î 2001491 Cette invention concerne des composés de -et ^ -céphalosporine» c'est-à-dire des composés de céphalosporine ayant une double liaison carbone-carbone entre les atomes de carbone situés en position 2 et 3 ou 3 et 4 du cycle dihydrothiazine. Plus particu-5 lièreraent, cette ^invention fournit un procédé pour transformer les ^esters de ûr -désacétos^céphalosporine en composés A2 - ou /\ -néthyl "fonctionnalisés" qui sont utiles comme intermédiaires dans un procédé chimique pour obtenir des dérivés d*acide Ci--céphalosporanique à action antibiotique, ou bien qui ont une action 10 antibiotique per se. La production semi-synthétique d'antibiotiques de 7-acylaraido-désacétoxycéphalosporine à partir de pénicillines comme produits de départ a pris récemment de l'importance, à cause du procédé inventé par Morin et Jackson (brevet E.U.A. 3.275.636) qui décrit 15 et revendique un procédé pour transformer les esters sulfoxydes de pénicilline en estexsd'acide désacétoxycéphalosporanique. Les composés de céphalosporine dérivés de pénicillines par ce procédé possèdent la formule générale : " fx 20 R-C-HN-&I-ÇHg 2CH2 i°- ? (I) COOR1 dans laquelle R est le reste du groupement acylamide en position 7, 25 1 et R est l'hydrogène, un cation formateur de sel, un groupement ester, ou une charge anionique quand le COO- forme un sel avec un cation éther à l'intérieur ou à l'extérieur de la molécule. Pour tenter d'améliorer et d'élargir les propriétés et les utilités de ces substances céphalosporines serai-synthétiques tirées 30 des pénicillines, on s'est efforcé de changer le groupement 3-méthy-le dés -désacétoxycéphalosporines ci-dessus en un groupement qui donne aU composé de céphalosporine obtenu une action antibiotique accrue vis-à-vis d'un ou de plusieurs micrcorganismes Gram-positifsou Gram-négatife, Cependant, à ce jour du moins, il 35 n'a pas été possible de transformer directement une -désacé- toxycéphalosporine en une /\ -céphalosporine 3-méthyl fonctionnalisée avec un rendement appréciable. C'est pourquoi les spécialistes de la technique des antibiotiques chimiques ont besoin d'une méthode ou d'une voie de rechange pour obtenir les antibiotiques de 40 céphalosporine /\-3-méthvl fonctionnalisén intrinsèquement plus 69 02897 2 2001491 puissants qui nEGHt été obtenus jusqu'à prisent cp'à partir de la céphalosporine c de fermentation, ou à partir de 18acide 7-amin©eé-phalosporaniçue (7-Aeàj) qui en dérive. C8 est-en but de cette invention de fournir une méthode eMmi-5 que-clef pour surmonter la difficulté de la transformation des /\ désacétoxycéphalosporines an antibiotiques d8 acide S-flaêtlsyl-foncdion-nalisë- A. "^-céphalosporanique. Dans le procédé de cette invention (a) on fait réagir la M-br©-mosuccinimide avee un ester de /^-céphalosporine de formel© s 1° ^ S R-NH-CH-CH ^ |p 0=C -H, ^yc-CH3 (II) XH ' 15 COORj^ dans-laquelle R est un groupement protesteur de l1aminé et est le reste d'un groupement ester, dans un solvant organique sensiblement anhydre, à des températures allant d'environ. Q®C aux températures de reflux, de préférence d'environ 40°C à environ 100®C, pour 20 former l'intermédiaire ester de 3-bromométhyl- ^^-céphalosporine correspondant, et ensuite (b) on fait réagir l'intermédiaire ester de 3-bromométhyl- A2 -céphalosporine avec une substance nucléophile pour déplacer le brome de l'intermédiaire 3-tor 69 2897 3 2001491 R-NH-CH-CH CH 0=C -N U-CH--Y (III) / CH ■ COO^ dans laquelle R et R^ sont tels que définis ci-dessus, et Y est l'agent nucléophile ou groupement"fonctionnel" dérivé du réactif 10 nucléophile utilisé dans l'étape (b) du procédé de cette invention. Par commodité, ces produits peuvent aussi être appelés en général esters de 3-(méthyl-nucléophile)- A2 "-céphalosporine. Les esters de /\ ^-7-acylamido-3-(méthyl-nucléophile) céphalosporine produits par le procédé de cette invention sont utiles comme 15 intermédiaires dans la préparation de substances antibiotiques de /\^-céphalosporine, nouvelles ou connues, qui peuvent être utilisées dans le traitement d'affections causées par des microorganismes Gram-positi©ou Gram-négatifs.Ces esters de /\^-7-acylamido-3-(méthyl-nucléophile)-céphalosporine peuvent être transformés partiel-20 lement en esters correspondants de A3 -7-acylamidc?-3-méthyl-nuclé-ophile-sulfure en les chauffant dans un milieu faiblement basique qui provoque le déplacement de la double liaison /\ 2 en position A3 , en donnant un mélange en équilibre du produit /\2 et de l'ester de ^-7-acylamido-3-(méthyl-nucléophile)céphalosporine, 25 que l'on transfocne facilement en une substance antibiotique active en éliminant le groupement ester par des méthodes connues, illustrées ci-dessous. Il est cependant préférable de transformer chimiquement l'ester 7-acylamido-3-(méthyl-nucléophile)-3-céphem-4-carboxylate obtenu en ester A3 correspondant, par un procédé 30 qui ne fait pas partie de cette invention. Ce procédé comprend (1) l'oxydation du produit ester de -sulfure en ester de A3 sulfoxyde à l'aide d'un peracide, (2) la réduction de l'ester de /V-sulfoxyde à l'aide d'un agent réducteur tel que le bisulfite de sodium ou le dithionite de sodium, en présence d'un activateur 35 tel que le chlorure d1acétylc, dans un solvant organique de dilution tel que l'acide acétique ou le diméthy1formamide, pour former l'ester de /a ^-sulfure, et (3) ensuite en désestérifiant si on le désire 1 ' ester de "^-sulfure en acide de A3 -sulfure à action antibiotique. Si on le désire, on peut utiliser des mélanges de 40 l'acide de A3 '-céphalosporine, antibiotique actif, et de l'acide 69 .2897 4 2001491 de ZX. 2-céphalosporine inactif, ou bien leurs sels pharmaceutiquement acceptables sous une telle forme mixte pour certains usages comme antibiotiques, par exemple comme antibiotiques locaux pour les plaies ouvertes dans les applications vétérinaires, auxquels cas le mélange 5 peut être saupoudré sur la plaie, ou incorporé dans un onguent et appliqué dans un tel milieu pour inhiber la croissance de divers microorganismes Gram-positifeou Gram-négatifs. Les esters de A2-7 -(amino protégé)-3-(méthyl-nucléophile)-sulfure produits par le procédé de cette invention sont utiles 10 comme intermédiaires pour former des antibiotiques de/V ^-céphalosporine portant tout groupement 7-ecylamide voulu, connu pour contribuer à l'activité antibiotique des céphalosporines. Ces produits sont (1) traités pour éliminer le groupement protecteur de 1*aminé et pour former l'ester de Z\ 2-7-amino-3-(méthyl-nucléophile)-sul-15 fure, qui peut être (2) acylé si on le désire, par exemple à l'aide d'acide thiophène-2-acétique,d'an chlorure d'acide, ou d'un anhydride mixte, pourformer l'ester correspondant des /\^-7-(thiénylacé-tamido) -3-(méthyl-nucléophile)-céphalosporines, (3) lequel peut être isomérisé en ester correspondant de^ ^-7-(thiénylacétamido)-3-20 (méthyl-nucléophile)-céphalosporine, par une méthode d1oxydo-réduction décrite ci-dessus, et (4) désestérifié, par exemple par traitement avec l'acide trifluoroacétique, seul ou avec du zinc dans de l'acide formique ou de l'acide acétique, pour former l'antibiotique céphalosporine actif. Autrement, l'ester de/\^-céphalosporine 25 peut être d'abord transformé en/\3-ester et cet ester peut être scindé en ester de/^^-7-amino-3-(riéthyl-nucléophile) -céphalosporine, lequel peut à son tour être N-acylé et désestérifié en une /\ -céphalosporine. Un exemple de ce composé que l'on peut préparer par une telle méthode est la céphalothine, antibiotique de céphalospo-30 rine largement accepté et disponible dans le commerce, qui ne peut être obtenue actuellement que par l'intermédiaire de la céphalosporine C de fermentation ou du 7-ACA qui en dérive. Cette invention fournit aussi une catégorie de nouveaux esters d'acide 7-acylamido-3-bromométhyl-/\2-céphem-4-carboxy ligue 35 de formule : / \ R—NH-CH-CH' CH ' ' I 0=C—N C-CH_-Br (IV) \ / CH 40 COORj, 69 ~897 5 2™ 1491 ainsi que certains nouveaux acides et esters 7-acylamido-3-cyanomé- thyl-, 3-oxymethyl éther, 3-thiométhy1 éther et 3-aminométhyl \ 2 aliphatique —Oi -céphem-4-carboxyliques de formule : S, R-KH-CH-CH' « i 0»C -N. C-CH-,~r" (V) COOR1 2_q où, dans chacune des formules IV et V, R est le radical triméthyl-silyle, triphénylméthyle, butoxycarbonyle, phényl-O^,-o(-dimêthyl-acétyle, phénoxyacétyle, phénylacétyle, ou phênylmercaptoacétyle, substitués sur leurs atomes de carbone cycliques par le fluor , le chlore, le brome, 2 1 iode, un radical alcoxy en ci~C2' ^utoxy-15 carbonylméthyle, nitro, cyano, ou trifluorométhyle, R" dans la formule (V) est -C1T, -XY où X est l'oxygène ou le soufre et Y est un radical alcoyle en c^~c^q' alcényle en C3~C3_o' slcynyle en C^-C10' cycicalcoyle en C5~C7' (cycloalcoyl en G^- C^-(alcoyle en C^-Cg),îialoalcoyle en C„- haloalcényle en C.,- ou haloalcynyle 20 en C-j - C^q où l'halogène est le fluor , le chlore, le brome, ou l'iceie, cyanoalcoyle en - C^, (alcoyl en C^- -X-fe 1 coy 1 e en -Cg) cù X est 1'oxygène ou le soufre, cycloalcoyl en C^- C^f cyclc-alccv3 en CK- C^-felcoyle en C^- C^, (alcoyloxycarbonyl en c]_~cg^ ~ (alcoyle en C^~Gg)/(slcényl en C2~C^)-(alcoyl en C^-Cg), (alcanoylo-25 xi7 en C^-C^} - (alcoyle en C^-Cg) f (2 1 -tétrahydrofuryl) - (alcoyle en C^-C,}, (2'-thiényl)-(alcoyle en C^-C^) , phényl-(alcoyle en / phényle, bensyle, et phênyléthyle, ou phényle, benzyle et phényl-éthyls substitués par un radical cyano, nitro, trifluorométhyle, alccyloxy en C^-C,, alcoyle en CJL-C3' ou alcovloxycarbonyle en 30 Ci-C3(COO-alcoyle où le groupement alcoyle a de 1 à 3 atomes de carbone), ou -N- R3 4 R 3 4 35 où chacun des radicaux R et R pris isolément est un radical 3 4 alcoyle en C^-C^, ou bien R et R pris ensemble avec l'azote auquel ils sont liés complètent un noyau monocyclique et hétérocy-clique contenant de 5 à 6 atomes cycliques, de formule : cu2— ch2x 40 CH2"Q —t *"ïl BAD 0RK31NAL 69 ,zb97 onnMoi c \ 5 5 où n est 0 ou 1, et Q est -CH.-,-, -0-, -S-, ou^--NR où R est l'hydrogène ou un radical alcoyle en C-^-C^, sauf quand n est 0, Q est -CH2-, et R est un groupement ester facile à éliminer, dont les préférés 5 sent un radical tertioalcoyle en C^-C^,tertioalcényle en C^-C^, tertioalcynyle en C^-C^, par exemple un radical tert-butyle, 1,1- diméthyl-2-propényle, 1,l-diméthyl-2-pentynyle, benzyle, méthoxy- benzyle, nitrobenzyle, phénacyle, triméthylsilyle, benzhydryle, phtalimidométhyle ou succinimidométhyle. 10 Les esters de /\ -désacétoxycéphalosporine servant de produits de départ peuvent être obtenus de diverses sources de pénicillines ou de céphalosporines ,par des méthodes connues. On les obtient pat- traitement basique aes 3-méthyl- /\ -céphem-4-carboxylates corres- dans 11 Exemple pondants, comme décri+" par exemple/4 du brevet E.U.A. 3.275.626 15 de Morin et Jackson. On peut aussi les obtenir en hydrogénant un ester de céphalosporine dérivé de la Céphalosporine C pour former 1s ester correspondant de A 3 '-désacétoxycéphalosporine, puis en traitant l'ester de /\3-désacétoxycéphalosporine par une base telle que la pyridine au froid (0-10°C) pour isomériser la double liaison 20 en position A2. On a essayé en vain de bromer le groupement 3-mcthyle allylique des esters /\3 -désacétoxy-céphalosporanates. La bromation réussie des esters /\^-désacétoxycéphalosporanates selon la présente invention a été surprenante et n'était pas prévisible. 25 Le groupement protecteur de 1'aminé représenté par R dans la fcrmule II ci-dessus peut être tout groupement connu pour protéger l'azote auquel il est lié de l'attaque de la N-bromosuccinimide. Si l'azote est dans l'état aminé, libre, il faudra un excès de réactif de bremation pour mener à bonne fin la première étape du procé-30 dé de cette invention. Le groupement R peut être par exemple un radical triphénylméthyle(trityle), triméthylsilyle, ou bien un groupement acyle, ce qui est plus pratique et préférable. Bien des groupements acyle. convenant à cet effet sont déjà connus dans la littérature des antibiotiques de pénicilline et de céphalos-35 porine. Certains de ces groupements acyle peuvent être soumis à une bromation, auquel cas il faudrait un excès molaire de H-bromosucci-nirnide pour bromer la totalité du groupement 3-méth.yle dans l'ester A2 -désacétoxycéphalosporanate. Par exemple, si on utilise les groupements thiénylacétyle ou furylacétyle comme groupement 40 acyle protecteur, les systèmes cycliques de ces groupements peuvent ÊAD ORIGINAL 69 02897 7 20G1491 être bromes dans la première étape de ce procédé, mais une telle condition n'est pas préjudiciable au procédé, notamment quand le groupement 7-acyle doit être scindé ultérieurement dans le procédé pour former le dérivé correspondant ester de 7-aminocéphalosporine. 5 Cependant, le groupement protecteur d'aminé préféré est un groupement acyle de formule — dans laquelle m est un nombre entier de 0 à 4 inclus, n est un nombre 10 entier de 1 à 4 inclus, X est l'ojqrgène ou le soufre, ou bien une liaison chimique, ces groupements acyles pouvant être substitués sur les atomes de carbone phényliques par le fluor , le chlore, le brome, l'iode, un groupement alcoyle en C^-C^, alcoxy en C]_~C2' nitro, cyano, ou trifluorométhyle. Le groupement acyle peut aussi 15 porter des groupements méthyle à la place d'I ou 2 hydrogènes sur les atomes de carbone dœm ou n groupements. Quelques exemples représentatifs de ces groupements acyle préférés comprennent les radicaux suivants : phénylacétyle 20 phénoxyacétyle phénylmercaptoacétyle benzyloxyacétyle 3-méthylphényIbutyryle 4-propyIbenzylmercaptoacétyle 25 benzylmercaptopropiony ïe phénylpropionyle phényléthylmercaptopropionyle phénylbutoxybutyryle 3-fluorophénoxyacétyle 30 4-bromophénylacétyle 2-chlorobenzyloxypropionyle phényl-^, C^-diméthy la cétyle 4-nitrophénylmercaptoacétyle 3-cyanophénylpropionyle 35 4-trifluorophénoxyacétyle, et leurs équivalents. De nombreux autres composés qui forment des groupements acyles protecteurs d'aminé et que l'on peut utiliser en position R sont connus dans la technique antérieure, par exemple ceux décrits dans les brevets E.U.A. de Behrens et al N° 2.479.295 à 2.479.297, 40 2.562.407 à 2.562.411, et 2.623.876. /. c\ / 2897 8 2001491 Le symbole représente le reste d'un alccol formateur d'ester. L'alcool utilisé pour former ces esters doit être un alcool facile à éliminer par des méthodes connues, par exemple à l'aide d'une base aqueuse diluée ou d'acide trifluoroacétique,ou encore 5 par hydrogénation en présence d'un catalyseur au palladium ou au rhodium sur un support approprié tel que le charbon, le sulfate de baryum ou l'alumine, de façon que la céphalosporine ne soit pas dégradée. Les groupements esters préférés sont ceux qui sont énumé-rés ci-dessus. 69 02897 9 2001491 Dans la première etape du procède de cette invention, on mélan- 2 ge le produit de départ, la -désacétoxycéphalosporine estéri-fiée, avec la N-bromosuccinimide dans un milieu liquide organique, et on agite ou on remue jusqu'à ce qu'il se forme le produit 3-5 bromo-méthylé. On mène de préférence la réaction en présence d'azo-biBisobutyronitrile comme catalyseur ou comme promoteur pour améliorer le rendement, mais on peut mettre le procédé en oeuvre sans catalyseur. La réaction s'effectue plus rapidement quand on chauffe un peu le mélange, et pour cette raison on se fixe un intervalle de 10 température d'environ 40° C à environ 100° C. On doit maintenir la température àu-desspus du point de décomposition du produit de départ et du produit obtenu. Mais des températures trop basses entraînent une vitesse de réaction trop faible pour une opération efficace. La N-bromosuccinimide se trouve d'habitude en quantité au 15 moins stoechiométrique par rapport à l'ester -désacétoxycéphalo-sporanate car ce dernier est le plus coûteux. La quantité d'azo-bisisobutyronitrile ou autre promoteur que l'on utilise a peu d'importance. Les diluants liquides organiques pour le mélange réaction-nel comprennent le tétrachlorurè de carbone ou ses mélanges avec le 20 chloroforme, le tétrachloroéthane, le chlorure de méthylène, le benzène, le toluène, le xylène, l'heptane, et les solvants de ce genre. Des' exemples des nouveaux composés intermédiaires delta-2-3-bromométhylés de cette invention comprennent : 25 le 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl- /\2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle, le 7-phénylacétamido-3-bromométhyl- ^.^-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle, le 7-phénylmercaptoacétamido-3-bromométhyl- ^-céphem-4-30 carboxylate de benzhydryle, .le 7-(4'-nitrophénoxyacétamido)-3-bromo-méthyl- A 2-céphem-4-carboxvlate de tert-butyle, le 7-(3'-chlorophénylmercapto-acétamido)-3-bromométhyl- A 2-céphem-4-carboxylate de 3,5-diméthoxybenzyle, 35 le 7-(41-iodophénoxyacétamido)-3-bromométhyl- A ^-céphem-4- carboxylate de tert-butyle, le 7- (3 ', 5 •"-dibromophénoxyacétamido) -3-bromométhyl- A 2-céphem-4-carboxylate de 3-méthaxybenzyle, le 7-benzamido-3-bromométhyl- ^-céphem-4-carboxylate de 40 phtalimidométhyle, f)0 0?û07 10 2001491 2 le 7-(4'-trifluorométhylphénoxy-acétamido)-3-bromométhyl- û - céphem-4-carboxylate de succinimidométhyle, . 2 le 7-(4'-fluorophénylmercaptopropionamido)-3-bromométhyl- /S ~ céphem-4-carboxylate de tert-butyle, 5 le 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl- l\ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, le 7-phénylacétamido-3-bromométhyl- 2-céphem-4-carboxylate de p-nitrobenzyle, le 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-Z\ ^-céphem-4-carboxylate 10 de l,l-diméthyl-2-propényle, le 7-phénoxyacétamido-3-bromométhy1- A2 -céphem-4-carboxylate de 1,l-diméthyl-2-propynyle. Quand la bromation est terminée, l'intermédiaire ester de Z\ 2-3-bromométhyl-céphalosporine peut soit être isolé du mélange 15 réactionnel, soit être traité dans le même mélange réactionnel, dans la seconde étape de ce procédé, par un réactif nucléophile, qui déplace le brome de la position 3-méthyle. Dans le milieu organique l'intermédiaire ester de A -3-bromométhyl céphalosporine est mélangé ou brassé avec le réactif nucléophile choisi jusqu'à ce que 20 l'atome de brome soit remplacé par l'agent nucléophile. Avec certains réactifs nucléophiles il faut chauffer le mélange pour augmenter la vitesse de réaction. La mise du mélange à reflux dans un solvant à bas point d'ébullition (par exemple moins de 100° C) tel que l'acétone, l'acétonitrile, le diméthylformamide, le diméthyl-25 sulfoxyde, le benzène, l'heptane, ou un solvant de ce genre, favorise la conversion. Suivant le type de réactif nucléophile utilisé, un le brrmure peut apparaître dans /éous-produit ou bien sous forme du sel d'azote quaternaire dans le composé céphalosporine. Les produits peuvent être des huiles ou des solides cristallins. Le produit peut 30 être purifié par lavage avec un non-solvant, ou par des méthodes chromatographiques. Autrement, le produit du mélange réactionnel brut peùt être traité immédiatement par des agents oxydants appropriés, l'acide méta-chloroperbenzoîque par exemple, pour en former l'ester sulfoxyde de Zi. ^-céphalosporine, et ensuite être réduit 35 par un agent réducteur approprié tel que le bisulfite de sodium ou le dithionite de sodium en mélange avec du chlorure d'acétyle et du diméthylformamide, pour former l'ester de céphalosporine - fonctionnalisé correspondant. Certains esters de Z\ ^-céphalosporine, tels que les esters d'acétaxyméthyl céphalothine décrits dans 40 la demande de Brevet E;U.À. N° 573.820 déposée le 22 AOUT 1966, 69 02897 11 onnup i peuvent être utilisés tels quels dans la thérapie par antibiotiques pour combattre des infections bactériennes. Cependant, pour la plupart des applications, il est préférable d'éliminer le groupement ester protecteur, par des méthodes connues, pour obtenir l'acide 5 A3-céphalosporanique ou le dérivé zwitterion. L'acide céphalo-sporanique ou le zwitterion obtenus peuvent être utilisés tels quels ou bien être transformés en sels pharmaceutiquement acceptables, par exemple en sels de métal alcalin (de sodium ou de potassium par exemple), ou en la forme sel d'aminé solùble ou insoluble, 10 suivant le type de traitement auquel le sel est destiné. Les sels insolubles avec le 1,4-bis(aminométhyl)cyclohexane sont utiles pour l'administration d'antibiotiques de céphalosporine du type "dépôt", selon laquelle les antibiotiques de céphalosporine paséent lentement dans le sang. Sous une telle forme, la céphalosporine est admi-15 nistrée d'habitude par injection intramusculaire en doses de 0,5 à 1 gramme. Les sels hydrosolubles des antibiotiques de céphalosporine, tels que les sels de sodium, de monoéthanol- ou de diéthano-lamine de céphalosporine peuvent être administrés par voie parenté-raie pour donner des doses quotidiennes totales d'environ 1 à envi-20 ron 6 grammes de l'antibiotique de céphalosporine actif, pour un patient pesant environ 70 kilogrammes. Les réactifs nucléophiles que l'on peut utiliser pour remplacer le brome du groupement 3-bromométhyle peuvent être tout composé ou toute substance qui fournit un groupement chargé négativement ou 25 une molécule neutre portant une paire d'électrons appariés (la pyridine par exemple) qui entre dans une substitution nucléophile avec le groupement 3-bromométhyle. Bien des composés contenant des groupements nucléophiles sont déjà connus pour leur utilité comme fournisseurs de groupements nucléophiles pour préparer les antibio-30 tiques de 3-méthyl-nucléophile-céphalosporine, notamment dans la littérature des brevets. Certains réactifs nucléophiles sont plus valables que d'autres en ce que les agents nucléophiles que fournissent les réactifs apportent une activité antibiotique accrue au composé de céphalosporine "fonctionnalisé" obtenu par rapport au 35 composé de céphalosporine correspondant sans groupement nucléophile. Le réactif nucléophile, tel qu'il est défini'ci-dessus, comprend les composés qui contiennent des atomes nucléophiles d'oxygène, de soufre, d'azote, ou de carbone, comme par exemple dans les groupements suivants de réactifs nucléophiles préférés : 40 (1) les composés de formule : 69 "2897 12 2001491 / \ M-S-CS-N S N-R. 1 \ / A 5 dans laquelle M est l'hydrogène ou un métal alcalin, est un radical alcoyle en C2-C6 » alcényle en C^-C^, carbo-alcoxy en C;l~"C2• A est l'hydrogène ou le groupement carboxyle, ces composés étant représentés par exemple par les 4-méthyl, 4-éthyl, 4-isopropyl, 4-n-propyl, 4-isobutyl, 4-n-butyl, 4-n-amyl, 4-néopentyl, 4-n-hexyl, 10 4-allyl, 4-(2-butényl), 4-carbométhoxy, et 4-carboéthoxy-pipérazino-di-thio-carboxylates, et par d'autres composés décrits plus en détail dans le Brevet E.U.A. 3.239.516; dans laquelle R^ est l'hydrogène, le fluor, le chlore, le brome, un radical alcoyle en C^-C3, carboxyle, çarboxamide (-CONI^)' N~ méthylcarboxamide, N,N-diméthylcarboxamide, et R^ est l'hydrogène, 20 le fluor, le chlore, le brome ou un radical alcoyle en C^-C^, ces composés étant représentés par exemple par la pyridine, l'c 3.280.118 par exemple; (3) la thiourée, le thioacétamide, le thiosemicarbazide, la N-alcoylthiourée ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans la partie 30 alcoyle, la N-phénylthiourée, et les sels de métaux alcalins de ces composés, tels qu'ils sont représentés par exemple dans le Brevet E.U.A. 3.278.531, et M-S-CS-OR? dans lesquelles chacun des radicaux R,. et R_ est un radical alcoyle 40 en C,-C,.( ou bien Rr et R^ pris ensemble avec l'atome d'azote 16 5 6 (2) les composés de type pyridine, de formule : 15 (4) les dithiocarbamates et les xanthates de formules : 35 69 02897 13 2001491 auquel ils sont liés complètent un noyau à 4 ou 5 atomes de carbone méthyléniques, est un radical alcoyle primaire en C^-Calcoyle secondaire en C3~C12' cycloalcoYle en C3~C7, et M est un métal alcalin, ces composés étant représentés par exemple par le N,N-5 diméthyldithiocarboxylate de sodium, le pipéridinodithiocarboxylate de sodium, et autres dithiocarboxylates de ce genre représentés dans le Brevet E.U.A. 3.258461, ou par l'éthoxydithiocarboxylate de sodium et autres xanthates de métaux alcalins préparés par la méthode de Drawert, Deuther, et Born, Ber., 93, 3064 (1960), et re-10 présentés par les xanthates de métaux alcalins servant de réactifs nucléophiles dans la demande de Brevet E.U.A. N° 426.440, déposée le 18 Janvier 1965; (5) M-N3, M-SCN, M-N02, M-CN, où M est un métal alcalin, composés représentés par l'azoture, lesthiocyanate, le nitrite ou le 15 cyanure de sodium ou de potassium, comme par exemple dans le Brevet E.U.A. 3.274.186, ou bien M est le cuivre cuivreux dans le cyanure cuivreux ou l'ion argent comme dans le cyanure d'argent, qui peuvent aussi être utilisés; (6) les composés de formule : 20 Ç Rg-C-X-M dans laquelle chaque X est l'oxygène ou le soufre, et RQ est l'hydrogène -ou un radical alcoyle en C^-C^, alcényle en C^-C^, phényle, benzyle, ou phényléthyle, ces groupements phényle, benzyle ou phényl-25 éthyle pouvant être substitués sur leurs atomes de carbonl^par^ï fi radicaux trifluorométhyle, nitro, cyano, alcoyle en C^-C^, alcoxy en C^-C2, fluor, chlore, ou brome, ou bien R^ est : mn-vr- 30 où Y est ^ NH, -O-, ou -S-, et y est O ou 1, etM est un métal alcalin ou alcalino-terreux, ces composés étant représentés par les alcanoates de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux des acides formique, acétique, propionique, butyrique, pentanoîque, 35 hexanoîque, acrylique, méthylacrylique, crotonique, 3-hexénoîque, aussi bien que des homologues soufrés de ces acides comme les acides thioacétique, thiopropionique, dithiobutyrique, dithioacétique, thiophènecarboxylique, 3-thiophènecarboxylique, 2-furoîque, ou un acide de ce genre, les sels de métaux alcalins ou de métaux alcalino-40 terreux, tels que les sels de calcium ou de magnésium des acides 69 02897 14 2001491 benzoîque, thiobenzoîque, dithiobenzoîque, phénylacétique, phényl-thioacétique, phényldithioacétique, phénylpropionique, phénylthio-propionique, phény.ldithiopropionique, et des acides substitués tels que les acides 4-trifluorométhylbenzoîque, 3-nitrophénylacétique, 5 2-cyanophénylthioacétique, 4-méthylphényldithioacétique, 3-éthyl-phénylpropionique, 4-méthoxyphénylacétique, 3-chlorophénylthio-acétique, 4-fluorophényldithiopropionique, 4-bromophényldithio-acétique, ou 2-pyrrolylacétique, -3-pyrrolylacétique, 2-pyrrolyl-thioacétique, et 3-pyrrolyldithioacétique, 2-thiénylacétique, 3-10 thiénylacétique, 2-thiénylthioacêtique, 2-furylacétique, 3-furyl-acétique, ou 3-furylthioacétique, comme représenté par exemple dans les Brevets E.U.A. 3.218.318 et 3.261.832; (7) les aminés choisies dans le groupe composé des alcoylamines primaires ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans leur groupement al-15 coyle, des dialcoylamines ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans chaque groupement alcoyle, et des trialcoylamines ayant un total de 3 à 12 atomes de carbone, des aminés cycloaliphatiques monocycliques ayant de 5 à 7 atomes de carbone, des aminés hétérocycliques contenant de l'azote saturé monocyclique et contenant de 4 à 6 atomes de 20 carbone et un total de 5 à 7 atomes cycliques, et des aminés aromatiques de formule : 25 dans laquelle chacun des radicaux Rg et R1Q est l'hydrogène ou le radical méthyle, et R^ est l'hydrogène ou un radical alcoyle en C^-Cg ou alcoxy en C2-C2' ^es exemples de ces aminés comprenant la méthylamine, 1'éthylamine, l'isopropylamine, 1'hexylamine, la dimé-30 thylamine, la diéthylamine, la dibutylamine, la dihexylamine,la pipéridine, la morpholine, la 4-méthylpipérazine, la thiomorpholine, la triméthylamine, la triéthylamine, la tributylamine, la cyclo-pentylamine, la cyclohexylamine, la cycloheptylamine, la N-méthyl-cyclohexylamine, la pipérazine, la pyrrolidine, l'aniline, la N~ 35 méthylaniline, la N,N-dimêthylaniline, la 4-méthylaniline, la 4-méthyl-N-méthylaniline, la 3-propylaniline, et les aminés de ce genre. (8) les composés de formule : R-L2-X-IÎ 40 dans laquelle X est l'oxygène ou le soufre, et R^2 est le reste 69 02897 15 2001491 d'un alcool ou d'un mercaptan, ayant de préférecce un poids moléculaire inférieur à environ 200 mais pouvant être représenté par exemple par l'hydrogène ou par les radicaux : alcoyle en c^-c^o 5 alcényle en C^-C^q alcynyle en C^-C^q haloalcoyle en C2~C"i_Q' ^lo^cényle en C^-C^q ou haloalcynyle en C3-C10 est Ie fluor, le chlore, le brome ou l'iode, cyanoalcoyle en C^-C^, 10 cycloalcoyle en C^-C^, (cycloalcoyl en C^-C.j) - (alcoyle en C^-Cg), phényle, benzyle, phényléthyle, ces radicaux phényle, benzyle, et phényléthyle pouvant être substitués sur leurs atomes de carbone cycliques par un radical alcoyle en , alcoxy en , alcoy- 15 loxycarbonyle en (-COO-alcoyle où le groupement alcoyle a de 1 à 3 atomes de carbone), fluor, chlore, brome, nitro, cyano, ou trifluorométhyle, (alcoyl en C,-C_)-X-(alcoyle en C_-Cr) où X est l'oxygène ou le X J Z o soufre, 20 (alcanoyl en C2~C^)-(alcoyle en C^-Cg), (alcanoyloxy en C^-C^)-(alcoyle en C2~cq) > (alcoyloxycarbonyl en C^-Cg)-(alcoyle en C^-Cg), et r-^j_ 25 \Y^ où Y est -O-, -S-, ou ^NH, et y est 0 à 2, etc..., ainsi que les sels de sodium, de potassium ou de calcium de tous ces composés qui ont un pKa inférieur à 11. 30 Des exemples de ces composés comprennent l'eau, l'acide sul- fhydrique, des alcools et des mercaptans tels que le méthanol, 1'éthanol, 1'isopropanol, le tert-butanol, 1'hexanol, 1'octanol, le décanol, l'alcool allylique, l'alcool 3-bûténylique, l'alcool 3-hëxénylique, l'alcool 4-octényliquei' l'alcool 9-décénylique, 35 l'alcool propargylique, le 3-butynol, le 3-hexynol, le 4-octynol, le 4-chloro-l-butanol, le cyclohexanol, le cyclopentanol, le cyclo-heptanol, le cyclopentyléthanol, le cyclohexylpropanol, le 2-chloroéthanol, le 2-bromopropanol, l'alcool 2-chloro-2-buténylique, l'alcool 2-chloro-3-butynylique, le 2-pyrrolylméthanol, le 3-40 pyrrolyl-propanol, le furanol, le 2-thiénylméthanol, le thiophénol, 69 02897 16 2001491 le 2-thiényléthanol, le 2-furylméthanol, ou le 3-furyléthanol, le 2-cyanoéthanol, le 3-cyanopropanol, l'alcool benzylique, l'alcool anisylique, l'alcool p-nitrobenzylique, le phényléthanol, le 4-trifluorométhylphényléthanol, l'alcool p-cyanobenzylique, le propyl-5 oxyéthanol, le méthoxyéthanol, 1'éthoxyéthanol, le propionoylétha-nol, le butanoyloxypropanol, le butoxycarbonyléthanol, le phénol, le p-toluol, le 3-chlorophénol, le 4-éthoxyphénol, le résorcinol ainsi que leurs mercaptans homologues, dont quelques exemples sont le méthyl mercaptan, l'allyl mercaptan, le phényl mercaptan, le 10 benzyl mercaptan, le furanethiol, le thiophènethiol, le 2-thiényl-éthyl mercaptan, le 3-thiénylméthyl mercaptan, le 2-furyléthyl mercaptan, ainsi que les sels de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux de ces alcools, phénols, et mercaptans qui ont un pKa inférieur à 11. 15 (9) les composés N-aminoalcoyldithiocarbamat« de formule : 2Q où z est 2 ou 3, R13 est un radical alcoyle en chacun des radicaux et pris séparément est un radical alcoyle en Cj-Cg, R^ et R^,- pris ensemble avec l'azote auquel ils sont liés forment un noyau contenant de 4 à 6 atomes de carbone cycliques, et R^ et R^j. pris ensemble contiennent au total pas plus de 8 atomes 25 de carbone, et M est l'hydrogène ou un métal alcalin, ces composés étant représentés par exemple par le N-méthyl-N-( 2 '-diméthylamino-éthyl)dithiocarbamate, le N-méthyl-N-(2'-diéthyl-aminoéthyl)dithio-carbamate, le N-hexyl-N-(21-di-n-propylaminoéthyl-dithiocarbamate, le N-méthyl-N-(21-morpholinoéthyl)-dithiocarbamate, ou le N-méthyl-30 N-(2'-pipéridinopropyl)dithiocarbamate, comme décrit dans le brevet E.U.A. 3.239.515. Les exemples spécifiques de produits obtenus par le procédé de cette invention et des réactifs nucléophiles que l'on peut utiliser pour les préparer par déplacement du brome des intermédiaires 35 3-bromométhyl céphalosporines, comprennent : 1'ester 7-(4'-trifluorométhylphénoxyacétamido)-3-(4-méthyl-pipérazinodithiocarboxylate)- A2-céphem-4-carboxylate, à partir du 4-méthylpipérazinodithiocarboxylate; 1'iodure d'ester 7-(2'-phénoxyacétamido)-3-(4',4'-diméthyl-40 pipérazinodithiocarboxylate) - A^-céphem-4-carboxylate, à partir 69 02897 17 2001491 du 4-méthylpipérazinodithiocarboxylate, puis traitement par l'iodu-re de méthyle; le bromure d'ester 7-(3'-chlorophénoxyacétamido)-3-(pyridino-méthyl)-{S2-céphem-4-carboxylate, à partir de la pyridine; 5 le bromure d'ester 1-J21 (3-chlorophénylmercaptoacétamido)_7-3- (3'-carbamoylpyridinométhyl)- /S2"-céphem-4-carboxylate, à partir du nicotinamide; le bromure d'ester 7-(4'-phénylbutoxyacétamido)-3-(2'-pseudo-thiouréidométhyl)- A2-céphem-4-carboxylate, à partir de la thio-10 urée; 1'ester • 1-/4"-(tert-butoxycarbamidométhyl)benzamido7-3-(2'-imidazolylthiométhyl)- ^2-céphem-4-carboxylate à partir du 2-mercaptoimidazole; 1'ester 7-/phénoxyacétamido7-3-(azidométhyl)-A 2-céphem-4-15 carboxylate, à partir de l'azoture de sodium, ainsi que le produit obtenu en réduisant le groupement 3-azidométhyle en groupement 3-aminométhy1e par hydrogénation catalytique avec un catalyseur au palladium ou au platine; le 7-(phénylmercaptoacétamido)-3-aminométhyl- A 2-céphem-4-20 carboxylate à pairtir de l'azoture de sodium, en réduisant ensuite le groupement azoture en groupement aminé; 1'ester 7-(phénylmercaptoacétcunido)-3-N,N-diméthyldithiocarba-mylméthyl- A 2-céphem-4-carboxylate à partir du sel de sodium du N,N-diméthyldithiocarbamate ; 25 l'ester 7-(éthylmercaptoacétamido)-3-N,N-diméthyldithiocarba- raylméthyl- A 2-céphem-4-carboxylate, à partir du sel de sodium du N,N-diméthyldithiocarboxylate; 1'ester 7-(3'-chlorophénoxyacétamido)-3-(picolinoylthiométhyl)-A 2-céphem-4-carboxylate, à partir du thiopicolinate de sodium; 30 l'ester 7-(4'-nitrobenzyloxyacétamido)-3-(4,-nitrobenzoyl- thioroéthyl)- A2-céphem-4-carboxylate, à partir du 4-nitrothioben-zoate de sodium; 1'ester 7-(3'-méthoxyphénylacétamido)-3-(4'-tert-butylpipéra-zinothiocarbonylthiométhyl)- A 2-céphem-4-carboxylate, .à partir du 35 4'-tert-butylpipérazinodithiocarboxylate de sodium; 1'ester 7-(3 *-chlorophénoxyacétamido)-3-(4'-méthylpipérazino-thiocarbonylthic»néthyl)-A 2-céphem-4-carboxylate à partir du 4-méthylpipérazinodithiocarboxylate de sodium; 1'ester 1-/5'-(4"-cyanophénoxy)pentanamido7-3-(4-isopropyl-40 pipérazinothiocarbonylthi 69 02897 18 2001491 partir du 4-isopropylpipérazinodithiocarboxylate de sodium; 1 ' ester 7- (2 ' -fluorophénylacétamido)-3- (N-sec-butyl-N- (2_|_-diméthylaminoéthyl)aminothiocarbonylthiométhyl)- A 2-céphem-4-carboxylate, à partir du N-sec-butyl-N-/2 '-diméthylaminoéthyl/aniino-5 dithiocarboxylate de sodium; 1 ' ester 7- (caprylamido) -3-thy 1 -N-2 (N ' -éthyl-N ' -n-hexyl-amino) éthyl7aminothiocarbonylthiométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate, à partir du N-méthyl-N-/2- (N1-éthyl-N1-n-hexylamino)-éthyl7amino-dithiocarboxylate de sodium; 10 l'ester 1-/2' -{?hénylisopropoxy)acétamido7-3-(acétoxyméthyl)- A 2-céphem-4-carboxylate à partir de l'acétate de potassium; 1'ester 7-(phénoxyacétamido)-3-(propionoxyméthyl)- A 2-céphem-4-carboxylate, à partir du propionate de sodium; et le 7-(naphtylmercaptoacétamido)-3-(hexanoyloxyméthyl)- A 2- 15 cépihem-4-carboxylate, à partir de l'hexanoate de potassium, où les groupements esters sont comme définis ci-dessus. Cette invention fournit aussi des composés de formule : 7 R-NH-CH-CH, 2CH- III C—N5 3C-CH--R' I COOR" 25 dans laquelle R est choisi dans le groupe composé de : l'hydrogène; Q .. * CH-CO- i où X est un groupement aminé, aminé protégé , hydroxyle, alcoyloxy 30 en C^-C^, -COOH, ou alcanoyloxy en C^-C^, Q H2)y-X-(CH2)z-00- 35 où X est l'oxygène ou le soufre ou bien une liaison chimique, y est un nombre entier de 0 à 2, et z est de 1 à 3, //r -CHICH-CO-, 40 69 02897 19 2GG1491 où Q, dans chacun des noyaux phényliques ci-dessus, est l'hydrogène ou un radical alcoyle en C^-C^, alcoyloxy en C^-C^, cyano, nitro, hydroxyle, chlore, brome, fluor, trifluorométhyle,c Z-C CH Z-C C-CH-CO- \ x / où. X est l'oxygène ou le soufre, et les Z séparément désignent 10 l'hydrogène, ou pris ensemble avec les carbones auxquels ils sont liés complètent vn cycle benzo-, R1—0—C C-CH-CO- Il II I H H R2 \o/ 1 2 15 où R et R sont tous deux l'hydrogène ou le radical méthyle, 2-sydnone-3-(nlcanoyle en C^-C^), alcanoyle en C^-C^Q, alcénoyle en C3~C^q, (alcoyl en C^-C^)-X-(alcanoyle en C^-C^) - où X est l'oxygène ou 20 le soufre, (alcényl en C3-C^)-X-(alcanoyle en C^-C3> où X est l'oxygène ou le soufre, haloalcanoyle en C2~cio est fluor, le chlore, ou le brome, 25 ou cyanoalcanoy 1 en C2~cio? R" est le groupement cyano (-CN) ou -OY où Y est le radical : alcoyle en C^-C^Q, alcényle en C3-C1Q, alcynyle en c3-C^q' 30 haloalcoyle en C2-C10 haloalcényle en C3_C10. hakjalcyîjb en C^-C^q où dans chacun de ces groupements haloalcoyle, haloalcényle, et haloalcynyle 11halogène est le fluor, le chlore, le brome ou l'iode, - ' 35 cycloalcoyle en C^-C^, (cycloalcoyl en C,.-^)-(alcoyle en C^-C3), (alcoyl en C^-C3)-X-(alcoyle en C^-C^) où X est l'oxygène ou le soufre, (alcanoyl en C2-C^)-(alcoyle en C^-C^)/ 40 (alcanoyloxy en C2~C^)-(alcoyle en C^-C^), 69 A2897 onni/ioi (2'-furyl)-(alcoyle en C^-Cj), (2'-thiényl)-(alcoyle en C.J-C3) , phényle, benzyle ou phényléthyle, et phényle, benzyle ou phényléthyle 5 qui peuvent être substitués su:: leurs atomes de carbone cycliques par un radical alcoyle en C^-C^, alcoyloxy en C^-C^, alcoyloxycarbonyle en C^-C^, fluor, chlore, brome, nitro, cyano, ou trifluorométhyle, ou par leurs combinaisons; et R" est choisi dans le groupe composé de : 10 - l'hydrogène, - une charge de zwitterion, ou un sel avec un cation ou un anion pharmaceutiquement acceptable, et - un radical tert-alcoyle en C.-C.., par exemple tert-butyle, tert- 4 D p=ntyle ou tert-hexyle, 15 - un radical tert-alcényle en par exemple tert-pentényle, tert-hexényle ou tert-heptényle, - un radical tertio-alcynyle en C^-C^, par exemple tert-pentynyle, tert-hexynyle ou tert-heptynyle, - le radical benzyle, 20 - le radical méthoxybenzyle, - le radical nitrobenzyle, - le radical benzhydryle, - le radical phtalimidométhyle, - le radical succinimidométhyle, 25 - le radical triméthylsilyle, ou - le radical ester de phénacyle. Certains des esters , 7-acylamido-3-cyanométhyl- et 3-oxyméthyl éther- A -céphem-4-carboxylates inclus ci-dessus sont préparés en oxydant le composé A Correspondant en 3-sulfoxyde, puis en 30 réduisant le A3-sulfoxyde en composé ester de A3-céphalosporine. Par exemple, le 7-phénoxyacétamido-3-cyanométhyl- A3 -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle est préparé en oxydant le 7-phénoxy-acétamido-3-cyanomêthyl- A^-céphem-4—carboxylate de p-méthoxybenzyle en 1-oxyde correspondant (sulfoxyde) par exemple, 35 à l'aide d'acide m-chloroperbenzoîque dans un solvant approprié, et en réduisant le sulfoxyde à l'aide de dithionite de sodium ou d'ion agent réducteur équivalent en présence de chlorure d'acétyle. Les esters 7-amino-3-cyanométhyl- ou ?-oxymêthyl éther-A 3-ciéphern-4-carboxylates , appelés composés de type nucléî- 40 que, sont préparés en scindant le groupement 7-acyle ou autre 69 "2897 21 2001491 groupement qui bloque le groupement 7-amine qui était présent au cours des étapes d'oxydation et de réduction ci-dessus décrites. Par exemple, on obtient le 7-amino-3-éthoxyméthyl- A3-céphem-4-carboxylate de p-nitrobenzyle en faisant réagir le 7-phénoxyacéta-5 mido-3-éthoxyméthyl- Z^3-céphem-4-carboxylate de p-nitrobenzyle avec PClg en présence d'une aminé tertiaire, avant traitement par un alcanol tel que le méthanol, et ensuite par l'eau pour effectuer la scission. On prépare les autres composés 7-acylamido-3-cyanométhyl et 10 3-oxyméthyl éther- C^3-céphem-4-carboxylates en acylant les composés 7-amino-3-cyanométhyl-ou 3-oxyméthyl éther-A 3 ,sous forme d'ester ou d'acide, avec le groupement acyle voulu, selon les méthodes connues d'acylation des céphalosporines. On prépare les acides 7-amino-3-cyanomêthy1- et 3-oxyméthyl 15 éther- A3-céphem-4-carboxyliques et les acides 7-acylamido-3-cyanométhyl- et 3-oxyméthyléther- A 3-céphem-4-carboxyliques en désestérifiant les esters par des méthodes connues ou par des méthodes décrites ici, soit avant soit après que le groupement 7-amine ait été ré-acylé. 20 L'invention est mieux illustrée par les exemples détaillés suivants qui montrent la préparation des esters de A ^-désacéto-xycéphalosporine de départ, le procédé de cette invention, et la méthode de transformation des produits esters de céphalosporine A : ^-fonctionnalisés en acides A 3-céphalosporaniques correspon-25 dants qui sont des substances antibiotiques actives.. EXEMPLE 1 Préparation du Delta-2 Acide Une portion de 3,63 g (0,01 mole) de 7-(phénoxy-acétamido)-3-3 méthyl- A -céphem-4-carboxylate de méthyle (préparé à partir de 30 désacétoxyceph V et de diazométhane), dans 100 cm3 de mélange pyri-dineîl^O 1:1,.a été refroidie dans un bain d'eau glacée. On a ajouté un équivalent de solution de NaOH IN, et on a agité le mélange au froid pendant 5 heures. Après dilution avec 100 cm'3 d'eau et 100 cm3 d'acétate d'éthyle, on a refroidi le mélange et on l'a acidifié 35 à pH 2,5 à l'aide de HCl à 20 peur cent . On a chassé l'acétate d'éthyle, et on a extrait la couche aqueuse une f6is à l'acétate d'éthyle. On a refroidi les couches organiques réunies, on a ajouté de l'eau, et on a ajusté le pH à 8,2 à l'aide de NaHC03 solide. On a séparé la couche aqueuse, on l'a lavée une fois à l'acétate d'éthy-40 le, puis on l'a refroidie, délayée à l'acétate d'éthyle et acidifiée 69 02897 22 2001491 à pH 2,5. On a chassé l'acétate d*éthyle, et on a lavé la couche aqueuse à l'acétate d'éthyle, puis on a lavé deux fois les couches organiques réunies avec une solution de chlorure de sodium, on les a séchées sur sulfate de magnésium, on lès a filtrées et concentrées 5 pour obtenir une mousse. On a dissous le produit mousseux dans l'acétate d'éthyle, dont on l'a fait cristalliser pour obtenir 1,6 g (45 pour cent) de l'acide 7-fe>hénoxyacétamido)-3-méthyl- A 2-céphem-4-carboxylique, P.F. 180-183° (décomposition). 10 Estérification de l'Acide Delta-2 Désacétoxycéphalosporanique 3-METHYL-7-PHENOXYACETAMIDÔ- A 2-CEPHEM-4-CARBOXYLATE DE p-METHOXYBENZYLE A line' solution agitée de 1,75 g (0,005 mole) de A 2-désacétoxyœph V /acide 7-phénoxyacétamido-3-méthyl- A 2-céphem-15 4-carboxylique7 et de 700 mg (0,005 mole) d'alcool p-méthoxybenzy-lique dans 20 cm3 de chlorure de méthylène on a ajouté une solution d'agent de condensation formé par .1,23 g (excès de 5 pour cent) de dinéopertylacétal de DMF dans le chlorure de méthylène. La dissolution était totale au bout de quelques minutes. On a agité le mélan-20 ge réactionnel pendant une nuit à la température ambiante. On a chassé le solvant et on a ajouté du benzène. Après chauffage pour provoquer la dissolution, on a laissé reposer le mélange à la température ambiante. Après séparation d'un produit de réaction secondaire cristal-25 lin, on a dilué les liqueurs mères de benzène, on les a lavées trois fois avec une solution de bicarbonate, deux fois avec une solution de chlorure de sodium, on les a séchées sur sulfate de magnésium et évaporées.On a fait cristalliser le résidu dans CC14 pour obtenir le 7-phénoxyacétamido-3-méthyl-A 2-céphem-4-30 carboxylate de 4-méthoxybenzyle. On a obtenu une première récolte de 1,15 g, P.F. 108-112°; et une seconde récolte de 0,16 g, P.F. 107-111*; rendement 55 pour cent. FONCTIOKNALISATION DU 3-METHYL-7-PHENOXYACETAMIDO- A 2-CEPHEM-4-CARBOXYLATE DE p-METHOXYBENZYLE 35 Un mélange de 235 mg de 3-méthyI-7-phénoxyacétamido- A et Z\ 3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle, de 90 mg de N-bromosuccinimide (NBS), de 14 mg d'azobisisobutyronitrile, et de 30 cm3 de CCl^, a été mis à reflux sous N2# à l'abri de la lumière, pendant 14 heures. On a refroidi le mélange réactionnel, on l'a 40 filtré, et on a concentré à sec le filtrat jaune d'or. Au résidu 69 .2897 23 nnm Ani on a ajouté 25 mg d'acétate de potassium et 15 cm3 d'acétone, et on mis ce mélange à reflux pendant six heures sous N2» à l'abri de la lumière, puis on l'a agité à la température ambiante pendant une nuit. On a concentré à sec la solution rouge-brun foncé, on a 5 repris le résidu dans le chloroforme, on l'a filtré et concentré pour obtenir 250 mg d'une huile rouge-brun. On a purifié deux fois cette huile par chromatographie en couche mince de préparation pour obtenir 103 mg d'un mélange d'esters ù 2-et ù: 3-p-méthoxybenzyliques de ceph V. 10 La scission du produit mixte ester 2- A3 à l'aide d'acide trifluoroacétique dans le benzène a donné une substance qui contenait de l'acide ceph V, antibiotique connu, comme le prouvaient-^la chromatographie en couche mince et le bioautogramme d'un chromato-gramme sur papier. 15 L'oxydation à l'acide m-chloroperbenzoîque du mélange d'esters /Li 2 et A 3 dans le chloroforme a donné un bon rendement du 3-acétoxyméthyl-7-(2'-phénoxyacétamido)- A 3-céphem-4-carboxylate-1-oxyde de p-méthoxybenzyle correspondant, P.F. 161-163°.. (après recristallisation dans le méthanol). 20 REDUCTION DU 3-ACETOXYMETHYL-7-PHENOXYACETAMIDO- A 3-CEPHEM-4-CAKBOXYLATE-l-OXYDE DE p-METHOXYBENZYLE A une solution de 500 mg du sulfoxyde, le 3-acétoxyméthyl-7- A O (2'-phénoxyacétamido)- A -céphem-4-carboxylate-l-oxyde de 4-méthoxybenzyle, dans 40 cm3 de diméthylformamide (DMF), on a ajouté 25 10 cm3 de chlorure d'acétyle puis 3 g de dithionite de sodium.Une réaction exothermique a eu lieu. Après agitation pendant 4 heures à la température ambiante pour assurer une réaction complète, on a refroidi le mélange, on l'a dilué dans le benzène et on l'a trempé à l'aide de bicarbonate de sodium aqueux. Après que le vigoureux 30 dégagement gazeux se soit calmé, on a ajouté encore du benzène, et on a séparé la couche organique et. on l'a lavée soigneusement avec vme solution aqueuse de bicarbonate de sodium puis avec une solution de chlorure de sodium, on l'a séchée sur sulfate de magnésitom, on l'a filtrée et concentrée pour obtenir 635 mg d'huile brune. 35 On a purifié ce produit sur une colonne de gel de silice à 15 pour cent d'H20. On a obtenu 253 mg d'une huile dont les spectres RMN, infrarouge (I.R.) et ultraviolet (U.V.) étaient les mêmes que ceux du 7-(2'-phénoxyacétamido)- 3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle préparé à partir d'acide 7-aminocéphalospora-40 nique (7-ACA) de fermentation. On a pu faire cristalliser ce produit 69 ,2897 24 2001491 ester huileux dans 1'éther, pour obtenir 195 mg de substance, P.F. 118-119°, dont le point de fusion n'était pas réduit quand on la mélangeait à des échantillons connus du même composé. SCISSION DE L'ESTER p-METHOXYBENZYLIQUE EN CEPH V 5 A une solution de 105 mg de 7-(phénoxy-acétamido)-3-acétoxy- méthyl- ^ 3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle et de 22 mg d'anisole dans 10 cm3 de benzène sec, on a ajouté 0,5 cm3 d'acide trifluoroacétique. On a agité le mélange pendant deux heures à la température ambiante sous azote, puis on l'a concentré à sec. On 10 a repris le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on l'a extrait trois fois à l'aide d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium. On a concentré la solution d'acétate d'éthyle pour obtenir 55 mg de produit neutre. On a refroidi les extraits du bicarbonate, on les a délayés 15 à l'acétate d'éthyle et on les a ajustés à pH 2,4 à l'aide de 20 pour cent de HC1. On a séparé la couche acétate d'éthyle et on a extrait la portion aqueuse une fois à l'acétate d'éthyle. On a lavé les couches organiques réunies deux fois avec une solution de chlorure de sodium, on les a filtrées et concentrées pour obtenir 20 86 mg d'une huile incolore, qui possédait le même R^ que l'acide 7-(phénoxyacétamido)-3-acétoxyméthyl- û 3-céphem-4-carboxylique dans un chromatogramme en couche mince. La solution chloroformique de cette huile a déposé un solide qu'on a séparé par filtration. On a concentré le filtrat pour laisser 65 mg de produit, lequel 25 s'est révélé être l'acide 7-(phénoxyacétamido)-3-acétoxyméthyl-A 3-céphem-4-carboxylique car son spectre RMN était identique à celui d'un échantillon connu de ce composé, antibiotique connu, que 11 on ne pouvait obtenir auparavant qu'à partir de 7-ACA de fermentation. 30 EXEMPLE 2 PREPARATION D'UN MELANGE DE DELTA-2 ET DELTA-3 METHYL 3-ACETOXYMETHYL-7-PHENOXYACETAMIDO-2-CEPHEM-4-CARBOXYLATES Dans un ballon à fond rond de 50 cm3 on a placé 91 mg (0,25miUi-mole) de 3-méthyl-7-phénoxyacétamido- A ^-céphem-4-cartooxylate de 35 méthyle cristallin, 45 mg (0,25 mmole) de N-bromo-succinimide, 7 mg d'azobisisobutyronitrile, et 15 cm3 de CCl^, afin de former le 3-bromométhyl-7-phénoxyacétamido-2-céphem-4-carboxylate de méthyle. On a mis le mélange, à l'abri de la lumière, à reflux sous azote pendant 14 heures, on l'a refroidi, filtré, et concentré à sec. Au 40 résidu on a ajouté 25 mg (0,25 mmole) d'acétate de potassium et 69 02897 25 29011 15 cm3 d'acétone. On a mis le-mélange, à l'abri de la lumière, à reflux sous azote pendant six heures et on l'a agité à la température ambiante pendant une nuit. Après avoir concentré la solution à sec, on a repris le résidu dans le chloroforme et on l'a filtré. 5 L'évaporation du solvant a donné 130 mg d'une huile dorée. La séparation de l'huile en ses composants par chromatographie de préparation en couche mince a donné 11 mg de produit de départ récupéré et 70 mg (rendement 65 pour cent) d'un mélange de 3-acétaxyméthyl-7-phénoxyacétamido- 2-céphem-4-carboxylate de 10 méthyle et de 3-acétoxyméthyl-7-phénoxyacétamido- A3-céphem-4-carboxylate de méthyle (structure confirmée, par RMN; rapport A 2: A3= 3:1) . EXEMPLE 3 PREPARATION D'UN MELANGE DE DELTA-2 ET DELTA-3 METHYL 15 3-AZIDOMETHYL-7-PHENOXYACETAMIDOCEPH-2-EM-4-CARBOXYLATES On a préparé le 3-bromométhyl-7-phénoxyacétamido-2-céphem-4-carboxylate de méthyle de la même manière qu'à 1'Exemple 2. Après évaporation du solvant CCl^, on a ajouté au résidu 16 mg d'azoture de sodium (0,25 mmole) et 15 cm3 d'acétone. On a mis le mélange à 20 reflux pendant six heures puis on l'a agité pendant une nuit à la température ambiante, on a fait évaporer l'acétone et on a repris le résidu dans le chloroforme avant de le filtrer. L'élimination du solvant a donné 123 mg d'huile brune. On a purifié le produit brut, huileux et brun, par chromato-25 graphie de préparation en couche mince. On a obtenu de cette manière 79 mg de substance contenant et le produit de départ et le produit azido (comme indiqué par le spectre I.R.). L'examen des spectres RMN et IR a indiqué que cette substance contenait 16 pour cent de produit de départ ( 2 = A 3 = 1:1) plus le mélange vou-30 lu de 3-azidométhyl-7-phénoxyacétamido- ù 2-céphem-4-carboxylate de méthyle et de 3-azidométhyl-7-phénoxyacétamido-A 3-céphem-4-carboxylate de méthyle ( A2: A 3 *= 3:1) avec un rendement de 65 pour cent. EXEMPLE 4 35 On mélange et on agite une solution de 7-phénoxyacétamido-3- A 2 « -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle dans le benzène sec, avec une solution de deux équivalents molaires de triméthylamine anhydre dans le benzène sec, pendant 3 heures à la température ambiante. Au bout de ce temps on chasse le solvant ben-40 zène, par décantation du produit précipité. On dissout le résidu 69 02897 26 2001491 précipité dans un mélange de 1 volume d'eau pour 1 volume d'acétone, et on le sépare sur une colonne d'échange d'ions ("Dowex lxl" sous forme acétate). La première fraction d'effluent est lyophilisée pour donner un produit vitreux qui est un mélange de 7-phénoxy-5 acétamido-3- (N,N,N-triméthylammoniumméthyl)- Q ^-céphem-4-carboxy- O late de p-méthoxybenzyle et de son isomère ^ , ainsi que les acétates. EXEMPLE 5 En suivant la méthode de l'Exemple 4, on fait réagir un 7-10(phénoxyacétamido)-3-(bromométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle avec la méthylamine pour former l'ester, le 7-(phénoxyacétamido)-3-(N-méthylaminométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle, produit qui est mélangé avec l'ester f\ ^ correspondant. 15 EXEMPLE 6 En suivant la méthode de l'Exemple 5, on prépare le produit 7- (p-méthylphénylacétamido) -3-/(fN' -carboxamido) -hydrazinométhyl/^-A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle en faisant réagir le 7-(p-méthylphénylacétamido)-3-bromométhy1-2-céphem-4-carboxylate 20 de p-méthoxybenzyle avec deux équivalents molaires de semi-carbazide h2n-nh-c(o)nh2. On transforme cet ester en un antibiotique utile en traitant l'ester par une base diluée pour former un mélange contenant un ester antibiotique, le 7-(phénoxyacétamido)-3-/Tn '-carboxamido)-25 hydrazinométhyl/- /S 3-céphem~4-carboxylate, et en éliminant le groupement ester en traitant le mélange d'esters par l'acide tri fluoroacétique. EXEMPLE 7 En suivant la méthode de l'Exemple 6, on obtient les esters 30 de céphalosporine delta-2 fonctionnalisés suivants à partir des réactifs nucléophiles indiqués : 7-(phénoxyacétamido)-3-(N-hydroxylaminométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate de benzhydryle à partir du 7-(phénoxyacétamido-3-bromométhyl)-A-céphem-4-carboxylate de benzhydryle et de l'hydroxyl-35 aminé? 7-(4'-méthylphénoxyacétamido)-3-(hydrazinométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle à partir du 7-(4'-méthyIphénoxy-acétamido)-3-(bromométhyl)- A^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle et de l'hydrazine; 40 7- (4-méthoxyphénylmercaptoacétamido) -3-/N- (4-méthylpipérazino- 69 02897 27 2001491 2 l-aminométhyl)- (S -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle à partir du 7-(4-méthoxyphénylmercaptoacétamido)-3-(bromométhyl)- A céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle et de la l-amino-4-méthyl-pipérazine; 5 7-(4'-nitrophénylacétamido)-3-(N-morpholinométhyl)- A 2-céphem- 4-carboxylate de méthoxybenzyle à partir du 7-(41-nitrophényl-' acétamido)-3-bromométhyl- A ^-céphem-4-carboxylate de bis(3,5-diméthoxyphényl)méthyle et de la morpholine, et 7-(4'-bromothiophène-2'-acétamido)-3-(N-méthylanilinométhyl)-10 A 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 7-(4'-bromo-thiophèneacétamido)-3-(bromométhyl) - A ^-céphem-4-carboxylate de tert-butyle et de la N-méthylaniline. D'autres réactifs nucléophiles contenant de l'azote que l'on peut utiliser pour préparer les esters A^-3-fonctionnalisés selon 15 le procédé de cette invention comprennent la pipérazine, l'imidazo-le, 1'imidazoline, le pyrrazole, et d'autres composés contenant des atomes nucléophiles d'oxygène, de soufre, d'azote ou de carbone, composés qui sont décrits dans la technique antérieure pour la préparation des antibiotiques de céphalosporine. 20 EXEMPLE 8 On mélange une solution de 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle dans le benzène sec, avec une solution benzénique de 2 équivalents molaires de méthyl-mercaptan. On agite le mélange à la température ambiante pendant 25 trois heures pour assurer une réaction complète. On-concentre le mélange réactionnel sous vide pour chasser le solvant. Le résidu contenait du 7-(phénoxyacétamido)-3-(méthylthiométhyl)- A ^-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle brut. EXEMPLE 9 30 En suivant la méthode de l'Exemple 8, on obtient les esters de céphalosporine delta-2-(3-fonctionnalisés) suivants à partir des réactifs nucléophiles soufrés indiqués : 7-(phénoxyacétamido)-3-(phénylthiométhyl)- A 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyïe à partir du 7-phénoxyacétamido)-3-35 bromométhyl- A 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle et du thiophénol; 7-(phényl-o 69 02897 28 2001491 7-(4'-nitrophénoxyacétamido)-3-(allylthiométhyl)- A 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 7-(4'-nitrophénoxy-acétamido)-3-bromométhyl- A 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle et de 11allylmercaptan; 5 7-/p-(tert-butoxycarbamido)phénylmercapto-acétamido7~3-(carbo- méthoxyméthylthiométhyl)- A 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 7-/p-(tert-butoxycarbamido)phénylmercaptoacétamido"7-3-bromométhyl- A 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle et du thio-glycolate de méthyle; 10 7-(3'-chlorophénoxyacétamido)-3-(N,N-diméthylaminoéthylthio- méthyl)-A 2-céphem-4-carboxylate de benzyle à partir du 7-(3'-chlorophénoxyacétamido)-3-bromométhyl- A2-céphem-4-carboxylate de benzyle et du N,N-diméthylaminoéthyl mercaptan. Ces esters de céphalosporine A 2-3-méthyl-fonctionnalisés 15 sont transformés en un mélange contenant des dérivés d'acide 3-céphalosporanique à action antibiotique par traitement des esters de A "-céphalosporine avec une base diluée, telle que la triéthyl-amine, pour former un mélange contenant l'ester de A. ^-céphalosporine mélangé à l'ester de A ^-céphalosporine correspondant, puis 20 en traitant le mélange d'esters de A 2 et A^-céphalosporine avec l'acide trifluoroacétique dans le benzène, pour former le mélange correspondant de dérivés d'acides A 2 et A 3-céphalosporaniques. EXEMPLE 10 On agite une solution de 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-25 A 2-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle dans du benzène sec, en même temps qu'on lui ajoute une solution soigneusement séchée contenant 1,1 équivalent molaire de N,N-diméthyldithiocarbamate de sodium en suspension dans le benzène. On agite le mélange à la température ambiante pendant environ 3 heures. On sépare par filtra-30 tion les solides insolubles et on concentre la solution benzénique du produit de la réaction jusqu'à un faible volume avant de la soumettre à une chromatographie sur silice. On met de côté les fractions d'éluat contenant des 7-phénoxyacétamido-3-méthyl-A 2-et A 3-céphem-4-carboxylates de p-méthoxybenzyle, tandis qu'on re-35 cueille et qu'on concentre à sec les fractions d'éluat contenant des 7-(phénoxyacétamido-3-(N,N-diméthylaminothiocarbonylthiométhyl) - A 2-céphem-4-carboxylatesde p-méthoxybenzyle.On transforme ce produit en un mélange en équilibre contenant l'acide 7-phénoxy-acétamido-3-N,N-diméthylaminothiocarbonylthiométhyl- A 3-céphem-40 4-carboxylique, en traitant l'ester (\ 2 par la pyridine, pour 29 2001491 former un mélange en équilibre des 7-phéno:îy-acêtaiaido-3-N,H-diméthylaminothiocarbonylthiométnyl- A et A ^-céphem-4-carboxylates de p-méthoxybenzyle, puis en traitant ce mélange d'esters par l'acide trifluoroacétique dans le benzène. 69 02897 BAD ORIGINAL 69 02897 30 2001491 EXEMPLE 11 En suivant la méthode de l'Exemple 10, on obtient les esters de céphalosporine delta-2-(3-fonctionnalisés) suivants à partir des réactifs nucléophiles indiqués • 5 1-(phénylmercaptoacétamido)-3-(N'-méthyl-N-pipérazinothiocar- bonylthiométhyi) - -cêph.em-4-carboxylate de 1,1-diméthylpropynyle à partir du 7-(phénylmercaptoacétamido) -3-bromométhyl- A2 -céphem-4-carboxylate de 1,1-Diméthylpropynyle et du N-méthyIpipérazinodi-t'fciocarboxylate; 10 7- (4 ' -nitrophénoxyacétamido) -3- ( thioacétoxyniéthyl) - - céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzy1e à partir du 7-(4'-nitro-phénoxyacétamido)-3-bromométhyl- -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle et du thioacétate de sodium; 7- (octanoylamido) -3-(benzoylthiométhyi) --céphem-4-carboxy--15 late de tert-butyle à partir du 7-(octanoylamido)-3-bromométhyl-2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle et du thiobenzoate de potassium; 7-(phénoxyacétamido)-3-(picolinoylthiométhyi)--céphem-4- carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 7-(phénoscy acétamido)-3- 2 20 bromométhyl- -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle et du thiopicolinace de sodium; et 7-(phényl-^, v -diméthylacétamido)-3- /N-( Z3-diméthylarainoéthyl) -K"-méthyithiocarboxyl thiométhyi_ /- Z\ - céphem-4-carboxylate de bensliydryle à partir du 7- (phényl-o( , ^ -diméthylacétamido) -3-bromo-2 25 méthyl-/X -céphem-4-carboxylate de benzhydryle et du N- ( & -dimé-thylaminoéthyl)-N-méthyldithiocarboxylate de sodium; Ces esters de -(3-méthyl-fonctiomialisé) céphalosporine, produits par le procédé de cette invention, sont facilement trans-formés en antibiotiques correspondants dérivés de ls acide .Cs -(3-30 méthyl-fonctionnalisé)-céphalosporanique, par la méthode décrite à l'Exemple 10. EXEMPLE 12 On traite une solution de 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-2-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle dans le benzène sec, 35 par une solution benzénique sèche contenant 1,1 équivalent molaire de thiourée. Après agitation pendant 5 heures à la température ambiante pour assurer une réaction complète, on ajoute 2 gouttes d'hydroxyde de tétraméthylammonium dans le méthanol et on laisse reposer le mélange pendant 1 heure de plus pour obtenir comme pro-40 duit dans le mélange brut le bromhydrate de 7-(phénoxyaeétaaiâo)- BAD ORIGINAL 69 '2897 31 ?nni40i O . O -3-formaidinothiométhyl-S\ et./\ -céphem-4-carboxylates de p-méthoxybenzyle. EXEMPLE 13 En suivant les méthodes de 1J Exemple 12, on remplace la thio-5 urée par les réactifs nucléophiles suivants pour obtenir les produits indiqués : 7-(phénoxyacétamido)-3-(2'-pyrimidylthiométhyi)-^ 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir de la 2-mercaptopyrimidine, 2 7-(phénoxyacétamido)-3-(2ithioazolylthiométhyi)--céphem-10 4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mercaptothioazole, 7- (phénoxyacétamido) -3-(2-benzimidazolylthiométhyi) -/S. -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mercaptoben-zimidazole; 2 7-(phénoxyacétamido)-3-(21-pyridylthiométhyi)-céphem-15 4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir de la 2-mercaptopyridine; o 7-(phénoxyacétamido)-3-(2Abenzothiazolylthiométhyi)~/\ -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mercaptoben-zothiazole: 7-(phénoxyacétamido)-3-(2'-imidazolylthiométhyi)2-céphem-20 4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mércaptoimidazole; 7-(phénoxyacétamido)-3-/3'-(11,3',4'-thiadiazolyl_/ thiométhyi-^2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mercap-to-1,3,4-thiadiazole; 7-(phénoxyacétamido)-3-/2'-(11,31, 41-oxadiazolyl/thiométhyl-25 A 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du 2-mercap-to-l,3,4-oxadiazole; et 2 7-(phénoxyacétamido)-3-(2'-pyrazylthiométhyl)-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir de la 2-mercaptopyrazine; Ces produits esters de/X -céphalosporine sont utiles comme o 30 intermédiaires pour former les antibiotiques,/^ -sulfure-acide correspondants par le procédé d'équilibrage/scission de l'ester décrit ci-dessus. EXEMPLE 14 On mélange une solution de 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-35 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle, dans 1'acétonitrile sec, avec 1,1 équivalent molaire de nitrite de sodium sec, et on agite le mélange pendant 13 heures à la température ambiante pour former le 7-(phénoxyacétamido)-3-(nitrométhyl)-/^N -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle. Cet ester de^îs2-céphalosporine, 40 quand on le transforme en dérivé d'acide/\3-céphalosporanigue 69 02897 32 2001491 correspondant, présente une action antibiotique vis-à-vis de S., lutea, 9elon une méthode de biautographie. Le spectre RMN de ce produit révèle la présence d'un groupement 31-méthylène. EXEMPLE 15 5 En suivant la méthode de l'Exemple 14 3: en remplaçant le nj- trite de sodium par les nucléophiles indiqués contenant un sel de métal alcalin, de cuivre ou d'argent, on obtient les 4-esters de 2-céphalosporine suivants : 7-(phénoxyacétamido)-3-(cyanothiométhyl)-céphem-4-carbo- 10 xylate de 4-méthoxybenzyle à partir du thiocyanate de sodium; 7- (phénoxyacétamido) -3- (cyanométhyl) -i^2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du cyanure cuivreux dans le diméthyl- 2 sulfoxyde, et 7-(phénoxyacétamido) -3-(cyanométhyl)-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du cyanure d'argent. 15 Ces produits esters de^X -céphalosporine obtenus par le pro cédé de cette invention peuvent être utilisés comme intermédiaires pour former les antibiotiques correspondants dérivés d'acide de /\ -céphalosporine, ou des sels de ces acides, par les méthodes décrites à l'Exemple 1. 20 EXEMPLE 16 On mélange à la température ambiante pendant 5 heures un mélange de 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-/^2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle dans le benzène sec et 1,1 équivalent molaire de pyridine, pour former le bromhydrate de 7-phénoxyacétamido-3- 2 25 (1-pyridinométhyl)-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle. 2 On transforme facilement l'ester de-céphalosporine produit en un dérivé d'acide -céphalosporanique connu, par les méthodes décrites ci-dessus. EXEMPLE 17 30 On mélange des portions aliquotes d'une solution de 7-(phénoxy- 2 /tert acétamido)-3-bromométhyl--céphem-4-carboxylate de -butyle dans le benzène sec, avec 1,1 équivalent molaire d'une des aminés énumé- rées ci-dessous, et on agite pendant 3 à 5 heures à la température ambiante pour former les sels indiqués d1ester de céphalosporine : S 35 Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(3'-picolino-1'-méthyl)- /S. 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de la 3-picoline; Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(4'-carbamyl-1'-pyridinomé-thyl )- -céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'iso-nicotinamide; 40 Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(3'-carbamyl-11- 69 02897 2001491 pyridinométhyl)- /\2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du nicotinamide ; Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-/3*-(N*-méthylcarbamyl)-1-pyri-dino/raéthyl- ^^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 5 N-méthylnicotinamide; Bromure de 7- (phénoxyacétamido) -3- (3 ' -bromo-N-pyridino-méthyl)-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de la 3-bromo-pyridine; Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(2*,31-diméthyl-N-pyridino-10 méthyl) - Bromure de 1-(phénoxyacétamido)-3-(3*-carboxy-N-pyridinométhyl) -2^>2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'acide nico-tinique; 15 Bromure de 7-(phénoxyacétamido) -3- (4* -cyano-N-pyridinométhyl- ' -céphem-4 -carboxylate de tert-butyle à partir de la 4-cyano-pyridine; Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(3'-sulfonaraido-N-pyridinomé-thyl)--céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de la 3-20 sulfonamidopyridine; Bromure de 7-(phénoxyacétamido)-3-(1J-pyrimidinométhyl)-^^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de la pyrimidine; Bromure de 7- (phénoxyacétamido) -3- (3 ' -thiazolylméthyl) - - 30 EXEMPLE 18 En suivant la méthode:décrite à 11 Exemple 1, on remplace l'acétate de potassium qui y est utilisé par d'autres réactifs nucléophiles contenant de l'oxygène, pour former les produits esters de 2-céphalosporine indiqués à partir de l'intermédiaire 7-(phéno-35 xyacétamido)-3-bromométhyl- ^ -céphem-4-carboxylate de phtalimido-méthyle ou de succinimidométhyie, pour obtenir lés produits céphalos-poraniques 3-fonctionnalisés suivants : 7-(phénoxyacétamido)-3-(benzoyloxyméthyl)2-céphem-4-carboxylate de phtalimidométhyle à partir du benzoate de sodium; 2 40 1-(phénoxyacétamido)-3-(phénylacétoxyméthyl)-céphem-4- 69 02897 34 2001491 carboxylate de succinimidométhyle à partir du phénylacétate de sodium; 7- (phénoxyacétamido) -3- (thiophène-2-carboxyméthyj)-./S -cépheffl-4-carboxylate de phtalimidométhyle à partir du thiophène-2-carbo-5 xylate de sodium; 7-(phénoxyacétamido)-3-(indole-2-acétoxyméthyl)~/\ 2-céphem-4-carboxylate de succinimidométhyle à partir du 2-indoleacétate de sodium; 2 7- (phénoxyacétamido) -3- (carbométhoxycarboxyméthyl) -céphem- 10 4-carboxylate de phtalimidométhyle à partir du méthyl-oxalate de sodium; 7-(phénoxyacétamido)-3-(hydroxyméthyl) 2-céphem-4-carboxylate de succinimidométhyle à partir de l'eau; 7-(phénoxyacétamido)-3-(méthoxy-carbonyloxyméthyl)-15 céphem-4-carboxylate de phtalimidométhyle à partir du méthylcarbo-nate de sodium; 7- (phénoxyacétamido) -3- (méthylthiocarbonyloxyméthyl) -céphem-4-carboxylate de succinimidométhyle à partir du S-méthyl monothiocarbonate de sodium; 20 On transforme les produits esters de/b> -céphalosporine en antibiotiques d1acide&2-céphalosporanique par la méthode d'équi-librage/désestérification décrite ci-dessus, ou bien par les méthodes d1oxydo-réduction précédentes. EXEMPLE 19 25 A un équivalent molaire de 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl- A- *-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle dissous dans du mé-thanol absolu, on a ajouté 2 équivalents molaires de carbonate de calcium pulvérisé anhydre. On a agité le mélange à la température ambiante pendant 24 heures pour assurer une réaction complète, on 30 l'a filtré, et on a concentré le filtrat à sec. On a dissous le résidu, contenant le 7-(phénoxyacétamido)-3-méthoxyméthyl-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle, dand du benzène. On a ajouté une petite quantité de pyridine à la solution benzénique pour équilibrer la double liaison et former un mélange des esters 2 3 35 de -et A -céphalosporine. Au bout de plusieurs heures, on a ajouté au produit un excès d'acide trifluoroacétique dans 1'aniso-le et on a agité le mélange pendant 2 heures pour former l'acide 7-phénoxyacétamido-3-méthoxyméthyl- -céphem-4-carboxylique à action antibiotique, mélangé à de l'acide 7-phénoxyacétamido-3-40 méthoxyméthyl - /\ -céphem-4 -carboxyl ique. 69 *2997 35 2001491 EXEMPLE 20 En suivant la méthode de l'Exemple 19, èxcèpté qu'on change les réactifs nucléophiles oxygénés, on obtient les produits esters n de A -céphalosporine suivants à partir des réactifs nucléophiles 5 indiqués : 7- (phénoxyacétamido) -3-(thiophène-2-méthoxyméthyl) 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir du thiophène-2-carbinol; 7-(phénoxyacétamido)-3-(4-/tert-butoxycarbonyl-pipéridinyl/ oxyméthyl) - 7-(phénoxyacétamido)-3-(diphénylméthylidèneaminooxyméthyl)-/à. 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir de la benzo-phénone oxime; et 7-(phénoxyacétamido)-3-(isopropylidèneaminooxyméthyl)- -15 céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle à partir de l'acétone oxime. On transforme facilement les dérivés d'ester de EXEMPLE 21 Estérificat ion A une suspension agitée de 6,98 g (0,002 mole) *d'acide 2-acide non récupéré) du 3-méthyl-7-phénoxyacétamido)- ^^2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle, p.f. 108-112° C. On a délayé à l'acétate d'éthyle les liqueurs aqueuses épuisées 40 de bicarbonate de sodium, on les a refroidies et on les a ajustées 69 02897 36 2001491 à pH 2,5. La couche organique a donné 1,56 g d'acide 3-méthyl-7-phénoxyacétamido--/^ 2-céphem-4-carboxylique cristallin et incolore, qu'on pouvait réutiliser dans le processus d'estérification. Fonctionnalisation du groupement 3-méthyle 5 On a traité une portion de 1,17 g du 3-méthyl-7-phénoxyacéta mido-/^ 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle par la N-bromosuccinimide dans le tétrachlorure de carbone, en présence d'azobis-isobutyronitrile, pour former le 3-bromométhyl-7-phénoxyacétamido-2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle. On a dissous ce 10 bromure -ester /\2-allvlique dans 100 cm3 de méthanol absolu contenant 2 équivalents molaires de N,N-diéthyl aniline pour absorber le bromure acide sous-produit. On a agité ce mélange à la température ambiante pendant 24 heures pour assurer une réaction complète, puis on l'a concentré à sec, on l'a repris dans le benzène, 15 on l'a extrait deux fois avec une solution froide de 5% d'acide chlorhydrique, une solution de bicarbonate de sodium, une solution de chlorure de sodium, on l'a séché sur sulfate de magnésium, on l'a filtré et concentré pour obtenir 970 mg d'une huile brune. On a soumis cette huile brune à une chromatographie sur une colonne 20 de gel de çilice contenant 15 pour cent d'eau, en utilisant un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle comme éluant. Une solution benzénique contenant environ 4 pour cent d1acétate d'éthyle a élué à peu près 15 pour cent de produit de départ désacétoxy non réagi. Une solution benzénique contenant environ 8 pour cent d'acétate 25 d'éthyle a élué le 7-phénoxyacétamido-'Q2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle-3-méthoxyméthyle, p.f. 116-118° C, après recristallisation dans le méthanol, avec un rendement de 40 pour cent. La structure a été confirmée par le spectre de résonance magnétique nucléaire et par l'analyse élémentaire. 30 Formation du sulfoxyde A une solution refroidie de 215 mg du 7-phénoxyacétamido-& 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle-3-méthoxyméthyle produit par cette invention, dans 5 cm3 de chloroforme, on a ajouté une solution de 85 mg d'acide m-chloroperbenzoîque (pureté 88 pour 35 cent) dans le chloroforme. On a agité le mélange et on l'a laissé se réchauffer doucement pendant 1 heure. On a lavé le chloroforme avec une solution de bicarbonate de sodium puis une solution de chlorure de sodium, on a séché sur sulfate de magnésium, on a filtré et concentré. On a fait cristalliser le résidu solide dans du ben-40 zène contenant du chlorure de méthylène, pour obtenir 82 mg de 69 02897 37 2001491 3-méthoxyméthyl-7-phénoxyacétamido-/A -céphem-4-carboxylate-1-oxyde de 4-méthoxybenzyle, p.f. 183-185° C, qui a donné une analyse élémentaire satisfaisante. D'autres expériences ont montré que des solvants hydroxyliques 5 tels que 11isopropanol ou le tert-butanol donnaient de meilleurs rendements que le chloroforme dans cette réaction. Réduction du sulfoxyde A une solution de 1,028 g (0,002 mole) du 3-méthoxyméthyl-7-phénoxyacétamido- A3-céphem-4-carboxylate-1-oxyde de 4-méthoxy-10 benzyle dans 75 cm3 de diméthylformamide sec on a ajouté 15 cm3 de chlorure d'acétyle puis 6 g de dithionite de sodium (Ma2S20^). Après agitation à la température ambiante pendant 4 heures, on a refroidi le mélange obtenu et on a ajouté du benzène et une solution aqueuse de bicarbonate de sodium. Après que la décomposition 15 de l'excès de chlorure d'acétyle ait été terminfe, on a ajouté de l'eau et on a extrait le mélange deux fois avec du benzène. On a lavé les extraits benzéniques réunis avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, puis avec une solution de chlorure de sodium, puis on les a séchés sur sulfate de magnésium, on les a filtrés et 20 concentrés pour obtenir 1,32 g de 3-méthoxyméthyl-7-pfeênoxyacéta-mido- ^^3-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle brut, semi-solide brun foncé. On a purifié cet ester de A3 -céphalosporine brut par chromatographie sur colonne et on l'a élué à l'aide d'un gel de silice-25 colonne à 15 pour cent d'eau utilisant comme éluant du benzène avec 5 pour cent d'acétate d'éthyle. On a obtenu 300 mg de 3-méthoxymé-thyl-7-phénoxyacétamido-^Cb>3-céphem-4 -carbostylate de 4-méthoxyben-zyle, p.f. 116-117,5° C, après cristallisation dans l'éthyl éther. On a vérifié cette structure supposée par spectrographie RMN et 30 par analyse élémentaire. Elimination de 1* ester A une solution de 174 mg de 3-méthoxyméthyl-7-phénoxyacétamido-3-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle et de 119 mg d'anisole dans 25 cm3 de benzène sec, on a ajouté 1,25 cm3 d'acide trifluo-35 roacétique. Après agitation pendant 2 heures à la température ambiante, on a concentré le mélange réactionnel, oh a repris le résidu dans l'acétate d'éthyle, et on a extrait trois fois le mélange obtenu dans l'acétate d'éthyle à l'aide d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium. On a refroidi les extraits de bicar-40 bonate aqueux, on les a délayés à l'acétate d'éthyle et on les a 69 02897 38 2001491 acidifiés à pH 2,8. A partir de la couche acétated*éthyle on a obtenu par évaporation 140 mg d'une mousse, qui a donné 86 mg d'acide 3 -méthoxyïiiéthyl-7 -phénoxyacétamido~/\ 3-céphem-4-carboxy-lique, p.f. 135-137° C, après cristallisation dans 1'éther. Cet 5 acide a donné une zone à action antibiotique sur le bioautogramme de son chromatogramme sur papier. La tache obtenue pour le dérivé se déplaçait un peu plus lentement que celle obtenue pour le désacétoxyceph V. EXEMPLE 22 10 3 -cvanométhvl-7-phénoxyacétamido2 -céphem-4 -carboxyl ate de p-méthoxvbenzvle On a dissous une portion du 3-bromométhyle-7-phénoxyacétamido-2-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle brut obtenu à partir de 585 mg du 3-méthyl-7-phénoxyacétamido-^^2-céphalosporanate 15 de p-méthoxybenzyle correspondant, dans 10 cm3 de dimêthylsulfoxyde sec, et on l'a ajoutéeà une suspension de 55 mg de cyanure cuivreux (0,5 équivalent molaire pour le produit de départ) dans 5 cm3 de dimêthylsulfoxyde. On a agité le mélange pendant 6 heures à la température ambiante. On a ensuite ajouté du benzène et on a 20 effectué des extractions du mélange obtenu,de la façon suivante : 3 fois avec une solution aqueuse de chlorure de sodium, 2 fois avec une solution aqueuse froide à 5 pour cent d'acide chlorhydrique, 2 fois avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, 2 fois avec une solution aqueuse de chlorure de sodium. On a séché le 25 résidu sur sulfate de magnésium anhydre, on l'a filtré et concentré pour obtenir 392 mg de produit brut. On a introduit ce produit brut dans une colonne de gel de silice à 15 pour cent d'H-O. On a élue le 3-méthyl—7-phénoxyacéta-A 2 mi do- -ci -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzy]e de départ avec 30 des mélanges de benzène-et-2 pour cent d'acétate d'éthyle et de benzène-4 pour cent d'acétate d'éthyle. Les mélanges de benzène à 4 pour cent d'acétate d'éthyle et de benzène à 8 pour cent d'acétate d'éthyle ont élué le 3-cyanométhyl-7-phénoxyacétamido--^*^2-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle désiré, que l'on a fait 35 cristalliser dans l'éthyl éther, p.f. 119-120° C. La structure de ce produit désiré a été confirmée par le spectre RMN, par spectro-raphie de masse, et par analyse élémentaire. . 3-cyanométhyl-7-phénoxyacétamido- -£^3-céphem-4-carboxylate-l-oxyde de 4-méthoxvbenzvle 40 A une solution de 372 mg de 3-cyanométhyl-7-phénoxyacétamido- 69 02897 39 20 C1491 2-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle dans 300 cm3 d'alcool isopropylique on a ajouté une solution de 133 mg d1acide métachlo-roperbenzoîque dans l'alcool isopropylique. On a agité ce mélange pendant une nuit à la température ambiante. On a recueilli, par 5 filtratiomessorage, le sulfoxyde qui a précipité, le 3-cyanomé-thyl-7-phénoxyacétamido- 3-cvanométhvl-7-phénoxvacétamido—^ 3-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzvle A une solution de 400 mg du 3-cyancnéthyl-7-phénoxyacétamido-20 '-céphem-4-carboxylate-1-oxyde de 4-méthoxybenzyle, préparé comme décrit ci-dessus, dans 25 cm3 de diméthylformamide sec, on a ajouté 1,6 g de dithionite de sodium (Na2S20^). On a refroidi le mélange dans un bain d'eau glacée, et on a ajouté 4,5 cm3 de chlorure d'acétyle. On a agité le mélange dans le bain froid pendant 25 1 heure puis on l'a versé dans un mélange aqueux froid de solution de bicarbonate de sodium et de benzène. Après que l'excès de chlorure d'acétyle se soit complètement décomposé, on a encore ajouté du benzène, et on a lavé le mélange avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium puis avec des solutions aqueuses de chlorure 30 de sodium, on l'a séché sur sulfate de magnésium, on l'a filtré et concentré pour obtenir 620 mg de produit 3-cyanométhyl-7-phénoxyacétamido- -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle brut. On a introduit ce produit brut dans une colonne de 40 g de gel de silice à 15 pour cent d'eau. On a élue le 3-cyanométhyl-7-phéno-35 xyacétamido- &> 3-céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle pur avec un mélange de benzène et de 4 pour cent d'acétate d'éthyle, et on l'a fait cristallisa:dans l'éthyl éther. Il avait un point de fusion de 145-147° C. Sa structure a été confirmée par des méthodes spectroscopiques. 40 On a traité le 3-cyanométhyl-7-phénoxyacétamido-'^ 3-céphem- £0 HOQQ7 40 2001491 -4-carboxylate de 4-méthoxybenzyle avec un excès molaire d'acide trifluoroacétique en solution benzénique à la température ambiante pendant 2 heures, pour former l'acide 3-cyanométhyl-7-phénoxy-acétamido--A -céphem-4-carboxylique correspondant, qui a une action 5 antibiotique contre le Bacillus subtilis, comme le prouve le bioau-togramme de son chromatogramme sur papier. EXEMPLE 23 Préparation du 7-phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-2-céphem-4-carboxylate 10 de tert-butyle Une solution de 8,08 g (20 mmoles) de 7-(phénoxyacétamido)-3-méthyl- -céphem-carboxylate de 4-tert-butyle, de 5,0 g de N-bromosuccinimide, et de 50 mg d'azobisisobutyronitrile dans 800 ml de tétrachlorure de carbone, a été mise à reflux sous azote jus-15 qu'à ce qu'on obtienne un test négatif des iodures à l'amidon (5 heures). On a refroidi le mélange réactionnel, on a séparé la succinimide par filtration, et on a chassé le solvant sous pression réduite pour obtenir 11,8 g de produit brut. Un spectre RMN a révélé la ffiule présence de 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-20 céphem-4-carboxylate de tert-butyle souillé par des traces de suc-cinimide (rendement / à 90 pour cent). EXEMPLE 24 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxvméthvl-2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle 25 On a réchauffé, au bain de vapeur jusqu'à environ 70° C et i pendant 20 minutes, une solution de 3,51 g de 7-phénoxyacétamido)-3-bromométhyl-^ -céphem-4-carboxylate de 4-tert-butyle, préparé comme décrit à l'Exemple 23,dans 100 ml d'isopropanol. On a chassé sous pression réduite l'excès d'isopropanol. On a dissous. 30 le résidu dans du benzène, on l'a lavé avec une solution aqueuse à 5 pour cent de bicarbonate de sodium, puis avec de l'eau, on l'a séché sur sulfate de sodium, et on l'a concentré à sec pour obtenir 2,32 g de 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxyméthyl-^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle brut comme produit. Les analy= 35 ses spectrales ont confirmé sa structure. EXEMPLE 25 7-phénoxyacétamido-3-t ert-butoxyméthyl-2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle On a agité à reflux (83° C environ) pendant 90 minutes une 2 40 solution de 1,00 g de 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-- 69 02897 41 2001491 céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 50 ml d'alcool tert-butylique. On a ensuite chassé l'alcool solvant sous pression réduite et on a dissous le résidu dans de l'acétate d'éthyle. On a réchauffé la solution acétate d'éthyle, on l'a traitée par du 5 charbon décolorant, on l'a filtrée et on l'a concentrée à sec pour obtenir 1,36 g de 7-phénoxyacétamido-3-tert-butoxynéthy1- 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle brut. On a soumis le produit brut à une chromatographie sur 75 g d'un gel de silice à 15 pour cent d'eau, pour obtenir 0,563 g du produit 7-phénoxyacétamido-10 3-tert-butoxyméthyl--céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans l'éluat obtenu à partir de 10 pour cent d'acétate d'éthyle i»é luarfc benzénique. La structure du produit a été confirmée par les données spectrales. EXEMPLE 26 15 On a préparé le 7-phénoxyacétamido-3-cyclopentyloxyméthyl- 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle en réchauffant le 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-/£^ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans un excès d'alcool cyclopentylique, comme décrit à 1' Exemple 24. 20 On prépare des composés esters de 3-oxy-éther- /*$-céphalos porine analogues en réchauffant le 7-acylamido-3-bromométhyl- ^2-céphem-4-carboxylate approprié mélangé à un excès stoechiométrique de l'alcool primaire, secondaire ou tertiaire voulu. EXEMPLE 27 25 Oxydation En utilisant l'ester 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxyméthyl- A 2 '—* -céphem-4-carboxylate de tert-butyle comme illustration, cet exemple montre comment les esters de 3-oxy-éther- -céphalosporine décrits ci-dessus peuvent être oxydés en esters correspon-30 dants de Z^.3-céphem-1 -oxyde, réduits en^3-céphem -esters correspondants, et désestérifiés pour former les antibiotiques de -céphem acide. On a dissous du 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxyméthyl - 2 -céphem-4-carboxylate de tert-butyle brut C2,32 g), obtenu ci-dessus 35 dans tui mélange de chlorure de méthylène et de 50 ml d* isopropanol, et on a agité à la température de la glace en même temps qu'on a ajouté"goutte à goutte une solution de 1,00 g d'acide m-chloroperbenzoîque dans 50 ml de chlorure de méthylène. A la fin de l'addition, on a chassé le solvant sous pression réduite. On a 40 dissous le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on l'a lavé avec une 69 02897 42 2001491 solution aqueuse à 5 pour cent de bicarbonate de sodium, on l'a séché sur sulfate de sodium et on l'a concentré à sec, pour obtenir 2,16 g de l'ester sulfoxyde brut, le 7-phénoxyacétamido-3-i sopr opoxyméthyl -céphem-4-carboxylate-1-oxyde de tert-butyle. 5 L'ester sulfoxyde brut a été soumis à une chromatographie sur 200 g de gel de silice à 15 pour cent d'eau, pour donner 1,10 g de l'ester sulfoxyde pur, dans un mélange à 40 pour cent d'acétate d'éthyle et 60 pour cent de benzène. On a vérifié la structure de 1'ester sulfoxyde pur à l'aide des données spectrales. 10 Réduction On a agité, à 25° C pendant 2 heures, une solution de 0,891 g de l'ester sulfoxyde, le 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxyméthyl-A3 1 -céphem-4-carboxylate-1-oxyde de tert-butyle, de 0,71 g de chlorure stanneux, de 0,5 ml de chlorure d'acétyle, de 15 ml d'acé-15 tonitrile, et de 5 ml de diméthylformamide. On a chassé les solvants sous pression réduite et on a mis le résidu en suspension dans l'acétate d'éthyle. On a lavé deux fois la suspension dans l'acétate d'éthyle à l'aide d'une solution aqueuse à 3 pour cent d'acide chlorhydrique,cfune solution aqueuse à 5 pour cent de bi-20 carbonate de sodium, puis à l'aide d'eau, on l'a séchée sur sulfate de sodium, et on l'a concentrée à sec, pour obtenir 0,781 g de l'ester (sulfure) réduit, le 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxymé-thyl- Les analyses spectrales ont confirmé sa structure. 25 Désestérification On a agité, à 25° C pendant 25 heures pour assurer une réaction complète, une solution de 0,156 g de l'ester 7-phénoxyacéta-mido-3-isopropoxyméthyl-& 3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 7 ml d'acide formique à 98 pour cent et d'eau. On a versé le 30 mélange réactionnel dans de l'eau et on l'a extrait à l'acétate d'éthyle. On a lavé la solution dans l'acétate d'éthyle avec de l'eau puis on l'a extraite avec une solution aqueuse à 5 pour cent de bicarbonate de sodium. On a acidifié la solution obtenue avec de l'acide chlorhydrique aqueux à 3 pour cent, et on l'a extraite 35 à l'acétate d'éthyle. On a séché sur sulfate de sodium la solution obtenue dans l'acétate d'éthyle et on l'a concentrée à sec pour obtenir 0,088 g de l'acide libre, l'acide 7-phénoxyacétamido-3-isopropoxyméthyl- 3-céphem-4-carboxylique, qui est un antibiotique actif vis-à-vis d'un groupe de staphylocoques sensibles ou 40 résistants à la pénicilline dans un test in vitro. 69 02897 43 2001491 EXEMPLES 28 à 50 En suivant les méthodes décrites ci-dessus, on a préparé les _ 2 esters 3-oxyméthyl-/A -céphem-4-carboxylates supplémentaires suivants en dissolvant et en réchauffant le 7-phénoxyacétamido-3-5 bromométhyl- A2 '-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans un excès de l'alcool indiqué 28. 7-phénoxyacétamido-3-benzyloxyméthyl-A2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, à partir de l'alcool benzylique; 2 9. 7-phénoxyacétamido-3(1-cyclohexylméthoxy)méthyl- A2- 10 céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du cyclohexylméthanol; 30. 7-phénoxyacétamido-3-n-butoxyméthyl—^ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du n-butanol; 31. 7-phénoxyacétamido-3-(2'-tétrahydrofurylméthoxy)méthyl-^ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-tétrahydro- 15 furylméthanol; 32. 7-phénoxyacétamido-3-(acétylméthoxy)méthyl-^2-céphera-4-carboxylate de tert-butyle à partir de 1' -hydroxyacétone; 33. 7-phénoxyacétamido-3-(21-méthoxyéthoxy)méthyl- A2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-méthoxyéthanol; 20 34. 7-phénoxyacétamido-3-(p-méthoxybenzyloxy)méthyl--^2- céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'alcool p-méthoxy-benzylique; 35. 7-phénoxyacétamido-3-propargyloxyméthyl-^i2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'alcool propargylique; 25 36. 7-phénoxyacétamido-3-(2 '-trifluoroéthoxy)méthyl-- céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2,2,2-trifluoro-éthanol; 37. 7-phénoxyacétamido-3-(carboéthoxyméthoxy)méthyl- -^^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'O^ -hydroxy- 30 acétate d'éthyle; 38.7-phénoxyacétamido-3- (2' -acétoxyéthoxy ) méthyl - 2 -céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-acétoxyéthanol; 39. 7-phénoxyacétamido-3-(2-bromoéthoxy)-méthyl-^^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-bromoéthanol; 35 40. 7-phénoxyacétamido-3-(3'-bromopropoxy)méthyl- A2 -céphem- 4-carboxylate de tert-butyle à partir du 3-bromoJ-n-propanol ; 41. 7-phénoxyacétamido-3- (2'-allyloxy)-méthyl-A2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'alcool allylique; 42. 7-phénoxyacétamido-3- (21 -méthylthioéthoxy)méthyl- -A2- 40 céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-méthylthioéthanol; 60 n?po7 44 2001491 43. 7-phénoxyacétamido-3-(4*-nitrophénoxy)méthyl~/\ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 4-nitrophénol; 44. 7-phénoxyacétamido-3-phénoxvméthvl-2-céphem-4-carbo-xylate de tert-butyle à partir du phénol? 5 45. 7-phénoxyacétamido-3-(4'-méthyl-phénoxy)méthyl- A2- céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du p-méthylphénol; 46. 7-phénoxyacétamido-3-(2'-cyanoéthoxy)méthyl-^ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-cyanoéthanol? 47. 7-phénoxyacétamido-3- (3 ' -tétrahydrofuryloxyméthyl) -/^2-10 céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'alcool 3- furylique? 48. 7-phénoxyacétamido-3-/l'-(carboéthoxyi-éthoxY/-^1 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2-hydroxypropionate d'éthyle; 15 49. 7-phénoxyacétamido-3-(2' -chloroallyloxyméthyl)-^2-céphem- 4-carboxylate de tert-butyle à partir de l'alcool 2-chloroallyli-que? 50. 7-phénoxyacétamido-3-(2'-thiénylméthoxy)méthyl-^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle à partir du 2'-thiénylméthanol. 20 Le tableau suivant donne les résultats de RMN concernant le groupement 3' dans certains des nouveaux composés de cette invention". Les résultats sont donnés en parties par million (p.pm) de décalage par rapport au tétraméthylsilane dans le chloroforme deu-téré comme solvant. Les résultats sont présentés comme suit : 25 (a) = décalage chimique en p.pm ( ) (b) - description des pics du spectre s = singulet d = doublet t = triplet 30 m - multiplet q r= quadruplet (c)' = nombre de protons Le premier groupe de composés était constitué par les 7-phénoxyacétamido-3-oxyméthyléther---^2-céphem-4-carboxylates de 35 tert-butyle de formule m 02897 45 2001491 0och2comï-CH-=GH GH a a » C=C—H C-CH2OR / 'ce'" 5 CC>2-tert-butyle oû R Vciriait ccxane indiqué : 69 02897 46 0014 Composé (R) 3-atét Fixé au 3-méthvlëne -H 4,20 (s) 2,85 (s) (1) "CE, 4» 0 (d) 3,29 (s) (3) =SH?CH3 3, 92 (s) 3,30 Cq) (2) , 1,2 Ct) (3) 5 ,-CEU, -CH >CH3 4,05 (s) 3,60 (m) CD , 1,18 (d) (S) CH3 -C-CH, 3,95 (s) 1,20 (s) (9) 10 i J ch3 v -«2- 0 4,10 (q) 4,50 (s) (2) , 7,35 (s) (5) II -CH2CH20CCH3 4,20 (m) 3,60 (t) (2) , 4,20 (t) (2), 15 2,10 (s) (3) -CH2CH2CN 4,12 (q) 3,60 (t) (2) , 2,60 (t) (2) -CH2CH2OCH3 4,20 (q) 3,30 (s) (4) , 3,45 (s) (3) h 4,0-4 ,2 (m) 4,2 (m) (1) 20 -ch2ch2ch2ch3 4,0 (q) 0,90 3,30 (t) (q) (3) (2) , 1,50 (m) (4), -=H2-k0^ 1,8 (m) (4) , 3,30 (d) (2), 4,10 (m) 3,8 (m) (3) 25 -CH2CH2SCH3 3,80 (m) 2,1 (s) (3) ,3,6 (m) (4) 0 II -CH2COCH2CH3 0 4,20 (m) 1,25 4,2 (t) (q) (3) (2) , 4,0 (s) (2) , 30 II -CH2CCH3 4,12 (q) 2,15 (s) (3) , 4,00 (s) (2) -CH2CH2Br 4,10 (q) 3,3-3 ,9 (m) (4) -CH2^ Clf 4,17 (s) 2,5 m (D , 4,10 (d) (2) -ch2c6h5 4,0 (q) 3,2 (2) (d) , 1,0-1,9 (m) -ch2ch=ch2 4/0 (m) 4,0 (M) (2) , 5,0-5,5 (m) (3) 35 -CH2CH2CH2Br 4,10 (m) 2,0 (m) (2) , 3,3-3,8 (m) (4) -CH-COOCH2CH3 ch3 4,10 (m) 1,0-1 ,5 (m) (6), 4,2 (m) (3) -*6*5 3,41 (s) 6,7-7 ,4 (m) 69 02897 47 2001491 On a aussi .préparé d'autres composés de formule 0OCH2CO^H 10 2-t ert-butyle où X est comme défini ci-dessous, et on les a analysés par des méthodes spectrales de RMN. Composé X 3-Méthylène X -Br 4,20 (q) -SCH3 3,30 (m) 1,98 (s) (3) /CH3 -N 3,20 (m) 2,2 (s) (6) ^h3 -CN 2,01 (s) 15 EXEMPLE 51 Préparât ion du 7-phénoxyacétamido)-3-hydroxyméthvl -4% 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle On a dissous le 7-phénoî^acétamido-3-bromométhyl-/!^2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle obtenu à partir de 20 mmoles de 7-20 phénoxyacétamido-3-méthyl- ^^^-céphem-carboxylate 'de 4-tert-butyle (préparé comme ci-dessus) dans 200 ml de benzène, et on a ajouté 200 ml de dimêthylsuifoxyde et 5 ml d'eau. On a agité le mélange réactionnel à 25° pendant 20 heures. On a ensuite versé le mélange réactionnel dans 1000 ml d'eau contenant 20 g de chlorure de sodium. 25 On a ensuite lavé la couche benzénique qui s'est séparée de l'eau, quatre fois à l'eau, deux fois avec une solution aqueuse à 5 pour cent de bicarbonate de sodium, on l'a séchée sur sulfate de sodium, et on l'a concentrée à sec. Le résidu a cristallisé dans le benzène sous forme de prismes (3,S0 g; 46 pour cent), p.f. 118-120°. 30 Les données spectrales ont confirmé la structure proposée. Dans d'autres expériences avec cette réaction on a constaté qu'avec un mélange à 50 volumes de benzène pour 50 volumes de dimêthyl sulfoxyde comme diluant pour la réaction de ces esters 7-acylamido-3-bromométhyl- '-céphem-4-carboxylatesavec l'eau, on 35 obtenait de meilleurs rendements, bien que l'on .obtienne de bons rendements avec des mélanges de benzène et de 25 à 75 pour cent de dimêthylsulfoxyde. Des expériences suivies de chromatographies en couche mince indiquent aussi que le tétrahydrofurane, l'acéto-nitrile, l'acétate d'éthyle, le nitrométhane, l'acétone, le dioxane, 40 le chlorure de méthyle, et les diluants organiques analogues, 69 2897 48 2001491 peuvent se substituer au benzène, et que le diméthylformamide et l'hexaméthylphosphoramide peuvent se substituer au dimêthyl-sulfoxyde. On a préparé des composés 3-hydroxyméthylés analogues en fai-5 sant réagir l'eau avec des 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl-"O2-céphem-4-carboxylatesoù le groupement ester était un groupement p-méthoxybenzyle, tert-butyle, p-nitrobenzyle, ou 1,1-diméthyl-2-propynyle. Les composés 3-hydroxymêthylés, préparés comme décrit ci- 10 dessus, peuvent être utilisés pour former les 3-acyloxyméthyl-/\ 2 -céphem esters correspondants par réaction avec un anhydride d'acide alcanoïque , l'anhydride acétique par exemple, et peuvent être ensuite transformés en composés antibiotiques connus par la méthode d'oxydo-réduction-désestérification décrite ci-dessus. 15 EXEMPLE 52 Préparation du 7-(phénoxyacétamido)-3-diméthvlaminométhvl- Al '-céphem-4-carboxylate de tert-butyle A une solution de ^2-bromure brut de 7-phénoxyacétamido-3-20 bromométhyl— & -céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 50 ml d'éthyl éther on a ajouté à peu près 5 ml de diméthylamine dans 20 ml d'éther à la température de la glace. On a agité le mélange réactionnel à 0° C pendant 3 heures. On a chassé le solvant sous pression réduite et on a mis le résidu en suspension dans l'acétate 25 d'éthyle. On a lavé deux fois la solution dans l'acétate d'éthyle à l'aide d'une solution aqueuse à 5 pour cent de bicarbonate de sodium, puis on l'a extraite avec de l'acide chlorhydrique à 3 pour cent. On a alcalinisé la solution acide à l'aide de bicarbonate de sodium à 5 pour cent, puis on l'a extraite à l'acétate d'éthyle. 30 On a séché la solution dans l'acétate d'éthyle sur du carbonate de potassium anhydre, et on l'a concentrée à sec, pour obtenir 2,3 g de produit brut. Un spectre RMN a révélé la présence du dérivé de diméthylamine pur du 7-phénoxyacétamido-3-(N,N-diméthylaminomé-thyl) -céphem-4-carboxylate de tert-butyle. 35 EXEMPLE 53 On a mélangé une solution de 7-phénoxyacétamido-3-bromométhyl- A 2 -cephem-4-carboxylate de tert-butyle dans du benzène sec avec un excès de méthyl mercaptan, et on a suivi la méthode décrite à l'Exemple 8. On a obtenu comme produit du 7-phênoxyacétamido-3-40 méthylthiométhyi- -céphem-4-carboxylate de tert-butyle. Le 69 02897 49 2001491 spectre RMN du produit a indiqué des signaux définis formés par un ailtiplet à 3,3 parties par million (p.pm) pour le groupement 3-méthylène et par un singulet à 1,98 p.pm pour les 3 protons du groupement thiométhyle, par rapport au tétraméthylsilane dans le chloro-5 foras deutéré comme solvant étalon. 3jes esters de 3-oxyméthyl éther- /^^-céphalosporine produits par cette invention sont facilement transformés en antibiotiques correspondants d'acide 3-oxyméthyl éther /£. -céphalosporanique, par la méthode d'oxydo-réduction-désestérification décrite ci-dessus. 10 On peut aussi utiliser ces composés comme intermédiaires pour préparer les noyaux d'ester de 7-amino-3-oxyméthyl éther-^^-céphalosporine en scindant par des méthodes connues le groupement protecteur du groupement 7-amine ou le groupement acyle. On peut ensuite acyler par des méthodes connues ces derniers esters nucléiques, à 15 l'aide de n'importe quel agent d'acylation ou groupement voulu, connu pour contribuer à la formation de composés d'acide,^3- céphalosporanique à action antibiotique. Quand cette acylation du groupement 7-amino est terminée, on peut éliminer le groupement ester du groupement carboxyle par des méthodes connues. Autrement, on 20 peut d'abord désestérifier les noyaux d'ester de 7-amino-3-oxy-méthyl éther-^ 3-céphalosporine, puis acyler aveb le groupement acyle voulu pour obtenir l'antibiotique voulu d'acide 7-acylamido-3-oxyméthyl éther-^ 3-céphem-4-carboxylique. De-même, les esters de 3-cyanométhyl- 2-céphalosporine pro-25 ctuits par cette invention sont facilement transformés en antibiotiques correspondants d'acide 3-cyanométhyl-'^ 3-céphalosporanique, peu: la méthode d* oxydo-réduction-désestérification décrite ci-dessua (ta peut aussi utiliser ces composés comme intermédiaixes pour préparer les noyaux d'ester de 7-amino-3-cyanométhyl-/\3-céphalo-30 sporine, en scindant par des méthodes connues le groupement protecteur du groupement 7-amino ou le groupement 7-acyle. On peut ensuite acyler aussi ces derniers esters nucléiques, peu: des méthodes connues, à l'aide de l'agent d'acylation voulu, comme ci-dessus, dans le procédé de préparation des antibiotiques d'acide 7-acylami-35 do-3-cyanométhyl- /S. 3-céphem-4-carboxylique. On peut transformer les esters de 3-thiométhyl éther- 69 02897 50 2001491 ci-dessus, on peut ré-acyler le noyau obtenu à l'aide de n'importe quel groupement acyle voulu, et on peut éliminer les groupements esters par des méthodes connues pour obtenir les antibiotiques de & ^-céphalosporine. 5 Les nouveaux esters 3-aliphatiques de N,N-dialcoylaminométhyl- ou les homologues hétérocycliques d'aminométhyl—-céphalosporine produits par cette invention sont facilement transformés en antibiotiques correspondants d1aminométhyl-&^-céphalosporine, par les méthodes d* isomérisation basique de la double liaison et 10 de désestérification décrites ci-dessus. Ces composés sont aussi utiles comme intermédiaires pour préparer les noyaux d* es£§gyj[{Jx 7-amino-3-(N,N-dialcoylaminométhyl)-j& 3-céphalosporine et autres/, homologues esters aminométhylés, en scindant par des méthodes connues le groupement protecteur du groupement 7-amino ou le grou-15 pement 7-acyle. Ces derniers noyaux d* esteis 3-aminométhylés peuvent être ensuite acylés par des méthodes connues à l'aide de n'importe quel groupement acyle voulu, comme ci-dessus dans le procédé de préparation des^antibiotiques d'acide 7-acylamido-3-(N,N-dialcoylaminométhyl) -céphem-4-carboxylique, et des antibioti-20 ques apparentés à partir des autres dérivés aliphatiques aminés de céphalosporine. Ces emplois des produits de cette invention sont illustrés par les exemples suivants. EXEMPLE 54 25 Cet exemple, ainsi que les exemples suivants, illustre 1*acy- lation d'un ester typique à noyau 7-amino-3-céphem obtenu à partir des produits de cette invention, à l'aide de plusieurs agents d'acylation différents, etlhydrolyse des groupements esters dans la préparation de composés de céphalosporine à action antibiotique. 30 Acvlation Dans cet exemple spécifique on a d'abord préparé le noyau 7-amino-3-méthoxyméthyl- 3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle en soumettant le produit de l'exemple 19 à la méthode d'oxydo-réduction décrite ci-dessus. On a ensuite scindé le groupement 35 7-phénoxyacéty3e selon des méthodes exposées ci-dessus, pour obtenir le noyau ester 7-amino-3-méthoxyméthyl- -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyia, sous la forme du tosylate (sel d'acide p-toluônesulfonique). On a agité un mélange de 268 mg (0,5 mmole) du tosylate de 40 7-amino-3-méthoxyméthyl -3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle 69 02897 51 ?0014<>1 et de 336 mg (2,0 mmoles) de bicarbonate de sodium dans 25 ml d'acétone, tout en refroidissant le mélange réactionnel dans un bain de glace. Après avoir ajouté 130 mg (0,62 mmole) de chlorure de 2-benzothiophèneacétyle, on a agité le mélange réactionnel pen-5 dant 1 heure à basse température (0-5° C), puis encore 2 heures à la température ambiante. On a ensuite dilué la solution réaction-nelle avec 100 ml d'eau. On a recueilli le solide qui a précipité, on l'a lavé à l'eau, et on l'a séché sous vide à 45°, ce qui a donné 250,0 mg (93 pour cent} de produit, p.f. 182-5° C . Le spectre 10 RMN et la micro-analyse ont confirmé la structure de ce composé. La chromatographie en couche mince (CCM) a révélé la présence d'un seul produit, le 7-(2'-benzothiénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-^ 3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle. On trouvera ci-dessous un résumé d'acylations analogues o u RjCHïh . __Ï^ X.XCH2OR2 O I c0och 2\/~\ \J R1 Î2_ p.f . en p-nitrobenzyle CH3 201' -5 2-benzothiénylméthyle ch3 182 -5 3-chlorobenzyle ch3 171- -4 3-chlorophénylthiométhyi e ch3 139' -143 CH,0 . n_ CH~- 3 || * 1 2 N N CH3 158' -165 0 ii j. y _,och oc ch3 149- -150 2-thiénylméthyle Et 159- -162 och3 Calculé Trouvé C H N C H N 56,92 4, 78 4,97 56,92 4,83 8,05 60,22 4,87 5,20 50,02 4,97 5,19 58,07 4,87 5,42 37,82 4,91 5,36 54,68 4,59 5,10 54,84 4,81 5,32 52,38 4,80 11,11 50,35 5,04 10,00 59,77 4,24 15,36 59,70 4,06 5,19 57,37 5,22 5,58 57,64 5,33 5,35 69 02897 53 .9001491 Hydrolyse ; On a choisi le 7-(41-nitrophénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzy]e dans le tableau ci-dessus pour illustrer cette étape. 5 On a laissé reposer à la température ambiante pendant 1,5 heure une solution de 120 mg (0,23 mmole) de 7-(4-nitrophénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-3-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle, de 0,4 ml d'acide trifluoroacétique et de 20 gouttes d'anisol dans 10 ml de benzène. On a ensuite ajouté la solution réactionnelle à 100 ml de 10 tampon phosphate de. pH 7. Après séparation des couches, on a lavé la couche aqueuse à 1'eau et avec une solution saturée de NaCl, on l'a séchée (MgSO^) et on l'a concentrée. On a dissous le résidu dans 15 ml d'éthanol, et on a ajouté 0,4 ml de solution 1 N d'acétate de sodium dans le méthanol. Après 2 heures à 0° C, on a recueilli le 15 solide, on l'a lavé à 1'éthanol et on l'a séché sous vide à 45° C, ce qui a donné 76 mg (83 pour cent) de produit cristallin, l'acide 7-(4tnitrophénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-^ 3-céphem-4-carboxyli-que. LesspectresRMN et UV ont confirmé la structure de ce composé. La microanalyse était aussi en accord avec les valeurs calculées. 20 On trouvera dans le tableau suivant un résumé des données physico-chimiques obtenues pour le sel de l'acide ci-dessus et d'autres acides de formule ci-dessous. R lchn f""] VCH2OR2 Calculé r, 802-f;V OHj- cl p-08* » SCH2- Cl ch2- v 2 Ç H N CH3 47,54 3,75 9,78 CH2* CH3 51,81 3,89 6,36 CH3 49,08 4,76- 6,02 CH3 45,28 3,58 6,21 CH2" CH3 41,37 3,72 13,79 CH3 50,99 4,28 7,00 Et 57,37 5,22 5,58 CH3 48,89 4,37 7,60 Trouvé Ç H N A. L o *£> O K3 00 «O ^4 47,70 4,15 9,51 217 (10.800) 265 (16.300) 51,91 3,73 6,30 227 (17.000) 258 ( 9.550) 297 ( 2.000) 48,81 4,69 5,73 258 ( 7.000) 44,99 3,78 5,92 252 (12.300) g 41,40 4,01 13,50 45,56 4,76 6,37 258 ( 6.800) O O 57,64 5,33 5,35 •&> -O 48,60 4,50 7,63 69 02897 55 2001491 Les nouveaux sels de sodium d'acide 7-acylamido-3-alcoxyméthyl-^ 3-céphem-4-carboxylique ci-dessus ont une action antibiotique contre divers organismes Gram -positifs ou Gram -négatifs. EXEMPLE 55 5 p-toluènesulfonate de 7-amino-3-cyanométhyl-^ 3- céphem-4-carboxylate de tert-butyle A une solution de 2,15 g (5 mM) de 7-phénoxyacétamido-3-cyanométhyl - /X -céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 100 cm3 de benzène sec, on a ajouté de la pyridine sèche (590 mg; 1,5 éq) 10 et du pentachlorure de phosphore (1,56 g; 1,5 éq). On a chauffé ce mélange sous N2 pendant deux heures à 56° C. On a chassé le benzène et on a ajouté 100 cm3 de méthanol refroidi dans la glace. Après repos à la température ambiante pendant une nuit, on a chassé le méthanol sous pression réduite, on a ajouté 75 cm3 de THF, et après 15 refroidissement , 75 cm3 de solution tampon froide à pH 4,5. Après repos pendant 20 minutes, on a chassé le THF sous pression réduite et on a ajouté de l'acétate d'éthyle et un peu d'eau. On a ajusté le pH de ce mélange à 6,5 à l'aide de bicarbonate de sodium. On a séparé la couche organique, on l'a lavée deux fois avec une solution 20 de NaCl, on l'a séchée sur MgSO^,, on l'a filtrée et on l'a concentrée à un faible volume. A une solution de ce 7-amino-3-cyanométhyl-^ 3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle on a ajouté une solution de 951 mg d'acide p-toluènesul-fonique dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle. On a laissé cristalliser 25 pendant une nuit le p-toluènesulfonate, puis on l'a recueilli par filtration-essorage (856 mg, p.f. 177° C)(d). La structure a été confirmée par Ieb spectresi.R., U.V. et R.M.N., et par l'analyse élémentaire. EXEMPLE 56 30 p-toluènesulfonate de 7-amino-3-méthoxyméthyl- 3-céphem-4-carboxylate de tert-butvle A une solution de 364 mg (0,84 mM) de 7-phénoxyacétamido-3-méthoxyméthyl- ^-céphem-4-carboxylate de tert-butyle huileux dissous dans 30 cm3 de benzène sec, on a ajouté 83 mg de pyridine 35 sèche et 218 mg de pentachlorure de phosphore (1,25 éq) . On a chauffé le mélange pendant 2 heures sous N2à 56-58° C. On a chassé le benzène et on a ajouté 35 cm3 de méthanol refroidi dans la glace. On a laissé reposer cette solution pendant 24 heures à la température ambiante. On a chassé le méthanol sous pression réduite 40 et on a ajouté 20 cm3 de THF. Après refroidissement, on a ajouté 69 02897 56 7001491 20 cm3 de tampon de pH 4,5, et on a laissé reposer le mélange pendant 20 minutes à la température ambiante. Après élimination du THF sous pression réduite, on a ajouté une solution diluée de NaCl et de l'acétate d'éthyle, et on a ajusté le pH à 6,5 à l'aide de 5 NaHCOj solide. On a séparé la couche organique, on l'a lavée deux fois avec une solution saturée de NaCl, on 1'a séchée sur MgSO^, on l'a filtrée et on l'a concentrée à un faible volume. A une solution de ce 7-amino-3-méthoxyméthyl-/N 3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 20 cm3 d'acétate d'éthyle, on a ajouté une so-10 lution de 160 mg d'acide p-toluènesulfonique monohydraté. Le p-toluènesulfonate du 7-amino-3-méthoxyméthyl- ^ -céphem-4-carboxylate de tert-butyle a cristallisé spontanément en donnant 177 mg (rendement 45 pour cent). On a recristallisé ce sel solide dans l'alcool isopropylique pour obtenir un échantillon plus pur, p.f. 15 183-187° C, dont la structure a été confirmée par les spectres I.R., U.V. et R.M.N., et par l'analyse élémentaire. EXEMPLE 57 7-(2'-thiénvlacétamido)-3-cyanométhyl- 3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle 20 A un mélange refroidi de 467,5 mg (1 mM) de p-toluènesulfonate de 7-amino-3-cyanométhyl-3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, de NaHCO^ solide (420 mg, 5 mM), et de 30 cm3d'acétone sèche, on a ajouté 48 mg (3mM) de chlorure de thiophène-2-acétyle distillé dans 10 cm3 d'acétone sèche. On a agité le mélange réactionnel pen-25 dant une heure à basse température (0°-5° C), et pendant 3 heures à la température ambiante. On a chassé l'acétone sous pression réduite et on a ajouté du benzène. On a lavé ce mélange successivement avec une solution de bicarbonate de sodium, une solution froide de HC1 à 5 pour cent, cinq fois avec une solution de NaHCO^# puis avec 30 une solution de NaCl, on l'a séchée sur MgSO^,on l'a filtrée et concentrée pour obtenir 481 mg de produit. On a fait cristalliser ce produit dans le tétrachlorure de carbone pour obtenir 271 mg (66 pour cent) de 7-(2'-thiényl)acétamido-3-cyanométhyl- ^*3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, p.f. 164-166° C. La structure 35 a été confirmée par les spectres I.R., U.V. et R.M.N., et par l'analyse élémentaire. EXEMPLE 58 Acide 7-(2'-thiénvl)acétamido-3-cyanométhyl-3-céphem-4-carboxyl icrue 40 On a agité, sous N2 et à température ambiante pendant 2 heures 69 02897 57 2001491 l/2,_une solution de 455 mg de 7-thiophéneactamido-3-cyanométhyl-3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 40 cm3 d'acide for-mique à 98-100 pour cent . On a chassé l'acide formique sous pression réduite. On a ajouté de l'acétate d'éthyle et de l'eau, et on 5 a ajusté le pH à environ 7,5 à l'aide de bicarbonate de sodium. A la couche aqueuse on a ajouté de l'acétate d'éthyle, on a refroidi le mélange et on l'a acidifié à pH 2,8 avec du HCl à 20 pour cent. On a séparé la couche organique, on l'a lavée deux fois avec une solution saturée de NaCl, on l'a séchée sur MgSO^, on l'a 10 filtrée et concentrée pour obtenir 234 mg d'une mousse dorée. On a repris cette substance mousseuse dans de l'éthyléther bouillant (10 mg insolubles). Après concentration à un faible volume, l'acide désiré , l'acide 7-(2'-thiényl)acétamido-3-cyano-méthyl-^Ci3-céphem-4-carboxylique a cristallisé (97 mg, p.f. 114-15 117® c). Sa structure a été confirmée par les spectres I.R., U.V. et R.M.N.. Il a donné sur le bio-autographe d'un chromatogranime sur papier une zone d'antibiotique actif qui se déplaçait un peu plus vite que celle de la céphalothine sodique. 69 02897 ss 2001491 EXEMPLE 59 p-toluènesulfonate de 7 -amino-3-méthoxyméthyl- A ^-céphem-4-carboxylate de p-Méthoxybenzyle A une solution de 996 mg (2mM) de 7-phênoxyacétamido-3-méthoxy-5 méthyl- £3 -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle et de 221,5 mg 3 de pyridine sèche (1,4 équivalent) dans 75 cm de benzène sec, on a ajouté 601 mg (excès de 40 pour cent) de pentachlorure de phosphore. On a chauffé le mélange sous pendant 2 heures à 50°C. On a chassé le benzène par êvaporation sous pression réduite et on 3 10 a ajouté 100 cm de méthanol refroidi dans la glace. Après repos à la température ambiante pendant une nuit on a chassé le méthanol 3 par êvaporation sous pression réduite. Au résidu on a ajouté 40 cm 3 de THF et, après refroidissement, 40 cm d'eau. On a laissé reposer ce mélange homogène pendant 25 minutes ; on a chassé le THF sous 15 pression réduite, on a ajouté de l'acétate d'éthyle et un peu d'eau, et on a ajusté le pH à 6,5 à l'aide de NaHCO- solide. On a séparé ■j une la couche organique, on l'a lavée deux fois avec/solution saturée de NaCl, on l'a séchée sur MgSO^, on l'a filtrée et concentrée jusqu'à un faible volume. A une solution du 7-amino-3-méthoxyméthy1-20 Z\3-céphemr4-carboxylate de p-méthoxybenzyle brut ainsi obtenu, 3 dans un total de 80 cm d'acétate d'éthyle, on a ajouté une solution 3 de 380 mg (2mM) d'acide p-toluènesulfonique monohydraté dans 10 cm d'acétate d'éthyle. Le p-toluènesulfonate a commencé à cristalliser au bout de quelques minutes. Au bout de 3 heures, on a recueilli les 25 cristaux par filtration et essorage ( 781 mg, 73 pour cent), p.f. 160-164°C, structure confirmée par les spectres I.R., U.V., et R.M.N., et par l'analyse élémentaire. EXEMPLE 60 7-(2'-sydnone-3-acétamido)-3-méthoxy-méthyl-/\ 3-céphem-4-30 carboxylate de tert-Butyle ©0-CH CH . SL 1 • N-CH-CO-NH-CH-CH o * o=c—sr 35 COO-tert-butyle On a agité dans un mélange d'eau et d'acétate d'éthyle le tosylate du 7-amino-3 -aéthoxyxtéthyl- Z!i3-céphem-4-carboxylate 4. On a secoué la couche acétate d'éthyle avec une solution 40 saturée de chlorure de sodium, on l'a séchée sur sulfate de magné- 69 02897 59 2001491 sium, puis on l'a concentrée.. On a dissous le résidu dans 10 ml de tétrahydrofurane (THF) et on l'a ajouté à l'anhydride mixte de tert-butyle de l'acide 2-sydnone-3-acétique préparé à -5°C en ajoutant 50 mg (0,07 ml) de triéthylamine et 0,06 ml de chlorure 5 de pivaloyle à 80 mg d'acide 2-sydnone-3-acétique dans 10 ml de tétrahydrofurane sec. Après agitation dans un bain de glace pendant une heure et à la température ambiante pendant deux heures, on a dilué le mélange réactionnel avec 100 ml d'eau et on l'a extrait à l'acétate d'éthyle. On a secoué la solution dans l'acétate d'éthy-10 le avec un tampon phosphate de pH 8, on l'a séchée sur sulfate de magnésium, et on l'a concentrée. On a délayé le résidu dans l'éthyl éther, on l'a recueilli, on l'a lavé à 1'éther et on l'a séché sous vide, ce qui a donné 95 mg de l'ester précité. Le spectre de résonance magnétique nucléaire (RMN) a confirmé la structure. 15 EXEMPLE 61 Acide 7 - (2 î-Sydnone-3 ' -acétamido) -3-méthoxyméthy1-A 3 ^ -céphem-4-carboxylique On a dissous une portion de 86 mg du 7-(2'-sydnone-3-acétamido)-3-méthoxyméthyl- A 3 -céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans 2 ml 20 d'acide formique à 98 pour cent, et on a agité à la température ambiante pendant deux heures. On a concentré la solution à sec. On a trituré le résidu semi-solide obtenu avec de l'éthyl éther et on a ensuite recueilli le solide et on l'a séché sous vide, ce qui a donné 52 mg d'acide 7-(2*-sydnone-3 '-acétamido) -3-méthoxyméthyl-^. 25 céphem-4-carboxylique. La micro-analyse élémentaire et les résultats de l'analyse ultraviolette (U.V.) étaient compatibles avec cette structure. EXEMPLE 62 7- (2 ' -carboxy-2 ' -phénylacétamido) -3-méthoxyméthyl- 3-céphem-30 4-carboxylate de tert-Butyle On a refroidi à -5°C une solution de 328 mg (1,4 mmole) de l'ester mono-tert-butylique de l'acide phénylmalonique et 0,21 ml (156 mg, 1,54 mmole) de triéthylamine dans 30 ml de THF, et on a ajouté 168 mg (0,168 ml ; 1,4 mmole) de chlorure de pivaloyle pour 35 former l'anhydride mixte de tert-butyle. Au bout de 20 minutes, on a ajouté à la solution d'anhydride mixte une solution de 342 mg (1,4 mmole) d'acide 7-amino-3-méthoxyméthyl-^^3-céphem-4-carboxylique (7-AMCA) préparé en hydrolysant l'ester 7-amino-3-méthoxyméthy1-^3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle dans l'acide formique, 40 dans un mélange de 10 ml d'eau et de 10 ml de THF, contenant une 69 02897 60 2001491 quantité équivalente de triéthylamine. Après agitation du mélange pendant 1 heure à basse température (0°-5°C) et pendant 2 heures à la température ambiante, on a refroidi la solution réactionnelle, on l'a recouverte d'une couche d'acétate d'éthyle, et on a ajusté 5 le pH à 2,0 à l'aide de HCl 6 N. On a séché et concentré la solution dans l'acétate d'éthyle. On a repris le résidu dans l'éthyl éther, puis on l'a reprécipité à l'aide d'une fraction d'hydrocarbures de pétrole disponible dans le commerce , surtout de l'hexane (p.e. 60-68°C.), ce qui a donné 88,0 mg du 7-(2'-carboxy- P 3 10 2'-phénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-/_\ -céphem-4-carboxylate de tert-butyle. EXEMPLE 63 Ifester 7-(21-carboxy-2*-phénylacétamido)-3-méthoxyméthyl- A3-céphem-4-carboxylate de tert-butyle de l'Exemple 62 a été agité 15 dans un ml d'acide trifluoroacétique froid. Au bout de 15 minutes on a fait évaporer la solution. On a agité le résidu dans 5 ml d'un mélange à un volume d'hydrocarbures de pétrole (p.e. 60-68°C) et un volume d'éthyl éther pendant 1 heure, puis on l'a recueilli et séché sous vide, ce qui a donné 56,1 mg d'acide 7-( 2'-carboxy-20 2-phényl-acétamido) 3-méthoxyméthyl- ZX3-céphem-4-carboxylique . L'analyse élémentaire et le spectre UV étaient compatibles avec cette structure. Les nouvelles céphalosporines ci-dessus ont donné des valeurs caractéristiques de Rf dans la chromatographie sur papier, et ont 25 été essayées dans des analyses microbiologiques in vitro dans lesquelles tous les composés ont manifesté une excellente activité contre plusieurs espèces de staphylocoques. Les dérivés ont protégé efficacement des souris de la mort provoquée par deg infect.rons streptococciques, après administration buccale. 30 EXEMPLE 64 Acide 7-Amino-3-méthoxyméthyl- 3-céphem-4-carboxylique A une portion de 268 mg (1 millimole) du p-toluène-sulfonate de 7-amino-3-méthoxyméthyl- 1-céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle, agitée dans l'eau, on a ajouté de 1'orthophosphate diso-35 dique jusqu'à pH 7 tout en recouvrant la solution d'une couche d'acétate d'éthyle. On a séché la solution dans l'acétate d'éthyle sur sulfate de magnésium et on l'a concentrée à sec. On a dissous le résidu huileux dans 25 ml de benzène contenant 40 gouttes d'ani-sole et 0,8 ml d'acide trifluoroacétique. Après agitation du mélange 40 pendant 2 heures à la température ambiante, on a fait évaporer le 69 02897 61 2001491 benzène et on^repris le résidu dans 10 ml d'eau recouverte d'une couche de 10 ml d'acétate d'éthyle. On a ajusté le pH à 3,6 par addition de triéthylamine. Après réfrigération du mélange pendant une nuit, on recueilli le solide, on l'a lavé à l'eau et à l'acétate 5 d'éthyle, et on l'a séché sous vide à 45°C, ce qui a donné 75 mg d'acide 7-amino-3-méthoxyméthyl- A3 -céphem-4-carboxylique. La structure a été confirmée par les spectres infrarouge (IR), ultraviolet (UV), et RMN. On a utilisé une méthode analogue pour préparer l'acide 7-amino-10 3-êthoxyméthyl-A ^-céphem-4-carboxylique à partir de son ester p-méthoxybenzylique. EXEMPLE 65 Acide 7-(D-2-Amino-2-phénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-3-céphem-4-carboxylique 15 On a agité et refroidi à -5°C une solution de 185 mg (0,74 mmole) d'acide D-2-tert-butoxycarboxamido-2-phénylacétique dans 15 ml de tétrahydrofurane (THF). Après avoir ajouté 82 mg (0,81 mmole) de triéthylamine et 110 mg (0,81 mmole) de chloroformate d'isobutyle, on a agité le mélange réactionnel pendant 20 minutes. 20 A cette solution d'anhydride mixte obtenue on a ajouté une solution de 180 mg (0,74 mmole) d'acide 7-amino-3-méthoîryméthyl-3-céphem-4-carboxylique (7-AMCA) dans 5 ml d'eau, ainsi que 5 ml de THF et 0,103 ml de triéthylamine. Après avoir agité le mélange réactionnel pendant une heure dans un bain de glace et pendant 2 heures à la 25 température ambiante, on l'a recouvert d'une couche d'acétate d'éthyle, on l'a refroidi et on a ajusté le pH à 2,0 à l'aide de HC1 6 N. On a séché la couche acétate d'éthyle sur MgSO^ et on l'a concentrée à sec. On a repris le résidu dans l'éthyl éther. Après que le cristallisation ait commencé on a refroidi le ballon pendant 30 plusieurs jours. On a ensuite recueilli le solide et on l'a séché sous vide, ce qui a donné 95,5 mg d'acide 7-(D-2-tert-butoxycarbo-xamido-2-phénylacétamido)-3-méthoxyméthyl-3-céphem-4-carboxylique (composé t-BOC). On a obtenu une seconde récolte par dilution du filtrat prêcââenfc avec une fraction de pétrole (surtout de l'hexane) 35 de p.e. 60-68°C. On a agité pendant 5 minutes une solution froide (0°) de 150 mg du composé t-BOC dans '2 ml d'acidç trifluoroacétique, puis on l'a concentrée à sec. On a repris le résidu dans 2 ml d'eau. Il A cette solution on a ajouté 25 pour cent de "Amberlite IA-1, résine liquide échangeur d'anions (forme acétate) dans la méthyl isobutyl 40 cétone (MIBC) jusqu'à pH 4,5. On a fait subir à la couche aqueuse 69 02897 62 2001491 un second traitement par la résine liquide échangeur d'anions, puisai l'a lavée à la MIBC . On a ensuite concentré la couche aqueuse jusqu'à environ 0,5 ml et on l'a diluée avec de l'acétonitrile. Le gel qui a précipité de la solution a cristallisé lentement. On 5 a recueilli le solide, on l'a lavé à l'acétonitrile et on l'a séché sous vide, ce qui a donné 42,0 mg d'acide 7-(D-2*-amino-2'-phénylacétamido)-3-méthoxyméthy1- -céphem-4-carboxylique. La structure a été confirmée par les spectres UV et RMN et par la microanalyse. 10 EXEMPLES 66 à 69 Acide 7-/D-2'-amino-21 -(3"-hydroxyphény1)-acétamido7-3-méthoxyméthyl- A 3-céphem-4-carboxylique On a exécuté l'acylation du 7-AMCA par l'acide D-2-tert-butoxycarboxamido-2-(3-hydroxyphényl) acétique en utilisant la même 15 méthode à l'anhydride mixte que dans l'exemple précédent. On a complété comme suit l'élimination du groupement t-BOC et l'isolement de l'acide 7-/6-2'-amino-21 -(3"-hydroxyphény1)acétamido7~3-méthoxyméthyl- -cêphem-4-carboxylique sous forme de zwitterion : on a préparé une solution de 513 mg du composé protégé par le t-BOC 20 dans 6 ml d'acide trifluoroacétique froid (0°). Au bout de 5 minutes on a fait évaporer l'excès d'acide trifluoroacétique. On a dissous le résidu dans 2 ml d'eau recouverte d'une couche de 10 ml de MIBC. On a ajusté le pH à 5 par addition de tributylaminé. On a séparé la couche aqueuse, on l'a lavée à la MIBC et on l'a concen-25 trée à environ 0,5 ml. On a dilué la solution avec 5 ml d'acéto-nitrile et on l'a réfrigérée. Au bout de plusieurs heures, on a recueilli le solide, on l'a lavé à l'acétonitrile et on l'a séché sous vide à 50°, ce qui a donné 249,1 mg de produit. Dans le tableau suivant sont énumérés les dérivés de phénylglycine préparés 30 de la même manière qu'à l'Exemple 26. NH2 Exemple h. !2 26 OU ch3 27 h ch3 28 Cl ch3 29 h -C2H5 o Résumé des dérivés de phénylglycine Y CH OR CO " '2H Microanalvses C Calculées H N Trouvées C H N > € 49, 62 5,15 10, 21 49,76 5,27 10, 21 263 (7 .400) 54, 11 5, 08 11,14 54,28 5,20 11, 27 258 (7 .700) 49, 57 4,40 10,20 49,36 4,63 10, 10 260 (7 .400) 52, 79 5, 66 10,26 52,61 5,49 10, 09 259 (7 .500) r- j oo -O en w K) O O _a 45» -O 69 -„2897 64 2001491 KXRMPttF. 70 On a effectué une série d'acylations comme décrit dans l'Exemple suivant : On a préparé une solution de 11 mg de 7-AMCA et de 11 mg de NaHCO^ dans 5,5 ml d'eau. On a agité des portions aliquotes 5 (0,75 ml) de cette solution dans un bain de glace, et on a ajouté des portions aliquotes de solutions de chlorure d'acide du groupement R indiqué (contenant 1,5 mg de chlorure d'acide). Après trente minutes d'agitation, on a fait évaporer l'acétone et on a redilué chaque solution dans Ë^O à 1,5 ml. On a ensuite essayé ces solu-10 tions vis-à-vis d'une gamme étendue de microorganismes. On a également constaté qu'il était possible d'essayer directement la solution réactionnelle sans éliminer l'acétone. On a également soumis les composés à une chromatographie sur papier et à des bioautogra-phies. 15 Le tableau ci-dessous résume les caractéristiques antibioti ques obtenues avec les solutions, les chaines latérales utilisées, et les valeurs de Rf obtenues dans les bioautographies. Activité Antibiotique des Comoosês obtenus dans les Acylations Essai m disque d'Agar-Agar Dimension de la zone en mm O -O O K> 00 -O Exemple N°. R V G+ SA G+ X-12 G+ X-186 Tb X-85 G-X-45 G- X-142 G- G-X-161 X-48 70 ch3(ch?)5 1,1 32 20 30 - 11 - - 71 ch3(CH2)4-ch-ch- 1,5 27 22 32 - 12 - - 72 Ç1 cich2ch- co 0 24 26 31 - 14 - _ 73 Ç1 ch3ch2ch 0.- 9 29 28 35 - 17 - tr. 74 Br ch3 (ch2) ? -ch- 2, 2 30 29 45 - 13 - - 75 ch3(ch2) 3sch2- 1,0 30 33 40 - 14 - 16 76 () 2ŒtCH2). yCH2- 1,4 3S 34 39 — 16 — 16 - 77 ch2=chch2SCH2- 0,9 25 21 29 - 17 tr — — 78 p-CH„0-C6H4-CH2- 0,8 29 34 40 - l'S .15 — 79 p-n02-C6H4-ch2CH2- 1,0 32 30 37 - 12 ~ 11 80 m-Cl-c6h4-OCH2~ Jl, 3 36 34 42 - 15 - U 81 P-CI-C6H4-OCH2- 1,1 40 35 37 13 - tr 82 m-N02-C6H4-OCH?- 1,0 35 35 40 - 12 - 12 83 m-CP3-C6H4-0CÎÎ2~ 1,8 34 34 40 -> - tir 84 C6H4-CH20CH2- 1,0 27 25 32 — 14 « — «= 85 p~E> -C5H4-CU2 SCH2 - 1,3 33 32 45 tr "ÏB — 14 . - . 86 c6h5 ~ch2 ch2 s ch2 - 1,4 29 34 40 - 14 16 ' - 87 c6hS-(ch2)3sch2- 1,7 31 34 37 - 10 - 13 88 C6H5-CH--CÎI- 1,0 25 17 20 - - — _ en un KJ O o o 69 02897 66 2001491 Notes 1. Rj„ est défini comme le rapport entre la distance de la tache respective (bioautographe) et l'origine, et la distance entre la tache faite par l'antibiotique de référence, la céphalothine 5 sodique, et l'origine. 2. On a déterminé les rapports à partir de bioautogrammes de chromatographie sur papier du composé de céphalosporine d'essai par rapport au . composé de référence, qui était le "Keflin" (céphalothine sodique de Lilly), désigné par l'indice "k", antibio- 10 tique de céphalosporine.disponible dans le commerce. La méthode .d'esç.! utilisée était généralement celle oui est dans Antibiotica ana CTaemot&erapy, Vol, ïv.ïao. 7, Jaly,X954 décrite par Bird et Pugh,/ sau£ qu'on a utilise du papier Whatman N°4, tamponné à pH 4/ 6 avec de l'acétate de sodium 0,1 molaire, le liquide d'appoint de la chambre se composait d'un mélange de 15 600 parties de méthyl éthyl cétone et de 400 parties d'eau, et le solvant de développement se composait d'un mélange contenant 92 parties de méthyl éthyl cétone et 8 parties d'eau. Chaque ahroiaatogramme a été tracé pendant 2.-5 à 3,-5 heures. Les méthodes de chromatographie sur papier sont décrites 20 généralement dans un livre appelé Paper Chromâtoaraohv. troisième Edition, Edité par I.M. Hais et al., (1963), Académie Press, New York and London, page 155. 3. S.A. = Staphvlococcus aureus XI2 = B. subtilis 25 X186 = Sarcina sp. X85 = Sacharomvces pastorianum X45 = Proteus vulgaris X142 = Salmonella gallinarum X161 = Bscherichia coli 30 X48 = Pseudomonas aerucrinosa Une dimension de la zone du disque d'agar agar supérieure à 8 mm constitue une indication d'activité antibiotique du composé d'essai vis-à-vis de l'organisme d 'épreuve dans cet essai qualitatif. fe 67 2001491 REVENDICATIONS 1. Un procédé comprenant3ia réaction de la N-bromosuccinimide avec un composé de céphalosporine de formule : 3C-CH3 dans laquelle R est un groupement protecteur d'aminé, et R"*" est 10 le reste d'un groupement ester, dans un diluant liquide organique inerte et sensiblement anhydre, à une température d'environ 40°C à environ 100°C, pour former un composé de formule : ^S^ R-NH-ÇH-CH CH 15 0=C—à xC-CH0Br ! COOR dans laquelle R et R^" sont comme définis ci-dessus. 2. Un procédé selon la revendication 1, comprenant la réaction 20 du produit de la réaction de la revendication 1 avec une substance nucléophile qui fournit un groupement chargé négativement ou bien qui est une molécule neutre portant une paire d'électrons eppariést et qui entre dans une réaction de substitution nucléophile avec le groupement 3-bromométhyle du produit de l'étape (a), pour former 25 comme produit un composé de formule : S> R-NH-CH-CH CH 30 dans laquelle R et R^" sont comme définis ci-dessus, et Y est l'agent nucléophile. 3. Un procédé selon la revendication 2, dans lequel : le composé de céphalosporine est un composé (dans lequel R est 35 un groupement acyle de formule : «"À— x —(c VH- co — , 60 "ICT 68 2C01491 dans laquelle m est un nombre entier de 0 à 4 inclus, n est un nombre entier de 1 à 4 inclus, X est l'oxygène ou le soufre ou une liaison chimique, ce groupement acyle pouvant être substitué sur un atome de carbone phénylique par le fluor, le chlore, le brome, l'iode, 5 ou par un radical alcoyle ayant de 1 à 6 atomes de carbone, alcoyloxy ayant de 1 à 2 atomes de carbone, nitro, cyano, ou trifluorométhyle ; et R^" est choisi dans le groupe composé des radicaux : tert-alcoyle en C^-C^ 10 tert-alcényle en tert-alcynyle en Cjj-C-y benzyle méthoxybenzyle nitrobenzyle 15 benzhydryle phénacyle triméthylsilyle phtalimidométhyle, et succinimidométhyle 20 et le réactif nucléophile est choisi dans le groupe composé de (1) les composés de formule : m-s-ch-n 25 A dans laquelle M est l'hydrogène ou un métal alcalin, R^ est un radical alcoyle en C^-Cg,alcényle en carbo-alcoxy en et A est l'hydrogène ou un groupement carboxyle ; (2) les composés de type pyridine de formule : 30 dans laquelle R^ est l'hydrogène, le fluor, le chlore, le brome, ou un radical alcoyle en C^~C2' carhoxyle, carboxamide, N-méthyl-35 carboxamide, N,N-diméthylcarboxamide, et est l'hydrogène, le fluor, le chlore, le brome, ou un radical alcoyle en > (3) la thiourée, le thioacétamide, le thiosemicarbazide, la N-alcoylthiourée ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans son groupement alcoyle, la N-phénylthiourée, ainsi que les sels de métaux 69 02897 69 2001491 alcalins de ces composés ; (4) les dithiocarbamates et les xanthates de formules : ^R5 M-S-CS-N 3 5 Xr6 et M-S-CS-ORy dans lesquelles chacun des radicaux R_ et R, est un radical alcoyle 3 O en C^-Cg, ou bien R,. et Rg pris ensemble avec l'azote auquel ils sont 10 liôs coraplèrfcôîît un cycle à 4 ou 5 atomes de carbone méthyléniques, Rj est un radical alcoyle primaire en C^-C^2/ un radical alcoyle secondaire en c3~ci2 ou un rac^-cal cycloalcoyle en C^-C^, et M est un ion métallique alcalin ; (5) M-Ng, M-SCN, M—NOg ou M-CH où M est un ion métallique 15 alcalin, un ion métallique alcalino-terreux ou un ion cuivreux ou argent ; (6) les composés de formule : X H R0-C-X-M 20 8 dans laquelle chaque X est l'oxygène ou le soufre,, et Rg est l'hydrogène ou un radical alcoyle en CL-C-, alcényle en C -C jl D A o phényle, benzyle, ou phényléthyle, ces groupements phényle, benzyle et phényléthyle pouvant être substitués sur leurs atomes de carbone 25 cycliques par les groupements trifluorométhyle, nitro, cyano, alcoyle en C^-C^, alcoxy en c^~c2' f3-uor' brome, ou chlore, ou bien Rg est "(CH> 2 ■ y Y 30 où Y est ^>NH, -O-, ou -S-, et y est 0 à 1, et M est un métal alcalin ou alcalino-terreux ; (7) les aminés choisies dans le groupe composé des alcoylamines primaires ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans leurs groupements alcoyle, des dialcoylamines ayant de 1 à 6 atomes de carbone dans 35 chacun de leurs groupements alcoyle, et des trialcoylamines ayant . un total de 3 à 12 atomes de carbone, de la cyclopentylamine, de la cyclohexylamine, de la cycloheptylamine, des aminés hétérocycli-ques contenant de l'azote saturé- monocyclique et contenant de 4 à 6 atomes de carbone cyliques et un total de 5 à 7 atomes forma-40teursde cy :1e, et des aminés aromatiques de formule : 69 02897 70 2001491 \\ ■:V No dans laquelle chacun des radicaux Rg et R^q est l'hydrogène ou le 5 radical méthyle et R^ est l'hydrogène ou un radical alcoyle en C^-Cj ou alcoxy en ' (8} les composés de formule : r12-x-h dans laquelle X est l'oxygène ou le soufre, et R^2 es^ 1'hydrogène 10 ou un radical : alcoyle en Cl"C10 ' alcényle en C3-C1Q, alcynyle en C^-C^q, cycloalcoyle en Cg-C^, 15 (cyc-Xoalcoyl en C^-C^) - (alcoyle en C^-Cg), haloalcoyle en C2~cmj haloalcényle en C3~C10' ou haloalcynyleen C3-C10' où l'halogène est le fluor, le chlore, le brome, ou l'iode, ou un radical cyanoalcoyleen C^-C^, phényle, benzyle, et phényléthyle, ces radicaux phényle,benzyle et phényléthyle pouvant 20 être substitués sur les atomes de carbone cycliques par un radical alcoyle en C^-C^, alcoyloxy en C^-C^, alcoyloxycarbonyle en C^-Cg.-fluor, chlore, brome, nitro, cyano, ou trifluorométhyle, (alcoyl es -X-(alcoyle en C^-C^) où X est l'oxygène ou le soufre, alcanoyl en C2-C^-^lcoy3e en C^-C^),( alcanoyloxy en C2~C^)-(alcoyle 25 en C2-Cg), (alcoyloxycarbonyle en C^-Cg) -(alcoyle en C^-Cg), et et O" ■ y- 3Q où Y est ^>NH, -O-, ou -S-, et y est 0 à 2, ainsi que les sels de sodium, de potassium ou de calcium de ces composés qui ont un pKa inférieur .à 11, et (9) les N-aminoalcoyldihhiocarbamates de formule : 35 h/R14 Xr15 dans laquelle z est 2 13, R13 est un radical alcoyle en C^-C^, chacun des radicaux *14 et R^g pris isolément est un radical alcoyle 40 en C^-Cg, R^ et R^ pris ensemble avec l'azote auquel ils sont 69 02897 71 2001491 liés forment un cycle contenant de 4 à 6 atomes de carbone cycliques, et et pris ensemble contiennent un total de pas plus de 8 atomes de carbone, et M est l'hydrogène ou un métal alcalin. 4. Un procédé selon la revendication 3, dans lequel le composé 5 de céphalosporine est un 3-méthy1-7-phénoxy-acétamido- Z\2-céphem- 4-carboxylate de méthoxybenzyle, et le réactif nucléophile est un composé de formule correspondant an gjroupe (6). 5. Un procédé selon la revendication 3, dans lequel le composé de céphalosporine est le 3-méthy1-7-phénoxyacétamido- ^-céphem-4- 10 carboxylate de 4-méthoxybenzyle, et le réactif nucléophile du groupe (6) est un réactif dans lequel X est l'oxygène, Rg est un radical alcoyle en et M est un métal alcalin. 6. Un procédé selon la revendication 5, dans lequel le réactif nucléophile est l'acétate de potassium. 15 7. Un procédé selon la revendication 3, dans lequel le composé de '.ephalosporine est un 3-méthy1-7-phénoxyacétamido- £l2 '-céphem-4-carbo^ylate de tert-butyle, et le réactif nucléophile est un composé de formule correspondant au groupe(81. 8. Un procédé selon la revendication 7, dans lequel le réactif 20 nucléophile du groupe(8) est un réactif dans lequel X est 1'oxygène et R^2 est un radical alcoyle en C^-Cj q. 9. Un procédé selon la revendication 7 ou 8, dans lequel le réactif nucléophile est le méthanol. 10.Un procédé selon n'importe laquelle des revendications précé- 25 dentes, dans lequel le diluant organique est 1'azobisiaobutyronitrile. 11. Un procédé comprenant le chauffage des composés obtenus par le procédé de n'importe laquelle des revendications précédentes, dans un milieu faiblement basique pour provoquer le déplacement de la double liaision A2 en position /\3. 30 .12. Un composé de formule : -S 35 ' COOR" dans laquelle R est choisi dans le groupe composé des radicaux triméthylsilyle, triphénylméthyle, butoxycarbonyle, phénoxyacétyle, phénylacétyle, phénylmercaptoacétyle, phény l-^,cA-diméthylacétyle, 40 par exemple phénoxyacétyle, phénylacétyle, phénylmercaptoacétyle,ou 69 02897 72 onm 4P t phényl-o' , o^-diméthylacétyle, substitués sur leurs atomes de carbone cycliques par le fluor, le chlore, le brome, l'iode, ou par un radical alcoyle en C^-Cg, alcoyloxy en ci~c2' butoxycarbonylméthyle, nitro, cyano, ou trifluorométhyle ; R' est Br» -CN, ou -XY où X est l'oxygène ou le soufre, et 5 Y est un radical alcoyle en ci-cio' alcényle en C3~ cio* al°ynyle en c3~ci0' en cs"c-j' (cycloalcoyl en C3~Cg) - (alcoyle en ) ,haloalcoyle en. C2~Gio' hal°alcényleen C^- C^q, ou halo- alcynyleen C^-C^q où l'halogène est le fluor,le chlore, le brome, ou l'iode, cyanoalcoyle en C^-C^, (alcoyl en C^-C^}-X-(alcoyleen 10 c^-cg) °û X est l'oxygène ou le soufre, cycloalcoyl en C^-C^, (cycloalcoyl en C^-C^)-(alcoyle en C^-Cg),( alcoyloxycarbonyl en C^-Cg)-(alcoyle en c^_cg)»( alcanoyl en C2~C4^ ~(alcoyl? en c^_cg)> (alcanoyloxy en C2~C^)-(alcoyle en C^-Cg), (2'-tétrahydrofuryl)- (alcoyle en ), 3 ' -tétrahydrofuryle, (21 -thiényl) - (alcoyle en 15 C^-C^), phényle, benzyle, phényléthyle, ces radicaux phényle, benzyle, et phényléthyle pouvant être substitués par un groupement cyano, nitro, trifluorométhyle, alcoyloxy en C^-C3, alcoyleen C^-C3, ou alcoyloxycartonyle en C -C fCOO-alcoyle où le groupement 1 ^ alcoyl® a de 1 à 3 atomes de carbone), ou bien S* 20 ,R3 ^R4 3 4 où chacun des radicaux R et R pris isolément est un radical alcoyle 3 4 en C^-Cg, ou bien R et R pris ensemble avec l'azote auquel ils sont liés complètent un noyau monocyclique et hétérocyclique contenant 25 de 5 à 6 atomes cycliques et de formule /CH2 CH -N Q 'CHj2—— CH"' 2^ n 2 x 5 5 30 où n est O ou 1, et Q est -CH2~, -0-, -S-, ou^*NR où R est l'hydrogène ou un radical alcoyle en sauf quand n est O, Q est -CH2~, et R" est choisi dans le groupe composé des radicaux tert-alcoyleen C4-Cg, tert-alcényle en C5-C7» tert-alcynyle en C^-C^, 35 benzyle, méthoxybenzy le, nitrobenzyle, phénacyle, triméthylsilyle, benzhydryle, phtalimidométhyle et succinimidométhyle. 13. Un composé selon la revendication 12, dans lequel R est le radical phénoxyacéty&e , R' est OY, Y est un radical alcoyle en et R" est un radical alcoyle en C4-Cg. 40 14. Un composé selon la revendication 12, dans lequel R est 69 02897 73 700 ^401 le radical phénoxyacétamide, R' est -CN, et R" est un radical méthoxybenzyle. 15. Un composé selon la revendication 12, dans lequel R est le radical phénoxyacétyle, R* est -XY où X est le soufre et Y est 5 un radical alcoyle en Cl"C10' et R" est un radical tertioalcoyle en C4-Cg. 16. Un composé selon la revendication 12, dans lequel R est 7 le radical phénoxyacétamide, R' est -NR^R^ où chacun des radicaux R3 et R4 est un radical, alcoyle en C^-Cg, et R" est un radical tertio alcoyle en C4-Cg. 17. Un composé selon la revendication 12, dans lequel le composé est le 7-phéno3Çfacétamido-3-méthoxyméthyl-.Z\ 2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, le 7-phénoxyacétamido-3-cyanométhyl S -céphem-4-carboxylate de p-méthoxybenzyle, le 7-phénoxyacétami-15 do-3-méthy1thiométhyi- A2 -céphem-4-carboxylate de tert-butyle, le 7-phénoxyacétamido-3-(N,N-dimêthylaminométhy1)- ZX2-céphem-4-carboxylate de tert-butyle, ou le 7-(phénoxyacétamido)-3-bromométhyl -Z^2 -céphem-4-carboxylate de 4-méthoxybensyle. 18. Des composés de formule : 20 /Sv R-NH-ÇH-CH 0=C—H 25 dans laquelle R est : l'hydrogène, 0—^ COOR" i. r CH-CO- , \ — it v 30 x où X est un groupement aminé, aminé protégé , hydroxyle, alcoyloxy en C^-C^, carboxyley ou alcanoyloxy en C^-C^ Q £TT\ N\ (CH2)y-X-(CH2^ CO 35 où X est 11oxygène ou le soufre ou une liaison chimique, y est un nombre entier dé 0 à 2, et z est un nombre entier de 1 à 3, Q ^jaî"CH~C0~' 69 02897 74 2001491 et Q dans chacun des noyaux phényliques ci-dessus est l'hydrogène ou un radical alcoyle en C^-C^, alcoyloxy en C^_C3' cyano, nitro, hydroxyle, chlore, brome, fluor, trifluorométhyle, a\ -amino-(alcoyle en -C3), carboxyméthyle (HOOC-CH^-) ou carboxamidométhyle 5 (H2NC(0)CH2-), 2T~T z"\ /•-CH2C°- 10 où Y est le soufre ou l'oxygène, et chaque Z désigne séparément l'hydrogène, ou bien les Z pris ensemble avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés complètent un cycle benzo ; R^O-Ç C-CH-CO- 15 M y r2 N7 1 2 où chacun des radicaux R et R est l'hydrogène ou le radical méthyle, 2-sydnone-3-(alcanoyle en C^-C^) 20 alcanoyle en C^-C^Q, alcénoyle en Cj-C^q, felcoyl en C^-C^)-X-(alcanoyle en 0^-03) où X est l'oxygène ou le soufre, (alcényl en C^-C^) -X-(alcanoyle en où X est l'oxygène ou 25 le soufre, haloalcanoyle en C2~C10 l'halogène est le fluor, le chlore, ou le brome, ou bien cyanoalcanoyle en C2~C10 R' est le groupement cyano ou -OY où Y est un radical alcoyle en 30 C^-C^, alcényle en C3-C1Q, alcynyle en C5-gio' cy.cloalcoyle en C^-C^, (cycloalcoyl en C^-C^)-(alcoyle en C^-Cj), 35 haloalcoyle en c2""cio' hal°alcényle en c3~ciq' et haloalcynyle en C3~C10 où l'halogène est le fluor, le chlore, le brome, ou l'iode, (alcoyl en -X-(alcoyle en C^-C^) où X est l'oxygène ou ' le soufre, 40 (alcanoyloxy en C2~C^)-(alcoyle en C^-Cq), 69 02897 75 2001491 (alcanoyl en C^-C^)-(alcoyle en C^-Cg}, (furyl)-(alcoyle en C^-C3), (thiényl)-(alcoyle en C^-C3), 3'-tétrahydrofuryle, 5 tétrahydrofuryl-(alcoyle en C^-C^), phényle, benzyle, ou phényléthyle, ces radicaux phényle, benzyle et phényléthyle pouvant être substitués sur leurs atomes de carbone cycliques par un radical alcoyfe en C^-C^, alcoyloxy en alcoyloxycarbonyle en -C^, fluor, chlore, brome, nitro, cyano, 10 ou trifluorométhyle» et R" est choisi dans le groupe composé de : l'hydrogène, une charge de zwitterion, un sel avec un cation pharmaceuti-quement acceptable, et 15 un radical tertioalcoyle en C^-Cg, un radical tertioalcényle en C^-C^, un radical tertioalçynyle en C^-C^, un radical benzyle, un radical méthoxybenzyle, 20 un radical nitrobenzyle, un radical benzhydryle, un radical phtalimidométhyle, un radical succinimidométhyle, un radical triméthylsilyle, et 25 un radical ester phénacyle. 19. Un composé selon la revendication 18, dans lequel R est l'hydrogène, R' est le groupement cyano et R" est un radical tert-alcoyleen C4~Cg, ou bien un de ses sels d'acide sulfonique hydrocarboné aromatique en Cg-C^-30 20. Un composé selon la revendication 18, dans lequel R est l'hydrogène, R1 est-OY, Y est un radical alcoyle en C^-C^Q, et Ru est un radical tert-alcoyle en C^-Cg, ou bien un de ses sels d'acide sulfonique hydrocarboné aromatique en C6 " C12' 21. Un composé selon la revendication 18, dans lequel R est 35 un radical 2-sydnone-3-(alcanoyle en C^-C^), R* est -OY, Y est un radical alcoyle en C^-C^q, et R" est l'hydrogène.1 22. Un composé selon la revendication 18, dans lequel R est Q 40 ~W" :h-co- 69 02897 76 2001491 où X est un groupement aminé, aminé protégé , alcoyloxy en C^-C^, —COOH, ou alcanoyloxy en ci~c3» et Q est l'hydrogène, R" est- OY, Y est un radical alcoyle en ci"*ci0' et R" est l'hydrogène, ou bien un de $3s sels de sodium ou de potassium. 5 23. Un composé selon la revendication 18, dans lequel le compo sé est le 7-amino-3-cyanométhyl-/'-céphem-4-carboxylate de tert-butyle ou son p-toluènesulfonate, l'acide tert-butyl-7-amino-3-méthoxyméthyl- -céphem-4-carboxylique ou son p-toluènesulfonate, 1 ' acide 7- (2i-sydnone-3-acétamido) -3-méthoxyméthyl-/\3-céphem-4-10 carboxylique, l'acide 7-(D-2'-amino-21-phénylacétainido)-3-méthoxyméthyl- -céphem-4-carboxylique, 11 acide 7/5-2'-amino-2'-(3"-hydro xyphênyl) acétamido/-3-méthoxyméthyl-A3-céphem-4-carboxylique, ou 1'acide 7-^5-oi-hydroxy-o^-phénylacêtamido7-3-méthoxyméthy1-Z\ 3-céphem-4-carboxylique, ou bien son sel de sodium ou de potassium. 15