Procédé de préparation de protéines semi-synthétiques par altération chimique d'un substrat spécifique. Les protéines sont constituées par des macromolécules synthétisées biologiquement, et ayant des rôles variés dans les organismes vivants. Les enzymes sont des variétés particulières de protéines biologiquement actives, catalysant des réactions spécifiques. La technologie relative aux enzymes est actuel- lement utilisée dans de nombreux domaines de l'industrie et de la recherche, comme par exemple la recherche médicale; l'obtention et la conservation des aliments, la fabrication de boissons fermentées, la préparation de produits pharmaceutiques et la détermination analytique de la concentration de métabolites ainsi que des composants alimentaires, par des techniques analytiques mettant en oeuvre des enzymes. Les entymes sont hautement spécifiques dans leur activité biologique et sont généralement des agents catalytiques de réactionsparticulièresselon une vitesse très élevée comparée à celle de réactionscorrespondanteseffectuéesà la température ambiante mais en l'absence d'une catalyse biologique. Une seule enzyme peut présenter une activité catalytique par rapport à de nombreux substrats sur lesquels elle peut avoir une action. Il en résulte qu'une enzyme donnée peut catalyser la synthèse ou la dégradation de plusieurs substrats. Certaines protéines qui ne sont pas considérées comme des enzymes classiques, telles que la sérum albumine des bovins, présentent une activité catalytique très limitée par rapport à un ou plusieurs substrats. De nombreuses enzymes sont trouvées dans la nature en des quantités très faibles. Il en résulte que leur isolation, leur purification et leur utilisation se trouvent limitées à des opérations à une échelle réduite, étant donné le coût et la lenteur des opérations nécessaires pour les isoler et les obtenir sous une forme utilisable. Quelques enzymes sont présentes dans la nature en des quantités relativement importantes et l'on peut les isoler, les purifier et les utiliser d'une façon relativement facile. Malheureusement, étant donné les caractéristiques cata- lytiques très précises des enzymes, les enzymes pouvant âtre obtenues en de grandes quantités, sont seulement utilisables comme catalyseur pour certaines réactions particulières. Des efforts considérables ont été effectués dans un passé récent, pour obtenir la synthèse de catalyseursbiologiques synthétiquesprésentant un comportement enzymatique similaire à celui des enzymes naturelles qui se trouvent en petites quan- tités ou dont l'isolation est comteuse. En outre, on a essayé de modifier les enzymes naturelles pour obtenir un changement de la spécificité enzymatique afin qu'elles puissent catalyser des réactionsqu'ellesnepouvaient pas catalyser antérieurement. Une technique connue pour obtenirqu'une enzyme catalyse une réaction spécifique souhaitée, consiste à effectuer la synthèse de molécules dites "selon le modèle de l'enzyme". Par exemple, des composés de bas poids moléculaire peuvent être réunis de façon covalente pour constituer des groupes fonctionnels présentant la même activité que celle du site actif d'une enzyme. Des exemples de telles préparations sont décrits dans les publications en langue anglaise: "Breslow, R., Advances In Chemistry Series, R.F. Gould, Ed., American Chemical Society, Washington, D.C., 21-43 (1971) et Tang, C.C.; Davalian, D.; Haung, P. et Breslow, R., J. Amer. Chem. Soc., 100, 3227 (1978). Un autre procédé concerne l'utilisation d'un polymère synthétique de base dont la chaîne principale est modifiée pour comporter des groupes fonctionnels ayant la fonction du site actif d'une enzyme donnée. On trouve des exemples d'un tel procédé dans les articles suivants: "Wulff, G. et Schulza,I., Isreal J. Chem.,17, 291 (1978) ainsi que Suh, J. et Klotz, I.M. Bioorganic, 6, 165 (1977). Un autre procédé concerne le rattachement d'un nouvel ensemble chimique à une enzyme naturelle au voisinage du site de l'enzyme, pour obtenir un comportement catalytique différent de l'enzyme considérée. Comme exemple de ce procédé, on peut citer la conversion de la papaine, c'est-à-dire d'une enzyme protéo- lytique, en une enzyme du type oxydase, obtenu par le rattachement covalent d'une flavine dans le voisinage du site actif de la papaine de l'enzyme naturelle, ce qui a été illustré par les articles en langue anglaise: "Levine, H. L. et Kaiser, E.T., J. Amer. Chem. Soc., 100, 7670 (1978), ainsi que Otsuki, T.; Nakagawa, Y. et Kaiser, E.T., J.C.S. Chem.Comm., 11, 457 (1978)". D'autres exemples d'une telle modification d'enzymes peuvent être trouvés dans l'article en langue anglaise: "Wilson, M.E. et Whitesides, G.M., J. Amer. Chem. Soc., 100, 306 (1978)." Une autre façon d'essayer de modifier la spécificité d'une enzyme consiste à immobiliser une enzyme naturelle sous la forme d'un gel de base. Par exemple, l'enzyme de la trypsine a été immobilisée dans un gel de polyacrylamide. Le polyacrylamide permet aux esters des acides aminés de diffuser à travers le gel de base de façon à réagir avec l'enzyme, sans permettre la diffusion de protéines de plus large dimension. Ainsi, la spécificité de l'enzyme est modifiée en supprimant la possibilité pour l'une des molécules du substrat d'atteindre l'enzyme. Des exemples de telles'modifications de la spécificité sont décrits dans l'ouvrage en langue anglaise: "Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, 3 Ed., 9, 148 (1980) publié par Wiley et Son, Inc." Il est enfin connu que l'on peut faire réagir la lysine mono-oxygénase naturelle pour bloquer les groupements sulfhydryles sur l'enzyme. Lorsque l'enzyme spécifique lysine- mono-oxygénase est traitée comme indiqué ci-dessus, elle présente une nouvelle activité catalytique envers les acides aminés et elle catalyse une désamination oxydante au lieu d'effectuer sa fonction naturelle de décarboxylation par oxy- génation. Toutefois, d'après les articles publiés, on ne peut pas prévoir le comportement d'une enzyme modifiée, comme indiqué dans les articles en langue anglaise de Yamauchi, T.; Yamamoto, S. et Hayaishi, 0., dans "The Journal of Biological Chemistry", 248, 10, 3750-3752 (1973). Il a également été publié qu'en faisant réagirune enzyme naturelle, par exemple la trypsine, avec son inhibiteur naturel, suivi d'une réticulation de l'enzyme son activité par rapport à son substrat naturel, peut être modifiée, comme indiqué dans l'article en langue anglaise de Beaven, G.H. et Gratzer, W.B. dans "Int. J. Peptide Res.", 5, 215-18 (1973). tien que ces procédés conviennent pour de nombreuses applications, ils permettent d'obtenir des enzymes modifiées, naturelles ou des enzymes analogues totalement synthétiques, qui n'ont pas une activité catalytique élevée. Il existe donc un besoin selon un procédé efficace et peu onéreux, de modifier chimiquement une enzyme naturelle d'un faible coût pour obtenir une enzyme semi-synthétique ayant une activité par rapport à une réaction chimique souhaitée qui n'était pas auparavant une réaction susceptible d'être catalysée d'une façon utilisable par l'enzyme naturelle, et cela de façon que la réaction précitée puisse être prédéterminée de façon sys- tématique. Les procédés décrits dans les publications mention- nées ci-dessus consistent simplement à soumettre une enzyme à un ensemble de conditions pour essayer de connaître son comportement. Ils ne décrivent pas un procédé systématique pour modifier le comportement d'une protéine ou d'une enzyme. La présente invention concerne la préparation d'enzymes semi-synthétiques en soumettant une protéine naturelle, notam- ment une protéine ayant une activité enzymatique, à une déna- turation partielle par l'action d'un agent dénaturant, afin d'ouvrir la structure de la protéine. Ensuite, la protéine partiellement dénaturée ainsi obtenue est mise en contact avec l'inhibiteur d'une enzyme modèle. Puis, la protéine est réticulée pour obtenir une nouvelle conformationlou une enzyme semi-synthétique.dont les propriétés sont définies par l'inhi- biteur. Enfin, on élimine de l'enzyme semi-synthétique obtenue, l'agent inhibiteur ainsi que tout excès d'agent réticulant, de façon à obtenir une fonction analogue à celle de l'enzyme modèle. L'enzyme semi- synthétique ainsi obtenue présente les mêmes caractéristiques d'activité que l'enzyme modèle. En obtenant les objets et avantages de la présente invention, la demanderesse a découvert qu'une protéine peut être modifiée à partir de sa structure naturelle pour obtenir une structure semi-synthétique, selon le procédé de l'invention. Cette nouvelle structure défini.t la forme d'une enzyme semi- synthétique ayant une activité catalytique. Le mot "enzyme" utilisé dans la présente description définit une protéine ayant une activité catalytique connue envers des substrats spécifique. Le terme "protéine" utilisé dans la description, définit, comme cela est généralement accepté, un polypeptide formé d'amino-acidespour obtenir une molécule biologique. L'invention concerne un procédé de modification d'une v protéine d'une première structure en une seconde structure présentant une activité enzymatique nouvelle, ou présentant une augmentation d'une activité enzymatique secondaire contenue dans la protéine naturellejde façon à atteindre un niveau utilisable industriellement. Selon le procédé de l'invention, on soumet une protéine naturelle, notamment une enzyme, à des conditions de traitement et/ou à des réactifs qui dénaturent partiellement la structure de la protéine, habituellement de façon réversible. Ensuite, on met un inhibiteur de l'enzyme modèle en contact avec la pro- téine naturelle se trouvant à l'état partiellement dénaturé. Bien que n'étant pas liéepar une quelconque théorie, la deman- deresse estime que la dénaturation partielle de la protéine permet à la protéine de fixer un inhibiteur de l'enzyme de façon qu'il soit modelé par le procédé de l'invention pour obtenir un site actif très semblable au site actif de l'enzyme servant de modèle. La demanderesse estime que la fixation de l'inhibiteur préserve et définit une-nouvelle conformation comprenant au moins un site capable de produire la fonction catalytique de l'enzyme modèle jusqu'à ce que la nouvelle conformation puisse être réticulée. A cet effet, après la mise en contact d'inhibiteur et de la protéine partiellement dénaturée, on effectue une réticulation pour stabiliser chimi- quement la nouvelle conformation de la protéine. On prépare ainsi une nouvelle enzyme semi-synthétique à partir d'une protéine modèle. L'expression "dénaturation partielle" signifie dans la présente description, une modification de la conformation de la protéine, modifiant la forme ou la conformation de la protéine, sans que la dénaturation de la protéine soit importante et irréversible. Le terme "conformation" signifie, comme cela est généralement accepté, la combinaison d'une structure secondaire et tertiaire dela protéine possédant "in vivo", une activité biologique. La dénaturation partielle des protéines est bien connue et discutée en détail dans les références suivantes: l'ouvrage "Biochemistry", de A.L. Lehninger, Worth Publishers, Inc., N.Y., 1970, pg. 58; l'article par P.L. Privalov "Stability of Proteins" dans "Advances in Protein Chemistry", Vol. 33, pg. 167-192; l'article de C. Sanford intitulé "Protein Denaturation, Partie C" dans "Advances in Protein Chemistry", Vol. 24, pg. 2-97; l'article de F.R.N. Gurd, et al intitulé "Motions in Proteins" dans Advances in Protein Chemistry", Vol. 33, pg. 74-166; l'article de 0. Jardetzky dans "BBA", Vol. 621, pg. 227-232; l'article de R. Huber dans "TIBS", Dec. 1979, pg. 271, et l'article de D.S. Markovich, et al dans "Molekulyarnaya Biologiya", Vol. 8, No. 6, pg. 857-863. L'expression "agent dénaturant" concerne les condition- ou les réactifs utilisés dans le procédé, provoquant la déna- turation partielle de leur protéine. Par exemple, la dénaturation partielle d'une protéine peut être obtenue par secouage de la protéine dans une solution aqueuse à une température élevée, par exemple dans la gamme de 25 d 60 C. Pour la plupart des protéines, une témpérature de 250C à 60 C modifie la structure de la protéine d'une façon telle qu'il en résulte une dénatu- ration partielle de la protéine. Toutefois, comme cela est bien connu, certaines protéines provenant de sources bactérielles thermophiles sontstables jusqu'à une température voisine du point d'ébullition de l'eau, et nécessiteraient l'utilisation de températures plus élevées que celles indiquées ci-dessus de façon générale. On peut également obtenir la dénaturation partielle d'une protéine par secouage de la protéine dans une solution aqueuse contenant un sel minéral,un acide mineral ou organique, ou un solvant miscible à l'eau. Comme sels minéraux appropriés pour déstabiliser la structure d'une protéine, on peut mentionner les suivantes: NaF, (NH4)2S04, (CH3)4NCl, (CH3)4NBr, KCH3COO, NE4Cl, RbCl, KC1, NaCl, CsCl, LiCl, KBr, NaBr, KNO3, MgC12, NaNO3, CaC12, KSCN, NaSCN, BaCl2, NaI, et LiI. Comme acides minéraux appropriés, on peut mentionner les suivants: acide chlorhydrique, acide nitrique, sulfurique, phosphorique,ainsique les acides forts minéraux donnant nais- sance à des protons de façon similaire. Comme acides organiques appropriés, on peut mentionner les suivants: acide acétique, acide formique, acide propio- nique et acide citrique. Comme solvants appropriés miscibles dans l'eau, sus- ceptibles de solubiliser les groupes hydrophobes de la protéine et ainsi de déstabiliser sa structure, on peut mentionner les suivants: t-butanol, acétonitrile, dioxane, acétone, méthanol, éthanol et diméthylsulfoxyde. Le terme "inhibiteur" utilisé dans la description désigne un composé ayant une structure suffisamment similaire à celle du substrat naturel de la protéine semi-synthétique, pour qu'elle puisse servir de patron pour le site actif de l'enzyme semi-synthétique. Les inhibiteurs ne sont généralement pas dégradés par l'enzyme comme le sont les substrats. On peut citer comme exemple de similitude structurale entre un inhi- biteur d'enzyme et le substrat naturel d'une enzyme, le cas de la glucose oxydase. Le glucose est le substrat naturel de la glucose oxydase tandis que le D-glucal est l'inhibiteur de la glucose oxydase. Le glucose et le D-glucal ont des structures très similaires. Le terme "réticulé" désigne dans la description un moyen de formation de liaisonscovalentes, soit intermoléculaire, soit intramoléculaire, entre les sites réactifs d'une protéine. Dans le cas d'une réticulation intramoléculaire, le procédé s'effectue habituellement en utilisant des réactifs multi- fonctionnels tels que l'aldéhyde glutarique. Comme agents réticulants permettant d'obtenir la réticulation d'une protéine on peut encore citer les composés suivants: l'amino-2, dichloro-4,6-s-triazine; les sels de diazonium; le N-hydroxy succinamide; le p-benzoylazide,ainsi que les réactifs mentionnés dans les références suivantes: Wolf, F., Methods Enzymol, 11, HIRS, C.H.W. ed., Academic Press, 1967, 617; Fasold, H. et al, Augen. Chem. Int. Ed. Engl., 10, 795, 197; et Keyes, M.H., KirkOthmer: Encyclopedia of Chemical Technology, 9, 3d ed., 1980, J. Wiley et Sons, Inc., 148-172. & De nombreuses enzymes naturelles sont suscrptibles d'être modelées selon le procédé de l'invention pour obtenir leurs enzymes semi- synthétiques analogues, comme par exemple les enzymes hydrolytiques, les enzymes rédox et les enzymes transférase. Par exemple, le premier groupe des enzymes hydro- lytiques comprend des enzymes protéolytiques qui hydrolysent les protéines telles que les suivantes: papaine, ficine, pepsine, trypsine, chymotrypsine, bromeline, kératinase, les carbohydrases qui hydrolysent les carbohydrates comme par exemple les suivantes: cellulase, amylase, maltase, pectinase, chitanase; les estérases qui hydrolysent les esters, comme les suivantes: lipase, chlolinestérase, lécithinase, les phospha- téases; les phosphatéases alkalines et acides; les nucléases qui hydrolysent sont les acides nucléiques, comme les suivantes: ribonucléase, déoxyribonucléase; ainsi que les amidases qui hydrolysent les amines, comme les suivantes: arginase, asp-a- raginase, glutaminase, histidase, et uréase. Le second groupe est constitué par les enzymes rédox qui catalysent les réactions d'oxydation ou de réduction. Parmi ce groupe, on peut citer les enzymes suivantes:glucose oxydase, xanthine oxydase, catalase, péroxydase, lipoxydase, et cytochrome réductase. Dans le troisième groupe constitué par les ensymes transférales, qui transfèrent des groupements d'une molécule à une autre, on peut mentionner des enzymes suivantes: transaminase glutamique- pyruvique, transaminase glutamique-oxalacétique, transméthylase, transphosphorylase phosphopyruvique. Dans la pratique habituelle, on choisit un modèle ou une première protéine, notamment une enzyme. Ensuite, on choisit une seconde protéine destinée à être modelée à la première protéine pour obtenir une enzyme semi-synthétique. Selon l'invention, on peut obtenir à partir de la seconde protéine, une protéine semi-synthétique différente si on le désire. Ceci procure un avantage considérable dans une large gamme d'app]i- cationscliniqueset industrielles dans lesquelles l'enzyme que l'on souhaite utiliser n'est disponible qu'en petites quantités, ou bien très onéreuse, ou encore difficile à purifier. Ainsi, une protéine naturelle ou une enzyme naturelle disponibles en de larges quantités et/ou à faible coût, peut être modifiée par le procédé de l'invention pour transformer la protéine ou l'enzyme en une enzyme semi-synthétique plus facile à obtenir et/ou d'un coût moindre, ayant l'activité catalytique de l'enzyme naturelle souhaitée. Il existe de nombreuses applications pour de tels produits de conversion d'enzymes comme par exemple de nombreuses applications dans le domaine industriel et dans le domaine de la recherche, en particulier dans la fermentation, dans les applications de la recherche - pharmaceutique et médicale, ainsi que dans les procédés de l'industrie alimentaire. Dans la mise en oeuvre pratique du procédé de l'in- vention, on purifie une protéine naturelle et on la dissout dans une solution-tampon appropriée. Ensuite, on mélange à la solution-tampon un agent dénaturant afin d'obtenir la dénatu- ration partielle de la protéine dissoute. On obtient notamment la dénaturation partielle de la protéine en modifiant la force ionique de la solution par addition d'un sel minéral, en modifiant le pH de la solution à l'aide d'un acide minéral ou organique donneur de protons, ou en modifiant la solution par introduction d'un solvant organique miscible à l'eau. La durée de contact de l'agent dénaturant et de la protéine peut varier de 15 minutes à quelques jours. De meme, la température de la solution peut être augmentée en même temps qu'on effectue l'opération de modification aboutissant à la dénaturation partielle de la protéine, comme indiqué dans les références mentionnées ci-dessus, par exemple dans l'article de Privalov. Dans certains cas o la protéine à traiter comporte un grand nombre de liaisons disulfure, comme par exemple la sérum albumine bovine ou uréase, la dénaturation partielle peut être effectuée par rupture des liaisons disulfure dans la protéine, en la soumettant à l'action du mercapto-éthanol. On suppose que la dénaturation partielle de la protéine provoque un relâchement de sa structure, de sorte qu'elle peut accepter et fixer l'inhibiteur lorsque celui-ci est ajouté à la solution contenant la protéine partiellement dénaturee. Après avoir obtenu la dénaturation partielle de la protéine, on mélange un inhibiteur de l'enzyme modèle et on le maintient en contact avec l'enzyme partiellement dénaturée pendant un laps de temps suffisant et à une température suffi- sante pour obtenir une population de complexes enzyme partiel- lement dénaturé-inhibiteur. Par exemple, dans le cas de la transofrmation de l'enzyme trypsine naturelle en une enzyme semi-synthétique qui reproduit l'activité de l'enzyme chymo- trypsine naturelle, l'enzyme trypsine naturelle est mise en contact avec un inhibiteur de la chymotrypsine, par exemple l'indole ou l'acide benzoique. La mise en contact peut être effectuée soit dans une solution aqueuse, soit dans une solution aqueuse comportant une addition suffisante de solvant organique pour obtenir la solubilisation de l'inhibiteur. Après la mise ne contact de l'inhibiteur avec l'enzyme partiellement dénaturé, on stabilise la nouvelle forme sous laquelle se présente l'enzyme semi-synthétique, par une réticu- lation extensive de la structure de la protéine. Une telle réticulation peut être notamment obtenue avec l'aldéhyde glutarique utilisé comme agent de réticulation, étant donné que ce réactif est relativement peu couteux et facilement disponible, mais'on peut également utiliser avec succès n'importe lequel deb agents de réticulation mentionnés ci-dessus. Apres avoir effectué la réticulation de la protéine selon la nouvelle structure pour obtenir l'enzyme semi-syn- thétique, on élimine de l'enzyme s-emi-synthétique par n'importe quel procédé approprié, l'inhibiteur et tout excès d'agent réticulant. Comme procédé utilisé à cet effet, on peut citer la chromatographie en phase liquide et la dialyse exhaustive. L'enzyme semi-synthétique obtenue est ensuite purifiée, notam- ment par chromatographie sur colonne chargée avec un gel, et l'on recueille la fraction la plus active de la protéine à partir de l'éluant pour recueillir la partie la plus active de l'enzyme semi-synthétique. Les exemples suivants dans lesquels les températures sont indiquées en degrés centigradespermettront de mieux com- prendre l'objet de l'invention. Les modes opératoires l)à 5)sont indiqués à la fin des exemples d'essais. EXEMPLE 1 PARTIE A Purification de l'enzyme On soumet de la trypsine purifiée provenant du pancréas de bovin, cristallisée deux fois, exempte de sel et lyophilisée, à l'essai selon la màthode de Kostka et Carpenter (Kostka, V. et Carpenter, F.H., dans "The Journal of Biological Chemistry", 239, 6, 1799 (1964)), et l'on ne détecte aucune contamination par de la chymotrypsine naturelle. L'essai initial pour déter- miner la spécificité du substrat de trypsine est effectué par une méthode potentiométrique connue sous la désignation "pH-Stat", selon l'enseignement de Walsh et Wilcox (Walsh, K.A. et Wilcox, P.E., "Methods in Enzymology", édité par G.E. Perlmann et L. Lorant, "Academic Press", 31-41 (1970)). On prépare la trypsine dans de l'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3,0. L'absorbance est déterminée pour 280 nm et l'on utilise une absorbance de 14,3 pour une solution à 1% pour déterminer la concentration en mg/ml. Quatre essais potentiostatiques "pH-Stat" initiaux ont été effectués pour déterminer l'activité U/mg pour chacun des substrats de la trypsine naturelle. Les substrats utilisés étaient les suivants: 1. Acétyltyrosine éthylester (ATEE) (O,01 M) 2. Benzoylarginine éthylester (BAEE) (O,01 M) 3. Acétyltryptophane éthylester (ATrEE) (O,01 M) 4. Acétylphénylalanine éthylester (APEE) (0,01 M) PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout une quantité suffisante de trypsine purifite obtenue dans la partie A dans 100 ml d'acide chlorhydrique O,001 M à pH 3 et à 25 C, pour obtenir une absorbance de 0,98 pour 280 nm. On laisse reposer la trypsine ainsi préparée pendant 30 minutes pour obtenir sa dénaturation partielle. PARTIE C Addition de l'inhibiteur A une quantité de 40 ml de solution d'enzyme dénaturée provenant de la partie B, on ajoute 30 mg d'indole en poudre purifié et séché, et l'on soumet le mélange à un secouage lent pendant une heure. Apres une heure, le complexe inhibiteur- trvpsine-chymotrypsine est soumis à un essai pour vérifier 1' inhibition et ainsi la liaison de l'inhi- biteur à l'enzyme. PARTIE D Réticulation A la solution obtenue dans la partie C, on ajoute pl d'un agent de réticulation contenant 8% d'aldéhyde glutarique. On soumet la solution obtenue à un secouage pendant une heure à la température de 0 à 5 C à pH 3. Après une heure, on fait monter le pH de la solution jusqu'à 5 par addition de 0,01 M de NaOH. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution de la partie D sur une colonne de filtration But gel, connue sous la désignation "Séphadex G-10" et un utilisant de l'acide chlorhydrique 0,01 M dans du chlorure de calcium 0,001 M, comme éluant. La séparation de l'indole et de l'excès d'aldéhyde glutarique est effectuée en un laps de temps d'environ une heure à l'aide d'une colonne de dimension 30,48 x 2,54 cm et d'un débit d'éluant de 60 ml/hr. Le pic de la protéine est détecté pour 254 nm, on la recueille, et on la soumet aux essais indiqués ci-après. PARTIE F Résultats Les échantillons provenant de la partie E de chymo- trypsine semi-synthétique préparés selon l'invention présententj par rapport au substrat pour chymotrypsineJl'augmentation d'activité indiquée ci-après. Substrat ATEE (U/ml) BAEE (U/ml) Activité initiale 5,21 55,3 Activité finale mesurée selon le mode opératoire 1) 8,37 30,21 Modification en % + 160 -46 Les résultats montrent que la chymotrypsine semi- synthétique présente une activité accrue par rapport au substrat de chymotrypsine (ATEE) et une activité réduite par rapport au substrat de trypsine (BAEE). L'exemple ci-dessus montre donc une augmentation importante de l'activité par rapport à un substrat lorqu'on utilise le procédé de l'invention. Cet exemple montre en outre l'augmentation de l'activité d'une peptidylpeptide hydrolase, c'est-à-dire la trypsine, par rapport au substrat d'une autre peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la chymotrypsine, lorsqu'on opère selon le procédé de l'invention pour obtenir une chymotrypsine semi-synthétique. EXEMPLE 2 PARTIE A Purification de l'enzyme On utilise l'enzyme ribonucléase sous la forme purifiée de ribonucléase de pancréas d'orifine bovine, exempte de sel et exempte de protéase, du type II-A préparée par la Firme "Sigma Chemical Co." PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout 60 mg de ribonucléase purifiée provenant de la partie A dans 100 ml d'eau distillée déionisée pour obtenir une solution ayant une absorbance de 0,39 pour 280 nm. On ajoute à la solution 300 p1 de mercaptoéthanol 0,2 M utilisé comme agent dénaturant.On porte le pH de la solution à 7 et on le maintient ainsi pendant deux heures par introduction goutte à goutte de NaOH 0,01 M tout en agitant lentement à la température de 25 C. PARTIE C Addition de l'inhibiteur A une quantité de 100 ml de la solution de la partie B, on ajoute 40 mg d'inhibiteur sous la forme d'indole en poudre sèche. On agite la solution à la température de 25 C et on maintient le pH à 7 par addition goutte à goutte de NaOH 0,01 M pendant 1-1,5 heures jusqu'à ce que la totalité de l'indole soit passée en solution. PARTIE D Réticulation On augmente le pH de la solution de la partie C jusqu'à pH 9, 45 à la température de 250C par une addition goutte à goutte de NaOH 0,1 M, et l'on agite lentement le tout pendant un laps de temps de 3 heures. On refroidit ensuite la solution jusqu'à 0-5 C dans un bain d'eau froide. Lorsque la solution atteint la température de 5 C, on introduit lentement dans la solution habituellement en un laps de temps d'environ 30 minutes, 4001pl d'un agent de réticulation comprenant 8% d'aldéhyde glutarique, et l'on soumet l'ensemble à un secouage lent pendant 17 heures. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution de la partie D sur une colonne connue sous la désignation "Sephadex G-1i", en utilisant comme éluant de l'acide chlorhydrique O;OOi M. On obtient la séparation de l'indole et de l'excès d'aldéhyde g!litarique en utilisant une colonne de 30,48 x 2,54 cm. On recueille la fraction de la protéine à 206 nm. PARTIE F Résultats Les échantillons provenant de la partie E d'estérase semisynthétique préparés selon l'invention, présentent par rapport au substrat pour estérase, l'augmentation d'activité indiquée ci-après: Substrat BAEE (U/mg) Activité initiale 0,00 Activité finale Mode opératoire 1) 0,3 Mode opératoire 2) 0,4 Modification en % N/A Les résultats ci-dessus montrent que l'estérase semi- synthétique présente une activité enzymatique par rapport au substrat de l'estérase, alors que la ribonucléase naturelle ne présente aucune activité. Cet exemple montre la transformation d'un gène d'une enzyme qui est une nucléase, en un autre gène d'enzyme qui est une estérase. EXEMPLE 3 PARTIE A Purification de l'enzyme On soumet de la trypsine, provenant du pancréas de bovin, cristallisée deux fois, exempte de sel et lyophilisée, à l'essai selon la méthode de (Kostka, V. et Carpenter, F.H., dans "The Journal of Bioloaical Chemistry", 239, 6, 1799 (1964)) et l'on ne détecte aucune contamination par de la chymotrypsine naturelle. L'essai initial pour déterminer la spécificité du substrat de trypsine est effectué par une méthode potentio- métrique connue sous la désignation "pH-Stat" selon l'ensei- gnement de Walsh et Wilcox (Walsh, K.A. et Wilcox, P.E., "Methods in Enzymology", édité par G.E. Perlmann et L. Lorand, "Academic Press", 3141 (1970)). On prépare la trypsine dans de l'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3,O. L'absorbance est déterminée pour 280 nm et l'on utilise une absorbance de 14,3 pour une solution à 1% pour déterminer la concentration en mg/ml. Quatre essais potentiostatiques"pH-Stat" initiaux ont été effectués pour déterminer l'activité U/mg pour chaque subs- trat de trypsine naturelle. Les substrats utilisés étaient les suivants: 1. Acétyl tyrosine éthyl ester (ATEE) (0,01 M) 2. Benzoyl arginine éthyl ester (BAEE) (0,01 M) 3. Acétyl tryptophane éthyl ester (ATrEE) (0,01 M) 4. Acétyl phénylalanine éthyl ester (APEE) (0,01 M) PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout une quantité suffisante de trypsine purifiée provenant de la partie A dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3 à la température de 25 C, pour obtenir une absorbance de 1,4 pour 280 nm. On laisse reposer la trypsine pendant 30 minutes pour obtenir sa dénaturation partielle. PARTIE C Addition de l'inhibiteur A une quantité de 40 ml de la solution d'enzyme dénaturée provenant de la partie B, on ajoute 2 ml d'une solution contenant 1 % d'indole (dans de 1' acide chlorhydrique 0,001 M) et l'on soumet le mélange à un secouage lent pendant 2 heures. Après un laps de temps de 2 heures, le complexe inhibiteur- trvpsine-chymotrypsine est soumis à un essai pour vérifier l'existence de l'inhibition, c'est-à-dire la liaison de l'inhibiteur à enzyme. PARTIE D Réticulation A la solution obtenue dans la partie C, on ajoute 3001pl d'un agent de réticulation contenant 8% d'aldéhyde glutarique. On soumet la solution obtenue à un secouage pendant 17 heures à la température de O à 5 C à pH 3. Après 17 heures on augmente le pH de a solution jusqu'à 5 par addition de soude 0,01 M. PARTIE E -Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration sur gel connue sous la désignation "Sephadex G-10", et en utilisant comme éluant une solution 0,001 M en acide chlorhydrique et 0,001 M en chlorure de calcium. On effectue la séparation de l'indole et de l'excès d'aldéhyde glutarique en un laps de temps d'environ 1 heure à l'aide d'une colonne 30,48 x 2,54 cm avec un débit d'éluant de 60 ml/hr. On détecte le pic de la protéine pour 254 nm, on la recueille, et on la soumet aux essais indiqués ci-après. PARTIE F Résultats Les échantillons provenant de la partie E de chymo- trypsine semi-synthétique préparés selon l'invention, présentent par rapport au substrat pour chymotrypsine, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. Substrat ATEE (U/ml) BAEE (U/ml) Activité initiale 3,2 52,0 Activité finale selon le mode opératoire 1) 12,85 45,75 Modification en % +401 -14 Les résultats ci-dessus montrent que la chymotrypsine semi-synthétique présente une activité accrue par rapport au substrat de chymotrypsine (ATEE) et une activité réduite par rapport au substrat de trypsine (BAEE). Cet exemple montre donc une augmentation importante de l'activité par rapport à un substrat lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. Cet exemple montre en outre l'aug- mentation de l'activité d'une peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la trypsine, par rapport au substrat d'une autre peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la chymotrypsine, lorsqu'on opère selon le procédé de l'invention. EXEMPLE 4 PARTIE A Purification de la protéine- * On utilise comme protéine la sérum albumine bovine (BSA) sous la forme d'une protéine cristalline purifiée et lyophilisée, contenant 1 à 3% de globuline et préparée par la firme "Sigma Chemical Co., lot A4378." PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout 100 ml de protéine purifiée BSA provenant de la partie A dans 100 ml d'eau distillée déionisée et présentant une absorbance de 0,58 à 280 nm. On maintient le pH de la solution à 3 pendant 2 heures tout en agitant lentement à la température de 25 C par l'introduction goutte à goutte d'une solution d'acide chlorhydrique 0,01 M. PARTIE C Addition de l'inhibiteur A une quantité de 100 ml de la solution provenant de la partie B, on ajoute 40 mg de poudre d'indole séché, comme inhibiteur. On agite la solution à la température de 25 C et on la maintient à pH 3 en introduisant goutte à goutte une solution d'acide chlorhydrique 0,01 M pendant un laps de temps de 1 à 1,5 heure jusqu'à ce que tout l'indole passe en solution. PARTIE D Réticulation On augmente jusqu'à 7 le pH de la solution de la partie C à la température de 25 C par addition goutte à goutte de soude 0,1 M, et l'on agite lentement le tout pendant 3 heures. On refroidit la solution jusqu'à O - 5 C dans un bain d'eau froide. Lorsque la solution atteint la température de 5 C, on ajoute en un laps de temps qui est habituellement d'environ minutes, 400p1 d'un agent de réticulati-on contenant 8% d'aldéhyde glutarique, et l'on soumet la solution à une agitation lente pendant 17 heures. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml d'une solution de la partie D sur une colonne constituée par un gel;connussous la désignation "Séphadex G-15", en utilisant comme éluant de l'acide chlorhydrique 0,001 M. On effectue la séparation de l'indole et de l'aldéhyde glutarique en excès à l'aide d'une colonne de 30,48 x 2,54 cm. On recueille la fraction de protéine après contrôle pour 206 nm. PARTIE F Résultats Les échantillons d'estérase semi-synthétique préparés selon l'invention et provenant de la partie E présentent, par rapport au substrat pour estérase, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. Substrat BAEE (U/mg) Activité initiale 0,00 Activité finale mode opératoire 1) 0,06 mode opératoire 2) 0,022 Modification en % N/A Les résultats montrent que l'estérase semi-synthétique présente une activité enzymatique par rapport au substrat d'estérase, alors qu' aucune activité n' a été trouvée dans la BSA naturelle. Cet exemple montre la transformation d'un gène d'une protéine non enzymatique, c'est-à-dire l'albumine, en un autre gène de protéine qui est une estérase enzymatiquement active. EXEMPLE 5 PARTIE A Purification de l'enzyme On soumet la trypsine provenant du pancréas de bovin, purifiée, deux fois cristallisée, exempte de sel et lyophilisée, à l'essai selon la méthode de Kcstka et Carpenter (Kostka, V. et Carpenter, F.H., The Journal of Biological Chemistry", 239, 6, 1799 (1964)), et l'on ne détecte aucune contamination par de la chymotrypsine naturelle. L'effet initial pour déterminer la spécificité du substrat de trypsine est effectué par une méthode potentiométrique connue sous la désignation "pH-Stat" selon l'enseignement de Walsh et Wilcox (Walsh, K.A. et Wilcox, P.E., Methods in Enzymology, édité par G.E. Perlmann et L. Lorand", Academic Press", 31-41 (1970)). On prépare la trypsine dans de l'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3,0. On détermine l'absorbance pour 280 nm et l'on utilise une absorbance de 14,3 pour une solution contenant 1% pour déterminer la concen- tration en mg/ml. Quatre essais potentiostatiques "pH-Stat" initiaux ont été effectués pour déterminer l'activité U/mg pour chaque substrat de la trypsine naturelle. Les substrats utilisés sont les suivants: 1. Acétyl tyrosine éthyl ester (ATEE) (0,01 M) 2. Benzoyl arginine éthyl ester (BAEE) (0,01 M) 3. Acétyl tryptophane éthyl ester (ATrEE) (0,01 M) 4. Acétyl phénylalanine éthyl ester (APEE) (0,01 M) PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout une quantité suffisante de trypsine purifiée provenant de la partie A, dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0, 001 M à pH 3 à une température de 25 C pour obtenir une absorbance de 0, 98 pour 280 nm. On laisse reposer la trypsine pendant 30 minutes pour obtenir sa dénaturation partielle. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On ajoute à 40 ml de solution d'enzyme dénaturée provenant de la partie B, 2 ml d'une solution d'indole dans de l'acide chlorhydrique 0,001 M, et l'on soumet la solution à une agitation lente pendant 1 heure. PARTIE D Réticulation On ajoute à la solution provenant de la partie C une quantité de 100 pl d'un agent de réticulation contenant 8% d'aldéhyde glutarique. On soumet la solution contenue à un secouage pendant 20 heures à la température de 0-5 C à pH 3. Après 20 heures, on augmente le pH de la solution jusqu'à 5 par addition de soude 0,01 M. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration contenant un gel connu sous la désignation "Séphadex qualité G-10", et en utilisant comme éluant une solution HC! 0,001 M dans CaC12 0,001 M. On effectue la séparation de l'indole et de l'excès d'aldéhyde glutariaue en un laps de temps d'environ 1 heure à l'aide d'une colonne de 30,48 x 2,54 cm avec un débit d'éluant de 60 ml/hr. On détecte le pic de la protéine pour 254 nm, on la recueille et on la soumet aux essais comme indiqué ci- dessous. PARTIE F Résultats Les échantillons de chymotrypsine semi-synthétique préparés selon l'invention et provenant de la partie E présentent, par rapport au substrat pour chymotrypsine, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. 249S619 Substrat ATEE (U/ml) BAEE (U/ml) Activité initiale 3,2 52,0 Activité finale mode opératoire 1) 8,45 48,0 Modification en % +264 -8 Les résultats ci-dessus montrent que la chymotrypsine semi-synthétique présente une activité accrue par rapport au substrat de chymotrypsine (ATEE) et une activité réduite par rapport au substrat de trypsine (BAEE). Cet exemple montre une augmentation importante de l'activité par rapport à un substrat lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. Cet exemple montre en outre l'augmen- tation de l'activité pour une espèce de peptidyl-peptide hydrolase, c'està-dire la trypsine, par rapport au substrat d'une autre peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la chymotrypsine, lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. EXEMPLE 6 PARTIE A Purification de l'enzyme - On soumet de la trypsine purifiée, provenant de pancréas bovin, deux fois cristallisée, exempte de sel et lyophilisée, à l'essai selon la méthode de Kostka et Carpenter (Kostka, V. et Carpenter, F.H., The Journal of Biological Chemistry", 239, 6, 1799 (1964)), et l'on ne détecte aucune contamination par de la chymotrypsine naturelle. L'essai initial pour déterminer la spécificité du substrat de trypsine est effectué par une méthode potentiométrique connue sous la désignation "pH-4", selon l'enseignement de Walsh et Wilcox (Walsh, K.A. et Wilcox, P.E., "Methods in Enzymology",édité par G.E. Perlmann et L. Lorand, Academic Press, 31-41 (1070)). On prépare la trypsine avec de l'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3,0. On détermine l'absorbance pour 280 nm, et l'on utilise une absorbance de 14, 3 pour une solution à 1% pour déterminer la concentration en mg/ml. Quatre essais potentiostatiques "pH-Stat" initiaux soT effectués pour déterminer l'activité U/mg pour chaque substrat de trypsine naturelle. Les substrats utilisés sont les suivants: 1. Acétyl tyrosine éthyl ester (ATEE) (O,01M) 2. Benzoyl arginine éthyl ester (BAEE) (O,01 M) 3. Acétyl tryptophane éthyl ester (ATrEE) (0,O1 M) 4. Acétyl phénylalanine éthyl ester (APEE) (0,01 M) PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout une quantité suffisante de trypsine purifiée provenant de la partie A dans 100 ml d'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3 à la température de 25 C pour obtenir une absorbance de 1,35 pour 280 nm. On laisse reposer la trypsine pendant 30 minutes pour obtenir sa dénaturation partielle. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On ajoute à 10 -ml de la solution d'enz.me dénaturée provenant de la partie B, 5 ml d'une solution aqueuse contenant 1% d'acide benzoîque, et l'on effectue un seccuage lent de la solution pendant 1 heure. Apeès un laps de temps d'une heure, 0 on contrôle le complexe inhibiteur-trypsine-chymotrypsine pour vérifier que l'inhibition est obtenue, et ainsi que l'inhi- biteur est fixé à l.'enzyme. PARTIE D Réticulation On ajoute à la solution provenant de la partie C 1l de l'agent de réticulation constitué par une solution contenant 8% d'aldéhyde glutarique. On soumet la solution ainsi obtenue à une agitation pendant 17 heures à la température de 0-5 C à pH 3. Après 17 heures, on augmente le pH de la solution jusqu'à 5 par addition de soude O,O1 M. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution de la partie D sur une colonne de filtration garnie d'un gel} connue sous la désignation "Séphadex qualité G-10", en utilisant comme éluant HCl 0,001 M darsCaCl2 O,001 M. On effectue la sépa- ration de l'acide benzoique et de l'excès d'aldéhyde glutarique en un laps de temps d'environ une heure en utilisant une colonne de 30,48 x 2, 54 cm, avec un débit d'éluant de 60 ml/hr. On détermine le pic de la protéine pour 254 nm, on la recueille et on effectue les essais ci-après. PARTIE F Résultats Les échantillons de chymotrypsine semi-synthétique préparés selon l'invention présentent, par rapport au substrat pour chymotrypsine, l'augmentation de l'activité indiquée ci- après. Substrat ATrEE (U/ml) Activité initiale 1,66 Activité finale mode opératoire 1) 6,35 Modification en % +382 Les résultats ci-dessus montrent que la chymotrypsine semi-synthétique présente une activité accrue par rapport au substrat de chvmotrypsine (ATEE), et une activité réduite par rapport au substrat de trypsine (BAEE). Cet exemple montre également une augmentation impor- tante de l'activité par rapport à un substrat lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. Cet exemple montre en outre l'augmentation de l'activité d'une espèce de peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la trypsine, par rapport au substrat d'une autre peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la chymo- trypsine, lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. EXEMPLE 7 PARTIE A Purification de l'enzyme On utilise de l'enzyme ribonucléase sous une forme purifiée provenant d'une ribonucléase de pancréas de bovin exempte de sel et de protéase, du type II-A préparée par la firme "Sigma Chemical Co.". PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout 60 mg de ribonucléase purifié provenant de la partie A, dans 100 ml d'eau distillée déionisée, l'absor- bance étant alors de 0,411 pour 280 nm. On abaisse le pH de la solution jusqu'à 3 et on le maintient ainsi pendant 2 heures en agitant lentement à la température de 25 C et en ajoutant goutte à goutte de l'acide chlorhydrique 0,01 M. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On ajoute à 100 ml de la solution provenant de la partie B, une quantité de 40 mg de poudre sèche d'indole utilisé comme inhibiteur. On agite la solution à la température de 25 C et l'on maintient le pH à 3 par une addition goutte à goutte d'acide chlorhydrique 0,01 M en un laps de temps de 1-1,5 jusqu'à ce que la totalité de l'indole passe en solution. PARTIE D Réticulation On élève le pH de la solution provenant de la partie C jusqu'à 7 à la température de 25 C par une addition goutte à goutte de soude de 0,1 M, et l'on agite lentement le tout pendant 3 heures. On refroidit ensuite la solution jusqu'à la température de 0-5 C dans un bain d'eau froide. Lorsque la solution atteint la température de 5 C, on introduit habi- tuellement en un laps de temps d'environ 30 minutes une quantité de 400 p1 d'un agent de réticulation constitué par une solution contenant 8% d'aldéhyde glutarique, et l'on soumet la solution à un secouage lent pendant 30 heures. PARTIE E Purification On effectue la dialyse de la solution provenant de la partie D à l'aide d'un tampon TRIS 0,01 M à pH 7 à l'aide d'un jeu de tubes connus sous la désignation "Spectrapore" et ayant une zone de coupure pour un poids moléculaire d'environ 3500, pendant un laps de temps de 20 heures à la température de 0-5 C. PARTIE F Résultats Les échantillons d'estérase semi-synthétiques provenant de la partie E et préparés selon l'invention présentent, par rapport au substrat pour estérase, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. Le tampon décrit dans la mesure effectuée selon la. procédure 2)est ajusté au pH approprié avec de l'acide chlorhydrique 0,01 M. Substrat BAEE (U/mg) Activité initiale 0,00 Activité finale mode opératoire 2) pH 9 0,089 pH 8 0,15 pH 7 0,29 pH 6 0,79 pH 5 0,41 Modification en % N/A Les résultats ci-dessus montrent qu'une estérase semi-synthétique présente une activité enzymatique par rapport au substrat estérase, tandis que la ribonucléase naturelle ne présente aucune activité. Cet exemple illustre la conversion d'un gène d'enzyme, qui est une nucléase, en un autre gène d'enzyme qui est une estérase. EXEMPLE 8 PARTIE A Purification de l'enzyme - On soumet de la trypsine purifiée provenant du pancréas de bovin, cristallisée deux fois, exempte de sel et lyophilisée, a l'essai selon la méthode de Kostka et Carpenter (Kostka, V. et Carpenter, F.H., "The Journal of Biological Chemistry", 239, 6, 1799 (1964)), et l'on ne détecte aucune contamination par de la chymotrypsine naturelle. On effectue l'essai initial pour déterminer la spécificité du substrat de trypsine par la méthode potentiométrique connue sous la désignation "pH- Stat", selon l'enseignement de Walsh et Wilcox (Walsh, K.A. et Wilcox, P. E., "Methods in Enzymology",édité par G.E. Perlmann et L. Lorand, "Academic Press", 31-41 (1970)) On prépare la trypsine avec de l'acide chlorhydrique 0,001 M à pH 3,0. On détermine l'absorbance pour 280 nm, et l'on utilise une absorbance de 14,3 avec une solution à 1% pour déterminer la concentration en mg/ml. Ouatre essais potentiostatiques"pH-Stat" initiaux sont effectués pour déterminer l'activité U/mg pour chaque substrat de la trypsine naturelle. On utilise les substrats suivants: 1. Acétyl tyrosine éthyl ester (ATEE) (0,01 M) 2. Benzoyl arginine éthyl ester (BAEE) (0,01 M) 3. Acetyl tryptophane éthyl ester (ATrEE) (0,01 M) 4. Acetyl phénylalanine éthyl ester (APEE) (0,01 M) PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On dissout une quantité suffisante de trypsine purifiée provenant de la partie A dans 100 ml de HC1 0,001 M à pH 3 à C pour obtenir une absorbance de 1,56 pour 280 nm. On laisse reposer la trypsine pendant 30 minutes pour obtenir sa dénaturation partielle. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On ajoute à 40 ml de la solution d'enzyme dénaturée provenant de la partie B, une quantité de 2 ml d'acétate de phényle pur et l'on réajuste le pH de la solution à 3 avec de l'acide chlorhydrique dilué. On chauffe ensuite la solution jusqu'à 40 C pour dissoudre la totalité de l'inhibiteur constitué par l'acétate de phényle dans la solution, et l'on agite le tout pendant 2 heures. PARTIE D Réticulation On ajoute à la solution provenant de la partie C 600p1 d'agent de réticulation constitué par une solution contenant 8% d'aldéhyde glutarique. On soumet la solution ainsi obtenue à un secouage pendant 20 heures à la empérature de 0-5 C à pH 3. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration constituée par un gel connu sous la désignation "Séphadex qualité G-10" en utilisant comme éluant une solution HCl 0,001 M avec CaCl2 O,001 M. On effectue la séparation de l'acétate de phényle et de l'excès d'aldéhyde glutarique en un laps de temps d'environ 1 heure avec une colonne de 30,48 x 2,54 cm avec un débit d'éluant de 60 ml/hr. On détermine le pic de la protéine pour 254 nm, on la recueille et on effectue les essais ci- après. PARTIE F Résultats Les échantillons de chymotrypsine semi-synthétiques préparés selon l'invention et provenant de la partie E présentent, par rapport au substrat pour chymotrypsine, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. Substrat ATEE (U/ml) BAEE (U/ml) Activité initiale 3,2 54 Activité finale mode opératoire 1) 6,23 32,6 Modification en % +195 -22 Ces résultats montrent que la chymotrypsine semi- synthétique présente une activité accrue par rapport au substrat de chymotrypsine (ATEE), et une activité réduite par rapport au substrat de trypsine (BAEE). L'exemple ci-dessus montre également une augmentation importante de l'activité par rapport au substrat lorsqu'on utilise le procédé de l'invention. Cet exemple montre en outre l'augmentation de l'activité d'une espèce de petidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la trypsine, par rapport au substrat d'une autre peptidyl-peptide hydrolase, c'est-à-dire la chymotrypsine, lorsqu'on opère selon le procédé de l'invention. EXEMPLE 9 PARTIE A Purification de l'enzyme On utilise de l'alpha-amylase d'origine bactérielle comme enzyme purifiée, constituée par un produit quatre fois cristallisé, du type II-A préparée par la firme "Siama Chemical Co.", et isolé à partir de Bacillus Subtilis. On dissout 1 g d'alpha-amylase bactérielle purifiée dans ml d'eau distillée déionisée, et on effectue la dialyse contre un tampon de phosphate lmM à pH 7 pendant 24 heures à la température de 0-5 C. La préparation ainsi obtenue est conservée à l'état gelé jusqu'à son utilisation. PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On porte à la température ambiante 10 ml de la solu- tion gelée contenant 1% d'alpha-amylase provenant de la partie A et on le filtre à travers un filtre ayant une dimension de pore de O,20 pm. La concentration déterminée après stockage est de 0,67%. On effectue ensuite le titrage de 6,5 ml de la solution d'alpha-amylase avec de la soude 0,01 M jusqu'à l'obtention d'un pH de 10,7 et on agite lentement le tout pendant 10 minutes. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On mélange la solution de la partie B avec 0,017 gramme d'inhibiteur constitué par de la cellobiose, et l'on agite le tout pendant 45 minutes à la température de 25 C. PARTIE D Réticulation On mélange la solution provenant de la partie C à la température de 25 C avec 10pl d'un agent réticulant constitué par de l'aldéhyde glutarique, et l'on agite le tout pendant minutes. Apres l'addition de l'aldéhyde glutarique, le pH diminue jusqu'à 9,9 et la solution qui était claire devient jaunâtre. On ajuste le pH à 9 en ajoutant goutte à goutte de l'acide chlorhydrique 0,01 M et l'on continue l'agitation pendant 15 minutes. On ajuste ensuite lentement le pH à 7 avec de l'acide chlorhydrique 0,01 M et l'on agite le tout pendant 1 heure supplémentaire. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 5 ml de la solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration de 1,25 x 47 cm contenant un gel connu sous la désignation "Séphadex G-10", en utilisant une solution d'un tampon de Tris 0,01 M à pH 7 avec un débit de 1 ml/min. On détecte le pic de la protéine pour 206 nm et on la recueille. PARTIE F Résultats Les échantillons de glycoside hydrolase semi-syn- thétiques préparés selon le procédé de l'invention et provenant de la partie E présentent, par rapport au substrat pour glycoside hydrolase, l'augmentation d'activité indiquée ci-après Les substrats pour des glycoside hydrolase utilisés sont: r-nitrophényllt-D-galacto pyranoside (pNpGA) et f-nitrophényl-a -D-glucoside (pNeGL) Substrat pNbGA (U/ml) pNcGL (U/ml) Activité initiale 0,00 0,00 Activité finale mode opératoire 3) 1,8 x 10-3 3 3 1,5 x 10- mode opératoire 4) 3 x 103 Les résultats ci-dessus montrent que la glycoside hydrolase semi-synthétique présente une activité enzymatique par rapport au substrat de glycoside hydrolase, alors qu'aucune activité n'est trouvée dans l'alpha-amylase bactérielle naturelle qui est elle-même une espèce de glycoside hydrolase. Cet exemple montre la conversion d'une glycoside hydrolase en une autre glycoside hydrolase. EXEMPLE 10 PARTIE A Purification de l'enzyme On utilise comme enzyme purifiée de l'alphaamylase d'origine bactérielle, constituée par un produit cristallisé quatre fois, du type II-A préparée par "Sigma Chemical Co.' et isoléeà partir de Bacillus Subtilis. On dissout 0,15 g d'alpha-amylase bactérielle purifiée dans 15 ml d'eau distillée déionisée, et on dialyse le tout à travers un tampon de phosphate 1 mM à pH 7 pendant 24 heures à la température de 0-5 C. PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On porte à la température ambiante 10 ml de lasolution contenant 1% d'alpha-anylase provenant de la partie A et on les centrifuge à 20 000 g pendant 20 minutes. On détermine la concentration qui est de 0,65%. On effectue ensuite le titrage de 10 ml de la solution d'alpha-amylase avec de la soude 0,01 M jusqu'à un pH de 10,6 et l'on agite le tout lentement pendant 10 minutes. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On mélange la solution provenant de la partie B avec 0,051 gramme de cellobiose comme inhibiteur et l'on agite le tout pendant 45 minutes à la température de 25 C. PARTIE D Réticulation On mélange à la solution provenant de la partie C à la température de 25 C, une quantité de 86 1 d'agent de réticulation constitué par de l'aldéhyde glutarique. On ajoute ensuite immédiatement une solution 0,1 M de NaCO3 - NaHCO3, à pH 10,0 jusqu'à ce que le pH soit maintenu à 10 pendant 15 minutes. La quantité de solution de carbonate indiquée est d'environ 0,7 ml. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 1 ml de la solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration de 1,25 x 47 cmr contenant un gel connu sous la désignation "Séphadex G-10" et en utilisant un tampon Tris 0,01 M à pH 7 avec un débit de 0,34 ml/minute. On détermine le pic de la protéine pour 254 nm et on la recueille. PARTIE F Résultats Les échantillons de glycoside hydrolase semi-syn- thétique préparés selon l'invention et provenant de la partie en E présentent, par rapport au substrat pour glycolyse hydrolase, l'augmentation de l'activité indiquée ci-après. On utilise comme substrat pour glycoside hydrolase: F-nitrophényl-l-Dglucoside (9NbGL) et ?nitrophényl-oL-D-glucoside (fNOGL) Substrat eNtGL (U/mg) ?NOGL (U/mg) Activité initiale 0,00 0,00 Activité finale mode opératoire 5) 3,1 x 10-4 1,4 x 104 Les résultats ci-dessus indiquent que la glycoside hydrolase semi-synthétique présente une activité enzymatique par rapport au substrat de glycoside hydrolase, alors que l'alpha-amylase bactérielle naturelle qui est elle-même une espèce de glycoside hydrolase, ne présente aucune activité. Cet exemple montre la conversion d'une glycoside hydrolase en une autre glycoside hydrolase. EXEMPLE 11 PARTIE A Purification de l'enzyme On utlise comme enzyme purifiée de l'alphaamylase bactériel,un produit cristallisé quatre fois, du type II-A préparé par "Sigma Chemical Co.",et isolé à partir de Bacillus Subtilis. On dissout 0,15 g d'alpha-amylase bactériel purifié dans 15 ml d'eau distillée déionisée, et on dialyse à travers un tampon de phosphate lmM à pH 7 pendant 24 heures à la température de 0-5 C. PARTIE B Dénaturation de l'enzyme On porte à la température ambiante 10 ml de la solution contenant 1% d'alpha-amylase provenant de la partie A, et on les centrifuge à 20 000 g pendant 20 minutes. On déter- mine la concentration qui est de 0,57%. On titre ensuite 10 ml de la solution d'alpha-amylase avec de la soude 0,01 N à un pE de 10,6 et l'on agite lentement le tout pendant 10 minutes. PARTIE C Addition de l'inhibiteur On mélange à la solution provenant de la partie B 0,051 gramme d'inhibiteur cellobiose et l'on agite le tout pendant 45 minutes à 25 C. PARTIE D Réticulation On mélange la solution de la partie C à la température de 25 C avec 72pl d'aldéhyde glutarique comme agent de réti- culation. On ajoute ensuite immédiatement une solution 0,1 M de NaCO3 NaHCO3 à pH 10,0 jusqu'à ce que le pH soit maintenu à 10,0 pendant 15 minutes. On utilise à cet effet 0,4 ml de la solution de carbonate. PARTIE E Purification On effectue la chromatographie de 1 ml de la solution provenant de la partie D sur une colonne de filtration sur gel de 1,25 x 47 cm connu sous la désignation "Séphadex G-10" en utilisant un tampon Tris 0,01 M à pH 7 avec un débit de 0,34 ml/min. On détermine le pic de la protéine pour 254 nm et on la recueille. PARTIE F Résultats Les échantillons de glycoside hydrolase semi-synthétique provenant de la partie E et préparés selon l'invention présentent, par rapport au substrat pour glycoside hydrolase, l'augmentation d'activité indiquée ci-après. Le substrat pour glycolyse hydrolase utilisé est: pnitrophényl-f-D-glucoside (eb7ôCL) Substrat N GL (U/mg) Activité initiale 0,00 Activité finale mode opératoire 5) 2,8 x 10 Les résultats ci-dessus montrent que la glycoside hydrolase semi-synthétique présente une activité envers le substrat de glycoside hydrolase, alors que l'alpha- amylase bactérielle naturelle qui est elle-même une espèce de glycoside hydrolase, ne présente aucune activité. Ceci met en évidence la transformation d'une glycoside hydrolase en une autre glycoside hydrolase. MODES OPERATOIRES D'ESSAI Les échantillons essayés dans les exemples 1 à 8 peuvent être essayes selon une ou deux méthodes. La première méthode d'essai mesure l'émission de protonbà partir du substrat réagissant. La seconde méthode d'essai mesure les modifications du spectre provenant des modifications de la structure électronique produite par l'hydrolyse du substrat. Dans chacun des cas des exemples 1 à 8 ci-dessus, chacune des deux méthodes indique une modification de l'activité dans le sens positif, par rapport à l'activité que l'on désire obtenir selon le modèle, ce qui confirme par deux méthodes de mesure n'ayant pas de rapport entre elles, l'obtention d'une activité qui n'existait pas auparavant. EXEMPLE DE MODE OPERATOIRE D'ESSAI 1) Réactifs: Tampon KC1 0,1 M, CaC12 0,05 M, Tris 0,01 M à pH 7,75 Substrat: Dissoudre 343 mg d'alpha-N-benzoyl-L-arginine éthyl ester, HCl ou (BAEE) dans 100 ml de tampon. Mode opératoire: Utilisation d'un "pH-Stat" du type Sargent- Welch modèle pHR, et remplissage de la burette de titration avec de la soude 0,1 M. Placer ml de la solution de substrat dans le godet du pHStat sous agitation vigoureuse. Ajuster l'indicateur de titrage pour augmenter le pH jusqu'à 7,8. Etablir une ligne de base constante. Ajouter 2 ml de la solution d'enzyme. L'enregistreur indique le volume de toute quantité de base utilisée par unité de temps, ce qui correspond à une mesure directe des micromoies de substrat consommés par minute. EXEMPLE DE MODE OPERATOIRE D'ESSAI 2) Réactifs: Tampon KC1 0,1 M, CaC12 0,05 M, Tris 0,5 M à pH 8,0. Substrat: Dissoudre 34,3 mg d'alpha-N-benzoyl-L-arginine éthyl ester, HC1 ou (BAEE) dans 100 ml de tampon. Mode opératoire: Utiliser un spectrophotomètre du type Beckmnan ACTA en plaçant l'ajusteur de longueur d'onde à 255 nm pour une largeur de fente de 1,25 nm. Ajuster le zéro du tampon pour la référence et pour l'échantillon à essayer. Vider la chambre destinée à l'échantillon et laver la cuvette avec de l'acétone puis avec de l'eau. Ajouter 2,5 ml de la solution de substrat BAEE et obtenir une ligne de base constante pendant une minute. Ajoute 0, 5 mi de la solution d'enzyme et noter la vitesse d'augmentation de l'absorbance pendant que le BAEE est hydrolysé en alpha-N-benzoyl-L- arginine. Noter la variation de l'absorbance par rapport au temps (delta A/min) pendant au moins 5 minutes. Pour une variation de l'absorbance substrat-produit à 808 M-1 cm 1, une unité correspond à l'hydrolyse d'une micromole de BAEE par minute à 25 C pour un pH de 8,0. Voir Schwert, G.W. et Takenade, T., "Biochemica et Biophsica ACTA", 16, 570, 1955. EXEMPLE DE MODE OPERATOIRE D'ESSAI 3) Les échantillons essayes dans l'exemple 9 peuvent être essayes selon le mode opératoire ci-dessous. Réactifs: Tampon de citrate de sodium 0,05 M à pH 4,6. Tampon de carbonate de sodium 0,2 M. Substrat: Solution de 25 mM de pnitrophényl-"-D-glucoside dans un tampon 0,05 M de citrate de sodium à pH 4,6. Mode opératc Voir l'ouvra Voir l'ouvra Solution de 25 mM de V-nitrophénylc-D-galacto pyranoside dans un tampon de citrate de sodium 0,05 M à pH 4,6. )ire: Un échantillon de lOOJ100l1 d'une solution 25 mM de chaque substrat dans un tampon de citrate de sodium 0,05 mM à pH 4,6 est mis à incuber à la température de 30 C avec 350ul du même tampon pendant 5 minutes. On prépare cinq solutions comme indiqué ci-dessus. Après l'addition de 50 1 de l'enzyme à trois des solutions précitees et 501ul du tampon de citrate aux deux autres solutions de contrôle, on effectue l'incubation des solutions à la température dé 30 C. Après 15 minutes, on choisit une solution contenant l'enzyme et une solution de contrôle. On arrête la réaction en ajoutant 700 1 de carbonate de sodium 0,2 M. On mesure l'absorbance pour 420 nm. Après 30 minutes, on effectue l'ana- lyse d'une autre solution contenant l'enzyme, et après 60 minutes, on effectue l'analyse de la dernière solution contenant l'enzyme, ainsi que l'analyse de l'échantillon de contrôle restant. ge "Methods in Enzymology", Vol. 28, pg. 720-21. Les activités sont calculées en utilisant *+4 -1 -1 une absorptivité de 1,83 x 10+4 M1 cm1. Lge J. Biol. Chem., 233, 1113 (1958). L'absorbance de 25,2 pour 280 nm pour une solution contenant 1% d'amylase est utilisée pour calculer la densité dans une contenue dans l'échantillon. EXEMPLE DE MODE OPERATOIRE D'ESSAI 4) Chromatoaraphie en phase liquide à pression élevée Les échantillons essayés dans l'exemple 9 peuvent être essayés selon le mode opératoire ci-dessous. Réactifs: Galactose, solution à 0,1%. Galactose, solution à 1,0%. p-nitrophényl-D -alacto pyranoside (fNPGL), solution 12 mM. e-nitrophénol, solution à 0,5%. Glucosidase, solution à 0,5%. Micro-Pak préparé par (Varian Associates)sur Colonne de 30 x 4 cm du type Détecteur d'absorbance réglé à 206 mM. Eau comme éluant à 25 C. Débit - 2,5 ml/minute à 137,89 105 Pa Mode opératoire: On met à incuber un mélange de glycoside hydrolase semi-synthétique et de rNPGL, et ensuite on le fait passer sur la colonne. Après 18 heures, on obtient un pic dont la position correspond au galactose. A l'aide de solution étalon de galactose, on détermine la hauteur du pic et la concentration. L'activité de l'enzyme semisynthétique ainsi calculée est de 3 x 10-3 U/ml. EXEMPLE DE MODE OPERATOIRE D'ESSAI CINQ Les échantillons essayés dans les exemples 10 et 11 doivent être essayés selon le mode opératoire indiqué ci-après. Réactifs: Tampon de citrate de sodium 0,05 M à pH 5,0. Carbonate de sodium à 0,2 M. Substrat: Solution 25 mM de p-nitrophényl-tD-gluco pyranoside dans de l'eau distillée déionisée. Solution 25 mM def-nitrophényl-O-D-gluco pyranoside dans de l'eau distillée déionisée. Mode opératoire: Ajouter une partie aliquote de 700 ul de tampon de citrate de sodium à pH 5 dans 5 tubes, dont deux servent de témoin. On ajoute 100 p1 dans une semi-svnthétique dans trois des tubes pré- cités, tandis qu'on ajoute 100 pl de citrate de sodium à pH 5 dans les deux tubes témoins. On effectue l'incubation des tubes pendant minutes à la température de 300C avec secouage. Après 10 minutes, on ajoute 200p1 du substrat approprié à chacun des cinq tubes et l'on continue l'incubation à Jatempérature de 30C avec secouage. Après 15 minutes d'incubation, on retire un tube témoin et un tube contenant l'enzyme. On mélange immédia- tement la solution du tube témoin avec 1,4 ml d'une solution de carbonate de sodium 0,2 M. On centrifuge le tube contenant l'enzyme pendant 2 minutes. Après 2 minutes, on verse le liquide contenu dans le tube dans un tube marque et l'on recueille le précipité. Ensuite, on pipette 500p1 de la solution dans un autre tube marqué et on ajoute 700 p1 d'un tampon de carbonate de sodium 0,2 M pour arrêter la réaction. On mesure l'absorbance pour 420 nm. Après 30 minutes, on retire l'un des tubes contenant l'enzyme et on le centrifuge pendant environ 2 minutes. On verse ensuite le liquide dans un tube marqué et l'on pipette 500/1l de la solution dans un autre tube marqué dans lequel on ajoute 700 P1 de solution de carbonate de sodium 0,2 M pour arrêter la réaction. Après 45 minutes, on retire les deux derniers tubes (un tube contenant l'enzyme et l'autre -tube servant de témoin) et l'on effectue à nouveau le même mode opératoire que dans le cas du tube retiré après 15 minutes. On calcule U/mg en utilisant l'absorptivité de 1,38 x 104 M 1 con 1 pour le t-nitrophénol à 420 nm. L'absorbance de (A %) de 25,2 pour l'c'(-amylase est également utilisée dans le calcul de la quantité de l'enzyme présente dans l'échantillon REVENDICATIONS 1. Procédé de modification chimique de la spécificité du substrat d'une protéine pour obtenir une protéine semi- synthétique prédéterminée, caractérisé par le fait qu'on dénature partiellement la protéine précitée et qu'on effectue la réticulation de la protéine partiellement dénaturée précitée, in situ et en présence d'un inhibiteur de la protéine semi- synthétique prédéterminée précitée. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait aue la protéine précitée est partiellement dénaturée en mettant sous la forme d'une solution aqueuse la protéine précitée, et en maintenant la solution aqueuse précitée à une température suffisante et pendant-un laps de temps suffisant pour obtenir la dénaturation partielle de la protéine précitée. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que le laps de temps précité est d'environ 15 minutes à 24 heures et que la température précitée est d'environ 250C à 600C. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que pour obtenir la dénaturation partielle de la protéine précitée, on mélange la protéine précitée avec de l'eau pour obtenir une solution aqueuse et qu'on mélange la solution ainsi obtenue avec un agent dénaturant. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait qu'on utilise un acide minéral comme agent dénaturant. 6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait qu'on utilise un acide organique comme agent dénaturant. 7. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait qu'on utilise un solvant organique miscible à l'eau comme agent dénaturant. 8. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait qu'on utilise un sel minéral comme agent dénaturant. 9. La protéine semi-svnthétique préparée selon le procédé de la revendication 1. 10. Procédé de préparation d'une enzyme semi-synthétique caractérisé par le fait que: - on choisit une protéine enzymatique pour servir de modèle; - on choisit une seconde protéine pour être modifiée selon le modèle de la protéine enzymatique précitée; - on mélange la seconde protéine précitée avec un agent dénaturant pendant un laps de temps suffisantet une température suffisante pour obtenir la dénaturation partielle de la seconde protéine précitée; et - on effectue la réticulation de la seconde protéine précitée, in situ et en présence d'un inhibiteur pour la protéine enzymatique précitée. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé par le fait que pour obtenir la dénaturation partielle de la seconde protéine précitée, on prépare une solution aqueuse de la seconde protéine précitée et qu'on maintient la solution aqueuse précitée à une température suffisante et pendant un laps de temps suffisant pour obtenir la dénaturation de la protéine précitée. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait que le laps de temps précité est d'environ 15 minutes en 24 heures et que la température précitée est d'environ 25 à 600C. 13. Procédé selon la revendication 10, caractérisé par le fait que pour obtenir la dénaturation partielle de la seconde protéine précitée, on mélange la seconde protéine précitée avec de l'eau pour obtenir une solution aqueuse et qu'on mélange la solution aqueuse obtenue avec un agent dénaturant. 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait qu'on utilise un acide minéral comme agent dénaturant 15. Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait qu'on utilise un acide organique comme agent dénaturant. 16. Procédé selon la revendication 13, caractérisé par le fait qu'on utilise un solvant organique miscible à l'eau comme agent dénaturant. 17. Procédé selon la revendication 13, caractérisé parle fait au'on utilise un sel minéral comme agent dénaturant. 18. L'enzyme semi-synthétique préparée selon le procédé de la revendication 10.