La présente invention concerne des pénicillines douées des propriétés usuelles de ces composés et particulièrement intéressantes à utiliser dans le traitement d'infections dues à des micro-organismes du genre Pseudomonas. 5 La préparation et les propriétés de l'acide 6-[D-oc- (3-guanyl-1 -uréido ) phénylacétamido }-pénicillanique et de ses sels ont été décrites dans les demandes de brevet des Etats-Unis d 'Amérique IT° 780 557 et ÏT° 852 457 déposées respectivement le 2 Décembre 1968 et le 22 Août 1969, au ÎO nom de Donald lie il McG-regor et aussi dans le brevet belge N° 742 425. Ce composé répond à la formule î 0 II CH - C - NH - CH- / \ /chj CH 0 = \ CH-, K CH - COgH N - C - NH„ If * NH L'invention concerne le nitrate monohydraté, l'hémi-hydrate, le dihydrate du sel de potassium et le monohydrate 15 du sel de sodium de l'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido}phény1-acétamidoj-pénicillanique, tous sous la forme cristalline. L'invention concerne en outre un procédé de purification d ' acide 6- [D-oc- (3-guanyl-1 -uréido)phénylacétamido]pénicilla-nique amorphe impur, procédé qui consiste à transformer du 20 nitrate d'acide 6-[B-a-(5-guany1-1-uréido)phénylacétamidoj- pénicillanique cristallin en acide 6-[B-o:-(3-guany 1-1-uréido )-phénylacétamido]pénicillanique cristallin très purifié, par mise en suspension de l'acide impur dans une solution aqueuse d'alcool, puis réglage du pH de la suspension avec une base 2-5 dans la gamnie de 4,5 à 6,0 pour former une solution dans 72 03520 2 212441 1 laquelle 11 acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]pé-nicillanique cristallin purifié précipite spontanément et est ensuite recueilli ; selon une forme préférée de mise en oeuvre, le procédé de purification d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)- dss 5. phénylacétamido]-pénieillanique amorphe impur consiste à transformer/ cristaux de monohydrate de nitrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]-pénicillanique en hémihydrate d'acide 6-[B-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylac ét amido]-pénicillanique cristallin fortement purifié, par mise en suspension de 10 cet hémihydrate dans une solution aqueuse à 50 $ en volume/volume d'isopropanol, puis à ajuster le pH de la solution avec une hase dans la gamme de 4,5 à 6,0 pour former une solution dans laquelle l1hémihydrate d'acide 6—[D-a— (3-guanyl-l-uréido)-phénylacétamido]™pénicillanique cristallin purifié précipite 15 spontanément et est ensuite recueilli. L'invention concerne aussi le procédé de purification d'acide 6-[B-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]pénicillanique amorphe impur, qui consiste à mélanger cet acide avec de l'acide nitrique dans de lîalcool aqueux à un pli compris dans la gamme 20 de 1 à 2, à séparer le nitrate d'acide 6-[B-a-(3~guanyl-1-uréido)phénylacétamido]-pénicillanique cristallin ainsi précipité puis à transformer ce nitrate en acide 6-[B~a-(3-guanyl-1— uréido)phénylacétamidoJ-pénicillanique cristallin fortement purifié par sa mise en suspension dans de l'alcool aqueux, 25 puis réglage du pE de la suspension,avec une base,dans la gamme de 4,5 à 6,0 pour former une solution dans laquelle l'acide 6-[B-a-(3-guaayl-1-uréido)phénylacétamidol-pénicillanique cristallin purifié précipite spontanément et est ensuite recueilli; dans une forme préférée de mise en oeuvre, le procédé de puri-30 fication d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]-pénicillanique amorphe impur consiste à mélanger cet acide avec de l'acide nitrique dans de l'isopropanol aqueux à 90 # en volume/volume dans une gamme de pH de 1,3 à 1,9, à séparer le monohydrate de nitrate d'acide 6-[B-a~(3-guanyl-1-uréido)-35 phénylacétamido]pénicillanique cristallin ainsi précipité puis à transformer le nitrate en hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]-pénicillanique cristallin 72 03520 3 2124411 fortement purifié par mise en suspension de cet hémihydrate dans de l'isopropanol aqueux à 50 $ en volume/volume et réglage du pH de la suspension,avec une base,de 4,5 à 6,0 pour former une solution dans laquelle 11 hémihydrate d'acide 5 6-[D-a-(3-gu.anyl-1 -uréido)phénylacétamido]pénicillanique cristallin purifié précipite spontanément et est ensuite recueilli. la matière première utilisée dans le procédé de la présente invention est préparée de la manière suivante, comme décrit par Donald Ile il KcG-regor : 10 N-guanvl-M'-nitro-urée (I) - On ajoute (avec pré caution) par petites portions, en 40 minutes, 25 g (0,3 mole) de cyanoguanidine (Eastman) à un mélange sous agitation, refroidi à la glace, de 100 ml d'acide sulfurique concentré et 40 ml d'acide nitrique concentré, lorsque l'addition 15 est terminée, on maintient le mélange réactionnel à environ . 0° pendant 1,5 heure en le brassant de temps en temps, puis on le verse sur 1000 g de glace. On sépare le précipité par filtration et on le lave à l'eau, le précipité est mis en suspension, sans séchage, dans 200 ml d'eau et dissous par 20 addition d'hydroxyde de sodium en solution aqueuse à 10 la solution résultante est filtrée,puis le produit est précipité par barbotage d'anhydride carbonique dans la solution pendant une heure, la substance solide est séparée par filtration, lavée à l'eau et séchée ; rendement 38,6 g (88 $), point de 25 fusion > 250°C. Analyse : C $ H fo -H f° Calculé pour C2H^ïI^0^ : 16,3 3,43 47,96 Trouvé ï 16,63 3,65 47,6 Dichlorhydrate de 4-^i.anylsemicarbazide (II) -30 On refroidit une solution de 5,88 g (0,04 mole) de 0-guanyl-N'-nitro-urée dans 31,8 ml d'acide chlorhydrique concentré en ajoutant environ 15 g ûe glace et en maintenant la suspension au bain de glace. On ajoute la suspension en 45 minutes à un mélange refroidi à la glace, agité énergiquoment, de 35 12,96 g (0,18 mole) de poudre de zinc et d'environ 300 g de glace, lorsque l'addition est terminée, on laisse reposer le mélange pendant 10 minutes sans refroidissement extérieur puis on le filtre. l§£iltrat est agité énergiquement par secousses 72 03520 4 2124411 avec 5 ml (0,05 mole) de benzaldéhyde et le précipité incolore qui se sépare est rapidement isolé par filtration et séché sous pression réduite, en donnant 3,0 g du benzal du composé de formule II, fondant à 237°. 5 Sans purification, on met en suspension 3,5 g du benzal dans 5 ml d'éthanol, puis on ajoute 50 ml d'acide chlorhy-drique concentré et on maintient le mélange à 40° pendant -une heure. le produit cristallin insoluble est recueilli par filtration et recristallisé dans un mélangé1 eau et d'éthanol, 10 ce qui donne 1,0 g du composé II fondant à 191°. Acide 6-[D(-)-a-(3-guanyl-1-uréido)-phénylacétamido]-pénicil-lanique. On ajoute une solution de 0,366 g (5,25 mmoles) de ÏTaîTOg dans 1,4 ml d'eau à une solution sous agitation, refroidie 15 par un mélange de glace et dé sel, de 1,0 g (5,25 mmoles) de dichlorhydrate de 4-guanyl-semicarbazide dans 6 ml d'eau. On continue d'agiter et de refroidir pendant 10 minutes. Cette solution d'agent de guanylcarbamoylation préparé in situ est ensuite ajoutée à une solution sous agitation, refroidie ■ 20 à la glace, de 2,12 g (5,25 mmoles-) de trihydrate d'ampicilline dans 7 ml d'eau contenant une quantité suffisante de triéthyl-amine pour ajuster le pH à 7,5. Après que les solutions ont été rassemblées, le pH est ajusté à 7,2 avec de la triéthylamine, et l'agitation et le refroidissement sont poursuivis pendant 25 45 minutes, le précipité qui se sépare est recueilli par filtration, lavé à l'eau et séché, ce qui donne 1,2 g d'acide 6-[D-a~(3-guanyl-1-uréido)-phénylacétamido]-pénicillanique solide. On le reprécipite deux fois par dissolution dans 10 ml d'eau avec de la triéthylamine à un pH égal à 9,5, puis 30 on acidifie à un pH égal à 5 (un pH de 6,5 serait suffisant) avec de l'acide orthophosphorique à 42 ce qui donne 0,425 g d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]pénicillanique fondant à 198-200°C en se décomposant. Analyse : C $ H £ N $ 35 Calculé pour C^gH22îTg0,-S.H20 : 45,95 5,57 17,86 Trouvé : 46,65 5,67 17,51 Cette substance est amorphe et, comme l'indiquent 72 03520 2124411 les exemples qui suivent, elle est également impure. Une grande pureté et la crlstallinité sont des caractères très désirables, sinon essentiels, des pénicillines du commerce et l'invention a pour but de produire l'acide 6-[D-a~(3-Fjuanyl™1—'uréido)-5 phénylacétamido]-pénicillanique et .ses sels de sodium et de potassium ayant ce degré de pureté, et de décrire les opérations nécessaires pour l'obtenir. On a découvert, et ceci fait l^bjet de la présente invention, que 1*acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido}phénylacétamido} 10 pénicillaniaue amorphe impur est transformé en un nitrate ou produit d'addition très purifié par cristallisation dans un mélange à 90 c,'- en volume/volume d'isopropanol et d'eau à un pK égal à 1-2,0. le nitrate est transformé à son tour en acide libre très pur (zv;itterion) par cristallisation dans 15 un mélange à 50 £ en volume/volume d'isopropanol et d'eau à un pH égal à 4-6,0. Ainsi, de l'acide 6-[D~œ-(3-guany 1-1-iiréido)— phénylacétamido]-pénicillanique amorphe brut est transformé en son nitrate cristallin purifié en un rendement biologique d'environ 75 a. le nitrate est transformé en svitterion cristallin 20 pur (ou pratiquement pur) en un rendement progressif d'environ 86 io . On obtient un passage du pouvoir biologique de 900 à 1250 U/mg et un passage du pouvoir chimique de 600 à 835 U/mg. On a en outre découvert; conformément à la présente invention,que l'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-25 uréido)~phénylacétamido]-pénicillanique cristallin purifié est transformé en dihydrate de 6-[D-a-(3-guany1—1-uréido)-phénylacétamidoj-pénicillanate de potassium cristallin, dans l'acétone. Ce sel est très soluble dans l'eau. Des solutions aqueuses diluées(10 mg/ml) ont un pH de 8,5 et sont stables, 30 à 10 ^ près, pendant au moins' 12 heures à la température ambiante. Des solutions aqueuses concentrées (250 mg/ml) ont un pH de 9,8-9,9 et sont stables,, à 10 £ près, pendant au moins une heure à la température ambiante. Ce sel est également très soluble à 500 mg/ml dans l'eau (pH 9,9). Ainsi, un 35 dihydrate de 6-[D-a-(3-gusny1-1-uréido)-phénylacétamidoJ-pénicillanate de potassium cristallin et très purifié est préparé en un rendement convenable par uri procédé utilisant de l'eau, de l'hydroxydo de potassium et de l£acétone ou de 72 03520 6 2124411 l'eau, du 2-éthylhexanoate de potassium, de la et de l'acétone à partir de l'hémihydrate d'acide t-[L-.x-(3-guanyl-1-uréido)-phénylacétamidoJpcnicillanique cristallin "libre". la stabilité biologique de ce sel de potassium 5 dans l'eau, est à peu près égale ou équivaut approximativement à celle de solutions aqueuses correspondantes du sel de potassium -3e l'ampicilline. On a en outre découvert, conformément à la présente invention, que l'hérnihydrafce d'acide 6-[D-a-(3-guany 1-1 -uréido)-10 phénylacétamido]pénicillaniqu3 (zwitterion) purifié cristallin est transformé en monohydrate de 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)-phénylacétamido]pénicillanate de sodium cristallin, dans lracétone. Ce sel est très soluble dans l'eau. Des solutions aqueuses diluées (10 mg/ml) ont un pH de 8,3 et sont stables à 15 10 fo près pendant au moins 24 heures à la température ambiante. Des solutions aqueuses concentrées (250 mg/ml) ont un pH de 9,8 à 9,9 et sont stables dans des limites de 10 5? pendant au moins deux heures à la température ambiante. Ce sel est également très soluble à 500 mg/ml (pH 9,9). Ainsi, on prépare 20 un monohydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamido] pénicillanate de sodium cristallin et fortement purifié, en un rendement convenable, par un procédé utilisant l'acétone, l'eau, le 2-éthylhexanoate de sodium et la triéthylamine, à partir d'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-25 phénylacétamido}~pénicillanique cristallin, la stabilité biologique de ce monohydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamido]-pénicillanate de sodium dans l'eau équivaut à peu près à celle de solutions correspondantes du sel de sodium de l'ampicilline. 30 L'invention est illustrée par les exemples suivants, donnés à titre non limitatif. Cristallisation du nitrate de l'acide 6-rD-a-(3-rJ-3--yl~1-u~'^~do^-ph énylacet amid o]-pcni cillanique On délaie 10 g d'acide 6-[D-a~(3-guanyl~1-uréido)-35 phénylacét amido ]-pénicillaniq.ue impur amorphe (eu particules de 0,149 mm) dans 70-100 ml d'un mélange d'isopropanol et d'eau à 90 ^ en volume/volume. On ajoute, en agitant très 72 03520 7 2124417 10 15 20 25 30 35 rapidement, 1,3 ml d'acide nitrique concentré (ou le volume de HNO^ requis pour ajuster le pli à 1,3-1,9). la dissolution est totale ou pratiquement totale (pH 1,3-1,9). la cristallisation commence après ensemencement, au bout de 3 à 5 minutes, le mélange est délayé à la température ambiante (21-24°C)pendant 1-1,5 heure, les petits cristaux en aiguille sont recueillis par filtration, lavés avec 20 ml d'isopropanol h 90 i puis avec 30 ml d'isopropanol, et séchés sous vide sur du pentoxyde de phosphore à 50°C pendant 24 heures. On obtient 6 g de monohydrate de nitrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phényl-acétamidoj-pénicillanique dont on constate la cristallinité par le fait qu'il produit une extinction à l'examen au microscope .polarisant. la comparaison de ce produit avec la matière première donne les résultats suivants : RESULTATS Teneur estimée en ampicil-line Titrage biologique* Titrage chimique en unités d'ampicilline Bio-rendement ■,D [a] 25 fc. DMAC Karl Fischer Matière première (amorphe, brute) 5-10 i 870-920 U/mg 590-630 U/mg + 117, + 144 Produit (monohydrate de nitrate cristallin) 700-740 U/mg 60-76 io + 180 HgO a, (théorie pour le monohydrate = 3,5 i) N0~ i (théorie = 12,5 i) N i (théorie = 19,7 i) S i (théorie =6,42 i) Point de fusion (méthode capillaire) 5,18 i 2,7 i Sur base sèche = 12,2$ Sur base sèche = 19,3^ Sur base sèche = 6,0^ 205-209° (déc.) * On utilise comme témoin un lot déterminé d'acide 6-[D-a-(3_guanyl-1 -uréido)pïiénylacétamido]-pénicillanique brut dont l'activité, dans ce titrage particulier, est à peu près le quart de celle de l'ampicilline. 72 03520 8 2124411 Exemple 2 Cristallisation de l1hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phényla.cétamido]-pénicillanique (zwitterion ou "acide libre") 5 On délaie 15 g de nitrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1- uréido)-phénylacétamido]pénicillanique cristallin (particules de 0,149 mm)dans 100-150 ml d'un mélange d'isopropanol et d'eau à 50 °/° en volume/volume pendant 5 minutes. On ajoute, sous agitation/rapide, de l'hydroxyde de sodium à 20-40 °f° 10 (que l'on peut remplacer par de la triéthylamine) pour ajuster le pH à 4,5-6,0. On obtient une solution. (On peut utiliser, le cas échéant,une période de 10 minutes de filtration par gravité sur papier pour filtration rapide). le mélange est ensemencé et la cristallisation débute au 15 bout de 15 à 20 minutes environ, le mélange est agité à la température ambiante (21-24°C)pendant deux heures. Les petits cristaux en bâtonnets sont recueillis par filtration, lavés avec 25 ml d'isopropanol à 50 f°, puis avec 30 ml d'isopropanol, et ils sont ensuite séchés sous vide sur du pentoxyde 20 de phosphore à 50°C pendant 24 heures. On obtient 11,5 g d'hémi-hydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamido]-pénicillanique dont la crlstallinité apparaît du fait que ce composé présente une extinction à l'examen au microscope polarisant. L'analyse de ce produit donne les résultats 25 suivants ï Teneur estimée en ampicilline: Titrage biologique-» = 1150-1210 U/mg Titre chimique en unités d'ampicilline = 800-835 U/mg - Bio-rendement — 86 fo 50 M25 » DMC = +171,6 H^O i, Karl Fischer [théorie pour l'hémihydrate ( .I^H^O) = 2,04 £] = 2,3 Io N (théorie sur base sèche = 19,3 /f° ) = 19,3 f° sur base sèche S (théorie sur base sèche = 7,36 £) = 7,6 f sur base sèche 35 Point de fusion = 208-214°C (décomposition) Résonance magnétique nucléaire : pas d'isopropanol * comme indiqué ci-dessus, dans l'exemple 1. 72 03520 9 2124411 Exemple 3 On délaie 10 g de cristaux d'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uré ido)phénylacétamido]-pénioillanique purifié (0,250 mm) , préparé conformément à 1* exemple 2, 5 dans un mélange de 10 ml d'eau et de 50 ml d1acétone„ On ajoute à cette suspension 4,3 ml de solution aqueuse à 30 io d'hydroxyde de potassium, en agitant rapidement. On obtient une solution. (Cette solution ne cristallise pas et on peut la filtrer dans des conditions aseptiques sur des 10 filtres convenables à une pression positive pour éliminer les bactéries et les substances pyrogènes. A ce stade, la filtration éventuelle doit être terminée en moins d'une- heure). On ajoute à cette solution 100 ml d'acétone en 3 minutes, en agitant rapidement. On ensemence la solution et la cristalli-15 sation commence au bout d'environ 3 minutes, le mélange est délayé pendant 15 minutes. On ajoute encore Î00 cri d'acétone en 3 minutes et on délaie le mélange pendant une heure à la température ambiante (21-24°C). Les petits cristaux en aiguilles minces qui se forment sont recueillis par filtration, lavés 20 avec 65 ml d'acétone et séchés dans l'air à 37-45°C pendant 24 heures. On obtient 10 g de dihydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidojpénicillanate de potassium dont la cristallinité apparaît du fait que ce composé présente une extinction à l'examen au microscope polarisant. L'analyse 25 de ce produit donne les résultats suivants ï RESULTATS Titrage biologique comme dans l'exemple 1 = 1100-1180 unités/mg Titre chimique (exprimé en ampicilline) = 750 - 790 unités/ng Bio-rendement ï > 95 io 30 Teneur estimée en ampicilline: Eau it Karl Fischer = 3,6* après séchage sous vide sur du pentoxyde de phosphore à la température ambiante ; 7,1 ** après séchage dans l'air à 37-56° ; 9,02 i (après exposition à 3.'air du laboratoire pendant 24-48 heures)*** 35 Cendres i, exprimé en potassium sur base sèche = 7,6-8,2 (théorie = 8,25 i) N i (sur base sèche) = 17,9 (théorie = 17,8 i) S i (sur base sèche) = 6,85 (théorie = 6,78 i) 72 03520 io 212441.7 [a]^ ; BMâC = + 164,3 Le spectre infrarouge et le spectre de résonance magnétique nucléaire sont compatibles avec la structure ; Il ny a pas d'acétone libre ou combinée 5 * Théorie pour le monohydrate = 3,6 $ ** Théorie pour le dihydrate - 7,25 ^ *** Théorie pour l'hémi-pentahydrate (2,5 H^O) = 8,7 La teneur en eau peut varier du monohydrate à 1*hémipentahydrate en fonction des techniques de séchage 10 (temps, température, vide, humidité relative). Le composé est un dihydrate lorsqu'il est séché dans l'air à 37-45°C. Exemple 4 On délaie dans 100 ml d'acétone 10 g de cristaux, de 0,149 mm,d'héffiihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-15 phénylacétamidojpenicillanique purifié.On ajoute, sous agitation rapide, 25 ml d'tuae solution à 28-30 fi de 2-éthylhexan.oate de potassium dans la méthylisobutylcétone. On obtient au bout de trois minutes une dissolution totale ou pratiquement totale. On ajoute 2 ml d'eau et on obtient une solution limpide 20 en 3 minutes environ.(Cette solution ne cristallise pas et peut être filtrée dans des conditions aseptiques sur des filtres convenables à une pression positive pour éliminer les bactéries et les substances pyrogènes. La filtration éventuelle,à ce stade, doit être terminée en moins d'une heure). 25 On ajoute 3 (ou un maximum de 5) al de triéthylamine et on ensemence la solution. La cristallisation débute en 5 à 10 minutes environ. Le mélange est délayé à la température ambiante pendant une heure. Les cristaux sont recueillis par filtration, lavés avec 50 ml d'acétone et séchés dans l'air 30 à 37-45°C pendant 24 heures. On obtient 7,0 g de dihydrate de 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)-phénylacétamido]pénicillanate de potassium, dont la cristallinité ressort du fait que ce produit présente une extinction à l'examen au microscope polarisant. Ce produit donne à l'analyse les résultats suivants ; 72 03520 n 2124411 RESULTATS Titre biologique comme dans l'exemple 1 = 1100-1180 unités/mg Titre chimique (exprimé en ampicilline) = 750-790 unités/mg Bio-rendement = 70-85 i 5 Teneur exprimée en ampicilline: Cendres i exprimé en potassium sur base sèche = 7,9-8,1 (théorie = 8,25 i°) N fi (sur base sèche) = 18,0 (théorie = 17,8 $) 10 S fo (sur base sèche) = 6,83 (théorie = 6,78 i) [a]® ; BMC = + 169,4 le spectre infrarouge et le spectre de résonance magnétique nucléaire sont compatibles avec la structure ; il n'y a pas d'acétone libre ou combinée. 15 Exemple 5 On délaie dans 100 ml d'acétone à la température ambiante (21-24°C) 10 g de cristaux de 0,250 mm,d'hémi-hydrate d'acide 6-[B-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamido]pénicillanique purifié (zwittèrion) préparé conformément à l'exemple 2. On 20 ajoute, en agitant rapidement, 25 ml de solution à 28-30 i de 2-éthylhexanoate de sodium dans la méthylisobutylcétone. Le mélange est délayé pendant 2 minutes. On ajoute 5 ml d'eau et on obtient une solutioï^én une minute environ. (Cette solution ne cristallise pas et peut être filtrée dans des conditions 25 aseptiques sous pression positive sur des filtres convenables pour éliminer la matière en particules, des bactéries et des substances pyrogènes. La filtration éventuelle à ce stade doit être terminée en moins de 1,5 heure). On ajoute sous agitation rapide 3 (ou un maximum de 4) ml de triéthylamine. On ensemence g-{j 30 la solution /La cristallisation débute en 3-5 minutes environ. On délaie le mélange pendant 15 à 20 minutes pour obtenir la croissance en masse des cristaux. On ajoute ensuite"100 ml d'acétone en une période de 10 minutes sous agitation rapide. On délaie le mélange pendant 30 à 45 minutes. Les cristaux 35 microscopiques denses sont séparés par filtration, lavés avec 65 ml d'acétone et séchés dans l'air à 45°C pendant 18 à 24 heures. On obtient 7-8,5 g de monohydrate de 6-[B-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido]pénicillanate de sodium 72 03520 12 212441 1 dont la cristallinité ressort du fait que ce produit présente une extinction à l'examen au microscope polarisant. l'analyse de ce produit donne les résultats suivants : RESULTATS 5 Titre "biologique comme dans l'exemple 1 = 1120-1220 unités/mg Bio-rendement = 70 - 85 fi° Titre chimique (exprimé en ampicilline) = 790-830 unités/mg Teneur estimée en ampicilline; Eau ?$, Karl Fischer = 3,7-3,9* 10 Cendres fi exprimé en sodium sur base sèche = 4,5-4,85 (théorie = 5,04 fi) N fi (sur base sèche ) = 18-18,4 (théorie = 18,4 fi>) S fi (sur base sèche) = 7,2-7,6 (théorie = 7,03 fi>) [af25 ; DKA.C = +176^7 15 Point de fusion (10°C/mn) = 218-220°C (décomposition). Le spectre infrarouge et le spectre de résonance magnétique nucléaire sont compatibles avec la structure ; il n'y a pas dtacétone ou d'acétone combinée. ^Théorie pour le monohydrate = 3,82 fi. Cet hydrate ne semble 20 pas être hygroscopique et n'absorbe pas une quantité importante d'eau lorsqu'il est exposé à l'air du laboratoire pendant 48 heures. FORMULAT 10 F S Solution de monohydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phényl-25 acétamido]pénicillanate de sodium poiir l'administration paren-térale (équivalant à 250 mg/ml d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylaoétamidoJpénicillanique anhydre La préparation est effectuée de la façon suivante : Le mor_ohydrate de 6-[D-a-(3-guany 1-1 -uréido )phényl~ 30 acétamido]pénicillanate de sodium stérile, apyrogène, en cristaux de 0,149 mm, est introduit dans des fioles stérilisées ou dans des seringues stérilisées, du type sacrifiable. Le produit est reconstitué peu avant l'usage par addition de la quantité indiquée d'eau apyrogène stérile. 72 03520 13 2124411 FORMULE Par fiole Cristaux de 0,149 nus de monohydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-5 uréido)phénylacéta!nido 1-pénicil-lanate de sodium apyrogène stérile 0,273.g* Eau stérilisée apyrogène^ quantité suffisante pour 1,0 ml tO * Ce poids équivaut à 0,25 g d'acide 6-[D-a-(guanyl-î-uréido}-phénylacétamido jpénicillanique anhydre. Solution de dihydrate de '6-[5-a-(3-guanyl-1 -uréido)phénylacéta-mido]pénicillanate de potassium pour 1'administration par voie parentéraie 15 Cette solution est préparée de la façon suivante : Le sel est introduit dans des fioles stériles ou des seringues stériles du type sacrifiable. Le produit est reconstitué peu avant l'usage par addition de la quantité indiquée d'eau stérile apyrogène. 20 FORMULE Par fiole Cristaux de 0,149 œm. de dihydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacét amido]pé:iicil-25 lanate de potassium stérile 0,294 g * Quantité d'eau stérile nécessaire pour obtenir une activité de 250 mg/ml soiis la forme _ "acide libre" (z;-;itterion), 30 quantité suffisante pour 1,0 ml * Ce poids équivaut à 0,2 5 g d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phényîacétamido]ponicillanique anhydre (appelé "acide libre"ou zvritterion ). De grands excès de sels basiques tels que le citrate tri-35 sodique, l'ascorbate de sodium, le phosphate disodique et l'acétate de sodium,empêchent la solubilisâtion de l'acide [D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamido]-pénic illanique à une concentration supérieure à 50 mg/ml dans l'eau. Toutefois, on a constaté que le phosphate trisodiaue et le carbonate 40 de sodium solubilisent l'acidc- 6-[D-a-(3-guanyl-1 -uréido)- 72 03520 14 2124411 phénylacétamido]pénicillanique dans l'eau à des concentrations .supérieures à 250 mg/ml (pli 9-9,4). Ces solutions ont des stabilités analogues à celles du sel de sodium de l'ampicilline, aux mêmes concentrations. 5 Des mélanges?conditionnés à l'état sec,d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidojpénicillanique ("acide libre" ou zwitterion) et de carbonate de sodium ou de phosphate trisodique constituent des formes intéressantes pour ^administration intraveineuse et intramusculaire . •JO Des exemples particuliers sont donnés ci-après. Solution à usage parentéral d'hémil^drate d'acide 6-[D-a-(3-guany 1-1 -uréido )ph.énylacétamidojpénicillanique avec du carbonate de sodium (dose : 250 mg/ml). La préparation est effectuée de la façon suivante : 15 1 » Le carbonate de sodium stérile en particules de 0,074 mm. et l'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-gu.anyl-l-uréido)-piiénylacétamido jpénicillanique en cristaux de 0,074 mm sont mélangés dans un mélangeur stérile convenable pendant une heure, puis broyés ou tamisés pour assurer la rupture de toutes masses 20 agglomérées. 2. Le mélange stérile indiqué ci-dessus est introduit dans des fioles stériles ou dans des seringues stériles du type sacrifiable. Le produit est reconstitué peu avant l'usage par addition de la quantité indiquée d'eau stérile 25 apyrogène. FORMULE Quantité par fiole Cristaux (0,074 mm) d'hémi-hydrate d'acide 6-[D-a-(3-30 guanyl-l-uréido)phénylacétamidoj-pénicillanique stérile et apyrogène 0,25 gramme Carbonate de sodium (0,074 mm), stérile et apyrogène * 0,07 g 35 Volume d'eau stérile apyrogène rcqiiise potir ajuster la concentration à 250 mg/ml ** 0,70 ml "x" La quantité requise de carbonate de sodium peut varier en tant que quantité minimale requise pour donner un p;i de 72 03520 15 212441î 9,3-9,8 et/ou une dissolution complète ** La solution à 250 mg/ml est stable dans des limites de 10 pendant au moins une heure à la température ambiante. Cette solution peut être diluée à une concentration de 100 mg/ml 5 qui est stable dans des limites de 10 £ pendant au moins deux heures à la température ambiante, ou une solution à 10 mg/ml qui est stable dans des limites de 10 £ pendant au moins 24 heures à la température ambiante. La concentration de 250 mg/ml équivaut à 250 000 unités/ml. 10 Solution pour l'usage parentéral d1hémihydrate d'acide 6-[D-g-(5~guanyl-1 -uréido)phénylacétamidojpénicillanique avec du phosphate trisodique (Dose : 100 mg/ml) La préparation est effectuée de la façon suivante : 1. L'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)-15 phénylacétamidojpénicillanique stérile apyrogène en cristaux de 0,149 mm et le phosphate trisodique stérile apyrogène en cristaux de 0,149 mm sont mélangés dans un mélangeur stérile convenable pendant une heure,puis broyés ou tamisés dans des conditions aseptiques pour éliminer toutes masses 20 agglomérées. 2. Le mélange indiqué ci-dessus est introduit dans des fioles stériles ou dans des seringues stériles du type sacrifiable. Le produit est reconstitué peu avant l'usage par addition de la quantité indiquée d'eau apyrogène stérile. 25 FOEI-FJIE Quantité par fiole Cristaux de 0,149 mm d'hémi-hydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany 1-1 -uréido )phénylacétamidoj-30 pénicillanique stérile apyrogène 0,1 gramme Phosphate trisodique anhydre stérile apyrogène en cristaux de 0,149 mm 0,041 g * 35 Volume d'eau nécessaire pour ajuster la concentration à 100 mg/ml 0,9 ml « * La quantité requise de phosphate.- trisodique est la quantité minimole donnant une solution de pH égale à 9,3-9,7 40 *"x- Cette solution est stable dans des limites de 10 fo pendant au moins deux heures et peut être diluée en donnant une solution à 10 mg/ml qui est stable pendant au moins 24 heures à la température ambiante. 72 03520 16 2124411 REVENDICATIONS 1. Procédé de purification d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1~ uréido)phénylacétamidojpénicillanique amorphe impur, caractérisé par le fait qu'il consiste à transformer des cristaux de nitrate d ' acide 6- [D-a- (5-guanyl~1 -uréido ) phénylacétamido ]pénic illanique 5 en cristaux très purifiés d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamidojpénicillanique par délayage dans de l'alcool aqueux puis réglage du pH de la suspension avec une base, dans la gamme de 4,5 à 6,0, pour former une solution dans laquelle les cristaux d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacé-10 tamidojpénicillanique purifié précipitent spontanément et sont ensuite recueillis. 2. Procédé suivant la revendication 1 pour la purification d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidojpénicillanique amorphe impur, caractérisé par le fait qu'il consiste 15 à transformer des cristaux de monohydrate de nitrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidoj-pénicillanique en cristaux très purifiés d'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamidojpénicillanique par délayage dans un mélange d-tisopropanol et d'eau à 50 ^ en volume/volume, puis 20 réglage du pH de la suspension avec une base dans la gamme de 4,5 à 6,0 pour former une solution de laquelle l'hémihydrate d1acide 6- [D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamido jpénicillanique cristallin purifié précipite spontanément et est ensuite recueilli. 25 3. Procédé de purification d'acide 6-[D-a-(3-guanyl- 1-uréido)phénylacétamidojpénicillanique amorphe impur, caractérisé par le fait qu'il consiste à mélanger cet acide avec de de l'acide nitrique dans/l'alcool aqueux à un pH compris dans la gamme de 1 à 2, à séparer les cristaux de nitrate d'acide 30 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamido jpénic illanique ainsi précipité, puis à transformer ce nitrate en cristaux très purifiés d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacét amidoj-pénicillanique par délayage dans de l'alcool aqueux puis réglage du pli de la suspension avec line base, dans la gamme de 4,5 à 35 6,0, pour former une solution dans laquelle les cristaux purifiés d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidoj-pénicillanique précipitent spontanément et sont ensuite recueillis. 17 72 03520 . 2124411 4. lïocêûé s-ai'vant la revendication 3* pour purifier de l'acide 6-[D-a-(3-guany 1-1-uréido)phénylacétamidojpénicillanique amorphe impur, caractérisé par le fait qu'il consiste à mélanger cet acide avec de l1auide nitrique dans de l'isopropanol 5 aqueux à 90 i en volume/volume à un pH compris dans la gamme de 1,3 à 1,9, à séparer les cristaux de monohydrate de nitrate d1acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)phénylacétamidojpénicillanique ainsi précipité,puis à transformer ce nitrate en cristaux très purifiés d1 hémihydrate d'acide- 6-[D-a~(3~guany1-1-uréido}-10 phénylacétamidojpénicillanique par délayage dans un mélange d'isopropanol et d'eau à 50 i en volume/volume , puis réglage du pH de la suspension avec une base dançta gamme de 4,5 à 6,0 pour obtenir une solution dans laquelle les cristaux purifiés d'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phénylacétamido j~ 15 pénicillanique cristallisent spontanément et sont ensuite recueillis. 5. le nitrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamidoj-pénicillanique à l'état eristallin. 6. Le monohydrate de nitrate d'acide 6-[D-a-(3-20 guanyl-1-uréido)phénylacetamidojpénicillanique à l'état cristallin. 7. L'hémihydrate d'acide 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido}-phénylacétamidojpénicillanique à l'état cristallin. 8. Le dihydrate de 6-[D-a-(3-guanyl-1-uréido)phényl-25 acétamido jpénicillanate^ie potassium cristallin» 9. Le monohydrate de 6-[D-a-(3-guany1-1-uréido)-phénylacétamidoj-pénicillanate de sodium cristallin.