Payamvdn/NorthPersian_fa_wiki huggingface dataset:
مردان چوب کبریتی فیلمی در ژانر جنایی، سرقت، و کمدی-درام به کارگردانی ریدلی اسکات است که در سال ۲۰۰۳ منتشر شد. این فیلم بر اساس رمانی به همین نام، نوشتهٔ اریک گارسیا ساخته شده است. بازخورد. مردان چوب کبریتی در متاکریتیک از مجموع ۳۸ نقد امتیاز ۶۱ از ۱۰۰ را گرفت که نشان دهنده نقد های «عموماً مطلوب» است. همچین راجر ایبرت به این فیلم چهار ستاره داد(از چهار ستاره) و آن را برای چندین نامزدی اسکار توصیه کرد که از مهمترین آن ها بازیگری نیکلاس کیج و فیلمنامه بود. داستان. «والر» (نیکلاس کیج) یک جاعل و کلاهبردار بزرگ و ماهر اما به شدت وسواسی و روان پریش است. والر برای اینکه مشکلات روحی روانی بر روی حرفه اش تأثیر نگذارد به اجبار تحت مداوای دکتر کلین قرار می گیرد. دکتر کلین برای درمان او تصمیم می گیرد وی را با دختر ۱۵ ساله اش «آنجلا» (الیسون لومن) که والر تاکنون او را ندیده و از وجودش نیز خبری ندارد مواجه کند. ۱۴ سال پیش، در همان آغاز ازدواج، همسر باردار والر او را ترک کرده و بنابراین والر هرگز دخترش را ندیده است. حال آنجلا برای یک تعطیلات کوتاه نزد پدرش می آید. بازگشت او والر را در موقعیت تازه و دشواری قرار می دهد.
حزب دموکراتیک بیت نهرین () از احزاب سیاسی آشوری در عراق به رهبری رومئو حکاری می باشد.این حزب در سال ۱۹۷۴ تأسیس شد و یکی از اهدافش را ایجاد منطقه خودمختار آشوریان در عراق قرار داده است.
گاردون رودی است که به رون می ریزد. این رود از کشور فرانسه می گذرد. طول رودخانه ۱۳۳ کیلومتر است.
رمولن (به فرانسوی: Remoulins) یک کامین در فرانسه است که در Canton of Remoulins واقع شده است. خصوصیات. رمولن ۸٫۲۴ کیلومترمربع مساحت و ۲٬۳۸۱ نفر جمعیت دارد و ۲۷ متر بالاتر از سطح دریا واقع شده است.
ور پون دو گار (به فرانسوی: Vers-Pont-du-Gard) یک کامین در فرانسه است که در Canton of Remoulins واقع شده است. خصوصیات. ور پون دو گار ۱۹٫۱۴ کیلومترمربع مساحت و ۱٬۶۵۳ نفر جمعیت دارد و ۵۲ متر بالاتر از سطح دریا واقع شده است. خواهرخوانده. شهرهای Oron، Palézieux و Santa Vittoria d'Alba خواهرخوانده های ور پون دو گار هستند.
آباره رومی () سبکی در سازه های رومی در ساخت آباره بوده است. این آباره ها جهت انتقال آب از منابع آب به مراکزی چون حمام های عمومی و مستراح های رومی (Latrine) تعبیه شده بودند.
قاتل درون من () فیلمی در ژانر مهیج به کارگردانی مایکل وینترباتم است که در سال ۲۰۱۰ منتشر شد. داستان. سال ۱۹۵۷ است. لو فورد جانشین کلانتر در منطقه ای در نزدیکی تگزاس به نام سیرکا است که وظیفه دارد پسر یکی از ثروتمندترین افراد شهر را از شر یک رابطه عاطفی با جویس خلاص کند. او باید جویس را به خارج از شهر انتقال دهد تا از یک رسوایی بزرگ جلوگیری شود اما لو هنگام انجام مأموریت درگیری رابطهٔ با جویس می شود اما او در عین ناباوری نقشه قتل جویس را می کشد.
پون دو گار () پل-قنات رومی است که بر روی رود گاردون، واقع در ور پون دو گار، رمولن فرانسه قرار دارد. این پل جزو میراث جهانی یونسکو در فرانسه به شمار می رود. این پل سه طبقه دارد. تاریخچه. این پل دارای سه طاق طاق است، ۴۸٫۸ متر (۱۶۰ فوت) ارتفاع دارد، و ارتفاع آن فقط ۲٫۵ سانتیمتر (۱ اینچ) پایین می آید - یک شیب تنها ۱ در ۱۸۲۴۱ - در حالی که کل قنات از ارتفاع تنها ۱۲٫۶ متر (۴۱ فوت) پایین می رود) در تمام طول آن، نشانگر دقت بزرگی است که مهندسان رومی با استفاده از فناوری ساده توانستند به آن دست یابند.
کوزومل (Cozumel) جزیره ای در دریای کارائیب و ساحل شرقی مکزیک است.
«ابرقهرمانان» تک آهنگی از د اسکریپت است که در سال ۲۰۱۴ میلادی منتشر شد. این تک آهنگ و در چارت های ایرلند و اسکاتلند در رتبه یک قرار گرفت.
کولیون (به لاتین: Culion) یک جزیره در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. کولیون ۴۹۹٫۵۹ کیلومترمربع مساحت و ۱۹٬۵۴۳ نفر جمعیت دارد.
دوماران (به لاتین: Dumaran) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. دوماران ۴۳۵٫۰۰ کیلومترمربع مساحت و ۲۱٬۳۹۷ نفر جمعیت دارد.
نارا (پاراوان) (به لاتین: Narra, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. نارا ۸۳۱٫۷۳ کیلومترمربع مساحت و ۶۵٬۲۶۴ نفر جمعیت دارد.
روکساس (به لاتین: Roxas) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. روکساس ۱٬۱۷۷٫۵۶ کیلومترمربع مساحت و ۶۱٬۰۵۸ نفر جمعیت دارد.
خشم جاده ای اشاره به رفتار پرخاشگرانه یا همراه با عصبانیت راننده یک خودرو یا سایر وسائل حمل و نقل جاده ای است. چنین رفتاری می تواند شامل حرکات بی ادبانه، توهین های کلامی، رانندگی به شیوه ای ناامن یا تهدیدآمیز باشد. خشم جاده ای می تواند منجر به مجادلات، ضرب و جرح و برخورد و حتی منجر به مرگ شود. از نظر برخی از روانشناسان خشم جاده ای نوعی اختلال روانی محسوب می شود.
میر محمدجواد ذاکر طباطبایی خویی (زاده ۳۱ شهریور ۱۳۵۵ در خوی – درگذشته ۱۶ تیر ۱۳۸۵ در تهران) که با نام سید جواد ذاکر شناخته شده است، مداح ایرانی بود. او یکی از پایه گذاران مداحی به سبک جدید و اشعار غالیانه شناخته می شود. سبک جدید مداحی او باعث جذب برخی جوانان به هیئت های عزاداری شد. مرگ. در سال ۱۳۸۵ بیماری سرطان او به اوج رسید و وی در اوایل خرداد ماه، در اثر مرگ سلولهای مغزی در کما فرو رفت و بعد از حدود ۴۰ روز، در ساعت ۲ بامداد شانزدهم تیرماه ۱۳۸۵ در بیمارستان میلاد تهران درگذشت. مراسم تشییع او برگزار شد و در قبرستان نو روبروی حرم فاطمه معصومه در قم به خاک سپرده شد.
تای تای (به لاتین: Taytay, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. تای تای ۱٬۲۵۷٫۶۸ کیلومترمربع مساحت و ۷۰٬۸۳۷ نفر جمعیت دارد.
جیسون رضاییان (زادهٔ ۱۵ مارس ۱۹۷۶) روزنامه نگار ایرانی-آمریکایی است. او مدیر دفتر تهران روزنامهٔ "واشینگتن پست" بود. جمهوری اسلامی ایران رضاییان را به همراه همسرش یگانه صالحی در ۳۱ مرداد ۱۳۹۳ به اتهام جاسوسی دستگیر کرد. صالحی در ۱۴ مهر آزاد شد، ولی رضاییان به زندان اوین انتقال یافت. در ۵ خرداد ۱۳۹۴ دادگاهی غیرعلنی او را به جاسوسی و فعالیت تبلیغی علیه نظام محکوم کرد. رضاییان پس از ۱۸ ماه حبس در ۲۶ دی ۱۳۹۴ به همراه سه آمریکایی دیگر در چارچوب مبادله زندانیان آزاد شد. زندگی شخصی. رضاییان در ۱۵ مارس ۱۹۷۶ متولد شد و در شهرستان مارین، کالیفرنیا دوران کودکی اش را سپری کرده است. پدر او، تقی رضاییان، در سال ۱۹۵۹ از ایران به آمریکا مهاجرت کرده بود و مادرش مری اهل شیکاگو بود. او یک برادر دارد. همسر او یگانه صالحی است که عکاس خبری روزنامه انگلیسی زبان "نشنال" بود و در ابوظبی کار می کرد. جیسون رضاییان تابعیت دوگانه ایرانی و آمریکایی دارد. بازداشت. رضاییان به عنوان خبرنگار "واشینگتن پست" در دفتر تهران این روزنامه مشغول به کار بود. او و همسرش یگانه صالحی توسط مقامات ایرانی در ۲۲ ژوئیه ۲۰۱۴ بازداشت شدند. غلامحسین اسماعیلی، رئ
یس دادگستری استان تهران، چند روز پس از بازداشت رضاییان اظهار داشت که او «برای پاسخ به برخی سوالات بازداشت شده» است. وزارت امور خارجه ایالات متحده آمریکا، یک هفته پس از بازداشت رضاییان، خواستار آزادی او شد. جن ساکی، سخنگوی این وزارتخانه، از کشور سوئیس خواست تا «به عنوان حافظ منافع آمریکا در ایران، پیگیری پرونده جیسون رضاییان، خبرنگار روزنامه "واشینگتن پست" و همسرش را بر عهده بگیرد». مدتی بعد همسر جیسون رضاییان، یگانه صالحی، به قید کفالت آزاد شد. خبرنگار دیگری هم که به همراه این زوج دستگیر شده بود در آن تاریخ آزاد شد. همزمان با آن دویچه وله فارسی نوشت: «با وجود گذشت بیش از چهار ماه از بازداشت جیسون رضاییان او هنوز رسماً تفهیم اتهام نشده است». این خبرگزاری همچنین ذکر کرد که «او در بخشی از زندان اوین که زیر کنترل سپاه پاسداران ایران است»، نگهداری می شود. بنا به گفته دیدبان حقوق بشر، به وکیل او اجازهٔ دفاع و ارتباط با موکلش داده نشده است. همچنین بنا به گفتهٔ همین منبع، با اینکه رضاییان توانایی خواندن و نوشتن به زبان فارسی را ندارد، مترجمی هم در اختیار وی قرار داده نشده است. همچنین دویچه وله نوشت که خبر بازداشت او
در رسانه های ایرانی بازتاب داده نشده است، چرا که اطلاع رسانی دربارهٔ زندانیان سیاسی و امنیتی در ایران «ممنوع» است. سازمان دیدبان حقوق بشر هم در روز ۰۳ دسامبر ۲۰۱۴ اطلاعیه ای منتشر کرد و در آن اظهار نگرانی نمود که: «خانواده های یگانه صالحی و جیسون رضاییان توسط مقام های ایران تحت فشار قرار گرفته اند تا با رسانه ها گفتگو نکنند و دربارهٔ شرایط بازداشت ادامه دار جیسون رضاییان اطلاع رسانی نکنند». اتهامات. به نوشتهٔ روزنامه مشرق، مهم ترین اتهامات ضدامنیتی رضاییان، نفوذ در اماکن مهم دولتی و افشای برنامه های «ضد تحریمی ایران» از جمله هویت واسطه های تجاری و ماهیت شرکت های همکار ایران در پروسه دور زدن تحریم ها و جاسوسی از برنامه هسته ای ایران است. روزنامهٔ "وطن امروز" در ستونی رضاییان را متهم به کارگردانی و پخش ویدئوکلیپ هایی چون ترانهٔ خوشحال اثر فارل ویلیامز (که چند نفر در رابطه با آن دستگیر شده بودند) «در راستای حجاب ستیزی» کرد. این ستون همچنین رضاییان را متهم به فعالیت برای شورای ملی ایرانیان آمریکا (نایاک) می کرد. خبرگزاری فرانسه این اتهامات را «بی اساس» می خواند. حمید رسایی نماینده مردم تهران در مجلس اظهار داشت: ج
یسون رضاییان جاسوس آمریکایی یکی از وظایفش این بود که درمورد آب شرب تهران تحقیق کند برای اینکه از این طریق بتوانند فشار بیاورند. یازده تن از نمایندگان مجلس طی تذکری به مصطفی پورمحمدی وزیر دادگستری، کسب اطلاعات وسیع از جیسون رضاییان را باعث نگرانی از خطر نفوذی ها و از طرفی باعث اطمینان خاطر از هوشیاری و بیداری دستگاه ها و سازمان های اطلاعاتی و امنیتی دانسته و خواستار اطلاع رسانی جامع شده اند. کیفرخواست رضاییان فروردین ماه ۱۳۹۴ از سوی دادستانی تهران صادر شد که وی را به جاسوسی از طریق جمع آوری تصمیمات کشوری در خصوص مسائل سیاست داخلی و خارجی و قراردادن آن در اختیار افراد غیر صالح متهم می نمود. آزادی. در ۲۶ دی ۱۳۹۴ و همزمان با حضور وزرای خارجه ایران و آمریکا در وین به منظور قرائت بیانیهٔ اجرایی شدن برجام، دادستان تهران اعلام کرد که در راستای مصوبات شورای عالی امنیت ملی و مصالح کلی نظام، چهار زندانی ایرانی دو تابعیتی ظرف روز جاری (شنبه) در چارچوب مبادلهٔ زندانیان آزاد شدند. اسامی چهار زندانی ایرانی-آمریکایی آزاد شده عبارت است از سعید عابدینی، امیر میرزایی حکمتی، جیسون رضاییان و نصرت الله خسروی. پرداخت ۱٫۷ میلیارد دل
اری. آمریکا هم زمان با آزادی رضاییان و ۴ نفر دیگر معادل مبلغ ۱٫۷ میلیارد دلار به ایران پرداخت و به صورت اسکناس نقد به ایران داد. این مبلغ مربوط به یک پرداخت ۴۰۰ میلیون دلاری ایران به آمریکا برای خرید تسلیحات در دهه ۷۰ میلادی و ۱٫۳ میلیارد دلار سود آن بوده است. اما رضاییان می گوید که آمریکا ان مبالغ را در ازای آزادی او نداده بلکه: در رسانه ها. شش هفته قبل از دستگیری، رضایی و صالحی در مستند "بخش های ناشناخته" سی ان ان اثر آنتونی بوردین حاضر شدند و با بوردین در مورد فرهنگ و میراث ایرانی مصاحبه کردند. در خرداد و تیر ۱۳۹۸ مجموعه تلویزیونی "گاندو" با موضوع فعالیت ها و دستگیری وی از شبکه سه تلویزیون ایران پخش شد. در این سریال وی مایکل هاشمیان نامیده شده و نقش او را پیام دهکردی ایفا می کند. در این فیلم سکانس های جنجالی پیرامون شخصیت اول داستان و دولت حسن روحانی از جمله اصرار وزارت خارجه به آزادی وی دیده می شود. هرچند سخنگوی وزارت خارجه دولت حسن روحانی معتقد است که منطبق با واقعیت نیست.
نرم افزار تجاری ، یا بعضی وقت ها payware هم نامیده می شود، نرم افزاری است که برای فروش تولید شده باشد، یا در اهداف تجاری به کار برود. بسته های تجاری می توانند نرم افزار مالکیتی یا نرم افزار آزاد (یا متن باز) باشد. همه یا بخشی از بسته های نرم افزاری و سرویس هایی که از تجارت حمایت می کنند به طور فزاینده به به عنوان نرم افزار آزاد در دسترس قرار دارند. این امر شامل محصولاتی از رد هت، اپل (شرکت)، سان مایکروسیستمز، گوگل، و مایکروسافت می شود. شرکت مایکروسافت از «نرم افزار تجاری» برای معرفی مدل کسب وکارشان استفاده می کنند. اما همچنین بیشتر مالکیتی است.
مگسای سای (به لاتین: Magsaysay, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. مگسای سای ۴۹٫۴۸ کیلومترمربع مساحت و ۱۱٬۹۶۵ نفر جمعیت دارد.
سن ویسنته (به لاتین: San Vicente, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. سن ویسنته ۱٬۴۶۲٫۹۴ کیلومترمربع مساحت و ۳۰٬۹۱۹ نفر جمعیت دارد.
ال نیدو (به لاتین: El Nido, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. ال نیدو ۴۶۵٫۱۰ کیلومترمربع مساحت و ۳۶٬۱۹۱ نفر جمعیت دارد و ۶۰۹ متر بالاتر از سطح دریا واقع شده است.
این لیستی از مشاهدات ادعایی شیء ناشناس پرنده یا بشقاب پرنده در ایران است. ۱۳۸۳. مشاهدات یوفو از ۲۹ فروردین سال ۱۳۸۳ شروع شد. در ابتدا صدا و سیما قصد گزارش این مشاهدات را نداشت ولی این گزارشات آنقدر گسترده و طولانی مدت بود که به ناچار برای اینکه مردم نگران نشوند اقدام به گزارشهای کوتاهی در صدا و سیما شد. پس از آن تقریباً هرشب گزارشهایی در اخبار تلویزون ایران پخش می شد و در شهرهای شمالی کشور و قزوین و بسیاری جاهای دیگر مشاهدات طولانی مدتی توسط مردم گزارش می شد و خبرنگاران صدا و سیما در بعضی موارد موفق می شدند از اشیائ نورانی گزارش تصویری تهیه کنند و حتی به طور مستقیم از تلویزیون پخش شد. در هفتم اردیبهشت برنامه ویژه خبری بعد از اخبار ۲۲:۳۰ شبکه ۲ به این موضوع اختصاص داشت و آقای دکتر ایرج ملکپور به عنوان کارشناس در برنامه حاضر شد و دو کارشناس هم به طور تلفنی شرکت داشتند پروفسور عجب شیرزاده استاد و کارشناس اشعه های خورشیدی و آقای دکتر نصیری قیداری رئیس انجمن نجوم ایران و در یک گفتگوی مفصل به بررسی موضوع پرداختند. دکتر ایرج ملکپور قبلا در سال ۱۳۸۱ کتابی به نام بشقاب پرنده تألیف کرده بود و تقریباً تمام مطالبی که در
تلویزیون مطرح کرد قبلا در کتابش آورده بود. این مشاهدات تا دهم اردیبهشت ادامه داشت و بسیاری از روزنامه ها و مجلات در این مدت به انتشار این اخبار می پرداختند. از طرفی به بهانه این موضوع به انتشار مقالات و اخبار قبلی موضوع بشقاب پرنده و موجودات فضایی و یوفوها پرداختند.
آراسلی (به لاتین: Araceli, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. آراسلی ۲۰۴٫۳۰ کیلومترمربع مساحت و ۱۴٬۱۱۳ نفر جمعیت دارد.
کالایان (به لاتین: Kalayaan, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. کالایان ۲۹۰ کیلومترمربع مساحت و ۲۲۲ نفر جمعیت دارد.
لیناپاکان (به لاتین: Linapacan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. لیناپاکان ۱۹۵٫۴۴ کیلومترمربع مساحت و ۱۴٬۱۸۰ نفر جمعیت دارد.
بوسوانگا (به لاتین: Busuanga, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. بوسوانگا ۳۹۲٫۹۰ کیلومترمربع مساحت و ۲۱٬۳۵۸ نفر جمعیت دارد.
بالاباک (به لاتین: Balabac, Palawan) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. بالاباک ۵۸۱٫۶۰ کیلومترمربع مساحت و ۳۵٬۷۵۸ نفر جمعیت دارد.
کاگایانسیلو (به لاتین: Cagayancillo) یک شهر در فیلیپین است که در پالاوان واقع شده است. خصوصیات. کاگایانسیلو ۲۶٫۳۹ کیلومترمربع مساحت و ۷٬۱۱۶ نفر جمعیت دارد.
فلوسایتومتر دستگاهی است برای انجام تکنیک فلوسایتومتری و به دست آوردن فنوتایپ و خصوصیات سلول ها، که بر اساس پراکنده سازی نور توسط سلول های تحت آزمایش و انتشار فلورسانس از آن ها استوار است. نشر فلورسانس یا با استفادهٔ مستقیم از مواد رنگ کنندهٔ فلورسنت یا ترکیبی از رنگ فلورسنت با آنتی بادی های مونوکلونال حاصل می شود. این آنتی بادی های کونژوگه با فلورسانس می توانند مولکول های سطحی یا ترکیبات داخلی سلول ها را ردیابی کرده و به آن ها متصل شوند و شناسایی انواع سلول های موجود در یک جمعیت سلولی متنوع را توسط فلوسایتومتری امکان پذیر می سازند. این روش اساساً توسط ایمونولوژیست هایی ابداع شد که تلاش می کردند جمعیت های خالص سلول ها را از یکدیگر جدا کرده و پس از تکثیر آن ها در محیط کشت سلولی، نقش مجزای هر سلول را در دستگاه ایمنی بررسی نمایند. دستگاه های اولیه قادر بودند تنها یک یا دو رنگ فلورسانس را تجزیه و تحلیل کنند اما امروز دستگاه هایی عرضه شده اند که قادرند یازده رنگ فلورسانس را به طور هم زمان ردیابی و تجزیه و تحلیل کنند. امروزه استفاده از تکنولوژی های مدرن روز، برای افزایش سرعت انجام کارها و سهولت انجام آن ها روز به رو
ز در حال گسترش است. در دهه های اخیر فلوسایتومتری به ابزاری ضروری در تشخیص لوسمی های خونی در انسان تبدیل شده است. فلوسایتومتری به طور معمول برای شناخت ردهٔ سلولی، تحلیل یا تجزیهٔ بافت سلولی بالغ و تشخیص هتروژنیستی در میان جمعیت سلول های توموری استفاده می شود. در دهه های اخیر استفاده از این روش در آزمایشگاه های کلینیکی و همچین تشخیص انواع سرطان به طور چشمگیری افزایش یافته است. تاریخچه. تاریخچهٔ فلوسایتومتری به آزمایش های آندرو مولداوان در سال ۱۹۳۰ بر می گردد که دستگاهی را با استفاده از سلول فتو الکتریک طراحی کرد که سلول های در حال عبور از میانهٔ لولهٔ مویینه ای بر روی صفحهٔ اسلاید میکروسکوپ را شمارش می کرد. اولین مقاله مربوط به فلوسایتومتری به سال ۱۹۳۴ بر می گردد که توسط وی در مجلهٔ ساینس چاپ شد. نویسنده در این مقاله به شمارش سلول های خونی در یک لولهٔ مویین توسط یک سنسور فتوالکتریک اشاره کرده است. در سال ۱۹۷۰ اولین سیستم فلوسایتومتری توسط فی.وی.آ. جی تولید، و وارد بازار شد که قابلیت اصلی آن تجزیه و تحلیل دی ان ای و بررسی مقادیر آن بود. پس از آن شمارشگرهای افتراقی با اساس فلوسایتومتریک وارد بازار شد. منابع نوری
به کار رفته در این سیستم ها لامپ های تنگستنی هالوژنی بودند. در سال ۱۹۷۲ هرزنبرگ و همکارانش اولین دستگاه جداکنندهٔ سلول بر اساس فلورسنس را ابداع کردند. این دستگاه اساساً یک فلوسایتومتر بود که پس از آنالیز سلولی قادر به جداسازی سلول های مورد بررسی بود. در سال ۱۹۹۵ امکان اندازه گیری حداقل ۵ پارامتر در ۲۵۰۰۰ سلول در ثانیه به طور معمول به منظور بالا بردن تشخیص و مدیریت حالت های متفاوت بیماری ها و تشخیص بیماری ها استفاده شد. در سال ۲۰۰۳ دستگاه های پرسرعت با استفاده از تکنولوژی دیجیتالی معرفی شدند. اصول آزمایش. نمونهٔ سلولی مورد آنالیز به صورت پخش شدهٔ یکنواخت درآمده و توسط مایع ایزوتونیک تحت فشار وارد ستون باریکی که از مایع شیت پر شده است می گردد. محلول شیت اطراف مجرای باریک را احاطه کرده و نمونهٔ مورد آنالیز به صورت یک جریان مرکزی از وسط محلول شیت به صورت سلول های تک تک و پشت سر هم در می آید. سرعت عبور ممکن است به ۱۰ متر بر ثانیه برسد. برای شناسایی نشانگرهای سطحی، نمونهٔ مورد آنالیز با آنتی بادی های مونوکلونال اختصاصی که با یکی از فلوروکروم ها نشاندار شده اند مجاور می گردد. چنانچه واکنشی صورت گرفته باشد سطح سلول د
ارای خاصیت فلورسانس شده و با جذب نور لیزر برانگیخته شده و طول موج بلندتری بازتاب می کند. نور بازیافتی در زوایای مختلف مورد سنجش قرار می گیرد. حساسیت جداسازی سلول ها بستگی به شکل و شدت نور لیزر دارد. قطر پرتو لیزر حدود ۶۵۰ میکرومتر بوده که توسط عدسی هایی در مسیر آن، که دارای قطر باریک هستند، با سلول برخورد می کند. اندازه گیری پراکندگی یا پخش نور لیزر در طول محور پرتو تابش یا از پیش رو بستگی به اندازهٔ سلول دارد. آنالیز بازیافت نور فلورسانس بعد از برخورد با نور لیزر در زوایای جانبی و زاویهٔ ۹۰ درجه خصوصیاتی از وضعیت آنتی ژنی و محتویات درون سلولی را ارائه می دهد. تهیهٔ سلول برای فلوسایتومتری. برای انجام هر نوع فلوسایتومتری ابتدا باید سلول ها را آماده کرد به طوری که سلول ها به صورت تکی درآمده و در محیط مناسبی معلق شده باشند. روش های مختلفی برای تهیهٔ سلول وجود دارد و روش انتخاب شده به نوع سلول مورد ارزیابی بستگی دارد. پس از تهیهٔ سوسپانسیون مناسب، سلول ها باید با مواد فلورسانس رنگ شوند یا با آنتی بادی های کونژوگه با فلوروکروم نشاندار شوند. روش نشاندار کردن تحت تأثیر فاکتورهای زیادی قرار می گیرد از جمله میزان اختص
اصی بودن آنتی بادی و غلظت آنتی ژن در سطح یا داخل سلول، مناسب بودن غلظت آنتی بادی مورد استفاده و به کار بردن کنترل های مثبت و منفی مناسب در آنالیز سلول ها. فلوسایتومترها باید بتوانند نور لیزر پراکنده شده یا فلورسانس نشر شده از یک سلول منفرد را در میان انواع سلول ها با حساسیت بالایی ردیابی کنند و بدین منظور سلول ها باید در محیط مایع به صورت سوسپانسیون یکنواختی درآیند. محیط اطراف سلول ها معمولاً به صورت ایزوتونیک با پی اچ برابر ۷٫۳ و غلظت سلولی بین ۱۰۵ تا ۱۰۶ سلول در هر میلی لیتر تهیه می شود و تحت چنین شرایطی سلول ها به صورت یک به یک از مقابل محور تابش نور لیزر عبور خواهند کرد. معمولاً حجم کمی از نمونه (۲/۰ تا ۱ میلی لیتر) برای آنالیز لازم است ولی «حداقل حجم مورد نیاز از نمونه» به کثرت سلول های مورد نظر در میان انواع سلول های موجود در نمونه نیز بستگی دارد و اگر درصد سلول های تحت بررسی، نسبت به سایر سلول های موجود پایین باشد لازم است ابتدا برای حذف بخشی از سلول های ناخواسته اقدام شود. قطر سلول های ارزیابی شده باید در محدودهٔ ۱ تا ۳۰ میکرون باشد و فلوسایتومترهای معمولی برای ارزیابی ذرات کوچک تر از ۱ میکرون حساسیت
لازم را ندارند. از طرفی وجود ذرات درشت تر از ۳۰ میکرون موجب انسداد جریان مایع در دستگاه خواهد شد. فلوسایتومترهای معمولی برای استفاده و آنالیز سلول های خونی طراحی شده اند زیرا پلاکت های خون حدود ۱ میکرون قطر دارند و قطر سلول های خونی نیز ۶ تا ۱۲ میکرون است. با این حال سلول هایی از منشأ بافت های دیگر (مثل بافت های لنفوئیدی و سلول های کشت شده) را نیز می توان با فلوسایتومترهای معمولی آنالیز کرد. با این شرط که آن ها باید از همدیگر و از بسترشان جدا شوند و به صورت سوسپانسیون سلول های منفرد در آیند و هر گونه تودهٔ سلولی باید پیش از آنالیز حذف شود. عاملی که فلوسایتومتری را به عنوان یک تکنیک فوق العاده در مطالعات کلینیکی درمی آورد این است که سرعت جریان نمونه (۵ تا ۵۰ متر بر ثانیه) امکان جمع آوری اطلاعات مربوط به ۵۰۰۰ تا ۵۰۰۰۰ سلول را در هر ثانیه فراهم می نماید و حجم مورد نیاز از نمونهٔ خون معمولاً حدود ۱۰۰ میکرولیتر یا کمتر است. قدم اول برای تهیهٔ نمونه، گرفتن یا ساختن سوسپانسیون سلولی مناسب است. نمونهٔ خون در حالت معمول حاوی سلول های منفرد است که در پلاسمای خون به صورت معلق هستند. نمونه های به دست آمده از مغز استخوان
را می توان با پیپت کردن مکرر به صورت سوسپانسیون سلول های منفرد درآورد. در نمونه های تهیه شده از بافت های جامد و لنفوئیدی، اتصالات سلول به سلول یا سلول به بستر باید شکسته شود و سلول ها کاملاً آزاد شوند. قدم دوم این است که تا زمان آنالیز نمونه، خصوصیات و عملکرد سلول های تحت بررسی باید در حالت طبیعی و دست نخورده حفظ شوند. برای برخی از انواع سلول ها (مثلاً آنتی ژن های اختصاصی ردهٔ سلولی در لنفوسیت های در حال استراحت) این کار نسبتاً ساده است و استفاده از روش های مختلف معمولاً در این مورد نتایج یکنواختی به بار می آورد. اما برای برخی سلول های دیگر مثل آنتی ژن های CD62P در پلاکت ها و CD11b در نوتروفیل ها که سریعاً تغییر می یابند نگهداری سلول ها مشکل آفرین خواهد بود و روش های مختلف تهیه و نگهداری سلول در این موارد ممکن است به نتایج متفاوتی ختم شود. فاکتورهای مؤثر در انتخاب روش تهیهٔ سلول. بدیهی است که وقتی برخی خصوصیات سلولی و عملکردهای آن (نظیر سنجش زنده بودن سلول ها به وسیلهٔ دفع رنگ، توانایی فاگوسیتوز و سیتوتوکسیسیته و پاسخ به آگونیست ها در حالت کشت آزمایشگاهی) بررسی می شوند ضروری است سلول ها به صورت زنده به کار بر
ده شوند و در محیط فیزیولوژیک رقیق شوند و هرچه سریع تر مورد آزمایش قرار گیرند. با این حال دلیلی وجود ندارد از سلول های زنده برای ارزیابی برخی خصوصیات دیگر سلولی نظیر بیان آنتی ژن های اختصاصی ردهٔ سلول یا مولکول های چسبندگی استفاده نشود به شرطی که بتوان آن ها را در وضعیت ثابتی که تغییر قابل توجه در ساختمان و حیات سلولی ایجاد نشود نگهداری کرد. در عین حال استفاده از سلول های زنده این مزیت را دارد که آن ها نسبت به سلول های فیکس شده یا مرده به مقدار کمتری با آنتی بادی ها از طریق غیر اختصاصی متصل می شوند. بافر نمکی فسفات (PBS): بیشتر اوقات سلول ها پیش از آنالیز به مدت کوتاهی در شرایط آزمایشگاهی نگهداری می شوند در این صورت می توان از بافر فسفات نمکی برای تهیهٔ سوسپانسیون سلولی استفاده کرد. اما اگر قرار است سلول ها مدت طولانی تری را پیش از آنالیز سپری کنند بهتر است در محلول های دیگری که دارای بافر مناسب، از نظر یونی ایزوتونیک، حاوی پروتئین و از نظر نمکی نزدیک به حالت فیزیولوژیک هستند نگهداری شوند. اگر سلول ها (مثل ماکروفاژ ها، نوتروفیل ها و پلاکت ها) تمایل به چسبیدن به یکدیگر یا به سطوح پلاستیکی دارند با استفاده از مح
یطی که فاقد یون های دوظرفیتی مثل Ca2+ و Mg2+ و نیز حاوی ۵ میلی مول اتیلن دی آمین تترااستیک اسید (EDTA) می توان آن ها را به صورت سوسپانسیون نگه داشت. با این حال فقدان یون های دوظرفیتی و وجود EDTA برای ادامهٔ حیات سلول ها مضر هستند. چه به صورت زنده و چه به صورت فیکس شده بهتر است سلول ها را مدت کوتاهی پیش از استفاده تهیه نمود و برای به حداقل رساندن رشد و تکثیر میکروب ها آن ها را در دمای ۴ درجه نگهداری نمود. همچنین تهیهٔ سوسپانسیون سلولی و محلول رنگ کننده باید تحت شرایط استریل انجام گیرد. اگر BSA یا FBS به محیط های ساده ای مثل PBS و HBSS اضافه می شوند باید محلول تهیه شده از نظر وجود توده های پروتئینی بررسی شود مخصوصاً اگر آنالیز سلول های کوچک تری مثل پلاکت ها مدنظر باشد. این توده های پروتئینی خطای قابل توجهی ایجاد می کنند و بهتر است محلول پروتئینی از فیلترهای با سایز ۰٫۲۵ میکرون عبور داده شود تا ذرات پروتئینی گرفته شوند. آماده سازی قبلی نمونه برای دسته بندی بسیار مهم است. در واقع، دسته بندی موفق تقریباً به طور کامل به کیفیت نمونهٔ استفاده شده بستگی دارد. تهیهٔ سوسپانسیون سلول ها یا ذرات انفرادی، پیش نیاز اصلی برا
ی فلوسایتومتری است. هنگامی که سلول های مورد استفاده به طور طبیعی به حالت سوسپانسیون وجود دارند (مثل سلول های خونی یا سلول هایی که در محیط کشت به صورت سوسپانسیون رشد می کنند) تهیهٔ چنین سوسپانسیونی آسان است اما وقتی سلول ها از منشأ کشت های چسبنده یا سلول های بافت جامد باشند، تهیهٔ سوسپانسیون سلول های منفرد کمی مشکل است. به هر حال، چندین روش کاملاً ارزیابی شده برای آماده سازی نمونه های جداساز جریانی بیان می شوند. نفوذپذیر کردن و ردیابی محتویات درون سلولی. گاهی لازم است ترکیبات درون سلولی را ردیابی یا اندازه گیری کرد. مثل توالی دی ان ای، آنزیم ها، گلیکوپروتئین های درون سلولی که قرار است در سطح سلول عرضه یا ترشح شوند (مثل سایتوکاین ها) فاکتورهای نسخه برداری یا تنظیمی مثل سایکیلین ها و پی۵۳ و اجزای ساختمانی مثل رشته های اکتین. اگر اجزای درون سلول قرار است از طریق immunolabeling ردیابی شوند باید غشای پلاسمایی (و شاید غشای ساختمان های درونی سلول) (قبلا یا در حین رنگ آمیزی) برای عبور آنتی بادی های نشاندار شده، نفوذپذیر گردند. در عین حال، آنتی ژن باید در درون سلول باقی بماند و آنتی ژنیسیته و خصوصیات انکسار نوری سلول ن
یز ثابت بماند. معمولاً سلول ها با فرمالدهید ثابت می شوند که می تواند غشا را پایدار کرده و به طور همزمان، نفوذپذیری آن را نیز افزایش دهد ولی برای نفوذپذیری بیشتر باید از معرف های دیگری استفاده شود. فرمالدهید اضافی حتماً باید از محیط سلولی حذف شود مثلاً با استفاده از گلایسین و برای به حداقل رساندن اتصال غیر اختصاصی آن به آنتی ژن های داخل سلولی، BSA یا شیر خشک کم چربی به محلول اضافه می شود؛ و اگر سلول ها برای نوکلئیک اسید رنگ آمیزی می شوند می توان از ثابت کننده های لخته کننده مثل متانول هم استفاده کرد. عوامل نفوذپذیرکنندهٔ شایع عبارت اند از ساپونین و دترجنت های غیر یونی. ساپونین ها نواحی آب گریز بزرگی دارند که به نواحی کلسترولی غشاهای سلولی داخل می شوند و کمپلکسی را تشکیل می دهند که دارای قطری حدود ۱۲ تا ۱۵ نانومتر است و ماکرومولکول ها را قادر می سازند از آن طریق به سیتوپلاسم وارد شوند. غشای پلاسمایی دست نخورده باقی می ماند اما چون سوراخ ایجادشده در غشا برگشت پذیر است و سلول های نفوذپذیر شده با ساپونین فقط در حضور ساپونین برای آنتی بادی ها نفوذپذیر هستند؛ بنابراین موقع نشاندار کردن سلول، باید در محلول آنتی بادی،