i 2047869 10 La présente invention concerne un sel de la tétracycline. L'invention vise également un procédé de fabrication de ce sel. Elle concerne également les applications de ce sel à titre de produit industriel nouveau et à titre d'agent thérapeutique, de la famille des antibiotiques. On connaît la tétracycline base qui est un antibiotique à squelette hydronaphtacénique et qui répond à la formule développée suivante : CH3 CH5 ch3 oh n 15 La tétracycline base peut être obtenue à partir de cultures de micro-organismes de l'espèce des streptomyces tels que le 20 streptomyces aureofaciens de Duggar ou encore le streptomyces vi-ridifaciens Lein» On la prépare également par hydrogénation de la chlortétracycline, en présence de substances capables de fixer l'acide chlorhydrique formé au cours de la réaction. k l'état cristallisé, la tétracycline base est une poudre, de 25 couleur jaune, inodore et sans point de fusion défini, stable à l'air mais sensible en atmosphère humide à la lumière vive. Sa solubilité dans l'eau est très faible, ce qui a 1'inconvénient de limiter ses usages en thérapeutique. Pratiquement insoluble dans l'éther éthylique, le benzène et le chloroforme, elle est 30 par contre très soluble dans l'alcool éthylique, dans l'alcool mé-thylique et assez soluble dans l'acide chlorhydrique dilué. En solution à 0,001 p. 100 dans l'acide chlorhydrique 0,01 N, la tétracycline base a un spectre ultra-violet qui présente des bandes d'absorption vers 232, 270, 300 et 355 millimicrons. 35 La tétracycline base est un corps amphotère. Avec les acides, elle donne des sels cristallisés tels que le chlorhydrate qui ont l'avantage d'etre généralement très solubles dans l'eau. Sur le plan thérapeutique, le spectre d'activité antibactérienne de la tétracycline base est particulièrement étendu. Ce 40 corps agit sur les germes Grasa positif tels que staphylocoques, 69 18770 2 2047869 streptocoques, pneumocoques, clostridium, sur les germes Grain négatif tels que gonocoques, méningocoque, colibacille, Klebsiella pneumoniae» Salmonella typhosa, proteus et sur les rickettsies. La présente invention a pour but de fournir un nouveau moyen 5 de lutte antibactérienne sous forme d'un sel de tétracycline à la fois plus soluble dans l'eau , possédant une activité antibactérienne plus grande que la tétracycline base, et d'autres avantages. Suivant la présente invention, le sel de tétracycline est constitué par le lactate de tétracycline. Ce sel correspond à la com-10 binaison en quantités sensiblement équimoléculaires de tétracycline base et d'acide lactique. L'acide lactique est un acide-alcool correspondant à la formule GH^ - CHOH - C02H. Si on désigne par (A) la formule chimique de la tétracycline 15 telle qu'elle a été précisée plus haut, le lactate de tétracycline répond à la formule ï (A) , CH. - CHOH - C02H qui représente l'addition d'une molécule de tétracycline base avec une molécule d'acide lactique. 20 Ce composé se présente sous forme de poudre amorphe, de couleur brun jaune, très hygroscopique et dont le point de fusion au banc chauffant est de 155°C. Au delà de .cette température, il se décompose. Sa solubilité dans l'eau est instantanée et on constate l'apparition lente d'un précipité traduisant l'hydrolyse dont il 25 est l'objet et qui s'accompagne d'une variation progressive dru pH de 7 à 3. Il est également soluble dans l'alcool éthyliqus anhydre mais non soluble dans l'éther éthylique. Les deux constituants du lactate de tétracycline peuvent être caractérisés d'une part en soumettant une solution alcoolique de 30 ce composé au rayonnement ultra-violet, ce qui permet d'identifier la présence de la tétracycline, et d'autre paît en déplaçant l'acide lactique de ce composé par l'acide chlorhydrique qui est un acide fort, ce qui permet de constater la présence d'acide lactique. 35 L'analyse du spectre ultra-violet montre en effet la présence des bandes d'absorption caractéristiques de la tétracycline. Pour caractériser l'acide lactique, on ajoute dé l'acide chlorhydrique à une solution aqueuse de lactate de tétracycline jusqu'à obtention d'un pH égal à 1, puis on procède à une extraction 40 de l'acide lactique libéré à lfaide de l'éther éthyiiqus dans 9 18770 3 2047869 lequel cet acide est soluble. L'extrait obtenu est chromatogra-phié en couche mince sur gel de silice G, le solvant mobile "étant constitué par un mélange de 1 partie de pyridine et de 2 parties d'éther de pétrole; l'acide lactique est alors révélé par une 5. solution de rouge de bromocrésoL à 0,04 $ dans l'alcool éthylique hydraté à 50 % et ajusté1 à un pH 10 à l'aide de la soude. Suivant l'invention également, le procédé de fabrication du lactate de tétracycline est caractérisé en ce que, sous atmosphère inerte.et à partir de produits anhydres, on fait réagir à la tem-10 pérature ambiante l'acide lactique pur cristallisé en excès sur une quantité mesurée de tétracycline. base en solution dans un solvant alcoolique et en ce que la solution résultante est concentrée sous vide en vue de la cristallisation ultérieure du lactate de tétracycline obtenu qui est ensuite séparé en eaux-mères 15 par filtration.. De préférence, le lactate de tétracycline obtenu est purifié par lavage à l'éther éthylique anhydre. - Il a été en effet constaté au cours de nombreuses expérimentations que le sçl de tétracycline suivant l'invention ne pouvait 20 se former en présence d'eau. De même il est apparu que la réaction ne pouvait être réalisée convenablement à l'air libre à cause de l'humidité atmosphérique et des possibilités d'oxydation par l'air. D'une manière préférée, l'atmosphère inerte nécessaire à la 25 réaction est constituée par une atmosphère d'azote sec. Selon une version préférée de l'invention, l'acide lactique cristallisé pur est obtenu en distillant sous vide l'acide lactique officinal et il est utilisé aussitôt après sa préparation. Il "est rappelé à ce sujet, pour mémoire, que l'acide lactique 30 officinal est un acide de nature racémique qui est obtenu par fermentation et qui est un mélange, de consistance sirupeuse, formé d'acide lactique pur et d'acide lactyl-lactique et contenant quelques centièmes parties d'eau. Cet acide officinal est miscible avec"l'eau et avec l'alcool éthylique; il est soluble 35 dans l'éther éthylique. La tétracycline base est préalablement séchée à une température comprise entre 100 et 105°C et de préférence son solvant alcoolique est constitué par l'alcool éthylique anhydre. La concentration de la solution résultante de la réaction est 40 avantageusement effectuée sous vide jusqu'à réduction au quart 69 18770 4 2047869 du volume initial et à une température pouvant atteindre 40°C. Suivant une réalisation préférée de 1*invention, le lactate de tétracycline est obtenu de la façon suivante : On dissout 1 Kg dé tétracycline préalablement desséchée à 5 100°C. dans un volume de 13,500 litres d'alcool éthylique anhydre. On distille sous un vide de 20 mm de mercure e£ à la température de 96 ®C de l'acide lactique officinal de manière à obtenir 400 g d'acide lactique pur cristallisé. Aussitôt après sa préparation, l'acide lactique est ajouté 10 sous atmosphère d'azoté sec dans la solution alcoolique de tétracycline qui est"aaintènue à température ambiante pendant une durée de 48 heures. Au bout de ce temps de réaction, la solution résultante, de couleur rouge brun, est évaporée sous vide, à une température d;e 40*C jusqu'à, réduction au quart de son volume ini-15 tiai« On refroidit la solution résiduelle ainsi obtenue; ce qui provoque graduellement la précipitation du lactate de tétracycline formé pendant la réaction. Les cristaux de lactate de tétracycline sont ensuite séparés des eaux-mères par filtration sous atmosphère d'azote sec, puis 20 lavés à trois reprises avec 1 litre d'éther éthylique anhydre. On obtient 666 g. de lactate de tétracycline pur. Le lactate de tétracycline visé par l'invention constitue un agent thérapeutique particulièrement intéressant du fait qu'il présente un spectre d'activité comparable à celui de la tétraçy-25 cline, avee en plus certaines propriétés spécifiques originales. Dé plus, cet antibiotique n'a pas les inconvénients bien connus de la tétracycline à l'égard de la flore intestinale du patient. On exposera d'abord les caractéristiques pharmacologiques du lactate de tétracycline telles quelles ont été établies à la sui-30 te d'essais qui ont donné les résultats ci-après : Toxicité aiguë La DL 50 de la tétracycline base est de 2,5 g/kg lorsqu'elle est administrée par voie orale à la souris. Exprimée en tétracycline base à la même dose, la DL 50 n'est 35 pas atteinte lorsqu'on utilise le lactate de tétracycline. Le lactate de tétracycline est donc moins toxique que la tétracycline base. Il n'a pas été possible de poursuivre l'expérience en cause avec le lactate de tétracycline au-delà de la dose de 2,5 g/kg 40 exprimée en tétracycline contenue parce que la quantité adminis >9 18770 5 2047869 10 trée devient trop importante, la dose limite étant de 0,5 ml pour une souris de 20 g ou bien parce que les limites de solubilité du lactate étant dépassées, la solution devient difficile à administrer à la sonde par tubage gastrique. Activité antibactérienne 1 - Le lactate de tétracycline est très actif sur le streptocoque, le pneumocoque, le gonocoque et l'entérocoque. Selon la technique dite du stylo à microbes, il a été constaté que le lactate était plus actif que la tétracycline sur différentes, souches " in vitro " comme le montre le tableau ci-après : Geiikes s inhibition en microg./ml tétracycline base lactate de tétracycline Streptocoque C 10 Aristène 0,12 0,06 Streptocoque foecalis I.P. 0,24 0,06 Streptocoque foecalis (isolement d'un abcès stercoral) 5 3,90 Diplococcus pneumoniae (isolement d'un crachat) 5 3,90 25 30 35 15 20 Par ailleurs, " in vivo par injection intrapéritonéale à la souris albinos Rapp de 20 g. d'une dose mortelle à 5000 fois d'une culture de diplococcus pneumoniae gr. I-TIL, la dose minimale curatrice 50 fo est de 145 mg/kg pour la tétracycline base alors qu'elle n'est que de 125 mg/kg pour le lactate de tétracycline. 2 - Le lactate de tétracycline est également très actif, mais à un degré un peu moindre sur le staphylocoque, le méningocoque, le colibacille, les salmonella et les shigellae Toutefois son activité est le plus souvent supérieure à celle de la tétracycline comme l'indiquent les résultats contenus dans le tableau suivant : (Voir tableau donné plus loin),, 3 - L'activité du lactate de tétracycline est encore marquée sur les Klebsiella tel que le bacille de Friedlander, les brucelles, les pasteurella, les hémophilus, les ricketsies, les spiro-chètes et même les proteus. On constate là également que le lactate de tétracycline se montre plus actif comme en témoigne le tableau qui suit : 69 18770 6 2047869 inhibition en microg./ml Germes tétracycline base lactate de tétracycline Staphylocoque Londres 0,48 0,24 Staphylocoque 133 0,48 a, 24 Goli Ifonod 7,81 7,81 Staphylocoque isolé dfun pus d'un abcès 7,50 3,90 inhibition en microg./ml Germes tétracycline base lactate de tétracycline Klebsiella 4 L 15,62 7,81 Proteus vulgaris IP 125 62,5 Bacille de Friedlander isolé d'un crachat 125 62,5 Proteus vulgaris isolé d'une urine 125 62,5 4-H est à signaler aussi que le lactate de tétracycline est 20 encore actif sur certains virus causant la lymphogranulomatose, la psittacose et la pneumonie primaire atypique. A fortes concentrations, il est aussi actif sur le bacille tuberculeux et sur les amibes. Tolérance 25 Des essais de tolérance du lactate de tétracycline ont été effectués en comparaison avec la tétracycline base en mesurant le taux de croissance de rats soumis à des fortes doses de ces antibiotiques. On sait, en effet, que la tétracycline détruit la flore intestinale, ce qui provoque une avitaminose du groupe B 30 et par conséquent un retard de croissance. L'expérience a consisté à faire ingérer 5 mg/lOO g/jour de tétracycline base % un premier lot de 10 animaux, la mtme dose de tétracycline sous forme de lactate à un deuxième lot de 10 animaux tandis qu'un troisièpe lot de 10 animaux ne recevant rien 35 servait de témoin. Au bout de 30 jours, les résultats suivants ont été observés : - la moyenne des poids des animaux du lot témoin était passée de 100 g à 175 g, soit un gain de 75 $. è9 18770 7 2047869 -"la moyenne des poids des animaux du lot ayant ingéré le lactate de tétracycline était passée également de 100 g à 175 g» soit un gain de 75 i» comme pour les animaux témoins. - èn revanche la moyenne des poids des animaux du lot ayant 5 absorbé la tétracycline était passée de 100 à 150 g, soit un gain de 50 seulement. Cette administration a été complétée par l'étude de l'hydratation ët du nombre de selles de matières fécales émises par 24 heures pour chacun des trois lots de 10 animaux. 10 Pour ce qui concerne cette dernière expérimentation, le nombre de selles au bout de 30 jours était de 13 pour les témoins, de 17 pour ceux traités au lactate de tétracycline et de 27 pour ceux traités à la tétracycline base. .L'étude dé 1'hydratation a consisté à placer un papier filtre 15 blanc sous.le treillage inférieur des cages. En règle normale la matière fécale Jie doit pas donner d'auréolej lorsque l'hydratation devient excessive, l'auréole est d'autant plus forte qtœ l'hydratation est plus intense; l'urine ne perturbe pas ici cette expérience car les empreintes de celle-ci et des matières fécales 20 . ne se confondent pas et peuvent se superposer sans interférence. On a constaté l'absence d'auréole pour les témoins. La présence d'auréoles a .été par contre constatée pour les animaux traités aux antibiotiques : la moyenne du diamètre des auréoles était de 2,4 cm pour ceux ayant ingéré la "tétracycline base et de 0,2 cm 25 seulement pour ceux ayant absorbé le lactate de tétracycline. Les essais de tolérance qui précèdent montrent que le lactate de tétracycline est beaucoup mieux toléré que la tétracycline base en raison de la présence de l'ion organique lactique qui paraît permettre un réensemencement très rapide de la flore intestinale 30 par ses hôtes normaux qui sont les bacilles coli et les bacilles lactiques tout en la protégeant contre les bactéries et les mycoses pathogènes. Il résulte de l'étude pharmacologiaue qui précède que le lactate de tétracycline présente, de nombreux avantages sur son parent 35, qui est la tétracycline base. Le lactate est moins toxique et bénéficie' d'une meilleure tolérance. Tout comme son parent, le lactate présente, avantageusement un spectre d'activité anti 69 18770 s 2047869 bactérienne particulièrement étendu puisqu'il agit sur les germes Gram positif et sur les germes Gram négatif et son activité est généralement supérieure. Par ailleurs le lactate est plus facilement soluble dans l'eau que son parènt. 5 Essais cliniques Les essais cliniques ont confirmé la valeur du lactate de tétracycline ainsi que le témoignent les deux cas de traitement ci-après : 1er Cas - Une fillette de 7 ans -traitée pour une pneumonie à pneu-10 mocoqùes a déjà été traitée avec des antibiotiques et notamment avec la pénicilline G, mais le geime s'avère particulièrement résistant. Elle reçoit durant 6 jours 0,5 g/jour de tétracycline en 4 prises journalières; une amélioration sensible est alors obtenue, mais une diarrhée apparait au 5ème jour et s'aggrave 15 très rapidement le lendemain. La petite malade est mise le 7ème jour au lactate de tétracycline à raison de 0,20 g matin et soir. Dès le lendemain, la diarrhée commence à régresser. Le traitement est ensuite poursuivi pendant 4 jours au bout desquels les selles redeviennent presque 20 normales et la malade est guérie. 2ème Cas - Un jeune homme de 20 ans dyspeptique vient consulter pour une gonorrhée confirmée par le laboratoire (gonocoques de Neisser intracellulaires dans le pus urétral). Un traitement à la tétracycline est appliqué à raison de 1,5 g 25 par jour en 4 prises mais dès le début ce traitement provoque une colite avec état nauséeux. La tétracycline est remplacée par le lactate de tétracycline à raison d'une prise de 0,5 g toutes les 12 heures. La tolérance s'avère excellente et le malade est guéri en 4 30 jours de traitement. Le laboratoire confirme l'absence de gonocoques intracellulaires dans le liquide urétral. Formes pharmaceutiques Le conditionnement du lactate de tétracycline en vue de son application à titre de médicament est avantageusement réalisé en 35 gélules à 0,5 g de substance active pour adultes, ces gélules étant logées en flacons munis d'un déhydratant. Pour les enfants, le lactate est présenté en sachets de poudre cacaotée dosée à 0,10 g, cette poudre étant à délayer dans un peu de lait tiède sucré et coupé avec de l'eau. Pour cette dernière 40 présentation la poudre cacaotée peut être remplacée par du sucre 9 18770 9 2047869 aromatisé. L'administration du médicament contenant le lactate de tétracycline est faite par voie orale. Posologie 5 Ce médicament est prescrit à raison d'une prise, c'est-à-dire à raison d'une gélule ou d'un sachet, toutes les 12 heures. Bien entendu, l'invention vise aussi les applications non thérapeutiques du lactate de tétracyclines ce corps constituant un produit industriel nouveau. 69 18770 10 2047869 REVENDICATIONS 1 - Sel de tétracycline constitué par le lactate de tétracycline . 2 - Procédé de fabrication du lactate de tétracycline carac-5 térisé en ce que, sous atmosphère inerte et à partir de produits anhydres, on fait réagir à la température ordinaire l'acide lactique pur cristallisé en excès sur une quantité mesurée de tétracycline base en solution dans un solvant alcoolique et en ce que la solution résultante est concentrée sous vide en vue de la 10 cristallisation ultérieure du lactate de tétracycline obtenu qui est ensuite séparé des eaux-mères par filtration. 3 - Procédé conforme à la revendication 2 caractérisé en ce que le lactate de tétracycline formé est purifié par lavage à l'éther éthylique anhydre. 15 4 - Procédé conforme à la revendication 2 et caractérisé en ce que l'atmosphère inerte est constituée par de l'azote sec. 5 - Procédé conforme à la revendication 2 et caractérisé en ce que l'acide lactique pur cristallisé est obtenu à partir d'acide lactique officinal distillé sous vide et est utilisé à l'état 20 fraichement préparé. 6 - Procédé conforme à la revendication 2 et caractérisé en ce que la tétracycline base est préalablement séchée à une température comprise entre 100 et 105°G. 7 - Procédé conforme à la revendication 2 et caractérisé en ce 25 que le solvant de la tétracycline base est l'alcool éthylique anhydre. 8 - Procédé conforme à la revendication 2 et caractérisé en ce que la concentration de la solution résultante de la réaction est effectuée sous vide jusqu'à réduction au quart du volume initial 30 et à une température pouvant atteindre 40°C. 9 - Application du lactate de tétracycline conforme à la revendication 1 en qualité de substance active de la famille des antibiotiques à la préparation d'un médicament. 10 - Application conforme à la revendication 9 et caractérisée 35 en ce que le médicament est présenté en gélules. 11 - Application conforme à la revendication 9 et caractérisée en ce que le médicament est présenté en sachets. 12 - Application du lactate de tétracycline conforme à la revendication 1 à titre de produit industriel nouveau.