La présente invention, due à la collaboration du Professeur Jean-François BIELLMANN et de Monsieur Michel JUNG, concerne de nouveaux pyridine adénine dinuclé otites substitués et leur préparation. Les pyridine adénine dinucléotides selon l'invention répondent à la formule dans laquelle X est un groupe acétylé choisi parmi le diazoaeétyl - CO - CHN2 (composé 1) et le chloroacétyl- CO - CH2 Cl (composé 2). L'invention concerne aussi la préparation de ces composés par transglycosi- dation entre la diazoacétvl-3 pyridine et la nicotinamide adénine dinucléotide en présence de nicotinamide adénine dinucléotide glycohydrolase de rate de veau (figu- rée par Â) selon le schéma N CPN2 S R N X H0 OP, o- P O P OP - O N H + H2- X H OH OH 2 H ÔH OH R H HW OH H HR OH Co-CE 0 0 I tt CO-C D 2 N X CH2~ [ C- -O oH O - CH + )ÈONH2 OH OH H H R HO OH Cette réaction permet d'atteindre le composé 1, celui-ci est ensuite soumis à l'action d'une solution aqueuse diluée décinormale en acide chlorhydrique et contenant du chlorure de sodium.Cette réaction peut être mise en oeuvre à température ordinaire et à l'abri de la lumière0 La transglycosidation directe ne peut être appliquée à la préparation du composé 2, car les chloroacétyl-3 pyridine sont des inhibiteurs de l'enzime qui catalyse les réactions de transglycosidaticn. Les composés suivant l'invention se sont avérés un coenzyme actif pour l'enzyme extraite de foie de cheval catalysant l'oxydation de ltéthanol et également un inhibiteur irréversible de cette meme enzyme et de I'enzyme correspondante extraite de levures Par suite de cette propriété d'inhibiteur irréversible d'enzyme, les composés suivant l'invention sont des antimétabolitesO L'exemple suivant non limitatif illustre lesnouveau pyridine dinucléotides selon l'invention et leur méthode de préparation0 EXEMPLE s à une solution de 550 mg de nicotinamide adénine dinucléotide dans 20 ml de tampon triséthanolamine-acide chlorhydrique 0,1 M à pH = 7,1, on a ajouté 0,5 g de diazoacétyl-3 pyridine et une suspension de 1 g de nicotinamide adénine dinucl otide glycohydrolase de rate de veau dans 10 ml du meme tampon. Le mélange est thermostaté à 370 C et fortement agité. A intervalles réguliers, on prélève 0,1 mi qu'on dilue par 0,5 ml de tampon tris-éthanolamine-acide chlorhydrique et l'enzime est centrifugée. On pipette alors 0, 1 ml de la solution surnageante dans deùx cuves W LI et D contenant 7 ml de tampon phosphate 0,1 M à pH = 8,0; 0,1 N en éthanol et 0,05 ml de la solution dans la cuve 2 contenant 3 ml de solution molaire de KCN. - à la cuve 2 on ajoute 2 Fg d'alcool deshydrogénase de levure. Après 10 mn, on détermine la différence d'absorption à 340 nm entre les cuves 1 et 2. - la différence d'absorption à 365 nm entre les cuves 1 et 3 permet de déterminer la concentration de l'analogue formé. Après disparition du nicotinamide adénine dinucléotide (test 1), l'enzyme est centrifugée et l'excès de diazoacétyl-3 pyridine extrait à ltéther (on récupère de la sorte 300 mg de diazocétone). Après précipitation à l'acétone froide, centrifugation... le résidu (750 mg de poudre brune) est dissous dans 10 ml d'eau, chroma- tographié sur une résine échangeuse d'anions ; hauteur 20 cm, diamètre 2 cm, fraction de 10 ml : - par élution à l'eau (300 ml) on obtient un pic jaune trouble non analysé, puis un mélange de nicotinamide et de diazoacétyl-3 pyridine - avec une solution HCOOH 0,1 N (300 ml) on élue d'abord diverses impuretés mineures non analysées, puis l'analogue du nicotinamide adénine dinucléotide (80 r-Moles). - enfin une solution d'acide formique 0,4 N (500 ml) élue d'autres produits que nous pensons être de l'adénosine diphosphate, du ribose adénosine diphosphate..e Les différents produits d'élution sont analyses enzymatiquement (Alcool deshydrogénase de levure et éthanol) et par leur éventuelle réaction avec l'ion cyanure. Les fractions contenant le diazoacétyl-3 pyridine adénine dinucléotide sont réunies et lyophilisées, On peut encore l'extraire par chromatographie sur une résine en éluant avec des solutions de NH4 HCO On obtient une solution de diazocétone riche en sels qu'il faut dessaler par une filtration sur gel. Les caractéristiques spectrales du diazoacétyl-3 pyridine adénine dinucléo- tide sont les suivantes - dans 1' eau à pH = 7,1 (tampon tris-éthanolamine-acide chlorhydrique) 260 nm # = 17 800 mas Emax 303 nm = 6 850 - dans une solution aqueuse molaire de KCN #max 260 nm # = 15 800 #max 360 360 nm # = 10 000 - dans un tampon tris-éthanolamine-acide chlorhydrique 0,1 M pH = 8,0; 0,1 M en éthanol après addition d'alcool deshydrogénase. #max 260 nm # = 15 000 #max 380nm # = 7 700 #max 380 nm # = 7 700 Pour obtenir le composé 2 on dissout 15 M moles de diazoacétyl-3 pyridine adénine dinucléotide dans 0,5 ml H20 et on rajoute 0,5 ml d'une solution 0,2 N en HCl et 0,4 N en NaCl. Le récipient est bouché et gardé à température ambiante à l'abri de la lumières On prélève 5 ç de cette solution qu'on dilue dans 3 ml de tampon phosphate 0,1 M, pH = 7,00 Lorsque l'absorption en W à 303 nm a disparu, la solution est dessalée par filtration sur gel ; le produit correspondant au pic d'élution (HZO) est chromatographié sur une colonne de résine échangeuse d'anions sous forme chlorure (hauteur 15 cm, diamètre 2 cm, fractions de 10 ml). - élution à l'eau (160 ml) : aucune produit notable. - élution avec une solution de HCl 0,01 14 (200 ml) : on obtient le chloroacétyl-3 pyridine adénine dinucléotide dans les fractions 22 à 29. Aucun autre produit n'est élué à une concentration plus forte en HCl. Les fractions sont réunies et lyophilisées plusieurs fois pour éliminer HCl. Le dosage en W indique que nous obtenons environ 12 r oles de produit I. Pour le conserver, nous l'avons dissous dans une solution 10 M en llCl qui est gardée à -150C. Les propriétés spectrales en ultra-violet du composé I sont les suivantes s - dans une solution de tampon phosphate de sodium 0,1 n, pH = 7,0 G: 260 nm = 16 300 - dans une solution molaire de KCN dans l'eau #max 260 nm # = 16 000 #max 335 nm # = 3 600 max - dans un tampon phosphate 0,1 M , pH = 8,0; 0,1 M en éthanol après addition d'alcool deshydrogénase de foie #max 260 nm #= 15 000 #max 358 nm # = 6150 # max 358 nm # = 6150 L'alcool deshydrogénase de foie de cheval (0,5 mg par ml) perd toute activité après 40 mn d'incubation avec une concentration 1,3 10 N M de composé I. L'enzyme extraite de levure (0,2 mg/ml) perd 80% de son activité en 50 mn d'incubation dans le même tampon avec une concentration de 5,6 10-5 -5 M de I. L'activité n'est pas restaurée par filtration sur gel ou dialyse, d'autre part le spectre W de l'enzyme est modifié. REVENDICATIONS 1. Nouveaux pyridines adénine dinucléotides répondant à la formule t dans laquelle X est un groupe acétyle choisi parmi le diazoacétyl - CO - CHN2 (composé 1) et le chloroacétyl-CO H2 Cl (composé 2). 2. Procédé de fabrication du composé 1 par traneglycosidation entre la diazoacétyl-3 pyridine et la nicotinamide adénine dinucléotide en présence de nicotinamide adé- nine dinucléotide glycohydrolase de rate de veaux 3. Procédé de fabrication du composé 2 à partir du composé 1 par traitement de ce dernier au moyen d'une solution aqueuse décinormale en acide chlorhyirique et contenant du chlorure de sodium0 4. Procédé selon la revendication 3 dans lequel on opère à température ordinaire à l'abri de la lumière 5. Application cescomposésselon la revendication 1 comme antimétabolite