La présente invention, à la réalisation de laquelle ont participé 121» Jean BOUCHAUDON et Georges JOLLES, concerne les dérivés des polymyxines de formule générale î A - X - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab - Y - Z - Dab - Dab - Thr ' (I) 5 dans laquelle : A représente un reste alcoyle ayant de 3 à. 18 atonies de carbone en chaîne droite ou ramifiée éventuellement substitué, par exemple par un radical hydroxyle» amino ou cyano, un resta alcoyle ayant de 1 à 4 atonies de carbone en chaîne droite ou ramifiée 10 substitué par un radical cycloalcoyle mono- ou polycyclique tel que le cyclo-hexyle ou le norbornyle ou par un radical phényle éventuellement substitué par un atome d'halogène ou un radical alcoxyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou un radical phényle éventuellement substitué par un atome d'halogène ou un radical alcoxyle ayant dé 1 â 4 atomes de carbone, 15 X représenta un radical choisi dans le groupe des radicaux carbonyle (-CO-), oxycarbonyle (-OCO-), aminocarbonyle (-RHC0-) ou sulfonyle (-SO2-) et Y-Z représente l'un des enchaînements D Phe-Leu, D Leu-Leu et D Leu-Ileu, Dans ce qui précède et ce qui suit les abréviations utilisées pour désigner les antinoacides sont celles de l'Union Internationale de Chimie Pure 20 et Appliquée et le symbole Dab représente l'acide a,y-diaminobutyrique, étant également entendu que, sauf indication contraire, les aminoacides ont la configuration L. On connait déjà un certain nombre de polymyxines isolées jusqu'à présent à partir de mélanges obtenus par fermentation» Ces polymyxines, qui 25 sont de divers types, sont habituellement désignées par les lettres A, B, D, E et 11 ou par les dénominations circulines A et B. Les polymyxines B et E et les circulines constituent une classe particulière des produits de formule générale (I), Plus précisément, les polymyxines B et E et les circulines de fermentation répondent à la formule générale : 30 Aj - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab - Y - Z - Dab - Dab - Thr -j dans laquelle A^ représente un radical n,octanoyle, L méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle et simultanément Y-Z représente D Phe-Leu ou D Leu-Leu ou Aj représente un radical L méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle et simultanément Y-Z représente D Leu-Ileu. 35 Les produits de formule générale (I) autres que les polymyxines de fermentation de formule générale (II) sont des produits nouveaux» La présente invention concerne plus particulièrement ces produits 71 03429 2 2124060 nouveaux ainsi que leurs sels, leur préparation et les compositions médicinales qui les contiennent à l'état de base et/ou de sels. Le procédé de préparation desdits produits nouveaux permet égalaient, à partir des matières premières convenables, de préparer les produits 5 de formule générale (II)» Ce procédé de préparation des produits de formule générale (II), les produits ainsi obtenus, les compositions médicinales qui les contiennent à l'état de base et/ou de sels, constituent vin autre objet de 1'invent ion. Selon l'invention, les produits de formule générale (I) peuvent 10 être préparés par réaction d'un cyclopeptide de formule générale s (a) H - Dab - Dab - Y - Z - Dab - Dab - Thr n g(y> g dans laquelle Y-Z est défini comme précédemment et G représente un radical protégeant la fonction Y-a^ino de l'acide a,y-diaminobutyrique de formule générale ; 15 py - Cil - 0 CO - K (IV> dans laquelle Py représente un radicalpyridyle oupyridylfe K-oxyde, éventuelle- ■ ment substitué par un radical méthyle et R représente un atome d'hydrogène, un radical alcoyle à chaîne droite ou ramifiée contenant 1 à 5 atomes de carbone ou un radical phényle, 20 sur un produit de formule générale : A - X - Dab - Thr - Dab - B ° i t (V) Q Q dans laquelle : X est défini comme précédemment, Q représente un radical labile protecteur de fonction aminée, éliminable de 25 préférence par hydrogénolyse ou acidolyse, d'emploi usuel en chimie peptidique tel que le groupement benzyloxyccrbonyle ou tertiobutyloxycarbonyle,ou le radical G de formule générale (IV) défini précédemment, A représente A dans tous les cas où ce reste n'est pas porteur d'un radical amino et QHH-A'- dans le cas contraire, A' représentant alors un reste alcoylene 30 ayant de 3 à 18 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée, ou Aq représente un radical transformable en radical A dans les conditions d'élimination du radical protecteur Q, et B représente un radical hydroxyle ou un groupement activant la fonction carbo-nyle d'emploi habituel en chimie peptidique, 35 puis élimination des groupements protecteurs des fonctions aminées et transformation éventuelle de la base obtenue en sel. 71 03429 3 2124060 Le groupe terminal de chaîne des produits de formule générale (V) peut être soit le groupe carboxyle soit l'un de ses dérivas tel que l'azide, le chlorure, un ester activé tel que l'ester p-nitrophénolique, l'ester trichloro-2,4,5 phénolique ou l'ester avec le iï«liydroxysuccinimide, ou un 5 anhydride mixte de formule générale : ~ - CO - u - CU - (vl) dans laquelle R^ représente un radical alcoyle ou alcoyloxyle contenant 1 à 5 atones de carbone. On préfère généralement le groupement azido, qui peut être préparé par action, en milieu acide, d'un nitrite alcalin sur l'hydrazide 10 correspondant. Les produits de fomule générale (V) peuvent être préparés par application de toute méthode habituelle 2n chimie peptidique et en particulier par la méthode de lierrifield en phase solide. On peut également employer d'autres méthodes habituelles d'allongement de chaînes peptidiques telles que le 15 condensation d'un acide dont les radicaux aminés éventuels sont protégés par un radical Q défini comme précédemment sur un ester d'air.ir.o acide en présence d'un carbodiimide comme le dicyclohexylcarbodiisiic, la néthode à l'azidcj la méthode aux esters activés ou la néthode à l'anhydride mijîte, La condensation de l'acide car*?oxylique terminal (X = -C0-) peut 20 être obtenue par action d'un produit de fomule À. COB, dans laquelle A et B sont définis comme précédemment, sur la chaîne tripeptidique, La condensation de l'acide carbonique terminal (X = -0-C0-) peut être obtenue par toutes les méthodes habituelles de préparation des carbamates à partir d'aminés primaires et en particulier par action d'un chlorofomiate 25 de fomule A -O-CO-Cl, o La condensation de l'acide carbamique terminal (X = -FHC0-) peut être obtenue par toutes les méthodes habituelles de préparation d'urées H,H'-disubstituées à partir d'anines primaires et en particulier par action d'un isocyanate de formule Ao-1TCO. 30 La condensation de l'acide sulfonique terminal (X = -SO^-) peut être obtenue par toutes les méthodes habituelles de préparation de sulfamides à partir d'aminés primaires et en particulier par action d'un sulfochlorure de fomule A -S0 Cl» o 2 Lorsque les produits de fomule (V) sont préparés par la méthode 35 de Uerrifield, il peut être avantageux de condenser l'acide terminal sur la fonction a-amino de l'acide L a,y~diaminobutyrique dont la fonction y-amino a été protégée par un radical Q défini comme précédemment et ensuite d'effectuer 71 03429 » 2124060 la condensation de l'intermédiaire ainsi obtenu sur un produit de formule : Thr - Dab - B' q dans laquelle Q est défini comme précédemment et B1 représente le polymère utilisé, 5 Cette condensation préalable de l'acide terminal est particuliè rement avantageuse lorsque AqX'- représente un reste d'acide carbonique, carbatniquG ou sulfonique, Aq étant défini coiacie précédemment et X' représentant un radical oxycarbonyle, aminocarbonyle ou sulfonyle. La réaction des produits de formule générale (V) sur le cyclo-10 peptide de formule générale (III) est de même effectuée par application des méthodes habituelles en chimie peptidique, et en particulier par la méthode à l'azide. Dans ce cas, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que le diméthylformataide, éventuellement en présence d'une base organique telle que la triéthylamine et à une température comprise entre -15 et + 25°C. liais on 15 peut également opérer par condensation de l'acide sur le cyclopeptide de formule générale (III) en présence d'un carbodiimide tel que le dicyclohexyl-carbodiiraide, ou par le. méthode aux esters activés ou à l'anhydride mixte. L'élimination des groupes protecteurs G de formule générale (IV) s'effectue par hydrogénolyse et en particulier par action d'hydrogène en 20 prcsence de palladium ou par action du sodium dans l'amnoniac liquide. Cette hydrogénolyse permet également d'éliminer certains des autres groupements protecteurs Q et en particulier les groupements benzyloxycarbonyle. Cependant, selon la nature de Q, il peut être nécessaire de faire suivre 1'hydrogénolyse d'une acidolyse, en particulier lorsque Q est un groupement tertiobutyloxy-25 carbonyle. On peut éliminer ce dernier par action du méthanol chlorhydrique. Coraae exemple de radicaux Aq transformables en radicaux A, on peut citer les radicaux Aq contenant des liaisons multiples carbone-carbone ou des groupements cétoniques qui sont transformables respectivement en simple liaison carbone-carbone et en groupement alcool lors de l'élimination 30 des groupements protecteurs Q par hydrogénolyse. Les cyclopeptides de formule générale (III) peuvent être obtenus à partir des polymyxines de formule générale (II) par l'intermédiaire des produits de formule générale : A. - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab - Y - Z - Dab - Dab - Thr - I l ! I If i fVlI) g(y) g(y) | g(y) g(y) g(y) j 1 ' 35 dans laquelle A^ et Y-Z sont définis comme dans la formule générale (II). 71 03429 5 2124060 La méthode consiste à réaliser une hydrolyse sélective de la liaison peptidique reliant la chaîne latérale au cycle peptidique. Cette hydrolyse est réalisée par voie enzynatique dans des conditions convenables de durée, de température et de pH. 5 Différents enzynes protoolytiques sont capables de réaliser cette hydrolyse sélective, en particulier les protéases exocellulaires élaborées par diverses souches de Bacillus subtilis telles que la subtilisine, la nagarse, la pronase, la colistinase, l'alcalase, ou encore les protéases élaborées par B, subtilis GLAXO 417, B. subtilis A.T.C.C. 9524 ou Bacillus 10 THE 4, Selon l'enzyme utilisé, il est avantageux d'opérer à des températures comprises entre 20 et 70°C, au sein d'un milieu aqueux tamponne à un pH compris entre 5 et 9, Les produits de formule générale (VII) peuvent être obtenus à 15 partir des polymyxines de formule générale (II), par la mise en oeuvre des méthodes -habituellement utilisées en chimie peptidique pour le blocage des fonctions aminées. Il est particulièrement avantageux de faire réagir un carbonate mixte de formule générale : R I Py - CH - 0 - CO - 0 - T (VIII) 20 dans laquelle les symboles Py et R sont définis comme précédemment et T représente un radical phényle ou phényle substitué tel que p-nitrophényle, tri-chloro-2,4,5 phényle ou un radical dérivé d'un hétérocycle comme le radical quinoléinyle-8 ou le radical dioxo-2,5pyrrolidinyle-l. La réaction est avantageusement réalisée au sein du diméthylformamide et à 20°C environ. 25 Les carbonates mixtes de formule générale (VIII) peuvent être préparés par action d'un chloroformiate de formule générale : Cl - CO - O - T (IX) dans laquelle T est défini comme précédemment, sur un alcool de formule générale : R 30 ! Py - CH - OH (X) dans laquelle Py et R sont définis comme précédemment. Cette réaction est avantageusement effectuée dans la pyridine à 0°C. Les peptides de formule générale (VII), les carbonates mixtes de formule générale (VIII) et les alcools de formule générale (X) dans lesquelles 35 le symbole Py représente un radical pyridyîe N-oxyde peuvent être obtenus à 71 03429 6 2124060 partir des produits non oxydes correspondants par action d'un agent de peroxy-dation approprie tel que l'acide p-nitroperbenzoïque. On peut donc introduire le groupement H-oxyde à un stade quelconque de la préparation des produits intermédiaires de formule générale (VII). On opère habituellement au sein 5 d'un solvant organique inerte qui peut être un alcool comme le néthanol, un solvant chloré comme le chloroforme, ou un ester comme l'acétate d'éthyle et à une température comprise entre O et 25°C. Jusqu'à présent les produits de formule générale (II) n'ont été isolés à l'état pur qu'à partir de mélanges complexes obtenus par fermentation» 10 La séparation des constituants de tels mélanges est particulièrement longue et; fait appel à des méthodes délicates, surtout quand on veut obtenir ces constituants avec une très grande pureté. Le procédé selon la présente invention permet, à partir d'un cyclo-peptide de formule générale (III) déterminé, de préparer directement une 15 polymyxine de formule générale (II) exempte de produits de structure voisine dont l'activité phamacologique peut être très différente. Ainsi, à partir de la colistine commerciale qui est connue pour être un mélange des colistines A, B et G ayant toutes en commun le même noyau cyclopeptide de base mais des activités pharmacologiques d'intensités différentes, le procédé selon l'in-20 vention permet d'obtenir la seule colistine A qui présente la plus grande activité pharmacologique. De même, le procédé selon l'invention permet de valoriser une colistine pharmacologiquement peu active par sa transformation chimique en une autre colistine pharmacologiquement plus active» Les dérivés des polymyxines de formule générale (I) peuvent être 25 transformés en sels d'addition avec les acides. Ces sels peuvent être obtenus par action des composés sur les acides dans des solvants appropriés : comme solvants organiques on utilise par exemple des alcools, des éthers, des cétones ou des solvants chlorés î le sel formé précipite après concentration éventuelle de sa solution et est séparé par filtration, décantation ou 30 lyophilisation. Les nouveaux dérivés selon l'invention présentent d'intéressantes propriétés antibiotiques. Ils se sont montrés actifs sur germes Gram-négatifs, in vitro et in vivo, et plus particulièrement sur Escherichia coli et Pseudomonas aeruginosa. Certains d'entre eux ont montré une activité non 35 négligeable sur Staphylococcus aureus. In vitro, l'activité bactériostatique des produits de formule générale (I) est de 1 à 4 fois plus forte que celle de la polymyxine E^ ou 71 03429 7 2124060 colistine A [produit de formule générale (II) dans laquelle A^ représente le radical L raéthyl-6 octanoyle, Y-Z représente D L^u-Leuj, Pour 11enploi thérapeutique, il peut Être fait usage des nouveaux dérivés des polymyxines soit à l'état libre soit à l'état de sels pbarmaceu-5 tiouement acceptables, c'est-à-dire non r xiques aux 3-ses d'utilisation. Corme exemples de sels phariùeceutiqucment acceptables peuvent être cités des sels d'acides minéraux (tels que les chlorhydrates, sulfates, nitrates, phosphates) ou organiques (tels que les acétates, propicnates, succinates, benzoates, fumaratcs, ualdatcs, tarcrates, théapàylline-acétates» 10 salicylates, phénolphtalinates, néthylVac-bis-p-oxy-naphtoates) ou lorsque l'un des acides de la chaîne latérale est ua diacide, des sels métalliques (tels que les sels de sodium) ou des seis ^vec les bases azotées. Les compositions médicinales qui contiennent au moins un nouveau produit de formule générale (I) à l'état libre eu sous ferme de sel, à l'état 15 pur ou en présence d'un diluant ou d'un enrobage constituent un autre objet de l'invention. En thérapeutique humaine, la proportion de produit actif dans le médicament peut varier selon i'eïf-t thérapeutique recherché. Par voie intra-musculaire, la dose d'enpl:>i est généralement soqprise entre 1 et 5 mg/lcg par jour pour un adulte. 20 Le cyclopeptide de formule gén„ra'ië (IIl) éaris laquelle Y repré sente la D-leucine et Z la L-leucine et de-ut les radicaux aminés des acides a,Y"dianinobutyriques ne sont pas protégés par de& radicaux G, c'est-à-dire le cyclopeptide de formule : KH2 CH(CH3>2 CH(GI-l3)2 (CH2)2 CII2 CH2 H„H - CH - COUH - CH - COKH - CH - C01TH - GH - GO 2 I / (GH2)2 / HUOC - CH - HHOC - CH - HITOC - CH - BÎT ' CHOH (&IL,)o (CHo)o I t 2 2 l 1 1 CH3 I!H2 NH2 25 sera appelé, dans ce qui suit et pour simplifier l'écriture, la colistaiaine. Les exemples suivants donnés à titre non limitatif montrent comment l'invention peut être mise en pratique. Exemple 1 - A une solution de 40 g d'acide î! a-t.butyloxycarbonyl IT Y-benzyl-30 oxycarbonyl L a,y~diaminobutyrique dans 350 cm3 d'éthanol, on ajoute 15,9 cm3 de triéthylamine. On agite pendant 3 minutes à 20°C, puis concentre à sec 71 03429 8 2124060 sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°C. L'huile obtenue est dissoute dans 1 litre d'éthanol» Dans la solution obtenue, on ajoute ICO g de résine de styrsne-divinylbenzène préalablement chlororaéthylée (que l'on appellera "polymère" chlorométhylé) contenant 0,70 milliéquivalent de chlore par graume, 5 On agite le milieu réactionnel pendant 48 heures à 78°C. Le polymère est filtré, lavé successivement par 4 fois 300 cm3 d'éthanol, 4 fois 300 cm3 d'eau distillée et 4 fois 300 cm3 de mcthanol, puis séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°G. On obtient 196 g de N a-t.butyloxycarbonyl N "y-ben-zyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-"polymère" 10 (Acide L a,y-diaminobutyrique : 0,19 mmole par gramme de polymère). Exemple 2 - Le deuxième aminoacide composant la chaîne latérale, la thréonine, est accroché au premier intermédiaire "acide L a,Y-diaminobutyrique bloqué -polymère" en effectuant la suite d'opérations suivante : 15 1° - On effectue 3 lavages successifs de l'intermédiaire "acide L a,y-diamino-butyrique bloqué-polymère" par 110 cra3 d'acide acétique glacial à chaque fois. Chaque addition d'acide est suivie d'une agitation de 3 minutes puis d'un ' essorage. 2° - Le groupement protecteur du radical a-aminé de 1'aminoacide est ensuite 20 éliminé par addition de 110 cm3 d'une solution d'acide chlorhydrique ï! dans l'acide acétique, agitation pendant 30 minutes puis essorage. 3° - Le produit obtenu est alors lavé successivement par : a) 3 fois 110 cm3 d'acide acétique b) 3 fois 110 cn3 d'éthanol 25 c) 3 fois 110 cm3 de chloroforme en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de réactif et en essorant à chaque fois. 4° - On neutralise alors le produit obtenu par addition de 110 cm3 du mélange chloroforme-triéthylamine (9:1 en volume^», agitation pendant 20 minutes puis 30 essorage. 5° - On lave le produit obtenu successivement par : a) 3 fois 110 cra3 de chloroforme b) 3 fois 110 cm3 d'éthanol c) 3 fois 110 cm3 de chlorure de méthylène 35 en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de réactif et en essorant à chaque fois. 71 03429 9 2124060 6° - On ajoute alors successivement : a) la thréoninc^ dont le radical amino est protégé,en solution dans 110 cra3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes b) du dicyclohexylcarbodiimide dans 20 cr.i3 de chlorure de méthylène, et 5 agite pendant 15 heures et essore. 7° - On lave alors le produit obtenu successivement par : a) 3 fois 110 cm3 de chlorure de méthylène b) 3 fois 110 cm3 d'éthanol en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de réactif et en essorant 10 à chaque fois. Cette suite d'opérations est répétée une première fois pour la condensation du troisième acide aminé, l'acide L a,"y-diarainobutyrique, dont les radicaux amino sont protégés, puis une deuxième fois pour la condensation de l'acide terminal. 15 Lorsque l'acide terminal est porteur d'un radical amino, ce radical doit être protégé. Après la condensation de l'acide terminal (opération 6), on effectue les opérations 7a et 7b. Eventuellement il peut être préférable de ne répéter qu'une seule 20 fois la suite d'opérations décrite ci-dessus. Le dernier réactif est alors l'acide L a,Y-diarainobutyrique dont la fonction a-arair;0 est déjà porteur de l'acide terminal. Après cette dernière condensation, on effectue les opérations 7a et 7b. En résumé pour la condensation de chaque acide aminé et pour la 25 condensation de l'acide terminal, on réalise toutes les étapes figurées dans le tableau ci-après : 30 Opération Réactif i Nombre j des j opera- ! tions Volume de réactif en cmg Durée d'agitation pour chaque opération But 3a 3b 3c Acide acétique i 3 | 110 Solution normale j 1 j 110 d'acide chlor- ! > hydrique dans l'acide acétique Acide acétique 3 110 Ethanol 3 110 Chloroforme j 3 i 110 3 min. 30 min. 3 min. 3 min. 3 min. Lavage Elimination des groupes protecteurs Lavage Lavage Lavage 71 03429 » 2124060 i Opération 1 " —T Réactif Nombre des opérations Voltme ! de ré- ! actif en cr.13 Durée d'agi-! tntion pour i chaque opé- | ration But 5 4 CHCl-, + (C2H5)3 II 9/1 (vol.) 1 110 20 min. Heutralisation 5a Chloroforme 3 110 3 iûin. Lavage 5b Ethanol 3 110 3 min. Lavage 5c Chlorure de méthylène 3 110 3 ain» Lavage 10 6a Amino acide bloqué ou acide terminal dans chlorure de méthylène 1 110 10 min. lié lange 15 6b Dicyclohexylcarbodiimide dans chlorure de méthylène 1 20 15 heures Condensâtion 7a Chlorure de méthylène 3 UO 3 min» Lavage 7b Ethanol 3 110 3 min. Lavage On essore entre chaque opération, sauf entre les opérations 6a et ,6b. Toutes les opérations sont effectuées à une température voisine de 20°G# 20 Préparation du M g triméthyl-3,5,5 hexanoyl IT y-benzyloxycarbonyl L g»y-diaiaino-butyryl- L thréonyl-I-T y-benzyloxycarbonyl L aty-dianinobutyrylhydrazide Dans un réacteur muni d'un agitateur et à sa base d'un filtre en verre fritté, on introduit 19,4 g de N a-t.butyloxycarbonyl H y-benzyloxy-carbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polyiaère" préparé comme à l'exemple 1 et conte-25 nant 3,6 ranoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué. Après réalisation des opérations 1 à 5, on ajoute 2,95 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine dans 110 cra3 de chlorure de méthylène. Après 10 minutes d'agitation, on ajoute 2,85 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide dans 20 cm3 de chlorure de méthylène. On poursuit l'opération 6 b comme mentionné ci-dessus puis on effectue succes-30 sivement les opérations 7 et 1 à 5. On ajoute alors 4,75 g d'acide II a-t.butyloxycarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique dans 110 co3 de chlorure de méthylène. On agite pendant 10 minutes puis ajoute 2,85 g de 13,15'-dicyclohexylcarbodiimide en solution dans 20 cm3 de chlorure de méthylène. On poursuit l'opération 6 b 35 comme mentionné ci-dessus puis on effectue successivement les opérations 7 et 1 à 5. On ajoute alors 2,18 g d'acide triiaéthyl-3,5,5 hexanoïque en solution dans 110 cm3 de chlorure de méthylène, on agite pendant 10 minutes 71 03429 2124060 puis on ajoute 2,35 g de H,*!1-dicyclohcxylcarbodiinide en solution dans 20 cra3 de chlorure de méthylène. On agite pendant 15 heures puis, après essorage, lava le produit obtenu successivement par 3 fois 110 cro3 de chlorure de méthylène et 3 fois 110 cn3 d'éthanol en agitant parJnnt 3 nir.utos après chaque adâltioi: 5 de solvant de lavage et en essorant avant chaque nouvelle addition de solvant* On obtient alors du N a-triméî:'yl-3,5,5 hexinoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl•" •jr-benzyloxyccrbcnyl L a,y-diar.iino-butyryl-"polymère". Ce produit est alors lavé avec 3 fois 110 cu3 de diméthylformamide, 10 puis nis en suspension dans 150 ca3 d'une solution de dioéthylfcraaraide à 22 % d'hydrazine hydratée (vol,/vol.). On agita le milieu réactionnel pondant 16 heures à 20°C, On filtre, on lave r.vec. 100 cn3 de dincthylforrâanide. On traite l'insoluble une deuxième fois comme ri-dessus. Les filtrats sont réunis et concentres à sec sous pression réduite (0,3 rxi de mercure) à 55°G® On 15 reprend l'huile obtenue par 200 cn3 d'eau distillée ; on sépare l'insoluble par filtration, puis le lave avec 2 fois 30 cm3 de nét'îa.iol et 2 fois 30 cej3 d'éther. Après séchase sous pression réduite (0,3 on mercure) à 20°C on obtient 1,76 g de N a triméthyl-3,5,5 he:::r.vyl ÎT y-bennyXesycarbaziyl L a,y-diaoinobutyryl-L thréonyl- II y-benzylc-xyc nrbonyl L s,y-dianinobutyrylhydrazido. 20 Analyse Cale 7. ; C 59,90 !I 7,47 i I3j2i Tr : 59,6'^ 7,5 13,^5 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanslyscur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab = 2,0 (théorie = 2) 25 Thr = 1,0 (théorie = 1) Exemple 3 - 2n opérant comme dans l'exemple 2, mais en utilisant successivement -18,9 g de N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polymère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 3,4 nmoles d'acide 30 L a,y"dianinobutyrique bloqué) -2,98 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 2,01 g de l!,K'-dicyclo-hexylcarbodiimide puis -4,79 g d'acide I! a-t.butyloxycarbonyl 1! y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-butyrique suivi de 35 -2,81 g de î!,N'-dicyclohexylcarbodiimide et enfin -1,255 cm3 d'acide n.butyrique suivi de 2,C g de H,H'-dicyclohexylcarbodiimide, on obtient environ 20 g de N a-n.butyryl 1: y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-butyryl-L thréonyl-IÎ y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobut.7ryl-"polyn;2re". 71 03429 12 2124060 Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,4 g de N a-n.butyryl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y—diamino— butyrylhy drazi -lu. Analyse Cale % : C 57,22 H 6,75 N 14,59 5 Tr : 57,29 6,60 14,78 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèl# la présence des -acides -aminés suivants : Dab = 2,0 (théorie = 2) Thr =0,8 (théorie = 1) 10 Exemple 4 - Ei opérant comme dans l'exemple 2» mais en utilisait successivement 18,58 g de N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaininobutyryl-"polymère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 3,53 .nmoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué) 15 3,27 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréoiine suivi de 3,07 g de N,N'-dicyclohexyl-carbodiimide puis 5,25 g d'acide II a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobuty-riaue suivi de 3,07 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide et enfin 20 2,2 g d'acide étiiyl-2 hexanoi'que suivi de 3,14 g de N,N1 -dicyclohexylcarbodiimide t on obtient environ 20,5 g de N a-éthyl-2 hexanoyl N y-benzyloxycarbonyl L ac,y-diaminobutyryl-L thrêonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diajninobutyryl-"polymère";' Après traitement par l'hydrazine on obtient 1,69 g de N a-éthyl-2 hexanoyl 25 N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyrylhydrazide. Analyse Cale % : C 59,41 H 7,34 N 13,47 Tr : 59,00 7,40 13,31 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle 30 la présence des acides .aminés suivants : Dab =1,9 (théorie = 2) Thr =1,0 (théorie = 1) Exemple .s - En opérant comme dans l'exemple 2, mais en utilisant successivement 35 18,9 g de N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-"polymère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 3,4 mmoles d'acide L a,y-dia-'îHinobutyrique bloqué) 71 03429 13 2124060 2,98 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 2,81 g de ÎT,IT'-dicyclohexylcarbodiimide puis 4,79 g d'acide N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a;y-diaminobutyrique suivi de 2,81 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide et 2,147 g d'acide méthyl-7 octanoïquc suivi de 2,8 g de îî,N'-dicyclohexylcarbodiimide , on obtient environ 20 g de îî a-:néthyl-7 octanoyl N -y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-"polymère". Après traitement par 1'aydrazine, on obtient 1,25 g de îî «-méthyl-7 octanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dia.iinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxy-carbo.iyl L a,y-diaminobutyrylhydrazide. Analyse Cale : C 59,90 H 7,47 N 13,22 Tr ; 59,68 7,11 12,90 Exemple 6 - En opérant comme dans l'exemple 2, mais en utilisant successivement 18,58 g de N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-"polymère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 3,53 rcraoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué) 3,27 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,07 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide puis 5,25 g d'acide N a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino- butyrique suivi de 3,07 g de M,N'-dicyclohexylcarbodii.niie et 2,62 g d'acide décanoi'que suivi de 3,14 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, on obtient environ 20,5 g de N a-décanoyl Iî y-benzyloxycarbonyl L a,y-diomino-butyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dia;ninûbutyryl-"polymère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,2 g de N a-décanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L- cc,y-di amino -butyrylhydrazide. Analyse Cale % ; C 60,38 H 7,60 IT 12,97 Tr ; 59,94 7,38 13,26 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèlo la présence des acides aminés suivants : Dab - 2,0 (théorie = 2) Thr = 1,0 (théorie = 1) 71 03429 14 2124060 Exemple 7 - En opérant coxnne dans l'exemple 2, nais en utilisent successivement 22,47 g de N a-t «butyloxycarbonyl î! y-benzyloxycarbonyl L a,"y-dianinobutyryl-"polyrnère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 4,27 ramoles d'acide 5 L a,y-dianinobutyrique bloque) 3,95 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,71 s de 11,11 ' dicyclohexyl-carbodiimide puis 6,34 g d'acide ÎT a-t.butyloxycarbonyl 11 Y~benzyloxycarbcnyl L a,y-diaminobuty-rique suivi de 3,71 g de H,N'dicyclohexylcarbodiinide et 10 3,60 3 d'acide dodécanoïque suivi de 3,G3 g de ïï,H'dicyclohexylcarbodiimide, on obtient environ 24,5 g de N a-dodccanoyl I! y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-butyryl-L throonyl-11 y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-"polyr.i3re". Après traitenent par l'hydrazine, on obtient 0,69 g de 11 a-dodécanoyl îl y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-îî y-benzyloxycarbonyl 15 L a,y-diaminobutyrylhydrazide. Analyse Cale "L : C 61,2G H 7,34 H 12,50 Tr s 61,51 7,95 12,36 'Exemple 8 - En opérant comme dans 1'exemple 2, mais en utilisant successivenent 20 18,58 g de N a-t.butyloxycarbonyl 11 y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianiinobutyryl-"polynère" (obtenu conne à l'exemple 1 et contenant 3,53 umoles d'acide L a,y-diai.iinobutyrique bloqué) 3,27 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,07 g de îl, 17'-dicyclohexyl-carbodiimide puis 25 5,25 g d'acide 11 a-t.butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobuty-rique suivi de 3,07 g de 11,H'-dicyclohexylcarbodiimide et 2,2 g d'acide n.octanoïque suivi de 3,14 g de IT,11 '-dicyclohexylcarbodiimide, on obtient environ 20,5 3 de N a-n.octanoyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-butyryl-L thréonyl-1! y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-"polynère". 30 Après traitement par l'hydrazine on obtient 1,47 g de H a-n.octanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-ÎT y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrylhydrazide. Analyse Cale % : C 59,41 H 7,34 II 13,47 Tr. : 59,23 7,13 13,45 35 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab = 2,0 (théorie = 2) Thr =1,0 (théorie = l) 71 03429 is 2124060 Exenple 9 - En opérant corxie à 1'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 19,4 g do H a-t.butyloxycarbonyl H y-bensyloxycarbonyl L a*y-diaainobutyryl-"polynère" (préparé corxie à 1!exenple 1 et contenant 3,6 moles d'acide 5 L a,y-dianinobutyrique bloqué) 2,95 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 2,85 g de IT9IT *-dicyclo-hexylcarbodiinide 4,75 g d'acide lï a-t .butyloxycarbonyl I; y - ; » en z y lo xy c ar bony 1 L a,y-dianino-butyrique suivi de 2,85 g de N,î!'-dicyclch xylcarijodiir.ii.de et 10 1,6 g d'acide hexanoïque suivi de 2,25 g de IT,iî'-dicyclohexylcarbodiiiaide on obtient environ 22 g de IT a-hexanoyl IT y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaraino-butyryl-L thréonyl-lî Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-"poiynâre". Après traitenent par l'hydrazine, on obtient 1,22 g de IT a-hexa-noyl N Y~b£nzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-ïï y-feenzyloxycar-15 bonyl L a,Y~diarainobutyryl hydrazide. Analyse Gale % : C 58,35 H 7,06 II 14,01 Tr : 58,52 7,0 14,11 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides ar.iinés suivants : 20 Dab : 1,38 (théorie : 2) Thr : 1,00 (théorie : 1) Exenple 10 - En opérant cor.oe à l'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 16 g de N a-t.butyloxycarbonyl 1T Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianin rbutyry1-25 "polymère" (préparé conne à 1'exenple 1 et contenant 4 ixîoIgs d'acide L a,y-dianinobutyrique bloqué) 3,44 g de N-t «butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,34 g de IT,iT'-dicyclo-hexylcarbo diini de 5,72 g d'acide K a-t«butyloxycarbonyl K y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-30 butyrique suivi de 3,43 g de N,H'-dicyclohexylcarbodiinide et 3 g d'acide trinéthyl-5,7,7 octanoïque suivi de 3,3 g de lT,îT'-dicyclohexyl-carbodiinide on obtient environ 19 g de N a-trinéthyl-5,7,7 octanoyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L o£,y-diar.îinobutyryl-35 "polynère". 71 03429 2124060 Après traitenent par l'hydrazine, on obtient 3 g de N a-trinéthyl-5,7,7 octanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,Y-di oninobutyry1-L thrconyl-K y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dia®inobutyryl hydrazide» Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 5 révèle la présence des acides aminés suivants : Dab : 1,95 (théorie : 2) Thr s 1,00 (théorie : l) Exemple 11 - En opérant corne â l'exenpie 2, nais en utilisant successivenent : 10 13,5 g de N a-t.butyloxycarbonyl t! y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polynère" (prépare! coone à l'exemple 1 et contenant 4,05 mnoles d'acide L a,y~dianinobutyrique bloqué) 3,32 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,2 g de H,H'-dicyclo-hexylc arbo di inide 15 5,6 g d'acide K noyl î! y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-U y-benzyloxycarbonyl L a,y-diar.iinobutyryl hydrazide Analyse Gale % : C 50,09 H 7,20 n 13,73 Tr : 57,70 6,66 14,14 25 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 0,91 (théorie î l > Exenple 12 - 30 En opérant cornue à 1'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 10,7 g de N a-t.butyloxycarbonyl H y-bcnzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polynère" (préparé coixie à l'exemple 1 et contenant 4,12 nuoles d'acide L a,y-dianinobutyrique bloqué) 3,62 g de tî-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g ds H,lî'-dicyclohexyl-35 carbodiinide 71 03429 2124060 5,8 g d'acide IT a-t.butyloxycarbonyl II y-bensyloxycarbonyl L a,y-dianino- butyriquc suivi de 3,4 3 de IÎ,IT'-dicyclohexylcarbodiimide et 2,54 g d'acide norbornyl-2 acétique suivi de 3,4 g de I],IT'-dicyclohexyl- carbodiinide, 5 on obtient environ 13 g de N a-norbornyl-2 acétyl II Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-II y-benzyloxycarbonyl L a,v-diffi.iinobutyryl-"polyuère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 2,25 3 de K a-norbornyl-2 acétyl N Y-benzyloxycarbonyl L cx,y-dianinobutyryl- L thréonyl-E y-10 benzyloxycarbonyl L a,y~c!iar.iinobutyryl hydrazide. Analyse Gale 7. : G 60,23 K 6,97 II 13,29 Tr : 59,45 6,8 13,2 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : 15 Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 0,90 (théorie : 1) Exenple 13 - En opérant comme à l'exemple 2, nais en utilisant successivement 10,7 g de M a-t.butyloxycarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-20 "polymère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 4,12 v.moles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué) 3,62 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 3 de N,IÎ'-dicyclo-hexylcarbodiimide 5,S » û'acide H a-t.butyloxycarbonyl K y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-25 butyrique suivi de 3,4 3 de l!,N'-dicyclohexylcarbodiimide et 2,58 g d'acide cyelohejcyl-3 propionique suivi de 3,4 3 de I!,lI'-dicyclohexyl-carbodiimide, on obtient environ 13 3 de II a-cyclohexyl-3 propionyl II v-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-30 "polymère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,19 3 de IT a-cyclo-hexyl-3 propionyl N y-bcnzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazide. Analyse Cale % : G 60,07 H 7,22 N 13,25 35 Tr : 59,68 7,1 13,24 71 03429 18 2124060 Apres hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la prcsence des acides aninés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 0,93 (théorie : l) 5 Exenple 14 - En opérant conme à 1'exenple 2, nais en utilisant successivenent s 10,7 g de lï a-t .butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,v-dianinobutyryl-"polynère" (préparé corme à l'exenple 1 et contenant 4,12 onoles d'acide L a,Y~dianinobutyrique bloqué) 10 3,62 g de îî-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g de lî,ï!'-dicyclohexyl-carbodiinide 5,0 g d'acide N a-t.butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianino-butyrique suivi de 3,4 g de H,N'-dicyclohexylcarbodiinide et 4 g d'acide hydroxy-2 octanoïque suivi de 5,15 g de 11,13'-dicyclohexylcarbo-15 diinide, on obtient environ 13 g de N a-hydroxy-2 octanoyl II y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L ajY-dianinobutyryl-"polynère". Après traiteuent par l'hydrazine, on obtient 1,02 g de II a-hydro-20 xy-2 octanoyl N Y-benzyloxycarbonyl L a»Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iinobutyryl hydrazide. Analyse Cale % : C 58,13 H 7,10 K 13,10 Tr : 50,39 7,4 13,67 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 25 révèle la présence des acides aninés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 1,00 (théorie : 1) Exenple 15 - En opérant conne à 1'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 30 10,7 g de H a-t.butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iino-butyryl-"polynère" (préparc corxie à 1'exenple 1 et contenant 4,12 nnoles d'acide L a,Y~dianinobutyrique bloqué) 3,62 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g de 11,K'-dicyclohexylcarbodiinide 35 5,0 g d'acide M a-t.butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,v-dianino-butyrique suivi de 3,4 g de H,lî'-dicyclohexylcarbodiinide et 71 03429 19 2124060 2,85 g d'acide oxo-2 nonanoïque suivi de 3,4 g de i!,H'-dicyclohexylcarbodi-inide, on obtient environ 13 g de 1! a-oxo-2 nonanoyl II y-benzyloxycarbonyl L aty«diz::.i-nobutyryl-L thrconyl-l! y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamincbutyryl~,,poIynè.ra". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 2,02 g de î! a-oxG-2 nonanoyl H y-benzyloxycarbonyl L or,Y-diaL:inobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazide Analyse Cale % : C 58,79 H 7,07 H 12,97 Tr : 50,1 7,25 13,8 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la prcsence des acides aninés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 1,00 (théorie : i) Exemple 16 - En opérant comme à l'execple 2, nais en utilisant successivenent ! 10,7 g de N a-t«butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polynère" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 4,12 raraoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué) 3,62 g de N-t «butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g de l?,!?'-dicyclohexylcarbodiinide 5,8 g d'acide N a-t«butyloxycarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino- butyrique suivi de 3,4 g de 11,17'-dicyclohexylcarbodiinide et 3,40 g d'acide cyano-11 undécanoïque suivi de 3,4 g de IT,IT *—dicyclohexyl- carbodiimide, on obtient environ 13 g de N a-cyano-11 undécanoyl !" y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L «jy-dianinobutyryl-"polynère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,11 g de 17 a-cyano-11 undécanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-H y-benzyl-oxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide. Analyse Cale % : C 60,44 H 7,35 17 14,09 Tr : 60,3 7,55 14,0 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab : 1,92 (théorie : 2) Thr : 1,00 (théorie : 1) 71 03429 20 2124060 Exemple 17 - En opérant comme à l'exemple 2, mais en utilisant successivement : 10,7 g de H a-t«butyloxycarbonyl K Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diarainobutyryl-"polymare" (préparé comme à l'exemple 1 et contenant 4,12 mraoles d'acide 5 L a,Y-diaminobutyrique bloqué) 3,62 g de N-t«butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g de N,N'-dicyclo-hexylcarbodiimide 5,8 g d'acide N a-t«butyloxycarbonyl II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diamino-butyrique suivi de 3,4 g de II,N'-dicyclohexylcarbodiimide et 10 5,5 g d'acide benzyloxycarbonyl amino-11 undécanoïque suivi de 3,4 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, on obtient environ 13 g de II a-benzyloxycarbonylamino-11 undécanoyl îl Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diamlnobutyryl-L thréonyl-II Y-benzyl°*ycarbonyl L a,Y-diamino-butyryl-"polyraère"« 15 Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,06 g de N a-benzyl oxycarbonylamino-11 undécanoyl K Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl hydrazide. Analyse Gale % : C 61,42 H 7,24 K 12,19 Tr : 61,41 7,25 12,39 20 Exemple lu - En opérant comme à l'exemple 2, mais en utilisant successivement î 10,7 g de N a-t«butyloxycarbonyl II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-"polyraare" (préparé conme à l'exemple 1 et contenant 4,12 mtnoles d'acide L a,Y-diaminobutyrique bloqué) 25 3,62 g de N-t«butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,4 g de N,IT'-dicyclo-hexylcarbo di imi de 5,8 g d'acide M a-t«butyloxycarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y~diaminobuty-rlque suivi de 3,4 g de N,II'-dicyclohexylcarbodiimide et 2,01 g d'acide benzoïque suivi de 3,4 g de N,K'-dicyclohexylcarbodiimide, 30 on obtient environ 13 g de II a-benzoyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diamino-butyryl-L thréonyl-î? Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-"polymère"« 71 03429 2124060 Après trai.tcr.icnt par l'hydrazine, on obtient 2,11 g de II ct-benzoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iinobutyryl-L thréonyl-N v-benzyloxycarbonyl L a,Y-diarainobutyryl hydrazide. Analyse Gale % : G 59,56 K 6,14 K 13,09 5 Tr : 59,7 6,3 14,25 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants s Dab : 1,92 (th'orie : 2) Thr : 1,00 (théorie : l) 10 Exenple 19 - En opérant corxie dans l'exenple 2, nais en utilisant successivenent: 10,0 g de N a-t.butyloxycarbonyl K Y-bensyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-"polynère" (prépare corme à l'exenple 1 et contenant 3,6 nnoles d'acide L a,Y-dianinobutyrique bloque) 15 3,25 g de M-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,04 g de H,H'dicyclo-hexylcarbo diini de 5,20 g d'acide II a-t .butyloxycarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iino-butyrique suivi de 3,04 g de N,tî '-dicyclohexylcarbodiinide et 2,85 g d'acide néthoxy-4 cinnanique suivi de 3,30 g de M,ÎI'-dicyclohexylcarbo-20 diinide, on obtient du N a-néthoxy-4 cinnanoyl K Y-benzyloxycarbonyl L a,v-dianino-butyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L a, y - di ar.iino but y r y 1 - "p o 1 ync r e . Après traiteuent par l'hydrazine, on obtient 4,22 g de II a-netho-xy-4 cinnanoyl II Y"benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-II y-25 benzyloxycarbonyl L a,Y~dianinobutyryl hydrazide. Analyse Gale % : G 59,91 K 6,22 II 12,07 Tr : 59,1 6,1 13,1 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : 30 Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 1,06 (théorie : l) Exenple 20 - En opérant conme à l'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 15,2 g de 1! a-t.butyloxycarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-35 "polynère" (préparé conue à l'exenple 1 et contenant 3,0 nr.ioles d'acide L a,Y-diauinobutyrique bloqué) 71 03429 22 2124060 3,27 g de M-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,17 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiimide, 7 g d'acide N a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyrique suivi de 3,3 g de N,N'-dicyclohexylcarbodiinide, 5 on obtient environ 10,5 g de H a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl H a-benzyl-oxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y~ dianinobutyryl-"polymère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 3 g de N a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L 10 thrconyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaiainobutyryl hydrazide. Analyse Cale % : C 59,75 H 7,33 N 12,51 Tr : 59,57 6,80 12,94 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : 15 Dab : 2,00 (théorie ï 2) Thr : 0,90 (théorie : l) L'acide 11 a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyrique utilise corme intermédiaire peut être préparé de la façon suivante : 20 A 10 g d'acide H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyrique dissous dans 40 cm3 de soude N , on ajoute simultanément et en 30 minutes 9,6 g de chloroformiate de cyclohcxyl-3 butyle et 40 cro3 de soude N . Après la fin de l'addition, l'agitation du milieu réactionnel est poursuivie pendant 16 heures» On ajoute au milieu réactionnel 100 cn3 d'éther et 60 co3 d'acide 25 chlorhydrique N . On agite pendant quelques minutes. Le précipité fomé est sépare par filtration, lavé par 50 cn3 d'éther. On obtient ainsi un solide pâteux que l'on dissout dans un mélange de 250 cin3 d'acctate d'éthyle et 40 cn3 d'acide chlorhydrique N .La phase aqueuse est lavée par 2 fois 40 cn3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, séchées sur 30 sulfate de sodium anhydre. Après concentration à sec de ces phases organiques sous pression réduite (20 rm de mercure) à 45°C, on obtient 7,1 g d'acide N a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,Y~diaminobutyrique. Le chloroformiate de cyclohexyl-3 butyle peut être préparé de la façon suivante : 35 dans 20 g d'alcool cyclohexyl-3 butylique fraîchement distillé, et refroidi à 0°C, on fait passer un courant de phosgène pendant 2 heures 1/2. On laisse ensuite la température du milieu réactionnel remonter à 20°C puis abandonne 71 03429 2124060 le milieu réactionnel au repos pendant 16 heures» Par distillation on recueille 21,7 g de chloroformiate de cyclohexyl-3 butyle dans la fraction distillant entre 60 et 70°C sous 0,3 on de mercure» Exemple 21 - En opérant corxie à l'exenple 2, nais on utilisant successivement ; 27 g de N a-t.butyloxycarbonyl IT y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinchutyryl-"polymère" (préparé corxie à l'exemple 1 et contenant 3,05 nnoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué), 6,65 g de H-t .butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 6,4 g de î!,iï'-dicyclohexylcarbodiimide, 7,6 g d'acide N a-hexyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl h a,y-diaminobutyrique suivi de 3,7 g de 11,11'-dicyclohexylcarbL'diimide, on obtient environ 31 3 de H a-hexyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-II y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl~ "polymère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 3,5 g de H a-hexyl-oxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diTainobutyryl-L thréonyl-H y-benzyl-oxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazido. Analyse Cale % : C 57,6 II 7,17 H 13,4 Tr : 57,48 7,14 13,39 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 0,93 (théorie : l) L'acide H a-hexyloxycarbonyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-butyrique utilisé coixie intermédiaire peut être préparc en opérant comme à l'exemple 20, nais en utilisant 7,25 g de chloroformiate d'hexyle (préparé selon P. CARRE, Bull. Soc. Chim. 1936, 1066) et 10 g d'acide H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique ; on obtient ainsi 16 g d'acide II a-hexyloxycarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique. Exemple 22 - En opérant comme à l'exemple 2, mais en utilisant {successivement ; 10 g de H a-t.butyloxycarbonyl I* y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polymère" (préparé comme à l'exenple 1 et contenant 3,85 mmoles d'acide L a,y-diaminobutyrique bloqué) 3,38 g de N-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,18 g de H,H'-dicyclohexylcarbodiinide 71 03429 2* 2124060 6,3 g d'acide H a-octyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobuty-rique suivi de 3,1S g de N,N'-dicyclohexylcarbodiinide , on obtient environ. 12,5 g de K a-octyloxycarbonyl K Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-l! Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-5 "polynère". Après traitenent par l'hydrazine, on obtient 2,29 g de N a-octyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a, y-diarainobutyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide# Analyse Cale % : C 58,64 H 7,31 N 12,94 10 Tr : 57,66 6,9 14,16 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab : 2,00 (théorie : 2) Thr : 0,92 (théorie : 1) 15 L'acide H a-octyloxycarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaraino- butyrique utilisé coixie internediaire peut être préparé de la façon suivante : à 5,04 g d'acide !l y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique dissous dans .20 cn3 de soude M, on ajoute sinultanéraent en 30 minutes, 4,23 g de chloro-forniate d'octyle (préparé selon H, HAJER et coll«,Bull. Soc, Ghin, 1955, 1189) 20 et 24 cn3 de soude N . Après la fin de l'addition, l'agitation du uilieu réactionnel est poursuivie pendant 16 heures. On ajoute au nilieu réactionnel 70 cn3 d'acétate d'éthyle et 30 cn3 d'acide chlorhydrique IT. On agite pendant quelques ninutes. La phase organique est lavée par 20 cm3 d'acide chlorhydrique N puis par 20 cta3 d'une solution saturée de chlorure de sodiun, Après 25 séchage sur sulfate de sodiun anhydre et concentration à sec sous pression réduite (13 m de nercure) à 50°C, on obtient G g d'acide Iî a-octyloxy-carbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique. Exenple 23 - En opérant conne à l'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 30 16 g de H a-t.butyloxycarbonyl IT y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polynère" (préparé conne à l'exenple 1 et contenant 4 rjnoles d'acide L a,Y-dianinobutyrique bloqué), 3,44 g de H-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 3,34 g de H,H'-dicyclohexylcarbodiinide, 35 6,9 g d'acide K a-octylaninocarbonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique suivi de 3,4 g de I\T,N'-dicyclohexylcarbodiinide, 71 03429 " 2124060 on obtient environ 17,5 g de lî a-octylaninocarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y~dianinobutyryl-L thréonyl-II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diarainobutyryl-"polynère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1 g de H a-octyl-5 aninocarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-i! Y" benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iinobutyryl hydrazide. Analyse Gale % : C 58,71 II 7,45 H 14,80 Tr : 58,92 7,23 15,10 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 10 révèle la présence des acides aminés suivants : Dab : 1,0 (théorie : 1 dosable) Thr : 1,0 (théorie : l) L'acide N a-octy 1 aninocarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diar.iino-butyrique utilisé conne intermédiaire peut être préparé de la façon suivante : 15 à 7,56 s d'acide H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyrique dissous dans 62 cn3 de' soude 0,5 N, on ajoute 6,05 g d'isocyanate d'octyle. On agite fortement le nilieu réactionnel pendant 1 heure et on le naintient à pH 8-9 par addition de soude K ; après chauffage à 60°C pendant 5 minutes puis refroidissement à 20°C, on sépare un léger insoluble par filtration. Le filtrat est 20 acidifié par addition de 32 cn3 d'acide chlorhydrique 17. Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé avec de l'eau distillée et séché sous pression réduite (0,3 mn de nercure) à 20°G. On obtient 12 g d'acide 17 a-octyl-aninocarbonyl lî Y-benzyloxycarbonyl L ot,Y-dianinobutyrique. L'isocyanate d'octyle peut être préparé de la façon suivante : 25 Dans une solution de 8,8 g de chlorhydrate d'octylanine sec dans CO cm3 de toluène bouillant, on fait passer un courant de phosgène pendant 1 heure 1/2. On laisse ensuite la température descendre à 20°G puis fait passer un courant d'azote dans le nilieu réactionnel pendant 16 heures. On sépare l'insoluble par filtration. Après concentration à sec du filtrat sous 30 pression réduite (30 nm de nercure) à 50°C, on obtient 6,2 g d'isocyanate d'octyle. Exemple 24 - En opérant conne à l'exenple 2, nais en utilisant successivenent : 10 g de I! a-t .butyloxycarbonyl lî Y-benzyloxycarbonyl L oc,Y-dianinobutyryl-35 "polymère" (préparé coixie à l'exenple 1 et contenant 3,4 Emoies d'acide L a,y-dianinobutyrique bloqué), 71 03429 26 2124060 3 g de lî-t.butyloxycarbonyl L thréonine suivi de 2,8 g de IT,1!'dicyclohexylcarbodiinide 6,9 g d'acide K a-octylsulfonyl H v-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyrique suivi de 3,3 3 de IÏ,N'-dicyclohexylcarbodiinide, 5 on obtient environ 12 g de i! a-octylsulfonyl IT y-benzyloxycarbonyl L a,Y~ dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-"polymère". Après traitement par l'hydrazine, on obtient 1,54 g de H a-octylsulfonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazide, 10 Analyse Gale % : C 55,58 H 7,12 ÎT 12,60 S 4,12 Tr : 55,43 7,05 12,76 4,52 L'acide N a-octylsulfonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique utilisé coixie intermédiaire peut être préparé de la façon suivante : dans une solution refroidie à 0° de II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrate 15 de néthyle dans 200 cm3 de chlorure de méthylène et 3,06 cn3 de pyridine anhydre, on ajoute en 30 minutes une solution de 8,10 g d'octylsulfochlorure [préparé selon C, ZIEGL2R et coll., J, Org. Ghen. 16, 621 (1951)] dans 100 cm3 de chlorure de méthylène. Après la fin de l'addition, l'agitation du nilieu réactionnel est poursuivie pendant 2 heures à 0% 20 heures à 20°G et 20 20 heures à 1'ébullition. Le milieu réactionnel est lavé avec 2 fois 200 cn3 d'acide chlorhydrique H, 2 fois 200 cn3 d'une solution saturée de bicarbonate de sodiun puis séchée sur sulfate de sodium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite (20 ma de nercure) à 50°G, on obtient 8,0 g de H a-octylsulfonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrate de néthyle que 25 l'on dissout dans 100 cm3 de néthanol et 40 cn3 de soude IT. On agite cette solution pendant 16 heures à 20°C. On concentre le nilieu réactionnel à 30 cn3 environ sous pression réduite (20 m de nercure) à 50°G, puis dilue à 100 cm3.par addition d'eau distillée, extrait avec 2 fois 50 cn3 d'acétate d'éthyle, puis amène à pH 2 par addition d'acide chlorhydri-30 que IT (environ 50 cn3). On extrait la phase aqueuse 3 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de sodiun anhydre. Après concentration sous vide (20 ran de mercure) à 50°C, on obtient 7,7 g d'acide H a-octylsulfonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyrique. Exemple 25 - 35 A une solution de 22,3 g d'acide nonanoïque dans 67 cra3 de dimé- thylforaamide anhydre et 267 cm3 de dioxanne anhydre refroidie à 0°G, on ajoute 35 g de N,H'-carbonyldiimidazole (titrant 80,65 %). On poursuit 71 03429 2124060 l'agitation du milieu réactionnel pendant 2 heures à 0°G. D'autre part, on dissout 57 g de chlorhydrate de N v-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl -L thréoninate de méthyle [préparé selon la méthode de K» VOGLEIi et coil», Helv. Chira. Acta 48, 1161 (1965)] dans 200 cm3 de diraéthylformaiside anhydre tiède» 5 On ajoute 808 cm3 de dioxanne anhydre et 1^,2 g de triéthylaminé» On refroidit à 0°C et on agite pendant 10 minutes. Or. filtre le chlorhydrate de triéthyl-amine formé. Le filtrat obtenu est ajouté à la solution d'acide nonanoïque activé. On agite le milieu réactionnel pendant 2 heures à 0°G, laisse la température remonter à 20°C et poursuit l'agitation pendant 16 heures à cette 10 température. On concentre à sec sous pression réduite (20 mm, puis 0,3 mm de mercure) à 50°C. On reprend le résidu par 750 cm3 d'acétate d'éthyle. On filtre un insoluble, lave le filtrat avec 2 fois 250 cm3 d'acide chlorhydrique N, 2 fois 250 cm3 d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium (poids/ volume) et 2 fois 200 cm3 d'une solution ssturée de chlorure de sodium. 15 On concentre à sec sous pression réduite '20 de mereura) à 50°G«. Le résidu est repris par 100 cra3 d'éther, filtré et lavé avec 50 ca3 d'éther de pétrole. Après séchage sous pression réduite (0,3 tvn de mercure), on obtient 35 g de H a-nonanoyl H y-benr ylosrycarborai L s,*/--disainobatyryl-L thréoninate de méthyle 20 = "9>2 5 î nSuhcncl). A la solution de ces 35 g de V. a-nonanoyl H y-bcjizylciiycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréoninate de méthyle dans 250 cm3 de aéthanol, on ajoute 19,7 cm3 d'hydrazine hydratée. On agite le railisu réactionnel pendant 16 heures à 20°C. Le précipité fomé est séparé par filtration, lavé avec 25 3 fois 150 cm3 d'eau, 3 fois 150 cm3 d'acétone et 2 fois 150 en3 d3éther« Après séchage sous pression réduite (0,3 m de nercure), on obtient 33 g de il a-nonanoyl lî y-benzyloxycarbonyl L a,y-diarainobutyryl-L thréonylhydrazide. Ce produit est mis en solution dans un mélange de 440 cm3 d'acide acétique, 132 cm3 d'acide chlorhydrique N f I'jG cn3 d'eau distillée et 30 1100 cm3 d'acétate d'éthyle, refroidi à -2°C ; on ajoute 4,9 g de nitrite de sodium en solution dans 27 cra3 d'eau distillée. Après 20 minutes d'agitation à -2°C, on ajoute 550 cra3 d'eau glacée. On décante, puis lave la phase aqueuse avec 275 cm3 d'acétate d'éthyle à 0°C. On lave les phases organiques réunies avec 3 fois 550 cm3 d'une solution glacée à 10 % de carbonate de 35 sodium (poids/volume), avec 5 fois 275 cm3 d'une solution glacée à 5 % de bicarbonate de sodium (poids/volume) puis avec 275 cm3 d'une solution glacée et saturée de chlorure de sodium. On sèche la phase organique (contenant l'azide) 71 03429 28 2124060 sur sulfate de sodium pendant 15 minutes à 0°C. Pendant ce tençs, on dissout 21,4 g de chlorhydrate de H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaiainobutyrate de méthyle dans 110 cm3 de diméthylfonnamide. On refroidit à 0°C et on ajoute 10 cm3 de triéthylamine. On agite pendant 10 minutes à 0°C. On filtre le 5 chlorhydrate de triéthylamine formé. On ajoute le filtrat obtenu à la solution d'azide dans l'acétate d'éthyle débarrassée du sulfate de sodium par filtration. On agite le milieu réactionnel pendant 16 heures à 0°C, ensuite pendant 24 heures à 20°C. On filtre un insoluble, lave le filtrat avec 2 fois 350 cm3 d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium (poids/volune), 2 fois 350 cm3 10 d'acide chlorhydrique K et 2 fois 200 cm3 d'eau. On concentre à sec sous pression réduite (20 nm de mercure) à 50°C. On reprend le résidu par 200 cm3 d'eau distillée, on obtient un solide que l'on filtre. Après séchage sous pression réduite (0,3 ma de mercure) à 20°C, on obtient 28 g de ï! a-nonanoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-II Y-benzyloxycarbonyl 15 L a>Y-diaminobutyrate de méthyle. 20° = -21 (c = 0,5 ; diméthylformamide). A une solution de 30 g de H a-nonanoyl lî Y-benzyloxycarbonyl ,L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-îî Y~benzyloxycarbonyl L a^-dismlnobutyrate de méthyle (préparé comme ci-dessus) dans 500 cm3 de diméthylformamide, on 20 ajoute 40 cm3 d'hydrazine hydratée. On agite le milieu réactionnel pendant 16 heures à 20°C. Le précipité formé est séparé par filtration, lavé avec 3 fois 150 cm3 d'eau puis 3 fois 100 cm3 d'éther. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°C, on obtient 24,3 g de H a-nonanoyl H y~ benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl 25 L a,y-diaminobutyrylhydrazide, 20° [a]p = -28 [c =0,48 ; CH3C00H - HGl N 5>i (vol,)] Analyse Gale % : G 59,90 H 7,47 N 13,22 Tr : 59,74 G,10 13,25 Exemple 26 - 30 A une solution de 3,17 g de penta ïî-(W-oxyde de pyridyl-3 méthyl- oxycarbonyl) polymyxine B dans 634 cm3 d'une solution tamponnée à pH 6, on ajoute 1,02 g de protéase alcaline élaborée par B. subtilis (titrant 9,5 U/mg) et on agite le mélange réactionnel à 22°G pendant 3 heures» Aussitôt après, on amène le milieu réactionnel à pH 3 par addition d'acide chlorhydrique H» 35 On sépare l'insoluble par filtration puis concentre le filtrat à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°G. On obtient line poudre crème qui est dissoute dans 60 cnt3 d'eau distillée ; à la solution on ajoute 60 cia3 71 03429 29 2124060 d'Amberlite IRA 400 (forme OH"). On agite le mélange pendant 1 heure, filtre, lave la résine par 200 cm3 d'eau distillée et lyophilise la phase aqueuse» On obtient un solide que l'on reprend par 50 cm3 de méthanol. On agite pendant 1/2 heure. On sépare l'insoluble par filtration et le lave avec 3 fois 15 cm3 5 de méthanol. On concentre à sec le filtrat sous pression réduite (20 ïam de mercure) à 50°G. Le résidu solide obtenu est dissous dans 5 cm3 d'une solution méthanol-dioxanne (95-5 en volumes) et la solution est chroiaatographiee sur une colonne de silice (hauteur : 70 cm ; diamètre : 1,8 cm). On élue avec le mélange méthanol-dioxanne (95-5 en volumes) en recueillant des fractions de 10 25 cm3. Les fractions 30 à 40 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°C. On obtient ainsi le cyclo [H y-L a,y-diamino-butyryl-t! y-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) L a,y-diaminobutyryl-D phénylalanyl-L leucyl-iT y-(l!-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) L a,y-diami-nobutyryl-N y-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) L a,y-diarainobutyryl-L 15 thréonyl]. . Rf = 0,27 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] La solution tamponnée à pH 6 utilisée pour dissoudre la penta N-(îî-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) polymyxine B peut être obtenue en 20 amenant une solution de 454 mg de phosphate monopotassique dans 1 litre d'eau distillée à pH 6 (détermination au pH mstre) par addition d'une solution de 1,2 g de phosphate disodique dodécahydraté dans 1 litre d'eau distillée. L'unité d'enzyme est la quantité d'enzyme qui, à pK 9,5 et à 50°G, libère, en une minute et à partir de caséine, suffisamment de peptide soluble 25 dans l'acide trichloracétique, pour observer une augmentation de la densité optique de 1,00 à 280 nm. Le titre de l'enzyme (U/mg) est donc le nombre d'unités par mg de substance. Cette méthode de détermination de l'activité enzymatique est voisine de celle décrite par ii. KUlîITZ, J« Gen. Physiol., 30, 291 (1947). 30 La penta N-(î]-oxyde de pyridyl-3. méthyloxycarbonyl) polymyxine B peut être obtenue de la façon suivante ; A une solution de 10,9 g d'hydroxyméthyl-3 pyridine dans 200 cm3 d'acétate d'éthyle refroidie à 0°C on ajoute 21,96 g d'acide p-nitroperben-zoïque. Après 15 minutes d'agitation à 0°G puis retour progressif du mélange 35 réactionnel à 20°C environ, le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé par 100 cm3 d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°C environ. Le produit obtenu est alors mis en suspension dans 71 03429 30 2124060 200 cm3 d'eau distillée ; à cette suspension on ajoute 90 cm3 de résine Araberlite IRA 402 sous forme carbonate et agite le mélange pendant 25 minutes à 20°G environ. La résine est séparée par filtration et lavée par 2 fois 100 cm3 d'eau distillée. Le filtrat et les eaux de lavage sont rassemblés et 5 concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 55°C. L'huile obtenue est dissoute dans C0 cia3 d'acétate d'éthyle bouillant. Après retour progressif à 20°G et maintien à cette température pendant 15 minutes, le précipité apparu est séparé par filtration et lavé avec 50 cm3 d'acétate d'éthyle. 10 Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°C on obtient 11,6 g de N-oxyde d'hydroxyméthyl-3 pyridine fondant à 90°G (P.F. inst. Kofler) Analyse : Gale % î lî > 0 23,98 Tr : 23,70 15 A une solution de 1 g de ïT-oxyde d'hydroxyméthyl-3 pyridine dans 14 cm3 de pyridine refroidie â 0°C, on ajoute, par petites portions, en 30 minutes, 1,61 g de chloroformiate de p.nitrophényle» On poursuit l'agitation du milieu réactionnel pendant 17 heures à 20°G environ. Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé par 2 fois 4 cm3 de pyridine et séché 20 sous pression réduite (0,3 rasa de mercure) à 20°G. On obtient ainsi 1,2 g de carbonate mixte de N-oxyde de pyridyl-3 méthyle et de p-nitrophényle fondant à 160°G (P.F. inst. Kofler). A une suspension de 2,17 g de polymyxine B dans 145 cni3 de diméthyl-formamide, on ajoute 3,18 g de carbonate mixte de IT-oxyde de pyridyl-3 méthyle 25 et de p-nitrophényle. Après 24 heures d'agitation à 60°C et 65 heures d'agitation à 20°C, l'insoluble est séparé par filtration. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 60°C, Le résidu est dissous dans 7 cra3 de méthanol et la solution est chromatographiée sur une colonne de Sephadex LH 20 (diamètre de la colonne : 38 mm j hauteur 1,80 m). On élue 30 avec du méthanol en reucillant des fractions de 7 cm3. Les fractions 130 à 170 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 om de mercure) à 50°G. On obtient ainsi 3,2 g de penta H-(K-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) polymyxine B. Rf = 0,30 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en 35 volumes)] 71 03429 31 2124060 Exemple 27 - A une solution de 60 g de penta H-(lî-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistine dans 12 litres d'une solution tamponnée à pH 6 (préparée comme à l'exemple 26), on ajoute 18 g de protéase élaborée par B.subtilis THF 4 5 et on agite le mélange réactionnel à 20°G pendant 3 heures» Aussitôt après, on arrête la réaction en portant la solution à pH 3 par addition d'acide chlorhydrique normal» Le mélange réactionnel refroidi à -70°C est lyophilisé» Le résidu solide obtenu est agité dans 1,92 litre d'éthanol anhydre pendant 40 heures à 20°G» On élimine l'insoluble par filtration et on concentre à 10 sec le filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°C» Le résidu solide obtenu est dissous dans 70 cia3 d'un mélan3e méthanol-dioxanne (95-5 en volumes) et chromatographié sur une colonne contenant 700 g de silicagel à sa partie inférieure et 500 g d'alumine à sa partie supérieure (dianûtre de la colonne 5,7 cm ; hauteur 77 cm). On élue par un mélange méthane1-dioxanne 15 (95-5 en volumes) en recueillant des fractions de 1 litre j les fractions 3 à 7 sont réunies puis concentrées à sec sous pression réduite (15 mm de mercure) à 50°G» On obtient ainsi 15,55 g de tri H Y-O'î-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, 20 Rf = 0,22 [silicagel ; n.butanol-pyridlnc"»acide acétiqua-aae (50-20-6-24 en volumes)]• La penta N-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistine peut être obtenue de la façon suivante : A une solution de 109,1 g d'hydroxyméthyl-3 pyridine dans 500 cra3 25 de pyridine refroidie à 0°G, on ajoute, par petites portions, en 1 heure 1/4 environ, 201,54 g de chloroformiate de p.nitrophényla. Or? poursuit l'agitation du milieu réactionnel pendant 1 heure à 0°G, laisse la température remonter à 20°C et poursuit l'agitation pendant 16 heures à cette température» On ajoute 1,6 litre de chlorure de méthylène, lave avec 3 fois 500 cm3 d'eau distillée, 30 puis avec 500 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium» La solution organique est séchée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°C, L'huile obtenue est dissoute dans 1,6 litre d'éthanol et la solution abandonnée au repos pendant 16 heures à 0°G» Le précipité obtenu est séparé par filtration, lavé avec 100 cm3 d'éthanol et 35 séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure)» On obtient 128 g de carbonate mixte de pyridyl-3 méthyle et de p.nitrophényle fondant à 93° (P.F. inst. Kofler). Rf = 0,73 [silicagel ; méthanol-dichloro-1,2 éthane (2-8 en volumes)]. Analyse Cale % : C 56,94 H 3,67 H 10,21 Tr : 57,58 3,06 9,89 71 03429 32 2124060 A une solution de 15,1 g de carbonate mixte de pyridyl-3 méthyle et de p.nitrophényle dans 400 cm3 de chloroforme, on ajoute 12,1 g d'acide p.nitroperbenzolque. Après 16 heures d'agitation à 20°C, le précipité apparu est séparé par filtration et lavé par 2 fois 100 cm3 de chloroforme. Le filtrat 5 et les lavages sont réunis et concentrés à sec sous pression réduite (17 mm de mercure) à 30°C. Le résidu solide est mis en suspension dans 600 cm3 d'éther et la suspension est agitée énergiqueaient pendant 10 minutes. L'insoluble est séparé par filtration et à nouveau mis en suspension dans 600 cm3 d'éther ; 10 après 10 minutes d'agitation, l'insoluble est séparé par filtration, lavé avec 100 cm3 d'éther et séché sous pression réduite (0,3 ma de mercure) à 20°C. On obtient ainsi 14,9 g de carbonate mixte de N-oxyde de pyridyl-3 méthyle et de p.nitrophényle. Rf = 0,4 [silicagel j méthanol-dichloro-1,2 éthane (2-8 en volumes)] 15 a une suspension de 12 g de colistine dans 900 cm3 de diméthyl- forraamide on ajoute 30 g de carbonate mixte de N-oxyde de pyridyl-3 méthyle et de p.nitrophényle. Après 64 heures d'agitation à 20°G, l'insoluble est séparé par filtration. Le filtrat est concentré aux 2/3 de son volume sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 50°C. Au concentrât on ajoute 500 on3 20 d'éther. Une huile décante, que l'on sépare et dissout dans 500 cm3 de méthanol. A la solution obtenue on ajoute 500 ca»3 d'éther. Une huile relargue puis cristallise. Après 15 heures au repos à 20°C, les cristaux sont séparés par filtration, lavés par 100 cm3 d'éther et séchés sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°G. On obtient ainsi 16,8 g de penta 25 N-(K-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistine. Rf = 0,32 [silicagel ; n«butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Gale % î II > 0 7,79 Tr : 7,60 30 Exemple 28 - A une solution de 631 mg de N a-méthyl-7 octanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-ÎI Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diamino-butyrylhydrazide (préparé comme à l'exemple 5) dans un mélange de 16 cm3 d'acide acétique et 1,8 cm3 d'acide chlorhydrique N , refroidie à 2°G, on 35 ajoute 62 mg de nitrite de sodium en solution dans 1 cm3 d'eau distillée. Après 20 minutes d'agitation à 2°C, le milieu réactionnel est versé dans 400 cm3 d'une solution glacée à 5 % de bicarbonate de sodium (poids/volume). 71 03429 33 2124060 Un précipité blanc apparait que l'on sépare par filtration à 0°C et lave avec 200 cm3 d'eau distillée glacée. Ce précipité est ajouté à une solution glacée de 1 g de tri II y-(K-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine (préparée comme décrit à l'exemple 27) dans 120 cm3 de diméthylformamide» On agite le 5 milieu réactionnel pendant 2 heures à 0°C, puis pendant 48 heures à 20°G. On le verse dans 450 cra3 d'eau distillée et on laisse reposer pendant 1 heure à 20°G, Un précipité se forme que l'on sépare par filtration et lave par 10 cm3 d'eau distillée. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°C, on obtient 900 mg de solide que l'on dissout dans 9 cm3 de méthanol. La solution est chromatographiée sur une colonne de 150 g de Sêphadex LH 20 (dicmètre de la colonne 20 mm, hauteur 1,80 m). On élue par du méthanol en recueillant des fractions de 5 cia3 ; les fractions 58 à 70 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°G. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure), on obtient 700 mg de 15 N o-(lî a-méthyl-7 octanoyl lî y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dicminobutyryl) tri H y-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine. Rf = 0,55 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Ce produit est mis en solution dans 35 cni3 de méthanol et 1,G5 cm3 d'acide chlorhydrique N .On ajoute 700 mg de palladium sur noir (à 3,15 % de palladium) et on fait passer un léger courant d'hydrogène pendant 16 heures. Après filtration et concentration à sec du filtrat sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50°C, le résidu est repris par 3 cm3 de méthanol chlor-25 hydrique 0,G M. On ajoute 87 cm3 de dioxanne. On obtient un précipité blanc qu'on filtre et lave avec 10 cm3 de dioxanne et 10 cra3 d'éther anhydre. Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de mercure) à 20°C, on obtient 500 mg de solide blanc que l'on dissout dans 2 cm3 de méthanol. La solution est chromatographiée sur une colonne de 150 g de Sephadex LH 20 (diamètre de la colonne 20 mm, hauteur 1,80 m). On élue par du méthanol en recueillant des fractions de 4,5 cm3 ; les fractions 66 à 78 sont réunies et concentrées à sec sous pression réduite (20 ram de mercure) à 50°C. Le résidu est repris par 30 cm3 d'eau distillée et la solution obtenue est lyophilisée. On obtient ainsi 417 mg da pentachlorhydrate de i! a-(ïî a-méthyl-7 octanoyl L a,y-diamino- 35 * butyryl-L thréonyl-H a-L a,y-diarainobutyryl) colistamine Rf = 0,37 [silicagel ; n«butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Cale 7. : Î! 16,58 Cl 13,11 Tr : 15,67 12,27 71 03429 2124060 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab = 5,5 (théorie = 6) Leu =2,0 (théorie =2) 5 Thr = 1,5 (théorie = 2) Exemple 29 - En opérant comme dans 1'exemple 28, nais en utilisant 618 mg de H a-n.octanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyl-oxycarbonyl L a,y-diaiainobutyry 1 hydrazide (obtenu comme indiqué à 1 ' exemple 8) 10 et 1 3 de tri 11 y-(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, on obtient 1,045 g de IT a-(N a n «octanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-butyryl-L thréonyl-M y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianiinobutyryl) tri N y-(13-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, Sf = 0,63 [silicagel j n«butanol-pyridine-acide acétique-eau 15 (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des groupements protecteurs des radicaux aminés coixie indiqué à l'exemple 28, on obtient 655 mg de pentachlorhydrate de N a-(N a-n,octanoyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-H a-L a,y-diaminobutyryl) colistamine 20 Rf = 0,31 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acctique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Gale % : M 16,75 Cl 13,25 Tr : 16,14 13,0 Après hydrolyse totale, l'analyse sur r.utoanalyscur Technicon 25 révèle la présence des acides aminés suivants ; Dab = 6,0 (théorie = 6) Leu =2,2 (théorie = 2) Thr =2,0 (théorie =2) Exemple 30 - En opérant comme dans l'exemple 28, mais en utilisant 744 mg de M a-éthyl-2 hexanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazide (préparé comme à l'exemple 4) et 1,2 g de tri K y-(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, on obtient 900 mg de M a-(N a-éthyl-2 hexanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-35 butyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl) tri N y-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine. Rf = 0,66 [silicagel 5 n»butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 71 03429 35 2124060 Après élimination des radicaux protecteurs comme indiqua à l'exemple 28, on obtient 545 mg de pentachlorhydrate de K o-(M a-éthyl-2 hexanoyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-î: a-L a,Y-diaminobutyryl) colistamine Rf = 0,45 [silicagel ; n»butanol-p/ridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Gale % : H 16,75 Gl 13,25 Tr : 17,37 . 13,08 Après hydrolyse totale, l'analysa sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants i Dab = 6,0 (théorie = 6) Leu = 2,0 (théorie = 2) Thr = 2,0 (théorie = 2) Exemple 31 - En opérant corxie dans l'exemple 23, nais en utilisant 642 mg de N a-décanoyl il Y-benzyloxycarbonyl L a, y-diarainobutyryl-L thréonyl-17 y-bons?!-oxycarbonyl L a,y-dianiinobutyryl hydrazide (prépara a l!e;ier.iple 6) et 1 g de tri M y-(H-oxyde de pyridyl-3 nétfcyloxycarbanyi) colistamine, on obtient SCO mg de H o-(K a-décanoyl H y-benzyloxyc-rrbonyl L a}y-cÂsainobatyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianvic-butyr> 1} tri iï y-ÇE-cxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistar.iinc, Rf = 0,65 [silicagel ; n» but an j i >-pyr i - ine-aci de sacSlqae-eau (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des radicaux protecteurs sot-as indiqué à 1*esen-ple 2 G, on obtient 605 mg de pentachlorhjdrate 1' a-(ïî a-décanoyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-17 a-L a,y-dianinobutyryl) cclistanine» Rf = 0,31 [silicagel j n»butaiiol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)]} Analyse Cale 7. : H 16,40 Gl 12,97 Tr ï 16,06 13,04 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab = 5,9 (théorie = 6) Leu = 2,0 (théorie = 2) Thr = 2,0 (théorie = 2) Exemple 32 - En opérant comme dans l'exemple 28, mais en utilisant 437 mg de N a-n.butyryl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-H y-benzyl- 71 03429 36 2124060 oxycarbonyl L a, y - di aninobutyry1 hydrazide (préparé cooae à 1'exemple 3) et 790 ng de tri M y(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, on obtient 750 ng de N a-(H a-n.butyryl N y-benzyloxycarbonyl) L ct,Y-dianino-butyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri IT y-(N-oxyde 5 de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,60 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élimination des radicaux protecteurs corme indiqué à l'exemple 28 et à partir de 880 ng de N a-(H a-n.butyryl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diami-10 nobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl) tri K Y"(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 450 mg de pentachlorhydrate de N a-(N a-n.butyryl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-diaminobutyryl) colistanine, Rf = 0,15 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 15 (50-20-6-24 en volumes)] Exenple 33 - En opérant conne dans l'exemple 28, nais en utilisant 760 ng de H a-trinctliyl-3,5,5 hexanoyl II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y~dianinobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diauinobutyryl hydrazide (préparé comme à 20 l'exenple 2) et 1,2 g de tri H y-(H-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 0,8 g de lî a-(H a-trinéthyl-3,5,5 hexanoyl N y-benzyloxycarbonyl L o,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L oc,y-diamino-butyryl) tri N y-(lî-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,66 [silicagel { n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 25 (50-20-6-24 en volunes)] Après élimination des radicaux protecteurs comme indiqué à 1'exemple 28, on obtient 500 ng de pentachlorhydrate de N a-(N a-trinéthyl-3,5,5 hexanoyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-ÎI a-L a,y-diaminobutyryl) colistanine. 30 Rf = 0,34 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Cale % : H 16,57 Cl 13,11 Tr : 15,80 13,35 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 35 révèle la présence des acides .aninés suivants : Dab =5,5 (théorie = 6) Leu = 2,0 (théorie = 2) Thr =1,96 (théorie = 2) 71 03429 37 2124060 Exemple 34 - En opérant conne dans l'exemple 20, nais en utilisant 800 ng de N a-dodécanoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparc coiarae dans 5 l'exerjple 7) et 1,2 g de tri IT Y-0ï-°xyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 970 ng de I! a-(H a-dodécanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl) tri K Y"(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,65 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 10 (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des radicaux protecteurs corme indiqué à l'exenple 28, on obtient 600 ng de pentachlorhydrate de H a-(H a-dodécanoyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H a-L a,Y-diaminobutyryl) colistamine. Rf = 0,46 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 15 (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Gale 7. : H 16,08 Gl 12,72 Tr s 15,84 12,07 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : 20 Dab =6,0 (théorie = 6) Leu = 1,97 (théorie = 2) Thr = 1,99 (théorie =2) Exemple 35 - En opérant conne dans l'exemple 28, nais en utilisant 378 ng de 25 II a-nonanoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-îî Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparé comme à l'exenple 25) et 600 ng do tri II y~(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient(sans purification par passage sur Sephadex LH 20)572 mg de H a-(H. a-nonanoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-I! Y-benzyloxy-30 carbonyl L a,Y-diaminobutyryl) tri H Y"(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine» Rf = 0,60 [silicagel ; n«butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des groupenents protecteurs des radicaux y-anin&s 35 conne indiqué à l'exemple 28, on obtient 309 ng de pentachlorhydrate deN a-(N a-nonanayl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-IT a-L a,Y-dianinobutyryl) colistanine. 71 03429 38 2124060 Rf = 0,30 [silicagel j n,butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-2 + en volumes)] Analyse Cale % : M 16,58 Cl 13,11 Tr : 16,37 12,69 5 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : Dab = 6,0 (théorie = 6) Leu =2,1 (théorie = 2) Thr = 1,8 (théorie = 2) 10 Exemple 36 - En opérant conne à l'exenple 28, mais en utilisant 715 ng de N a-hexanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazine (préparé conne à l'exenple 9) et 1,2 g de tri H y-(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, 15 on obtient 1,02 g de M a-(H a-hexanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diamino-butyryl-L thréonyl-ÎI y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri N y~(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistamine, Rf = 0,65 [silicagel : n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-2't en volumes) ^ 20 Après élimination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exenple 20, on obtient 560 ng de pentachlorhydrate de 1! a-(H a-hexanoyl L a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,27 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-5-2+ en volumes)] 25 Analyse Cale % : M 17,11 Cl 13,53 Tr : 17,42 13,08 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab — 6,00 (théorie = 6) 30 Leu = 1,76 (théorie = 2) Thr =1,76 (théorie = 2) Exemple 37 - En opérant conne à 1'exenple 2D, mais en utilisant 785 mg de H a-trinéthyl-5,7,7 octanoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl-L 35 thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé corxie à l'exenple 10) et 1,2 g de tri H y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 630 ng de N a-(N a-trinéthyl-5,7,7 octanoyl II y-benzyl- 71 03429 39 2124060 oxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri N Y-Û'-°xydc de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine» Rf = 0,68 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-aau (50-20-6-2'+ en volunes)] 5 Après élinination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exenple 28, on obtient 370 mg de pentachlorhydrate de H ct~(H a-trinéthyl-5,7,7 octanoyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-K,a-L a,y-dianinobutyryl) colistamine, Rf = 0,32 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 10 Analyse Cale % : N 16,24 Cl 12,85 Tr î 16,11 12,63 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence dos acides aninés suivants : Dab = 5,53 (théorie = 6) 15 Leu =2,06 (théorie = 2) Thr =2,00 (théorie =2) Exemple 38 - En opérant conne à l'exenple 2, nais en utilisant 730 ng de N a-hcptanoyl N Y_ben?,yioxycarbonyi L et; Y-dianinobutyryl-L thréonyl-il y-20 benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé cosse à l'exemple il) et 1,2 g de tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,37 g de H a-(N a-hcptanoyl N y-benzyloxycarbonyl L- a,y-dianino-butyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianlnobutyryl) tri lî y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, 25 Rf = 0,61 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acctique-eau (50-20-6-24 en volunes)! Après élinination des radicaux protecteurs corme indiqué à 1'exemple 28, on obtient 790 ng de pentachlorhydrate de H a-(H a-heptanoyl L a,y-dianinobutyryl-L thrconyl-W ct-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. 30 Rf = 0,20 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)} Analyse Cale 7. : ÎT 16,93 Cl 13,39 Tr : 16,61 13,90 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 35 révèle la présence des acides aninés suivants : Dab = 5,85 (théorie = 6) Leu = 2,24 (théorie = 2) Thr = 2,00 (théorie = 2) 71 03429 40 2124060 Exenple 39 - En opérant corne à l'exenple 28, nais en utilisant 750 ng de M ot-norbornyl-2 acétyl lî Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H v-b on z y\oxyc orbon y1 L a»y-dianinobutyryl hydrazide (préparé corxie à 5 l'exenple 12) et 1,2 g de tri N y-(lT-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine., on obtient 1,02 g de K a-(l1 ct-norbornyl-2 acétyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaraino-butyryl) tri M Y-(N-°*yde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,64 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide-acétique-eau 10 (50-20-6-24 en volumes)] Après élinination des radicaux protecteurs corme indiqué à l'exenple 28, on obtient 660 ng de pentachlorhydrate de M a-(M a-norbornyl-2 acétyl L a,y-diarainobutyryl-L thréonyl-îl a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine, Rf = 0,30 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 15 (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Cale % : II 16,63 Cl 13,15 Tr î 16,07 13,36 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : 20 Dab = 6,00 (théorie = 6) Leu = 1,74 (théorie = 2) Thr = 1,74 (théorie = 2) Exenple 40 - En opérant conne à l'exenple 28, nais en utilisant 3,78 g de ' H a-cyclohexyl-3 propionyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé corne à l'exenple 13) et 6,02 g de tri H y~(lî-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 7,1 g de H a-(N a-cyclohexyl-3 propionyl IT y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) 30 tri N y-(î7-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,61 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-5-24 en volunes)] Après élinination des radicaux protecteurs corxie indiqué à l'exenple 28, on obtient 4,31 g de pentachlorhydrate de ÎT a-(î! a-cyclohexyl-3 propionyl 35 L a,y-diarainobutyryi-L thréonyl-N a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,27 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 71 03429 41 2124060 Analyse Cale 'L : N 16,60 Cl 13,13 Tr : 16,00 13,70 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : 5 Dab =6,00 (théorie = 6) Leu = 1,37 (théorie = 2) Thr = 1,87 (théorie =2) Exemple 41 - En opérant corme à 11 exemple 28, mais en utilisant 760 ng de H a-hydroxy-2 octanoyl II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne à l'exenple 14) et 1,2 g de tri II y-(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,24 g de lî a-(N ct-hydroxy-2 octanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-lï Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-15 butyryl) tri N y-(ïî-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine# Rf = 0,62 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élinination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exenple 28, on obtient 7G0 ng de pentachlorhydrate de H a-(il a-hydroxy-2 20 octanoyl L a,y-diar.iinobutyryl-L tliréonyl-1! o-L a,Y-dianinobutyryl) colistanine, Rf = 0,25 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Cale % : H 16,55 Cl 13,09 Tr : 16,16 13,21 25 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle iE présence des acides aninés suivants : Dab =6,00 (théorie = 6) Leu = 1,82 (théorie =~2}~ — . Thr = 1,90 (théorie = 2) 30 Exenple 42 - En opérant conne à l'exenple 28, nais en utilisant 770 ng de N a-oxo-2 nonanoyl lï Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne à l'exenple 15) et 1,2 g de tri II y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, 35 on obtient 1,40 g de N a-(l! a-oxo-2 nonanoyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-lî y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri N y-(lî-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. 71 03429 42 2124060 Rf = 0,55 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élinination des radicaux protecteurs corne indiqué à l'exenple 28, on obtient 900 ng de pentachlorhydrate de N a-(H a-hydroxy-2 5 nonanoyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,28 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volisnes)] Analyse Cale % : N 16,38 Cl 12,96 Tr s 16,27 12,99 10 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab =6,00 (théorie = 6) Leu = 1,85 (théorie — 2) Thr = 1,85 (théorie = 2) 15 Exenple 43 - En opérant conne à l'exenple 28, nais en utilisant 810 ng de t N a-cyano-11 undécanoyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-s M Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparé coniae à l'exenple 16) et 1,2 g de tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) 20 colistanine, on obtient 650 ng de N a-(N a-cyano-11 undécanoyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-IT Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl) tri N y-(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine» Rf = 0,61 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 25 Après élinination des radicaux protecteurs conne indiqué à 11exenple 28, on obtient 380 ng de pentachlorhydrate de K a-(M a-cyano-11 undécanoyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-N a-L a,Y-dianinobutyryl) colistanine» Rf = 0,27 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide aectique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 30 Analyse Cale % : N 16,95 Cl 12,62 Tr 16,91 12,51 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : Dab = 6,00 (théorie = 6) 35 Leu = 1,97 (théorie = 2) Thr = 2,12 (théorie = 2) 71 03429 43 2124060 Exenple 44 - En opérant conne à l'exenple 28, nais en utilisant 9^0 ng de N a-benzy1oxycarbony1aeino-11 undécanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-butyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide 5 (préparé corne à l'exenple 17) et 1,2 g da tri N y-(îî-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,07 g de N a-(ll cc-benzyloxycarbonyl-anino-11 undécanoyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri ÎI y-(lï-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. 10 Rf = 0,64 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élinination des radicaux protecteurs conue indiqué à l'exenple 28, on obtient 550 ng de pentachlorhydrate de K a-(H a-anino-11 undécanoyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-di?xiinobutyryl)co1istaminé. 15 Rf = 0,10 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Gale % : N 16,64 Gl 14,06 Tr : 16,00 14,44 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon 20 révèle \a présence des acides aninés suivants : Dab = 5,35 (théorie = 6) Leu =2,00 (théorie =2) Thr =1,92 (théorie =2) Exenple 45 - 25 En opérant corne à l'exenple 20, nais en utilisant 712 ng de N a-benzoyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-ÎI y-benzyl-oxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne à l'exenple 18) et 1,2 g de tri N y-(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,12 g de H a-(M a-ben.zo.yLN y-benzyloxycartfOnyï L a,y-diamino - 30 butyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistamine. Rf = 0,59 [silicagel j n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes) Après élinination des radicaux protecteurs conne indiqué à 35 1'exenple 28, on obtient 780 ng de pentachlorhydrate de II o-(H a-benzoyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,18 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 71 03429 44 2124060 Analyse Cale % : H 17,03 Cl 13,47 Tr : 16,50 13,63 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants : 5 Dab = 6,00 (théorie = 6) Leu = 1,88 (théorie = 2) Thr = 2,07 (théorie = 2) Exenple 46 - En opérant comme à l'exenple 28, nais en utilisant 910 mg de K a-ncthoxy-4 cinnanoyl K Y-benzyloxycarbonyl L a,Y~dianinobutyryl-L thréonyl-II Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl hydrazide (préparé comme à l'exenple 19) et 1,51 g de tri H yÛJ-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,93 g de H a-(î!ce-aéthoxy-4 cinnauoyl N Y-benzyl-oxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,y-15 dianinobutyryl) tri lî ^-(tî-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine^ Rf = 0,63 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Après élinination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exeuple 28, on obtient 1,0 g de pentachlorhydrate de lî ot-(H a-ciéthoxy-4 20 phénylpropionyl L a,Y-dianinobutyryl~L thréonyl-H a-L a,Y-dianinobutyryl) colistanine, Rf = 0,22 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 an volunes)] Analyse Cale % : II 16,31 Cl 12,91 25 Tr : 15,65 13,2 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle ia présence des acides aninés suivants : Dab = 6,00 (théorie = 6) Leu = 2,00 (théorie = 2) 30 Thr = 2,00 (théorie = 2) Exenple 47 - En opérant conne à l'exemple 28, mais en utilisant 880 mg de H a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl N Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-diaminobutyryl-L thréonyl-lÎY-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne 35 à l'exenple 20) et 1,2g de tri Ny-KlI-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,61 g de H a-(H a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl H Y-benzyloxycarbonyl 71 03429 45 2124060 L a,y-dianinobutyryl) tri H y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, Rf = 0,63 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] 5 Après élimination des radicaux protecteurs comme indiqué à l'exenple 28, on obtient 1,07 g de pentachlorhydrate de K a-(N a-cyclohexyl-3 butyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-H a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,30 [silicagel } n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 10 (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Cale % s N 16,08 Cl 12,72 Tr : 16,20 13,00 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : 15 Dab = 6,00 (théorie = 6) Leu = 1,95 (théorie =2) Thr =1,95 (théorie = 2) Exenple 48 - En opérant corxie à l'exenple 28, nais en utilisant 745 ng de a-hexyloxycarbonyl H Y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-N Y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne à l'exenple 21) et 1,2 g de tri H y-Ol-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,46 g de lî a-(iî a-heyyloxycarbonyl M y-benzyloxycarbonyl L a,Y-dianinobutyryl-L thréonyl-H y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianino-25 butyryl) tri II y-(H-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,60 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élimination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exenple 28, on obtient 930 ng de pentachlorhydrate de H a-(11 a-hexyloxy-30 carbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-lî a- L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,27 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Analyse Cale % : M 16,73 Cl 13,23 Tr : 16,63 13,42 35 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon xâvâle la présence des acides aninés suivants : Dab = 6,00 (théorie = 6) Leu = 1,92 (théorie = 2) Thr =1,92 (théorie =2) 71 03429 46 2124060 Exemple 49 - En opérant conne à l'exenple 20, nais en utilisant 772 mg de N a-octyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé comme à 5 l'exenple 22) et 1,2 g de tri N y-(î!-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 850 ng de II a-(N a-octyloxycarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl) tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,64 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 10 (50-20-6-24 en volunes}] Après élimination des radicaux protecteurs conne indiqué à l'exemple 28, on obtient 440 ng de pentachlorhydrate de II a-(H a-octyloxycar-bonyi L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-dianinobutyryl) colistamine. Rf = 0,33 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau 15 (50-20-6-2 4 en volunes)] Analyse Gale % : N 16,38 Cl 13,67 Tr : 16,17 12,43 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aninés suivants : 20 Dab — 6,00 (théorie = 6) Leu = 2,00 (théorie = 2) Thr = 1,92 (théorie = 2) Exenple 50 - En opérant conne à l'exenple 20, nais en utilisant 770 ng de N a-octylaninocarbonyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl hydrazide (préparé conne à l'exenple 23) et 1,2 g de tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine, on obtient 1,31 g de II a-(N a-octylaninocarbonyl N y-benzyloxycarbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N y-benzyloxycarbonyl L a,y-3® dianinobutyryl) tri 11 y-(N-oxyde de pyridyl-3 néthyloxycarbonyl) colistanine. Rf = 0,69 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volunes)] Après élinination des radicaux protecteurs consne indiqué à 1'exemple 28, on obtient 830 ng de pentachlorhydrate de N a-(N a-octylanino-35 carbonyl L a,y-dianinobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-dianinobutyryl) colistanine. Rf = 0,34 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique eau (50-20-6-24 en volunes)] 71 03429 47 2124060 Analyse Cale % : N 17,42 Cl 12,97 Tr : 16,89 13,30 Après hydrolyse totale, l'anaiy.e sur autoanalyseur Technicon révèle la présence des acides aminés suivants î 5 Dab = 4,81 (théorie = 5 dosables) Leu = 2,17 (théorie = 2) Thr = 2,00 (théorie = 2) Exemple 51 - En opérant comme à l'exemple 28, mais en utilisant 870 mg de 10 N a-octylsulfonyl N y-benzyloxycarbonyl L oc,y-diaminobutyryl-L thrêonyl-N y-bonzyloxycarbonyl L a>y-diaminobutyryi hydrazide (préparé comme â l'exemple 24) et 1,2 g de tri H y-(îî-oxyde de pyridyl-3 raétliyloxycarbonyl) colistamine, on obtient 1,33 g de 1>! a-(i! a-octylsulfonyl H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl L thréonyl-vî v-benzyloxycarbonyl L a}y-diamino-15 butyryl) tri N y-(N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, Rf = 0,67 [silicagel ; n.butanoî-pyridine-acida acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des radicaux protecteurs «eue» indiqué à l'exemple 2.3, on obtient 820 mg de pentacK'orfcydratc de il G=octylsulfoii7l L a,y-diami;iobutyryl-L thréonyl-N a-L a,y-diaminobutyryl) colistamine, Rf = 0,33 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acids acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Analyse Cale % : K 16,15 S 2,31 Cl 12.7" Tr : 15,85 2,54 13,00 25 Exemple 52 - En opérant comme à l'exemple 26, mais en utilisant 742 nig de K a-L méthyl-6 octanoyl K y-benzyloxycarî:on.yl h a,y-diaminobutyryl-L thréonyl-I! y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl hydrazide [préparé selon la méthode de K, V0GLER et coll., Helv, Chim. Acta 48, H61 (1965)] et 1S1G g de tri N y-30 (N-oxyde de pyridyl-3 méthyloxycarbonyl) colistamine, on obtient 925 mg de N a-(K a-L méthyl-6 octanoyl II y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaraiuobut^ryl-L thréony* H y-benzyloxycarbonyl L a,y-diaminobutyryl) tri M y-(K-oxyde de pyridyl-3 71 03429 48 2124060 méthyloxycarbonyl) colistamine, Rf = 0,66 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] Après élimination des radicaux protecteurs comme indiqué a 5 l'exemple 28, on obtient 585 mg de pentachlorhydrate de H a-(lî a-L méthyl-6 octanoyl L a,v-diaminobutyryl-L thréonyl-N a-L a,Y-diaminobutyryl) colistamine ou pentachlorhydrate de colistine A. Rf = 0,42 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau (50-20-6-24 en volumes)] 10 Analyse Cale % : N 16,58 Gl 13,11 Tr : 17,25 13,08 Après hydrolyse totale, l'analyse sur autoanalyseur Technicon révè- la présence des acides aminés suivants : Dab = 6,00 (théorie = 6) 15 Leu = 2,00 (théorie = 2) Thr =2,00 (théorie = 2) La colistine ainsi obtenus est identique à la colistine A obtenue par fermentation. Exemple 53 - 20 On prépare une solution ayant la composition suivante : -pentachlorhydrate de H a-(N a-nonanoyl L a,Y-diaminobutyryl- L thréonyl-N a-L a,Y-diaminobutyryl) colistamine ... 2,31 g -eau distillée ... 100 cm3 Cette solution est stérilisée par filtration sur filtre bacté-25 riostatique puis est répartie en ampoules à raison de 10 cm3 par ampoule. Les ampoules sont alors soumises à une lyophilisation sous atmosphère d'azote puis scellées. Pour l'emploi du médicament par voie intramusculaire, on prépare extemporanéraent une solution injectable par addition de 2 cm3 de sérum physio-30 logique au contenu de l'ampoule. On obtient ainsi 2 cm3 d'une solution contenant 200 mg de produit actif» 71 03429 49 2124060 L?-Y_5_?_Ç_LÇ_è_I_L9_N.s 1) - Un dérivé des polymyxines de formule générale : A - X - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab -Y-Z - Dab - Dab - Thr dans laquelle : 5 A représente un reste alcoyle ayant de 3 à 18 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée éventuellement substitué, un reste alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone substitué par un radical cycloalcoyle mono ou polycyclique ou par un radical phényle éventuellement substitué 10 ou un radical phényle éventuellement substitué, X repxfsente un radical carbonyle, oxycarbonyle, aminocarbonyle ou sulfonyle et Y-Z représente l'un des enchaînements D Phe-Leu, D Leu-Leu et D Leu-Ileu étant entendu que, sauf indication contraire, les aminoacides ont la configuration L et que A X- est autre que : 15 un radical n-octanoyle, L méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle lorsque simultanément Y-Z représente DPhe-Leu ou Dleu-Leu ou un radical L méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle lorsque simultanément Y-Z représente DLeu-Ileu, ainsi que leurs sels* 20 2) - Un procidé de préparation des polymyxines de formule générale : dans laquelle : A représente un reste alcoyle ayant de 3 à 13 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée, éventuellement substitué, 25 un reste alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée substitué par un radical cycloalcoyle mono- ou polycyclique ou par un radical phényle éventuellement substitué, ou un radical phényle éventuellement substitué, x représente un radical carbonyle, oxycarbonyle, aminocarbonyle ou sulfonyle et 30 Y-Z représente l'un des enchaînements D Phe-Leu, D Leu-Leu et D Leu-Ileu, étant entendu que, sauf indication contraire, les aminoacides ont la configuration L, caractérisé en ce que l'on fait réagir un cyclopeptide de formule générale : A - X - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab -Y-Z - Dab - Dab - Thr (a) H - Dab - Dab - Y - Z - Dab - Dab - Thr - G(y) 71 03429 50 2124060 dans laquelle Y-Z est défini comme précédemment et G représente un radical protégeant la fonction Y-amino de l'acide a,Y-diaminobutyrique de formule générale : Py - CH - O CO - i R 5 dans laquelle : Py représente un radicalpyridyle oupyridylë N-oxyde, éventuellement substitué par un radical méthyle et R représente un atome d'hydrogène, un radical alcoyle à chaîne droite ou ramifiée contenant 1 à 5 atomes de carbone ou un radical phényle, sur un 10 produit de formule générale : A - X - Dab - Thr - Dab - B ° t i, dans laquelle : X est défini comme précédemment, Q représente un radical labile protecteur de fonction aminée ou le radical G 15 défini précédemment, Aq représente A dans tous les cas où ce reste n'est pas substitué par un radical amino et Q-NH-A*- dans le cas contraire, A* représentant alors un reste alcoylène ayant de 3 à 18 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée ou A représente un radical transformable en radical A dans les conditions O 20 d'élimination du radical protecteur Q et B représente un radical hydroxyle ou un groupement activant la fonction carbonyle, puis élimine les groupements protecteurs des fonctions aminées par les méthodes habituelles et transforme éventuellement la base obtenue en sel» 25 3) - Un dérivé des polymyxines de formule générale : A, - Dab - Thr - Dab - Dab - Dab - Y - Z -! Dab - Dab - Thr -i i ! dans laquelle : Aj représente un radical n-octanoyle, L-méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle et simultanément Y-Z représente D Phe-Leu ou D Leu-Leu, 30 ou Aj représente un radical L méthyl-6 octanoyle ou méthyl-6 heptanoyle et, simultanément Y-Z représente D Leu-Ileu, ainsi que leurs sels, lorsque préparé selon le procédé de la revendication 2* 71 03429 51 2124060 4) - Une composition médicinale antibactérienne caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication i. 5) - Une composition médicinale antibactérienne caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication 3.