15 heures, on concentre la solution jaune limpide et reprécipite le résidu dans un mélange de méthanol, de chloroforme et- d'éther, puis dans un mélange de méthanol, d'acétone et d'éther et enfin dans un mélange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. La poudre blanche fond à 178 1800. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,40 dans le système 52 Rf = 0,16 dans le système 890 12. Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-NH-NH2 Dans un mélange de 20 ml de méthanol et de 3,5 ml de diméthylformamide, on dissout 2,57 g de Z-Asn-Lys(BOC)-Leu His-OMe et ajoute à la température ambiante 1,65 ml d'hydrate d'hydrazine. On laisse la solution reposer pendant 18 heures à la température ambiante, ce qui fait que l'hydrazide tétrapeptidique ci-dessus précipite0 On ajoute alors 10 ml d'eau, sépare le précipité par filtration et le lave à l'eau jusqu'à ce que l'eau de lavage présente une réaction neutre. On reprécipite dans un raéîanbe de chloroforme, de méthanol et d'éther la poudre blanche amorphe obtenue. Elle fond à 209 - 2100. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = O, 36 dans le système 100 Rf = 0,54 dans un système constitué par un mélange (90 : 10) d'isopropanol et d'ammoniaque concentrée. 13. Z-Asn-Dys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala Ile-Gly-OH Dans 11 ml de diméthylformamide, on dissout 1,03 g de Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-Mis-NH-NH2, refroidit la solution à - 200, puis ajoute ensuite 1,13 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, ainsi que 0,202 ml de nitrite de tertio-butyle. On laisse la solution reposer pendant 15 minutes à - 15 , refroidit ensuite à - 200 et ajoute au tout Goutte-@- @@itte une sclvtion de 636 mg de H-Thn (tBu)-Phé-@ro Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH dans 20 ml de diméthylformamide, ainsi que 0,584 ml de N-éthyl-di-isopropylamine.On laisse la solution reposer pondant 16 heures à + 5 , ajoute ensuite 85 ml d'acide acétique à 1 %, sépare par filtration le précipité qui s'est formé et le lave avec de l'eau jusqu'à ce qu'il soit exempt de chlorure. Pour purifier le produit on le reprécipite dans un mélange de méthanol, de chloroforme et d'éther -de pétrole, puis dans un mélange de diméthylformamide et d'eau et finalement dans un mélange de méthanol et d'eau. Il fond à 209 - 2110. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,55 dans le système 100 Rf = 0,44 dans le système 70 Rf = = 0,32 dans un système constitué par un mélange (90 : 10) d1isopropanol et d'ammoniaque concentrée. 14. H-Asn-Lys(EOO)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala Ile-Gly-OH Dans 80 ml d'acide aoétique à 80 %, on dissout 678 mg du produit décrit sous 13 et, tout en ajoutant 73 mg d'un charbon à 10 ,J de palladium, on hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène.Lorsque 11 absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentre le filtrat presque à sec, reprend le résidu dans de i'acide acétique glacial et lyophilise On dissout le lyophilisat dans du tertio-butanol à 70 % et lyophilise à nouveau0 DAns un chromatogramme en couche mine sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf 0,17 dans le système 52 Rf = 0,36 dans le système 70. 15. Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC) Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH Dans 3,1 ml de diméthylformamide, on dissout 368 mg de Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-NH-NH2, refroidit la solution à - 200 et ajoute 325 l d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, ainsi que 55 l de nitrite de tertio-butyle. On laisse la solution reposer pendant 15 minutes à une température de - 15 à - loa ; on ajoute ensuite à - 150 une solution de H-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé- Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH dans 7,5 ml de diméthylformamide, ainsi que 169 l de N-éthyl-di-isopropylanine. On agite la solution pendant deux heures dans un bain de glace et ajoute pendant ce temps, en quatre portions, 42 autres l de N-éthyl- di-isopropylamine.On laisse alors la solution reposer pendant 15 heures à + 5 et la verse ensuite goutte-à-goutte dans de l' éther. On dissout le précipité blanc obtenu dans du diméthyl- formamide, verse à nouveau goutte-à-goutte dans de l'éther, dissout à nouveau le précipité obtenu dans du diméthylformamide e-t ajoute goutte-à-goutte la solution à une solution (refroidie à 0 ) 0,02-normale d'acide chlorhydrique (à laquelle on ajoute pour 100 ml en. volume 10 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium).Le produit amorphe ainsi obtenu est dissous dans de l'acétonitrile à 80 % et précipite à 500 avec de l'eau0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,36 dans le système 52 Rf = 0,50 dans le système 110 Rf = 0,27 dans le système 100 16. H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 17 ml de méthanol à 80 io, on met en suspension 194 mg de Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 et, tout en ajoutant 60 mg d'un charbon à 10 x de palladium, hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène.Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentra, dissout l'huile obtenue dans du tertie-butanol et lyophilise. Les valeurs de Rf de la poudre blanche obtenue alors, dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, sont les suivantes Rf = 0,22 dans le système 96 Rf - 0,17 dans mi système constitué par un mélange (1 : 1) de chloroforme at de méthanol 17.Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 Dans 4,41 ml de diméthylformamide, on dissout 375 mg du composé décrit sous 15) et ajoute à la température ambiante 77 mg de H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, 26 mg de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 4o mg de dicyclohexyl-carbediimide, puis agite la solution pendant 18 heure à 45 .On verse ensuite cotte solution goutte-à-goutte dans de l'éther et soumet la poudre blanche obtenu à une répartition à contre-courant suivant Craig : on répartit 435 mg de l'amide docosapeptidique sur les quatre premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 7 ml), en utilisant comme système solvant un mélange (10 : 4 : 5 : 6) de méthanol, d'un tampon, de chloro- forme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué plus loin. On effectue une répartition multiplicative en 550 stades au total (rmax = 70, K = 0,15). A partir des fractions pures, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 40 sous un vide poussé, Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, l'amide docosapeptidique pur protégé présente les valeurs de R f suivantes Rf = 0,68 dans le système 70 Rf = 0,31 dans le système 52 Rf = 0,40 dans le système 100 Rf = 0,62 dans le système 43 E. 18. H-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 Dans 13,8 ml d'acide acétique à 80 %, on dissout 138 mg du produit décrit sous 17), et, tout en ajoutant 25 mg d'un catalyseur à 10 % de palladium sur du charbon, on hydrogène pendant 18 heures à la température ambiante avec de l'hydrogène. Cn filtre alors, concontre, dissout le résidu dans de l'acide acétique et lyophilise. On dissout le lyophilisat obtenu dans peu de méthanol, ajuste avec une solution saturée d'hydrogéno- carbonate de sodium à un pH d'une valeur comprise entre 7 et 8 et verse ensuite goutte-à-goutte dans une solution décinormale d'hydroxyde de sodium On obtient une poudre blanche ; dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,24 dans le système 100 Rf = 0,64 dans le système 70 Rf = 0,57 dans le système 43 E. 19. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Gys-Mét-Leu-Gly Thr(tRu)-Leu-Thr(tRu) -Gln-Asp(CtBu)-Leu-Asn-Lys (BCO)-Leu- His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 Dans 0;7 ml de dim6thylformamide, on dissout à chaud 96 mg de -l'amide docosapeptidique décrit sous 18), ainsi que 50 mg du décapeptide protégé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu- S6r(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-OH, ajoute ensuite à la température ambiante 9,5 mg de N-hydroxy-succinimide solide, ainsi que 12,8 mg de dicyclohexylwcarbodiimide solide, puis agite pendant trois heures et demie à 45 . On verse ensuite la solution goutte-à-goutte dans 14 ml d'éther exempt de peroxyde que l'on a préparé et soumet la poudre blanche alors obtenue, pour la purifier, à une répartition à contre-courant suivant Craig : on répartit 126 ng de l'amide dotriacontapeptidique brut sur lés deux premiers tubes d'une appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml), en utilisant comme système solvant us nélange (11 o 4 : o : 7) de méthanol, d'un tampon, de chlorofo-rne et de tétrackiorure de carbone, le tampon étant celui indiqué plus loin.On procède à une répartition multiplicative en 210 stades au total (rmax = 87, K = 0,7), élimine les fractions pures et l'acétate d'ammoeiium par sublimation à 40a sous un vide poussé ; l'amide dotriacontapeptidique protégé présente les valeurs de Rf suivantes ; dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice : Rf = 0,40 dans le système 100 Rf = 0,58 dans le système 66. EXEMPLE 3 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Lys-Tyr-Thr-Gln-Asp Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Arg-Thr-Ala-Ile-Cly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 (Lys11, Arg24 -calcitonine M) On recouvre, à 0 , 81 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Két-Leu-Gly-Lys(BOC)-Tyr(tBu)-Thr(tBu) Gln-Asp (OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Arg Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, de 2 ml d'une solution concentrée glacée d'acide chlorhydrique, rince à l'azote et agite pendant 10 minutes à 0 en vase clos. Aprés relroidisse- ment à une température de - 80 a environ, on établit un vide poussé et concentre la solution en augmentant lentement la température jusqu 0 . On ajoute ensuite au tout 2 ml d'eau et lyophilise. En vue d'échanger les ions chlorure contre des ions acétate, on fait alorspasser le lyophilisat, on solution, dans 2 ml d'une solution décinormale d'acide acétique, a travers une colonne (diamètre 6 mm, logueur 12 cm) de "Amberlite CG-45" (échangeur d'ions faiplement basique sous la forme acétate). Après avoir contrôlé l'éluat en uitra-violet, on le lyophilise, le sèche ensuite sous un -vide poussé sur du pentoxyde de phos phora et l'équilibre avec l'humidité atmosphérique en le laissant reposer à l'air libre, On obtient ainsi l'acétate de la Lys11, Arg24 - calcitonine M. Dans une chromatographie en couche mince, l'amide dotriacentapeptidique présente, comme unique impureté, une trace du Mét8-sulfexyde comrespondant. Dans un chromatogramme en couche mince sur "Alox-D-O" les valeurs de Rf sont de 0,51 dans le système 52 et de 0,43 dans le système 45 Sur de la cellulose "Selecta" (plaques finies de la Firme Schleicher et Schuel 1) la valeur de Rf est de O 49 dans le système 45 et de 0,55 dans le système 101 A. Dans une électropherèse sur cellulose "Selecta 1440", la substance migra, pour un pH de 1,9 et pour 28C velts/cm, de 5,6 cm vers la cathode au cours d'une heure et demie. La matière de départ peut par exemple, être préparée co;se suit Dans du diméthylformamide, on fait réagir Z-Arg-OH sur H-Thr(tRu)-Ala-Ila-Gly-OH en présence de dicyclohexylcarbodiimide pour obtenir Z-Arg-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH, puis élimine le groupe carbobenzoxy, dans une solution chlorhydrique aqueuse à 80 % de méthanol en présence de charbon au palladium. On condense Z-Thr(tBu)-Phé-Pro-OH sous la forme de l'anhydride mixte (avec le carbonate d'isobutyle) avec le composé de formule H-Arg-Thr(tBu)-Alo-Ile-Gly-OH obtenu pour paTenir au composé de formule Z-Thr(tBu)-Phé-Pre-Arg-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH. Après hydrogénation catalytique dans de l'acide acétique à 80 %, en présence de charbon au palladium, on fait réagir ce dernier com- posé sur une solution d'acide de Z-Asn-Lys(BOC0-Phé-His dans du diméthylformamide pour obtenir le composé de formule Z-Asn Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Arg-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH. Le dérivé dodécapeptidique , décarbobenzoxylé dans de l'acide acétique à 80 % en présence d'un charbon au palladium, est condensé avec l'azîde de Z-Lys(BOC)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Bln-Asp(OtBu) Plié, que l'on obtient en condensant l'anhydride mixte de Z-Lys(BOC)- OH (avec le carbonate d'isobutyle) avec H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)- Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe pour obtenir le composé de formule Z Lys(BOC)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe dont la transformation en hydrazide a lieu avec de lthydrate d'hydrazine dans du méthanol, la conversion d.e l'hydrazide en azide se faisant à 1' aide de nitrite de tertobutyle dans du diméthylformamide avec addition d'acide chlorhydrique dans du dioxanne. Le composé de formule Z-Lys(BOC)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Bln-Asp(OtBu)-Phé-Asn Lys(BOC)-Phé-His-The(tBu)-Phé-Pro-Arg-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH ainsi obtenu est amené à réagir, à l'aide de dicyclohexyl- carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide dans du diméthylforma mide, sur le composé de formule H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 pour donner l'amide docosapeptidique protégé, Celui-ci est purifié par une répartition de Craig et hydrogéné ensuite dans de l'acide acétique à 80 %, en présence de charbon au palladium.Par reprécipitation par le méthanol dans une solution décinormale de carbonate de sodium on obtient la base libre que l'on condense dans du diméthylformamide, à l'aide de dicyclohoxyl-carbodiimide et d'hydroxy-succinimide, avec BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu) Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-OH pour obtenir l'amide dotriaconta peptidique protégé. On purifie à nouveau le produit par une répartition de Craig0 EXEMPLE 4 H-Cys-Gly-Asn-Lou-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp Phé-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 (His17, Leu19, Gln20 -calcitonine M). On recouvre, à 0 , 470 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu- Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Cly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu) Gln-Asp(OtBu) -Phé -His-Lys (ROC )-Leu-Gln-Thr(tRu)-Phé-Pro-Gln- Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 avec 10 ml d'acide chlorhydrique concentré glacé. On ri.nce avec de l'azote et agite ensuite en vase clos pendant 10 minutes à 00. Après refroidissement à une température de - 60 environ, on établit un vide poussé et concentre la solution en portant lentement la température jusqu'à 0 . On ajoute ensuite 15 ml d'eau et lyophilise.On dissout le lyophilisat dans o lil d'acide acétique déclnormal et, en vue d'échanger les ions chlorure contre des ions acétate, fait passer a solution à travers une colonne (diamètre 10 mm, longueur 16 cm) de "Amberlite CG-45" (échangeur d'ions faiblement basique sous la forme acétate). Après avoir contrôlé l'éluat sur un analyseur continu en ultra-violet, on le lyophilise, le sèche ensuite sous un vide poussé sur du pente- oxyde de phosphore et j'équilibre avec l'humidité atmosphérique an le lassant reposer à l'air libre.On obtient de cette maniêre l'acésate de la Ris17, Lau19, Gln20 -caioitonine M. Dans une électrophorèse le produit s'avère unitaire0 Dans une électrophorèse en couche mince sur de la cellulose "Selecta 1.440" (plaques finies de Schleicher et Schüll), le produit migre, pour un pH de l,9 (tampon comme dans l'exemple 1), sous 280 volts, de 3,5 cm vers la cathode au cours d'une heure et demie O L'amide dotriacontapeptidique présente, dans une chromatographie en couche mince sur de la cellulose "Sclecta", les valeurs de R f suivantes Rf = 0,52 dans le système 45 Rf = 0,60 dans le système 101A sur "Alox D-O", il présente les valeurs de Rf suivantes = 0,46 dans le système 45 R f = 0,57 dans le système 52 Rf = 0,68 dans le système 790 L'amide dotriacontapeptidique protégé est préparé par exemple comme suit On fait réagir Z-Lys(ROC)-OH, pour obtenir l'anhydride mixte, sur du chlorocarbonate d'isobutyle et condense le produit obtenu avec H-Leu-OMe pour obtenir l'ester dipeptidique protégé de formule Z-Lys(BOC)-Leu-OMe fondant à 113 - 1l40o On transforme ce dernier avec de l'hydrate d'hydrazine dans du méthanol en l'hydrazide (fondant à 154 - 155 )o A partir de l'hydrazide, on prépare suivant Rudinger, avec du nitrite de tertio-butyle dans du dioxanne, avec addition d'acide chlorhydrique, l'azide ,que l'on copule, avec addition de di-isopropyl-éthylamine, avec H-Gln-OMe pour obtenir Z-Lys(BOC)-Leu-Gln-OMe.En procédant à une hydrogénation neutre dans du méthanol avec du charbon au palladium, on obti-ent- le composé de formule Lys--(ROC)-Leu-Gln- OMe. On copule ce dernier avec Z-His-N3 suivant la méthode à l'avide de Rudinger, comme ci-dessus, de sorte qu'on obtient le composé de formule Z-His-Lys(ROC)-Leu-Gln-OMe0 On transforme a nouveau cet ester suivant Rudinger, en passant par lthydrazide, en ltazide et le copule suivant Rudinger avec le composé de formule H-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH (cf. exemple 2), en utilisant comme base de la di-isopropyl-éthyla- mine. En procédant à une hydrogénation catalytique avec du charbon au palladium dans de l'acide acétique à 80 %, on obtient H-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-OH qui, suivant la méthode à l'azide est condensé, somme précédemment, avec A-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Phé-N3 (cf. exemple 1) pour donner le composé de formule Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-His-Lys(BOC) @eu-Gln-Thr @@u)-Tié-@re-Gln-@ar(tBu)-Ala-@le-Gly-OH. On @arifi le produit par reprécipitation dass du diméthylformamide et de l'acétate d'éthyle et le condense, à l'aide de dycyclchexylcarbodiimide et de N-hydroxy-succinimide dans du diméthylformamide, avec H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (cf. exemple 1).L'amide docosapeptidique protégé ainsi obtenu est purifié par une réparti ion de Craig dans un système solvant constitué par lui mélange (5 : 3 : 10 : 6) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone et il est ensuite décarboxylé dans de 1 t acide acétique à 80 %, en présence de charbon au palladium, pour donner le composé de formule N-Phr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu) Gln-Asp(OtBu)-Phé-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2.A l'aide d'une soultion décinosmale de bicarbonate de sodium, on prépare la base libre et condense cette dernière contre dans l'exemple 1 d l'aide de dicyclohexyl-carbodiimide et de N-hydroxy-succinimide avec le composé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)- Cys-Mét-Leu-Gly-OH pour obtenir l'amide dotriacontapeptidique protégé que l'on purifie comme dans l'exemple 1. EXEMPLE 5 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-ILe-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 x 3NC1 (Val8, Tyr22 -calcitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit sous atmosphère d'acote, à C dans un bain de glace, 7,0 mg de BOC-Cys-Gly-Asn Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu) Gln-Asp-(CtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Phr(tBu)-Tyr(tBu)-Iro Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute ensuite 0,2 ml d'acide chlorhydrique concentré, laisse reposer pendant 7 minutes à 0 , refroidit profondément avec un mélange d'acétone et de dioxyde de carbone, puis dégaze sous un vide poussé, refroidit ensuite dans un bain de glace et concentre jusqu'à avoir un résidu vitreux et sirupeux. On dissout ce dernier dans peu d'eau et lyophilise, bans IL chromatogramme en couche mince, le trichlorhy- drate de l'amide dotriacontapeptidique obtenu présente les valeurs de Rf suivantes sur "Alox-D-O" (Firme Camag : oxyde d'aluminium avec 8 % de plâ tre) : Rf = 0,71 dans le système 52 sur Cellulose "Selecta 1.440" (plaques finies de la Firme Schleicher et Schüll) Rf = 0,59 dans le système 101A Rf = 0,65 dans la système 45. Electrophorèse sur cellulose 1,Selecta 1.440"- : pH 1,9, une heure et demie, 280 volts, plage de migration : 4,8 cm vers la cathode. a matière de départ peut être préparée comme suit l. Z-Leu-Gly-OMe Dans 260 ml de diméthylformamide, on dissout 115,8 g de Z-Leu-ONP, ajoute 37ss7 g de chlorhydrate solide de l'ester méthylique de la glycine et, tout en refroidissant à la glace, ajoute goutte-à-goutte 47,1 ml de triéthylamine. On abandonne la solution pendant 18 heures à + 5a, sépare par filtration le chlorhydrate de triéthylamine qui a précipité et concentre le filtrat.On dissout dans de l'acétate d'éthyle l'huile jaune foncé obtenue et, tout en refroidissant à la glace, lave à une reprise avec de l'eau, à quatre reprises avec une solution aqueuse diluée de carbonate de potassium, à une reprise avec une solution diluée de chlorure de sodium, à deux reprises avec une solution 0,2-normale d'acide chlorhydrique et ensuite avec de l'eau, jusqu'à ce que lteau de lavage présente une réaction neutre0 On sèche la phase obtenue à l'acétate d'éthyle sur du sulfate de sodium, concentre et recristallise le résidu cristallin jaune dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole.Il fond à 91 - 920o Dans un chromatogramme, en couche mince sur du gel de silice les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,87 dans le système 115 Rf = = 0,60 dans un système constitué par un mélange (1 : 1) de toluène et d'acétone. H-Leu-Gly-OMe Dans 400 ml de méthanol, on dissout 79,0 g de Z-Leu- Gly-OMe et, tout en agitant 16,5 g d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène à la température arbiante avec de l'hydro- gène dans un récipient d'hydrogénation à secousses Lorsque l'absorption d'hydrogène est terminée, on filtre, concentre et soumet immédiatement à la suite du traitement l'huile jaune obtenue O 30 Z-Val-Leu-Gly-OMe A une solution de 47,4. g de H-Leu-Gly-OMe dans 250 ml de N,N-diméthylformamide, on ajoute à la température ambiante 2,68 ml d'acide acide glacial, ainsi que 87,5 g de Z-Tal- ONP solide, puis abandonne la solution obtenue pendant 18 heures à la température ambiante On concentre alors jusqu'à consistance huileuse, dissout dans un mélange constitué par 1,5 litre d'acétate d'éthyle et par 0,5 litre de n-butanol et lave à 0 à une reprise avec 0,8 équivalent (rapporté à la quantité théoriquement formée de p-nitrophénol) d'une solution diluée d'hy- dioxyde de sodium, à cinq reprises avec une solution aqueuse diluée de carbonate de potassium, à une reprise avec de l'eau, à une reprise avec une solution diluée d'acide tartrique et ensuite a nouveau avec de l'eau jusqu'à ce que l'eau de lavage présente une rÉaction neutre.On seche la phase organique sur du sulfate de sodium, concentre, puis recristallise le résidu blanc cristallin dans un mélange de méthanol et d'eau, ainsi que dans un mélange de chloroforme et d'éther de pétrole Le produit qui est unitaire dans une chromatographie en couche mince présente un point de fusion de 1690o Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de si.lice, les valeurs de RI sont les suivantes = 0,45 dans un système constitué par un mélange (96 : 4) de chloroforme et de méthanol Rf = = 0,57 dans un système constitué par un mélange (1 : 1) de toluène et d'acétone. 4. H-Val-Leu-Gly-OMe Dans 100 mî de méthanol on dissout 5 g de Z-Val-Leu Gly-OMe et tout en agitant 1,0 g d'un catalyseur à 10 % de palladium sur du charbon, on hydrogène à la température arabisante avec de l'hydrogène dans un rcipient d'hydrogénation à secousses, Après filtration et concentration, on: soumet immédiatement à la suite du traitement le produit qui s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince0 5.TRI-Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OMe Dans 20 ml d'acétonitrile, on dissout 1,70 g de H-Val Leu-Gly-OMe, ajoute 4,70 g de TRI-Cys(TRI)-OH solide, refroidit à oa la solution obtenue,,ajoute 1,90 g de dicylohexyl-c-arbodii- mide solide et abandonne pendant 18 heures à la température ambiante. On sépare par essorage la masse qui s'est déjà solidifiée au bout de peu de temps et la recristallise dans un mélange de,chloroforme, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,73 dans un système constitué par un mélange (9 : 1) de chloroforme et de méthanol, Rf = 0,53 dans l'acétate de butyle. 6. H-Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OMe A 3,8 g du produit. décrit sous 5), on ajoute 36,3 ml d'acide acétique glacial, ajoute également 6,3 ml d'eau et homogénéise bien le mélange0 Au bout de peu de temps, la solution trouble au départ devient limpide, puis peu à peu du triphényl-carbinol blanc finement cristallin commence à se séparer. On filtre au bout d'une heure,. concentre le filtrat, le dissout dans un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol, lave à trois reprises avec une solution aqueuse diluée d'hydrogéno-carbonate de sodium et ensuite avec de l'eau jusqu'à ce que l'eau de lavage présente une réaction neutre. On concentre la phase organique, dissout le résidu dans un mélange de chloroforme et de benzène et fait précipiter à nouveau à l'aide d'acétate d'éthyle, ainsi que d'éther de pétrole. La poudre de teinte rose pâle obtenue présente dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silices dans un système de chloroforme et de méthanol (98 : 2) une valeur de Rf de O,20o 7.DPC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OMe Dans 13 ml de diméthylformamide, on dissout 1,60 g de DIC-Sér(tBu)-Thr(tBu)-NH-NH2, refroidit la solution à - 15 et ajoute 3,5 ml d'une solution binormale d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, ainsi que 0,39 ml de nitrite de tertiobutyle. Cn abandonne la solution pendant 15 minutes à - 10a, refroidit ensuite à - 200 et verse rapidement goutte-à-goutte dans une solution (refroidie à 0 ) de 2,50 g de H-Cys(TRI) Val-Leu-Gly-OMe, ainsi que 0,975 ml de triéthylamine, dans 9 ml de diméthylformamide.On agite la solution obtenue pendant une heure à - 100 et abandonne pendant 18 heures à 0 . On sépare par filtration le chlorhydrate de triethylamine qui a cristallisé, concentre le filtrat, dissout dans l'acétate d'éthyle le résidu résineux d'un jaune rougeatre et le lave à deux reprises avec une solution aqueuse diluée d'acide citrique, à une reprise avec de l'eau, à deux reprises avec une solution aqueuse diluée d'hydrogéno-carbonate de sodium et à nouveau avec de l'eau jusqu'à ce que l'eau de lavage présente une réaction neutre.On sèche sur du sulfate de sodium la phase obtenue à l'acétate d'éthyle, dissout le résidu jaune rougeâtre pulvérulent dans de l'acétate d'éthyle et précipite à 0 avec de l'éther de pé- trole. Cn recristallise dans de l'acétonitrile la poudre amorphe de teinte brun-clair que l'on obtient o Elle fond à 20G - 2010o Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,51 dans un système constitué par un mélange (6 : 4) de toluène et d'acétone Rf = 0,37 dans un système constitué par un mélange (97 : 3) de chloroforme et de méthanol Rf = 0,28 dans l'acétate de butyle. 8. Acétate de H-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OMe Dans 8,9 ml d'acide acétique glacial, on dissout, à 45 , 1,64 g du produit décrit sous 7) et, tout en agitant vigoureusement, a joute goutte-à-goutte 2,2 ml d'eau. La substance jaunâtre oui précipite après chaque addition d'eau passe à nouveau rapidement en solution0 Gn abandonne cette solution pendant 75 minutes à 45 , la concentre sous le vide de la trompe à eau à une température de bain de 45 presque jusqu'à siccités puis lyophilise0 On met le lyophilisat en suspension dans peu d'eau, lyophilise à nouveau et sèche ensuite à 400 sous un vide poussé.Pour purifier le lyophilisat, on le met en suspension à 500 dans 10 ml de méthanol, puis ajoute 35 ml d'acétate d'éthyle et, à la température ambiante, 300 ml d'éther de pétrole, On agite pendent 15 minutes à 0 le précipité finement floconneux qui s' est formé et le sépare par filtration0 La poudre blanche possède un point de fusion de 204 - 2060o Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,69 dans le système 96 Rf = 0,71 dans le système 43 C Rf = 0,80 dans un système constitué par un mélange I (7 : 3) de chloroforme et de méthanol. 9. H-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OH A 799 mg du produit décrit sous 8), on ajoute 11 ml de diméthylformamide, chauffe à 500, met finement en suspension et ajoute 2,7 ml d'eau, ce qui fait qu'il se forme un précipite blanc an fins flocons. On ajoute à la suspension, tout en agitant formtement, à la températeure ambiante, 2,4 ml d'une solution normale d'hydroxyde de sodium et agite pendant 10 minutes à la température ambiante.On ajoute à la solution obtenue presque totalement limpide, à 0 , 2,4 ml d'acide chlorhydrique normal, ainsi que 8 ml d'eau, agite pendant 90 minutes à 0 le précipité qui s'est fortuné, le sépare par filtration, le lave avec de l'eau jusqu'à ce qu'il soit exempt de chlorure, et le reprécipite dans un mélange de méthanol, de chloroforme et d éther de pétrole. On contrôle par une chromatographie en couche mince sur du gel de silice que li saponification est complte Rf = 0,37 dans le système 43 C Rf = 0,48 dans le système 100 f = 0,30 dans un système constitué par un mélange (7 : 3) de chloroforme et de méthanol, 10. BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Val-Leu Gly-OH On dissout à chaud 476 mg de BOC-Cys(TRI)-Gly-Asn @eu-RNNH2 dans 5,2 ml de diméthylformamide, refroidit à - 15 la solution obtenue et ajoute 796 l d'une solution 1,98-normale d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, ainsi que 89 l de nitrite de tertio-butyle. Cn abandonne la solution pendant 10 minutes à - 10 , refroidit à - 20 , et ajoute au tout une solution ( préalablement refroidie à - 10 ) ( de 389 mg du produit décrit sous 9) dans 8,2 ml de diméthylformamide et 276 l de triéthylamine. On abandonne la solution fortement visqueuse obtenue pendant une heure à - 10 et pendant 18 heures à + 5 . On dilue avec du N, N-diméthylformamide le mélange réactionnel qui s'est solidifié, ajoute de l'eau, sépare par filtration le précipité qui s'est formé, le seche et extrait les impuretés qu'il renferme en extrayant à plusieursreprises à 60 avec du méthanol. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice les valeurs de Rf de la poudre blanche obtenue sont les suivantes Rf = 0,47 dans le système 45 R = = 0,54 dans un système constitué par un mélange (7 : 3) de chloroforme et de méthanol Rf = 0,53 dans le système 70 Rf = 0,73 dans le système lOOo 11. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH Dans 40 ml de diméthylformamide, on dissout à chaud 406 mg du produit décrit sous 10), et ajoute à la température ambiante 0,0j3 ml d'acide chlorhydrique normal0 On ajoute goutteà-goutte la solution obtenue, au cours de 30 minutes, à une solution faiblement agitée, naintenue sous atmosphère d'azote, de 620 ng d'iode dans 125 nl de méthanol. On agite encore pendant une heure à la température ambiante la solution brun foncé limpide, refroidit ensuite à 0 et ajoute goutte-à-goutte une solution normale de thiosulfate de sodium jusqu'à ce que la solution brune soit décolorée On concentre ensuite largement et ajoute de l'éther exempt de peroxyde, tout en refroidissant à la glace. On obtient un précipité d'abord graisseux qui deviens peu à peu pulvérulent. On sépare l'éther par décantation et agite le résidu à 0 à nouveau avec de l'eau.En vue de purifier davantage la poudre; on la soumet à une répartition à contrecourant suivant Craig : on répartit 216 mg du produit sur les quatre premiers tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml), en utilisant camme système solvant un mélange (5 : 2 : 3 : 1) de méthanol, d'un tampons de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple 1.On effectue une répartition multiplicative en 220 stades au total (rmaX = 111, K = 1 A partir des fractions pures obtenues (tubes de répartition na 98 à 127), on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 40a sous un vide poussé0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, le décapeptide protégé présente les valeurs de R f suivantes: Rf = 0,35 dans le système 45 Rf = 0,48 dans le système 70 Rf = 0,44 dans le système 100. 12. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-Thr(tBu) Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His Thr(tRu)-Tyr(tRu)-Pro-Gln-Thr(tRu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 Dans 0,15 mi de diméthylformamide, on dissout à chaud 22,0 mg de l'amide docosapeptidique protégé de formule H-Thr(tBu)- Thr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu) Thr(tBu)-Pro-Glo-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 [cf. exemple 1 sous 12)], , ainsi que 13,1 mm du décapeptide de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH, rofroi dit la solution à la température ambiante, ajoute au tout 2,0 mg de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 2,8 mg de dicyclohaxyl- carbodiimide et laisse reposer pendant trois heures et demie à 45 , .On verse ensuite la solution dans 3 ml d'éther exempt de peroxyde que l'on a préparé et soumet t la poudre qui a alors précipité, après séchage, à une répartition à contre-courant smivant eraig : en place 30,0 mg du produit dans le troisième tube d'un apparoillage de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml), en utilisant ut système solvant constitué par un mélange (11 . 3 : G : 7) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple lo On procède à une répartition multiplicative en 250 stades au total (rmax = 97, K = 0,63).A partir du produit obtenu en évaporant les fractions N 93 à 107, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé; ou obtient à l'état pur l'amide dotriacontapeptidique protégé. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de R sont les suivantes Rf = O 57 dans le système 70 = 0,31 dans le système 100. f EXEMPLE 6 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp Leu-Asn-Lys-Leu-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 x 3HCl (Val8, Leu12,16,19 -calcitonine @) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 dans un bain de glace, sous atmosphère d'azote, 64,2 mg de BOC-Cys-Gly-Asn Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu) Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute ensuite d'un coup 1,29 ml d'acide chlorhydrique concentré, ce qui falt que a substance est dissoute au bout d'une minute environ.On agite alors pendant 7 minutes encore à 0 , ajoute ensuite d'un coup 15 ml d'acide acétique glacial, agite bion à fond la solution et lyophilise. On dissout le lyophilisat dans peu d'eau, lyophilise à nouveau et abandonne ensuite encore pendant trois heures à la température ambiante sous un vide poussé sur un mélange de pentoxyde de phosphore et d'hydroxyde de potassium. Dans un chromatogramme en couche mince, le trichlorhydrate de l'amide dotriacontapeptidique obtenu présente les valeurs de Rf suivantes sur "Alox D-O" (Firme Camag ; oxyde d'aluminium avec 8 % de plâtre) Rf = 0,71 dans le système 52 A Rf 0,52 dans le système 79 sur cellulose "Selecta 1,440" (plaques finies de la Firme Schleicher et schüll). Rf 0,59 dans le système 45 Rf 0,56 dans le système 101 A. Dans une électrophorèse sur cellulose "Selecta 1o440", à un pH de 1,9 et sous une tension de 280 volts, on observe, au cours d'une heure et demie, une migration de 4,8 cm vers la cathode0 La matière de départ peut être préparée comme suit Dans 0,75 ml de diméthylformamide, on dissout à chaud 10 mg de l'amide docosapeptique protégé de formule H-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH /voir exemple 2 sous 18)], ainsi que 52,4 mg de BOC-Cys-Gly-Asn- Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH, refroidit la solution à la température ambiante, ajoute au tout 10,2 mg de N-hydroxy succininide et 13,8 mg de dicyclohexyl-carbodiimide, puis agite pendant trois heures et demie à 45 .On verse ensuite la soluton dans 15 ml d'éther exempt de peroxyde que l'on a préparé et soumet le précipité blanc qui se forme alors, après séchage à mie répartitIon à contre-courant suivant Craig : on place 129 mg du produit dans les troisième et quatrième tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml), en utilisant comme système solvant un mélange (11 : 3 : 6 : 7) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple 1. On effectue une répartition multiplicative en 200 stades au total (rmax = 117, K = 1,4). A partir du produit obtenu en concentrant les fractions, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé ; on obtient à l'état pur l'amide dotriacontapeptidique protégé.Les valeurs de Rf dans un chromatogramme en coucne mince sur du gel de silice sont les suivantes : Rf = 0,09 dans le système 70 Rf = 0,37 dans le système 100 Rf = 0,66 dans le système 110 EXEMPLE 7 Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln Asp-Leu-Asn-Lys-Leu-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (désamino-Leu12,16,19-caltitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 , dans un bain de glace, sous atmosphère d'azote, 35 mg de Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér-(tBu) Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu) Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute alors 0,75 ml d'acide chlorhydrique concentré et agite encore pendant 7 minutes à 0 après dissolution complète. .On concentre ensuite sous un vide poussé, dissout le résidu vitreux dans 2 ml d'eau lyophilise, dissout à nouveau dans 7 ml d'eau, lyophilise à nouveau et sèche ensuite pendant deux heures à la température ambiante sous un vide poussé. Dans un chromatogramme en couche mince, le trichlorhydrate du dotriacontapeptide obtenu présente les valeurs de Rf suivantes : sur "Alox D-O" (Firme Camag, oxyde d'aluminium avec 8 % de plâtre) Rf = 0,78 dans le système 52. Sur cellulose "Selecta 1.440" (plaques finies de la Firme Schleicher a Schüll) Rf = 0,68 dans le système 45 Rf = 0,71 dans le système 101 A. Electropnorèse sur cellulose "Selecta 1.440" : à un pH de 1,9 et pour 280 volts, on observe une plage de migration de 5,9 cm vers la cathode au cours d'une heure et demie. La matière de départ peut etre préparée comme suit : Dans 0,755 ml de diméthylformamide, on dissout à chaud 101 mg de l'amide docosapeptidique protégé de formule H-Thr(tBu)- Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu) Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 [cf. exem ple 2 sous l8 ainsi que 61,3 mg de Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)- ThrCtBu)-Cys-Liét-Leu-Gly-OH (cf. brevet belge 737 890) refroi dit la solution à la température ambiante, ajoute au tout 10,3 mg de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 13,9 mg de dicyclohexylcarbodiimide puis agite pendant trois heures et demie à 450 sous atmosphère d'azote.On ajoute ensuite la solution à 20 ml d'éther exempt de peroxyde et soumet le précipité blanc qui se forme alors, après séchage, a une répartition à contre-courant suivant Craig : on place 146 mg du produit dans les troisième et quatrième tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : 3 ml chaque fois), en utilisant comme système solvant un mélange (11 ' 3 : 9 : 6) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone le tampon étant celui in diqué sous 8) dans l'exemple 1. On effectue la répartition mul-. tiplicative en 300 stades au total (r max = 95 , K = 0,46) A partir du produit obtenu en cóncentrant les fractions 78 à 102, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé et obtient à l'état pur l'amide dotriacontapeptidi- que protégé.Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice les valeurs-de Rf sont les suivantes = 0,44 dans le système 70 Rf = 0,61 dans le système 107o EXEMPLE 8 Bmp-Cly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Gln-Aps-Phé Asn-Lys-Phé-Ris-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 (Désamino-Tyr22 -calcitonine M) On recouvre 100 mg de @ Cys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly Val-Gly-Ala-Pro-NH2 à 0 , avec 2 ml d'acide chlorhydrique pur concentré, rince à l'azote et, après dissolution (ce qui demande de une à deux minutes environ), on laisse encore reposer pendant 7 minutes de plus à 0 dans le petit ballon formé. On refroidit alors avec ae la glace carbonique, établit un vide poussé et et concentre ensuite la solution à 0 jusqu'à consistance sirupeuse. On dissout le sirop dans 2 ml d'eau, lyophilise et dissout à nouveau le résidu dans 3 ml d'eau puis lyophilise.Le résidu est mie poudre amorphe0 Dans une chromatographie en couche mince, elle présente les valeurs de Rf suivantes : Sur"Alox D-O" Rf = 0,65 dans le système 52 Rf = 0,76 dans le système 79 Sur cellulose "Selecta 1.440" : Rf = 0,68 dans le système 101 A. Lors d'une électrophorèse en couche mince à un pH de 1,9 (comme dans l'exemple 5) la plage de migration est de 2,4 cm vers la cathode O La matière de départ peut être préparée comme suit Dans 2,5 nl de diméthylformamide absolu on dissout 166 mg de Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Len-Gly-OH (cf. brevet belge 737 890), 290 mg de H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-TMr- (tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu) Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 [cf. exemple 1 sous 12.2.7et 21 mg de N-hydroxy-succinimide, puis ajoute 28 ml de dicyclohexyl-carbodiimide.On rince le petit ballon réaction nel brièvement avec de l'azote, le ferme et agite avec mi aimant pendant 15 heures à 45 . Cn sépare par centrifugation la dicy- clohexyl-urée qui a cristallisé et fait précipiter de la solution qui surnage l'amide dotriacontapeptidique brut protégé en ajoutant 30 ml d'éther absolu exempt de peroxyde puis filtre, La purification a lieu à l'aide d'une répartition de Craig dans un système constitué par un mélange (11 : : 4 : 6 6 7, parties en velume) de méthanol, d'un taxpon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple lo On réunit les fractions principales qui s'avè- rent unitaires d'après la chromatographie en couche mince, les concentre à sec et élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé. On obtient une poudre blanche amorphe qui, sur du gel de silice, présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,25 dans le système 52 A Rf = C,27 dans le système 100 Rf = 0,51 dans le système 70. EXEI.LE 9 Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Leu Asn-Lys-Leu-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro NH2 (désamino-Val8, Leu12,16,19 -calcitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 dans un bain de glace sous atmosphère d'azote, 53 mg de Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér (tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute ensuite 1,1 ml d'acide chlorhydrique concentré et, après dissolution complète (ce qui demande environ une minute), agite au bout de 7 minutes à 0a On concentre ensuite sous un vide poussé, dissout le résidu vitreux dans 2 ml dt eau et lyophilise0 Dans un chromatogramme en couche mince, le trichlorhydrate obtenu de l'amide dotriacontapeptidique présente les valeurs de Rf suivantes sur "Alox D-O" (Firme Camag, oxyde d'aluminium avec 8 % de plâtre) : Rf 0,75 dans le système 72 Sur cellulose "Selecta 1.400" (plaques finies de la Firme Schlèicher et Schüll), Rf 0,72 dans le système 45 Rf = 0,69 dans le système 101 A. Dans une électrophorèse sur de la cellulose "Selecta 1.440", à un pH de 1,9 et pour 280 volts, on observe une plage de migration de 4,0 cm vers la cathode au cours d'une heure et demie0 La matière de départ peut être préparée comme suit 1. Bmp(TRI)-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI) Val-Leu-Gly-OH Dans 50 ml de diméthylformamide, on dissout 3,79 g de Bmp(TRI)-Gly-Asn-Leu-NH-NH2 (cf. Brevet belge 737 890), refroidit à - 10 , ajoute lentement au tout au goutte-à-goutte 6,81 ml d'une solution 2,15-normale d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle et ensuite 0,69 ml de nitrite de tertio butyleO Au bout de 15 minutes à - LOO, on ajoute une solution (refroidie à cette température) de 5,47 g de H-Sér(tBu)-Thr(tBu)- Cys(TRI)-Val-Leu-Gly-OH [cf. exemple 5 sous 9)] et 2,85 ml de triéthylamine dans 100 ml de diméthylformamide.Au bout de deux heures à - 10 et de 15 heures à 0 , on concentre le mélange réactionnel sous un vide poussé jusqu'à 70 ml environ et y ajoute ensuite 100 ml de méthanol. On chauffe la suspension pendant 5 minutes à 400 > agite ensuite à 0 , filtre et lave le précipité avec 50 ml de méthanol froid Après séchage sous un vide poussé sur de l'hydroxyde de potassium et du pentoxyde de phosphore, on obtient le composé pur qui se déconpose à 230 - 2500 environ. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, il présente les valeurs de Rf suivantes : Rf = 0,22 dans un système constitué par un mélange (8 : 2) de chloroforme et de méthanol Rf = 0,45 dans le système 45 Rf = 0,50 dans le système 70. 2. Dmp-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH Tout en chauffant, on dissout 3,87 g de Rmp(TRI)-Gly- Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Lys(TRI)-Val-Leu-Gly-OH dans 200 ml de diméthylformamide, et après refroidissement à la température ambiante, ajoute le tout goutte-à-goutte au cours d'une heure dans une solution fortement agitée de 6,35 g d'iode dans un litre de méthanol.On agite ensuite pendant une heure encore, refroidit alors la solution à 0 et décolore avec une solution 1,0- normale de thiosulfate de sodium0 Après concentration sous le vide de la trompe à eau et sous un vide poussé jusqu'à 50 ml environ, on précipite avec de éther. On malaxe le précipité à 00 > à deux reprises avec chaque fois 50 ml d'eau-et sèche sur de l'hydroxyde de potassium et du pentoxyde de phosphore.Pour purifier ce produit, on le soumet à une répartition à contre- courant dans un système constitué par un mélange (5 : 2 X 3 : 1) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'oxemple 1. On réunit les fractions unitaires (K = 1,42), les concentre et les débarrasse de l'acétate d'ammonium par séchage à 350 sous un vide pousse pendant quatre heures0 Le dérivé peptidique obtenu de cette manière à l'état pur présente dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,20 dans le système 70 Rf = 0,30 dans le système 100 Rf = 0,25 dans le système 43 C. 3. Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-Thr(tBu) Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu) Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 0,755 mi de diméthylformamide, on dissout à chaud 101 mg de l'amide docosapeptidique protégé de formule H-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 /cf. exemple 2 sous 18)], ainsi que 52,8 mg de Rmp-Gly-Asn-Leu Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH, refroidit la solution à la température ambiante, ajoute au tout 10,3 mg de N-hydroxy- succinimide, ainsi que 13,9 mg de dicyclohexyl-carbodiimide, puis agite pendant trois heures et demie à 45 .On ajoute ensuite la solution à 20 mi d'éther exempt de peroxyde et soumet le précimité blanc qui se forme alors, après séchage, à une répartition à contre-courant suivant Craig : on place 144 ng du produit dans les troisième et quatrième tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 3 ml), en utilisant comme système solvant un mélange (11 : 7 : 9 : 6) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple 1.On effectue une répartition multiplicative en 350 stades au total (rmax = 125; K = 0,56). A partir du produit obtenu, on concentrant les fractions n 118 à 137, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé ; on obtient à l'état pur l'amide dotriacontapeptidique protégé. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,49 dans le système 70 Rf = 0,60 dans le système 107. EXEMPLE 10 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp Leu-Asn-Lys-Leu-His-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 x 3HCl (Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 . dans un bain de glace, 30 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC) Leu-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 ajoute ensuite sous atmosphère d'azote 0,65 ml d'acide chlorhydrique concentré, ce qui fait que le produit est dissous au bout d'une minute environ.On agite alors la solution pendant 7 minutes encore à 0 et ajoute alors au tout 7,3 ml d'acide acétique glacial, On lyophilise la solution alors obtenue, dissout le lyophillsat dans peu d'eau, lyophilise à nouveau et sèche le résidu blanc pendant trois heures encore à la tempériture ambiante sous un vide poussé, sur un mélange de pentoxyde de phosphore et d'hydroxyde de potassium. Dans un chromatogramme en couche rince sur du gel de silice, le trichlorhydrate obtenu de l'amide dotriacontapeptidique présente les valeurs de R. suivantes sur "Alox D-O" (la Firme Camag ; oxyde d'aluminium avec 8 % de plâtre) Rf = 0,50 dans le système 52 Rf = 0,58 dans le système 79. Sur cellulose "Selecta 1.440" (plaques finies de la Firme Schleicher et Schüll) Rf = 0,60 dans le système 101 A Rf 0,50 dans le système 45. Lors d'une électrophorèse sur de la cellulose "Selecta 1.440" à un pH de 1,9 sous 280 volts, la plage de migration est de 4,8 cm vers la cathode. La matière de départ peut être préparée comme suit 1. Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-OH On dissout 3,66 g de Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-NH-NH2 (cf. exemple 2 sous 12) dans 52 ml de diméthylformamide, refroidit la solution à - 200 et ajoute 3,75 ml d'une solution 3,23-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne, ainsi que 0,718 ml de nitrite de tertiobutyle. On agite la solution pendant 20 minutes à - 15 , refroidit à - 20 et ajoute une solution de 3,46 g de H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile- Gly-OH x AcOH (cf. exemple 1) dans 52 ml de diméthylformamide, puis 2,08 ml de N-éthyl-di-isopropylamine.On laisse cette solutien reposer pendant 15 heures à 00, concentre ensuite jusqu'à @O ml, ajoute 200 ml d'eau, sépare par filtration le précipité blanc qui s'est formé et reprécipite encore à deux reprises dans un mélange de diméthyflroamide et d'eau. La substance obtenue, qui s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince, se décompose en écumant à 1760 environ0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont les suivantes Rf = 0,32 dans le système 43C Rf = 0,55 dans le système 7O Rf = 0,33 dans le système lOOo 2.Z-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-Yal-Gly-Ala,-Pro-NH2 Dans 43 ml do diméthylformamide, on dissout 3,79 g du composé décrit sous 1) et 1,11 g de H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute à la solution 0,375 g de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 0,671 g de dicyclohexyl-carbodiimide, puis ' agite la solu tion obtenue pendant 15 heures à 45 . On ajoute ensuite cette solution goutte-à-goutte à 400 ml d'éther exempt de peroxyde que l'on a préparé, sépare le précipité par essorage et le reprécipite dans un me lange de méthanol, d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, ainsi que dans un mélange d'acétonitrile et d'eau.Le produit pratiquement pur obtenu présente dans un chromatogramme en couche rince sur du gel de silice les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,71 dans le système 37 Rf 0,62 dans le système 43 3 Rf = 0,66 dans le système 107. 3. N-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 x AcOH Dans 50 mi d'acide acétique à 80 %, on dissout 1,0 g du produit décrit sous 2) et, tout en ajoutant 100 mg d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène à la température ambiante avec de l'hydrogène. après f filtration, on concentre le filtrat jusqu 40 ml environ et lyophilise, Sur du gel de silice, le produit présente les valeurs de Rf suivantes : Rf= 0,48 dans le système 43 E Rf = 0,48 dans le système 70 Rf = 0,68 dans le système 107. 4. Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala Pro-NH2 Dans 10 111 de diméthylformamide, on dissout à chaud 705 mg- de Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-NHNH2 (cf. exemple 2), refroidit la solution obtenue - 200 et ajoute 0,584 mi d'une solution 3,2-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne. ainsi que 1,043 ml de nitrite de tertio-butyle On agite la solution pendant 15 minutes à une température de - 100 à - 150, refroidit à - 200 et ajoute une solution de 932 mg du produit décrit sous 3) dans 10 ml de diméthylformamide, puis 0,321 ml de N-éthyl-dl-isopropylamine.On agite ensuite cette solution à 0 dans un bain de glace, ajoute au cours de 5 heures, en quatre portions de 20 litres chacune environ, 80,2 litres de 1-N-éthyl-di-isopropylamine, laisse la solution reposer à 0 pendant 15 heures après la dernière addition de la base et ajoute ensuite goutte-à-goutte dans 100 ml d'éther exempt de peroxyde que l'on a préparé, Après filtration et séchage, on soumet le précipité blanc qui s'est formé à une répartition à contrecourant suivant Craig : on place 1,24 g de l'amide docosapeptidique protégé obtenu dans les second, troisième et quatrième tubes d'un appareil de répartition (volume des phases : chaque fois 10 ml) > en utilisant comme solvant un système constitué par un mélange (10 * 3 * 5 5) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple 1. On procède à une préparé tition multiplicative en 300 stades au total. A partir des fractions pures obtenues, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé et obtient à l'état pur l'amide docosapeptidique protégé, 5.H-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu His-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 Dans 30 ml d'acide acétique à 80 %, on dissout 100 mg du produit obtenu sous 4), et, tout en ajoutant 20 mg d'un charbon à 10 % de palladium, hydrogène pendant 20 heures à la tenpérature ambiante avec de l'hydrogène. On filtre ensuite, concentre le filtrat jusqu'à 10 ml environ et lyophilise. On dissout le lyophilisat dans peu de méthanol ajuste à un pH compris entre 7 et 8 avec une solution saturée d'hydrogéno-carbonate de sodium et verse ensuite ,outte-à-goutte dans une solution décinormale de carbonate de sodium.On obtient un précipité blanc qui présente dans un chromatogramme en couche mince sur du ,el de silice les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,57 dans le système 45 E Rf = 0,65 dans le système 70 Rf = 0,24 dans le système 100. 6. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu) Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu) Thr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Dans 0,437 ml de diméthylformamide. on dissout à chaud 60 g de l'amide docosapeptidique de formule BOC-Cys-Gly- Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Sys-Mét-Leu-Gly-OH qui est décrit sous 5), refroidit la solution à la températare ambiante, ajoute au tout 6,0 mg de N-hydroxy-succinimide, ainsi que 8,0 mg de dicyclohexyl-carbodiimide et agite sous atmosphère d'azote pendant trois heures et demie à 45 .On verse ensuite la solution dans 9 ml d'éther exempt de peroxyde et soumet le précipité blanc qui s'est formé, après séchage, à une répartition à contrecourant suivant Craig o- on place 80 mg du produit dans le troisième tube d'un appareil de répartition (volume des phases ; chaque fois 3 ml), en utilisant comme solvant un système constitué par mi mélange (11 3 3 : 6 : 7) de méthanol, d'un tampon, de chloro- orme et de tétrachlerure ne carbone, le tampon etant celui imdiqué sous 8) dans l'exemple 1.On sffectue une répartition --ultiplicatlve en 200 stades au total (rKlax = 100, K = 1,0). A partir des fractions pures, on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé ; on obtient l'amide dotriacontapeptidique protégé. Dans un chromatogramme en couche rince sur du gel de silice 7 les valeurs de Rf ont les suivantes Rf = 0,50 dans le système 70 Rf = 0,44 dans le système 100. EXEMPLE 11 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Val-Len-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp Lau-Asn-Lys-Lau-His-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly- Ala-Pro-NH2 (Val8, Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M) Dans 0,35 ml d'acide formique à 98 fo, on dissout 112,5 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu- Gly-Thr(tRu)-Leu-Thr(tRu) -Gln-Asp (OtRu) -Leu-Asn-Lys (ROC) -Len- His-Thr(tRu) -Tyr( tRu) -Pro-Gln-Thr(tRu) Ala-Ila-Gly-Val-Gly-Ala- Pro-NH2, refroidit à 00, ajoute 1,2 ml d'acide chlorhydrique concentré glacé et laisse reposer à 0 pendant 12 minutes.On ajoute ensuite au tout 15 ml d'acide acétique glacial, refroidit à -25 et lyophilise en refroidissant au début à -250. On dissout le produit obtenu dans 3 ml d'eau et lyophilise à nouveau. On obtient alors la Val8, Leu12,16,19, Tyr22-calcitonine M sous la forme d'une poudre blanche qui, lors d'une électro- phorèse en couche mince ("Avicel", plaques finies) à un pH de 1,9, présente au cours de deux heures, sous une tension de 16 volts/cm, une plage de migration de 4,3 cm vers la cathode. Lors d'une chromatographie en couche sur des plaques d'oxyde d'aluminium ("D-O" de la Firme Camag, avec addition de 12 % de plâtre), la valeur de Rf est de 0,48 dans le système 52. La matière de départ peut être préparée comme suit A 171 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys Val-Leu-Gly-OH (cf. exemple 2) et à 266 mg de H-Thr(tBu)-Leu- Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Tyr (tBu)-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (cf. exemple 10), on ajoute 2 ml de diméthylformamide et 20 mg de N-hydroxy- succinimide. On agite pendant une heure à 450 et refroidit ensuite à 300. On ajoute alors au tout 30 mg de dicyclohexylcarbodiimide, agite pendant 16 heures à une température de 35 à 40 et transfère ensuite la masse réactionnelle dans 50 ml d'éther. Au bout de 5 heures à 0 , on sépare par filtration le produit brut qui s'est formé, le sèche et le soumet à une répartition à contre-courant dans un système constitué par un mélange (6 : 7 : 11 : 3, parties en volume) de chloroforme, de tétrachlorure de carbone, de méthanol et d'un tampon, ce dernier étant celui indiqué sous 8) dans l'exemple 1. Après 300 stades de répartition,. la substance pure se trouve dans les éléments 157 - 181 (K = 1,3). On réunit ces fractions, les concentre à sec sous vide et débarrasse le résidu d'évaporation de l'acétate d'ammonium par séchage à 450 sous une. pression de 0,01 mm de mercure. Le peptide purifié-protégé.présente, .dan,s une chromatographie en couche mince sur des plaques de gel de silice, les valeurs de R f suivantes Rf= 0,29 dans le système 52 A Rf 0,46 dans le système 70. EXEMPLE 12 Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Leu Asn-Lys-Leu-His-Thr-Tyr-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro NH2 (désamino-Val8, Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M). A 17 mg de Bmp-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val Leu-Gly-Thr(tRu) -Leu-Thr(tRu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys (ROC)- Leu-His-Thr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Pro-NH2, on ajoute 0,5 ml d'une solution concentrée glacée d'acide chlorhydrique, laisse reposer pendant 12 minutes à 0 , fait ensuite le vide pour éliminer l'acide chlorhydrique dissous à l'état gazeux, pendant une minute à 0 sous une pression de 0,01 mm de mercure, puis ajoute 6 ml d'acide acétique glacial et lyophilise. On obtient 15 mg du dichlorhydrate de la désamino Val8, Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine PI sous la forme d'une poudre presque incolore.Dans une chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium ("D-O" de la Firme Camag, 12 -)-o' de platre), les valeurs de Rf sont les suivantes Rf 0,6 dans le système 52 Rf 0,72 dans le système 79. La matière de départ peut être préparée comme suit On agite pendant 90 minutes à 450 48 mg de Bmp-Gly- Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Val-Leu-Gly-OH (cf. exemple 9), 77 mg de H-Thr(tRu)-Leu-Thr(tbu)-Gln-Asp(OtRu)-Leu-Asn-Lys(BOC)- Leu-His-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2 (cf. exemple 10), 5 mg de N-hydroxy-succinimide et 0,7 ml de diméthylformamide, puis ajoute ensuite 10 ml de dicyclohexyl-carbodiimide.Après avoir continué à agiter pendant 16 heures à une température de 40 à 450, on verse dans 10 ml d'éther, laisse reposer. pendant une nuit à 00, sépare ta fin précipité par centrifugation, le lave à l'éther et le sèche à 40 sous une pression de il mm de mercure.Pour le purifier, on le reprécipite à deux reprises dans un mélange de diméthylformamide et d'éther ; on chromatographie ensuite, après dissolution dans du méthanol, sur une colonne (préparée dans du méthanol) de "Sephadex LH-20" d'un diamètre de 2,8 cm et d'une hauteur de 40 GllLs On éiue--avec-du-méthanol, en recueillant des fractions de 3 mi. On concentre à sec les fractions présentant une adsorption en ultra-violet et contrôle leur pureté par une chromatographie en couche mince sur une plaque de gel de silice dans les systèmes 52, 52a, 70 et 100. On réunit les fractions pures, concentre à sec, et obtient alors 40 mg du dotriacontapeptide protégé. EXEMPLE 13 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp Phé -Asn-Lys -Phé -Hi s -Thr-Phé -Pro-Gln-Thr- a-île -Gly-Val-Gly- Ala-Pro-NH2, 3 HCl $Leu12 - calcitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 dans un bain de glace, sous atmosphère d'azote, 60 mg de ROO-Cys-Gly-Asn-Leu- Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Leu-Thr-Gln-Asp(OtBu) Phé-Asn-Lys (RCC)-Phé-His-Thr(tRu) -Phé-Pro-Gln-Thr(tRu)-Ala-Ile- Gly-Val-Gly-Ala-Pro-HN2, ajoute ensuite d'un coup 1,29 ml d'acide chlorhydrique concentré, ce qui fait que la substance est dissoute au bout d'une minute environ. On agite alors encore pendant 7 minutes à 00, ajoute ensuite d'un coup 15 mi d'acide acétique glacial, agite bien à fond la solution et lyophilise. On dissout le îyophilisat dans peu d'eau, lyophilise à nouveau. et- abandonne ensuite pendant trois heures encore à la température ambiante sous un vide poussé, sur un mélange de pentoxyde de phosphore et d'hydroxyde de potassium. Bans un chromatogramme en couche mince, le trichlorhy- drate ainsi ohtenu de l'amide dotri ac ontapeptidique présente les valeurs de Rf suivantes sur cellulose "Selecta 1.440" -(Firme Schleicher et Schüll) Rf = 0,61 dans le système 45 Rf = O, 60 dans le système 101 A Electrophorèse sur cellulose "Selecta 1.440", à un pH de 1,9, temps de migration une heure et demie, 280 volts, plage de migration : 5,1 cm vers la cathode. La matière de départ peut être préparée comme suit 1. Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-NH-NH2 Dans du méthanol, et en présence d'un charbon au palladium, on décarbobenzoxyle avec de l'hydrogène le dérivé tétrapeptidique de formule Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe qui est décrit dans le brevet belge 737 890 et condense le composé obtenu, de formule H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe, avec Z-Leu-ONP dans du diméthylformamide pour obtenir le composé de formule Z-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe qui cristallise dans un mélange de méthanol et d'eau.Le composé fond à 204 - 2050 et présente un pouvoir rotatoire spécifique 20 = On décarbobenzoxyle ce dérivé pentapeptidique par hydrogénation dans du méthanol en présence de charbon au palladium et condense le produit obtenu avec Z-Thr(tBu)-OSU dans du diméthylformamide pour obtenir le composé de formule Z-Thr (tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-OMe. Ce dernier fond, après précipitation dans un mélange de méthanol et d'eau, à 197 - 1990 ; il présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]20D = + 120 (c = 1,828 dans le chloroforme). L'ester méthylique de 1'hexapeptide est transformé, avec de l'hydrate d'hydrazine dans du méthanol, en 1'hydrazide de formule Z-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-NH-NH2. On reprécipite ce dernier dans un mélange de diméthylformamide et d'eau et il fond alors à 220 - 221 ; il présente un pouvoir rotatoire spécifique Êa 7D20 = -65 (c = 1,65 dans le diméthylformamide). 2. H-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH, (acétate) On condense suivant Weygand-Wünsch avec du dicyclohexylcarbodiimide, en présence de N-hydroxy-succinimide dans du diméthylformamide à 45 , le composé de formule Z-Asn-Lys (BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH décrit dans le brevet belge 737 890 avec l'amide tétrapeptidique de formule H-Val-Gly-Ala-Pro-WH2 qui est également décrit dans ledit brevet.On fait précipiter le dérivé hexadécapeptidique de formule Z-Asn-Lys(ROC) -Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tRu) - Ala-Il e-Gly-Val-Gly-Al a-Pro-NH2 par versage goutte-à-goutte dans de l'éther, reprécipite la poudre séparée dans un mélange de méthanol, de chloroforme et d'éther de pétrole, puis la soumet à une répartition à contre-courant en 850 stades suivant Craig dans un système constitué par un mélange (1 : 1 : 1, parties en volume) d'acétonitrile, d'un tampon, de chloroforme et de méthanol, le tampon étant constitué par 5 g d'acétate d'ammonium en solution dans un litre d'acide acétique binormal. Le dérivé hexadécapeptidique présente une valeur K de O, 33 dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rt est de 0,50 dans le système 70, de 0,41 dans le système 96 et de 0,23 dans le système 52. En vue de décarbobenzoxyler le produit, on l'hydrogène dans de l'acide acétique à 80 %. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, le mono-acétate obtenu du composé de formule H-Asn-Lys (BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val Gly-Ala-Pro-NH2 présente une valeur de Rf de 0,18 dans le système 100. 3. H-Thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé HIs-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tRu)-Ala-IIe-Gly-Val-Gly-Ala- Pro -NH2 Suivant la méthode à l'azide, on condense de la manière indiquée sous 4) suivant l'exemple 10, le composé de formule Z-thr(tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-NH-NH2 décrit sous 1) avec le mono-acétate de l'amide hexadécapeptidique décrit sous 2). Par versage goutte-à-goutte dans de l'éther, on obtient le dérivé docosapeptidique sous la forme d'une poudre que l'on soumet à une répartition à contre-courant en 700 stades suivant Craig dans un système constitué par un mélange (4 : 2 : 1 : 1, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone.Le dérivé docosapeptidique présente une valeur K = 0,7 et sur du gel de silice les valeurs de R f sont les suivantes Rf = O,55 dans le système 70 Rf 0,43 dans le système 100 R f = 0,65 dans le système 107. Pour éliminer le groupe carbobenzoxy, on hydrogène dans de l'acide acétique à 80 %. On reprend le produit décarbobenzoxylé dans un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol, puis lave avec une solution diluée de carbonate de sodium et ensuite avec de l'eau. On obtient ainsi le dérivé docosapeptidique indiqué dans le titre, qui dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice présente une valeur de R f de 0,21 dans le système 100. 4. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr (tBu)-Leu-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Phé-His Thr( tRu) -Phé-Pro-Gln-Thr(tRu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Suivant le procédé indiqué dans l'exemple 6, on condense le dérivé docosapeptidique décrit sous 3) avec le composé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys Val-Leu-Gly-OH. En versant goutte-à-goutte dans de 1' éther, on obtient le dérivé dotriacontapeptidique sous la forme d'une poudre que l'on soumet à une répartition à contre-courant en 400 stades suivant Craig dans un système constitué par un mélange (11 : 3 : 6 : 7, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone.Pour le produit pur, la valeur K est de 1,0 ; la valeur de Rf sur du gel de silice est de 0,73 dans le système 107. EXEMPLE 14 H-Cys -Gly-Asn-Leu-S ér-Thr-Cys-Hét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp- Leu-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2, 3 HC1 (Leul6-calcitonine M) Dans un petit ballon, on refroidit à 0 dans un bain de glace, sous atmosphère d'azote, 60 mg de BOC-Cys-Gly-Asn-Leu- Sér(tBu)-Thr(tBu)-Oys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr-Thr(tBu)-Gln-Asp (OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu) Ala-Ile-Cly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute ensuite d'un coup 1,29 ml d'acide chlorhydrique concentré, ce qui fait que la substance est dissoute am bout d'une minute environ. On agite alors pendant 7 minutes encore a 00, ajoute ensuite d'un coup 15 ml d'acide acétique glacial, , agite bien à fond la solution et lyophilise. On dissout le lyophilisat dans peu d'eau, lyophilise à nouveau et abandonne ensuite pendant trois heures encore à la température ambiante sous un vide.poussé, sur un mélange de pentoxyde de phosphore. et d'hydroxyde de potassium. Dans un chromå.togramme en couche mince, le trichlorhydrate obtenu de l'amide dotriacontapeptidique présente les valeurs de R f suivantes: sur "Alox-D-O" (Firme Camag;,, oxyde d' aluminium avec 8 % de plâtre) Rf = 0,64 dans le système 52 Rf = 0,67 dans le système 79 sur cellulose "Selecta 1 440" (plaques finies de la Firme Schleicher et Schüll) Rf = 0,48 dans le système 45 Rf = 0,57 dans le système 101 A Electrophorèse sur cellulose "Selecta 1 440" à un pH de 1,9, pendant une heure et demie, sous 280 volts : plage de migration de 5,5 cm vers' la cathode. La matière de départ peut être préparée comme suit 1. Z-Thr(tRu) Tyr(tRu) -Thr(tRu) -Gln-Asp(OtRu) -Leu-NH-NH2 Tout en ajoutant de la N-méthyl-morpholine, on condense le produit de formule Z-Asp(OtBu)-ONP avec du chlorhydrate de H-Leu-OMe dans du diméthylformamide pour obtenir le produit de formule Z-Asp(OtBu)-Leu-OMe. Le produit cristallise dans un mélange d'éther et d'éther de pétrole. I1 fond à 61 620 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]20D = -27 (&alpha; = 1,682 dans le méthanol). On le décarbobenzoxyle avec de l'hydrogène en présence de charbon au palladium, dans du méthanol, en ajoutant du gaz chlorhydrique. On condense le composé. de formule H-Asp(OtBu) Leu-OMe obtenu avec Z-Gln-QNP dans du diméthylformamide en ajoutant de la n-méthylmorpholine, pour obtenir le composé de formule Z-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe. Ce dernier cristallise dans un mélange d'acétone et d'éther de pétrole. I1 fond à 184 18.50 et présente un pouvoir rotatoire spécifique Ta 720 = 370 (c = 1,891 dans le méthanol). Le produit est hydrogéné dans du méthanol en présence de charbon au palladium. On condense le composé de formule H-Gln-Asp(OtRu)- Leu-OMe obtenu dans du diméthylformamide, avec Z-Thr(tBu)-OSU pour obtenir le composé de formule Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)- Leu-OMe qui cristallise dans un mélange de méthanol et d'eau. Ce dernier composé fond à 175 - 1800 et présente un pouvoir rotaoire spécifique [&alpha;]20D = -28 (c = 1,95 dans le méthanol). Par hydrogénation dans du méthanol en présence de charbon au palladium, on obtient à partir de ce dernier composé le produit de formule H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe. On condense ce dernier avec Z-Tyr(tBu)-OH dans du diméthylformamide en présence de aicyclohexyl-carbodiimide pour obtenir le produit de formule Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe qui cristallise dans un mélange de méthanol et d'eau. Ce dernier composé fond à 176 1850 et présente un pouvoir rotatoire spécifique 20 @ @D = + 1 (C = 2,005 dans le chloroforme). Le groupe carbobenzoxy est éliminé par hydrogénation dans du méthanol en présence de charbon au palladium et l'on condense le composé de formule H-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-OMe obtenu dans du diméthylformamide avec Z-Thr(tBu)-OSU. On précipite le composé de formule Z-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Gln- Asp(OtBu)-Leu-OMe dans un mélange de méthanol et d'eau. Le composé fond à 153 - 1590 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [&alpha;]20D = -10 (c = 1,981 dans le méthanol). En faisant réagir l'ester méthylique sur de l'hydrate d'hydrazine dans du méthanol, on obtient le composé de formule Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-NH-WH2 que 1' on précipite à l'état de poudre dans un mélange de méthanol et o eau. Le composé fond à 175 - 2040. 2. H-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-Asn-Lys(BOC) Phé-His-Thr( tRu) -Phé-Pro-Gln-Thr(tRu) Ala-Ile-Gly-Val-Gly- Ala-Pro-NH2 On condense suivant la méthode à 1'azide, comme infiqué sous 4) dans l'exemple 10, Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr (tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Leu-NSH2 avec le mono-acétate de l'amide hexapeptidique, de formule H-Asn-Lys(BOC)-Phé-His-Thr(tBu) Phé -Pro-Gln-Thr ( tRu) -Al a-Il e -Gly-Val Gly-Ala-Pro-NH2 (suivant exemple 13) et, après versage goutte-à-goutte dans de l'éther, obtient une poudre que l'on soumet à une répartition à contrecourant en 630 stades suivant Craig dans une système constitué par un mélange (4 : 1 : 2 : 2, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone. Pour le dérivé docosapeptidique K = 0,6 .; sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,38 dans le système- 100. On hydrogène le produit dans de l'acide acétique à 80 =/ò, reprend le produit déc-arbobenzoxylé dans un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol, lave la solution avec une solution diluée de carbonate de sodium et avec de l'eau, puis concentre. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,33 dans le système 100 et elle est de 0,79 dans le système 70. 3. ROC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tRu)-Thr(tRu) -Cys-Hét-Leu-Gly-Thr (tRu) -Tyr-Thr(tRu) -Gln-Asp (OtRu) -Leu-Asn-Lys (ROC) -Phé-His- Thr( tRu)-Phe'-Pro-Gln-Thr(tRu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Suivant le procédé décrit dans l'exemple 6, on condense le dérivé docosapeptidique obtenu sous 2) avec le composé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys- Val-Leu-Gly-OH. Par versage goutte-à-goutte dans de l'éther, on obtient le dérivé dotriacontapeptidique sous la forme d'une poudre.On soumet cette dernière à une répartition à contrecourant en 230 stades dans un système constitué par un mélange (11 : 3 : 6 : 7, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone ; la valeur K est de O, 9. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, le produit présente les valeurs de Hf suivantes Rf = 0,67 dans le système 70 Rf = O, 84 dans le système 107 R f = 0,40 dans le système 100. EXEMPLE 15 - I H-Cys-Gly-Asn-Leu-S ér-Thr-Cys-Hét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-G1n-Asp- Phé-Asn-Lys-Leu-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly Ala-Pro-NH2, 3HCl (Leu19 -calcitonine M) Dans un petit ballon. on refroidit à 0 dans un bain de glace, sous atnosphère d'azote, 60 mg de BOC-Cys-Gly Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Trn(tBu) Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, ajoute ensuite d'un coup 1,29 ml d'acide chlorhydrique concentré, ce qui.fait que la substance est dissoute au bout d'une minute environ.On agite alors pendant 7 minutes encore à 0 , ajoute ensuite d'un coup 15 ml d'acide acétique glacial, agite bien à fond la so- lution et lyophilise. On dissout le lyophilisat dans peu d'eau, lyophilise à nouveau et abandonne ensuite pendant trois heures encore à la température ambiante sous un vide poussé, sur un mélange de pentoxyde de phosphore et d'hydroxyde de potassium. Dans un chromatogramme en couche mince, le chlorhydrate obtenu de l'amide dotriacontapeptidique présente les valeurs de R f suivantes Sur "Alox D-O" (Firme Camag, oxyde d'aluminium avec 8 % de plâtre) Rf = 0,63 dans le système 52 Rf = 0,67 dans le système 79 Sur cellulose "Selecta 1440" (plaques finies de la Firme Schleicher et Schüll) Rf = 0,52 dans le système 45 Rf = 0,57 dans le système 101 A Electrophorèsa sur cellulose "Selecta 1 440", à un pH de 1,9 pendant une heure et demie sous 280 volts : plage de migration vers la cathode : 5,6 cm. La matière de départ peut être préparée comme suit 1. H-Asn-Lys (BOC) -Leu-Hi s -Thr ( tBu) -Phé -Pro -Gln-Thr ( tBu) -Al a Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 A l'aide d'un mélange de carbodilmide et de N-hydroxysuccinimide dans du diméthylformamide, on condense à 450 Z-Asn Lys(BOC-Leu-His-Thr(tBu)-Phé-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Cly-OH [cf. exemple 2, 13)] avec H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 [exemple 2, 18)] et, en versant goutte-àgoutte dans de l'éther, obtient une poudre que l'on soumet à une répartition à contre-courant en 700 stades suivant Craig, dans un système constitué par un mélange à partit égales en volume d'acétonitrile, d'un tampon, de chloroforme et de méthanol, le tampon étant constitué par 5,0 g d'acétate d'ammonium en solution dans un litre d'acide acétique binormal.La fraction pure obtenue [valeur K = 0,54, valeurs de Rf sur gel- de silice Rf = 0,66 dams le système 70 Rf = 0,32 dans le e système 100 Rf = 0,39 dans le système 43 C] est hydrogénée de manière usuelle dans de l'acide acétique à 80 'já ; on obtient le mono-acétate de 1'hexadécapeptide qui, sur du gel de silice, présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,53 dans le système 70 Rf = 0,57 dans le système 107 Rf = 0,46 dans le système 43 E. 2. H-Thr(tRu) Tyr(tRu) -Thr(tRu) -Gln-Asp(OtBu) -Phé-Asn-Lys(ROC) Leu-His-Thr(tRu) -Phé-Pro-Gln-Thr(tRu) -Ala-Ile-Gly-Val-Gly- Ala-Pro-NH2 Suivant la méthode à 1'azide, on condense, comme indiqué sous 4) dans l'exemple 10, Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu) Gln-Asp(OtBu)-Phé-NH-NH2 [cf. brevet belge 737 890, exemple 2, 28)~7 avec le mono-acétate de l'amide hexapeptidique, de formule H-Asn-Lys (ROC) -Leu-His-Thr(tRu) -Phé-Pro-Gîn-Thr(tRu) - Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2, AcOH.En versant goutte-àgoutte dans de l'éther, on obtient une poudre que l'on soumet à une répartition à contre-courant en 500 stades suivant Craig, dans un système constitué par un mélange (4 : 1 : 2: 2, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure; de, carbone. A partir des fractions pures obtenues (valeur K = 0,6), on élimine l'acétate d'ammonium par sublimation Sur du gel de silice, l'amide docosapeptidique protégé que l'on obtient présente les valeurs de Rf suivantes Rf = 0,72 dans le système 70 Rf, 0,44- dans le système 100. On hydrogène le produit de manière usuelle dans de l'acide acétique à 80 /S. En reprenant dans un mélange d'acétate d'éthyle et de n-butanol, en lavant avec une solution diluée de carbonate de sodium, en lavant jusqu a neutralité avec de l'eau et en concentrant, on obtient l'amide docosapeptidique indiqué dans le titre ; sur du gel de silice, ce composé présente une valeur de Rf de 0,36 dans le système 100. 3. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr (tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phé-Asn-Lys(BOC)-Leu-His Thr ( tRu) -Phé -Pro-Gln-Thr ( tRu) -Al a-Il e -Gly-Val -Gly-Al a-Pro -NH2 Suivant le procédé indiqué dans l'exemple 6, on condense le dérivé docosapeptidioue otenu sous 2) avec le composé de formule BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér(tBu)-Thr(tBu)-Cys Met-Leu-Gly-OH. En versant goutte-à-goutte dans de l'éther, on obtient le dérivé dotriacontapeptidique sous la forme d'une poudre. On soumet cette dernière à une répartition à contrecourant en 200 stades, dans un système constitué par un mélange (11 : 3 : 6 : 7, parties en volume) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone ; la valeur de K est égale à 1,2. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, le produit présente une valeur de Rf de 0,5 dans le système 70. REVENDICATIONS 1. Las amides peptidiques de formule 1 2 3 4 5, 6 7 8 9 10 ll 12 13 14 15 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys- X -Lau -Giy-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp- 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly 31 32 (î) Ala-Pro-NH2, dans laquelle X représente le reste de la L-méthionïne, de la L-valine, de la L-norvaline, de la L-leucine, de la L-isoleucinq, de la L-norleucine ou de l'acide L-z-aminobutyrique et dans laquelle au moins l'un des acides aminés dans les positions Il, 12, 16, 17, 19, 20, 22 et 24 est échangé contre un autre acide aminé, et notamment la L-thréonine11 contre la L-lysine, la L-tyrosine12 contre la L-leucine, la L-phényl-alanine16 contre la L-leucine, l'acide L-aspartique17 contre la L-histidine, la L-phénylalanine19 contre la L-loucine, la L-histidine20 contre la L-glutamine, la L-phénylalanine22 contre la L-tyrosine et la L-glutamino24 contre de la L-arginine, leurs dérivés, ainsi que leurs sels d'addition avec des acides et les complexes de ces composés. 2. La Lys11, Arg24 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 3. La His17, Leu19, Gln20 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 4. La Tyr22 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 5. La Leu12,16,19 -calcitonine M, ses dérivés, sels d'addition avec des acides et ses complexes. 6. La Val8, Tyr22 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 7. La Val8, Leu12,16,19 -calcitonine M, ses ses sels, d'addition avec des acides et ses complexes. 8. La Val8, Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 9. La Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des scides et ses complexes. 10. La désamino-Tyr22 -caleitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 11. La désamino-Leu12,16,19 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 12. La désamino-Val8, leu12,16,19 -calcitonine 1U, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 13. La désamimo-Val8, Leu12,16,19, Tyr22 -calcitonine M, ses dérivés, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 14. Les N&alpha;-acyl-dérivés des peptides suivant l'une quelconque des revendications 1 à 14. 15. Les complexes des composés suivant l'une quelconque des revendications 1 à 15 avec le phosphate de zinc, le pyrophosphate de zinc et/ou l'hydroxyde de zinc. 16. Les complexes des composés suivant l'une quelconque des revendications 1 à 15.avec des poly-oxygélatines, avec le phosphate de polyphlorétine, avec des polyphosphates ou l'acide polyglutamique. 17. Les préparations pharmaceutiques renfermant des composés suivant l'une quelconque des revendications 1 à 16. 18. Procédé de préparation de nouveaux peptides de formule 1' 2 3 4 5 6 7' 8 9 10 11 12 13 14 15 H-Cys-Gly-Asn-Leu-S ér- Thr-Cys - X -Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp- 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Phé-Asn-Lys-Thé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly 31 32 Ala-Pro-NH2, (I) dans laquelle X représente le reste de L-méthionine, de la L-valine, de la L-norvaline, de la L-leucine, de la L-isoleucine, de la L-norleucine ou de l'acide L-a-aminobutyrique et dans laquelle au moins l'un des acides aminés dans les positions 11, 12, 16, 17, 19, 20, 22 et 24 est échangé contre un autre acide aminé, et notamment la L-thréonine11 contre la L-lysine, la Ltyrosine12 contre la L-leucine, la L-phényl-alanine16 contre la 17 L-leucine, l'acide L-aspartigue 7 contre ia çhistidine, la L-phénylalanine19 contre la L-leucine, la L-histidine20 contre la L-glutamine, la 1s-pnénylalanine22 contre la L-tyrosine et la L-glutamine24 contre de la L-arginine, leurs dérivés, ainsi que leurs sels d'addition avec des acides et les complexes de ces composés, caractérisé par le fait que a) dans un composé de formule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly 29 30 31 32 Val-Gly-Ala-Pro-NH2, (I), dans laquelle X a la signification indiquée et dans laquelle l'un au moins des amino-acides dans les positions 11, 12, 16, 17, 19, 20, 22 et 24 est remplacé par les acides aminés indiqués cidessus, ou leurs dérivés, composes dans lesquels au moins un groupe amine gène ou un groupe carboxyle est protégé par un groupe de protection éliminable, on élimine le(s) groupe(s) de protectien, ou que b) on oxyde en bisulfures des composés de formule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 H-Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Phé -Asn-Lys -Phé-His -Thr-Phé-Pre-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly 31 32 Ala-Pro-NH2 (II), dans laquelle X a la signification indiquée et dans laquelle l'un au moins des amino-acides dans les positions 11, 12, 16, 17, 19, 22 et 24 est remplacé par les acides aminés ci-dessus, ou leurs dérivés, dans lesquels les groupes mercapte sont libres ou sont protégés par le groupe trityle, puis, si on le désire, transforme les amides peptidiques obtenus en leurs sels d'addition avec des acides ou en leurs complexes.