La présente invention concerne des compositions pharmaceutiques cou tenant des extraits de lierre grimpant et l'obtention des extraits à base d'hédérasaponine C à partir du lierre. On a déjà préparé des extraits de lierre (Hedera) et plus particu- lièrement de lierre grimpant (Hedera Helix) par extraction à l'aide d'eau et/ou d'alcool. La présente invention concerne l'obtention d'un extrait de saponines à 60% à partir de lierre grimpant et plus particulièrement l'obten- tion d'un extrait de saponines purifiées titré à 90% en hédérasa- ponine C et enfin l'obtention d'CO Le procédé de l'invention consiste à préparer dans un premier temps un extrait de saponines titré à 60%. A cet effet, on effectue d'a- bord une lixiviation (de la poudre de lierre) à l'aide d'acétone ou d'un solvant présentant une constante diélectrique identique à celle de l'acétone; par exemple un mélange acétate d'éthyle/alcanol, tel que méthanol ou éthanol. La poudre épuisée par le solvant est ensuite séchée. On effectue alors une seconde lixiviation avec du méthanol pur. On concentre la solution que l'on traite avec du charbon activé neutre puis on filtre. On concentre le filtrat sous pression rédui- te. On ajoute alors au filtrat de l'éther éthylique ou un mélange de solvants ayant une polarité identique à celle de l'éther, par exem- ple un mélange chloroforme/acétate d'éthyle afin de précipiter l'extrait de saponines. Cet extrait est repris par du méthanol pur, filtré et séché sous pression réduite ou par atomisation. Le produit ainsi obtenu est un complexe de saponines contenant environ 60% d'hédérasaponine C. Ce complexe de couleur jaune est très soluble dans l'eau et le mé- thanol et peu soluble dans l'éthanol. En chromatographie sur couche mince sur gel de silice, avec pour solvant un mélange benzène 65/méthanol 35/acide acétique 10 et com- me révélateur une solution à 1% de vanilline dans de l'acide sulfu- rique, on met en évidence différentes taches colorées dont en par- ticulier celle de-l'hédérasaponine C colorée en brun noir. Selon le procéde de l'invention, dans un second temps, on prépare un extrait titré à 90% en hédérasaponine C. A cet effet on traite le précédent extrait à 60% d'hédérasaponine C sur une colonne d'alu- mine en éluant avec du méthanol pur. On recueille l'éluat qui contient au minimum 90% d'hédérasaponine C de formule CH3 1. Rhamm.-î.Arabin. - \ CH3 CH2OH Selon le procédé de l'invention on prépare enfin l' -hédérine ou ses sels alcalins à partir de l'extrait précédent par saponification à l'aide de soude ou de potasse; de formule HC - CH 3*% -, 3 ou Me) Ch3 l.Rhamm.-l.Arabin. CH3 Les trois substances, obtenues à chaque stade du procédé de l'inven- tion ont été étudiées quant à leur activité antifungique et antipa- rasitaire in vitro et in vivo. L'exemple suivant illustre le procédé de l'invention. dGlu I 1.RhamdGlum. 1. Rhamnm. l EXEMPLE 1. On traite 25 kg de poudre de lierre grimpant avec 120 1 d'acétone. On concentre et sèche. On obtient une masse visqueuse vert foncé pesant environ 1000 g. On sèche. On ajoute 110 1 de méthanol pur. On concentre sous pression réduite jusqu'à 25 1. On agite avec 100 à 200 g de charbon activé neutre. On filtre. On concentre le filtrat sous pression réduite à 10 1 environ. On ajoute au 10 1 de filtrat, 20 1 d'éther éthylique. On obtient un précipité P'1. On ajoute au filtrat, concentré à 6 1, 20 1 d'éther éthylique. Il se forme un précipité P2 que l'on réunit avec le pré- cipité P'1. On reprend les précipités par 10 1 de méthanol pur, on filtre et on sèche sous pression réduite. On obtient 1,5 à 2 kg d'extrait contenant 60% d'hédérasaponine C. 2. La séparation sur colonne d'alumine afin d'obtenir l'extrait con- tenant 90% d'hédérasaponine C est effectuée de la manière suivante: On disperse 1 kg d'alumine neutre W200 dans du méthanol pur. On la place alors dans la colonne. On élue avec du méthanol pur jusqu'a ce que l'éluat soit parfaitement limpide. On introduit alors 300 g de l'extrait précédent dilués dans 2 1 de méthanol pur. On élue avec du méthanol pur. On recueille 4 1 d'éluat que l'on évapore sous pres- sion réduite. On obtient 190 g d'extrait contenant au minimum 90% d'hédérasaponine C. 3. On traite l'extrait à 90% d'hédérasaponine C, en milieu aqueux, par NaOH ou KOH2N, à chaud pendant 1 heure. On acidifie et lave le précipité. On le reprend par du méthanol pur. On filtre et sèche. On obtient l'o -hédérine. Les extraits de lierre grimpant obtenus selon le procédé de l'inven- tion, l'extrait titré à 60% en hédérasaponine C, l'extrait titré à % en hédérasaponine C et 1', -hédêrine, se sont révélés âtre ac- tifs en tant qu'antiparasitaires et antifungiques. La toxicité des extraits a été déterminée chez la souris par voie intrapéritonéale. La DL 50 (24 heures) varie de 2000 mg à 3200 mg. La DL 50 (8 jours) varie de 1500 mg à 2500 mg. Activité antiparasitaire L'activité anthelminthique et l'activité protozoocide des extraits de l'invention ont été étudiées. 1. L'activité anthelminthique vis à vis des cestodes, des nématodes et des trématodes a été déterminée in vitro et in vivo. 1.1 L'activité à l'égard des cestodes a été étudiée sur le Taenia de la souris Essai in vitro: Les Hymenolepis nana var. fraterna sont récupérés par dis- section de l'intestin grèle des souris parasitées, et sont placés dans un milieu de Sen et Hawking à l'étuve à 37 . L'essai consiste à mettre en contact les différentes dilu- tions des produits à essayer avec les vers maintenus en survie et à déterminer la dose léthale après 24 heures. On opère par rapport à - 1 lot de vers non traités qui doivent survivre plusieurs jours - 1 lot de vers traités par des produits de référence: hélénine et santonine. Essai in vivo: Il consiste à faire ingérer à la souris parasitée des doses variables de produits à tester et de contrôler dans les feces l'émis- sion des oeufs d'Hymenolepis. On évalue la guérison en effectuant une numération des oeufs par gramme de selle. Cette numération doit être négative en fin de traitement. Pour avoir la certitude que le déparasitage est total, on réalise après autopsie une dissection de l'intestin de la souris afin de s'assurer qu'il n'y a plus de vers ou encore qu'ils sont tous morts. Les substances de référence utilisées dans le test in vivo sont la mépacrine et l'hélénine. Les résultats des essais in vitro sont exprimés en doses léthales DL 100 après 24 heures, c'est à dire en quantités de produits sufi- santes pour tuer 100% des cestodes au bout de 24 heures. Les résultats des essais in vivo indiquent le pourcentage de dépa- rasitage obtenus pour les quantités indiquées. In vitro Substance DL 100 (24h) Hélénine (substance de référence) 50, pg/ml Santonine " 100 ug/ml O -hédérine 100 pg/ml Extrait à 90% 1 mg/ml Extrait à 60% 5 mg/ml In vivo Substance Dose % de déparasitage (mg/kg) Mépacrine 220 100 Hélênine 300 60 C -hédérine 400 20 Extrait à 90% 400 30 Extrait a 60% 400 60 1.2 L'activité nématicide a été étudiée sur Syphacia obvelata de la souris. On effectue les tests in vitro et in vivo de la môme manière que ceux qui ont été pratiqués pour la recherche de l'activité taenicide. Les produits de référence sont ici la santonine et l'hélenine in vitro et la pipérazine et l'hélénine in vivo. In vitro Substance DL 100 (24h) Hélénine 10 pg/ml Santonine 100 Pg/ml hédérine 1 mg/ml Extrait à 90% 5 mg/ml Extrait à 60% 5 mg/ml In vivo Substance Dose % de déparasitage (mg/kg) Citrate de pipérazine 200 90 Hélénine 300 80 cx-hédérine 400 10 Extrait à 90% 400 30 Extrait à 60% 4Q0 70 1.3 L'activité à l'égard des trématodes a été étudiée à l'égard des douves in vitro et in vivo. Essai in vitro: Les douves:Fasciola hepatica (grande douve) et Dicrocoe- lium lancéolatum (petite douve) sont récoltées aussitôt après l'abat- tage des ovins et des bovins parasités, par dissection des canaux biliaires et hépatiques de ces animaux. 7 2460136 Ces vers sont directement placés dans le milieu de survie de Benex modifié par Cavier, à l'étuve à 37 . Les produits à tester sont mis en contact à différentes concentrations et on détermine la dose léthale (DL 100) après 24 heures; les substances de référence sont l'hélénine et la santonine. Essai in vivo sur des ovins parasités. On contrôle au préalable par une numération des oeufs de douves dans les feces, le taux d'infestation des moutons à traiter. Puis on fait ingérer aux animaux à l'aide d'un pistolet doseur pla- cé au fond de la gorge des moutons 3 doses successives des différents produits à 8 jours d'intervalle. La durée du traitement est donc de 3 semaines. Pendant tout le temps du traitement on contrôle par numéra- tion la diminution des oeufs dans les fèces jusqu'à disparition. Enfin pour s'assurer de la guérison, on abat les moutons et on re- cherche la disparition des douves dans les canaux hépatiques et bi- liaires ce qui est la preuve irréfutable de l'activité douvicide des produits essayés. Les résultats sont exprimés de la même manière que dans les essais précédents, In vitro | via) sur Fasciola hepatica Substance DL 100 (24 h) Santonine 100 Pg/ml Hélénine 10 lOjg/ml t -hédérine 5 5g/ml Extrait à 90% 5 mg/ml Extrait à 60% 1 mg/ml b) sur Dicroceelium lanceolatum Substance DL 100 (24 h) Santonine 50 pg/ml Hélénine 10 Pg/ml -hédérine 10 lOug/ml Extrait à 90% 5 mg/ml Extrait à 60% 500 Pg/ml In vivo 3 cures de 800 mg/kg à 8 jours d'intervalle ont été faites sur des moutons parasités par la petite douve (Dicrocoelium lanceolatum). Avec l'9(-hédérine il y a diminution des oeufs dans les feces alors qu'avec les deux extraits à 60 et 90% en hédérasaponine C il y a disparition totale des oeufs. Le contrôle après autopsie a montré qu'il y avait effectivement disparition des douves ou que les douves étaient mortes lorsque les animaux avaient été traités à l'aide des 2 extraits à 60 et 90%. 2. L'activité protozoocide a été étudiée à l'égard des protozoaires intestinaux (amibes) et à l'égard des Trichomonas intestinalis. L'activité des substances est étudiée sur 2 tests: - inhibition au départ des cultures: on détermine la concentration minimale inhibitrice (CMI) c'est à dire la plus petite quantité de produit qui, introduite dans le mi- lieu de culture avant ensemencement arréte-complétement le dévelop- pement de la culture après un délai de contact de 72h à 37 . 9 792460136 Action léthale sur une culture de 48 heures. On détermine la plus petite quantité de produit à étudier qui, introduite dans une culture de 2 jours en pleine croissance, est susceptible de tuer tous les pro- tozoaires (amibes ou Trichomonas) après une incubation de 48 heures à 37 . Ces 2 tests sont menés en parallèle avec un produit de référence connu: le métronidazole. Pour ces tests on a effectué un contrôle de l'activité des produits en réalisant des rétrocultures à partir des milieux o les protozo- aires ont été tués. Ces rétrocultures négatives ont confirmé l'acti- vité des produits essayes. Les résultats sont les suivants: Substance Métronidazole 2 L'activité a été étudiée sur les levures et les dermatophytes. 1. L'activité sur les levures (Candida albicans) a été étudiée in vitro et in vivo. CMI ú2460136 In vitro: On met en culture la levure de Candida albicans sur le milieu de Sabouraud liquide à double concentration d'une suspension de 106 cellules. On met en contact une quantité déterminée de cet-inoculum avec des doses décroissantes des dilutions des produits à tester. La lecture se fait après 24 heures d'incubation à 37 . Les tubes dans lesquels les produits ont agi restent limpides. On contrôle cette activité antifungique, en pratiquant des rétro- cultures qui,72 heures après incubation à l'étuve à 370 doivent rester négatives. La substance de référence est l'amphotéricine B. In vivo: L'étude est effectuée sur la souris. Après épilation dorsale des souris et exposition aux UV pour entrai- ner une réaction inflammatoire, on réalise un abcès candidosique souscutané en inoculant 0,25 ml d'une culture diluée au 1/10 de Candida albicans. Deux jours plus tard on commence le traitement en répartissant les souris en différents lots qui.recevront des concentrations diffé- rentes de produits à tester par ingestion forcée à l'aide d'une sonde stomacale. Ce traitement est mené en parallèle avec un pro- duit de référence:l'amphotéricine B. Le temps de traitement est de jours. La guérison se manifeste par la disparition progressive des abcès candidosiques. Les témoins non traités conservent ces abcès pendant plus d'un mois. Les résultats sont exprimés en concentrations minimales d'inhibi- tion (CMI) pour le test in vitro. Substance CMI Amphotéricine B 2,5 pg/ml -hédérine 500 yg/ml Extrait à 90%) 50 mg/ml Extrait à 60% > 50 mg/ml il 2460136 Pour le test in vivo on détermine la disparition ou non de l'abcès sous-cutané provoqué chez la souris: - L'abcès persiste plus d'un mois chez les animaux non traités. - L'abcès persiste chez les animaux traités par 2,5 mg/kg d'ampho- téricine B, mais un nouveau traitement pendant 10 jours permet la disparition de l'abcès. - Les trois substances de l'invention, l' les cas. 2. L'activité sur les dermatophytes a été étudiée in vitro sur le Microsporum Canis. La mise en culture du dermatophyte est effectuée de la manière suivante: L'inoculum est une dilution au 1/10 dans de l'eau stérile d'une culture de 7 jours. Chaque tube reçoit 0,1 ml de cette dilution, 1 ml de milieu de Sabouraud double concentration et 1 ml de dilution des produits. La lecture de l'activité antifungique sera faite au bout de 7 jours. On recherche l'inhibition de croissance dans les différents tubes. Lorsque cette inhibition est constatée, on procède à une rétrocul- ture pour contrôle et la lecture sera faite 15 jours après; la négativité de cette rétroculture confirme alors l'activité antifungi- que du produit. La substance de référence est l'amphotéricine B. Les résultats sont exprimés en CMI Substance CMI Amphotéricine B 2,5 >g/ml c parasitaires et fungiques; en thérapeutique humaine-et vétérinaire. Les substances peuvent être présentées sous toute forme appropriée pour l'administration par voie locale, orale ou parentérale en association O10 avec tout excipient approprié, par exemple sous la forme de compri- més, gélules, capsules, solutions buvables et injectables, poudres lyophilisées, crèmes, lotions, etc... A titre d'exemple, les gélules peuvent avoir la composition suivante: mg de l'extrait à 60% d'hédérasaponine C 20 mg de mannitol mg de cellulose microcristalline mg de stearate de magnésium pour une gélule n 1. 13 2460136 Revendications 1. Compositions Pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles con- tiennent à titre de principe actif un extrait de lierre grimpant à 90% ou 60% d'hédérasaDonine C ou le oroduit de saoonification de l'hédérasaponine C, 1 D -hédérine. 2. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 1, à activi- té antinarasitaire et antifungicue. 3. Procédé d'obtention d'extraits de lierre grimpant, procédé caractérisé en ce que l'on effectue une lixiviation de la poudre de lierre à l'aide d'acétone ou d'un solvant orésentant une cons- tant diélectrique identique à celle de l'acétone, on sèche la mou- dre épuisée par le solvant, on effectue une seconde lixiviation avec du méthanol pur, on concentre la solution que l'on traite avec du charbon activé neutre nuis on filtre, on concentre le fil- trat sous pression réduite, on ajoute au filtrat de l'éther éthy- lique ou un mélange de solvants de polarité identique à celle de l'éther pour nréciniter l'extrait de saDonines, on reprend ce der- nier par du méthanol pur, on le filtre et sèche, on obtient l'ex- trait à 60% d'hédérasaponine C que l'on traite sur une colonne d' alumine par élution avec du méthanol nur, on obtient alors l'ex- trait à 90% d'hédérasaponine C. 4. Extraits de lierre grimpant à 60% et 90% d'hédérasanonine C obte- nus selon le procédé de la revendication 3.