i 2008048 La prèsente- inventipn concerne un procédé de préparation des 1-glycosyl 5-azacytosines répondant à la formule/généralaT.: , dans laquelle : . 1 R est un radical glycosyle, p 10 R est l'hydrogène ou un radical alkyle ayant de 1 à 4 atomes de de carbone, " ' R^ et r\ qui sont identiques ou différents, peuvent être !' hydrogène , des radicaux alkyle de 1 à 4- atomes de carbone,-ou des radicaux aralkyle de 7 à 10 atomes de carbone. 15 Deux substances répondant à cette définition présentent une activité biologique notable, à savoir le 1->-D -ribofuranosyl 4-a-mino 1,2 dihydro 1,3»5-triazine 2-one, ou ,.l5-azacytidinew, et le 1-(2-désoxy-ji-D-ribofuranosyl) 4—amino 1,2-dihydro 1,3>5-triazi-ne 2-one, ou "5-aza 2,-désp3jycitidiD.eM, ; 20 La 5-azacytidine, qui est une pyrimidine antimétakolique, ralentit, même à faible concentration, la croissance des bactéries, et présente une activité antileucémitique élevée chez les souris. Dans les méristes des V. fabe elle inhibe les mitoses et aberrations chromosomales. Sur les bactéries, la 5-azacytic'ine a 25 des effets mutagènes. Elle ralentit la formation d'enzymes induo-tives dans les cellules des mammifères, et la régénération du foie après une hépatectomie, chèz l'es ratsi Elle • protège égale-.' ment les souris des effets des rayons X. Comme la 5-azacytidine, la 5-aza 2'-désoxycitine freine no-30 tablement l'apparition d'une leucémie expérimentale et possède, même aux faibles concentrations, des propriétés bactériostatiques notables. On pouvait donc supposer que d'autres 1-glycosyl 5-azacytosines seraient également-douées d'activité biologique. 35 la préparation des 1-glycosyl 5-azacytosines fait l'objet 69 14547 2 200804b des brevets français n° 1.450.440 et 1.430.153. Les produits de départ indiqués sont lès peracylgly c osy 1-isocyanates qui, par addition d'O-alkyl isourées, ou de S-alkyl isothiourées, sont convertis respectivement en p eracylglyco sy1-i sobiuret s et peracylgly-5 cosyl-isothiobiurets correspondants.. Ceux-ci, par condensation avec des ortiioesters d'acides aliphatiques, donnent les 1-peracyl-glycosyl 4-alkoxy (ou alkylthio) 1,2-dihydro 1,3»5 triazine-ones qui, par réaction sur l'ammoniaque ou les aminés, sont convertis en 1-glycosyl 5-azacytosinqs. 10 Tous ces procédés de préparation présentent l'inconvénient d'un rendement irrégulier, et souvent très faible, en 1-glycosyl 5-azacytosines, de la réaction de l'ammoniaque-, (pu.-., de s aminés) avec les 1 -peracylglycosyl 4-alkoxy (ou alkylthio) -.1,2-dihydro 1j3»5-triazine-2-ones. Ce défaut provient, dç l instabilité des 15 produits intermédiaires mentionnés dans les conditions .d' amina-tion utilisées. Par comparaison avec, les dérivés-alkoxy., L'instabilité des alkylthio- est encore plus élevée, et. l-ejor vitesse de réaction plus faible, d'où une décomposition plus, marquée et, par suite.*, 'une nouvelle diminution-du rendement, de 1.'amination. Il a 20 été constaté que les 1-peracylglycosyl 4-alkoxy 1,2rdihydro 1»3»5 -triazine 2-ones sont moins stables- que les 1-glycosyl 4-alkoxy 1,2-dihydro 1,3,5-trxazine 2-bnes libres. L'amination de ces .derniers composés se fait très rapidement et avec de faibles pertes de sorte qu'ils constituent les intermédiaires les plus intéres-25 sants pour la préparation des 1-glycosyl 5-azacytosines. Les 1-glycosyl 4-alkoxy 1,2-dihydro 1,3s5-triazine 2-ones s'obtiennent facilement par alcoolyse, soit des dérivés peracylés correspondants, soit des 1-peracylglycosyl 4-alkylthio 1,2-dihydro 1,3*5-triazine 2-ones. Par alcoolyse de ces derniers composés, il peut 30 y avoir également remplacement des groupes alkylthio- par un groupe alkoxy. Le procédé conforme à la présente invention pour la préparation des 1-glycosyl 5-azacytosines répondant à.la. formule générale I, reposé sur la réaction'de composé» répondant à la formule 3,5 générale II s " ■' : " v ' 69 14547 3 2008048 ii. 5 dans laquelle : p R a la même signification que dans la formule I, 5 Br est un p eracylglycosy1e dont le radical acyle contient de 2 à 10 atomes de carbone, X est un radical alkoxy- ou alkylthio- ayant de 1 à 4 atomes de 10 carbone, sur un alcoolate d'un métal alcalin, ayant de 1 à 6 atomes de carbone, dans un alcool de 1 à 6 atomes de carbone, qui est de préférence le métlxanol, avec formation de 1-glycosyl 4-alkoxy 1,2-dihydro 1,3>5-tria-15 zine 2-ones, répondant à la formule générale : III. 20 dans laquelle : 1 2 R et R ont les mêmes sens que dans la formule I, ÇL R est un alkyle de 1 à 4 atomes de carbone, ces composés étant mis en réaction dans un alcool de 1 à 5 atomes de carbone, de préférence le méth.anol, 25 avec des composés répondant à la formule IV : R5— NH — R4" IV. dans laquelle H? et R^ oiit les mêmes significations que dans la formule I. 69 14547 4 2008048 La conversion des alkoxy- (ou alkylthio-) triazine ones, répondant à la formule générale II, en 1-glycosyl 5-azacytosines répondant à la formule I, est effectuée de préférence sans isoler les alkoxytriazines-ones de formule générale II. 5 La réaction des composés de formule II avec les alcoolats alcalins est effectuée à la température ambiante dans un alcool à 1 à 6 atomes de carbone, de préférence le méthanol. Dans le cas des thiodérivés, on doit utiliser, pour obtenir les meilleurs ren dements, une à deux moles de l'alcoolat pour une mole du composé 10 de départ. La réaction des alkoxytriazine-ones de la formule générale III sur un composé de formule IV est effectuée à la température ambiante dans un alcool de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence le méthanol. 15 La conversion des composés, de formule II en 1-glycosyl 5-aza cytosines de formule I peut se faire en une seule opération, par action simultanée d'un alcoolat d*un métal alcalin et d'un composé de formule IV, dans, l'a 1 cool. Les exemples de mise en oeuvre ci-après sont donnés unique-20 ment à titre d'illustration du procédé de la présente invention et ne doivent nullement être considérés comme des limitations du procédé. 5-AZACYTIDINE. C1-ft -D-ribofuranosyl 4-amino 1,2-dihydro 1,3»5-triazine 2-one). 25 EXEMPLE 1. Dans un ballon muni d'un tube sécheur à potasse, on agite jusqu'à dissolution complète un mélange formé de : 0,5875 g de 1-(2,3,5-tri-0-benzol P-D-ribofuranosyl) 4-méthylthio 1,2-dihydro "î,3,5-triazine 2-one, 5 ml de méthanol absolu et 1,2 ml d'une so-30 lution normale de méthylate de sodium dans le méthanol. On laisse encore la solution 45 minutes à la température ambiante et on la débarrasse de ses cations par passage sur une colonne de 10 ml d'un échangeur cationique (H+) faiblement acide, préalablement lavé à l'eau et au méthanol. L'éluat méthanolique (60 ml) sortant 35 de la colonne est évaporé sous vide à 30°. Le résidu de l'évapo-ration est redissous dans 20 ml de méthanol et évaporé à nouveau. La 1- P-D-ribofuranosyl 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-one brute ainsi obtenue est dissoute sans autre purification dans 4 ml d'une solution à 10 % d'ammoniaque anhydre dans le méthanol 69 14547 5 2008048 V , - : f\ '*\ absolu. On laisse la solution 30 minutes à la température ambian-, te dans un ballon bouché. âu bout de 5 ,minut$s*^le-produit est séparé, On'lailais.se ênsuite 12-heures au réfrigérateur, à -10°. "Lâ ^T-aaacytidine séparée est essorée à la trompe* lavée au métha-5 nol et séchéè''sous Vide. On recueille 0,216 g .de ; produit, soit un ; rendèmeût:de 88,6 %. Le produit fpnd (avec décomposition) à 232-234°. - . ; . . KXWPLE 2. - ' ■ On agite dans un ballon muni d'un tube à potasse jusqu'à dis-10 solution (soit 3 minutes) un mélange formé par : 0,5875 g.de 1-(2,3,5-tri-0-benzol £-D-ribofuranosyl) 4-méthylthio 1,2-dihydro 1,3»5-triazine 2-one, 4 ml d'une solution à 10 % de anhydre dans• le méthanol et 1,2 ml d'une solution normale de méthylate de 'sodium dans le méthanol. On laisse, la ^solution encore 45. minutes 15 à la température ambiante. Le produit commence à.cristalliser au bout de 30 minutes. On laisse 12 heures au réfrigérateur à -10°. Le produit est essoré à la trompe, lavé au méthanol et séché sous vide. On recueille 0,162 g- de 5-azacytidine, -soit un rendement de 66,4 %. Le produit fond (avec décomposition) à 232-234°. 20 KX^MPLE 3.- ' , ■ On-agite dans un ballon muni d'un tube à potasse jusqu'à dissolution (soit 5 minutes) un mélange formé par : 0,571,5. g de 1-(2,3,5-tri-O-benzol /3 -D-ribofuranosyl) 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3, 5-triazine 2-one, 5 ml de méthanol absolu et un ml d'une solution •25 normale de méthylate de sodium dans le méthanol. On laisse la solution une heure à la température ambiante et on"la traite comme dans 1'exemple-1. On recueille 0,219 g de 5-azacytidihe* soit un rendement de 89,7 %• Le produit final fond (avec décomposition) • à- 232-234°. , 50 EKWPLE 4 . -: Dans, -un ballon muni d'un tube à potasse, on agite à- la température-ordinaire jusqu'à dissolution (soit 5 minutés) un mélan-- ge formé, par : 0,5715 gde 1-(2,3,5-tri-0-benzo^l?-D-ribofurano-syl) 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-one, 10 ml de métha-35 nol absolu et 1*2 ml d'une solution normale de méthylate de sodium dans le méthanol. On traite le mélange comme dans T'exemple 2. On obtient 0,174 g de 5-azacytidihe, soit un'rendement de71,3%. Le produit -fond (avec décomposition) à 232-234°: 69 14547 6 2008048 5-AZA-2'-DESOXYCITIDINE. * ou "1 -(2-désoxy- - D-ribofuranosyle ) -4~amino-1,3,5- triazine 2-one EXEMPLE 5. ' ' '■ 5 Dans un "ballon avec agitateur magnétique' et tube de1 dessica- •èion à'potassé,' on laissé pendant 2 heures '45"' •£t:ës:* pro duits de départ" passant en solution au bout "de 2 heures^ un mélange formé par : 0,4-956 g de 1-(3»5-di-0-p.toluyi 2-désoxy-^-D-ribofuranosylë) 4—méthylthi'o 1,2-dihydro 1,3,5-triazine "2-one, 10 "10 ml de méthanol absolu et 1*2 ml d'une solution normale de méthylate de sodium dans le méthanol. La solution est débarrassée de ses cations sur une colonne de 10 ml d'un échangeurAcationique (H+) faiblement acide, préalablement lavé au méthanol.."aqueux. L'éluat méthanolique' de la colonne (60 ml) est évaporé dans le 15 vide à 30°. Le résidu est redissous dans 10 ml de méthanol et éva poré à nouveau. La 1-(2-désoxy-£ -ribofuranosyle) 4—méthoxy '1,2-dihydro i ,3 »5-"triazine 2-one sirupeuse brute ainsi obtenue est dissoute dans une solution à 10 % d'ammoniaque anhydre dahs le méthanol et la solution est laisdée' 3Ô minutes dans un ballonbou-20 ché à la température ambiante. Le produit cristallisé commence à se déposer au bout de 15 minutes. On laissé le produit-encore 12 heures au réfrigérateur à -10°. il est essoré à la trompe, lavé au méthanol et séché sous vide. On recueille 0,180 g'dé'SS-aza 2'-désoxycitidine,\soj,tîm rendement ; de 79 %* Le.;produit .fond à 196-25 198° et se solidifie par refroidissement. EXEMPLE 6. • > ' ■ Dans nn ballon avec agitateur magnétique, et jfeube à potasse, on' laisse-à" la température ambiance gusqu'à dissolution complète • '(4-5' minutes) et en agitant,, un mélange., formé par : 0,4956 g de 1-30 (3»5-di-0-p.toluyl 2-désoxy-0-D-ribofuranosyle) 4—méthylthio 1*2 -dihydro 1',3,5-triazine 2-one, 4-, ml d3uae solution à 10 % de-SH^ anhydre dans-le méthanol et. 1,2 ml d'une solution, de. méthylate de sodium dans le méthanol.,- On. lais se la solution une heure au repos à la température ambiante. Pendant ce, temps, il y a séparation dm 35 produit cristallisé. On le laisse ensuite 12 heures au réfrigérateur à -10°. Il est- essoré à la trompe, lavé au méthanol et séché sous vide. On obtient 0,132 g de 5-aza 2'-désoxycitidine, dépeint de fusion 198-199°» et se solidifiant par refroidissement. v/ viiu -;i,. y, . . . . - * • 69 14547 7 2008048 EXEMPLE 7. Dans un ballon avec agitateur magnétique et tube à potasse, on agite à la température ambiante pendant 4 heures un mélange formé par : 0,4-796 g de 1-(3»5-di-0-p.toluyl 2-désoxy- fi - D-ribofu 5 ranosyle) 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-one, 10 ml de méthanol absolu et tin ml d'une solution normale de méthylate de sodium dans le méthanol. La dissolution est totale au bout de 2 heures 30. La suite du traitement est la même que dans l'exemple5 On obtient 0,176 g de 5-aza 2*-désoxycitidine, soit un rendement 10 de 77»2 Le point de fusion est de 197-199°» avec solidification par refroidissement. EXEMPLE 8. Dans un ballon avec agitateur magnétique et tube à potasse, on agite à la température ambiante jusqu'à dissolution (45 minu-15 tes) un mélange formé par : 0,4796 g de 1-(3,5-di-0-p.toluyl 2-dé-soxy-J3-D-ribofuranosy1e) 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3»5-triazine 2-one, 4 ml d'une solution à 10 % d'ammoniaque dans le méthanol et 1,0 ml d'une solution normale de méthylate de sodium dans le méthanol. Le reste du traitement est le même que dans l'exemple 6. 20 On obtient 0,120 g de 5-aza 21-désoxycytidine, soit un rendement de 52,7 %• Le point de fusion est de 188-199°> avec solidification par refroidissement. 1-j3 -D-ribofuranosyle 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3»5-triazine 2-one. EXEMPLE 9. 25 Dans un ballon muni d'un tube à potasse, on agite à la tempé rature ambiante jusqu'à dissolution (5minutes) un mélange formé par : 0,5875 S de 1-(2,3»5-'bri-0-benzoyl-J5 -D-ribofuranosyle) 4-méthylthio 1,2-dihydro 1,3>5-triazine 2-one, 5 ml de méthanol absolu et 1,2 ml d'une solution normale de méthylate de sodium dans 30 le méthanol. La solution est laissée au repos pendant 40 minutes à la température ambiante, puis traitée comme dans l'exemple 1. Le produit cristallisé brut obtenu est recristallisé dans le méthanol. On obtient 0,210 g de 1- #-D-ribofuranosyle 4-méthioxy 1,2 -dihydro 1,3,5-triazine 2-one. Le point de fusion est de 177-179° 35 1- g -D-ribofuranosyle 4-méthylamino 1,2-dihydro 1,3 » 5-triazine 2- one. •EXEMPTÏR 10. Dans un ballon muni d'un tube à potasse, on agite pendant 5 minutes tin mélange formé par : 0.259 S de 1--D-ribofuranosyle 69 14547 8 2008048 4-métho:xy 1,2-dihydro 1,3*5-triazine 2-one et 2 ml d'une solution à 7 % de méthylamine anhydre dans le méthanol absolu. On laisse encore le mélange 10 minutes à la température ambiante, puis 15 minutes à -10°. Le produit de la réaction est essoré à la trompe, 5 lavé au méthanol à 0° et séché sous vide. On obtient 0,210 g de 1-&-£-ribofuranosyle 4-méthylamino 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-one. Le point de fusion est de 148-150°. 1-fi-D-ribofuranosyle 4-diméthyiamino 1,2-dihydro 1 « 3 « 5-triazine 2-one. 10 K7WPLE 11. Dans un ballon muni d'un tube à potasse, on agite pendant 5 minutes à la température ambiante un mélange formé par : 0,259 g de 1-D-ribofuranosyle 4-méthoxy 1,2-dihydro 1,3»5-triazine 2-one et 2 ml d'une solution à 7 % de diméthylamine dans le méthane! 15 absolu. On laisse encore la solution 15 minutes à la température ambiante, puis on l'évaporé sous vide à 30°. Le résidu de l'évapo-ration est distillé en présence de 5 ml de méthanol absolu et on dissout le produit sirupeux obtenu dans un ml d'éthw&oliabaolu. La solution, refroidie à basse température est amenée à cristalli- 20 sation par friction et on laisse le mélange pendant une nuit au réfrigérateur à -10°. lie produit est essoré à la trompe, lavé à 1'éth.anol et séché sous vide. On obtient 0,216 g de 1-ft-D-ribofu-ranosyle 4-diméthylamino 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-one. Le point de fusion est de 128-130°. 69 14547. 9 2008C'48': RjÉTVENDI CATIONS " . " Procédé de préparation de 1-glycosyle 5-azacytosines répondant à la formule générale I : R? R4 N dans laquelle : a : .. • 10 _ R est un radical glycosyle, • 2 • • ' R est, soit l'hydrogène, soit un radical alkyle ayànt de 1 à 4 atomes de carbone, R^ et R4", identiques ou différents, peuvent être, soit l'hydrogène, soit des radicaux alkyles ayant de 1 à 4 atomes de carbo 15 ne, soit des radicaux aralkyle de 7 à 10 atomes de carbone, le procédé étant caractérisé en ce que l'on fait réagir uii composé répondant à la formule générale II : 2 ' R* II. dans laquelle : p R a la même signification que dans la formule I, R^ est un peracylglycosyle dont le radical acyle contient de P 2 à 10 atomes de carbone, 25 X est un radical alkoxy- ou alkylthio- ayant de 1 à 4 atomes de carbone, 69 14547 10 2008048 sur un alcoolate d'un métal alcalin ayant de 1 à 6 atomes de carbone, dans un alcool ayant de 1 à 6 atomes de carbone, qui est de préférence le méthanol, et en ce que l'on fait réagir les .1-glycosyle 4-alkoxy 1,2-dihydro 1,3,5-triazine 2-ones ainsi obtenus répondant à la formule générale III : OR6 R2 Il I III. R1 dans laquelle : A O E et E ont la même signification que dans la formule I, fi \ S est un alkyle ayant de 1 a 4 atomes de carbone dans ion alcool ayant de 1 à 6 atomes de carbone, qui est de préférence le 15 méthanol, sur un composé répondant à la formule générale IV R3 — ug — i7. dans laquelle ~B? et E^ ont les mêmes significations que dans la formule I-,