e 20128*1 La présente invention concerne un procédé po;ur .la production de maltose très pur à partir de l'amidon* Elle se arapporte, plus particulièrement, à un procédé qui comprend la gélatinisation de l'amidon et la saccharification par des enzymes, notamment par 5 de la {3-a my la se, puis par de l'a-1,6.* glucosidase ou inversement. Jusqu'à présent, dans la production du maltose à partir de l'amidon, on liquéfiait ce dernier au moyen de l'a-amylase par exemple, pour la saccharifier ensuite par l'action d'une amylase du malt, notamment au moyen d'un mélange d'à et p amylases. Ce 10 procédé connu permettait d'obtenir tout au plus 70% de maltose pur dans la solution résultante, même si la proportion de p-amy-lase était accrue par l'emploi d'un malt contenant une proportion sensible de cet enzyâê. Le raffinage d'une telle solution est extrêmement difficile, et l'on ne peut pas purifier par recris-15 tallisation; on est donc amené, dans la pratique courante, à utiliser la précipitation fractionnée à l'alcool. Cependant, ce procédé n'est pas très économique, et le produit obtenu ne peut pas titrer plus de 93% de maltose; il contient d'ailleurs des dex-trines, du malt-triose, du glucose et d'autres impuretés. 20 La présente invention remédie à cet inconvénient de l'art antérieur* elle apporte .vin nouveau procédé.permettant, de façon économique, l'obtention de maltose pratiquement pur. Le nouveau procédé suivant 1!invention consiste à-liquéfier d'abord une bouillie d'amidon par l'action de la chaleur 25 ou d'ensymes liquéfiants, à réduire la viscosité de la solution obtenue par l'adjonction de (3-amylase, et ensuite saccharifier par l'addition d'une ou de plusieurs a—1,6 glucosidasesjdans . une autre forme d'exécution de l'invention, la liquéfaction de l'amidon et la réduction de la viscosité sont réalisées- par ' 30 l'action d'une ou de plusieurs a-1,6 glucosidases5 tandis que la saccharificatiori est provoquée par de la p-amylase./Autrement dit, le nouveau procédé utilisé pour la réduction de la viscosité la |3-amylase ou bien une a-1,6 glucosidase, et pour la saccharification celui de ces enzymes qui n'a pas servi à la réduction 35 de la viscosité. Selon une forme d'exécution particulières fort avantageuse, de l'a-amylase est ajoutée au milieu de la saccharification. Les données expérimentales qui suivent permettront de 40 mieux comprendre l'invention. BAD ORIGINAL 69 23079 2 2012631 Une suspension aqueuse à 10% d'amidon de poiame de terre a été liquéfiée jusqu'à E*D. (équivalent d'extrase) de 2,1% , au moyen de l'a-amylase, et le liquide obtenu fût saccharifié par l'addition de 25 unités "de p-amylase par gramme d'amidon, à 45*C, 5 pendant 16 heures. L'échantillon ainsi préparé est désigné par: A. Une autre fraction du mStté liquide fut saccharifiée par l'addition de 10 unités de pullulanase, c'est-à-dire a-6 glucosidase) après quoi on a ajouté 25 unités de p-amylase par gramme d'amidon/ La solution résultante est désignée- par B. 10 Le tableau 1 ci-après donne les résultats de ces deux essais. Tableau 1 . 15 maltose glucose (%) (%) malt-triose (#)... dextrine {%) A 65,5 1,1 3,5 29,9 B 90,5 0,4 1,2 7,9 On voit qu'avec l'emploi d« lap-amylase seule, salation A, la 2q- teneur en maltose est seulement de 65,5/£, alors qu'elle atteint 9Ô,53S, lorsqu'on emploie de la pullulanase conjointement avec de la p-amylase, dans là solution B- . Lapullulanase est une a-6 glucosidase ou isoamylase, capable de scinder spécifiquement les liaisons «*»1,6,.glucosidi-25 ques; elle"peut ftre obtenue par la culture de l'Aerob^cter aero-genes . la méthode japonaise ,' pour là détermination *de l'activité de cet enzyme, consiste à préparer'd'abord, une solution comprèr nant 1 ml de solution d'enzyme, 5 ml d'tuae solution à'ï% d'amidon de rizglutineux, 1 ml d'un tampon d'acide acétique 0,5 M 30 : de jpH 6 ; la solution est maintenue à 40*C pendant 30' minutes j -0,5 ml de solution résultante sont versésadans t15 «l;&?*aj£ avec 0,5 ml d® solution d'iodé 0»01! M» Apr«5-15 minutes, oni: j&£$era(ine ^absorption pour la longueur d * onde de. 610iaillimicrons ; l'activité enzymâtique susceptible de faille varier l'absorption d'une valeur de 0,1 est considérée comme correspOndant èt /liQ unités. La p-amylase est essayée,- au point de-vue rde, son activités de la façon suivante. On prépare une solutionud# 5. ml d'amidon soluble à 4 ml* d'un tampon d'acide acétique M/10 et 1 ml de la solution d'enzyme? le tout est maintenu à 40*C 40 pendant 30 minutes. Le sucre réducteur» ainsi obtenu^ .est ' BAD ORIGINAL 69 23079 3 2012831 exprimé en glucose: l'activité de P-amylase est considérée comme étant d'une unité, lorsque la quantité de glucose formé est de 10 mg. Comme indiqué plus haut, pendant la saccharification 5 de l'amidon liquéfié avec la p-amylase, l'emploi de 1*a-1,6 glucosidase permet de scinder les liaisons a-1,6 glucosidiques des ramifications de l'amylopectine de l'amidon; cela conduit à la formation de chaînes linéaires type amylose, susceptibles d'être aisément décomposées par la P-amylase. Il en résulte une meilleure 10 efficacité de la liquéfaction de l'amidon par la p-amylase, sans formation de dextrineslimitées a et p, et sans sous-produits tels que maltotriose et glucose, à partir d'un amidon liquéfié à bas E.D. Ces facteurs contribuent à l'obtention de solutions très riches en maltose. 15 L'a-1,6 glucosidase utilisée peut être non seulement la pullulanase produite par l'Aerobacter (Hans Bender, Bischoemische Zeitefclrxft 334,79^95(1961), mais également l'isoamylase du Pseudo-monas, par exemple de la variété amyloderamosa(ATGC n° 21.262). L'expérience a montré que ce dernier enzyme, conjointement avec 20 de la p-amylase, peut donner une solution de maltose aussi pur que celle qui est produite par la combinaison des pullulanase . et et p-amylase. On peut également employer les iso-amylases produi-tw-par une ou plusieurs des bactéries suivantes: Escherichia, Agrobacterium, Azotobacter, Erminia,Stapylococcus, Streptococcus, 25 Serratia, Sarcina, Nocardia, Bacillusi Pediococcus, Micrococcus, Microbacterium, Lactobacillus ou Leuconostoc. L'a-1,6 glucosidase peut etre ajoutée avant ou après l'addition de p-amylase. En outre, l'adjonction d'une amylase liquéfiante,notamment d'a-amylase, au cours de la saccharification, 30 facilite la purification de la solution. Lorsque la solution,saccharifiée au moyen de l'a-1,6 glucosidase et P-amylase, est purifiée à la manière- habituelle, les faibles quantités de dextrines, à poids moléculaire élevé, qui y subsistent, sont éliminées sur une résine échangeuse d'ions. 35 A titre d'exemple, une solution C à 39,4%, saccharifiée par l'action successive de pullulanase et de p-amylase, est comparée avec une solution D, à 40,5%, saccharifiée de la même façon, mais avec en plus l'a-amylase; on essaie de purifier les deux' solutions sur une résine échangeuse d'ions. Le tableau 2 suivant donne le 40 résultat de ces essais. 69 230*79 4 2012831 Tableau 2 Prétraitement en 2 lits Traitement en lits mixtes avec acide fort et base avec acide fort et base moyenne forte 8 fois le volume de solu- 40 fois le volume de solution par rapport au volu- tion; pH 5; me de résine passée; pH résist.spéc.1x10° cm. 5,2;résist.spéc.5x10^cm 20 fois le volume de solu- 2 fois le volume de solu-10 D tion; pH 8; ■. tion; pH 3,7 résist.spéc.9x1Cr cm» résist.spéc.1x10** cm. On peut voir que la solution C est impossible à purifier par l'échange d'ions, alors que la solution D se purifie bi«n sur la résine échangeuse. 15 Suivant une particularité de la présente invention ,1e rendement en maltose peut être amélioré par l'emploi d'un mélange de différentes variétés d*s~1,6 glucosidase#, au lieu d'une seule, en combinaison avec la p-aaylase. Cela ressort de l'exemple sur les solutions E et F, récapitulé au tableau 3. 20 Tableau 3 Enzyme utilisé Glucose Maltose Malt-triose Dextrine % % % % E Pullulanase 0,5 92,5 5,5 1.5 Pullulanase + 25 F isoamylase du 0,5 95,0 3,4 M Pseudomonas Dans chacun de ces essais, une solution gélatinisée à 2% d'amidon de patate douce était saccharifiée avec la même quantité totale d'enzyme, à 45°C,pendant 64 heures. Le pH, de la solution E,était 30 de 6, et de la solution F, 5,5,pendant la conversion. Dans une autre série d'essais, des bouillies aqueuses, contenant 2% de différents amidons, ont été dispersées et géla-tinisées à 1*ébullition, et soumises à la température de 130°C sous pression, pendant 5 minutes.Après refroidissement, les solu-35 tions d'amidon liquéfié ont été additionnées chacune de 20 unités de pullulanase par gramme d'amidon, de façon à former une solution de viscôsité réduite; on leur a ensuite ajouté 100 unités de P-amylase et 5 unités d'cc-amylase par gramme d'amidon, on les a saccharifiées à 45°C,pendant 16 h. Les résultats sont réunis 40 au tableau 4 ci-après. BAD ORIGINAL 69 23079 5 2012831 Tableau 4 Amidon de Degré Composition % .du sucre obtenu ' d'amylolyse Glucose Maltose Malfc-triose Dextrine E.D. % 59,3 1,0 91,0 - 4,0 4e0 59,85 1,5 92,0 4,5 2,0 63,40 2,0 93,5 3,5 1,0 ° Pomme de terre Maïs Maïs cireux Nota - L'activité de l'a-amylase était déterminée par la méthode 10 décrite à la page 88 " méthodes analytiques de l'industrie du sucre de l'amidon" éditée par la Société pour la recherche technique des sucrés de l'amidon japonaise. Il est à remarquer que, dans le cas du maïs cireux, la concentration de la bouillie d'amidon peut Stra élevé# jusqu8à 4%. 15 En plus des essais précédents, on a utilisé, dans les mêmes conditions, 100 unités de p-amylasepar grains d'amidon et 25 unités de pullulanase, avec, en outre, 5 unités d80£®affiylasa5 pour la saccharification des solutions gélatiniséess, les. résultats étaient les mimés qu'au tableau 4. 20 D*autre part, des bouillies d'amidon de différentes concentrations , préparées à partir de l'amidon de pomme d© terra » étaient liquéfiées jusqu'à E.D«= ]% par de l'œ-aiaylase à la température élevée, à la manière habituelle, et elles étaient traitées pendant 5 minutes à 130°C, sous pression* Ensuite, après l'addition 25 des 25 unités de pullulanase par gramme d'amidon, à 45°C, on a ajou® té 7 unités de p-amylase, et chaque échantillon était saccharifié à 6, à 45*C,pendant 16 heures. Les résultats sont montrés au tableau 5. Tableau 5 - 30 Composition % du sucre obtenu Concentration e.d« Glucose Maltose Mait-triose Dextrine de l¥amidon & % 10% 56,62 0,2 77,7 8,6 • 13g4 20% 53,70 0,3 75,4 > '8,6 15,7 35 On constate que les meilleures concentrations sont d'environ 10$o bad original 69 23079 6 2012831 glucosidase, chaque échantillon était saccharifié à pH 6S à 45°G pendant 16 heures. Les résultats étaient les mêmes que ceux du tableau 5. En ce qui concerne la corrélation entre: le degré de 5 liquéfaction dé l'amidon et la production de maltose, lé tableau 6, ci-après, montre que le rendement en maltose est d'autant plus grand que le degré de liquéfaction est plus poussé pour un pour-cent E*D* faible* Tableau 6 Degré de liquéfaction E.D.%' £*D* Final Glucose Maltose Malt-triose Dextrine 3,8% 50, f S# Ot6% 82,0% 6,7% 10,7# 11,9" 54,86" 0,9" 75,0" 13,8" 10,3" 18,8" 55,16" 1,1" 68,5" 21,0" 9,4" B Dans ces essais, on a utilisé le même mode opératoire qu'à propos du tableau 5, sauf que 22 imités de pullulanase et 15 unités de pssaayiase ont été employées par gramme d*amidon* Le tableau 7 montre que la proportion préféré® de pullulanase est d'environ 20 unités par gramme d*amidon* 20 Tableau 7 • Unités d'enzyme par a d * amidon E.D* Composition % du sucre obtenu Pullulanase P-amylase final % Glucose Maltose Malt-triose Dextrine 10 30 55,8 0,8 85,4 6,3 7,5 20 30 57,5 0,9 87,5 6,3 5,1 200 30^ 58,9 1,0 82, O 13,5 0 30 58,9 M 69,6 3,5 25,7 La bouillie d8amidon de pomme de terre, utilisée, avait uîie con- 30 centration de ^0%; le degré de liquéfaction était de 2,5$, et la saceharifieation eut lieu à pH 6, à 45 ®C, pendant 36 heures* Bien que la production de maltose augmente proportionnellement avec la quantité de p-amylase ajoutée, il convient, du point de vue industriel, d'employer 30 à 60 unités de cette amyla« 35 se par gramme d'amidon* La durée de saccharification requise est d'environ 46 heures* Avec 20 unités de pullulanase et 5 unités d'a-amylase par gramme d'amidon, le mode de liquéfaction étant le même que dans le cas du tableau 5, la saccharification a donné les résul-40 tats récapitulés au tableau 8. BAP ORIGINAL 69 23079 7 2012831 Tableau 8 Unités de 15 25 5 p-amylase par g d'amidon uuree ae saccharification h D.E« final % Glucose % Maltose % Malt-triose % 1 Q> QS 20 6 53,7 0,5 75 11,0 13,5 20 12 57,6 2,2 78,9 12,2 6,7 20 24 59,5 1 »6 83,3 11,8 3,3 20 46 60,0 1.4 82,5 13,1 3,0 10 60 6 55,5 1,1 79,6 9,0 10,3 60 12 59,5 2,2 82,8 9,0 6,0 60 24 61,3 2,0 00 8,4 2,5 60 46 61,9 2,2 88,3 7,0 2,5 20 La proportion d'a-amylase, à ajouter en cours de saccharification, peut être assez limitée, parce qu'elle sert simplement à la décomposition de la dextrine restante. Habituellement, 5 unités environ d'a-amylase, par gramme d'amidon, suffisent à procurer le résultat cherché. D'ailleurs, l'adjonction d'une proportion excessive de cet enzyme risque d'altérer la pureté du maltose. Quant au moment de cette addition, le tableau 9 montre que c'est vers le milieu de la saccharification que se situe le temps préféré. Le résultat recherché ne se produirait pas pour une addition trop tardive. Tableau 9 30 E.D* final % Glucose % Maltose % Malt-triose % Dextrine % Essai témoin 62,82 1,4 87,3 9,1 2,2 a-amylase ajoutée après: 6 h 62,80 2,2 87,3 7,4 3,1 12 h 62,80 1,3 88,2 7,1 3,4 24 h 62,90 1,4 89,8 5,9 2,9 35 40 Les vitesses de saccharification et la pureté du maltose obtenues varient avec le type de l'amidon utilisé. Les meilleurs résultats sont atteints avec de l'amidon de maïs cireux; les amidons de maïs, de pomme de terre et l'amidon soluble donnent des résultats décroissants dans cet ordre de numération. Les exemples qui suivent illustrent l'invention non limitativement. SAD ORIGINAL 69 23079 8 2012831 EXEMPLE 1 100 g d'amidon de mais sont gélatinisés et dispersés dans 3 1 d'eau bouillante. La dispersion est ensuite maintenue à 130°C, sous pression,pendant 5 minutes,puis refroidie à 45°C, son pH 5 étant amené à 6. Après l'addition de 20 unités de pullulanase (relarguée par salification), la viscosité de la solution étant réduite, on ajoute 150 unités de p-amylase par gramme d?amidon, et le tout est saccharifié à 45°C pendant 48 h. La solution saccharifiée est ensuite chauffée, filtrée et concentrée, puis 10 purifiée par décoloration, à la manière habituelle. Après concentration jusqu'à une teneur en eau de 15#, des cristaux incolores sont obtenus; leur analyse montre qu'il s'agit d'un maltose très pur, composé de 93# de maltose, 1,5/6 de glucose, 4# de malt-triose et 1,5# d'autres sucres. 15 EXEMPLE 2 Une solution à 5# dans l'eau est préparée par gélatinisation de 100 g d'amidon de maïs cireux par le même procédé qu'à l'exemple 1. On ajoute ensuite 20 unités de pullulanase, puis 100 unités de P-amylase par gramme d'amidon. Le mélange est saccharifié à 20 45°C durant 10 h, après quoi, on lui ajoute 5 unités d'a-amylase par gramme d'amidon. La saccharification est alors continuée pendant 40 h. La solution résultante est bouillie, décolorée et concen trée. Après une nouvelle purification sur des résines échangeuses d'ions (Amberlite IR 120, IRA 68 et IRA 411), suivie d'une concen-25 tration, le produit devient complètement solide pour une teneur en eau de 13#. L'analyse par chromatographie sur papier montre que ce produit contient 93,7# de maltose, rapporté à la matière sèche* Mis en solution à 70#, ce produit a donné des microcristaux d'une pureté de 96 à 97# de maltose. 30 EXEMPLE 3 Avec 100 g d'amidon de patate douce, purifié, on a préparé une suspension aqueuse à 3# d'amidon, que l'on a ensuite gélatinisé comme à l'exemple 1. Ensuite, 20 unités de pullulanasé'et 40 unités d'a-1,6 glucosidase provenant des bactéries du genre Pseu-35 domonas(ATOC 21.262,décrite dans la demande de brevet PV n° 155 570) ont été ajoutées par gramme d'amidon. Le pH étant"ramené à 5,5, le mélange fut saccharifié à 45°C de façon à réduire sa viscosi-téjensuite, 25 unités de p-amylase furent ajoutées par' g d'amidon. Après saccharification à 45°C, pendant 46 h, ébullition,purifica-- 40 tion sur charbon actif et concentration, le sirop obtenu titrait BAD ORIGINAL 69 23079 9 2012831 13% d'eau at il a iwaédiatement cristallisée Le produit contenait 94,5$ de maltose par rapport à la matière sèche, le rendement ^ anhydre étant de 95#. EXEMPLE 4 5 On a préparé une bouillie à 30% avec 500 g d'amidon de pomme de terre, et on lui a ajouté 0,2% de Néospitase (désignation de l'a-amylase produite par la Société Nagase Sangyo Co). La bouillie, au pH 6, était liquéfiée à 88*C jusqu'à ce que la valeur de E.D® ait atteint 2,7. On a ajouté de l'eau chaude pour amener la con-10 centration en solides à 10$. La solution obtenue, additionnée de 40 unités de l'enzyme du Pseudomonas à pH 5,5 et à 45®C, et lorsque sa viscosité fut réduite, on ajouta 50 unités de p-amylase par gramme d'amidon. Le mélange fut alors saccharifié pendant 15 h, à 45*C, avec pH 6f ensuite, après l'addition de 5 unités 15 de Néospitase par gramme d'amidon, on continua la saccharification durant 4# h au total. La solution obtenue, réchauffée et filtrée, fut purifiée au charbon actif et sur une résine échangeuse d'ions; la solution de maltose très pure, ainsi obtenue, fut concentrée jusqu'à une teneur en eau de 15% et cristalli-20 sée. Le rendement en solides était alors de 92% et la teneur on maltose de 94% de la matière sèche. EXEMPLE 5 100 g d'amidon de maïs sont ajoutés à 300 ml d'eau bouillante pour y être dispersés et gélatinisés.La dispersion est portée 25 à 130°C,. sous pression, pendant 5 minutes,puis refroidie à 80°C; son pH est alors ajusté à 6. Après l'addition de 100 unités de p-amylase,par gramme d'amidon,lorsque la viscosité a été réduite, on refroidit la solution à 45°C et on ajoute 20 unités de pullulanase de salification par gramme d'amidon. Le mélange 30 est saccharifié à 45*C pendant 48 h. La solution obtenue est chauffée, filtrée et concentrée à 15% d'eau? elle donne alors des cristaux incolores.produit contient 92,5% de maltose, 2% de glucose, 4% de malt-triose et 1,5% d'autres sucres. EXEMPLE 6 35 Après avoir gélatinisé 100 g d'amidon de maïs cireux,comme dans l'exemple 5, on a refroidi la solution à 50°C,et on lui a ajouté 50 unités de p-amylase par gramme d'amidon. Le pH était amené à 6. Lorsque la viscosité a baissé, 20 unités de pullulanase par gramme d'amidon ont été ajoutées et le mélange était saccharifié à 45°C 40 pendant 10 h; on a alors ajouté 5 unités d'ct-amylase par granane 8AD ORIGINAL 69 23079 10 2012831 et on a continué la saccharification pendant 45 h encore. La solution obtenue était bouillie, décolorée et concentrée à la manière habituelle. Après une nouvelle purification sur les résines Amberlite IR 120, 5 IRA 68, IRA 411,suivie de concentration, le produit est devenu solide avec une teneur en eau de 13$. La chromatographie sur papier a montré une teneur en maltose de 93$ de la matière sèche. En solution aqueuse à 70$ le produit a donné des microcristaux• EXEMPLE 7 10 On a préparé une suspension à 15$ d'amidon de patate douce, et on lui a ajouté 0,2$ d'anzyae liquéfiant, d'origine bactérielle, et on a effectué la saccharification à 190*C, jusqu'à atteindre la valeur de 1,7 E.D. La solution aqueuse résultante, refroidie à 70®C, a été additionnée de 30 unités de p-amylase par gramme d'ami— don; à pH 6, la solution a été saccharifiée et, lorsque sa viscosité a baissé, on lui a ajouté 20 unités de pullulanase et 40 unités d' ,6 glucosidase (même qu'à l'exemple 3) par gramme d'amidon. On a alors ramené le pH à 5,5 et saccharifié le mélange à 45*C pendant 46 h. Après ébullition, purification et concentration ha-20 bituelles, le sirop obtenu contenait 13$ d'eau et cristallisait immédiatement; il contenait 95$ de maltose par rapport à la matière sèche et le rendement en maltose ressortait à 95$. EXEMPLE 8 Une bouillie à 30$ d'amidon de posasse de terre est préparée avec 25 500 g de cet amidon. Après l'addition de 0,2$ de Neospitase (mime qu'à l'exemple 4)le pH étant 6, la bouillie est liquéfiée à 88*C pour atteindre un E.D. de 2,7. On ajoute alors de l'eau chaude pour former une solution à 10$ de solides. Ensuite, on ajoute 50 unités de p-amylase par gramme d'amidon, et l'on saccha-30 rifie à 80°C; lorsque la viscosité a baissé, 40 unités d'enzyme du Pseudomonas(isoamylase) sont ajoutées par gramme, et le mélange est saccharifié à pH 6, pendant 15 h, à 45*C; on ajoute alors de nouveau 5 unités de Neospitase par gramme» et l'on continue la saccharification. Après un total de 48 h de saccharification, 35 après chauffage, filtration et purification habituels, on effectue un raffinage sur une résine échangeuse d'ions.La solution est concentrée jusqu'à 15$ d'eau et cristallisée. Le rendement en solides est de 90$ sur matière sèche et la teneur en maltose de,94$. 40 L'invention n'est pas limitée aux détails ci-dessus. BAD ORJGJNAL 23079 n 2012831 REVENDICATIONS 1. Procédé pour la production de.maltose de haute pureté à partir de l'amidon, par gélification d'une bouillie d'amidon, par l'action de la chaleur ou d'enstymes liquéfiants, caractérisé en ce que la solution aqueuse gélifiée est soumise à l'action de la p-amylase ou bien d'une a-1,6 glucosidase en vue de la réduction de.la viscosité, et elle est ensuite saccharifiée par.l'action d'un ou de plusieurs de ces derniers enzymes. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la réduction de la viscosité est réalisée par l'adjonction de p-amylase, tandis que la saccharification est effectuée par l'addition d'une ou de plusieurs a-1,6 glucosidases. 3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la liquéfaction de l'amidon et la réduction de la viscosité sont réalisées par l'action d'une ou de plusieurs a-1,6 glucosidases, tandis que la saccharification est produite par la p-amylase. 4. Procédé suivant une des revendications 1 à 3,caractérisé en ce que de l'a-amylase est ajoutée pendant la saccharification, de préférence vers le milieu de la durée de celle-ci. 5. Procédé suivant une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la ou les a-1,6 glucosidases proviennent des cultures de bactéries telles que Aerobacter, Pseudomonas, Escherichia, Agrobacterium, Azotobacter, Erwinia, Staphylococcus, Strepto-coccus, Serratia, Sarcina, Nocardia, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Mycobacterium, Lactobacillus ou Leuconostoc.