f 2004.559 69 08462 La présente invention coneêï"ne de nouveaux composes doues d'une activité antimdicrobienne et leur préparation i elle se rapporte plus particulièrement à ues alpha-azidobenzyl pénicillines substituées de formule générale : 10 - CH - CO - NH - CH - CH I I N-, CO .GH-CeOH 15 20 25 à leurs sels non toxiques et à leur préparation. Les sels non toxiques des composés de la présente invention comprennent des sels métalliques non toxiques tels que les sels de sodium, de potassium, de calcium et d'aluminium, les sels d'ammonium et les sels d'ammanium substitués , par exemple des sels d'aMnes non toxiques telles que des trialcoylamines parmi lesquelles on peut citer la triéthylamine, la procaïne , la dibenzy-lamine, la N-benzyl-bêta-phénétylamine, la 1-éphénamine, la N,N-dibenzyléthylènediamine, la déhydroabiéthyiaminé, la N,N-bis-déhydroabiéthyléthylènediamine et d'autres aminés qui ont été utilisées pour la formation des sels avec la benzylpénicilline ou la phénoxyméthylpénicilline. La présente invention fournit jen outre un procédé pour la préparation de composés de formule I, procédé qui consiste à faire réagir un composé de formule ; 30 avec un composé de fcrmule - CH - C0 - X k II 35 Y - NH - CH - CH I I C0 - N '3 CH - COOR III où CO-X et Y-N" sont des groupes d'atomes capables de réagir les 40 uns sur les autres en formant -une liaison carbone-azote de manière fn -0.,- 2 2004559 6V Uo4Qué, au besoin après hydrolyse, on obtienne un groupe -C0-NH-; où R est un atome d'hydrogène, un cation ou un radical/6rganique pouvant être remplacé par de l'hydrogène sans qu'ait lieu une réduction du groupe azido ou une destruction notable du éystème 5 à cycle bêta-lactame-thiazolidinique. Le composé de formule II peut être un chlorure d'acide ou " son équivalent fonctionnel en tant qu'agent d'ac^||ïfcion pour tin groupe amino primaire. Comme équivalents on peut citer les bromures d'acidc, lés azides d'acide, les esters activés, les anhydri-10 des d'acide correspondants, y compris des anhydrides mixtes et en particulier les anhydrides mixtes préparés à partir d'acides organiques plus forts tels que les monoesters aliphatlques inférieurs de l'acide carbonique et les.anhydrides mixtes préparés à partir d'acides minéraux tels qu^ |.'âci.4e dichlorophosphorique. 15 On peut en outre utiliser un amide hétéroëyclique activé tel qû'.un imidazolide ou l'acide libre lui'-anême peut être couplé avec le composé 6-amino-pénicillanique de formule III par emploi d'un réactif à base de carbodiimide ou d'un autre composé tel que le 3'-suifonate de N-éthyl-5-phénylisoxazolinium, lequel peut con-20 duire à la formation d'un amide après incorporation à un mélange d'un acide et d'une aminé. r.: - Dans le composé.de formule III, Y peut être un atome d'hydrogène ou.être identique à H "etr reprélilite un groupe di-(alcoyié inférieur)- ou tri (alcoyle inférieur)-silyle, le terme "infé-25 rieur" signifiant un alcoyle renfermant jusqu'à 6. atomes de carbone. Selon un mode de réalisation, Te composé de formule III est de 1"acide 6-aminopénicillanique (6 APA) ou un de ses sels avec une base minérale ou une base organique tertiaire et la réaction 30 s'effectue dans l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un solvant organique tel que le dioxanne,l'acétone, la méthylisobutylcétone, l'acétate d'éthyle, l'acétate de ,butyle ou le diméthylformamide, en présence d'un agent de fixation de l'acide tel que l'hydro-xyde de sodium, le bicarbonate de sodium ou une base organique 35 tertiaire, par exemple la triéthylamine, la N-éthylpipéridine ou la pyridine. Selon un autre mode de réalisation, le composé de formule III est du 6-APA ou un de ses sels avec -une base organique et la réaction est conduite dans des solvants organiques secs tels que le 40 chlorure de méthylène ou le chloroforme en présence d'un agent de 08462 3 2004559 fixation de l'acide organique tel qu'une base organique tertiaire par exemple, la triéthylamine ou la N-éthyl-pipéridine. Selon un troisième mode de réalisation du procédé de la présente invention, le groupe R dans le composé de formule III est 5 un radical di-(alcoyl inférieur)-silyle ou tri(alcoyl inférieur) silyle ou un radical étain tri(alcoyle inférieur) ou étaixvèria-ryle tel que ceux décrits dans le brevet britannique n° 1 144 191 -par exemple l'étain tri-(n-butyle) ou l'étain triphényle et la réaction s'effectue dans des solvants organiques secs comme le 10 chlorure de méthylène , le chloroforme, l'acétate d'éthyle, le tétrahydrofuranc,e,l'éther, le benzène, le toluène et le diméthyl-formamide. Une fois que la réaction est terminée, le groupe silyle ou étain est remplacé par de l'hydrogène au moyen d'une réaction c'hydrolyse avec ion srylthiolate monocarbocyclique en solution 15 non aqueuse, par exemple avec du thiophénate de sodium ou de potassium dans le diméthylformamide ou par traitement à l'aide d'un acide ou d'une base aqueuse dans des conditions modérées de température et de pH. Selon le mode de réalisation préféré du procédé de la pré-20 sente invention, le composé de formule II est un chlorure d'acide que l'on fait réagir sur le 6-APA dans un solvant organique aqueux tel que l'acétone, le dioxane ou le diméthylformamide aqueux ou dans un mélange d'eau et d'un solvant organique non miscible à l'eau comme la méthylisobutylcétone, l'acétate d'éthyle 25 ou l'acétate de butyle. Après la fin de la réaction, le mélange réactionnel est acidifié jusqu'à pH 2-3 et extrait à l'aide d'un solvant organique tel que l'éther, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, la méthyl isobutyl cétone ou le n-butanol. La pénicilline est récupérée à partir de la phase organique par ex-30 traction avec de l'eau et une base minérale, par concentration ou lyophilisation de la phase aqueuse ou par précipitation au moyen d'éthylhexanoate de sodium et filtration. L'alpha-azidobenzylpénicilline (brevets britannique n° 9^0 488 et 9^0 489) et ses analogues substitués (brevet britannique n° 35 918 169) ont été utilisés comme produitéintermédiaires pour la préparation des aminobenzylpénicillines correspondantes. Cependant, on a constaté que l'épimère de 1'alpha-azidobenzylpénicj1-line non substituée qui a une configuration D sur le carbone alpha de la chaîne latérale, l'acide 6- ^-alpha-azidophénylacétâmidO"J-40 pénicillanique, possède d'excellentes propriétés antibactériennes 69 08462 n 2004559 (B.' SjSberg et coll. Antiraicrobial Agents and Chemotherapy -1967* P. 560) qui le rend utile comme agant chimiothérapeutique. La valeur d'un agent chimiothérapeutique ne se mesure non seulement à son pouvoir antibactérien mais également à ses pro-5 priétés pharmacologiques telles que absorption orale, vitesse d'élimination et fixation sur le sérum. Une bonne absorption orale est une propriété très intéressante car elle permet d'obtenir des concentrations satisfaisantes des agents chimi©thérapeutiques dans le sang par la voie buccale commode plutôt que par 10 la voie parentérale plus difficile et plus laborieuse. Les pénicillines se fixent, à des degrés variables, sur les protéines du sérum humain et on a découvert que leurs activités antibactériennes diminuaient proportionnellement à leur degré de fixation sur les protéines (Robinson and Sutherland, Brit, J. Pharma-15 col. 2j5 (1965)* 638). Kunin (Clinical Pharmacology and Therapeu-tica (1966) 166) a découvert qu'une fixation importante des pénicillines sur le sérum inhibe, de façon marquée, leur activité antibactérienne dans le sérum et que la quantité de produit non liée donne une image plus fidèle de l'activité antimicrobienne 20 du composé que ne le font les essais in vitro habituels. Bien que l'acide é-^D-alpha-azido-phénylacétamido^/pénicil-lanique soit absorbé de façon très appréciable par voie orale (L Magni et coll. Antibiotics and Chemotherapy 1967, p. 569).-on a maintenant découvert que l'introduction d'un atome de fluor 25 dans le noyau benzénique de la chaîne latérale conduit, de façon surprenante, à des composés qui fournissent des taux sanguins beaucoup plus élevés après administration orale. Lorsqu'on administre les composés préparés conformément à cette invention à des sourit? par voie buccale, tous les com-3 3 posés sont nettement mieux absorbés que l'acide 6-^~D-alpha- azido-phénylacétamido_J7pénicillanique. Avec les composés m et £ substitués, on a enregistré des taux sanguins au moins deux fois aussi élevés que ceux trouvés avec le composé non substitué. On a également observé des concentrations sanguines de plus longue 35 durée. En administrant l'acide 6-[_ (-)-alpha-azido-m-fluorophényl-acétamido_/pénieillanique à l'homme, on trouve des taux maximaux du même ordre que ceux de l'acide 6-£~D-alpha- azido-phénylacé-tamido_/ pénicillanique. A partir de deux heures après l'admi-40 ministration,les taux sanguins obtenus avec le composé fluoré 69 08462 5 2004559 étaient considérablement plus élevés que ceux obtenus avec le composé non substitué. Même huit heures après 1'administrât!on, on a noté, avec le premier, des taux sanguins utiles du point de vue thérapeutique alors que le dernier n'a fourni de tels 5 taux que pendant six heures. Lorsqu'on administre 300 mg de sel de sodium de chaque composé, les taux sanguins d'acide 6-/T")-alpha-azido-m-fluorophénylacétamido/ pénicillanique après huit heures sont, de fait, sensiblement plus élevés que ceux trouvés avec l'acide 6-/~D-alpha-azido-phénylacétamido/-10 pénicillanique après six heures. Ces taux sanguins élevés et de longue durée présentent un grand intérêt thérapeutique et pharmaceutique, car ils permettent de réduire les doses du composé qui doivent être administrées pour produire l'effet thérapeutique et/ou de modifier le dosage 15 de manière à réduire les fréquences d'ingestion du médicament. L'acti\d.té antibactérienne des composés de l'invention est du même ordre que celle du composé non substitué. Comme dans le cas de ce dernier, les pénicillines fluorosubstituées issues d'acides latéraux lévogyres sont plus actives que leur épimères ob-20 tenus à partir, d'acides dextrogyres. Les composés de l'invention st«nt liés au sérum de l'homme à peu près au même degré que l'acide 6-(D-alpha-azSdaphénylacé-tamido/ pénicillanique. Certains des composés sont fixés un peu plus et d'autres un peu moins que ce dernier. 25 Comparées à celles de 1'alpha-azidobenzylpénicilline non substituée;, les propriétés antibactériennes et de fixation au sérum inchangées des composés de l'invention en font, en liaison avec leurs taux sanguins étonnamment plus élevés et plus durables après administration orale, des composés plus efficaces du point 30 de vue thérapeutique. D'autres composés analogues de l'acide é-^D-alpha-azido-phénylacétamido/ pénicillanique à substitution halogénée dans le noyau benzénique pourraient également fournir des taux sanguins accrus après administration orale. Leur degré de fixation 35 important sur le sérum de l'homme empêche toutefois de les utiliser comme agents thérapeutiques. L'alpha-azido-m-chlorobenzyl-pénicilline et l'alpha-azido-jD-chlorobenzylpénicilline (par exemple se fixent sur le sérum humain jusqu'à concurrence de 98% et 9.6,5$ en ne laissant respectivement que 2$ et 3,5% des pénicilli-40 nés sous forme active libre. 69 08462 6 2004559 L'invention est illustrée au moyen des exemples suivants : Exemple 1. - Préparation de 1'alpha-azido-m-fTuoro-benzylpénicilli- 30 ne i. De l'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique (5,9 g, 0/03 ç- mole) a été dissous dans du trichloréthylène (25 ml) et traité pendant 5 heures à 65°C à l'aide de chlorure de thionyle (5,5g, 0,046 mole ). On a chassé le solvant sous vide et éliminé le chlorure de thionyle en excès par traitement avec du solvant frais (3 x 5ml) qui a également été chassé par distillation sous vide. Le résidu final a été dissous dans de l'éther sec (30 ml), et ajouté goutte à goutte à une solution agitée d'acide ôamino-pénicillanique (6,5g* 0,03 mole) dans du dioxannsà 75$ (125 ml) maintenue à pH 7 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. Après arrêt de la•consommation de base, la solution réactionnelle a été ^ lavée à l'éther, acidifiée jusqu'à pH 2 et extraite deux fois à l'éther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et, après addition d'eau, extraits avec du bicarbonate de potassium N (33 ml) jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. La lyophilisation 20 de cette dernière a fourni le sel de potassium de 1'alpha-azido-m-fluorobenzylpénicilline (10 g) avec une pureté de 73$ (titrage à 1'hydroxylamine). L'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique, point de fusion 63-64°C (trouvé : C 49,40; H 3,2$j F 9,85; N 21,26, 25 calculé pour CgHgFN^O^ C 49,2^ H 3,10; F 9,7^j N 21,53$). a été obtenu à partir de l'acide alpha-bromo-m-fluorophénylacéti- que, point de fusion : 65°C (trouvé : C 41,07; H 2,56î Br 34,22j F 8,33; calculé pour C8H6BrF02; C 41,23. H 2,60j Br 3^,29, F 8,15$) par réaction de l'azide de sodium dans 95$ d'acétone en présence de carbonate de sodium. On a découvert que ce produit inhibait la croissance du Staph. aureus, Oxford à une concentration de 0,01 mcg/ml. Exemple 2.- Préparation de l'acide -)-alpha azido-m-fluoro-- phénylacétamido/ pénicillanique a) L'énantiomère lévogyre de l'acide alpha-azido-m-fluoro-phénylacétique (2,6 g , 0,0136 mole) dans du trichloroéthylène (15 ml) a été traité pendant 5 heures à 65°C avec du chlorure de thionyle (2,5 g , 0,021 mole). Le solvant a été évaporé sous vide et l'excès de chlorure de thionyle a été éliminé par traite-tement du résidu avec du solvant frais (3 x 5 ml) qui a également 40 69 08462 7 2004559 été chassé par distillation sous vide. Le résidu final a été dissous dans de l'éther sec (30 ml) et ajouté goutte à goutte à Tin mélange agité et refroidi à la glace d'acide 6-aminopé-nicillanique (2,94 g* 0,0136 mole) dans du dio&anzeà 75$ 5 (125 ml) maintenu à pH 7 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. Après arrêt de la consommation de base, le mélange a été dilué avec de l'eau, lavé à l'éther, acidifié à pH 2 et extrait deux fois à l'éther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et extraits avec une solution de bicarbonate de potas-10 sium N (13 ml) jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. La lyophilisation de cette dernière a fourni le sel de potassium de l'acide 6-/~(-)-alpha-azido-m-fluorophénylacétamido_7 pénicillanique (3>0g) avec une pureté de 63$ (essai à l'hydroxyla-mine). La précipitation dans du méthanol-éther a donné un produit 15 qui titrait 65$ et avait un Z%_7 20 : + 157° ( C =0,1, H20). On a découvert que ce produit inhibait la croissance du Sfc&ph. aureuc Oxford à une concentration de 0,03 mcg/ml. OO L'acide (-)-alpha-azido-m-fluorophénylacétique Z^-q7 - 101,1° (C = 0,9 éfchanol) a été obtenu par cristallisation 20 fractionnée du sel de pseudoéphédrine de l'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique racémique dans le méthanol/éther. b) A de l'acide 6-aminopénicillanique (95*6$, 200 g,0,885 mole) dissous dans de l'eau (15 l) et ajusté à pH 7,5 par addition d'hydroxyde de sodium 5N, on a ajouté de la 4-méthyl-pen-25 tanone-2 (7*51) et le pH a été ajusté à 3 par addition d'acide sulfurique 5M. On a ajouté une solution de chlorure de (-)-alpha-azido-m-fluorophénylacétyle dans du trichloroéthylène (1,07 mole/kg 914 gi 0,977 mole) pendant 15 minutes à 8-11°C tout en agitant 30 vigoureusement le mélange et en le maintenant à pH 3 par addition d'hydroxyde de sodium 5N. Après agitation pendant 20 minutes supplémentaires, on a ajouté un adjuvant de filtration (Celite^) et filtré le irélange. La phase organique a été récupérée et, après séchage sur sulfate de sodium anhydre, traitée par du 2-35 éthylcaproate de sodium butanoliqùe (532 ml).Après agitation pendant 60 minutes, le précipité formé a été recueilli par filtration, soigneusement lavé avec de la 4-méthyl-pentanone-2 et séché sous vide en donnant le sel de sodium de l'acide 6-/~ ( -)-alpha-azido-m-fluorophénylacétamido/pénicillanique 40 (245g) avec une pureté de 93*1$ (titrage alcalimétrique). 69 08462 s 2004559 Une partie du produit (10g) a été recristallisée dans de 1'isopropanol/eau en donnant 8,3 g du composé avec une pureté de 94,1# et un 7 20 = + 189°, (C = 0,25, HgO). Exemple 3.- Préparation de lj_acide 6-^f"•4-)-alpha~azido-m-fluoro-5 Phénylacétamido / pénicillanique Si partant de 1'énantiomère dextrogyre de l'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique (2,6 g , 0,0136 mole) et en reprenant le mode opératoire des exemples précédents, on a obtenu le sel de potassium de l'acide 6-^_ (+)-alpha-azido-m-fluorophé-10 nylacétamido/pénicillanique (4 g) avec une pureté de 58*3$ (titrage à 1'hydroxylamine). La précipitation dans du méthanol éther a conduit à un produit avec une pureté de 65$ et un £s.\J 20 = + 244° (C = 0,1 H~0). D On a découvert que ce produit inhibait la croissance du ^ Staph, aureus. Oxford à une concentration de 0,06 mcg/ml.gq L'acide (+)-alpha-azido-m-fluorophénylacatique Z^)_7 + 100,4° (C = 0,25 éthanol) a été obtenu par cristallisation fractionnée du sel de 1-éphédrine de l'acide alpha-azido-m-flu-orophénylacétique racémique dans le mélange acétate d'éthyle/ on éther diéthylique/éther de pétrole. Exemple 4.- Préparation de 1'alpha-azido-o-fluoro-benzylpéni-cilline Du chlorure d'al'pha-azido-o-fluorophénylacétyle (3* 6g, 0,017 mole) dans du dioxane sec (5 ml) a été ajouté goutte à 25 goutte à un mélange agité et refroidi à la glace" d'acide 6-ami-nopénicillanique (4,5g, 0,02 mole) dans du dioxanneà 75$ (5^ ml) le pH étant maintenu à 6,5 par addition automatique d'hydroxyde de sodium 2N. Après arrêt de la consommation de base, la solution réactionnelle a été lavée à "l'éther, acidifiée à pH 2 et 30 extraite trois fois avec de l'éther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et, après addition d'eau, extraits avec du bicarbonate de potassium N jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. La lyophilisation de cette dernière a conduit au sel de potassium de l'alpha-azido-o- fluorobenzylpénicilline 35 (5g) avec une pureté de 64$ (titrage à 1'hydroxylamine). On a découvert que ce produit inhibait la croissance du Staph; aureus. Oxford à une concentration de 0,-03 mcg/ml. L'acide alpha-azido-o-fluorophénylacétique, point de fusion = 53-4°C (trouvé : C 48,88; H 3*60; P 9,68; N 21,381 poids 40 équivalent 197. Calculé pour CgHgPN^Og s C 49,23; H 3*10;F 9,74; 69 08462 9 2004559 N 21,53#J poids équivalent 195) a été obtenu à partir de 1'alpha-bromo acide par réaction avec de l'azide de sodium dans de l'acétone ?. 95# en présence .de carbonate de sodium. Il a été transformé en son chlorure d'acide par réaction avec du 5 chlorure de thionyle pendant 45 mn. à 80°C. Exemple 5.- Préparation de 1'alpha-aziuo-p-fluorobenzyijjpéni-cilline a- Du chlorure d'alpha-azido-]D- fluorophénylacétyle (13*3g* 0,062 mole) a été ajouté goutte à goutte à une mélange agité 10 et refroidi à la glace d'acide 6-aminopénicillanique (16,2g 0,075 mole) dans du dioxanœ à 75# (350 ml) maintenu à pH 6,5 par addition automatique d'hydroxyde de sodium 2N. Après arrêt de la consommation de base, la solution réactionnelle a été lavée à l'éther, acidifiée à pH 2 et extraite deux fois à l'é- 15 ther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et extraits avec de l'hydioxyde de sodium 2N jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. La lyophilisation de cette dernière a fourni le sel de sodium de l'alpha-azido-jo-fluorobensylpénicil- line (21,5g) avec une pureté de 78#« f!') On a découvert que ce produit inhibait la croissance du Staph. aureus. Oxford à une concentration de 0,06 racg/ml. L'acide alpha-azido-p-fluorophénylacétique, point de fusion 6>4°C (trouvé : C 49,14^ H 3,52; F 9*61. N 21,30: calculé pour CgHgV.^Og: C 49,24, H 3,10; F 9.74; N 21,53#) a été préparé à 25 partir de l'alpha)bromoacide correspondant par traitement avec d© de 1 'azide^/sodium dans de l'acétone à 95# en présence de bicarbonate de sodium. Le chlorure d'acide, point d'ébullition 121-122°C/8 mm a été obtenu par traitement de l'acide par du chlorure de thionyle. 30 b) De l'acide 6-aminopénicillanique (1,1 g, 0,005) dans du chlorure de méthylène sec (50 ml) a été traité par de la trié-thylamine (1g, 0,01 mole) et agité pendant 1 heure dans un bain de glace. On a ajouté de 1'alpha-azidorp-fluorophénylacétate de p-nitrophényle (1,25 g> 0,004 mole) dissous dans du chlorure 35 de méthylène sec (10 ml) et poursuivi l'agitation sans refroidissement pendant 20 heures. Le mélange réactionnel a été lavé deux fois avec de l'acide sulfurique dilué à pH 2 et ensuite avec de l'eau. La couche organique a été ensuite extraite ï\ l'aide d'hydroxyde de sodium dilué jusqu'à ce que la phase 40 aqueuse eût atteint le pH de 6,3- La solution aqueuse a été 08462 io 2004559 séparée, lavée à l'éther et ensuite évaporée sous vide à 30°C en donnant le sel de sodium de l'alpharazido-p-fluoro-benzyl pénicilline (1,25g) avec une pureté de 66% (titrage à 1'hydroxylamine). L'alpha-azido-jD-fluorophénylacétate de p-nitrophényle a été 5 obtenu par traitement de l'acide alpha-azido-]D-fluorophénylacé-tique dans du chlorure de méthylène avec du p-nitrophénol en présance de dicyclohexylcarbodiimide. c} De l'acide alpha-azido'-p-fluorophénylacétique (1 g, 0,005 mole) dans du tétrahydrofurane sec (30 ml) a été agité, traité 10 par du N,N'-carbonyl:-diimidazole (0,9 g, 0,0055 mole) et maintenu pendant 1 heure à 50°C. Après refroidissement jusqu'à la température ambiante, on a ajouté un dérivé diméthylsilylé de l'acide 6-aminopénicillanique dans de l'acétate d'éthyle, obtsiu comme décrit plus haut, et poursuivi l'agitation pendant 2 heures. 15 On a ajouté de 1' eau (50 ml) et ajusté le pH à 7« Le mélange a été lavé à l'éther et la phase aqueuse a été acidifiée à pH 2 et extraite deux fois à l'éther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et ensuite extraits avec du bicarbonate de potassium N jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. L'évaporation 20 de cette dernière a fourni lé sel de potassium de 1'alpharazido-p-fluorobenzyl pénicilline (1,8 g è-vec une pureté de 63% par titrage à 1'hydroxylamine. Le dérivé diméthylsilylé de l'acide ô-amino-pénieill.snïque:-a.été préparé comme suit : à de l'acide 6-amino-pénicillanique (1, 1g, 25 0,005 mole) en suspension dans de l'acétate d'éthyle sec (30 ®1) on a ajouté, sous agitation à 80°C de la triéthylamine (1,5g, 0,015 mole) suivie de diméthyl-dichlorosilane (0,65g, 0,005 mole) dissous dans de l'acétate d'éthyle sec (5 ml). Après 5 minutes, le précipité formé a été éliminé par filtration dans des condi-30 tions anhydres et le filtrat a été refroidi à la température ambiante et directement utilisé pour la synthèse décrite plus haut. d) De l'ecide alpha-azido-£-fluorophénylacétique (1g, 0,005 mole) et de la triéthylamine (0,5g, 0,005 mole) dans du diméthyl-35 formamide sec (10 ml) ont été agités à -10°C et traités goutte à goutte par du chloroformiate d'éthyle (0,54 g , 0,005 mole) dissous dans de l'éther sec (5 ml).10 minutes après la fin de l'addition, on a ajouté une solution d'acide 6-amino-pénicillaîii-que ( 2„1 g, 0,01 mole) et de triéthylamine (1,1 g, 0,011 mole) 40 dans de l'eau (10 ml) et poursuivi l'agitation pendant 2 heures 69 08462 n 2004559 sans refroidissement extérieur. Le mélange réactionnel a été lavé à l'éther, acidifié à pH 2 et extrait trois fois à l'éther. Les extraits éthérés cmmbinés ont été lavés à l'eau et extraits avec du bicarbonate de potassium N jusqu'à neutralité de la phase 5 aqueuse. L'évaporation sous vide à la température ambiante de cette dernière a fourni le sel de potassium de llalpha-azido-£-fluoro-benzyl pénicilline (1,7 g) avec une pureté de 53$ (titrage à 1'hydroxylamine). e) Une solution agitée et refroidie à la glace d'acide alpha-10 azido-£- fluorophénylacétique (1 g, 0,005 mole) dans du dichlo- rure de méthylène sec (15 ml) a été traitée à l'aide d'une solution de 6-aminopénicillanate de tri-n-butyle (2,5g, 0,005 mole) dans du dichlorure de méthylène sec (15 ml) refroidie à la glace, immédiatement suivie d'une solution de dicyclohexylcar-15 bodiimide (1,03 g, 0,005 mole) dans du dichlorure de méthylène sec (7ml) pareillement refroidie à la glace. On a poursuivi l'agitation pendant une nuit à + 4°C. On a ajouté de l'acétate d'éthyle (50 ml) et filtré le mélange. Le filtrat a été agité avec dé l'eau (55ml), ajusté à un pH de 6,5 pendant 10 minutes-filtré, 20 séché sur sulfate de magnésium anhydre et évaporé jusqu'à siccité. Le résidu a été reprécipité dans du benzène/ éther de pétrole en donnant 2,1 g de produit qui ont été dissous dans du diméthylformamide sec (2,5 ml) et traités pendant 30 minutes à l'aide de thiophénate de potassium(0,46g). Le mélange a été versé 25 sous agitation dans de l'éther sec en donnant un précipité de sel de potassium d'alpha-azido-£-fluorobenzyl pénicilline (1,2g) avec une pureté de 79)^ (titrage à 1 'hydroxylamine). f) De l'acide alpha-azido-£-fluorophénylacétique (1g,0,005 mole) dans du tétrahydrofuranne,éec (25 ml) a été agité, refroidi 30 de -20 à -30°C efc traité goutte à goutte par de 1'oxychlorure de phosphore (0,75 g, 0,005 mole) et ensuite par de la triéthylamine (0,5g, 0,005 rnole), chacun étant dissous dans quelques ml de té-trahydrofura^ne sec. On a ajouté -une solution d'un dérivé trimé-thylsilylé du 6-APA dans le tétrahydrofuranse (20 ml) préparé comme 35 décrit cifaprès et de triéthylamine (0,5 g, 0y005 mole) et poursuivi l'agitation pendant les deux premières heures entre -10 et -20°C et à 0°C à la fin de la réaction.Après addition d'eau et ajustement du pH à J, le mélange a été lavé à l'éther, acidifié à pH 2 et extrait deux fois à l'éther. Les extraits éthérés cora-40 binés ont été lavés à l'eau et extraits avec une solution de 69 08462 12 2004559 10 15. 20 25 30 35 bicarbonate de potassium N jusqu'à neutralité de la phase aqueuse, L'évaporation sous vide à la température ambiante de cette dernière a fourni le sel de potassium de 1'alpha-azido-£-fluoro-benzyl pénicilline (1,7 g) avec une pureté de 39% (titrage à 1'hydroxylamine). Le dérivé triméthylsilylé de l'acide 6-amino pénicillanique a été préparé comme suit : de l'acide 6-aminopénicillanique (1>1. g, 0,005 mole) a été traité par de la N-triméthylsilyl-dié thylamine (3*6 g, 0,025 mole) à 80°C, la diéthylamine formée étant éliminée en continu par distillation. Après 30 minutes, l'agent de silylation en excès a été éliminé sous vide et le résidu a été dissous dans du tétrahydrofuranaesec (20 ml) et utilisé pour la réaction ci-dessus. Exemple 6. - Préparation de 1.'acide 6-/~(-)-alpha-azido-p-fluoro-phénylacétamido/pénicillanique. ~ L'éxiantiomère lévogyre de l'acide alpha-azido-p-fluoitphényl-acétique (4,7g* 0,024 mole) dans du trichloréthylène (20 ml) a été traité pendant 2 heures 1/2 à 65°C par du chlorure de thionyle (4,4 g, 0,037 mole). Le solvant et le chlorure de thionyle en excès ont été évaporés sous vide et le résidu a été dissous dans de l'éther sec (20 ml) et ajouté goutte à goutte dans un mélange d'acide 6-aœinc«pénicillanique (7,8g, 0,036 mole) et de dioxaœeà 75$ (75 ml) agité et refroidi à la glace, maintenu à pH 7 par addition d'hydroxyde de sodium 2N. Après arrêt de la consommation de base, le mélange a été dilué avec de l'eau, lavé à l'éther, acidifié à pH 2 et extrait quatre fois à l'éther. Les extraits éthérés combinés ont été lavés à l'eau et extraits avec du bicarbonate de potassium N jusqu'à neutralité de la phase aqueuse. La lyophilisation de cette dernière a fourni le sel de potassium de l'acide 6-£~(-)-alpha-azido-£-fluorophénylacé-tamido7-pénicillanique (6,5g) avec une pureté de 78% (titrage à 1'hydroxylamine). On a découvert que ce produit inhibait la croissance du Staph. aureus. Oxford à une concentration de 0,01 ug/ml. La re-cristallisation dans de 1'isopropanol/éther a conduit à un pro- . OA duit ayant une pureté de 86% et un £\_/ - + 163° (C = 0,25, fractionnée du sel d'éphédrine de l'acide alpha-azido-p-fluoro- HgO). D 69 08462 13 2004559 phénylacétique racémique. Exemple 7.- Préparation de l'acide 6-/~*(+)-alpha-azido-p-fluoro phenylacetamido /pénicillanique En partant de 1'énantiomère dextrogyre de l'acide alpha-5 azido-p-fluoKphénylacétique* (3,9 g, 0,02 mole), on a obtenu, selon le procédé décrit dans l'exemple 6, le sel de potassium de l'acide 6-/T~(+)-alpha-azido-p-fluorophénylacétamido_7pénicil-lanique (5>5g) avec une pureté de 70% (titrage à l'hydroxylamine)*' et un /T&J20 = + 279° (C = 0,25, HgO). 10 On a découvert que ce produit inhibait la croissance Staph. aureus. Oxford à une concentration de 0,03/Ug/ml. / 20 L'acide (+)-alpha~azido-£-fluorophénylacétique + 110° (0 = 0,25, éthanol), a été obtenu par cristallîsation fractionnée du sel de d-amphétamine de l'acide alpha-azido-p-15 fluorophénylacétique racémique. Essais pharmacologiques Les produits préparés d'après les exemples précédents, l'acide 6-(D-alpha-azido-phénylacétamido)pénicillanique, 1'alpha-azido-m-chlorobenzylpénicilline et l'alpha-azido-p-chloro-péni-20 cilline, ont été examinés en donnant les résultats ci-après. Les composés sont désignés comme suit : I signifie l'acide 6-/-~(-)-alpha-azido-m-fluorophénylacétamido_/ pénicillanique II " l'acide 6-/f~(+)-alpha-azido-m-fluorophénylacétamido/ pénicillanique III " l'alçha-azido-m-fluorobenzylpénicilline, c'est-à-dire un mélange de I et II obtenu selon exemple 1 à partir d'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique-DL IV " l'acide 6-//~(-)-alpha-azido-p-fluorophénylacétamido/ pénicillanique V " l'acide 6-/~(+)-alpha-azido-£-fluorophénylacétamido7 30 pénicillanique VI " 11alpha-azido-p-fluorobenzy3bpénicilline, c'est-à-dire un mélange de IV et V obtenu à partir d'acide alpha-azido-p-fluorophénylacétique-DL. VII " 1'alpha-azido-£-fluorobenzylpénicilline VIII " l'acide 6-/î)-alpha-azido-phénylacétamido7pénicilla-35 nique IX " 1'alpha-azido-m-chlorobenzylpénicilline X " l'alpha-azido-jD-chlorobenzylpénicilline a) Activité antibactérienne (concentration inhibitrice minimale u~) M.I.C. mcg/ra"1.) CN vO ^r co o o -o Composé I II III IV Y VI VII VÏII IX X o o Pureté 95 65 .00 78 69 84 73 99 81 86 Organi sme Dipl'.pneura. N01L S S • catarrli. ^0,005 0,03 - C,01 0,13 J-01 0,01 5,01 Staph. aureus. Oxford 0,01 0,06 0,01 0,01 0,03 0,06 0,03 ^0,0)6 0,01 C,01 Strept.Paec. 0,25 2,5 0,63 0,63 2,5 1*25 1,25. 0,63 0,25 0,63 " P/e ^ " viridans 08462 15 2004559 b) Degré de fixation sur le sérum humain déterminé par une 10 20 25 technique d'ultrafiltration (Robinson and Sutherland, Brit, J. Pharmocol . 2£ (1965) 638) Composé fo fixé fo non fixé I 88,3 11,7 II ' ' 82,9 17,1 III 88,7 11*3 IV 81,8 18,2 Y 85,7 14,3 VI 83,9 16,1 VII 87,3 12,7 VIII 84,9 15*1 IX 98,0 2,0 X 96, v5 . 3*5 ^ c) Concentrations dans le sang (mcg/ml) chez des souris après application orale de 200 mg de pénicilline/kg de poids du corps. Composé'' Temps (mn) I II IV V VII VIII X 10 5,2 11,8 20 16,4 18,4 19*0 20,4 15*8 9*6 11*6 30 16,0 21,9 40 21*3 25*9 26,3 25*7 16,2 11,4 25*0 50 23*2 20,9 60 19*4 24,9 23*9 24,3 12,2 11*6 21*5 80 19*8 18,7 9*7 " 8*7 16,7 100 16,8 17*8 8,2 7*7 14,9 120 15*5 15*3 7*6 6*4 9*7 150 11*9 11,0 7*6 5*4 10,7 180 7*3 8,6 5*8 5*0 7*2 d) Concentrations dans le sang chez 1'homme 30 Des capsules contenant du 6-/~~(-)-alpha-azido-m-fluorophénylacé-tamido/pénicillanate de sodium (I, 300 mg) ont été administrées à six volontaires à jeun en bonne santé. Des prises de sang ont été faites arpès 1/2, 1,2, 4, 6 et 8 heures et analysées quant à leur teneur en pénicilline. Trois jours après, du 6-^ÎT-alpha-azido-phénylacétamido7pénicillanate de sodium(VIII, 300 mg) a été administré aux mêmes personnes dans des conditions identiques. 2^q Les concentrations moyennes dans le sang ont été relevées 69 08462 16 2004559 (mcg/ml) avec les erreurs par rapport à la moyenne suivantes : Tempg (heures) Composé 0,5 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 I 9,16 7,45 3,24 0,99 0,34 0,125 + 2,74 + 0,68 + 0,13 +0,075 +0,015 +0,008 v'IIï 9,55 7,64 2,38 0,36 0,081 +1,99 +0,85 + 0,25 OJ r\ 0 0 +0,0098 Les différences entre les valeurs moyennes des deux compo-10 ses n'étaient pas significatives à 0,5 et 1 heure mais les taux sanguins plus élevés observés a^ec le composé fluoré étaient significatifs (p 0,01) après 2 et 4 heures et fortement significatifs 0,001 ) après 6 et 8 heures. La valeur 8 heures pour I était supérieure à la valeur 6 heures pour VIII (p 0,05). 69 08462 17 REVENDICATIONS 1 - Une pénicilline de formule : 2004559 10 15 20 25 ch - co - nh - ch - ch - co ,CH5 'CH„ -ch -cooh et ses sels non toxiques. 2 - Une pénicilline selon la revendication 1 et ses sels non toxiques lorsqu'ils sont préparés à partir d'un isomère de l'acide de la chaîne latérale, optiquement pue 3 - L'alpha-azido~o_-fluorobenzylpénicilline et ses sels non toxiques lorsqu'ils sont préparés à partir de l'acide alpha-azido-o-fluorophénylacétique racémique. 4 - L'alpha-azido-m-fluorobenzylpénicilline et ses sels non toxiques lorsqu'ils sont préparés à partir de l'acide alpha-azido-m-fluorophénylacétique racémique. 5 - l'alpha-azido-p-fluorobenzylpénicilline et ses sels non toxiques lorsqu'ils sont préparés à partir de l'acide alpha-azido-£-fluorophénylacétique racémique. 6 - L'acide 6-/"(-)-alpha-azido-m-fTuorophénylacétamido7 pénicillanique et ses sels non toxiques. 7 - L'acide 6-/~(-)-alpha-azido-£-fluorophénylacétaraido7 pénicillanique et ses sels non toxiques. 8 - Un procédé de préparation de pénicillines de formule : 30 -ch - c0 - nh - ch- 0H N-, P CO -N- ch, ch-cooh 35 et de ses sels non toxiques, procédé qui consiste essentiellement à faire réagir un composé de formule : '/ V ch - ce - x 40 N. II 69 08462 18 2004559 avec un composé de formule : Y - NH - CH - Ctl C CH, 3 .CH - COOR III CO - N 10 15 20 25 30 35 où CO-X et Y-NH sont des groupes d'atomes capables de réagir les uns sur les autres en formant une liaison carbone-azote de manière que, au besoin après hydrolyse, on obtienne un groupe -CO-NH-î où R est un atome d'hydrogène, un cation ou un radical organique pouvant être remplacé par de l'hydrogène sans qu'ait lieu une réduction du groupe azido ou une destruction notable du système à cycle bêta-laetame-thiafc.olidinique. 9 - Un procédé selon la revendication 8 dans lequel le composé de formule II est un chlorure d'acide ou son équivalent fonctionnel en tant qu'agent d'acylation pour un groupe amino primaire et dans lequel Y est un atome d'hydrogène ou est identique à R et représente un groupe di-(alcoyle inférieur) ou tri-(alcoyle inférieur)-silyle. 10 - Un procédé selon la revendication 8 ou 9 dans lequel le composé de formule II est un bromure d'acide , un azide d'acide, un ester activé, un anhydride d'acide* y compris des anhydrides mixtes ou un amide hétérocyclique activé. 11 - Un procédé selon la revendication 8 dans lequel l'anhydride est m anhydride mixte préparé à partir d'acides organiques plus forts tels que les monoesters aliphatiques inférieurs de l'acide carbonique ou à par£±r d'acide dichlorophos-phorique. 12 - Un procédé selon la revendication 8 ou 9 dans lequel l'acide libre de formule II est couplé avec le composé 6-aminopénicillanique de formule III par emploi d'un réactif à base de carbodiimide ou d'un autre composé qui peut conduire à la formation d'un amide après incorporation à un mélange d'un acide et d'une aminé. 13 - Un procédé selon les revendications 8 à 12 dans lequel le composé de formule III est de l'acide 6-aminopénicillanique ou un de ses sels avec une base minérale ou une base organique tertiaire et dans lequel la réaction s'effectue dans l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un solvant organique tel que le 69 08462 19 2004559 dioxame,1'acétone, la méthylisobutylcétone, l'acétate d'éthyle l'acétate de butyle ou le diméthylformamide, en présence d'un agent de fixation de l'acide tel que l'hydroxyde de sodium, le bicarbonate de sodium ou une,base organique tertiaire, par exemple 5 la triéthylamine* la N-éthylpipéridine ou la pyridine. 14 - Un procédé selon les revendications de 8 à 12 dans lequel le composé de formule III est du 6-APA ou un de ses sels avec une base organique et dans lequel la réaction est conduite dans des solvants organiques secs tels que le chlorure de méthy- 10 lène et le chloroforme en présence d'un agent de fixation de l'acide organique tel que la triéthylamine ou la N-éthyl:-pipéridine. 15 - Un procédé selon les revendications de 8 à 12 dans lequel le groupe R dans le composé de formule III est un radical di-(alcoyle inférieur)-silyle ou tri-(alcoyle inférieur)-silyle, 15 un radical étain tri-(alcoyle inférieur) ou étain triphényle, dans lequel la réaction s'effectue dans des solvants organiques secs tels que le chlorure de méthylène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, le tétrahydrofurane, l'éther, le benzène, le toluène et le diméthylformamide et dans lequel, une fois que la réaction est 20 terminée, le groupe silyle ou étain est remplacé par de l'hydrogène au moyen d'une réaction d'hydrolyse avec un arylthiolate mono-carbocyclique en solution non aqueuse ou par traitement à l'aide d'un acide ou d'une base aqueuse dans des conditions ménagées. 16 - Un procédé selon la revendication 8 dans lequel le com-25 pos" de formule II est un chlorure d'acide que l'on fait réagir sur l'acide 6-aminopénicillanique dans un solvant organique aqueux tel que l'acétone, le dioxame ou le diméthylformamide aqueux ou dans un mélange d'eau et d'un solvant organique non miscible à l' eau comme la méthylisobutylcétone, l'acétate d'éthyle ou l'acétate 30 de butyle et dans lequel, après la fin de la réaction, le mélange réactionnel est acidifié jusqu'à pH 2-3 et extrait à l'aide d'un solvant organique tel que l'éther, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, la méthylisobutylcétone ou le n' rbutanol, après quoi la pénicilline est récupérée à partir de la phase organique par 35 extraction avec deal'eau et line base minérale, par concentration ou lyophilisation de la phase aqueuse ou par précipitation au moyen d'éthylhexanoate de sodium et filtration.