La présente invention concerne tm nouveau procédé pour fournir des groupes de 'blocage labiles à la fonction mercapto du noyau de la cystéine en vue de faciliter les synthèses des pep-tides « 5 Dans les procédés de synthèse des peptides contenant le reste cystéine, il est généralement indiqué de protéger le groupe mercapto du reste au moyen d'un groupe de "blocage0 On connaît plusieurs groupes de protection convenant à cet effet. Les groupes le plus communément utilisés pour protéger la fonction 10 mercapto comprennent notamment les groupes S-benzyle, S-p-nitro-benzyle, S-p-diphénylméthyle, S-benzylthiométhyle et S-triphényl-méthyle. On constate que ces groupes ne donnent pas satisfaction en raison des difficultés qu'on rencontre pour les éliminer au stade final de la synthèse sans endommager le reste du peptide ou 15 en raison de problèmes de solubilité ou de difficultés auxquelles on se heurte quand les groupes sont éliminés sélectivement pendant des stades antérieurs de la synthèse. On a déterminé récemment que les groupes S-alcoyle ou -arylamidométhyle sont des plus satisfaisants pour protéger la 20 fonction mercapto. On prépare facilement de tels dérivés en faisant réagir le composé contenant le reste cystéine ou un de ses esters avec le lï-hydroxyméthyl alcoyl- ou arylamide correspondant dans un solvant hydrosylé en présence d'un acide. On a trouvé, toutefois, qu'au cours de cette synthèse oh obtient 25 aussi une certaine quantité de sous-produits indésirables. Par exemple, dans la synthèse de la S-acétamidométhyl-cystéine par cette méthode, on obtient de la thioproline comme sous-produit. En outre, on a rencontré des difficultés dans la préparation de dérivés S-alcoylamidométhyliques de protéines contenant plusieurs 30 restes cystéine et d'autres amino-acides comme l'histidine, la méthionine et analogues, qui peuvent subir une scission catalysée par l'acide en donnant de l'acide aspartique ou de l'asparagine. Il convenait donc de chercher une méthode pour insérer ces groupes protecteurs hautement satisfaisants par une voie qui 35 éliminerait la formation de sous-produits indésirables et permettrait d'introduire des groupes protecteurs dans des composés complexes contenant plusieurs restes cystéine et obtenir encore le composé protégé avec un rendement élevé. 69 43866 2 2026554 10 15 20 25 Le principe de la protection de la fonction mercapto des restes cystéine est important dans la synthèse des peptides, en particulier de peptides comme la glutathiose, l'insuline, l'oxy-tocine ou la ribonucléase, De nombreux peptides sont connus comme étant biologiquement actifs. Certains sont utiles dans l'étude et l'analyse des protéines, en particulier dans les études ayant pour but d'accroître les connaissances sur l'action chimique et biologique des enzymes, hormones et autres protéines remplissant d'importantes fonctions dans le corps. L'insuline par exemple occupe une position-clé dans la régulation hormonale de l'équilibre du sucre et une déficience en insuline provoque le diabète; l'oxytocine, qui est un nonapep-tide cyclique avec un cycle disulfure à 20 chaînons, stimule l'éjection du lait dans la glande mammaire en lactation et est souvent utilisée en thérapeutique pour provoquer la lactation, La vasopressine a été utilisée comme médication de substitution dans le cas de diabète insipide et pour traiter l'anentoroneurie. Dans le procédé selon l'invention, on fait réagir le composé contenant le reste cystéine avec un N-hydroxyméthylalcoyl-ou -arylamide convenable en présence d'un acide anhydre. La réaction peut être schématiquement représentée par l'équation suivante: 0 R-O-HH-OHgOH -HO/H + 2 0 R-0-fo=GHg HgO 0 R-C-lSïïg 30 ®2<> HS-CHg-CH-SOOH . | 0 * ft a-O-KH- ! thioproline 000H i NHg 35 dans laquelle S est un radical alcoyle ou âryle. Gomme le montre l'équation ci-dessus, le"'N-hydroxy-méthylalcoyl- ou -arylamide pieut réagir avec un reste cystéine 69 43866 3 2026554 pour former le composé S-alcoylamidométhylique ou S-arylamido-méthylique. En solution aqueuse, toutefois, le composé ïï-hydroxy-méthylique peut donner naissance à du formaldéhyde qui peut réagir avec la cystéine pour former de la thioproline ou un de ses 5 dérivés. Bien que le schéma ci-dessus illustre une réaction probable, il peut se faire que la réaction se fasse, en fait, suivant un mécanisme différent. Le mécanisme exact de la réaction ne fait d'ailleurs pas partie, en soi, de l'invention. 10 Bien que la réaction ait été illustrée avec la cystéi ne, il va de soi que la réaction est également applicable à vin peptide plus complexe contenant un ou plusieurs restes cystéine. Il doit en outre être entendu que lorsque la partie du peptide à protéger contient plus d'un reste cystéine, il faut utiliser une 15 mole de ïf-hydroxymétbylamide pour chaque reste cystéine par mole du peptide. Il n'y a toutefois pas d'inconvénient à utiliser un . excès de l'amide : on peut utiliser avec avantage entre 1 et 3 moles d'amide par mole de reste cystéine. Dans le procédé selon l'invention, on fait réagir la 20 cystéine ou le peptide contenant la cystéine avec un H-hydroxy-méthylalcoyl- ou -arylamide. Le substituant alcoyle de l'amide est de préférence un alcoyle inférieur comme un radical méthyle, éthyle, propyle ou butyle et le substituant aryle peut être un radical phényle ou naphtyle. Dans le mode de réalisation préféré 25 de l'invention, on emploie entre 1 et 1,5 mole du IT-hydroxy-méthylamide par mole de cystéine. Toutefois, quand il y a plus d'un reste cystéine dans le peptide, on emploie 1-1,5 mole du N-hydroxyméthylamide par mole de peptide. Les réactifs sont dissous dans un acide anhydre. Il est 30 préférable d'utiliser l'acide fluorhydrique anhydre qui se condense dans l'appareil de réaction, de préférence un appareil en polyéthylène ou en un autre matériau résistant à l'acide fluor-hydrique. Ltappareil de réaction est équipé des dispositifs usuels pour maintenir des conditions anhydres, comme un tube 35 desséchant, une entrée de gaz pour un gzz inerte sec comme l'azo- • te, etc... On laisse le mélange des r/cxjifs et de l'acide fluorhydrique anhydre se réchauffer depuis la température de condensation, de préférence celle qu'on obtient avec l'azote 69 43866 4 2026554 liquide ou arec un mélange d'acide carbonique solide et d'acétone, à la température obtenue avec un bain d'eau glacée. En raison du point d'ébullition du solvant un tel bain fournit une température convenable, mais, si on emploie d'autres acides, la réaction peut 5 être conduite à des températures allant de la température ambiante environ à environ 60°C„ On agite le mélange pendant environ un quart d'heure à environ une heure et on chasse l'acide fluorhydrique en faisant passer un gaz inerte sec, de préférence un courant d'azote sec au-dessus de la solution. Les dernières 10 traces d'acide sont éliminées sous pression réduite et le résidu est purifié, de façon commode par lavage avec un solvant inerte dans lequel l'acide est soluble, comme le diûxanne ou le tétra-hydr ofuranne, pour donner le dérivé S-alcoyl- ou -aryl-amido-méthylique sous la forme du sel d'acide. La pureté du produit est 15 alors examinée. ïïne méthode convenable est la chromatographie en couche mince» La base libre peut être facilement isolée, si on le désire, par traitement du sel avec une base, de préférence une base faible. Pour faciliter la purification on préfère utiliser 20 une base qui donnes avec l'anion acide un précipité insoluble dans l'eau. L'oxyde d'argent et l'hydroxyde de baryum conviennent particulièrement bien. Quand l'anion est le fluorure, on préfère utiliser l'hydroxyde de baryum aqueux. Le sel du dérivé amido-méthylique est dissous dans un minimum d'eau et on ajoute l'hy-25 droxyde de baryum aqueux saturé. Il se forme un précipité de fluorure de baryum qu'on sépare par filtration ou par toute autre méthode connue, La fraction aqueuse est alors évaporée sous pression réduite à la température ambiante ou au-dessous, et le résidu est recristallisé pour donner le dérivé désiré sous la 30 forme de la base libre. Quand on emploie un acide anhydre dans le procédé selon l'invention, on élimine les réactions secondaires indésirables, ce qui permet d'obtenir de meilleurs rendements et dans certains cas des rendements quantitatifs en peptide. Bien que les 35 meilleurs résultats soient obtenus dans des conditions~ anhydres, de bons résultats sont obtenus quand le système est pratiquement anhydre, c'est-à-dire contient jusqu'à environ 5 # d'humidité. Comme agent de condensation, on peut utiliser, outre 69 43866 5 2026554 l'acide fluorhydrique anhydre, d'autres acides anhydres comme les acides trifluoracétique, dichloracétique, trichloracétique, polyphosphorique anhydre et sulfurique. Parmi ces acides, on préfère les acides trif luoracétique et dichloracétique car ils 5 peuvent être plus facilement éliminés du mélange réactionnel par évaporation sous pression réduite» Dans certains cas, il peut être nécessaire d'employer un solvant inerte, comme le dioxanne, lorsque les réactifs ne sont pas mutuellement solubles» Les N-hydroxyméthylalcoyl- ou -arylamides utilisés 10 comme matières de départ dans le présent procédé peuvent facilement être préparés par la réaction de quantités approximativement équimolaires de l'alcoylamide ou arylamide voulu et de formaldéhyde en présente d'une quantité catalytique de carbonate de potassium» Pour la commodité, on peut employer une solution aqueuse de 15 formaldéhyde à 36-38 #. Le mélange est chauffé pendant quelques minutes au bain de vapeur et on le laisse en général reposer quelques heures à la température ambiante. On ajoute de la glace sèche de façon à introduire de lucide carbonique en solution, après quoi la solution est évaporée sous vide à une température de 20 bain d'environ 40-50°C« Le résidu est dissous dans un solvant convenable, comme l'acétone ou le chlorure de méthylène; la solution est séchée sur un agent dessiccateur approprié et le solvant est chassé sous vide. Le résidu est purifié par cristallisation ou par d'autres techniques connues. 25 Le groupe de blocage S-alcoylamido peut être complète ment éliminé d'un peptide contenant un reste cystéine par agitation avec environ un équivalent molaire d'un sel de métal lourd soluble dans l'eau, comme des acétates ou nitrates de mercure, argent, cadmium, étain, antimoine, platine, or, plomb et bismuth 30 ou des sels organométalliques de métaux lourds comme l'acide p-chloromercuri-benzoïque, avec une solution aqueuse de la S-alcoylamidométhylcystéine, par exemple, pendant une à deux heures. On peut aussi utiliser des solvants comme le méthanol ou le diméthylformamide ou leurs mélanges. La réaction est en géné-35 rai conduite à la température ambiante, bien qu'on puisse utiliser des températures autres que la température ambiante. Le sel métallique solide est en général ajouté à la solution du dérivé de la cystéine, mais le sel peut aussi être ajouté en solution. Il 69 43866 6 2026554 se forme en général un précipité à ce moment et on laisse la réaction se poursuivre pendant environ 30-90 minutes. La réaction peut être conduite dans un grand intervalle de pH dans des conditions "basiques ou acides, selon l'agent particulier 5 utilisé pour éliminer le groupe de blocage. Les meilleurs résultats sont toutefois obtenus à pH 4 quand on utilise des sels minéraux comme agents de déblocage et à pH 9 quand on utilise des sels organométalliques de métaux lourds. Quand le sel est ajouté en solution, le pH de la solution est en général pré-10 ajusté au pH auquel la réaction doit être effectuée# Quand la réaction est terminée, on ajoute de l'hydrogène sulfuré au mélange pour enlever le métal} on peut aussi éliminer ce dernier par dialyse en utilisant des agents de chélation comme l'acide éthylènediamine-tétraacétique. Pour les peptides de grande tail-15 le, le métal lourd peut être éliminé par addition de mercapto-éthanol au mélange du sel métallique et du résidu de S-alcoyl-amidométhylcystéine. Le dérivé métallique du mercapto-éthanol est ensuite séparé par filtration sur gel. L'absence totale du groupe de blocage est déterminée par chromatographie en couche mince. 20 Les nouveaux groupes de blocage selon l'invention sont particulièrement utiles dans la synthèse des peptides car on a trouvé qu'ils étaient stables dans les diverses conditions de réaction généralement utilisées dans la synthèse des peptides. Par exemple, les groupes de blocage sont stables dans des condi-25 tions acides ou basiques de pH 0 à pïï 13, dans l'ammoniac concentré et dans l'acide trifluoracétique. La S-acétamidométhylcystéine, qui est un intermédiaire utile dans la synthèse de peptides contenant de la cystéine, est fortement soluble dans l'eau, propriété qui est précieuse dans certains types de synthèse des peptides. 30 Les nouveaux agents de blocage peuvent être utilisés dans la synthèse de peptides connus dont les propriétés biologiques sont en général connues, comme l'oxytoeine qui régularise la lactation et la vasopressine qui a des propriétés hyperten-sives. 35 Les exemples non limitatifs qui suivent illustrent l'invention. 69 43866 7 2026554 Exemple 1 Fluorhydrate de S-acétamidométhylcystéine Un. mélange de 234 g (2,63 mmoles) de IJ-hydroxyméthyl-acétamide et de 321 mg (2,65 mmoles) de cystéine est placé dans 5 un tube en polyéthylène équipé d'un tube dessiccateur et d'une arrivée de gaz. Le tube est placé dans un bain réfrigérant de glace sèche et d'acétone et on condense dans le tube environ 1 ml d'acide fluorhydrique anhydre. On retire le tube du bain de glace sèche et on le place dans un bain d'eau glacée, et on agite pen- • 10 dant 30 minutes. On fait ensuite passer un courant d'azote à travers le tube pour chasser la majeure partie de l'acide fluorhydrique. lies dernières traces d'acide fluorhydrique sont éliminées en séchant le résidu sous pression réduite. Le résidu est lavé trois fois avec du dioxanne, filtré et séché sous pression 15 réduite pour donner le fluorhydrate de S-acétamidométhylcystéine. La chromatographie en couche mince montre que le produit de la réaction est un seul produit, à savoir la S-acétamidométhylcystéine, sans thioproline. Quand on suit le même mode opératoire que ci-dessus, 20 mais en remplaçant le N-hydr oxyméthylacétamide par le U-hydroxy-méthylpropionamide, le N-hydroxyméthylvaléramide ou le ïî-hydroxy-méthylbenzamide, on obtient sous forme de fluorhydrate les produits correspondants à savoir la S-propionamidométhylcystéine, la S-valéramidométhyleystéine et la S-benzamidométhylcystéine. 25 Exemple 2 Trifluoracétate de S-acétamidométhylcystéine 276 mg (3,1 mmoles) de N-hydroxyméthylacétamide et 351 mg (2,9 mmoles) de cystéine sont dissous dans 2 ml d'acide trif luoracétique et sont agité», dans un bain d'eau glacée en 30 atmosphère d'azote anhydre pendant 30 minutes. L'acide trifluor-acétique est alors éliminé par évaporation sous pression réduite, sans élever la température. I»e résidu est alors lavé avec du dioxanne, filtré et séché sous pression réduite pour donner le trifluoracétate de S-acétamidométhylcystéine. 35 Quand on suit le même mode opératoire que ci-dessus, mais en remplaçant l'acide trif luoracétique par l'acide trichlor-acétique ou l'acide dichloracétique et que les réactifs sont dissous dans un minimum de dioxanne comme solvant, on obtient 69 43866 8 2026554 respectivement le tridhloracétate et le dichloracétate de S-acétamidométhylcystéine « Exemple 5 Oeta-S-acétamidométhyl-S-protéine (sous forme de fluorhydrate) 5 En traitant la Bibonucléase A avec la subtilisine, on obtient une protéine contenant 104 amino-acides, dont 8 restes de cystéine et cette protéine est appelée arbitrairement S-protéine. Un mélange de 2,4 mg (27,9 Jimoles) de N-hydroxyméthyl-acétamide et de 40 mg (3»48 jxmoles) de S-protéine est dissous 10 dans 0,5 ml d'acide fluorhydrique liquide anhydre à 0°0. On laisse le mélange reposer à 0°0 dans des conditions excluant toute humidité pendant 30 minutes, après quoi on élimine substantiellement l'acide fluorhydrique en soufflant de l'azote sec sur la surface du liquide dans le récipient de réaction» le résidu est 15 séché sous pression réduite pour enlever les dernières traces d'acide fluorhydrique, lavé avec de l'alcool absolu (0,5 ml), du dioxanne (0,5 ml) et finalement avec de l'éther (0,5 ml). Le résidu est ensuite séché sous pression réduite. **e produit de la réaction est purifié par filtration sur une colonne de Sephadex 20 G—75 en utilisant de l'acide acétique aqueux à 50 $> comme éluant. L'analyse du produit final montre la présence de plus de 7 moles de S-acétamido-méthylcystéine par mole d'enzyme. Après digestion enzymatique totale avec de la trypsine, de la chymo-trypsine et de 1 'aminopeptidase M, on n'a trouvé que des traces 25 de cystéine ou de cystine. En outre, il n'y a pas d'indication de réaction avec d'autres amino-acides que la cystéine. Oe produit peut être retransformé en S-protéine enzymatiquement active par élimination des groupes protecteurs acétamidométhyle de la façon décrite dans le présent mémoire. 30 Exemple 4 S-a cétami dométhyloyaté-i nft Du fluorhydrate de S-acétamidométhylcystéine est dissous dans une petite quantité d'eau et on y ajoute une solution saturée d'hydroxyde de baryum jusqu'à ce qu'on ait atteint 35 le point isoélèctrique. Le fluorure de baryum qui précipite est séparé par filtration et le solvant aqueux est chassé par évapora-tion sous pression réduite. Le résidu est cristallisé dans de l'éthanol pour donner la S-acétamidométhylcystéine. 69 43866 9 2026554 Quand on suit le même mode opératoire, mais en remplaçant le fluorliydrate de S-acétamidométhylcystéine par le trifluor-acétate ou le dichloracétate correspondant, on obtient la S-acétamidométhylcystéine sous forme du sel d'acide correspondant. 5 L'exemple suivant illustre l'élimination du groupe S-acétamidométhyle de blocage s Exemple 5 96 mg (0,5 mmole) de S-acétamidométhylcystéine sont dissous dans 5 ml d'eau et la solution est ajustée à pïï 4 avec 10 de l'acide chlorhydrique 0,25 Ko On y ajoute une solution, préalablement ajustée à pH 4» de 159 mg (0,5 mmole) d'acétate mercurique dans 5 ml d'eau. Par mélange il se forme immédiatement un précipité» Le pH baisse et est ramené à 4 pendant une heure. On prélève des échantillons de 2 ml à des intervalles de 15 minu-15 tes pendant la période de réaction. A chaque échantillon on ajoute de l'hydrogène sulfuré pour arrêter la réaction, ^e liquide surnageant limpide est décanté et on fait une chromatographie en couche mince pour chaque échantillon dans un système butanol/ acide acétique/eau. Les échantillons prélevés après 30 et 45 mi-20 nutes ne contiennent pas de S-acétamidométhylcystéine. ^es seuls produits obtenus sont la cystéine et la cystine. La description qui suit illustre l'emploi du groupe de blocage S-acétamidométhyle dans la synthèse d'un peptide contenant de la cystéine : 25 Synthèse de l'oxytocine 2 mmoles de propyl-leucyl-glycine amide et 20 ml de tampon au borate de potassium (pH 10,2) sont placés dans un mélangeur Waring à 0°C. On y-ajoute, en agitant, un excès molaire de 1 # de S-acétamidométhylcystéine-ÎT-carboxyanhydride. Le pH est 30 ajuste à 3,0 avec de l'acide sulfurique concentré et le système est balayé avec de l'azote pendant 15 minutes pour éliminer l'acide carbonique. Le pH est alors amené à 10,2 avec de l'hydroxyde de potassium à 50 $ et on ajoute un excès 2 i» molaire d'asparagine-N-carboxyanhydride. Le pH est ajusté à 3,0 avec de 35 l'acide sulfurique concentré et le système est à nouveau balayé avec de l'azote. Le pH est alors amené à 10,2 avec de l'hydroxyde de potassium à 50 # et on ajoute un excès de 3 # de glutamine-N-carboxyanhydride. Le pH est abaissé à 3 avec de l'acide sulfurique 69 43866 10 2026554 concentré et le système est balayé avec de l'azote» le pH est alors amené à 10,2 avec de l'hydroxyde de potassium à 50 $ et on ajoute un excès de 5 # de tyrosine-N-carboxyanhydride» -^e pH est ajusté à 3 avec de l'acide sulfurique concentré et le système est 5 balayé à nouveau avec de l'azote pour éliminer l'acide carbonique» le pH est alors amené à 8,0 avec de l'hydroxyde de potassium à 50 io et on ajoute un excès 10 $ molaire de U-t-butoxycarbonyl-B-acétamidométhylcystéine-îJ-hydroxy succinimide,ester» le pH est ensuite abaissé à 1 avec de l'acide sulfurique concentré et est 10 maintenu à 1 pendant 15 heures pour éliminer le groupe t-butoxy-carbonyle» le pH est ajusté à 4 at on ajoute un excès 10 # molaire d'une solution aqueuse d'acétate mercurique au mélange réactionnel» le pH est maintenu à 4 par addition d'acide sulfurique» On introduit de l'hydrogène sulfuré gazeux dans le mélange 15 réactionnel pour éliminer l'ion mercure et on fait barboter de l'air dans le mélange réactionnel pour oxyder le produit en oxy-tocine, le produit est purifié par chromatographie sur gel de silice»■ les matières premières utilisées dans l'exemple ci-20 dessus sont préparées comme suit : A - S-acétamidométhvlcystéine-H-carboxvanhydride 1,0 g de S-acétamidométhylcystéine est placé dans une fiole tricol sèche équipée d'un tube d'entrée de gaz et d'un condenseur à tube desséchant» On ajoute 50 ml de tétrahydrofuranne 25 sec exempt de peroxyde, et on agite la suspension tandis qu'on introduit tm courant de phosgène à la température ambiante. Après 3 heures, la dissolution est à peu près complète et la solution est filtrée et évaporée sous vide pour donner le S-acétamido-méthyl-cystéine-N-carboxyanhydride sous la forme d'une huile jaune. 30 l'huile est identifiée par spectre infra-rouge comme étant le produit désiré. Quand, dans le mode opératoire ci-dessus, on utilise la S-propionamidométhylcystéine et la S-benzamidométhylcystéine au lieu de la S-acétamidométhylcystéine, on obtient respective-35 ment le S-propionamidométhylcystéine-N-carboxyanhydride et le S-benzamidométhylcystéine-F-earboxyanhydride. B - ff-t-butoxycarbonvl-S-acétamidométhylcystéine 22,8 g (0,1 mole) de chlorhydrate de S-acétamidométhylcystéine sont dissous dans 250 ml de dioxanne à 50 $> (exempt de 69 43866 n 2026554 peroxyde) dans une fiole tri col de 500 ml équipée d'une agitation mécanique et d'un condenseur. On ajoute 12 g d'oxyde de magnésium (0,3 mole) et on agite le mélange à la température ambiante pendant 30 minutes. On ajoute 15»7 g (0,11 mole) de t-butoxy-5 carbonylazide redistillé et on agite le mélange pendant 20 heures dans un "bain d'huile à 45°C» Le mélange est alors refroidi à la température ambiante et additionné d'un litre d'eau, mélange aqueux est lavé avec 2 x 250 ml d'acétate d'éthyle, refroidi dans un bain de glace et acidifié à pH 3 avec de l'acide citrique à 10 50 la solution acide est saturée de chlorure de sodium et extraite avec de l'acétate d'éthyle. les extraits sont lavés deux fois avec 200 ml d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchés sur du sulfate de sodium anhydre, filtrés et évaporés sous vide pour donner un solide amorphe, le solide est dissous dans 15 de l'acétate d'éthyle chaud et on ajoute 2 volumes de benzène. Par repos à la température ambiante, le produit cristallise et, après filtration, il est lavé au benzène et séché sous vide» Un deuxième et un troisième jets sont obtenus en ajoutant du benzène au filtrat et en ensemençant» Après séchage sous vide, on 20 obtient 11 g de N-t-butoxycarbonyl-S-acétamidométhylcystéine fondant à 110-112°a. C - K-t-butoxvcarbonvl-S-acétamidométhylcystéine-H-hydroxy-succinimlde ester 7,3 g (0,025 mole) de U-t-butoxy-S-acétamidométhyl-25 cystéine sont dissous dans 100 ml de tétrahydrofuramie exempt de peroxyde dans une fiole sèche« la fiole est refroidie dans un bain de glace et on ajoute 2,9 g (0,025 mole) de N-hydrozysuccini-mide. Quand la dissolution est complète on ajoute 5»66 g (excès de 10 de dicyclohexylcarbodiimide» le mélange est agité pen-30 dant une heure dans un bain de glace et de sel et abandonné au repos pendant une nuit à 0-5°0. le sous-produit urée est filtré et le filtrat est évaporé sous vide» le solide blanc obtenu est dissous dans de l'acétate d'éthyle, lavé une fois avec du bicarbonate de sodium 1 S, 3 fois avec une solution saturée de 35 chlorure de sodium et séché sur du sulfate de sodium, le solvant est chassé sous vide pour donner 9 g de solide amorphe, le produit est dissous dans du chloroforme et la solution est additionnée d'éther jusqu'à ce qu'elle devienne trouble. Après repos d'une nuit à la température ambiante, on obtient le îî-t-butoxy-carbonyl-S-acétamidométhyl-N-hydroxysuccinimide ester cristallin. 69 43866 12 2026554 KETTOICAMOBS t - Procédé de préparation de peptides contenant -un reste cystéine, caractérisé en ce qu'on protège la fonction mercapto du reste cystéine avec un groupe de blocage de formule : 5 0 R-C-HH-CHg- dans laquelle S est un radical alcoyle ou aryle en faisant réagir un peptide contenant un reste cystéine avec un U-hydroxymé-thylalcoyl- ou -arylamide en présence d'un acide, et en ce qu'on 10 effectue la réaction en présence d'un acide anhydre. 2 - Procédé selon la revendication t, caractérisé en ce que le N-hydrosyméthylamide a la formule générale : 0 R-G-HH-GHg-OH 15 dans laquelle R est un radical alcoyle Inférieur, phényle ou naphtyle. 3 - Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'acide est choisi parmi les acides fluorhydrique, tri-chloracétique., trifluoracétique et dichloracétique. 20 4 - Procédé selon la revendication 1, dans lequel le résidu cystéine est la cystéine elle-même. 5 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'acide est l'acide fluorhydrique et le H-hydroxyméthylamide est le ÎT-hydrosyméthylacétamide. 25 6 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'acide anhydre est l'acide fluorhydrique, le H-hydroxyméthyl-amide est le lî-hydrozyméthylacétamide et le résidu cystéine est la cystéine. 7 - Procédé de préparation de peptides contenant un 30 résidu cystéine, dans lequel on protège la fonction mercapto du résidu cystéine avec un groupe de blocage de formule : 0 R-G-NH-GHg- dans laquelle R est un radical alcoyle ou aryle en faisant réagir 35 un peptide contenant un résidu cystéine avec un N-hydroxyméthyl-alcoyl- ou -arylamide en présence d'un acide, caractérisé en ce qu'on effectue la réaction en présence d'un acide substantiellement anhydre. 69 43866 13 2026554 8 - Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'acide est choisi parmi les acides fluorhydrique, trichloracétique, trifluoracétique et dichloracétique. 9 - Procédé selon la revendication 8, dans lequel 5 le résidu cystéine est la cystéine.